FR2929511A1 - Nouveau principe actif stimulant la proliferation et/ou l'activite des fibroblastes. - Google Patents

Abstract

L'invention concerne un nouveau principe actif stimulant la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes ainsi que ses applications dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, en particulier dermatologique.En particulier, le principe actif selon l'invention comprend la combinaison d'au moins un extrait d'Hibiscus Abelmoscus et d'un extrait de soja contenant au moins des peptides.

Description

La présente invention concerne un nouveau principe actif stimulant la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes ainsi que ses applications dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, en particulier dermatologique. Etat de l'art Les fibroblastes sont des cellules qui permettent la synthèse de macromolécules de la matrice extracellulaire (MEC) dermique telles que le collagène, l'élastine et les glycosaminoglycanes (GAG). Ces io macromolécules sont essentielles à l'intégrité de la peau. Avec l'âge et/ou sous l'effet de différents facteurs tels que les facteurs climatiques et environnementaux, notamment le vent, la pollution, les rayons UV, la fumée de cigarette, et/ou les facteurs physiologiques, la matrice dermique a tendance à s'atrophier, caractéristique du vieillissement cutané. 15 Cette atrophie est due à une diminution du nombre de fibroblastes, à une réduction de leur taille ainsi qu'à une diminution du métabolisme global de la matrice et en particulier une diminution des synthèses de collagène, élastine et GAG. Il peut en résulter une désorganisation de la MEC et être responsable de : 20 - une perte des propriétés mécaniques de la peau et/ou des muqueuses, en particulier l'élasticité et la fermeté - une perte de capacité de régénérescence et/ou reconstruction dermique suite à une altération de l'intégrité dermique de la peau/ou des muqueuses. 25 Le vieillissement cutané a notamment des conséquences esthétiques et/ou inconfortables telles que le relâchement des tissus, la perte de fermeté, l'apparition de rides, de ridules, de sillons et/ou de vergetures, et/ou des cicatrices visibles inconfortables et/ou inesthétiques. i D'un point de vue médical, notamment en dermatologie, la peau et/ou les muqueuses peuvent être altérées, notamment suite à des inflammations, blessures, brulures ou opérations chirurgicales. Stimuler la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes contribue à la résorption des cicatrices afin qu'elles ne deviennent pas pathologiques, et/ou peut contribuer à éviter l'apparition d'inflammations telles que les gingivites. Cette stimulation présente un intérêt sur tout type de peaux et/ou muqueuses altérées et en particulier sur des peaux et/ou muqueuses présentant un vieillissement cutané. io La recherche de composés et/ou compositions capables de stimuler la prolifération des fibroblastes et/ou de leur activité est donc d'un grand intérêt tant dans les domaines cosmétiques pour la prévention et/ou le traitement cosmétique des manifestations inesthétiques et/ou inconfortables dues au vieillissement cutané, que dans les domaines is pharmaceutiques et en particulier dermatologiques pour prévenir et/ou traiter les pathologies associés au vieillissement et/ou les altérations de la MEC. La Demanderesse a déjà commercialisé un extrait de soja fermenté contenant des peptides, connu sous le nom de PhytokineTM et réputé pour 20 sa capacité à stimuler la prolifération des fibroblastes. Ce peptide de soja est également déjà connu pour son activité stimulant la synthèse de collagène, élastine et GAG, et utilisé en cosmétique pour son action sur la fermeté notamment dans des soins anti-âges ou amincissants et pour son action protectrice de la matrice et sur le renforcement de l'hydratation. Ce 25 produit PhytokineTM a également été décrit dans la demande de brevet EP1119344 B1 (Laboratoires Expanscience) pour son action en prévention et/ou traitement des vergetures. 2 La Demanderesse vient maintenant de découvrir que, de manière très inattendue et surprenante, cette capacité à stimuler la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes peut être encore augmentée de manière synergique par l'ajout d'un extrait d'Hibiscus Abe/moscus Les tests réalisés sur fibroblastes en monocouche démontrent notamment cette synergie (voir l'exemple 2 ci-après) Les extraits d'Hibiscus ont de manière très générale déjà été décrits dans l'art antérieur notamment pour leurs utilisations cosmétiques. Ainsi, un extrait d'Abelmoscus moschatus a été décrit pour sa capacité à io augmenter la teneur en acide hyaluronique de la peau (JP 10-029922, Shiseido). Un extrait aqueux d'Hibiscus Abe/moschus obtenu à partir de la plante entière a également été décrit pour ses propriétés amincissantes en cosmétique, plus particulièrement pour lutter contre la cellulite 15 (US5705170). En outre, la Demanderesse a déjà décrit dans la demande de brevet français déposée sous le numéro FR0654316 l'extrait d'Hibiscus Abe/moscus selon la présente invention pour sa capacité à protéger le facteur de croissance des fibroblastes ou FGF2 de la matrice extracellulaire contre sa dégradation et/ou sa dénaturation dans le but de restructurer la 20 matrice extracellulaire. Néanmoins, en soit, ledit extrait seul ne présente pas de capacité à stimuler la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes (voir l'exemple 2 ci-après). But de l'invention 25 L'invention a pour but de fournir de nouveaux principes actifs, et compositions stimulant la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes ainsi 3 que ses applications dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, en particulier dermatologique. En particulier, l'invention a pour but d'améliorer les propriétés d'un extrait de soja stimulant la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes.

L'invention concerne également de nouvelles applications d'un extrait d'hibiscus. Description de l'invention La présente invention a pour objet un nouveau principe actif, io notamment cosmétique, pharmaceutique, en particulier dermatologique ou nutraceutique, comprenant au moins un extrait d'Hibiscus Abelmoscus et un extrait de soja contenant au moins des peptides. La présente invention a également pour objet des compositions cosmétiques, pharmaceutiques en particulier dermatologiques ou 15 nutraceutiques comprenant ledit principe actif. La présente invention a également pour objet l'utilisation dudit principe actif pour stimuler la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes dans des applications cosmétiques ou pharmaceutiques et notamment dermatologiques ou nutraceutiques. 20 Enfin, la présente invention a pour objet l'utilisation d'un extrait d'Hibiscus Abelmoscus pour augmenter l'effet stimulant de la prolifération et/ou de l'activité des fibroblastes d'un extrait de soja contenant au moins des peptides. Selon la présente invention, l'extrait de soja est un extrait 25 contenant des peptides, de préférence obtenus par hydrolyse de protéines de soja. Avantageusement, l'extrait de soja est extrait de la graine de soja, et contient au moins des peptides et a été de préférence fermenté 4 par des microorganismes, éventuellement en milieu enrichi en sucres de fermentation. Avantageusement, l'extrait de soja est une peptone de soja. De manière préférentielle, la fermentation est réalisée par des bactéries lactiques notamment Lactobaci//us p/antarum ou Lactobaci//us paracasei et/ou par des levures, notamment du genre Saccharomyces, préférentiellement Saccharomyces cerevisiae. De manière préférentielle, les microorganismes sont ensuite éliminés de l'extrait selon les techniques classiques, notamment par microcentrifugation ou par filtration. De manière avantageuse, l'extrait io fermenté est ainsi filtré sur membrane à un seuil de coupure de 0, 45pm pour éliminer les microorganismes, et/ou est filtré sur membrane à un seuil de coupure de 0,22pm, pour effectuer une filtration stérilisante. Un tel extrait de soja a notamment été commercialisé sous le nom Phytokine TM par la Demanderesse, est notamment décrit dans le brevet 15 EP1119344 B1 (Laboratoires Expanscience). De manière particulièrement avantageuse, l'extrait de soja contenant des peptides, préférentiellement obtenu par fermentation contient 6 acides aminés majoritaires qui sont acide aspartique (Asp), acide glutamique (Glu), proline (Pro), glycine (Gly), alanine (Ala), leucine 20 (Leu), lesquels sont chacun présents préférentiellement à une teneur de 5%, de préférence 6% ou plus par rapport aux acides aminés totaux de l'extrait. De manière générale, les peptides du soja dans la composition utilisée selon la présente invention peuvent être tout peptide obtenu par 25 hydrolyse de protéines extraites du soja, selon des conditions opératoires connues de l'homme du métier, en d'autres termes tout hydrolysat de protéine du soja. De préférence, ces peptides du soja sont des peptides ayant subi en outre une fermentation par une souche de micro-organisme. 5 D'une manière générale, on obtient un peptide du soja fermenté en plaçant un peptide du soja dans un fermenteur en présence de glucose, de sels minéraux et d'une souche de micro-organisme donnée, dans des conditions contrôlées de température, de pH, d'oxygénation et de durée.

Après la fermentation, on obtient le peptide du soja fermenté par des opérations de séparation et de filtration classiques. Divers hydrolysats de protéines végétales fermentés sont commercialisés ainsi par le déposant. De préférence, les peptides du soja, fermentés ou non, dans la composition utilisée selon la présente invention, io ont un poids moléculaire compris entre environ 200 et environ 20000 Daltons, tel que mesuré par exemple par électrophorèse. Un extrait de soja contenant de tels peptides et particulièrement préféré selon l'invention est l'extrait de soja fermenté dénommé "Phytokine TM " De manière préférentielle, l'extrait de soja selon l'invention, en is particulier le produit Phytokine TM est utilisé en une quantité comprise entre 0.1% et 5% en poids de la composition finale. Une utilisation entre 1.25% et 3% en poids de la composition finale permet l'obtention de très bons résultats. L'extrait de soja contenant au moins des peptides, 20 préférentiellement fermenté, peut se présenter sous une forme sèche, notamment lyophilisée ou en suspension en solution aqueuse ou dans une solution hydroalcoolique. La plante Hibiscus Abe/moschus appartient à la famille Malvaceae, genre Hibiscus et est également connue sous le nom commun Ambrette. 25 Le solvant d'extraction et/ou de remise en suspension peut être tout solvant polaire pour autant qu'il permette d'obtenir essentiellement l'ensemble des composés actifs dans un extrait aqueux pour apporter les propriétés désirées dans le cadre de la présente invention. D'après les 6 essais réalisés, l'extrait d'Hibiscus Abe/moschus est un extrait aqueux, préférentiellement obtenu par extraction à température ambiante (environ 20°C à environ 30°C) ou à température comprise entre 35 et 80 °C ou hydroalcoolique, de préférence hydroglycolique d'Hibiscus Abe/moschus Parmi les extraits hydroglycoliques, un solvant d'extraction du type eau/glycol est préféré. Un mélange eau/butylène glycol est particulièrement préféré. Parmi les extraits hydroalcooliques non hydroglycoliques, un solvant eau/méthanol ou eau/éthanol est particulièrement préféré. io Les proportions du mélange eau/alcool, préférentiellement glycol peuvent varier comme le sait l'Homme du métier. Les proportions eau/alcool sont préférentiellement comprises entre 10/90 à 90/10, et par exemple entre 50/50 à 80/15. De manière préférentielle, l'extrait est obtenu à partir de la feuille is ou de la graine Hibiscus Abe/moschus, préférentiellement de la graine. Ledit extrait d'Hibiscus est obtenu à partir de 1 à 10% de la plante ou partie de la plante à l'état sec par rapport au poids de la solution totale. L'extrait d'Hibiscus Abe/moscus peut être utilisé à une quantité comprise entre 0.1% et 5% en poids de la composition finale. De très 20 bons résultats sont obtenus aux quantités comprises entre 1 et 3% en poids de composition finale et préférentiellement à 2.25%. Un tel produit est également décrit dans la demande de brevet déposée sous le numéro FR0654316. L'extrait d'Hibiscus Abelmoscus peut se présenter sous une forme 25 sèche, notamment lyophilisée ou en suspension en solution aqueuse ou dans la solution hydroalcoolique précédemment décrite. De manière particulièrement avantageuse, l'extrait d'Hibiscus Abelmoscus contient 5 acides aminés majoritaires qui sont Arginine, 7 2929511 s Alanine, Valine, Leucine et Isoleucine, lesquels représentent chacun au moins 5%, de préférence 6% ou plus de 6% des acides aminés totaux de l'extrait. Selon un mode de réalisation avantageux, le principe actif 5 comprend au moins un extrait d'HibiscusAbelmoscuset un extrait de soja, préférentiellement fermenté, contenant au moins des peptides selon un ratio (extrait d'Hibiscus Abelmoscus/extrait de soja) compris entre 1/1 et 1/5, préférentiellement environ 1/2. Le principe actif peut être obtenu par simple mélange de l'extrait io d'Hibiscus Abelmoscus et de l'extrait de soja fermenté contenant au moins des peptides. Le principe actif selon l'invention peut se présenter sous toute forme appropriée à son application sur la peau et/ou les muqueuses. De manière préférentielle, il se présente sous forme de solution aqueuse ou is dans la solution hydroalcoolique précédemment décrite. Selon un mode de réalisation avantageuse, le principe actif se présente sous forme liquide et est incorporé dans un patch, notamment un patch liquide. Un patch liquide particulièrement approprié à cette fin est notamment constitué par un gel aqueux obtenu par l'association de 20 macromolécules de haut poids moléculaire qui sont des polymères capables de former un maillage filmogène à la surface de la peau. Les polymères utiles à la réalisation du patch peuvent être alors choisis parmi les polysaccharides, les protéines à effet filmogène et leurs mélanges. Parmi les polysaccharides, on pourra notamment utiliser les gommes de 25 préférence la gomme d'acacia, et les alginates notamment sous forme de sels de sodium, potassium, calcium, magnésium de l'acide alginique et préférentiellement sous forme d'alginates de sodium. Parmi les collagènes, on utilisera préférentiellement le collagène marin, préférentiellement ceux s décrits dans les brevets FR2678624 et FR2801314 déposé au nom de la Demanderesse (anciennement COLETICA). Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux, les polymères utilisés pour la réalisation du patch sont la les alginates de sodium et la gomme d'acacia et/ou le collagène marin. Un tel patch est en particulier connu sous le nom de Micropatch TM, décrit dans les brevets FR2678624 et FR2801314 et commercialisé par la Demanderesse. La réalisation d'un tel patch est notamment décrite dans l'exemple 7. Le principe actif selon l'invention seul ou en combinaison avec d'autres actifs, notamment la sérine est alors io préférentiellement ajouté dans le patch à une concentration comprise entre 10 et 90%, de préférence entre 1 et 50%. Ledit patch est ensuite préférentiellement utilisé à une teneur de 1 à 5% en poids dans la composition finale. Selon un autre mode de réalisation particulièrement avantageux, le is principe actif selon l'invention est encapsulé dans un véhicule cosmétique et/ou dermatologique approprié pour l'application topique. Il peut alors s'agir de nanoencaspulation, préférentiellement de liposomes, préférentiellement liposomes cationiques, et encore préférentiellement s'ouvrant sous UV. Préférentiellement, il s'agit des véhicules décrits dans 20 les brevets FR8901221, FR9202912, FR934332, FR2808691, FR0216637, FR2870741 déposés au nom de la Demanderesse (anciennement COLETICA), notamment ceux résultant de l'association de collagène et GAG marins, association d'alginates de propylène glycol et de polysaccharides d'acacia, association de 13-cyclodextrine lipophilisée à 25 l'acide laurique, association de polymères de caroube, blé et acacia, association de lécithine de soja et protéines de soja quaternisées. La réalisation d'un tel liposome est notamment décrite dans l'exemple 3. 9 2929511 io La présente invention a également pour objet l'utilisation du principe actif pour la réalisation de composition cosmétique en combinaison avec un véhicule cosmétique approprié pour l'application topique. 5 Les compositions cosmétiques selon l'invention comprennent avantageusement une quantité d'extrait de soja, préférentiellement fermenté, contenant au moins des peptides compris entre 0.1% et 5%, de préférence à 1.25%, en combinaison avec au moins une quantité d'extrait d'HibiscusAbelmoscuscomprise entre 0.1% et 5% de préférence 2.25%. io Avantageusement, elles contiennent d'autres actifs d'intérêt cosmétique notamment, les agents classiques des compositions anti-âge notamment ceux choisis parmi l'acide hyaluronique, l'acide ascorbique, le rétinol, les acides a-hydroxylés (AHA) et/ou l'acide ursolique. Selon un mode de réalisation avantageux, elles contiennent au moins is l'un des agents suivants : - un agent stimulant la synthèse de fibronectine, en particulier un extrait de mais, un tel extrait étant notamment commercialisés par la Demanderesse sous le nom Deliner TM; - un agent stimulant la synthèse de laminine, en particulier un 20 extrait de malt modifié par biotechnologie, un tel extrait étant notamment commercialisé par la Demanderesse sous le nom Basal ine TM ; - un agent stimulant l'expression et/ou l'activité de la Hyaluronane synthase 2 (HAS2) tels que les extraits végétaux décrits dans la 25 demande de brevet FR2 893 252 Al et en particulier un extrait aqueux de Galanga (Alpinia ga/anga) ; io Il - un agent stimulant la synthèse de lysyl oxydase like (LOXL) tel que ceux décrits dans la demande de brevet FR2855968, et en particulier l'extrait d'aneth ; - un agent stimulant la synthèse d'ATP intracellulaire, notamment un 5 extrait d'algue Laminaria digitata; - - un agent protégeant la dégradation de FGF2. L'invention couvre l'utilisation concomitante, ou séquentielle, d'un extrait d'Hibiscus Abelmoscus et d'un extrait de soja contenant au moins des peptides, préférentiellement fermenté, tels que définis précédemment, io notamment pour augmenter l'activité de stimulation de la prolifération et/ou de l'activité des fibroblastes de l'extrait de soja. Par utilisation séquentielle , on entend l'utilisation en séparée et décalée des extraits d'Hibiscus Abelmoscus et de soja, éventuellement selon une séquence précise, comme une séquence alternée des extraits, is avec éventuellement une séquence comprenant l'utilisation successive du même extrait. Une séquence est typiquement déterminée par l'homme de l'art. Par utilisation concomitante , on entend l'utilisation séparée et simultanée des extraits d'HibiscusAbelmoscuset de soja. 20 Ainsi l'invention couvre un kit de composition et son utilisation, ledit kit comprenant d'une part une composition comprenant un extrait d'Hibiscus Abelmoscus et d'autre part une composition comprenant un extrait de soja contenant au moins des peptides, tels que définis précédemment. Ces compositions peuvent être conditionnées dans un kit 25 unique ou de manière séparée, par exemple de manière identique, complémentaire, ou indépendante. Ces compositions peuvent se présenter formulées de manière identique ou différente. Selon un mode avantageux, l'extrait de soja contenant au moins des peptides peut être formulé dans ii un patch, préférentiellement un patch liquide tel que décrit précédemment. La présente invention porte aussi sur de telles compositions contenant soit l'extrait de soja contenant au moins des peptides soit l'extrait d'Hibiscus Abe/moscus et considérées indépendamment brevetables. La présente invention a également pour objet l'utilisation du principe actif pour stimuler la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes, notamment normaux et humains et notamment pour stimuler la synthèse des macromolécules de la matrice extracellulaire dermique, en particulier lo de l'élastine, du collagène et des GAG. Le principe actif permet en outre de stimuler le renouvellement de la matrice extracellulaire, et en particulier la matrice dermique et de redensifier le derme. Selon l'invention, le principe actif, éventuellement sous la forme des compositions cosmétiques précédemment décrites, est particulièrement 1s utile pour le soin cosmétique et/ou le traitement cosmétique des effets du vieillissement cutané notamment des manifestations inesthétiques et/ou inconfortables du vieillissement cutané telles que le relâchement des tissus, la perte de fermeté, l'apparition de rides, de ridules, de sillons et/ou de vergetures, et/ou des cicatrices visibles inconfortables et/ou 20 inesthétiques. Le principe actif dans ses applications cosmétiques éventuellement sous forme des compositions cosmétiques convient particulièrement pour protéger la peau contre le vieillissement cutané naturel et/ou provoqué par les facteurs climatiques et environnementaux, notamment le vent, la 25 pollution, les rayons UV, la fumée de cigarette, et/ou de facteurs physiologiques notamment le stress. L'invention concerne également une méthode de traitement ou de soin cosmétique, d'un sujet en ayant besoin, ladite méthode comprenant 12 l'application topique ou l'administration, de préférence par voie orale, d'une composition cosmétique selon la présente invention à ce sujet. En particulier procédé de soin cosmétique dans lequel le principe actif et/ou la composition cosmétique selon l'invention sont utilisés par application topique pour stimuler la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes, notamment pour le soin cosmétique et/ou le traitement cosmétique des effets liés au vieillissement cutané, notamment des manifestations inesthétiques et/ou inconfortables du vieillissement cutané, tels que le relâchement des tissus, la perte de fermeté des tissus, l'apparition de rides, de ridules, de sillons et/ou pour le soin et/ou le traitement cosmétique de vergetures, et/ou des cicatrices. En particulier, la méthode de traitement ou de soin est destinée à protéger la peau contre les effets du vieillissement cutané, et en particuliers les effets cités dans la présente invention. 1s Selon un mode de réalisation, la méthode de traitement ou de soin cosmétique comprend l'utilisation concomitante, séquentielle des extraits de l'invention, telle que définie précédemment. Avantageusement le sujet en ayant besoin est un sujet choisi parmi une population d'âge moyen supérieur à 30 ans. 20 La présente invention a également pour objet une composition pharmaceutique et en particulier dermatologique contenant ledit principe actif éventuellement en combinaison avec un véhicule pharmaceutique, notamment dermatologique approprié à sa voie d'administration. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention comprennent 25 avantageusement une quantité d'extrait de soja contenant au moins des peptides fermentés compris entre 0.1% et 5%, de préférence à 1.25%, en combinaison avec au moins une quantité d'extrait d'Hibiscus Abelmoscus comprise entre 0.1% et 5% de préférence 2.25%. Avantageusement, elles 13 contiennent d'autres actifs et/ou excipients et/ou additifs d'intérêt pharmaceutiques notamment dermatologiques tels que des agents aux propriétés : - cicatrisantes tels que le panthénol et ses dérivés, par exemple l'ethyl 5 panthenol, l'aloe vera, l'acide pantothenique et ses dérivés, l'allantoine, le bisabolol, et le dipotassium de glycyrrhizinate, - anti-inflammatoires tels que les anti-inflammatoires stéroïdiens et non stéroïdiens, en particulier les inhibiteurs de production de cytokines et chemokines, de cycloxygénase, de Nitrique Oxide (NO) et NOS Nitrique 10 Oxide Synthase. A titre d'exemple de produits anti-inflammatoires, on peut citer les extraits de Ginkgo biloba, les terpènes trilactone tels que les ginkgolides, notamment ginkgolide B et Bilobalide connus pour leurs propriétés antagonistes du facteur d'activation plaquettaire (PAF). Selon l'invention, le principe actif est utile pour la réalisation de 1s compositions pharmaceutiques notamment dermatologiques, préférentiellement destinées à la prévention et/ou au traitement des cicatrices et/ou inflammations telles que les gingivites. Les compositions pharmaceutiques notamment dermatologiques sont préférentiellement destinées au traitement des peaux dont le derme 20 est au moins partiellement altéré notamment chez les sujets ayant subi une opération chirurgicale, brulés et/ou blessés. Ce traitement permet de stimuler la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes, pour stimuler la réparation tissulaire et/ou la reconstruction dermique. L'invention concerne également une méthode de traitement ou de 25 soin pharmaceutique, de préférence dermopharmaceutique, d'un sujet en ayant besoin, ladite méthode comprenant l'application topique ou l'administration, de préférence par voie orale, d'une composition 14 pharmaceutique, de préférence dermopharmaceutique, selon la présente invention. En particulier, la méthode de traitement ou de soin pharmaceutique, de préférence dermopharmaceutique, est destinée aux applications citées dans la présente invention. Selon un mode de réalisation, la méthode de traitement ou de soin pharmaceutique, de préférence dermopharmaceutique, comprend l'utilisation concomitante, séquentielle des extraits de l'invention, telle que définie précédemment. lo Avantageusement le sujet en ayant besoin est un sujet choisi parmi une population d'âge moyen supérieur à 30 ans ou ayant une peau dont le derme est au moins partiellement altéré, notamment comme détaillé ci-dessus. La composition peut contenir tout solvant approprié et/ou tout 1s véhicule approprié et/ou tout excipient approprié, éventuellement en combinaison avec d'autres composés d'intérêts. De ce fait, pour les compositions selon l'invention, l'excipient contient par exemple au moins un composé choisi parmi le groupe consistant en les conservateurs, les émollients, les émulsifiants, les 20 tensioactifs, les hydratants, les épaississants, les conditionneurs, les agents matifiants, les stabilisants, les antioxydants, les agents de texture, les agents de brillance, les agents filmogènes, les solubilisants, les pigments, les colorants, les parfums et les filtres solaires. Ces excipients sont de préférence choisis parmi le groupe consistant en les acides aminés et leurs 25 dérivés, les polyglycérols, les esters, les polymères et dérivés de cellulose, les dérivés de Lanoline, les phospholipides, les lactoferrines, les lactoperoxidases, les stabilisants à base de sucrose, les vitamines E et ses dérivés, les cires naturelles et synthétiques, les huiles végétales, les 15 triglycérides, les insaponifiables, les phytosterols, les esters végétaux, les silicones et ses dérivés, les hydrolysats de protéines, l'huile de Jojoba et ses dérivés, les esters lipo/hydrosolubles, les betaines, les aminoxides, les extraits de plantes les esters de Saccharose, les dioxydes de Titane, les glycines, et les parabens, et encore de préférence parmi le groupe consistant en le butylène glycol, le stéareth-2, le stéareth-21, le glycol-15 stéaryl éther, le cétéaryl alcool, le phénoxyéthanol, le méthylparaben, l'éthylparaben, le propylparaben, le butylparaben, le butylène glycol, les tocopherols naturels, la glycérine, le dihydroxycetyl sodium phosphate, l'isopropyl hydroxycétyl éther, le glycol stéarate, le triisononanoin, l'octyl cocoate, le polyacrylamide, l'isoparaffine, le laureth-7, un carbomer, le propylène glycol, le glycérol, le bisabolol, une diméthicone, l'hydroxyde de sodium, le PEG 30-dipolyhydroxystérate, les caprique/caprylique triglycérides, le cétéaryl octanoate, le dibutyl adipate, l'huile de pépin de raisin, l'huile de jojoba, le sulfate de magnésium, I'EDTA, une cyclométhicone, la gomme de xanthane, l'acide citrique, le lauryl sulfate de sodium, les cires et les huiles minérales, l'isostéaryl isostéarate, le dipélargonate de propylène glycol, l'isostéarate de propylène glycol, le PEG 8, Beeswax, les glycérides d'huile de coeur de palme hydrogénée, les glycérides d'huile de palme hydrogénée, l'huile de lanoline, l'huile de sésame, le cétyl lactate, le lanoline alcool, l'huile de ricin, le dioxyde de titane, le lactose, le saccharose, le polyéthylène basse densité, une solution isotonique salée. Avantageusement, les compositions précitées sont formulées sous une forme choisie parmi le groupe consistant en une solution, aqueuse ou huileuse, une crème ou un gel aqueux ou un gel huileux, notamment en pot ou en tube, notamment un gel douche, un shampoing ; un lait ; une émulsion, une microémulsion ou une nanoémulsion, notamment huile- 16 dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple ou siliconée ; un masque ; une lotion, notamment en flacon de verre, de plastique ou en flacon doseur ou en aérosol ; une ampoule ; un savon liquide ; un pain dermatologique ; une pommade ; une mousse ; un produit anhydre, de préférence liquide, pâteux ou solide, par exemple sous forme de bâtonnet notamment sous forme de rouge à lèvre ou de comprimés. Selon la présente invention, on entend par "application topique" l'application de la composition sur la surface de la peau et/ou les muqueuses, notamment muqueuses gingivales, notamment par application io directe ou par vaporisation. Les termes "véhicule cosmétique ou dermatologique approprié", utilisés ici, signifient que la composition ou les composants de celle-ci sont adaptés à l'utilisation en contact avec la peau humaine sans toxicité, incompatibilité, instabilité, réponse allergique, ou leurs équivalents, indue. is De nombreux ingrédients cosmétiquement actifs sont connus par l'homme du métier pour améliorer la santé et/ou l'apparence physique de la peau. L'homme du métier sait formuler les compositions cosmétiques ou dermatologiques pour obtenir les meilleurs effets. D'autre part les composés décrits dans la présente invention peuvent avoir un effet de 20 synergie lorsqu'ils sont combinés les uns aux autres. Ces combinaisons sont également couvertes par la présente invention. Le CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992) décrit différents ingrédients cosmétiques et pharmaceutiques utilisés couramment dans l'industrie cosmétique et pharmaceutique, qui sont en particulier adaptés à une 25 utilisation topique. Des exemples de ces classes d'ingrédients comprennent, sans en être limité les composés suivants: abrasif, absorbants, composé à but esthétique tel que les parfums ; les pigments ; les colorants ; les huiles essentielles ;les astringents tels que l'huile de 17 25 clou de girofle, menthol, camphre, l'huile d'eucalyptus, eugénol, menthyl lactate, distillat d'hamélis ; les agents anti-acné ; les agents antifloculants ; les agents antimousse ; les agents antimicrobiens tels que iodopropyl butylcarbamate ; les antioxydants tels que l'acide ascorbique; les liants ; les additives biologiques ; les agents tampon ; les agents gonflants ; les agents chélatants ; les additifs ; les agents biocides ; les dénaturants ; les épaississants ; et les vitamines ; les matériaux formant des films ; les polymères ; les agents opacifiants ; les ajusteurs de pH ; les agents réducteurs ; les agents de conditionnement tels que les io humectants, et les dérivés ou équivalents de ceux-ci.

La figure 1 représente la répartition en acides aminés de plusieurs lots d'extrait d'HibiscusAbe/moschusobtenu selon l'exemple 1.2)a).

is Les exemples ci-après font partie intégrante de la présente invention et servent à l'illustrer sans néanmoins en constituer une limitation. Toute caractéristique apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque à partir de la description prise dans son ensemble, incluant les exemples, fait partie intégrante de 20 l'invention dans sa fonction et dans sa généralité. EXEMPLES : Exemple 1 : Réalisation du principe actif selon l'invention 1.1) Un 1er produit extrait de soja est réalisé. Une peptone de graine de soja est fermentée par un microorganisme Lactobacillus. Un tel produit est commercialisé par la Demanderesse sous le nom Phytokine TM, connu et décrit dans le brevet EP1119344 B1 (Laboratoires Expanscience). 18 Ce produit présente un poids moléculaire moyen d'environ 800 Daltons et présente l'aminogramme suivant : Tableau 1 : Aminogramme de l'extrait de soja contenant au moins des 5 peptides fermentés : Nombre de résidus pour 100 Hyp 0,00 Asp 12,13 Thr 3,04 Ser 3,62 Glu 18,15 Pro 6,78 Gly 8,84 Ala 9,97 Cys N D Val 5,37 Met 1,30 IIe 4,42 Leu 7,42 Tyr 2,10 Phe 3,60 His 1,81 Lys 5,71 Trp N D Arg 5,73 I3-Ala ND ND = Non déterminé

1.2) Plusieurs exemples d'obtention d'extrait d'Hibiscus Abe/moschus 10 (ambrette) sont décrits ci-après : a) Un extrait d'Hibiscus Abelmoschus est obtenu par extraction à partir de la graine. Cet extrait est réalisé à partir des graines broyées à 5% (p/p) dans l'éthanol à reflux ou dans un mélange eau 75%/25%, 19 préférentiellement dans l'eau. La macération est réalisée 1 nuit à 4°C ou température ambiante ou préférentiellement 2 heures à température ambiante. La solution est ultrafiltrée sur filtres céramiques à différents seuil de 5 coupure et notamment à 0.45pM.

Le produit obtenu présente une distribution en acides aminés libres particulièrement caractéristique qui est décrite dans la figure 1, et qui représente la répartition en acides aminés de plusieurs lots d'extrait 10 d'Hibiscus Abe/moschus obtenu selon 1.2)a) (répartition en % en poids d'acide aminé par rapport au poids total des acides aminés du lot considéré). Plusieurs lots industriels d'un tel produit ont été étudiés et 5 acides aminés is majoritaires sont observés de façon significative pour chaque lot à savoir Arginine, alanine, valine, leucine et isoleucine.

b) Un extrait d'Hibiscus Abe/moschus hydroalcoolique est réalisé à partir des graines broyées à 5 % (p/p) dans de l'éthanol à reflux. L'extraction 20 est réalisée pendant 1 heure puis la solution est filtrée, l'éthanol éliminé, et le résultat est solubilisé à 5% (p/p) dans un mélange eau/glycol (75/25) puis ultrafiltré sur filtre céramiques à différents seuils de coupure, et enfin filtrée à 0,45pm.

25 c) Un extrait d'Hibiscus Abe/moschus hydroglycolique est réalisé dans un mélange eau (75%)/ butylène glycol (25%) préférentiellement à partir des graines broyées à 5% (p/p). La macération est réalisée pendant 1 nuit à 20 4°C puis la solution est ultrafiltrée sur filtre céramiques à différents seuils de coupure, et enfin filtrée à 0,45pm.

d) Un extrait d'Hibiscus Abe/moschus aqueux est réalisé dans de l'eau préférentiellement à partir des graines broyées à 5% (p/p). La macération est réalisée pendant 1 nuit à 4°C puis la solution est ultrafiltrée sur filtre céramiques à différents seuils de coupure, et enfin filtrée à 0,45pm. 1.3) Le principe actif est alors obtenu par simple mélange des deux lo extraits de soja et d'HibiscusAbe/moschus. Exemple 2 : Etude de la prolifération cellulaire sur fibroblastes humains normaux en monocouche. 15 1) Matériel et méthodes Des fibroblastes dermiques humains normaux obtenus à partir d'une plastie abdominale d'un donneur de 34 ans, ont été ensemencés à faible densité dans des plaques de culture 6 puits. Ils ont été cultivés dans du milieu DMEM (Dubbelco Modified Eagle Medium) pendant 48 heures en 20 absence (témoin non traité) ou en présence des produits à tester à différentes concentrations. Les produits testés sont le produit PhytokineTM (selon l'exemple 1.1), l'extrait d'Hibiscus Abe/moschus (ci-après Ext. d'Hibiscus) (selon l'exemple 1.2 a), et leur combinaison. 25 A sub-confluence, les cellules ont été traitées selon les conditions ci-dessous : - Non traité (sans produit) - Témoin positif (10% sérum de veau foetal) 3o -PhytokineTM 1,25% 21 - Ext. d'Hibiscus 0,125% ou 0,25% - PhytokineTM 1,25% + Ext. d'Hibiscus 0,125% - PhytokineTM 1,25% + Ext. d'Hibiscus 0,25% Après 48 heures d'incubation à 37°C, le milieu a été éliminé puis un dosage au p-nitrophényl phosphate (pnpp) a été réalisé. Ce dosage est basé sur la transformation du p-nitrophényl phosphate (pnpp) en pnitrophénol par les phosphatases acides intracellulaires des cellules viables. L'absorbance du p-nitrophenol à 405nm est directement io proportionnelle au nombre de cellules viables contenues dans les puits de culture et donc par voie de conséquence permet d'évaluer la prolifération cellulaire comparativement à des puits non traités. Pour cela, après élimination du milieu, les cellules ont été rincées puis mise en présence d'un tampon contenant 5mM de p-nitrophenyl 15 phosphate (Sigma, France). Après incubation à 37°C dans une atmosphère contenant 5% de CO2, la réaction a été stoppée par ajout de NaOH 1N. L'absorbance des milieux réactionnels à 405 nm a été alors déterminée à l'aide d'un lecteur de plaque (Victor V, Perkin E/mer, Finlande). 20 L'hydrolyse non enzymatique du p-nitrophényl phosphate a été déterminée lors de chaque expérience sur des puits ne contenant pas de cellules (blanc).

2) Résultats 25 Pour chaque produit testé les résultats ont été exprimés en pourcentage de prolifération cellulaire (ci-après prolif. cell.) par rapport au témoin non traité. Toutes les mesures sont réalisées en sextuplate (n=6). 22 5 Les résultats ont été exprimés en moyenne +/- Ecart-Type (EC). Les statistiques entre les groupes ont été réalisées par un test One way Anova/Dunnett test (* :p<0.05, ** :p<0.01, *** :p<0.001). Les résultats obtenus sont décrits dans le tableau ci-dessous : Tableau 2 : stimulation de la prolifération cellulaire des fibroblastes : Condition Moyenne Ecart- Prolif cell. Prolif. cell. type (%)-vs (%)-vs témoin PhytokineTM Non traité 0,267 0,005 100 - Témoin positif 0,441 0,019 165 - p <0.001 PhytokineTM 0,359 0,014 134 100 1,25% p <0.001 Ext. d'Hibiscus 0,257 0,010 96 - 0,125% ns Ext. d'Hibiscus 0,281 0,008 105 - 0,25% p <0.01 PhytokineTM 0,381 0,016 143 106 Ext. d'Hibiscus p<0.001 p<0.05 0,125% PhytokineTM 0,439 0,017 165 122 Ext. d'Hibiscus p<0.001 p<0.001 0,25% Il a été observé que le témoin positif d'expérience constitué par 10% de sérum de voeu foetal a stimulé la prolifération des fibroblastes de +165%. io C'est le résultat attendu qui valide cette expérience. L'ajout de PhytokineTM 1.25% seule a stimulé la prolifération cellulaire de +134% (p<0.001) de façon significative par rapport au témoin non traité. Ce résultat était aussi attendu car PhytokineTM est connu pour stimuler dans ces conditions expérimentales la prolifération des fibroblastes. 15 L'ajout d'extrait d'Hibiscus Abe/moschus 0.125% seul n'a pas stimulé la prolifération des fibroblastes. 23 L'ajout d'une quantité d'extrait d'Hibiscus Abelmoschus supérieure (0.25%) a stimulé faiblement la prolifération des fibroblastes (+105%). La combinaison selon la présente invention de PhytokineTM + l'extrait d'Hibiscus Abelmoschus 0,125% a stimulé la prolifération de façon significative non seulement par rapport au témoin non traité (+143%) mais également par rapport à PhytokineTM utilisé seul (+ 106% vs PHK). La combinaison selon la présente invention PhytokineTM + l'extrait d'Hibiscus Abelmoschus 0,25% a stimulé de manière très significative la prolifération non seulement par rapport au témoin non traité (+165%) mais aussi par rapport à PhytokineTM (+122%) utilisé seul.

Ainsi, une réelle synergie d'action est observée par l'utilisation de la combinaison selon l'invention, en particulier PhytokineTM et l'extrait d'Hibiscus Abelmoschus sur la prolifération des fibroblastes humains is normaux. Exemple 3 : compositions selon l'invention On procède selon les méthodes connues de l'homme de l'art pour 20 mélanger ensemble les différentes parties A, B, C, D, E, ou F pour préparer une composition selon la présente invention. Les produits de l'invention représentent les principes actifs mentionnés dans la présente invention, notamment le principe actif obtenu par mélange du produit PhytokineTM préparé comme indiqué dans l'exemple 25 1.1) et l'extrait d'Hibiscus Abelmoschus préparé selon l'exemple 1.2 a), b), c), ou d), et de préférence selon l'exemple 1.2a).

Les produits de l'invention peuvent également se présenter sous une forme de liposomes contenant 5% de lécithine de soja et incorporant une 24 solution de soja quaternisé (600 g en final) obtenus selon le mode de réalisation suivant : 30 g de lécithine de soja, 12 g de solution de soja quaternisé, 7.5 g d'extrait de soja obtenu selon l'exemple 1.1) et 1.5 g d'extrait d'Hibiscus Abe/moschus préparé selon l'exemple 1.2 a) sont introduits dans un pilulier et dilué dans 447 g d'eau pure de laboratoire. Après agitation magnétique pendant 10 minutes à température ambiante, le mélange est homogénéisé violemment pendant 10 minutes, en obtenant ainsi une solution liposomale dans laquelle les liposomes ont une dimension moyenne pouvant varier entre 100 et 800 nanomètres selon les conditions exactes de l'homogénéisation. La suspension est ensuite laissée sous agitation douce pendant 1 heure. 90 g de butylène glycol, 6 g de phenoxyethanol et 6 g d'hydroxyéthylcellulose (agent de gélification) sont ensuite ajoutés.

Formulation 3a : Eau qsp 100 Butylene Glycol 2 Glycerine 3 Sodium Dihydroxycetyl 2 Phosphate, Isopropyl Hydroxycetyl Ether Glycol Stearate SE 14 Triisononaoin 5 Octyl Cocoate 6 Butylene Glycol, 2 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, pH ajusté à 5,5 Produits de l'invention 0,01 ù 10 A B C D 25 26 Formulation 3b : A Eau qsp 100 B Butylene Glycol 2 Glycerine 3 Polyacrylamide, Isoparafin, 2,8 Laureth-7 Butylene Glycol, 2 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben ; 2 Phenoxyethanol, 0,5 Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben D Butylene Glycol 0,01ù10% Produits de l'invention Formulation 3c : 0,50 A Carbomer Propylene Glycol 3 Glycerol 5 Eau qsp 100 B Octyl Cocoate 5 Bisabolol 0,30 Dimethicone 0,30 C Sodium Hydroxide 1,60 D Phenoxyethanol, 0,50 E Methylparaben, 0,30 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Parfum F Produits de l'invention 0,01ù10% 26 A B C D E Exemple 4 de l'invention : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type eau dans huile PEG 30 ù 3 dipolyhydroxystearate Capric Triglycerides Cetearyl Octanoate Dibutyl Adipate Grape Seed Oil Jojoba Oil Phenoxyethanol, Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Glycerine Butylene Glycol Magnesium Sulfate EDTA Eau Cyclomethicone Dimethicone Pa rfu m Produits de l'invention Exemple 5 selon l'invention : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de type shampoing ou gel douche Xantham Gum 0,8 Eau qsp 100 Butylene Glycol, 0,5 Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben Phenoxyethanol, 0,5 Methylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Citric acid 0,8 Sodium Laureth Sulfate 40,0 Produit de l'invention 0,01 ù 10 0/0 A B C D E 3 4 3 1,5 1,5 0,5 3 3 0,5 0,05 qsp 100 1 1 0,3 0,01ù10% 27 Exemple 6 de l'invention : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de gels aqueux (contours de l'oeil, amincissants, etc.) Eau qsp 100 Carbomer 0,5 Butylene Glycol 15 Phenoxyethanol, Methylparaben, 0,5 Propylparaben, Butylparaben, Ethylparaben Produits de l'invention 0,01 ù 10 0/0 Exemple 7 de l'invention : Utilisation des produits de l'invention dans une formulation de patch liquide: 20g d'extrait de soja obtenu selon l'exemple 1.1) et 20g d'extrait d'Hibiscus Abe/moschus préparé selon l'exemple 1.2 a) sont mélangés à 38g d'eau permutée. Dans ce mélange, sont ajoutés 1% d'alginate de io sodium et 1% de collagène marin. Enfin, sont ajoutés 20g de butylène glycol contenant les conservateurs. Ce patch peut être utilisé seul ou formulé dans une autre composition cosmétique classique.

is Exemple 8 de l'invention : Préparation de formulations pharmaceutiques contenant le produit de l'invention

Formulation 8a : préparation de comprimés Excipients En g par comprimé Lactose 0,359 Saccharose 0,240 Produits de l'invention 0,001 -0,1 A B A B 28 Formulation 8b : préparation d'une pommade A Excipients 5,5 Polyéthylène basse densité Paraffine liquide qsp 100 B Produits de l'invention 0,001 -0,1 29

Claims (16)

1. REVENDICATIONS1. Principe actif comprenant au moins un extrait d'Hibiscus Abelmoscus et un extrait de soja contenant au moins des peptides.
2. 2. Principe actif selon la revendication 1 dans lequel l'extrait d'Hibiscus Abelmoscus est obtenu à partir de la graine.
3. 3. Principe actif selon la revendication 1 ou 2, dans lequel l'extrait d'Hibiscus Abelmoscus est un extrait aqueux ou hydroalcoolique, de préférence hydroglycolique.
4. 4. Principe actif selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans lequel l'extrait de soja contenant au moins des peptides est obtenu par fermentation, de préférence la fermentation étant réalisée par des bactéries, notamment des bactéries lactiques, comme notamment Lactobacillus plantarum ou Lactobacillus paracasei, et/ou par des levures, comme notamment du genre Saccharomyces, préférentiellement Saccharomyces cerevisia.
5. 5. Principe actif selon l'une des revendications précédentes dans lequel l'extrait de soja fermenté est filtré sur membrane à un seuil de coupure de 0,45 pm et/ou de 0,22 pm.
6. 6. Principe actif selon l'une des revendications précédentes dans lequel l'extrait de soja est utilisé en une quantité comprise entre 0.1% et 5% en poids de la composition finale, et préférentiellement de 1.25 à 3% en poids.
7. 7. Principe actif selon l'une des revendications précédentes dans lequel extrait d'Hibiscus Abelmoscus est utilisé à une quantité comprise entre 0.1% et 5% en poids de la composition finale, préférentiellement entre 1 et 3% en poids de composition finale.30
8. 8. Principe actif selon l'une des revendications précédentes dans lequel le principe actif comprend au moins un extrait d'Hibiscus Abelmoscus et un extrait de soja, de préférence fermenté, contenant au moins des peptides selon un ratio extrait d'Hibiscus Abelmoscus/extrait de soja compris entre 1/1 et 1/5, préférentiellement environ 1/2.
9. 9. Composition cosmétique, notamment anti-âge, contenant le principe actif selon l'une des revendications 1 à 8 en association avec un véhicule cosmétique approprié pour l'application topique.
10. 10. Procédé de soin cosmétique dans lequel le principe actif selon l'une des revendications 1 à 8 et/ou une composition cosmétique selon la revendication 9 est utilisée par application topique pour stimuler la prolifération et/ou l'activité des fibroblastes.
11. 11. Procédé selon la revendication précédente pour le soin cosmétique 1s et/ou le traitement cosmétique des effets liés au vieillissement cutané, notamment des manifestations inesthétiques et/ou inconfortables du vieillissement cutané, tels que le relâchement des tissus, la perte de fermeté des tissus, l'apparition de rides, de ridules, de sillons et/ou pour le soin et/ou le traitement cosmétique 20 de vergetures, et/ou des cicatrices.
12. 12. Procédé de soin cosmétique selon l'une des revendications 10 à 11 pour protéger la peau contre le vieillissement cutané.
13. 13. Composition pharmaceutique, en particulier dermatologique contenant le principe actif selon l'une des revendications 1 à 8. 25
14. 14. Composition pharmaceutique selon la revendication précédente destinée à la prévention et/ou au traitement des cicatrices et/ou inflammations, par exemple les gingivites. 31FR 08 52191du 27-05-08
15. 15. Utilisation d'un extrait d'Hibiscus Abe/moscus et d'un extrait de soja contenant au moins des peptides fermentés, tel que défini à l'une des revendications 1 à 8, comme principe actif dans une composition, notamment cosmétique, ou pour la préparation d'une composition pharmaceutique, en particulier dermatologique.
16. 16.Utilisation, selon la revendication 15, dans laquelle l'extrait d'Hibiscus Abe/moscus et l'extrait de soja contenant au moins des peptides sont utilisés de manière concomitante, ou séquentielle.