FI92334B - Menetelmä syklosporiinien tuottamiseksi ja menetelmässä käytettävä uusi Tolypocladium-kanta - Google Patents

Menetelmä syklosporiinien tuottamiseksi ja menetelmässä käytettävä uusi Tolypocladium-kanta Download PDF

Info

Publication number
FI92334B
FI92334B FI925940A FI925940A FI92334B FI 92334 B FI92334 B FI 92334B FI 925940 A FI925940 A FI 925940A FI 925940 A FI925940 A FI 925940A FI 92334 B FI92334 B FI 92334B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
tolypocladium
cyclosporin
strain
cyclosporins
lea3
Prior art date
Application number
FI925940A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI92334C (fi
FI925940A0 (fi
Inventor
Timo Korpela
Anja Kopio
Juhani Lundell
Matti Ankelo
Original Assignee
Leiras Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Leiras Oy filed Critical Leiras Oy
Publication of FI925940A0 publication Critical patent/FI925940A0/fi
Priority to FI925940A priority Critical patent/FI92334C/fi
Priority to US08/020,545 priority patent/US5409816A/en
Priority to AT94902795T priority patent/ATE196655T1/de
Priority to DK94902795T priority patent/DK0677116T3/da
Priority to JP51571394A priority patent/JP3530531B2/ja
Priority to CA002152963A priority patent/CA2152963C/en
Priority to PT94902795T priority patent/PT677116E/pt
Priority to HU9501951A priority patent/HU217683B/hu
Priority to DE69329500T priority patent/DE69329500T2/de
Priority to SG1996005777A priority patent/SG49072A1/en
Priority to PL93309613A priority patent/PL177023B1/pl
Priority to PCT/FI1993/000568 priority patent/WO1994016091A1/en
Priority to EP94902795A priority patent/EP0677116B1/en
Priority to RU95114383A priority patent/RU2112807C1/ru
Priority to ES94902795T priority patent/ES2150980T3/es
Priority to AU57014/94A priority patent/AU674723B2/en
Priority to KR1019950702677A priority patent/KR100283503B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of FI92334B publication Critical patent/FI92334B/fi
Publication of FI92334C publication Critical patent/FI92334C/fi
Priority to EE9400184A priority patent/EE03114B1/xx
Priority to HK98115143A priority patent/HK1014035A1/xx
Priority to GR20000402825T priority patent/GR3035139T3/el

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/645—Cyclosporins; Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

92334
Menetelmä syklosporiinien tuottamiseksi ja menetelmässä käytettävä uusi Tolypocladium-kanta 5 Tässä keksinnössä esitetään uusi Tolypocladium-mikrobila-ji ja menetelmä syklosporiinien, erityisesti syklosporii-ni A:n tuottamiseksi fermentoimalla tämän lajin kantaa aerobisesti.
10 Syklosporiinit ovat neutraaleja, voimakkaasti lipofiili-siä, syklisiä undekapeptidejä, joiden aminohappokoostumus vaihtelee. Nykyisin tunnetaan 25 erilaista syklosporiini-muotoa (A-Z). Näistä A-muoto on osoittautunut kliinisesti arvokkaimmaksi (ftehäöek ja De-xiu, Process Biochem. 1991, 15 26, 157-166).
Syklosporiini eristettiin alun perin 1970-luvulla sieni-kannoista Cylindrocarpon lucidum Booth ja Tolypocladium inflatum Gams, jotka oli eristetty maanäytteistä USA:sta 20 ja Norjasta. Tolypocladium inflatum -tuottokanta (NRRL
8044) identifioitiin aluksi kannaksi Trichoderma polyspo-rum (Link ex Pers) Rifai. Tämä kanta ja sen tuottamat antibioottiset aineet kuvataan mm. FI-patentissa 54606. Kannan kasvuolosuhteista ja taksonomiasta raportoidaan 25 myös artikkelissa Dreyfuss et ai., Eur. J. Appi. Microbiol., 1976, 3, 125.
Edellä mainittu kanta Cylindrocarpon lucidum Booth (NRRL 5760) kuvataan FI-patentissa 52851. Muita kirjallisuudes-30 ta löytyviä syklosporiineja tuottavia mikrobikantoja ovat mm. DD-patentissa 298 276 kuvattu Tolypocladium inflatum -kanta SF 136, joka tuottaa ainakin syklosporiini A:ta, ja GB-patenttihakemuksessa 2 227 489 kuvattu Tolypocladium varium, joka tuottaa mm. syklosporiinien A, B ja C 35 seosta. JP-hakemuksessa 826 3093 A2 esitetään kaksi Fusa-rium-kantaa, joiden mainitaan tuottavan syklosporiineja.
92334 2
Kokooma-artikkelissaan Isaac et ai. (Antimicr. Agents Chemoter., 1990, 34, 121-127) vertailevat joidenkin tunnettujen Tolypocladium-kantojen syklosporiinien tuottoa.
5 Syklosporiini A löydettiin alun perin antifungaalisena antibioottisena yhdisteenä. Vasta myöhemmin selvisi sen erinomainen vaikutus immunosuppressiivina (Borel et ai., Immunology, 1977, 32, 1017). Syklosporiinia käytetäänkin nykyisin elintensiirtoleikkausten jälkihoidossa, ja se on 10 lähes ainoa lääke tähän tarkoitukseen. Tästä on raportoitu ensimmäisen kerran munuaisen siirron (Caine; Lancet, 1978, 2, 1323) ja luuytimen siirron yhteydessä (Powles, Lancet, 1978, 2, 1327). Elintensiirtoleikkausten lisäksi syklosporiinia voidaan käyttää erilaisten autoimmuunisai-15 rauksien, kuten esim. reuman ja psoriasiksen hoitoon.
Kirjallisuudessa esiintyvien mikrobikantojen syklosporiini A:n tuottoprosesseissa on ongelmana osin alhaiset tuotot ja pitkät fermentointiajät. Jos tuotto onkin saatu 20 suureksi, on syklosporiini A:n suhteellinen määrä usein ollut pieni. On myös todettu, että pienempituottoiset kannat muodostavat suhteessa suuria syklosporiini A -määriä. (De-xiu et ai., Folia Microbiol., 1991, 36(6) 549-556) .
25
Tarkoituksenamme oli löytää tuottokanta, joka antaisi mahdollisimman suuren tuoton lyhyessä fermentointiajassa sekä taloudellisissa olosuhteissa.
30 Etsittäessä mahdollisia tuottokantoja löydettiin erittäin nopeatuottoinen Tolypocladium-kanta, joka muodostaa huomattavia määriä syklosporiini A:ta, ja suhteellisen vähän muita syklosporiinimuotoja, mikä mahdollistaa syklosporiini A:n helpomman puhdistuksen. Tämä kanta on eristetty 35 maanäytteestä Venäjältä, läheltä Moskovaa.
3 9 2.6 δ 4
Tutkittaessa löydettyä kantaa Hollannissa (W. Gams, Cent-raalbureau voor Schimmelcultures, Baarn, Hollanti), mikrobi osoittautui uuden Tolypocladium-lajin edustajaksi. Kannalle annettiin koodiksi Tolypocladium sp. LeA3, ja 5 kanta on talletettu Budapestin sopimuksen mukaisesti
Centraalbureau voor Schimmelcultures -talletuslaitokseen, Hollantiin 7.12.1992 talletusnumerolla CBS 630.92.
Keksinnön kohteena on siten uusi korkea- ja nopeatuottoi-10 nen Tolypocladium-laji, ja sen käyttö kliinisesti tärkeän syklosporiini A:n tuottamiseksi.
W. Gams kuvasi ensimmäisen kerran Tolypocladium-suvun vuonna 1971 (W. Gams, Persoonia, 1971, voi. 6. osa 2, 15 185-191) Julkaisussa on tutkittu kolmea Tolypocladium- lajia, T. inflatum, T. geodes ja T. cylindrosporum. Tyypillistä Tolypocladium-lajeille on hidaskasvuisuus, valkoiset haituvaiset pesäkkeet sekä suuri itiöiden määrä.
20 Tämän keksinnön mukaista Tolypocladium sp. LeA3 -kantaa verrattiin em. lajeihin, ja se erottui selvästi niistä siten, että sillä oli heikompi itiöintikyky, tummemmat pesäkkeet ja paisuneet soluketjut. Näin muodoin kyseinen Tolypocladium-kanta luokiteltiin uuden Tolypocladium-la-25 jin edustajaksi.
Keksinnön mukaista Tolypocladium sp. LeA3 -kantaa voidaan kuvailla seuraavasti: Seitsemän päivän ikäinen pesäke mallasuute-hiivauute-maljalla on halkaisijaltaan noin 10 30 mm ja sitä peittää harmahtava, vähän itiöitä sisältävä myseeli. Tyypillinen piirre kannalla on sen epäsäännölliset konidiat ja paisuneet soluketjut. Erona Tolypocladium inflatumiin keksinnön mukainen kanta ei käytä raffinoo-sia, mutta pystyy käyttämään galaktoosia. Tolypocladium 35 sp. LeA3 -kannan kasvuominaisuudet verrattuna Tolypocladium inflatumin ja Cylindrocarpon lucidumin ominaisuuk-.. s iin on koottu taulukkoon I.
4 92354
Taulukko I Mikrobikantojen hiililähteiden käyttö
Kanta 5 Hiililähde 25 A 51 52
Glukoosi + + +
Glyseroli + + + 2KG + + + 10 L-arabinoosi + + + D-xyloosi + + +
Adonitoli + +
Xylitoli + +
Galaktoosi + - + 15 Inositoli + + +
Sorbitoli + + + MDG + NAG + + +
Sellobioosi + + + 20 Laktoosi --+
Maltoosi + + +
Sakkaroosi + + +
Trehaloosi + + +
MeLezitoosi + + + 25 Raffinoosi + + Käytetyt lyhenteet: 2KG = 2-keto-D-glukonaatti 30 MDG = a-metyyli-D-glukosidi NAG = N-asetyyli-D-glukosamiini
Kasvatusaika 4 vrk.
35 25 A = Tolypocladium sp. LeA3 ’ 51 = Tolypocladium inflatum 52 = Cylindrocarpon lucidum Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä syklosporiinien, 40 erityisesti syklosporiini A:n tuottamiseksi kasvatetaan uuden Tolypocladium sp. lajin kantaa LeA3, jolla on tal-letusnumero CBS 630.92, aerobisesti lämpötilassa 20 - 30 °C ravintoliuoksessa, jossa on hiililähteitä, typpiläh-teitä sekä mineraalisuoloja, ja haluttaessa eristetään ja 45 puhdistetaan syntyneet syklosporiinit.
» »
II
5 92 334
Tolypocladium sp. LeA3 -kanta CBS 630.92 on erityisen edullinen keksinnön tarkoituksiin, koska se tuottaa syk-losporiineja runsaasti jo 5-6 vuorokauden (120-144 h) kasvatuksen jälkeen. Lisäksi se tuottaa suhteessa paljon 5 syklosporiini A:ta. Vaikkakin kanta tuottaa myös muita syklosporiinimuotoja, (B, c, D ja G), niin niiden määrä on huomattavasti pienempi kuin useimmilla tunnetuilla kannoilla (vrt. Isaac et ai., supra). Kanta tuottaa ainoastaan 10 % C-muotoa, 4 % B-muotoa ja 2 % D- ja G-muotoja 10 yhteensä. Näin siitäkin huolimatta, että A-muodon tuotto on suuri, jopa 1,5 g/1.
Em. keksinnön mukainen kanta on edullinen myös siinä suhteessa, että se kasvaa nopeasti ja hyvin tavanomaisilla 15 kasvualustoilla. Kanta kykenee käyttämään mm. glukoosia, sakkaroosia, arabinoosia, ksyloosia ja galaktoosia (vrt. taulukko I) hiililähteinä ja useita sekä orgaanisia että epäorgaanisia typpilähteitä, kuten peptonia, soijajauhoa, kalajauhoa, puuvillasiemenjauhoa ja (NH4)2S04:a.
20 Näiden lisäksi käytettävät elatusaineet tavallisesti sisältävät mineraalisuoloja, kuten magnesiumsulfaattia tai kaliumdivetyfosfaattia.
25 Erityisesti hiililähteenä voidaan käyttää hinnaltaan edullista melassia, ja typpilähteenä soijajauhoa.
Edullisessa keksinnön mukaisessa menetelmässä esikasva-tuselatusaineeseen inokuloidaan itiö- ja myseeliymppi, 30 joka on saatu suspendoimalla veteen Tolypocladium sp.
LeA3:n vinopinnalta kerätty kasvusto. Viljelmää esikasvatetaan 2-4 päivää ja tuotantoelatusaine inokuloidaan esi-kasvatusliuoksella. Varsinainen kasvatus suoritetaan noin 20 - noin 30 eC:ssa, edullisesti 25 - 30 °C:ssa, erityi-35 sesti 25 °C:ssa 5-7 päivän ajan, pitäen kasvuston pH
välillä 3-8, edullisesti välillä 4-7 lisäämällä tarvittaessa IM NaOH:a tai IM HCl:a.
6 92334
Aerobiset olosuhteet pidetään yllä ilmastamalla esimerkiksi 1 vol/min. (kasvuston tilavuuden verran ilmaa minuutissa) , ja kasvustoa sekoitetaan 200 - 350 rpm.
5 Fermentaation aikana syklosporiinimääriä seurataan korkean erotuskyvyn nestekromatografiällä (HPLC), kuten mm. Isaac et ai. (supra) ovat esittäneet. Fermentointia jatketaan, kunnes maksimimäärä syklosporiineja on muodostunut. Keksinnön mukainen kanta tuottaa kuudessa vuorokau-10 dessa (144 h) syklosporiini A:ta jopa 1500 mg/1, syklo-sporiini A:n suhteellisen osuuden ollessa jopa 84 %.
Syklosporiinimuotojen seos voidaan eristää ja puhdistaa tavanomaisilla menetelmillä. Myseeli erotetaan kasvuli-15 uoksesta joko suodattamalla tai sentrifugoimalla. Syklo-sporiinit uutetaan myseelistä alempialkanolilla, esimerkiksi metanolilla, etanolilla tai isopropanolilla, edullisesti metanolilla. Uute konsentroidaan ja uutetaan edelleen veteen sekoittumattomalla orgaanisella liuotti-20 mella, esimerkiksi butyyli- tai etyyliasetaatilla, edullisesti etyyliasetaatilla. Saadun uutteen haihdutusjäännös liuotetaan sopivaan orgaaniseen liuottimeen, esimerkiksi tolueeniin, ja syklosporiini A erotetaan pylväskro-matografiällä, esimerkiksi silikageelipylväässä. Ohutle-25 vykromatografiän avulla analysoidaan fraktiot, jotka si sältävät haluttua syklosporiini A:ta, fraktiot konsentroidaan ja syklosporiini A kiteytetään uudelleen sopivasta liuottimesta tai liuotinseoksesta, esimerkiksi eette-ri-heksaanista.
30
Lopuksi saatu tuote karakterisoidaan esimerkiksi määrittämällä sen sulamispiste ja optinen kiertokyky.
Seuraavat esimerkit kuvaavat edelleen keksintöä.
35
II
92334 7
Esimerkki l
Itiö- ja myseeliymppi tehtiin Tolypocladium sp. LeA3:n vinopinnalta suspendoimalla kasvusto 5 ml:aan steriiliä 5 vettä. 1 ml tätä suspensiota käytettiin inokuloimaan 50 ml elatusainetta (El) 250 ml:n erlenmeyer-pullossa.
El-esikasvatuselatusaineen koostumus 10 glukoosi 30 g soijajauho 15 g kaliumdivetyfosfaatti 1 g magnesiumsulfaatti 0,5 g ammoniumsulfaatti 5 g 15 H20 ad 1 1
Seos steriloitiin 20 min 121 °C:ssa.
Viljelmää inkuboitiin 25 °C:ssa ravistelijassa (340 rpm) 20 2 vrk, jonka jälkeen esikasvatusliuos (50 ml) siirrettiin steriilisti 5 l:aan tuotantoelatusainetta (Tl) 10 l:n fermentorissa.
Tl-tuotantoelatusaineen koostumus 25 melassi 150 g soijajauho 17 g ammoniumsulfaatti 5 g kaliumdivetyfosfaatti 1 g 30 magnesiumsulfaatti 0,5 g H20 ad 11
Seos steriloitiin 20 min. 121 °C:ssa.
35 Kasvatus suoritettiin 25 °C:ssa, ilmastus 1 voi./min., sekoitus 200 rpm. Kasvatusliuoksen syklosporiinimääriä seurattiin koko kasvatuksen ajan HPLC-menetelmällä (Isaac 8 92.334 et ai., supra). Ferxnentointia jatkettiin 144 tuntia, jolloin syklosporiini A:n pitoisuus oli 1500 mg/1. Muiden muotojen pitoisuudet olivat seuraavat: C: 155 mg/1, B: 62 mg/1, D: 28 mg/1 ja G: 29 mg/1.
5
Syklosporiinimuotojen seos eristettiin ja puhdistettiin seuraavasti: 4,5 1 fermentointiliuosta suodatettiin ja kasvusto uutettiin kaksi kertaa 1 1:11a metanolia. Uutteet yhdistettiin ja konsentroitiin vakuumissa. Jäännök-10 sestä syklosporiinit uutettiin kaksi kertaa 300 ml:11a etyyliasetaattia. Etyyliasetaattiliuokset yhdistettiin ja kuivattiin natriumsulfaatilla. Liuos konsentroitiin edelleen ja jäännös liuotettiin 100 ml:aan tolueenia. Liuos ajettiin pylvääseen (5 cm x 40 cm), jossa oli täyteainee-15 na 200 g silikageeliä (Merck, 0,063 - 0,2 mm) tolueenis-sa. Pylvästä eluoitiin seoksella, jossa oli tolueenia ja asetonia suhteessa 4:1. Fraktiot, joissa oli puhdasta syklosporiini A:ta, otettiin jatkokäsittelyyn (analysointi TLC:llä, levy Kieselgel 60 F 254, kehitysliuos heksaa-20 ni/asetoni 1:1, detektointi jodihöyryllä). Yhdistetyt fraktiot konsentroitiin ja syklosporiini A kiteytettiin eetteri-heksaanista. Saanto oli 4,5 g. Syklosporiini A:n sp. oli 139-140 °c ja optinen kiertokyky -189° (0,5 MeOH).
25
Esimerkki 2
Itiö- ja myseeliymppi tehtiin samoin kuin esimerkissä 1.
1 ml tätä suspensiota käytettiin inokuloimaan 50 ml ela-30 tusainetta (E2) 200 ml:n erlenmeyer-pullossa.
E2-esikasvatuselatusaineen koostumus maltoosi 40 g 35 ammoniumsulfaatti 5 g puuvillasiemenjauho 10 g kaliumdivetyfosfaatti 1 g * 9 92334 magnesiumsulfaatti 0,5 g H20 ad 11
Seos steriloitiin 20 min. 121 °C:ssa.
5
Viljelmää inkuboitiin 25 °C:ssa ravistelijassa (230 rpm) 2 vrk, jonka jälkeen esikasvatusliuos (50 ml) siirrettiin steriilisti 5 Iraan tuotantoelatusainetta (T2) 10 l:n fermentorissa.
10 T2-tuotantoelatusaineen koostumus glukoosi 10 g maltoosi 10 g 15 sakkaroosi 60 g puuvillasiemenjauho 10 g puuvillasiemenöljy 5 g ammoniumsulfaatti 5 g kaliumdivetyfosfaatti 1 g 20 magnesiumsulfaatti 0,5 g H20 ad 11
Seos steriloitiin 20 min 121 °C:ssa.
25 Kasvatus suoritettiin 24 °C:ssa, ilmastus 1 voi./min., sekoitus 200 rpm. Fermentointia jatkettiin 120 tuntia, jolloin syklosporiini A:n pitoisuus oli 1410 mg/1. Kasva-tusliuoksen syklosporiinimääriä seurattiin koko kasvatuksen ajan HPLC-menetelmällä (Isaac et ai., supra). Muiden 30 muotojen pitoisuudet olivat seuraavat: C: 135 mg/1, B: 50 mg/1, G ja D: 30 mg/1.
Syklosporiini A puhdistettiin samalla tavalla kuin esimerkissä 1.
35 t 10 9'^5o4
Talletetut mikro-organismit
Seuraava mikro-organismi talletettiin Budapestin sopimuksen mukaisesti Centraalbureau voor Schimmelcultures -tal-5 letuslaitokseen (CBS), Oosterstraat 1, NL-3742 SK Baarn, Hollanti
Mikro-organismi Talletusnumero Talletuspäivä 10 Tolypocladium sp. LeÄ3 CBS 630.92 7.12.1992 11 . ·

Claims (4)

92 ό 34
1. Menetelmä syklosporiinien, erityisesti syklosporiini A:n tuottamiseksi, tunnettu siitä, että uuden
5 Tolypocladium sp. -lajin kantaa LeA3, jonka talletusnume-ro on CBS 630.92, kasvatetaan aerobisesti lämpötilassa 20 - 30 °C ravintoliuoksessa, jossa on hiililähteitä, typ-pilähteitä sekä mineraalisuoloja, ja haluttaessa eristetään ja puhdistetaan syntyneet syklosporiinit. 10
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hiililähteenä käytetään melassia ja typpilähteenä käytetään soijajauhoa.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että hiililähteenä käytetään sakkaroosia ja typpilähteenä käytetään puuvillansiemenjauhoa.
4. Tolypocladium sp. LeA3 -kanta, jonka talletusnumero on 20 CBS 630.92. 92334
FI925940A 1992-12-30 1992-12-30 Menetelmä syklosporiinien tuottamiseksi ja menetelmässä käytettävä uusi Tolypocladium-kanta FI92334C (fi)

Priority Applications (20)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI925940A FI92334C (fi) 1992-12-30 1992-12-30 Menetelmä syklosporiinien tuottamiseksi ja menetelmässä käytettävä uusi Tolypocladium-kanta
US08/020,545 US5409816A (en) 1992-12-30 1993-02-22 Process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein
PL93309613A PL177023B1 (pl) 1992-12-30 1993-12-29 Sposób wytwarzania cyklosporyny A
RU95114383A RU2112807C1 (ru) 1992-12-30 1993-12-29 Способ получения иммунодепрессанта циклоспорина а и штамм tolypocladium species свs630.92, продуцирующий циклоспорин а
JP51571394A JP3530531B2 (ja) 1992-12-30 1993-12-29 免疫抑制剤の製造方法およびそれに使用される新規微生物種
CA002152963A CA2152963C (en) 1992-12-30 1993-12-29 A process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein
PT94902795T PT677116E (pt) 1992-12-30 1993-12-29 Processo para a producao de imuno-supressores e uma nova especie microbiana a ser utilizada para esse fim
HU9501951A HU217683B (hu) 1992-12-30 1993-12-29 Eljárás Cyclosporin A előállítására és az eljárásnál alkalmazott új mikrobafaj
DE69329500T DE69329500T2 (de) 1992-12-30 1993-12-29 Ein verfahren zur herstellung von immunosuppressiva und eine neuartige mikrobielle spezies, die dabei eingesetzt wird
SG1996005777A SG49072A1 (en) 1992-12-30 1993-12-29 A process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein
AT94902795T ATE196655T1 (de) 1992-12-30 1993-12-29 Ein verfahren zur herstellung von immunosuppressiva und eine neuartige mikrobielle spezies, die dabei eingesetzt wird
PCT/FI1993/000568 WO1994016091A1 (en) 1992-12-30 1993-12-29 A process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein
EP94902795A EP0677116B1 (en) 1992-12-30 1993-12-29 A process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein
DK94902795T DK0677116T3 (da) 1992-12-30 1993-12-29 Fremgangsmåde til fremstilling af immunosuppressive midler og en ny mikroorganismeart til anvendelse deri
ES94902795T ES2150980T3 (es) 1992-12-30 1993-12-29 Un procedimiento para producir inmunosupresores y una nueva especie microbiana a emplear en el mismo.
AU57014/94A AU674723B2 (en) 1992-12-30 1993-12-29 A process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein
KR1019950702677A KR100283503B1 (ko) 1992-12-30 1993-12-29 면역억제제의 제조방법 및 이에 사용되는 신규 미생물
EE9400184A EE03114B1 (et) 1992-12-30 1994-11-16 Meetod tsüklosporiin A tootmiseks
HK98115143A HK1014035A1 (en) 1992-12-30 1998-12-23 A process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein
GR20000402825T GR3035139T3 (en) 1992-12-30 2000-12-22 A process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein.

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI925940 1992-12-30
FI925940A FI92334C (fi) 1992-12-30 1992-12-30 Menetelmä syklosporiinien tuottamiseksi ja menetelmässä käytettävä uusi Tolypocladium-kanta

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI925940A0 FI925940A0 (fi) 1992-12-30
FI92334B true FI92334B (fi) 1994-07-15
FI92334C FI92334C (fi) 1994-10-25

Family

ID=8536483

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI925940A FI92334C (fi) 1992-12-30 1992-12-30 Menetelmä syklosporiinien tuottamiseksi ja menetelmässä käytettävä uusi Tolypocladium-kanta

Country Status (20)

Country Link
US (1) US5409816A (fi)
EP (1) EP0677116B1 (fi)
JP (1) JP3530531B2 (fi)
KR (1) KR100283503B1 (fi)
AT (1) ATE196655T1 (fi)
AU (1) AU674723B2 (fi)
CA (1) CA2152963C (fi)
DE (1) DE69329500T2 (fi)
DK (1) DK0677116T3 (fi)
EE (1) EE03114B1 (fi)
ES (1) ES2150980T3 (fi)
FI (1) FI92334C (fi)
GR (1) GR3035139T3 (fi)
HK (1) HK1014035A1 (fi)
HU (1) HU217683B (fi)
PL (1) PL177023B1 (fi)
PT (1) PT677116E (fi)
RU (1) RU2112807C1 (fi)
SG (1) SG49072A1 (fi)
WO (1) WO1994016091A1 (fi)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0725076B1 (en) * 1995-02-01 2001-06-06 National Research Development Corporation of India A process for the preparation of cyclosporin A from tolypocladium species
KR100360675B1 (ko) * 1995-02-28 2003-01-14 내셔널 리서어치 디벨럽먼트 코포레이션 사이클로스포린a제조방법
US5709797A (en) * 1996-06-05 1998-01-20 Poli Industria Chimica S.P.A. Method of isolating cyclosporins
US5747330A (en) * 1996-06-05 1998-05-05 Poli Industria Chimica Antibiotic producing microbe
KR100496929B1 (ko) * 1997-03-25 2005-09-30 테바 기오기스제르갸르 레스즈베니타르사사그 시클로스포린의정제방법
US6423233B1 (en) * 2000-08-15 2002-07-23 Biogal Gyogyszergyar Rt. Purification process
HU223054B1 (hu) * 1997-03-25 2004-03-01 BIOGAL Gyógyszergyár Rt. Tisztítási eljárás nagytisztaságú ciklosporin A előállítására
US20030220234A1 (en) * 1998-11-02 2003-11-27 Selvaraj Naicker Deuterated cyclosporine analogs and their use as immunodulating agents
DE69832984T2 (de) 1997-10-08 2006-09-21 Isotechnika, Inc., Edmonton DEUTERIERtE und undeuterierte CYCLOSPORIN-ANALOGA UND IHRE VERWENDUNG ALS IMMUNMODULIERENDE AGENtIEN
PT1154759E (pt) 1998-12-30 2008-11-20 Dexcel Ltd Concentrado dispersível para administração de ciclosporina
US7732404B2 (en) * 1999-12-30 2010-06-08 Dexcel Ltd Pro-nanodispersion for the delivery of cyclosporin
AU3728001A (en) * 2000-01-20 2001-07-31 Basilea Pharmaceutica Ag Nasally administrable cyclic peptide compositions
CA2401700A1 (en) * 2000-02-29 2001-09-07 Biocon India Limited Manufacture and purification of cyclosporin a
PL210795B1 (pl) 2001-10-19 2012-03-30 Isotechnika Inc Sposób wytwarzania mieszaniny ISATX247 wzbogaconej w izomer (E), sposób wytwarzania mieszaniny ISATX247 wzbogaconej w izomer (Z), sposób stereoselektywnej syntezy izomeru (E) ISATX247, sposób stereoselektywnej syntezy izomeru (Z) ISATX247 i sposób wytwarzania mieszaniny izomerów ISATX247
US7862552B2 (en) * 2005-05-09 2011-01-04 Boston Scientific Scimed, Inc. Medical devices for treating urological and uterine conditions
EP2151450A1 (de) * 2008-07-29 2010-02-10 Sandoz AG Verfahren zur Aufarbeitung von mikrobiologisch hergestellten zyklischen Oligopeptiden
WO2019067423A1 (en) * 2017-09-29 2019-04-04 Valent Biosciences Llc NEW TOLYPOCLADIUM ALBUM STRAIN
RU2679051C1 (ru) * 2018-02-16 2019-02-05 Федеральное государственное учреждение Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук Штамм streptomyces hygroscopicus bkm ac-2737d - продуцент антибиотика рапамицина и способ увеличения его продуктивности

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE295870C (fi) *
US3878047A (en) * 1973-02-02 1975-04-15 Upjohn Co Process for production of AT-125
US4117118A (en) * 1976-04-09 1978-09-26 Sandoz Ltd. Organic compounds
US4215199A (en) * 1978-06-05 1980-07-29 Sandoz Ltd. Antibiotic production
DD298276A5 (de) * 1988-10-11 1992-02-13 Institut Fuer Mikrobiologie Und Experimentelle Therapie,De Verfahren zur herstellung von cyclosporin a
DD295870A5 (de) * 1988-10-11 1991-11-14 Arzneimittelwerk Dresden Gmbh,De Verfahren zur mikrobiellen gewinnung von cyclosporinen
HU201577B (en) * 1988-12-20 1990-11-28 Gyogyszerkutato Intezet Process for producing cyclosporin antibiotics
WO1992013094A1 (fr) * 1991-01-25 1992-08-06 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Procede pour produire de la cyclosporine a et/ou c
DE59106428D1 (de) * 1991-04-06 1995-10-12 Dresden Arzneimittel Verfahren zur fermentativen Herstellung und Isolierung von Cyclosporin A sowie neue Cyclosporin- bildende Stämme.

Also Published As

Publication number Publication date
HU9501951D0 (en) 1995-08-28
WO1994016091A1 (en) 1994-07-21
ATE196655T1 (de) 2000-10-15
FI92334C (fi) 1994-10-25
DE69329500T2 (de) 2001-06-07
HU217683B (hu) 2000-03-28
US5409816A (en) 1995-04-25
EE03114B1 (et) 1998-08-17
RU2112807C1 (ru) 1998-06-10
DK0677116T3 (da) 2000-12-27
CA2152963C (en) 2003-05-27
PT677116E (pt) 2001-01-31
KR960700346A (ko) 1996-01-19
HUT72702A (en) 1996-05-28
EP0677116A1 (en) 1995-10-18
EP0677116B1 (en) 2000-09-27
AU674723B2 (en) 1997-01-09
HK1014035A1 (en) 1999-09-17
AU5701494A (en) 1994-08-15
JP3530531B2 (ja) 2004-05-24
DE69329500D1 (de) 2000-11-02
CA2152963A1 (en) 1994-07-21
PL177023B1 (pl) 1999-09-30
PL309613A1 (en) 1995-10-30
SG49072A1 (en) 1998-05-18
GR3035139T3 (en) 2001-04-30
FI925940A0 (fi) 1992-12-30
KR100283503B1 (ko) 2001-03-02
ES2150980T3 (es) 2000-12-16
JPH08505059A (ja) 1996-06-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI92334B (fi) Menetelmä syklosporiinien tuottamiseksi ja menetelmässä käytettävä uusi Tolypocladium-kanta
FI92603C (fi) Mikrobinen menetelmä syklosporiinien valmistamiseksi
WO1994016091A9 (en) A process for producing immunosuppressives and a novel microbial species to be employed therein
HU181534B (en) Process for preparing the antibiotic a/16686
JPH06339390A (ja) Ｂｕ−４１６４ｅ−ａ及びｂ、プロリルエンドペプチダーゼインヒビター
CA1183093A (en) Macbecin derivatives and their production
EP0933422A1 (en) Cyclic lipopeptide acylase
US5747330A (en) Antibiotic producing microbe
EP0725076B1 (en) A process for the preparation of cyclosporin A from tolypocladium species
EP0781348B1 (en) Process for manufacturing cyclosporin a by highly productive fusant strain
JPH0641067A (ja) 新規カルパイン阻害物質ｋｐ−１２４１及びその製造法
US6521600B1 (en) Compound, WF002, production thereof and use thereof
GB2159150A (en) Antibiotics do-248-a and b and their preparation
KR0161664B1 (ko) 사이클로스포린에이의 제조방법 및 변이미생물
US3986928A (en) Antibiotic a-32390 and process for preparation thereof

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application
PC Transfer of assignment of patent

Owner name: SANTEN OY

MA Patent expired