HRP20210301T1 - Djelotvorna selektivnost rekombinantnih proteina - Google Patents

Djelotvorna selektivnost rekombinantnih proteina Download PDF

Info

Publication number
HRP20210301T1
HRP20210301T1 HRP20210301TT HRP20210301T HRP20210301T1 HR P20210301 T1 HRP20210301 T1 HR P20210301T1 HR P20210301T T HRP20210301T T HR P20210301TT HR P20210301 T HRP20210301 T HR P20210301T HR P20210301 T1 HRP20210301 T1 HR P20210301T1
Authority
HR
Croatia
Prior art keywords
goi
seq
cell
fragment
antigen
Prior art date
Application number
HRP20210301TT
Other languages
English (en)
Inventor
Dipali DESHPANDE
Darya Burakov
Gang Chen
James Fandl
Original Assignee
Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Regeneron Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Regeneron Pharmaceuticals, Inc.
Publication of HRP20210301T1 publication Critical patent/HRP20210301T1/hr

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/005Glycopeptides, glycoproteins
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2319/00Fusion polypeptide
    • C07K2319/30Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00Genetically modified cells
    • C12N2510/02Cells for production
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2840/00Vectors comprising a special translation-regulating system
    • C12N2840/20Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
    • C12N2840/203Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Claims (15)

1. Izolirana stanica, naznačena time što sadrži: (a) sisavački gen za otpornost na tunikamicin (Tn) koji kodira protein koji je najmanje 93% istovjetan aminokiselinskom slijedu u SEQ ID NO: 3, gdje je gen za otpornost na Tn egzogeno dodan u stanicu; (b) prvi gen od interesa (GOI), gdje je prvi GOI egzogeno dodani GOI; i (c) najmanje jedan regulacijski element gdje je gen za otpornost na Tn operabilno vezan na prvi GOI i najmanje jedan regulacijski element, gdje stanica je sisavačka stanica, i, naznačen time što prvi GOI kodira laki lanac protutijela ili njegov fragment koji se veže na antigen, teški lanac protutijela ili njegov fragment koji se veže na antigen, ili Fc-fuzijski protein ili njegov fragment.
2. Vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu, naznačen time što nukleinska kiselina sadrži sisavački gen za otpornost na tunikamicin (Tn) koji kodira protein koji je najmanje 93% istovjetan aminokiselinskom slijedu u SEQ ID NO: 3, prvi gen od interesa (GOI) operabilno vezan na Tn-otpornost gen, te najmanje jedan regulacijski element, te gdje prvi GOI kodira laki lanac protutijela ili njegov fragment koji se veže na antigen, teški lanac protutijela ili njegov fragment koji se veže na antigen, ili Fc-fuzijski protein ili njegov fragment.
3. Izolirana stanica u skladu s patentnim zahtjevom 1, ili vektor u skladu s patentnim zahtjevom 2, naznačeni time što gen za otpornost na Tn sadrži nukleinskokiselinski slijed kojeg se bira iz skupine koju čine SEQ ID NO 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, te SEQ ID NO: 17.
4. Izolirana stanica u skladu s patentnim zahtjevom 1, ili vektor u skladu s patentnim zahtjevom 2, naznačeni time što se najmanje jedan regulacijski element bira iz skupine koju čine promotor, mjesto vezanja na ribosom, te pojačivač.
5. Izolirana stanica u skladu s patentnim zahtjevom 1, ili vektor u skladu s patentnim zahtjevom 2, naznačeni time što je prvi GOI operabilno vezan na promotor.
6. Izolirana stanica u skladu s patentnim zahtjevom 1, ili vektor u skladu s patentnim zahtjevom 2, naznačeni time što dodatno sadrže drugi egzogeno dodani gen od interesa (GOI), gdje drugi GOI može kodirati glikoprotein, gdje se glikoprotein može birati između lakog lanca protutijela ili njegovog fragmenta koji se veže na antigen, teškog lanca protutijela ili njegovog fragmenta koji se veže na antigen, Fc-fuzijskog proteina ili njegovog fragmenta, liganda, te receptora ili njegovog fragmenta koji se veže na ligand.
7. Postupak, naznačen time što se sastoji u: (a) unosu vektora koji sadrži nukleinsku kiselinu u populaciju sisavačkih stanica domaćina transficiranjem, gdje nukleinska kiselina sadrži sisavački gen za otpornost na tunikamicin (Tn) koji kodira protein koji je najmanje 93% istovjetan aminokiselinskom slijedu u SEQ ID NO: 3, prvi gen od interesa (GOI) operabilno vezan na Tn-otpornost gen, te najmanje jedan regulacijski element; (b) uzgoju stanične populacije iz koraka (a) u prisutnosti Tn, čime se dobije transficiranu stanicu koja sadrži nukleinska kiselina iz vektora.
8. Postupak proizvodnje rekombinantnog proteina od interesa (POI), naznačen time što se postupak sastoji u: (a) osiguravanju sisavačke stanice domaćina koja sadrži: (i) sisavački gen za otpornost na tunikamicin (Tn) koji kodira protein koji je najmanje 93% istovjetan aminokiselinskom slijedu u SEQ ID NO: 3, gdje je gen za otpornost na Tn egzogeno dodan u stanicu; (ii) prvi gen od interesa (GOI), gdje je prvi GOI egzogeno dodani GOI; i (iii) najmanje jedan regulacijski element, gdje je gen za otpornost na Tn operabilno vezan na prvi GOI i najmanje jedan regulacijski element; i (b) uzgoju stanice u prisutnosti Tn radi eksprimiranja POI iz GOI.
9. Postupak u skladu s patentnim zahtjevom 7 ili 8, naznačen time što: (i) gen za otpornost na Tn sadrži nukleinskokiselinski slijed kojeg se bira iz skupine koju čine SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, te SEQ ID NO: 17; (ii) najmanje jedan regulacijski element se bira iz skupine koju čine promotor, mjesto vezanja na ribosom, te pojačivač; (iii) prvi GOI je operabilno vezan na promotor; i/ili (iv) prvi GOI kodira glikoprotein, gdje se glikoprotein može birati između lakog lanca protutijela ili njegovog fragmenta koji se veže na antigen, teškog lanca protutijela ili njegovog fragmenta koji se veže na antigen, Fc-fuzijskog proteina ili njegovog fragmenta, liganda, te receptora ili njegovog fragmenta koji se veže na ligand.
10. Postupak u skladu s patentnim zahtjevom 7, naznačen time što vektor dodatno sadrži drugi egzogeno dodani gen od interesa (GOI), gdje drugi GOI može kodirati glikoprotein, gdje se glikoprotein može birati između lakog lanca protutijela ili njegovog fragmenta koji se veže na antigen, teškog lanca protutijela ili njegovog fragmenta koji se veže na antigen, Fc-fuzijskog proteina ili njegovog fragmenta, liganda, te receptora ili njegovog fragmenta koji se veže na ligand.
11. Postupak u skladu s patentnim zahtjevom 8, naznačen time što sisavačka stanica dodatno sadrži drugi egzogeno dodani gen od interesa (GOI), gdje drugi GOI može kodirati glikoprotein, gdje se glikoprotein može birati između lakog lanca protutijela ili njegovog fragmenta koji se veže na antigen, teškog lanca protutijela ili njegovog fragmenta koji se veže na antigen, Fc-fuzijskog proteina ili njegovog fragmenta, liganda, te receptora ili njegovog fragmenta koji se veže na ligand.
12. Postupak u skladu s bilo kojim od patentnih zahtjeva 7-11, naznačen time što je Tn u koncentraciji od najmanje 1 µg/ml po mogućnosti gdje je Tn u koncentraciji od 1 µg/ml 2,5 µg/ml ili 5 µg/ml.
13. Postupak u skladu s patentnim zahtjevom 7, naznačen time što se transficiranu stanicu dobije uzgojem stanične populacije iz koraka (b) u prisutnosti stupnjevito sve većih koncentracija Tn, ili postupak u skladu s patentnim zahtjevom 8, gdje se uzgoj sastoji u uzgoju u prisutnosti stupnjevito sve većih koncentracija Tn, gdje se uzgoj može sastojati u uzgoju uz prvu koncentraciju Tn od 1 µg/ml, uz daljnji uzgoj uz drugu koncentraciju Tn od 2,5 µg/ml ili 5 µg/ml.
14. Postupak u skladu s bilo kojim od patentnih zahtjeva 7-11 i 13, naznačen time što dodatno uključuje izdvajanje POI kojeg eksprimira GOI.
15. Izolirana stanica u skladu s bilo kojim od patentnih zahtjeva 1 i 3-6, ili postupak u skladu s bilo kojim od patentnih zahtjeva 7-14, naznačeni time što se stanicu: (a) bira iz skupine koju čine CHO-K1, COS-7, HEK293, tumorska stanica, limfocit, stanica mrežnice, te matična stanica; ili (b) CHO-K1 stanica.
HRP20210301TT 2014-08-19 2021-02-23 Djelotvorna selektivnost rekombinantnih proteina HRP20210301T1 (hr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462039416P 2014-08-19 2014-08-19
EP15833421.9A EP3183359B1 (en) 2014-08-19 2015-08-19 Efficient selectivity of recombinant proteins
PCT/US2015/045793 WO2016028838A1 (en) 2014-08-19 2015-08-19 Efficient selectivity of recombinant proteins

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HRP20210301T1 true HRP20210301T1 (hr) 2021-04-02

Family

ID=55347784

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HRP20210301TT HRP20210301T1 (hr) 2014-08-19 2021-02-23 Djelotvorna selektivnost rekombinantnih proteina

Country Status (27)

Country Link
US (4) US9732357B2 (hr)
EP (2) EP3901274A1 (hr)
JP (3) JP7115851B2 (hr)
KR (2) KR102406976B1 (hr)
CN (2) CN107075549B (hr)
AR (1) AR102333A1 (hr)
AU (3) AU2015305565B9 (hr)
BR (1) BR112017003074A2 (hr)
CA (1) CA2957036A1 (hr)
CY (1) CY1124079T1 (hr)
DK (1) DK3183359T3 (hr)
EA (1) EA035340B1 (hr)
ES (1) ES2849728T3 (hr)
HR (1) HRP20210301T1 (hr)
HU (1) HUE054069T2 (hr)
IL (3) IL287020B (hr)
LT (1) LT3183359T (hr)
MA (1) MA40371B1 (hr)
MX (2) MX2017002203A (hr)
MY (1) MY191745A (hr)
PL (1) PL3183359T3 (hr)
PT (1) PT3183359T (hr)
RS (1) RS61371B1 (hr)
SG (2) SG10201707859RA (hr)
SI (1) SI3183359T1 (hr)
TW (3) TWI777374B (hr)
WO (1) WO2016028838A1 (hr)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR102333A1 (es) 2014-08-19 2017-02-22 Regeneron Pharma Selectividad eficiente de proteínas recombinadas
EP3749754A4 (en) * 2018-02-08 2021-10-20 Applied Stemcell, Inc. PROCEDURE FOR SCREENING VARIANTS OF A TARGET
WO2021079909A1 (ja) 2019-10-23 2021-04-29 キヤノン株式会社 セラミックス物品の製造方法およびセラミックス物品

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4656134A (en) 1982-01-11 1987-04-07 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Gene amplification in eukaryotic cells
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US6077835A (en) 1994-03-23 2000-06-20 Case Western Reserve University Delivery of compacted nucleic acid to cells
KR970029803A (ko) 1995-11-03 1997-06-26 김광호 반도체 메모리장치의 프리차지 회로
US5972650A (en) 1997-06-26 1999-10-26 Brigham And Women's Hospital Tetracycline repressor regulated mammalian cell transcription and viral replication switch
US6281005B1 (en) 1999-05-14 2001-08-28 Copernicus Therapeutics, Inc. Automated nucleic acid compaction device
US6919183B2 (en) 2001-01-16 2005-07-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Isolating cells expressing secreted proteins
ATE496134T1 (de) 2002-03-29 2011-02-15 Xoma Technology Ltd Multigene vectoren und methoden für eine erhöhte expression von rekombinanten polypeptiden
US8673589B2 (en) 2002-05-29 2014-03-18 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Inducible eukaryotic expression system
US7384744B2 (en) * 2002-11-29 2008-06-10 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co., Kg Expression vector, methods for the production of heterologous gene products and for the selection of recombinant cells producing high levels of such products
JP2005027599A (ja) * 2003-07-09 2005-02-03 Nara Institute Of Science & Technology 植物由来遺伝子を用いた遺伝子導入植物の選抜法
EP1586585A1 (de) * 2004-04-14 2005-10-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Expressionssystem zur Herstellung von IL-15/Fc-Fusionsproteinen und ihre Verwendung
CA2671365C (en) 2006-12-07 2020-07-21 Dow Agrosciences Llc Use of dsm-2 gene as a selectable marker for selecting herbicidal resistant plants
PL2150617T3 (pl) 2007-06-04 2015-04-30 Regeneron Pharma Wzmocniona ekspresja i regiony stabilności
KR100927803B1 (ko) * 2007-11-23 2009-11-23 한국생명공학연구원 식물 형질전환체를 선별하기 위한 마커로서 gpt 유전자
ME03057B (me) * 2007-12-07 2019-01-20 Zymogenetics Inc Molekuli humanizovanih antitela specifični za il-31
WO2009131681A2 (en) * 2008-04-22 2009-10-29 Rutgers, The State University Hcv e2 construct compositions and methods
WO2010077297A1 (en) * 2008-12-09 2010-07-08 Halozyme, Inc. Extended soluble ph20 polypeptides and uses thereof
EP2674495A1 (en) 2012-06-14 2013-12-18 Sanofi CHO expression system
AR102333A1 (es) 2014-08-19 2017-02-22 Regeneron Pharma Selectividad eficiente de proteínas recombinadas

Also Published As

Publication number Publication date
HUE054069T2 (hu) 2021-08-30
SG10201707859RA (en) 2017-10-30
SG11201701121UA (en) 2017-03-30
US9732357B2 (en) 2017-08-15
TWI719945B (zh) 2021-03-01
ES2849728T3 (es) 2021-08-20
EP3183359B1 (en) 2020-12-16
TW201615833A (zh) 2016-05-01
IL295361A (en) 2022-10-01
EP3901274A1 (en) 2021-10-27
LT3183359T (lt) 2021-02-25
TWI777374B (zh) 2022-09-11
EA201790241A1 (ru) 2017-06-30
JP7260510B2 (ja) 2023-04-18
US20210340564A1 (en) 2021-11-04
IL295361B1 (en) 2023-04-01
AU2020205336B2 (en) 2022-11-10
AU2023200752B2 (en) 2024-02-29
US11085053B2 (en) 2021-08-10
CA2957036A1 (en) 2016-02-25
TW202246506A (zh) 2022-12-01
JP7115851B2 (ja) 2022-08-09
TWI832364B (zh) 2024-02-11
AU2020205336A1 (en) 2020-08-06
CN107075549B (zh) 2021-04-20
AU2015305565B2 (en) 2020-04-30
EP3183359A4 (en) 2018-04-04
AR102333A1 (es) 2017-02-22
JP2017525368A (ja) 2017-09-07
AU2015305565B9 (en) 2020-05-21
MY191745A (en) 2022-07-13
JP2020174681A (ja) 2020-10-29
SI3183359T1 (sl) 2021-03-31
BR112017003074A2 (pt) 2018-03-06
IL287020B (en) 2022-09-01
MX2017002203A (es) 2017-05-22
AU2023200752A1 (en) 2023-03-09
US20160053280A1 (en) 2016-02-25
WO2016028838A1 (en) 2016-02-25
US10457959B2 (en) 2019-10-29
DK3183359T3 (da) 2021-02-01
AU2015305565A1 (en) 2017-03-09
MA40371B1 (fr) 2021-03-31
RS61371B1 (sr) 2021-02-26
TW202124716A (zh) 2021-07-01
US20200063159A1 (en) 2020-02-27
KR102406976B1 (ko) 2022-06-10
KR20220080215A (ko) 2022-06-14
PT3183359T (pt) 2021-02-03
CN113293139A (zh) 2021-08-24
IL250531B (en) 2021-10-31
IL295361B2 (en) 2023-08-01
US20170335341A1 (en) 2017-11-23
KR102556383B1 (ko) 2023-07-17
KR20170055481A (ko) 2017-05-19
MX2021009154A (es) 2021-09-10
EP3183359A1 (en) 2017-06-28
IL250531A0 (en) 2017-03-30
CY1124079T1 (el) 2022-05-27
CN107075549A (zh) 2017-08-18
EA035340B1 (ru) 2020-05-29
PL3183359T3 (pl) 2021-08-02
IL287020A (en) 2021-12-01
MA40371A (fr) 2017-06-28
JP2023076667A (ja) 2023-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HRP20210301T1 (hr) Djelotvorna selektivnost rekombinantnih proteina
HRP20191409T1 (hr) Postupci i sredstva za proizvodnju heterodimernih ig-sličnih molekula
JP2019528077A5 (hr)
RU2017134741A (ru) Полипептиды транспозазы и их применение
ES2732907T3 (es) Procedimiento de expresión
RU2016114306A (ru) Антитела со встроенным в лёгкие цепи гистидином и генетически модифицированные отличные от человека животные для их получения
MX2011013544A (es) Plantas que tienen mejores rasgos relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas.
JP2012531208A5 (hr)
DK1583830T3 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af rekombinante polyklonale proteiner
HRP20161459T1 (hr) Protutijela koja se specifično vežu na receptor epidermnog čimbenika rasta
RU2018104703A (ru) Опухолеспецифичное антитело против egfr и его применение
US9458244B2 (en) Single chain multivalent binding protein compositions and methods
EP3167065B1 (en) Dual cistronic bacterial expression system
JP2016517691A5 (hr)
MY196874A (en) Humanized anti-basigin antibodies and the use thereof
RU2017129911A (ru) Биосенсорная система для быстрого обнаружения определяемых компонентов
RU2015129656A (ru) Гуманизированное моноклональное антитело, специфичное к синдекану-1
RU2017102986A (ru) Новые люциферазы и способы их использования
JP2017525368A5 (hr)
KR101972899B1 (ko) 소수성 테일 도메인이 제거된 먹장어 유래 VLRB 단백질과 C4bp 올리고머화 도메인이 연결된 융합 단백질 및 이의 용도
CN102719443B (zh) 一种羧基末端特异的抗人淀粉样蛋白单克隆抗体基因和其编码多肽及应用
JP2016506239A5 (hr)
FI3687287T3 (fi) Humanisoitua c1q-kompleksia ilmentävät jyrsijät
EA202091713A1 (ru) Биологический синтез аминокислотных цепей для получения пептидов и белков
KR101972894B1 (ko) 소수성 테일 도메인이 제거된 먹장어 유래 vlrb 단백질에 칠성장어 유래 vlrb 단백질의 c 말단 서열이 연결된 융합 단백질 및 이의 용도