FR2792318A1 - Indazole derivatives as 5-HT3 and 5-HT4 serotoninergic receptor antagonists useful for preventing and treating e.g. intestinal disorders, nausea or central nervous system disorders - Google Patents

Abstract

Indazole derivatives (I) and (II), useful as 5-HT3 and 5-HT4 serotoninergic receptor antagonists, are new. The new compounds are of formulae (I) and (II), their N-oxides and acid addition salts, are new. R1 = H, halo, 1-4C alkoxy, methyl, OH or NH2; one of R2 and R3 = -(CH2)2-OH, or -CH2-C(O)OH, and the other is H; or R2 + R3 = together form -CH2-CH(OH)- or -CH(OH)-CH2-; X = -O-, -NH-, or -N-(1-4C alkyl)-; A = a group of formulae (i) or (ii); Y = N or CH; R4 = H, 1-4C alkyl or benzyl n, m = 0 or 1; R5, R6 = H, 1-4C alkyl, phenyl or benzyl. An Independent claim is also included for the preparation of (I) or (II).

Description

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DERIVES D'INDAZOLE, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION EN  INDAZOLE DERIVATIVES, THEIR PREPARATION AND THEIR APPLICATION

THÉRAPEUTIQUETHERAPEUTIC

La présente invention a pour objet des dérivés d'indazole, leur préparation et leur application en thérapeutique, plus particulièrement en tant qu'antagonistes des récepteurs 5-  The subject of the present invention is indazole derivatives, their preparation and their therapeutic use, more particularly as receptor antagonists 5-

HT3/ 5-HT4.HT3 / 5-HT4.

Les dérivés d'indazole selon la présente invention répondent à la formule générale (I): o X-A Rl R1 (iXi)  The indazole derivatives according to the present invention correspond to the general formula (I): o X-A Rl R1 (iXi)

O R3O R3

dans laquelle: R2 R1 représente un atome d'hydrogène, un halogène, un groupe C1i4 alcoxy, méthyle, hydroxy ou amino, R2 représente -(CH2)2-OH ou -CH2-C(O)OH lorsque R3 représente un atome d'hydrogène, ou R2 représente un atome d'hydrogène lorsque R3 représente- (CH2)2-OH ou -CH2-C(O)OH, ou R2 et R3 sont liés pour former un des cycles représenté ci-dessous:  in which: R2 R1 represents a hydrogen atom, a halogen, a C1i4 alkoxy, methyl, hydroxy or amino group, R2 represents - (CH2) 2-OH or -CH2-C (O) OH when R3 represents a d atom hydrogen, or R2 represents a hydrogen atom when R3 represents- (CH2) 2-OH or -CH2-C (O) OH, or R2 and R3 are linked to form one of the rings shown below:

O -.OO -.O

0 OH0 OH

OH X représente un atome d'oxygène, un groupe -NH- ou -N(Ci_4 alkyle)-, et A est un groupe de formule B ou C R4 -(CH2)n Y N N -(CH2)n (CH2)m  OH X represents an oxygen atom, a group -NH- or -N (C1-4 alkyl) -, and A is a group of formula B or C R4 - (CH2) n Y N N - (CH2) n (CH2) m

B CB C

dans lesquelles: Y représente un atome d'azote ou un groupe méthylène, R4 représente un atome d'hydrogène, un groupe C1_4 alkyle,  in which: Y represents a nitrogen atom or a methylene group, R4 represents a hydrogen atom, a C1_4 alkyl group,

ou un benzyle, nest égal à 0 ou 1, et m est égal à 0 ou 1.  or a benzyl, is equal to 0 or 1, and m is equal to 0 or 1.

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Un autre objet de l'invention est représenté par les composés de formule (II) R4 N-O O/ f  Another subject of the invention is represented by the compounds of formula (II) R4 N-O O / f

O -(CH,O - (CH,

R X-2)n(CH2)n m O R5 dans laquelle: R6 A, X, m, n et R1 sont tels que définis précédemment et R5 et R6, identiques ou différents, représentent un atome  R X-2) n (CH2) n m O R5 in which: R6 A, X, m, n and R1 are as defined above and R5 and R6, identical or different, represent an atom

d'hydrogène, un groupe Cl4 alkyle, un phényle ou un benzyle.  hydrogen, C1-4 alkyl, phenyl or benzyl.

Dans la présente demande: - Cl-4 alkyle représente une chaîne carbonée pouvant avoir de 1 à 4 atomes de carbone, telle que par exemple un méthyle,  In the present application: Cl-4 alkyl represents a carbon chain which may have from 1 to 4 carbon atoms, such as for example methyl,

éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle ou tert-  ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl or tert-

butyle, - le terme alkyle ou alcoxy représente respectivement un alkyle ou alcoxy à chaîne carbonée linéaire ou ramifiée, et - halogène représente un atome d'iode, brome, chlore ou fluor. Les composés de formule générale (I) ou (II) peuvent comporter un ou plusieurs atomes de carbone asymétrique. Ils peuvent donc exister sous forme d'énantiomères ou de diastéréoisomères. Ces énantiomères, diastéréoisomères, ainsi que leurs mélanges, y compris les mélanges racémiques, font  butyl, - the term alkyl or alkoxy represents respectively an alkyl or alkoxy with a linear or branched carbon chain, and - halogen represents an atom of iodine, bromine, chlorine or fluorine. The compounds of general formula (I) or (II) may contain one or more asymmetric carbon atoms. They can therefore exist in the form of enantiomers or diastereoisomers. These enantiomers, diastereoisomers, as well as their mixtures, including racemic mixtures, make

partie de l'invention.part of the invention.

Les composés de formule générale (I) ou (II) peuvent se présenter sous forme de base libre, de dérivés N-oxydes ou de sels d'addition à des acides pharmaceutiquement acceptables,  The compounds of general formula (I) or (II) can be in the form of a free base, of N-oxide derivatives or of addition salts with pharmaceutically acceptable acids,

qui font également partie de l'invention.  which are also part of the invention.

Les composés préférés selon l'invention sont les composés de formule (I) pour lesquels A représente un groupe de formule C, plus particulièrement ceux pour lesquels A représente un groupe de formule C et X représente un atome d'oxygène. Parmi  The preferred compounds according to the invention are the compounds of formula (I) for which A represents a group of formula C, more particularly those for which A represents a group of formula C and X represents an oxygen atom. Among

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ces derniers, les composés pour lesquels m=0 et n=0 sont préférés et plus particulièrement ceux pour lesquels R4 représente un méthyle. Parmi ceux-ci les composés de formule (I) dans laquelle R2 représente (CH2)2-OH ou -CH2-C(O)OH, plus particulièrement -CH2-C(O)OH, lorsque R3 représente un  the latter, the compounds for which m = 0 and n = 0 are preferred and more particularly those for which R4 represents methyl. Among these, the compounds of formula (I) in which R2 represents (CH2) 2-OH or -CH2-C (O) OH, more particularly -CH2-C (O) OH, when R3 represents a

atome d'hydrogène, sont préférés.  hydrogen atom, are preferred.

Les composés de l'invention peuvent être préparés par bio-  The compounds of the invention can be prepared by bio-

transformation des composés de formule (III)  transformation of the compounds of formula (III)

OO

X-A XN R5 R6 dans laquelle Rl, R5, R6, A et X sont tels que définis pour le composé de formule (I) ou (II). Plus particulièrement, les composés de formule (I) sont préparés par biotransformation des composés de formule (III) dans laquelle R5 et R6  X-A XN R5 R6 in which R1, R5, R6, A and X are as defined for the compound of formula (I) or (II). More particularly, the compounds of formula (I) are prepared by biotransformation of the compounds of formula (III) in which R5 and R6

représentent chacun un atome d'hydrogène.  each represents a hydrogen atom.

Ainsi, les composés de formule (I) ou (II) peuvent être préparés par biotransformation des composés de formule (III) in vitro par incubation avec des hépatocytes en culture  Thus, the compounds of formula (I) or (II) can be prepared by biotransformation of the compounds of formula (III) in vitro by incubation with hepatocytes in culture

primaire selon des méthodes connues de l'homme du métier.  primary according to methods known to those skilled in the art.

Alternativement, les composés de formule (I) dans laquelle R2 représente -CH2-C(O)OH lorsque R3 représente un atome d'hydrogène, peuvent être préparés par une oxydation microbiologique selon des méthodes connues de l'homme du métier, par exemple, par oxydation enzymatique en présence de  Alternatively, the compounds of formula (I) in which R2 represents -CH2-C (O) OH when R3 represents a hydrogen atom, can be prepared by microbiological oxidation according to methods known to those skilled in the art, for example , by enzymatic oxidation in the presence of

cytochrome P450 de champignons filamenteux.  cytochrome P450 of filamentous fungi.

Les composés de formule (III) sont décrits dans la demande de  The compounds of formula (III) are described in the application for

brevet PCT/FR98/02221.PCT / FR98 / 02221 patent.

Les exemples suivants illustrent les procédés et techniques appropriées pour la préparation de cette invention, sans toutefois limiter l'étendue de la revendication. Les spectres  The following examples illustrate the methods and techniques suitable for the preparation of this invention, without however limiting the scope of the claim. Specters

de masse, RMN et/ou microanalyses confirment les structures.  , NMR and / or microanalyses confirm the structures.

EXEMPLE 1:EXAMPLE 1:

1.1 Préparation des hépatocytes Les hépatocytes de souris et de rat ont été préparés selon la procédure après dissociation à la collagénase. Les hépatocytes humains ont été préparés à partir de biopsies obtenues par le Laboratoire de Biochimie de l'Hôpital Paul Brousse à Villejuif en accord avec le comité d'éthique de10 l'Hôpital. Les hépatocytes de chien et de singe cryoconservés ont été obtenus auprès de Bioprédic (Liverbeads) (Rennes, France). 1.1 Préparation des composés selon l'invention  1.1 Preparation of hepatocytes The hepatocytes of mice and rats were prepared according to the procedure after dissociation with collagenase. Human hepatocytes were prepared from biopsies obtained by the Biochemistry Laboratory of the Paul Brousse Hospital in Villejuif in agreement with the ethics committee of the Hospital. The cryopreserved dog and monkey hepatocytes were obtained from Bioprédic (Liverbeads) (Rennes, France). 1.1 Preparation of the compounds according to the invention

Le chlorhydrate de 7,8-dihydropyrazolo[1,5,4-  7,8-dihydropyrazolo hydrochloride [1,5,4-

de][1,4]benzoxazine-2-carboxylate de endo-8-méthyl-8-  of] [1,4] benzoxazine-2-carboxylate of endo-8-methyl-8-

azabicyclo[3.2.lloct-3-yle est mis à incuber avec les  azabicyclo [3.2.lloct-3-yle is incubated with

hépatocytes de l'espèce choisie à une concentration de 20pM.  hepatocytes of the selected species at a concentration of 20 μM.

Après 24 h d'incubation, les composés de formule (I) ou (II) ont été isolés par HPLC (colonne Kromasil C8 5p, éluant: acetate d'ammonium 15mM, pH4/ acétonitrile)à partir du surnageant extra-cellulaires et identifiés par LC/ESI-MS (Electrospray, HP/MSD, Hewlett Packard) et par LC/ESI-MS/MS (Quattro I, VG).(voir tableaux)  After 24 h of incubation, the compounds of formula (I) or (II) were isolated by HPLC (Kromasil C8 5p column, eluent: 15mM ammonium acetate, pH4 / acetonitrile) from the extracellular supernatant and identified by LC / ESI-MS (Electrospray, HP / MSD, Hewlett Packard) and by LC / ESI-MS / MS (Quattro I, VG) (see tables)

EXEMPLE 2:EXAMPLE 2:

240 mg de chlorhydrate de 7,8-dihydropyrazolo[1,5,4-  240 mg 7,8-dihydropyrazolo hydrochloride [1,5,4-

de] [1,4]benzoxazine-2-carboxylate de endo-8-méthyl-8-  of] [1,4] benzoxazine-2-carboxylate of endo-8-methyl-8-

azabicyclo[3.2.1]oct-3-yle sont mis à incuber en présence d'une souche de champignons filamenteux Cunninghamella echinulata NRRL 3655 pendant un mois à 27 C, sous agitation orbitalaire. La biomasse est alors éliminée par filtration, et le filtrat évaporé partiellement est extrait à l'acétate d'éthyle. La phase aqueuse contenant le 7-(carboxyméthoxy)1H-indazole-3-carboxylate de 8-méthyl-8-azabicyclo[3.2.1]oct-3-yle est évaporée à sec puis lavée avec un mélange dichlorométhane/méthanol. L'insoluble est essoré et le filtrat concentré est purifié par chromatographie sur gel de silice (solvant d'élution: dichlorométhane 80%/méthanol 20%). Les fractions contenant 7-(carboxyméthoxy) -lHindazole-3-carboxylate de 8-méthyl-8-azabicyclo[3.2.1]oct-3-yle sont repurifiées par HPLC préparative (Kromasil C8, 5p) pour donner 15 mg 7-(carboxyméthoxy)-lH-indazole-3-carboxylate de endo- 8-méthyl-8azabicyclo[3.2.1]oct-3-yle MS (API, ES+): m/z 360 (M + 1); 301; 124 Composition élémentaire: m/z = 360.1536 (calc. 360.1524) pour C18H21N30 RMN 1H (en ppm):7.7 (d, 1H); 7.2 (t, 1H); 6.8 (d, 1H); 5.3  azabicyclo [3.2.1] oct-3-yle are incubated in the presence of a strain of filamentous fungi Cunninghamella echinulata NRRL 3655 for one month at 27 C, with orbital shaking. The biomass is then removed by filtration, and the partially evaporated filtrate is extracted with ethyl acetate. The aqueous phase containing 8-methyl-8-azabicyclo [3.2.1] oct-3-yl 7- (carboxymethoxy) 1H-indazole-3-carboxylate is evaporated to dryness and then washed with a dichloromethane / methanol mixture. The insoluble material is filtered off and the concentrated filtrate is purified by chromatography on silica gel (elution solvent: 80% dichloromethane / 20% methanol). The fractions containing 8-methyl-8-azabicyclo [3.2.1] oct-3-yl 7- (carboxymethoxy) -l-Hindazole-3-carboxylate are repurified by preparative HPLC (Kromasil C8, 5p) to give 15 mg 7- ( carboxymethoxy) -1H-indazole-3-carboxylate of endo-8-methyl-8azabicyclo [3.2.1] oct-3-yl MS (API, ES +): m / z 360 (M + 1); 301; 124 Elementary composition: m / z = 360.1536 (calc. 360.1524) for C18H21N30 1H NMR (in ppm): 7.7 (d, 1H); 7.2 (t, 1H); 6.8 (d, 1H); 5.3

(m, 1H); 4.55 (s, 2H); 2.5 (s, 3H); 2-2,5 (m, 8H).  (m, 1H); 4.55 (s, 2H); 2.5 (s, 3H); 2-2.5 (m, 8H).

RMN 13C(en ppm): 68.6 (t); 70 (d); 107 (d); 114.3 (d); 125.6  13 C NMR (in ppm): 68.6 (t); 70 (d); 107 (d); 114.3 (d); 125.6

(d); 137 (s); 147 (s); 166 (s); 178 (s).  (d); 137 (s); 147 (s); 166 (s); 178 (s).

EXEMPLE 3EXAMPLE 3

En appliquant les méthodes décrites selon l'exemple 1 ou 2,  By applying the methods described according to example 1 or 2,

d'autres composés selon l'invention peuvent être synthétisés.  other compounds according to the invention can be synthesized.

Les tableaux qui suivent illustrent les composés obtenus  The following tables illustrate the compounds obtained

selon l'exemple 1 ou 2.according to example 1 or 2.

6 27923186 2792318

Tableau 1Table 1

O R4O R4

R1x 3 < X -A -(CH2)n y N R1 N A = N -(CH2)n (C2)m  R1x 3 <X -A - (CH2) n y N R1 N A = N - (CH2) n (C2) m

O R3O R3

R2 B CR2 B C

R2 (I) no R1 R2 R3 R4 X A m n Y MS (API,  R2 (I) no R1 R2 R3 R4 X A m n Y MS (API,

ES') (M+1)ES ') (M + 1)

1H CH3 O Ce 0 0 - 344 XN- Or'OH 2 H H -(CH2)2 -OH CH3 0 Ce 0 0 346 3 H H -CH2-C(O)OH CH3 O Ce 0 0 - 360 4 H -(CH2) 2 -OH H CH3 O Ce 0 0 - 346 H -CH2-C(O)OH H CH3 0 Ce 0 0 - 360 Dans la colonne A Ce" indique que le composé C est sous  1H CH3 O Ce 0 0 - 344 XN- Or'OH 2 HH - (CH2) 2 -OH CH3 0 Ce 0 0 346 3 HH -CH2-C (O) OH CH3 O Ce 0 0 - 360 4 H - (CH2 ) 2 -OH H CH3 O Ce 0 0 - 346 H -CH2-C (O) OH H CH3 0 Ce 0 0 - 360 In column A Ce "indicates that compound C is under

forme endo.endo shape.

Tableau 2Table 2

R N-O- o R,/ N X -(CH2)n H2)m Ri NN OC R5 R6 (II) n R1 R5 R6 R4 X m n MS(API ES+) (M+1)  R N-O- o R, / N X - (CH2) n H2) m Ri NN OC R5 R6 (II) n R1 R5 R6 R4 X m n MS (API ES +) (M + 1)

6 H H H CH3 O 0 0 3446 H H H CH3 O 0 0 344

7 27923187 2792318

Les composés de formule (I) selon l'invention, ont fait l'objet d'essais pharmacologiques qui ont montré leur intérêt  The compounds of formula (I) according to the invention have been the subject of pharmacological tests which have shown their interest

comme substances actives en thérapeutique.  as active substances in therapy.

Ils ont en particulier été testés quant à leurs effets inhibiteurs de la liaison du [3H]-(S)-zacopride avec les récepteurs sérotoninergiques de type 5-HT3 du cortex de rat, selon la méthode décrite par N.M. Barnes et Coll., dans J.  In particular, they have been tested for their inhibitory effects on the binding of [3H] - (S) -zacopride with serotonergic receptors of the 5-HT3 type of the rat cortex, according to the method described by NM Barnes et al., In J.

Pharm. Pharmacol., 40, 548-551 (1988).  Pharm. Pharmacol., 40, 548-551 (1988).

Des rats mâles Sprague-Dawley (OFA, Iffa credo) de 200 à 250 g sont euthanasiés et leur cerveau est prélevé. On dissèque le cortex et on l'homogénéise à l'aide d'un broyeur Polytron (position 7,20 s) dans 20 volumes de tampon Tris 25 mM (pH = 7,4, 22 C). On centrifuge l'homogénat pendant 10 min à 45000xg (dans une centrifugeuse SORVALL munie d'un rotor SS34), puis le culot est remis en suspension dans 10 volumes de tampon Tris et incubé à 37 C pendant 10 min sous agitation. On dilue ensuite la suspension à 20 volumes à l'aide de tampon Tris et on centrifuge dans les mêmes conditions que précédemment. Le culot obtenu est remis en suspension dans 5 volumes de tampon Tris puis réparti en fractions aliquotes de 5 ml qui sont congelées à -80 C. Le jour de l'expérience, la préparation est décongelée à 4 C  Male Sprague-Dawley rats (OFA, Iffa credo) weighing 200 to 250 g are euthanized and their brains removed. The cortex is dissected and homogenized using a Polytron mill (position 7.20 s) in 20 volumes of 25 mM Tris buffer (pH = 7.4, 22 C). The homogenate is centrifuged for 10 min at 45000 × g (in a SORVALL centrifuge equipped with an SS34 rotor), then the pellet is resuspended in 10 volumes of Tris buffer and incubated at 37 ° C. for 10 min with shaking. The suspension is then diluted to 20 volumes using Tris buffer and centrifuged under the same conditions as above. The pellet obtained is resuspended in 5 volumes of Tris buffer and then distributed into 5 ml aliquots which are frozen at -80 C. The day of the experiment, the preparation is thawed at 4 C.

puis diluée 1,2 fois à l'aide du tampon d'incubation Tris-  then diluted 1.2 times with the Tris- incubation buffer

NaCl (Tris 25 mM, NaCl 150 mM, pH = 7,4, 220C).  NaCl (25 mM Tris, 150 mM NaCl, pH = 7.4, 220C).

La suspension membranaire (100 Ml, 1 mg de protéines) est  The membrane suspension (100 ml, 1 mg of protein) is

incubée à 25 C pendant 25 min en présence de 0,5 nM de [3H]-  incubated at 25 C for 25 min in the presence of 0.5 nM [3 H] -

(S)-zacopride (activité spécifique: 75-85 Ci/mmole, Amersham, Little Chalfont, Royaume-Uni) dans un volume final de 500 Ml de tampon TrisNaCl, en l'absence ou en présence du  (S) -zacopride (specific activity: 75-85 Ci / mmol, Amersham, Little Chalfont, United Kingdom) in a final volume of 500 ml of TrisNaCl buffer, in the absence or in the presence of

composé à tester.compound to be tested.

On arrête l'incubation par filtration en utilisant des filtres Whatman GF/B préalablement traités avec de la polyéthylènimine (0,1 %). Chaque tube réactionnel est prédilué avec 4 ml de tampon Tris-NaCl puis rincé 3 fois avec  The incubation is stopped by filtration using Whatman GF / B filters previously treated with polyethyleneimine (0.1%). Each reaction tube is prediluted with 4 ml of Tris-NaCl buffer and then rinsed 3 times with

4,5 ml de tampon Tris-NaCl.4.5 ml of Tris-NaCl buffer.

Les filtres sont prédécoupés avant séchage dans l'étuve (120 C, 5 min). La radioactivité retenue sur les filtres est mesurée par scintigraphie liquide. La liaison non spécifique  The filters are precut before drying in the oven (120 C, 5 min). The radioactivity retained on the filters is measured by liquid scintigraphy. Nonspecific binding

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est déterminée en présence de 10 MM de MDL 72222 (ligand décrit dans l'article N. M. Barnes et coll. ci-dessus référencé). Pour chaque concentration de composé étudié, on détermine le pourcentage d'inhibition de la liaison spécifique du [3H]- (S)-zacopride, puis la concentration du composé inhibant 50 %  is determined in the presence of 10 MM of MDL 72222 (ligand described in the article N. M. Barnes et al. referenced above). For each concentration of compound studied, the percentage of inhibition of the specific binding of [3H] - (S) -zacopride is determined, then the concentration of the inhibiting compound 50%

de la liaison spécifique du [3H]-(S)-zacopride (CI50).  the specific binding of [3H] - (S) -zacopride (IC50).

Les CI50 des composés de l'invention se situent entre 0,5 rnM  The IC 50 values of the compounds of the invention are between 0.5 rnM

et 3 MM.and 3 MM.

Les composés de l'invention ont été étudiés quant à leurs effets antagonistes vis-à-vis des récepteurs 5-HT3 du muscle lisse de côlon descendant isolé de cobaye, selon la méthode décrite par Grossman et coll. dans Br. J. Pharmacol. (1989)  The compounds of the invention were studied as to their antagonistic effects with respect to the 5-HT3 receptors of the smooth muscle of the descending colon isolated from guinea pigs, according to the method described by Grossman et al. in Br. J. Pharmacol. (1989)

97 451.97,451.

La sérotonine (0,1-100 MM), après blocage des récepteurs de types 5-HT1 et 5-HT2 (Méthysergide 0,1 MM) et désensibilisation des récepteurs 5-HT4 (5-méthoxytryptamine MM) provoque une contraction, dépendante de la concentration, de la partie musculaire lisse du côlon  Serotonin (0.1-100 MM), after blocking receptors of 5-HT1 and 5-HT2 types (Methysergide 0.1 MM) and desensitization of 5-HT4 receptors (5-methoxytryptamine MM) causes a contraction, dependent on concentration, smooth muscle part of the colon

descendant de cobaye, par stimulation des récepteurs 5-HT3.  descendant of guinea pig, by stimulation of 5-HT3 receptors.

Les contractions sont enregistrées en isométrie.  Contractions are recorded in isometry.

L'effet antagoniste d'un composé sur les récepteurs sérotoninergiques 5HT3 est quantifié par la mesure du déplacement d'une courbe effetconcentration témoin de sérotonine (concentrations successives croissantes non cumulées), à des concentrations comprises entre 1 nM et 0,1 MM, avec une incubation de 30 min. Les composés de l'invention ont également été étudiés quant à leur affinité vis-à-vis des récepteurs 5- HT4 dans le striatum de cobaye, selon la méthode décrite par Grossman et coll.,  The antagonistic effect of a compound on the 5HT3 serotonergic receptors is quantified by measuring the displacement of a control effect-concentration curve for serotonin concentration (successive increasing concentrations not accumulated), at concentrations of between 1 nM and 0.1 MM, with an incubation of 30 min. The compounds of the invention have also been studied as to their affinity for 5-HT4 receptors in the guinea pig striatum, according to the method described by Grossman et al.,

dans Br. J. Pharmacol., 109, 618-624 (1993).  in Br. J. Pharmacol., 109, 618-624 (1993).

On euthanasie des cobayes (Hartley, Charles River) de 300 à 400 g et on prélève leur cerveau. On excise les striata et on les congèle à -80 C. Le jour de l'expérience, on décongèle le tissu à +4 C dans 33 volumes de tampon Hépès-NaOH 50mM (pH = 7,4 à 20 C) et on l'homogénéise à l'aide d'un broyeur Polytron'. On centrifuge l'homogénat pendant 10 min à  Guinea pigs (Hartley, Charles River) weighing 300 to 400 g are euthanized and their brains removed. The striata are excised and frozen at -80 C. The day of the experiment, the tissue is thawed at + 4 ° C. in 33 volumes of 50 mM Hepes-NaOH buffer (pH = 7.4 at 20 ° C.) and 'homogenize using a Polytron mill'. The homogenate is centrifuged for 10 min at

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48000xg, on récupère le culot, on le remet en suspension et on le centrifuge de nouveau dans les mêmes conditions. On suspend le culot final dans du tampon Hépès-NaOH (30 mg de tissu frais/ml). Cette suspension membranaire est utilisée telle quelle. On incube 100 M1 de la suspension membranaire à 0 C pendant min, en présence de 0,1 nM de [3H]GR113808 (activité spécifique: 80-85 Ci/mmole), dans un volume final de 1 ml de tampon Hépès-NaOH (50 mM, pH = 7,4), en l'absence ou en présence du composé à tester. On arrête l'incubation par filtration sur filtres Whatman GF/B , préalablement traités avec de la polyéthylèneimine 0,1 %, on rince chaque tube par 4 ml de tampon à 0 C et on filtre de nouveau. On mesure la radioactivité retenue sur les filtres, par scintigraphie liquide. On détermine la liaison non spécifique en présence de sérotonine 30 iM. La liaison spécifique représente 90% de  48000xg, the pellet is recovered, it is resuspended and it is again centrifuged under the same conditions. The final pellet is suspended in Hepes-NaOH buffer (30 mg of fresh tissue / ml). This membrane suspension is used as it is. 100 M1 of the membrane suspension are incubated at 0 ° C. for min, in the presence of 0.1 nM of [3 H] GR113808 (specific activity: 80-85 Ci / mmol), in a final volume of 1 ml of Hepes-NaOH buffer (50 mM, pH = 7.4), in the absence or in the presence of the compound to be tested. The incubation is stopped by filtration through Whatman GF / B filters, previously treated with 0.1% polyethyleneimine, each tube is rinsed with 4 ml of buffer at 0 ° C. and filtered again. The radioactivity retained on the filters is measured by liquid scintigraphy. Nonspecific binding is determined in the presence of 30 µM serotonin. The specific bond represents 90% of

la radioactivité totale récupérée sur le filtre.  the total radioactivity recovered on the filter.

Pour chaque concentration de composé étudié, on détermine le pourcentage d'inhibition de la liaison spécifique du [3H]GR113808, puis la concentration du composé testé qui  For each concentration of compound studied, the percentage of inhibition of the specific binding of [3H] GR113808 is determined, then the concentration of the compound tested which

inhibe 50% de la liaison spécifique (CI50).  inhibits 50% of specific binding (CI50).

Les CI50 des composés de l'invention se situent entre 1 nM et 2MM. Enfin, les composés de l'invention ont été étudiés quant à leurs effets agonistes ou antagonistes vis-à-vis des récepteurs 5-HT4 dans l'oesophage de rat selon la méthode  The IC50 values of the compounds of the invention are between 1 nM and 2MM. Finally, the compounds of the invention were studied as to their agonist or antagonist effects with respect to 5-HT4 receptors in the rat esophagus according to the method

décrite par Baxter et coll., dans Naunyn Schmied Arch.  described by Baxter et al., in Naunyn Schmied Arch.

Pharmacol. (1991), 343, 439.Pharmacol. (1991), 343, 439.

On utilise des rats mâles Sprague Dawley pesant de 300 à 450 g. On prélève rapidement un fragment d'environ 1,5 cm de la partie terminale de l'oesophage, on élimine la couche musculaire, on ouvre longitudinalement la tunique muqueuse musculaire interne, on la monte dans une cuve à organe isolé contenant une solution de Krebs-Henseleit à 32 C oxygénée par un courant carbogène (95% 02 et 5% CO2), et on la connecte à  Male Sprague Dawley rats weighing 300 to 450 g are used. We quickly remove a fragment of about 1.5 cm from the end part of the esophagus, we eliminate the muscular layer, we open the inner muscular mucous membrane longitudinally, we mount it in a tank with isolated organ containing a Krebs solution -Henseleit at 32 C oxygenated by a carbogenic current (95% 02 and 5% CO2), and we connect it to

un transducteur isométrique sous une tension basale de 0,5 g.  an isometric transducer with a basal voltage of 0.5 g.

On induit une contraction du tissu par l'addition de 0,5 pM de carbachol, on attend que la contraction se stabilise (15  A contraction of the tissue is induced by the addition of 0.5 μM of carbachol, we wait until the contraction stabilizes (15

27923182792318

min), puis on expose la préparation au composé à étudier, en  min), then the preparation is exposed to the compound to be studied, by

concentration cumulées croissantes de 0,1 nM à 1 MM.  cumulative concentration increasing from 0.1 nM to 1 MM.

Les composés qui induisent une relaxation sont caractérisés comme des agonistes 5-HT4. Pour les composés qui n'induisent pas de relaxation, la préparation est exposée à la sérotonine en concentrations cumulées croissantes, de 0,1 nM jusqu'à une concentration induisant une relaxation maximale, et la courbe de relaxation due à la sérotonine, en présence du composé à étudier, est alors comparée à une courbe témoin établie en l'absence du dit composé. Si sa présence induit un déplacement de la courbe vers la droite, le composé étudié  Compounds that induce relaxation are characterized as 5-HT4 agonists. For compounds which do not induce relaxation, the preparation is exposed to serotonin in increasing cumulative concentrations, from 0.1 nM up to a concentration inducing maximum relaxation, and the relaxation curve due to serotonin, in the presence of the compound to be studied, is then compared to a control curve established in the absence of said compound. If its presence induces a displacement of the curve to the right, the compound studied

est caractérisé comme un antagoniste 5-HT4.  is characterized as a 5-HT4 antagonist.

Les pKb des composés selon l'invention se situent entre 5 et 10. Ils peuvent donc être utilisés pour la préparation de médicaments destinés à agir en tant qu'antagonistes des  The pKb of the compounds according to the invention are between 5 and 10. They can therefore be used for the preparation of medicaments intended to act as antagonists of

récepteurs sérotoninergiques 5-HT3 et 5-HT4.  5-HT3 and 5-HT4 serotonergic receptors.

Ainsi, les composés de l'invention de formule (I), sont particulièrement utiles pour le traitement et/ou la prévention des troubles fonctionnels intestinaux tels que la les troubles moteurs et sécrétoires intestinaux, les troubles de la sécrétion intestinale, du côlon irritable, de la viscérosensibilité, des douleurs intestinales, diarrhée, mais également du reflux oesophagien,; de la fibrose kystique du pancréas, du syndrome carcinoide; de l'incontinence urinaire  Thus, the compounds of the invention of formula (I) are particularly useful for the treatment and / or prevention of functional intestinal disorders such as intestinal motor and secretory disorders, disorders of intestinal secretion, of irritable bowel, viscerosensitivity, intestinal pain, diarrhea, but also esophageal reflux; cystic fibrosis of the pancreas, carcinoid syndrome; urinary incontinence

ou intestinale, du mégacôlon.or intestinal, megacolon.

D'autre part, les composés de l'invention, de part leur affinité vis à vis des récepteurs 5-HT3 peuvent encore être utilisés en vue du traitement et/ou de la prévention des nausées et vomissements, par exemple consécutifs à un traitement antitumoral ou à l'administration d'un anesthésique; du spasme oesophagien; des troubles du système nerveux central tels que la schizophrénie, la manie, l'anxiété et la dépression; des troubles de la cognition tels que la démence sénile du type de la maladie d'Alzheimer 11i 2792318 ou démences liées à l'âge, les déficits de mémoire et d'attention, les déficiences cérébrales vasculaires, la maladie de Parkinson; les psychoses; la dyskinésie, les douleurs, migraines et maux de tête; des troubles de la 5 dépendance ou du sevrage de l'alcool ou de drogues; des troubles de la fonction gastro-intestinale tels que dyspepsie, ulcère peptique, aigreurs d'estomac, flatulences; des troubles du système cardio- vasculaire et des troubles respiratoires. Les composés de l'invention, en association avec des excipients appropriés, peuvent être présentés sous toutes formes convenant à une administration orale ou parentérale, telles que comprimés, dragées, gélules, capsules, suspensions ou solutions buvables ou injectables, et dosées pour permettre une administration de 0,005 à 10 mg/kg, 1 à 4 fois  On the other hand, the compounds of the invention, due to their affinity for 5-HT3 receptors, can also be used for the treatment and / or prevention of nausea and vomiting, for example consecutive to an anti-tumor treatment. or the administration of an anesthetic; esophageal spasm; central nervous system disorders such as schizophrenia, mania, anxiety and depression; cognitive disorders such as senile dementia of the Alzheimer's disease type 11i 2792318 or age-related dementias, memory and attention deficits, cerebrovascular deficiencies, Parkinson's disease; psychoses; dyskinesia, pain, migraines and headaches; alcohol or drug dependence or withdrawal disorders; gastrointestinal function disorders such as dyspepsia, peptic ulcer, heartburn, flatulence; disorders of the cardiovascular system and respiratory disorders. The compounds of the invention, in combination with appropriate excipients, can be presented in all forms suitable for oral or parenteral administration, such as tablets, dragees, capsules, capsules, suspensions or solutions for oral or injectable injection, and dosed to allow administration of 0.005 to 10 mg / kg, 1 to 4 times

par jour.per day.

12 279231812 2792318

Claims (8)

RevendicationsClaims 1. Composé de formule (I) o1. Compound of formula (I) o X-AX-A O R3 dans laquelle: R2 R1 représente un atome d'hydrogène, un halogène, un groupe Cl-4 alcoxyle, méthyle, hydroxy ou amino, R2 représente -(CH2)2-OH ou -CH2-C(O)OH lorsque R3 représente un atome d'hydrogène, ou R2 représente un atome d'hydrogène lorsque R3 représente-(CH2)2-OH ou -CH2-C(O)OH, ou R2 et R315 sont liés pour former un des cycles représentés ci-dessous:  O R3 in which: R2 R1 represents a hydrogen atom, a halogen, a Cl-4 alkoxyl, methyl, hydroxy or amino group, R2 represents - (CH2) 2-OH or -CH2-C (O) OH when R3 represents a hydrogen atom, or R2 represents a hydrogen atom when R3 represents- (CH2) 2-OH or -CH2-C (O) OH, or R2 and R315 are linked to form one of the rings shown below : 0 0 O- OH0 0 O- OH OH X représente un atome d'oxygène, un groupe -NH- ou -N(Cl_4 alkyle)-, et A est un groupe de formule B ou C  OH X represents an oxygen atom, a group -NH- or -N (Cl_4 alkyl) -, and A is a group of formula B or C N4N4 -(CH2)n y Y N -(CH2) (CH2) 2)m- (CH2) n y Y N - (CH2) (CH2) 2) m B CB C dans lesquelles: Y représente un atome d'azote ou un groupe méthylène, R4 représente un atome d'hydrogène, un groupe Cl_4 alkyle, ou un benzyle, n est égal à 0 ou 1, et m est égal à 0 ou 1, et éventuellement sous forme d'énantiomère, de diastéréoisomère, y compris de mélange racémique ainsi que les dérivés N-oxydes et sels d'addition à des acides  in which: Y represents a nitrogen atom or a methylene group, R4 represents a hydrogen atom, a C1-4 alkyl group, or a benzyl, n is equal to 0 or 1, and m is equal to 0 or 1, and optionally in the form of an enantiomer, a diastereoisomer, including a racemic mixture as well as the N-oxide derivatives and addition salts with acids pharmaceutiquement acceptables d'une de ces formes.  pharmaceutically acceptable from one of these forms. 13 279231813 2792318 2. Composé de formule (I) selon la revendication 1 caractérisé en ce que A représente un groupe de formule C.  2. Compound of formula (I) according to claim 1 characterized in that A represents a group of formula C. 3. Composé de formule (I) selon la revendication 2 caractérisé en ce que X représente un atome d'oxygène, m= 0, n=0.3. Compound of formula (I) according to claim 2 characterized in that X represents an oxygen atom, m = 0, n = 0. 4. Composé de formule (I) selon la revendication 3 caractérisé en ce que R4 représente un méthyle.  4. Compound of formula (I) according to claim 3 characterized in that R4 represents a methyl. 5. Composé de formule (II) R4 N-O +NO- Ri1 X -(CH2)n (CH2)m  5. Compound of formula (II) R4 N-O + NO- Ri1 X - (CH2) n (CH2) m R1 N (II)R1 N (II) is (Nz) OCJ'R5 dans laquelle: R6 X, m, n et R1, R4 sont tels que définis dans la revendication 1 et, R5 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un groupe Cl14 alkyle, un phényle ou un benzyle et éventuellement sous forme d'énantiomère, de diastéréoisomère, y compris de mélange racémique ainsi que les sels d'addition à des acides pharmaceutiquement acceptables d'une de ces formes.25  is (Nz) OCJ'R5 in which: R6 X, m, n and R1, R4 are as defined in claim 1 and, R5 and R6, identical or different, represent a hydrogen atom, a C1-14 alkyl group, a phenyl or a benzyl and optionally in the form of an enantiomer, of diastereoisomer, including of racemic mixture as well as the addition salts with pharmaceutically acceptable acids of one of these forms. 6. Procédé de préparation d'un composé selon la revendication 1 ou 5 par biotransformation d'un composé de formule (III) O X-A6. Process for the preparation of a compound according to claim 1 or 5 by biotransformation of a compound of formula (III) O X-A R1 NR1 N o R5 (III) R6 dans laquelle A, X, Rl, R5 et R6 sont tels que définis dans  o R5 (III) R6 in which A, X, Rl, R5 and R6 are as defined in la revendication 1 et 5.claim 1 and 5. 7. Médicament caractérisé en ce qu'il est constitué par un  7. Medicine characterized in that it is constituted by a composé selon la revendication 1 ou 5.  compound according to claim 1 or 5. 14 279231814 2792318 8. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un composé selon la revendication 1 ou 5 et un ou  8. Pharmaceutical composition characterized in that it comprises a compound according to claim 1 or 5 and one or plusieurs excipients.several excipients.