HU192741B - Process for producing new neplanocin antibiotics - Google Patents
Process for producing new neplanocin antibiotics Download PDFInfo
- Publication number
- HU192741B HU192741B HU79TO1102A HUTO001102A HU192741B HU 192741 B HU192741 B HU 192741B HU 79TO1102 A HU79TO1102 A HU 79TO1102A HU TO001102 A HUTO001102 A HU TO001102A HU 192741 B HU192741 B HU 192741B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- neplanocin
- physiologically acceptable
- antibiotic
- formula
- acceptable salt
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás új neplanocin antibiotikumok előállítására. Az új antibiotikumok növények patogén mikroorganizmusai növekedését gátolják, valamint daganatellenes hatásuk van. Részletesebben kifejtve, a találmány tárgya olyan eljárás az új neplanocin antibiotikumok előállítására, amely magába foglalja a neplanocinokat termelő, Actinomycetales rendbe tartozó Ampullariella A 11 079 mikroorganizmus törzs (deponálási száma PERM-P 4494) táptalajon tenyésztését és az új neplanocin antibiotikumok elkülönítését.
Adenin-szerkezetű antibiotikumokat ismertet a 4 138 562 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás.
A találmány szerinti neplanocin antibiotikumok szerkezete az (I) általános képlettel szemléltethető - ebben a képletben X hidroxil- vagy aminocsoport és Z (a) vagy (b) általános képletű csoport, és ezekben a csoportokban Y oxigénatom (-O-) vagy vegyértékkötós.
A képletből egyértelmű sztereokémiái következtetéseket nem lehet levonni.
A találmány szerinti új neplanocin antibiotikumok magukba foglalják az A-, C- és D-neplanocinokat és a B- és P-neplanocinokat.
A neplanocin A gyengén bázisos anyag, és a kővetekező tulajdonságai vannak:
(1) Elemi összetétel:
talált: C=49,96%, H=5,00%, N=26,43%, számított: C=50,19%, H=4,97%, N=26,60%, (2) Molekulasúlya tömegspektrumelemzésból számítva: 263.
(3) Molekulaképlete: C11H13N5O3.
(4) Olvadáspontja: termikus elemzéssel meghatározva: 216 °C.
(5) Fajlagos forgatóképessége: ({£)dm= =-157 °C (c=0,45%, vízben).
(6) Ultraibolya abszorpciós spektrum (14 χ/ml), vízben: lásd az
1, ábrát: >ux=263 mu, Εΐαό*=602,1;
pH-nál: λ«χ=26ΐ mu, Ei«n=566,4 (hidrokloridként);
pH-nál: λ·ω=263 πιμ, Eic»lx=595,0.
(7) Infravörös abszorpciós spektrum (Kbr):
lásd a 2. ábrát. Abszorpciós sávok 3360, 3200, 2920, 1640, 1600, 1570, 1480, 1415, 1370, 1330, 1300, 1250, 1205, 1160, 1115, 1080, 1050, 1005, 910, 850, 790,
730 cnrMiél.
(Ő) Magmágneses rezonancia spektrum: lásd a 3. ábrát (DSS belső standard, deutérium-dintetilszulfoxidban, 100 MHz).
(9) Oldhatóság:
Oldható: vízben; dimetilszulfoxidban, dimetilformamidban, ecetsavban és vizes acetonban.
Oldhatatlan: etilacetátban, kloroformban, benzolban, hexánban.
(10) Szinreakció:
Pozitív: káliumpermanganát elszintelenítés, per jódét oxidálás és ánizsaldehid.
Negatív: vas(III)-klorid, ninhidrin, anilinftalát, Molisch- és Fehling-próba.
(11) Kémhatás: gyengén bázisos.
(12) Színe: fehér tűkristályok.
(13) Rf-értéke kovasavgélen (Tokyo Kaséi
Co., f-kovasavgél):
6:1:1 arányú n-butanol-ecetsav-víz;
Rf=0,36;
: 0,5 : 2 arányú n-butanol-tömény ammónia-víz: Rf=0,27;
: 1 : 1 arányú n-propanol-tőmény ammónia-víz: Rf=0,41; 10 : 1 arányú aceton-viz: Rf=0,34;
: 2 : 1 arányú etilacetát-metanol-víz:
Rf=0,21;
: 2 : 1 arányú kloroform-metanol-ecetsav: Rf=0,17, (14) Szerkezeti képlete: lásd az (IA) általános képletet.
A neplanocin A biológiai tulajdonságai a következők:
(1) Növények patogén gombéinak növekedését gátló hatása:
A neplanocin a 100 γ/ml koncentrációjú oldata agar lemezen a Helminthosporium oryase M 0306 tenyészeten 18,9 ram átmérőjű gátlási zónát mutat.
(2) Daganatellenes hatás:
Murine leukémia L-1210 daganat 10® sejtjét Intraperitoneálisan egerekbe oltottuk be, és a beoltás után egy nappal 5 napon át, naponta egyszer intraperitoneálisan csoportonként 0,16 mg/kg, 0,32 mg/kg, 0,63 mg/kg, 1,25 mg/kg, 2,5 mg/kg, illetve 5,0 mg/kg neplanocin A-t adtunk, be. Kontrollcsoportként 10 egeret használtunk, és minden egyes kezelt csoportban 7 egér volt. Az eredményeket a 4. ábrán szemléltetjük. A megfigyelés 15. napján a kontrollcsoportnál megfigyelt átlagos túlélési időtartam 7,4 nap volt. A kontrollcsoporttal összehasonlítva a kezelt csoportoknál az élettartam meghosszabbodását figyeltük meg; azaz a 0,16 mg/kg adaggal kezelt csoportnál 158%; a 0,32 mg/kg adaggal kezelt csoportnál 170%-os volt az élettartam meghosszabbodása; a 2,5 mg/kg-os adaggal és az 5,0 mg/kg-os adaggal kezelt csoportokban halálozást nem tapasztaltunk.
Az L-1210 daganatsejtekhez hasonlóan az Ehrlich ascites daganatsejtekkel, a Sarcoma-180, a P-388 leukémia sejtekkel beoltott egereknek és a Yeshida szarkóma sejtekkel beoltott patkányoknak a neplanocin A beadása után az élettartamuk meghosszabbodását figyeltük meg.
(3) Heveny toxicitás:
LD50 (50% halálozást okozó adag): 137,3 mg/kg egereknek (intraperitoneálisan beadva).
Halálozást nem figyeltünk meg akkor, ha 14 napon át intraperitoneálisan 5 mg/kg/nap mennyiséget adtunk be.
Irányelvek és adagolás:
A heveny leukémia kezelésére a gyógyszert fiziológiás nátriumklorid-oldatban old3 va, naponként 5-20 mg mennyiségben 7 napon át naponta egyszer adjuk be. A neplanocín A-t hatásosan lehet a krónikus leukémia, a gyomor-bélrendszer rákja, tüdőrák, méhrák, emlőrák és a rosszindulatú nyirok leukémia kezelésére használni.
A neplanocin A-t ásványi savakkal vagy szerves savakkal alkotott, fiziológiailag elviselhető sói alakjában, például hidrokloridként, acetátként, tartarátként, citrátként vagy szukcinátkónt is lehet alkalmazniA neplanocin C gyengén bázisos anyag, és a következő fizikai-kémiai tulajdonságai vannak:
(1) Elemi összetétele:
talált: C=47,59%, H=4,64%, N=25,10%;
számított: C=47,31%, H=4,66%, N=25,09%.
(2) Molekulasúlya (töraegspektrum elemzésből számítva): 279; (tetraacetil-neplanocin C=447).
(3) Molekulasúly képlete: CuHi3Hs0'4.
(4) Olvadáspontja (termikus elemzéssel meghatározva): 226 °C (bomlik).
(5) Fajlagos forgatóképessége:
(oc)d21=-43,6° (c=0,67, vízben).
(6) Ultraibolya abszorpciós spektruma: (16 í/ml) vízben: Xeax=263mu, Eicmlx=538,9 (lásd az 5. ábrát);
pH-nái: λ«βχ=259 mju, £10.^=510,8: (hidrokloridként), pH-nál: Xmax=263 mg, Eicb1x=534,4.
(7) Infravörös abszorpciós spektruma (KBr): lásd a 6. ábrát. Abszorpciós sávok: 3450-3100, 2920, 2740, 2680, 1680, 1630, 1600, 1560, 1500, 1460, 1420, 1380, 1360, 1330, 1300, 1240, 1200, 1170, 1100, 1050, 1020, 960, 920, 900, 880, 830, 780, 720, 680 cm-1.
(8) Magmágneses rezonancia spektruma: lásd a 7. ábrát; (belső standard DSS, deutérium-dimetílszulfoxidban, 100 MHz).
(9) Oldhatóság:
Oldható: vízben, dimetilszulfoxidban, dimetilformamidban.
Oldhatatlan: etilacetátban, kloformban, benzolban, hexánban.
(10) Szinreakció:
Pozitív: káliumpermanganát elszíntelenítés, perjodát és Tollens reakciók. Negatív: vas(III)-klorid, ninhidrin, ánízsaldehid és Molisch-reakcióba.
(11) Kémhatás: gyengén bázisos.
(12) Színe: fehér (színtelen lemezes kristályok).
(13) Rf-értéke (kovasavgél vékonyrétegen, Tokyo Kaséi Co., kovasavgél-f):
6:1:1 arányú n -butanol-ecetsav-víz: Rf-0,33;
: 0,5 : 2 arányú n-butanol-tőmény ammóniua-viz: Rf=0,19;
: 1 : 1 arányú n -propanol-tömény ammónia-víz: Rf=0,30;
: 1 arányú aceton-víz: Rf=0,43;
: 2 : 1 arányú etilacetát-nietanol-viz: Rf=0,27;
: 2 : 1 arányú kloroform-nietanoi-ecetsav: Rf=0,20.
(14) Szerkezeti képlet (lásd az (IC) általános képletet].
A neplanocin C biológiai tulajdonságai a következők:
(1) Növények patogén gombái növekedését gátló hatása: 100 u/ml koncentrációjú oldatban, 7 mm átmérőjű papírkorong: Helminthosporium oryzae N Ö’3O6: 31,4 mm gátlási zóna;
Cladosporium herbarum M 4278: 14,0 mm gátlási zóna;
Alternaria kikuchisna M 4588: 12,0 mm gátlási zóna.
(2) Heveny toxicitás:
LD5Q (50% halálozást okozó adag):
mg/kg (intraperitoneálisan egereknek beadva).
A neplanocin C-t ásványi vagy szerves savakkal alkotott fiziológiailag elfogadható sói alakjában, például hidrokloridként, acetátként, tartarátként, citrátként vagy szukcinátként lehet alkalmazni.
(3) Daganatellenes hatás:
A neplanocin C 0,8 Ίί/ml koncentrációban ir vitro tökéletesen meggátolja az L-5.178 Y muri ne leukémia sejttenyészet. növekedését.
A neplanocin C élettartamot meghosszabbító hatása 10 mg/kg mennyiségben murine leukémia L-1210 ellen intraperitoneálisan beadva, 131% kezelt/kontroll csoport.
A neplanocin D fizikai-kémiai tulajdonságai a következők:
(1) Elemi összetétele: C=49,70%; H=4,64%;
N=21,20%.
(2) Molekulasúlya tömegspektrum elemzésből számítva: 264.
(3) Molekulaképlete: C11H12N4O4.
(4) Olvadáspontja: 236-237 °C.
(5) Fajlagos forgatóképessége:
(oc)d23=-145° (c=0,6%, vízben).
(6) Ultraibolya abszorpciós spektruma: vízben (lásd a 8. ábrát): Xnax=251 ιυμ, Eion=479;
savas vízben: Xmax=251 mu, EiCbi1x=453; (hidrokloridként), alkálikus vízben: λ««=256 ηΐμ,
Ei«lx=508, (7) Infravörös abszorpciós spektruma (KBr): lásd a 9. ábrát. Abszorpciós sávok: 3420-3120, 2940-2880, 1680, 1580, 1545, 1510, 1440, 1390, 1305, 1210, 1110, 1075, 1040, 1000, 990, 975, 900, 845, 780 cm’1.
(3) Maginágneses rezonancia spektruma: lásd a 10. ábrát; (belső standard DBS. deulerium-dímetilszulfoxidban. 100 MHz).
(9) Oldhatóság:
Oldható: vízben, dimetilszulfoxidban, dimetilfonnamidban, ecetsavban és piridinben.
Oldhatatlan: etilacetátban, kloroformban, benzolban és hexánban.
(10) Színreakció:
Pozitív: káliumpermanganát elszlntelenítés és perjodát oxidáció.
Negatív: ninhidrin, Fehling-reakció és vas(III)-klorid.
(11) Színe: fehér túkristályok.
(12) Rf-értéke (kovasavgélen, Tokyo Kaséi Co., Kovasavgél-f):
6:1:1 arányú n-butanol-ecetsav-víz: Rf=0,27;
: 0,5 : 2 n-butanol-tömény ammónia-viz: Rf=0,07;
: 1 : 1 arányú n-propanol-tömény-víz: Rf=0,18;
: 1 arányú aceton-viz: Rf-0,33.
(13) Kémiai szerkezete: lásd az (ID) általános képletet.
A neplanocin D akut toxicitásának meghatározásakor, egereknek intraperitoneálisan 100 mg/kg neplanocin D-t beadva, halálozást nem figyeltük meg.
A neplanocin B fizikai-kémiai tulajdonságai a követekezők:
(1) Elemi összetétele: C=47,44%; H=4,63%;
N=25,07%.
(2) Molekulsulya (tőmegspektrum elemzésből számítva): 279.
(3) Molekulaképlete: C11H13N5O4.
(4) Olvadáspontja: 269-272 °C (bomlik), (5) Fajlagos forgatóképessége:
(cc)d24=-3,5o (c=1,0%, dimetilszulfoxidban).
(6) Ultraibolya abszorpciós spektruma: vízben: lásd a 11. ábrát. Xeax=262 mp, Eicelx=530,4;
savas vízben (egy csepp 0,1 n sósavval): hidrokloridként λ·βχ=259 mp,
Eic.l*=506,7;
lúgos vízben (egy csepp 0,1 n nátriumhidroxiddal): X«ax=263 nip, EicaIX=522,2.
(7) Infravörös abszorpciós spektruma (KBr):
lásd a 12. ábrát. Abszorpciós sávok:
3380, 3280, 3100, 2920, 2880, 2740, 1700,
1610, 1570, 1520, 1480, 1420, 1380, 1350,
1300, 1250, 1220, 1170, 1160, 1100, 1080,
1030, 1020, 980, 970, 870, 840, 790, 730, 710 cm-1.
(8) Magmégneses rezonancia spektruma: lásd a 13. ábrát; (belső standard DSS, deutérium-dimetilszulfoxidban, 100 MHz) (9) Olhatóság:
Oldható: vízben, dimetilszulfoxídban. Olhatatlan: etilacetátban, kloroformban, benzolban és dimetiléterben.
(10) Színreakció:
Gyengén pozitív: káliumpermanganát elszintelenítés.
Negatív: ninhidrin, Molisch-reagens és ánizsaldehid.
(11) Kémhatása: gyengén bázisos.
(12) Színe: fehér (fehér lemezes kristályok).
(13) Rf-értéke (kovasavgél-f, Tokyo Kaséi Co.,):
6:1:1 arányú n-butanol-ecetsav-viz: Rf=Ö,42;
: 0,5 : 2 arányú n-butanol-tömény ammónia-vÍ2: Rf=0,27;
: 1 : 1 arányú n-propanol-tömény ammónia-víz: Rf=0,41;
: 1 arányú aceton-viz: Rf=0,48.
(14) Szerkezeti képlete: lásd az (IB) általános képletet.
A neplanocin F-nek a következő fizikai-kémiai tulajdonságai vannak:
(L) Elemi összetétele: C=48,74%; H=4,83%;
N=25,71% (kristályvizet tartalmaz).
(2) Molekulasúlya: (tömegspektrumelemzésból számítva): 263.
(3) Molekulaképlete: C11H13N5O3.I/2 H2O.
(4) Olvadáspontja: 223 °C (bomlik).
(5) Fajlagos forgatóképessége:
(oc)d21=-6,6° (c=0,8%, vízben).
(6) Ultraibolya abszorpciós spektrum: vízben (lásd a 14. ábrát): λ·ω=263 mp, Eicnix=548,7;
savas vízben (egy csepp 0,1 n sósavval): hidrokloridként Xma*=260 mp,
Eic»«=527,l;
lúgos vízben (egy csepp 0,1 n nátriumhidroxiddal): Xbuu£=263 mp, EiCB n=531,8.
(7) Infravörös abszorpciós spektrum (KBr):
lásd a 15. ábrát. Abszorpciós sávok: 3320, 3210, 2920, 1650, 1610, 1580, 1480, 1420, 1380, 1340, 1310, 1270, 1220,' 1180, 1110, 1070, 1020, 980, 900, 840, 800,
730 cnH-nél.
(8) Magmégneses rezonancia spektrum (lásd a 16. ábrát): (belső standard DSS, deutérium-dimetilszulfoxidban, 100 MHz).
(9) Oldhatóság:
Oldható: vízben, dimetilszulfoxidban és ecetsavban.
Oldhatatlan: etilacetátban, kloroformban benzolban és dietiléterben.
(10) Színreakció:
Pozitív: káliumpermanganát elszintelenités.
Negatív: vas(IIl)-klorid, ninhidrin és Foohling-reagnes.
(11) Kémhatás: gyengén bázisos.
(12) Színe: fehér (fehér túkristályok).
(13) Rf-értéke: kovaeavgél-f, Tokyo Kaséi. Co,,):
6:1:1 arányú n-butanol-ecetsav-víz: Rf=0,51;
: 0,5 : 2 arányú n-butanol-tömény ammónia-víz: Rf=0,43;
: 1 : 1 arányú n-propanol-t.ömény ammónia-víz: Rf=0,59;
: 1 arányú aceton-viz: Rf=0,48.
(14) Kémiai szerkezete: lásd az (IF) általános képletet.
A neplanocin B és F biológiai tulajdonságai a következők:
(1) Akut toxieitás:
A neplanocin B-t vagy F-et egereknek intraperitoneálisan 100 mg/kg mennyiségben beadva, halálozást nem figyeltünk meg.
(2) Sejtnövekedést gátló hatás:
19274L
Egerek L-5178 Y limforaa sejttenyészetét a neplanocin B 0,8 γ/ml, a neplanocin F 20 ϊ/ml koncentrációban gátolta.
(3) Daganatellenes hatás:
A neplanocin B élettartamot meghosszab- ; bitó hatása 50 mg/kg mennyiségben murino leukémia L 1210 ellen intraperitoneálisan beadva 142% volt a kezelt/kontroll csoport vonatkozásában.
(4) További hatékonyság: j
A neplanocin B-nek depresszióellenes hatása van.
A neplanoclnokat termelő mikroorganizmust a Japánban levő Niigate-ken-i hagymamezők talajából izoláltuk, és ez a mikro- l organizmus az Ampullariella genusba tartozik.
Az Ampullariella sp. A 11 079 törzsnek nevezett mikroorganizmus tipus-tőrzsét a Japánban levő Institute fór Microbial Industry and Technology Intézetben tartós megőrzésre 2 FERM-P 4494 Jelzéssel letétben helyeztük.
Az Ampullariella sp. A 11 079 PERM-P 4494 törzsnek a kővetkező rendszertani tulajdonságai vannak:
I. Morfológiai jellemzők: 2
Szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agar táptalajon 30 °C-on 10-15 napig tenyésztve, a következőket figyeltük meg:
Az A 11 079 törzs 0,5-0,8 mikron átmérőjű görbe és elágazó aljzat-micéliumot és í
1. Szénforrásc kevés némileg éretlen Iégmicéliumot képez,
Az aljzat-rnicéliumon fejlődő sporangíofor tartalmazza a hengeres vagy köteges alakú és 5-15 x 15-25 mikron méretű sporangiumokat. Sok sporangiutn-spóra a sporangiumon belül párhuzamos láncokként rendeződik. A sporangium-spórák vízben poláris ostornyal&b segítségével mozognak, és 0,5-1,0 x 1,0-2,0 mikron méretű pálcika alakjuk van.
II. A diamino-pimelinsav összetétele:
A teljes sejtelemzéssel meghatározott diamino-pimelinsav mező- és hidroxi-típusú.
III. Tenyésztési jellemzők különféle táptalajokon:
A különféle táptalajokon 30 °C-on 20 napig inkubált tenyészeteken megfigyelt tenyésztési jellemzőket az 1. táblázatban foglaltuk össze. Légmicéliumot nem figyeltünk meg, kivéve a szervetlen sókat és keményítőt tartalmazó agar táptalajon és a zabliszt-agar táptalajon megfigyelt csekély, éretlen légmicélium fejlődést.
A színjelzéseket a táblázatban a Container Corporation of America által közölt .Color Harmony Manrial* 4. kiadás, 1958. szerint adjuk meg.
IV. Fiziológiai tulajdonságok:
A fiziológiai tulajdonságokat a következőkben szemléltetjük.
hasznosítása:
Szénforrás | Hasznosítás | Szénforrás | Hasznosítás |
L-arabinóz | + | szalicin | + |
D-xilóz | + | D-galaktóz | + |
D-glükóz | + | glicerin | + |
D-fruktóz | + | L-szorbóz | - |
D-mandÓ2 | + | trehalóz | + |
D-mannit | oc-melibióz | - | |
mozit | - | D-ribóz | - |
L-ramnóz | + | maltóz | + |
szacharóz | + | melezitóz | - |
β-laktóz | - | D-cellobióz | + |
raffinóz | - | D-szorbit | - |
cellulóz | - | dulcit | - |
keményítő | + |
1. Táblázat: Tenyésztési jellemzők különféle táptalajokon | ||||
Táptalaj | Növekedés | Sporangium | Aljzat-micélium színe Oldható pigment | |
Szacharóz-nitrát agar ’ | gyenge-közepes | kevés | gyöngyházrózsaszín (3ca) vllágossárga dinnyeszin (3ca) | nincs |
Glükóz-aszparagin agar | közepes-gyenge | kevés | bembuszszín (2fb) gyöngyházrózsaszín (3ca), | nincs |
Glicerin-aszparagin agar | gyenge-közepes | nincs | bammbuszszin (2fb) gyögyházrózsaszin (3ca) | nincs |
Szervetlen sók-keményítő agar | jó-közepes | jó | borostyénkőszín (31c) pasztell narancsszín | nincs |
(4 ic)
Táptalaj | Növekedés | Sporangium | Aljzat-micélium színe Oldható pigment | |
Tirozin agar | jó-közepes | nincs | világos borostyánkőszín | nincs |
(3ic) | ||||
Zabliszt agar | jó | közepes | borostyánkószín | nincs |
(31c) élénk kukorica- | ||||
sárga (31a) | ||||
Élesztő-maláta | jó-közepes | gyenge | topázszln (3ne) | halvány |
agar | kissé ráncos | borostyánkószín (3pe) | borostyán- | |
kőszín (3pe) | ||||
Glükóz-élszetó- | közepes-jó | nincs | fahéjszín (31e) | aranybarna |
kivonat agar | (3pg-3pi) | |||
(28.sz. Waksman | ||||
táptalaj) * | ||||
Glicerin-nitrát agar | közepes | nincs | színtelen-bambuszszin | nincs |
(l.sz. Waksman | (2fb) | |||
táptalaj) * | ||||
Glükóz-nitrát | gyenge-közepes | nincs | színtelen-bambuszszin | nincs |
agar (l.sz. Waksman | (2fb) | |||
táptalaj) * | ||||
Tápagar | gyenge | nincs | világos borostyánkőszín | aranybarna |
(3íc) - fahéjszin (31e) | (3pg) | |||
Emerson agar | jó-közepes | nincs | fahéjszin (31e) | aranybarna |
(28.sz. Waksman | teveszín (31e) | (3pg-3pi) | ||
táptalaj) * | ||||
Bennett agar | jó-közepes | nincs | borostyánkószín (3pe) | halvány- |
(30.sz. Waksman | topázszin (3ne) | aranybarna | ||
táptalaj) * | (3pg) | |||
Pepton-Czapek | közepes-jó | kevés | világos borostyánkőszín | halvány |
agar | (3ic) -borostyánkószín | aranybarna | ||
(31c) | (3pg) | |||
Élesztökivonat | közepes-jó | kevés | borostyánkószín (31c-3nc) nincs | |
Czapek agar | ||||
Tirozin agar **** | gyenge | nincs | világos cserszínu (3gc) | szegfübarna |
égetett kőagyagszín | (3pl) | |||
(3ec) | ||||
Pepton-élesztő | közepes-jó | nincs | világos borostyánkőszín | sötét |
vas agar | (3ic) | gyömbérbar- | ||
na (4pl) | ||||
Kazein agar **** | jó | nincs | teves2Ín (3ic) | szegfűbarna |
fahéjszin (3le) | (3pl) | |||
* Waksman, S.A., | .The Actinomycetes, 2. 11 | 079 mikroorganizmusnak az | , elágazó aljzat· |
kötet, 327-334 (1961), Willien and Wilkins 45 Co.
** J. Elisha Mitchell, Sci. Sox. 73, 54 (1963) *** J Virol. 3 210 (1969) **** J. Bacteriol. 69, 147 (1955).
2. Tenyéezhómérséklet: 10-45 °C.
Lefölözött tejre gyakorolt hatás: pozitív peptonizálás és koagulálás. Melanin termelés: tirozin agar táptalajon negatív; pepton-élesztő-vas aga^r táptalajon pozitív.
Keményítő hidrolízis: pozitív.
Cellulóz hidrolízis: negatív.
Kazein hidrolízis: pozitív Zselatin elfolyósítás: pozitív.
Tirozin elbontás: negatív.
Xantin elbontás: negatív,
Hipoxantin elbontás: negatív. Kénhidrogén termelés: negatív.
Nitrát redukálás: negatí
3.
4.
5.
6.
7.
8. 9.
10.
11.
12.
13.
A fenti rendszertani adatok szerint az A 65
-micéliumon fejlődött sporangiumokat hordozó sporangioforja van, a sporangium hengeres vagy köteges alakú, a sporangíum-spórák a sporangíumon belül párhuzamos láncokként rendeződnek, a pálcika alakú sporangiuni-spórákon poláris ostornyaláb és mozo-diaminopimelinsav van, ezért az Actinoplanaceae családbeli nemek meghatározására szolgáló Bergey’s Manual of Deterrainative Bacteriology. B. kiadás, 707-708. old (1974) mű szerint ez a mikroorganizmus az Ampullarietla nemhez tartozik. Ezért ezt a mikroorganizmust Ampullariella sp. A 11 079-nek nevezzük.
A találmány tárgya eljárás a nepianocin A, -C, -D új antibiotikumok és ezek származékai, a neplanocin-B és -F előállítására.
A találmány további tárgya eljárás olyan nepianocin antibioLikum csoport előállítására, amelyek növények patogén gombái, daganatsejtek és hasonlók ellen hatékonyak.
A kővetkezőkben a találmány a mellékelt rajzokra hivatkozva részletesebben írjuk le.
A rajzok a kővetkezők:
1. ábra: a neplanocin A ultraibolya abszorpcióspektruma.
2. ábra: a neplanocin A infravörös abszorpciós spektruma.
3. ábra: a neplanocin A magmágneses rezonanciaspektruma.
4. ábra: a neplanocin A-nak az L-1210 leukémiás egerekre gyakorolt hatása.
5. ábra: a neplanocin C ultraibolya abszorpcióspektruma.
6. ábra: a neplanocin C infravörös abszorpcióspektruma.
7. ábra: a naplanocin C magmágneses rezonanciaspektruma.
8. ábra: a neplanocin D ultraibolya abszorpcióspektruma.
9. ábra: a neplanocin D infravörös abszorpcióspektruma.
10. ábra: a neplanocin D magmágneses rezonancispektru ma.
11. ábra: a neplanocin B ultraibolya abszorpcióspektruma.
12. ábra: a neplanocin B infravörös abszorpcióspektruma.
13. ábra: a neplanocin B magmágneses rezonanciaspektrum.
14. ábra: a neplanocin F ultraibolya abBzorpcióspektruma.
15. ábra: a neplanocin F infravörös abszorpcióspektruma,
16. ábra: a neplanocin F magmágneses rezonanciaspektruma.
A találmány értelmében a neplanocinokat például úgy állítjuk elő, hogy alkalmas táptalajra beoltjuk az Ampullariella sp. A 11 079 FERM-P 4494 sz. törzset. A mikroorganizmus tenyésztését különbözőképpen, például szintetikus vagy természetes táptalajon, folyadék vagy szilárd táptalajon való tenyésztéssel hajthatjuk végre. Az ipari előállítás céljára előnyös a folyékony táptalajon való tenyésztés. A neplanocin antibiotikumokat termelő mikroorganizmosok tenyésztésére a táptalaj alkotórészeiként asszimilálható szénforrásokat, asszimilálható nitrogénforrásokat, szervetlen sókat és egyebeket használhatunk. Az alkalmazható szénforrások közül például megemlítjük a glükózt, szacharózt, glicerint, oldható keményítőt, melaszt stb. Asszimilálható nitrogénforrásként peptont, kukoricalekvárt, szóqalisztet, húskivonatot, rizskorpát, kazeinhidrolizétumot, nitrátokat, ammóniusót stb. használhatunk. Szervetlen sót, például nátriumkloridot, kálium-, magnézium-, vas(II)- vagy mangánfoszfátot szintén alkalmazhatunk. A táptalajhoz habzást gátló szert, például szilikonolajat vagy szójababolajat is hozzáadhatunk.
A folyékony tenyésztéshez a süllyesztett, levegőztetett tenyésztést előnyösen alkalmazhatjuk. Ebben az esetben a mikroorgaR nizmusok számára legkedvezőbb tenyésztési hőmérsékletet kell választani, ez előnyösen 25-30 °C. A tenyésztés időtartama a körülményektől függ, és általában 2-4 nap lehet. A tenyésztés folyamán a közeg pll-jál előnyösen semleges és gyengén savas között, kell tartani.
Az így kapott fermentlé tartalmazza a neplanocin antibiotikumokat. Ezek elkülönítését a mikroorganizmusok anyagcseretermékeiről használt, szokásos elkülönítési vagy elválasztási módszerekkel hajtjuk végre. Mivel a neplanocinok gyengén bázisos anyagok, ezeket alkalmas adszorbenseken való adszorheáltatással, majd alkalmas oldószerrel való kioldással lehet elkülöníteni. Az adszorbensek közül például megemelitjük a2 aktívszenet, a kationcseréló gyantákat és az aktív alumíniumoxidot vagy kovasavgélt.
Az eluáló oldószert a használt adszorbenstől függően kell kiválasztani, például vízzel elegyedő szerves oldószereket, így vizes metanolt, vizes acetont vagy vizes dioxánt, vagy savas, lúgos vagy sótartalmú oldatokat hasznáhatunk.
Ezenkívül a neplanocinokat az anyag gyengén bázisos természetét alapján különíthetjük el, és tisztíthatjuk. Az antibiotikumokat például kationcseréló gyantán (ilyen például a Rohm and Haas Co., USA cég által Amberlite vagy a DOW Chem. Co. USA cég állal Powex 50 IRC-50 kereskedelmi néven forgalombahozott kationcserélő gyanta) adszorbeáljuk, és alkalmas savas, lúgos vagy sós oldattal eluálhatjuk.
Az antibiotikumok elkülönítésére, eluálásra és tisztításra előnyösen az adszorbens és az ioncserélő gyanta kombinációját alkalmazhatjuk. A tenyészet szüredéket az antibiotikum adszorbeálására például Amberlite IR-120 (kereskedelmi név) kationcserélő gyantára visszük fel, alkalmas alkálikus oldószerrel, például 3,7 n vizes ammónia-oldattal eluálva, a hatékony frakciót kapjuk, és miután ezeket semleges vagy gyengén lúgos kémhatásra állítottak be, az antibiotikumokat aktívszénen adszorbeáljuk, majd 70%-os metanollal eluáljuk. Az eluált oldatot Amberlite IRA-410 (kereskedelmi név) anioncserélő gyantán adszorbeáljuk, és vízzel ismét eluáljuk, hogy a hatékony frakciókat összegyűjtsük. Az egyesített frakciókat bepárolva, nyers terméket kapunk, ezt végül kovasavgélen adszorpciós kromatográfiával tisztítjuk. A további tisztítást átkristályositással hajtjuk végre. Az egyes anyagok tisztaságát úgy ellenőrizzük, hogy meghatározzuk, egyetlen olvadáspontot, papirkromatog ráfiéval, vékony réteg-kromatográfia val és papír-elektroforézíssel 263 πΐμ-nál ultraibolya fényben egyetlen foltot mutat-e.
A következő példák a találmányt közelebbről szemléltetik, de terjedelmét semmiképpen nem korlátozzák. A hőmérsékleti adatokat, Celsius-fokban adjuk meg.
1. példa
2% glükózt, 2% keményítőt, 1% élesztőkivonatot, 1% kazein-hidrolizátomot és 0,2% kalciumkarbonátot tartalmazó 100 ml 6,5 pH—jú vizes táptalajt 500 ml-es lombikba töltve, 120 °C-on 15 percig sterilizáljuk. Két ilyen lombikot Ampullariella sp. A 11 079 FERM-P 4494 sz. törzs ferde tenyészetéből egy kacsnyival beoltunk, és rázás közben 30 °C-on inkubáljuk. Az inkubált folyékony táptalajt 4 nap múlva 20 liter, ugyanilyen sterilizált táptalajt tartalmazó 30 literes fermentorba töltjük, és percenként 300 fordulattal keverve és percenként 20 liter levegővel levegőztetve, 48 óra hosszat 30 °C-on tenyésztjük.
Az igy inkubált tenyészetet 4% glükózt, 1% szójalisztet, 0,4% húskivonatot, 0,4% peptont, 0,1% élesztőkivonatot, 0,25% nátriumkloridot és 0,1% kalciumkarbonátot tartalmazó 6,5 pH-jú 200 liter folyékony táptalajra töltjük, és percenként 180 fordulattal keverve és percenként 130 liter levegővel levegőztetve, 30 °C-on 40 óra hosszat tenyésztjük. A mintegy 200 liter térfogatú tenyésztett folyékony táptalajt szűréssel elválasztjuk, és a micéliumtömeget vízzel mossuk. A szüredéket és a mosófolyadékot egyesítve, körülbelül 140 liter víztiszta szüredéket kapunk (hatékonysága neplanocin A-ként számítva 57 mcg/ml).
2. példa
Az 1. példa szerint előállított szüredéket 20 liter, hidrogénalakban levő Amberlite IR-120 kereskedelmi nevű kationcserélő gyantát tartalmazó oszlopra töltve az anyagot adszorbeáljuk és 100 ml vízzel mossuk. 3,7 n ammónia-oldattal eluálunk, és az első 30 liter eluátumot kiöntjük. A következő 90 liter eluátumot összegyűjtjük, pH-ját 6 n sósavval 8-ra állítjuk be, majd 4 liter aktívszenet tartalmazó oszlopon vezetjük át, vízzel mossuk, és 90 liter, 70%-os vizes metanollal eluálunk. Az így kapott eluátomot csökkentett nyomáson bepárolva, 1,5 liter sűrítményt kapunk. A sűrítményt 10 liter hidroxid alakban levő Amberlite IRA-410 kereskedelmi nevű ioncserélő gyantával töltött oszlopra visszük fel, vízzel eluáljuk, és az eluátum pH-ját 4 n sósavval 7-re állítjuk be. Az eluátomot vákuumban bepárolva, a terméket hűtés közben leválasztva és szűréssel elválasztva, 41,8 g nyers neplanocin A-t kapunk (tisztasága körülbelül 12%).
A 41,8 g nyers neplanocin A-t kevés vízben oldjuk, és 6,3 x 40 cm méretű, 10 : 0,2 : 1 arányú n-butanol 28%-os ammónia-víz eleggyel nedvesített 2 liter kovasavgélt tartalmazó oszlopra visszük fel, majd ugyanilyen oldószereleggyel eluálunk. 150 ml-es frakciókat szedünk, és mindegyik eluátumot frakcionáljuk; a hatékony terméket a 24-52. sz. frakcióban találjuk. Ezeket a frakciókat egyesítve, vákuumban bepároljuk, és a maradékot hűtés közben állni hagyjuk.
A kivált csapadékot szűréssel elválasztva, 2,6 g nyers, kristályos neplanocin A-t kapunk. Kitermelés 32%.
A nyers neplanocin A-t 60 ml forró vízben oldjuk, és az oldatot szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált fehér tűkristályokat szűréssel elválasztva, 2,01 g neplanocin A kristályokat kapunk. Kitermelés 25,2%.
3. példa
Az 1. példa szerint előállított és neplanocin C-re számított 300 mcg/ml hatékonysága, 140 liter szüredéket a termék adszorbeálására Amberlite IR-120 kereskedelmi elnevezésű hidrogénalakban levő kationcserélő gyantát tartalmazó 20 literes oszlopon vezetjük át, és mintegy 100 liter vízzel mossuk. 3,7 n vizes ammóniaoldattal eluálunk, és az első 20 iter eluátumot kiőntjük. Az ezután következő 100 liter eluátumot összegyűjtjük, pH-ját tömény sósavval 8-ra állítjuk be, majd oszlopban levő 4 liter aktivszénen vezetjük át, vízzel mossuk, és 70 liter 70%-os metanollal eluláljuk. Az igy kapott eluátumot csökkentett nyomáson bepárolva, 1,5 liter sűrítményt kapunk. A sűrítményt fagyasztva szárítással, 83,6 g, 29,5% tisztaságú, poralakú nyers termék marad vissza.
g poralakú nyers terméket vízzel telített n-butanolban oldjuk, és az oldatot 2 liter kovasavgéllel töltött és n-butanollal nedvesített 8,3 x 40 cm méretű oszlopra visszük fel, majd 10 : 0,2 : 1 arányú n-butanol-tömény ammónia-víz oldószereleggyel eluáljuk. 150 ml-es frakciókat szedünk, és mindegyik eluátumot frakcionáljuk. Hatékony terméket az 53-108. számú frakcióban találunk. Ezeket a frakciókat egyesítjük, bepároljuk, és a maradékot alacsony hőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált csapadékot szűréssel elválasztva, fehér kristályok alakjában 18,2 g neplanocin C-t kapunk. Tisztasága 96%. Kitermelés 41,6%.
Ezt a terméket forró vízben oldva és az oldatot szobahőmérsékleten állni hagyva, a színtelen lemezes kristályok alakjában kivált neplanocin C-t szűréssel elválasztva, tiszta neplanocin C-t kapunk.
4. példa
Az 1. példa szerint előállított szüredékhez 3,6 kg porított aktívszenet adunk, -10 percig keverjük, majd az aktivszenet szűréssel eltávolítjuk, és vízzel alaposan mossuk. Az eluálást 70%-os metanollal hajtjuk végre. 40 liter eluátumot vákuumban szárazra párolva, neplanocin D-t tartalmazó 80 g poralakú nyers terméket, kapunk.
A 80 g nyers terméket oszlopba töltött és 10 : 1 : 1 arányú n-propanol-tömérty ammónia-víz eleggyel nedvesített 6 liter kovasavgélre visszük fel, majd ugyanilyen oldószerkeverékkel eluélunk. Minden egyes 600 g eluátumot frakcionálunk, és a 20-37, számú frakciókban találjuk a neplanocin D-t. Ezeket a frakciókat elegyítjük, vákuumban 30 ml-re bepároljuk, és a maradékot hűtés közben állni hagyjuk. A kivált csapadékot szűréssel elválasztva, 460 mg nyers, kristályos neplanocin D-t kapunk.
A nyers termékként kapott 460 mg kristályokat 3 ml forró vízben oldjuk, és 1850 ml Sephadex G-15-tel töltött és vízzel nedvesített oszlopra visszük fel, majd vízzel eluáljuk. Mindegyik 100 ml-es eluátumot frakcionáljuk, a 15. és 16. számú frakciókat egyesítjük, és a 200 ml oldatot 20 ml-re pároljuk be. A bepárlási maradékot szobahőmérsékleten állni hagyva, fehér tűkristályok alakjában 314 mg neplanocin D vélik ki.
5. példa
Az 1, példa szerinti eljárásban kapott és neplanocin B-ként számított 50 mcg/ml hatékonyságú, 140 liter szüredéket hidrogén alakban levő Amberlite IR-120 kationcserélő gyantát tartalmazó 20 literes oszlopra viszszük fel, hogy az anyagot adszorbeáljuk, majd 100 liter vízzel mossuk. Az eluálást 3,7 n vizes ammóniaoldattal hajtjuk végre, és az első 30 liter eluátumot kiöntjük, A következő 90 liter eluátumot egyesítjük, pH-ját 6 n sósavval 8-ra állítjuk be, majd aktívszepet tartalmazó 4 literes oszlopra visszük fel, vízzel mossuk, és 90 liter, 70%-os metanollal eluáljuk. Az így kapott eluátumot 500 ml-ye bepárolva, alacsony hőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált terméket elválasztva és szárítva, 5,1 g nyers neplanocin B-t kapunk. Tisztasága 60%. Kitermelés 44%.
6. példa
Az 5. példában kapott 5,1 g neplanocin B-t 8,3 x 40 cm méretű, 2 liter kovasavgéít tartalmazó és 10 : 0,5 arányú aceton-víz eleggyel nedvesített oszlopra visszük fel. 80 ml-es frakciókat szedünk, és mindegyiket frakcionáljuk. A 16-24. számú frakciókat egyesítjük. £zeket az aktív anyagot tartalmazó frakciókat alacsony hőmérsékleten állni hagyva, 2,57 g neplanocin B fehér lemezes kristályokként válik ki. Kitermeléés 32,8%.
elválasztjuk, vízzel mossuk, és a szüredéket és a mosóvizet egyesítjük, igy 140 liter, 1,5 mcg/ml hatékonyságú oldatot kapunk.
Ezt az oldatot 20 liter hidrogénalakban levő Amberlite IR-120 kationcserélő gyanta oszlopon vezetjük át, és 100 liter vízzel mossuk, 3,7 n vizes ammóniaoldattal eluélunk, és az első 30 liter eluátumot kiöntjük. Az ezutáni 90 liter eluátumot egyesítjük, pH-ját 6 n sósavval 8-ra állítjuk be, majd aktívszenet tartalmazó 4 literes oszlopra töltjük, vízzel mossuk, és 90 liter 70%-os vizes metanololdattal eluáljuk. Az így kapott eluátumot 500 ml-re bepárolva és a maradékot fagyasztva szárítva, 31,2 g nyers neplanocin F-et kapunk. Tisztasága 0,5%.
8. példa
A 7. példa szerint előállított 31,2 g nyers neplanocin F port 10 : 0,2 : 1 arányú n-butanol-28%-os vizes ammónia-oldat-viz eleggyel nedvesített 800 ml kovasavgéít tartalmazó oszlopra visszük fel, és ugyanezzel az oldószerkeverékkel eluélunk. 150 ml-es frakciókat szedünk, ezeket egyenként frakcionáljuk, és az 5-10. számú frakciókat egyesítjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékként kapott sűrítményt olyan kovasavgéít tartalmazó 240 ml-es oszlopra visszük fel, amely kovasavgéít előzetesen 10 : 2 : 0,2 arányú kloroform-metanol-ecetsav oldószerkeverékkel nedvesítünk, é6 az eluálást ugyanilyen összetételű oldószereleggyel végezzük. 20 ml-es frakciókat szedünk, mindegyiket frakcionáljuk, és a 67-120. számú frakciókat egyesítjük. Ezeket az egyesített frakciókat bepárolva és a maradékot szárítva, 108 mg kristályos, nyers neplanocin F-et kapunk. Kitermelés 51%.
9. példa
A 8. példa eljárása szerint kapott. 108 mg kristályos nyers neplanocin F-et vízzel nedvesített 186 ml Sephadex G-15 oszlopra visszük fel, és vízzel eluáljuk. 10 ml-es frakciókat szedünk, és mindegyik eluátumot frakcionáljuk. A 22-27. számú frakciókat egyesítve, 5 ml-re bepároljuk. Az igy kapott bepárlási maradékot hűtőkamrában állni hagyjuk, hogy a neplanocin F fehér tűkristályok alakjában kiváljon. A kivált csapadékot szűréssel elválasztva és szárítva, 87 mg kristályos neplanocin F-et kapunk, kitermelés 41%.
7. példa
A mikroorganizmus tenyésztését az 1. példa szerint végezve, körülbelül 200 liter fermentlevet kapunk. A sejttőmeget szűréssel
Claims (8)
1. Eljárás az (I) általános képletű neplanocín-antibiotikumok és fiziológiailag elfogadható sóik előállítására - ebben a képlel10 ben
X hidroxil- vagy anionicsoportot és Z (a) vagy (b) általános képletű csoportot jelent, és ezekben a csoportokban Y oxigénatom vagy vegyértékkótésazzal jellemezve, hogy az említett neplanocin antibiotikumokat termelő, Ampullariella a 11 079 mikroorganizmus törzset - deponálási száma FERM-P 4494 - asszimilálható szenet és nitrogént, valamint egyéb tápanyagokat tartalmazó táptalajon tenyésztjük, a kapott antibiotikum elegyet a fermentléből elkülönítjük, kívánt esetben komponenseire szétválasztjuk, kívánt esetben bármely komponenst fiziológiailag elfogadható sójává átalakítjuk. (Elsőbbsége: 1979. április 12.)
2. Eljárás az (IA) képletű neplanocin A antibiotikum és fiziológiailag elfogadható sói előállítására azzal jellemezve, hogy az említett antibiotikumot termelő, Ampullariella A 11 079 mikroorganizmus törzset - deponálási száma FERM-P 4494 - asszimilálható szenet és nitrogént, valamint egyéb tápanyagokat tartalmazó táptalajon tenyésztünk, majd a fermentléből az antibiotikumot elkülönítjük, kívánt esetben fiziológiailag elfogadható sójává átalakítjuk. (Elsőbbsége: 1978. májuk 25.)
3. Eljárás az (IC) képletű neplanocin C antibiotikum és fiziológiailag elfogadható sói előállítására azzal jellemezve, hogy az említett antibiotikumot termelő, Ampullariella A 11 079 mikroorganizmus törzset - deponálási száma FERM-P 4494 - asszimilálható szenet és nitrogént, valamint egyéb tápanyagokat tartalmazó táptalajon tenyésztjük, majd a fermentléből az antibiotikumot elkülönítjük, kívánt esetben fiziológiailag elfogadható sójává átalakítjuk. (Elsőbbsége: 1978. augusztus 10.)
4. Eljárás az (ID) képletű neplanocin D antibiotikum és fiziológiailag elfogadható sói előállítására azzal jellemezve, hogy az említett antibiotikumot termelő, Ampullariella A 11 079 mikroorganizmus törzset - deponálási száma FERM-P 4494 - asszimilálható szenet és nitrogént, valamint egyéb tápanyagokat tartalmazó táptalajon tenyésztjük, majd a fermentléből az antibiotikumot elkülönítjük, kívánt esetben fiziológiailag elfogadható sójává átalakíthatjuk. (Elsőbbsége: 1979. január 29.)
5. Eljárás az (IB) képletű neplanocin B és/vagy az (IF) képletű neplanocin F anti— ? biotikum és fiziológiailag elfogadható sói a előállítására azzal jellemezve, hogy az említett antibiotikumokat termelő, Ampullariella A 11 079 mikroorganizmus törzset - deponálási száma FERM-P 4494 - aszimilálható szenet és nitrogént, valamint egyéb tápanyagokat tartalmazó táptalajon tenyésztjük, majd a fermentléből a két antibiotikum elegyét vagy valamelyik antibiotikumot elkülönítjük, kívánt esetben a kapott elegyet komponenseire lg szétválasztjuk, kívánt esetben bármelyik komponenst fiziológiailag elfogadható sójává átalakítjuk. (Elsőbbsége: 1979. február 23.)
6. Eljárás hatóanyagként (I) általános képletű neplanocin-antibiotikumot vagy fiziológiailag elfogadható sóját - ebben a képletben X és Z az 1. igénypontban megadott jelentésű - tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított
25 hatóanyagot a gyógyszerkészitésben szokásos hordozó-, hígító-, töltő- és/vagy egyéb segédanyaggal együtt kikészítjük. (Elsőbbsége: 1979. április 12.)
7. Eljárás hatóanyagként (IA) képletű
30 neplanocin A-t vagy fiziológiailag elfogadható sóját tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy a 2. igénypont szerinti eljárással előállított hatóanyagot a gyógyszerkészitésben szokásos hordo35 zó-, hígító-, töltő- és/vagy egyéb segédanyaggal együtt kikészítjük. (Elsőbbsége: 1978. május 25.)
8. Eljárás hatóanyagként (IB) képletű neplanocin B-t vagy (IF) képletű neplanocin
40 F-et vagy fiziológiailag elfogadható sójukat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy az 5. igénypont szerinti eljárásai előállított hatóanyagot a gyógyszerkészítésben szokásos hordozó-, hi45 gitó-, töltő- és/vagy egyéb segédanyaggal együtt kikészítjük. (Elsőbbsége: 1979. február 23.)
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP6289978A JPS54154792A (en) | 1978-05-25 | 1978-05-25 | Novel antibiotic a-11079-b1b and its preparation |
JP9802778A JPS5524157A (en) | 1978-08-10 | 1978-08-10 | Novel antibiotic substance a-11079-b2 and its preparation |
JP820579A JPS55100388A (en) | 1979-01-29 | 1979-01-29 | Novel substance neplanocin d and its derivative |
JP2120179A JPS55113786A (en) | 1979-02-23 | 1979-02-23 | Novel substance, nepranosin b or f and its preparation |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HU192741B true HU192741B (en) | 1987-07-28 |
Family
ID=27454901
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU79TO1102A HU192741B (en) | 1978-05-25 | 1979-04-12 | Process for producing new neplanocin antibiotics |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
CA (1) | CA1128882A (hu) |
CH (1) | CH641804A5 (hu) |
DE (2) | DE2917000C2 (hu) |
DK (1) | DK149313C (hu) |
ES (1) | ES480384A1 (hu) |
FR (1) | FR2426688A1 (hu) |
GB (1) | GB2021582B (hu) |
HU (1) | HU192741B (hu) |
IT (1) | IT1115245B (hu) |
MX (1) | MX5788E (hu) |
NL (1) | NL182231C (hu) |
SE (1) | SE443576B (hu) |
SU (1) | SU906388A3 (hu) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3148363A1 (de) * | 1980-12-12 | 1982-09-16 | Toyo Jozo K.K., Shizuoka | Neplanocin a-derivate |
US4742064A (en) * | 1985-09-10 | 1988-05-03 | Regents Of The University Of Minnesota | Antiviral carbocyclic analogs of xylofuranosylpurines |
ZA894534B (en) * | 1988-06-20 | 1990-03-28 | Merrell Dow Pharma | Novel neplanocin derivatives |
NZ232993A (en) * | 1989-04-24 | 1992-10-28 | Squibb & Sons Inc | Purinyl and pyrimidinyl tetrahydrofurans |
US5145960A (en) * | 1989-04-24 | 1992-09-08 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Pyrimidinyl tetrahydrofurans |
US5164520A (en) * | 1989-04-24 | 1992-11-17 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Intermediates for purinyl and pyrimidinyl tetrahydrofurans |
US5059690A (en) * | 1990-03-01 | 1991-10-22 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Purinyl tetrahydrofurans |
-
1979
- 1979-04-12 HU HU79TO1102A patent/HU192741B/hu unknown
- 1979-04-26 NL NLAANVRAGE7903318,A patent/NL182231C/xx not_active IP Right Cessation
- 1979-04-26 DE DE2917000A patent/DE2917000C2/de not_active Expired
- 1979-04-26 SE SE7903672A patent/SE443576B/sv not_active IP Right Cessation
- 1979-04-26 DE DE2954197A patent/DE2954197C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1979-04-30 DK DK177079A patent/DK149313C/da not_active IP Right Cessation
- 1979-05-08 FR FR7911578A patent/FR2426688A1/fr active Granted
- 1979-05-09 ES ES480384A patent/ES480384A1/es not_active Expired
- 1979-05-17 SU SU792763801A patent/SU906388A3/ru active
- 1979-05-18 GB GB7917481A patent/GB2021582B/en not_active Expired
- 1979-05-23 CA CA328,113A patent/CA1128882A/en not_active Expired
- 1979-05-23 MX MX797996U patent/MX5788E/es unknown
- 1979-05-24 IT IT7922957A patent/IT1115245B/it active
- 1979-05-25 CH CH490879A patent/CH641804A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE2917000A1 (de) | 1979-11-29 |
SU906388A3 (ru) | 1982-02-15 |
GB2021582B (en) | 1982-10-20 |
CA1128882A (en) | 1982-08-03 |
FR2426688A1 (fr) | 1979-12-21 |
DE2954197C2 (hu) | 1990-09-27 |
GB2021582A (en) | 1979-12-05 |
NL182231B (nl) | 1987-09-01 |
DK149313C (da) | 1986-10-20 |
SE7903672L (sv) | 1979-11-26 |
NL182231C (nl) | 1988-02-01 |
IT1115245B (it) | 1986-02-03 |
DK177079A (da) | 1979-11-26 |
SE443576B (sv) | 1986-03-03 |
IT7922957A0 (it) | 1979-05-24 |
NL7903318A (nl) | 1979-11-27 |
DE2917000C2 (de) | 1985-10-03 |
MX5788E (es) | 1984-07-11 |
DK149313B (da) | 1986-04-28 |
CH641804A5 (de) | 1984-03-15 |
ES480384A1 (es) | 1980-04-01 |
FR2426688B1 (hu) | 1982-03-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4743689A (en) | Antibiotic derivative of adenine | |
US5055453A (en) | Benanomicins a and antibiotic compositions | |
US4990448A (en) | Bu-4061T | |
US4518589A (en) | BBM-2478 Antibiotic complex | |
US5071957A (en) | Antibiotic BU-4061T | |
US4321376A (en) | Neplanocin-B and -F | |
CA1291054C (en) | Antitumor antibiotics (ll-e33288 complex) | |
KR100659680B1 (ko) | 항생 물질 카프라자마이신류 및 그 제조법 | |
HU192741B (en) | Process for producing new neplanocin antibiotics | |
US4916065A (en) | BU-3420T Antitumor antibiotic | |
US4423218A (en) | Antibiotic neplanocin A | |
US4517296A (en) | Antibiotic acmimycin and its production | |
EP1001035B1 (en) | Novel antibiotics rk-1061 and process for preparing the same | |
GB2111495A (en) | Aminoglycoside antibiotics | |
US5109122A (en) | Antibiotics, dexylosylbenanomicin B | |
US5041423A (en) | Antibiotics of the mureidomycin group, their preparation, and their therapeutic use | |
CA1338245C (en) | Compound dc-107 and process for its preparation | |
CA1339467C (en) | New antibiotics called "mureidomycins a, b, c and d", a process for their preparation and their therapeutic use | |
EP0702691B1 (en) | New thiodepsipeptide isolated from a marine actinomycete | |
US4292309A (en) | Antibiotics C-14482 B1, B2 and B3 | |
KR830001688B1 (ko) | 신규의 항생물질 네플라노씬류의 제조방법 | |
US4677071A (en) | Antibiotic agents from S. coeruleorubidus, rubidus | |
US4895864A (en) | Antibiotic TAN-950A, its production and use | |
US4572895A (en) | Process for preparing an antibiotic complex by culturing actinomyces strain ATCC 39417 | |
JPH01246288A (ja) | Tan−1030aおよびその誘導体,これらの製造法ならびに用途 |