FI59402C - Foerfarande foer framstaellning av ett terapeutiskt anvaendbart 1-ftalazonderivat - Google Patents

Description

E35F1 [B] (11)KUULUTUSjULKAISU CQAQO

JjSTff l J 1 ' UTLÄGGNINCSSKItlFT 3 ^ 7¾¾¾ C (45) Γιtontti n y i m ί·. *: y 10 O1 ll’l ^ T ^ (51) Kv.lk?/li»t.a.3 C 07 D 237/32

SUOMI —FINLAND (11) ht«ttiWMw«i»-Pw««iekni«| 3157/7U

(22) H»k«ml«ptlvt — Antftkningtdif 29.10.7^

(23) AlkupUv·—GIM(h«t*d«| 29.10.7U

(41) Tulkit luikituksi — Bllvlt offwitllg 01.05.75

SttMttl· )· r*MtterHiallltus (+, N—' '

Patant- och ragiutarttyralMn ' AnsOkan uttogd och utl.tkrlften publlcurad 30.0U.Ol (32)(33)(31) Pyyd«ty etuoikeus—««gird priorit«t 30.10.73 31.10.73 Japani-Japan(JP) 121260/73, 121757/73 (71)(72) Michiro Inoue, 6-26-3, Kokuryo-cho, Chofu-shi, Tokyo,

Masayuki Ishikawa, 3-1U-13, Akatsutsumi, Setagaya-ku, Tokyo,

Takashi Tsuchiya, 5-17-25, Minamikoiwa, Edogawa-ku, Tokyo,

Takio Shimamoto, 13, Kitamachi, Shinjuku-ku, Tokyo, Japani-Japan(JP) (7U) Oy Roister At (5U) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen 1-ftalatsonijohdan naisen valmistand seksi - Förfarande för framställning av ett terapeutiskt användbart 1-ftalazonderivat Käsiteltävänä oleva keksintö koskee menetelmää uuden, farmaseuttisesti arvokkaan 1-ftalatsonijohdannaise n valmistamiseksi.

Erityisesti keksintö tarjoaa menetelmän yleistä kaavaa (I) ch2oh

R2v^A

I m

As/^v N"Ri r4ooc R3 o olevan uuden 1-ftalatsonijohdannaisen valmistamiseksi, jonka kaavassa R^ on vetyatomi, tai 1-3 hiiliatomia sisältävä a 1 kyy 1iryhmä, R2 Ja R3 ovat kumpikin 1-3 hiiliatomia sisältävä a 1 kyy 1iryhmä, R^ on vetyatomi / tai 1-5 hiiliatomia sisältävä a 1 kyy 1iryhmä tai R4 voi Rgin kanssa muodostaa metyleeniryhmän tai metyyli- tai etyylisubstituoidun mety-leeniryhmän.

2 59402

Menetelmä yleistä Kaavaa (I) olevan 1-ftalatsonijohdannaisen valmistamiseksi tunnetaan siitä, että a) annettaan yleistä kaavaa (II) co-z BP ^ (ii) R.OOC Tn1 R3 ° olevan yhdisteen, jonka kaavassa R^, R2 ja Rj merkitsevät samaa kuin yllä ja Z on halogeeniatomi, atsido-, hydroksi- tai alkoksiryhmä, mieluiten 1-5 hiiliatomia sisältävä alkoksiryhmä tai kaavaa 0

-0-C-0R

oleva ryhmä, jossa R on metyyli- tai etyyliryhmä, reagoida kompleksi-metallihydridin kanssa metallihalogenidin läsnäollessa tai ilman sitä tai b) annetaan yleistä kaavaa (III)

'-TfrS

R4ooc^r'Y

R3 olevan yhdisteen, jonka kaavassa R2» Rg ja R4 merkitsevät samaa kuin yllä reagoida yleistä kaavaa (IV) ΝΗ2ΝΗΡχ (IV) olevan yhdisteen kanssa, jonka kaavassa R·^ merkitsee samaa kuin yllä.

Belgialaisessa patenttijulkaisussa n:o 787 13Θ on esitetty, että 4-hydroksimetyyli - 1-ftalatsoni1la on farmaseuttinen vaikutus 3 59402 hoidettaessa verenvuotoa, verisuonitukoksia ja verisuonien kalkkeutumista. Tämän jälkeisessä belgialaisessa patentissa n:o 787 139 julkistetaan, että alkoksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli-1-ftalatsoni-johdan-nainen tehoaa farmaseuttisesti paremmin kuin edellisessä patenttijulkaisussa julkistettu yhdiste. Tutkittaessa myöhemmin 7 - a 1koks1karbo-nyyli-4-hydroksimetyyli-1-ftalatsonien aineenvaihduntaa kliinisin kokein eläimissä ja ihmisessä voitiin todeta, että yhdiste muuttuu vastaavaksi 7-karboksiyhdisteeksi. Aineenvaihdunta hydro 1yysi johtaa a 1koksikarbonyy1iyhdisteen bioinaktivoitumiseen, jolloin yhdisteen biologinen vaikutusaika jää suhteellisen lyhyeksi.

Nyt on havaittu, että verrattuna ko. alan aikaisempiin yhdisteisiin käsiteltävänä olevan keksinnön yhdisteet eivät hajoa aineenvaihdunnassa ja niiden biologinen teho on pidentynyt. Kolesterolin aiheuttamassa kokeellisessa verisuonten ka 1kkeutumistestissä todettiin keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden estävän voimakkaasti verisuonten kalkkeutumista ja kolesterolin saostumista valtimon seinämille. Niiden teho on suunnilleen 3-5 kertaa suurempi kuin aikaisemmilla yhdisteillä. Keksinnön mukaisesti valmistetut uudet yhdisteet ehkäisevät myös kolesterolin tai adrenaalin aiheuttamaa veren lisääntynyttä hyytymis- ja tulpanmuodostustaipumusta. Tällöin teho on suunnilleen 5-10 kertaa suurempi kuin aikaisemmilla yhdisteillä.

Tämä merkitsee sitä, että käsiteltävänä olevat yhdisteet estävät tehokkaammin veren hyytymisajan lyhenemistä ja adenosiin idifosfaatin aiheuttamaa lisääntynyttä verihiutaleiden kasautumista.

Lisäksi käsiteltävänä olevien yhdisteiden havaittiin alentavan ja normalisoivan kohonnutta verenpainetta itsesyntyisesti kohonnutta verenpainetta sairastavien rottien kohonneen verenpaineen kokeessa.

Ko. aikaisemmilla yhdisteillä sen sijaan ei ole merkittävää vaikutusta rottien kohonneeseen verenpaineeseen. Tämä käsiteltävänä olevien yhdisteiden teho voitaneen yhdistää niiden syklisen AMP-fosforidi-esteraasin estovaikutukseen, mikä ilmenee biologisista kokeista.

Siten käsiteltävänä olevan keksinnön yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa kohonnutta verenpainetta, verisuonien kalkkeutumista ja verisuonitukoksia. Niitä voidaan myös käyttää hoidettaessa syklisen AMP : n vajaatoiminnan aiheuttamia sairauksia, esim. syöpää, mielenterveydellisiä ja neurologisia häiriöitä, hormoonihäiriöitä ja sydäntoiminnanvajavuuksia.

Seuraavassa kuvataan käsiteltävänä olevan keksinnön eräiden lähtöyhdisteiden valmistusta. Arabialaiset numerot viittaavat reaktio-kaavioissa esiintyviin vastaaviin yhdisteisiin.

14 59402

Etyyli-isodehydroasetaatin ja dimetyyliasetyleenidikarboksylaa-tin Diels-Adler-addukti (1) (vrt. Berichte der Deutschen Chemischen Gesellschaft, 70, 1354 (1937)) hydrolysoidaan ftaalihapoksi (2). Käsittelemällä yhdistettä (2) etikka-anhydridillä saadaan ftaalianhyd-ridi (3). Käsittelemällä jälkimmäistä malonihapolla pyridiinissä (8O-05°C) saadaan 3-hydroksi-3-metyyliftalidi (4), saanto 60 %. Hapettamalla yhdiste (4) emäksisessä vesiliuoksessa kaliumpermanganaatilla ja käsittelemällä sitten hydratsiiniliuoksella saadaan happo (5), joka esteröidään esteriksi (6), kokonaissaanto Θ0 %.

Me^^y COOMe Me γ^νΟΟΟΗ Me CO^

EtOOC^^^ COOMe StOOC COOH StOOC

Me Me Me (1) (2) (3)

COCH

HO yv— Me - “Äi -

Etooc t ii Etooc I a

Me O Me O

W (5·) COOEt

Me^^r^N

StOOC T l»

Me O

(6) 5 59402

Tarvittaessa happo (5) voidaan muuttaa tunnetuin keinoin karbok-syylihapon muuksi johdannaiseksi kuin esteri. Esim. antamalla hapon (5) reagoida tionyylikloridin kanssa saadaan asyy1ikloridi (kaavan (III) yhdiste, jossa Z on klooriatomi), ja käsittelemällä asyyliklori- dia natriumatsidilla saadaan asyyliatsidi (kaavan III) yhdiste, jossa Z on atsidoryhmä). Kaavan (II) yhdiste, jossa Z on ryhmä 0

-O-C-OR

jossa R on määritelty yllä, voidaan valmistaa tunnetuin keinoin esim. antamalla hapon (5) reagoida alkyylikloroformaatin, esim. metyyliklo-roformaatin tai etyylikloroformaatin kanssa liuottimen ja dehydrokloo-raavan aineen, esim. trietyyliamiinin läsnäollessa. Muodostunutta sekahappoanhydridiä voidaan edullisella tavalla pelkistää käsiteltävänä olevan keksinnön mukaan eristämättä ja puhdistamatta.

Vaihtoehtoisesti kaavan (II) lähtöyhdisteet, joissa ja R^ muodostavat metyleeniryhmän tai metyyli- tai etyylisubstituoidun metyleeniryhmän, voidaan edullisella tavalla valmistaa seuraavan reaktio kaavan mukaan, 6,8-dimetyyli-4,7-dietoksikarbonyyli-l-ftaiatsoni (6) bromataan N-bromisukkiini-imidillä. Pyrolysoimalla monobromoyh-diste (7) saadaan laktoni (8)' suurin saannoin.

COOSt 000Et

Me Me V1® f y

BtOOC I I EtOOC T II

Me 0 0HoBr II

^ 0 <6> (7) COOEt

Me —

0=C | II

N * 0 0 - CH2 (8) 6 59402

Kaavan (III) lähtöyhdiste voidaan valmistaa esim. seuraavan reaktiokaavion avulla. Diels-Adler-addukti (1) hydrolysoidaan osittain kciiumhydroksidin vähäisellä ylimäärällä monohapoksi (9). Käsittelemällä jälkimmäistä tionyylikloridilla ja käsittelemällä muodostunutta hap-pokloridia diatsometaanilla saadaan diatsoketoni (10). Käsittelemällä jälkimmäistä laimealla rikkihapolla saadaan isokromaani-l,4-dioni (11) .

Me ^Tv^COOH Me C0CHN2

EtOOC "^N^^COOMe EtDOu^f^cOOMe

Me Me (9) (10)

EtOGC T >Γ Me 0 (11)

Toteutettaessa keksinnön menetelmää a) annetaan kaavan (II) yhdisteen reagoida kompleksimetallihydridin kanssa liuottimen läsnäollessa. Käsiteltävänä olevassa keksinnössä käyttökelpoisista kompleksime-tallihydrideistä ovat esimerkkeinä natriumborohydridi, kaiiumborohyd-ridi, 1 itiumborohydridi ja litiumalumiinihydridi. Yllä kuvatuista komp-leksimetailihydrideistä natriumborohydridi on suositeltavin, koska se on halvempi, helpompi käsitellä ja vaarattomampi. Kompleksimetalli-hydridiä käytetään ekvimolaarisia määriä tai ylimäärin, mieluiten 1,5-5 moolia yhdisteen (II) moolia kohti. Mieluiten reaktio suoritetaan meta11ihalogenidin, esim. kalsiumkloridin, magnesiumbromidin, li-tiumbromidin, alumiini kloridin tai litiumjodidin läsnäollessa. Käytettäessä kompleksimetallihydridinä natriumborohydridiä alla olevassa taulukossa olevassa keksinnössä mainitut liuottimet, katalyytit ja lämpötilat ovat käsiteltävänä olevassa keksinnössä suoriteltavia. Taulukosta ilmenevät myös keskimääräiset saannot. Tavallisesti reaktio voidaan suorittaa lämpötilassa -10 ... +100°C.

7 59402 Z_Liuotin_Meta 11 ihalogenidi Lämpötila Saanto °C % alkoksi etanoli-metanoli CaC^ -10...+3U 90-95 halog. dioksaani-tetrahyd- rofuraani - 0...+100 50-00

-0-C-0R

" tetrahydrofuraani - 0 dioksaani - -10...+50 50-Θ0

Menetelmän b) eräässä toteuttamismuodossa annetaan kaavan (III) yhdisteen reagoida ekvimolaarisen määrän tai ylimäärän kanssa kaavan (IV) hydratsiinijohdannaista mieluiten liuottimen tai laimentimen läsnäollessa. Sopiva liuotin tai laimennin on vesi ja etanoli. Mieluiten reaktio suoritetaan lämpötilassa 30-100°C.

Yllä olevissa menetelmissä a) ja b) tuotteet voidaan helposti eristää ja puhdistaa tavanomaisin keinoin seuraavissa esimerkeissä kuvatulla tavalla.

Käsiteltävänä olevan keksinnön yhdisteitä voidaan antaa sellaisinaan tai farmaseuttisina koostumuksia, esim. jauheina, tabletteina, rakeina, kapseleina, lääkenappeina, suspensioina tai muina suun kautta annettavina muotoina ja liuoksina, suspensioina tai muina antomuotoi-na suoliston ulkopuolitse, Kaavan (I) yhdisteen tehokasta määrää voidaan vapaasti vaihdella ko. annoksesta riippuen, mutta tavallisesti se on noin 0,1-80 % kantajan tai laimentimen ja kaavan (I) yhdisteen seoksesta. Lyhyesti sanoen se voi olla mikä tahansa antokonsentraa-tio 1-100 mg/kg kehonpainoa/päivä.

Kantajana tai laimentimena voidaan käyttää farmaseuttisesti hyväksyttävä neste tai kiinteä aine ja tässä keksinnössä tarkoitetaan kantajalla myös apuaineita. Esimerkkejä nestemäisistä kantajista ovat ruiskeeseen sopiva tislattu vesi, isotooninen natriumkloridiliuos, Ringerin liuos, Locken liuos, polyetyleeniglykoli, etyylialkoholi, propyleeniglykoli, glyseroli, ja kasvisöljyt. Esimerkkejä kiinteistä kantajista ovat natriumkloridi, glukoosi, laktoosi, tärkkelys, sakkaroosi, setyy1 ia 1 koho 1i, kaakaovoi ja valaanpäärasva.

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä.

Esimerkki 1 1) 5,7-dimetyyli-6-Btoksikarbonyyli-3-hydroksi-3-metyyliftali-din valmistus.

Seosta, jossa oli 7,8 g 4,6-dimetyyli-5-etoksikarbonyylibentseeni- 1,2-dikarboksyylihappoanhydridiä (sp. 80-81°C), 6,5 g malonihappoa, jota oli kuivattu kuumentamalla 100°C:ssa 10 tuntia sekä 7 ml β 59402 absoluuttista pyridiiniä kuumennettiin 80-85°C:ssa 15 tuntia. Jäähtymisen jälkeen lisättiin 10 %:ista kloorivetyhappoa ja seosta uutettiin kloroformi 11a. Orgaanista kerrosta pestiin vedellä ja uutettiin kyllästetyllä natriumkarbonaattivesiliuoksella. Natriumbikarbonaatti -uute tehtiin happamaksi laimealla kloorivetyhapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin. Muodostunut jäännös kiteytettiin uudelleen eetteri-n-heksaa-nista, jolloin saatiin 5,4 g 5,7-dimetyy1i-6-etoksikarbonyy1i-3 -hydroksi-3-metyy1 ifta 1 idia, saanto 62 %, sp. 118-120oC.

2) 6,8-dimetyyli-4,7-dietoksikarbonyyli-1-ftalatsonin valmistus

Liuokseen, jossa oli 1,32 g 5,7-dimetyy1i-6-etoksikarbonyy1i- 3-hydroksi-3-metyy1 ifta 1idia ja 1 g kaliumhydroksidia 100 ml:ssa vettä lisättiin tiputtaen ja sekoittaen liuosta, jossa on 1,58 g kaliumpermanganaattia 80 ml:ssa vettä. Kun on sekoitettu lisää puolitoista tuntia, saostunut mangaanidioksidi poistettiin suodattamalla ja suodos kyllästettiin hiilidioksidilla. Liuokseen lisättiin 5 ml 80 %:ista hydratsiinihydraatti1iuosta ja liuosta kuumennettiin 70-80°C:ssa kaksi tuntia. Jäähtymisen jälkeen liuos tehtiin happamaksi laimealla kloori-vetyhapolla ja muodostunut sakka suodatettiin ja kiteytettiin uudelleen metanolista, jolloin saatiin 1,1 g 6,θ-dimetyyli-7-etoksikarbo-nyy1i- 1-fta latsoni-4 - karboksyy1ihappoa, sp. 216-218°C.

6,8-dimetyyli-7-etoksikarbonyyli-1-ftalatsoni-4-karboksyyli-happoa kuumennettiin pystyjäähdyttäen absoluuttisen etanolin ja konsentroidun rikkihapon kera. Käsittelemällä seosta tavalliseen tapaan saatiin 5,8-dimetyy1i-4,7-dietoksikarbonyy1i- 1-fta lats oni, sp. 159-161°C, saanto 90-95 %.

3) 6,8-dimetyyli-7-etoksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli-1-ftala-tsonin valmistus

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 500 mg natriumborohydridie 200 ml:ssa etanolia lisättiin annoksittain -5 - 0°C:ssa 1,4 g 6,8-dimetyy1i-4,7-dietoksikarbonyy1i-1-fta 1 atsonia ja tähän liuokseen lisättiin tiputtaen liuosta, jossa oli 700 mg vedetöntä kalsiumkloridia 200 mlsssa etanolia. Sekoitusta jatkettiin kolme tuntia samassa lämpötilassa ja reaktioseosta seisotettiin yli yön huoneenlämpötilassa. Seosta konsentroitiin vakuumissa, laimennettiin vedellä ja pH säädettiin arvoon 5 etikkahapo1la. Muodostunut sakka suodatettiin ja kiteytettiin uudelleen etanoli-vedestä, jolloin saatiin 1,2 g 6,8-dimetyy-li-7-etoksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli-1-ftalatsonia, sp. 171 - 17 2° C, spektrit on esitetty alla.

UV-spektri: (EtOH) rryj 218 (6 = 57000), 259 (6 =1 5000), 292 (£=11800), 307 (£=9600), 321 (6=7400) 9 59402 IR-spektri: (KBr) cm ^ 3400 (leveä), 2920, 1730, 1650, 1600, 1450, 1280, 1250, 1150, 1120, 1030 (leveä), 900.

NMR-spektri: (mitattu dimetyy 1 isu lf oks id i-dg : ssa ), 1*25 (t. 3H) 2,4 (s. 3H), 2,69 (s. 3H), 4,25 (q. 2H), 4,7 (d. 2H), 5,2 (t. 1H), 7,55 (s. 1H)

Analyysi C14H1604N2 Laskettu C 60,86 H 5,84 N 10,14 Saatu: C 60,78,H 5,80 N 10,34

Esimerkki 2 Käyttäen esimerkin 1 reaktiokaaviota ja metyy1i-isodehydro-asetaatin ja dimetyyliasetyleenidikarboksylaatin Diels-Adlerpadduktia valmistettiin seuraavat väliaineet ja 6,8-dimetyyli-7-metoksikarbonyy-li-4-hydroksimetyyli-l-ftalatsoni: 4,6-dimetyyli-5-metoksikarbonyylibentseeni-1,2-dikarboksyy1i-tappoanhydridi, sp. 129-131°C, kiteytetty uudelleen etyyliasetaatti-n-heksaanista, 5,7-dimetyy1i-6-metoksikarbonyyli-3-hydroksi-3-metyyli-ftalidi, sp. 104-106°C, kiteytetty uudelleen etyyliasetaatti-n-heksaa-n ista, 6,8-dimetyy1i-7-metoksi karbonyyli-4-karboksi-1-ftalatsoni, sp. 221-223°C, kiteytetty uudelleen metanolista, 6,8-dimetyy1i-4,7 -dimetoksikarbonyyli-l-ftalatsoni, sp. 240-241aC, kiteytetty uudelleen metanolista, 6,B-dimetyy1i-4-hydroksimetyy1i-7-metoksikarbonyyli-1-ftalatsoni, sp. 204-205°C, kiteytetty uudelleen metanolista, NlMR-spekt-ri (mitattu dimetyylisulfoksidi-dg:ssa) 2,4 (s. 3H), 2,7 (s. 3H), 3,95 (s. 3H), 4,6 (d. 2H), 5,3 (leveä, 1H), 7,8 (s. 1H).

Esimerkki 3 6,B-dimetyyli-7-etoksikarbonyyli- iso kromaani-1,4-dionin valmistus .

Kuumennettiin varovasti pystyjäähdyttäen 3,5-dimetyy1i-4,6 -dietoksikarbonyylibentsoehappoa ja tionyylikloridia ja tionyyliklori-din ylimäärä poistettiin tislaamalla. Muodostunutta jäännöstä käsiteltiin ylimäärin diätsometaan ia sisältävällä eetteri liuoksella, jolloin saadaan 3,5-dimetyyli-4,6-dietoksikarbonyyli-LJ -diatsoasetofenoni sp. 78-89°C, kokonaissaanto 60 %. Jälkimmäinen yhdiste lisättiin huoneenlämpötilassa sekoitettuun seokseen, jossa oli 2 ml 15 %:sta rikki-happovesiliuosta ja 10 ml dioksaania. Liuosta sekoitettiin kaksi tuntia ja sitten liuokseen lämpötila kohotettiin 60-90°C:een ja pidettiin tässä lämpötilassa tunti. Liuos jäähdytettiin, laimennettiin vedellä ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute haihdutettiin ja jäännös kiteytettiin uudelleen etanolista, jolloin saatiin 6,8-dimetyyli-7-etoksi-karbonyy1i-isokromaani-1-dioni, sp. 142-144°C, saanto 73 %.

10 59402 6,8-dimetyy1i-7-etoksikarbonyyl1-4-hydroksimetyyli-l~ftalatso- ni .

Liuosta, jossa oli 2 g yllä mainittua isokromaanijohdannaista, 4 ml SO %:sta hydratsiinihydraattiliuosta ja 50 ml etanolia, kuumennettiin pystyjäähdyttäen kaksi tuntia. Liuosta konsentroitiin vakuumis-sa, laimennettiin vedellä ja tehtiin lievästi happameksi laimealla kloo-rivetyhapölla. Muodostunut sakka suodatettiin ja kiteytettiin uudelleen etanoli-vedestä, jollain saatiin 1,2 g 6,8-dimetyyli-7-etoksikarbonyy-li-4-hydroksimetyyli-l-ftalatsonia, sp. 171-172°C. IR-spektri oli sama kuin esimerkin 1 3) näytteellä.

Esimerkki 4

Kaavan (I) yhdiste, jossa R2 on metyyli ja R^ ja R3 muodostavat yhdessä metyleeniryhmän, valmistettiin seuraavan reaktiokaavion avulla .

Liuosta, jossa oli 3,2 g 6,8-dimetyyli-4,7-dietoksikarbonyyli-1-ftalatsonia, 1,9 g N-bromisuksiini-imidiä ja 100 mg bentsoyy1iper-oksidia 200 ml:ssa hiilitetrakloridia, kuumennettiin pystyjäähdyttäen kaksi tuntia. Liuottimen haihduttamisen jälkeen muodostunutta jäännöstä uutettiin etyyliasetaatilla. Uutetta pestiin vedellä ja liuotin poistettiin. Jäännös kiteyttiin uudelleen etyyliasetaatista, jolloin saatiin 2,86 g 8 - bromi etyy li-4,7-dietoksikarbonyyli-6-metyyli-l-fta-latsonia, sp. 185-190°C.

Kuumennettiin 1,2 g yllä kuvattua bromoyhdistettä 40 minuuttia vakuumissa 185-190°C:ssa öljyhauteessa. Muodostunut kiinteä massa kiteytettiin uudelleen asetonista, jolloin saatiin seuraavan kaavan [3] yhdiste kvantitatiivisesti, Se ei sulanut 3oo°C:ssa.

COOEt

Me N

NH (8) OC T T \) _ch2 °

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 45 mg natriumborohydridiä 60 mlissa etanolia lisättiin annoksittain -5,..Q°C:ssa 112 mg yllä kuvattua yh distettä (8) ja sitten lisättiin yllä kuvattuun liuokseen tiputtaen 5C mg vedetöntä kalsiumkloridia 40 ml:ssa etanolia. Muodostunutta liuosta sekoitettiin lisää kolme tuntia huoneenlämpötilassa ja konsentroitiin vakuumissa tilavuuteen n. 20 ml. Konsentraattia laimennettiin vedellä ja kun pH oli säädettu arvoon 4-5 laimealla kloorivety- n 59402 vetyhapolla uutettiin etyyliasetaatilla. Liuotin poistettiin uutteesta ja jäännös kiteytettiin uudelleen asetonista, jolloin saatiin 7Θ mg kaavan (12] mukaista yhdistettä ch2dh T m 1 {i2] /Λν nh 0=Cm

Sen fysikaaliset ominaisuudet olivat seuraavat: ei sulanut 300°C:ssa, IR-spektri (KBr) cm ^ 3400 (leveä], 1760, 1640, 1610, 1355 NMR-spektri (mitattu dimetyylisulfoksidi-dg:ssa] 2,75 (s. 3H), 4,7 (s. 2H], 5,45 (leveä, 1H), 5,7 (s. 2H], 8,05 (s. 1H], 12,9 (s. 1H] massaspektri 246 (M ).

Esimerkki 5

Liuosta, jossa oli 1 g 6,8-dimetyyli-7-etoksikarbonyyli-iso-kromaani-l,4-dionia, 3 ml metyylihydratsiinia ja 25 ml etanolia kuumennettiin pystyjäähdyttäen kaksi tuntia. Liuosta konsentroitiin vakuu-missa, laimennettiin vedellä ja tehtiin lievästi happamaksi laimealla kloorivetyhapo1 la. Muodostunut sakka suodatettiin ja kiteytettiin uudelleen asetoni-eetteristä, jolloin saatiin 720 mg 7-etoksikarbonyy-li-4-hydroksimetyyli-2,6,6-trimetyyli-l-ftalatsonia, sp. 142-144°C.

Biologiset kokeet 1] Käsiteltävien yhdisteiden vaikutus ihmisen verihiutaleiden kasautumisestossa in vitro.

Käsiteltävänä olevan keksinnön yhdisteillä oli selvä estovaikutus in vitro ADP:n (adenosiin id ifosfaatin] tai adrenaliinin aiheuttamaan ihmisen verihiutaleiden kasautumiseen.

Ihmisen CPRP:tä (sitraattikäsiteltyä, runsaasti verihiutaleita sisältävää veriheraa] ja 1/10 tilavuusosaa koeyhdisteen erilaisia määriä sisältävää suolaliuosta inkuboitiin 37°C:ssa 200 sekuntia. Seokseen lisättiin 3 ^imoolia ADP:tä tai 1 yug/ml adrenaliinia. Primäärisen ja sekundäärisen kasautumisen voimakkuus määritettiin verihiutale-kasautumismittari1la (Chrono-Log, malli 300].

Kunkin yhdisteen kera inkuboidun näytteen ADP:n tai adrenaliinin aiheuttama kasautuminen verrattiin suolaliuoksen kera inkuboidun näytteen arvoon. Suhde on ilmoitettu yhdistettä sisältävän näytteen prosentuaalisena määränä suolaliuosta sisältävästä näytteestä. Tulokset ilmenevät alla olevasta taulukosta I.

i2 59402

Verihiutaleiden primäärisen ja sekundäärisen kasautumisen voimakkuus määritettiin menetelmän avulla, jonka ovat kuvanneet H. Yamazaki, T. Sano et. ai., otsikko (Platelet Functions in Thromboembolic Disorders), Thrombosis et Diatheses Haemorrhagica, painossa ja siinä mainitut viitteet.

Kuten taulukosta I käy ilmi, käsiteltävänä oleva yhdiste estää ADP:n tai adrenaliinin aiheuttamaa primääristä kasautumista samalla tavoin kuin 4-hydroksimetyyli-l-ftalatsoni (belgialaisen patentin njo 787,130 yhdiste) ja 7-etoksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli-l-ftalatsoni (belgialaisen patentin n:o 787,139 yhdiste). Käsiteltävänä olevan keksinnön yhdiste estää kuitenkin aikaisempiin yhdisteisiin verrattuna huomattavasti tehokkaammin sekundääristä kasautumista. Niinpä käsiteltävänä olevat yhdisteet estävät AD0:n tai adrenaliinin aiheuttamaa sekundääristä kasautumista statistisesti merkitsevästi konsentraa-tion ollessa 1-2,5 yjg/ml. 7-etoksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli-l-fta-latsoni estää sekundääristä kasautumista konsentraation ollessa 5-10 /Jg· 13 59402 x κ • κχχ x x „ ^ x κ P r\ κ x x XLD CD cmo x ,-h 0 » en co o cm * v-*LT>·. > >riin M 0 cd ·> - -»(Τ' »co * co n ω « « ίτΠΤΊ τ— Γ— IM CO M M *c- CTS (τ— τ- .Μ Μ .

dc + I + I + I +Ι+Ι+Ι + I + I + I + I + I ♦ I + I + I

^ O MD O CM (M CDD O N >- CO (D t- ^ CO

^^ ^ ^ ^ * * * * ^ ^ ' 0 cm cd m cd en m γπι-cmo m m cm cm h en to o- *3- cd uo ω rn n co co mcninin e

•rH

•H

r—H

en e

CU X

in X X CTj „ X

TD CD CM d r O OI LO > CH LT) CO CD r- <£ · * * * * * ·. *{£}*. »**> C cm lti m ro to en eo.^-.^d-.to μ,μ,γπγο,

cd +1+1 + 1 + 1+1+1 + + +1 + i + I+I+I+I

cd m ωΚ <3- n co enenoeo en t- ^ en CC * * * * * * * % * * * * * * •h edenin ld cm co n n en m en cm co (h e en o co en en coeneno en co ® co CL *“

Lii

D CD CO CD O O CD CD CD CD CD I O O O O

Π] r- t— ^ t— v- «r- r- v“ v-r—τ— t— q. n:

(U ·ΓΊI

I- CD

X

XX XXX XXX

P x x X xxxx x (D

cd en > en co m co cd en en cm co en « m en

CD * CD * »·** * » * * * * ·> * O

ti ld r- σι en cd cd □ n cd ω cm ,to .to ,co, o e +1+1+1 + |+|+| +|+ + +1 + I+I+I+I+I 01 -*

D ID N O CO en CD M CO V- CT) en CM en CO CD O DL

ν’ % * * % *. ·. ·»·*%·» * * * * * ^33

en LTioco ao^TCM uicofM'i i- ω oi m cd -*c E

en mmm cd cd rs e- un cd cc o- en «r in en ll-h p cd o o £ >

"M -H CD

CL XXX O -H

CD K KKK > t <c ω co ^ cd cm un o e- cm cd cm cm co en en eno p en r— co cm co cm tn en,in,en mmo.coo, E 3 cd +I+I+I + I + I + I + + + + + + + +1+1 3 <ti o m en rv en lo^cm en o en in in v-to co m -Pen C* £ * ·* ·» * ·» * * * * * * i] fö

+J -H CO LP CO ^fCMUD (M N r- O CD CH C (O r- ID-iC

•I—( e o en oi co co co cd n o en cd en σι en en en -> n *— cd 3

SU- 4J

e ·Η •H I 3 0 jsC -P Xl 0 3 •O 3

TD O O O CD CD O O CDO-O-O- O O O CM □ CD -L

r CLCD ^ t *— ^ * ^ ^ _QC

3 CD -H 3 Ό 0 I— 0 -X _

O c {P

_|_J Ή Ci 0 ω 0 o jc;

I—e P

e E CD CD CD O □ CD CDCDCDLO O O DID ID t- 0C

0 M. O CO <J CD CO «et CO CM '3‘CM'- « OlL0 en clo co co cm « en

H 3 O C -SL

E ^ V 0 3 _p Q_ -P 1—· tj en cd

0 II · -H rH

CD O rH -H I TD O

ID CL I CD tn ·Η X -0 3 cl i ^--p -sLen-H x>,0

0 CD TT- I <4- ·—> O-SLCC

_C I -Hl -H -POO0 CC

(D 0 Ή -H 1—* ^ i—t 0 p 0 C ....

H_) H-) i—l e—C >1 I i—C I TD -P ·Η Q_ Q_

D CD >1 > >1-H O CM >1 fO CD e CL

•H -rH >1 >, Cr-HP lOIr-HLL 0.0- _c TD tn -P 0>-P ·Η I CD 3 u u

•H SI -H 0 II >1 C rH^f-PE

P >1 .-H^ gr-^TH-PO >ιΐΜ- en m

I—I 0 *H CD ·Η ·Η ·Η ·Η ID CD I >ι·Η I C O

> H-> 0 1—I 0 C I—I -SL E '—' 4JrHv-:Q ·>0

O C *H rH _iL O i—t ·ίΗ "i-C 0 >1 I C ' ' CD TD

^CC -rH rH O O0O 00 E>lOC0 M -C

JL0 O >|P P-PP -SL JL -ei -rlCrH-H+J 3 O 0 _Q >,-P TDCD-P aoC TD O >1 0 0 CO 0

rH ·Η 3 -PC >11—I C -PPO I O >|JL ·Η O

OE -SL 0O -CCDO 0Ό I» COP-P0TD ·· -P

0 JZ C 0 JS i +) I I >i -P ·. 0 0 DL -C 0

I— I—I I—I O-q-'—' IM-CIU 0 je e w > X UJ

14 59402 2) Käsiteltävien yhdisteiden vaikutus estettäessä syklistä AMP-fosfodiesteraasia kanin aorttaseinämässä ja ihmisen verihiutaleissa.

Käsiteltävänä olevan keksinnön yhdisteillä oli selvä estovaikutus sykliseen AMP-fosfodiesteraasin kanin aorttaseinämässä ja ihmisen verihiutaleissa .

Kanin aorttaseinämän tai ihmisen runsaasti verihiutaleita sisältävänä veriheran homogenaatin päällä olevaa nestettä inkuboitiin reagens-siseoksen, jossa oli tritiummerkittyä, syklistä AMP:tä (adenosiini-3',-5 *-syklomonofosfaattia) ja erilaisten yhdistemäärien kera.

Inkuboitua seosta puhdistettiin pylväkromatografia 1la ja nukleotidia sisältävä jae tutkittiin kvantitatiivisesti nesteskinti1latiolaski-mella.

Taulukosta II ilmenee näiden yhdisteiden estovaikutus sykliseen AMP-fosfodiesteraasiin. Taulukkoarvoista ilmenee yhdistemäärä, joka tarvitaan syklisen AMP-fosfodiesteraasin 50 %:ksi estämiseksi.

Kuten taulukosta II käy ilmi, käsiteltävänä oleva yhdiste estää tehokkaammin difosfoesteraasia kuin teofylliini, kofeiini tai alan aikaisempi yhdiste. Niinpä käsiteltävät yhdisteet lisäävät tehokkaasti syklisen AMP : n konsentraatiota verihiutaleissa ja aorttaseinämässä.

Taulukko II

^50^1 moolia

Yhdiste Aorttaseinämä

Verihiutale Sisäkalvo Keskikalvo (ihminen) (kani) (kani) 7-etoksikarbonyyli-4-hydro ks imetyyli-l-ftalat- soni (kontrolli) 57 52 144 teofylliini (kontrolli) 91 127 155 kofeiini (kontrolli) 350 - 460 6, Q-dimetyyli-7-etoksi-karbonyyli-4-hydroksi-metyyli-l-ftalatsoni (käsiteltävä yhdiste) 4,1 1,6 24 Käytettyä koemenetelmää ovat kuvanneet H. Hidaka ja M. Shibuya, "A new assey of cyclic nucleotide phosphodiesterase and its application to human" Biochemical Medicine (painossa).

3) Käsiteltävien yhdisteiden verenpainetta alentava vaikutus myö-täsyntyisesti korkeata verenpainetta sairastavissa rotissa..

Käsiteltävillä yhdisteillä on ainutlaatuinen verenpainetta alentava vaikutus myötäsyntyisesti korkeata verenpainetta sairastavissa rotissa.

Myötäsyntyisesti korkeata verenpainetta sairastavia rottia, joi- is 59402 ta lyhyesti kutsutaan SH-rotiksi (spontaanisti hypertensiivinen), saadaan siittämällä valikoivasti myötäsyntyisesti korkeata verenpainetta sairastavia rottia keskenään ja umpisiittämällä jatkuvasti korkeata verenpainetta sairastavan naaraan kanssa. Uskotaan, että SH-rotilla on selvä samanlaisuus ihmisen varsinaiseen korkeaan verenpaineeseen joutuessaan tähän sairaustilaan.

Alalla aikaisemmin julkistetut 4-hydroksimetyyli-l-ftalatsonil-la ja 7-etoksikarbonyy1i-4 - hydroksimetyy1i- 1-fta lats oni11 a ei ollut selvää verenpainetta alentavaa vaikutusta annettaessa vatsaontelon sisäisesti tai suun kautta 50 mg/kg saakka. Toisaalta käsiteltävillä yhdisteillä oli selvä verenpainetta alentava vaikutus annettaessa vatsaontelon tai suun kautta 0,78-50 mg/kg, mikä ilmenee taulukosta Ill-b.

Verenpainekokeessa käytettiin SH-rottia, joiden paino oli 210-250 g ja ikä 13-15 viikkoa ja koeyhdisteet annettiin vatsaonteloon. Taulukon III jokainen arvo on kolmen rotan keskiarvo.

Taulukko Ill-a

Yhdiste Verenpaine (annos 50 mg/kg) Ennen 1 3 6 24 48 4-hydroksimetyyli-1- ftalatsoni, verenpaine 183 178 179 180 182 1B4 7-etoksikarbonyyli-4- hydroksimetyyli-1- ftalatsoni, verenpaine 178 165 176 180 179 184 16 59402

Taulukko III-b

Yhdiste: 6,8-dimetyyli-7-etoksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli-l-ftalatsoni

Annos mg/kg Verenpaine ja alenema %

Aika h annon jälkeen

Ennen 136 24 48 cjq Verenpaine 170 165 132 110 145 152

Alenema % 2,9 22,4 35,3 14,7 10,6 -.y n Verenpaine 175 173 155 120 142 155 ' Alenema % 1,1 11,4 28,6 18,9 11,4 o ·, Verenpaine 173 170 138 110 135 150

Alenema % 1,7 20,2 36,4 22,0 13,3 n 7fl Verenpaine 183 177 167 143 160 169 ' Alenema % 3,3 8,7 21,9 12,6 8,8 4) Myrkyllisyyskoe Käsiteltävänä olevan keksinnön yhdisteiden ja alan aikaisempien yhdisteiden myrkyllisyyskokeen (LD^q) tulokset ilmenevät alla olevasta taulukosta. Koe suoritettiin antamalla suun kautta hiirille. Koe osoittaa, että nämä yhdisteet olivat suhteellisen myrkyttömiä, LD50 mg/kg 4-hydroksi-l-ftalatsoni 4,000 7-etoksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli- 1-ftalatsoni 5,000 6,8-dimetyyli-7-etoksi karbonyy1i-4-hyhdroksimetyyli-l-ftalatsoni (käsiteltävänä oleva yhdiste) 4,250

Claims (2)

1. 59402 17 Patenttivaatimus : Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen yleistä kaavaa I ch2oh r400C' l"lf "1 r3 0 olevan 1 - fta latsonijohdannais en valmistamiseksi, jonka kaavassa R on vetyatomi tai 1-3 hiiliatomia sisältävä a 1 kyy 1 i ry hmä, ja R,_j ovat kumpikin 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä ja R^ on vetyatomi tai 1-5 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai Ru ja voivat yhdessä muodostaa metyyleeniryhmän tai metyyli- tai etyylisubsti-tuoidun metyleeniryhmän, tunnettu siitä, että a) annetaan yleistä kaavaa II CG-Z Rzv^v\ I (II) R400C^ flTN Rl R3 o olevan yhdisteen, jonka kaavassa R^, Rg Ja ^4 merkitsevät samaa kuin yllä ja Z on halogeeniatomi tai atsido-, hydroksi- tai alkoksi-ryhmä, mieluiten 1-5 hiiliatomia sisältävä alkoksiryhmä tai kaavan 0 -0-C-0R ryhmä, jossa R on metyyli tai etyyli, reagoida kompleksimetallihydri-din kanssa meta11ihalogenidin läsnäollessa tai ilman sitä tai b) annetaan yleistä kaavaa III ia 59402 o I (im k3 o olevan yhdisteen, jonka kaavassa R^» R^ Ja R4 merkitsevät samaa kuin yllä, reagoida yleistä kaavaa IV nh2nhr1 (IV) olevan yhdisteen kanssa, jossa merkitsee samaa kuin yllä. 19 5 94 0
2. 2 Förfarande för framstä1lning av ett terapeutiskt användbort 1-ftalazonderivat med den allmänna formeln I CH^OH ΥΎ ί_ R400C 1 R3 □ väri R^ är väteatom eller en alkylgrupp med 1-3 kolatomer; R2 oc^ ^3 vardera är en alkylgrupp med 1-3 kolatomer; R^ är väteatom eller en alkylgrupp med 1-5 kolatomer eller R4 tillsammans med Rg kari bilda metylen-, eller metyl- eller etylsubstituerad metylengrupp, kännetecknat därav, att a] en förening med den allmänna formeln II CO-Z 'Yli 1 (ID r4odc/ y y R3 o väri R^, R2» Rg och R4 är som ovan definierats och Z är en halogen-atom, eller azido-, hydroxi- eller alkoxigrupp, företrädesvis en alkoxigrupp med 1-5 kolatomer, eller en grupp med formeln 0 -0-C-0R väri R är metyl- eller etylgrupp, omsättes med en komplex metallhydrid i närvaro eller fränvaro av en metallhalogenid, eller b) en förening med den allmänna formeln III