FR2555602A1 - ENZYME AND COMPOSITION OF ENZYMES DEGRADING PENTOSANES, METHODS OF OBTAINING AND APPLYING SAME - Google Patents

Abstract

L'INVENTION CONCERNE UNE COMPOSITION D'ENZYME PRESENTANT UNE ACTIVITE DE PENTOSANE, EN PARTICULIER A DES TEMPERATURES ELEVEES, ET SON PROCEDE D'OBTENTION. LA COMPOSITION EST PREPAREE PAR FERMENTATION DE TALAROMYCES EMERSONII, EN PARTICULIER DE LA SOUCHE IMI116815, ET EVENTUELLEMENT PAR DES MOYENS D'AUGMENTATION DE L'ACTIVITE DE PENTOSANASE PAR RAPPORT A D'AUTRES ACTIVITES ENZYMATIQUES. APPLICATIONS A LA CUISSON DU PAIN, A LA FABRICATION DE L'AMIDON, A LA PRODUCTION DE FOURRAGES ENSILES MIXTES ET D'ALIMENTS POUR ANIMAUX, A L'EXTRACTION DU THE ET DU CAFE, ETC.THE INVENTION RELATES TO AN ENZYME COMPOSITION PRESENTING A PENTOSANE ACTIVITY, IN PARTICULAR AT HIGH TEMPERATURES, AND ITS PROCESS FOR OBTAINING IT. THE COMPOSITION IS PREPARED BY FERMENTATION OF TALAROMYCES EMERSONII, IN PARTICULAR OF THE STRAIN IMI116815, AND POSSIBLY BY MEANS OF INCREASING THE ACTIVITY OF PENTOSANASE IN RELATION TO OTHER ENZYMATIC ACTIVITIES. APPLICATIONS TO BAKING BREAD, MANUFACTURING STARCH, PRODUCTION OF MIXED SILK FORAGES AND ANIMAL FEEDS, EXTRACTION OF TEA AND COFFEE, ETC.

Description

La présente invention concerne un nouveau procédé de biodégradation desThe present invention relates to a novel process for the biodegradation of

pentosanes, une enzyme utile à cette  pentosans, an enzyme useful for this

fin et un procédé d'obtention d'une composition la conte-  end and a process for obtaining a composition

nant. Les pentosanes constituent une classe de poly-  ing. Pentosans are a class of poly-

mères d'un ou de plusieurs pentoses naturels. Ils se ren-  mothers of one or more natural pentoses. They meet

contrent dans diverses sources naturelles telles que des céréales, par exemple le blé et l'avoine, des plantes, par  in various natural sources such as cereals, eg wheat and oats, plants,

exemple le thé et le café, les algues, les fruits, les lé-  tea and coffee, seaweed, fruits, vegetables,

gumes et le sorgho, et leur présence est indésirable pour  vegetables and sorghum, and their presence is undesirable for

un certain nombre d'applications de ces sources naturelles.  a number of applications from these natural sources.

Ainsi, par exemple, des pentosanes se trouvent dans les farines de céréales, dans lesquelles ils fixent l'eau, et  Thus, for example, pentosans are found in cereal flours, in which they fix the water, and

ils contribuent à durcir ou à rassir le pain après cuisson.  they help harden or stale the bread after cooking.

Dans ce cas, une réduction de la teneur en pentosanes de la farine diminue la tendance au durcissement. Dans un autre exemple, des pentosanes se trouvent dans le cafe et se rencontrent dans les gommes solubles extraites en même temps que le café lors de la fabrication de granulés ou de poudre de café instantané. La réduction de la teneur en pentosanes de ces matières permet d'atteindre de plus hautes teneurs en matières solides lors de l'extraction et il en  In this case, a reduction in the pentosan content of the flour decreases the tendency to cure. In another example, pentosans are found in the coffee and are found in soluble gums extracted together with coffee during the manufacture of granules or instant coffee powder. The reduction of the pentosan content of these materials makes it possible to achieve higher solids contents during extraction and

résulte des économies notables dans le processus de fabri-  significant savings in the manufacturing process.

cation.cation.

Dans la description du brevet britannique  In the description of the British patent

N 1 421 127, la demanderesse décrit un procédé de produc-  No. 1,421,127, the applicant describes a production process

tion d'enzymes qui dégradent les $-glucanes provenant de l'orge et les e1,4/e-1,3-glucanes apparentés. La principale enzyme obtenue est une 0-1, 4/0-1,3-glucanase, d'un intérêt particulier dans le traitement de l'orge, bien qu'il soit dit que des activités de 0-glucanase, de laminarinase, d'hydroxyéthyl-cellulase, de cellulase et d'a-amylase puissent également être présentes. Des microorganismes de  tion of enzymes that degrade $ -glucans from barley and related e1,4 / e-1,3-glucans. The main enzyme obtained is a 0-1, 4 / 0-1,3-glucanase, of particular interest in the treatment of barley, although it is said that O-glucanase, laminarinase, hydroxyethyl cellulase, cellulase and α-amylase may also be present. Microorganisms of

l'espèce Penicillium emersonii sont employés comme la sour-  Penicillium emersonii are used as the source of

ce d'enzyme, et en particulier la souche qui a été déposée au Commonwealth Mycological Institute, Kew, Grande-Bretagne,  this enzyme, and in particular the strain that was deposited at the Commonwealth Mycological Institute, Kew, Great Britain,

sous le numéio IMI 116815.under the number IMI 116815.

La demanderesse est maintenant en mesure de faire fermenter Talaromyces emersonii (initialement dénommé Penicillium emersonii) afin de produire une autre enzyme, une pentosanase, qui catalyse la dégradation de pentosanes, en particulier des pentosanes provenant du blé. La classe de ces enzymes est connue en général et diverses enzymes  The Applicant is now able to ferment Talaromyces emersonii (initially called Penicillium emersonii) to produce another enzyme, a pentosanase, which catalyzes the degradation of pentosans, especially pentosans from wheat. The class of these enzymes is known in general and various enzymes

individuelles ont été utilisées, entre autres, en boulan-  were used, inter alia, in

gerie, dans la fabrication de l'amidon, l'agriculture, le brassage, l'extraction de tissus végétaux et la fabrication de matières colorantes végétales. Cependant, dans un grand nombre de ces applications, il est couramment fait usage de températures élevées et il existe un besoin pour une pentosanase thermostable qui conserve une bonne activité  in the manufacture of starch, agriculture, brewing, extraction of plant tissues and the manufacture of vegetable coloring matter. However, in many of these applications, high temperatures are commonly used and there is a need for a thermostable pentosanase that retains good activity.

sur une large plage de températures élevées.  over a wide range of high temperatures.

Ainsi, selon l'un des aspects de la présente in-  Thus, according to one aspect of the present

vention, la demanderesse fournit une enzyme susceptible d'être obtenue par fermentation à partir d'une souche des espèces Talaromyces emersonii, en particulier à partir de  vention, the applicant provides an enzyme that can be obtained by fermentation from a strain of Talaromyces emersonii species, in particular from

Talaromyces emersonii Stolk, synonyme de Penicillium emer-  Talaromyces emersonii Stolk, synonymous with Penicillium emer-

sonii Stolk IMI 116815, ou d'un mutant de celle-ci, et qui est capable de catalyser la dégradation de pentosanes. Il a été découvert que cette nouvelle enzyme peut être obtenue avec un bon rendement et à une concentration élevée de façon  or Stoly IMI 116815, or a mutant thereof, which is capable of catalyzing the degradation of pentosans. It has been discovered that this new enzyme can be obtained in good yield and at a high concentration of

satisfaisante pour un usage commercial.  satisfactory for commercial use.

Selon un aspect particulier de l'invention, la  According to a particular aspect of the invention, the

demanderesse fournit une enzyme susceptible d'être prépa-  plaintiff provides an enzyme that can be prepared

rée par fermentation à partir d'une souche des espèces T. emersonii, en particulier de T. emersonii IMI 116815, ou d'un mutant de celle-ci, et qui est capable de catalyser la dégradation du xylane. Le xylane est un polymère d'un  Fermented from a strain of T. emersonii species, particularly T. emersonii IMI 116815, or a mutant thereof, which is capable of catalyzing the degradation of xylan. Xylan is a polymer of a

pentose, le xylose.pentose, xylose.

On a constaté que cette nouvelle enzyme est ther-  This new enzyme has been found to be

mostable, c'est-à-dire qu'elle conserve une bonne activité à des températures élevées, et est,%par suite, d'un intérêt particulier dans la dégradation de pentosanes à hautes températures. Par exemple, dans des mesures de stabilité faites en utilisant l'enzyme préparée conformément au mode  most likely, that is, it retains good activity at elevated temperatures, and is, therefore, of particular interest in the degradation of pentosans at high temperatures. For example, in stability measurements made using the enzyme prepared according to the mode

opératoire de l'exemple 1 décrit ci-après, l'enzyme conser-  procedure of Example 1 described below, the enzyme preserves

ve encore 50 % de son activité initiale après chauffage à  50% of its initial activity after heating

95 C pendant six minutes à pH 5,0 en l'absence de substrat.  95 C for six minutes at pH 5.0 in the absence of substrate.

L'enzyme présente également une relation température-acti-  The enzyme also has a temperature-activity relationship

vité avantageuse, et manifeste une activité optimale à 87 + 2 C par utilisation d'un substrat de xylane de balles d'avoine tout en conservant 45 % de son activité optimale à 950C. Ce fait est inhabituel pour une enzyme d'origine fongique, et se différencie nettement, par exemple, des résultats obtenus avec la 0-glucanase indiquée ci-dessus qui présente un optimum mal défini à 60-70 C et conserve  It has an advantageous activity and exhibits an optimal activity at 87 ± 2 ° C. using an oat husk xylan substrate while retaining 45% of its optimum activity at 950 ° C. This fact is unusual for an enzyme of fungal origin, and clearly differs, for example, from the results obtained with the 0-glucanase indicated above which has a poorly defined optimum at 60-70 C and

seulement 40 % de son activité de pointe à 800C.  only 40% of its peak activity at 800C.

En utilisant une préparation d'enzyme brute obte-  Using a crude enzyme preparation obtained

nue par le mode opératoire de l'exemple 1 décrit ci-après, on mesure les caractéristiques suivantes présentées par l'enzyme conforme à l'invention:  by the procedure of Example 1 described below, the following characteristics are measured presented by the enzyme according to the invention:

(a) le pH correspondant à l'activité optimale de la nou-  (a) the pH corresponding to the optimal activity of the new

velle enzyme est de 5,0, mesuré à 50 C en utilisant du xylane de balles d'avoine comme substrat de pentosane; (b) la température correspondant à l'activité optimale de la nouvelle enzyme est de 87 2 C, mesurée à pH 5, 0 en utilisant du xylane de balles d'avoine comme substrat de pentosane;  the enzyme is 5.0, measured at 50 ° C using oat husk xylan as the pentosan substrate; (b) the temperature corresponding to the optimal activity of the new enzyme is 87 2 C, measured at pH 5.0 using oat husk xylan as the pentosan substrate;

(c) la présence de xylose, de glucose ou de maltose préala-  (c) the presence of xylose, glucose or maltose before

blement ajouté n'a aucun effet sur l'activité de l'en-  additionally has no effect on the activity of the

zyme lorsqu'elle est ultérieurement éprouvée à pH 5,0 et à 50 C en utilisant un substrat de xylane de balles d'avoine. L'enzyme conforme à l'invention peut généralement  zyme when subsequently tested at pH 5.0 and 50 C using an oat husk xylan substrate. The enzyme according to the invention can generally

être préparée en faisant fermenter un inoculum de T. emer-  be prepared by fermenting an inoculum of T. emer-

sonii, par exemple T. emersonii IMI 116815 ou un de ses mutants, dans un milieu nutritif lui convenant. Cependant, la demanderesse a découvert que la quantité de pentosanase produite naturellement peut être accrue par rapport à la  sonii, for example T. emersonii IMI 116815 or a mutant thereof, in a nutrient medium suitable for it. However, the applicant has discovered that the amount of naturally occurring pentosanase can be increased compared to

quantité de $-glucanase produite par une modification ap-  amount of $ -glucanase produced by an amendment

propriée du milieu de fermentation. Une caractéristique  propriety of the fermentation medium. A characteristic

préférée de la présente invention consiste en une prépara-  preferred embodiment of the present invention consists of a preparation

tion d'enzyme, et en un procédé d'obtention de cette prépa-  enzyme, and in a process for obtaining this preparation

ration, obtenue directement par fermentation de Talaromyces  ration, obtained directly by fermentation of Talaromyces

emersonii, de préférence T. emersonii IMI 116815, dans la-  emersonii, preferably T. emersonii IMI 116815, in the

quelle le niveau de l'activité de pentosanase par rapport à l'activité d'une quelconque 0-1,4/$-1,3-glucanase est, du fait de cette modification, plus élevé que celui qui est  the level of pentosanase activity relative to the activity of any 0-1,4 / $ - 1,3-glucanase is, because of this modification, higher than that which is

obtenu de façon classique.obtained in a classical way.

La fermentation peut être conduite par des métho-  Fermentation can be conducted by methods

des bien connues dans l'industrie de la fermentation. La  well known in the fermentation industry. The

souche de T. emersonii peut ainsi être cultivée sous con-  strain of T. emersonii can be grown under

ditions aérobies, de préférence en culture immergée, avec agitation ou brassage avec de l'air ou de l'oxygène. Le milieu de fermentation utilisé doit contenir une source de carbone assimilable, une source d'azote digestible et, si on le désire, des substances favorisant la croissance ainsi  aerobic conditions, preferably in submerged culture, with stirring or mixing with air or oxygen. The fermentation medium used must contain a source of assimilable carbon, a source of digestible nitrogen and, if desired, growth-promoting substances as well as

que des sels minéraux.than mineral salts.

Les sources de carbone appropriées comprennent des matières riches en pentosanes, par exemple des céréales  Suitable carbon sources include pentosan rich materials, for example cereals

telles que l'orge et le blé, des matières solubles de rési-  such as barley and wheat, soluble solubles of

dus ou autres sous-produits de la distillation de malt ou de grains, de la cellulose, par exemple de la variété Solka  or other by-products of distillation of malt or grain, of cellulose, for example of the variety Solka

Floc, ou du xylane.Floc, or xylan.

Les sources d'azote appropriées comprennent, par exemple, l'orge, des matières solubles de résidus ou autres sous-produits de la distillation de malt ou de grains, la farine de soja, des nitrates ou des sels d'ammonium tels  Suitable nitrogen sources include, for example, barley, soluble residues or other by-products of malt or grain distillation, soybean meal, nitrates or ammonium salts such as

que le dihydrogénophosphate d'ammonium.  than ammonium dihydrogen phosphate.

Dans le cas o l'on désire augmenter le niveau de l'activité de la pentosanase par rapport à l'activité d'une quelconque 0-glucanase, il est souhaitable d'utiliser une source de carbone ou d'azote choisie parmi Scotagran (un mélange de matières solubles avec des grains d'orge séchés), le nitrate d'ammonium, les sirops de résidus de distillation de moûts fermentés, les boulettes de maïs (grains de maïs séchés mélangés avec des matières solubles),  In the case where it is desired to increase the level of pentosanase activity relative to the activity of any O-glucanase, it is desirable to use a carbon or nitrogen source selected from Scotagran ( a mixture of solubles with dried barley grains), ammonium nitrate, fermented bottled distillation syrup syrups, corn pellets (dried corn kernels mixed with soluble materials),

le sirop de Curne et l'extrait soluble de maïs.  Curne syrup and soluble corn extract.

Les sels minéraux que l'on peut utiliser dans le  The mineral salts that can be used in the

milieu de fermentation peuvent être, par exemple, les sul-  fermentation medium may be, for example,

fates ou chlorures de potassium, de magnésium ou de sodium.  fats or chlorides of potassium, magnesium or sodium.

Les substances favorisant la croissance que l'on peut utiliser comprennent les oligo-éléments tels que le  The growth promoting substances that can be used include trace elements such as

manganèse, le fer, le zinc, le cuivre ou le phosphore.  manganese, iron, zinc, copper or phosphorus.

Le milieu de fermentation renferme avantageuse-  The fermentation medium contains advantageous

ment de l'orge en une concentration dans la plage de 0,2  barley at a concentration in the range of 0.2

à 3,5 % en poids par volume, des matières solubles de rési-  at 3.5% w / v, soluble solubles of

dus de distillation ou autres sous-proudits de la distilla-  distilleries or other underproducts of the distillation

tion de malt ou de grains en une concentration dans la plage ae 0,4 à 5,5 % en poids par volume, et de 0,2 à 3,0 %  malt or grain in a concentration in the range of 0.4 to 5.5% by weight per volume, and 0.2 to 3.0%

de cellulose en poids par volume.cellulose by weight by volume.

Les conditions de culture telles que la tempéra-  The growing conditions such as temperature

ture, le pH et le temps de fermentation sont choisies de telle façon que la souche employée puisse accumuler une quantité maximale de l'enzyme désirée. Par exemple, la fermentation est avantageusement conduite à une température comprise dans la plage de 35-60 C, de préférence de 50-54 C, à un pH de 3,5-4,5 et pendant i à 20 jours, de préférence  The pH, and the fermentation time, are chosen so that the strain employed can accumulate a maximum amount of the desired enzyme. For example, the fermentation is conveniently conducted at a temperature in the range of 35-60 C, preferably 50-54 C, at a pH of 3.5-4.5 and for i to 20 days, preferably

7 à 10 jours.7 to 10 days.

Le liquide de culture brut peut être utilisé di- rectement pour son activité enzymatique, ou bien, si on le désire, on peut sécher le bouillon de culture entier et utiliser la poudre résultante. Si on le désire, on peut effectuer une certaine purification de la pentosanase, par exemple par des techniques de chromatographie, pour obtenir une préparation d'enzyme ayant une activité de pentosanase  The crude culture liquid can be used directly for its enzymatic activity, or, if desired, the whole culture broth can be dried and the resulting powder used. If desired, some purification of the pentosanase can be performed, for example by chromatographic techniques, to obtain an enzyme preparation having pentosanase activity.

accrue par rapport à l'activité de toute $-1,4/1,3-gluca-  increased relative to the activity of any $ -1,4 / 1,3-glucan

nase, et une méthode pour effectuer une telle purification  nase, and a method for performing such purification

ainsi que le produit obtenu constituent des aspects supplé-  as well as the product obtained are additional aspects

mentaires de l'invention.of the invention.

En variante, l'enzyme, qui est exocellulaire, peut être extraite du produit de fermentation grâce, par exemple, à des méthodes classiques. Ainsi, par exemple, une première  Alternatively, the enzyme, which is exocellular, can be extracted from the fermentation product by, for example, conventional methods. So, for example, a first

étape consiste normalement à séparer par filtration le my-  This step normally consists of separating the

célium formé, de préférence au moyen d'une filtration à pré-  formed, preferably by means of pre-filtration.

couche, c'est-à-dire en utilisant un filtre ayant été re-  layer, that is to say using a filter having been re-

couvert d'un adjuvant d'assistance de la filtration. Le filtrat résultant peut être directement utilisé ou alors peut commodément être concentré, de préférence sous vide,  covered with a filter aid adjuvant. The resulting filtrate may be directly used or may conveniently be concentrated, preferably under vacuum,

afin d'obtenir l'enzyme sous forme d'un concentré liquide.  to obtain the enzyme in the form of a liquid concentrate.

Le concentré liquide peut être lui-même utilisé en tant que source d'enzyme. Si on le désire, on peut ajouter à ces concentrés liquides des substances telles que le chlorure de sodium, le benzoate de sodium ou le métabisulfite de  The liquid concentrate can itself be used as an enzyme source. If desired, liquid concentrates such as sodium chloride, sodium benzoate or metabisulphite can be added to these liquid concentrates.

sodium qui confèrent à l'enzyme une stabilité à la conser-  which give the enzyme stability to the

vation, une thermostabilité et/ou une stabilité bactério-  cation, thermostability and / or bacterial stability

logique. En variante, le concentré liquide peut être ab-  logic. Alternatively, the liquid concentrate can be ab-

sorbé dans une matière solide appropriée, par exemple du blé ou de l'orge broyés, éventuellement en présence d'un support tel que la carboxyméthylcellulose sodique, et la  sorbed in a suitable solid material, for example milled wheat or barley, optionally in the presence of a carrier such as sodium carboxymethylcellulose, and the

masse humide résultante séchée pour fournir un produit d'en-  resulting wet mass dried to provide a product of

zyme actif. Si on le désire, le concentré liquide peut être lui-même séché, par exemple par séchage par pulvérisation, lyophilisation ou séchage au rouleau, afin d'obtenir une  active zyme. If desired, the liquid concentrate can itself be dried, for example by spray drying, lyophilization or roller drying, to obtain a

composition d'enzyme sèche.dry enzyme composition.

A moins que l'extraction ne soit poussée, ce qui, à des fins commerciales, est ordinairement évité pour des raisons économiques et n'est pas nécessaire vu la gamme des utilisations auxquelles peut s'appliquer une composition plus brute, la composition présentera également d'autres  Unless the extraction is extensive, which for commercial purposes is ordinarily avoided for economic reasons and is not necessary in view of the range of uses to which a more crude composition may apply, the composition will also other

activités enzymatiques.enzymatic activities.

Dans le cas o l'on désire un produit solide d'enzyme, il peut être obtenu à partir du filtrat ou d'un concentré liquide de celui-ci, par des méthodes classiques telles qu'une précipitation par addition, par exemple d'un  In the case where a solid enzyme product is desired, it can be obtained from the filtrate or a liquid concentrate thereof, by conventional methods such as addition precipitation, e.g. a

excès de solvant organique miscible à l'eau tel qu'un al-  excess of water-miscible organic solvent such as an alcohol

cool, par exemple l'éthanol, ou qu'une cétone, par exemple l'acétone. On peut utiliser une précipitation directe ou  cool, for example ethanol, or a ketone, for example acetone. Direct precipitation or

bien une précipitation sur un support, des supports typi-  a precipitation on a support, typical

ques comprenant par exemple l'amidon, la méthyl-cellulose  such as starch, methyl cellulose

ou la carboxyméthyl-cellulose sodique.  or sodium carboxymethylcellulose.

L'inoculum de T. emersonii utilisé dans la fermen-  The inoculum of T. emersonii used in the fermentation

tation peut être obtenu, par exemple, en développant pro-  can be achieved, for example, by developing

gressivement une culture en surface de l'organisme. Le dé-  gressively a culture on the surface of the body. Of the-

veloppement jusqu'à une fermentation de phase productive peut commodément être effectué en conduisant un stade de croissance végétative en laboratoire suivie par une ou plusieurs étapes d'ensemencement dans des récipients de  development to a productive phase fermentation can conveniently be carried out by conducting a vegetative growth stage in the laboratory followed by one or more inoculation steps in

fermentation agités.agitated fermentation.

Ainsi, dans une préparation d'inoculum typique, l'organisme est ensemencé en stries sur un milieu nutritif  Thus, in a typical inoculum preparation, the organism is streaked on a nutrient medium.

solide, par exemple un milieu de gélose contenant une pep-  solid, for example an agar medium containing a pep-

tone (par exemple 0,5 % en poids/volume), du chlorure de sodium (par exemple 0,4 % en poids/volume), du glycérol (par exemple 0,75 % en poids/volume), de la mélasse (par exemple 0,8 % en poids/volume), du dihydrogénophosphate de  tone (eg 0.5% w / v), sodium chloride (eg 0.4% w / v), glycerol (eg 0.75% w / v), molasses ( for example 0.8% w / v), dihydrogen phosphate from

potassium (par exemple 0,006 % en poids/volume) et du sul-  potassium (for example 0.006% w / v) and sulphate

fate de magnésium (par exemple 0,005 % de MgSO4.7H20 en  magnesium fate (eg 0.005% MgSO4.7H20 in

poids/volume) ayant été préalablement stérilisé, par exem-  weight / volume) having been previously sterilized, for example

ple par passage à l'autoclave à environ 120 C pendant 15 minutes, et mis à refroidir. L'incubation est de préférence conduite à environ 37 C pendant environ 10 jours, après quoi les spores produites sont utilisées pour inoculer un  by autoclaving at about 120 ° C for 15 minutes, and allowed to cool. Incubation is preferably conducted at about 37 ° C for about 10 days, after which the spores produced are used to inoculate a

milieu liquide destiné à la croissance végétative, stéri-  liquid medium for vegetative growth, sterility

lisé par exemple par passage à l'autoclave à environ 120 C pendant 15 minutes, et contenant de l'extrait de malt (par exemple 3,3 % en poids/volume), de l'extrait de levure (par exemple 2,0 % en poids/volume) et du dihydrogénophosphate d'ammonium (par exemple 0,6 % en poids/volume). La culture est de préférence conduite jusqu'à ce qu'il existe un bon développement mycénien, par exemple, pendant environ 72  for example, by autoclaving at about 120 ° C. for 15 minutes, and containing malt extract (eg 3.3% w / v), yeast extract (e.g. % w / v) and ammonium dihydrogenphosphate (e.g. 0.6% w / v). The culture is preferably conducted until there is good mycene development, for example, for about 72 hours.

heures à 45 C lorsqu'on utilise environ 500 ml de milieu.  45 hours when using about 500 ml of medium.

La culture végétative résultante est ensuite-  The resulting vegetative culture is then

utilisée pour inoculer un premier stade d'ensemencement sous agitation. Le milieu convenant à ce stade contient de préférence les mêmes composants que ceux précédemment décrits pour le milieu de fermentation principale, et est  used to inoculate a first inoculation stage with stirring. The medium suitable at this stage preferably contains the same components as those previously described for the main fermentation medium, and is

préparé de préférence en stérilisant ensemble tous les in-  preferably prepared by sterilizing together all

grédients dans le récipient du stade d'ensemencement, par exemple par injection de vapeur d'eau. Un milieu typique  in the container of the seeding stage, for example by steam injection. A typical environment

convenant au stade d'ensemencement est le "Milieu A" dé-  suitable for the seeding stage is "Medium A" de-

crit ci-après au tableau 1. En utilisant environ 40 litres de milieu, la culture est de préférence effectuée à environ C pendant environ 76 heures sous agitation rotative, par exemple à 420 tr/min, et aération, par exemple à 50 litres/  Hereinafter described in Table 1. Using about 40 liters of medium, the culture is preferably carried out at about C for about 76 hours with rotary stirring, for example at 420 rpm, and aeration, for example at 50 liters / minute.

minute d'air.minute of air.

La culture d'ensemencement ainsi obtenue peut ensuite être utilisée pour inoculer un stade de production  The seed culture thus obtained can then be used to inoculate a production stage.

comme décrit ci-dessus ou, si davantage de semence est né-  as described above or, if more seed is born

cessaire, peut être utilisée dans des stades d'ensemence-  may be used in seed stages.

ment ultérieurs, de nature identique au premier.  later, identical in nature to the first.

Il est possible d'obtenir des mutants de T. emer-  It is possible to obtain mutants of T. emer-

sonii destinés à être utilisés dans les processus de fer-  intended for use in iron and steel

mentation, par des méthodes classiques d'amélioration des  by means of conventional methods of improving

souches, par exemple par utilisation de radiations ioni-  strains, for example by the use of ionizing radiation

santes (par exemple les rayons X et y, la lumière ultra-  (for example, X and y rays, ultraviolet light,

violette; ou la lumière ultraviolette en présence d'un agent photosensibilisant tel que le 8-méthoxypsoralène), de  violet; or ultraviolet light in the presence of a photosensitizing agent such as 8-methoxypsoralen),

produits chimiques (par exemple l'oxyde nitreux; l'hydro-  chemicals (eg nitrous oxide;

xylamine; des analogues de bases pyrimidiques tels que le -bromo-uracile; les acridines; des agents alkylants tels que le méthanesulfonate d'éthyle ou le gaz moutarde; le peroxyde d'hydrogène; les phénols ou le formaldéhyde),  xylamine; pyrimidine base analogs such as -bromo-uracil; acridines; alkylating agents such as ethyl methanesulphonate or mustard gas; hydrogen peroxide; phenols or formaldehyde),

de techniques thermiques ou génétiques (par exemple, re-  thermal or genetic techniques (for example,

combinaison, transduction, transformation, lysogénisation,  combination, transduction, transformation, lysogenization,

conversion lysogénique et techniques de sélection des mu-  lysogenic conversion and selection techniques for

tants spontanés).spontaneous tants).

L'activité d'enzyme requise peut être déterminée  The required enzyme activity can be determined

dans le liquide de culture ou en tout point dans une opéra-  in the culture liquid or at any point in an operation.

tion d'isolement grâce à un simple essai conçu afin de do-  isolation by means of a simple test designed to

ser les sucres réducteurs libérés par l'action de l'enzyme sur un substrat de pentosane. Ainsi, dans un essai, un  reduce the reducing sugars released by the action of the enzyme on a pentosan substrate. So, in a test, a

échantillon de la préparation d'enzyme à mesurer est con-  sample of the enzyme preparation to be measured is

venablement dilué et est ensuite mis à incuber pendant 10 minutes avec un excès du xylane de pentosane, à 50 C dans un tampon acétate de pH 5,0. Le sucre libéré est dosé en tant qu'équivalent de maltose par addition d'un réactif consistant en sel alcalin de l'acide 3,5-dinitrosalicylique,  diluted and is then incubated for 10 minutes with an excess of pentosan xylan at 50 ° C. in an acetate buffer of pH 5.0. The sugar released is dosed as a maltose equivalent by addition of an alkaline salt reagent of 3,5-dinitrosalicylic acid,

chauffage pendant 5 minutes sur bain-marie bouillant, re-  heating for 5 minutes on a boiling water bath,

froidissement rapide à l'eau glacée, mesure de l'absorption de la solution à 540 nm et conversion de cette mesure en un  rapid chilling with ice water, measuring the absorption of the solution at 540 nm and converting this measurement into a

équivalent de maltose par référence à une courbe d'étalon-  equivalent of maltose by reference to a standard curve.

nage obtenue en préparant des dilutions-type de maltose de  obtained by preparing standard dilutions of maltose of

teneur en eau connue et en les faisant réagir avec le réac-  water content and by reacting them with the reaction

tif dinitrosalicylique dans les conditions qui viennent d'être décrites. De la manière utilisée ici, une unité d'enzyme libère 1 mg d'équivalent de maltose par minute  dinitrosalicylic acid under the conditions just described. As used herein, one unit of enzyme releases 1 mg of maltose equivalent per minute

dans les conditions d'essai à 50 C et pH 5,0.  under test conditions at 50 C and pH 5.0.

L'enzyme conforme à l'invention est utile pour  The enzyme according to the invention is useful for

divers objectifs pour lesquels sont utilisées d'autres pen-  various objectives for which other

tosanases. Ainsi, par exemple, elle peut être utilisée dans  tosanases. So, for example, it can be used in

la cuisson, afin de réduire la teneur naturelle en pento-  cooking, in order to reduce the natural content of

sanes de la farine de blé et d'améliorer ainsi la conser-  wheat flour and thereby improve the conservation

vation des qualités du pain. Elle peut être utilisée dans la fabrication et l'hydrolyse de l'amidon, afin d'abaisser  the qualities of bread. It can be used in the manufacture and hydrolysis of starch, in order to lower

la teneur en pentosanes des céréales et de réduire la vis-  the pentosan content of cereals and to reduce the

cosité des bouillies d'amidon qui, autrement, affecteraient  cosity of starch slurries that would otherwise affect

de manière nuisible l'efficacité et le coût de la récupéra-  detrimental to the efficiency and cost of recovering

tion de l'amidon et de l'hydrolyse subséquente. Elle peut être utilisée en agriculture, afin d'améliorer la qualité  starch and subsequent hydrolysis. It can be used in agriculture to improve the quality

des fourrages -ensilés mixtes et des aliments pour animaux.  mixed forages and feed.

Elle peut être utilisée dans le brassage, pour améliorer la production et l'extraction des sucres susceptibles de fermenter lorsque le fardeau renferme par exemple du blé ou du sorgho, et pour la prévention ou le traitement de certains types de trouble. Elle peut être utilisée pour l'extraction de tissus végétaux, par exemple l'extraction  It can be used in brewing, to improve the production and extraction of sugars that can ferment when the burden includes eg wheat or sorghum, and for the prevention or treatment of certain types of disorders. It can be used for the extraction of plant tissues, for example extraction

du thé, du café et des fruits; et pour extraire des algi-  tea, coffee and fruit; and to extract algi-

nates à partir d'algue; et dans la fabrication de matières colorantes végétales naturelles. Pour certaines de ces  nates from seaweed; and in the manufacture of natural vegetable coloring materials. For some of these

applications, la thermostabilité de l'enzyme est particu-  applications, the thermostability of the enzyme is particularly

lièrement avantageuse en regard destempératures auxquelles  advantageously with regard to the temperatures at which

sont conduites les opérations.are conducted operations.

Selon un autre aspect de l'invention, la deman-  According to another aspect of the invention, the

deresse fournit en conséquence une méthode de réduction de  deresse therefore provides a method of reducing

la teneur en pentosanes d'une matière contenant des pento-  the pentosan content of a pentoxide-containing material

sanes, méthode consistant en la mise en contact de ladite  sanes, a method consisting in placing the said

matière avec une enzyme de l'invention.  material with an enzyme of the invention.

Des pentosanes typiques qui peuvent être dégradés avec l'enzyme de l'invention comprennent ceux qui se trou- vent dans des céréales telles que le blé et l'avoine; des plantes telles que le thé et le café et leurs extraits; les fruits; les légumes; les algues et le sorgho. Dans un exemple, le pentosane peut être du xylane, par exemple du O10 xylane de balles d'avoine. Dans une forme préférée de mise  Typical pentosans which can be degraded with the enzyme of the invention include those found in cereals such as wheat and oats; plants such as tea and coffee and extracts thereof; the fruits; the vegetables; algae and sorghum. In one example, the pentosan may be xylan, for example oxo xylan from oatmeal. In a preferred form of setting

en application, la mntière contenant des pentosanes à dé-  the application containing pentosans containing

grader provient du blé.grader comes from wheat.

Dans un autre mode de réalisation de l'invention,  In another embodiment of the invention,

la demanderesse fournit une méthode de réduction de la te-  the plaintiff provides a method of reducing the

neur en xylane d'une matière contenant du xylane, méthode  xylan neur of a material containing xylan, method

dans laquelle la matière est mise en contact avec une en-  in which the material is brought into contact with a

zyme conforme à l'invention.zyme according to the invention.

L'enzyme ou la composition conforme à l'invention peut être utilisée en employant les méthodes habituellement rencontrées dans la technologie des enzymes. Ainsi, par exemple, l'enzyme peut être mise en contact avec un milieu aqueux contenant le substrat soit en suspension, soit en mélange, soit encore en solution. La température de réaction peut varier selon la nature exacte de la réaction mais se situe en général dans la plage de 3595 C, avantageusement à l'extrémité supérieure de cette plage, à 90 C et plus dans certaines applications. Le pH du mélange réactionnel peut se situer par exemple dans la plage de 4,0-6,5, de préférence de 4,5-5,5 et notamment à pH 5,0. Si on le  The enzyme or composition according to the invention can be used by employing the methods usually encountered in enzyme technology. Thus, for example, the enzyme may be contacted with an aqueous medium containing the substrate either in suspension, in admixture, or in solution. The reaction temperature may vary depending on the exact nature of the reaction but is generally in the range of 35 ° C, preferably at the upper end of this range, to 90 ° C and higher in some applications. The pH of the reaction mixture can be, for example, in the range of 4.0-6.5, preferably 4.5-5.5, and especially at pH 5.0. If we

désire, le mélange réactionnel peut contenir d'autres enzy-  desired, the reaction mixture may contain other enzymes

mes ajoutées, par exemple une a-amylase.  my added, for example an-amylase.

La souche de Talaromyces emersonii qui a été uti-  The strain of Talaromyces emersonii that has been used

lisée est une sous-culture de celle qui a été déposée au Commonwealth Institute, Kew, Angleterre, sous le numéro IMI 116815 en 1972, avant qu'ait été signé le Traité de Budapest sur la Reconnaissance Internationale du Dépôt de Microorganismes aux fins des Formalités de Délivrance de  is a subculture of that which was deposited at the Commonwealth Institute, Kew, England, under the number IMI 116815 in 1972, before the signing of the Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for Formalities of Deliverance

Brevets (Budapest 1977). La demanderesse a récemment redé-  Patents (Budapest 1977). The applicant has recently

posé cette souche au LIre dépositaire le 19 Novembre 1984 sous le nunmro CIl OC 290604 et sous les conditions du Traité de Budapest et la demanderesse considère que ces deux souches sont identiques et que  This strain was deposited with the Depository Bank on November 19, 1984, under Order No. OC 290604 and under the conditions of the Budapest Treaty, and the Applicant considers that these two strains are identical and that

dacune de celles-ci est utilisable.none of them is usable.

Les exemples suivants illustrent l'invention.  The following examples illustrate the invention.

Toutes les températures sont exprimées en C et tous les  All temperatures are in C and all

pourcentages sont exprimés en poids/volume.  percentages are expressed in weight / volume.

Exemple 1.Example 1

On cultive Talaromyces emersonii IMI 116815 à 37'C pendant 10 jours sur un milieu de gélose stérilisé dans un autoclave et contenant 0,5 % de peptone, 0,4 % de NaCl, 0,75 % de glycérol, 0,8 % de mélasses, 0,006 % de  Talaromyces emersonii IMI 116815 was cultured at 37 ° C for 10 days on sterilized agar medium in an autoclave and containing 0.5% peptone, 0.4% NaCl, 0.75% glycerol, 0.8% molasses, 0.006% of

KH2PO4 et 0,005 % de MgSO4.7H20.KH2PO4 and 0.005% MgSO4.7H2O.

Les spores produites sont utilisées pour inocu-  The spores produced are used for inoculation

ler des flacons d'un milieu liquide stérilisé par passage en autoclave et contenant 3,3 % d'extrait de malt, 2,0 %  bottles of a sterilized liquid medium by autoclaving and containing 3.3% of malt extract, 2.0%

d'extrait de levure et 0,6 % de dihydrogénophosphate d'am-  of yeast extract and 0.6% of ammonium dihydrogenphosphate

monium. On place les flacons sur une secoueuse rotative (210 tours/mn; excentricité de 4,9 cm) pendant 3 jours à C. La culture végétative résultante (400 ml) est utilisée pour inoculer 40 litres de Milieu A (tableau 1)  monium. The flasks were placed on a rotary shaker (210 rpm, eccentricity 4.9 cm) for 3 days at C. The resulting vegetative culture (400 ml) was used to inoculate 40 liters of Medium A (Table 1).

stérilisé par injection de vapeur d'eau dans un fermenta-  sterilized by injecting water vapor into a fermenta-

teur en acier inoxydable d'une capacité de 50 litres. La culture est agitée à 420 tours/minute et aérée à 50 litres/  stainless steel tank with a capacity of 50 liters. The crop is shaken at 420 rpm and aerated at 50 liters /

mn pendant 75 heures à 50 C.min for 75 hours at 50 ° C.

La culture résultante (4,5 litres) est utilisée pour inoculer 40 litres de Milieu A (tableau 1) stérilisé par injection de vapeur d'eau dans un fermentateur en acier inoxydable d'une capacité de 50 litres. La culture  The resulting culture (4.5 liters) was used to inoculate 40 liters of sterilized Medium A (Table 1) by injecting steam into a stainless steel fermenter with a capacity of 50 liters. Culture

est agitée à 420 tours/minute et aérée à 50 litres/mn pen-  is agitated at 420 rpm and aerated at 50 liters / min

dant 75 heures à 50 C.75 hours at 50 C.

La culture résultante (4,5 litres) est utilisée pour inoculer 40 litres de Milieu A stérilisé par injection de vapeur d'eau dans un fermentateur en acier inoxydable d'une capacité de 50 litres. La culture est agitée à 420 tours/minute et aérée à 50 litres/mn pendant 36 heures à 500C. La culture résultante (16 litres) est utilisée pur inoculer 32 litres de Milieu B (tableau 1) stérilisé par injection de vapeur d'eau dans un fermentateur en acier  The resulting culture (4.5 liters) was used to inoculate 40 liters of sterilized Medium A by steam injection into a stainless steel fermenter with a capacity of 50 liters. The culture is stirred at 420 rpm and aerated at 50 liters / min for 36 hours at 500C. The resulting culture (16 liters) is used to inoculate 32 liters of medium B (Table 1) sterilized by injection of steam into a steel fermenter

inoxydable d'une capacité de 50 litres.  stainless steel with a capacity of 50 liters.

La culture est aérée à 50 litres/minute et agitée par intermittence à 420 tours/minute à 50 C pendant 10 jours. On ajoute de l'eau stérile à un débit moyen de  The culture is aerated at 50 liters / minute and stirred intermittently at 420 rpm at 50 ° C. for 10 days. Sterile water is added at an average flow rate of

1,5 litres par jour.1.5 liters a day.

Un titrage du fluide exocellulaire donne une  A titration of the exocellular fluid gives a

concentration de l'enzyme selon l'invention de 36 V /g.  concentration of the enzyme according to the invention of 36 V / g.

TABLEAU 1TABLE 1

Ingrédients Milieu A (%) Milieu B (%) Orge broyée 1,0 3,38 Matières solubles de résidus de distillation 2,25- 5,06 "Solka Floc" 2,25 2,53  Ingredients Medium A (%) Medium B (%) Crushed barley 1.0 3.38 Soluble residue bottoms 2.25- 5.06 "Solka Floc" 2.25 2.53

(NH4)2 H2PO4 0,34 0,77(NH4) 2H2PO4 0.34 0.77

K2S04 0,12 0,27K2S04 0.12 0.27

MgSO4.7H20 0,01 0,11 NaCl 0,11 0,11 MnSO4. 4H20 0,0005 0,001 FeSO4.7H20 0, 004 0,008 ZnSO4. 7H20 0,004 0,008 CuSO4.5H20 0,0005 0,001  MgSO4.7H2O 0.01 0.11 NaCl 0.11 0.11 MnSO4. 4H20 0.0005 0.001 FeSO4.7H2O 0.004 0.008 ZnSO4. 7H20 0.004 0.008 CuSO4.5H20 0.0005 0.001

H3PO4 0,5 1,02H3PO4 0.5 1.02

Eau jusqu'à 100 %Water up to 100%

Exemple 2.Example 2

Mise en évidence de la variation du rapport pentosanase:  Demonstration of the variation of the pentosanase ratio:

glucanase sur la fermentation.glucanase on fermentation.

a) Des spores sont produites comme dans l'exemple 1 et utilisées pour inoculer un stade d'ensemencement dans  a) Spores are produced as in Example 1 and used to inoculate a seeding stage in

des flacons de 250 ml contenant 40 ml de Milieu A sté-  250 ml flasks containing 40 ml of Stable Medium A

rilisé par passage en autoclave. Les flacons sont mis à incuber à 45 C pendant 72 heures, en secouant à 200 tours/minute. La culture résultante (4 ml) est utilisée pour inoculer 40 ml de Milieu B stérilisé par passage  rilized by autoclaving. The flasks are incubated at 45 C for 72 hours, shaking at 200 rpm. The resulting culture (4 ml) is used to inoculate 40 ml of sterilized Medium B per pass

en autoclave dans des flacons de 250 ml. Après incuba-  autoclaved in 250 ml flasks. After incubation

tion à 45 pendant 12 jours, en secouant à 200 tours/ minute, le fluide de culture exocellulaire est titré pour déterminer les activités de pentosanase (P) et de $-glucanase (G) de l'orge, et l'on calcule le rapport P:G. b) On utilise essentiellement le m&me système qu'en a) cidessus. En supprimant le Solka Floc et en incorporant du xylane d'épeautres d'avoine (2,2 %), on obtient un rapport P:G  at 45 rpm for 12 days, shaking at 200 rpm, the exocellular culture fluid is titrated to determine barley pentosanase (P) and barley $ -glucanase (G) activities, and the P ratio: G. (b) Essentially the same system is used as in (a) above. By removing Solka Floc and incorporating xylan from oat spelled (2.2%), a P: G ratio is obtained.

de 71 % supérieur à celui obtenu en a).  71% higher than that obtained in (a).

Exemple 3.Example 3

Pour démontrer l'activité de pentosanase de l'en-  To demonstrate the pentosanase activity of the

zyme produite dans l'exemple 1, on met à incuber une solu-  zyme produced in Example 1, a solution is incubated

tion de pentosane à 1 % à 50'C dans un tampon à pH 5,0 en  1% pentosane at 50 ° C in pH 5.0 buffer

présence de l'enzyme ajoutée (système d'essai) ou avec ad-  presence of the added enzyme (test system) or with ad-

dition d'une quantité équivalente d'eau (système témoin).  addition of an equivalent quantity of water (control system).

Le substrat de pentosane utilisé est le xylane, provenant  The pentosan substrate used is xylan, from

*de balles d'avoine.* oat balls.

Des échantillons du système d'essai sont prélevés au bout de 10 minutes, 30 minutes et 22,5 heures, refroidis brutalement pour éviter une réaction supplémentaire puis  Samples of the test system are taken after 10 minutes, 30 minutes and 22.5 hours, cooled rapidly to avoid further reaction and then

appliqués en gouttes sur des plaques carrées de chromato-  applied in drops on square plates of chromate

graphie en couche mince de 20 cm de côté recouvertes de 0,25 mm de gel de silice. On applique également des gouttes  20 cm side thin layer graphite coated with 0.25 mm silica gel. We also apply drops

de solutions de sucre de référence et du système témoin.  of reference sugar solutions and the control system.

La phase mobile est constituée par un mélange nbutanol:pyridine:éthanol:eau (20:15:25:10). La détection s'effectue par pulvérisation, sur les plaques séchées, de molybdate d'ammonium à 5 % dans l'acide sulfurique à 5 %,  The mobile phase consists of a mixture of n-butanol: pyridine: ethanol: water (20: 15: 25: 10). The detection is carried out by spraying, on the dried plates, 5% ammonium molybdate in 5% sulfuric acid,

puis en chauffant à 105 C pendant 15 minutes.  then heating at 105 C for 15 minutes.

Tous les échantillons d'essai présentent, entre  All test samples are presented between

autres, une tache d'une valeur de Rf identique à celle pré-  other, a stain with a value of Rf identical to that pre-

sentée par la solution de sucre de référence à base de xy-  with the reference sugar solution based on xy-

lose. Etant donné que l'échantillon témoin ne donne qu'une seule tache à l'origine, cette tache d'essai ne peut provenir d'une contamination par le xylose du substrat ni  lose. Since the control sample gives only a single spot at the origin, this test spot can not come from xylose contamination of the substrate or

de son hydrolyse chimique: elle doit provenir d'une dé-  its chemical hydrolysis: it must come from a

gradation enzymatique du pentosane.enzymatic gradation of pentosan.

Exemple 4.Example 4

L'essai comparatif suivant est destiné à illus-  The following comparative test is intended to illustrate

trer l'utilité potentielle de l'enzyme selon l'invention  the potential utility of the enzyme according to the invention

dans un procédé de digestion enzymatique d'amidon de blé.  in a process of enzymatic digestion of wheat starch.

On secoue énergiquement l'enzyme (2 ml) préparée  The enzyme (2 ml) prepared is vigorously shaken

selon l'exemple 1, de la farine de blé de qualité infé-  according to Example 1, wheat flour of inferior quality

rieure (155 g), du chlorure de sodium (2 g), du chlorure  (155 g), sodium chloride (2 g), chlorine

de calcium (0,17 g), de l'alpha-amylase bactérienne "Terma-  of calcium (0.17 g), bacterial alpha-amylase

myl" (Novo Industri A/S) (1 ml) et de l'eau (250 ml) dans un flacon en verre. On ajuste le pH à 6,5 en utilisant de la soude caustique. Le goulotdu récipient est recouvert afin de minimiser l'évaporation et le flacon est maintenu pendant 5 heures à une température de 90 C. L'hydrolyse de l'amidon se produit (résultat négatif de l'essai à l'iode) et la viscosité du produit de digestion est de  myl "(Novo Industri A / S) (1 ml) and water (250 ml) in a glass vial The pH is adjusted to 6.5 using caustic soda. minimize evaporation and the flask is kept for 5 hours at a temperature of 90 C. Starch hydrolysis occurs (negative result of the iodine test) and the viscosity of the digestion product is of

43 mPa.s.43 mPa.s.

Dans une expérience témoin dans laquelle on omet l'enzyme de l'invention, la viscosité finale du produit de  In a control experiment in which the enzyme of the invention is omitted, the final viscosity of the product of

digestion est de 127 mPa.s.digestion is 127 mPa.s.

Les exemples suivants illustrent des expériences  The following examples illustrate experiences

effectuées pour caractériser l'enzyme selon l'invention.  performed to characterize the enzyme according to the invention.

Dans chaque exemple, l'enzyme utilisée est préparée selon la méthode de l'exemple 1, à la différence qu'on ajoute  In each example, the enzyme used is prepared according to the method of Example 1, with the difference that

de petites quantités de benzoate de sodium et de métabi-  small amounts of sodium benzoate and metabis-

sulfite de sodium au fluide exocellulaire comme stabili-  sodium sulphide to the exocellular fluid as a stabilizer

sants bactériologiques. L'activité enzymatique est déter-  bacteriological health. The enzymatic activity is deter-

minée dans chaque exemple en utilisant un excès de solution aqueuse à 1 % de xylane de balles d'avoine comme substrat de pentosane et en mesurant l'augmentation de l'activité réductrice après une incubation de 10 minutes, en référence  each example using an excess of 1% aqueous solution of oat bean xylan as a pentosan substrate and measuring the increase of the reducing activity after a 10 minute incubation, with reference

à une courbe d'étalonnage du xylose. Le pH et la tempéra-  to a standard curve of xylose. PH and temperature

ture de chaque incubation sont indiqués dans les exemples.  Each incubation is indicated in the examples.

Exemple 5.Example 5

La relation pH-activité est obtenue à une tempé-  The pH-activity relationship is obtained at a temperature of

rature de 50 C.at 50 C.

pH 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 % d'activité maximale 62 85 100 84 70 47 Une hydrolyse importante se produit dans toute  pH 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5% maximum activity 62 85 100 84 70 47 Significant hydrolysis occurs throughout

la gamme illustrée.the illustrated range.

Exemple 6.Example 6

On étudie la stabilité thermique en maintenant les échantillons à des températures de 60, 70, 80, 90 et C en l'absence de substrat et en prélevant des quantités à intervalles de temps pour obtenir une famille de courbes activité résiduelle-temps. L'activité restante est mesurée à pH 5,0 et à 50 C: - à 60"C, on ne décèle pas de perte d'activité au bout de minutes, - à 70 C, il subsiste encore 70 % de l'activité initiale après 1 heure, - à 80 C, il subsiste encore 70 % de l'activité initiale après 30 minutes, - à 90 C, il subsiste encore 50 % de l'activité initiale après 8 minutes, - à 95 C, il subsiste encore 50 % de l'activité initiale  The thermal stability is studied by keeping the samples at 60, 70, 80, 90 and C in the absence of substrate and taking amounts at intervals to obtain a family of residual activity-time curves. The remaining activity is measured at pH 5,0 and 50 ° C: - at 60 ° C, there is no loss of activity after minutes, - at 70 ° C, 70% of the activity remains initial after 1 hour, - at 80 C, there is still 70% of the initial activity after 30 minutes, - at 90 C, there is still 50% of the initial activity after 8 minutes, - at 95 C, it remains still 50% of initial activity

après 6 minutes.after 6 minutes.

Exemple 7.Example 7

La relation température-activité est obtenue à un pH de.5,0. Un examen de la courbe activité-température  The temperature-activity relationship is obtained at a pH of 5.0. An examination of the activity-temperature curve

révèle qu'une activité de pointe se produit à 87 2 C.  reveals that peak activity occurs at 87 2 C.

Les activités aux températures individuelles étudiées,  Activities at individual temperatures studied,

exprimées en pourcentages de ce maximum, sont les suivan-  expressed in percentages of this maximum, are the following

tes:your:

15.. .15 ...

% d'activité 13 24 41 57 86 [100] 90 45 maximale Température C 40 50 60 70 80 [87 2] 90 95 Les résultats confirment la stabilité thermique  % of activity 13 24 41 57 86 [100] 90 45 maximum Temperature C 40 50 60 70 80 [87 2] 90 95 The results confirm thermal stability

inhérente de la nouvelle enzyme, comme indiqué dans l'exem-  inherent to the new enzyme, as shown in the example

ple 5. L'enzyme peut être à l'évidence utilisée à des tem-  5. The enzyme can clearly be used at times

pératures supérieures à 90 C.temperatures above 90 C.

Ceci se distingue d'un optimum médiocrement défi-  This is distinguished from a poorly defined optimum.

ni de 60-7o0 C pour la 6-glucanase de l'orge du brevet bri-  or 60-700 C for the barley 6-glucanase of the patent

tannique Ne 1 421 127. A 80 C, on n'enregistre que 40 % de  tannic acid 1,421,127. At 80 ° C, only 40% of

l'activité de pointe.peak activity.

Exemple 8.Example 8.

Dans une étude préliminaire visant à déterminer si l'activité de l'enzyme est affectée par les produits de la réaction et/ou d'autres sucres présents dans un produit de digestion représentatif dans un procédé industriel, on ajoute séparément à l'enzyme trois sucres simples (xylose,  In a preliminary study to determine whether the activity of the enzyme is affected by the reaction products and / or other sugars present in a representative digestion product in an industrial process, the enzyme is separately added to the enzyme. simple sugars (xylose,

glucose et maltose) que l'on titre ensuite à 50 C et pH 5,0.  glucose and maltose) which is then titrated at 50 ° C. and pH 5.0.

Chacun des sucres est ajouté en une quantité équivalant à  Each of the sugars is added in an amount equivalent to

la quantité de xylose libérée par le substrat dans les con-  the amount of xylose released by the substrate into the

ditions de l'analyse.of the analysis.

Il n'y a pas d'inhibition ni d'accentuation de l'activité enzymatique et ainsi, à l'évidence, l'activité enzymatique ne se trouve pas affectée par l'accumulation des sucres simples comme il s'en produit dans de nombreuses  There is no inhibition or enhancement of enzymatic activity and thus, obviously, the enzymatic activity is not affected by the accumulation of simple sugars as occurs in many cases. many

applications industrielles.industrial applications.

Claims (14)

REVENDICATIONS 1. Enzyme, caractérisée en ce qu'elle peut être  1. Enzyme, characterized in that it can be obtenue à partir d'une souche de l'espèce Talaromyces emer-  obtained from a strain of the species Talaromyces emer- sonii ou d'un mutant de celle-ci, et qui est capable de ca-  sonii or a mutant thereof, and who is capable of talyser la dégradation de pentosanes.  talyser the degradation of pentosans. 2. Enzyme selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle présente un pH d'activité optimale, mesuré à C, d'environ 5,0, et une température d'activité optimale, mesurée à pH 5, 0, de 87 2 C, et en ce qu'elle conserve environ 50 % de son activité initiale après chauffage à C pendant six minutes à pH 5,0, toutes mesures étant faites en utilisant un substrat de pentosane constitué de2. Enzyme according to claim 1, characterized in that it has a pH of optimum activity, measured at C, of about 5.0, and an optimum activity temperature, measured at pH 5.0, of 87. 2 C, and in that it retains about 50% of its initial activity after heating at C for six minutes at pH 5.0, all measurements being made using a pentosan substrate consisting of xylane de balles d'avoine.xylan oat balls. 3. Composition d'enzyme, caractérisée en ce qu'elle comprend une enzyme selon la revendication 1 ou 2 en mélange avec une e-1,4/>1l,3-glucanase et dans laquelle le niveau d'activité de pentosanase a été augmenté par rapport au niveau d'activité de 0-1,4/B-1,3-glucanase par modification du milieu de fermentation dans lequel chacune  An enzyme composition, characterized in that it comprises an enzyme according to claim 1 or 2 in admixture with a 1,4-1,4-glucanase and in which the level of pentosanase activity has been increased relative to the level of activity of 0-1,4 / B-1,3-glucanase by modification of the fermentation medium in which each est produite.is produced. 4. Enzyme ou composition selon l'une quelconque  4. Enzyme or composition according to any one of des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la souche  Claims 1 to 3, characterized in that the strain utilisée est Talaromyces emersonii IMI 116815, CiI CC 290604  used is Talaromyces emersonii IMI 116815, CiI CC 290604 ou un mutant de celles-ci.or a mutant thereof. 5. Procédé de préparation d'une composition d'en-  5. Process for preparing a composition of zyme présentant une activité de pentosanase, caractérisé  zyme having pentosanase activity, characterized en ce qu'il comprend la fermentation d'une souche de micro-  in that it comprises the fermentation of a microbial strain organismes de l'espèce Talaromyces emersonii dans un milieu nutritif lui convenant, ce par quoi est produit un bouillon  organisms of the species Talaromyces emersonii in a nutrient medium suitable for him, by which is produced a broth contenant ladite enzyme.containing said enzyme. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé  6. Method according to claim 5, characterized en ce que le niveau de l'activité de pentosanase est aug-  in that the level of pentosanase activity is increased menté par rapport au niveau de l'activité de 0-1,4/0-1,3-  compared to the activity level of 0-1,4 / 0-1,3- glucanase par modification du milieu nutritif.  glucanase by modification of the nutrient medium. 7. Procédé selon la revendication 5 ou 6, carac-  7. Process according to claim 5 or 6, térisé en ce que le niveau de l'activité de pentosanase est  in that the level of pentosanase activity is augmenté par rapport au niveau de l'activité de $-1,4/0-1,3-  increased relative to the level of activity of $ -1.4 / 0-1.3- glucanase par une étape de purification subséquente à la fermentation.  glucanase by a purification step subsequent to the fermentation. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendica-  8. Process according to any one of the claims tions 5 à 7, caractérisé en ce que la souche est Talaromyces  5 to 7, characterized in that the strain is Talaromyces emersonii IMI 116815, CMI CC 290604 ou un mutant de celle-ci.  emersonii IMI 116815, MIC CC 290604 or a mutant thereof. 9. Procédé de réduction de la teneur en pentosanes d'une matière contenant des pentosanes, caractérisé en ce qu'elle consiste à mettre en contact ladite matière avec une enzyme ou une composition selon l'une quelconque des  9. Process for reducing the pentosan content of a pentosan-containing material, characterized in that it consists in bringing said material into contact with an enzyme or a composition according to any one of the following: revendications 1 à 4.Claims 1 to 4. 10. Procédé selon la revendication 9, caractérisé  10. Process according to claim 9, characterized en ce que la matière contenant des pentosanes est une cé-  in that the pentosan-containing material is a réale choisie parmi le blé et l'avoine, une plante choisie parmi le thé et le café ou un extrait de ceux-ci, un fruit  selected from wheat and oats, a plant selected from tea and coffee or an extract thereof, a fruit ou un légume.or a vegetable. 11. Procédé selon la revendication 9 ou 10, ca-  11. The method of claim 9 or 10, ractérisé en ce que la matière contenant des pentosanes  characterized in that the pentosan-containing material est l'amidon.is the starch. 12. Procédé selon la revendication 9 ou 10, ca-  12. A method according to claim 9 or 10, ractérisé en ce que la matière contenant des pentosanes  characterized in that the pentosan-containing material est du blé ou provient du blé.is wheat or wheat. 13. Procédé selon l'une quelconque des revendica-  13. Process according to any one of the claims tions 9 à 12, caractérisé en ce que l'enzyme est mise en contact avec la matière contenant des pentosanes dans un milieu aqueux à une température située dans la plage de  9 to 12, characterized in that the enzyme is contacted with the pentosan-containing material in an aqueous medium at a temperature in the range of -95 C et à un pH situé dans la plage de 4,0 à 6,5.  -95 C and at a pH in the range of 4.0 to 6.5. 14. Utilisation d'une composition contenant une  14. Use of a composition containing a enzyme du type pentosanase provenant d'une souche de l'es-  enzyme of the pentosanase type from a strain of pèce Talaromyces emersonii dans la réduction de la teneur  species Talaromyces emersonii in the reduction of the en pentosanes d'une céréale choisie parmi le blé et l'avoi-  in pentosans of a cereal selected from wheat and wheat. ne, d'une plante choisie parmi le thé et le café ou un ex-  of a plant selected from tea and coffee or an ex- trait de ceux-ci, d'un fruit ou d'un légume.  trait of these, a fruit or a vegetable.