HU223263B1 - Nukleinsavak transzfekciójára alkalmas gyógyászati kompozíciók és alkalmazásuk - Google Patents
Nukleinsavak transzfekciójára alkalmas gyógyászati kompozíciók és alkalmazásuk Download PDFInfo
- Publication number
- HU223263B1 HU223263B1 HU9801207A HUP9801207A HU223263B1 HU 223263 B1 HU223263 B1 HU 223263B1 HU 9801207 A HU9801207 A HU 9801207A HU P9801207 A HUP9801207 A HU P9801207A HU 223263 B1 HU223263 B1 HU 223263B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- composition according
- compound
- nucleic acid
- cooh
- Prior art date
Links
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 62
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 62
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 61
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 40
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 76
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims abstract description 54
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 39
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 20
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims abstract description 11
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims abstract 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 60
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 59
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 58
- OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N (2s)-2,5-bis(3-aminopropylamino)-n-[2-(dioctadecylamino)acetyl]pentanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CC(=O)NC(=O)[C@H](CCCNCCCN)NCCCN)CCCCCCCCCCCCCCCCCC OPCHFPHZPIURNA-MFERNQICSA-N 0.000 claims description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 26
- -1 polymethylene group Polymers 0.000 claims description 22
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 claims description 19
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 16
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 claims description 11
- MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N dioleoyl phosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC MWRBNPKJOOWZPW-CLFAGFIQSA-N 0.000 claims description 11
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 10
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 10
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 claims description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 8
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 7
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 6
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 claims description 5
- 102100021010 Nucleolin Human genes 0.000 claims description 5
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 108010044762 nucleolin Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 4
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical group CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- 229930183167 cerebroside Natural products 0.000 claims description 2
- 150000001784 cerebrosides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000021310 complex sugar Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 claims description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 claims description 2
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920000333 poly(propyleneimine) Polymers 0.000 claims 2
- ZXWQZGROTQMXME-WXUJBLQXSA-N 2-hydroxy-n-[(e,2s,3r)-3-hydroxy-1-[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoctadec-4-en-2-yl]tetracosanamide Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)N[C@H]([C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O ZXWQZGROTQMXME-WXUJBLQXSA-N 0.000 claims 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims 1
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 claims 1
- LZNMAXLTOOKNIJ-UHFFFAOYSA-N [2-(dioctadecylamino)-2-oxoethyl] ethaneperoxoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(C(=O)COOC(C)=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCC LZNMAXLTOOKNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 claims 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000002813 thiocarbonyl group Chemical group *C(*)=S 0.000 claims 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 description 31
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 25
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 23
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 17
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 14
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 13
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 13
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 13
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical class OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 11
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QVVDVENEPNODSI-BTNSXGMBSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-5-(diaminomethylidene Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O QVVDVENEPNODSI-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 8
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 8
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 6
- AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N Lys-Pro Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O AIXUQKMMBQJZCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 5
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- BDFHWFUAQLIMJO-KXNHARMFSA-N Lys-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O BDFHWFUAQLIMJO-KXNHARMFSA-N 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 3
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 101100297345 Caenorhabditis elegans pgl-2 gene Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 239000005057 Hexamethylene diisocyanate Substances 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 2
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 2
- YXPJCVNIDDKGOE-MELADBBJSA-N Lys-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O YXPJCVNIDDKGOE-MELADBBJSA-N 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- GXDCMTODGPEUIW-UHFFFAOYSA-N N-[3-[4-(3-aminopropylamino)butylamino]propyl]-2-hydrazinyl-2-octadecylicosanamide Chemical compound C(CCCCCCCCCCCCCCCCC)C(NN)(C(=O)NCCCNCCCCNCCCN)CCCCCCCCCCCCCCCCCC GXDCMTODGPEUIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N Pro-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 RVQDZELMXZRSSI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- DWGFLKQSGRUQTI-IHRRRGAJSA-N Pro-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 DWGFLKQSGRUQTI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 2
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 2
- RRBGTUQJDFBWNN-MUGJNUQGSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RRBGTUQJDFBWNN-MUGJNUQGSA-N 0.000 description 1
- HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N (4S)-2-(6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,2-f][1,3]benzothiazol-2-yl)-4,5-dihydro-1,3-thiazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(=N1)c1nc2cc3CCNc3cc2s1 HBZBAMXERPYTFS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- IZZVACPEJJCMJZ-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(dioctadecylamino)-2-oxoethoxy]acetic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(C(=O)COCC(O)=O)CCCCCCCCCCCCCCCCCC IZZVACPEJJCMJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- OYXZMSRRJOYLLO-RVOWOUOISA-N 7alpha-hydroxycholesterol Chemical compound C([C@H]1O)=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 OYXZMSRRJOYLLO-RVOWOUOISA-N 0.000 description 1
- 102000005991 Acylphosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108700006311 Acylphosphatases Proteins 0.000 description 1
- 102100040214 Apolipoprotein(a) Human genes 0.000 description 1
- 101710115418 Apolipoprotein(a) Proteins 0.000 description 1
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 1
- FSNVAJOPUDVQAR-AVGNSLFASA-N Arg-Lys-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FSNVAJOPUDVQAR-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- VENMDXUVHSKEIN-GUBZILKMSA-N Arg-Ser-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O VENMDXUVHSKEIN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QMQZYILAWUOLPV-JYJNAYRXSA-N Arg-Tyr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 QMQZYILAWUOLPV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000012336 Cholesterol Ester Transfer Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061846 Cholesterol Ester Transfer Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 1
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000000311 Cytosine Deaminase Human genes 0.000 description 1
- 108010080611 Cytosine Deaminase Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 1
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100031706 Fibroblast growth factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000368 Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004038 Glia Maturation Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000495 Glia Maturation Factor Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000000853 LDL receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000043296 Lipoprotein lipases Human genes 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 101001055320 Myxine glutinosa Insulin-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000014190 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010011964 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000003867 Phospholipid Transfer Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000216 Phospholipid Transfer Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N Pro-Lys-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WFIVLLFYUZZWOD-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QVOGDCQNGLBNCR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N Ser-Pro Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O WBAXJMCUFIXCNI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 102100032889 Sortilin Human genes 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N Thr-Pro Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O QOLYAJSZHIJCTO-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 102100037814 Vigilin Human genes 0.000 description 1
- LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] n-[(z)-1,3-dihydroxyoctadec-4-en-2-yl]carbamate Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C/C(O)C(CO)NC(=O)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O ammonium group Chemical group [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 1
- 108010084541 asialoorosomucoid Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical group C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000005 chromosome aberration Toxicity 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid Chemical compound CCS(O)(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920000140 heteropolymer Polymers 0.000 description 1
- 108010092427 high density lipoprotein binding protein Proteins 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 229940124280 l-arginine Drugs 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 108010053156 lipid transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003176 neuroleptic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000701 neuroleptic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 108010091617 pentalysine Proteins 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 102000005162 pleiotrophin Human genes 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 229940069575 rompun Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 108700029760 synthetic LTSP Proteins 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 230000036325 urinary excretion Effects 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- QYEFBJRXKKSABU-UHFFFAOYSA-N xylazine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 QYEFBJRXKKSABU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
A találmány tárgyát nukleinsav transzfekciójára alkalmas gyógyászatikompozíció képezi, amely a transzfektálandó nukleinsavon kívül egytranszfekciós hatóanyagot és legalább egy, a nukleinsavkondenzációjában részt vevő vegyületet tartalmaz, melyre jellemző,hogy az említett vegyület részben vagy egészben, folytonosan vagy nemfolytonosan ismétlődő (KTPKKAKKP) és/vagy (ATPAKKAA) peptidegységekbőláll, ahol az egységek száma 2– 10, vagy az alábbi oligopeptidekegyikét tartalmazza: SRSRYYRQRQRSRRRRRR(COOH) vagyRRRLHRIHRRQHRSCRRRKRR(COOH). ŕ
Description
A jelen találmány a génterápia területét, illetve egész pontosan genetikai anyag in vitro, ex vivő és/vagy in vivő átvitelét érinti. Pontosabban, egy új, a sejttranszfekció szempontjából hasznos gyógyászati kompozícióra vonatkozik. A találmány tárgyát képezi ezen kompozíció alkalmazása is.
A különböző kromoszóma-rendellenességek és/vagy eltérések (mutációk, megváltozott kifejeződés stb.) sok öröklődő vagy nem öröklődő betegség kialakulásának okozói. Ezekkel a betegségekkel szemben a hagyományos orvostudomány sokáig hatástalannak bizonyult. Napjainkban a génterápia kifejlődésével a jövőre nézve azt reméljük, hogy képesek leszünk előre jelezni és korrigálni ezen kromoszomális rendellenességeket. Ez az új gyógymód egy új genetikai információnak a sejtbe vagy szervbe történő bejuttatását szolgálja azon célból, hogy az említett rendellenességeket vagy eltéréseket korrigálja, vagy még inkább egy gyógyhatású fehérje kifejeződését elősegítse.
A legnagyobb akadályt a nukleinsavak számára a célsejtekbe vagy célszervekbe való bejutás során a méretük és a sejtmembránon való átjutást nehezítő polianionos jellegük jelenti.
Ezen nehézségek legyőzésére manapság különböző technikák javasoltak, úgymint a plazmidmembránon keresztül történő csupasz DNS in vivő transzfekciója (WO90/11092), illetve a transzfekciós vektoron keresztül történő DNS-transzfekció.
Ami a csupasz DNS-transzfekciót illeti, a hatékonysága ez idáig még csekélynek bizonyult. A csupasz nukleinsavak plazmafelezési ideje az enzimek által történő lebontásuk és a húgyúti eltávolítás miatt rövid.
Ami a második technikát illeti, általában két módszer megvalósítását teszi lehetővé.
Az első módszer során olyan természetes transzfekciós vektorokat hoznak létre, mint a vírusok. Itt javasolt az adenovírusok, a herpeszvírusok, a retrovírusok és újabban az adenoasszociált vírusok használata. Ezek a vektorok a transzfekció szempontjából hatékonynak bizonyultak, de sajnos esetükben nem zárhatjuk ki teljesen a vírusjellegükből következő fertőzés-, replikációs és/vagy immunogenitásveszély lehetőségét.
A második módszer előnyösen az eukarióta sejtekben a DNS-expresszió és transzfer elősegítésére képes, nem vírusjellegű hatóanyagok használatára vonatkozik.
A találmány tárgya egész pontosan a második módszer területére tartozik.
A kémiai és biokémiai vektorok a természetes vírusok számára egy előnyös alternatívát biztosítanak, egészen pontosan a vírus immunológiai válasza és/vagy a vírus rekombinációja hiányából következően. Nem rendelkeznek a fertőzőképesség tulajdonságával, a DNS megsokszorozódásának veszélye ezekben a vektorokban nulla, és ezenkívül nincs semmilyen elméleti határ, ami a transzfekció során használt DNS méretét illeti.
Ezeknek a mesterségesen előállított vektoroknak két alapvető funkciója van, egyrészt a transzfekció során használt DNS kondenzációjának, másrészt a sejtekhez való kötődés képességének megnövelése, illetve ugyanígy a plazmidmembránon és adott esetben a két magmembránon való átjutás elősegítése.
Polianionos jellegéből következően a DNS-nek természetesen semmilyen affinitása nincs a szintén polianionos sejtek plazmidmembránja iránt. Ennek a nehézségnek a kiküszöbölésére ezek a nem vírusjellegű vektorok általában mind polikationos töltéssel rendelkeznek.
A kifejlesztett, mesterségesen előállított vektorok között a polilizin és DEAE dextrán jellegű kationos polimerek, a kationos lipidek vagy lipofektánsok a legelőnyösebbek. Ezek DNS-t kondenzáló képességgel rendelkeznek, és elősegítik a DNS-nek a sejtmembránnal való összekapcsolódását. A közelmúltban kifejlesztették a célirányos és egy receptor által elősegített transzfekció módszerét. Ez a technika a DNS-kondenzációt használja fel a kationos polimereknek köszönhetően úgy, hogy elősegíti a komplex kötődését a membránhoz, mégpedig úgy, hogy a kationos polimer és a beoltandó sejt membránreceptorának egy liganduma között kötést hoz létre. Az inzulin és a transzferinreceptorok vagy a májsejtek aszialo-glikoprotein-receptorainak célirányos felkutatását e célból valósították meg.
A napjainkban használt mesterségesen előállított vektorok még korántsem olyan hatékonyak, mint a vírusvektorok. Ennek okai lehetnek a transzfekcióhoz szükséges elégtelen DNS-kondenzáció és/vagy a DNS-nek az endoszómából való kijuttatásakor és a sejtmagba való bejuttatásakor alkalmazott transzfekció során fellépő nehézségek, továbbá egyéb nehézségek, amelyek az alkalmazott lipofektánsok kationos polimereinek természetéből egyenesen következnek.
A találmány előnyös megoldást nyújt ezekre a problémákra.
Még pontosabban, a jelen találmány tárgya egy, a nukleinsavak transzfekcióját elősegítő gyógyászati kompozíció, amely az említett nukleinsavon kívül még tartalmaz legalább egy transzfekciós hatóanyagot és egy, az illető nukleinsav kondenzációjában részt vevő vegyületet, amely vegyület részben vagy egészben egy hisztonból, egy nukleolinból, egy protaminból és/vagy ezek származékából származtatható.
Nem várt módon a feltalálók bebizonyították, hogy egy ilyen kompozíció jelenléte egy klasszikus transzfekciós hatóanyag-alapú transzfekciós keverékben lehetővé teszi ezen hatóanyag mennyiségének jelentős csökkentését és ezáltal a szer toxikológiai hatásának kedvezőbb alakulását anélkül, hogy a nevezett keverék transzfekciós aktivitására káros hatással lenne. Épp ellenkezőleg, ez előnyösen egy hatékonyabb transzfekciót tesz lehetővé.
A találmány tárgya a nukleinsav kondenzációjában részt vevő minden olyan vegyület, amely direkt vagy indirekt módon tömöríti a nukleinsavat. Még pontosabban ez a vegyület vagy direkt módon a transzfekció során használt nukleinsavra hat, vagy egy kapcsolt vegyületre, amely direkt módon vesz részt ezen nukleinsav kondenzációs folyamataiban.
A találmány egy különleges megvalósítási módja szerint a nukleinsavak kondenzációjában részt vevő ve2
HU 223 263 Bl gyület részben vagy egészben a KTPKKAKKP (1. számú szekvencia) és/vagy ATPAKKAA (2. számú szekvencia) peptidelemekből és/vagy ezek származékaiból áll, ezen elemek száma 2 és 10 között változhat. A találmány szerinti vegyület szerkezetében ezek az elemek folytonosan vagy nem folytonosan ismétlődhetnek. Ezáltal biokémiai jellegű, például egy vagy több nukleinsav általi, vagy kémiai jellegű kötések által lehetnek egymástól elválasztva.
A találmány szerinti vegyület különösen előnyös módon egy olyan peptid vagy pszeudopeptid lehet, amely a találmány szempontjából különösen előnyös módon nagyrészt olyan bázikus jellegű aminosavakból áll, mint a lizin, hisztidin vagy az arginin. Az említett vegyület konformációja β-lemez. A bázikus aminosavakról elmondhatjuk, hogy specifikusabban vesznek részt a fehérje-nukleinsav kötések kialakításában. A nukleinsavak kondenzációjában részt vevő két egység ionos hidrogénkötéseinek kialakulásában vesz részt. Eközben a βlemezszerkezetre jellemző, hogy jobb hozzáférhetőséget biztosít a karbonilcsoportok és a hidrogénatomok számára, amelyek viszont akceptor és donor jellegükből következően elősegítik a kondenzálandó nukleinsawal való kötések kialakításának lehetőségét.
Még pontosabban, a hiszton, a nukleolin, a protamin és/vagy ezek deriváltjainak egy részéről vagy egészéről van szó.
A hisztonok és a protaminok kationos fehérjék, amelyek természetesen is tömörítik a DNS-t. így, ezek a vegyületek részt vesznek néhány vírus nem átírt DNSszakaszának in vivő DNS-kondenzációs folyamatában. A jelen leírásban hisztonnak meghatározott vegyületek közül egész pontosan a Hl, H2a, H3 és H4 hisztonokat említhetjük. Ami a nuklealint illeti, itt a sejtmagvacska egyik fehérjéjéről van szó, amely úgy tűnik, szoros együttműködésben van a Hl hisztonnal, annak DNStömörítő működése során. A találmány szerinti vegyület azzal jellemezhető, hogy a nukleolin N-terminális peptidszekvenciájának származéka, még pontosabban az (ATPAKKAA)2(COOH) (3. számú szekvencia).
A találmány szerint előállított vegyület előnyösen a Hl hisztonnak az egyik szekvenciája, még előnyösebben a C-terminális doménjének, egész pontosan a (KTPKKAKKP)2(COOH) szekvenciának (4. számú szekvencia) felel meg.
A találmány szerinti vegyületek közül előnyösek még a következő oligopeptidek: ATPKKSAKKTPKKAKKP(COOH) (5. számú szekvencia) és
KKAKSPKKAKAAKPKKAPKSPAKAKA(COOH) (6. számú szekvencia).
Ami a jelen találmányban szintén használható protamin származék szekvenciáit illeti, egész pontosan a következő oligopeptidszekvenciákat javasoljuk: SRSRYYRQRQRSRRRRRR(COOH) (7. számú szekvencia) és
RRRLHRIHRRQHRSCRRRKRR(COOH) (8. számú szekvencia).
A jelen találmányban a származék fogalom magában foglalja az összes peptidet, pszeudopeptidet (nem biokémiai elemeket is tartalmazó peptidet) vagy egy olyan fehérjét, amely különbözik a tárgyalt fehérjéktől vagy peptidektől, és egy vagy több genetikai és/vagy kémiai jellegű módosítással állítottuk elő. A genetikai és/vagy kémiai módosításon mutációt, szubsztitúciót, deléciót, addíciót és/vagy a tárgyalt fehérje egy vagy több aminosavmaradékának megváltoztatását értjük. Még pontosabban, kémiai módosításon az illető peptidek vagy proteinek minden kémiai úton előállított vagy kémiai egységekből előállított biológiai vagy nem biológiai molekuláinak módosítását értjük az említett fehéije bármely számú aminosavmaradékában. Genetikai módosításon minden olyan peptidszekvenciát értünk, amely szekvenciákkal vagy fragmentumokkal a DNS hibridizál, és így a termék az előírt aktivitással rendelkezik. Az ilyen származékok különböző célokkal állíthatók elő, ez lehet például a polipeptidek ligandumaihoz való megfelelő affinitásának megnövelése, a derivált termelékenységének megnövelése, a proteázokkal szembeni rezisztenciájának megnövelése, az aktivitásának növelése és/vagy megváltoztatása, vagy célul tűzhetjük ki azt is, hogy új farmakokinetikai vagy új biológiai tulajdonságokkal lássuk el a származékokat. Az addíció eredményeként létrejött származékok közül megemlíthetjük például az olyan kiméra peptidszekvenciákat, amelyek az egyik extremitásukon egy csatolt heterológ részt tartalmaznak. A származék kifejezés más sejtforrásokból, pontosabban emberi sejtekből vagy más organizmusokból származó és ugyanolyan aktivitással rendelkező, az említett szekvenciával homológ proteinszekvenciát is tartalmazó szekvenciákra is vonatkozik. Az ilyen homológ szekvenciák a megfelelő DNS-hibridizációs kísérlet útján állíthatók elő. A hibridizációk megvalósíthatóak nukleinsavbankok alapján, mintának natív szekvenciákat vagy azok egy fragmentumát használva, hagyományosan szigorú körülmények között (Maniatis et al.) (lásd a molekuláris biológia általános szabályai), vagy előnyösebben fokozottan szigorú körülményeket alkalmazva.
Egy rendkívül előnyös megvalósítási módszer szerint, a jelen találmány szerinti vegyületek többek között egy, a nukleinsavak transzfer folyamatait irányító célelemet tartalmaznak. Ez a célelem lehet egy sejten kívüli (extracelluláris) célelem, amely lehetővé teszi a nukleinsavak transzfer folyamatainak bizonyos sejt- vagy szövettípusok (rákos sejtek, májsejtek, vörösvértestképző sejtek) irányába történő orientálását. Ugyanígy beszélhetünk sejten belüli (intracelluláris) célelemről is, amely a nukleinsavak transzfer folyamatait bizonyos meghatározott sejtalkotók (mitokondrium, mag stb.) irányába próbálja orientálni.
Még előnyösebben a célelem kovalens vagy nem kovalens módon kötődik a találmányban meghatározott vegyülethez. A célelem kötődhet nukleinsavhoz is. A találmány egyik előnyös alkalmazása szerint az említett vegyület egyik extremitásához szupplementer heterológ csatolt részen keresztül kapcsolódik. Ezek a részek a sejttranszfekciót elősegítő fúzogén típusú peptidek, feladatuk, hogy elősegítsék a sejtek transzfekcióját, azaz a transzfekciós vegyületnek vagy különböző ele3
HU 223 263 Bl meinek a membránon való átjutását részesítsék előnyben, segítsék az endoszómából való kijutásnál, vagy a sejtmagmembránon való átjutásnál. Beszélhetünk sejtreceptor-ligandumról is, amely olyan sejttípusok felületén található, mint például a cukor, a transzferin, az inzulin vagy az aszialo-orosomukoid fehéije. Intracelluláris típusú ligandumról is lehet szó, mint például egy mag szignál lokalizációs szekvencia (nls), amely a mag belsejébe transzfektált (szállított) DNS felhalmozódását részesíti előnyben.
A találmány keretein belül alkalmazott célelemek között megemlíthetjük a cukrokat, a peptideket, a hormonokat, vitaminokat, citokineket, oligonukleotidokat, lipideket vagy az ezekből az elemekből származtatható frakciókat, vagy szekvenciákat, amelyek képesek a nekik megfelelő receptorokkal specifikus kötést létesíteni. Előnyösen cukrokról és/vagy olyan peptidekről van szó, mint például az antitestek vagy antitestfragmentumok, a sejtreceptor-ligandumok vagy azok fragmentumai, a receptorok vagy a receptor fragmentumai stb. Különösen fontos megemlíteni a növekedési faktorokat, a citokinek receptorait, a sejtben található lektinek receptorait vagy az adhéziós fehérjék receptorait. Továbbiakban megemlíthetjük a transzferin receptorát, a HDL-eket (nagy sűrűségű lipoprotein) és LDL-eket (kis sűrűségű lipoprotein). A célelem szintén lehet egy olyan cukor, amely a lektineket célozza meg, ilyenek például az aszialo-glikoprotein-receptorok, vagy lehetnek még az antitestek Fab-fragmentumai is, amelyek az immunglobulinok Fc-fragmentumának receptorát célozzák meg.
Ezen kompozíció bemutatásának céljából a jelen találmányban létrehoztunk egy Hrnls típusú vegyületet, illetve még előnyösebben egy PKKKRKV-bAla-(KTPKKAKKP)2(COOH) szekvenciát (9. számú szekvencia) tartalmazó peptidet.
Előnyösen találmány szerinti vegyület lehet minden hiszton-, protamin- vagy nukleolinszármazék, többek között ilyenek a poliglikolizálható, a szulfonálható és/vagy a foszforilálható, és/vagy a komplex cukrokba vagy egy lipofil vegyületbe illeszthető vegyületek, mint például a hosszú szénláncú vegyületek vagy a koleszterinszármazékai.
A találmányban szereplő vegyület magától értetődően más-más módon nukleinsavakat tömörítő különböző vegyületeket tartalmaz. Ily módon összekapcsolhatunk egy hiszton típusú vegyületet és egy nukleolin típusú vegyületet.
A találmányban szereplő vegyület a találmányban szereplő nukleinsav tömörítéséhez szükséges mennyiségben van jelen. így a vegyület és a nukleinsav aránya (tömegben kifejezve) 0,1 és 10 közötti, illetve még előnyösebben 0,3 és 3 közötti.
Ami a vegyületben lévő transzfekciós ágenst illeti, azt előnyösen a kationos polimerek és a lipofektánsok közül választjuk ki.
A jelen találmány szerint egy kationos polimer előnyösen egy (I) általános képletű vegyület - amelyben: R jelentése hidrogénatom vagy egy (a) általános képletű funkciós csoport, n értéke 2 és 10 közötti egész szám;
p és q egész számok -, és ebből következően a p+q összeggel megegyezően a polimer átlagos molekulatömege 100 és 107 D között van.
Nyilvánvaló, hogy az (I) általános képletben az n és p értéke a különböző formulákban változhat. így az (I) általános képlet magában foglalja a homopolimereket és a heteropolimereket is.
Igen előnyösen az (I) általános képletben n értéke 2 és 5 közötti lehet. Különösen az imino-polietilén (PEI) és az imino-polipropilén (PPI) polimerei mutatnak nagyon előnyös tulajdonságokat. A jelen találmány megvalósításánál a 103 és 5 χ 106 közötti molekulatömegű polimerek használata kedvező. Példaként megemlíthetjük az 50 000 D molekulatömegű imino-polietilént (PEI50K) vagy a 80 000 D molekulatömegű imino-polietilént (PEI800K).
A PEI50K vagy a PEI800K a kereskedelemben hozzáférhetőek. Az (I) általános képlet alapján meghatározott többi polimer az FR 9408735 számú szabadalmi bejelentésben közölt módszer szerint állítható elő.
A találmány szerinti kompozíció optimális hatásának eléréséhez a polimer és a nukleinsav arányának előnyösen az R=polimer aminjai/nukleinsav foszfátjai moláris arány meghatározás szerint a 0,5 és 50, még előnyösebben az 5 és 30 érték között kell lennie. A leginkább megfelelő eredményeket akkor kaptuk, amikor nukleinsavtöltésenként 5-25 aminpolimer ekvivalenst használtunk. Ami a lipofektánsokat illeti, a találmány leírásában ezen elnevezés alatt minden lipidjellegű vegyületet és a már a nukleinsavak transzfekciója kapcsán említett aktív ágenst értünk. Általánosságban amfifil molekulákról van szó, amelyekben legalább egy lipofil régió vagy nem lipofil régió kapcsolódik egy hidrofil régióhoz. Az első vegyületcsalád bemutatására illusztrációs jelleggel az olyan lipideket javasolhatjuk, amelyek jellemzően polietilénglikol jelenlétében vagy annak hiányában liposzómákat alakítanak ki, ilyenek a POPC vagy a foszfatidilszerin, a foszfatidil-kolin, a koleszterin, a maleimido-fenil-butiril-foszfatidil-etanol-amin, a laktozil-szeramid, amelyek furtif liposzómák előállítására használhatók, illetve antitestekkel vagy anélkül, vagy ligandumokkal vagy anélkül immunoliposzómákat és célliposzómákat állíthatunk elő belőlük.
A találmány egy különleges megvalósítása szerint az előállított lipidjellegű hatóanyag rendelkezik egy kationos régióval. Ez a kationos régió, amely előnyösen egy kationosan töltött poliamin, képes reverzibilisen kapcsolódni a negatív töltésű nukleinsavhoz. Ez a kölcsönhatás erősen tömöríti a nukleinsavat. A lipofil régió ezt az ionos kötődést a külső vizes közeggel lehetetlenné teszi azáltal, hogy a nukleolipidikus részecskét lipidhártyával veszi körül. Ebből következően tudjuk, hogy egy pozitív töltésű kationos lipid az N-[2,3-(dioleil-oxi)-propil]Ν,Ν,Ν,-trimetil-ammónium (DOTMA) liposzóma vagy kis vezikula formájában spontán interferál a negatív töltésű DNS-sel, hogy azzal lipid-DNS komplexet alkosson, és ezáltal a sejtmembránnal fuzionálhasson, illetve a DNS intracelluláris közegbe való kiszabadulását lehető4
HU 223 263 Bl vé tegye. A kationos lipidek kategóriájából illusztrációs céllal a DOTAP, DOBT vagy ChOTB-ket sorolhatjuk fel. Más vegyületek, mint például a DOSC és a ChOSC azzal jellemezhetőek, hogy a kvatemer ammóniumcsoport helyett kolincsoportot tartalmaznak. Egy másik kationos lipidtípust is meghatároztunk. Ebben a típusú vegyületben a kationos csoportot az l-(5-karboxi-spermin)gyök jellemzi, amely négy ammóniumcsoportot, két prímért és két szekundert tartalmaz. Idetartozik a DOGS és a DPPES is. Ezek a lipopoliaminok a primer belső elválasztású sejtek transzfekciójánál különösen hatékonyak.
Előnyösen a találmány szerinti lipofektánsok olyan lipopoliaminok közül kerülnek ki, amelyek poliaminrégiója a (II) általános képletnek felel meg, amelyben m értéke 1-nél nagyobb vagy azzal egyenlő egész szám, és n értéke is egy 1-nél nagyobb vagy azzal egyenlő egész szám, m a két aminocsoport közötti változó szénatomszámú csoport szénatomjainak számát adja meg;
előnyösen m értéke 2-6 és n értéke 1-5.
Még előnyösebben a poliaminrégiót a spermin, a termin vagy ezek valamely DNS-hez kötő képességgel rendelkező analógja képviseli. A lipofil régiót legalább egy olyan koleszterinnel, természetes lipiddel vagy szintetikus lipiddel szubsztituált telített vagy nem telített szénhidrogéncsoport alkotja, amely képes kovalens módon a hidrofil régióhoz kötődő lamelláris vagy hexagonális fázisok kialakítására.
Az EP 394 111 számú szabadalmi irat a jelen találmányban felhasználható olyan (III) általános képletű lipopoliaminokat mutat be, amelyek képletében R jelentése (R1R2)N-CO-CH-NH-CO- általános képletű csoport.
Ezen lipopoliaminok ismertetése céljából illusztrációsjelleggel különösen a dioktadecil-amido-glicil-spermint (DOGS) és a palmitoil-foszfatidil-etanol-amin 5karboxi-spermil-amidját (DPPES) említhetjük.
Az FR 97 14596 számú szabadalmi bejelentésben leírt lipopoliaminok szintén előnyösen felhasználhatók a találmányban említett transzfekciós hatóanyagként. Ezek a fent említett olyan (III) általános képlettel jellemezhetők, amelyben
R jelentése olyan (IV) általános képletű csoport, amelyben
X és X’ egymástól függetlenül oxigénatomot, egy -(CH2)q- általános képletű (poli)metiléncsoportot - ahol q=0, 1, 2 vagy 3 - vagy egy olyan -NH- képletű vagy -NR’- általános képletű aminocsoportot jelent, ahol R’ 1-4 szénatomos alkilcsoport;
Y és Y’ jelentése egymástól függetlenül metilén-, karbonil- vagy =C=S csoport;
R3, R4 és R5 egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1 -4 szénatomos szubsztituált vagy szubsztituálatlan alkilcsoport;
p értéke 0 és 5 között változhat; és
R6 jelentése koleszterilcsoport vagy egy -NRjR2 általános képletű alkil-amino-csoport, ahol Rj és
R2 egymástól függetlenül telített vagy telítetlen, lineáris vagy elágazó láncú, 12-22 szénatomos alifás csoport.
Ezen lipopoliaminok közül illusztrációs céllal megemlíthetjük a 2,5-bisz[(3-amino-propil)-amino)]pentil-[(dioktadecil-karbamoil-metoxi)-acetát]-ot és az {l,3-bisz[(3-amino-propil)-amino]-2-propil}-[(dioktadecil-karbamoil-metoxi)-acetát]-ot, amit a későbbiekben lipopoliamin A-nak nevezünk.
Az ezeknek megfelelő lipopoliaminok előállítására használható eljárásokat az EP 394 111 és az FR 94 145 96 szabadalmi iratok tartalmazzák.
Végül még a korábbiakban, az FR 95/134 90 számú szabadalmi iratban leírt új lipopoliaminokat a jelen találmány keretében kívánjuk hasznosítani. Ezen lipopoliaminok közül illusztrációs céllal különösen fontosnak tartjuk a következőket, amelyeket az alábbiakban mutatunk be:
- lipopoliamin B:
{H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2 (RP120525),
- lipopoliamin C:
H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)18]2 (RP120535),
- lipopoliamin D:
H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CH2)18] (RP12O531).
A jelen találmányban különösen előnyös módon felhasználhatjuk a dioktadecil-amido-glicil-spermint (DOGS), a palmitoil-foszfatidil-etanol-amin 5-karboxispermin-amidját (DPPES), a {2,5-bisz[(3-amino-propil)-amino]-pentil} -[(dioktadecil-karbamoil-metoxi)acetát]-ot, a {H2N(CH2)3}2N(CH2)4N {(CH2)3NH2) (CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2-t, a H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)18]2-t vagy a H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CH2)I8]-t.
Hogy a találmányban szereplő keverékek optimális hatását érjük el, a poliamin és a nukleinsav megfelelő R arányát úgy választjuk meg, hogy a transzfekciós hatóanyag pozitív töltésének aránya és a nukleinsav negatív töltésének aránya 0,1 és 10, még előnyösebben 0,5 és 6 között legyen.
A találmány szerinti vegyület jelenléte a transzfekciós keverékben előnyösen a transzfekciós hatóanyag jelentős csökkentését teszi lehetővé. Ebből annak lecsökkent toxicitása következik, ami a jövőben lehetővé teszi például az olyan sejtek transzfekcióját, amelyek kezdetben a sejtek transzfekciós hatóanyagaira érzékenyek voltak, mint például a vörösvértestképző sejtek a lipopoliaminokra. Végül, mint ahogy azt az itt következő példa bemutatja, a találmány szerinti kompozíciók transzfekciós hatékonysága magasabb a klasszikus transzfekciós keverékek által elért hatékonyságnál.
A jelen találmány szerinti kompozíciókban szereplő nukleinsav ugyanúgy lehet dezoxiribonukleinsav, mint ribonukleinsav. Beszélhetünk természetes vagy mesterséges eredetű szekvenciákról, illetve pontosabban geno5
HU 223 263 Bl miális eredetű DNS-ről, cDNS-ről, mRNS-ről, tRNSről és rRNS-ről, hibrid szekvenciákról vagy szintetikus szekvenciákról, illetve félszintetikus szekvenciákról. Ezek a nukleinsavak lehetnek humán, állati, növényi, bakteriális vagy vírus- stb. eredetűek. A kutatók által jól ismert technikákkal állíthatók elő, egészen pontosan génbankszelekcióval vagy kémiai szintézissel, továbbá a bankszelekció útján kiválasztott szekvenciákon kémiai vagy enzimatikus módosításokat végrehajtva, azaz kevert technikákat alkalmazva. Ezenkívül beiktathatok vektorokba, például plazmidvektorokba is.
Különösen ami a dezoxiribonukleinsavakat illeti, azok lehetnek egyszálúak vagy kétszálúak. Ezek a dezoxiribonukleinsavak kódolhatnak terápiás géneket, a transzkripció és replikáció regulációs génjeit, antiszensz (ellenirányú) géneket, más sejtalkotók kötőrégióit stb.
A találmány leírásában terápiás génen minden olyan fehérjejellegű terméket kódoló gént értünk, amelynek terápiás hatása van. Az így kódolt fehéijejellegű termék lehet fehéije vagy peptid stb. Ez a fehérjejellegű termék a célsejthez képest lehet homológ (azaz egy olyan termék, ami a célsejtben normálisan is kifejeződik, amikor semmilyen kóros állapot nem áll fenn). Ebben az esetben a fehéije kifejeződése lehetővé teheti valamely változtatás céljából egy másik fehéije elégtelen vagy legyengült aktivitása kifejeződésének álcázását, vagy éppen palástolhatja a fehéije fokozott kifejeződését is. A terápiás gén a sejtben található fehéije egy csökkent stabilitású, megváltoztatott aktivitású stb. mutánsát is kódolhatja. A fehérjetermészetű termék a célsejttel szemben lehet heterológ is. Ebben az esetben egy kifejeződő fehéije például kiegészítheti vagy pótolhatja a sejtben a hiányzó aktivitást, lehetővé téve ezzel, hogy a fehéije felvegye a harcot egy betegséggel, vagy stimuláljon egy immunválaszt.
A jelen találmányban szereplő hatóanyagok közül különösen fontos megemlítenünk az enzimeket, véralkotókat, hormonokat, a limfokineket: interleukinokat, interferonokat, TNF-eket stb. (FR 9203120), a növekedési faktorokat, a neurotranszmittereket vagy azok prekurzorait, vagy azok szintéziséhez szükséges enzimeket, a trofikus faktorokat: BDNF, CNTF, NGF, IGF, GMF, aFGF, bFGF, VEGF, NT3, NT5, HARP/pleiotrofm, a lipidek metabolizmusában részt vevő fehéijéket kódoló géneket, a következő apolipoproteinfajtákat: A-I, A-II, A-IV, B, C-I, C-II, C-III, D, E, F, G, H, J és apo(a) típusúakat, a metabolizmusban részt vevő enzimeket, mint például a lipoprotein lipázait, a vérsejt lipázát, a lecitin-koleszterin-acil-transzferázt, a 7-alfakoleszterin-hidroxilázt, a foszfatidil-acil-foszfatázt, illetve a lipidek transzfer fehérjéit, mint például a koleszterinészterek transzfer fehéijéit és a foszfolipidek transzfer fehérjéit, a HDL-ek kötőfehéijéit vagy például az LDL-receptorok közül kiválasztott receptort, vagy például a kilomikron-maradék receptorokat és a scavenger receptorokat, a disztrofint, vagy a minidisztrofint (FR 9111947), a GAX fehérjét, a mukovicidózis során előforduló CFTR fehéijét, a rákos sejtek növekedését elősegítő géneket: p53, Rb, RaplA, DCC, k-rev stb. (FR 93 04 745), a koagulációban részt vevő faktorokat kódoló géneket, a VII, VIII, IX faktorokat, a DNS javításában részt vevő géneket, az öngyilkos géneket (a timidin-kinázt, a citozin-deaminázt) stb.
A terápiás gén lehet egy antiszensz gén vagy szekvencia is, melynek kifejeződése a célsejtben kontrollálni tudja a gének kifejeződését vagy a celluláris mRNS transzkripcióját. Egy ilyen szekvencia a célsejtben átírható a sejt mRNS-éről komplementer RNS-sé, és így blokkolható a fehérjére történő átírás az EP 140 308 szabadalmi iratban leírt technika szerint. Az antiszensz szekvenciák a ribozimoknak kódoló szekvenciákat is magukban foglalják, amelyek képesek a cél-RNS-ek szelektív elpusztítására (EP 321 201).
Mint ahogy azt a fentiekben leírtuk, a nukleinsav szintén tartalmazhat egy vagy több antigén jellegű pepiidet kódoló gént, olyat, amely képes az embernél vagy az állatnál immunválaszt stimulálni. Egy különleges megvalósítási mód szerint a találmány lehetővé teszi vakcinák előállítását vagy immunterápiás gyógymódok használatát emberben vagy állatban, egész pontosan mikroorganizmusok, vírusok vagy különböző rákfajták ellen. Beszélhetünk az Epstein-Barr-vírus specifikus antigén hatású peptidjeiről, a HIV-vírusról, a hepatitis B-vírusról (EP 1885 573), az álveszettségvírusról vagy a tumorok specifikus vírusairól (EP 259 212).
Előnyösen a nukleinsav tartalmaz a terápiás gén kifejeződését lehetővé tevő szekvenciákat és/vagy a kívánt szervezetben vagy sejtben az antigén jellegű pepiidet kódoló géneket is. Beszélhetünk olyan szekvenciákról, amelyek természetesen az említett gén kifejeződéséért felelősek, mihelyt szekvenciái a megfertőzött sejtben működőképessé válnak. Szintén beszélhetünk különböző eredetű (más fehérjék kifejeződéséért felelős vagy akár szintetikus) szekvenciákról. Egész pontosan az eukarióták vagy vírusok promoterszekvenciáiról van szó. Például szó lehet azon sejt genomjából származó promoterszekvenciáról, amelyet meg akarunk fertőzni. Ugyanígy beszélhetünk egy vírus genomjából származó promoterszekvenciáról. Ennek fényében felsorolhatjuk például a El A, MLP, CMV, RSV stb. gének promotereit. Ezek az expressziós szekvenciák aktivációs, regulációs szekvenciák hozzáadásával megváltoztathatók.
Másfelől a nukleinsav tartalmazhat a terápiás gén előtt a célsejt szekréciós folyamatai során szintetizált terápiás terméket irányító szignálszekvenciát. Ez a szignálszekvencia lehet a terápiás termék természetes szignálszekvenciája, de lehet egy teljesen más funkcionális szignálszekvencia, vagy akár egy mesterséges szignálszekvencia is.
Még előnyösebben a találmány szerinti kompozíciók magukban foglalnak egy vagy több neutrális lipidet. Ezek a vegyületek különösen előnyösek, egész pontosan akkor, amikor az R arány alacsony. A feltalálók bebizonyították azt is, hogy egy neutrális lipid hozzáadása lehetővé teszi a nukleolipidrészecskék képződésének elősegítését és a részecske sejtbe való bejutását, ezzel destabilizálva annak membránját.
Legelőnyösebb, ha a jelen találmányban felhasznált neutrális lipidek két zsírsavláncot tartalmaznak.
HU 223 263 Bl
Különösen előnyös módon zwitterionos vagy az ionos töltésüktől megfosztott természetes vagy szintetikus zsírokat használunk fiziológiás körülmények között. Egész pontosan ezeket kiválaszthatjuk a dioleoilfoszfatidil-etanol-amin (DOPE), az oleoil-palmitoilfoszfatidil-etanol-amin (POPÉ), a diszteraoil-, -palmitoil-, -mirisztoil-foszfatidil-etanol-aminok és ezek 1,3N-metil-származékai közül, a foszfatidil-glicerinek, cerebrozidok (mint például a galaktocerebrozid), szfrngolipidek (mint például a szfingomielin), vagy még az aszialo-gangliozidok (mint például az aszialoGMl és az aszialoGM2) közül.
Ezek a különböző fajta lipidek előállíthatók vagy szintézissel, vagy különböző szervekből (például az agyból vagy tojásból) történő extrakcióval a szakember által jól ismert klasszikus technikák segítségével. Különösen a természetes lipidek szerves oldószerekkel végzett extrakciója útján állíthatóak elő (lásd Lehninger, Biochemistry).
Előnyösen a találmány szerinti transzfekciós hatóanyagként használt lipofektáns vegyületek 1 ekvivalens lipopoliaminra számítva 0,1-20, még előnyösebben 1-5 ekvivalens neutrális lipidet tartalmaznak.
A találmány szerinti kompozíciók beadása történhet külsőleg, bőrön át, szájon át, végbélen keresztül, hüvelyi úton, parenterálisan, orron át, vénásan, izomba, bőr alá, szemcsamokba, irhaszöveten át stb. való használatra szolgáló készítmények formájában. Előnyösen a találmány szerinti gyógyszerészeti kompozíciók beadási formái tartalmaznak egy gyógyszerészetileg elfogadott hordozóanyagot, pontosabban egy olyat, amely alkalmas a kívánt szervezetbe direkt vagy külsőleg (bőrön és/vagy testnedveken keresztül) történő bejuttatásra. Különösen steril vagy izotóniás oldatokról, vagy száraz, egész pontosan liofilizált vegyületekről lehet szó, amelyekből steril víz vagy fiziológiás szérum hozzáadásával injektálható oldat készíthető. A nukleinsav beadása során használt dózisai, pont úgy, mint az injekciók száma, különböző paraméterek szerint változtatható, egész pontosan függ a beadás módjától, az illető betegségtől, a gén fajtájától, melynek kifejeződését stimulálni akarjuk, vagy függhet az illető kezelési mód időtartamától is.
A nukleinsavak előnyösen különböző sejttípusváltozatok, mint például a hematopoietikus sejtek, a limfociták, a hepatociták, az endoteliális sejtek, a melanomasejtek, a karcinóma- és szarkómasejtek, simaizom-sejtek, neuronok és az asztrociták transzfekciójára használhatók.
A jelen találmány így egy különösen előnyös módszert kínál betegségek kezelésére egy, az illető betegség kezelésére alkalmas nukleinsavnak kationos vagy lipofektáns polimerekkel és egy, az előbbiek során meghatározott vegyületet tartalmazó hatóanyagokkal kombinációban in vitro, ex vivő vagy in vivő transzfekciója útján. Előnyösen e szerint a módszer szerint a fehéijevagy nukleon- és nukleinsavjellegű termékek hiánya által előidézett betegség ellen beadott készítmény az említett fehérjejellegű termékből vagy nukleonjellegű termékből származó szekvenciát kódol. A találmány szerinti kompozíciók a biológiai mozgékonyságuk és magas transzfektálóképességük következtében különösen fontosak.
A jelen találmány vonatkozik továbbá minden, a (KTPKKAKKP) és/vagy az (ATPAKKAA) peptid motívumot tartalmazó vegyületre, amelyben a motívumok száma 2 és 10 között változhat, amikor azok egy sejtreceptorhoz, antitesthez vagy antitestszármazékhoz kötődnek, és egy nukleinsavat irányítanak a receptort kifejező sejtek vagy a megfelelő antitestek felé. Ezekből következően egy ligandum, egy antitest vagy potenciális antitestszármazék a vegyülethez kapcsolódik, illetve ezen kiméramolekula transzfekciós tulajdonságát egyedül a vegyületnek tudjuk be.
A jelen találmány oltalmi körébe tartoznak az alább felsorolt oligopeptidek:
(ATPAKKAA)2(COOH), (KTPKKAKKP)2(COOH), ATPKKSAKKTPKKAKKP(COOH), KKAKSPKKAKAAKPKKAPKSPAKAKA(COOH), SRSRYYRQRQRSRRRRRR(COOH) és RRRLHRIHRRQHRSCRRRKRR(COOH), mindennemű olyan felhasználása is, ahol legalább egy, az említett célelemhez kapcsolt vagy célelemhez nem kapcsolt nukleinsav vagy előbbi oligonukleotid in vitro, ex vivő és/vagy in vivő transzferét valósítjuk meg.
A jelen találmány még teljesebb lesz a most következő példák alapján, amelyek csak szemléltető jeliegűként és a teljesség igénye nélkül kezelendők.
Anyagok és módszerek
1. Az in vivő génátvitelhez használt plazmidok
A találmányban szereplő vegyületek aktivitásának kimutatására használt szerkezetek a luciferázt (Luc) kódoló gént tartalmazó plazmidok.
Egész pontosan a pCMV luc, pXL 2621, pXL 2622 plazmidok, amelyek mindannyian tartalmazzák a pCDNA3 (Invitrogén) citomegalovírus (CMV) promotere előtt a luciferázt kódoló gént (pGL2 vektorból kinyerve, Promega). A pCMV luc és a pXL 2622 plazmidok a pGE2 vektorból származnak, a pXL 2621 pedig a pGL2 vektor plazmidja, továbbá mindezen vektorok SV40 promotere a CMV-promoterrel helyettesíthető.
Általánosságban a plazmidokat a PEG (Ausubel) kicsapási technikával állítottuk elő, és a DNS-t körülbelül 10 pg/μΙ koncentrációban 10 mM Trisz-t és 1 mM EDTA-t tartalmazó 8 pH-jú törzsoldatban 4 °C-on tároltuk.
2. A találmányban használt vegyületek
H: KTPKKAKKPKTPKKAKKP(COOH), 18 aminosav;
N: ATPAKKAAATPAKKAA(COOH), 16 aminosav;
nls-H: PKKKRKV-bAla-KTPKKAKKPKTKKAKKP(COOH), 26 aminosav;
PR1: RRRLHRIHRRQHRSCRRRKRR, 21 aminosav;
PR2: SRSRYYRQRQRSRRRRRR.
Ezeket az itt következő módszerek szerint állítottuk elő.
HU 223 263 Bl
2.1. N: ATPAKKAAATPAKKAA(COOH)
Ezt az oligopeptidet trifluor-ecetsavas sója formájában egy HMP-gyantán az FMOC-módszer szerint az Applied Biosystems 431 peptidszintetizátor segítségével állítottuk elő. A szintézis után a pepiidet a gyantától víz/TFA 1/19 arányú keverékének jelenlétében végzett 90 perces kezelés során hasítottuk le. Szűrés után az oldatot rotációs bepárlón koncentráltuk, majd a pepiidet a TFA-oldatból tercier-butil-metil-éter hozzáadásával kétszer kicsaptuk. A végső üledéket tercier-butil-metil-éterrel mostuk, majd szárítottuk. A peptidet 5 ml vízben oldottuk, majd fordított fázisú HPLC-vel C18 100 típusú (Biorad RSL) kolonnán szűrtük. A peptidet O-tól 25%os acetonitril és 0,07% TFA vizes oldatával tisztítottuk. A kapott peptid 95%-nál nagyobb tisztaságú, és oldékonysága vízben 100 mg/ml.
2.2. nls: PKKKRKV
Ezt az oligopeptidet trifluor-ecetsavas sója formájában a fentiekben ismertetett módszer szerint szintetizáltuk, a hasításhoz pedig víz/TFA/fenol/etánditiol/tioanizol 2/40/3/1/2 (v/v) oldatot használtunk. A kapott peptid 95%-nál nagyobb tisztaságú, és oldékonysága vízben 2,1 pH-nál 100 mg/ml.
2.3. H: KTPKKAKKPKTPKKAKKP(COOH) és nls-H: PKKKRKV-bAlaKTPKKAKKPKTKKAKKP(COOH)
Ezeket az oligopeptideket a fentiekben leírt módszer szerint trifluor-ecetsavas sóik formájában szintetizáltuk. Ahhoz, hogy ezt megvalósítsuk, a gyantát két részre osztottuk. Az egyik részt a H szintéziséhez használtuk, a hasítást TFA/fenol/etánditiol/tioanizol/víz 40/3/1/2/2 (v/v) eleggyel végeztük. A kapott peptid 90%-nál nagyobb tisztaságú, és oldékonysága vízben 2,1 pH-nál 10 mg/ml. A gyanta másik részén az nlsbAla-H szintézisét valósítottuk meg, a hasításhoz az előzővel megegyező összetételű oldatot használtunk. A kapott peptid 95%-nál nagyobb tisztaságú, és oldékonysága vízben 2,1-es pH-nál 10 mg/ml.
2.4. PR1: RRRLHR1HRRQHRSCRRRKRR és PR2: SRSRYYRQRQRSRRRRRR
Ezeket az oligopeptideket több lépésben kapcsoltuk össze a szilárd fázisú Boc-Benzyl szintézistechnikát alkalmazva. A kezdeti gyanta egy Boc-L-Arg(Tos)Pam (0,48 meq/g) gyanta. A védőcsoport eltávolítására és a kapcsolásra használt módszer a következő:
1-55% TFA metilén-dikloridban | |
(DCM) | 1x2 perc |
2-55% TFA metilén-dikloridban | 1x30 perc |
3-DCM | 2x1 perc |
4-DMF | 3x1 perc |
5-összekapcsolás | |
6-DMF | 2x1 perc |
7-DCM | 2x1 perc |
Minden lépéshez peptid-gyanta grammonként |
ml oldatot használtunk. Az összes aminosav kapcsolása (háromszoros feleslegben) BOP-t, Hobt-t és DIEA-t tartalmazó DMF-ben történt. Minden kapcsolási lépést ninhidrinteszttel ellenőriztünk.
A végső peptidet a gyantából kinyertük, és arról folyékony hidrogén-fluoriddal a védőcsoportokat teljes
1. táblázat
DOGS/DNS töltésarány | (RLU) vegyület nélkül | H (RLU)-val |
0,8X | 32 | 850 |
1,8X | 220 | 23 700 |
3X | 5400 | 21 750 |
egészében eltávolítottuk. Peptid-gyanta grammonként 10 ml HF-ot használtunk 0 °C-on, 45 percen keresztül, p-krezol és etánditiol jelenlétében. Miután a hidrogénfluoridot elpárologtattuk, a nyers reakcióelegyet dietil-éterrel mostuk, trifluor-ecetsavban oldottuk, majd dietil-éterrel kicsaptuk és szárítottuk.
3. A használt lipofektáns hatóanyagok
Lipopoliamin A:
{d-l,3-bisz[(3-amino-propil)-aminoJ-2-propil}(dioktadecil-karbamoil-metoxi)-acetát (RP115335).
Lipopoliamin B:
{H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2 (RP120525).
Lipopoliamin C:
H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyNí(CH2)lg]2 (RP120535).
Lipopoliamin D:
H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COArgN[(CH2)18] (RP120531).
1. példa
In vitro nukleinsavtranszfer az NIH3T3 sejtekbe
Ez a példa nukleinsavaknak egy találmány szerinti, nukleinsavat, egy találmány szerinti vegyületet és transzfekciós hatóanyagként egy lipopoliamint tartalmazó kompozíció segítségével, különböző pH- és pufferkörülmények között történő in vitro (sejtkultúrákban) transzferét úja le.
1. Az alábbi összetevőkből 10 μΐ keveréket készítünk:
0,5 μg pCMV-luc plazmid-DNS, 0,25 μg találmány szerinti egyik vegyület egy meghatározott pufferoldatban, mM dioktadecil-amido-glicil-spermin (DOGS) az X töltésnek az egyes kísérletek szerint meghatározott arányában.
2. Az NIH3T3 sejttörzs 5 χ 104 sejtjét az előző keverékkel 37 °C-on inkubáljuk 4 órán keresztül, 5%-os CO2-atmoszférában. A sejteket ezután mossuk, és a 10% szérumot (DMEM 10% SVF) tartalmazó táptalajba 48 órára visszahelyezzük.
A sejttakarót ezután 50 μΐ lízispufferben (Promega) feloldjuk, ezután 20 000 g-nél 5 percig centrifugáljuk.
A luciferázaktivitást 20 μΐ szubsztrát (Promega) hozzáadása után 4 μΐ felülúszóban méijük. A leolvasást LKB luminométerrel végezzük az RLU-kat (Relatíve Lights Units) 20 másodpercenként összegezve.
Az eredményeket az itt következő 1. és 2. táblázatban mutatjuk be.
3. Tömörítés 150 mM NaCl+10 mM 7,1 pH-jú HEPES* [N-(2-hidroxi-etil)-piperazin-N’-(2-etil-szulfonsav)]-oldatban
HU 223 263 Bl
4. Tömörítés 5%-os D-glükóz+150mM NaCl+10 mM HEPES-oldatban (a tömörítőoldat pHja7,2)
2. táblázat
DOGS/DNS 1 töltésarány | (RLU) vegyület nélkül | H (RLU)-val | N (RLU)-val |
0,8X | 880 | 44 000 | 1450 |
1 i>8x | 6 600 | 156 500 | - |
1 3x | 22 000 | 297 500 | 90 300 |
A kísérletek során összességében jobb eredményekhez jutottunk, ha a DOGS-os tömörítő készítményhez egy találmány szerinti vegyületet adtunk. Úgy tűnik, hogy lehetséges a DOGS mennyiségének nagymértékű csökkentése anélkül, hogy a megfelelő készítmény transzfekciójának hatékonysága romlana.
2. példa
Transzfekciós kísérlet neutrális lipid jelenlétében μΐ keveréket állítunk elő a következők alapján:
pg pCMV-luc plazmid-DNS-t, 0,25 pg találmány szerinti vegyületet előkészítünk 150 mM NaCl és 10 mM 7,4 pH-jú foszfátpufferben, mM dioktadecil-amino-glicil-spermint (DOGS) használva, minden egyes próbánál meghatározott X töltésarány szerint dioleil-foszfatidil-etanol-amin (DOPE) jelenlétében, 1/2 DOGS/DOPE arányban.
Ebben a különleges esetben etanolos 40 mM DOGSoldatot ugyanolyan térfogatú 80 mM dioleil-foszfatidil-etanol-amin (DOPE) kloroform/etanol 1/5 arányú elegyével készült oldatával keverünk össze.
Ebben a keverékben, az előző példában meghatározott körülmények szerint inkubáltuk az NIH3T3 sejttörzs 105 sejtjét. Az inkubáció befejeztével a sejteket ugyanezen példa előírásai szerint kezeltük. Az eredményeket az itt következő táblázatban mutatjuk be.
3. táblázat
DOGS/DNS töltésarány | (RLU) vegyület nélkül | H (RLU)-val | nls-H (RLU) kimérrel |
0,8XD/D | 24 | 3 175 | 760 |
1XD/D | 19 | 7 410 | 2 380 |
1,8XD/D | 1800 | 39 500 | 52 800 |
Ezek az eredmények megerősítik az 1. példában kapottakat. A találmány szerinti bázikus vegyület jelenlétében, különösen a H jelenlétében a lipofektáns mennyiségének felére csökkentése lehetséges. 3 *
3. példa
A találmány szerinti vegyület/DNS arány változtatása egy találmány szerinti transzfekciós kompozícióban
3.1. DOGS-készitmény jelenlétében
1.10 pl következő összetételű elegyet állítunk elő:
- 0,75 pg pCMV-luc plazmid-DNS és egy találmány szerinti vegyület meghatározott arányú keveréke 5% D-glükózt, 150 mM NaCl-ot, 10 mM HEPES-t (a tömörítőoldat pH-ja: 7,2) tartalmazó pufferoldatban,
- 40 mM-os dioktadecil-amino-glicil-spermint (DOGS) 1,8X töltésarányban.
2. NIH3T3 sejttörzs 4 χ 105 sejtjét az előző keverékkel együtt 37 °C-on inkubáltuk 4 órán keresztül 5%-os CO2-atmoszférában. A sejteket ezután mostuk, és 48 órára visszahelyeztük a 10%-os szérumot (DMEM 10% SVF) tartalmazó tenyészetbe. A sejttakarót a transzfekció után 48 órával 100 pl lízispufferben (Promega) lízisnek vetettük alá. A leolvasást LKB luminométer segítségével végeztük az RLU-kat (Relatíve Lights Units) 20 másodpercenként összegezve.
Az eredményeket az itt következő 4. táblázat mutatja be.
4. táblázat
PEP/DNS w/v | H (RLU)-val | H-nls (RLU)-val | N (RLU)-val |
0 | 2 150 | 2150 | 2 150 |
0,25 | 3 300 | 38 000 | 35 000 |
0,5 | 45 000 | 100000 | 35 000 |
1 | 84 000 | 105 000 | 13 000 |
2 | 105 000 | 200 000 | 20 000 |
3.2. DOGS/DOPE 1,8Xjelenlétében Az előzőekben leírt 3.1. előirat szerint járunk el, de transzfekciós ágensként 40 mM dioktadecil-amido-glicil-spermin (DOGS) 1,8X és dioleoil-foszfatidil-etanolamin (DOPE) oldatát használjuk, 1/2 DOGS/DOPE arányt biztosítva, amelyet a 2. példában leírt utasítás szerint készítünk el.
Az 5. táblázat mutatja be a kapott eredményeket.
5. táblázat
| Vegyület/DNS I w/v | H(RLU) | H-nls (RLU) | N(RLU) |
1 0 | 580 | 580 | 580 |
1 0,25 | 13 000 | 5 600 | 7 600 |
0,5 | 11 000 | 18 500 | 1 800 |
I 1 | 14 100 | 36 000 | 13 600 |
1 2 | 16 500 | 58 000 | 14 100 |
4. példa
A találmány szerinti vegyület/DNS arány változtatása a találmány szerinti transzfekciós keverékben egy másik, a DOGS-tól különböző transzfekciós hatóanyagot használva
4.1. {l,3-bisz[(3-Amino-propil)-amino]-2-propil}(dioktadecil-karbamoil-metoxij-acetát (lipopoliamin A) jelenlétében
1. 10 pl következő vegyületeket tartalmazó keveréket állítunk elő:
HU 223 263 Bl
- 0,55 pg pCMV-luc plazmid-DNS és egy találmány szerinti vegyület meghatározott arányban 150 mM NaCl-pufferoldatban,
- {l,3-bisz[(3-amino-propil)-amino]-2-propil}(dioktadecil-karbamoil-metoxi)-acetát a meghatározott töltésarányban.
2. NIH3T3 sejttörzs 5 χ 104 sejtjét az előző keverékkel 37 °C-on 4 órán keresztül inkubáltuk 5%-os CO2-atmoszférában. A sejteket ezután mostuk, és 48 órára 10% szérumot (DMEM 10% SVF) tartalmazó tenyészetbe helyeztük vissza. A sejttakarót a transzfekció után 45 órával 100 pl lízispufferben (Promega) lízisnek vetettük alá, ezután a sejteket összegyűjtöttük, és 20 000 g-nél 5 percig centrifugáltuk. A luciferázakti5 vitást 10 μΐ felülúszóban 50 μΐ szubsztrát hozzáadása után mértük. A leolvasást Berthold lumat 9501® luminométer segítségével végeztük az RLU-kat (Relatíve Lights Units) 10 másodpercenként összegezve. Az eredményeket az itt következő 6. táblázatban foglaltuk össze.
6. táblázat
Lipofektánsok | Vegyület nélkül χ 105 6 * RLU | H-valxl06RLU | nls-H-val χ 106 RLU | ||||
A lipofektáns NH2-csoportjának/DNS foszfátjának aránya | vegyület/DNS arány | ||||||
0 | 0,5 | 1 | 2 | 0,5 | 1 | 2 | |
1,8X | 3,9 | 30,4 | 32,7 | 4,1 | 52,4 | 58,5 | 39,3 |
3X | 8,9 | 41,5 | 61,3 | 16,6 | 64,1 | 60,4 | 49,2 |
6X | 6,2 | 23,6 | 22,3 | 15,6 |
4.2. PEI800Kjelenlétében
1. A 4.1. előirat szerint járunk el, ugyanazon közeget, de lipofektánsként a PEI800K-t használva. Az eredményeket az itt következő 7. táblázatban mutatjuk be.
7. táblázat
PEI800K | Vegyület nélkül χ 106 RLU | H-valxlO6RLU | nls-H-val χ 106 RLU | ||||
A polimer amin ekvivalens a DNS-foszfátra nézve | vegyület/DNS arány | ||||||
0 | 0,5 | 1 | 2 | 0,5 | 1 | 2 | |
6 | 7,7 | 4,9 | 7 | 12,3 | 4 | 7,3 | 8,8 |
1 9 * * | 5 | 8 | 11,6 | 4 | 16,3 | 11 | 12,1 |
1 12 | 7,5 | 11,3 | 17,1 | 1,2 |
5. példa
In vivő transzfer izomsejtekbe
Az ennek megfelelő kísérleteket az itt következő eszközök és módszerek segítségével valósítottuk meg.
Modell: Az injekciót a sípcsont felső részébe adtuk C57 bl6 vagy OF1 felnőtt (8 hétnél idősebb) egérnek.
Előirat: A DNS-t 0,5 mg/ml koncentrációban oldottuk egy 150 mM végső koncentrációjú NaCl-ot és 5% D-glükózt tartalmazó oldatban. Némelyik csoportban az injekciózás előtt 1 mg/ml koncentrációjú oldat formájában peptidet adtunk a DNS-hez úgy, hogy meghatározott tömeg/tömeg arányt érjünk el. Mielőtt beadtuk az oldatot, legalább 20 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk.
Az eredmények meghatározása: Két nappal a beinjekciózás után izommintát vettünk, 750 μΐ lízispufferben (Promega E153A) feldaraboltuk. A levett mintát darálóban (Heidolf) homogenizáltuk, és ebből 10 pl-t használtunk a luciferázaktivitás mérésére. Ezt a mérést egy Lumat 9501-es luminométerrel (Berthold) végeztük el a kibocsátott sugárzást 10 másodpercenként összegezve, miután 10 μΐ mintához 50 μΐ luciferázszubsztrátot adtunk. A szubsztrát hozzáadása előtt mért háttérzajt ebből az összegből kivontuk, és az aktivitást (750 ml lízispufferre visszaszámolva) össz-RLU-ban (Relatíve Lights Units) adtuk meg. Ennek megvalósításához 40 μΐ-t (20 pg DNS) injektáltunk 7,4 pH-jú 5 mM végkoncentrációjú HEPES-oldatba, ezután 20 perccel a beinjekciózás előtt lipopoliamint C-t (RPR 120 535) ad60 tünk hozzá 0,01 nmol/μΐ DNS arányban.
HU 223 263 Bl
8. táblázat
1 Peptid, peptid/DNS arány tömeg/tömeg | RLU-átlag | RLU-szórás | Állatok száma |
Peptid nélkül | 15 228 125 | 14 618 681 | 6 |
nls-H, 0,025 tömeg/tömeg+lipopoliamin C | 42 722 500 | 66 485 348 | 6 |
Ezek az eredmények megerősítik, hogy a DNS izomba történő in vivő transzfekciója során a lipopo- 10 liamin és a találmány szerinti tömörítő hatóanyag együttes használata előnyös hatású.
6. példa
Találmány szerinti kompozíciók in vivő transzferé tumorsejtekbe
Az erre vonatkozó kísérleteket C57/BL felnőtt (>8 hét) 3LL (Lewis Lung carcinoma) típusú, állatból állatba történő, a horpasz magasságában a bőr alá bejuttatott tumorfragmentum által előidézett tumort hordozó nőstény egereken végeztük.
A beinjektált oldatokat az itt következők alapján állítottuk elő.
Az itt következő DNS-t először a pufferben feloldottuk, ezután hozzáadtuk a peptidet, majd 20 perc után egy nagy koncentrációjú (20 vagy 40 mM) kationos lipidoldatot adtunk a keverékhez. Miután az összes anyagot hozzáadtuk, a keverék DNS-t, a peptidet és kationos lipidet, 150 mM NaCl-ot, 5% D-glükózt és 6,2 pH-jú 5 mM MES-t tartalmazott. A lipopo- 30 liamin C-t (RPR 120 535) tartalmazó két utolsó sorozat esetében az injekciós hordozóközeg megfelelően mM és 150 mM NaCl-ot és 5% D-glükózt tartalmazó oldat.
20-30 perccel az oldat elkészítése után injekcióztuk be az oldatot.
Minden transzfekciós keveréket (specifikus hatásukat lásd a 9. és 10. táblázatban) 7 nappal a beültetés 15 után injekcióztuk a tumorba, az egeret Ketamin (130 mg/kg)+Xilazin (4 mg/mg) keverékkel altattuk el.
nappal a beinjekciózás után kinyertük a tumorszövetet, amelyet lemértünk, majd feldaraboltunk, és 500 μΐ lízispufferben (Promega Cell Lysis Buffer 20 El53 A) daráltuk. Centrifugálás után (20 000 g-vel 10 percig) 10 μΐ mintát veszünk, amely 50 μΐ reagens (Promega Luciferase Assay Substrate) hozzáadása után egy Lumat LB 9501 (Berthold) típusú luminométerrel az eredményeket 10 másodpercenként összegezve, a lucife25 rázaktivitás teljes fényintenzitásának mérésére szolgál.
A kapott eredményeket RLU-ban (Relatíve Lights Units) a teljes tumorlízis felülúszóra vonatkoztatva vagy RLU-ban pg beinjektált DNS-re vonatkoztatva adtuk meg.
A 9. táblázat a különböző A, B, C, vagy D lipopoliaminok jelenlétében, illetve a 10. táblázat PEI jelenlétében kapott eredményeket mutatja be.
9. táblázat
Plazmid | Peptid | Kationos lipid | Eredmény, RLU/tumor | Kezelt állatok száma | ||||
pg/tumor | (DNS) Mg/μΐ | referencia | pept/DNS w/w | referencia | DNS nmol/pg | átlag | szórás | |
I 20 | 2 | 0 | 0 | 5 | ||||
| 20 | 2 | A | 1,8 | 142 300 | 121418 | 5 | ||
20 | 2 | H | 1 | 1,8 | 301 730 | 243 166 | 5 | |
30 | 2 | A | 3 | 99 775 | 128 726 | 6 | ||
30 | 2 | H | 1 | 3 | 1 340 | 1 771 | 5 | |
460 | 624 | |||||||
7,5 | 0,5 | 3 | 5 | |||||
7,5 | 0,5 | H | 1 | 3 | 88 712 | 49 314 | 6 | |
7,5 | 0,5 | H | 1,5 | 3 | 383 313 | 234 713 | 6 | |
15 | 1 | H | 1 | 3 | 618 025 | 530 774 | 5 | |
1017 | 966 141 | |||||||
10 | 0,5 | H | 1,5 | C | 3 | 372 | 9 | |
10 | 0,5 | H | 1,5 | D | 3 | 414 286 | 10 | |
679 258 | 219 333 | |||||||
18,75 | 0,25 | C | 2 | 395 433 | 6 |
HU 223 263 Bl
9. táblázat (folytatás)
Plazmid | Pepiid | Kationos lipid | Eredmény, RLU/tumor | Kezelt állatok száma | ||||
pg/tumor | (DNS) μ&'μΐ | referencia | pept/DNS w/w | referencia | DNS nmol/pg | átlag | szórás | |
18,75 | 0,25 | Pr2 | 0,5 | 2 | 126 036 | 6 | ||
222 700 | 612 401 | |||||||
20 | 0,5 | C | 4 | 1046 | 6 | |||
20 | 0,5 | H | 1 | c | 4 | 050 | 887 206 | 6 |
1674 | ||||||||
806 467 | 106 | |||||||
1 348 | ||||||||
233 |
10. táblázat
I Plazmid | Peptid | Polietilénimin | Eredmény, RLU/tumor | Kezelt állatok száma | ||||
beinjektált mennyiség | (DNS) pg/pi | referencia | peptid/DNS w/w | méret | Ekvivalens (Eq) | átlag | szórás | |
20 | 2 | 0 | 0 | 5 | ||||
20 | 2 | 800 K | 9 | 54 350 | 52 989 | 5 | ||
I 50 | 2 | 800 K | 9 | 7 783 | 16 803 | 6 | ||
1 50 | 2 | Η 1 | 1 | 800 K | 9 | 62 230 | 71462 | 5 |
50 | 2 | 800 K | 12 | 6 733 | 16 493 | 6 | ||
50 | 2 | Hl | 1 | 800 K | 12 | 72 700 | 150 300 | 5 |
40 | 2 | 800 K | 18 | 470 | 1 051 | 5 | ||
I 40 | 2 | Hl | 1 | 800 K | 18 | 82 608 | 104 443 | 6 |
| 40 | 2 | 800 K | 24 | 1630 | 3 645 | 5 | ||
40 | 2 | Hl | 1 | 800 K | 24 | 45 750 | 63 942 | 5 6 |
1 7 * * 10 11 | 0,5 | Hl | 1,5 | 50 K laktóz | 12 | 14152 | 16 946 | 11 |
1 ιθ | 0,5 | Η 1 | 1,5 | 50 K laktóz | 12 | 12 942 | 22 853 | 11 |
7. példa
In vitro nukleinsavtranszfer 3LL sejtekbe
Ez a példa az in vitro (sejtkultúrákban) nukleinsavtranszfert írja le a találmány szerinti nukleinsavat, a találmány szerinti protaminok származékait és egy lipopoliaminok közül kiválasztott vegyületet 75 mM végkoncentrációjú NaCl-oldatban tartalmazó kompozícióban.
Egy 10 pl mennyiségű, az említett vegyületet tartalmazó keveréket állítunk elő az itt következőkből:
- 0,5 pg pCMV-luc plazmid-DNS, 0,5 pg találmány szerinti PR1 vagy PR2 vegyület 0,75 mM végkoncentrációjú NaCl-oldatban,
- Lipopoliamin C (RPR 120 535) a továbbiakban a
11. táblázatban bemutatott különböző kísérletek szerint változó töltésarányoknak megfelelően.
χ 105 3LL sejtet (250 pl, 10% magzati boíjúszérumot tartalmazó DMEM táptalajban) 37 °C-on az előzőekben meghatározott keverékkel 4 órán keresztül inkubáltunk 5%-os CO2-atmoszférában. 500 pl táptalaj hozzáadása után a sejteket visszaoltottuk a kultúrába. Másnap a sejteket mostuk, és 24 órára visszaoltottuk ugyanazon, 10% magzati boíjúszérumot tartalmazó kultúrába.
A sejttakarót ezután 100 pl lízispufferben (Promega) lízisnek vetettük alá. A luciferázaktivitást 50 pl szubsztrát (Promega) hozzáadásával mértük. A leolvasást LB luminométeren végeztük, az RLU-kat (Relatíve Lights Units) 10 másodpercenként összegeztük.
A 11. és 12. táblázat a PRl-gyel és a PR2-vel végzett vizsgálatokat mutatja be.
HU 223 263 ΒΙ
11. táblázat
Töltésarany Lipopoliamin C/ DNS | Vegyület nélkül (RLU) | PR2-vel (RLU) |
1 4X | 107 289 | 447 214 |
I 6X | 77 396 | 1 182 641 |
1 8X | 14 512 | 729 285 |
12. táblázat
1 Töltésarány 1 Lipopoliamin C/ DNS | Vegyület nélkül (RLU) | PR2-vel (RLU) |
1 4X | 12 037 | 6 304 |
I 6X | 901 | 113 113 |
1 sx | 328 | 294 743 |
8. példa (összehasonlító példa)
A találmány szerinti tömöritőpeptidek lipofektáns nélkül in vivő tumorba történő injektálása Modell:
- Swiss típusú, felnőtt nőstény csupasz egér,
- ΙΟ7 3T3 HER2 sejt révén, a horpasz magasságában a bőr alá injektálva kísérletileg előidézett tumor,
- a transzfekciós keverék beinjekciózása 7-12 nappal a sejtek beinjekciózása után történik. A tömörített vagy nem tömörített peptid-DNS-t tartalmazó oldatot közvetlenül a tumorba injektáltuk egy Hamilton fecs5 kendővel,
- 2 nappal az injekciózás után tumorszövetmintát vettünk, melyet lemértünk, majd felaprítottunk, és 750 pl lízispufferben (Promega Cell Lysis Buffer El53 A) homogenizáltunk. Centrifugálás után (20 000 g-vel 10 percig) 10 μΐ mintát vettünk, amely az 50 μΐ reagens (Promega Luciferase Assay Substrate) hozzákeverése után Lumat LB 9501 (Berthold) típusú luminométerrel a fényintenzitást 10 másodpercenként összegezve, teljes fényintenzitás alapján történő lucife15 rázaktivitás méréséhez szükséges.
Az eredményként kapott aktivitásokat RLU-ban (Relatíve Lights Units) a tumorlízis során kapott felülúszó teljes mennyiségre vonatkoztatva határoztuk meg.
Előirat: 0,5 mg/ml koncentrációban oldottuk a
DNS-t egy olyan oldatban, amely az eredménytáblázatban feltüntetett végső koncentrációban tartalmazza a sókat, a puffért és a glükózt. Bizonyos csoportokban a beinjekciózás előtt 1 pg/μΙ peptid vizes oldatát adtuk a DNS-hez, hogy megfelelő mennyiségű és meghatáro25 zott tömeg/tömeg arányú oldathoz jussunk. Az oldatot 20 percen keresztül szobahőmérsékleten inkubáltuk. Az egerekbe összességében 10 pg, tumoregységre kiszámított mennyiségű, DNS-t tartalmazó 20 pl összmennyiségű oldatot injekcióztunk.
13. táblázat
Puffer | Peptid | Eredmény, RLU/tumor | Kezelt állatok száma | ||
NaCl/glükóz/5mM MES vagy HEPES | referencia | peptid/DNS w/w | átlag | szórás | |
I 150/HEPES | 1 689 938 | 1 388 072 | 6 | ||
bls-H | 0,02 | 6 819100 | 5 860 709 | 6 | |
150/5/HEPES | 369 563 | 577 901 | 6* | ||
nls-Hl | 0,1 | 1 654 313 | 2 145 147 | 6* | |
nls-Hl | 0,02 | 4 031 000 | 1 007 896 | 6* | |
931 275 | 214 229 | 4 | |||
H | 0,1 | 3 420 432 | 1 285 704 | 6 |
*: az injekciózás alatt idegrendszerre ható Imaigen+Rompun (Ketamin 130 mg/kg, Xilazin 4 mg/kg, hashártyán át beadva) neuroleptikus analgetikummal elaltatott egerek.
Ezek az eredmények az mutatják, hogy azok a tumorok, amelyek esetében a csupasz DNS által történő transzfekció lehetséges, ha a csupasz DNS-hez peptidet adunk alacsony peptid/DNS arányban, kationos lipid
SZEKVENCIÁK JEGYZÉKE (1) AZ 1. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 9 aminosav (B) TÍPUS: aminosav hozzáadása nélkül, ez a kizárólagosan csak csupasz DNS használatához viszonyítva az exogén gén kifejeződésének növekedését teszi lehetővé.
HU 223 263 Bl (D) KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) AZ 1. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA
Lys Thr Pro Lys Lys Alá Lys Lys Pro 5 (2) A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 8 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA Alá Thr Pro Alá Lys Lys Alá Alá (3) A 3. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 16 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) A 3. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA Alá Thr Pro Alá Lys Lys Alá Alá Alá
Thr
Pro Alá Lys
Lys Alá Alá 15 (4) A 4. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 18 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) A 4. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA Lys Thr Pro Lys Lys Alá Lys Lys
Pro Lys Thr 10
Pro Lys
Lys Alá 15
Ly s
Lys Pro (5) AZ 5. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 17 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) Az 5. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA Alá Thr Pro Lys Lys Ser Alá Lys Lys Thr
10
Pro Lys
Lys Alá Lys Lys 15
Pro (6) A 6. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) A 6. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA
Lys | Ly s | Al a | Ly s | Ser 5 | Pro | Ly s | Ly s | Al a | Lys Alá Alá Lys 10 | Pro Lys Lys Alá 15 |
Pro | Ly s | Ser | Pro | Al a | Ly s | Alá | Lys | Al a | ||
20 | 25 |
HU 223 263 Bl (7) A 7. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 18 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) A 7. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA
Ser Arg Ser Arg Tyr Tyr Arg Gin Arg Gin Arg Ser Arg Arg Arg Arg Arg 5 10 15 (8) A 8. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 21 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) A 8. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA
Arg Arg Arg Leu His Arg Ile His Arg Arg Gin His Arg Ser Cys Arg Arg 5 10 15
Arg Lys Arg Arg 20 (9) A 9. SZÁMÚ SZEKVENCIA ADATAI:
(i) A SZEKVENCIA JELLEMZŐI (A) HOSSZ: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) KONFIGURÁCIÓ: lineáris (ii) MOLEKULATÍPUS: fehérje (xi) A 9. SZÁMÚ SZEKVENCIA LEÍRÁSA
Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val Alá Lys Thr Pro Lys Lys Alá Lys Lys Pro 5 10 15
Lys Thr Pro Lys Lys Alá Lys Lys Pro
Claims (35)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Nukleinsavak transzfekciójára alkalmas gyógyászati kompozíció, amely a transzfektálandó nukleinsavon kívül egy transzfekciós hatóanyagot és legalább egy, a nukleinsav kondenzációjában részt vevő vegyületet tartalmaz, azzal jellemezve, hogy az említett vegyület részben vagy egészben, folytonosan vagy nem folytonosan ismétlődő (KTPKKAKKP) és/vagy (ATPAKKAA) peptidegységekből áll, ahol az egységek száma 2-10, vagy az alábbi oligopeptidek egyikét tartalmazza: SRSRYYRQRQRSRRRRRR(COOH) vagy RRRLHRIHRRQHRSCRRRKRR(COOH).
- 2. Az 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a peptidegységek egymástól aminosav típusú biokémiai és/vagy kémiai jellegű linkerekkel vannak elválasztva.
- 3. A 2. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a linker egy vagy több aminosavat tartalmaz.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a vegyület Hl hiszton származéka.
- 5. A 4. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a vegyület a Hl hiszton C-terminális doménjének származéka.
- 6. A 4. vagy 5. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a következő oligopeptidek valamelyikét tartalmazza:(KTPKKAKKP)2(COOH),ATPKKSAKKTPKKAKKP(COOH),KKAKSPKKAKAAKPKKAPKSPAKAKA(COOH).HU 223 263 Bl
- 7. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a vegyület a nukleolin N-terminális doménjének származéka.
- 8. A 7. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az (ATPAKKAA)2(COOH) peptidet tartalmazza.
- 9. Az 1 -8. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az említett vegyület β-lemezszerkezetű.
- 10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az említett vegyület egy sejtreceptor-ligandumot is tartalmaz.
- 11. A 10. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a Hl hiszton egy részét vagy egészét és egy maglokalizációs szignálszekvenciát is tartalmaz.
- 12. All. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a PKKKRKV-bAla-(KTPKKAKKP)2(COOH) peptidet tartalmazza.
- 13. Az 1-12. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy az említett vegyületet egy füzogén típusú peptiddel együtt alkalmazzuk, mely elősegíti az említett keverék sejtbe történő transzfekcióját.
- 14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy poliglikozilezett, szulfonált, foszforilált és/vagy komplex cukrokba vagy egy lipofil hatóanyagba van beillesztve.
- 15. Az 1-14. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a transzfekciós hatóanyag egy kationos polimer vagy egy lipofektáns.
- 16. A 15. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a lipofektáns liposzómák, immunoliposzómák vagy célliposzómák kialakítására hajlamos lipid.
- 17. A 15. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a kationos polimer előnyösen egy (I) általános képletű vegyület, mely képletben R jelentése hidrogénatom vagy (a) általános képletű csoport, ahol n értéke 2 és 10 közötti egész szám, p és q egész szám és p+q összeggel egyezően a polimer átlagos molekulatömege ΙΟ2—107 dalton.
- 18. A 15. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a kationos polimert a polietiléniminek (PEI) vagy a polipropiléniminek (PPI) közül választjuk ki.
- 19. A 18. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a polimert az 50 000 átlagos molekulatömegű polietiléniminek (PEI50K) és a 800 000 átlagos molekulatömegű polietiléniminek (PEI800K) közül választjuk ki.
- 20. A 15. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a lipofektáns legalább egy (II) általános képletű poliaminrégiót tartalmaz, ahol m értéke 2 vagy annál nagyobb egész szám és n értéke 1 vagy annál nagyobb egész szám.
- 21. A 20. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a poliaminrégiót spermin, termin vagy ezek olyan analógja alkotja, amely megőrizte a nukleinsavhoz való kötődés képességét.
- 22. A 20. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a lipofektáns legalább egy (IV) általános képletű lipofil régiót tartalmaz, aholX és X’jelentése egymástól függetlenül oxigénatom vagy egy -(CH2)q- általános képletű polimetiléncsoport, ahol q értéke 0, 1, 2 vagy 3; vagy -NH- vagy -NR’képletű csoport, aholR’ jelentése 1 -4 szénatomos alkilcsoport;Y és Y’ jelentése egymástól függetlenül metilén-, karbonil- vagy tiokarbonilcsoport;Rj, R4 és R5 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy 1-4 szénatomos szubsztituálatlan vagy szubsztituált alkilcsoport;p értéke 0-5 közötti egész szám,R$ jelentése egy koleszterinszármazék vagy egy -NR,R2 általános képletű alkil-amino-csoport, ahol R, és R2 jelentése egymástól függetlenül telített vagy telítetlen, lineáris vagy elágazó láncú12-22 szénatomos alifás csoport.
- 23. A 20. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a következő lipopoliaminok egyikét tartalmazza: dioktadecil-amido-glicil-spermin (DOGS), palmitoil-foszfatidil-etanol-amin 5-karboxispermil-amidja (DPPES), {2,5-bisz[(3-amino-propil)amino]-pentil}-(dioktadecil-karbamoil-metoxi)-acetát, {l,3-bisz[(3-amino-propil)-amino]-2-propil}-2(dioktadecil-karbamoil-metoxi)-acetát, {H2N(CH2)3}2N(CH2)4N{(CH2)3NH2}(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)17-CH3]2, H2N(CH2)3NH(CH2)4NH(CH2)3NHCH2COGlyN[(CH2)18]2 vagy H2N(CH2)3NH(CH^NHÍCH^NHCH^OArgNKCH^jg],
- 24. Az 1-15. vagy 20-23. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a transzfekciós hatóanyag dioktadecil-amido-glicil-spermin (DOGS).
- 25. Az 1-24. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a nukleinsav egy dezoxiribonukleinsav.
- 26. Az 1-24. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a nukleinsav ribonukleinsav.
- 27. A 25. vagy 26. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a nukleinsav kémiailag módosított.
- 28. A 25-27. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a nukleinsav antiszensz.
- 29. A 25-27. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a nukleinsav egy terápiás gént tartalmaz.
- 30. Az 1-29. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy egy vagy több neutrális lipidet tartalmaz.
- 31. A 30. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a neutrális lipid egy szintetikus vagy természetes, zwitterionos vagy fiziológiás körülmények között ionos töltéstől mentes lipid.HU 223 263 Bl
- 32. A 30. vagy 31. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció, azzal jellemezve, hogy a neutrális lipid az alábbiak egyike: dioleoil-foszfatidil-etanol-amin (DOPE), oleoil-palmitoil-foszfatidil-etanol-amin (POPÉ), disztearoil-, -palmitoil-, -mirisztoil-foszfatidil-etanol- 5 aminok vagy ezek 1,3-N-metil-származékai, foszfatidilglicerinek, diacil-glicerinek, glikozil-diacil-glicerinek, cerebrozidok, úgymint galaktocerebrozidok, szfingolipidek, úgymint szfingomielinek vagy aszialo-gangliozidok, úgymint aszialoGMl vagy aszialoGM2.
- 33. Az 1 -32. igénypontok bármelyike szerinti gyógyászati kompozíció alkalmazása in vitro és/vagy ex vivő nukleinsavtranszferre.
- 34. Egy (KTPKAKKP) és/vagy (ATPAKKAA) peptidegységeket tartalmazó vegyület, melyben a peptid- 15 egységek száma 2-10, alkalmazása nukleinsav transzferére alkalmas 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció előállítására.
- 35. Egy alábbi oligopeptid (ATPAKKAA)2(COOH), (KTPKKAKKP)2(COOH), ATPKKSAKKTPKKAKKP(COOH), KKAKSPKKAKAAKPKKAPKSPAKAKA(COOH), SRSRYYRQRQRSRRRRRR(COOH) vagy 10 RRRLHRIHRRQHRSCRRRKRR(COOH) alkalmazása egy célelemhez kapcsolódó vagy nem kapcsolódó, legalább egy nukleinsav in vitro, ex vivő és/vagy in vivő transzferére szolgáló 1. igénypont szerinti gyógyászati kompozíció előállítására.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9501865A FR2730637B1 (fr) | 1995-02-17 | 1995-02-17 | Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations |
PCT/FR1996/000248 WO1996025508A1 (fr) | 1995-02-17 | 1996-02-15 | Compositions contenant des acides nucleiques, preparation et utilisation |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUP9801207A2 HUP9801207A2 (hu) | 1998-08-28 |
HUP9801207A3 HUP9801207A3 (en) | 2000-12-28 |
HU223263B1 true HU223263B1 (hu) | 2004-04-28 |
Family
ID=9476267
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU9801207A HU223263B1 (hu) | 1995-02-17 | 1996-02-15 | Nukleinsavak transzfekciójára alkalmas gyógyászati kompozíciók és alkalmazásuk |
Country Status (18)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5945400A (hu) |
EP (1) | EP0809705B1 (hu) |
JP (1) | JPH11500431A (hu) |
KR (1) | KR19980702200A (hu) |
AT (1) | ATE313642T1 (hu) |
AU (1) | AU706643B2 (hu) |
BR (1) | BR9607383A (hu) |
CA (1) | CA2211162A1 (hu) |
CZ (1) | CZ293269B6 (hu) |
DE (1) | DE69635609T2 (hu) |
FI (1) | FI973363A0 (hu) |
FR (1) | FR2730637B1 (hu) |
HU (1) | HU223263B1 (hu) |
IL (1) | IL117144A0 (hu) |
NO (1) | NO973745D0 (hu) |
SK (1) | SK281543B6 (hu) |
WO (1) | WO1996025508A1 (hu) |
ZA (1) | ZA961255B (hu) |
Families Citing this family (162)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6383814B1 (en) | 1994-12-09 | 2002-05-07 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphiles for intracellular delivery of therapeutic molecules |
US5948767A (en) * | 1994-12-09 | 1999-09-07 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile/DNA complexes |
US5939401A (en) * | 1994-12-09 | 1999-08-17 | Genzyme Corporation | Cationic amphiphile compositions for intracellular delivery of therapeutic molecules |
US6331524B1 (en) | 1994-12-09 | 2001-12-18 | Genzyme Corporation | Organ-specific targeting of cationic amphiphile / DNA complexes for gene therapy |
FR2730637B1 (fr) | 1995-02-17 | 1997-03-28 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations |
WO1996041606A2 (en) * | 1995-06-08 | 1996-12-27 | Therexsys Limited | Improved pharmaceutical compositions for gene therapy |
FR2741066B1 (fr) | 1995-11-14 | 1997-12-12 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux agents de transfection et leurs applications pharmaceutiques |
FR2756491B1 (fr) * | 1996-11-29 | 1999-01-08 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition transfectante utile en therapie genique associan t a un virus recombinant incorporant un acide nucleique exog ene, un agent de transfection non viral et non plasmidique |
FR2750704B1 (fr) | 1996-07-04 | 1998-09-25 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procede de production d'adn therapeutique |
CN1181422A (zh) * | 1996-10-31 | 1998-05-13 | 上海市肿瘤研究所 | 与生长因子受体结合的多肽所构建的基因转移载体 |
US7008776B1 (en) | 1996-12-06 | 2006-03-07 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Compositions and methods for effecting the levels of high density lipoprotein (HDL) cholesterol and apolipoprotein AI very low density lipoprotein (VLDL) cholesterol and low density lipoprotein (LDL) cholesterol |
CN100497610C (zh) | 1996-12-06 | 2009-06-10 | 阿温蒂斯药物公司 | 人脂酶样基因编码的多肽及利用它的组合物和方法 |
US6884430B1 (en) | 1997-02-10 | 2005-04-26 | Aventis Pharma S.A. | Formulation of stabilized cationic transfection agent(s) /nucleic acid particles |
HUP0002922A3 (en) | 1997-04-28 | 2003-03-28 | Aventis Pharma Sa | Adenovirus-mediated intratumoral delivery of an angiogenesis antagonist for the treatment of tumors |
FR2763943B1 (fr) * | 1997-05-28 | 1999-07-09 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composes, leur preparation et leur utilisation pour le transfert d'acides nucleiques dans les cellules |
US6875606B1 (en) | 1997-10-23 | 2005-04-05 | The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs | Human α-7 nicotinic receptor promoter |
WO1999038821A2 (fr) | 1998-01-30 | 1999-08-05 | Aventis Pharma S.A. | Composes transfectants sensibles aux conditions reductrices, compositions pharmaceutiques les contenant, et leurs applications |
FR2774394B1 (fr) * | 1998-01-30 | 2002-04-26 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composes transfectants sensibles aux conditions reductrices, compositions pharmaceutiques les contenant, et leurs applications |
US6225456B1 (en) | 1998-05-07 | 2001-05-01 | University Technololy Corporation | Ras suppressor SUR-5 |
US6506889B1 (en) | 1998-05-19 | 2003-01-14 | University Technology Corporation | Ras suppressor SUR-8 and related compositions and methods |
FR2786700B1 (fr) * | 1998-12-03 | 2002-12-06 | Aventis Pharma Sa | Nouveaux agents de transfert d'acides nucleiques, compositions les contenant et leurs utilisations |
WO2000032803A2 (fr) * | 1998-12-03 | 2000-06-08 | Aventis Pharma S.A. | Nouveaux agents de transfert d'acides nucleiques, compositions les contenant et leurs utilisations |
US6441156B1 (en) * | 1998-12-30 | 2002-08-27 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Calcium channel compositions and methods of use thereof |
JP4799736B2 (ja) * | 1999-02-22 | 2011-10-26 | ジョージタウン・ユニバーシティ | 全身性遺伝子送達のための抗体フラグメント標的化イムノリポソーム |
US7780882B2 (en) * | 1999-02-22 | 2010-08-24 | Georgetown University | Simplified and improved method for preparing an antibody or an antibody fragment targeted immunoliposome for systemic administration of a therapeutic or diagnostic agent |
US9034329B2 (en) * | 1999-02-22 | 2015-05-19 | Georgetown University | Preparation of antibody or an antibody fragment-targeted immunoliposomes for systemic administration of therapeutic or diagnostic agents and uses thereof |
GB9918670D0 (en) | 1999-08-06 | 1999-10-13 | Celltech Therapeutics Ltd | Biological product |
EP1083232B1 (en) * | 1999-09-09 | 2005-02-23 | CureVac GmbH | Transfer of mRNA using polycationic compounds |
CA2390716A1 (en) * | 1999-09-24 | 2001-04-05 | Alan D. King | Process for enhancing electric field-mediated delivery of biological materials into cells |
CA2402530C (en) | 2000-03-13 | 2014-01-14 | Cornell Research Foundation, Inc. | Blocking leukocyte emigration and inflammation by interfering with cd99 |
US20040033600A1 (en) | 2001-03-21 | 2004-02-19 | Palli Subba Reddy | Ecdysone receptor-based inducible gene expression system |
US20030212022A1 (en) * | 2001-03-23 | 2003-11-13 | Jean-Marie Vogel | Compositions and methods for gene therapy |
GB0018307D0 (en) | 2000-07-26 | 2000-09-13 | Aventis Pharm Prod Inc | Polypeptides |
IL151909A0 (en) * | 2000-04-12 | 2003-04-10 | Implyx Ltd | Peptide conjugates for drug delivery |
AU5345901A (en) | 2000-04-13 | 2001-10-30 | Univ Rockefeller | Enhancement of antibody-mediated immune responses |
US20040142474A1 (en) * | 2000-09-14 | 2004-07-22 | Expression Genetics, Inc. | Novel cationic lipopolymer as a biocompatible gene delivery agent |
US6696038B1 (en) | 2000-09-14 | 2004-02-24 | Expression Genetics, Inc. | Cationic lipopolymer as biocompatible gene delivery agent |
FR2814370B1 (fr) * | 2000-09-22 | 2004-08-20 | Centre Nat Rech Scient | Utilisation d'un complexe acide nucleique/pei pour le ciblage de cellules souches du cerveau |
US8105825B2 (en) | 2000-10-03 | 2012-01-31 | Intrexon Corporation | Multiple inducible gene regulation system |
US7060442B2 (en) | 2000-10-30 | 2006-06-13 | Regents Of The University Of Michigan | Modulators on Nod2 signaling |
CN100422210C (zh) | 2000-12-28 | 2008-10-01 | Wyeth公司 | 来自肺炎链球菌的重组防护蛋白质 |
US20030125239A1 (en) * | 2001-02-02 | 2003-07-03 | Andrea Crisanti | Compositions for drug delivery |
WO2002063026A1 (en) * | 2001-02-08 | 2002-08-15 | Geneporter, Inc. | Complexes and components thereof for introducing polynucleotides into eukaryotic cells |
PT1456346E (pt) | 2001-02-20 | 2012-05-02 | Intrexon Corp | Novo sistema de expressão de genes induzido baseado no recetor de ecdisona / recetor x retinoide invertebrado |
JP4994563B2 (ja) | 2001-02-20 | 2012-08-08 | イントレキソン コーポレーション | 新規置換突然変異体受容体および核受容体−ベースの誘導性遺伝子発現システムにおけるその使用 |
DK1572862T3 (da) | 2001-02-20 | 2012-11-26 | Intrexon Corp | Kimære, retinoide x-receptorer og deres anvendelse i et hidtil ukendt ecdysonrecepttorbaseret inducerbart genekspressionssystem |
CA2445796C (en) | 2001-02-20 | 2014-09-16 | Rheogene, Inc. | Novel substitution mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system |
EP1499349B1 (en) | 2001-03-02 | 2009-11-18 | The Rockefeller University | Recombinant hybrid allergen constructs with reduced allergenicity that retain immunogenicity of the natural allergen |
US8216585B2 (en) * | 2001-05-25 | 2012-07-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Targeted particles and methods of using the same |
US20040234586A1 (en) * | 2001-06-11 | 2004-11-25 | Sylvain Meloche | Compositions and methods for enhancing nucleic acid transfer into cells |
FR2829136B1 (fr) | 2001-08-29 | 2006-11-17 | Aventis Pharma Sa | Derives lipidiques d'aminoglycosides |
CA2459827C (en) | 2001-09-26 | 2013-09-03 | Subba Reddy Palli | Leafhopper ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof |
US7919269B2 (en) | 2001-09-26 | 2011-04-05 | Intrexon Corporation | Whitefly ecdysone receptor nucleic acids, polypeptides, and uses thereof |
US20040023910A1 (en) * | 2001-09-28 | 2004-02-05 | Zhiming Zhang | Use of cyr61 in the treatment and diagnosis of human uterine leiomyomas |
MX339524B (es) | 2001-10-11 | 2016-05-30 | Wyeth Corp | Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica. |
EP1479985B1 (en) | 2002-01-17 | 2017-06-14 | Alfa Laval Corporate AB | Submerged evaporator comprising a plate heat exchanger and a cylindric casing where the plate heat exchanger is arranged |
US7037520B2 (en) * | 2002-03-22 | 2006-05-02 | Baylor College Of Medicine | Reversible masking of liposomal complexes for targeted delivery |
US7375093B2 (en) | 2002-07-05 | 2008-05-20 | Intrexon Corporation | Ketone ligands for modulating the expression of exogenous genes via an ecdysone receptor complex |
US7785608B2 (en) | 2002-08-30 | 2010-08-31 | Wyeth Holdings Corporation | Immunogenic compositions for the prevention and treatment of meningococcal disease |
EP1545593A1 (en) | 2002-09-27 | 2005-06-29 | PowderJect Research Limited | Nucleic acid coated particles |
JP2006517790A (ja) * | 2003-01-09 | 2006-08-03 | インヴィトロジェン コーポレーション | ポリペプチド−核酸複合体の細胞の送達および活性化 |
US7304161B2 (en) | 2003-02-10 | 2007-12-04 | Intrexon Corporation | Diaclhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes in mammalian systems via an ecdysone receptor complex |
US7456315B2 (en) | 2003-02-28 | 2008-11-25 | Intrexon Corporation | Bioavailable diacylhydrazine ligands for modulating the expression of exogenous genes via an ecdysone receptor complex |
US20070065409A1 (en) * | 2003-07-15 | 2007-03-22 | Behrooz Sharifi | Use of pleiotrophin in the diagnosis, treatment and prevention of disease |
US8507277B2 (en) | 2003-10-24 | 2013-08-13 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides |
US20090208478A1 (en) * | 2003-10-24 | 2009-08-20 | Gencia Corporation | Transducible polypeptides for modifying metabolism |
CA2543257C (en) | 2003-10-24 | 2013-12-31 | Gencia Corporation | Methods and compositions for delivering polynucleotides |
US8062891B2 (en) | 2003-10-24 | 2011-11-22 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides to plants |
US8133733B2 (en) | 2003-10-24 | 2012-03-13 | Gencia Corporation | Nonviral vectors for delivering polynucleotides to target tissues |
US20090123468A1 (en) | 2003-10-24 | 2009-05-14 | Gencia Corporation | Transducible polypeptides for modifying metabolism |
US7432057B2 (en) | 2004-01-30 | 2008-10-07 | Michigan State University | Genetic test for PSE-susceptible turkeys |
EP2270513A3 (en) | 2004-04-20 | 2011-04-06 | Galapagos N.V. | Methods, compositions and compound assays for inhibiting amyloid-beta protein production |
EP1747462A2 (en) | 2004-04-27 | 2007-01-31 | Galapagos N.V. | Methods, agents, and compound screening assays for inducing differentiation of undifferentiated mammalian cells into osteoblasts |
US7935510B2 (en) | 2004-04-30 | 2011-05-03 | Intrexon Corporation | Mutant receptors and their use in a nuclear receptor-based inducible gene expression system |
EP2270160A1 (en) | 2004-06-14 | 2011-01-05 | Galapagos N.V. | Methods for identification, and compounds useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases |
WO2006002161A2 (en) | 2004-06-18 | 2006-01-05 | Duke University | Modulators of odorant receptors |
US20070004658A1 (en) | 2004-06-21 | 2007-01-04 | Nick Vandeghinste | Method and means for treatment of osteoarthritis |
US7604798B2 (en) | 2004-07-15 | 2009-10-20 | Northwestern University | Methods and compositions for importing nucleic acids into cell nuclei |
WO2006020071A2 (en) | 2004-07-16 | 2006-02-23 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Vaccines against aids comprising cmv/r-nucleic acid constructs |
US7485468B2 (en) | 2004-10-15 | 2009-02-03 | Galapagos Bv | Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of joint degenerative and inflammatory diseases |
US7964571B2 (en) | 2004-12-09 | 2011-06-21 | Egen, Inc. | Combination of immuno gene therapy and chemotherapy for treatment of cancer and hyperproliferative diseases |
US9034650B2 (en) | 2005-02-02 | 2015-05-19 | Intrexon Corporation | Site-specific serine recombinases and methods of their use |
AU2006259415B2 (en) * | 2005-06-15 | 2012-08-30 | Massachusetts Institute Of Technology | Amine-containing lipids and uses thereof |
US8088382B2 (en) | 2005-07-05 | 2012-01-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Methods of inhibiting transendothelial migration of neutrophils and monocytes with anti-CD99L2 antibodies |
US7666584B2 (en) | 2005-09-01 | 2010-02-23 | Philadelphia Health & Education Coporation | Identification of a pin specific gene and protein (PIN-1) useful as a diagnostic treatment for prostate cancer |
KR20140135267A (ko) * | 2006-05-15 | 2014-11-25 | 조지타운 유니버시티 | 치료제 또는 진단제의 전신 투여를 위한 항체- 또는 항체 단편-표적화 면역리포좀 제제 및 그의 용도 |
KR100857389B1 (ko) | 2006-06-30 | 2008-09-11 | (주)아모레퍼시픽 | Ap-grr 펩티드 또는 ap-grr 펩티드를 포함하는펩티드사슬 및 이를 포함하는 약물전달담체 |
MX2009000976A (es) | 2006-07-28 | 2009-03-09 | Sanofi Aventis | Composicion y metodo para el tratamiento de tumores. |
JP5407862B2 (ja) * | 2006-10-04 | 2014-02-05 | サントル・ナシオナル・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・シアンティフィーク(セーエヌエールエス) | siRNAおよび脂質性4,5−二置換2−デオキシストレプタミン環アミノグリコシド誘導体を含む組成物ならびにその用途 |
AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
US8298781B2 (en) | 2007-05-08 | 2012-10-30 | Duke University | Compositions and methods for characterizing and regulating olfactory sensation |
MX2009012834A (es) | 2007-05-29 | 2010-05-17 | Intrexon Corp | Ligandos quirales de diacilhidrazina para modular la expresion de genes exogenos por medio de un complejo receptor de ecdisona. |
EP2162747B1 (en) | 2007-06-20 | 2014-04-30 | Galapagos N.V. | Molecular targets and methods to identify compounds for treating bone and joint degenerative diseases |
US20090069266A1 (en) | 2007-06-27 | 2009-03-12 | Northwestern University | Methods and compositions for nucleic acid transfer into cells |
EP2175835B1 (en) * | 2007-07-09 | 2016-04-20 | Georgetown University | Methods for generating immune response using cationic-liposome-mediated nucleic acid delivery |
US9144546B2 (en) | 2007-08-06 | 2015-09-29 | Clsn Laboratories, Inc. | Nucleic acid-lipopolymer compositions |
EP2185730A4 (en) | 2007-08-23 | 2010-10-27 | Intrexon Corp | METHOD AND COMPOSITIONS FOR SICKNESS DIAGNOSIS |
KR20100065190A (ko) * | 2007-09-14 | 2010-06-15 | 닛토덴코 가부시키가이샤 | 약물 담체 |
KR20100068435A (ko) * | 2007-09-17 | 2010-06-23 | 롬 앤드 하아스 컴패니 | 식물의 생리적 반응을 변형시키기 위한 조성물 및 방법 |
NZ584848A (en) | 2007-09-28 | 2012-09-28 | Intrexon Corp | Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof |
EP2042193A1 (en) | 2007-09-28 | 2009-04-01 | Biomay AG | RNA Vaccines |
US20090123441A1 (en) | 2007-10-08 | 2009-05-14 | Intrexon Corporation | Engineered Dendritic Cells and Uses for the Treatment of Cancer |
FR2928373B1 (fr) | 2008-03-05 | 2010-12-31 | Centre Nat Rech Scient | Polymere derive de la polyethylenimine lineaire pour le transfert de gene. |
CA2736425A1 (en) | 2008-09-11 | 2010-03-18 | Galapagos Nv | Method for identifying compounds useful for increasing the functional activity and cell surface expression of cf-associated mutant cystic fibrosis transmembrane conductance regulator |
KR20110081282A (ko) | 2008-11-05 | 2011-07-13 | 와이어쓰 엘엘씨 | 베타―용혈성 연쇄구균 (bhs) 질환의 예방을 위한 다성분 면역원성 조성물 |
KR101734955B1 (ko) | 2008-11-07 | 2017-05-12 | 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 | 아미노알콜 리피도이드 및 그의 용도 |
WO2010096561A1 (en) | 2009-02-18 | 2010-08-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Synthetic hiv/siv gag proteins and uses thereof |
JP2012518181A (ja) | 2009-02-19 | 2012-08-09 | ガラパゴス・ナムローゼ・フェンノートシャップ | 炎症を包含する疾患の診断及び治療に有用な同定方法及び化合物 |
EP2398479A2 (en) | 2009-02-19 | 2011-12-28 | Galapagos N.V. | Methods for identifying and compounds useful for the diagnosis and treatment of diseases involving inflammation |
EP2398481A2 (en) | 2009-02-19 | 2011-12-28 | Galapagos N.V. | Methods for identifying and compounds useful for the diagnosis and treatment of diseases involving inflammation |
WO2010112569A1 (en) | 2009-03-31 | 2010-10-07 | Robert Zimmermann | Modulation of adipose triglyceride lipase for prevention and treatment of cachexia, loss of weight and muscle atrophy and methods of screening therefor |
EP2414830A2 (en) | 2009-03-31 | 2012-02-08 | Robert Zimmermann | Modulation of adipose triglyceride lipase for prevention and treatment of cachexia, loss of weight and muscle atrophy and methods of screening therefor |
WO2010115841A1 (en) | 2009-04-01 | 2010-10-14 | Galapagos Nv | Methods and means for treatment of osteoarthritis |
JP5822822B2 (ja) | 2009-04-17 | 2015-11-24 | ニューヨーク ユニバーシティ | Tnfファミリー受容体を標的とし、tnf作用を拮抗するペプチド、その組成物、方法および使用 |
WO2011015573A1 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-10 | Galapagos Nv | Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of neurodegenerative diseases |
WO2011015572A1 (en) | 2009-08-03 | 2011-02-10 | Galapagos Nv | Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of neurodegenerative diseases |
US9186370B2 (en) | 2010-03-19 | 2015-11-17 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
KR102049161B1 (ko) | 2010-03-23 | 2019-11-26 | 인트렉손 코포레이션 | 치료적 단백질을 조건부로 발현하는 벡터,상기 벡터를 포함하는 숙주 세포 및 이의 용도 |
CA2808975C (en) | 2010-08-23 | 2018-10-30 | Wyeth Llc | Stable formulations of neisseria meningitidis rlp2086 antigens |
JP5976652B2 (ja) | 2010-09-10 | 2016-08-24 | ワイス・エルエルシー | 髄膜炎菌orf2086抗原の非脂質化変異体 |
EP2649178B8 (en) | 2010-12-09 | 2017-08-30 | Institut Pasteur | Mgmt-based method for obtaining high yield of recombinant protein expression |
EP2492279A1 (en) | 2011-02-25 | 2012-08-29 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Rapid immunogen selection method using lentiviral display |
JP6189754B2 (ja) | 2011-03-04 | 2017-08-30 | イントレキソン コーポレーション | タンパク質を条件的に発現するベクター |
WO2012135025A2 (en) | 2011-03-28 | 2012-10-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Conjugated lipomers and uses thereof |
US9458456B2 (en) | 2011-04-01 | 2016-10-04 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer |
EP2546358A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-16 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Methods and reagents for efficient control of HIV progression |
PT2760463T (pt) | 2011-09-20 | 2019-02-27 | Univ North Carolina Chapel Hill | Regulação de canais de sódio por proteínas plunc |
WO2013053765A1 (en) | 2011-10-11 | 2013-04-18 | Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. | A non-human animal model of mucosa-associated lymphoid tissue (malt) lymphoma |
JP6151707B2 (ja) | 2011-10-27 | 2017-06-21 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 薬物内包微小球の形成が可能なn−末端で官能基化されたアミノ酸誘導体 |
EP2788478B1 (en) | 2011-12-09 | 2017-08-23 | Institut Pasteur | Multiplex immuno screening assay |
WO2013103401A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | University Of South Alabama | Methods and compositions for the treatment of cancer |
CN104334187B (zh) | 2012-03-09 | 2017-04-05 | 辉瑞公司 | 脑膜炎双球菌组合物及其方法 |
SA115360586B1 (ar) | 2012-03-09 | 2017-04-12 | فايزر انك | تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها |
EP2698377A1 (en) | 2012-08-17 | 2014-02-19 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Enhanced rapid immunogen selection method for HIV gp120 variants |
JP6446377B2 (ja) | 2013-03-08 | 2018-12-26 | ファイザー・インク | 免疫原性融合ポリペプチド |
WO2014139885A2 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Galapagos Nv | Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of diseases associated with epithelial mesenchymal transition |
US9952202B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-04-24 | Galapagos Nv | Methods of identifying compounds for the treatment of fibrosis by using S1PR5 |
EP2972322B1 (en) | 2013-03-14 | 2019-03-06 | Galapagos NV | Molecular targets and compounds, and methods to identify the same, useful in the treatment of fibrotic diseases |
AU2014227571B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-02 | Intrexon Corporation | Boron-containing diacylhydrazines |
US20160130585A1 (en) | 2013-05-28 | 2016-05-12 | The Johns Hopkins University | Aptamers for the treatment of sickle cell disease |
WO2015033251A2 (en) | 2013-09-08 | 2015-03-12 | Pfizer Inc. | Neisseria meningitidis compositions and methods thereof |
KR101605421B1 (ko) | 2014-03-05 | 2016-03-23 | 국립암센터 | B 세포 림프종 세포를 특이적으로 인지하는 단일클론항체 및 이의 용도 |
WO2016004202A1 (en) | 2014-07-02 | 2016-01-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Polyamine-fatty acid derived lipidoids and uses thereof |
TW201625650A (zh) | 2014-09-17 | 2016-07-16 | 英翠克頌公司 | 含硼之二醯基肼化合物 |
US10308705B2 (en) | 2015-02-06 | 2019-06-04 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Optimized human clotting factor VIII gene expression cassettes and their use |
CN107249626A (zh) | 2015-02-19 | 2017-10-13 | 辉瑞大药厂 | 脑膜炎奈瑟球菌组合物及其方法 |
TW201710503A (zh) | 2015-06-12 | 2017-03-16 | 長庚醫療財團法人林口長庚紀念醫院 | 新穎多核苷酸、載體、醫藥組成物以及其用途 |
AU2016278970B2 (en) | 2015-06-19 | 2020-10-29 | Massachusetts Institute Of Technology | Alkenyl substituted 2,5-piperazinediones and their use in compositions for delivering an agent to a subject or cell |
AU2016328279A1 (en) | 2015-09-24 | 2018-05-10 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions for reducing metastases |
EP3347373A1 (en) | 2015-10-10 | 2018-07-18 | Intrexon Corporation | Improved therapeutic control of proteolytically sensitive, destabilized forms of interleukin-12 |
AU2017222450A1 (en) | 2016-02-22 | 2018-09-27 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Peptide inhibitors of calcium channels |
BR112019009446A2 (pt) | 2016-11-09 | 2019-07-30 | Intrexon Corp | construtos de expressão da frataxina |
WO2018096457A1 (en) | 2016-11-22 | 2018-05-31 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Nucleic acid condensing peptide, nucleic acid condensing peptide set, nucleic acid delivery carrier, nucleic acid delivery method, cell production method, cell detection method and kit |
KR102567845B1 (ko) | 2017-01-31 | 2023-08-17 | 화이자 인코포레이티드 | 네이세리아 메닌기티디스 조성물 및 그의 방법 |
US20200393446A1 (en) | 2017-12-08 | 2020-12-17 | Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) | Bioluminescent screening test for detecting cell cytolysis |
EP3539975A1 (en) | 2018-03-15 | 2019-09-18 | Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron | Micropeptides and uses thereof |
CA3109209A1 (en) | 2018-08-10 | 2020-02-13 | Eutilex Co., Ltd. | Chimeric antigen receptor that binds hla-dr and car-t cell |
AU2020236937B2 (en) | 2019-03-08 | 2023-06-15 | Obsidian Therapeutics, Inc. | CD40L compositions and methods for tunable regulation |
US20210069242A1 (en) | 2019-04-18 | 2021-03-11 | Dmitry Dmitrievich Genkin | Reprogramming of polymorphonuclear leukocytes |
MX2022008415A (es) | 2020-01-08 | 2022-08-08 | Obsidian Therapeutics Inc | Composiciones y metodos para la regulacion ajustable de la transcripcion. |
EP3885440A1 (en) | 2020-03-26 | 2021-09-29 | Splicebio, S.L. | Split inteins and their uses |
WO2023242436A1 (en) | 2022-06-17 | 2023-12-21 | Danmarks Tekniske Universitet | Allergy vaccines based on consensus allergens |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3486053T3 (de) | 1983-10-20 | 2004-01-08 | The Research Foundation Of State University Of New York | Regulierung von Gen-Expression durch Translationshemmung unter Verwendung von m-RNS hinderndem Komplementär-RNS. |
FR2573436B1 (fr) | 1984-11-20 | 1989-02-17 | Pasteur Institut | Adn recombinant comportant une sequence nucleotidique codant pour un polypeptide determine sous le controle d'un promoteur d'adenovirus, vecteurs contenant cet adn recombinant, cellules eucaryotes transformees par cet adn recombinant, produits d'excretion de ces cellules transformees et leurs applications, notamment a la constitution de vaccins |
FR2602790B1 (fr) | 1986-08-13 | 1990-06-01 | Transgene Sa | Expression d'un antigene specifique de tumeur par un virus vecteur recombinant et utilisation de celui-ci pour le traitement preventif ou curatif de la tumeur correspondante |
EP0640688A1 (en) | 1987-12-15 | 1995-03-01 | Gene Shears Pty. Limited | Ribozymes |
US5354844A (en) * | 1989-03-16 | 1994-10-11 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Protein-polycation conjugates |
EP0465529B1 (en) | 1989-03-21 | 1998-04-29 | Vical, Inc. | Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate |
FR2645866B1 (fr) | 1989-04-17 | 1991-07-05 | Centre Nat Rech Scient | Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi |
FR2646161B1 (fr) | 1989-04-17 | 1991-07-05 | Centre Nat Rech Scient | Nouvelles lipopolyamines, leur preparation et leur emploi |
US5286634A (en) | 1989-09-28 | 1994-02-15 | Stadler Joan K | Synergistic method for host cell transformation |
ATE126442T1 (de) * | 1990-05-18 | 1995-09-15 | Boehringer Ingelheim Int | Neue protein-polykation-konjugate. |
FR2681786A1 (fr) | 1991-09-27 | 1993-04-02 | Centre Nat Rech Scient | Vecteurs recombinants d'origine virale, leur procede d'obtention et leur utilisation pour l'expression de polypeptides dans des cellules musculaires. |
FR2688514A1 (fr) | 1992-03-16 | 1993-09-17 | Centre Nat Rech Scient | Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant. |
CA2133323C (en) * | 1992-04-03 | 2010-10-26 | Francis C. Szoka, Jr. | Self-assembling polynucleotide delivery system |
US5334761A (en) | 1992-08-28 | 1994-08-02 | Life Technologies, Inc. | Cationic lipids |
US5631237A (en) | 1992-12-22 | 1997-05-20 | Dzau; Victor J. | Method for producing in vivo delivery of therapeutic agents via liposomes |
FR2704234B1 (fr) | 1993-04-22 | 1995-07-21 | Centre Nat Rech Scient | Virus recombinants, preparation et utilisation en therapie genique. |
SG54115A1 (en) | 1993-04-27 | 1998-11-16 | Gerber Scient Products Inc | Thermal printing apparatus with improved power supply |
FR2704556B1 (fr) | 1993-04-30 | 1995-07-13 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Virus recombinants et leur utilisation en thérapie génique. |
FR2722506B1 (fr) | 1994-07-13 | 1996-08-14 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition contenant des acides nucleiques, preparation et utilisations |
FR2727679B1 (fr) | 1994-12-05 | 1997-01-03 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux agents de transfection et leurs applications pharmaceutiques |
FR2730637B1 (fr) | 1995-02-17 | 1997-03-28 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition pharmaceutique contenant des acides nucleiques, et ses utilisations |
-
1995
- 1995-02-17 FR FR9501865A patent/FR2730637B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-02-15 KR KR1019970705595A patent/KR19980702200A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-02-15 EP EP96904146A patent/EP0809705B1/fr not_active Revoked
- 1996-02-15 JP JP8524719A patent/JPH11500431A/ja not_active Ceased
- 1996-02-15 SK SK1118-97A patent/SK281543B6/sk unknown
- 1996-02-15 CZ CZ19972592A patent/CZ293269B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-02-15 DE DE69635609T patent/DE69635609T2/de not_active Revoked
- 1996-02-15 HU HU9801207A patent/HU223263B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-02-15 US US08/894,339 patent/US5945400A/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-02-15 CA CA002211162A patent/CA2211162A1/fr not_active Abandoned
- 1996-02-15 IL IL11714496A patent/IL117144A0/xx unknown
- 1996-02-15 WO PCT/FR1996/000248 patent/WO1996025508A1/fr not_active Application Discontinuation
- 1996-02-15 AT AT96904146T patent/ATE313642T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-02-15 AU AU48353/96A patent/AU706643B2/en not_active Ceased
- 1996-02-15 BR BR9607383A patent/BR9607383A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-02-17 ZA ZA961255A patent/ZA961255B/xx unknown
-
1997
- 1997-08-14 NO NO973745A patent/NO973745D0/no not_active Application Discontinuation
- 1997-08-15 FI FI973363A patent/FI973363A0/fi not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-05-06 US US09/306,044 patent/US6200956B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX9706016A (es) | 1997-11-29 |
SK111897A3 (en) | 1998-02-04 |
WO1996025508A1 (fr) | 1996-08-22 |
HUP9801207A3 (en) | 2000-12-28 |
KR19980702200A (ko) | 1998-07-15 |
CA2211162A1 (fr) | 1996-08-22 |
CZ259297A3 (en) | 1997-11-12 |
BR9607383A (pt) | 1997-11-25 |
NO973745L (no) | 1997-08-14 |
CZ293269B6 (cs) | 2004-03-17 |
FI973363A (fi) | 1997-08-15 |
SK281543B6 (sk) | 2001-04-09 |
IL117144A0 (en) | 1996-06-18 |
AU706643B2 (en) | 1999-06-17 |
EP0809705A1 (fr) | 1997-12-03 |
US5945400A (en) | 1999-08-31 |
FI973363A0 (fi) | 1997-08-15 |
DE69635609D1 (de) | 2006-01-26 |
ATE313642T1 (de) | 2006-01-15 |
ZA961255B (en) | 1996-08-27 |
HUP9801207A2 (hu) | 1998-08-28 |
FR2730637B1 (fr) | 1997-03-28 |
DE69635609T2 (de) | 2006-09-14 |
JPH11500431A (ja) | 1999-01-12 |
EP0809705B1 (fr) | 2005-12-21 |
FR2730637A1 (fr) | 1996-08-23 |
US6200956B1 (en) | 2001-03-13 |
NO973745D0 (no) | 1997-08-14 |
AU4835396A (en) | 1996-09-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU223263B1 (hu) | Nukleinsavak transzfekciójára alkalmas gyógyászati kompozíciók és alkalmazásuk | |
US6172048B1 (en) | Composition containing nucleic acids, preparation and uses | |
US8771728B2 (en) | Stable lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production | |
AU722700B2 (en) | Lipophilic peptides for macromolecule delivery | |
US5856435A (en) | Nucleic acid-containing composition, its preparation and use | |
US7214384B2 (en) | Lipid-conjugated polyamide compounds | |
US20030212031A1 (en) | Stable lipid-comprising durg delivery complexesand methods for their production | |
JPH09500136A (ja) | 樹枝状体ポリ陽イオンを含む自己集合性ポリヌクレオチド配送系 | |
JPH10502918A (ja) | 核酸を含有する組成物、その製造および使用 | |
US6372720B1 (en) | Liposome fusion and delivery vehicle | |
US7297759B2 (en) | Peptides for increasing transfection efficiency | |
CA2406233A1 (en) | Compositions for drug delivery | |
AU720697B2 (en) | Pharmaceutical composition which is useful for the transfection of nucleic acids, and uses thereof | |
MXPA97006016A (en) | Composition containing nucleic acids, preparation and use | |
AU737314B2 (en) | Nucleic acid containing composition, preparation and uses of same | |
MXPA98001920A (en) | Pharmaceutical composition useful for the transfection of nucleic acids and its u |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20040227 |
|
HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |