HU229289B1 - Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use - Google Patents
Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use Download PDFInfo
- Publication number
- HU229289B1 HU229289B1 HU0103889A HUP0103889A HU229289B1 HU 229289 B1 HU229289 B1 HU 229289B1 HU 0103889 A HU0103889 A HU 0103889A HU P0103889 A HUP0103889 A HU P0103889A HU 229289 B1 HU229289 B1 HU 229289B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- molecular weight
- lys
- calibration standards
- calibration
- glatiramer acetate
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 106
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 74
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 70
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 title description 29
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 81
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 71
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 65
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 57
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 51
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 43
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 claims description 40
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 40
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 40
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 claims description 40
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 claims description 40
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 35
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 33
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 33
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 27
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 24
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 10
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 7
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 4
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 5
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 3
- 108091008717 AR-A Proteins 0.000 claims 1
- 241000750004 Nestor meridionalis Species 0.000 claims 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 75
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 67
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 34
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 32
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 29
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 26
- 108010019911 (T,G)-A-L Proteins 0.000 description 24
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 229920001897 terpolymer Polymers 0.000 description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 18
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 14
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 12
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 11
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 10
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 8
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- BXPHMHQHYHILBB-BZSNNMDCSA-N Lys-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O BXPHMHQHYHILBB-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 7
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 7
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 6
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 5
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 5
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 5
- -1 amine acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 5
- KMZHZAAOEWVPSE-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxypropyl acetate Chemical compound CC(=O)OCC(O)CO KMZHZAAOEWVPSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Lys Natural products NCCCCC(NC(=O)C(N)C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100029966 HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Human genes 0.000 description 4
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 4
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 4
- 101000864089 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Proteins 0.000 description 4
- 101000930802 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain Proteins 0.000 description 4
- 101000968032 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 3 chain Proteins 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- UQRZFMQQXXJTTF-AVGNSLFASA-N Lys-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UQRZFMQQXXJTTF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 4
- 108010045397 lysyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 4
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 3
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 3
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 3
- 108010046732 HLA-DR4 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- 101710169105 Minor spike protein Proteins 0.000 description 3
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 3
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O JJKKWYQVHRUSDG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O BBBXWRGITSUJPB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 description 2
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 2
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- SUZVLFWOCKHWET-CQDKDKBSSA-N Lys-Tyr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SUZVLFWOCKHWET-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- 108700005089 MHC Class I Genes Proteins 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 2
- JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N Tyr-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JAGGEZACYAAMIL-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- YASYVMFAVPKPKE-UHFFFAOYSA-N acephate Chemical compound COP(=O)(SC)NC(C)=O YASYVMFAVPKPKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000001712 encephalitogenic effect Effects 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N (2r)-2-azaniumyl-3-$l^{1}-selanylpropanoate Chemical compound [Se]C[C@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- YLOCGHYTXIINAI-XKUOMLDTSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 YLOCGHYTXIINAI-XKUOMLDTSA-N 0.000 description 1
- ATCFYQUZTYQTJN-AXDSSHIGSA-N (2s)-2-amino-4-benzylpentanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ATCFYQUZTYQTJN-AXDSSHIGSA-N 0.000 description 1
- RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010600 3H thymidine incorporation assay Methods 0.000 description 1
- YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O YLTKNGYYPIWKHZ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N Ala-Glu-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN HMRWQTHUDVXMGH-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VCSABYLVNWQYQE-SRVKXCTJSA-N Ala-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O VCSABYLVNWQYQE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KQESEZXHYOUIIM-CQDKDKBSSA-N Ala-Lys-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KQESEZXHYOUIIM-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- XAXMJQUMRJAFCH-CQDKDKBSSA-N Ala-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=C(O)C=C1 XAXMJQUMRJAFCH-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- 241001136792 Alle Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 101100289888 Caenorhabditis elegans lys-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 1
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N D-Selenocysteine Natural products [Se]C[C@@H](N)C(O)=O FDKWRPBBCBCIGA-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 208000028387 Felty syndrome Diseases 0.000 description 1
- OQXDUSZKISQQSS-GUBZILKMSA-N Glu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OQXDUSZKISQQSS-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O HRBYTAIBKPNZKQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N Glu-Tyr Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 YSWHPLCDIMUKFE-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100036242 HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Human genes 0.000 description 1
- 108010010378 HLA-DP Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000015789 HLA-DP Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010093013 HLA-DR1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010051539 HLA-DR2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 208000001204 Hashimoto Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000930801 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 2 chain Proteins 0.000 description 1
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 101500021084 Locusta migratoria 5 kDa peptide Proteins 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XOQMURBBIXRRCR-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XOQMURBBIXRRCR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 201000011152 Pemphigus Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 208000035868 Vascular inflammations Diseases 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Substances CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 201000004982 autoimmune uveitis Diseases 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 229940042385 glatiramer Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001624 hip Anatomy 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 229940102213 injectable suspension Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000002356 laser light scattering Methods 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000968 medical method and process Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical group CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- RLBIQVVOMOPOHC-UHFFFAOYSA-N parathion-methyl Chemical compound COP(=S)(OC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 RLBIQVVOMOPOHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 201000001976 pemphigus vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 235000016491 selenocysteine Nutrition 0.000 description 1
- ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N selenocysteine Natural products [SeH]CC(N)C(O)=O ZKZBPNGNEQAJSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055619 selenocysteine Drugs 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000002325 somatostatin-secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/02—Peptides of undefined number of amino acids; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/06—Antianaemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Obesity (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
Description
A találmány tárgyát molekulatömeg kalibráló standardok képezik, amelyek glatiramer-acetát és más kopolimerek molekulatömegének pontos meghatározására alkalmazhatók. A találmány továbbá számos molekulatömeg kalibráló standardot ismerteti a glatiramer-acetát és más kopolimerek molekulatömegének meghatározására, amelyekben a moláris ellipticitás és a molekulatömeg illetve a retenciós idő és a molekulatömeg logaritmusa lineáris összefüggésben áll. A molekulatömeg kalibráló standardok ugyanakkor adott esetben a glatiramer-acetáthoz vagy a megfelelő kopolimerekhez hasonló biológiai aktivitással is rendelkeznek és különböző immunbetegségek kezelésére vagy megelőzésére is alkalmazhatók.
A találmány tárgyát képezik az immunbetegségek kezelésére szolgáló gyógyszerkészítmények is, amelyek meghatározott molekulatömegű polípeptidet és a glatiramer-acetátnak vagy egy terpolimernek megfelelő aminosav készítményt tartalmaznak.
♦ * * « * Φ
X»í « s x *
megadás alapjául
SZOLGÁtö VÁLTOZAT φ ·>
7S.6S3/GM
KepoHmer-1-rokon polipeptidek alkalmazása molekulatömeg kalibráló standardként és gyógyászati anyagként
A találmány molekulatömeg kalibráló standardokat ismertet a glatlramer-acetát, terpolimerek és más kopolimerek molekulatömegének pontos meghatározására. A molekulatömeg kalibráló standardok olyan polipeptidek, amelyeknek körülbelül 2ÖÖ0-40ÖÖÖ dalton közötti, meghatározott molekulatömegük van és aminosav-összetételük megfelel egy giatirsmer-acetátnak vagy ezzel rokon kopolimernek. Meghatározott molekulatömegekkel azok a polipeptidek rendelkeznek, amelyek szekvenciái meghatározottak. A giatiramer-acetátnak megfelelő molekulatömeg kalibráló standardok alanin, glutaminsav, tirozin és llzin nevű amlnosavakat specifikus mólarányban tartalmaznak. A rokon ferpollmereknek megfelelő molekulatömeg kalibráló standardok a fenti négy aminosavből hármat tartalmaznak. Egy előnyös kiviteli alakban a polipeptid aianinnal rendelkezik az N~láncvégen és tirozinnsl az N-iáncvégtői számított negyedik pozícióban. A találmány több molekulatömeg kalibráló standardok sorozatára is vonatkozik egy kopolimer-kompozíclő molekulatömeg-tartományának meghatározására. A molekulatömeg kalibráló standardok ideális esetben a moláris ellipticitás és a molekulatömeg vagy a retenciős idő és a molekulatömeg logaritmusa között lineáris kapcsolatot mutatnak.
Optimális esetben a polipeptidek olyan biológiai aktivitást mutatnak, amely hasonló azon kopolimeréhez, amelyből azokat származtatják, A maghatározott molekulatömegekkel és a giatiramer-aoetáthoz hasonló aminosav ősezetétehel rendelkező polipeptidek optimális esetben gyógyászatilag is hasznosíthatók immunbetegségek és -állapotok kezelésére, φ φ *♦ ♦ φ φ
ΦΦΦ «
φ X φ » φ <>.«« φ ♦ φ X φ
X « Φ -Φ Φ Φ 9
Autoimmun betegségek akkor fordulnak elő, amikor a szervezet Immunrendszere a szervezet egyes saját szöveteit nem ismeri fel sajátjaként” és azokat Idegenként megtámadja. Mórmalis esetben a sajátanyag felismerés az immunrendszeren belüli, azon fejlődés során, amely megakadályozza, bogy a szervezet saját T -sejtjei és 8-sejtjei a szervezet saját szöveteivel reagáljanak, korán kifejlődik. Ezeket a korai immunválaszokat az antigének MHC-molekulákhoz való kötődése és a T-sejt receptoroknak való bemutatás közvetíti.
Ez a sajátanyag felismerési folyamat összeomlik, amikor autoimmun betegségek fejlődnek ki, és a szervezőt saját szöveteit és proteinjeit a szervezet immunrendszere autoanligénakkénC ismeri fel, és megtámadja. Például a seierosis multiplexről azt gondolják, hogy egy autoimmun betegség, amely akkor fordul elő, amikor az immunrendszer megtámadja a mielln hüvelyt, amelynek funkciója az idegek elszigetelése és védelme. Ez egy kifejlődő betegség, amelyet demielinezés, majd idegi és mozgás funkciós károsodás jellemez, A rheumatoid arthritis (“AA) vélhetően szintén autoimmun betegség, amely a szinovialis ízületek gyulladásából és aktivált T -sejtek, makrofágok és plazma sejtek beszürődésébői áll és az izületi porc progresszív károsodására vezet. Ez az izületi betegség legsúlyosabb formája, A rheumatoid arthritis során megtámadott autoaníigén(ek) természete kevéssé ismert, bár a if-li'pusu kollagén lehetséges felelős.
A seierosis multiplex és a rheumatoid arthritis kifejlődésére velő hajlam örökletes. A szóban forgó betegségek többször fordulnak elő azokban a személyekben, akik egy vagy több jellegzetes ll-ösztályú MHC alléit (alielemorf gént) hordoznak. Például a rheumatoid artritssre való örökletes hajlam erős összefüggésben áll a ll-osztályű MHC DRB1*Ö40Í, DRBVÖ4G4 vagy DRB 1*0405 vagy a DRB 1*01 Öt allélekkal, A hiszfokompatlbilitás génhely antigének (HLA.) sejtek felületén találhatók és a szövetek egyedi φ X «
X « φ «
X Φ
ΦΦΦ X
3Φφ φφφ* »* φφ φφ jellegének meghatározását segítik különböző személyekből. A hisztokompatlbbhás génhely antigének génjei a 6, számú kromoszóma ugyanazon régiójában helyezkednek el nagyméretű hisztokompabbíhtás komplexként (MHC), Az MHC-régló molekulák számos különböző osztályát expresszálja a test különböző sejtjeiben, a gének a kromoszóma mentén szekvencia sorrendben I-, II- és iU-osztályú MHC-gének. Az l~osztályú gének HLA-génekbői állnak, amelyek tovább csoportosíthatók A, B és C alréglókra. A Ihosztályú gének tovább csoportosíthatók a DR, DO és OP alréglókra. Az MHC-DR molekulákat ismerjük a legjobban; ezek az antigént bemutató sejtek, Így például makrofágok, e nyírokszövet :elületén fordulnak elő. ement rendszer számos Immun-rokon
A Nhosztályú sí es fel na m-s iHC-íermákek a kot és egyes nem expresszálódnak.
Számos gyógyászati anyagot fejlesztettek ki autoimmun betegségek kezelésére, így sztereód- és nem-szteroid gyulíadáselienes gyógyszereket, például metotrexátot; különböző Interferonokat; és a prosztagíandin szintézis számos gátlószerét. A szóban forgó szerek azonban mergezoek lehetnek, be rövid időtartamoknál hosszabb ideig alkalmazzák, vagy nemkívánatos mellékhatásokat okozhatnak. Más terápiás szerek, például anti-TNF-speclfíkus antitestek vagy antitest-fragmentumok, vagy a TNF-receptor oldható formái megkötik és/vagy gátolják a tumor nekrózis faktor (TNF) gyuüadéskeitő hatását. Ezek a szerek T-sejt felületén egy proteint juttatnak célba és általában megakadályozzák az antigén bemutató sejttel (ARC) való kölcsönhatást. Azonban természetes hajlltásű proteineket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítása, kiszerelése, tárolása és célba juttatása gyakran bonyolult. Továbbá, az immunrendszer természetes heterogenitása a gyógyszerek hatásosságának határt szabhat és í-olíthafja az autoimmun betegségek bosszú távú kezelését.
* Α φ *
X * Φ Φ
Φ Φ «Γ *«·♦ **
-4 Á glatiramer-acetát (kopohmer~1, Cop-1, a továbbiakban GLAT-kopollmerj alanin, glutaminsav, Iizin és tirozin sorrendben körülbelül 4,6:1,5:3,6:1 ,ö mőíarányáből álló pollpeptid-elegy, amelyet a négy aminosav kémiai poiimerizációjával állítanak elő, olyan termékeket képezve, amelyek átlagos molekulatömege körülbelül a 4ÖÖ0-13ŐÖÖ dalion tartományban van. A megfelelő móltörtek körülbelül alaninra 0,427, giafamínsavra 0,141, lizinre 0,337 és tirozinra Ö.Ö33 és azok körülbelül ± 10 %· mértékig változhatnak, A rokon kopolimerek az előbb említett négy aminosavból háromból álló pölípeptld-eíegyek (ezért terpoiimerek). A kopolimer-1 és a terpoiimerek az emlős Immunrendszer és az emberi populáció természetes heterogenitását célozzák, és autoimmun betegségek és más immunállapotok kezelésére hatásosak. Előnyös átlagos molekulatömeg-tartományokat és terpolimer-előállífási eljárásokat Ismertet az 5 300 808 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, amely teljes tartalmára referenciaként hivatkozunk. A találmány szerinti kopolimer-1 a szakember által ismert mádon állítható elő, L pl. az US 3 849 550 sz. szabadalom leírását. £ szerint a tirozin, alanin, y-benzil-gíutamát és az s-N-trííiuor-acetlI-lizin N-karboxi-anhidridjéf szobahőmérsékleten absz. dioxánban dietil-amin mint iniciátor jelenlétében polimerizálják. A glutaminsav γ-karboxíl-csoportjának felszabadítását jégecetben hidrogén-hromiddal végzik; ezt követi a trifiuor-acehl-osoportoknak a iizin maradékokból 1M piperidinnel végzett eltávolítása. A jelen leírásban a „szobahőmérséklet” kifejezés a kb. 20 - kb. 26*0 hőmérséklet tartományra vonatkozik. A keresett molekulatömeg profillal rendelkező kopolimer-1-et bármelyik ismert módszerrel előállíthatjuk, Ilyen módszer pl. a nagy molekulájú elemeket tartalmazó kopolimer-1 kromatografálésa és a nem-kívánt féleségeket nem tartalmazó frakciók összegyűjtése; a részleges savas vagy enzimes hidrolízis, amely a nagy molekulájú elemek eltávolítására irányul, majd ezt követő tisztítás, diait-5
{.» * * * ♦ «««> *Χ
X***
Λ* * « * ífr»· * * * ·' ♦ «-Μ zissel vagy ultraszűréssel. Egy további eljárás szerint a keresett molekulatömeg profillal rendelkező kopellmer-1 előállításéra az aminocsoporfokat védett alakban tartalmazó, keresett molekulatömeg profillal rendelkező kopolimer-1-ből indulunk ki és közvetlenül a védőcsoportok eltávolításával jutunk a megfelelő molekulatömeg féleséghez. A találmány szerinti készítmények a szakterületen ismert eljárásokkal készíthetők ki. A készítményt előnyösen iiofilizáljuk és vizes oldattá alakítjuk, amely s.c. injekció céljára alkalmas. Egy másik megoldás szerint a kopolímer-1 bármely, a szakember által peptid hatóanyagok esetében Ismert alakban - orális, nazális, bukkális vagy rektális készítményként kikészíthető. A találmány más, három, négy vagy őt vagy több aminosav más kombinációiból álló kopoümereket ís Ismertet.
A kopobmer-í vagy terpeiimer preparátum gyógyászati készítményekben való alkalmazásra történő tanúsításhoz szükséges a preparátumban lévő poiípeptidek molekulatömeg-eloszlásának pontos meghatározása. A molekulatömeg meghatározásának egyik módja a kromatográfiás eljárás Superose-12 oszlopon. A Superose-12 keresztkötéses, agaréz alapú anyag, amelynek kizárási tartománya 2x10° Ballon, optimális szétválasztási tartománya 1000-3x10 5 Dalfon és a gyöngyök átmérője 20-40 pm. A glafiramer-acetát molekulatömegének meghatározáséra szolgáló oszlopok kalibráló koefficienseit közvetetten mért molekulatömegekkel rendelkező glatiramer-acetát-adagok alkalmazásával határozták meg, A közvetett mérések közé tartozott a víszkozimetría és a sebesség szedimentációs ultracentrifugálás. Újabban a glatíramer-acetát kalibrációs standardok olyan adagjait állították elő, amelyek molekulatömegét sokszögű lézerfény szórási eljárással (MALIS) határozták meg.
Ennélfogva Igény van olyan molekulatömeg kalibráló standardokra, amelyek standardéként alkalmasak a találmány sze»·»« rinti kopollmer kompozíciók molefe.uíatömeg~el.o.szíás.ának meghatározására. A kívánt molekulatömeg kalibráló standardok meghatározott, olyan molekulatömegekkel és fizikai tulajdonságokkal rendelkeznek, amelyek analógok azokkal a molekulákkal, amelyek molekulatömege meghatározandó. Ideális esetben lineáris kapcsolat van a kalibráló standardok meghatározott molekulatömegei {-vagy a meghatározott molekulatömegek logaritmusa) és egy mérhető fizikai tulajdonság, Így például a kalibráló standardok moláris eíiípticitása vagy molekula méret szerint elválasztó oszlopon mért retencíós ideje között.
A meghatározott szekvenciái?) molekulatömeg kalibráló standardok, amelyek kémiai és fizikai tulajdonságai hasonlóak a GLAT-kopolimerbez, pontos és megbízható kalibráló sorozatot biztosítanak a termék-adagok molekulatömegének meghatározásaihoz. A találmány olyan GLAT-kopolimer származékokat ismertet, amelyek alkalmasak molekulatömeg kalibráló standardokként GLAT-kopolimer készítmények molekulatömeg tartományainak meghatározására és optimális esetben gyógyászatilag alkalmazhatók Immunállapotok kezelésére. A találmány továbbá meghatározott molekulatömegekkel rendelkező pollpeptldeket ismertet, amelyek más kopoiimerek származékai és amelyek alkalmasak a szóban forgó polimerek preparátumai molekulatömeg-tartományának meghatározására. Amikor a szóban forgó kopoiimerek gyógyászatilag hasznosíthatók, akkor optimális esetben a származék-poüpeptidek ís gyógyászatilag alkalmazhatók. A GLAT-kopolimer preparátum molekulatömeg tartományának meghatározására előnyős származék az olyan polipeptld, amely ammosav-összetétele közelítőleg megfelel a
341 83-4604-iViOhKrnO ****
*x ö * * φ* φ **» 4
GLAT-kopotimerének és olyan meghatározott molekulatömeggel rendelkezik, amely körülbelül 2ÖÖQ-400ÖÖ dalion között van. A
V Φ polipeptid előnyösen az alanin, a glutaminsav, a tirozin és a VA
A * X lizin nevű arninosavak specifikus mólarányaival rendelkezik. To- : * í.,:.
vábbá egy előnyös kiviteli alakban a polipeptid az M~láncvégnél ♦ * alanin! és az N-láncvégtől számított 4. pozícióban tirozin! tar- l f«
Φ * talmaz. Egy terpolimer molekulatömegének meghatározására az előnyős származék meghatározott molekulatömeggel és olyan aminosav-összetétellel rendelkezik, amely körülbelül a szóban forgó terpolimerének felel meg, A találmány más kopolimereket is Ismertet. A találmány szerinti kopoh'mer molekulatömegének meghatározásakor a polipeptiö-származék meghatározott molekulatömeggel és olyan aminosav-összetétellel rendelkezik, amely közelítőleg, megfelel a szóban forgó kopolimerének.
A taláimány továbbá molekulatömeg kalibráló standardok sorozatát ismerteti a glatiramer-acetát vagy egy terpolimer vagy más kopoümer molekulatömegének meghatározására molekulatömeg szerint elválasztó oszlopon. A kalibráló standardok 2-1Ö vagy több polipeptidet tartalmaznak, minden egyes polipeptid meghatározott molekulatömeggel rendelkezik. A giatiramer-acetát molekulatömeg tartományának meghatározásakor előnyösen a molekulatömeg kalibráló standardok sorozata körülbelül 2000-40000 dalion, meghatározott molekulatömeggel és a gtaliramer-acetátnak vagy a kiválasztott terpoHmernek megfelelő aminosav-összetétellel rendelkeznek. Előnyös kiviteli alakokban lineáris kapcsolat van a molekulatömeg kalibráló standard polipeptid molekulatömegének logaritmusa és akár a molekulatömeg kalibráló standardok, retenciós Ideje a méret-meghatározó
9418 3-4604 -MOt/KmO
oszlopon vagy a molekulatömeg kalibráló standardok molekulatömege és a molekulatömeg kalibráló standardok moláris eíliptioítása között.
A találmány továbbá gyógyászati készítményt ismertet, amely GLAT-kopolimer molekulatömeg tartományának meghatározására molekulatömeg kalibráló standardként alkalmazható polipeptid gyógyászatilag hatásos mennyiségét tartalmazza és lényegében alanín, glutamínsav, tirozin és lizin aminosavakből, (körülbelül 0,38-0,50 alanín, körülbelül 0,13-0,15 glutamínsav, körülbelül 0,08-0,10 tirozin és körülbelül 0,3-0,4 lizin móltörtekkel) és egy gyógyászatilag elfogadható hordozóból áll.
A találmány továbbá gyógyászat! készítményt ismertet, amely egy terpolimer molekulatömeg-fartományának meghatározására molekulatömeg kalibráló standardként használható polipeptid gyógyászatilag hatásos mennyiségét tartalmazza,, és lényegében alanín, tirozin és lizin aminosavakből (körülbelül 0,3-0,6 alanín, körülbelül 0,005-0,25 tirozin és körülbelül 0,1-0,5 lizin móltörtekkei) és egy gyógyászatilag elfogadható hordozóból áll. A polipeptid előnyösen lényegében glutamin savtól' mentes,
A találmány továbbá gyógyászati készítményt ismertet, amely egy terpolimer molekulatömeg tartományának meghatározására molekulatömeg kalibráló standardként alkalmas polipeptid gyógyászatilag hatásos mennyiségét tartalmazza, és lényegében glufaminsavból, tirözlnból és lizinböi (körülbelül 0,05-0,300 glutamínsav, körülbelül 0,05-0,250 tirozin és körülbelül 0,3-0,? lizin móltörtekkei) és egy gyógyászatilag elfogad94 18 3-4504 - Μ Ο Ο K m O fc* ható hordozóból áll aianlníól mentes
A polipeptid -előnyösen lényegében
A találmány továbbá gyógyászati készítményt ismertet, Λ.'Α ·» * # amely egy terpo-hmer molekulatömeg tartományának meg határé- * ’ u,:.
* zására molekulatömeo kalibráló standardként alkalmas .♦.% fc V X polipeptid gyógyászaíiiag hatásos mennyiségét tartalmazza és t * « lényegében alanínból, glutaminsavból és tirozinbói (körülbeiüi 0,005-0,8 alanín, 0,005-0,3 glutaminsav, körülbeiüi 0,005-0,25 lizin mőllörtekkel) és egy győgyászatilag elfogadható hordozóbői áll. A polipeptid előnyösen lényegében lizlníöl mentes.
A találmány továbbá gyógyászati készítményt Ismertet, amely egy terpohmer molekulatömeg tartományának meghatározására molekulatömeg kalibráló standardként alkalmas polipeptid győgyászatilag hatásos mennyiségét tartalmazza és lényegében ala-ninból, glutaminsavból és lizinböl (körülbelül 0,005-0,6 aianin, körülbelül 0,005-0,3 glutaminsav és körülbelül 0,2-0,7 lizin mőlföríekkeí) és egy gyógyászaíiiag elfogadható hordozóból áll. A polipeptid előnyösen lényegében ür-ozmtól mentes.
Általában a találmány szerinti gyógyászati készítmények bármely számú (például 2-5, vagy több) aminosavból álló kopoIsmer molekulatömeg tartományának meghatározására, molekulatömeg kalibráló standardként alkalmas polipeptid gyógyászafííag hatásos mennyiségét tartalmazzák. A glatiramer-acetát esetében az ilyen kopoiimer az aminosav szekvenciák különböző csoportja. A molekulatömeg kalibráló standardokként alkalmas polipeptid az amínesavak olyan mőltörtjeiből áll, amely közelítőleg megfelel a kopolímernek.
941 83-4604-MOS/KmO ο
ί κ* > ·* » 9 χ « Α * *
4 * *
X <4 4 «.
** 4· * « 44 » χ **** * 494 ,
A találmány továbbá eljárást Ismertet immun-közvetített és autoimmun betegségek kezelésére és megelőzésére emlősökben, amely szerint a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standard gyógyászatliag hatásos mennyiségét adagoljuk. Mas kiviteli alakban az immun-közvetitett és autoimmun betegségek kezelésére irányuló eljárás emlősökben magában foglalja továbbá az immun támadással érintett T-sejtek szaporodásának gátlását. Más kiviteli alakban az immun-közvetített és autoimmun betegségek kezelési eljárásában emlősökben a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardot egy antigén bemutató sejthez kötjük. További másik kiviteli alakban az emlősök immun-közvetített és autoimmun betegségei kezelési eljárása során a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardot egy olyan H-osztályú nagyméretű hlsztokompatibilitás komplex proteinhez kötjük, amely az autoimmun betegséggel van kapcsolatban.
A találmány szerinti autoimmun betegségek közé tartoznak az arthritlses állapotok, a demieíinezésl betegségek és gyulladásos betegségek. Például a találmány szerinti készítményekkel kezelhető autoimmun betegségek közé tartozik a sclerosis multiplex, a rheumatoid arthritis, a csont-ízületi gyulladás, az autoimmun haemolitikus vérszegénység, az autoimmun petefészek gyulladás, az autoimmun pajzsmirigy gyulladás, az autoimmun uveorelínitis, a Crohn-féle betegség, a krónikus immun tromboeitopeníkus vörheny, a vastagbélgyuliadás, az érintés érzékenységi betegség, a diabetes mellhús, a Graves-féle betegség, a Guiliaín-Barre-féle tünetcsoport, a Hashlmoto-féle betegség, az idiopathiás mixödéma, a myasfhenia gravis (izom9418 3-4604-MOí/KsnO
Λ» 44 *
♦ Μ* * gyengeség)., a pikkelysömör, a közönséges bőrhőlyagosotíás ípempbigus vulgáris) vagy az általános iupus erytbematosus.
Az immun-közvetített betegségek az immunrendszer különösen idegen antigénekre való nemkívánatos érzékenységéből származik. Ezekre példák a gazda-öeüitetett-szövet-típusú betegség íhvod) és a beültetett szövet-gazda-típusú betegség covhd) és számos késleltetett-típusú hiperszenzitivítás fDTHh
A találmány szerinti készítmények a szóban forgó betegségek közül egy vagy több kezelésére alkalmazhatok;
Az ábrák rövid ismertetése
Az la-t la-2, ia-3 ábrák az 1. táblázatban ismertetett molekula kaiibráióstandardokban (TV-kalibrácIős standardok) az alanln megoszlását ismertetik. Az aminosav pozíciót az X-tengelyen jelöljük, Az alanln jelenlétét a jelzett aminosav pozícióban függőleges csík jelzi.
Az 1P-1, lb-2; 1Ö-5 ábrák az 1. táblázatban ismertetett tv-kalibrációs standardokban a lizin megoszlását ismertetik. Az aminosav pozíciót az x-tengelyen jelöljük. A lizin egység jelenlétét a jelzett aminosav pozícióban f üggőleges sáv jelzi,
Az ic-l. lc-2, 1C-3 ábrák az 1. táblázatban ismertetett TV-kalibrációs standardokban a glutaminsav megoszlását ismertetik. Az aminosav pozíciót az x-tengelyen jelöljük. A glutaminsav egység jelenlétét a jelzett aminosav pozícióban függőleges sáv jelzi
Az id-i, id-2: ld-5 ábrák az 1. táblázatban ismertetett tv-kaílbrációs standardokban a tirozin megoszlását ismertetik. Az aminosav pozíciót az x-tengelyen jelöljük, A tirozin egység jelenlétét a jelzett aminosav pozícióban függőleges sáv jelzi.
A 2. ábra a találmány szerinti TV-kalíbrációs standardok moláris elliptleítása és molekulatömege ábrázolásával képzett pontsort Ismerteti ismert glatiramer-acetát kalibráló standardokkal összehasonlítva. A moláris elliptícitást 1O'S deg cm'2 dmort-ben, a molekulatömeget daltonöan adjuk meg, A körök a TV-kalíbrációs standardokat, a négyzetek a glatiramer-acetát kalibráló standary χ *«· dókat jelentik. Amint az látható, a TV-kalibrációs standardok lineáris kapcsolatot biztosítanak a moláris elíiptidtás és a molekulatömeg között.
A 3a. ábra a találmány szerinti τν-kallbrádös standardok relatív retendós ideje (R^T) és a szóban forgó kalibráló standardok molekulatömegének logaritmusa ábrázolásával felvett pontsort mutatja az RRT -alapú algoritmus alkalmazásával
A 3b. ábra a TV-kalibráclos standardok molekulatömegének logaritmusa és a szóban forgó kalibráló standardok retendós ideje (RT) ábrázolásával felvett pontsort mutatja a Millennium-alapú algoritmus alkalmazásával
A 4a. ábra a találmány szerinti TV-kaiiPrádós standardok relatív retendós Ideje (RRT) és a szóban forgó kalibráló standardok molekulatömege ábrázolásával képzett több kalibrációt Összegző pontsort ismerteti RRT-aiapú algoritmus alkalmazásával Az adatokat 16 oszlopról gyűjtöttük. Mind a 16 kalibráció átlagos értékeit ismertetjük.
A 4b. ábra a találmány szerinti w-kalibrádós standardok relatív retendós ideje (RRT) és a szóban forgó kalibráló standardok molekulatömege ábrázolásával képzett több kalibrátíőt összegző pontsort ismerteti Millennium-alapú algoritmus alkalmazásával Az adatokat 16 oszlopról gyűjtöttük. Mind a 16 kalibráció átlagos értékeit ismertetjük.
Az 5. ábra mono-Cop-T EllSA felvétele a Cop-1 kötésének antlCop-l poliklön antitestekhez négy TV-kalibrációs standard és Cop-1 (03494) általi gátlását mutatja. Az abszorbancia aránya növekvő inhibitor koncentrációval mért abszorbandát jelzi a kötő Inhibitor hiányában mért. aöszorbanciáboz viszonyítva,
A szekvencialista kötetlen szövegének ismertetése;
Szekvencia azonosítási szám <213> <223 >
mesterséges szekvencia szintetikus peptid # * ♦ ·*Μ <213> <223> < 2Ί 3 > <225> <213>
szinten mester:
szlnteti sptld szekvencia sptid < 213 > <223> <213> <223>
<213>
<
szinten mesterséges szekvencia szintetikus peptid mesterséges szekvencia
A találmány szerinti latömeg rrtíok (például TV-kalibrácios standardok) közé olyan polipeptidek tartoznak.. amelyek aminosav összetétele közelítőleg megfelel a és m giatiramerrozott molekulatömeggel rendelkeznek, amely körülbelül 200040000 dalton között van és alkalmasak a ÓLA T -kopoilmer és a rokon terpolímerek molekulatömegének pontos meghatározására. A meghatározott molekulatömeg követelményéből következik, hogy a TV-kalibrációs standardnak diszkrét molekulatömeggel keli rendelkezni és nem molekulatömegek tartományával Ennek megfelelően a TV-kalíbrációs standardokat előre meghatározott aminosav szekvencia szerint állítjuk elő., amely összetételében megfelel annak a kopollmernek, amelyre a molekulatömeg tartomány meghatározandó. optimális esetben a TV-kalíbrációs standardoknak a megfelelő kopolim eréhez hasonló gyógyászati hatása van. A szóban forgó kalibráló standardok alkalmazhatók bármely molekula méret megkülönböztető rendszerben bármely megfelelő molekulatömeg meghatározási eljárás vagy készülék alkalmazásával. Például a találmány szerinti kalibráló alkalmazhatók polipeptidek vagy proteinek molekulatömeg határozására alkalmazott bármely kromatog$ *
jf «* ráfiás eljárás vagy készülék kalibrálására. Az ilyen kromatográfiás készülék lehet molekulatömeg szerint elválasztó oszlop, amely a polipeptideket molekula méretük alapján különíti el. A molekulatömeg szerint elválasztó oszlopokra példák a T5&-oszlopok, a Sephadex-oszlopok, a Sepharose-osziopok és a Superose-oszlopok. Diszkrét mérettel és összetétellel rendelkező molekulatömeg kalibráló standardok biztosítása érdekében a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardokat a szakember számára ismert eljárásokkal előre meghatározott szekvenciák szerint állíthatjuk elő.
A találmány szerinti aminosavak közé tartozik a 2ö általában előfordulö aminosav, nem korlátozódik azonban a találmány ezekre. A találmány körébe tartoznak a természetben előforduló és szintetikus származékok, például a szeíenociszteín is. Az »*-**'* aminosavak közé tartoznak továbbá az aminosav analógok. Az aminosav analóg az aminosav kémiailag rokon vegyület©, amely eltérő konfigurációval rendelkezik, például egy izomer vagy egy 0-konhgurációjú vegyület L-konfiguráció helyett; vagy egy az ammosavhoz közeli méretű és alakú szerves molekula vagy olyan aminosav, amelyen a peptld kötésben résztvevő atomok módosítva vannak annak érdekében, hogy proteáz-ellenállók legyenek, amikor peptidben vagy polipeptidben polimerizáljuk.
Az aminosav” és aminosav szekvencia kifejezések a jelen leírásban és az igénypontokban alkalmazva egy vagy több aminosav-szérmazék és/vagy aminosav-anaióg összetevőt jelenthetnek, amelyek egy része vagy egésze a szekvencia által jelzett, természetben előforduló 20 aminosav közül egy vagy több
94í8-3-4604-'MOt/KmO *♦
egységet tartalmaznak. Például egy egy vagy több tirozin egységgel rendelkező aminosav szekvenciában a szóban forgó egységek közül egy vagy több részlete homotirozinoeí helyettesit- 0J
A « <Ά X hetö. Továbbá, ebbe a definícióba értendő egy olyan aminosav * v ?ιφ Φ Α-ν szekvencia, amely egy vagy több nem-peptíd vagy peptidutánzó $ « * kötéssel rendelkezik két szomszédos egység között, ; rs
Az egybefűs vagy hárombetűs aminosav rövidítések (és az aminosav, amelyet a rövidítés jelöl) a következők; A jelentése ala (alanin); C jelentése cys (cisztein); D jelentése asp (aszpartámsav); £ jelentése giu (glutaminsav); F jelentése phe (fenílalanin); G jelentése gly (glicin); H jelentése his (hisztidin); I jelentése He (Izoleucin); K jelentése lys (lizin), L jelentése leu (leucin); M jelentése met (metionin); N jelentése asn (aszparaginj; P jelentése pro (prolin); Q jelentése gin (glutamin); R jelentése arg (arginin); S jelentése ser (szerin); T jelentése thr (treonin); V jelentése val (valin); W jelentése trp (triptofán); és Y jelentése tyr (tirozin).
A f,bidrofóh aminosav kifejezés a jelen leírásban és az igénypontokban alkalmazva az alanin (A vagy ala), a ghein (G vagy gly), az Izoleucin (1 vagy Hej, a leucin (L vagy leu), a prolin (P vagy pro), és a valin (V vagy válj alifás aminosavakai - a zárójelben levő kifejezések az aminosavak egybetűs vagy hárombetűs általános rövidítései - és a triptofán (W vagy trp), a fenilalanin (F vagy phe), és a tirozin (Y vagy tyr) aromás aminosavakat foglalja megában. Az aminosavak hidrofobicitást mutatnak az alifás rész hossza és az aromás oidalláneok mérete függvényében, amikor azok a proteinen beiül egységként találhatók.
94183-4SG4-lVOi/KmO ί *
Az íöliásssi rendelkező aminosav kifejezés a- jelen leírásban és az igénypontokban alkalmazva az aszperaginsey CD vagy asp)., a glutam-lnss-v (E vagy glu), a- hisztidin (H vagy hisz), az arginin (R vagy arg)· és a iizin (K vagy lys) aminosavakat foglalja magában, amely aminosavak pozitív (his, lys és arg) vagy negatív (asp és gly) töltést adnak a szóban forgó egységeket tartalmazó proteineknek vizes oldatokban a pH élettani értékei mellett.
A találmány szerinti polipeptíd kompozíció. A találmány szerint meghatározott molekulatömeggel rendelkező és a tirozin, a· gíutaminsav, az aianin és a lízin nevű aminosavak közöl hármat vagy mind a négyet tartalmazó polípeptidek előnyösek a találmány szerinti kalibráló- standardokként. Azonban a szakember könnyen helyettesítheti a szerkezetileg rokon aminosavakat a találmány értelmétől való eltérés nélkül· Ennélfogva a találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti poUpeptidekben a tirozin, a glutáminsav, az aianin és a lizín hagyományos a-mínosav-helyettesítései. Az Ilyen szerkezetileg rokon aminosavak közé tartoznak azok .az aminosavak, amelyek körülbolöi azonos töltéssel, hití-rofób jelleggel ás mérettel rendelkeznek, mint a tirozin, a glataminsav, az aianin vagy a lizln. Például a íizin szerkezetileg rokon az arginínneí és a hiszfidln-n-el; a giataminsav szerkezetileg rokon azaszparaginssvv-al;.a tirozin szerkezetileg rokon a szerinnel, a treemnnaí, a triptofénnal ás a femlafanínnal; ás az aianin szerkezetileg rokon a vaiínnaí, a leucinnal és az izoleuoínnal.
Továbbá a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok állhatnak L- vagy. ö-aminosavakbót Amint az a szakem/
- 1?
φ* bér számára ismert, a legtöbb természetes proteinben L~ -aminosavak fordulnak, eíő. Azonban a ö-aminosavak kereske* * deímí forgalomban beszerezhetők és a találmány szerinti moie- v.t
Φ ♦ .** ' ♦ kulatömeg kalibráló· standardok, előállítására alkalmazott egyes - : v vagy összes - aminosavaí helyettesíthetik. A találmány tárgyát ' ? í t
Φ * képezik a D- és L-aminosavak elegyeiből képzett molekulatömeg ; :**
X Φ kalibráló standardok és lényegében vagy L- vagy D-aminosavakbó! álló molekulatömeg kalibráló standardok is.
A találmány szerinti polipeptldekben lévő aminosavak átlagos molekulatömege és átlagos móltörfje változhat. Azonban a molekulatömeg a körülbelül 2000-40000 tartományban van., és a savas polipeptidekkel szemben inkább a bázikus polipeptidek előnyösek.
Egy kiviteli alakban a találmány lirozint alanint. gíutamínsavat és íizint meghatározott mólarányokban tartalmazó polipeptid kalibráló standardokat Ismertet. Egy előnyösebb kiviteli alakban a találmány szerinti poíipepllöekhen lévő aminosavak mófaránya azonos a GLAT-kopolimerben falálftai. A mólarányok közötti ilyen összefüggés biztosítja a legjobb molekulatömeg kalibráló standardokat, mert a szóban forgó kalibráló standardok töltése és molekula-alakja hasonló a GLAT-kopolimeréhez. Amikor szerkezetileg különböző kalibráló standardokat alkalmazunk, a kalibráló standardok a GLAT-kopollmer preparátumoktól eltérőhöz vándorolhatnak vagy eltérőnél eluálhatnak annak ellenére, hogy a szóban forgó preparátumok a kalibráló standardokkal azonos molekulatömegűek.
Továbbá egy előnyös kiviteli alakban az alanin az N~ -láncvégen és a tirozin sz N~láncvégtől számított 4. pozícióban
X* * > X $ » « van. Különböző glatiramer-acetát egységeken végzett Edman-íebontási analízisek nagy mennyiségű aianlnt mutattak ki az N-íáncvégen és tlrozint az N-íáncvégtöi számított 4. pozícióban. Ezért bizonyos előnyös kiviteli alakokban a GLAT-kopolimer molekulatömeg kalibráló standardok alaninnal rendelkeznek az N-láncvégen és firozinnal az N-láncvégtől számított 4. pozícióban. A GLAT-kopolimer előállítására alkalmazott polimerizáeiós reakciók tanulmányozása kimutatta, hogy az alanin és a glutaminsav gyorsabban poíimerlzálődik, mint a lizin. Ennek
X >»
eredményeként a GLAT-kopolimer C-láncvégl részlete gyakran gazdagabb aíaninban és giutamínsavfoan, míg az N-íáncvégi részlet gyakran gazdagabb lizin ben. Előnyős kiviteli alakokban a GLAT-kopolimer molekulatömeg kalibráló standardokban az aminosav egységek megoszlása ezt az eltolódást tükrözi.
A G L A T - k ο ρ ο I i m e r mo le k u I a tó m e g -1 a rt o m á n y á n a k m e g h a tá rozásakor az előnyös molekulatömeg kalibráló standard lényegében alanin, glutamlnsav, tírozín és lízin amínosavakbőí all alaninra körülbelül 0,38-0,50, glutamínsavra körülbelül 0,13-0,15. tirozinra körülbelül 0,08-0,10 és lizinre körülbelül 0.3-0,4 moítortekkeL
Más kiviteli alakokban a találmány az alanin. a glutaminsav. a tírozín és a lizin nevű négy aminosav közül hármat meghatározott arányban tartalmazó molekulatömeg kalibráló standardokat Ismertet. Előnyös kiviteli alakokban a molekulatömeg kalibráló standardokban jelenlévő aminosavak móltörtjei azoknak a möltörteknek felelnek meg,, amelyeket a megfelelő terpollmerben talárunk
94183--4604-MO1/KmO ; » * * * * * ν * * * * * Φ Φ * 3 * ti f\ * * * «0 * j:
Amikor a molekulatömeg kalibráló standard alanint, glutamlnsavat és tírozint tartalmaz, az alanin körülbelül 0.005-0,800, a glutamlnsav körülbelül 0,005-0,300. és a tirozln körülbelül 5 * *
0,005-0,250 möltörttel lehet jelen. A molekulatömeg körülbelül 2000-40000 dalion, és előnyösen körülbelül 3000-12000 dalion.
t rt
Amikor a molekulatömeg kalibráló standard alanin!, glüla- frj * í minsavaí és lizint tartalmaz, az alanin körülbelül 0,005-0,600, a glutaminsav körülbelül 0,005-8,300 és a llzin körülbelül 0,2-0,7 möltörttel lehet jelen. A molekulatömeg körülbelül 2000-40000 dalion és előnyösen körülbelül 3000-12000 dalion.
Amikor a molekulatömeg kalibráló standard alanint, tirezlnt és llzint tartalmaz, az alanin körülbelül 0,3-0,8, a tirozln körülbelül 0,005-0,250 és a fiz in körülbelül 0,1-0,5 móltörttel lehet jelen. A molekulatömeg körülbelül 2000-40000 dalton és előnyösen körülbelül 3000-12000 dalton.
Amikor a molekulatömeg kalibráló standard glutaminsavaf; íiroziní és llzint tartalmaz, a glataminsav körülbelül 0,005-0,300, a tirozln 0,005-0,250 és a llzin körülbelül 0,3-0,7 móltörttel lehet jelen. A molekulatömeg körülbelül 2000-40000 dalton közötti érték, és előnyösen körülbelül 3000-12000 dalton.
A találmány szerinti polípeptidek a találmány körébe tartozó más kopolimerek molekulatömeg tartományának meghatározására alkalmazhatók, A találmány szerinti kopolimerek három, négy vagy őt vagy több aminosav kombinációjából állhatnak. Általában a találmány szerinti kopolimer molekulatömeg tartományának meghatározására a polipeptid molekulatömeg kalibráló standard meghatározott molekulatömeggel, és olyan aminosav összetétellel rendelkezik, amely a szóban forgó kopohmerének
S41S3-4ő04-MOI/SmO n * κ ft közelítőleg megfelel· A szakember számára nyilvánvaló, begy a kopolimerben az aminosavak eloszlásában bármely eltolódás meghatározható a fentebb a GLAT-kopolimernéi ismertetett módon. Például egy terpolimer csoport minden egyes pozíciójában lévő aminosavak relatív mennyiségei megkaphatok egy Edman-lebontás minden egyes lépéseiből származó termékek elemzésével. Más megoldásként egy terpolimer csoportban lévő aminosavak arányai a szintézis során követhetők. Ahol az alkalmazható, molekulatömeg kalibráló standardok szintetizálhatok az eltolódás tükrében. Továbbá bizonyos előnyős terpolimer molekulatömeg kalibráló standardok aianínt vagy tírozint tartalmaznak a 4. pozícióban.
Az előnyős polipeptid molekulatömeg kalibráló standard szekvenciákra példákat az 1. táblázat tartalmaz (szekvencia azonosító számok; 1-7) a hagyományos egy betűs aminosav jelzés alkalmazásával, az N-iáncvéglöl a C-láncvég felé olvasva. A hét jelzett szekvencia poiipeptidek egyedi preparátumai, amelyek a glatiramer-acetátnak megfelelő aminosav összetétellel rendelkeznek, Általában egy molekulatömeg kalibráló standard molekulában lévő aminosavak túlnyomó többségben egy konfigurációjúak (D~ vagy L-konfiguráció). Előnyős kiviteli alakokban a molekulatömeg kalibráló standard molekula teljes mértékben azonos konfigurációjú aminosavakből áll. Azonban kevert konfigurációjú aminosavakaf tartalmazó molekulatömeg kalibráló standard molekulák előnyösek lehetnek bizonyos kiviteli alakokban, ahol a molekulatömeget olyan giatiramer-aceíáí preparátumra határozzuk meg, amely kevert konfigurációjú aminosavakat tartalmaz.
t: 1 $ .*
94t33~4Sö4~MOí/XrnO ♦ * * * 5 Φ ♦ Φ Xt
Kiválasztott TV£& ΥΉ Λ-CS £&Τ?' «Χί. £££& A Ο£2>«& V
| 1 TV··## 5 | Szekvencia asonosj· tási szám | Szekvencia | |
| | TV-35 | 1 | A A XfX?f A & íZTZ & V&T?f ?? & XT A Δ A 33* A A A XZYJ* A | |
| TV-45 | 2 | a ÍOrVA ΪΖΈΖ A SZ Λ 1ΖΪΖΔ VSZA A ΚΓ Á XZ3Z A A SZÍVSZ TZ A AAYEA | k A 'SS'SZA & AXZXjZ 1 |
| 1 TV-56 | 3 | KAEAAKAAAKEAAYEA | ί ΧΖ1ΖΈΖ A ΑΧΖν· s |
| TY-öő | 4 | A 3Ζ3ΖΛ7.& ΤΖ”ϊΖ37*ΧΖΔ V A-XZ A3ZXZ & t*1 A XZ A A XZIZ A '£Z A $ TZXZ’ | ΓΑ.ΚΑΑΚΑΕΚ- |
| TV-77 | 5 | Λ ΤΖΥΖ1Λ A Χ^ϊΖΈ^ΤΖ A XZ A YZ YZ A TF· YZ A A TZYZ A Tf' A YZ A A AUZ A A 82* ? ΪΖΧΖΧ7 A XZ A A SZ A ΐ? XZXZXJ^V A A A Yj'· A TZ'V'tZ A YZ A A ΥΖΆ A A YZ33* | . Ví^TZYZ A T5* A Yy> A |
| TV-S6 | 6 | AXZSZ^A^’XZ'S^SZ'A'V A SZYZ ASZSZ A A XZSZ&W & XZ Á'V'IZ Δ A X3* TZTZ^/AXZ A &1Z'&33%XíTXZX?*'VA A ATF·ft XZSZXZ A XZ& A'XZXZ ΑΛΖΧΖ * EAAYEA | iVwYZA YZAÍ^ ΑΛΊ&Γ-* |
| TV-109 | 7 _______ | A.XZYZ%/Á 3ZIZ A SZXZ A AZ A SZXZÁ'SZ'A A SZ’K'SZ'SZ A”V A XZSZX?* A ÍZ j íz a XT A SZ A SZT^V A SZTTA A XZ AXZSZiy1 A’V'SZ AXTAXZSZVÁ ΧΖΑ i jouxxS^Z&AMrZxjnue^ *ZaÍ^J^ZAZx-A»Z4.*?i.*>t~4L«A X xxZ^£bZaX»J£svi 2xa\ZsJT |
egy más sorozatát ismerteti terpolímer molekulatömegének me; szerinti elválasztó oszlopon. A dardok sorozata p hatnak 2-től körülbelül 10 vagy előnyös kiviteli alakban a 7. Minden egyes
latiramer-acetát vagy egy
stansfcandardok állstandardböl. Egy száma körülbelül körülbelül 2000-
amxnosav
Φ*
Φ *
- 2:
* φ φφφφ φ ΧΦφ összetétellel rendelkezik, amely közelítőleg megfelel a glatlramer-acetát vagy a terpeiimer összetételének..
Amikor ilyen molekulatömeg kalibráló standardok sorozatát í.J *
alkalmazzuk a glatíramer-acetát vagy a terpoiimer moiekulatö- Γ’?
&»»»» megének meghatározására standardként, közeiitöleq lineáris · , tn kapcsolat van a molekulatömeg kalibráló standardok retenciós «*5^ ♦ *’ <s
Ideje a kromatográfiás oszlopon és a molekulatömeg logaritmusa között. Annyi kalibrációs standardot alkalmazunk, amely elegendő a közelítőleg lineáris kapcsolat biztosításához, bár ennél több· alkalmazható. A 3, ábra a közelítőleg lineáris kapcsolatot mutatja a relatív retenciós idő és a molekulatömeg logaritmusa között a találmány szerinti TV-kalibrácios standardok esetében.
Más kiviteli alakban közelítőleg lineáris kapcsolat van a molekulatömeg kalibráló standardok moláris edipficitása és a kalibráló standardok molekulatömege között. Amikor a glaííramer-acetát preparátum molekulatömegét moláris eUipticItással határozzuk meg, annyi kalibráló standardot alkalmazunk, amely elegendő a közelítőleg lineáris kapcsolat biztosításéhoz, bár ennél több alkalmazható. A glatlramer-aceiát vagy terpoiimer preparátumra a lineáris kapcsolaton alapuló molekulatömeget kapunk. A 2. ábra a találmány szerinti TV-kallbráclós standardokra a moláris ellipticrtás és a molekulatömeg közötti közelítőleg lineáris kapcsolatot mutatja.
A találmány szerinti gyógyászati készítmények. A GLAT-kopohmernek összetételében megfelelő, találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok optimális esetben biológiai hatással rendelkeznek és a GLAT-kopotímerre! azonos módon alkalmazhatók betegségek kezelésére. A biológiai hafasS4133-4604-MOl/Kmö
X i
sál rendelkező TV~kaHhrációs standardokra váltakozva gyógyászati kalibráló standardként hivatkozunk. Például a GLAT-kopolimer alkalmas emberekben solerosis multiplex (MS) kezelésére és egerekben kísérleti allergiás encephefomyelitís (EAE) blokkolására. A GLAT-kopollmernek megfelelő, találmány szerinti, meghatározott molekulatömeggel és aminosav összetétellel rendelkező pollpeptidekröl ezúton kimutatjuk, hogy hatásosak egér modellben és a GLAT-kopoilmeréhez hasonló immunológiai tulajdonságokat mutatnak. Azok a monoklón antitestek, amelyek GLAT-kopolimerhez kötődnek. TV-katibrációs standardokhoz is kötődnek. Továbbá bizonyos T-sejteket, amelyeket a GLAT-kopohmer serkent, a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok is serkentik.
* *
* «
Hasonlóan a meghatározott molekulatömeggel rendelkező és a gyógyászatiiag alkalmazható terpoHmernek megfelelő aminosav összetétellel rendelkező polipeptid optimális esetében gyógyászatiiag alkalmazható. Általában egy biológiailag aktív kopolirnernek összetételében megfelelő polipeptíd molekulatömeg kalibráló standardok optimális esetben hasonló biológiai h a t á s s a I re n d e I k e ζ n e k.
A találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok gyógyászatiiag elfogadható hordozóanyagot tartalmazó gyógyászati készítményekké szerelhetők ki. A jelen leírásban alkalmazva a “gyógyászatiiag elfogadható hordozó” jelentése magában foglalja az összes oldószert, diszperziós közeget, bevonatot, baktériumellenes és gombaölő szert, szótőn és felszívódást késleltető szert, édesítőszert és más ezekhez hasonlókat. A gyógyászatiiag elfogadható hordozóanyagok sokféle anyagból
S'41-83-46Ö4-MOf/K?nO ·· 24 ·» * » fc * « « fc * * * ν * * «<· «««» .»»„ előáliíthatók, ideértve az lílatanyagokat édesítőszereket és egyéb anyagokat, így például puffereket és abszorbensaket, amelyek szükségesek lehetnek meghatározott gyógyászati készítmény előállításához, az anyagok köre nem korlátozódik azonban ezekre. Az ilyen közegek és szerek alkalmazása a gyógyás-zatilag; hatásos anyagokkal a szakterületen ismeretes. Kivéve, ha bármely hagyományos közeg vagy szer összeférhetetlen a hatóanyaggal, annak alkalmazása a gyógyászati készítményekben nem tartozik a találmány körébe. Kiegészítő hatóanyagok szintén a készítményekbe foglalhatók. A találmány szerinti készítmények kíszersíhetők Injektálható oldatként vagy szuszpenzióként, spray-oídaíkéní vagy szuszpenzióként.
A gyógyászati készítmények a találmány szerinti egy vagy több molekulatömeg kalibráló standard egy mennyiségét tartalmazzák. Előnyösen a molekulatömeg kalibráló standardok lényegében a tlrozin, az aianln, a glutaminsav és a lizin nevű aminosavak közül mind a négyből vagy bárom aminosavból állnak meghatározott mól törttel. Az aminosavak móltőrtjei a fentiek szerintiek.
Egy kiviteli alakban a gyógyászati készítmény molekulatömeg kalibráló standardjai képesek egy H-osztályú MH'Cproteínhez való kötődésre, amely előnyösen egy autoimmun betegséggel függ össze, A il-osztályú MHC-profein körülbelül egyenlő méretű a. és β alegységekből áll, amelyek közül mindkettő traoszmembrán protein. Egy pepiid kötőzseb képződik az α és a ö alegységek a minő-végi részei által. Ennél a peptíd kötőzsebnél történik ez antigén bemutatása a T-sejteknek. Legalább három típusú Il-osztályú MHC molekula van: a HLA-DR, a
941 83~48G4-MOLKmO <
φ « <,
- 25 ♦ * * * ♦ »χ
HLA-DQ és a HLA-DP molekulák. Számos alléi is van. amely ezen HLA-molekulák minden típusait kódolja. A ll-osztályú MHC molekulák túlnyomó többségben 8-hmfoclták és antigén bemutató sejtek, igy például makrofágok felületen expresszálódnak. Bármely megfelelő eljárás alkalmazható annak megállapítására, hogy a molekulatömeg kalibráló standard egy vagy több ll-osztályú MHC-proteinhez kötődik-e. Például a polipeptíd radioaktív jelzéssel látható el vagy híolmílezhetö, keverhető nyers vagy
V « XX φ « » w ♦ β
Φ * • * XX tiszta ll-osztályú MHC-protein preparátummal és a kötés detektálható a jelző (reporter) molekulának a ll-osztályú MHC-proteínhez való tapadása által a nem kötött polipeptíd eltávolítása után.
Egy másik kiviteli alakban a molekulatömeg kalibráló standardok képesek a sclerosis multlplex-szel összefüggő H-osztályú MHC-proteinhez való kötődésre. A szóban forgó kiviteli alak szerinti polipeptíd a sclerosis multlplex-szel összefüggő H-osztályú MHC-protein antigén kötőhelyéhez azonos vagy nagyobb affinitással rendelkezhet, mint a kopohmer-1. Ezáltal a találmány szerinti pohpeptid gátolhatja a megkötést vagy leszoríthatja a mieiin autoantlgének kötését a ll-osztályú MHC-proteinről. A sclerosis multlplex-szel összefüggő egy ll-osztályú MHC-protein a HLA-DR4 (DR8V1501)
Más kiviteli alakban a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok képesek arthritlses állapottal, például rheumatoid artritisszei vagy csont-ízületi gyulladással összefüggő ll-osztályú MHC-proteinhez való kötődésre. Ennek megfelelően a szóban forgó kiviteli alak szerinti pohpeptid az autoimmun betegséggel összefüggő ll-osztályú MHC-protein antigén
183-460 4 -MOí/KmÖ fc fc fc fc fc fc fcy * * fc fc ♦ *# fc kötőhelyéhez nagyobb affinitással rendelkezhet,, mint a H-típusú kollagén 261-273 peptid. Ezáltal a találmány szerinti polipeptid a ll-típusú kollagén 261-273 peptid kötését gátolhatja, vagy a szóban forgó pepiidet leszoríthatja a ll-osztáíyú MBC-protein antigén kötőhelyéről.
A találmány szerinti gyógyászati eljárások. A találmány továbbá eljárásokat Ismertet immunbetegségek kezelésére és megelőzésére emlősökben, amelyek szerint a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardot tartalmazó készítmény gyógyászatítag hatásos mennyiségét adagoljuk.
A találmány szerinti autoimmun betegségek közé tartoznak mind sejt-szabályozott betegségek (például T-sejt), mind antitest-szabályozott (például B-sejt) rendellenességek. Ilyen rendellenességek lehetnek többek között arthritises állapotok, demielinezési betegségek és gyulladásos betegségek. Például a találmány szerinti polipepfldekkel kezelhető autoimmun betegségek közé tartozik a scierosls multiplex (MS), a rheumatoid arthritis (RA), a csont-ízületi gyulladás, az autoimmun haemohíikus vérszegénység, az autoimmun petefészek gyulladás, az autoimmun pajzsmirigy-gyulladás, az autoimmun uveoretiniíis, a Crohn-féie betegség, a krónikus immun trombochopenikus vörheny, a vasfagbélgyulladás, az érintés érzékenységi betegség, a diabetes mellhús, a Graves-féle betegség, a Guilíain-8arre-féie tünetcsoport, a Hashimoto-féle betegség, az Idiopathfás mixödéma, a myasthenia gravis (izomgyengeség), a pikkelysömör, a közönséges bőrhólyagosodás (pemphigus vulgáris) vagy az általános lopás erythematösus. A találmány szerinti készítmények
94163-460-4-MOf/KmO « * *’ / * * ** **$« »#', ?· alkalmazhatók a szóban forgó betegségek közül egy vagy több kezelésére.
Az '‘arthrífises állapot kifejezés jelentése a jelen leírásban alkalmazva olyan állapot, ahol a rheumatoid arthritis legalább egy tünete tapasztalható egy emlős legalább egy ízületében, például váltban, térdben, csípőben, hátcsontban vagy az emlős egy ujján. Az arthritises állapotok közé tartozik a ‘'poiiarlhntssA amely olyan arthritiséé állapot, amely több mint egy ízületet érint, a serdülőkori (jovenflis) arthritis, emberek arthritíses állapota 21. életév alatt, a Felty-féie tünetcsoport, amely magában foglalhatja a neutropénia, a splenomegália (íépnagyohbodás), a fogyás, a vérszegénység, a nyirokcsomó duzzanat (lymphadenopáthla) és a bőrön pigment foltok tüneteit,
A jelen találmány szerinti immun-közvetített betegségek egy vagy több antigénre való nemkívánatos immun hiperérzékenységgel jellemezhetők, és ezek közé tartoznak a gazda-béül· tetetí-szövet-típusú betegségek (HVGD) és a beűltetett-szővetgazda-fipusú betegségek (GVHD), amelyekre példa sorrendben a gazda immunrendszere által a beültetett szövet kilökése és a donor-T sejtek gazda elleni támadása. Ezek a betegségek jelentős akadályt képeznek az átültetési (transzplantációs) rendszerekhez, igy például szervátültetésekhez és csontvelő újraképzéshez. Más találmány szerinti Immun-közvetített betegségek közé tartoznak a késleltetett típusú hiperérzékenység (DTK), amely kontakt antigénekkel, Így például szömörcévei és mérges szömörcévei (Rhus-toxicodendronj, számos kémiai anyaggal és tüdővésszel (tuberkulózis), leprával, lelshmaniasis-szal, mély gombafertőzéssel stb. függ össze.
94183-4604-iMÖÍ/KmO » ' ·* :( 9 * * fc ·* '·*« «fc -jc <
««
Egy kivitelt alakban bármely autoimmun betegség kezelhető a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardokkal, amennyiben a szóban forgó kalibráló standard olyan ll-osztályú MHC-proteinhez kötődik, amely az autoimmun betegséggel őszszefügg. A szóban forgó kiviteli alak egy formája eljárást Ismertet, amely szerint kiválasztunk egy olyan molekulatömeg kalibráló standardot, amely gátolja egy antigén peptid H-osztályű MHC-profeinhez való kötődését (például olyan eljárást, amely szerint olyan molekulatömeg kalibráló standardot választunk továbbá, amely gátolja a ll-osztályú specifikus T-sejt válaszokat ll-osztályú MRC-protein-peptid-komplexhez) és eljárást, ahol az antigén peptid az autoimmun betegséggel összefügg; a találmány más kiviteli alakjában eljárást ismertet, ahol a ll-osztályú MHC-protem egy atuolmmun betegséggel függ össze.
Egy más kiviteli alakban egy emlősben autoimmun betegség kezelésére irányuló eljárás során gátoljuk azon T-sejtek .szaporodását vagy működését, amelyek felelősek az antigénért. Az RA egy T sejt-közvetifeft autoimmun betegség, amely a találmány szerinti polipepíidekkei kezelhető. Az autoimmun betegségek kóros folyamatait és az immun kilökést T-sejtek szabályozzák. Az antigénhez kötődés után és annak felismerését kővetően a T-sejtek szaporodnak, cifokineket választanak ki és további gyulladásos és citotoxikus sejteket gyűjtenek a helyre, A találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok megakadályozzák a T-sejtek szaporodását és a T-sejtek olyan funkcióit, mint a citokin kiválasztás és a gyulladásos és citotoxikus sejtek az adott helyre való gyűjtése. Amikor az autoimmun betegség arthriílses állapot, az autoantigén lehet kollagén és a találmány
94183-4604-MOl/KmO ♦ « ·· 29 szerinti molekulatömeg kalibráló standardok gátolhatják a kollagénre reagáló T-sejtek szaporodását és működését.
Más kiviteli alakban emlős autoimmun betegségek kezelésére szolgáié eljárás szerint a molekulatömeg kalibráló standardot egy antigén bemutató sejthez, így például makrofághoz, dendrites sejthez vagy limfoid szövethez vagy hámsejthez kötjük. A T-sejtek szaporodása és működése aktiválódik, amikor egy megfelelő antigént mutatnak be azoknak. Az antigén bemutató sejthez való kötéssel a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok gátolhatják vagy egyébként befolyásolhatják a T-sejt aktiválódást.
Egy másik kiviteli alakban az emlős autoimmun betegsége kezelésére szolgáló eljárás szerint a molekulatömeg kalibráló standardot egy olyan Π-osztályú protein, nagyméretű hísztokom páti bili tás komplexhez kötjük, amely az autoimmun betegség összefügg. A ll-osztályú MHC-profeinek túlnyomó részben a B-íimfocilák és az antigén bemutató sejtek, igy például makrofágok felületén expresszálódnak. Ezek a ll-osztályú MHCprőtéinek peptid-köiö zsebbel rendelkeznek, amely az a hely, ahol az antigén pepiideket a ϊ-sejteknek bemutatják. Amikor a találmány szerinti polipeptidek egy ll-osztályú nagyméretű hisztokompatibilitás proteinhez kötődnek, a szóban forgó polipeptidek blokkolhatják vagy egyébként befolyásolhatják az antigén bemutatást és/vagy a T-sejt aktiválást.
Egy másik kiviteli alakban egy emlősben autoimmun betegség kezelésére szolgáló eljárás szerint a molekulatömeg kalibráló standardot kopolimer-1-reaktív δ-sejt antitestekhez és/vagy k opo li mer-1 -reaktív T-sejtekhez kötjük. A kopoilmer-l-reakfiv
94183-46 04-MGí/KroO
Ο * X fc fcfc *« fc
Tb'2/3 T-sejtek a kopolimer-l gyógyászati hatását fokozzák. A. kopoiimer-1 -reaktív T-sejtek megkötésekor a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok serkentik a szóban forgó T-sejtek szaporodását, gyuHadáselienes ciíokinek kiválasztását és növelik a találmány szerinti eljárások által megvalósított kezelés gyógyászati előnyeit A találmány szerint a molekulatömeg kalibráló standardok autoantigén-reaktlv antitestekhez is kötődnek, amely blokkolhatja az antitestet a. célszövet megtámadásában, ezáltal segítve az autoimmun betegség kifejlődésének m eg a k a d á I y ο z á s á t
A találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardokat adagolhatjuk bármely megfelelő- módon-. Egy kiviteli alakban a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardokat adagolhatjuk injekcióval az autoimmun betegséggel érintett szövetekhez való eljuttatás elősegítése érdekében. Ezáltal a találmány szerinti molekulatömeg kalibráló standardok lehetnek például injekciós adagolásiak,. a tápcsatornából felszívódok, beiégzéses vagy helyi aikaimazásúak. A találmány szerinti molekulatömeg kalibráld standardok kiszerelhetök krém, oldat vagy szuszpenzíó formájában helyi adagolásra. A molekulatömeg kalibráló standardok előnyösen orális, helyi vagy adjuváns hozzáadása nélküli, injekciós adagolásnak.
A találmány szerint alkalmazható készlet (kit). A találmány egy kiviteli alakjában egy készletet ismertetünk egy analizálandó anyagnak egy MHC-profe'mhez való kötésének vizsgálatára, a szóban forgó készlet vlzoldékony MHC-proíeiní, például egy nem emlős sejtben rekombináns módon előállított MHC-proteiní és az MHC-proteinen kötött analizálandó anyag detektálására
S4183-4S04-MOI/KotOφφ * φ φ φ
X
X « ** Ί eszközt, valamint használati utasítást tartalmaz, A készletben alkalmazott MHC-protein egy H-osztályú MHC-protem, amely le- . .
* * A hét ll-osztályú MHC HLA-DR1 protein, H-osztályú MHC HLA-DR2 i. \ ♦ « *· protein vagy H-osztályú MHC HLA-DR4 protein. A készlet tartalmazhat továbbá egy autó-antigén peptidet. A találmány sze- v?
* ΦΧφ £ ·* Φ rmti készlet alkalmazható például a találmány szerinti moleku- * latömeg kalibráló standard H-osztályú MHC-proteínhez való kötődésének vizsgálatára vagy egy autó-antigén peptid MHC-kötésének gátlására.
Egy előnyös kiviteli alakban a H-osztályú MHC-proteínt egy gerinctelen állatban vagy egy mikroba sejtben állítjuk elő, Igy például egy rovarsejtben vagy élesztősejtben, ezért az mentes az antigén kötözseben kötött peptidtől. Az analizálandó anyagnak az .MHC-proteinhez való kötődésének detektálására szolgáló eszköz lehet a szakterületen ismert bármely radioaktív, fluorímetriás, kemikimmeszcenciás, enzlmatlkus vagy kolorimetriás eszköz. Egy előnyős kiviteli alakban az MHC-protein II-osztályú HLA-DR1 vagy HLA-DR4 protein. Az előnyös autoantigén pepiidre példák a kollagén-!l-peptld, mie-hn alapú proteinből származó peptid, mseim oilgodendrit protein vagy más, egy autoimmun betegségben lévő proteinből származó peptid.
A következő példák a találmányt részletesen ismertetik, bemutatva, hogy annak bizonyos specifikus, jellegzetes kiviteli alakjai hogyan állíthatók elő; az anyagok, a készülék és az eljárási lépések kizárólag szemléltető példákként értendők. Közelebbről, a találmány nem értelmezendő az itt Ismertetett eljáráS4T33-46ö4-MOl/Km€>
« φ ** sokra, anyagokra, körülményekre, eljárási paraméterekre, készülékre és más ezekhez hasonlóakr-a korlátozva.,
A jelen szabadalmi bejelentésben különböző publikációkra, szabadalmakra és szabadalmi bejelentésekre hivatkozunk. A találmányhoz tartozó technika állása teljesebb ismertetése érdekében a szóban forgó publikációk, szabadalmak és szabadalmi bejelentések tartalmára teljes egészében referenciaként hivatkozunk a jelen szabadalmi bejelentésben.
Nyilvánvaló és elvárható, hogy az itt Ismertetett találmány élelmétől való eltérések a szakember által megvalósíthatók. Az ilyen módosítások a találmány körébe tartozónak tekintendők.
A következő példák a találmányt tovább szemléltetik.
1, példa
A TV-kalíbrációs standardok fizikai tulajdonságai
S z i 1 á r d f á z i s ú s ζ ί n té z is
Prof. M, Frldkin (Weizmann instítute of Science) laboratóriumában hét, körülbelül 3700-12000 dalton molekulatömegű molekulatömeg kalibráló standardot állítunk elő (2. táblázat). Ezeket a kalibráló standardokat TV-kalíbrációs standardoknak nevezzük. Az egyes peptídeket TV··## néven nevezzük, ahol a ## jelentése az aminosav egységek száma (például a TV-35 jelentése 3S egységből álló kalibráló standard). A szóban forgó kalibráló standardok aminosav összetétele megfelelő a glatüamer-acetát leírásoknak (2. táblázat).
9418.3-4SÖ4-M:Öi./K?nO·
2, táblázat
| TV-35-3757 Dalion molekulatömegű pepiid | ||||
| 3 | 1 Alá | | Glu | | Tyr | j Lys |
| 1 Az egységek szama | 5 | l 3 | ) 12 I | |
| i Móltört | 1 0,429 1 | 0,143 | | 0,088 | í o 34 3 1 |
| TV-45 - 4790 Dalton moieknlatömegű peptld | ||||
| i ’ [: A la | | Glu | | Tyr | Lys j | |
| ÍAz egységek száma | | 20 1 | 8 | I 4 | 15 | |
| | Mólt őrt | 1 0,444 = | 0,133 | I 0,089 | 0,333 I |
| TV-56 - 6008 Dalton molekulatör | negű pepi | id | ||
| Alá Ι | Glu | | Tyr | Lys i | |
| Az egységek száma | 24 | | 8 | 3 i 5 | 19 | |
| Móltőrt | 0,429 | | 0,143 | I 0,089 | 0,339 I |
* *
* X 9* 9 9 9 X Φ Φ # χ.
TV-66 - 7040 Dalton molekulatömegű peptld
| I Alá | Glu | Tr | Lys | |
| Az egységek száma | ...............1.........2:9....... | S | 8 | í: JL. itt ; |
| Mólt Ő rt | I 0,439 | 0,136 | 0,091 | 0.333 1 |
TV-77 - 8259 Dalton moleknlatömegő peptld
[ 0,429 I 0,143 1.0,091 j 0,838 J TV-86 - 9220 Dalton molekulatömegű peptld
GI u la
Az egysegek száma
Móltört
_12 i 8 29 | 0,430 I 0,140 | 0,093 0,337 |
S4 183-4604-MOl/KmO
TV-109 - 11727 Dákon molekulatőmegű peptid »♦
| --- -------------|......... | A la | Glu i Tyr ) | Lys | ||
| IAz egységek száma | j 48 j | 15 | 1 10 | 38 |
| | Mőltőrt | T 15' 1 0,422 i | 0.138 | 1 0,092 1 | 0,349 |
* *
Az fa., 1b., 1c. és 1d. ábrák sorrendben az alanin, a lizin, a ’* ’ glutamínsav és a tirozin megoszlását mutatják a 2. táblázatban ismertetett TV-kaiíbráoiös standardokban. Az aminosav pozíciót az X-tengelyen jelöljük ügy, hogy az első aminosav a C-láncvégi helyzetnek felel meg. Az aminosav jelenlétét a jelzett aminosav pozícióban függőleges sáv jelzi.
Polipeptid mintákat elemzőnk közvetlenül azok előállítása után, elektron spray ionforrással felszerelt VG-platíorm tömegspektrofotométer alkalmazásával. Néhány hónappal később az analízist TEVA-nál megismételjük elektron spray ionforrással felszerelt PE-Sciex AP1300 tomegspektrofotométer alkalmazásával (3. táblázat, első preparátum). Ezek az eredmények jelzik, hogy minden egyes polipeptid TV-kalibrációs standard egy, cél szerinti molekulatömeggel rendelkező fő komponenssel rendelkezik.
94t83-4604-MO|/kmO ♦ **
- 35 3, táblázat piás elemzése
| | Szándékolt j molekulatömeg j (dalion) | Meghatározott molekulatömeg - 1. preparátum (dahon) | Meghatározott molekulatömeg - 2. preparátum ί (dalion) | |
| i TV-3 5 | | 3757 | 3757 | 0 7 £ 7 l í kJ S $ |
| ! Tv-45 | | 4790 | 4790 | 4790 | |
| | TV-5 5 | | 5008 | 8008 | 6005 |
| ! TV-66 | | 7040 | 7041 | 7040 | |
| TV- 7 7 | f 8259 | 8259 | 8259 I |
| TV-36 | I 9220 | 9220 | 9220 I |
| TV-109* | 1 11727 | 11728 | 11727 |
* A 109 egységből álló polipeptidet fordított fázisú oszlopon való frakclönalízálással tovább tisztítjuk. Három frakciói gyűjtünk, és a 2. számú frakciót kalibráló célokra kijelöljük, és TV-109 jelzéssel látjuk el.
A kalibráló standardok egy második adagját állítjuk elő. A tömegspektroszkópia igazolja, hogy a második előállítás szerinti poiipeptidek azonosak az első előállítás szerinti polipeplidekkel (3. táblázat, második előállítás). A két előállítás közötti hasonlóságot Superose-12 kromatográfiás eljárással is megerősítjük. Minden egyes kalibráló standard különböző retenciós időpontokban éles csúccsal eluál, tekintet nélkül az elemzett adagra.
94133-4604-MOÜKmO
Φ Φ Φ « Α Φ Α Φ
Ennélfogva a taláimány szerinti TV-kallbrációs .standardok reprodukálható tömegben állíthatók elő.
Edman lebontás
A polipeptídek szándékolt szekvenciáját az első előállítás Ectman-lebontási elemzésével erősítjük meg.
A polipeptídek jellemzése
Cirkuláris dikroízmus
A molekulatömeg kalibráló standardok és a giatiramer-acetát közötti szerkezeti hasonlóság előfeltétele a molekula méret szerinti elválasztó oszlop megfelelő kalibrációjának. A polipeptid szerkezetben lévő különbségek különböző hidrodinamikai méretet és ebből következően a kromatográfiás rendszerben módosult retenciós időt eredményezhetnek. A cirkuláris dikroizmossai megbatározott eiíipticitás a polipeptid másodlagos szerkezetének méréséül szolgál. Amikor a molekulatömeg kalibráló standardok és a glatiramer-acetát ellipticitása hasonló, a két vegyüiet szerkezete hasonló.
A polipeptídek moláris eliipticitását Johin-Yvon CO spektrofotométerrel határozzuk meg. A 2. ábra és a 4. táblázat megmutatja, hogy a moláris eiíipticitás kiterjedése a polipeptid molekulatömegével összefügg. A legrövidebb pepiid a legalacsonyabb eiíipticitás értéket mutatja. Az új kalibráló standardok moláris ellipticitása azonos nagyságrendű a jelenleg alkalmazott glatiramer-acetát molekulatömeg kalibráló standardokéval. Megjegyezzük, hogy míg a TV-kallbrációs standardok pontos molekulatömegét ponfsorrai ábrázoljuk, a glatiramer-acetát szám szerinti átlagos molekulatömegét a pontsorban alkalmazzuk.
94183-4SG4-MOPKmO * '1, x * fc fc*
X
X
Ezé ital az új kalibráló standardok és a glatiramer-aeetát hasonló szerkezettel rendelkezik és ennélfogva a kalibráló standardok alkalmasak molekulatömeg kalibráló standardokként a glatlramer-acetát új preparátumaihoz.
* φ ♦ « « X
S * »«♦ XX fc fc * í í ;
4. táblázat fc
fcfc fc x
IVS öle k u I á r I s el 1 s p t i c s tá s
| j Molekulatömeg ka- j Nbráló standard | Molekulatömeg (dalion) | i Molekuláris el liptí oltás (210 nm) |
| | TV-kalíbráló stsn- | ||
| í dardok | | | |
| 1 TV-35 | 3757 | •1.5367 | |
| j TV-45 | 4790 | -2.1651 |
| i TV· 56 | 6005 | -3.9656 |
| | TV-66 | 7040 | •3.5172 | |
| TV-7 7 j | 8259 | -4,8365 |
| TV-86 | 9220 | -5,4546 |
| TV-109 | | 11727 | -6,818 |
| qiatiramer-acetát j | ||
| 8D 743 j | 3700 | | •2,0186 | |
8D 714__)______5600 j -4,4162
| 8 0 681 | 6600 | -5 | 2019 | |
| 80 677 | 7000 | a | 0153 | |
| 56895 | 8000 | 6 | 9062 | ________ |
| 90995 | 8500 | -9, | 17 36 | |
| 8D 856 | 8900 | -8, | 8576 |
S41S3’46Q4-MOI/K.mO
Λ
Ezek az .analitikai adatok jelzik, hogy a szintetizált TVkaílbráefös standard polipeptidek jelentős fokú hasonlóságot mutatnak a jelenleg alkalmazott gtatiramer-acetái molekulatömeg kalibráló standardokhoz. Az amlnosav-tartalöm a gíatiramer-acetátén belül van. Áz új polipeptidek és a glatiramer-acetát molekulatömeg kalibráló standardok hasonló, moláris elhptícitásként kifejezett másodlagos szerkezettel rendelkeznek. Ennélfogva a TV-kalibráeiós standardoknak olyan módon kell vándorolni vagy eluálni géípermeáclős kromatográfiás (GPC) rendszerben, igy például Superose-12 rendszerben,, mint a glatiramer-acetát preparátum.
A TV-kalibráeiós standardoknak és a glatiramer-aceiát preparátumnak a relatív retenclós idő (RRT) és a molekulatömeg logaritmusa között hasonló összefüggést kell mutatniuk. A TVkalibrációs standardokat több Superose-12 oszlopon kromatografáljuk. A csúcs retenclós időt minden egyes polipepiidre rögzítjük. A molekulatömeg logaritmusa (MW)· és a relatív retenclós idő (RRT) közötti lineáris összefüggést a kővetkezők szerint számítjuk;
RRT - 81 + 82 x logMW (lásd; 3a. ábra és 5. táblázat)
A most bevezetett Miílemum-aiapú adatszerzés! rendszer (Waters Corp., Milford, MA) GPC-oszlopokra integrált kalibrációt biztosít. A kalibráció az algoritmusra a retenclós időn alapul, és a következő egyenlettel adható meg;
183-4604-VOPKrrO
Φβ χχ
Φ X -X « φ * φ φ „ ,
4*9 φ J w
ΧΦ ΦΦΧ* ααγΦ*
LogMW ~ Α 4· Β χ RT vagy MW = 10{Α + 8xRT) ahol MW jelentése a molekulatömeg, RT jelentése a retenciós . „
9 * v fc idő, A és 8 jelentése sorrendben a számított regressziós függ- ?* «
4t ♦ vény tengelymetszete és meredeksége (3b. ébre. 5. táblázat).
fc
Ezzel az algoritmussal kapott eredmények gyakorlatilag \v « **A £ fc í azonosak azokkal, amelyeket az RRT-n alapuló, jelenleg alkai- « mázott algoritmussal kapunk. Az eljárások automatizálása érdekében a Miilenium-alapö adatszerzési rendszert alkalmazzuk a TV-kalibrációs standardok felhasználásával a kalibráció végrehajtására. Az elemzési eljárásokat ennek megfelelően korszerűs í t j ü k.
A lóg MW és RRT között jő korrelációt fr2 > G.,98) kapunk,, bár a pontok nem egyenletesen oszlanak meg a regressziós vonal körül. Ez az eloszlás megfelel a különböző kalibráló standardok eíiipfícításában tapasztalható különbségeknek, amint az a giaíiramer-acetátra is tapasztalható. A bizonyos lineantástől eltérő alacsony molekulatömeg kalibráló standard nem zárható ki, mert a regressziónak lefelé 2500 ballonig magában keli foglalnia értékeket az első standard deviáció {·* ISO) disztribúciós paraméterhez. Ez egy általános jellemzője minden rövidebb peptidnek - ezek kevésbé spirálisak, és inkább lineárisak.
A glatiramer-acetát molekulatömeg kalibráló standardokon alapuló kalibrációhoz a tengelymetszet (81) és a meredekség (82) sorrendben 1,7415 és -0,2784. Ez kedvezően viszonyul a TV-kalibrációs standardokra kapott kalibráló értékekhez (Bl ~
1,6996: 82 = -ö,27G5). A két kalibráló sorozatot alkalmazva kapott molekulatömegek a specifikációs tartományban tipikusan nem több, mint 20 %-kal térnek el az alacsony molekulatömeg
1 8 3-4 604-M 01/KmO • fc
4Ö
4# tte «4 * fc fc * > 4 « . ·' * r ** * fc-fc · « >fc 4 x»r » *» .y tartományban és nem több, mint 12 %-kal a csúcs RRT-specifikáciés tartományában (átlagos molekulatömeg). Ezen vi- . .
* r x v « szonylag kis különbség következtében telíesül az ;oény, hogy í. % « fc ezek a kalibráló standardok helyettesíthessék a jelenleg alkal- w, mázott glatiramer-acetát molekulatömeg kalibráló standardokat V?
X fcfcfc· i * í a molekulatömeg értékekben való jelentős változás nélkül.
5a. táblázat
Gtatiramer-aeetát molekulatömeg kalibráló standardok általi kalibráció
| : Kalibrációs | Molekula-- | | Molekula- | Csúcs re» | | RRT* |
| standard | tömeg | tömeg tóga» ritmusa | tenciós idő | 1 |
| TV-35 | 3757 | 1 3.575 | 28,97 | 0,728 j |
| | TV-45 | 4790 | 1 3,68 | ! 27,96 | 0,703 I |
| TV-56 | 6008 | j 3,779 | / i jC | 0,632 | |
| TV-66 | 7040 | 1 | 3,848 | Λ, Ό, CA | 0,662 I |
| TV-77 | 8259 | j 3,917 | 25,56 | 0,643 |
| TV-66 | 9220 | 3,965 | 24,93 | 0.627 |
| TV-109 | 11727 | | 4,069 | 23.57 | 0,593 |
| Tengely- metszet ί | ** A | 6.2516 | *** 81 1,699 | 6 |
| Meredekség j | 8 | -0,0918 | 82 -0,2705 | |
| 7 I | 0,9927 | 0,9923 |
* RRT = RT/RT-aceton ** a Millennium-egyenlet szerint számítva: lóg MW ~ A+BxRT *w* a következe egyenlet szerint számítva: RRT - 8? * Ss x lóg MW
341 83-4604 ÜÜOI/kfnO
-41 *# * w-X y.x.
* * * Ο * Λ9 y* * * Φ φ φ
4 9 χ J A
SÍ ♦*<» V'*»· W >
A TV-kalibrácíós standardokon alapuló kalibrációt a glatiramer-acetáí molekulatömeg, kalibráló standardokon alapuló z « s·· >
* «rtt kalibrációhoz hasonuljuk (5b,. táblázat). A két kalibrációt minden
Φ * •egyes kalibráció sorozatra a 0,5-0,8 RRT tartományban a moleku la tömeg számításával hasonlítjuk össze. A TV-kalibrálő stan- * dard kalibráló sorozat magában foglalja a iV-109 frakciót, amelyet az oszlop kalibráció- előtt fordított fázisú kromatográfiás eljárással tisztítunk.
Sb. táblázat
Oszlop kalibráció TV-kaiibrációs standardokkal
| | RRT í | | RT* (perc) i | 1 j Gfatlramerí -acetát 5 1 (molekula- i tömeg.!) | I tv (8»n | (molekula ί tömeg.m) ί | Különbség (molekulatömeg,m- i -molekulatömeg,!) i i i | |
| i (Dalton) | (Dalton) | ) (Dalton) | % | ||
| 0,5 | 19,89 | 28800 | 26700 | í -2100 | -7,3% ; |
| 0,51 | 20,28 | 25500 | 24500 | ! -2000 | -7,5% |
| 0.52 | 20,68 | 24400 | 22600 | -1800 | •7,4% |
| 0,53 | 21,08 | 22500 | 20700 | -1800 | -8,0% |
| 0.54 | 2148 | 2 0700 | 19100 | -1600 | -7,7%: |
| I 0.55 | 21,87 | 19000 | 17500 | -1500 | -7,9% |
| | 0.55 | 22,27 | 17500 | 15100 | -1400 | -8,0% |
| 0,57 | 22,67 | | 16100 | 14800 | -1300 | -8,1% ) |
| 0.58 i | 23,07 | | 14900 ) | 13500 i | -1300 | -8,7% j |
| 0,59 i | 23,46 | | 13700 ; | 12500 | | -1200 | -8.8% | |
| .. O l | 23,88 | | 12600 | 11500 | | -1100 | | -8,7% j |
94183-4604-blOi/KmO ** \
fcai «0
RT* p e re 3 icetát ((molekülaUekula- ; tömeg.m)
Különbség [ m ο 1 © k u f a t ö m e g. m -molekulatömeg. 1)
j 24,26 I 24,68
11600
10700 (□alton)______j (Pa lton;
s -1000
10600
9700
-6,7%
-9,3%
-1000
| 0,63 25,06 | 9800 | 9000 -800 | -8,2% | ||
| 0,64 | 25,45 | 9000 | 8200 1 -800 | -8,9% | ||
| ! 0.65 I 25,85 | 8300 | 7600 1 -700 | -8,4% |
| 0,68 | 26,25 | 7700 | 7000 [ -700 | -9,1% j |
| 0,67 | 28,85 | 7100 ! 8400 í -700 | -9,9% 1 | |
| ! 0,68 | 27,04 : | 6600 I 8900 1 -600 | -9,2% 1 -10,0% | |
| 0,69 l 27,44 | 6000 | 5400 -600 |
« fc $ * s
| 0 | 29.83 í | 3600 | 3300 | -300 | -8,3% j -11,8% j | |
| 0.76 | 30.23 1 | 3400 | 3000 | -400 | ||
| 0 | 77 | 30,62 ! | 3100 | 2800 | -300 | -9,7% |
| 0 | 78 | 31,02 | | 2800 | 2500 | -300 | -10,7% |
| 0 | 79 | 31 ^2 1 | 2800 | 2300 | -300 | -11,5% | |
| | | $ | |||||
| 0 | 60 | 31,82 | | 2400 | 2100 j | -300 j | -12,5% I |
941 S3-46ö4-MOi/KmO * φ > * * * φ φΙ *·» Α $ <
φφ
J,
Á TV-kalibrációs standardok tisztasága A kalibráló standardok közül hármat (TV-88, TV-77 és TV» A
-86) fordított fázisú kromatográfiás eljárással tovább tisztítunk. s* Három frakciót: kapunk minden egyes kalibráló standardra. A v
csúcs nagyobb részét tartalmazó középső frakciót Superose-12 *Λ* rendszerben a frakcionálatían kalibráló standardokkal összeba- ** * són Hív a kromatografáljuk (6. táblázat). TV-kallbráclós standardokat méret-kromatografálunk: tisztítás nélkül (szabályos) és fordított fázisú kromatográfiás tisztítás után (tisztitott). A csúcs retenciós Időket meghatározzuk és a különbségeket számítjuk. A csúcs retenciós idő a tisztítás fokától független marad. Ezért a szintézis végterméke alkalmas pontos kalibrációra és különös tisztítás nem szükséges.
5. táblázat
A tisztítás retenciós időre gyakorolt hatása
| 1 I T'¥-kalibrált* 1 i standard ί | Retenciós Idő (perc) | Különbség | |
| Szabályos | | Tisztított | ||
| 77-86 | | 28,200 | 26,233 | -0,13% |
| TV-77 | 25.450 | 25,450 | 0,00% |
| 24,857 | 24,850 | | 0,07% |
A mért értékek összefüggései (kereszt-megerősítés)
Hat adag, 1993-ban és 1994-ben gyártott glaíiramer-acetáíot TV-kalibrációs standardokkal kalibrált GPC alkalmazásával újra elemzőnk. Ezek átlagos molekulatömegét és molekuíatömeg-eloszíását a kibocsátásukkor mért értékkel összeba94183-4604-7Oi;KmG són Htunk.. A 7. táblázat a molekulatömeg adatok összehasonlítását mutatja az elemzés eredeti tanúsítványával és TVkalibrációs standardokkal kalibrált Supefose~12 oszlop alkalmazásával kapott molekulatömeg adatokkal. A mért értékekben lévő különbségek tipikusan kisebbek, mint íö %.
7, táblázat
Molekulatömeg meghatározások összehasonlítása « fc * fc fc * X fc « «««
| J Cop.~1 Pre- I p a rá tűm | Molekula- i tömeg l Millennium | Molekula- tömeg CoA | | %-os i s eltérés ί l | ||
| át | ag | 10250 | | 9900 | -3,5 % | | |
| I 00193 | - 1 | SD | 20950 I | 19100 | •9,7 % | |
| + 1 | SD | 51000 i | 4800 | -8,3 % | |
| áílao ί | 6700 j | 6550 | -2,3 % I |
00594
SD
15700
151 00 •4.0 % fc 1 SD
3600
3400
-5 Q %
Az „SD jelentése.' átlagos eltérés
94183-4604-MOVkmO « «
A kalibráló standardok stabilitása oldatban
A TV-kalibrációs standardokat 24 óra alatt négy alkatommal kromatografáljuk. Minden kalibráló standardot szobahőmérsékleten oldatban tartunk, és 8 órás időközönként elemezzük. A 8. táblázat a 4 időpontban a TV-kalibrációs standardokra mért csúcs retendós időt mutatja. 0,1 mg/ml koncentrációban a TVkalibrációs standardok oldatban legalább 24 óráig stabilak szoba h o m é rs é k I e te n.
8, táblázat
A TV-kalibrációs standardok stabilitása oldatban szobahőmérsékleten
| j Csúcs rétén dós idő (perc) | r~—-—--------- 5 Átlag | Eltérés (RSD) | ||||
| TV-3 5 | | 29,883 | 29,883 | i 29,900 | 29,950 | : 29,904 | 0,108 % |
| TV- 4 5 | 1---------- 1 28,933 | 28.917 | 28,917 | 23,933 | 28,925 | 0.032 % |
| TV-56 | f 28,250 | 28,217 | 28,283 | 28,250 | 28,250 | 0.085 % |
| TV-66 | | 27,400 | 27,350 | 27,433 | 27,433 | 27,404 | 0,143 % |
| TV-77 | 25,750 | 26,700 | 26,750 | 26,783 | 26,748 | 0,128 % |
| TV-88 | 26,1 17 | 26,100 | 28,150 | 26,150 | 26,129 | 0,095 % |
| TV- | 24,783 | 24,850 | 24,883 | 24,850 | 24,842. | 0,159 % |
| - í u y r ? 11 |
A kalibráló standardok oldatait ezen kívül különböző tárolási körülmények kozott (2-8 ’C, -10-20 ’C aziddal vagy anélkül) legfeljebb 3,5 hónapig tároljuk. A TV-kalibrációs standardok fa94183-48O4-MOi/Kmö
Φ Φ ♦ X XX •V Φ V >
* * φ φ φ « φ *Φ ΦΦΧχ « φ* »♦ * Φ * X*♦··« Φ* ♦ gyasztott oldat formájában legalább 3 hónapig tárolás-stabilak (9. táblázat). Óvatosságból a fagyasztott oldatokat 2 hónapig f, :
Φ x * Φ Φ engedjük tárolni.
V Φ
A liofilizált TV-kalibráciős standardok legalább 2 évig sta* χ Φ ♦ χ ♦ bilak a rendelkezésre álló stabilitási adatok szerint. /«λ
9. táblázat
Á TV-kalibrácios standardok stabilitása -lö - -2Ö °C hőmérsékleten
| A kalibráció időpontja | 1997. | | 1997. | i 1997. | |
| Intervallum (nap) | máj. 22. | jók 9. | szept. 4, | |
| 48 | 105 | |||
| Kalibráló | 1 ί Molekula- 5 | RT | ·· RT | RT |
| standard | tömeg | i | ||
| TV-35 | Ο í w ! | 28,867 | 28,867 | I 28.967 |
| TV-45 | 4790 | 27.833 | 7 7 QÍ7 Α». í , ‘~s ! ι | 27.950 |
| TV-56 | 6008 | 27,076 | 27,133 | 27,100 |
| TV-86 | 7040 | 26.233 | 26 317 | 26.300 |
| TV-77 | 8253 | 25,467 | 25,617 | 25,550 |
| TV-86 | 9220 | 24.88 3 | 25,017 | 24,950 |
| TV-109 | 11,727 | 23,500 | 23,650 | 23,583 |
Az „RT” jelentése: retenciós idő
A kalibráló adatok összegzése
A TV-kalibrácios standardokat összesen 53 alkalommal, két laboratóriumban elemeztük. Az adatok összegzését a 4. ábra és a 10. táblázat mutatja. Az egyes sorozatok között tapasztalható
34183-4SÖ4-MObkmO •ν különbségek (4. ábra) inkább az oszlopok közötti különbségeket., mint a résztvevő laboratóriumok közötti különbségeket tükrözik, Ezt jelzi a 4. ábrán az egyes kísérletekre eltérő jelek alkalmazása. A 10. táblázatban a kalibráló állandókat 16 oszlopra injektált 53 kalibráló sorozatból kapott adatokra a Miiiennium-egyenlet alkalmazásával számítjuk.
10. táblázat
A Píantex és az Abic laboratóriumokban kapott kalibráló állandók
| Retenciós idő | Retenciós sdő | |||||||
| Kalibráló staa dard | Moteku- latömeg | Közép- érték | Szórás (SD) | %-os eltérés (RSD) | Perc | Max. | Áííag- SD | Átlag* SD |
| TV-3S | 3757 | 2.9.69 | 0,463 | 1,6% | 28,85 | 30,35 | 26,30 | 31,03 |
| W-4S | 4790 | 28,72 | 0.481 | 1,7% | 27,88 | 29,40 | 27,28 | 30,16 |
| τν»5δ | 6008 | 27,99 | 0.520 | 1,9% | 27,08 | 28,77 | 26,43 | 23,55 |
| W-68 | 7040 | 27 ,19 | 0,526 | . -9% | 26,26 | 27,96 | 25,61 | 28,77 |
| TV-77 | 8259 | 2849 | 0,550 | 2,1 % | ......2351...... | 27,33 | 24,84 | 28.14 |
| TV-88 | 9220 | 25,83 | 0.556 | 2,1 % | 24,89 | 26,72 | 24,22 | 27,56 |
| TV-109 | 11727 | 24,56 | 0,557 | 2,3 % | 23.53 | 25,41 | 22,89 | 26.23 |
| Tenoelymetszet (A) | 64706 | 0,1220 | 1,9% | 6,2581 | 6,6500 | 6.1046 | 6,8366 : | |
| Meredekség; (8) | -0,0969 | 0,0032 | -3,3 % | •0.1014 | -0,0919 | -0,1084 | -0,0873 | |
| A | 0,9391 | 0.0022 | 0,2 % | 0.9368 | 0,9828 | 0,9835 | 0,9967 |
Az „SD jelentése: átlagos eltérés
941S3-46C4-MOf/KmO «♦♦χ χχ « «. * * ♦ 4 Λ » «4
-acetát preparátum lasa
Egy adag glatiramer-ac-etátra meghatározzuk a molekulatö- *,*♦/ meget (BN 90995). A 11, táblázat TV-kallbráló standard-kalíforált
V 4 $;:
oszlopon, 18 meghatározásból kapott adatokat összegzi. Λ2 t ; ϊ
11a. táblázat
A glaUramer-aeetát retencsós idői (BN 9Ö995)
| (SD) | %-os eltérés | ||
| f í I íi j Csúcs I | 26,208 | 0,434 | j 1,68 |
| I -2SD (2,5 %) | 19,865 | 0,528 | 2.66 | |
| -1SD (16%) | | 22,578 | 0,477 | I 2,11 |
| | +1SD (84 %).......| | 28,934 | 0,324 | I 1,12 1 |
Az „SD jelentése: szórás fo. táblázat
| | 1 | Átlag | (SD) | %-os eltérés | |
| I Csúcs : | 0,684 | 0,014 2,03 | |
| 1 -2SD (2,5 %) I | 0.503 | ;...........................................1 0,016 | 3,09 1 |
| | -1SD (16 %) | 0.572 | 0,015 j 2,54 |
| j + ISO (84 %) | | 0,733 | 0,011 | 1,53 1 |
Az sSD’ jelentése: szórás
94l83-4SŰ4-MOÚKmO
11c.
A glatiramer-acetát molek
| Átlag | (Sö) | i %-os eltérés i | |
| i Csúcs | 7459 | 146 | 1,95 | |
| -ISO (16 %) | 16622 | 466 | 2,80 |
| + 1SD <84 %) | 4089 | 77 | 1,89 I |
Az „Sö” jelentése: szórás
A molekulatömege és szekvencia-meghatározott kalibráló standardok sorozatának alkalmazása a Superose-12 oszlop kalibrálására számos előnnyel jár a jelenleg alkalmazott gíatíramer-acetát molekulatömeg kalibráló standardokkal szemben.
Először a szilárdfázisú szintézis biztosítja minden egyes adag különböző preparátumainak állandóságát. Tömegspektroszkőpiás eredmények (3. táblázat) megerősítették a szintézis reprodukálhatóságát. Az állandóság biztosítja a molekulatömeg meghatározások megnövekedett pontosságát.
Másodszor, a jelenlegi kalibráció minden egyes glaíiramer-acetát molekulatömeg kalibráló standard görbe alatti területének 50 %-ánál az RRT meghatározásán alapul. Az új kalibráló standardok éles- csúcsokként eluálnak. Azok alkalmazása a kalibrációban pontosabb, mint egy széles csúcs alatti terület 50 %-ánál a számított retencíós idő.
Harmadszor, előre meghatározott szekvencia által definiált molekulatömeggé! rendelkező kalibráló standardok alkalmazása előre kizár minden bizonytalanságot, amely a fizikai tulajdonsáS4183-46G4-MO!/KmO gok pontatlan mérésvei meghatározott molekulatömegű kalibráló standardok alkalmazását kísérheti.
Negyedszer, a kalibráló eljárás megkönnyíti az oszlopok normalizálását molekulatömeg meghatározásokhoz, tekintet nélkül az oszlop-töltések időpontja, kor vagy műszerezettség közötti kisebb változásokra.
3. példa
A TV-kalibrációs standardok biológiai aktivitása
A TV-kalibrációs standardok reaktivitása monoklán antitestekkel Cop-1-bez
A 12. táblázat anti-Cop-1 monokíőn antitestek TVkalibrációs standardokhoz való kötődését mutatja, A TVkalibrációs standardokat és referencia Glat-elöállítási adagokat tesztelünk. Míkrotitráió egységeket 2 ng/ml antigénnel vonunk be. Az értékek a monokiön antitestekhez kötött tíí6J-jelzett kecske anti-egér IgG percenkénti beütéseinek számával (cpm) vannak megadva. Minden egyes TV-kalibrálő standardhoz az antitest kötődést a Cop~1 referencia standardhoz való antitest kötődéssel hasonlítunk össze.
94183-4604-MOI/X.mO * t φ φ
Φφφ φ
Φ X * ΦΦΦ φ Φ*
12. táblázat
TV-kalibrációs standardok és Cop-1 reaktivitása mAbk-kel
| RlA-ban | ||
| | Bevonó antigén | Az mÁb kötődése | |
| cpm (%-os Cop-1 kötődési | ||
| anti-Cop-1 (3-3-8) | anti-Cop-1 | enti-Cop-1 (3-1-45) | (5-7-2) | |
| Foszfátpuffer oldat | 1384 | 315 i 521 |
| 03494 | 14880 | 20587 I 10513 |
| (glatlramer-aeefát) j | -—.....i-$ | |
| 55298 I | 13705 (91) | 17189 (83) | 8883 (82) I |
| | (giatírarner-acelát) j I | |||
| í 55396 | 13458 (90) | 1 17564 (85) | 9142 (88) |
| ί (qlatlramer-acetát) | j | ||
| TV-35 | 1176 (ö) | 34 3 (0) | 857 (1) |
| (T V-ka I i b rá I ó sta nd a rd) | |||
| TV- 5 8 | 1614 (2) | 1581 (6) | 9584 (91) |
| (TV - k a 1 í b r á 1 ó s í a n d a rd) | |||
| TV-77 | 2285 (6) | 2152 (9) | 4259 (37) |
| (TV-kalíbrálö standard) | |||
| TV-86 | 1825 (2) | 1608 (5) | 8140 (76) | |
| .(TV-kalibráló standard) |
Cop-1-specifikus T-sejtekfcei való reaktivitás
GLAT-kopolirnerrel serkenthető T-sejtvonalakat alkalmazunk
TV-kalibrációs' standardok serkentést aktivitásának, vizs ra
941S3-4504-MOhKmO szokásos GLAT-kopolimer előállítási adagokkal összehasonlítva
(13. táblázat). Mint fent, a TV-kalibrácIős standardok aktivitását in vitro vizsgáljuk. Számos egér- és emberi T-sejtvonal szapo- .\.j
Φ * rodását határozzuk meg tenyészetben peptidekre való reakcióí„:, ként. A sejtvonalak a következők; BALB/c-Ts~Cop-1. Balb/c-egerekből származó hőmérséklet-érzékeny vonal; L-22-1; FI * ;u egerekből származó hőmérséklet-érzékeny klón; SC-103 és SC-14: emberi Cop-1 specifikus T-sejt kiónok. A szaporodást 10 pg GLAT-kopoiimerrel vagy TV-kalibráló standarddal tenyésztett T-sejtvonalak ^H-timidrn felvételének mérésével határozzuk meg.
A glatiramer-acetát adagok serkeníőek. A TV-Ralfbrációs standardokat négy T-sejtvonaibőí kettő esetében szintén serkentőnek találtuk, bár nem olyan erősen. A TV-kalibráoiós standardokat mind az egér, mind az emberi glatiramer-aeetátra specifikus T-sejtek felismerik. Ez megerősíti, hogy aminosav szekvencia és T-:sejf ep.it őp hasonlóság van a glatiramer-acetát és a TV-kallbrációs standardok között.
A giatiramer-acefát és TV-kallbrációs standardok reaktivitása glatiramer-acetát specifikus T-sejtvonalakkal
| I Antigén i i i i | 3H-timidin | beépítés | ||
| “bÁLB/c- j Ts-Cop~1 | cpm (% * L-22-1 T | Cop-1) SC-ÍŰ3~~ | ; SC-14 | |
| i Foszfátpuffer oldat | 538 | | 207 | | 342 | 750 |
| ] 03494 | 32643 i | 15395 j | 3709 | 3091 |
| j (glatiramer-acetát) | l 1 |
9'4l83-4604-MÖVKmO
** > * * XX
SS -Ί 3.j « * « X*
| j 55296 I (glatiramer-acetát) | 35620 | 17315 Í7148 (81) (110) | (106) | 2973 (95) |
| 55396 (g I a t i r a m e r - a cet á t) | 34281 ) 17211 |7019 (80) (105) ) (105) | } i 5 | 3253 | (107) j |
| TV- 3 5 (TV-kalibráló standard) | '9465 (28)| 225 (0) i 438(0) 1 Ϊ | | 884 (0) i |
| [ TV-56 j (TV-kalibráló stanf dard) | “19545 |......232 (0 f j 237 (0) (59) | 1 1 1 5 ΐ | 1 3495 (117) |
| TV-7 7 (TV-kalibráló standard) | 17367 | 300 (1) | 327 (0) (52) ) | 2701 (83)| |
| TV-S6 I (TV-kalibráló sfan- i dard) i | 14094 1 418(1) 298 (0) (44) 1 | 2284 (65)ΐ [ |
♦ « + 4 *4
r.V e„u
A * t; :
♦ X «»♦ * *
Kísérleti allergiás A TV-kalibrácíós standardok fiziológiai aktivitásának vizsgálata érdekében kísérleti allergiás encephalomyehtis-töl (EAE) való védelmet vizsgálunk egerekben. Teljes Freund-féle adjuvánsban lévő kopolimer-1 és az encephaliiogén injekciója m kénes blokkolni az EAE-i,. amint azt Aharonl és munkatársai a 17 Eur. 3. Immunoi, 23., (1993) szakirodalmi helyen ismertetik. Más kutatók úgy találták, hogy a kopötimer-l gyógyászati hatása sclerosis multiplexben szenvedő betegek esetében szintén a TH2-selfek indukciójával függ össze. Lásd; Lahat és munkatársai, 244 J. Neurol. 129 (1997) szakirodalmi helyen. Ebben a példában a találmány szerinti különböze pQÍipeptidekkel blokkoljuk az EAE-i.
941 83-4604-IVIOI/X'nO * * * * ** ** φ φ ♦ * * * Λ ΛΚ * Φ φ φ * Φ *·* Χ*Φ* ÍWÍÍ φφί χ «» *
2-3 hónapos nőnemű (SJUJxBALÖ/c)F1 egérnek mind a négy lábába 1:1 arányban teljes Freund-íéie adjuvánssaí (CFA) emu Igééit, 4 mg/m! rmkobaktérium tuberkulózis H37Ra-vaI kiegészített egér gerincvelő homogenátot (3,5 mg/egér) injektálunk.. Pertussis toxínt (0,25 ml, 250 ng, Sigma) injektálunk intravénásán közvetlenül utána és 48 órával később. Az egereket naponta vizsgáljuk az indukció utáni 10. naptól kezdve az EAE klinikai jeleire nézve, amelyeket 0-5. skálán rögzítünk, amint azt Lando és munkatársai a 123 J, Immunoi. 2158 (1979) szakirodalmi helyen ismertették.
Az EAE blokkolása teljes arfjuvánssaí való injektálással
Minden tesztelt antigént enoephaiítogén oltóanyagba foglalunk, A 14, táblázat az EAE előfordulását mutatja olyan állatokban, amelyek TV-kalibráló standarddal vagy glaííramer-acetáttal kiegészített encephalítogén oltóanyagot kaptak és olyan állatokban, amelyek csak az encephalítogén oltóanyagot kapták. Az EAE átlagos kezdetét is mutatja a táblázat azokban az állatokban, amelyeket nem védtünk. A betegség intenzitását naponta rögzítjük az egerekben 0-5 közötti skálán (0 jelentése; egészséges, 5 jelentése: elpusztult), A kezdetet úgy határozzuk meg, mint azt a napot, amelyen az állat a betegségnek a szóban forgó skála szerinti legalább 1. súlyosságé tünetét mutatja.
4 18 3- 4 6 04 - Μ O i /'K mO fc « *
fclfc fc & «► fcfc «
fcfcfc* fc* fc « fc
X· fcfc* fc fcfc fcfí fc
14. táblázat
EAE-től való vedelem TV-kaHbráeiós standardok segítségével
941 S3-4SŰ4-MÖI/KmÖ megadás alapjául
SZOLGÁLÓ VÁLTOZAT
Sxafe&datesi leírás S ze kve n c i a I i s ta <220> Lís, Dóra
Gad, Alexander <12 ö> Gtstiramsi-aceíét rnofe-kuiatömeg kalibrációs stand erdők <230> 1662748401 <140 -ezúton bejelentett <2 42> 1S93-Ö2-24 <1SO> os 60/101,633 <251> 1933-36-25 <160 <2?0> WordPerfect 2,0 fór Windows <210> 1 <212> 35 <220 PRT <2i3> Mesterséges szekvencia · <220 <223> Szintetikus pepiid <400 1
Alá Lys Lys Tyr Alá Lys Lys Sin Lys Alá Alá Lys Lys Alá T'y.r Lys·
5 10 15 '
Lys Glu Alá Lys Alá Lys Alá· Alá Glu Alá Aia Als Lys Glu. Alá Alá ' 25 30
Tyr Glu Als <210 2 <211> 45 <212> PRT <213> Mesterséges szekvencia <220 <223> Szintetikus pepiid <400 2
Alá Lys Lys Tyr Alá Lys Lys Alá Lys Als Glu Lys Alá Lys Lys Alá 2 5 10 15
A /á (A/7 ,O / '-Ό
S4 1 33-4SQ4~Möí/KmO
Tyr Lys Ala Ala Glu Ala Lys Lys Ala Ala Lys Tyr Glu Lys Ala Aia 20 25 - 30
Ala Glu Lys Ala Αί, 35
A.l a Lvs Grs Ala a.:.s Tvr uiu Ar.
| «ί | |
| <211 > | 5 6 |
| <212> | PRT |
| <213> | Mas |
| <22O> | |
| &z$n | |
| <4QÖ> | 3 |
| Ar a L > | 'S Ly |
Lys Ala Ala Lys Lys Ala Glu Ala Lys Ala Tyr Lys Ala Ala Glu Ali
Lys Lys Lys Aia Glu Ala Lys Tyr Lys Ala Glu Ala Aia Lys Aia Ala
| Ala ly í | fs Giu 10 | Aia Aia Tyr Glu c. xí - |
| <21Ö> | 4 | |
| <21i> | 65 | |
| <212> | PRT | |
| <213> | Mestei | 'séges szekvencia |
| <220> | ||
| <223> | Szintet | ikus peptid |
| <400> | 4 | |
| Ala Li | rs Lys | Tyr Ala Lys Lys |
| 1 | £ |
5 5-5 lö
Ala Glu Ala uys Ala Ala Lys Lys Aia Lys Aaa Giu Ala Lys uys Tyr 20 25 30
941 33-4S04~MÜS/KmO
ΑΧίΐ Lys ΑΧe .Ti..;; Lvs Lys rys G2.u Ty- Ara .3.;0 Alá. 3l< Al.e
3.5 40 '45
Lys Tyr Lys Alá Slu Alá Alá Lys Alá Alá Ale Lys Glu Alá -Alá Tyr
Glu Alá 65 S 6 <210> 5 <211> 7?
<2.2 2> PRT <213» Mesterséges .szekvencia >
<220» <2.23> .Szintetikus peptid <400» 5
Alá Lys Lys Tyr Alá Lys Lys Glu Lys Alá Tyr Alá Lys Lys Alá Glu
| 4 | A | 10 | 15 | ||||||
| Lys AXs AXs. Lys Lys A1& | O'XU | Alá | Lys | Alá | Tyr Lys | Ara | Ars Glu | Al-3 | |
| 20 | 30 | ||||||||
| S» U> | |||||||||
| Lys 1 | ys Lys Alá Lys Ars | Glu | Alá | Lys | Lys | Tyr Ala | Lys | Al 3 Al | Lys |
| 35 | 40 | 45 | |||||||
| .Alá » | lu Lys Lys Glu Tyr | Alá | Az cl | Al e | Glu | Alá Lys | Tyr | Lys Alá | Glu |
| 50 | 55 | 00 | |||||||
| Al.% A | ls Lys Als Alá Alá | Lys | Glu | ALs | Alá | Tyr Glu | Ara | ||
| rr | 70 | 75 | 77 | ||||||
| <21S> | δ | ||||||||
| <221» | 86 | ||||||||
| <222» | PR? | ||||||||
| <2 23» | Mesterséges szekvencia | ||||||||
| <22 0> | |||||||||
| <223» | Szintetikus peptid , | ||||||||
| <400» | 6 |
344 83-4604- MOí/KroO
TF
Aia Lys Lys Tyr Aia Lys Lys Glu Lys Ma Tyr Alá Lys Lys Alá Glu
ÍU
Lys Alá Alá Lys Lys Alá Glu Aia Lys Alá Tyr Lys Alá bíU Alá
Lys Lys Lys Aia Lys Alá Glu Alá Lys Lys Tyr Alá Lys Alá Alá Lys 5 5 40 45
Alá Glu Lys Lys Glu Tyr Alá Alá Alá Glu Ha Lys Tyr Lys Aia Glu 50 55 50
Alá Alá Lys Lys Alá T'yr Lys Aia Glu Alá Alá Lys Alá. Aia Al
SS ?0 ys
Gru Alá Aia Tyr Glu Alá 85 86
| <210> | 7 |
| <2il> | 109 |
| <212> | PRT |
| <2i3> | Ms |
| <220> | |
| <22 3> | ÖZi |
| <400> | 7 |
Aia Lys Lys Tyr Alá Lys Lys Alá Glu Lys Aia Tyr Alá Lys Lys Alá
Lys Aia Ara Lys Gre Lys Lys λ1& Tyr Alá rys Lys ele Alá Lys Als ?yr Lys Ara Alá Gre Ars Lys Lys Lys: Aia Lys Ara Glu Ara. Lvs Lys
Tyr
Alá Lys Glu Aia Ar 50
Λ?3 Alá Lys Lys Glu Ara Tyr Lys Aia Glu 55 60
Ara Lys Lys Tyr Alá Lys Aia Aia Lys Alá Gie Lys Lys 'Glu Tyr Aia ?5
41 8 3 -4 6 ö 4 - Μ Ο '1 / K m G
AL3 Al<$ Glu ^.la 1-ys t.-ys Alá Gin Alá A-i<3 uys Ars Tyr Ays- Al»a Glu
90 - 95
Alá Ála Lys Alá AXa Ála lys Glu AXa Alá Tyr Glu Alá
100 105 109
841 83~4SO4-MOÍ/KrnO
Claims (9)
- Szabadalmi IgénypontokX» Eljárás 4 000 és 13 000 Dalton közötti átlagos molekulatömegű glatiramer-acetátot tartalmazó gyógyszertermék előállítására, amely a következő lépéseket tartalmazza;glatiramer-acetát készítmény nyerése;a glatiramer-acetát készítmény átlagos molekulatömegének meghatározása kromatográfiás berendezés alkalmazásával, amelyet molekulatömeg markerek .sokaságának alkalmazásával kalibrálunk és megállapítjuk a kromatográfiás berendezésen kapott molekulatömeg markerek retenciós ideje és a molekulatömeg markerek molekulatömegének lóg értéke közötti lineáris összefüggést, ahol a molekulatömeg markerek mindegyike egy alaninból, giutaminsavböl,. tírozinből és lizinből álló polipeptid, amelynek előre meghatározott aminosav szekvenciája és pontosan meghatározott molekulatömege van; és a glatiramer-acetát készítményt, a .gyógyszertermék elkészítésére alkalmazzuk, ha a glatiramer-acetát készítmény átlagos molekulatömege 4 000 és 13 000 Dalion közötti.
- 2, Eljárás 4 000 és 13 ÖÖO Dalton közötti átlagos molekulatömegű 'v^’*kamer-aeetátöt tartalmazó gyógyszertermékben glatiramer-acetát minősítésére, amely a következő lépéseket tart a glatiramer-acetát átlagos molekulatömegének meghatározása kromatográfiás berendezés alkalmazásával, amelyet r omeg markerek sokaságának alkalmazásával kalibrálunk és megállapítjuk w75.683/ReVGM«5s4 a kromatográfiás berendezésen kapott, molekulatömeg markerek retenciós ideje és a molekulatömeg markerek molekulatömegének lóg4'7 értéke közötti lineáris összefüggést, ahol a molekulatömeg markerek mindegyike egy -alaninból, glutaminsavból, tirozinbói és lizinböl álló polipeptid, amelynek előre meghatározott aminosav szekvenciája és pontosan meghatározott molekulatömege van; és a glatiramer-acetát a gyógy szertermék elkészítésére alkalmasnak minősítése, ha a glatiramer-acetát átlagos molekulatömege 4- 000 és közötti.
- 3, Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, ahol a molekulatömeg markerbart az aianin móltörtje 0,38-0,5, a glutaminsavé 0,13-0,15, a tiroziné 0.08-0,10 és a liziné- 0,3-0,4.
- 4, Az 1-3, igénypon tok bármelyike szerinti eljárás, ahol a molekulatömeg markerekben az alanín móltortje 0,422-0,444, a glutaminsavé 0,133-0,143, a tiroziné 0,086-0,093 és a liziné 0,333-0,349.
- 5, Az 1-4, igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a kromato
- 6, Az 1-4» igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a kromatográfiás berendezés egy TSK. oszlop, egy Sephadex oszlop, egy S-epharo-se oszlop vágy egy Superose oszlop,
- 7, Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, ahol a molekulatömeg markerek egyike a következő:AEKYAEKEKAAKaAYKKEAKAKAAEAAAKEAAYBA (I. számú szekvencia)AEKYAEXAKAEKAKKAYEAAEAEKAAKYEKAAáEYAAAKEAAYEA (2, számú szekvencia)ΑΚΚΥΑΚΚΕΚΑΥΑΚΚΑΕΚΑΑΚ.ΚΑΕΑΚΑΥΚΑΑΕΑΕΚΚΑΕΑΕΥΚ.ΑΕΑΑΚΑΑΑΚΕΑΑΥ (3. számú szekvencia)AK Κ. Y AKK EKAYAKAR RAEAE.AARKA.R AEAKKYAKÁAKÁEAK EYAAAEAEΥ ΚΛΕ A ακλααχαααυεα -számú szekvencia)AKRYAKKEKAYAXKAEKAAKKAEAEAYKAAEAKKKAK.AEAE.EYAEAAKAEKEEY αμΕλΚ υ ϊ r..A {5. g-^ámú. szekvencia)ΑΧΚΥΛΚΚ ΕΚΑΥΑΚΧ.ΑΕΚΑΑΚΚΑΕΑΚΑΥΚΑΑΕΑΚΚΧΑΧ.ΑΕΑΧΚΥΑΧΑΑ ΚΑΕ ΧΚΕΥ ζν:λλχααΚλ^αλΚ,μλϊ αΑ^λα.χΑΑαΚΕΑαυΕΑ (6. számú sze-kvencia) vagyΑΧΚ Ϋ A KK A EK A ΥΆ KK AK AA X EK K A Y A XX E A X. A ¥ KA A X A X X X A K A KA X. XX A X E A A ΚΧΚΚΕΑΥΧΑΕΑΕΚΥΑΧΑΑΕΑΚΕΚΕΥΆΑΑΕΑΚΧΑΕΧΑΧΧΥΚΑ.ΕΑΑΚΑ.ÍÍ./1 (7, számú szekvencia), ahol A jelentése aianin, K'jelentése lizin, Y jelentése tirozin, és E jelentése glutaminsav.
- 8. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti, eljárás, ahol a molekulatömeg markerek sokaságának szekvenciája a következő: ΑΧ.ΚΥΑΧΚΕΚΑΑΧ.ΚΑΥΚΚΕΑΚΑΚΑΑΕΑΑΑΚΕΑΑΥΕΑ fi, számú szekvencia) AKKΪΑΚΚΑΚΛΕΧΑΚΚΑΥΧΑΧΕΆΚΚΛΑΕΥΕΚΑΛΆΕΚΑΑΆΚΧΑΑΥΈΑ (2. számú szekvencia)AKKYAKXEKAYAKKAEKAAXKAEAKAYK.AAEAKKKAEAKYXAEAAKAAAKEAAY EA (3. számú szekvencia.)AKKYAKKEKAY ΑΚΑΚΚΆΕΛΚΑΆΚ X.AKAX AKKYAKAARAEKK E ΥΑΛΑΕΆΚY KAKA axyoyk.xeaaYEA (4 , számú szekvencia)ΑΚΕΥΆΚΚΕΚ.ΑΥΑΧΚΑΕΚΑΑΚΧΆΕΑ.ΚΑΥΚΑΑ.ΕΑΚΚΚΑΚΑΕΑΚΚΥΑΚΑ.ΑΚΑΕΚΚΧΥ Ααλ·\.χΑ.χΥκαΕΆΆχ.λΑα.χΕαζ;\ΧΧΑ (g, számú szekvencia)AKKYAKKEXAYAKXAEKAAKKAEAKAYKAAE.AKKKAKAEAXKYAXAAKAEKKEY AAAEAKYKAEAAKKAYKAEAAKAAAKEAAYEA (6.Számú szekvencia) és íYK'í f-C. ;·· A&fc ,XYAKiv-XX AAKEK cA Y ΑΧ X ΕΑΥΛ Y K AA E A.K X X ΛΧΑΕΑ KJ ¥ A.X XAA K AK K EX Y K AE AX.X Y A X AA KA E R KE Y AAA EX K R A E A AR A Y K A EAA KA. aak.eaay.ea. (7. számú szekvencia), ahol A jelentése aianin, K jelentése lizin, Y jelentése tirozin, és E jelentése glutaminsav.
- 9. Gyógyszertermék, amely az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárással előállított 4 000 és 13 000 .Dalton közötti átlagos molekulatomegú glatiramer-acetátot tartalmaz.A meghatalmazott...x .·· cSsE XYEYSAVfYvWsX SmYsX ,,s75'.6δ3/ΡΑ/0Μφ4a.W-S77 «λ
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US10169398P | 1998-09-25 | 1998-09-25 | |
| PCT/US1999/022402 WO2000018794A1 (en) | 1998-09-25 | 1999-09-24 | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0103889A2 HUP0103889A2 (hu) | 2002-03-28 |
| HUP0103889A3 HUP0103889A3 (en) | 2004-03-01 |
| HU229289B1 true HU229289B1 (en) | 2013-10-28 |
Family
ID=22285926
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0103889A HU229289B1 (en) | 1998-09-25 | 1999-09-24 | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use |
| HU1300505A HU229719B1 (en) | 1998-09-25 | 1999-09-24 | Copolymer-1-delated polipeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use |
| HU1300337A HU229720B1 (en) | 1998-09-25 | 1999-09-24 | Copolymer 1 related polypeptides for us as molecular weight markers and for therapeutic use |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU1300505A HU229719B1 (en) | 1998-09-25 | 1999-09-24 | Copolymer-1-delated polipeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use |
| HU1300337A HU229720B1 (en) | 1998-09-25 | 1999-09-24 | Copolymer 1 related polypeptides for us as molecular weight markers and for therapeutic use |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (3) | EP2239269B1 (hu) |
| JP (2) | JP4629229B2 (hu) |
| AT (2) | ATE516297T1 (hu) |
| AU (1) | AU757413B2 (hu) |
| CA (2) | CA2794705C (hu) |
| CY (3) | CY1110490T1 (hu) |
| DE (2) | DE09004306T1 (hu) |
| DK (3) | DK1115743T3 (hu) |
| ES (3) | ES2369642T3 (hu) |
| HK (3) | HK1040521A1 (hu) |
| HU (3) | HU229289B1 (hu) |
| IL (4) | IL142116A0 (hu) |
| NO (2) | NO329877B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ511020A (hu) |
| PT (3) | PT2239269E (hu) |
| SI (1) | SI1115743T1 (hu) |
| WO (1) | WO2000018794A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA200102269B (hu) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2527760T3 (es) | 1998-07-23 | 2015-01-29 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Tratamiento de enfermedad de Crohn con copolímero 1 y polipéptidos |
| IL141021A0 (en) | 1998-07-23 | 2002-02-10 | Yeda Res & Dev | Treatment of autoimmune conditions with copolymer 1 and related copolymers |
| US6800287B2 (en) | 1998-09-25 | 2004-10-05 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use |
| ZA200206457B (en) | 2000-02-18 | 2003-08-13 | Yeda Res & Dev | Oral, nasal and pulmonary dosage formulations of copolymer 1. |
| US20020077278A1 (en) | 2000-06-05 | 2002-06-20 | Yong V. Wee | Use of glatiramer acetate (copolymer 1) in the treatment of central nervous system disorders |
| WO2002076503A1 (en) | 2000-06-20 | 2002-10-03 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Treatment of central nervous system diseases by antibodies against glatiramer acetate |
| WO2001097785A2 (en) * | 2000-06-20 | 2001-12-27 | Caprion Pharmaceuticals Inc. | Basic copolymers for the treatment of prion-related-disease |
| US20040037828A1 (en) * | 2002-07-09 | 2004-02-26 | Bar-Ilan University | Methods and pharmaceutical compositions for healing wounds |
| WO2003029276A2 (en) * | 2001-10-03 | 2003-04-10 | President And Fellows Of Harvard College | Copolymers for suppression of autoimmune diseases, and methods of use |
| EP1459065B1 (en) | 2001-12-04 | 2010-07-28 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Processes for the measurement of the potency of glatiramer acetate |
| WO2004064717A2 (en) | 2003-01-21 | 2004-08-05 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Cop 1 for treatment of inflammatory bowel diseases |
| CN101287483B (zh) | 2003-08-07 | 2012-02-29 | 希尔洛有限公司 | 用于加速伤口愈合的药物组合物和方法 |
| CA2558655A1 (en) * | 2004-03-01 | 2005-09-15 | Kai W. Wucherpfennig | Methods and compositions for treatment of autoimmune diseases |
| US7655221B2 (en) | 2004-05-07 | 2010-02-02 | Peptimmune, Inc. | Methods of treating disease with random copolymers |
| US7560100B2 (en) | 2004-09-09 | 2009-07-14 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Mixtures of polypeptides, compositions containing and processes for preparing same, for treating neurodegenerative diseases |
| US7858337B2 (en) * | 2007-03-08 | 2010-12-28 | Novartis Ag | Process for the manufacture of a composite material |
| US8399413B2 (en) | 2009-08-20 | 2013-03-19 | Yeda Research & Development Co., Ltd. | Low frequency glatiramer acetate therapy |
| USRE49251E1 (en) | 2010-01-04 | 2022-10-18 | Mapi Pharma Ltd. | Depot systems comprising glatiramer or pharmacologically acceptable salt thereof |
| US8759302B2 (en) | 2010-03-16 | 2014-06-24 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Methods of treating a subject afflicted with an autoimmune disease using predictive biomarkers of clinical response to glatiramer acetate therapy in multiple sclerosis |
| WO2012051106A1 (en) | 2010-10-11 | 2012-04-19 | Teva Pharmaceutical Industries Ltd. | Cytokine biomarkers as predictive biomarkers of clinical response for glatiramer acetate |
| CA2827275A1 (en) | 2011-02-14 | 2012-09-20 | Usv Limited | Copolymer-1, process for preparation and analytical methods thereof |
| MX2014004309A (es) | 2011-10-10 | 2015-07-06 | Teva Pharma | Polimorfismos de nucleotidos individuales utiles para predecir una respuesta clinica para el acetato de glatiramer. |
| TW201420111A (zh) | 2012-10-10 | 2014-06-01 | Teva Pharma | 對格拉默醋酸鹽（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ ａｃｅｔａｔｅ）之臨床反應具預測性之生物標記 |
| CN104098655B (zh) * | 2013-04-09 | 2018-01-30 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 用于合成醋酸格拉替雷的质谱内标的多肽 |
| UY35790A (es) | 2013-10-21 | 2015-05-29 | Teva Pharma | Marcadores genéticos que predicen la respuesta al acetato de glatiramer |
| CN105218646B (zh) * | 2014-06-24 | 2018-09-21 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种用于检测醋酸格拉替雷样本的uplc方法 |
| US9155775B1 (en) | 2015-01-28 | 2015-10-13 | Teva Pharmaceutical Industries, Ltd. | Process for manufacturing glatiramer acetate product |
| CN107531750B (zh) * | 2015-04-28 | 2021-03-16 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 多肽混合物高效液相色谱分析方法 |
| EP3147667B1 (en) * | 2015-09-24 | 2019-06-12 | CHEMI S.p.A. | Analysis of the molecular weight distribution of complex polypeptide mixtures |
| EP3600553A4 (en) | 2017-03-26 | 2020-09-02 | Mapi Pharma Ltd. | GLATIRAMER DEPOT SYSTEMS FOR TREATMENT OF PROGRESSIVE FORMS OF MULTIPLE SCLEROSIS |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2009996A1 (en) * | 1989-02-17 | 1990-08-17 | Kathleen S. Cook | Process for making genes encoding random polymers of amino acids |
| US5800808A (en) | 1994-05-24 | 1998-09-01 | Veda Research And Development Co., Ltd. | Copolymer-1 improvements in compositions of copolymers |
-
1999
- 1999-09-24 DK DK99949923T patent/DK1115743T3/da active
- 1999-09-24 ZA ZA200102269A patent/ZA200102269B/en unknown
- 1999-09-24 PT PT101715530T patent/PT2239269E/pt unknown
- 1999-09-24 CA CA2794705A patent/CA2794705C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 HU HU0103889A patent/HU229289B1/hu unknown
- 1999-09-24 NZ NZ511020A patent/NZ511020A/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-09-24 EP EP10171553A patent/EP2239269B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 DK DK10171553.0T patent/DK2239269T3/da active
- 1999-09-24 JP JP2000572252A patent/JP4629229B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 DE DE09004306T patent/DE09004306T1/de active Pending
- 1999-09-24 DE DE69940888T patent/DE69940888D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 AT AT09004306T patent/ATE516297T1/de active
- 1999-09-24 EP EP09004306A patent/EP2090583B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 HU HU1300505A patent/HU229719B1/hu unknown
- 1999-09-24 PT PT09004306T patent/PT2090583E/pt unknown
- 1999-09-24 WO PCT/US1999/022402 patent/WO2000018794A1/en active IP Right Grant
- 1999-09-24 AT AT99949923T patent/ATE431359T1/de active
- 1999-09-24 ES ES09004306T patent/ES2369642T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 PT PT99949923T patent/PT1115743E/pt unknown
- 1999-09-24 SI SI9931035T patent/SI1115743T1/sl unknown
- 1999-09-24 ES ES99949923T patent/ES2327301T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 AU AU62695/99A patent/AU757413B2/en not_active Expired
- 1999-09-24 IL IL14211699A patent/IL142116A0/xx unknown
- 1999-09-24 HU HU1300337A patent/HU229720B1/hu unknown
- 1999-09-24 ES ES10171553T patent/ES2408706T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 CA CA2343929A patent/CA2343929C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-09-24 DK DK09004306.8T patent/DK2090583T3/da active
- 1999-09-24 EP EP99949923A patent/EP1115743B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-03-20 IL IL142116A patent/IL142116A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-03-21 NO NO20011441A patent/NO329877B1/no not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-01-18 HK HK02100390.4A patent/HK1040521A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2009
- 2009-08-06 CY CY20091100835T patent/CY1110490T1/el unknown
- 2009-12-09 HK HK09111514.5A patent/HK1133021A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-03-25 NO NO20100442A patent/NO336685B1/no not_active IP Right Cessation
- 2010-06-23 JP JP2010142689A patent/JP4903886B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2010-11-07 IL IL209190A patent/IL209190A/en not_active IP Right Cessation
- 2010-11-07 IL IL209189A patent/IL209189A/en not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-04-08 HK HK11103596.9A patent/HK1149279A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2011-10-05 CY CY20111100947T patent/CY1112197T1/el unknown
-
2013
- 2013-04-15 CY CY20131100310T patent/CY1113932T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU229289B1 (en) | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use | |
| US7615359B2 (en) | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use | |
| US6514938B1 (en) | Copolymer 1 related polypeptides for use as molecular weight markers and for therapeutic use | |
| CA2337688C (en) | Treatment of autoimmune conditions with copolymer 1 and related copolymers | |
| US7425332B2 (en) | Treatment of autoimmune conditions with Copolymer 1 and related Copolymers | |
| EP2327712B1 (en) | Treatment of Crohn's disease with copolymer 1 and polypeptides | |
| JP4800481B2 (ja) | 共重合体１および関連する共重合体ならびにペプチドによる自己免疫疾患の治療 |