ES2942285T3 - Profármacos de inhibidores de la calicreína - Google Patents

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ES2942285T3 ES17864949T ES17864949T ES2942285T3 ES 2942285 T3 ES2942285 T3 ES 2942285T3 ES 17864949 T ES17864949 T ES 17864949T ES 17864949 T ES17864949 T ES 17864949T ES 2942285 T3 ES2942285 T3 ES 2942285T3
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Abstract

Se describen compuestos de fórmula I, II y III y sus sales farmacéuticamente aceptables, que son inhibidores de la calicreína. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden dicho compuesto y métodos que implican el uso de los compuestos y composiciones en el tratamiento y prevención del angioedema hereditario o adquirido, u otras enfermedades y condiciones caracterizadas por una actividad aberrante de la calicreína. (I) (II) (III) (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Profármacos de inhibidores de la calicreína
Solicitudes relacionadas
Esta solicitud reivindica el beneficio de prioridad para la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos de número de serie 62/415,202, presentada el 31 de octubre de 2016.
Antecedentes de la invención
El angioedema hereditario (HAE) es una enfermedad genética rara grave y potencialmente mortal, causada por mutaciones en el gen del inhibidor de la esterasa CI (C1INH), ubicado en el cromosoma 11q. El HAE se hereda como una afección autosómica dominante, aunque una cuarta parte de los casos diagnosticados surgen de una nueva mutación. El HAE se ha clasificado como enfermedad huérfana en Europa, con una prevalencia estimada de 1 en 50000. Las personas con HAE experimentan ataques agudos recurrentes de edema doloroso subcutáneo o submucoso de la cara, laringe, tracto gastrointestinal, extremidades o genitales que, si no se tratan, pueden durar hasta 5 días. Los ataques varían en frecuencia, gravedad y ubicación y pueden poner en peligro la vida. Los ataques laríngeos, con potencial de asfixia, representan el mayor riesgo. Los ataques abdominales son especialmente dolorosos y, a menudo, dan lugar a procedimientos exploratorios o cirugía innecesaria. Los ataques faciales y periféricos son desfigurantes y debilitantes.
El HAE tiene varios subtipos. El HAE tipo I se define por mutaciones del gen C1INH que producen niveles bajos de inhibidor de C1, mientras que el HAE tipo II se define por mutaciones que producen niveles normales de proteína C1 ineficaz. El HAE tipo III tiene una patogenia separada, siendo causado por mutaciones en el gen F12 que codifica la serina proteasa conocida como Factor XII. Los criterios de diagnóstico para distinguir los subtipos de HAE, y distinguir el HAE de otros angioedemas, se pueden encontrar en Ann Allergy Asthma Immunol 2008; 100 (Suppl2): S30-S40 y J Allergy Clin Immunol 2004; 114: 629-37.
Los tratamientos actuales para el HAE se dividen en dos tipos principales. Los tratamientos no específicos más antiguos, que incluyen los andrógenos y los antifibrinolíticos, están asociados con efectos secundarios significativos, particularmente en mujeres. Los tratamientos más nuevos se basan en la comprensión de la patología molecular de la enfermedad, a saber, que C1INH es el inhibidor más importante de la calicreína en el plasma humano y que la deficiencia de C1INH conduce a la activación sin oposición de la cascada calicreínabradicinina, siendo la bradicinina el mediador más importante de la permeabilidad vascular localmente aumentada que es el sello distintivo de un ataque.
Las terapias aprobadas incluyen C1INH derivado de plasma purificado (Cinryze®, Berinert), el péptido recombinante inhibidor de la calicreína ecallantida (Kalbitor®) y el inhibidor del receptor B2 de bradicinina icatibant (Firazyr®). Todas las terapias dirigidas actualmente disponibles se administran mediante inyección intravenosa o subcutánea. Actualmente no existe una terapia crónica oral dirigida específica para el HAE.
Hay muchas vías de administración para los ingredientes farmacéuticos activos (API). En general, la vía de administración oral se ve favorecida debido a ventajas, tales como, pero no limitadas a, comodidad para el paciente, flexibilidad en el momento de la administración, sitio de administración y no invasividad. La administración oral también proporciona una exposición al fármaco más prolongada en comparación con la infusión intravenosa intermitente, lo que puede ser importante para los fármacos con eficacia dependiente de la pauta. Por ejemplo, un fármaco con una semivida corta puede lograr un mayor tiempo de exposición ya sea por infusión continua o por dosificación oral continua. El uso de la terapia oral tiene además el potencial de reducir el coste de los recursos de atención médica para los servicios de atención de pacientes hospitalizados y ambulatorios.
En las técnicas farmacéuticas, se sabe que una serie de API no pueden administrarse eficazmente por vía oral. Las principales razones por las que estos compuestos no pueden administrarse por vía oral son: a) rápida degradación enzimática y metabólica; b) inestabilidad química y/o biológica; c) baja solubilidad en medio acuoso; y/o d) permeabilidad limitada en el tracto gastrointestinal. Para tales compuestos, pueden desarrollarse vías de administración no orales, tales como la administración parenteral, principalmente mediante inyecciones intramusculares o subcutáneas. Sin embargo, la administración no oral presenta una desventaja tanto para el paciente como para los proveedores de asistencia sanitaria y, por esta razón, es importante desarrollar vías de administración alternativas para dichos compuestos, tales como vías de administración oral.
Si bien la vía de administración oral es la más conveniente para el paciente y la más económica, el diseño de formulaciones para la administración por vía oral implica muchas complicaciones. Hay varios métodos disponibles para predecir la facilidad con la que se puede formular un API en una formulación adecuada para la administración por vía oral. Dichos métodos incluyen, pero no se limitan a, la regla de Lipinski (también conocida como la regla de cinco) y el Sistema de clasificación biofarmacéutica para la disposición de fármacos (BDDCS).
El BDDCS divide los API en cuatro clasificaciones, según su solubilidad y permeabilidad. Los API de clase I tienen alta solubilidad y alta permeabilidad; los API de clase II tienen baja solubilidad y alta permeabilidad; los API de clase III tienen alta solubilidad y baja permeabilidad; y los API de clase IV tienen baja solubilidad y baja permeabilidad. Los API de las clases más altas del BDDCS se enfrentan a mayores desafíos a la hora de formular un producto eficaz y farmacéuticamente aceptable que los de las clases más bajas. De las cuatro clases, los API que están en la clase IV son los más difíciles de formular en una formulación para administración por vía oral que sea capaz de suministrar una cantidad efectiva del API ya que se deben abordar los problemas tanto de solubilidad como de permeabilidad (tenga en cuenta que el BDDCS inherentemente no aborda la estabilidad química). El papel del BDDCS en el desarrollo de fármacos se describe en general en L.Z. Benet J. Pharm Sci. 2013, 102(1), 34-42.
La regla de Lipinski (descrita en Lipinski et al. Adv. Drug Deliv. Rev. 46 (1-3): 3-26) establece, en general, que con el fin de desarrollar una formulación exitosa para administración por vía oral, un API no puede violar más de uno de los siguientes criterios:
i) no más de 5 donadores de enlaces de hidrógeno (átomos de nitrógeno u oxígeno con uno o más átomos de hidrógeno);
ii) no más de 10 aceptores de enlaces de hidrógeno (átomos de nitrógeno u oxígeno);
iii) una masa molecular inferior a 500 daltons; y
iv) un coeficiente de reparto octanol-agua log P no superior a 5.
Se describen ciertos inhibidores de la calicreína en la Publicación de solicitud PCT N° WO 2016/029214. Estos compuestos tienen potencial terapéutico para tratar el angioedema hereditario y otros trastornos asociados con la actividad desregulada de la calicreína. Existe la necesidad de desarrollar análogos adicionales de tales inhibidores de calicreína que se puedan administrar por vía oral y que muestren propiedades tales como una buena biodisponibilidad.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a compuestos como se definen en las reivindicaciones. La presente invención también se refiere a compuestos definidos en las reivindicaciones para usar en el tratamiento de indicaciones definidas en las reivindicaciones.
Los compuestos reivindicados de la invención pueden estar abarcados por la fórmula (I), y sus sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000003_0001
en donde, independientemente de cada caso:
Z representa OR1 o NH(OH);
R1 representa
Figure imgf000003_0002
-C(Ra)(Rb)-O-C(O)-M-R3, o alquilo (C2-C6) opcionalmente sustituido con hidroxilo o heterocicloalquilo; Ra representa H o alquilo (C1-C6);
Rb representa H o alquilo (C1-C6);
Rx representa H o alquilo (C1-C6);
M es un enlace o representa O, S, NH o N(CH3);
R2 representa H, -OH, -C(O)OR4, -C(O)SR4, -C(O)O-[C(Rc)(Rd)]n O-C(O)-L-R5, o
Figure imgf000004_0001
R6 representa H, OH, -C(O)OR4, -C(O)SR4, -C(O)O-[C(Rc)(Rd)]n O-C(O)-L-R5, o
Figure imgf000004_0002
o R2 y R6, considerados junto con los átomos a los que están unidos, forman un grupo 1,2,4-oxadiazol-5-ona opcionalmente sustituido;
L, independientemente para cada caso, es un enlace o representa O, S, NH o N(CH3);
Rc, Rd, Re y Rf representan cada uno independientemente para cada caso H o alquilo (C1-C6);
R3 representa alquilo (C1-C6), aralquilo o cicloalquilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en amino, hidroxilo, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, -C(O)OH y -C(O)O(alquilo(C1-C6));
R4, independientemente para cada caso, representa alquilo (C1-C6), cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en -C(O)OH, -C(O)O(alquilo(C1-C6)), alcoxi (C1-C6), hidroxilo, oxo, heterocicloalquilo, amino, alquil(C1-C6)amino, di(alquil(C1-C6))amino y éter de sililo;
R5, independientemente para cada caso, representa alquilo (C1-C6), arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en amino, heterocicloalquilo, alcoxi (C1-C6) opcionalmente sustituido con alcoxi (C1-C6) o una cadena de poliéter; y
n representa 1 o 2;
con la condición de que al menos uno de R2 y R6 no sea H; y
con la condición de que si Z es OR1 y R1 es etilo o 2-(morfolino)etilo, entonces R4 no es hexilo ni butilo. En ciertos aspectos, la invención proporciona los compuestos reivindicados para su uso en el tratamiento del angioedema adquirido o angioedema hereditario, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención.
La invención descrita en el presente documento también proporciona los compuestos reivindicados para su uso en la inhibición de la coagulación de la sangre, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz de un compuesto de la invención.
Descripción detallada
Se han descrito inhibidores de calicreína y son útiles en métodos terapéuticos y composiciones adecuadas para usar en el tratamiento del angioedema adquirido o angioedema hereditario. En el presente documento se proporcionan compuestos de fórmula (I) que son útiles para tratar o prevenir una enfermedad o afección caracterizada por una actividad aberrante de la calicreína.
Definiciones
Los artículos "un" y "una" se utilizan en el presente documento para hacer referencia a uno o más de uno (es decir, al menos uno) del objeto gramatical del artículo. A modo de ejemplo, "un elemento" significa un elemento o más de un elemento.
El término "heteroátomo" está reconocido en la técnica y se refiere a un átomo de cualquier elemento que no sea carbono o hidrógeno. Heteroátomos ilustrativos incluyen boro, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre y selenio y, alternativamente, oxígeno, nitrógeno o azufre.
El término "alquilo" como se usa en el presente documento es un término de la técnica y se refiere a grupos alifáticos saturados, incluyendo grupos alquilo de cadena lineal, grupos alquilo de cadena ramificada, grupos cicloalquilo (alicíclicos), grupos cicloalquilo sustituidos con alquilo y grupos alquilo sustituidos con cicloalquilo. En determinadas realizaciones, un alquilo de cadena lineal o ramificada tiene aproximadamente 30 o menos átomos de carbono en su cadena principal (p. ej., C1-C30 para cadena lineal, C3-C30 para cadena ramificada), y alternativamente, aproximadamente 20 o menos, o 10 o menos. En ciertas realizaciones, el término "alquilo" se refiere a un grupo alquilo C1-C10. En ciertas realizaciones, el término "alquilo" se refiere a un grupo alquilo C1-C6 , por ejemplo un grupo alquilo C1-C6 de cadena lineal. En ciertas realizaciones, el término "alquilo" se refiere a un grupo alquilo C3-C12 de cadena ramificada. En ciertas realizaciones, el término "alquilo" se refiere a un grupo alquilo C3-C8 de cadena ramificada. Los ejemplos representativos de alquilo incluyen, pero no se limitan a metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo y n-hexilo.
El término "cicloalquilo" significa anillos carbocíclicos saturados mono o bicíclicos o con puente, cada uno de los cuales tiene de 3 a 12 átomos de carbono. Ciertos cicloalquilos tienen 5-12 átomos de carbono en su estructura de anillo, y pueden tener 6-10 carbonos en la estructura de anillo. Preferiblemente, cicloalquilo es cicloalquilo (C3-C7), que representa un anillo carbocíclico monocíclico saturado, que tiene de 3 a 7 átomos de carbono. Los ejemplos de cicloalquilos monocíclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, cicloheptilo y ciclooctilo. Los sistemas de anillos de cicloalquilo bicíclicos incluyen anillos monocíclicos con puente y anillos bicíclicos condensados. Los anillos monocíclicos con puente contienen un anillo de cicloalquilo monocíclico donde dos átomos de carbono no adyacentes del anillo monocíclico están unidos por un puente alquileno de entre uno y tres átomos de carbono adicionales (es decir, un grupo puente de la forma -(CH2)w-, donde w es 1, 2 o 3). Los ejemplos representativos de sistemas de anillos bicíclicos incluyen, pero no se limitan a biciclo[3.1.1]heptano, biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2]octano, biciclo[3.2.2]nonano, biciclo[3.3.1]nonano y biciclo[4.2.1]nonano. Los sistemas de anillos de cicloalquilo bicíclicos condensados contienen un anillo de cicloalquilo monocíclico condensado bien con un fenilo, un cicloalquilo monocíclico, un cicloalquenilo monocíclico, un heterociclilo monocíclico o bien un heteroarilo monocíclico. El cicloalquilo bicíclico con puente o condensado está unido al resto molecular original a través de cualquier átomo de carbono contenido dentro del anillo de cicloalquilo monocíclico. Los grupos cicloalquilo están opcionalmente sustituidos. En ciertas realizaciones, el cicloalquilo bicíclico condensado es un anillo de cicloalquilo monocíclico de 5 o 6 miembros condensado bien con un anillo de fenilo, un cicloalquilo monocíclico de 5 o 6 miembros, un cicloalquenilo monocíclico de 5 o 6 miembros, un heterociclilo monocíclico de 5 o 6 miembros, o bien un heteroarilo monocíclico de 5 o 6 miembros, en donde el cicloalquilo bicíclico condensado está opcionalmente sustituido.
El término "(cicloalquil)alquilo" como se usa en el presente documento se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más grupos cicloalquilo. Un ejemplo de cicloalquilalquilo es el grupo ciclohexilmetilo.
El término "heterocicloalquilo" como se usa en el presente documento se refiere a un radical de un sistema de anillo no aromático, que incluye, pero no se limita a, anillos monocíclicos, bicíclicos y tricíclicos, que puede estar completamente saturado o que puede contener una o más unidades de insaturación, para evitar dudas, el grado de insaturación no da como resultado un sistema de anillo aromático, y que tiene de 3 a 12 átomos que incluyen al menos un heteroátomo, tal como nitrógeno, oxígeno o azufre. Para fines de ejemplificación, que no deben interpretarse como limitantes del alcance de esta invención, los siguientes son ejemplos de anillos heterocíclicos: aziridinilo, azirinilo, oxiranilo, tiiranilo, tiirenilo, dioxiranilo, diazirinilo, diazepanilo, 1,3-dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, 1,3-ditiolanilo, 1,3-ditianilo, imidazolidinilo, isotiazolinilo, isotiazolidinilo, isoxazolinilo, isoxazolidinilo, azetilo, oxetanilo, oxetilo, tietanilo, tietilo, diazetidinilo, dioxetanilo, dioxetenilo, ditietanilo, ditietilo, dioxalanilo, oxazolilo, tiazolilo, triazinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, azepinas, azetidinilo, morfolinilo, oxadiazolinilo, oxadiazolidinilo, oxazolinilo, oxazolidinilo, oxopiperidinilo, oxapirrolidinilo, piperazinilo, piperidinilo, piranilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, quinuclidinilo, tiomorfolinilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tiadiazolinilo, tiadiazolidinilo, tiazolinilo, tiazolidinilo, tiomorfolinilo, 1,1 -dioxidotiomorfolinilo (tiomorfolina sulfona), tiopiranilo y tritianilo. Un grupo heterocicloalquilo está opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes como se describe a continuación.
El término "(heterocicloalquil)alquiloM, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más grupos heterocicloalquilo (es decir, heterociclilo).
El término "alquenilo", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 2 a 10 carbonos, y que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono formado por la eliminación de dos hidrógenos. Ejemplos representativos de alquenilo incluyen, pero no se limitan a, etenilo, 2-propenilo, 2-metil-2-propenilo, 3-butenilo, 4-pentenilo, 5-hexenilo, 2-heptenilo, 2-metil-1-heptenilo y 3-decenilo. El(los) enlace(s) insaturado(s) del grupo alquenilo pueden estar en cualquier parte del resto y pueden tener la configuración (Z) o (E) alrededor del(de los) doble(s) enlace(s).
El término "alquinilo", tal como se usa en el presente documento, se refiere a un radical hidrocarburo de cadena lineal o ramificada que contiene de 2 a 10 átomos de carbono y que contiene al menos un triple enlace carbonocarbono. Ejemplos representativos de alquinilo incluyen, pero no se limitan a, acetilenilo, 1 -propinilo, 2-propinilo, 3-butinilo, 2-pentinilo y 1 -butinilo.
El término "alquileno" es reconocido en la técnica y, como se usa en el presente documento, se refiere a un dirradical obtenido eliminando dos átomos de hidrógeno de un grupo alquilo, como se definió anteriormente. En una realización un alquileno se refiere a un alcano disustituido, es decir, un alcano sustituido en dos posiciones con sustituyentes tales como halógeno, azida, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, alcoxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, sulfonamido, cetona, aldehido, éster, heterociclilo, restos aromáticos o heteroaromáticos, fluoroalquilo (tal como trifluorometilo), ciano o similares. Es decir, en una realización, un "alquilo sustituido" es un "alquileno".
El término "amino" es un término de la técnica y como se utiliza en el presente documento se refiere tanto a aminas no sustituidas como sustituidas, p. ej., un resto que se puede representar por las fórmulas generales:
Ra
l
N---- Rb
\Rb Rc
en donde Ra , Rb y Rc representan cada uno independientemente un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo, -(CH2)x-Rd , o Ra y Rb, considerados junto con el átomo de N al que están unidos completan un heterociclo que tiene de 4 a 8 átomos en la estructura del anillo; Rd representa un arilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, un heterociclilo o un policiclilo; y x es cero o un número entero en el intervalo de 1 a 8. En ciertas realizaciones, sólo uno de Ra o Rb puede ser un carbonilo, p. ej., Ra, Rb y el nitrógeno juntos no forman una imida. En otras realizaciones, Ra y Rb (y opcionalmente Rc) cada uno representa independientemente un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo o -(CH2)x-Rd . En ciertas realizaciones, el término "amino" se refiere a -NH2.
En ciertas realizaciones, el término "alquilamino" se refiere a -NH(alquilo).
En ciertas realizaciones, el término "dialquilamino" se refiere a -N(alquilo)2.
El término "amido", como se usa en el presente documento, significa -NHC(=O)-, en donde el grupo amido está unido al resto molecular original a través del nitrógeno. Los ejemplos de amido incluyen alquilamido tal como CHaC(=O)N(H)- y CH3 CH2C(=O)N(H)-.
El término "acilo" es un término de la técnica y como se usa en el presente documento se refiere a cualquier grupo o radical de la forma RCO- donde R es cualquier grupo orgánico, p. ej., alquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo y heteroaralquilo. Grupos acilo representativos incluyen acetilo, benzoilo y malonilo.
El término “aminoalquilo” como se usa en el presente documento se refiere a un grupo alquilo sustituido con uno o más grupos amino. En una realización, el término "aminoalquilo" se refiere a un grupo aminometilo. El término "aminoacilo" es un término de la técnica y, como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo acilo sustituido con uno o más grupos amino.
El término "aminotionilo" como se usa en el presente documento se refiere a un análogo de un aminoacilo en el que el O de RC(O)- se ha reemplazado por azufre, por lo tanto tiene la forma RC(S)-.
El término "fosforilo" es un término de la técnica y, como se usa en el presente documento, en general puede representarse por la fórmula:
Q50
------- P II-------
OR59
en donde Q50 representa S u O, y R59 representa hidrógeno, un alquilo inferior o un arilo; por ejemplo, -P(O)(OMe)- o -P(O)(OH)2. Cuando se usa para sustituir, p. ej., un alquilo, el grupo fosforilo del fosforilalquilo se puede representar por las fórmulas generales:
Figure imgf000007_0001
en donde Q50 y R59, cada uno independientemente, se definen anteriormente, y Q51 representa O, S o N; por ejemplo, -OP(O)(OH)OMe o -NH-P(O)(OH)2. Cuando Q50 es S, el resto fosforilo es un "fosforotioato".
El término "aminofosforilo" como se usa en el presente documento se refiere a un grupo fosforilo sustituido con al menos un grupo amino, como se define en el presente documento; por ejemplo, -P(O)(OH)NMe2.
El término "azida" o "azido", como se usa en el presente documento, significa un grupo -N3.
El término “carbonilo” , tal como se usa en el presente documento, se refiere a -C(=O)-.
El término "tiocarbonilo" como se usa en el presente documento se refiere a -C(=S)-.
El término "alquilfosforilo" como se usa en el presente documento se refiere a un grupo fosforilo sustituido con al menos un grupo alquilo, como se define en el presente documento; por ejemplo, -P(O)(OH)Me.
El término "alquiltio" como se usa en el presente documento se refiere a alquil-S-. El término "(alquiltio)alquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo alquiltio.
El término "carboxi" como se usa en el presente documento, significa un grupo -CO2H.
El término "arilo" es un término de la técnica y, como se usa en el presente documento, se refiere a que incluye grupos hidrocarburos aromáticos monocíclicos, bicíclicos y policíclicos, por ejemplo, benceno, naftaleno, antraceno y pireno. Normalmente, un grupo arilo contiene 6-10 átomos de carbono en el anillo (es decir, arilo (C6-C10)). El anillo aromático puede estar sustituido en una o más posiciones del anillo con uno o más sustituyentes, tales como halógeno, azida, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, alcoxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, sulfonamido, cetona, aldehído, éster, heterociclilo, restos aromáticos o heteroaromáticos, fluoroalquilo (tal como triflurometilo), ciano, o similares. El término "arilo" también incluye sistemas de anillos policíclicos con dos o más anillos cíclicos en los que dos o más carbonos son comunes a dos anillos contiguos (los anillos son "anillos condensados") en donde al menos uno de los anillos es un hidrocarburo aromático, p. ej., los demás anillos cíclicos pueden ser cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos, heteroarilos y/o heterociclilos. En ciertas realizaciones, el término "arilo" se refiere a un grupo fenilo.
El término "heteroarilo" es un término de la técnica y como se usa en el presente documento se refiere a un grupo aromático monocíclico, bicíclico y policíclico que tiene de 3 a 12 átomos en total que incluye uno o más heteroátomos tales como nitrógeno, oxígeno o azufre en la estructura del anillo. Los grupos heteroarilo de ejemplo incluyen azaindolilo, benzo(b)tienilo, bencimidazolilo, benzofuranilo, benzoxazolilo, benzotiazolilo, benzotiadiazolilo, benzotriazolilo, benzoxadiazolilo, furanilo, imidazolilo, imidazopiridinilo, indolilo, indolinilo, indazolilo, isoindolinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, isoquinolinilo, oxadiazolilo, oxazolilo, purinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolilo, piridinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirrolo[2,3-d]pirimidinilo, pirazolo[3,4-d]pirimidinilo, quinolinilo, quinazolinilo, triazolilo, tiazolilo, tiofenilo, tetrahidroindolilo, tetrazolilo, tiadiazolilo, tienilo, tiomorfolinilo, triazolilo o tropanilo, y similares. El "heteroarilo" puede estar sustituido en una o más posiciones del anillo con uno o más sustituyentes tales como halógeno, azida, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, alcoxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, sulfonamido, cetona, aldehído, éster, heterociclilo, restos aromáticos o heteroaromáticos, fluoroalquilo (tal como trifluorometilo), ciano, o similares. El término “heteroarilo” también incluye sistemas de anillos policíclicos que tienen dos o más anillos cíclicos en los que dos o más carbonos son comunes a dos anillos contiguos (los anillos son "anillos condensados"), en donde al menos uno de los anillos es un grupo aromático que tiene uno o más heteroátomos en la estructura del anillo, p. ej., los otros anillos cíclicos pueden ser cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos, heteroarilos y/o heterociclilos.
El término "aralquilo" o "arilalquilo" es un término de la técnica y como se usa en el presente documento se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo arilo, en donde el resto está unido a la molécula original a través del grupo alquilo.
El término “heteroaralquilo” o "heteroarilalquilo" es un término de la técnica y, tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo heteroarilo, unido al resto molecular original a través del grupo alquilo.
El término "alcoxi", como se usa en el presente documento, significa un grupo alquilo, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un átomo de oxígeno. Ejemplos representativos de alcoxi incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, 2-propoxi, butoxi, terc-butoxi, pentiloxi y hexiloxi.
El término "alcoxialquilo" se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo alcoxi.
El término "alcoxicarbonilo" significa un grupo alcoxi, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un grupo carbonilo, representado por -C(=O)-, como se define en el presente documento. Los ejemplos representativos de alcoxicarbonilo incluyen, pero no se limitan a, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo y ferc-butoxicarbonilo.
El término "alquilcarbonilo", como se usa en el presente documento, significa un grupo alquilo, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un grupo carbonilo, como se define en el presente documento. Los ejemplos representativos de alquilcarbonilo incluyen, pero no se limitan a, acetilo, 1-oxopropilo, 2,2-dimetiM-oxopropilo, 1-oxobutilo y 1-oxopentilo.
El término "alrilcarbonilo", como se usa en el presente documento, significa un grupo arilo, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un grupo carbonilo, como se define en el presente documento. Los ejemplos representativos de arilcarbonilo incluyen, pero no se limitan a benzoilo y (2-piridinil)carbonilo.
El término "alquilcarboniloxi" y "arilcarboniloxi", como se usan en el presente documento, significan un grupo alquilcarbonilo o arilcarbonilo, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un átomo de oxígeno. Los ejemplos representativos de alquilcarboniloxi incluyen, pero no se limitan a, acetiloxi, etilcarboniloxi y ferc-butilcarboniloxi. Los ejemplos representativos de arilcarboniloxi incluyen, pero no se limitan a, fenilcarboniloxi.
El término "alquenoxi" o "alquenoxilo" significa un grupo alquenilo, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un átomo de oxígeno. Los ejemplos representativos de alquenoxilo incluyen, pero no se limitan a, 2-propen-1-oxilo (es decir, CH2=CH-CH2-O-) y viniloxi (es decir, CH2=CH-O-).
El término "ariloxi", como se usa en el presente documento, significa un grupo arilo, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un átomo de oxígeno.
El término "heteroariloxi", como se usa en el presente documento, significa un grupo heteroarilo, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un átomo de oxígeno.
El término "carbociclilo" como se usa en el presente documento significa un radical hidrocarburo monocíclico o multicíclico (p. ej., bicíclico, tricíclico, etc.) que contiene de 3 a 12 átomos de carbono que está completamente saturado o tiene uno o más enlaces insaturados y para evitar dudas, el grado de insaturación no da como resultado un sistema de anillo aromático (p. ej., fenilo). Ejemplos de grupos carbociclilo incluyen 1 -ciclopropilo, 1 -ciclobutilo, 2-ciclopentilo, 1-ciclopentenilo, 3-ciclohexilo, 1-ciclohexenilo y 2-ciclopentenilmetilo.
El término "ciano" es un término de la técnica y como se usa en el presente documento se refiere a -CN.
El término "halo" es un término de la técnica y como se usa en el presente documento se refiere a -F, -Cl, -Br o -I.
El término "haloalquilo", como se usa en el presente documento se refiere a un grupo alquilo, como se define en el presente documento, en donde algunos o todos los hidrógenos se reemplazan con átomos de halógeno.
El término "hidroxi" es un término de la técnica y como se usa en el presente documento se refiere a -OH.
El término "hidroxialquilo", como se usa en el presente documento, significa que al menos un grupo hidroxi, como se define en el presente documento, está unido al resto molecular original a través de un grupo alquilo, como se define en el presente documento. Los ejemplos representativos de hidroxialquilo incluyen, pero no se limitan a, hidroximetilo, 2-hidroxietilo, 3-hidroxipropilo, 2,3-dihidroxipentilo y 2-etil-4-hidroxiheptilo.
El término "sililo", como se usa en el presente documento, incluye derivados de hidrocarbilo del grupo sililo (H3 Si-) (es decir, (hidrocarbilo)3 Si-), en donde los grupos hidrocarbilo son grupos monovalentes formados al eliminar un átomo de hidrógeno de un hidrocarburo, p. ej., etilo, fenilo. Los grupos hidrocarbilo pueden ser combinaciones de diferentes grupos que pueden variar para proporcionar una serie de grupos sililo, tales como trimetilsililo (TMS), terc-butildifenilsililo (TBDPS), terc-butildimetilsililo (TBS/TBDMS), triisopropilsililo (TIPS), y [2-(trimetilsilil)etoxi]metilo (SEM).
El término “sililoxi”, como se usa en el presente documento, significa un grupo sililo, como se define en el presente documento, unido al resto molecular original a través de un átomo de oxígeno.
Ciertos compuestos de la invención contenidos en las composiciones pueden existir en formas geométricas o estereoisoméricas particulares. Además, los compuestos de la presente invención también pueden ser ópticamente activos. La presente invención contempla todos estos compuestos, incluidos los isómeros cis- y trans, enantiómeros (R)- y (S), diastereómeros, isómeros (D), isómeros (L), las mezclas racémicas de los mismos y otras mezclas de los mismos, dentro del alcance de la invención. Pueden estar presentes átomos de carbono asimétricos adicionales en un sustituyente tal como un grupo alquilo. Todos estos isómeros, así como sus mezclas, se pretende que estén incluidos en esta invención.
Si, por ejemplo, se desea un enantiómero particular del compuesto de la presente invención, se puede preparar por síntesis asimétrica, o por derivación con un auxiliar quiral, donde la mezcla diastereomérica resultante se separa y el grupo auxiliar se escinde para proporcionar los enantiómeros deseados puros. Alternativamente, cuando la molécula contiene un grupo funcional básico, tal como amino, o un grupo funcional ácido, tal como carboxilo, se forman sales diastereoméricas con un ácido o base ópticamente activo apropiado, seguido de la resolución de los diastereómeros así formados por cristalización fraccionada o medios cromatográficos bien conocidos en la técnica, y la posterior recuperación de los enantiómeros puros.
Se entenderá que “sustitución” o “sustituido con” incluye la condición implícita de que dicha sustitución está de acuerdo con la valencia permitida del átomo sustituido y el sustituyente, y que la sustitución da como resultado un compuesto estable, p. ej., un compuesto que no experimenta espontáneamente una transformación tal como por transposición, fragmentación, descomposición, ciclación, eliminación, u otra reacción.
Está contemplado también que el término “sustituido” incluya todos los sustituyentes admisibles de compuestos orgánicos. En un aspecto amplio, los sustituyentes admisibles incluyen sustituyentes acíclicos y cíclicos, ramificados y no ramificados, carbocíclicos y heterocíclicos, aromáticos y no aromáticos de compuestos orgánicos. Los sustituyentes ilustrativos incluyen, por ejemplo, los descritos antes en el presente documento. Los sustituyentes admisibles pueden ser uno o más y pueden ser iguales o diferentes para los compuestos orgánicos adecuados. Para los fines de esta invención, los heteroátomos tales como nitrógeno pueden tener sustituyentes hidrógeno y/o cualquier sustituyente admisible de compuestos orgánicos descritos en el presente documento que satisfacen las valencias de los heteroátomos. Esta invención no pretende limitarse de ninguna manera a los sustituyentes admisibles de compuestos orgánicos.
La frase “grupo protector”, como se usa en el presente documento, significa sustituyentes temporales que protegen un grupo funcional potencialmente reactivo de transformaciones químicas no deseadas. Los ejemplos de dichos grupos protectores incluyen ésteres de ácidos carboxílicos, éteres silílicos de alcoholes y acetales y cetales de aldehídos y cetonas, respectivamente. Se ha revisado el campo de la química de grupos protectores (Greene, T.W.; Wuts, P.G.M. Protective Groups in Organic Synthesis, 2a ed.; Wiley: New York, 1991).
Para los fines de la invención, los elementos químicos se identifican de acuerdo con la tabla periódica de elementos, versión CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 67a Ed., 1986-87, cubierta interior.
Otros términos químicos en el presente documento se utilizan de acuerdo con el uso convencional en la técnica, como se ejemplifica en The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (ed. Parker, S., 1985), McGraw-Hill, San Francisco). A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que entienden normalmente los expertos en la técnica a los que pertenece esta invención.
La expresión “sal farmacéuticamente aceptable” como se usa en el presente documento incluye sales derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos que incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fosfórico, fórmico, acético, láctico, maleico, fumárico, succínico, tartárico, glicólico, salicílico, cítrico, metanosulfónico, bencenosulfónico, benzoico, malónico, trifluoroacético, tricloroacético, naftaleno-2-sulfónico y otros ácidos. Formas de sales farmacéuticamente aceptables pueden incluir formas en donde la proporción de moléculas que comprenden la sal no es 1:1. Por ejemplo, la sal puede comprender más de una molécula de ácido orgánico o inorgánico por molécula de base, tal como dos moléculas de ácido clorhídrico por molécula de compuesto de Fórmula I. Como otro ejemplo, la sal puede comprender menos de una molécula de ácido orgánico o inorgánico por molécula de base, tal como dos moléculas de compuesto de Fórmula I por molécula de ácido tartárico.
Los términos “vehículo” y “vehículo farmacéuticamente aceptable” como se usan en el presente documento se refieren a un diluyente, adyuvante, excipiente o portador con el que se administra o formula un compuesto para su administración. Ejemplos no limitantes de tales vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen líquidos, tales como agua, solución salina y aceites; y sólidos, tales como goma arábiga, gelatina, pasta de almidón, talco, queratina, sílice coloidal, urea y similares. Además, se pueden usar agentes auxiliares, estabilizantes, espesantes, lubricantes, saborizantes y colorantes. Otros ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuados se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences por E.W. Martin.
El término “tratar” como se usa en el presente documento significa impedir, detener o ralentizar la progresión de, o eliminar una enfermedad o afección en un sujeto. En una realización, “tratar” significa detener o ralentizar la progresión de, o eliminar una enfermedad o afección en un sujeto. En una realización, “tratar” significa reducir al menos una manifestación objetiva de una enfermedad o afección en un sujeto.
La expresión “cantidad efectiva” como se usa en el presente documento se refiere a una cantidad que es suficiente para producir un efecto biológico deseado.
La expresión “cantidad terapéuticamente efectiva” como se usa en el presente documento se refiere a una cantidad que es suficiente para producir un efecto terapéutico deseado.
El término “inhibir” como se usa en el presente documento significa disminuir en una cantidad o extensión objetivamente cuantificable. En varias realizaciones, “inhibir” significa disminuir en al menos 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 o 95 por ciento en comparación con el control relevante. En una realización “inhibir” significa disminuir 100 por cien, es decir, detener o eliminar.
El término “sujeto” como se usa en el presente documento se refiere a un mamífero. En diversas realizaciones, un sujeto es un ratón, rata, conejo, gato, perro, cerdo, oveja, caballo, vaca o primate no humano. En una realización, un sujeto es un ser humano.
Compuestos
La presente invención proporciona compuestos según las reivindicaciones. Estos compuestos pueden estar abarcados por la fórmula (I), o sus sales farmacéuticamente aceptables:
Figure imgf000010_0001
en donde, independientemente
Figure imgf000010_0002
Z representa OR1 o NH(OH);
R1 representa
Figure imgf000010_0003
-C(Ra)(Rb)-OC(O)-M-R3, o alquilo (C2-C6) opcionalmente sustituido con hidroxilo o heterocicloalquilo;
Ra representa H o alquilo (C1-C6);
Rb representa H o alquilo (C1-C6);
Rx representa H o alquilo (C1-C6);
M es un enlace o representa O, S, NH o N(CH3);
R2 representa H, -OH, -C(O)OR4, -C(O)SR4, -C(O)O-[C(Rc)(Rd)]n O-C(O)-L-R5, o
Figure imgf000011_0001
R6 representa H, OH, -C(O)OR4, -C(O)SR4, -C(O)O-[C(Rc)(Rd)]n O-C(O)-L-R5, o
Figure imgf000011_0002
o R2 y R6, considerados junto con los átomos a los que están unidos, forman un grupo 1,2,4-oxadiazol-5-ona opcionalmente sustituido;
L, independientemente para cada caso, es un enlace o representa O, S, NH o N(CH3);
Rc, Rd, Re y Rf representan cada uno independientemente para cada caso H o alquilo (C1-C6);
R3 representa alquilo (C1-C6), aralquilo o cicloalquilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes, cada uno seleccionado independientemente del grupo que consiste en amino, hidroxilo, heterocicloalquilo opcionalmente sustituido, -C(O)OH y -C (O)O(alquilo(C1-C6));
R4, independientemente para cada caso, representa alquilo (C1-C6), cicloalquilo, heterocicloalquilo, arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en -C(O)OH, -C(O)O(alquilo(C1-C6)), alcoxi (C1-C6), hidroxilo, oxo, heterocicloalquilo, amino, alquil(C1-C6)amino, di(alquil(C1-C6))amino y éter de sililo;
R5, independientemente para cada caso, representa alquilo (C1-C6), arilo o heteroarilo, opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste en amino, heterocicloalquilo, alcoxi (C1-C6) opcionalmente sustituido con alcoxi (C1-C6) o una cadena de poliéter; y
n representa 1 o 2;
con la condición de que al menos uno de R2 y R6 no sea H; y
con la condición de que si Z es OR1 y R1 es etilo o 2-(morfolino)etilo, entonces R4 no es hexilo ni butilo. Z puede representar OR1.
R1 puede representar
Figure imgf000011_0003
-C(Ra)(Rb)-O-C(O)-M-R3.
Ra y Rb pueden representar cada uno independientemente H o metilo.
Al menos uno de Ra y Rb puede ser H.
Al menos uno de Ra y Rb puede ser metilo.
R1 puede representar -C(Ra)(Rb)-O-C(O)-M-R3. M puede ser un enlace. Alternativamente, M puede ser O.
R3 puede representar alquilo (C1-C6), por ejemplo, R3 puede representar alquilo (C3-C5).
R3 puede representar cicloalquilo.
R3 puede representar aralquilo, opcionalmente sustituido con -NH2.
R3 puede representar alquilo (C1-C6), sustituido con -NH2 u -OH. Por ejemplo, R3 puede representar alquilo (C3-C5), sustituido con -NH2 u OH. R3 puede representar alquilo (C3-C5), sustituido con -NH2.
R1 puede representar
Figure imgf000012_0001
donde Rx representa H o metilo.
R1 puede representar alquilo (C2-C6) opcionalmente sustituido con hidroxilo.
R2 puede representar H; y R6 representa OH.
Alternativamente, R2 puede representar -C(O)OR4 o -C(O)O-[C(Rc)(Rd)]n-O-C(O)-L-R5.
Por ejemplo, R2 puede representar -C(O)OR4. R4 puede representar alquilo (C1-C6), sustituido con amino, hidroxi o alcoxi (C1-C6).
Alternativamente, R2 puede representar -C(O)O-[C(Rc)(Rd)]n-O-C(O)-L-R5 , y n es 1. Al menos uno de Rc y Rd puede ser H. Al menos uno de Rc y Rd puede ser metilo.
L puede ser un enlace.
R5 puede representar alquilo (C1-C4). Alternativamente, R5 puede representar alquilo (C1-C4), sustituido con amino.
R6 puede representar H.
R2 y R6 , considerados junto con los átomos a los que están unidos, pueden formar un grupo 1,2,4-oxadiazol-5-ona.
Puede ser que, si R1 es -CH2-O-C(O)-CH(/Pr)NH2 , entonces R2 no es -C(O)O(etilo); y si R1 es -CH2-O-C(O)-CH(/Bu)NH2 , entonces R2 no es -C(O)O(hexilo).
Composiciones Farmacéuticas
Se describen composiciones farmacéuticas, cada una de las cuales comprende uno o más compuestos de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede comprender un compuesto de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede comprender una pluralidad de compuestos de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Una composición farmacéutica puede comprender además al menos un agente farmacéuticamente activo adicional distinto de un compuesto de la invención. El al menos un agente farmacéuticamente activo adicional puede ser un agente útil en el tratamiento de una enfermedad o afección caracterizada por una actividad aberrante de la calicreína.
Las composiciones farmacéuticas se pueden preparar combinando uno o más compuestos de la invención con un vehículo farmacéuticamente aceptable y, opcionalmente, uno o más agentes farmacéuticamente activos adicionales.
Métodos de uso
La presente invención proporciona compuestos que son útiles para tratar o prevenir una enfermedad o afección caracterizada por una actividad aberrante de la calicreína. Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos de la presente invención para usar en el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).
En ciertos aspectos, la invención proporciona métodos para tratar el angioedema adquirido o el angioedema hereditario. El método incluye la etapa de administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable.
En ciertas realizaciones, el sujeto tiene angioedema adquirido. En realizaciones alternativas, el sujeto tiene angioedema hereditario.
En determinadas realizaciones, el sujeto tiene angioedema hereditario, y el angioedema hereditario es angioedema hereditario de tipo I. Alternativamente, el angioedema hereditario puede ser angioedema hereditario de tipo II. Alternativamente todavía, el angioedema hereditario puede ser angioedema hereditario de tipo III.
El angioedema adquirido (AAE) (Caldwell JR, et al. Clin Immunol Immunopathol. 1972;1:39- 52) se caracteriza de varias maneras, incluida la deficiencia adquirida del inhibidor de C1 (C1-INH), la hiperactivación de la ruta clásica del complemento humano y los síntomas de angioedema mediados por la bradiquinina liberada por la activación inapropiada del sistema de contacto de quinina. El AAE puede presentarse en dos formas, AAE tipo 1 (que normalmente se asocia con otra enfermedad) y AAE tipo II, que normalmente se asocia con una enfermedad autoinmunitaria. El AAE puede ser causado por una serie de factores, que incluyen, pero no se limitan a enfermedades autoinmunitarias (por ejemplo, la producción de anticuerpos anti-ClINH) o por una mutación adquirida en C1-INH. Además, los compuestos de la invención se pueden usar para tratar los efectos secundarios de los tratamientos con inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ACE). Los inhibidores de la ACE bloquean la principal ruta de descomposición de la bradiquinina. La inhibición de la formación de calicreína mediante el uso de los compuestos de la invención reduce la formación de bradiquinina.
En ciertos aspectos, la invención proporciona métodos para tratar una enfermedad o afección asociada con la actividad aberrante de la calicreína. El método incluye la etapa de administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, tratando o previniendo así la enfermedad o afección caracterizada por una actividad aberrante de la calicreína. Al reducir la actividad de la calicreína en el sujeto, se trata la enfermedad o afección caracterizada por la actividad aberrante de la calicreína.
Alternativamente, en ciertos aspectos, la invención proporciona un compuesto de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de una enfermedad o afección caracterizada por la actividad aberrante de la calicreína.
Como se usa en el presente documento, una “enfermedad o afección caracterizada por la actividad aberrante de la calicreína” se refiere a cualquier enfermedad o afección de las reivindicaciones en la que es deseable reducir la actividad de la calicreína. Por ejemplo, puede ser deseable reducir la actividad de la calicreína en el contexto de una activación inapropiada o hiperactivación de la calicreína.
En algunas realizaciones, la invención proporciona un método para inhibir la coagulación de la sangre, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz de un compuesto de las reivindicaciones.
Los compuestos de la invención se pueden usar para inhibir la coagulación de la sangre (particularmente mediante la inhibición del factor VIIa sin inhibir directamente la trombina). Por lo tanto, los compuestos pueden usarse para prevenir coágulos sanguíneos intravasculares o para tratamiento anticoagulante. Los ejemplos de situaciones clínicas en las que la terapia anticoagulante sería beneficiosa son bien conocidos e incluyen cirugía (tal como cirugía de reemplazo total de cadera, angioplastia coronaria transluminal y tratamiento para infarto de miocardio o angina in crescendo).
Formulaciones, vías de administración y dosificación
Los compuestos de la invención pueden formularse como composiciones farmacéuticas y administrarse a un hospedante mamífero, tal como un paciente humano, en una variedad de formas adaptadas a la vía de administración elegida, p. ej., por vía oral o parenteral, intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, tópica o subcutánea. La invención también contempla vías de administración adicionales.
Por tanto, los presentes compuestos pueden administrarse sistémicamente, p. ej., por vía oral, en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable tal como un diluyente inerte o un vehículo comestible asimilable. Pueden encerrarse en cápsulas de gelatina de cubierta dura o blanda, pueden comprimirse en comprimidos o pueden incorporarse directamente con los alimentos de la dieta del paciente. Para administración terapéutica oral, el compuesto activo puede combinarse con uno o más excipientes y usarse en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, pastillas para chupar, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas y similares. Tales composiciones y preparaciones deberían contener al menos 0.1% de compuesto activo. El porcentaje de las composiciones y preparaciones se puede variar, por supuesto, y puede estar convenientemente entre aproximadamente 2% y aproximadamente 60% del peso de una forma farmacéutica unitaria dada. La cantidad de compuesto activo en dichas composiciones terapéuticamente útiles es tal que se obtenga un nivel de dosificación efectivo.
Los comprimidos, pastillas para chupar, píldoras, cápsulas y similares pueden contener también los siguientes diluyentes y vehículos: aglutinantes tales como goma de tragacanto, goma arábiga, almidón de maíz o gelatina; excipientes tales como fosfato de dicalcio; un agente disgregante tal como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico y similares; un lubricante tal como estearato de magnesio; y un agente edulcorante tal como sacarosa, fructosa, lactosa o aspartamo o puede añadirse un agente aromatizante tal como menta piperita, aceite de gaulteria o aroma de cereza. Cuando la forma farmacéutica unitaria es una cápsula, puede contener, además de materiales del tipo anterior, un vehículo líquido, tal como un aceite vegetal o un polietilenglicol. Puede haber presentes diversos otros materiales como recubrimientos o para modificar de otra manera la forma física de la forma farmacéutica unitaria sólida. Por ejemplo, los comprimidos, pastillas o cápsulas se pueden recubrir con gelatina, cera, goma laca, azúcar y similares. Un jarabe o elixir puede contener el compuesto activo, sacarosa o fructosa como agente edulcorante, metil y propilparabenos como conservantes, un colorante y un agente aromatizante tal como aroma de cereza o naranja. Por supuesto, cualquier material usado en la preparación de cualquier forma farmacéutica unitaria debería ser farmacéuticamente aceptable y sustancialmente no tóxico en las cantidades empleadas. Además, el compuesto activo se puede incorporar en preparaciones y dispositivos de liberación sostenida.
El compuesto activo también puede administrarse por vía intravenosa o intraperitoneal por infusión o inyección. Se pueden preparar soluciones del compuesto activo o sus sales en agua o solución acuosa fisiológicamente aceptable, opcionalmente mezcladas con una tensioactivo no tóxico. También pueden prepararse dispersiones en glicerol, polietilenglicoles líquidos, triacetina y mezclas de los mismos y en aceites. En condiciones ordinarias de almacenamiento y uso, estas preparaciones contienen un conservante para evitar el crecimiento de microorganismos.
Las formas farmacéuticas adecuadas para inyección o infusión pueden incluir soluciones o dispersiones acuosas estériles o polvos estériles que comprenden el ingrediente activo, que estén adaptadas para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables o infundibles estériles, opcionalmente encapsuladas en liposomas. En todos los casos, la forma farmacéutica definitiva debería ser estéril, fluida y estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento. El portador o vehículo líquido puede ser un disolvente o un medio de dispersión líquido que comprende, por ejemplo, agua, etanol, un poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos y similares), aceites vegetales, ésteres de glicerilo no tóxicos y mezclas adecuadas de los mismos. La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante la formación de liposomas, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de las dispersiones, o mediante el uso de tensioactivos. La prevención de la acción de microorganismos se puede llevar a cabo mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal y similares. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, tampones o cloruro sódico. La absorción prolongada de las composiciones inyectables se puede llevar a cabo mediante el uso en las composiciones de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Se preparan soluciones inyectables estériles incorporando el compuesto activo en la cantidad requerida en el disolvente apropiado con diversos otros ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de esterilización por filtración. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos de preparación pueden incluir técnicas de secado al vacío y liofilización, que producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado presente en las soluciones previamente esterilizadas por filtración.
Para administración tópica, los presentes compuestos pueden aplicarse en forma pura, es decir, cuando son líquidos. Sin embargo, será generalmente deseable administrarlos a la piel en forma de composiciones o formulaciones, en combinación con un vehículo dermatológicamente aceptable que puede ser un sólido o un líquido.
Los vehículos sólidos útiles incluyen sólidos finamente divididos tales como talco, arcilla, celulosa microcristalina, sílice, alúmina y similares. Los vehículos líquidos útiles incluyen agua, alcoholes o glicoles o combinaciones de agua-alcohol/glicol en las que pueden disolverse o dispersarse los presentes compuestos en niveles efectivos, opcionalmente con la ayuda de tensioactivos no tóxicos. Pueden añadirse adyuvantes, tales como fragancias y agentes antimicrobianos adicionales, para optimizar las propiedades para un uso dado. Las composiciones líquidas resultantes pueden aplicarse desde almohadillas absorbentes, usarse para impregnar vendajes y otros apósitos o pulverizarse sobre el área afectada usando pulverizadores de tipo bomba o aerosol.
Pueden emplearse también espesantes tales como polímeros sintéticos, ácidos grasos, sales y ésteres de ácidos grasos, alcoholes grasos, celulosas modificadas o materiales minerales modificados con vehículos líquidos para formar pastas, geles, pomadas, jabones y similares que se pueden extender para aplicar directamente a la piel del usuario.
Se conocen en la técnica ejemplos de composiciones dermatológicas útiles que se pueden usar para administrar los compuestos de la invención en la piel; por ejemplo, véase Jacquet et al. (Patente de EE. UU. N° 4,608,392), Geria (Patente de EE. UU. N° 4,992,478), Smith et al. (Patente de EE. UU. N° 4,559,157) y Wortzman (Patente de EE. UU. N° 4,820,508).
Las dosis útiles de los compuestos de la invención se pueden determinar, al menos inicialmente, comparando su actividad in vitro y su actividad in vivo en modelos animales. Los métodos para la extrapolación de las dosis efectivas en ratones, y otros animales, a seres humanos son conocidos en la técnica; por ejemplo, véase la Patente de EE. UU. N° 4,938,949.
La cantidad del compuesto, o una sal activa del mismo, necesaria para usar en el tratamiento variará, no solo con el compuesto concreto o la sal seleccionada, sino también con la vía de administración, la naturaleza de la afección que se está tratando y la edad y estado del paciente y, en última instancia, será según criterio de un médico o terapeuta encargado.
En general, sin embargo, una dosis adecuada estará en el intervalo de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal del receptor por día, p. ej., de aproximadamente 3 a aproximadamente 90 mg/kg de peso corporal por día, de aproximadamente 6 a aproximadamente 75 mg por kilogramo de peso corporal por día, de aproximadamente 10 a aproximadamente 60 mg/kg de peso corporal por día, o de aproximadamente 15 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal por día.
Los compuestos de la invención se pueden formular convenientemente en forma farmacéutica unitaria; por ejemplo, que contiene de 5 a 1000 mg, de 10 a 750 mg o de 50 a 500 mg de ingrediente activo por forma farmacéutica unitaria. En una realización, la invención proporciona una composición que comprende un compuesto de la invención formulado en dicha forma farmacéutica unitaria. La dosis deseada se puede presentar convenientemente en una dosis única o en forma de dosis divididas para administrar a intervalos apropiados, por ejemplo, como dos, tres, cuatro o más subdosis al día. La subdosis en sí misma puede dividirse además en, p. ej., un número de administraciones discretas espaciadas holgadamente.
Los compuestos de la invención también se pueden administrar en combinación con otros agentes terapéuticos, por ejemplo, otros agentes que son útiles para tratar o impedir la isquemia, pérdida de sangre o lesión por reperfusión.
Otros sistemas de administración pueden incluir sistemas de administración de liberación prolongada, liberación retardada o liberación sostenida, como los que son bien conocidos en la técnica. Dichos sistemas pueden evitar las administraciones repetidas del compuesto activo, aumentando la comodidad para el sujeto y el médico. Muchos tipos de sistemas de administración de liberación están disponibles y son conocidos por los expertos en la técnica. Puede ser deseable el uso de un implante de liberación sostenida prolongada. Liberación prolongada, como se usa en el presente documento, significa que el sistema de administración o implante está construido y dispuesto para administrar niveles terapéuticos del ingrediente activo durante al menos 30 días, y preferiblemente 60 días.
En determinadas realizaciones, un compuesto de la invención se formula para administración intraocular, por ejemplo, inyección directa o inserción dentro o en asociación con un dispositivo médico intraocular.
Los compuestos de la invención se pueden formular para depositar en un dispositivo médico, que puede incluir cualquiera de una variedad de injertos, endoprótesis vasculares, incluidos injertos de endoprótesis vasculares, catéteres, globos, cestas convencionales u otro dispositivo que pueda ser desplegado o implantado permanentemente dentro de un lumen corporal. Como ejemplo particular, sería deseable tener dispositivos y métodos que puedan administrar compuestos de la invención a la región de un cuerpo que ha sido tratada mediante una técnica de intervención.
En una realización de ejemplo, un compuesto de la invención puede depositarse dentro de un dispositivo médico, tal como una endoprótesis vascular, y administrarse en el sitio de tratamiento para el tratamiento de una parte del cuerpo.
Se han utilizado endoprótesis vasculares como vehículos de administración de agentes terapéuticos (es decir, fármacos). Las endoprótesis vasculares se implantan generalmente de forma permanente en vasos coronarios o periféricos. Los diseños de endoprótesis vasculares incluyen los de la Pat. de EE. UU. N° 4,733,655 (Palmaz), Pat. de EE. UU. N° 4,800,882 (Gianturco), o Pat. de EE. UU. N° 4,886,062 (Wiktor). Dichos diseños incluyen tanto endoprótesis vasculares metálicas como poliméricas, así como endoprótesis vasculares autoexpandibles y expandibles con globo. También se pueden usar endoprótesis vasculares para administrar un fármaco en el sitio de contacto con la vasculatura, como se describe en las Pat. de EE. UU. N° 5,102,417 (Palmaz), Pat. EE. UU. N° 5,419,760 (Narciso, Jr.), Pat. de EE. UU. N° 5,429,634 (Narciso, Jr.), y en las Solicitudes de Patentes Internacionales N° WO 91/12779 (Medtronic, Inc.) y WO 90/13332 (Cedars-Sanai Medical Center), por ejemplo.
El término “depositado” significa que el compuesto se aplica como recubrimiento, es adsorbido, se pone o se incorpora de otro modo en el dispositivo mediante métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, el compuesto puede estar insertado y ser liberado desde dentro (“tipo matriz”) o rodeado por y liberado a través de (“tipo depósito”) materiales poliméricos que recubren o extienden el dispositivo médico. En el último ejemplo, el compuesto se puede atrapar dentro de los materiales poliméricos o acoplar a los materiales poliméricos usando una o más de las técnicas para generar tales materiales conocidas en la técnica. En otras formulaciones, el compuesto puede unirse a la superficie del dispositivo médico sin necesidad de un recubrimiento, por ejemplo mediante uniones desprendibles, y liberarse con el tiempo o puede eliminarse mediante procedimientos mecánicos o químicos activos. En otras formulaciones, el compuesto puede estar en una forma permanentemente inmovilizada que presenta el compuesto en el sitio de implante.
En determinadas realizaciones, el compuesto se puede incorporar con composiciones de polímero durante la formación de recubrimientos biocompatibles para dispositivos médicos, tales como endoprótesis vasculares. Los recubrimientos producidos a partir de estos componentes son típicamente homogéneos y son útiles para recubrir varios dispositivos diseñados para implantar.
El polímero puede ser un polímero bioestable o bioabsorbible dependiendo de la velocidad de liberación deseada o el grado deseado de estabilidad del polímero, pero con frecuencia se prefiere un polímero bioabsorbible para esta realización ya que, a diferencia de un polímero bioestable, no estará presente mucho después de la implantación para causar una respuesta local crónica y adversa. Los polímeros bioabsorbibles que podrían usarse incluyen, pero no se limitan a, poli(ácido L-láctico), policaprolactona, poliglicólido (PGA), poli(lactida-co-glicólido) (PLLA/PGA), poli(hidroxibutirato), poli(hidroxibutirato-co-valerato), polidioxanona, poliortoéster, polianhídrido, poli(ácido glicólico), poli(ácido D-láctico), poli(ácido L-láctico), poli(ácido D, L-láctico), poli(D, L-lactida) (PLA), poli(L-lactida) (PLLA), poli(ácido glicólico-co-carbonato de trimetileno) (PGA/PTMC), poli(óxido de etileno) (PEO), polidioxanona (PDS), polifosfoéster, polifosfoéster uretano, poli(aminoácidos), cianoacrilatos, poli(carbonato de trimetileno), poli(iminocarbonato), copoli(éter-ésteres) (p. ej., PEO/PLA), poli(oxalatos de alquileno), polifosfacenos y biomoléculas tales como fibrina, fibrinógeno, celulosa, almidón, colágeno y ácido hialurónico, poli(épsilon-caprolatona), poli(ácido hidroxibutírico), poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos, copolímeros de bloques de hidrogeles reticulados o anfipáticos y otros polímeros bioabsorbibles adecuados conocidos en la técnica. Además, podrían usarse polímeros bioestables con una respuesta tisular crónica relativamente baja, tales como poliuretanos, siliconas y poliésteres, y también podrían usarse otros polímeros si se pueden disolver y curar o polimerizar en el dispositivo médico, tales como poliolefinas, copolímeros de poliisobutileno y etileno-alfaolefina; polímeros y copolímeros acrílicos, polímeros y copolímeros de haluro de vinilo, tales como poli(cloruro de vinilo); polivinilpirrolidona; poli(éteres de vinilo), tales como poli(vinilmetiléter); poli(haluros de vinilideno), tales como poli(fluoruro de vinilideno) y poli(cloruro de vinilideno); poliacrilonitrilo, polivinilcetonas; poli(vinilos aromáticos), tales como poliestireno, poli(ésteres de vinilo), tales como poli(acetato de vinilo); copolímeros de monómeros de vinilo entre sí y olefinas, tales como copolímeros de etileno-metacrilato de metilo, copolímeros de acrilonitrilo-estireno, resinas ABS y copolímeros de etileno-acetato de vinilo; copolímero de pirano; polihidroxipropil-metacrilamida-fenol; polihidroxietil-aspartamida-fenol; poli(óxido de etileno)-polilisina sustituida con restos de palmitoilo; poliamidas, tales como Nilon 66 y policaprolactama; resinas alquídicas, policarbonatos; polioximetilenos; poliimidas; poliéteres; resinas epoxídicas, poliuretanos; rayón; rayón-triacetato; celulosa, acetato de celulosa, butirato de celulosa; butirato de acetato de celulosa; celofán; nitrato de celulosa; propionato de celulosa; éteres de celulosa; y carboximetilcelulosa.
Los polímeros y las matrices de polímeros semipermeables se pueden formar en artículos conformados, tales como válvulas, endoprótesis vasculares, tubos, prótesis y similares.
En determinadas realizaciones de la invención, el compuesto de la invención se acopla a un polímero o matriz de polímero semipermeable que se forma como una endoprótesis vascular o dispositivo de injerto de endoprótesis vascular.
Normalmente, los polímeros se aplican en la superficie de un dispositivo implantable mediante recubrimiento por centrifugación, inmersión o pulverización. Para este propósito, se pueden utilizar métodos adicionales conocidos en la técnica. Los métodos de pulverización incluyen procedimientos tradicionales así como técnicas de microdeposición con un dispensador tipo inyección de tinta. Además, se puede depositar un polímero sobre un dispositivo implantable utilizando fotopatrones para poner el polímero solo en partes específicas del dispositivo. Este recubrimiento del dispositivo proporciona una capa uniforme alrededor del dispositivo que permite una mejor difusión de varios analitos a través del recubrimiento del dispositivo.
En determinadas realizaciones de la invención, el compuesto se formula para su liberación desde el recubrimiento de polímero al entorno en el que se coloca el dispositivo médico. Preferiblemente, el compuesto se libera de manera controlada durante un período de tiempo prolongado (p. ej., meses) usando al menos una de varias técnicas bien conocidas que implican vehículos o capas de polímero para controlar la elución. Algunas de estas técnicas se describen en la solicitud de patente de EE. UU. 2004/0243225A1.
Además, como se describe, por ejemplo, en la patente de EE.UU. N° 6,770,729, los reactivos y las condiciones de reacción de las composiciones poliméricas pueden manipularse de modo que se pueda controlar la liberación del compuesto del recubrimiento polimérico. Por ejemplo, el coeficiente de difusión del uno o más recubrimientos poliméricos se puede modular para controlar la liberación del compuesto del recubrimiento polimérico. En una variación de este tema, el coeficiente de difusión del uno o más recubrimientos poliméricos se puede controlar para modular la capacidad de un analito que está presente en el entorno en el que se coloca el dispositivo médico (p. ej., un analito que facilita la descomposición o la hidrólisis de alguna porción del polímero) para acceder a uno o más componentes dentro de la composición polimérica (y por ejemplo, modular así la liberación del compuesto del recubrimiento polimérico). Otra realización más de la invención incluye un dispositivo que tiene una pluralidad de recubrimientos poliméricos, cada uno de los cuales tiene una pluralidad de coeficientes de difusión. En tales realizaciones de la invención, la liberación del compuesto del recubrimiento polimérico puede modularse mediante la pluralidad de recubrimientos poliméricos.
En otra realización más de la invención, la liberación del compuesto del recubrimiento polimérico se controla modulando una o más de las propiedades de la composición polimérica, tales como la presencia de uno o más compuestos endógenos o exógenos, o, alternativamente, el pH de la composición polimérica. Por ejemplo, ciertas composiciones poliméricas pueden diseñarse para liberar un compuesto en respuesta a una disminución del pH de la composición polimérica.
Kits
Un compuesto de la invención, o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, se puede proporcionar en un kit con al menos otro agente terapéutico, material de envasado e instrucciones para administrar el compuesto de la invención o su sal farmacéuticamente aceptable y el otro agente o agentes terapéuticos a un mamífero para tratar o prevenir una enfermedad o afección caracterizada por la actividad aberrante de la calicreína El mamífero puede ser un ser humano.
Un experto en la técnica relevante entenderá que otras modificaciones y adaptaciones adecuadas a las composiciones y métodos descritos en el presente documento son fácilmente evidentes a partir de la descripción de la invención contenida en el presente documento en vista de la información conocida por el experto en la técnica, y pueden hacerse sin apartarse del alcance de la invención o cualquier realización de la misma.
Ejemplos
Habiendo descrito ahora la presente invención en detalle, la misma se entenderá más claramente por referencia a los siguientes ejemplos, que se incluyen en la presente con fines de ilustración solamente y no pretender ser limitantes de la invención.
Los compuestos de la invención se definen en las reivindicaciones. En los ejemplos que siguen, sólo los compuestos que se definen en las reivindicaciones entran dentro del alcance de la invención. Cualquier compuesto ejemplificado a continuación que quede fuera del alcance de las reivindicaciones no forma parte de la presente invención, pero se retiene para la ejemplificación comparativa y sintética.
Esquema 1
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Preparación de metanosulfonato del 3-[2-(4-carbamimidoilfenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil]-6-(ciclopropilmetilcarbamoil)piridina-2-carboxilato de metilo (1o)
Etapa-1: Preparación del 6-bromobenzo[1,3]dioxol-5-carbaldehído (1b):
Se añadió lentamente una solución de bromo (33.0 kg, 206.49 mol) en ácido acético (27.5 l) a una solución de piperonal (1a) (29.9 kg, 199.16 mol) en ácido acético (105 l) a temperatura ambiente durante un período de 50 min y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 14.2 h. Se añadió lentamente a la mezcla de reacción una solución adicional de bromo (33 kg, 206.49 mol) en ácido acético (27.5 l) durante un período de 2 h y la mezcla de reacción se agitó durante 22 h. La mezcla de reacción se inactivó por adición de agua helada (500 l) con agitación a lo largo de un período de 6 h y se continuó agitando durante 1.25 h adicionales. La mezcla se dejó sedimentar y la mayor parte del líquido sobrenadante se decantó a un contenedor de residuos usando presión de nitrógeno. Se añadió agua (600 l) al sólido, se agitó, se dejó sedimentar la mezcla y luego se decantó la mayor parte del líquido sobrenadante a un contenedor de residuos usando presión de nitrógeno. Se añadió agua (100 l) a la mezcla decantada, se agitó durante 15 min y el sólido obtenido se recogió por filtración utilizando una centrífuga. El sólido se lavó con agua (2 x 100 l) y se secó al aire en un secador de bandejas durante 3.75 h para dar el producto bruto 1b (52 kg). El producto bruto (51.2 kg) se agitó en n-hexano (178 l) durante 3 h, se recogió por filtración, se lavó con n-hexano (25 l) y se secó para proporcionar el 6-bromobenzo[1,3]dioxol-5-carbaldehído (1b) (40.11 kg, 87.9%) como un sólido marrón claro. MP: 109-112°C.
1H NMR (300 MHz, CDCla) 810.21 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.10 (s, 2H); 1H NMR (DMSO-de): 810.06 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 6.20 (d, J =12.3 Hz, 2H).
Etapa 2: Preparación del 2-bromo-5-hidroxi-4-metoxi-benzaldehído (1c)
Una solución de ferc-butóxido de potasio (10.7 kg, 95.36 mol) en DMSO (49 l) se agitó a 50°C durante 30 min. Se añadió lentamente metanol (49 l) a lo largo de un período de 4.25 h y se agitó a 50°C durante 30 min. Se añadió 6-bromobenzo[1,3]dioxol-5-carbaldehído (1b) (9.91 kg, 43.27 mol) a la mezcla de reacción en pequeñas porciones a lo largo de un período de 45 min y se agitó a 50°C durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se dividió en dos partes iguales Cada parte se inactivó con agua (50.9 l) y se hizo básica con solución acuosa de NaOH al 50% (2.4 l). Cada parte se extrajo con MTBE (4 * 36 l) para eliminar las impurezas. La capa acuosa se acidificó con HCl conc. a pH ~ 3 para obtener el producto como un sólido amarillo. El sólido se recogió por filtración usando una centrífuga, se lavó con agua (2 * 35 l) y se secó al aire para proporcionar el 2-bromo-5-hidroxi-4-metoxi-benzaldehído (1c) (4.37 kg, 40.7%, contiene 7% de agua); Mp: 100-102°C; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de): 510.00 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 3.93 (s, 3H).
Etapa-3: Preparación del 5-hidroxi-4-metoxi-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)benzaldehído (1d)
El 2-bromo-5-hidroxi-4-metoxi-benzaldehído (1c) [1.3 kg (93%, contenido de agua de 7%), 5.25 mol] se disolvió en tolueno (13 l) en un matraz de reacción equipado con un aparato Dean Stark. La solución se calentó a temperatura de reflujo con agitación para separar por destilación aproximadamente el 25% del tolueno junto con agua (90 mL). La solución se enfrió a 90°C, luego se añadieron bis(pinacolato)diboro (1.5 kg, 5.82 mol), KOAc (772.6 g, 7.87 mol) y Pd(PPh3)4 (24.3 g, 0.02 mol) y la mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 10 h. Después de confirmar la finalización de la reacción por TLC (fase móvil: 100% de DCM), la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se mantuvo en reposo durante la noche. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y la torta de Celite se lavó con tolueno (4 l). El filtrado de este lote se mezcló con el filtrado de otro lote (tamaño de lote 1.3 kg obtenido de una reacción idéntica). El filtrado mezclado se lavó con agua (17.5 l), salmuera (17.5 l), se secó sobre Na2SO4, se filtró y la solución se pasó a través de una almohadilla de gel de sílice (2 kg, tamaño de malla 230-400). La almohadilla de gel de sílice se lavó con tolueno. El filtrado y el lavado combinados se concentraron a presión reducida y el producto bruto residual se agitó con n-hexano (23 l) durante 1 h para obtener un producto sólido. El sólido se recogió por filtración, se lavó con n-hexano (5 l) y se secó para dar el 5-hidroxi-4-metoxi-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)benzaldehído (1d) (2.47 kg, 84.6%). 1H NMR(300 MHz, CDCla) 5 10.54 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 5.89 (s, 1H), 4.01(s, 3H), 1.37 (s, 12H); 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 5 10.35 (s, 1H), 9.95 (s, 1H), 7.33 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.33 (s, 12H); MS (ES+) 301.1 (M+Na); 579.1 (2M+Na); Análisis calculado para C14H19BO5 : C, 60.46; H, 6.89; Encontrado: C, 60.60; H, 6.87
Etapa 4: Preparación de la 3-bromo-2,6-dimetilpiridina (1f)
Se añadió 2,6-lutidina (1e) (115 kg, 1073.3 mol) a óleum previamente enfriado (20-23%, 1015 kg, 2276.7 mol) a 0°C a lo largo de un periodo de 4.5 h (la temperatura alcanzó 14°C durante la adición). A continuación, se añadió bromo (88.18 kg, 1103.6 mol) a 5-10°C durante un período de 1 h. La mezcla de reacción se calentó lentamente a 150°C durante un período de 12 h. El análisis de TLC indicó aproximadamente 40-50% de conversión en el producto y la formación de un subproducto dímero (5%). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y luego se añadió lentamente bromo adicional (88.18 kg, 1103.6 mol). La mezcla de reacción se calentó lentamente para mantener una temperatura de 65-75°C durante un período de 15 h. El análisis de TLC indicó 65-70% de conversión en el producto y la formación de 5% de subproducto dímero. La mezcla de reacción se inactivó por adición de agua (500 l) mientras se mantenía la temperatura de reacción por debajo de 20°C. La mezcla se hizo básica con NaOH 6.6 M (3800 l) mientras se mantenía la temperatura a <40°C. Se añadió EtOAc (220 l) y la mezcla se agitó durante 1 h y luego se dejó sedimentar durante un período de 2 h. Las capas se separaron y la capa acuosa se trató con NaOH (10 kg) en agua (10 l) y se extrajo con EtOAc (160 l). Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera (100 l), se secaron sobre Na2SO4 (50.0 kg), se filtraron y el disolvente se evaporó a presión atmosférica. El residuo se destiló al vacío y el producto deseado la 3-bromo-2,6-dimetilpiridina (1f) se recogió a 58-60°C, 2 mm/Hg (98.45 kg, 49.2%) como un líquido incoloro.
Etapa 5: Preparación del ácido 3-bromopiridina-2,6-dicarboxílico (1g)
A una solución agitada de 3-bromo-2,6-dimetilpiridina (1f) (98 kg, 5326.05 mol) en agua (1310 l) se añadió KMnO4 (225 kg, 1423.6 mol) en 5 porciones iguales en intervalos de 1 h a 70°C. Después de agitar durante 1 h a 70°C, se añadió KMnO4 adicional (225 kg, 1423.6 mol) en 5 porciones iguales en intervalos de 1 h a 90°C. La mezcla de reacción se agitó durante 12 h a 90°C. La suspensión se filtró en caliente a través de Celite para obtener una solución transparente. El disolvente se separó por destilación para eliminar aproximadamente 30% del volumen total. La solución concentrada restante se enfrió a 0°C y se acidificó (a pH 3-4) por adición de HCl conc. (120 l). El precipitado blanco obtenido se recogió por filtración y se secó a 70°C para proporcionar el ácido 3-bromopiridina-2,6-dicarboxílico (1g) como un sólido blanco (109 kg, 84%).
Etapa 6: Preparación del 3-bromopiridina-2,6-dicarboxilato de dimetilo (1h)
A una solución agitada de ácido 3-bromopiridina-2,6-dicarboxílico (1g) (20.0 kg, 81.29 mol) en metanol (100 l) se le añadió H2SO4 conc. (4.4 l) durante un período de 30 min. La mezcla de reacción se calentó a 65°C y se mantuvo a esa temperatura durante 5 h (la reacción se vigiló por análisis de TLC para determinar la finalización de la reacción). La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se hizo básica por adición cuidadosa de solución acuosa de NaHCO3 (preparada a partir de 10 kg de NaHCO3 en 120 l de agua) y se diluyó adicionalmente con agua (120 l). El sólido blanco obtenido se recogió por filtración, se lavó con abundante agua y luego se secó en estufa a 40°C para obtener el 3-bromopiridina-2,6-dicarboxilato de dimetilo (1h) (9.2 kg, 41.3%) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 58.47 (d, J = 8.4, 1H), 8.08 (dd, J = 4.5, 8.4, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.91 (s, 3H); MS (ES+) 570.6 (2M+Na); Análisis calculado para CgHaBrNO4: C 39.44; H, 2.94; Br, 29.15 N, 5.11; Encontrado: C, 39.52; H, 2.92; Br, 29.28; N, 5.03.
Etapa 7: Preparación del 3-bromo-6-(cidopropilmetilcarbamoil)piridina-2-carboxilato de metilo (1i)
A una solución agitada de 3-bromopiridina-2,6-dicarboxilato de dimetilo (1 h) (9.08 kg, 33.13 mol) en ferc-butanol (45.4 l) se añadió a temperatura ambiente ciclopropilmetanamina (3.0 kg, 42.32 mol). La mezcla de reacción se calentó a 65°C durante 17 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se añadió lentamente HCI conc. (1.1 l; cantidad calculada basada en 0.25 eq. de ciclopropilmetanamina utilizada en la reacción) y la mezcla se agitó durante 15 min. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida para obtener el producto bruto (~11.8 kg). El producto bruto se disolvió en /-PrOH caliente (20 l) y se filtró a través de una almohadilla de Celite. El filtrado se enfrió con agitación a 10°C para obtener un precipitado blanco.
El sólido obtenido se recogió por filtración, se lavó con n-heptano (6.0 l) y se secó para proporcionar el 3-bromo-6-(ciclopropilmetilcarbamoil)piridina-2-carboxilato de metilo puro (1i) (2.28 kg, 22.0%, pureza por HPLC: 99.12%). El filtrado se enfrió a 10°C y se agitó para dar una segunda cosecha del compuesto (1i). El producto se recogió por filtración, se lavó con n-heptano (3.0 l) y se secó para dar el compuesto (1i) (988 g, 9.5%) (pureza por HPLC: 98.9%). El filtrado se concentró a presión reducida para separar por destilación aproximadamente 15 l de /'-PrOH. El filtrado concentrado se enfrió a 6°C, pero no se formó ningún producto. El disolvente se evaporó por completo para proporcionar 7.3 kg de producto bruto. El producto bruto se puede purificar por cromatografía en columna de gel de sílice utilizando terc-butanol y hexanos. Se preparó una muestra analítica mediante la purificación de 3 g de residuo bruto por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 80 g, eluyendo con (acetato de etilo en metanol 9:1) en hexano 0-100] para proporcionar el 3-bromo-6-(ciclopropilmetilcarbamoil)piridina-2-carboxilato de metilo (1i) como un sólido blanco. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 88.83 (t, J = 5.9, 1H), 8.47 - 8.41 (m, 1H), 8.06 (d, J = 8.4, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.16 (t, J = 6.5, 2H), 1.14 - 0.99 (m, 1H), 0.42 (m, 2H), 0.30 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+) 337.0 (M+Na), 650.8 (2M+Na); Análisis calculado para C ^ a B r^ O s : C, 46.03; H, 4.18; N, 8.95; Br, 25.52; Encontrado: C, 46.15; H, 4.17; N, 8.72; Br, 25.26; la elución adicional dio la diamida 3-bromo-N2,N6-bis(ciclopropilmetil)piridina-2,6-dicarboxamida como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 89.05 - 8.88 (m, 2H), 8.35 (d, J = 8.3, 1H), 7.98 (d, J = 8.3, 1H), 3.20 (t, J = 6.3, 4H), 1.16 - 0.96 (m, 2H), 0.52 - 0.36 (m, 4H), 0.34 - 0.19 (m, 4H); MS (ES+) 354.0 (M+1), 375.9 (M+Na), 727.4 (2M+Na); (ES-) 703.1 (2M-1); Análisis calculado para C15H1sBrN3O20.25H2O: C, 50.50; H, 5.23; N, 11.78; Encontrado: C, 50.61; H, 5.03; N, 11.57.
Etapa 8: Preparación de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-4-hidroxi-5-metoxifenil)picolinato de metilo (1j)
Se cargó THF (37,5 l) en un reactor de 100 l seguido de 3-bromo-6-(ciclopropilmetil-carbamoil)piridina-2-carboxilato de etilo (1i) (2.5 kg, 7.98 mol) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se desgasificó dos veces aplicando vacío y nitrógeno alternativamente. Se añadió el 5-hidroxi-4-metoxi-2-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)benzaldehído (1d) (2.88 kg, 10.36 mol), seguido de la adición de Pph3 (53.13 g, 0.20 mol), PdCl2(PPh3)2 (120.4 g, 0.17 mol) y una solución de Na2CO3 (2.12 kg, 20.00 mol) en agua desmineralizada (10.0 l) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se desgasificó de nuevo dos veces aplicando vacío y nitrógeno alternativamente. La mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 6.5 h, se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de una almohadilla de Celite. Se añadió agua (75 l) al filtrado y el producto se extrajo con acetato de etilo (75 l). La capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (2 x 60 l). Los extractos de acetato de etilo combinados se dividieron en dos porciones iguales y cada porción se lavó con salmuera (37 l), se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-4-hidroxi-5-metoxifenil)picolinato de metilo (1j) como un material viscoso rojizo (~4.5 Kg) que se utilizó como tal para la siguiente etapa sin más purificación. Se preparó una muestra analítica mediante la purificación de una muestra pequeña por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo en hexano al 0-100%) para proporcionar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-4-hidroxi-5-metoxifenil)picolinato de metilo (1j) como un sólido blanquecino; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 89.89 (s, 1H), 9.52 (s, 1H), 8.79 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.90 (s, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.22 (m, 2H), 1.16 -I . 02 (m, 1H), 0.49 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 791.0 (2M+Na), (ES-) 382.7 (M-1), 767.3 (2M-1); Análisis calculado para C20H20N2O6.0.25H2O: C, 61.77; H, 5.31; N, 7.20; Encontrado: C, 61.54; H, 5.13; N, 7.05.
Etapa 9: Preparación de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)fenil)-picolinato de metilo (1k)
A una solución de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-4-hidroxi-5-metoxifenil)picolinato de metilo (1j) (2.11 kg, calculado en aproximadamente 3.83 mol de la etapa 8) en diclorometano (16.0 l) y piridina (1.4 l, 17.4 mol) enfriada a -10°C y mantenida a esa temperatura durante 1 h, se añadió gota a gota una solución de anhídrido tríflico (980.0 mL, 5.8 mol) en diclorometano (6.0 l) a lo largo de un período de 3 h a -10°C. La mezcla de reacción se agitó a -5°C durante 1.3 h, se inactivó con solución acuosa saturada de NaHCO3 (10.4 l) y se agitó durante 30 min. La capa orgánica se separó, se lavó sucesivamente con solución acuosa saturada de NaHCO3 (10.4 l), HCl 1 N (2 x 16.6 l), agua (13.2 l), salmuera (13.2 l), se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida para dar el producto bruto. El producto bruto se agitó con acetato de etilo al 15% en n-hexano (7.0 l) durante 1 h. El sólido obtenido se recogió por filtración, se lavó con acetato de etilo en nhexano al 15% (3.0 l). El sólido se agitó de nuevo con acetato de etilo en n-hexano al 15% (7.0 l) durante 1 h, se recogió por filtración y se lavó con acetato de etilo en n-hexano al 15% (3.0 l). El sólido se agitó de nuevo con acetato de etilo en n-hexano al 15% (8.0 l) durante 1 h, se recogió por filtración, se lavó con acetato de etilo en n-hexano al 15% (3.0 l). El sólido se secó para proporcionar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)fenil)picolinato de metilo (1k) como un sólido marrón claro (1.7 kg, 86% de rendimiento, para las etapas combinadas 8 y 9); 1H NMR (300 MHz, DMSO-de): 89.64 (s, 1H), 8.78 (t, J = 6.1, 1H), 8.29 (d, J = 8.0, 1H), 8.16 (d, J = 8.0, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.22 (m, 2H), 1.11 (m, 1H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.28 (m, 2H); MS (ES+) 538.9 (M+Na).
Etapa-10: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de metilo (11)
Una solución de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-(((trifluorometil)sulfonil)oxi)fenil)picolinato de metilo (1k) (1.7 kg, 3.29 mol) en DME (15 l) se cargó en un reactor de 50 l en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se desgasificó dos veces aplicando vacío y nitrógeno alternativamente. Luego se añadió trifluoro(vinil)borato de potasio (551.2 g, 4. 11 mol), PdCh(PPh3)2 (115.52 g, 0.16 mol), KHCO3 (659.14 g, 6.58 mol) y agua desmineralizada (1.7 l) en atmósfera de N2. La mezcla de reacción se desgasificó aplicando vacío y nitrógeno alternativamente. La mezcla de reacción se calentó a temperatura de reflujo durante 5 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y después se filtró a través de una almohadilla de Celite. Se añadió agua desmineralizada (16.7 l) al filtrado seguido de acetato de etilo (17.6 l). La mezcla se agitó durante 20 min y luego se separó la capa orgánica. La capa acuosa se extrajo de nuevo con acetato de etilo (2 x 13.5 l). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera (13.5 l), se secaron sobre Na2SO4 y se filtraron. El disolvente se evaporó a presión reducida para dar el producto bruto (1.82 kg). El producto bruto se purificó por cromatografía en columna junto con el producto bruto (1.08 kg) (obtenido de un tamaño de lote de 1.0 kg de 1 k). El producto bruto total 1k cargado para la columna fue de 2.9 kg, se usó gel de sílice (3.0 kg, tamaño de malla 230-400) para la suspensión y se usó gel de sílice (32.4 kg, tamaño de malla 230-400) en la columna, eluyendo con acetato de etilo en n-hexano al 25%. Se recogieron dos fracciones.
1. Fracciones que contienen producto puro 11 (704.6 g, 34%); 1H NMR (300 MHz, CDCb): 8 (ppm) 9.64 (s, 1H), 8.35 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 8.06-8.03 (m, 2H), 7.78(d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.02-6.92 (m, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.86 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.35-3.29 (m, 2H),1.08-1.03 (m, 1H), 0.55­ 0.49 (m, 2H), 0.29-0.24(m, 2H). 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 89.68 (s, 1H), 8.77 (t, J= 6.1, 1H), 8.35 - 8.21 (m, 1H), 8.16 - 8.01 (m, 2H), 7.14 - 6.87 (m, 2H), 6.01 (dd, J = 1.2, 17.8, 1H), 5.45 (dd, J = 1.1, 11.3, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 1.21 - 1.01 (m, 1H), 0.51 - 0.40 (m, 2H), 0.34 - 0.20 (m, 2H). MS (ES+) 417.0 (M+Na); Análisis calculado para C22H22N2O5 : C, 66.99; H, 5.62; N, 7.10; Encontrado: C, 66.75; H, 5.52; N, 7.06.
2. Fracciones que contienen el producto 11 con una impureza inferior muy ligera (1012,8 g, 49%).
Etapa-11: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(metoxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (1m)
A una solución agitada de 6-((ciclopropilmetil)carbamoyl)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de metilo (11) (1.57 kg, 3.80 mol) en acetonitrilo (15.4 l) se añadió alcohol terc-butílico (22.2 l), agua desmineralizada (3.2 l) y dihidrogenofosfato de sodio monohidrato (323.74 g, 2.346 mol). La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se añadió 2-metil-2-buteno (5.3 l, 50.0 mol) y se agitó a 0°C durante 30 min. Se añadió una solución de clorito de sodio al 80% (1.36 kg, 12.0 mol) en agua desmineralizada (5.2 l) a la mezcla de reacción a lo largo de un período de 2.5 h a 0°C [la temperatura aumenta a 7°C durante la adición]. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 h, se diluyó con agua (40 l) y acetato de etilo (24 l). Después de agitar la mezcla, se dejó reposar y se separó la capa orgánica. La capa acuosa se volvió a extraer con acetato de etilo (2 x 20 l), luego se acidificó con ácido acético acuoso al 5.9% (2 l) y se extrajo una vez con acetato de etilo (10 l). Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con agua (2 * 20 l), una solución de ácido acético (125 mL) en agua (20.0 l), salmuera (2 * 20 l), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron en presión reducida (temperatura del vapor por debajo de 40°C). El residuo obtenido se disolvió en acetona (7 l) (el residuo no se disolvió completamente). La solución se vertió lentamente en un reactor que contenía n-hexano agitado (70.0 l) para precipitar el producto sólido y la mezcla se agitó durante 2 h. El sólido obtenido se recogió por filtración, se lavó con acetona en n-hexano al 10% (6,3 l), n-hexano (6.3 l), se secó para proporcionar el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(metoxicarbonilo)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (1m) como un sólido blanquecino (1.29 kg, rendimiento: 79.0%). 1H NMR (300 MHz, DMSO-de): 8 (ppm) 12.50 (brs, 1H), 8.69(t, J= 6.0 Hz, 1H, NH), 8.20 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.95 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.97 (dd, J= 18.0, 11.3 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.92 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 5.38 (d, J= 11.1 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.27-3.17 (m, 2H), 1.15-1.05 (m, 1H), 0.48-0.40 (m, 2H), 0.31-0.24 (m, 2H); MS (ES+) 433.26, (M+Na); (ES-) 409.28 (M-1).
Etapa-12: Preparación de metanosulfonato del 3-[2-(4-carbamimidoilfenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil]-6(cidopropilmetilcarbamoil)piridina-2-carboxilato de metilo (1o) Se añadieron secuencialmente piridina (231.6 mL, 2.87 mol) y EDCI (399.3 g, 2.08 mol) a una solución enfriada (0°C) de ácido 2-(6-((cidopropilmetil)carbamoil)-2-(metoxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (1m) (570 g, 1.39 mol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (346.8 g, 1.67 mol) en i-PrOH (5.7 l). Se dejó que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. El análisis por TLC indicó una reacción incompleta. Se añadió EDCI adicional (133.1 g, 0.69 mol) y la mezcla de reacción se agitó durante 11.5 h. La reacción aún estaba incompleta como indicaba el análisis por TLC, se añadió EDCI adicional (26.6 g, 0.14 mol) y la mezcla de reacción se agitó durante 7.5 h. El análisis por TLC indicaba que quedaban cantidades en trazas de material de partida sin reaccionar. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se añadió una solución de ácido metanosulfónico (MSA) (378.8 mL, 5.83 mol) en MeOH (2.8 l) a la mezcla enfriada. Se dejó que la mezcla de reacción se calentara hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. El producto se recogió por filtración, se lavó con una mezcla de /'-PrOH y MeOH (4 : 1, 2.8 l). La torta húmeda se suspendió en una mezcla de i-PrOH y MeOH (2:1, 8.5 l) durante 1 h y el producto se recogió por filtración y se lavó con una mezcla de i-PrOH y MeOH (4:1,2.8 l). El producto se secó en un horno de vacío a 45°C para proporcionar el metanosulfonato del 3-[2-(4-carbamimidoilfenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil]-6-(ciclopropilmetilcarbamoil)piridina-2-carboxilato de metilo (1o) como un sólido de color rosa (814 g, 94%). 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 810.71 (s, 1H), 9.16 (s, 2H), 8.80 (s, 2H), 8.68 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.84 -7.72 (m, 4H), 7.12 - 6.97 (m, 2H), 6.04 (dd, J = 17.8, 1.3 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.25 - 3.16 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.10 - 1.01 (m, 1H), 0.48 - 0.37 (m, 2H), 0.30 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 528.0 (M+1); Análisis calculado para C29H29N5O5.CH3SO3H.2 H2O. C, 54.62; H, 5.65; N, 10.62; S, 4.86; Encontrado: C, 54.95; H, 5.55; N, 10.61; S, 4.87.
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Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-morfolinoetilo (2d)
Etapa -1: Preparación del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a)
A una solución de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de metilo (11) (4.37 g, 11.08 mmol) en t Hf (20 mL) se añadió NaOH acuoso 1 N (13.85 mL, 13.85 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla de reacción se concentró al vacío para eliminar el exceso de THF y metanol. La capa acuosa separada se acidificó utilizando HCl 2.5 N (pH 4.0). El sólido obtenido se diluyó con agua (10 mL), se disolvió en acetato de etilo (50 mL) y la capa acuosa se separó. Se extrajo la capa acuosa con acetato de etilo (50 mL). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera y se secaron al vacío para proporcionar el ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (3.51 g, 83% de rendimiento) como un sólido amarillo pálido; 1 H Nm R (300 MHz, DMSO) 813.07 (bs, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.28 (t, J= 6.0, 1H), 8.39 - 8.22 (m, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.04 (d, J= 8.0, 1H), 7.11 - 6.92 (m, 2H), 6.08 - 5.92 (m, 1H), 5.43 (d, J = 12.3, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.27 (m, 2H), 1.09 (m, 1H), 0.59 - 0.41 (m, 2H), 0.38 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 381.1 (M+1), (ES-) 378.9 (M-1); Análisis calculado para: C21 H20 ClN2 O50.5HCl 0.25H2 O: C, 62.57; H, 5.25; N, 6.95; Encontrado: C, 62.86; H, 5.11; N, 6.84.
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-morfolinoetilo (2b)
A una solución de ácido 6-(cidopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (1 g, 2.63 mmol) en DMF (20 mL) se añadió carbonato de cesio (1.713 g, 5.26 mmol) e hidrocloruro de 4-(2-doroetil)morfolina (0.611 g, 3.29 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 72 horas. La mezcla de reacción se inactivó con ácido acético (1.5 mL) y se neutralizó con solución saturada de NaHCO3. La mezcla de reacción se diluyó con agua (20 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3 X 40 mL). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron, se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 2 4 g, eluyendo con CMA80/CHCl3 al 0-100%, para proporcionar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-morfolinoetilo (2b) (0.95 g, 73% de rendimiento) como un jarabe amarillo claro; 1 H NMR (300 MHz, DMSO) 89.68 (s, 1H), 8.71 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.16 - 8.05 (m, 2H), 7.00 (q, J = 11.6 Hz, 2H), 6.00 (dd, J = 17.8, 1.3 Hz, 1H), 5.45 (dd, J = 11.3, 1.2 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.48 - 3.41 (m, 4H), 3.24 (dd, J = 11.1, 6.6 Hz, 2H), 2.28 - 2.12 (m, 6H), 1.17 - 1.00 (m, 1H), 0.54 - 0.38 (m, 2H), 0.35 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 493.98 (M+1), (ES­ ) 527.97 (M+Cl).
Etapa-3: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-morfolinoetoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (2c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-morfolinoetilo (2b) (0.45 g, 0.912 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-20%) el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-morfolinoetoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (2c) (0.35 g, 75%) como un sólido blanco. 1 H Nm R (300 MHz, DMSO-cfó) 88.63 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 17.8, 11.2 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.91 (dd, J = 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.39 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.15-4.04 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.52 - 3.44 (m, 4H), 3.23 (td, J = 6.6, 3.6 Hz, 2H), 2.29 - 2.18 (m, 4H), 1.15 - 1.02 (m, 1H), 0.50 - 0.40 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 510.1 (M+1).
Etapa-4: Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-morfolinoetilo (2d)
A una solución de ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-morfolinoetoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (2c) (0.35 g, 0.68 mmol) en piridina (5.0 mL) se añadió EDCI (0.2 g, 1.02 mmol) seguido de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (0.21 g, 1.02 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se concentró al vacío para separar la piridina y DMF. El residuo se codestiló con agua (2 x 10 mL) y se secó con alto vacío. El residuo se disolvió en metanol y se convirtió en una suspensión de gel de sílice. La suspensión se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (40 g de gel de sílice, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-100%) para proporcionar el hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-morfolinoetilo (2d) (0.31 g, 72% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-de) 810.67 (s, 1H), 9.21 (s, 2H), 8.91 (s, 2H), 8.59 (s, 1H), 8.21 (d, J = 8.0, 1H), 8.04 (d, J = 8.0, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.79 (s, 4H), 7.04 (q, J = 11.6, 2H), 6.06 (d, J = 17.7, 1H), 5.45 (d, J = 12.4, 1H), 4.12 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.48 - 3.40 (m, 4H), 3.20 (m, 2H), 2.29 - 2.15 (m, 6H), 1.08 (m, 1H), 0.44 (m, 2H), 0.26 (m, 2H); MS (ES+) 627.1 (M+1); Análisis calculado para C34H38N6O6.HCM.7 5 H2O: C, 58.78; H, 6.17; Cl, 5.10; N, 12.10; Encontrado: C, 58.59; H, 6.13; Cl, 5.55; N, 12.02.
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Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de propilo (3c)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de propilo (3a)
El compuesto (3a) se preparó a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.44 g, 1.15 mmol) utilizando DMF (10 mL), carbonato de cesio (0.47 g, 1.44 mmol) y 1-bromopropano (0.13 mL, 1.44 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 2 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 12 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de propilo (3a) (0.42 g, 86% de rendimiento) como un aceite incoloro; MS (ES+) 867.2 (2M+Na). Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(propoxicarbonil)piridin-3-il)- 4-metoxi-5-vinilbenzoico (3b)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de propilo (3a) (0.42 g, 0.98 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexano al 0-100%] el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(propoxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (3b) (0.36 g, 84% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO) 812.56 (s, 1H), 8.65 (t, J = 6.0, 1H), 8.19 (d, J = 8.0, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0, 1H), 6.98 (dd, J = 11.3, 17.8, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.90 (dd, J = 1.3, 17.8, 1H), 5.38 (d, J = 12.5, 1H), 3.95 (t, J = 6.4, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 1.33 (m, 2H), 1.10 (m, 1H), 0.67 (t, J = 7.4, 3H), 0.45 (m, 2H), 0.28 (m, 2H); MS (ES+) 461.0 (M+Na); 899.0 (2M+Na); (ES-) 437.0 (M-1).
Etapa-3: Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de propilo (3c)
El compuesto (3c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(propoxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (3b) (0.33 g, 0.75 mmol) usando DMF (5 mL), EDCI (0.22 g, 1.13 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.2 g, 0.94 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 100%) el hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de propilo (3c) (0.17 g, 41% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H n Mr (300 MHz, DMsO-cfe) 8 10.70 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.38 - 8.77 (m, 4H, D2O intercambiable), 8.61 (t, J= 6.0, 1H), 8.20 (d, J= 8.0, 1H), 8.03 (d, J= 8.0, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.79 (m, 4H), 7.13 - 6.94 (m, 2H), 6.05 (d, J= 17.7, 1H), 5.44 (d, J= 12.5, 1H), 3.96 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.21 (s, 2H), 1.32 (m, 2H), 1.09 (m, 1H), 0.67 (t, J= 7.4, 3H), 0.44 (m, J= 6.4, 2H), 0.26 (m, J= 4.9, 2H); MS (ES+) 556.1 (M+1), (ES-) 554.2 (M-1); Análisis calculado para: C31 H33N5O5.1.25(HCl).0.5H2O: C, 61.02; H, 5.82; Cl, 7.26; N, 11.48; Encontrado: C, 59.83; H, 5.86; Cl, 6.97; N, 11.20.
Figure imgf000025_0001
Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-hidroxietilo (4c)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-hidroxietilo (4a)
El compuesto (4a) se preparó a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.38 g, 1.00 mmol) utilizando DMF (10 mL), carbonato de cesio (0.41 g, 1.25 mmol) y 2- bromoetanol (0.09 mL, 1.25 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 2 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 12 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-hidroxietilo (4a) (0.34 g, 80% de rendimiento) como un aceite incoloro; MS (ES+) 447.0 (M+Na). Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-hidroxietoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (4b)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-hidroxietilo (4a) (0.34 g, 0.80 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexano al 0-100%] el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-hidroxietoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (4b) (0.24 g, 57% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-de) 88.69 (d, J = 6.1, 1H), 8.19 (d, J = 8.0, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.0, 1H), 6.98 (dd, J = 11.3, 17.8, 1H), 6.87 (s, 1H), 5.91 (d, J = 17.8, 1H), 5.39 (d, J = 12.5, 1H), 4.01 (t, J = 5.5, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.37 (m, 2H), 3.23 (m, 2H), 1.13 (m, 1H), 0.44 (m, 2H), 0.29 (m, 2H); MS (ES+) 463.0 (M+Na), (ES-) 438.7 (M-1).
Etapa-3: Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-hidroxietilo (4c)
El compuesto (4c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-hidroxietoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (4b) (0.23 g, 0.52 mmol) utilizando DMF (5 mL), EDCI (0.15 g, 0.79 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (0.14 g, 0.66 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 100%) el hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-hidroxietilo (4c) (0.09 g, 32% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.70 (bs, 1H, D2O intercambiable), 9.19 (bs, 4H, D2O intercambiable), 8.68 (t, = 6.0, 1H), 8.20 (d, J= 8.0, 1H), 8.04 (d, J= 8.0, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.78 (m, 4H), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 6.05 (d, J = 17.7, 1H), 5.44 (d, J = 12.5, 1H), 4.89 (bs, 1H, D2O intercambiable), 4.03 (bs, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.21 (m, 2H), 1.09 (t, J = 7.0, 2H), 0.44 (m, 2H), 0.26 (m, 2H); MS (ES+) 558.1 (M+1), (ES-) 556.0 (M-1); Análisis calculado para: C30H31N5O6.1.5 HCM.5 H2O: C, 56.36; H, 5.60; Cl, 8.32; N, 10.95; Encontrado: C, 56.26; H, 5.64; Cl, 7.97; N, 10.65.
Figure imgf000026_0001
Preparación de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de etilo (5c)
Etapa-1: Preparación de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de etilo (5a)
El compuesto (5a) se preparó a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.47 g, 1.22 mmol) utilizando DMF (10 mL), carbonato de cesio (0.50 g, 1.53 mmol) y bromoetano (0.114 mL, 1.53 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 2 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 12 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4- vinilfenil)picolinato de etilo (5a) (0.95 g, 77% de rendimiento) como un aceite incoloro; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 89.67 (s, 1H), 8.76 (t, J = 6.1, 1H), 8.25 (d, J = 8.0, 1H), 8.18 - 8.03 (m, 2H), 7.00 (m, 2H), 6.00 (dd, J = 1.3, 17.8, 1H), 5.44 (dd, J = 1.2, 11.3, 1H), 4.10 - 3.99 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 1.11 (s, 1H), 0.92 (t, J = 7.1, 3H), 0.52 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 431.1 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(etoxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (5b)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de etilo (5a) (0.39 g, 0.95 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexano al 0-100%] el ácido 22-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(etoxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (5b) (0.23 g, 58% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 812.57 (bs, 1H), 8.68 (t, J = 6.1, 1H), 8.19 (d, J = 8.0, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0, 1H), 6.98 (dd, J = 11.3, 17.8, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.91 (dd, J = 1.3, 17.8, 1H), 5.39 (m, 1H), 4.04 (q, J = 7.1, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.22 (m, 2H), 1.10 (m, 1H), 0.94 (t, J = 7.1, 3H), 0.50 - 0.40 (m, 2H), 0.33 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 871.1 (2M+Na), (ES-) 422.8 (M-1); Análisis calculado para C23H26N2O7 : C, 62.43; H, 5.92; N, 6.33; Encontrado: C, 62.66; H, 5.76; N, 6.38.
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de etilo (5c)
El compuesto (5c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(etoxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (5b) (0.23 g, 0.54 mmol) utilizando DMF (5 mL), Ed C i (0.16 g, 0.82 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (0.14 g, 0.66 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 100%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5- metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de etilo (5c) (0.097 g, 33% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 8 10.73 (bs, 1H, D2O intercambiable), 9.25 (bs, 2H, D2O intercambiable), 9.03 (bs, 2H, D2O intercambiable), 8.66 (t, J = 6.1, 1H), 8.20 (d, J= 8.0, 1H), 8.04 (d, J = 8.0, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.80 (m, 4H), 7.16 - 6.95 (m, 2H), 6.07 (d, J= 17.7, 1H), 5.44 (d, J = 12.5, 1H), 4.06 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.21 (bs, 2H), 1.09 (m, 1H), 0.93 (t, J = 7.1, 3H), 0.43 (m, 2H), 0.27 (m, 2H); MS (ES+) 542.1 (M+1), (ES-) 539.9 (M-1); Análisis calculado para: C30H31N5O5.HCl.2 H2O: C, 58.68; H, 5.91; Cl, 5.77; N, 11.40; Encontrado: C, 58.35; H, 5.85; Cl, 5.86; N, 11.06.
Figure imgf000027_0001
Preparación del hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-morfolinoetilo (6a)
A una solución de hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-morfolinoetilo (2d) (1 g, 1.51 mmol) en acetonitrilo (10 mL) y DMF (4 mL) se añadió DIPEA (3.95 mL, 22.62 mmol), cloroformiato de hexilo (2.47 mL, 15.08 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 10 h. La mezcla de reacción se trituró dos veces con MTBE (50 mL) y se decantó. El residuo obtenido se disolvió en acetonitrilo (3 mL) y se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida de fase inversa (30 g, columna C18) eluyendo con HCl al 0.1% en agua y acetonitrilo. Las fracciones deseadas se combinaron y liofilizaron para producir el hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-morfolinoetilo; (6a) (97 mg, 8% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe, D2O) 88.25 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.88 - 7.71 (m, 4H), 7.12 - 6.96 (m, 2H), 6.07 (dd, J = 17.7, 1.4 Hz, 1H), 5.48 (dd, J = 11.3, 1.4 Hz, 1H), 4.55 - 4.32 (m, 2H), 4.25 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.83 - 3.64 (m, 4H), 3.23 (s, 4H), 3.09 (s, 4H), 1.74 - 1.57 (m, 2H), 1.43 - 1.23 (m, 6H), 1.16 - 1.00 (m, 1H), 0.94 - 0.80 (m, 3H), 0.51 - 0.41 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 755.7 (M+1), (E S-) 789.8 (M+Cl); Análisis calculado para C41H50N6O8.3 HCl.2 H2O: C, 54.70; H, 6.38; N, 9.33. Encontrado: C, 54.79; H, 6.30; N, 9.27.
Figure imgf000027_0002
Preparación del hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de etilo (7 a)
El compuesto (7a) se preparó a partir del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de etilo (5c) (0.4 g, 0.69 mmol) según el procedimiento descrito en el esquema 6. Esto dio después de tratamiento, purificación por cromatografía en columna ultrarrápida de fase inversa (30 g, columna C18) eluyendo con HCl al 0.1% en agua y acetonitrilo, seguido de liofilización, el hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de etilo (7a) (160 mg, 35% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.69 (s, 1H), 8.66 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.78 (s, 4H), 7.11 - 6.98 (m, 2H), 6.05 (dd, J = 17.9, 1.6 Hz, 1H), 5.45 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.29 - 4.16 (m, 2H), 4.12 - 3.99 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.26 -3.11 (m, 2H), 1.73 - 1.59 (m, 2H), 1.44 - 1.19 (m, 6H), 1.17 - 1.01 (m, 1H), 0.93 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 - 0.80 (m, 3H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 670.7 (M+1), 692.7 (M+Na), (ES-) 668.7 (M-1); Análisis calculado para C37H43N5O7.HCl.H2O: C, 61.36; H, 6.40; N, 9.67; Encontrado: C, 61.14; H, 6.22; N, 9.68.
Figure imgf000028_0001
Preparación del trifluoroacetato de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8e)
Etapa 1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5- metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8b)
A una solución de ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.38 g, 1.00 mmol) en DMF (10 mL) se le añadió N,N'-diciclohexil-4-morfolinocarboxamidina (0.37 g, 1.25 mmol), (S)-2- ((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 2-bromoetilo (8a) (0.49 g, 1.50 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Fu, Xiaozhong et al. en Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17(2), 465-470; 2007) y se calentó a 80°C durante 5 h. La reacción se inactivó con 15 mL de solución acuosa de ácido cítrico al 1% y se extrajo con acetato de etilo (3 x 25 mL). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, salmuera (25 mL), se secaron, filtraron y purificaron por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 25 g, eluyendo con acetato de etilo en hexano al 0-100%), para proporcionar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3- (2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8b) (0.51 g, 82% de rendimiento) como una espuma blanca. 1H NMR (300 MHz, DMSo-d6) 89.67 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.27 (d, J = 8.0, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0, 1H), 7.10 (d, J = 8.1, 3H), 5.99 (d, J = 17.7, 1H), 5.43 (d, J = 11.3, 1H), 4.22 (s, 3H), 4.03 (dd, J = 7.2, 14.3, 1H), 3.81 (s, 1H), 3.26 (s, 2H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.42 - 1.24 (m, 11H), 1.15 - 1.06 (m, 1H), 0.87 (d, J = 6.8, 1H), 0.80 (d, J= 6.8, 6H), 0.46 (d, J = 7.9, 2H), 0.29 (d, J = 3.7, 2H); MS (ES+) 624.0 (M+1), (ES-) 657.7 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(7-isopropil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa- 8-azadodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (8c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-2-((2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8b) (0.49 g, 0.78 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con metanol/acetato de etilo (1:9) en hexanos al 0-100%] el ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(7-isopropil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (8c) (0.43 g, 86% de rendimiento) como un semisólido blanco. 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 812.66 - 12.44 (m, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.21 (d, J = 8.0, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.0, 1H), 7.10 (d, J = 8.1, 1H), 6.97 (dd, J = 11.3, 17.8, 1H), 6.86 (s, 1H), 5.90 (d, J = 17.8, 1H), 5.38 (d, J = 12.4, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.81 (d, J = 8.0, 1H), 3.26 (s, 2H), 1.98 - 1.90 (m, 1H), 1.36 (d, J = 12.7, 9H), 1.27 (d, J = 8.0, 2H), 1.13 - 1.06 (m, 1H), 0.87 (d, J= 6.8, 2H), 0.79 (s, 4H), 0.45 (d, J = 8.1, 2H), 0.29 (d, J = 4.9, 2H); MS (ES+) 662.05 (M+Na), (ES-) 638.23 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8d)
El compuesto (8d) se preparó a partir del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(7-isopropil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (8c) (0.42 mg, 0.66 mmol) usando EDCI (0.19 g, 1.0 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (0.17 g, 0.82 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 30%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8d) (0.34 g, 69% de rendimiento) como un sólido blanco. MS (ES+) 757.1 (M+1); (ES-) 790.7 (M+Cl-)
Etapa-4: Preparación del trifluoroacetato de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8e)
A una solución de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8d) (0.1 g, 0.13 mmol) en diclorometano (1 mL) se añadió ácido 2,2,2-trifluoroacético (1.02 mL, 13.21 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h y se concentró hasta sequedad. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 4 g, eluyendo con (CMW-80 en CHCb) al 0-100% seguido de CMW50 en CHCb), para proporcionar el trifluoroacetato de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (8e) (0.036 g, 42% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-D2O)) 88.66 (t, J=5.4, 1H), 8.22 (d, J = 8.0, 1H), 8.04 (d, J= 8.0, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.76 (s, 4H), 7.01 (m, 2H), 6.03 (d, J= 8.0, 1H), 5.44 (d, J= 4.0, 1H), 4.35 - 4.14 (m, 2H), 4.09 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.22 (m, 3H), 1.89 -1.69 (m, 1H), 1.16 - 0.97 (m, 1H), 0.76 (dd, J= 6.8, 10.7, 6H), 0.46 (s, 2H), 0.28 (s, 2H); MS (ES+): 657.0 (M+1); Análisis calculado para C41H50N6O8.1.5 H2O.1.1 CF3CO2H: C, 55.22; H, 5.49; N, 10.39; F, 7.75; encontrado: C, 55.10; H, 5.13; N, 10.25; F, 7.84.
Figure imgf000029_0001
Preparación del N6-(ciclopropilmetil)-N2-hidroxi-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)piridina-2,6-dicarboxamida (9b) y ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (9c) Etapa-1: Preparación del 3-(2-((4-cianofenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (9a)
El compuesto (9a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(metoxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (im ) (0.41 g, 1.0 mmol) usando EDCI (0.29 g, 1.5 mmol) y 4-aminobenzonitrilo (0.24 g, 2.0 mmol) usando acetonitrilo (9 mL) y piridina (1 mL) como disolvente, según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con EtOAc:MeOH (9:1) en hexano al 0-100%] proporcionó el 3-(2-((4-cianofenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (9a) (0.46 g, 45%) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 810.73 (s, 1H), 8.67 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0, 1H), 8.05 (d, J = 8.0, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.76 (d, J = 3.9, 4H), 7.01 (m, 2H), 6.04 (d, J = 17.9, 1H), 5.44 (d, J = 11.5, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.20 (m, 2H), 1.17 (m, 1H), 0.45 (m, 2H), 0.27 (m, 2H); MS (ES+) 533.0 (M+Na), (ES­ ) 508.9 (M-1); IR (KBr) 2225 cm-1.
Etapa-2: Preparación del N6-(ciclopropilmetil)-N2-hidroxi-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)piridina-2,6-dicarboxamida (9b) y ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (9c) A una solución de 3-(2-((4-cianofenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (9a)
(0.44 g, 0.86 mmol) en metanol (10 mL) se añadió hidroxilamina (0.25 mL, 4.31 mmol) y se calentó a temperatura de reflujo durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo obtenido se purificó por columna (gel de sílice 25 g, eluyendo con CMA-80 en cloroformo al 0-100%) para proporcionar la N6-(ciclopropilmetil)-N2-hidroxi-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)piridina-2,6-dicarboxamida (9b) (0.092 g, 20% de rendimiento); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 8 11.73 (s, 1H), 10.31 (s, 1H), 9.50 (m, 1H), 9.28 (s, 1H), 9.16 (s, 1H), 8.12 (d, J = 8.0, 1H), 7.93 - 7.78 (m, 2H), 7.51 (m, 4H), 7.02 (dd, J = 11.3, 17.7, 1H), 6.88 (s, 1H), 6.00 (d, J = 17.6, 1H), 5.70 (s, 2H), 5.40 (d, J = 12.4, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 1.17 - 1.01 (m, 2H), 0.47 (m, 2H), 0.27 (m, 2H); MS (ES+) 545.0 (M+1), 567.0 (M+Na); (ES-) 543.1 (M-1); Análisis calculado para C28H28N6O6 E 7 5 H2O: C, 60.26; H, 5.33; N, 15.06; encontrado: C, 60.34; H, 5.45 N, 14.69; seguido del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (9c) (0.35 g, 77% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 89.48 (s, 1H), 8.83 - 8.66 (m, 1H), 7.89 (m, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.64 (m, 1H), 7.45 (m, 4H), 7.21 - 7.06 (m, 2H), 7.00 (dd, J = 11.4, 17.8, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.95 (d, J = 17.7, 1H), 5.69 (s, 2H), 5.37 (d, J = 12.2, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.19 (m, 2H), 1.12 - 1.07 (m, 1H), 0.45 (m, 2H), 0.25 (m, 2H); MS (ES+) 530.0 (M+1), (ES-) 528.0 (M-1).
Esquema 10
Figure imgf000030_0001
Preparación del trifluoroacetato de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10e)
Etapa-1: Preparación del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10b) El compuesto (10b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.57 g, 1.5 mmol) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.55 g, 1.25 mmol) y (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de clorometilo (10a) (0.6 g, 2.25 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Dousson, Cyril B. y Paparin, Jean-Laurent en la solicitud Int. PCT, 2015042375, del 26 de Marzo de 2015). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10b) (0.66 g, 72% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.69 (s, 1H), 8.67 - 8.51 (m, 1H), 8.29 (d, J = 8.0, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.0, 1H), 7.25 (d, J = 8.0, 1H), 7.01 (dd, J = 11.5, 17.6, 2H), 6.01 (d, J = 17.7, 1H), 5.92 - 5.81 (m, 1H), 5.74 (d, J = 6.0, 1H), 5.45 (d, J = 12.4, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.87 - 3.79 (m, 1H), 3.24 (d, J = 6.0, 2H), 1.97 -1.82 (m, 1H), 1.35 (2s, 9H), 1.14 - 1.05 (m, 1H), 0.80 (dd, J = 3.9, 6.7, 6H), 0.53 - 0.41 (m, 2H), 0.35 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 632.0 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (10c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10b) (0.63 g, 1.03 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con metanol/acetato de etilo (1:9) en hexanos al 0-100%] el ácido (S)-2- (6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3- il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (10c) (0.16 g, 25% de rendimiento) como un semisólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 812.53 (s, 1H), 8.50 (t, 1H), 8.23 (d, J = 8.0, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0, 1H), 7.24 (d, J = 7.9, 1H), 6.98 (dd, J = 11.3, 17.8, 2H), 6.88 (s, 1H), 5.96 - 5.82 (m, J = 3.4, 21.1, 2H), 5.73 (d, J = 5.9, 1H), 5.39 (d, J = 12.5, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.82 - 3.72 (m, 1H), 3.29 - 3.19 (m, 2H), 2.05 - 1.90 (m, 1H), 1.35 (s, 9H), 0.92 - 0.75 (m, 10H). MS (ES+) 626.0 (M+1), 648.0 (M+Na); (ES-) 623.8 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10d)
El compuesto (8d) se preparó a partir del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (10c) (0.162 g, 0.26 mmol) usando EDCI (0.075 g, 0.34 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.08 g, 0.34 mmol) en DMF (2 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 30%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10d) (0.098 g, 51% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.72 (s, 1H), 9.27 -9.02 (m, 2H), 9.00 - 8.77 (m, 2H), 8.50 - 8.35 (m, 1H), 8.24 (d, J = 8.0, 1H), 8.04 (d, J = 8.0, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.83 - 7.71 (m, 4H), 7.24 (d, 1H), 7.11 - 6.98 (m, 2H), 6.05 (d, J = 17.7, 1H), 5.95 - 5.62 (m, 2H), 5.45 (d, J = 12.6, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.86 - 3.77 (m, 1H), 3.28 - 3.13 (m, 2H), 1.99 - 1.84 (m, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.07 (d, J = 7.0, 1H), 0.79 (d, J = 6.8, 6H), 0.52 - 0.40 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 742.9 (M+1); (ES-): 776.4 (M+Cl-).
Etapa-4: Preparación del trifluoroacetato de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10e)
El compuesto (10e) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10d) (0.07 g, 0.11 mmol) en diclorometano (1 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.82 mL, 10.64 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 4 g, eluyendo con (CMW-80 en CHCb) al 0-100% seguido de CMW50 en CMW-80), para proporcionar el trifluoroacetato de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de ((S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10e) (0.024 g, 35% de rendimiento) como un sólido marrón claro; 1 H NMr (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.75 (s, 1H), 9.18 (s, 5H), 8.52 - 8.29 (m, 3H), 8.25 (d, J= 8.0, 2H), 8.04 (d, J= 8.0, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.81 - 7.74 (m, 4H), 7.10 - 6.96 (m, 2H), 6.06 (d, J= 17.8, 1H), 6.01 - 5.70 (m, 2H), 5.46 (d, J= 12.0, 1H), 3.92 - 3.86 (m, 4H), 3.27 -3.20 (m, 2H), 2.16 - 1.97 (m, 1H), 1.13 - 1.07 (m, 1H), 0.87 (d, J = 6.8, 6H), 0.48 - 0.42 (m, 2H), 0.31 - 0.26 (m, 2H); MS (ES+) 643.00 (M+1); Análisis calculado para C34H38N6O7.HCL 1.8 CF3CO2H: C, 51.06; H, 4.65; F, 11.60; N, 9.50; Encontrado: C, 51.41; H, 4.78; F, 11.95; N, 9.33.
Figure imgf000032_0001
Preparación del trifluoroacetato de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((2S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11e)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-(((2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11b) El compuesto (10b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.57 g, 1.5 mmol) en DMF (15 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.55 g, 1.88 mmol) y (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoato de 2-bromoetilo (11a) (0.76 g, 2.25 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Fu, Xiaozhong et al. en Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17(2), 465-470; 2007). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-(((2S,3R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11b) (0.75 g, 78% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.68 (2s, J = 3.5, 1H), 8.69 (t, J = 5.9, 1H), 8.26 (d, J = 8.0, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0, 1H), 7.17 - 6.94 (m, 3H), 5.99 (d, J = 16.6, 1H), 5.43 (d, J = 11.3, 1H), 4.21 (m, 2H), 4.03 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.89 - 3.83 (m, 1H), 3.31 - 3.21 (m, 2H), 1.75 - 1.61 (m, 1H), 1.33 (2s, J = 3.8, 9H), 1.28 - 1.24 (m, 1H), 1.15 - 1.05 (m, 2H), 0.72 (dd, J = 7.1, 18.2, 6H), 0.46 (m, 2H), 0.29 (m, 2H); MS (ES+) 638.1 (M+1); 660.1 (M+Na); (ES-) 636.2 (M-1).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(2-((S)-7-((R)-sec-butil)-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (11c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-(((2S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11b) (0.69 g, 1.08 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación mediante cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con metanol/acetato de etilo (1:9) en hexanos al 0-100%] el ácido 2-(2-((7S)-7-(sec-butil)-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (11c) (0.61 g, 86% de rendimiento) como un semisólido blanquecino. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 12.55 (s, 1H), 8.62 (t, J=6.0, 1H), 8.21 (d, J = 8.0, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0, 1H), 7.10 (d, J = 8.3, 1H), 6.97 (dd, J = 11.3, 17.8, 1H), 6.85 (s, 1H), 5.91 (d, J = 17.9, 1H), 5.38 (d, J = 12.4, 1H), 4.43 - 4.30 (m, 1H), 4.24 - 4.16 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.45 (s, 2H), 3.29 -3.20 (m, 2H), 1.76 - 1.59 (m, 1H), 1.34 (s, 9H), 1.07 (d, J = 7.0, 3H), 0.78 - 0.67 (m, 6H), 0.51 - 0.40 (m, 2H), 0.34 - 0.25 (m, 2H). MS (Es-) 651.5 (M-1); Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5- metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11 d)
El compuesto (11d) se preparó a partir del ácido 2-(2-((7S)-7-(sec-butil)-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (11c) (0.6 g, 0.91 mmol) usando EDCI (0.26 g, 1.37 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.29 g, 1.37 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 30%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11d) (0.41 g, 58% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.68 (bs, 1 H), 9.01 (s, 4H), 8.67 - 8.53 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0, 1H), 8.04 (d, J= 8.0, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.77 (s, 4H), 7.12 - 7.02 (m, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.04 (d, J= 17.6, 1H), 5.44 (d, J= 12.3, 1H), 4.32 - 3.96 (m, 4H), 3.89 (s, 3H), 3.87 - 3.76 (m, 1H), 3.28 - 3.17 (m, 2H), 1.72 - 1.57 (m, 1H), 1.32 (s, 9H), 1.27 - 1.19 (m, 2H), 1.14 - 1.08 (m, 1H), 0.76 - 0.62 (m, 6H), 0.45 (M, 2H), 0.28 (M, 2H); MS (ES+) 771.1 (M+1); (ES-) 804.9 (M+Cl-).
Etapa-4: Preparación del trifluoroacetato de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((2S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11e)
El compuesto (11e) se preparó del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11d) (0.39 g, 0.5 mmol) en diclorometano (5 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (3.85 mL, 49.9 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 4 g, eluyendo con (CMW-80 en CHCb) al 0-100% seguido de CMW50 en CMW-80), proporcionó el trifluoroacetato del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((2S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (11e) (0.25 g, 73% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.71 (s, 1H), 9.14 (d, J = 20.9, 4H), 8.56 (s, 1H), 8.35 (s, 3H), 8.23 (d, J= 8.0, 1H), 8.05 (d, J = 8.0, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.77 (s, 4H), 7.32 - 7.11 (m, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.05 (d, J = 17.7, 1H), 5.45 (d, J = 12.2, 1H), 4.26 (s, 4H), 3.90 (s, 3H), 3.38 (d, J= 7.0, 1H), 3.22 (s, 2H), 1.76 (s, 1H), 1.31 (s, 1H), 1.08 (d, J= 7.0, 2H), 0.79 (d, J= 6.8, 3H), 0.70 (t, J= 7.3, 3H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 671.09 (M+1); Análisis calculado para: C36H42N6O7.0.5 HCL2 CF3CO2H: C, 52.39; H, 4.89; F, 12.43; N, 9.16; Encontrado: C, 52.55; H, 5.01; F, 12.50; N, 8.91.
Esquema 12
Figure imgf000033_0001
Preparación del trifluoroacetato del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-amino-3-fenilpropanoil)oxi)etilo (12e)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)etilo (12b) El compuesto (12b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.52 g, 1.34 mmol) en DMF (15 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.5 g, 1.7 mmol) y (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoato de 2-bromoetilo (12a) (0.76 g, 2.03 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Fu, Xiaozhong et al. en Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17(2), 465-470; 2007). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)etilo (12b)(0.75 g, 82% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.69 (2 s, J = 5.6, 1H), 8.72 (t, J = 6.0, 1H), 8.27 (d, J = 8.0, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0, 1H), 7.23 (dd, J = 5.8, 20.9, 7H), 7.06 - 6.93 (m, 2H), 5.98 (d, J = 17.7, 1H), 5.43 (d, J = 12.4, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 4 H), 3.89 (s, 3H), 3.28 - 3.17 (m, 2H), 3.00 - 2.75 (m, 2H), 1.28 (s, 9H), 1.08 (m, 1H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.30 - 0.24 (m, 2H); EM (ES+) 694.0 (M+Na); MS (ES-) 669.8 (M-1).
Etapa-2: Preparación del ácido (S)-2-(2-(7-bencil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (12c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-2-((2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)etilo (12b) (0.67 g, 1.00 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con metanol/acetato de etilo (1:9) en hexanos al 0-100%] el ácido (S)-2- (2-(7-bencil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3- il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (12c) (0.45 g, 66% de rendimiento) como un semisólido blanquecino. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 12.59 (s, 1H), 8.64 (t, J = 6.0, 1H), 8.21 (d, J = 8.0, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0, 1H), 7.22 (dd, J = 7.9, 15.0, 6H), 6.97 (dd, J = 11.3, 17.8, 1H), 6.86 (s, 1H), 5.90 (d, J = 17.7, 1H), 5.38 (d, J = 12.5, 1H), 4.15 (s, 5H), 3.83 (s, 3H), 3.22 (s, 2H), 3.00-2.72 (m, 2H), 1.28 (s, 9H), 1.07 (s, 1H), 0.42 (d, J = 8.0, 2H), 0.25 (d, J = 3.7, 2H); MS (ES+) 710.0 (M+Na), MS (ES-) 686.0 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)etilo (12d)
El compuesto (12d) se preparó a partir del ácido (S)-2-(2-(7-bencil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (12c) (0.45 g, 0.66 mmol) usando EDCI (0.19 g, 1.00 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.21 g, 1.00 mmol) en DmF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 30%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)etilo (12d) (0.43 g, 54% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSo-d6 ) 810.48 (bs, 1H), 8.86 (s, 4H), 8.44 - 8.35 (m, 1H), 7.98 (d, J= 8.0, 1H), 7.80 (d, J= 8.0, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.59 - 7.49 (m, 4H), 7.06 - 6.99 (m, J= 7.9, 1H), 6.97 - 6.89 (m, J= 6.4, 12.3, 4H), 6.85 - 6.73 (m, 2H), 5.80 (d, J= 17.0, 1H), 5.20 (d, J= 12.5, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 4H), 3.63 (s, 3H), 3.00 - 2.94 (m, 2H), 2.74 - 2.47 (m, 2H), 1.03 (s, 9H), 0.94 - 0.92 (m, 1H), 0.22 - 0.11 (m, J = 8.1, 2H), 0.02 - -0.04 (m, 2H); MS (ES+) 805.1 (M+1); MS (ES-) 802.9 (M+Cl).
Etapa-4: Preparación del trifluoroacetato del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-amino-3-fenilpropanoil)oxi)etilo (12e)
El compuesto (12e) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)etilo (12d) (0.4 g, 0.49 mmol) en diclorometano (5 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (3.78 mL, 49.1 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 4 g, eluyendo con (CMW-80 en CHCb) al 0-100% seguido de CMW50 en CMW-80), proporcionó el trifluoroacetato del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((2S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (12e) (0.19 g, 56% de rendimiento) como un sólido blanco; 10.69 (s, 1h), 9.38 - 9.01 (m, 1H), 8.92 (s, 2h), 8.63 - 8.56 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0, 1H), 8.04 (d, J= 8.0, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.80 - 7.71 (m, 4H), 7.22 - 7.07 (m, J= 7.0, 6H), 7.01 (t, J= 8.9, 2H), 6.03 (d, J= 17.7, 1H), 5.44 (d, J= 12.4, 1H), 4.29 - 4.09 (m, 2H), 4.07 - 3.97 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.70 - 3.59 (m, 1H), 3.22 - 3.12 (m, 2H), 2.92 - 2.71 (m, 2H), 1.11 - 0.98 (m, 1H), 0.47 - 0.34 (m, J= 8.1, 2H), 0.31 - 0.18 (m, J = 4.9, 2H); MS (ES+) 705.0(M+1); Análisis calculado para: C39H40N6O7.0.5 HCM.3 CF3CO2H: C, 57.35; H, 4.84; F, 850; N, 9.65; Encontrado: C, 57.01; H, 5.03; F, 8.52; N, 9.27.
Figure imgf000035_0001
Preparación del 3-(2-(4-carbamimidoilfenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-(cidopropilmetilcarbamoil)picolinato de octadecilo (13c)
Etapa-1: Preparación del 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de octadecilo (13a)
El compuesto (13a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.57 g, 1.5 mmol) en DMF (10 mL) usando EDCI (0.43 g, 2.25 mmol) y DMAP (0.28 g, 2.25 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de octadecilo (13a) (0.32 g, 33% de rendimiento) como un aceite incoloro; MS (ES+) 632.91 (M+1), 655.05 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-2-(octadeciloxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (13b)
La oxidación del 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de octadecilo (13a) (0.31 g, 0.49 mmol) usando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con metanol/acetato de etilo (1:9) en hexanos al 0-100%] el ácido 2-(6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-2-(octadeciloxicarbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (13b) como un semisólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.57 (s, 1H), 8.65 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.89 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 5.37 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.97 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.22 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.22 (d, J = 12.4 Hz, 26H), 1.10 (s, 5H), 0.97 (s, 2H), 0.84 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.44 (dd, J = 5.2, 2.9 Hz, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H). MS (ES-) 647.50 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-(4-carbamimidoilfenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-(ciclopropilmetilcarbamoil)picolinato de octadecilo (13c)
El compuesto (13c) se preparó a partir del ácido 2-(6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-2-(octadeciloxicarbonil)piridin-3- il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (13b) (0.09 g, 0.13 mmol) usando EDCI (0.04 g, 0.20 mmol) y dihidrocloruro de 4- aminobencimidamida (In) (0.034 g, 0.16 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 30%) el 3-(2-(4-carbamimidoilfenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-(ciclopropilmetilcarbamoil) picolinato de octadecilo (13c) (0.008 g, 8% de rendimiento) como un sólido amarillo pálido; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.67 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.19 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.83 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.68 - 8.56 (m, 1H), 8.19 (d, J = 8.1, 1H), 8.01 (d, J = 8.0, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.78 m, 4H), 7.02 (m, 2H), 6.10 - 5.97 (m, 1H), 5.49 -5.37 (m, 1H), 4.03 - 3.95 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.24 - 3.19 (m, 2H), 1.23 (bm, 29H), 1.11 - 1.06 (m, 3H), 0.85 (m, 3H), 0.45 (m, 2H), 0.27 (m, 2H); MS (ES+) 767.4 (M+1).
Figure imgf000036_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (14d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (14b)
El compuesto (14b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir de ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.87 g, 2.25 mmol) en DMF (10 mL) utilizando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.83 g, 2.25 mmol) y carbonato de clorometilo e isopropilo (14a) (0.52 g, 3.38.25 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (14b) (0.73 g, 65% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H nMr (300 MHz, DmSo- d6 ) 8 9.69 (s, 1H), 8.70 (q, J = 6.4 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 - 6.91 (m, 2H), 6.06 - 5.95 (m, 1H), 5.73 (s, 2H), 5.42 (t, J = 13.6 Hz, 1H), 4.81 - 4.66 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.24 (dd, J = 10.2, 6.6 Hz, 2H), 1.22 (d, J = 6.3 Hz, 6H), 1.09 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 0.49 - 0.42 (m, 2H), 0.29 (q, J = 4.9 Hz, 2H); MS (ES+): MS (ES+) 519.0 (M+Na); Análisis calculado para: C26H28N2O8 : C, 62.89; H, 5.68; N, 5.64; Encontrado: C, 62.59; H, 5.62; N, 5.52.
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((((isopropoxicarbonil)oxi)metoxi)carbonil)piridin-3- il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (14c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (14b) (0.71 g, 1.43 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con metanol/acetato de etilo (1:9) en hexanos al 0-100%] el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((((isopropoxicarbonil)oxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (14c) (0.19 g, 26% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 812.57 (s, 1H), 8.64 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.90 (dd, J= 17.7, 1.4 Hz, 1H), 5.77 - 5.66 (m, 2H), 5.39 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.80 - 4.65 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.33 - 3.14 (m, 2H), 1.34 - 1.15 (m, 6H), 1.16 - 1.09 (m, 1H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (14d)
El compuesto (14d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((((isopropoxicarbonil)oxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (14c) (0.18 g, 0.35 mmol) utilizando EDCI (0.14 g, 0.71 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.18 g, 0.88 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 30%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (14d) (0.081 g, 36% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.72 (s, 1H), 9.20 (s, 2H), 8.89 (s, 2H), 8.62 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.78 (s, 4H), 7.10 - 6.96 (m, 2H), 6.04 (t, J = 14.9 Hz, 1H), 5.72 (s, 2H), 5.45 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 4.72 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.21 (s, 2H), 1.19 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 1.08 (m, 1H), 0.44 (m, 2H), 0.27 (m, 2H); MS (ES+) 630.0 (M+1), (ES-) 664.2 (M+Cl); Análisis calculado para C35H35N5Os(HCl)(H2O): C, 57.93; H, 5.60; N, 10.24; Cl, 5.18; Encontrado: C, 58.08; H, 5.58; N, 9.84; Cl, 4.95.
Figure imgf000037_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (pivaloiloxi)metilo (15d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (pivaloiloxi)metilo (15b)
El compuesto (15b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.87 g, 2.25 mmol) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.83 g, 2.25 mmol) y pivalato de clorometilo (15a) (0.49 mL, 3.38 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (pivaloiloxi)metilo ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (15b) (0.95 g, 80% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, MeOD) 89.68 (s, 1H), 8.67 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 - 6.91 (m, 2H), 5.99 (dd, J = 17.8, 1.3 Hz, 1H), 5.74 (q, J = 5.8 Hz, 2H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.2 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.24 (dd, J = 10.2, 6.7 Hz, 2H), 1.13 - 1.06 (m, 1H), 1.04 (s, 9H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H); MS(ES+) 494.96 (M+1); 516.93 (M+Na);
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((pivaloiloxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (15c) La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (pivaloiloxi)metilo ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (15b)
(0.95 g, 1.93 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-20%] el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((pivaloiloxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (15c) (0.73 g, 70% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H NMR (300 MHz, Dm So -d6) 812.53 (s, 1H), 8.60 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.94 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.89 (dd, J = 17.8, 1.2 Hz, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.39 (dd, J = 11.3, 1.2 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.24 (dd, J = 9.4, 6.6 Hz, 2H), 1.30 - 1.24 (m, 1H), 1.05 (s, 9H), 0.53 - 0.40 (m, 2H), 0.32 -0.23 (m, 2H); MS (ES+) 533.0 (M+Na); (ES-) 509.4 (M-1)
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (pivaloiloxi)metilo (15d)
El compuesto (15d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((pivaloiloxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (15c) (0.7 g, 1.37 mmol) utilizando EDCI (0.33 g, 1.71 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.36 g, 1.71 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 de esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 40 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 30%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (pivaloiloxi)metilo (15d) (0.5 g, 58% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.69 (s, 1H), 9.17 (s, 2H), 8.85 (s, 2H), 8.53 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 - 7.97 (m, 2H), 7.85 - 7.68 (m, 4H), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.73 (s, 2H), 5.45 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.26 - 3.15 (m, 2H), 1.15 - 1.06 (m, 1H), 1.03 (s, 9H), 0.51 - 0.40 (m, 2H), 0.33 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+): 628.0 (M+1), MS (ES-) 662.2 (M+Cl); Análisis calculado para C34 H37 N5 Oy HClH2 O: C, 59.86; H, 5.91; Cl, 5.20; N, 10.27; Encontrado: C, 60.08; H, 5.60; Cl, 4.95; N, 10.19.
Figure imgf000038_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2 -acetoxietilo (16d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-acetoxietilo (16b)
El compuesto (16b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.87 g, 2.25 mmol) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.83 g, 2.25 mmol) y acetato de 2-bromoetilo (16a) (0.37 mL, 3.38 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-acetoxietilo (16b) (0.63 g, 55% de rendimiento) como un semisólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.68 (s, 1H), 8.74 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 8.09 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.07 - 6.91 (m, 2H), 5.99 (dd, J = 17.8, 1.3 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.3, 1.2 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 4.00 - 3.94 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.29 - 3.21 (m, 2H), 1.92 (s, 3H), 1.15 - 1.06 (m, 1H), 0.53 - 0.40 (m, 2H), 0.35 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 489.0 (M+Na); (ES-) 465.1 (M-1). Etapa-2: Preparación del ácido 2-(2-((2-acetoxietoxi)carbonil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (16c) La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-acetoxietilo (16b) (0.63 g, 1.35 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-20%] el ácido 2-(2-((2-acetoxietoxi)carbonil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (16c) (0.43 g, 58% de rendimiento) como un sólido blanco.1 H NMR (300 MHz, DmSo-d6 ) 812.59 (s, 1H), 8.67 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.11 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 7.97 (t, J = 10.2 Hz, 1H), 6.96 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.89 (dd, J = 17.8, 1.3 Hz, 1H), 5.38 (dd, J = 11.3, 1.2 Hz, 1H), 4.29 - 4.16 (m, 2H), 4.00 - 3.93 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.24 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.93 (s, 3H), 1.15 - 1.05 (m, 1H), 0.52 - 0.38 (m, 2H), 0.34 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 483.0 (M+1); 505.0 (M+Na); (ES-) 481.4 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-acetoxietilo (16d)
El compuesto (16d) se preparó a partir del ácido 2-(2-((2-acetoxietoxi)carbonil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (16c) (0.4 g, 0.83 mmol) utilizando EDCI (0.2 g, 1.04 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.22 g, 1.04 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 40 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 30%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-acetoxietilo (16d) (0.14 g, 28% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.68 (s, 1H), 9.27 (s, 4H), 8.63 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.77 (s, 4H), 7.14 - 6.96 (m, 2H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 4.33 - 4.11 (m, 2H), 4.04 - 3.96 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.25 - 3.12 (m, 2H), 1.90 (s, 3H), 1.14 -1.07 (m, 1H), 0.50 - 0.40 (m, 2H), 0.31 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 600.0 (M+1); (ES-) 633.3 (M+Cl); Análisis calculado para C32 H33 N5 Oy HClH 2 O: C, 58.76; H, 5.55; Cl, 5.42; N, 10.71; Encontrado: C, 58.74; H, 5.54; Cl, 4.72; N, 10.40.
Figure imgf000039_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-pivaloilcarbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de metilo (17a) El compuesto (17a) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (1o) (0.28 g, 0.5 mmol) según el procedimiento indicado en el esquema 6. Esto dio después del tratamiento, la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-pivaloilcarbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de metilo (17a) (72 mg, 21% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.57 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.23 - 9.69 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.29 - 8.73 (m, 1H, D2O intercambiable), 8.66 (t, J = 6.3 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.92 (s, 1H), 7.69 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.04 (q, J = 11.6 Hz, 2H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.20 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 1.18 (s, 9H), 1.13-1.01 (m, 1H), 0.43 (dt, J = 5.5, 5.0 Hz, 2H), 0.26 (q, J = 4.9 Hz, 2H); MS (ES+) 612.0 (M+1), 634.0 (M+Na), MS (ES-) 610.3 (M-1), 646.5 (M+Cl); Análisis calculado para C34 H3y N5 O6 (H2 O)0.5 : C, 65.77; H, 6.17; N, 11.28 Encontrado: C, 65.66; H, 5.98; N, 11.16.
Esquema 18
Figure imgf000040_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18e), 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18f), 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (R)-2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18g)
Etapa-1: Preparación del 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanoiloxi)propilo (18b)
El compuesto (18b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.95 g, 2.5 mmol) en DMF (10 mL) utilizando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.92 g, 3.12 mmol) y (2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanoato de 1-bromopropan-2-ilo (18a) (1.48 g, 4.37 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-((S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanoiloxi)propilo (18b) (1.13 g, 71% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) 89.75-9.60 (m, 1H), 8.70-8.58 (m, 1H), 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.10 (dd, J = 11.8, 6.5 Hz, 2H), 7.16-6.90 (m, 3H), 5.99 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.16­ 4.07 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.81-3.68 (m, 1H), 3.30-3.18 (m, 2H), 1.97-1.84 (m, 1H), 1.33 (s, 9H), 1.28-1.21 (m, 1H), 1.12-0.96 (m, 3H), 0.95-0.68 (m, 7H), 0.54-0.39 (m, 2H), 0.36-0.23 (m, 2H); MS (ES+) 637.94(M+1), 659.91 (M+Na); (ES-) 636.02 (M-1).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((7S)-7-isopropil-4,11,11-trimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (18c)
La oxidación del 6-(cidopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-((S)-2-(tercbutoxicarbonilamino)-3-metilbutanoiloxi)propilo (18b) (2.6 g, 4.08 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con metanol/acetato de etilo (1:9) en hexanos al 0-100%] el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((7S)-7-isopropil-4,11,11-trimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (18c) (01.1 g, 41% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 12.55 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 - 7.04 (m, 1H), 6.97 (dd, J = 17.8, 11.2 Hz, 1H), 6.90 - 6.82 (m, 1H), 5.90 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 5.07 - 4.85 (m, 1H), 4.14 - 4.03 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.81 - 3.72 (m, 1H), 3.29 - 3.18 (m, 2H), 1.98 - 1.84 (m, 1H), 1.39 - 1.31 (m, 9H), 1.12 - 0.96 (m, 4H), 0.83 - 0.74 (m, 6H), 0.51 - 0.40 (m, 2H), 0.35 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 676.1 (M+Na); (ES-) 652.01 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18d)
El compuesto (18d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((7S)-7-isopropil-4,11,11-trimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (18c) (1.00 g, 1.53 mmol) usando EDCI (0.44 g, 2.3 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.48 g, 2.3 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 25 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0 a 50%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18d) (0.81 g, 63% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.70 (s, 1h), 9.03 (bs, 4H), 8.63 - 8.49 (m, 1H), 8.21 (dd, J = 7.9, 4.8 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 15.2, 7.8 Hz, 2H), 7.78 (s, 4H), 7.13 - 6.94 (m, 3H), 6.04 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.40 (d, J = 19.3 Hz, 1H), 5.06 - 4.83 (m, 1H), 4.22 - 3.96 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.78 - 3.68 (m, 1H), 3.30 - 3.16 (m, 2H), 2.00 - 1.81 (m, 1H), 1.33 (s, 9H), 1.26 - 1.18 (m, 1H), 1.04 - 0.88 (m, 3H), 0.81 - 0.72 (m, 6H), 0.50 - 0.41 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 771.1 (M+1); (ES-) 805.1 (M+Cl).
Etapa-4: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18e),
A una solución del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18d) (0.78 g, 1.01 mmol) en dioxano (5 mL) se añadió cloruro de hidrógeno (4 M en dioxano) (4.22 mL, 16.90 mmol). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se concentró al vacío hasta sequedad. La mezcla resultante se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con (CMW80/CHCla) al 0-100% seguido de CMW50/CMW80) al 0-100%] para proporcionar el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18e) (0.285 g, 42% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NmR (300 MHz, DMSO-d 6 ) 810.68 (s, 1H), 8.97 (s, 2H), 8.66-8.45 (m, 1H), 8.21 (dd, J = 8.0, 4.3 Hz, 1H), 8.10-7.87 (m, 2H), 7.85-7.66 (m, 5H), 7.01 (m, 2H), 6.06 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 4.89 (m, 1H), 4.11 (s, 2H), 3.99- 3.73 (m, 4H), 3.23 (s, 4H), 1.95-1.70 (m, 1H), 1.35 (m, 1H), 1.16-0.91 (m, 4H), 0.87-0.66 (m, 6H), 0.45 (m, 2H), 0.27 (m, 2H); MS (ES+) 671.1(M+1); (ES-) 669.0 (M-1); Análisis calculado para C36H 42N 6 O y -HCl-2.5H 2O: C, 57.48; H, 6.43; N, 11.17; Cl, 4.71; Encontrado: C, 57.53; H, 6.23; N, 10.95; Cl, 5.21.
Etapa-5: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18f), 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (R)-2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)propilo (18g)
El compuesto (18e) se volvió a purificar por HPLC preparativa (eluyendo con acetonitrilo en agua [que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%) para dar los compuestos (18f y 18g), la estructura se asignó aleatoriamente. Datos para el isómero-A: 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.78 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.24 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.96 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.60 - 8.45 (m, 1H), 8.41 (s, 3H, D2O intercambiable), 8.26 -8.12 (m, 1H), 8.09 - 7.96 (m, 2H), 7.88 - 7.65 (m, 4H), 7.10 - 6.91 (m, 2H), 6.08 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 5.14 - 4.82 (m, 1H), 4.26 - 4.03 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.75 (s, 1H), 3.26 - 3.17 (m, 2H), 2.16 -1.96 (m, 1H), 1.17 - 0.97 (m, 3H), 0.93 - 0.71 (m, 7H), 0.50 - 0.40 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 671.7 (M+1); (ES-) 705.7 (M+Cl); ); Análisis calculado para C36 H42 N6 Oy 2.25HCl-3H2 O: C, 53.59; H, 6.28; N, 10.42; encontrado: C, 53.62; H, 6.37; N, 10.31; Datos para el isómero-B: 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.77 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.23 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.94 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.58 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.47 - 8.25 (m, 3H, D2O intercambiable), 8.21 (t, J= 6.5 Hz, 1H), 8.08 - 7.94 (m, 2H), 7.89 - 7.69 (m, 4H), 7.11 - 6.95 (m, 2H), 6.07 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 5.07 - 4.76 (m, 1H), 4.28 - 4.03 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.77 - 3.58 (m, 1H), 3.27 - 3.12 (m, 2H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 1.13 - 0.97 (m, 3H), 0.94 - 0.74 (m, 7H), 0.49 - 0.37 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 671.7 (M+1); (ES') 705.7 (M+Cl).
Figure imgf000042_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (19d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (19b)
El compuesto (15b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.83 g, 2.25 mmol) y 4-(clorometil)-5-metil-1,3-dioxol-2-ona (19a) (0.5 g, 3.38 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (19b) (0.76 g, 64% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.63 (s, 1H), 8.75 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.26 (m, 1H), 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 6.98 (m, 2H), 5.97 (m, 1H), 5.44 (dd, J = 11.3, 1.2 Hz, 1H), 5.00 (q, J = 14.1 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.30 - 3.14 (m, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.15 - 1.04 (m, 1H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 514.9 (M+Na); Análisis calculado para C26H24N2O8 : C, 63.41; H, 4.91; N, 5.69; Encontrado: C, 63.06; H, 4.87; N, 5.54.
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (19c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (19b) (0.78 g, 1.56 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-20%] el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (19c) (0.75 g, 95% de rendimiento) como un sólido blanco MS (ES+) 531.0 (M+Na), (ES-) 506.7 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (19d) El compuesto (19d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (19c) (0.7 g, 1.4 mmol) usando EDCI (0.54 g, 2.8 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.73 g, 3.51 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g, eluyendo con CMW80 (CHCl3-MeOH-H2 O) en cloroformo del 0 al 100%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (19d) (0.46 g, 52% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.61 (s, 1H), 9.19 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.88 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.64 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.75 (s, 4H), 7.13 - 6.93 (m, 2H), 6.14 - 5.95 (m, 1H), 5.44 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 4.98 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.20 (s, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.09 (m, 1H), 0.50 - 0.38 (m, 2H), 0.31 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 626.0 (M+1), (ES-) 659.6 (M+Cl); Análisis calculado para C33H31N5OsHCM.5(H2O): C, 57.52; H, 5.12; Cl, 5.14; N, 10.16; Encontrado: C, 57.31; H, 5.06; Cl, 5.31; N, 10.05.
Figure imgf000043_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(isopropoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de metilo (20b)
El compuesto (20b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (1o) (0.15 g, 0.29 mmol) en DMF (10 mL) utilizando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.11 g, 0.36 mmol) y carbonato de 1 -cloroetilo e isopropilo (20a) (0.07 g, 0.43 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(isopropoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de metilo (20b) (0.09 g, 53% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.56 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.07 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.67 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 - 7.89 (m, 3H), 7.68 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 7.04 (q, J = 10.9 Hz, 2H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 12.5 Hz, 1H), 4.89 - 4.76 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.20 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.21 (d, J = 6.2 Hz, 7H), 1.09 (s, 1H), 0.43 (dt, J = 5.5, 5.0 Hz, 2H), 0.26 (q, J = 4.8 Hz, 2H). MS (ES-) 612.0 (M-1); Análisis calculado para C33H35N5O7 : C, 64.59; H, 5.75; N, 11.41; Encontrado: C, 64.29; H, 5.93; N, 11.24.
Figure imgf000043_0002
Preparación del (S)-3-(2-((4-(N-(2-amino-3-metilbutanoil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (21b) Etapa-1: Preparación del (S)-3-(2-((4-(N-(2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (21a) El compuesto (21a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (1o) (0.5 g, 0.95 mmol) en DMF (10 mL) usando EDCI (0.83 g, 2.25 mmol), HOBt (0.15 g, 1.14 mmol), TEA (0.34 mL, 2.44 mmol) y ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3metilbutanoico (0.21 g, 0.95 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 12 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-10%) el (S)-3-(2-((4-(N-(2-((terc-butoxicarbonilo)amino)-3-metilbutanoil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (21a) (0.48 g, 69% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.58 (s, 1H), 10.03 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.66 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.08-7.99 (m, 3H), 7.92 (s, 1H), 7.70 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.11 - 6.96 (m, 2H), 6.46 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 6.05 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J= 12.5 Hz, 1H), 4.00-3.91 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.20 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.30 - 2.10 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.13 - 1.01 (m, 1H), 0.89 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.82 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.47 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 749.1 (M+Na); Análisis calculado para C39 H46 N6 Os^(H2 O)0 .5 : C, 63.66; H, 6.44; N, 11.42; Encontrado: C, 63.43; H, 6.42; N, 11.18. Etapa-2: Preparación del (S)-3-(2-((4-(N-(2-amino-3-metilbutanoil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (21b)
El compuesto (21b) se preparó a partir del (S)-3-(2-((4-(N-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (21a) (0.12 g, 0.16 mmol) en diclorometano (4 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.5 mL, 6.36 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 4 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-10%) proporcionó el (S)-3-(2-((4-(N-(2-amino-3-metilbutanoil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (21b) (0.028 g, 24% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 811.41 (s, 1H), 10.56 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.66 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 - 7.84 (m, 4H), 7.79 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.10-6.98 (m, 2H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.06 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.20 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.24 - 2.05 (m, 1H), 1.15 - 0.73 (m, 7H), 0.49 - 0.20 (m, 4H).
Figure imgf000044_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(pivaloiloxi)etilo (22d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(pivaloiloxi)etilo (22b)
El compuesto (22b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.76 g, 2.00 mmol) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.59 g, 2.00 mmol) y pivalato de 1-cloroetilo (22a) (0.82 mL, 5.00 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 12 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(pivaloiloxi)etilo (22b) (0.67 g, 65% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.69 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.07 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.09 - 6.92 (m, 2H), 6.74 - 6.62 (m, 1H), 5.99 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.3, 1.1 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 3.24 (m, 2H), 1.21 (3, 3H), 1.10 (m, J = 12.6, 6.4 Hz, 1H), 1.01 (d, J = 5.4 Hz, 9H), 0.52 - 0.42 (m, 2H), 0.33 - 0.23 (m, 2H); MS (ES-): 543.3 (M+Cl); Análisis calculado para C28H32N2O7 0.7 5 H2O: C, 66.13; H, 6.34; N, 5.51; Encontrado: C, 65.75; H, 6.20; N, 5.37.
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((cidopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(pivaloiloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (22c)
La oxidación del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(pivaloiloxi)etMo (22b) (0.60 g, 1.19 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1 dio, después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-100%] el ácido 2-(6-((cidopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(pivaloiloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (22c) (0.5 g, 80% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 812.57 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.69 - 8.50 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.06 - 6.85 (m, 2H), 6.69 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 5.90 (dd, J = 17.8, 1.3 Hz, 1H), 5.39 (dd, J = 11.3, 1.2 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 4.1 Hz, 3H), 3.29 - 3.19 (m, 2H), 1.21 (d, J = 2.4 Hz, 3H), 1.10 (dd, J = 5.7, 3.2 Hz, 1H), 1.02 (d, J = 13.3 Hz, 9H), 0.50 - 0.42 (m, 2H), 0.32 - 0.25 (m, 2H); MS (ES+): MS (ES+) 525.1 (M+1), (ES-) 559.3 (M+Cl); Análisis calculado para C28H32N2O8.0.7 5 H2O: C, 62.50; H, 6.28; N, 5.21; Encontrado: C, 62.68; H, 6.36; N, 5.11.
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(pivaloiloxi)etilo (22d)
El compuesto (22d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((cidopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(pivaloiloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (22c) (0.47 g, 0.89 mmol) usando EDCI (0.26 g, I . 34 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.22 g, 1.07 mmol) en DMF (2.5 mL) y piridina (2.5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 12 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 100%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(pivaloiloxi)etilo (22d) (0.21 g, 35% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 810.72 (d, J = 16.9 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.15 (d, J = 53.7 Hz, 4H, D2O intercambiable), 8.52 (d, J = 28.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.00 (bs, 2H), 7.80 (s, 4H), 7.14 -6.91 (m, 2H), 6.72 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.24 (bs, 2H), 1.19 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 1.12 - 1.08 (m, 1H), 1.04 (s, 9H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.20 (m, 2H). MS (ES+): MS (ES+) 642.3 (M+1), (ES-) 676.1 (M+Cl); Análisis calculado para C28H32N2OyH2OHCl: C, 60.38; H, 6.08; N, 10.06; Cl, 5.09; Encontrado: C, 60.11; H, 6.22; N, 10.05; Cl, 5.11.
Figure imgf000045_0001
Preparación del ácido 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolmico (23f)
Etapa 1: Preparación del carbonato de 1-cloroetilo y (4-nitrofenilo) (23c)
A una mezcla de reacción enfriada con hielo de 4-nitrofenol (23a) (5 g, 35.9 mmol) y piridina (2.91 mL, 35.9 mmol) en DCM (300 mL) se añadió cloroformiato de 1-cloroetilo (23b) (5.65 g, 39.5 mmol). La reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche y se lavó con agua, NaOH acuoso al 0.5% y agua. La capa orgánica se secó y se concentró para dar el carbonato de 1-cloroetilo y 4-nitrofenilo (23c) (7.6 g, 86% de rendimiento) como un sólido blanquecino, que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 88.40 - 8.30 (m, 2H), 7.67 - 7.58 (m, 2H), 6.62 (q, J= 5.7 Hz, 1H), 1.87 (d, J= 5.7 Hz, 3H).
Etapa 2: Preparación de acetato de 1-((4-nitrofenoxi)carboniloxi)etilo (23d)
A una solución de carbonato de 1-cloroetilo y (4-nitrofenilo) (23c) (6.5 g, 26.5 mmol) en HOAc (50 mL) se añadió acetato de mercurio (10.29 g, 32.3 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente y se concentró al vacío hasta sequedad. El residuo se recogió en EtOAc/hexano (200 mL, 1:3, v/v), se filtró y el filtrado se concentró al vacío hasta sequedad. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-30%] para dar el acetato de 1-((4-nitrofenoxi)carboniloxi)etilo (23d) (4.2 g, 15.60 mmol, 59.0% de rendimiento) como un aceite transparente. 1 H NMR (300 MHz, DMSOd6 ) 88.40 - 8.26 (m, 2H), 7.64 - 7.51 (m, 2H), 6.74 (q, J= 5.5 Hz, 1H), 2.10 (s, 3H), 1.55 (d, J = 5.5 Hz, 3H).
Etapa-3: Preparación del ácido 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23e)
A una solución de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de metilo (1o) (1 g, 1.9 mmol) en metanol (10 mL) y THF (10 mL) se añadió NaOH 2 N (10 mL). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y luego se concentró para separar la mayor parte del metanol. La capa acuosa se acidificó con HCl 6 N a pH 6-7 y el sólido obtenido se recogió por filtración, se lavó con agua y éter para proporcionar al secar el ácido 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23e) (0.78 g, 80%) como un sólido blanquecino; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 812.67 (s, 1H), 9.11 (s, 2H), 8.97 (s, 2H), 8.74 (s, 1H), 7.90 (d, J = 7.8, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.72 - 7.58 (m, 4H), 6.99 (dd, J = 11.3, 17.7, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.95 (d, J = 17.2, 1H), 5.38 (d, J = 11.9, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.18 (s, 2H), 1.06 (s, 1H), 0.43 (d, J= 7.9, 2H), 0.25 (d, J= 4.7, 2H); MS (ES+) 514.0 (M+1); Análisis calculado para C2sH27N5O5.HCl.H2O: C, 59.21; H, 5.32; N, 12.33; Encontrado: C, 59.43; H, 5.21; N, 12.06.
Etapa-4: Preparación del ácido 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)- 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23f)
A una solución de NaOH (75 mg, 1.881 mmol) en acetona/H2O (13 mL, relación: 12:1) se añadió ácido 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23e) (0.5 g, 0.94 mmol), la mezcla se agitó durante 10 min a T.a. Luego se añadió acetato de 1-((4-nitrofenoxi)carboniloxi)etilo (23d) (0.76 mg, 2.82 mmol) y la mezcla resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con HOAc (5.0 mL), se concentró al vacío para eliminar la acetona y se diluyó con EtOAc y agua. La mezcla se extrajo con EtOAc (3x), las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron, se filtraron y se concentraron al vacío.
El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con DMA80 en DCM del 0 al 60%] para dar el ácido 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23f) (0.47 mg, 77% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 812.61 (brs, 1H, D2O intercambiable;, 9.17 (d, J = 31.6 Hz, 2H, D2O intercambiable;, 8.78 (t, J = 6.6 Hz, 1H, D2O intercambiable;, 7.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.88 - 7.81 (m, 2H), 7.78 (brs, 1H, D2O intercambiable;, 7.64 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.13 (s, 1H), 7.07 - 6.94 (m, 1H), 6.77 - 6.70 (m, 2H), 5.95 (dd, J= 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.37 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.19 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.41 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.11 - 0.99 (m, 1H), 0.50 - 0.38 (m, 2H), 0.30 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 644.6 (M+1); (ES-) 642.6 (M-1); Análisis calculado para C33H33N5O9.0.5 NH4CL0.5 H2O: C, 58.34; H, 5.34; N, 11.34; Encontrado: C, 58.08; H, 5.49; N, 11.50.
Figure imgf000047_0001
Preparación del ácido 6-((ciclopropNmetN)carbamoN)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (24c) y 6 -((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenM)picolinato de 2-hidroxietilo (24d)
Etapa 1: Preparación del carbonato de hexilo y (4-nitrofenilo) (24b)
A una solución agitada de hexan-1-ol (6.14 mL, 48.9 mmol) en THF (50 mL) enfriada a 0°C, se añadió TEA (15.01 mL, 108 mmol), carbonocloridato de 4-nitrofenilo (24a) (9.66 g, 46.5 mmol) y se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (100 mL) y el sólido separado se eliminó por filtración y se lavó con acetato de etilo (100 mL). El filtrado se lavó con salmuera (2 x 50 mL), se secó, filtró y concentró al vacío para dar el carbonato de hexilo y (4-nitrofenilo) (24b) (10.5 g, 8 0 % de rendimiento) como un jarabe amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 8.36 - 8.24 (m, 2H), 7.63 - 7.49 (m, 2H), 4.24 (t, J= 6 .6 Hz, 2H), 1.67 (dq, J= 8.2, 6.5 Hz, 2H), 1.45 - 1.14 (m, 6 H), 0.98 - 0.76 (m, 3H).
Etapa-2: Preparación del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (24c)
El compuesto (24c) se preparó a partir del ácido 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23e) (0.5 g, 0.94 mmol) añadido en acetona (20 mL), agua (2 mL), usando NaOH (94 mg, 2.35 mmol) y carbonato de hexilo y (4-nitrofenilo) (24b) (0.38 g, 1.41 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con DMA 80 en diclorometano al 0-100%) el ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (24c) (0.54 g, 89% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 11.25 (s, 1H), 9.08 (d, J = 6 .8 Hz, 1H), 8.24 - 8.05 (m, 1H), 7.98 - 7.75 (m, 4H), 7.75 - 7.53 (m, 2H), 7.10 -6.91 (m, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.00 (dd, J = 17.9, 1.6 Hz, 1H), 5.41 (dd, J = 11.2, 1.6 Hz, 1H), 3.99 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.51 - 3.28 (m, 2H), 1.57 (q, J= 6 .8 Hz, 2H), 1.40 - 1.17 (m, 6 H), 1.18 - 0.98 (m, 1H), 0.93 -0.78 (m, 3H), 0.54 - 0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+) 642.6 (M+1), (ES-) 640.7 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-hidroxietilo (24d)
El compuesto (24d) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (24c) (0.2 g, 0.39 mmol)) en DMF (5 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.11 g, 0.39 mmol) y 2-bromoetanol (42.8 mg, 0.34 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g, eluyendo con DMA 80 en diclorometano al 0-100%), el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-hidroxietilo (24d) (110 mg, 52% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 8 10.52 (s, 1H), 9.06 (d, J= 59.1 Hz, 2H, D2O intercambiable;, 8.68 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.98 - 7.86 (m, 3H), 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.11 - 6.96 (m, 2H), 6.04 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.43 (dd, J = 11.2, 1.6 Hz, 1H), 4.87 (t, J = 5.7 Hz, 1H, D2O intercambiable;, 4.20 - 3.90 (m, 4H), 3.89 (s, 3H), 3.46 - 3.24 (m, 2H), 3.21 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.58 (dt, J= 12.8, 6.3 Hz, 2H), 1.44 - 1.18 (m, 6H), 1.16 - 0.99 (m, 1H), 0.94 - 0.78 (m, 3H), 0.49 - 0.37 (m, 2H), 0.32 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 686.6 (M+1), 708.5 (M+Na), (ES-) 720.7 (M+Cl).
Figure imgf000048_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-hidroxietilo (25a)
El compuesto (25a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23f) (0.38 g, 0.58 mmol) en DMF (15 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.21 g, 0.73 mmol) y 2-bromoetanol (80 mg, 0.64 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 12 g, eluyendo con una mezcla de acetato de etilo y metanol 9:1 en hexanos al 0-70%) el 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-hidroxietilo (25a) (46 mg, 12% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.54 (s, 1H, D2O intercambiable;, 9.21 (d, J = 23.5 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.67 (t, J = 6.1 Hz, 1H, D2O intercambiable;, 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.99 - 7.89 (m, 3H), 7.67 (d, J= 8.9 Hz, 2H), 7.10 - 6.96 (m, 2H), 6.76 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.04 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.43 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 4.86 (t, J = 5.6 Hz, 1H, D2O intercambiable;, 4.03 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.34 - 3.28 (m, 2H), 3.21 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.43 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 1.13 - 1.02 (m, 1H), 0.48 -0.39 (m, 2H), 0.30 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 688.5 (M+1); 710.6 (M+Na); (ES-) 686.7 (M-1).
Figure imgf000048_0002
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de etilo (26a)
El compuesto (26a) se preparó a partir del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de etilo (5c) (0.2 g, 0.37 mmol) según el procedimiento descrito en el esquema 6. Esto dio después de tratamiento, purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 12 g, eluyendo con DMA80 en DCM al 0-40%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de etilo (26a) (75 mg, 33% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.52 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.05 (d, J = 61.8 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.65 (t, J = 6.1 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 9.5 Hz, 3H), 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.09 - 6.94 (m, 2H), 6.11 - 5.93 (m, 1H), 5.49 - 5.38 (m, 1H), 4.04 (q, J = 7.2 Hz, 4H), 3.89 (s, 3H), 3.20 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.15 - 1.02 (m, 1H), 0.91 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.48 - 0.38 (m, 2H), 0.31 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 636.5 (M+Na); (ES-) 612.7 (M-1); Análisis calculado para C33H35N5O7.0.5 H2O. C, 63.65; H, 5.83; N, 11.25; encontrado: C, 63.60; H, 6.09; N, 10.95.
Figure imgf000049_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de etilo (27a)
El compuesto (27a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (9c) (0.5 g, 0.94 mmol) en d Mf (15 m) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.35 g, 1.18 mmol) y bromoetano (0.11 mL, 1.42 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (Primera columna: gel de sílice 24 g, eluyendo con metanol en DCM al 0-100%; segunda columna: gel de sílice 24 g, eluyendo con metanol/acetato de etilo (1/9) en hexanos al 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de etilo (27a) (29 mg, 6% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.32 (s, 1H), 9.53 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.66 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.57 (s, 4H), 7.15 - 6.92 (m, 2H), 6.03 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.73 (bs, 2H, D2O intercambiable), 5.43 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.15 - 3.97 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.27 - 3.12 (m, 2H), 1.18 - 1.01 (m, 1H), 0.92 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.52 - 0.37 (m, 2H), 0.32 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+): 580.5 (M+Na); MS (ES-): 592.5 (M+Cl); Análisis calculado para C30H31N5O6 H2O: C, 62.60; H, 5.78; N, 12.17; encontrado: C, 62.84; H, 5.63; N, 12.10.
Figure imgf000049_0002
Preparación del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (28b)
Etapa 1: Preparación del carbonato de etilo y (4-nitrofenilo) (28a)
El compuesto (23a) se preparó a partir de 4-nitrofenol (23a) (6 g, 43.1 mmol), cloroformiato de etilo (4.68 g, 43.1 mmol) y TEA (12.02 mL, 86 mmol) en THF (300 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento el carbonato de etilo y (4-nitrofenilo) (28a) (5.6 g, 62% de rendimiento) como un sólido blanco, que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.38 - 8.21 (m, 2H), 7.64 - 7.45 (m, 2H), 4.29 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H); MS (ES+) 212.4 (M+1). Etapa-2: Preparación del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (28b)
El compuesto (28b) se preparó a partir del ácido 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23e) (1.68 g, 3.16 mmol) en acetona/agua (12 mL, 2:1), usando NaOH (0.28 g, 6.95 mmol) y carbonato de etilo y (4-nitrofenilo) (28a) (2 g, 9.47 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23.
Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (25 g de gel de sílice, eluyendo con DMA 60 en diclorometano al 0-100%) el ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonilo))-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (28b) (1.2 g, 65% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 m Hz , DMSO-cfe) 8 12.75 (brs, 1H, D2 O intercambiable), 10.77 (s, 1 H, D2O intercambiable), 9.48 - 8.88 (m, 3H, D2O intercambiable), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.00 - 7.81 (m, 4H), 7.72 - 7.59 (m, 2H), 7.10 - 6.92 (m, 2H), 6.02 (dd, J = 17.7, 1.5 Hz, 1H), 5.42 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 4.05 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.23 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.14 - 1.01 (m, 1H), 0.52 - 0.40 (m, 2H), 0.34 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 586.5 (M+1); (ES-) 584.5 (M-1).
Figure imgf000050_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (29d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (29b)
El compuesto (29b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (1.72 g, 4.52 mmol) en DMF (20 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (1.33 g, 4.52 mmol) e isobutirato de 1-cloroetilo (29a) (1.7 g, 4.52 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (29b) (1.777 g, 79% de rendimiento) como un jarabe amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.69 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.77 - 8.59 (m, 1H), 8.27 (dd, J = 8.1, 0.7 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.08 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 7.08 - 6.93 (m, 2H), 6.72 (p, J = 5.4 Hz, 1H), 6.00 (dt, J = 17.9, 1.3 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.3, 1.4 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 3.29 - 3.17 (m, 2H), 2.36 (dp, J = 15.6, 6.9 Hz, 1H), 1.21 (dd, J = 11.5, 5.5 Hz, 3H), 1.19 - 1.02 (m, 1H), 1.02 - 0.92 (m, 6H), 0.50 - 0.41 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 495.4 (M+1), 517.4 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4metoxi-5-vinilbenzoico (29c)
La oxidación del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (29b) (11.9 g, 24.06 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1 dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((cidopropNmetN)carbamoN)-2-((1-(isobutirNoxi)etoxi)carbonN)piridin-3-N)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (12.25 g, 100% de rendimiento) como un sólido amarillo. 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.57 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.62 (dt, J = 12.7, 6.1 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 8.0, 1.5 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.98 (ddd, J = 17.9, 11.3, 1.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.71 (tt, J = 5.4, 3.1 Hz, 1H), 5.91 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.39 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 3.27 - 3.20 (m, 2H), 2.37 (dq, J = 20.7, 6.9 Hz, 1H), 1.20 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.18 - 1.01 (m, 1H), 1.03 - 0.92 (m, 6H), 0.50 - 0.41 (m, 2H), 0.32 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 511.5 (M+1), 533.5 (M+Na), (ES-) 509.5 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoNfenN)carbamoN)-5-metoxi-4-vinNfenN)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (29d)
El compuesto (29d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((cidopropNmetN)carbamoN)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (1.5 g, 2.94 mmol) usando EDCI (0.85 g, 4.41 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (0.73 g, 3.53 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [C-18, 30 g, eluyendo con acetonitrilo-agua del 10 al 80%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (29d) (0.45 g, 23% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88 10.80 - 10.61 (m, 1H), 9.22 (s, 2H), 8.94 (s, 2H), 8.67 - 8.46 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.01 (s, 2H), 7.78 (s, 4H), 7.11 - 6.97 (m, 2H), 6.80 - 6.66 (m, 1H), 6.06 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 5.45 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.29 - 3.17 (m, 2H), 2.47 - 2.27 (m, 1H), 1.18 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.14 - 0.89 (m, 7H), 0.49 -0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 628.7 (M+1).
Figure imgf000051_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-morfolinoetilo (30a)
El compuesto (27a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (9c) (0.52 g, 0.98 mmol) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.36 g, 1.23 mmol) e hidrocloruro de 4-(2-cloroetil)morfolina (0.183 g, 0.984 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [EZ-PREP, columna C-18, 50 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y en acetonitrilo al 0-100%], seguido de liofilización el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N'-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-morfolinoetilo (30a) (54 mg, 9% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.83 (s, 1H, D2O intercambiable), 11.72 (s, 1H, D2O intercambiable), 11.13 (s, 1 H, D2O intercambiable), 10.95 (s, 1H), 8.90 (s, 3H, D2O intercambiable), 8.79 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.89 - 7.78 (m, 2H), 7.72 - 7.61 (m, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 2H), 6.10 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.51 - 5.35 (m, 1H), 4.68 - 4.33 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.81 - 3.69 (m, 4H), 3.27 - 2.88 (m, 8H), 1.16 - 0.93 (m, 1H), 0.46 - 0.37 (m, 2H), 0.29 - 0.20 (m, 2H); 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe D2O) 810.92 (s, 1H), 8.82 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.89 - 7.79 (m, 2H), 7.74 - 7.62 (m, 2H), 7.19 - 6.82 (m, 2H), 6.10 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.67 - 4.31 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.76 (s, 4H), 3.33 -2.89 (m, 8H), 1.17 - 0.95 (m, 1H), 0.48 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.18 (m, 2H); MS (ES+): 643.6 (M+1); MS (ES-): 641.8 (M-1), 677.6 (M+Cl); Análisis calculado para C34H3sN6O7-2.5H2O-2HCl: C, 53.69; H, 5.96; Cl, 9.32; N, 11.05; encontrado: C, 53.63; H, 5.95; Cl, 9.32; N, 10.99.
Figure imgf000052_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (31b)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (31a)
El compuesto (31a) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (10d) (0.7 g, 0.94 mmol) y cloroformiato de hexilo (1.541 mL, 9.42 mmol) seguido según el procedimiento descrito en el esquema 6. Esto dio después del tratamiento, la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida de fase inversa [gel de sílice 24 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonilo)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (31a) (115 mg, 14% de rendimiento) como un sólido blanquecino; MS (ES+): 871.81 (M+1).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (31b)
El compuesto (31b) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (31a) (0.11 g, 0.14 mmol) en diclorometano (5 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.22 mL, 2.88 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (EZ-PREP, columna C-18, 50 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y acetonitrilo al 0-60%), seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (31b) (0.031 g, 32% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 8 12.37 (bs, 1H, D2O intercambiable), 10.86 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.30 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.65 (bs, 4H, D2O intercambiable), 8.56 - 8.44 (m, 1H), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 - 7.96 (m, 2H), 7.91 - 7.69 (m, 4H), 7.15 - 6.94 (m, 2H), 6.10 (dd, J = 17.6, 1.5 Hz, 1H), 6.03 - 5.69 (m, 2H), 5.56 - 5.35 (m, 1H), 4.24 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.87 - 3.84 (m, 1H), 3.31 -3.19 (m, 2H), 2.20 - 1.95 (m, 1H), 1.75 - 1.60 (m, 2H), 1.46 - 1.21 (m, 6H), 1.14 - 1.02 (m, 1H), 0.98 - 0.77 (m, 9H), 0.56 - 0.37 (m, 2H), 0.36 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+): 771.7 (M+1), 772.7 (M+2), 793.6 (M+Na); MS (ES-): 805.8 (M+Cl); Análisis calculado para C41H50N6Og-3H2O-2HCl: C, 54.85; H, 6.51; N, 9.36; Cl, 7.90. Encontrado: C, 54.83; H, 6.15; N, 9.29; Cl, 7.68.
Figure imgf000053_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (32c)
Etapa-1: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de etilo (32a)
A una solución de 4-aminobencimidamida (1n) (4 g, 19.22 mmol) en acetona-agua (90 mL, relación: 2:1), se añadió una solución de NaOH (2.69 g, 67.3 mmol) en agua (30 mL) y se enfrió a °0 C. A esta solución se le añadió cloroformiato de etilo (2.09 g, 19.22 mmol) a 0°C y se agitó durante 20 min adicionales a 5-10°C. La reacción se diluyó con EtOAc (100 mL) y las fases se separaron. La fase orgánica se concentró al vacío. El residuo se recogió con EtOAc (50 mL) y se diluyó con una solución de HCl (3 mL) en EtOAc (20 mL). El sólido obtenido se recogió por filtración para dar sal de hidrocloruro de (4-aminofenil)(imino)metilcarbamato de etilo (32a) (3.5 g, 75% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 811.86 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.91 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.96 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.75 - 7.52 (m, 2H), 6.79 - 6.56 (m, 2H), 5.16 (brs, 3H, D2O intercambiable), 4.32 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H); MS (ES+) 208.3 (M+1); (ES') 242.3 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (32c)
El compuesto (32c) se preparó a partir del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (10c) (0.5 g, 0.8 mmol) usando EDCI (0.23 g, 1.2 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de etilo (32a) (0.21 g, 1.00 mmol) en piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 12 g, con DMA80 en DCM al 0-40%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (32c) (0.27 g, 41% de rendimiento) como un sólido blanco; MS (ES-) 813.9 (M-1);
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (32c)
El compuesto (32c) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (32c) (0.16 g, 0.2 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.303 mL, 3.93 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC prep. [columna C18, eluyendo con ACN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%], seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (32c) (0.046 g, 31% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 Mh z , DMSO-cfe) 8 12.36 (brs, 1H, D2O intercambiable), 11.21 (brs, 1H, D2O intercambiable), 10.85 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.39 br (s, 1H, D2O intercambiable), 8.62 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.49 (t, J = 6.0 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 7.85 - 7.71 (m, 4H), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 6.16 - 6.03 (m, 1H), 5.94 (d, J = 21.2 Hz, 1H), 5.87 - 5.73 (m, 1H), 5.51 - 5.40 (m, 1H), 4.32 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.89 (s, 4H), 3.28 - 3.17 (m, 2H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.14 - 1.00 (m, 1H), 0.93 - 0.82 (m, 6H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 715.7 (M+1); (ES') 749.7 (M+Cl).
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Preparación del ácido 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (33c)
Etapa-1: Preparación del (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (33a)
Una mezcla de carbonato de 1 -cloroetilo y 4-nitrofenilo (0.5 g, 2.04 mmol), Boc-L-valina (0.89 g, 4.07 mmol) y óxido de plata (0.47 g, 2.04 mmol) se mezcló y calentó en un baño de aceite precalentado a 90°C durante 15 min. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se trituró con EtOAc. Los sólidos inorgánicos se separaron por filtración, se lavaron con EtOAc (3 x). El filtrado se lavó con agua (4 x), solución acuosa saturada de NaHCO3, se secó, filtró y concentró al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-40%] para dar el (2S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (33a) (0.31 g, 35% de rendimiento). 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.39 - 8.29 (m, 2H), 7.61 - 7.49 (m, 2H), 7.32 (dd, J = 11.9, 7.8 Hz, 1H), 6.79 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 3.93 - 3.80 (m, 1H), 2.12 - 1.91 (m, 1H), 1.61 - 1.50 (m, 3H), 1.38 (d, J = 4.3 Hz, 9H), 0.96 - 0.83 (m, 6H); MS (ES+) 449.4 (M+Na)
Etapa-2: Preparación del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (33b) El compuesto (33b) se preparó a partir del ácido 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23e) (0.5 g, 0.94 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con DMA80 en DCM del 0 al 60% ] el ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (33b) (0.42 g, 56% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H NMR (300 m Hz , DMSO-cfe) 812.42 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.18 (d, J = 19.3 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.77 (t, J = 5.2 Hz, 1H, D2O intercambiable), 7.99 - 7.75 (m, 4H), 7.66 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.60 - 7.51 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 2H, D2O intercambiable), 7.00 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.86 - 6.79 (m, 1H), 6.77 (s, 1H, D2O intercambiable), 5.96 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.38 (dd, J = 11.3, 1.3 Hz, 1H), 3.89 - 3.73 (m, 4H), 3.18 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.05 - 1.85 (m, 1H), 1.45 - 1.30 (m, 12H), 1.14 - 0.98 (m, 1H), 0.93 - 0.77 (m, 6H), 0.53 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 801.7 (M+1); (ES-) 799.8 (M-1).
Etapa-3: Preparación del ácido 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolínico (33c)
El compuesto (33c) se preparó a partir del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (33b) (0.3 g, 0.38 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.303 mL, 3.93 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa [columna C18, eluyendo con ACN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el ácido 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (33c) (56 mg, 21% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.88 (brs, 1H, D2O intercambiable), 10.65 (d, J = 22.9 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.85 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.28 (t, J = 5.9 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.70 - 8.34 (m, 4H, D2O intercambiable), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 - 7.93 (m, 2H), 7.92 - 7.80 (m, 2H), 7.80 - 7.65 (m, 2H), 7.11 -6.90 (m, 3H), 6.05 (dd, J = 17.8, 1.7 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.3, 1.5 Hz, 1H), 4.04 - 3.94 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.24 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.24 - 2.10 (m, 1H), 1.56 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.17 - 1.03 (m, 1H), 1.03 - 0.85 (m, 6H), 0.54 - 0.42 (m, 2H), 0.34 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 701.6 (M+1); (ES-) 699.7 (M-1); Análisis calculado para: C36 H40 N6 Og .3.5H2O.1.75HCl: C, 52.25; H, 5.94; N, 10.15; Cl, 7.50. Encontrado: C, 52.26; H, 5.75; N, 10.14; Cl, 7.65.
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Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (34a)
El compuesto (34a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (19c) (0.38 g, 0.75 mmol) utilizando EDCI (0.22 g, 1.12 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de etilo (32a) (0.19 g, 0.9 mmol) en DMF (20 mL) y piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (12 g), eluyendo con EtOAc en hexano al 0-100%), el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (34a) (0.13 mg, 25% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.41 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.05 (d, J = 69.2 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.63 (t, J = 6.1 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.05 - 7.83 (m, 4H), 7.63 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.08 - 6.98 (m, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.04 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.43 (dd, J = 11.1, 1.5 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 4.04 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.28 - 3.13 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.21 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.14 - 0.99 (m, 1H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 720.5 (M+Na); (ES' ) 696.5 (M-1); Análisis calculado para C36H35N5O10: C, 61.97; H, 5.06; N, 10.04; encontrado: C, 61.81; H, 5.41; N, 9.99.
Figure imgf000055_0002
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (35a)
El compuesto (35a) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (19d) (0.93 g, 1.5 mmol) según el procedimiento descrito en el esquema 6. Esto dio después del tratamiento, purificación por cromatografía en columna ultrarrápida de fase inversa [gel de sílice 24 g, MeOH-EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (35a) (0.07 g, 6% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.41 (s, 1H), 9.31 - 8.81 (m, 2H), 8.64 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.96 - 7.85 (m, 3H), 7.63 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.09 - 6.93 (m, 2H), 6.04 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.47 - 5.38 (m, 1H), 4.97 (d, J = 3.1 Hz, 2H), 3.99 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.25 -3.16 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.66 - 1.50 (m, 2H), 1.40 - 1.16 (m, 6H), 1.16 - 1.01 (m, 1H), 0.93 - 0.80 (m, 3H), 0.49 - 0.38 (m, 2H), 0.31 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 754.7 (M+1).
Figure imgf000056_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (36b)
Etapa-1: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a)
El compuesto (36a) se preparó a partir del dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (5.98 g, 28.7 mmol) en acetona (225 mL), usando solución acuosa de NaOH 1 M (60.3 mL, 60.3 mmol) y carbonato de hexilo y (4-nitrofenilo) (24b) (10.75 g, 40.2 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 80 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%) el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (5.24 g, 69% de rendimiento) como un semisólido; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.15 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.80 -7.69 (m, 2H), 6.58 - 6.52 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 3.97 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.65 - 1.50 (m, 2H), 1.39 - 1.21 (m, 6H), 0.94 - 0.79 (m, 3H); MS (ES+) 264.3 (M+1), 286.4 (M+23), 527.6 (2M+1), (ES-) 262.4 (M-1).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (36b)
El compuesto (36b) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (2.23 g, 4.37 mmol) utilizando EDCI (1.01 g, 5.24 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (1.15 g, 4.37 mmol) en piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 120 g, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (36b) (1.7 g, 51.5% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.67 - 10.31 (m, 1H), 9.33 - 8.70 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.68 - 8.42 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.05 - 7.95 (m, 2H), 7.92 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.77 - 7.54 (m, 2H), 7.15 - 6.91 (m, 2H), 6.80 - 6.63 (m, 1H), 6.05 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.99 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.30 - 3.18 (m, 2H), 2.47 - 2.28 (m, 1H), 1.67 - 1.49 (m, 2H), 1.41 - 1.22 (m, 6H), 1.17 (d, J = 5.2 Hz, 3H), 1.14 - 1.03 (m, 1H), 1.07 - 0.89 (m, 6H), 0.92 - 0.77 (m, 3H), 0.53 - 0.37 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H); Análisis calculado para C41H49N5O9.2.2 5 H2O: C, 61.83; H, 6.77; N, 8.79; Encontrado: C, 61.77; H, 6.60; N, 8.82.
Figure imgf000057_0001
Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (2-aminoacetoxi)metilo (37e)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de clorometilo (37a)
A una solución enérgicamente agitada de ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (2 g, 5.26 mmol) en EtOAc (40 mL), agua (40 mL) se añadió hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (0.18 g, 0.53 mmol), sulfocloridato de clorometilo (0.64 mL, 6.31 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2 x 70 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (80 mL), salmuera, se secaron (MgSO4 ), se filtraron y se concentraron al vacío hasta sequedad para proporcionar el producto bruto. El producto bruto resultante se suspendió en hexano (80 mL) y se sometió a sonicación durante unos minutos. La capa de hexano se decantó y el sólido resultante se secó al vacío para proporcionar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de clorometilo (37 a) (2.4 g, 106% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.71 (s, 1H), 8.75 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.21 - 8.05 (m, 2H), 7.09 - 6.94 (m, 2H), 6.01 (dd, J = 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.94 - 5.86 (m, 2H), 5.44 (dd, J = 11.3, 1.4 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.24 (h, J = 6.7 Hz, 2H), 1.17 - 1.03 (m, 1H), 0.52 - 0.40 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-((tercbutoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (37b)
El compuesto (37b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de clorometilo (37 a) en d Mf (15 mL) utilizando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (1.07 g, 3.64 mmol) y Boc-glicina (0.74 g, 4.20 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-((terc-butoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (37b) (0.42 g, 26% de rendimiento) como una espuma incolora; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.69 (s, 1H), 8.70 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 7.09 - 6.93 (m, 2H), 6.02 (dd, J = 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.77 (q, J = 6.1 Hz, 2H), 5.45 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.70 - 3.62 (m, 2H), 3.30 - 3.18 (m, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.20 - 1.02 (m, 1H), 0.51 - 0.40 (m, 2H), 0.33 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 590.5 (M+Na).
Etapa-3: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (37c)
La oxidación del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-((tercbutoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (37b) (0.4 g, 0.71 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (37c) (0.4 g, 97% de rendimiento) como un sólido amarillo claro; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfó) 812.57 (s, 1H), 8.63 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.98 - 5.86 (m, 1H), 5.83 - 5.71 (m, 2H), 5.39 (dd, J = 11.3, 1.4 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.68 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 3.24 (q, J = 7.5, 6.3 Hz, 2H), 1.36 (s, 9H), 1.18 - 0.99 (m, 1H), 0.52 - 0.41 (m, 2H), 0.33 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 606.5 (M+Na), MS (ES-) 582.6 (M-1).
Etapa-4: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (2-((terc-butoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (37d)
El compuesto (37d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (37c) (0.58 mg, 1.00 mmol) usando EDCI (0.29 g, 1.5 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (0.26 g, 1.25 mmol) en piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (2-((tercbutoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (37d) (0.7 g, 100% de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. MS (ES+) 701.6 (M+1), (ES-) 735.7 (M+Cl).
Etapa-5: Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (2-aminoacetoxi)metilo (37e)
El compuesto (37e) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (2-((terc-butoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (37d) (0.7 g, 1.0 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (1.54 mL, 20.00 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 100 g) eluyendo con HCl al 0.1% y acetonitrilo, seguido de liofilización, el hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (2-aminoacetoxi)metilo (37e) (65 mg, 10% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.74 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.33 - 9.07 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.96 - 8.76 (m, 3H, D2O intercambiable), 8.61 (s, 1H), 8.24 (dd, J = 8.1,3.8 Hz, 1H), 8.08 - 7.97 (m, 2H), 7.77 (d, J = 3.8 Hz, 4H), 7.10 - 6.93 (m, 2H), 6.08 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.94 - 3.86 (m, 3H), 3.79 - 3.70 (m, 2H), 3.22 (s, 4H), 1.16 - 0.99 (m, 1H), 0.51 - 0.40 (m, 2H), 0.33 -0.22 (m, 2H); MS (ES+) 601.5 (M+1); (ES-) 635.6 (M+Cl); Análisis calculado para: C31H32N6O7.2.7 5 HCM.2 5 H2O: C, 51.47; H, 5.19; N, 11.62; encontrado: C, 51.20; H, 5.44; N, 11.65.
Figure imgf000058_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (38d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (38b)
El compuesto (38b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (1.33 g, 3.5 mmol) en DMF (15 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (1.28 g, 4.38 mmol) y carbonato de 1 -cloroetilo e isopropilo (38a) (0.875 g, 5.25 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (38b) (1.23 g, 69% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H nMr (300 MHz, DMsO-cfe) 89.69 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.69 (dt, J = 6.3, 3.1 Hz, 1H), 8.27 (dd, J = 8.0, 2.5 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 - 6.89 (m, 2H), 6.72 - 6.51 (m, 1H), 6.11 - 5.94 (m, 1H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.3 Hz, 1H), 4.69 (h, J = 6.2 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 3.31 - 3.16 (m, 2H), 1.32 - 0.96 (m, 10H), 0.54 - 0.39 (m, 2H), 0.35 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+): 511.5 (M+1), 533.5 (M+Na); MS (ES-): 509.5 (M-1).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3- il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (38b) (1.15 g, 2.26 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (1.13 g, 95% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 812.60 (s, 1H), 8.73 - 8.55 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 17.7, 11.3 Hz, 1H), 6.88 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 6.72 -6.53 (m, 1H), 5.91 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.39 (dd, J = 11.3, 1.4 Hz, 1H), 4.84 - 4.59 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.33 - 3.13 (m, 2H), 1.31 - 1.08 (m, 10H), 0.51 - 0.42 (m, 2H), 0.34 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+): 527.5 (M+1), 549.4 (M+Na); MS (ES-): 525.5 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (38d)
El compuesto (38d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (0.7 g, 1.33 mmol) usando EDCI (0.38 g, 2.0 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (0.42 g, 2.00 mmol) en DmF (12 mL) y piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 40 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 100%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (38d) (0.33 g, 39.0% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1H NMR (300 Mhz, DMSO-cfe) 8 10.97 - 10.50 (bs, 1H, D2O intercambiable), 9.22 (bs, 2H, D2O intercambiable), 8.96 (bs, 2H, D2O intercambiable), 8.75 - 8.44 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.93 (m, 2H), 7.78 (d, J = 8.1 Hz, 4H), 7.04 (dd, J = 17.9, 11.2 Hz, 2H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.07 (dd, J = 17.9, 1.5 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.70 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.32-3.16 (m, 2H), 1.35 - 0.91 (m, 10H), 0.57 - 0.37 (m, 2H), 0.34 - 0.20 (m, 2H).MS (ES+): 644.6 (M+1); MS (ES-): 678.6 (M+Cl); Análisis calculado para: C34 H37 N5 Oa -1.75HCl0.75H2 O: C, 56.64; H, 5.63; Cl, 8.61; N, 9.71. Encontrado: C, 56.62; H, 5.49; Cl, 8.77; N, 9.80.
Figure imgf000059_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5 metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (39a)
El compuesto (39a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (0.4 g, 0.76 mmol) usando EDCI (0.22 g, 1.14 mmol) y (4-aminofenil)(imino)metilcarbamato de hexilo (36a) (0.3 g, 1.14 mmol) en DMF (12 mL) y piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (primera columna: gel de sílice, 40 g, eluyendo con metanol en cloroformo del 0 al 100%; segunda columna: gel de sílice, 24 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (39a) (0.15 g, 26% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.64 - 10.38 (2bs, 1H, D2O intercambiable), 8.95 (s, 3H, D2O intercambiable), 8.71 - 8.49 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.04 - 7.97 (m, 2H), 7.96 - 7.89 (m, 2H), 7.78 - 7.56 (m, 2H), 7.15 - 6.93 (m, 2H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.05 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.54 - 5.32 (m, 1H), 4.87 - 4.55 (m, 1H), 3.99 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.26 - 3.20 (m, 2H), 1.57 (s, 2H), 1.41 - 1.23 (m, 6H), 1.23 - 0.93 (m, 10H), 0.94 - 0.78 (m, 3H), 0.50 - 0.38 (m, 2H), 0.35 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+): 772.6 (M+1), 794.6 (M+Na); (ES-): 806.8 (M+Cl); Análisis calculado para C41H49N5O1 0 0.5 H2O: C, 63.06; H, 6.45; N, 8.97; Encontrado: C, 62.93; H, 6.43; N, 9.21.
Figure imgf000060_0001
Preparación del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (40a)
Etapa-1: Preparación del isobutirato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (40a)
El compuesto (40a) se preparó a partir de carbonato de 1 -cloroetilo y 4-nitrofenilo (23c) (10 g, 40.7 mmol), ácido isobutírico (11.33 mL, 122 mmol) y óxido de plata (9.43 g, 40.7 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 33. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 120 g, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-100%] el isobutirato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (40a) (6.16 g, 51% de rendimiento) como un aceite transparente; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.40 - 8.26 (m, 2H), 7.62 - 7.51 (m, 2H), 6.74 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 2.61 (dt, J = 14.0, 7.0 Hz, 1H), 1.55 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.10 (dd, J = 6.9, 0.7 Hz, 6H). Etapa-2: Preparación del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (40a)
El compuesto (40a) se preparó a partir del ácido 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23e) (3.0 g, 5.64 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 80 g, eluyendo con DMA80 en DCM del 0 al 100%] el ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (40a) (0.40 g, 11% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.47 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.23 (s, 1H), 9.13 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.77 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.92 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.88 - 7.78 (m, 3H), 7.65 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.23 - 7.05 (m, 1H, D2O intercambiable), 7.01 (dd, J = 17.7, 11.3 Hz, 1H), 6.84 - 6.65 (m, 2H), 5.96 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.38 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.18 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.56 - 2.45 (m, 1H), 1.42 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.14 - 0.95 (m, 7H), 0.50 - 0.37 (m, 2H), 0.30 - 0.18 (m, 2H); MS (ES+) 672.4 (M+1) 694.4, (ES-) 670.5 (M-1).
Figure imgf000061_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((terc-butoxicarbonil)oxi)etilo (41a)
El compuesto (41a) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(pivaloMoxi)etilo (22d) (0.41 g, 0.77 mmol) usando EDCI (0.22 g, 1.16 mmol) y (4-aminofenil)(imino)metilcarbamato de hexilo (36a) (0.31 g, 1.16 mmol) en DMF (12 mL) y piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida ((gel de sílice, 40 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((terc-butoxicarbonil)oxi)etilo (41a) (0.19 g, 31% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, dMsO-cfe) 8 10.70 - 10.34 (2bs, 1H, D2O intercambiable), 9.13 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.94 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.68 - 8.37 (m, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 - 7.83 (m, 4H), 7.81 - 7.53 (m, 3H), 7.14 -6.91 (m, 2H), 6.78 - 6.64 (m, 1H), 6.05 (dd, J = 17.7, 1.5 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 3.99 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.31 - 3.17 (m, 2H), 1.68 - 1.49 (m, 2H), 1.42 - 0.74 (m, 22H), 0.52 - 0.40 (m, 2H), 0.34 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+): 770.7 (M+1); MS (ES-): 768.7 (M-1); Análisis calculado para C42H51N5O9 0 .2 5 H2O: C, 65.14; H, 6.70; N, 9.04. Encontrado: C, 65.02; H, 6.78; N, 9.09.
Figure imgf000061_0002
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato 1 -(isobutiriloxi)etilo (42a)
El compuesto (42a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.2 g, 0.39 mmol) utilizando EDCI (0.083 g, 0.43 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de etilo (32a) (0.095 g, 0.39 mmol) en DMF (2 mL) y piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 4 g, eluyendo con acetato de etilo en DCM al 0-60%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (42a) (0.045 g, 16% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 810.60 - 10.40 (m, 1H), 9.28 - 8.78 (m, 2H), 8.68 - 8.44 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.06 - 7.86 (m, 3H), 7.75 - 7.56 (m, 3H), 7.12 - 6.95 (m, 2H), 6.73 (brs, 1H), 6.05 (dd, J = 17.7, 1.5 Hz, 1H), 5.50 - 5.38 (m, 1H), 4.04 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.30 - 3.16 (m, 2H), 2.47 - 2.30 (m, 1H), 1.32 -0.76 (m, 13H), 0.49 - 0.40 (m, 2H), 0.31 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 700.5 (M+1), 722.5 (M+Na), MS (ES-): 698.5 (M-1).
Figure imgf000062_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (43a)
El compuesto (43a) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (38d) (3.0 g, 4.66 mmol) según el procedimiento descrito en el esquema 6. Esto dio después del tratamiento, purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 80 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%; segunda columna: EZ-PREP, columna C-18, 30 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y acetonitrilo al 0-50%], seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(etoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (43a) (0.42 g, 13% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.34 y 11.07 (2bs, 1H, D2O intercambiable), 10.81 y 10.74 (2bs, 1H), 10.34 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.65 y 8.56 (2bs, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.10 - 7.93 (m, 2H), 7.89 - 7.65 (m, 5H), 7.16 - 6.87 (m, 2H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.08 (dd, J = 17.7, 1.6 Hz, 1H), 5.58 -5.30 (m, 1H), 4.87 - 4.55 (m, 1H), 4.31 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.31 - 3.14 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 1.16 (h, J = 7.1 Hz, 10H), 0.54 - 0.37 (m, 2H), 0.35 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+): 716.7 (M+1); MS (ES-): 750.7 (M+Cl); Análisis calculado para C37H41N5O10-1.7 5 H2O-1.0 HCl: C, 56.70; H, 5.85; N, 8.94; encontrado: C, 56.94; H, 5.66; N, 9.08.
Figure imgf000062_0002
Preparación del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolínico (44b)
El compuesto (44b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23 a partir del ácido 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolínico (23e) (0.28 g, 0.52 mmol) en acetona/agua (13 mL, 12:1), utilizando NaOH (46 mg, 1.15 mmol) y carbonato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo y (4-nitrofenilo) (44a) (0.385 g, 1.30 mmol, preparado según el procedimiento publicado por Rahmathullah, Syed M. et al.; en Journal of Medicinal Chemistry, 42(19), 3994-4000; 1999). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [columna C18, eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100% ] seguido de liofilización, el ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolínico (44b) (85 mg, 24% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 8 12.88 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.72 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.21 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.27 (t, J = 6.0 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 - 7.93 (m, 2H), 7.84 - 7.70 (m, 4H), 7.10 - 6.94 (m, 2H), 6.04 (dd, J = 17.7, 1.6 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.6 Hz, 1H), 5.19 (s, 2H), 5.06 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.24 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.16 -1.00 (m, 1H), 0.55 - 0.41 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 670.5 (M+1); (ES-) 668.6 (M-1); Análisis calculado para C34H31N5O10.HCL2.5 H2O: C, 54.37; H, 4.96; N, 9.32; encontrado: C, 54.52; H, 4.74; N, 8.97.
Figure imgf000063_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-aminoacetoxi)metilo (45b)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-((tercbutoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (45a)
El compuesto (45a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (37c) (0.3 g, 0.51 mmol) usando EDCI (0.12 g, 0.62 mmol) y (4-aminofenil)(imino)metilcarbamato de hexilo (36a) (0.15 g, 0.57 mmol) en piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g, eluyendo con metano l/EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-((tercbutoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (45a) (0.23 g, 53% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.63 (s, 1H), 8.60 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.72 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.26 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 7.11 - 6.95 (m, 2H), 6.13-6.00 (m, 1H), 5.85 - 5.64 (m, 2H), 5.49-5.39 (m, 1H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.62 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.29 - 3.14 (m, 2H), 1.73 - 1.55 (m, 2H), 1.46 - 0.76 (m, 19H), 0.51 - 0.40 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 829.8 (M+1), MS (ES-) 863.8 (M+Cl). Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-aminoacetoxi)metilo (45b)
El compuesto (45b) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-((tercbutoxicarbonil)amino)acetoxi)metilo (45a) (0.21 g, 0.25 mmol) en diclorometano (4 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.4 mL, 0.58 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida preparativa de fase inversa (C18, 26 g, eluyendo con Hcl acuoso al 0.1% y acetonitrilo del 0 al 50%) seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (2-aminoacetoxi)metilo (45b) (0.095 g, 51% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 812.33 (brs, 1H), 10.82 (s, 1H), 10.35 (brs, 1H), 8.62 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.48 (brs, 3H), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.85 - 7.69 (m, 4H), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 6.16-6.04 (m, 1H), 5.92 - 5.76 (m, 2H), 5.51-5.40 (m, 1H), 4.32 - 4.19 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.82 - 3.67 (m, 2H), 3.30 - 3.15 (m, 2H), 1.74 - 1.59 (m, 2H), 1.44 - 1.21 (m, 6H), 1.18 - 1.01 (m, 1H), 0.94 - 0.81 (m, 3H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+): 729.7 (M+1).
Figure imgf000064_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutirMoxi)etMo (46b)
Etapa-1: Preparación del acetato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (46a)
El compuesto (46a) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (1.33 g, 6.37 mmol) en acetona/agua (26 mL, 12:1), utilizando solución de NaOH (0.54 g, 13.37 mmol) y acetato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (23d) (2.4 g, 8.92 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 80 g, eluyendo con 0-70% de acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos) el acetato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (46a) (1.2 g, 71% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.18 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.85 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.81 - 7.69 (m, 2H), 6.76 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.60 - 6.48 (m, 2H), 5.93 (s, 2H, D2O intercambiable), 2.01 (s, 3H), 1.42 (d, J = 5.4 Hz, 3H); MS (ES+) 266.4 (M+1); (ES+) 264.4 (M-1).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (46b)
El compuesto (46b) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (1.6 g, 3.13 mmol) usando EDCI (0.78 g, 4.07 mmol) y acetato de 1-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (46a) (0.91 g, 3.45 mmol) en piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía de fase inversa [C18, 100 g, acetonitrilo - agua (HCl al 0.1%), del 10% al 80% como eluyentes] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (46b) (0.62 g, 26% de rendimiento) sal de HCl como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.76 - 10.56 (m, 1H), 8.67 -8.46 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.00 (s, 2H), 7.88 - 7.64 (m, 4H), 7.19 - 6.95 (m, 2H), 6.89 - 6.79 (m, 1H), 6.81 - 6.67 (m, 1H), 6.06 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.49 - 5.40 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.29 - 3.17 (m, 2H), 2.47 - 2.29 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.49 (t, J = 5.4 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.16 - 0.98 (m, 1H), 1.03 - 0.89 (m, 6H), 0.49 - 0.40 (m, 2H), 0.33 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+): 758.7 (M+1).
Figure imgf000064_0002
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6 ((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (47a)
El compuesto (47 a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (2.5 g, 4.75 mmol) usando EDCI (1.09 g, 5.70 mmol) y acetato de 1-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (46a) (1.32 g, 5 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con MeOH-EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100%] el 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (47a) (1.84 g, 50% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.66 - 10.44 (m, 1H), 9.34 - 9.09 (m, 2H), 8.70 - 8.48 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.89 (m, 3H), 7.77 - 7.59 (m, 3H), 7.13 - 6.95 (m, 2H), 6.76 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.06 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.79 - 4.62 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.28 - 3.16 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.42 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.24 - 1.03 (m, 10H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 774.7 (M+1).
Figure imgf000065_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (48b)
Etapa-1: Preparación de isobutirato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a)
El compuesto (48a) se preparó a partir del dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.27 g, 1.31 mmol) en acetona (10 mL), usando solución acuosa de NaOH 1 N (2.75 mL, 2.75 mmol) e isobutirato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (40a) (0.58 g, 1.96 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 12 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%) el isobutirato de 1-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a) (0.28 g, 72% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.19 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.85 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.87 - 7.69 (m, 2H), 6.77 (q, J= 5.4 Hz, 1H), 6.66 - 6.47 (m, 2H), 5.94 (s, 2H, D2O intercambiable), 2.71 - 2.31 (m, 1H), 1.42 (d, J= 5.4 Hz, 3H), 1.06 (dd, J= 7.0, 6.0 Hz, 6H); MS (ES+) 294.4 (M+1), 316.4 (M+Na), (ES-) 292.4 (M-1), 328.4 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (48b)
El compuesto (48b) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.51 g, 1.0 mmol) utilizando EDCI (0.24 g, 1.24 mmol) e isobutirato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a) (0.32 g, 1.1 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 25 g eluyendo con mezcla de acetato de etilo y metanol (9:1) en hexanos del 0 al 100%] el 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoilo)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (48b) (0.21 g, 26% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.53 (d, J= 25.5 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.22 (d, J = 25.3 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.57 (d, J= 28.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 17.7 Hz, 4H), 7.80 -7.56 (m, 2H), 7.10 - 6.95 (m, 2H), 6.83 - 6.68 (m, 2H), 6.17 - 5.94 (m, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.22 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.61 - 2.30 (m, 2H), 1.43 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.05 (dd, J = 7.0, 5.3 Hz, 6H), 1.05 -0.88 (m, 7H), 0.50 - 0.40 (m, 2H), 0.32 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 786.7 (M+1), 808.7 (M+Na), (ES-) 784.8 (M-1); Análisis calculado para C41H47N5O11.0.5 H2O: C, 61.95; H, 6.09; N, 8.81; Encontrado: C, 61.98; H, 6.16; N, 8.81.
Figure imgf000066_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (49a)
El compuesto (49a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (0.51 g, 0.96 mmol) usando EDCI (0.28 g, 1.44 mmol) e isobutirato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a) (0.31 g, 1.06 mmol)) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con MeOH-EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (49a) (0.22 g, 29% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.55 (d, J= 28.4 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.23 (d, J= 23.0 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J = 25.5 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.11 - 7.89 (m, 5H), 7.77 - 7.60 (m, 1H), 7.10 - 6.96 (m, 2H), 6.77 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.06 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.24 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.61 - 2.38 (m, 1H), 1.43 (d, J= 5.4 Hz, 3H), 1.32 - 0.96 (m, 16H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 802.7 (M+1), (ES-) 836.9 (M+Cl); Análisis calculado para C41 H47 N5 O12 (H2 O)0 .75 : C, 60.73; H, 5.97; N, 8.64; encontrado; C, 60.75; H, 6.07; N, 8.57.
Figure imgf000067_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50a)
El compuesto (50a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de clorometilo (37 a) (1.25 g, 2.91 mmol) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (1.07 g, 3.64 mmol) y ácido (S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoico (0.87 g, 3.5 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50a) (0.77 g, 43% de rendimiento) como un jarabe espeso amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.69 (s, 1H), 8.66 (t, J= 5.9 Hz, 1H), 8.28 (dd, J = 7.9, 0.9 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 7.8, 3.5 Hz, 1H), 7.08 - 6.93 (m, 2H), 6.01 (dd, J = 17.8, 1.3 Hz, 1H), 5.81 (dd, J= 8.5, 5.9 Hz, 1H), 5.73 (dd, J = 5.9, 1.4 Hz, 1H), 5.45 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 3.95 (dd, J = 8.2, 3.8 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 1.1 Hz, 3H), 3.25 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 1.65 - 1.39 (m, 2H), 1.34 (s, 9H), 1.25 (dq, J = 7.1, 4.0, 3.0 Hz, 1H), 1.14 - 0.98 (m, 1H), 0.84 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.81 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.52 - 0.42 (m, 2H), 0.33 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 624.4 (M+1), 646.6 (M+Na), (ES-) 658.8 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isobutil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (50b)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50a) (0.75 g, 1.20 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isobutil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (50b) (0.85 g, 111% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, Dm So -cfe) 812.57 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.68 - 8.50 (m, 1H), 8.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.05 - 6.82 (m, 2H), 5.98 - 5.68 (m, 3H), 5.39 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 4.03 -3.89 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.31 - 3.19 (m, 2H), 1.40 - 1.31 (m, 10H), 1.29 - 1.19 (m, 1H), 0.89 - 0.76 (m, 8H), 0.53 - 0.42 (m, 2H), 0.33 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 662.6 (M+Na), (ES-) 638.6 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50c)
El compuesto (50c) se preparó a partir del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isobutil-10,10- dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (50b) (0.32 mg, 0.5 mmol) usando EDCI (1.5 equiv.) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.17 g, 0.63 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50c) (0.44 g, 99% de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.55 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.05 (d, J= 59.7 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.54 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.31 -8.14 (m, 1H), 8.02 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.99 - 7.82 (m, 3H), 7.67 (d, J = 8.7 Hz, 3H), 7.32 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.11 - 6.91 (m, 2H), 6.12 - 5.99 (m, 1H), 5.81 (dd, J= 38.6, 24.4 Hz, 3H), 5.50 - 5.37 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.62 (t, J= 15.3 Hz, 1H), 1.58 (d, J= 7.0 Hz, 2H), 1.30 (d, J= 8.7 Hz, 16H), 0.96 - 0.70 (m, 12H), 0.52 -0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 908.5 (M+Na), (ES-) 920.6 (M+Cl).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50d)
El compuesto (50d) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50c) (0.43 g, 0.49 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.75 mL, 9.72 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 26 g) eluyendo con HCl al 0.1% y acetonitrilo seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-4-metilpentanoil)oxi)metilo (50d) (0.15 g, 38% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-afe) 8 10.74 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.47 - 9.87 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.71 - 8.29 (m, 4H, 3H D2O intercambiable), 8.23 (s, 1H), 8.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.83 - 7.69 (m, 4H), 7.12 - 6.97 (m, 2H), 6.05 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.90 (s, 1H), 5.82 (s, 1H), 5.46 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 4.22 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.99 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.22 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 1.76 - 1.58 (m, 2H), 1.54 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.44 - 1.19 (m, 7H), 1.17 - 0.99 (m, 1H), 0.93 - 0.84 (m, 3H), 0.84 - 0.73 (m, 6H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 785.7 (M+1), 807.7 (M+Na); Análisis calculado para: C42H52N6O9.2 CF3CO2H.2 H2O: C, 52.42; H, 5.55; N, 7.97. Encontrado: C, 52.57; H, 5.30; N, 7.85.
Figure imgf000068_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (51b)
El compuesto (51b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2 a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (1.21 g, 2.29 mmol) usando EDCI (0.53 g, 2.75 mmol) y 4-amino-N'-hidroxibencimidamida (51a) (0.35 g, 2.29 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Lin, Chia-Chi et al.; en Organic Letters, 16(3), 892-895; 2014) en DMF (15 mL) y piridina (5 mL). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 40 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos del 0 al 100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-hidroxicarbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (51b) (0.14 g, 9% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 88.71 - 8.55 (m, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.93 (m, 1H), 7.35 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.00 (dd, J = 17.9, 11.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 6.63 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 6.56-6.46 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 6.09 (dd, J= 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.50 (s, 2H, D2O intercambiable), 5.44 (dd, J = 11.3, 1.5 Hz, 1H), 4.87 - 4.61 (m, 1H), 3.88 y 3.87 (2s, 3H), 3.24 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.34-1.02 (m, 10H), 0.53 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+): 660.57 (M+1), 682.57 (M+Na); MS (ES-): 658.6 (M-1), 694.5 (M+Cl); Análisis calculado para: C34H37N5O9 0 .7 5 H2O: C, 60.66; H, 5.76; N, 10.40; encontrado: C, 60.67; H, 5.78; N, 10.38.
Esquema 52
Figure imgf000069_0001
Preparación del 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(5-metoxi-2-((4-(5-oxo-4,5-dihidro-1,2,4-oxadiazol-3-il)fenil)carbamoil)-4-vinMfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (52b)
El compuesto (52b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2 a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (0.5 g, 0.95 mmol) utilizando EDCI (0.27 g, 1.42 mmol) y 3-(4-aminofenil)-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (52a) (0.18 g, 1.04 mmol, n° CAS 864680-71-7) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 25 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos en hexanos del 0 al 100%) el 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(5-metoxi-2-((4-(5-oxo-4,5-dihidro-1,2,4-oxadiazol-3-il)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (52b) (0.17 g, 26% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.88 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.61 (d, J= 26.7 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 24.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.93 (m, 2H), 7.85 - 7.64 (m, 4H), 7.13 - 6.94 (m, 2H), 6.64 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.06 (dd, J= 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.51 - 5.37 (m, 1H), 4.81 - 4.56 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.24 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.17 (t, J = 7.0 Hz, 9H), 1.08 (dq, J = 8.0, 4.8, 4.1 Hz, 1H), 0.44 (dt, J = 8.1, 2.9 Hz, 2H), 0.33 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 686.5 (M+1), 708.6 (M+Na), (ES-) 684.7 (M-1), 720.6 (M+Cl); Análisis calculado para C35H35N5O10.H2O: C, 59.74; H, 5.30; N, 9.95; Encontrado: C, 60.15; H, 5.32; N, 10.02.
Figure imgf000069_0002
Preparación del 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(5-metoxi-2-((4-(5-oxo-4,5-dihidro-1,2,4-oxadiazol-3-il)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (53a)
El compuesto (52b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2, a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.4 g, 0 .7 8 mmol) usando EDCI (0.19 g, 0.98 mmol) y 3-(4-aminofenil)-1,2,4-oxadiazol-5(4H)-ona (52a) (0.21 g, 1.18 mmol, n° CAS 864680-71-7) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 25 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos en hexanos del 0 al 100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(5-oxo-4,5-dihidro-1,2,4-oxadiazol-3-il)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (53a) (0.21 g, 40% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H n Mr (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.88 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.59 (d, J = 23.7 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 26.5 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.00 (s, 2H), 7.75 (d, J = 11.5 Hz, 4H), 7.11 - 6.96 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.06 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.45 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.28 - 3.19 (m, 2H), 2.49 - 2.32 (m, 1H), 1.22 - 1.15 (m, 3H), 1.14 - 1.04 (m, 1H), 1.05 - 0.92 (m, 6 H), 0.50 - 0.41 (m, 2H), 0.32 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 692.7 (M+Na), (ES-) 6 6 8 .6 (M-1).
Figure imgf000070_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (54c)
Etapa-1: Preparación (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (54a)
El compuesto (54a) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.72 g, 8.28 mmol) en acetona/agua (26 mL, 12:1), utilizando NaOH (0.68 g, 16.98 mmol) y (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1 -(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (33a) (3.89 g, 9.11 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida el (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (54a) (2.84 g, 81% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.17 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.86 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.77 (dd, J= 8.8, 2.4 Hz, 2H), 7.18 (dd, J = 11.5, 8.1 Hz, 1H), 6.83 (dd, J = 5.5, 3.0 Hz, 1H), 6.55 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.94 (s, 2H, D2O intercambiable), 3.80 (ddd, J= 8.1,6.2, 3.1 Hz, 1H), 1.47 - 1.28 (m, 13H), 0.85 (td, J= 4.1,2.0 Hz, 6H); MS (ES-) 457.5 (M+Cl)
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (54b)
El compuesto (54b) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (0.6 g, 1.14 mmol) usando EDCI (0.33 g, 1.71 mmol) y (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (54a) (0.58 g, 1.37 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía de columna ultrarrápida [gel de sílice, 12 g eluyendo con mezcla de acetato de etilo y metanol (9:1) en hexanos del 0 al 60%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (54b) (0.29 g, 28% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.55 (d, J = 27.1 Hz, 1H), 9.33 - 9.10 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.60 (d, J = 25.9 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 - 7.90 (m, 4H), 7.70 (d, J = 10.2 Hz, 2H), 7.20 (dd, J = 11.4, 8.2 Hz, 1H), 7.09 - 6.96 (m, 2H), 6.83 (s, 1H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.15 - 5.99 (m, 1H), 5.44 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.78 - 4.62 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.80 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.35 (s, 32H), 2.07 - 1.89 (m, 1H), 1.47 - 1.41 (m, 3H), 1.38 - 1.35 (m, 7H), 1.20 - 1.13 (m, 9H), 0.90 - 0.81 (m, 9H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 932.8 (M+1); 954.8 (M+Na).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (54c)
El compuesto (54c) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (54b) (0.29 g, 0.31 mmol) en diclorometano (12 mL) utilizando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.47 mL, 6.14 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa [columna C18, eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6 ((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (54c) (0.04 g, 16% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.71 (d, J = 22.8 Hz, 1H), 8.71 - 8.42 (m, 4H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.95 (m, 2H), 7.91 - 7.80 (m, 2H), 7.80 - 7.66 (m, 2H), 7.27 -6.89 (m, 4H), 6.63 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.78 - 4.63 (m, 1H), 4.09 - 3.94 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.31 - 3.12 (m, 2H), 2.26 - 2.06 (m, 1H), 1.56 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.23 - 1.09 (m, 10H), 1.02 - 0.92 (m, 6H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+ ) 831.7 (M+1); (ES-) 865.8 (M+Cl); Análisis calculado para C42H50N6O12.2 HCI.3.5 H2O: C, 52.17; H, 6.15; N, 8.69; encontrado: C, 52.12; H, 5.97; N, 8.67.
Figure imgf000071_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (55b)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2.4.9- trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (55a)
El compuesto (55a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.65 g, 1.27 mmol) usando EDCI (0.37 g, 1.91 mmol) y (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (54a) (0.65 g, 1.53 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 12 g eluyendo con mezcla de acetato de etilo y metanol (9:1) en hexanos del 0 al 60%] seguido de HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2.4.9- trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (55a) (0.27 g, 23% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.53 (d, J = 23.7 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.22 (d, J = 9.7 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.56 (d, J = 27.5 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.32 - 8.18 (m, 1H), 8.07 - 7.89 (m, 4H), 7.77 - 7.58 (m, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 1H), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 6.90 - 6.78 (m, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.05 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.83 - 3.76 (m, 1H), 3.23 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.46 - 2.31 (m, 1H), 2.03 - 1.88 (m, 1H), 1.48 - 1.40 (m, 3H), 1.38 - 1.33 (m, 9H), 1.21 - 1.14 (m, 3H), 1.12 -1.05 (m, 1H), 1.03 - 0.94 (m, 6H), 0.89 - 0.82 (m, 6H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 916.8 (M+1); 937.8 (M+Na); (ES-) 914.8 (M-1).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (55b)
El compuesto (55b) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (55a) (0.27 g, 0.29 mmol) en diclorometano (12 mL) utilizando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.45 mL, 5.79 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa [columna C18, eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (55b) (0.09 g, 37% de rendimiento) como un sólido blanco. 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.76 (d, J = 14.8 Hz, 1H, D2O intercambiable), 10.13 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.79 - 8.46 (m, 4H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.10 - 7.94 (m, 2H), 7.89 -7.66 (m, 4H), 7.12 - 6.89 (m, 3H), 6.73 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 6.17 - 5.99 (m, 1H), 5.44 (d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.92 (dd, J = 19.8, 4.6 Hz, 5H), 3.24 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.45 - 2.33 (m, 1H), 2.26 - 2.13 (m, 1H), 1.58 (dd, J = 5.5, 2.3 Hz, 3H), 1.17 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.12 - 1.05 (m, 1H), 1.02 - 0.95 (m, 12H), 0.52 - 0.40 (m, 2H), 0.34 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 815.8 (M+1).
Figure imgf000072_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-metil-1 -(pivaloiloxi)propilo (56d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-metil-1-(pivaloiloxi)propilo (56b)
El compuesto (56b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (0.86 g, 2.25 mmol) en DMF (5 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.83 g, 2.81 mmol) y pivalato de 1-cloro-2-metilpropilo (56a) (0.43 g, 2.25 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-metil-1-(pivaloiloxi)propilo (56b) (0.68 g, 57% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.69 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.51 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.06 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.08 - 6.93 (m, 2H), 6.51 (dd, J = 7.0, 4.9 Hz, 1H), 5.98 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.89 (d, J = 4.8 Hz, 3H), 3.26 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.83 (dt, J = 11.3, 6.8 Hz, 1H), 1.13 - 1.00 (m, 10H), 0.85 - 0.72 (m, 6H), 0.52 - 0.42 (m, 2H), 0.28 (q, J = 4.9 Hz, 2H); Análisis calculado para C30H36N2O7 : C, 67.15; H, 6.76; N, 5.22; encontrado: C, 66.74; H, 6.81; N, 5.19.
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-metil-1-(pivaloiloxi)propoxi)carbonil)piridin-3-il)- 4-metoxi-5-vinilbenzoico (56c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-metil-1-(pivaloiloxi)propilo (56b) (0.65 g, 1.21 mmol) utilizando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, columna de 12 g, eluyendo con metanol en cloroformo al 0-100%) el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-metil-1-(pivaloiloxi)propoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (56c) (0.45, 0.81 mmol, 66.8% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 812.53 (s, 1H), 8.47 (dd, J = 14.2, 6.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.93 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.04 - 6.85 (m, 2H), 6.51 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 5.88 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 5.38 (dd, J = 11.3, 1.2 Hz, 1H), 3.84 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 3.25 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.89 - 1.73 (m, 1H), 1.05 (d, J = 8.1 Hz, 10H), 0.83 - 0.71 (m, 6H), 0.51 - 0.43 (m, 2H), 0.32 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 553.1 (M+1), (ES-) 550.9 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenN)carbamoil)-5-metoxi-4-vinNfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-metil-1 -(pivaloMoxi)propilo (56d)
El compuesto (56d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((2-metil-1-(pivaloiloxi)propoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (56c) (0.4 g, 0.73 mmol) utilizando EDCI (0.28 g, 1.46 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.38 g, 1.82 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (10 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g, eluyendo con CMW80 (CHCb-MeOH-H2O) en cloroformo del 0 al 100%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picoNnato de 2-metil-1 -(pivaloiloxi)propilo (56d) (0.32 g, 65% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.71 (bs, 1H, D2O intercambiable), 9.09 (bs, 4H, D2O intercambiable), 8.36 (s, 1H), 8.21 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.10 - 7.89 (m, 2H), 7.79 (s, 4H), 7.03 (m, 2H), 6.54 (s, 1H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 12.3 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.24 (m, 2H), 1.80 (bs, 1H), 1.08 (m, 10H), 0.76 (d, J = 6.5 Hz, 6H), 0.47 (m, 2H), 0.27 (m, 2H); MS (ES+) 670.0 (M+1), (ES-) 704.2 (M+Cl); Análisis calculado para Ca /^ aNaOy H C l-^O : C, 61.36; H, 6.40; Cl, 4.90; N, 9.67; encontrado: C, 61.06; H, 6.37; Cl, 4.55; N, 9.55.
Figure imgf000073_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-metil-1 -(pivaloiloxi)propilo (57a)
El compuesto (57a) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 2-metil-1 -(pivaloiloxi)propilo (56d) (0.14 g, 0.21 mmol) y cloroformiato de hexilo (0.339 mL, 2.075 mmol), usando TEA (0.29 mL, 2.08 mmol) como base en acetonitrilo (10 mL) según el procedimiento descrito en el esquema 6. Esto dio después del tratamiento, purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2-metil-1 -(pivaloiloxi)propilo (57a) (0.086 g, 52% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.64 - 10.39 (2bs, 1H, D2O intercambiable), 9.36 - 8.72 (2bs, 2H, D2O intercambiable), 8.53 - 8.30 (m, 1H), 8.27 - 8.16 (m, 1H), 8.07 - 7.84 (m, 4H), 7.77 - 7.56 (m, 2H), 7.15 - 6.91 (m, 2H), 6.69 - 6.39 (m, 1H), 6.03 (dd, J= 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.51 - 5.34 (m, 1H), 3.99 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.30 - 3.19 (m, 2H), 1.79 (s, 1H), 1.65 - 1.49 (m, 2H), 1.43 - 1.17 (m, 6H), 1.16 - 0.95 (m, 10H), 0.92 - 0.83 (m, 2H), 0.82 - 0.68 (m, 7H), 0.54 - 0.38 (m, 2H), 0.34 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+): 798.7 (M+1), 820.7 (M+Na); MS (ES-): 796.7 (M-1); Análisis calculado para C44H55N5O9 0 .2 5 H2O: C, 65.86; H, 6.97; N, 8.73; encontrado: C, 65.73; H, 6.98; N, 8.52.
Esquema 58
Figure imgf000074_0001
Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58f)
Etapa-1: Preparación del (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1 -cloroetilo (58b)
A una solución enfriada con hielo agitada enérgicamente de L-Boc-valina (5.2 g, 23.93 mmol), bicarbonato de sodio (8.04 g, 96 mmol), hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (0.813 g, 2.39 mmol) en agua (75 mL) y CH2CE (75 mL) se le añadió una solución de sulfocloridato de 1 -cloroetilo (58a) (6.0 g, 33.5 mmol, preparada a partir de cloroformiato de 1 -cloroetilo y ácido clorosulfónico según el procedimiento descrito en la publicación de solicitud de patente de EE. UU., 20140056849) en diclorometano (20 mL). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente a lo largo de un periodo de 16 h. La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (2 x 100 mL), se secó, se filtró y se concentró al vacío hasta sequedad. El residuo se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 80 g, eluyendo con acetato de etilo en hexano al 0-50%) para proporcionar el (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1 -cloroetilo (58b) (3.5 g, 52% de rendimiento) como un aceite incoloro. MS (ES‘) 314.2 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58c)
El compuesto (58c) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (2.45 g, 6.43 mmol) en DMF (15 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (2.36 g, 8.04 mmol) y (2S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1-cloroetilo (58b) (2.7 g, 9.65 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenilo)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58c) (3 g, 75% de rendimiento) como un sólido amarillo. MS (ES+) 624.8 (M+1), 646.7 (M+Na)
Etapa-3: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (58d)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58c) (2.0 g, 3.21 mmol) usando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (58d) (2 g, 97% de rendimiento) como un sólido amarillo, que se usó como estaba en la siguiente etapa sin más purificación. MS (ES+) 662.6 (M+Na); (ES-) 638.6 (M-1).
Etapa-4: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58e) El compuesto (58e) se preparó con el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (58d) (0.92 g, 1.43 mmol) usando EDCI (0.41 g, 2.15 mmol) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.36 g, 1.72 mmol) en DMF (20 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (12 g), eluyendo con EtOAc en hexano al 0-100%] el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58e) (0.14 g, 13% de rendimiento) como un sólido blanquecino. MS (ES+) 757.8 (M+1).
Etapa-5: Preparación del hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58f)
El compuesto (58f) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58e) (0.14 g, 0.19 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.29 mL, 3.7 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el hidrocloruro de 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (58f) (26 mg, 0.040 mmol, 21.40% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.78 (d, J= 22.3 Hz, 1H), 9.28 (s, 2H, D2O intercambiable), 9.04 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.58 (s, 3 H, D2O intercambiable), 8.52 -8.41 (m, 1H), 8.29 - 8.19 (m, 1H), 8.09 - 7.95 (m, 2H), 7.80 (d, J = 5.9 Hz, 4H), 7.10 - 6.94 (m, 2H), 6.91 - 6.82 (m, 1H), 6.10 (d, J= 18.0 Hz, 1H), 5.45 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 3.91 - 3.84 (m, 4H), 3.27 - 3.21 (m, 2H), 2.14 - 1.96 (m, 1H), 1.34-1.18 (m, 3H), 1.13 - 1.00 (m, 1H), 0.92 - 0.81 (m, 6H), 0.49 - 0.37 (m, 2H), 0.30 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 657.7 (M+1); (ES-) 691.8 (M+Cl).
Figure imgf000075_0001
Preparación del hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (59b)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (59a)
El compuesto (59a) se preparó con el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil- 5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (58d) (0.49 g, 0.77 mmol) usando EDCI (0.22 g, 1.15 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.24 g, 0.92 mmol) en DMF (20 mL) y piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (12 g), eluyendo con EtOAc en hexano al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (59a) (0.23 g, 33% de rendimiento) como un sólido blanquecino; MS (ES+) 885.8 (M+1), 907.8 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (59b)
El compuesto (59b) se preparó con el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (59a) (0.23 g, 0.25 mmol) en diclorometano (5 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.39 mL, 5.1 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa [columna C18, eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (59b) (0.06 g, 29% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DIVISOR ) 8 12.33 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.85 - 10.70 (m, 1H, D2O intercambiable), 10.33 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.55 (m, 4H, D2O intercambiable), 8.30 - 8.16 (m, 1H), 8.10 - 7.93 (m, 2H), 7.78 (s, 4H), 7.13 - 6.95 (m, 2H), 6.88 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.10 (dd, J = 16.9, 5.6 Hz, 1H), 5.45 (d, J= 11.5 Hz, 1H), 4.26 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.94 - 3.79 (m, 4H), 3.29 - 3.18 (m, 2H), 2.14 - 1.99 (m, 1H), 1.74 - 1.58 (m, 2H), 1.38 - 1.24 (m, 9H), 0.95 - 0.78 (m, 10H), 0.50 - 0.37 (m, 2H), 0.28 (d, J = 4.6 Hz, 2H); MS (ES+ ) 785.6 (M+1); (ES-) 819.6 (M+Cl).
Figure imgf000076_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (60c)
Etapa-1: Preparación del 3-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)propanoato de terc-butilo (60a)
El compuesto (60a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (2.84 g, 13.68 mmol) en THF (50 mL) usando 3-hidroxipropanoato de terc-butilo (2 g, 13.68 mmol) y trietilamina (4.20 mL, 30.1 mmol). Esto dio después del tratamiento el 3-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)propanoato de terc-butilo (60a) (3.5 g, 82% de rendimiento) como un aceite transparente; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.35 - 8.28 (m, 2H), 7.59 - 7.50 (m, 2H), 4.42 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 2.70 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.42 (s, 9H); MS (ES+) 334.4 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del 3-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)propanoato de terc-butilo (60b)
El compuesto (60b) se preparó a partir del dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.85 g, 8.87 mmol) en acetona/agua (20 mL, relación 4:1), utilizando NaOH (0.75 g, 18.64 mmol) y 3-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)propanoato de terc-butilo hexilo (60a) (3.32 g, 10.65 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 de esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 12 g, eluyendo con acetato de etilo/MeOH (9:1) en hexanos al 0-100%) el 3-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)propanoato de terc-butilo (60b) (1.65 g, 61% de rendimiento) como un semisólido 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 9.14 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.65 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.83 - 7.68 (m, 2H), 6.62 - 6.47 (m, 2H), 5.86 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.15 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 2.56 (t, J= 6.2 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H); MS (ES-) 306.5 (M-1)
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-((3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (60c)
El compuesto (60c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c)
(0.5 g, 1.42 mmol) usando EDCI (0.27 g, 1.42 mmol) y 3-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)propanoato de terc-butilo (60b) (0.35 g, 1.14 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (12 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] y después HPLC preparativa [columna C18, eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-((3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (60c) (85 mg, 11% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.69 (d, J = 24.8 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J = 28.9 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.95 (m, 2H), 7.87 - 7.66 (m, 4H), 7.10 - 6.93 (m, 2H), 6.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.06 (dd, J= 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.45 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 4.79 - 4.62 (m, 1H), 4.48 - 4.30 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.29 - 3.14 (m, 2H), 2.76 - 2.62 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.28 - 1.00 (m, 12H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 816.7 (M+1); 838.7 9 (M+Na); (eS-) 850.9 (M+Cl); Análisis calculado para C42H49N5O12.HCM.5 H2O: C, 57.37; H, 6.08; N, 7.96; encontrado: C, 57.35; H, 6.13; N, 7.96.
Figure imgf000077_0001
Preparación del ácido (S)-4-amino-5-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metoxi)-5-oxopentanoico (61d)
Etapa-1: Preparación del (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)pentanodioato de 5-terc-butilo y 1-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metilo) (61a)
El compuesto (61a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de clorometilo (37a) (2.0 g, 4.66 mmol) en DMF (15 mL) usando N,N'-dicidohexil-4-morfolinacarboxamidina (2.05 g, 7.0 mmol) y ácido (S)-5-(tercbutoxi)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-5-oxopentanoico (1.84 g, 6.06 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)pentanodioato de 5-terc-butilo y 1-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metilo) (61a) (2.25 g, 69% de rendimiento) como una espuma incolora; 1H NMR (300 m Hz , DMSO-cfe) 89.68 (s, iH ), 8.70 - 8.56 (m, 1H), 8.36 - 8.24 (m, 1H), 8.13 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (dd, J = 7.9, 3.5 Hz, 1H), 7.08 - 6.92 (m, 2H), 6.00 (dt, J = 17.8, 1.3 Hz, 1H), 5.86 - 5.70 (m, 2H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.02 - 3.94 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.31 - 3.18 (m, 2H), 2.24 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.91 - 1.57 (m, 2H), 1.48 - 1.00 (m, 19H), 0.51 - 0.41 (m, 2H), 0.33 - 0.24 (m, 2H).
Etapa-2: Preparación del ácido (S)-2-(2-(6-(3-(terc-butoxi)-3-oxopropil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (61b)
La oxidación del (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)pentanodioato de 5-terc-butilo y 1-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metilo) (61a) (2.2 g, 3.16 mmol) usando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido (S)-2-(2-(6-(3-(terc-butoxi)-3-oxopropil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (61b) (2.2 g, 98% de rendimiento) como un sólido amarillo claro; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 812.57 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 5.91 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 5.85 - 5.68 (m, 2H), 5.39 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.08 - 3.92 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.31 - 3.16 (m, 2H), 2.31 - 2.18 (m, 2H), 1.93 - 1.76 (m, 1H), 1.76 - 1.60 (m, 1H), 1.45 - 1.25 (m, 19H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.21 (m, 2H).
Etapa-3: Preparación del (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)pentanodioato de 5-terc-butilo y 1-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metilo) (61c)
El compuesto (61c) se preparó a partir del ácido (S)-2-(2-(6-(3-(terc-butoxi)-3-oxopropil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9- trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (61b) (0.48 g, 0.67 mmol) usando EDCI (0.16 g, 0.81 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.18 g, 0.67 mmol) en DMF (6 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con MeOH:EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100%] el (S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)pentanodioato de 5-terc-butilo y 1-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metilo) (61c) (0.31 g, 48.0% de rendimiento) como un sólido gomoso; MS (ES+) 957.8 (M+1) y 979.8 (M+Na).
Etapa-4: Preparación del ácido (S)-4-amino-5-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metoxi)-5-oxopentanoico (61d)
El compuesto (61d) se preparó a partir del (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)pentanodioato de 5-terc-butilo y 1-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metilo) (61c) (0.3 g, 0.31 mmol) en diclorometano (2 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (1.0 mL, 12.6 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa (C18, 26 g) eluyendo con HCl acuoso al 0.1% y acetonitrilo al 0-100%, seguido de liofilización, el ácido (S)-4-amino-5-(((6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinoil)oxi)metoxi)-5-oxopentanoico (61d) (0.048 g, 19% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 812.55 - 12.12 (m, 2H), 10.77 (s, 1H), 8.81 - 8.41 (m, 3H), 8.25 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.10 - 7.97 (m, 2H), 7.77 (s, 4H), 7.15 - 6.92 (m, 2H), 6.15-6.08 (m, 1H), 5.96 - 5.73 (m, 2H), 5.52-5.39 (m, 1H), 4.31 - 4.16 (m, 2H), 4.13 - 4.00 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.29 - 3.16 (m, 2H), 2.61-2.20 (m, 2H), 2.03 - 1.87 (m, 2H), 1.74 - 1.56 (m, 2H), 1.46 - 1.20 (m, 6H), 1.17 - 1.00 (m, 1H), 0.91 - 0.84 (m, 3H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 801.7 (M+1), MS (ES-) 835.8 (M+Cl).
Figure imgf000079_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2- ((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62a)
El compuesto (62a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de clorometilo (37 a) (1.3 g, 3.03 mmol) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (1.1 g, 3.8 mmol) y Boc-L-isoleucina (0.84 g, 3.64 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62a) (0.67 g, 36% de rendimiento) como un sólido amarillo claro; 1H NMR (300 m Hz , DMSO-cfe) 89.69 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.57 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 8.29 (dt, J = 8.0, 2.4 Hz, 1H), 8.17 - 8.11 (m, 1H), 8.07 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.09 - 6.89 (m, 2H), 6.01 (dt, J= 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.84 (dd, J = 11.2, 5.9 Hz, 1H), 5.75 (dd, J = 6.0, 2.2 Hz, 1H), 5.45 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.89 - 3.81 (m, 1H), 3.25 (p, J = 6.4 Hz, 2H), 1.86 - 1.51 (m, 1H), 1.34 (d, J = 4.3 Hz, 9H), 1.33 - 1.22 (m, 2H), 1.17 - 1.02 (m, 1H), 0.80 - 0.67 (m, 6H), 0.53 - 0.41 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 646.6 (M+Na). Etapa-2: Preparación del ácido 2-(2-((S)-6-((S)-sec-butil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi- 5-vinilbenzoico (62b)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62a) (0.64 g, 99% de rendimiento) utilizando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido 2-(2-((S)-6-((S)-sec-butil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3- il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (62b) (0.84 g, 129% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.56 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.56 - 8.43 (m, 1H), 8.27 - 8.19 (m, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.99 -7.93 (m, 1H), 7.27 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.98 (dd, J= 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.96 - 5.81 (m, 2H), 5.74 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 5.39 (dd, J= 11.2, 1.4 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.25 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 1.76 - 1.54 (m, 1H), 1.41 - 1.31 (m, 9H), 1.32- 1.20 (m, 2H), 1.19 - 1.04 (m, 1H), 0.74 (q, J= 7.3, 6.6 Hz, 6H), 0.53 - 0.43 (m, 2H), 0.34 -0.23 (m, 2H); MS (ES+) 662.6 (M+Na), 638.6 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62c)
El compuesto (62c) se preparó a partir del ácido 2-(2-((S)-6-((S)-sec-butil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (62b) (0.32 g, 0.5 mmol) usando EDCI (1.5 equiv.) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.17 g, 0.63 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62c) (0.39 g, 86% de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.55 (s, 1H), 9.41 - 8.75 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.42 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.11 -7.99 (m, 1H), 8.00 - 7.87 (m, 3H), 7.74 -7.59 (m, 2H), 7.38 - 7.22 (m, 1H), 7.15 - 6.89 (m, 2H), 6.05 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.92 - 5.57 (m, 2H), 5.44 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 3.87 (d, J = 12.4 Hz, 4H), 3.28 - 3.18 (m, 2H), 1.58 (d, J = 7.3 Hz, 2H), 1.31 (d, J = 12.2 Hz, 20H), 0.92 - 0.82 (m, 3H), 0.81 - 0.62 (m, 6H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.19 (m, 3H); MS (ES+) 886.60 (M+1), 908.53 (M+Na).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62d)
El compuesto (62d) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62c) (0.38 g, 0.42 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.65 mL, 8.47 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa-4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 26 g) eluyendo con HCl al 0.1% y acetonitrilo, seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (62d) (0.13 g, 37% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H Nm R (300 Mh z , DMSO-cfe) 810.75 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.46 - 10.14 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.66 - 8.33 (m, 4H, 3H D2O intercambiable), 8.25 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.76 (d, J = 1.7 Hz, 4H), 7.11 -6.96 (m, 2H), 6.06 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 6.02 - 5.87 (m, 1H), 5.80 (s, 1H), 5.46 (dd, J= 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 4.00 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.31 - 3.17 (m, 2H), 1.86 - 1.74 (m, 1H), 1.74 - 1.57 (m, 2H), 1.47 - 1.10 (m, 8H), 1.15 - 0.99 (m, 1H), 0.93 - 0.71 (m, 9H), 0.51 - 0.41 (m, 2H), 0.31 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 785.7 (M+1), 807.7 (M+Na); Calculado para: C42 H52 N6 Og(CFaCOOH)2 (H2 O)2.25. C; 52.20; H, 5.57; N, 7.98; encontrado: C, 52.17; H, 5.26; N, 7.81.
Figure imgf000080_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(isopropoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (63c)
Etapa-1: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de isopropilo (63b)
El compuesto (63b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23 a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (4.82 g, 23.15 mmol) en acetona/agua (60 mL, relación 11:1), utilizando NaOH (1.95 g, 48.6 mmol) y carbonato de isopropilo y (4-nitrofenilo) (63a) (7.3 g, 32.4 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Nishikawa, Hiroshi en la solicitud Int. PCT., 2008044562). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 12 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%) el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato (63b) (2.73 g, 12.34 mmol, 53.3% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 m Hz , DMsO-cfe) 89.17 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.60 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.80 - 7.64 (m, 2H), 6.63 - 6.47 (m, 2H), 5.84 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.87 - 4.68 (m, 1H), 1.20 (d, J= 6.2 Hz, 6H); MS (ES+) 222.4 (M+1); (ES-) 220.4 (M-1). Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(isopropoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (63c)
El compuesto (63c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c)
(0.5 g, 0.95 mmol) usando EDCI (0.27 g, 1.42 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de isopropilo (63b) (0.25 g, 1.14 mmol) en DMF (8 mL) y piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (12 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] y después HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(isopropoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (63c) (52 mg, 8% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.32 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.72 (d, J = 24.4 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J = 30.3 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 7.4 Hz, 2H), 7.77 (s, 4H), 7.09 - 6.93 (m, 2H), 6.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.06 (d, J= 18.1 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 5.10 - 4.94 (m, 1H), 4.78 - 4.63 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.28 - 3.14 (m, 2H), 1.32 (d, J= 6.3 Hz, 6H), 1.26 - 1.02 (m, 11H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 730.7 (M+1); (ES-) 764.7 (M+Cl); Análisis calculado para C38H43N5O10.HCL4.5 H2O: C, 53.87; H, 6.30; Cl, 4.18; N, 8.27; encontrado: C, 53.75; H, 5.68; Cl, 3.93; N, 8.17.
Figure imgf000081_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (64b)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (64a)
El compuesto (64a) se preparó a partir del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (10c) (0.5 g, 0.8 mmol) usando EDCI (0.23 g, 1.2 mmol) e isobutirato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a) (0.26 g, 0.88 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (64a) (0.51 g, 71% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 810.57 (s, 1H), 9.38 - 9.04 (m, 2H), 8.44 (s, 1H), 8.24 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 9.1 Hz, 3H), 7.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.10 - 6.97 (m, 2H), 6.77 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.11 - 5.99 (m, 1H), 5.82 - 5.62 (m, 2H), 5.44 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.86 - 3.75 (m, 1H), 3.27 - 3.17 (m, 2H), 2.54 (s, 1H), 1.99 - 1.81 (m, 1H), 1.43 (d, J= 5.4 Hz, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.17 - 0.96 (m, 7H), 0.79 (d, J= 6.8 Hz, 6H), 0.51 - 0.41 (m, 2H), 0.33 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 901.7 (M+1), 923.8 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (64b)
El compuesto (64b) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (64a) (0.5 g, 0.56 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.86 mL, 11.10 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [gel de sílice 26 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.76 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.70 - 8.38 (m, 4H, 3H, D2O intercambiable), 8.25 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.10 - 7.96 (m, 2H), 7.90 - 7.78 (m, 2H), 7.78 - 7.67 (m, 2H), 7.11 - 6.94 (m, 2H), 6.89 - 6.75 (m, 1H), 6.09 (dd, J = 17.7, 1.6 Hz, 1H), 6.02 - 5.71 (m, 3H), 5.45 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.48 - 2.39 (m, 1H), 2.17 - 2.00 (m, 1H), 1.50 (d, J= 5.4 Hz, 3H), 1.09 (dd, J= 7.0, 3.3 Hz, 6H), 1.09 - 0.98 (m, 1H), 0.87 (d, J= 6.9 Hz, 6H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 801.7 (M+1), (ES-) 835.8 (M+Cl); Análisis calculado para C41H48N6O11-1.5 HCL0.5 CF3CO2H.2 H2O: C, 53.18; H, 5.74; Cl, 5.61; N, 8.86; encontrado: C, 52.86; H, 5.86; Cl, 5.82; N, 9.07.
Figure imgf000082_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-(((1,3-dioxan-5-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (65c)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 1,3-dioxan-5-ilo y (4-nitrofenilo) (65a)
El compuesto (65a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (5.76 g, 27.7 mmol) en THF (50 mL) usando 1,3-dioxan-5-ol (2.5 mL, 29.2 mmol) y trietilamina (8.95 mL, 64.2 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por columna cromatografía ultrarrápida [(gel de sílice, 80 g) eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%] el carbonato de 1,3-dioxan-5-ilo y (4-nitrofenilo) (65a) (3.06 g, 39% de rendimiento) como un sólido blanco que se puede utilizar como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.39 -8.27 (m, 2H), 7.66 - 7.55 (m, 2H), 4.93 (d, J= 6.1 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.68 (p, J = 2.4 Hz, 1H), 4.04 (d, J = 2.4 Hz, 4H).
Etapa-2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1,3-dioxan-5-ilo (65b)
El compuesto (65b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (2.32 g, 11.14 mmol) en acetona (50 mL), utilizando solución acuosa de NaOH 1 N (27.9 mL, 27.9 mmol) y carbonato de 1,3-dioxan-5-ilo y (4-nitrofenilo) (65a) (3 g, 11.14 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1,3-dioxan-5-ilo (65b) (0.62 g, 21% de rendimiento) como un sólido amarillo que se puede utilizar como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.14 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.93 - 7.65 (m, 2H), 6.67 - 6.39 (m, 2H), 5.89 (s, 2H), 4.79 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 4.64 - 4.41 (m, 1H), 4.06 - 3.98 (m, 2H), 3.79 (dd, J = 11.8, 4.5 Hz, 2H).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-(((1,3-dioxan-5-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutirMoxi)etilo (65c)
El compuesto (65c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((cidopropNmetN)carbamoN)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.5 g, 0.98 mmol) usando EDCI (0.28 g, 1.47 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1,3-dioxan-5-ilo (65b) (0.33 g, 1.22 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 25 g eluyendo con EtOAc/MeoH (9:1) en hexano al 0-60%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-(((1,3-dioxan-5-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (65c) (125 mg, 17% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 Mh z , DMSO-cfe) 8 10.49 (d, J = 23.3 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.07 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.55 (d, J = 27.9 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.85 (m, 4H), 7.66 (m, 2H), 7.09 - 6.91 (m, 2H), 6.71 (m, 1H), 6.03 (d, J = 17.5 Hz, 1H), 5.41 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.77 (q, J= 6.2 Hz, 2H), 4.51 (m, 1H), 3.99 (dd, J= 11.8, 2.8 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (dd, J= 11.7, 4.2 Hz, 2H), 3.26 - 3.16 (m, 2H), 2.45 - 2.26 (m, 1H), 1.14 (d, J= 5.3 Hz, 3H), 1.12 - 1.00 (m, 1H), 0.94 (d, J = 7.9 Hz, 6H), 0.50 - 0.37 (m, 2H), 0.30 - 0.17 (m, 2H); MS (ES+) 758.6 (M+1), 780.7 (M+Na), (ES-) 756.8 (M-1); Análisis calculado para C39H43N5O11.H2O: C, 60.38; H, 5.85; N, 9.03. Encontrado: C 60.46; H, 5.84; N, 9.09.
Figure imgf000083_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((1,3-dimetoxipropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (66c)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 1,3-dimetoxipropan-2-ilo y (4-nitrofenilo) (66a)
El compuesto (66a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (4.97 g, 23.93 mmol) en THF (50 mL) usando 1,3-dimetoxipropan-2-ol (3.03 mL, 25.2 mmol) y trietilamina (7.73 mL, 55.4 mmol). Esto dio después del tratamiento el carbonato de 1,3-dimetoxipropan-2-ilo y (4-nitrofenilo) (66a) (5.05 g, 70% de rendimiento) como un jarabe amarillo que se puede utilizar como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.40 - 8.26 (m, 2H), 7.57 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 5.03 (p, J= 5.0 Hz, 1H), 3.59 (s, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.30 (s, 6H).
Etapa-2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1,3-dimetoxipropan-2-ilo (66b)
El compuesto (65b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (3.65 g, 17.53 mmol) en acetona (100 mL), usando solución de NaOH (1.75 g, 43.8 mmol) y una solución de carbonato de 1,3-dimetoxipropan-2-ilo y (4-nitrofenilo) (66a) (5 g, 17.53 mmol) en acetona (25 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 al 100%) el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1,3-dimetoxipropan-2-ilo (66b) (0.5 g, 10% de rendimiento) como un sólido marrón; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-da) 5 9.13 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.67 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.88 - 7.65 (m, 2H), 6 .6 6 - 6.46 (m, 2H), 5.87 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.94 (p, J= 5.2 Hz, 1H), 3.46 (dd, J = 5.1, 1.4 Hz, 4H), 3.26 (s, 6 H).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((1,3-dimetoxipropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutirMoxi)etilo (66c)
El compuesto (66c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.5 g, 0.98 mmol) usando EDCI (0.28 g, 1.47 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1,3-dimetoxipropan-2-ilo (66b) (0.34 g, 1.22 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((1,3-dimetoxipropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (66c) ( 1 6 0 mg, 21% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 5 10.51 (d, J = 24.1 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.14 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.98 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.57 (d, J= 28.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.85 (m, 4H), 7.70 (m, 2H), 7.11 - 6.94 (m, 2H), 6.74 (m, 1H), 6.06 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.44 (dd, J= 11.3, 1.5 Hz, 1H), 4.96 (p, J= 5.2 Hz, 1H), 3.95 - 3.78 (m, 3H), 3.50 - 3.43 (m, 4H), 3.35 (s, 6 H), 3.28 - 3.15 (m, 2H), 2.47 - 2.28 (m, 1H), 1.17 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.15 - 1.04 (m, 1H), 1.05 - 0.91 (m, 6 H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 774.7 (M+1), 796.7 (M+Na), (ES-) 772.8 (M-1); Análisis calculado para: C40H47N5O11 (H2 O)0 .75. C, 61.02; H, 6.21; N, 8.89. Encontrado: C, 61.00; H, 6.20; N, 8.80.
Figure imgf000084_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((1,3-dimetoxipropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (67a)
El compuesto (67 a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (0.5 g, 0.95 mmol) usando EDCI (0.27 g, 1.42 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1,3-dimetoxipropan-2-ilo (66b) (0.33 g, 1.19 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((1,3-dimetoxipropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (67a) (115 mg, 0.146 mmol, 15.33% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 5 10.53 (d, J= 26.8 Hz, 1H), 9.28 - 9.05 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.05 - 8.85 (m, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J= 25.2 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.84 (m, 4H), 7.77 - 7.60 (m, 2H), 7.17 - 6.91 (m, 2H), 6.70 - 6.53 (m, 1H), 6.06 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.96 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.78 - 4.61 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.51 - 3.41 (m, 4H), 3.32 - 3.20 (m, 8 H), 1.24 - 1.04 (m, 10H), 0.52 - 0.36 (m, 2H), 0.33 - 0.17 (m, 2H); MS (ES+) 790.8 (M+1), 812.7 (M+Na).
Figure imgf000085_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-(((1,3-dioxan-5-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (68a)
El compuesto (68a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (0.5 g, 0.95 mmol) usando EDCI (0.27 g, 1.42 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1,3-dioxan-5-ilo (65b) (0.32 g, 1.19 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-100%] el 3-(2-((4-(N-(((1,3-dioxan-5-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (68a) (110 mg, 15% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NmR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.54 (d, J= 26.2 Hz, 1H), 9.31 - 8.88 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.69 - 8.47 (m, 1H), 8.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.86 (m, 4H), 7.76 - 7.57 (m, 2H), 7.11 - 6.95 (m, 2H), 6.69 - 6.57 (m, 1H), 6.14 - 5.96 (m, 1H), 5.44 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.79 (q, J = 6.1 Hz, 2H), 4.76 - 4.64 (m, 1H), 4.60 - 4.48 (m, 1H), 4.02 (dd, J = 12.1,2.9 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.82 (dd, J = 11.8, 4.3 Hz, 2H), 3.28 - 3.18 (m, 2H), 1.28 - 1.02 (m, 10H), 0.50 -0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 774.3 (M+1), 796.6 (M+Na); Análisis calculado para; C39H43N5O12.H2O: C, 59.16; H, 5.73; N, 8.84; encontrado: C, 59.42; H, 5.50; N, 8.73.
Figure imgf000085_0002
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69d)
Etapa-1: Preparación del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69a)
El compuesto (69a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de clorometilo (37 a) (1.25 g, 2.91 mmol) en DMF (10 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (1.07 g, 3.64 mmol) y ácido (S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)- 3-fenilpropanoico (0.93 g, 3.5 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69a) (1.09 g, 57% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.68 (s, 1H), 8.67 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.29 (dd, J = 7.9, 1.5 Hz, 1H), 8.16 - 8.02 (m, 2H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.22 (t, J= 3.5 Hz, 4H), 7.08 - 6.83 (m, 2H), 6.01 - 5.89 (m, 1H), 5.85 (t, J= 6.3 Hz, 1H), 5.77 (dd, J= 6.0, 1.5 Hz, 1H), 5.45 - 5.36 (m, 1H), 4.20 - 4.08 (m, 1H), 3.88 (d, J= 2.4 Hz, 3H), 3.25 (q, J = 6.4, 4.9 Hz, 2H), 2.96 - 2.68 (m, 2H), 1.27 (d, J = 2.1 Hz, 9H), 1.23 - 1.10 (m, 1H), 1.15 - 1.01 (m, 1H), 0.49 - 0.41 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 680.6 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ácido (S)-2-(2-(6-bencil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (69b)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69a) (1.07 g, 1.62 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido (S)-2-(2-(6-bencil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (69b) (1.35 g, 124% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.59 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.24 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 1.9 Hz, 3H), 6.96 (dd, J = 11.1, 4.9 Hz, 2H), 6.88 (s, 1H), 5.92 - 5.68 (m, 4H), 5.36 (d, J= 9.9 Hz, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.29 - 3.17 (m, 2H), 2.89 (s, 1H), 2.85 - 2.69 (m, 1H), 1.27 (s, 10H), 0.48 - 0.40 (m, 2H), 0.27 (dd, J= 5.0, 1.6 Hz, 2H); MS (ES+) 696.6 (M+Na), (ES-) 672.6 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69c)
El compuesto (69c) se preparó a partir del ácido ((S)-2-(2-(6-bencil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (69b) (0.46 mg, 0.68 mmol) usando EDCI (1.5 equiv.) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.22 g, 0.85 mmol) en DMF (4 mL) y piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69c) (0.52 g, 84% de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.53 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.30 - 8.75 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.56 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.96 - 7.87 (m, 3H), 7.66 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.17 (d, J= 5.0 Hz, 3H), 7.04 - 6.96 (m, 1H), 6.00 (d, J= 17.9 Hz, 1H), 5.77 (s, 3H), 5.41 (d, J= 11.7 Hz, 1H), 4.11 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.21 (s, 3H), 2.99 - 2.62 (m, 2H), 1.69 - 1.50 (m, 2H), 1.35 - 1.25 (m, 14H), 1.25 - 1.17 (m, 1H), 1.17 - 0.98 (m, 4H), 0.91 - 0.83 (m, 3H), 0.47 - 0.39 (m, 2H), 0.29 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 942.52 (M+Na).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69d)
El compuesto (69d) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69c) (0.51 g, 0.56 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.86 mL, 11.21 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 26 g) eluyendo con HCl al 0.1% y acetonitrilo seguido de liofilización, la sal de hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-fenilpropanoil)oxi)metilo (69d) (0.025 g, 5% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.77 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.84 - 8.47 (m, 4H, 3H D2O intercambiable), 8.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.76 (s, 4H), 7.34 - 7.12 (m, 5H), 7.01 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 6.04 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 60 Hz, 1H), 5.85 - 5.72 (m, 2H), 5.44 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 4.36 - 4.13 (m, 4H), 3.86 (s, 3H), 3.29 - 3.18 (m, 2H), 3.10 - 2.94 (m, 1H), 1.67 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 1.44 - 1.21 (m, 6H), 1.14 - 0.97 (m, 1H), 0.93 - 0.76 (m, 3H), 0.51 - 0.33 (m, 2H), 0.29 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+) 819.7 (M+1), 841.8 (M+Na).
Figure imgf000087_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etilo (70d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etilo (70b)
El compuesto (70b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (1.9 g, 5.0 mmol) en DMF (30 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (1.83 g, 6.25 mmol) y carbonato de 1 -cloroetilo y ciclohexilo (70a) (1.55 g, 7.50 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etilo (70b) (2.41 g, 88% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 m Hz , DMSO-cfe) 8 9.69 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.76 - 8.64 (m, 1H), 8.27 (dd, J= 8.0, 2.4 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 8.08 (dd, J= 8.0, 0.7 Hz, 1H), 7.11 - 6.90 (m, 2H), 6.68 - 6.54 (m, 1H), 6.01 (dt, J = 17.8, 1.2 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.55 - 4.38 (m, 1H), 3.91 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 3.30 - 3.17 (m, 2H), 1.87 - 1.72 (m, 2H), 1.69 - 1.55 (m, 2H), 1.51 - 1.03 (m, 10H), 0.53 - 0.38 (m, 2H), 0.35 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+): 551.5 (M+1), 573.3 (M+Na). 1.69 - 1.55 (m, 2H), 1.51 - 1.03 (m, 10H), 0.53 - 0.38 (m, 2H), 0.35 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+): 551.5 (M+1), 573.3 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(2-((1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (70c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etilo (70b) (2.31 g, 4.19 mmol) usando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1 dio después de tratamiento el ácido 2-(2-((1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (70c) (2.21 g, 93% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 8 12.62 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.75 - 8.54 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.92 - 6.83 (m, 1H), 6.71 - 6.53 (m, 1H), 5.91 (dd, J = 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.39 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.30 - 3.17 (m, 2H), 1.89 - 0.87 (m, 14H), 0.56 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+): 567.5 (M+1), 589.5 (M+Na); MS (ES-): 565.6 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etilo (70d)
El compuesto (70d) se preparó a partir del ácido 2-(2-((1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (70c) (0.47 g, 0.83 mmol) utilizando EDCI (0.24 g, 1.24 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.33 g, 1.24 mmol) en DMF (15 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (dos columnas separadas: gel de sílice, 40 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%), el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etilo (70d) (0.32 g, 48% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.56 y 10.48 (2s, 1H, D2O intercambiable), 9.36 - 8.73 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.64 y 8.57 (2s, 1H), 8.22 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.05 - 7.97 (m, 2H), 7.96 - 7.85 (m, 2H), 7.75 - 7.60 (m, 2H), 7.14 - 6.89 (m, 2H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.06 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.44 (d, J= 11.3 Hz, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 1H), 3.99 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.27 - 3.19 (m, 2H), 1.90 - 1.01 (m, 23H), 0.91 - 0.83 (m, 2H), 0.54 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+): 812.78 (M+1); MS (ES-): 810.89 (M-1); Análisis calculado para C44H53N5O10 0.5 H2O: C, 64.37; H, 6.63; N, 8.53; encontrado: C, 64.24; H, 6.6 8 ; N, 8.31.
Figure imgf000088_0001
Preparación del ácido 3-((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)propanoico (71a)
El compuesto (71a) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-((3-(terc-butoxi)-3-oxopropoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (60c) (60 mg, 0.074 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.113 mL, 1.47 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa de columna ultrarrápida [columna C18, eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%], seguido de liofilización, el ácido 3-((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)propanoico (71a) (29 mg, 52% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 12.54 (brs, 1H, D2O intercambiable), 11.23 (brs, 1H, D2O intercambiable), 10.77 (d, J = 19.8 Hz, 1H), 10.34 (brs, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J= 29.5 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.95 (m, 2H), 7.87 - 7.68 (m, 4H), 7.11 - 6.93 (m, 2H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.78 - 4.63 (m, 1H), 4.44 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.26 -3.18 (m, 2H), 2.72 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 1.26 - 1.00 (m, 11H), 0.51 - 0.37 (m, 2H), 0.33 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 760.6 (M+1); 782.6 (M+Na); MS (ES-): 794.7 (M+Cl); Análisis calculado para C3sH41N5O12.HCl.3 H2O: C, 53.68; H, 5.69; N, 8.24; encontrado: C, 53.63; H, 5.60; N, 8.25.
Figure imgf000088_0002
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (72a)
El compuesto (72a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((((isopropoxicarbonil)oxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (14c) (0.47 g, 0.94 mmol) usando EDCI (0.27 g, 1.41 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.29 g, 1.10 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [(gel de sílice, 24 g), eluyendo con mezcla de acetato de etilo y metanol 9:1 en hexanos (del 0 al 100%)] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (72a) (0.23 g, 33% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-da) 510.52 (s, 1H), 9.34 - 8.73 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.57 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.82 (m, 4H), 7.67 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.14 - 6.94 (m, 2H), 6.05 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.73 (s, 2H), 5.44 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 3.99 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.27 - 3.17 (m, 2H), 2.46 - 2.33 (m, 1H), 1.67 - 1.50 (m, 2H), 1.40 - 1.20 (m, 6H), 1.15 - 1.03 (m, 1H), 0.99 (d, J= 7.0 Hz, 6H), 0.91 - 0.80 (m, 3H), 0.44 (dt, J = 8.0, 2.9 Hz, 2H), 0.27 (d, J= 4.9 Hz, 2H); MS (ES+) 742.8 (M+1), 764.8 (M+Na); Análisis calculado para: C40H47N5Og(H2O)0.5: C, 63.99; H, 6.44; N, 9.33; encontrado: C, 63.99; H, 6.41; N, 9.35.
Figure imgf000089_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((((2S,4R)-4-hidroxi-6-oxotetrahidro-2H-piran-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (73d)
Etapa-1: Preparación del 2-((4R,6S)-2,2-dimetil-6-((((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-dioxan-4-il)acetato de terc-butilo (73a)
El compuesto (73a )se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (0.43 g, 2.11 mmol) en THF (20 mL) usando 2-((4R,6S)-6-(hidroximetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxan-4-il)acetato de terc-butilo (0.55 g, 2.11 mmol) y trietilamina (0.65 mL, 4.65 mmol). Esto dio después del tratamiento el 2-((4R,6S)-2,2-dimetil-6-((((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-dioxan-4-il)acetato de terc-butilo (73a) (0.82 g, 91% de rendimiento) como un jarabe espeso de color naranja oscuro que se puede usar como tal en la siguiente etapa sin más purificación.
Etapa-2: Preparación del 2-((4R,6S)-6-(((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetil-1,3-dioxan-4-il)acetato de terc-butilo (73b)
El compuesto (73b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.3 g, 1.45 mmol) en acetona (10 mL), utilizando solución acuosa de NaOH 1 N (3.18 mL, 3.18 mmol) y 2-((4R,6S)-2,2-dimetil-6-((((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metil)-1,3-dioxan-4-il)acetato de terc-butilo (73a) (0.8 g, 1.88 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 al 100%) el 2-((4R,6S)-6-(((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetil-1,3-dioxan-4-il)acetato de terc-butilo (73b) (0.4 g, 66% de rendimiento) como una espuma incolora; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 9.12 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 7.80 - 7.70 (m, 2H), 6.60 - 6.50 (m, 2H), 5.87 (s, 2H), 4.32 - 4.11 (m, 2H), 3.92 (d, J= 5.0 Hz, 2H), 2.41 (dd, J= 15.1, 4.8 Hz, 1H), 2.24 (dd, J= 15.1, 8.1 Hz, 1H), 1.61 - 1.11 (m, 17H); MS (ES+) 422.5 (M+1), 444.5 (M+Na).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-((((4S,6R)-6-(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxan-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (73c)
El compuesto (73c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi) carbonil)piridina-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.3 g, 0.59 mmol) usando EDCI (0.14 g, 0.71 mmol) y 2-((4R,6S)-6-(((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetil-1,3-dioxan-4-il)acetato de terc-butilo (73b) (0.25 g, 0.59 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] el 3-(2-((4-(N-((((4S,6R)-6-(2-(terc-butoxi)-2-oxoetil)-2,2-dimetil-1,3-dioxan- 4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (73c) (0.315 g, 59% de rendimiento) como una espuma.
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((((2S,4R)-4-hidroxi-6-oxotetrahidro-2H-piran-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (73d)
El compuesto (73d) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-((((4S,6R)-6-(2-(terc-butoxi)-2-oxoetilo)-2,2-dimetil-1,3-dioxan-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (73c) (0.26 g, 0.28 mmol) en diclorometano (2 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.66 mL, 8.53 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa de columna ultrarrápida [columna C18, 26 g eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%], seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((((2S,4R)-4-hidroxi-6-oxotetrahidro-2H-piran-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (73d) (47 mg, 20%) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.81 - 10.56 (m, 1H), 8.69 - 8.46 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.00 (s, 2H), 7.78 (s, 4H), 7.11 - 6.97 (m, 2H), 6.80 - 6.67 (m, 1H), 6.05 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 5.41 - 5.25 (m, 1H), 4.97 - 4.81 (m, 1H), 4.51 - 4.28 (m, 1H), 4.25 - 4.16 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.29 - 3.17 (m, 2H), 2.74 - 2.54 (m, 1H), 1.90 - 1.79 (m, 2H), 1.66 - 1.54 (m, 1H), 1.17 (d, J= 5.4 Hz, 3H), 1.15 - 0.98 (m, 1H), 1.04 - 0.91 (m, 8H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 800.7 (M+1), 822.7 (M+Na), MS (ES-) 834.8 (M+Cl).
Figure imgf000091_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-(((((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (74e) Etapa-1: Preparación del (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de (((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metilo (74b)
El compuesto (74b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 33 a partir de carbonato de clorometilo y 4-nitrofenilo (74a) (6 g, 25.9 mmol), Boc-L-valina (11.26 g, 51.8 mmol) y óxido de plata (6.00 g, 25.9 milimoles). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con EtOAc en hexano 0-40%] el (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de (((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metilo (74b) (2.2 g, 21% de rendimiento). 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.41 - 8.31 (m, 2H), 7.61 - 7.51 (m, 2H), 7.39 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 5.93 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 5.85 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.93 (dd, J = 7.7, 6.4 Hz, 1H), 2.11 - 2.02 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 0.91 (dd, J = 6.9, 1.8 Hz, 6H). Etapa-2: Preparación del (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (74c)
El compuesto (74c) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.24 g, 5.95 mmol) en acetona/agua (26 mL, 12:1), NaOH (0.49 g, 12.20 mmol) y (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de (((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metilo (74b)
(2.7 g, 6.55 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (24 g), eluyendo con EtOAc/MeoH (9:1) en hexano al 0-70%] el (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (74c) (1.01 g, 42% de rendimiento) como un sólido amarillo. MS (ES+): 409.5 (M+1); MS (ES-) 407.6 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((S)-6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-((terc butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (74d)
El compuesto (74d) se preparó a partir del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (10c) (0.6 g, 0.96 mmol) usando EDCI (0.28 g, 1.44 mmol) y (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (74c) (0.47 g, 1.15 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (12 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] y después HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((S)-6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (74d) (0.22 mg, 23% de rendimiento) como un sólido blanco. MS (ES+) 1016.8 (M+1).
Etapa-4: Preparación del 3-(2-((4-(N-(((((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (74e)
El compuesto (74e) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((S)-6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (74d) (0.22 g, 0.22 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.67 mL, 8.66 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa [columna C18, eluyendo con ACN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%], seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-(((((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (74e) (75 mg, 43% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.83 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.21 - 9.47 (m, 1H, D2O intercambiable), 8.79 - 8.55 (m, 6H, D2O intercambiable), 8.53 - 8.42 (m, 1H), 8.25 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 8.01 (m, 2H), 7.88 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 7.79 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 7.10 - 6.97 (m, 2H), 6.11 (dd, J= 17.8, 1.6 Hz, 1H), 6.02 - 5.68 (m, 4H), 5.50 - 5.31 (m, 1H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.94 - 3.81 (m, 4H), 3.30 - 3.15 (m, 2H), 2.22 (dt, J= 12.1,6.4 Hz, 1H), 2.16 - 1.96 (m, 2H), 1.16 - 1.01 (m, 1H), 0.98 (dd, J = 9.5, 6.9 Hz, 6H), 0.87 (dd, J= 6.9, 2.0 Hz, 6H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 816.7 (M+1); 838.7 (M+Na); Análisis calculado para: C41H49N7O11.2.7 5 HCL3.7 5 H2O.0.2 5 TFA: C, 49.24; H, 5.92; Cl, 9.63; N, 9.74; encontrado: C, 49.29; H, 5.99; Cl, 9.93; N, 9.76.
Figure imgf000092_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (75c)
Etapa 1: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-morfolinoetilo (75b)
El compuesto (75b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23 a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.5 g, 7.21 mmol) en acetona (30 mL), usando una solución de NaOH (0.63 g, 15.86 mmol) en agua (10 mL) y carbonato de 2-morfolinoetilo y (4-nitrofenilo) (75a) (0.8 g, 1.88 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Yoon, Suk Kyoon et al.; en la solicitud Int. PCT, 2004002985). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 a 100%) el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-morfolinoetilo (75b) (0.7 g, 2.395 mmol, 33.2% de rendimiento) como un sólido de color naranja claro. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 89.09 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.79 - 7.69 (m, 2H), 6.60 - 6.51 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 4.09 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.61 - 3.52 (m, 4H), 2.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.46 - 2.35 (m, 4H); MS (ES+) 585.6 (2M+1), MS (ES-) 291.4 (M-1), 327.5 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (75c)
El compuesto (75c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.2 g, 0.39 mmol) utilizando EDCI (0.09 g, 0.47 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-morfolinoetilo (75b) (0.12 g, 0.39 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [C18, 26 g, acetonitrilo en agua (con HCl al 0.1%) del 0 al 60% como eluyentes] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (75c) (0.08 g, 0.102 mmol, 26.0% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.87 - 10.61 (m, 1H), 8.69 - 8.45 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.08-7.94 (m, 2H), 7.88-7.70 (m, 4H), 7.11 - 6.96 (m, 2H), 6.80 - 6.68 (m, 1H), 6.06 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.49 - 5.39 (m, 1H), 4.72 - 4.55 (m, 2H), 4.07 - 3.58 (m, 9H), 3.59 - 3.35 (m, 2H), 3.30 - 3.16 (m, 4H), 2.49 - 2.35 (m, 1H), 1.25 - 0.89 (m, 10H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 785.8 (M+1), MS (ES-) 819.8 (M+Cl).
Figure imgf000093_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((ciclohexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (76c)
Etapa-1: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de ciclohexilo (76b)
El compuesto (76b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23 a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.96 g, 9.42 mmol) en acetona/agua (40 mL, 4:1), utilizando NaOH (0.79 g, 19.79 mmol) y carbonato de ciclohexilo y (4-nitrofenilo) (76a) (3.0 g, 11.31 mmol), preparado según el procedimiento descrito por Yoo, Moohi et al.; en la solicitud Int. PCT, 2010024586). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 80 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 al 100%) el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de ciclohexilo (76b) (1.59 g, 6.08 mmol, 65% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.14 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.59 (bs, 1H, D2O intercambiable), 7.85 - 7.58 (m, 2H), 6.63 - 6.41 (m, 2H), 5.84 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.66 - 4.39 (m, 1H), 1.94 - 1.78 (m, 2H), 1.76 - 1.62 (m, 2H), 1.58 - 1.46 (m, 1H), 1.42 - 1.15 (m, 5H); MS (ES+): 262.4 (M+1), 284.4 (M+Na); MS (ES-): 296.6 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-((ciclohexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (76c)
El compuesto (76c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (1.01 g, 1.91 mmol) usando EDCI (0.55 g, 2.87 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de ciclohexilo (76b) (0.5 g, 1.91 mmol) en DMF (15 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 40 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%) el 3-(2-((4-(N-((ciclohexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (76c) (0.28 g, 19% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.56 y 10.47 (2bs, 1H), 9.13 y 8.94 (2bs, 2H, D2O intercambiable), 8.64 y 8.55 (2bs, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.83 (m, 4H), 7.70 -7.61 (m, 2H), 7.16 - 6.88 (m, 2H), 6.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.06 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.79 - 4.63 (m, 1H), 4.61 - 4.45 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.30 - 3.07 (m, 2H), 1.96 - 1.80 (m, 2H), 1.75 - 1.62 (m, 2H), 1.60 - 1.46 (m, 1H), 1.45 - 0.98 (m, 15H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+): 770.7 (M+1), 792.8 (M+Na); Análisis calculado para: C41H47N5O1 0 0.5 H2O: C, 63.23; H, 6.21; N, 8.99; encontrado: C, 63.13; H, 6.20; N, 8.79.
Figure imgf000094_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (77c)
Etapa-1: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de (2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metilo (77b)
El compuesto (77b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23 a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (2.80 g, 13.46 mmol) en acetona/agua (40 mL, 4:1), utilizando NaOH (1.13 g, 28.3 mmol) y carbonato de (2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metilo y (4-nitrofenilo) (77a) (4.00 g, 13.46 mmol), preparado según el procedimiento descrito por Guenther, Sven et al.; en la solicitud Int. PCT, 2013016668). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 80 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 al 100%) el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de (2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metilo (77b) (2.78 g, 71% de rendimiento) como una cera amarilla. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.12 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.68 (bs, 1H, D2O intercambiable), 7.86 - 7.62 (m, 2H), 6.67 - 6.40 (m, 2H), 5.88 (bs, 2H, D2O intercambiable), 4.35 - 4.19 (m, 1H), 4.14 - 3.90 (m, 3H), 3.67(dd, J = 8.4, 6.2 Hz, 1H), 1.37 - 1.31 (m, 3H), 1.30 - 1.25 (m, 3H); MS (ES+): 294.3 (M+1), 316.4 (M+Na); MS (ES-): 292.5 (M-1); 328.5 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (77c)
El compuesto (77c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1- ((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (1.08 g, 2.05 mmol) usando EDCI (0.59 g, 3.07 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de (2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metilo (77b) (0.6 g, 2.05 mmol) en DMF (15 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [EZ-PREP, columna C-18, 50 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1 % en agua y acetonitrilo al 0-100%], seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (77c) (0.37 g, 22% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.40 (bs, 1H, D2O intercambiable), 10.80 y 10.72 (2s, 1H), 10.34 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.69 y 8.56 (2s, 1H), 8.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.94 (m, 2H), 7.89 - 7.67 (m, 4H), 7.13 - 6.95 (m, 2H), 6.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.83 - 4.61 (m, 1H), 4.49 - 4.29 (m, 2H), 4.28 - 4.13 (m, 1H), 4.07 (dd, J= 8.5, 6.3 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.76 (dd, J= 8.6, 5.8 Hz, 1H), 3.38 - 3.09 (m, 2H), 1.45 - 1.00 (m, 16H), 0.53 - 0.37 (m, 2H), 0.34 - 0.17 (m, 2H); MS (ES+): 802.7 (M+1); MS (ES-): 836.8 (M+Cl); Análisis calculado para: C41H47N5O12-2.0 H2O-1.0 HCl: C, 56.32; H, 5.99; Cl, 4.05; N, 8.01; encontrado: C, 56.31; H, 5.98; Cl, 4.31; N, 8.03.
Figure imgf000095_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (78d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (78b)
El compuesto (70b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (2.66 g, 7.00 mmol) en DMF (30 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (2.57 g, 8.75 mmol) y carbonato de clorometilo e isopropilo (78a) (1.60 g, 10.50 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo 1-(((ciclohexiloxi)carbonil)oxi)etilo (78b) (2.77 g, 5.57 mmol, 80% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.69 (s, 1H), 8.73 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14 - 6.88 (m, 2H), 6.01 (dd, J = 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.73 (s, 2H), 5.45 (dd, J = 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.86 - 4.61 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.30 - 3.17 (m, 2H), 1.25 - 1.19 (m, 6H), 1.17 - 1.05 (m, 1H), 0.53 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+): 497.5 (M+1).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((((isopropoxicarbonil)oxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (78c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (78b) (2.71 g, 5.46 mmol) utilizando el procedimiento que se describe en la etapa 11 del esquema 1 dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((((isopropoxicarbonil)oxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (78c)
(2.60 g, 5.07 mmol, 93% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 812.57 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.66 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.88 (s, 1H), 5.91 (dd, J = 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.72 (d, J= 2.5 Hz, 2H), 5.39 (dd, J= 11.2, 1.4 Hz, 1H), 4.73 (hept, J= 6.4 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.29 - 3.16 (m, 2H), 1.22 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 1.15 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 0.53 - 0.40 (m, 2H), 0.34 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+): 513.5 (M+1), 535.5 (M+Na); MS (ES-): 511.5 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (78d)
El compuesto (78d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((((isopropoxicarbonil)oxi)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (78c) (0.56 g, 1.1 mmol) usando e Dc I (0.32 g, 1.64 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.43 g, 1.64 mmol) en DMF (15 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (Dos columnas separadas: gel de sílice, 40 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%; tercera columna: EZ-PREP, columna C-18, 30 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y acetonitrilo al 0-100%]) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((isopropoxicarbonil)oxi)metilo (78d) (0.110 g, 0.145 mmol, 13% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 812.32 (bs, 1H, D2O intercambiable), 11.23 (bs, 1H, D2O intercambiable), 10.92 (s, 1H), 10.36 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.64 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.09 - 7.97 (m, 2H), 7.92 - 7.67 (m, 4H), 7.19 - 6.81 (m, 2H), 6.10 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.85 - 5.58 (m, 2H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.89 - 4.58 (m, 1H), 4.26 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.28 - 3.13 (m, 2H), 1.75 - 1.56 (m, 2H), 1.44 - 1.22 (m, 6H), 1.19 (d, J= 6.2 Hz, 6H), 1.17 - 1.02 (m, 1H), 0.92 - 0.82 (m, 3H), 0.54 - 0.37 (m, 2H), 0.36 - 0.17 (m, 2H); MS (ES+): 758.7 (M+1); MS (ES-): 792.6 (M+Cl); Análisis calculado para: C40H47N5O10 H2O.HCl: C, 59.14; H, 6.20; Cl, 4.36; N, 8.62; encontrado: C, 59.20; H, 6.27; Cl, 4.20; N, 8.57.
Figure imgf000096_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((4-(terc-butoxi)-4-oxobutoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (79c)
Etapa-1: Preparación del 4-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)butanoato de terc-butilo (79a)
El compuesto (79a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir del cloroformiato de 4-nitrofenilo (5.19 g, 24.97 mmol) en THF (50 mL) usando 4-hidroxibutanoato de ferc-butilo (4 g, 24.97 mmol) y trietilamina (7.66 mL, 54.9 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-50%) el 4-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)butanoato de terc-butilo (79a) (5.16 g, 64% de rendimiento) como un aceite transparente; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.37 - 8.21 (m, 2H), 7.64 - 7.43 (m, 2H), 4.26 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.00 - 1.78 (m, 2H), 1.40 (s, 9H).
Etapa-2: Preparación del 4-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)butanoato de terc-butilo (79b)
El compuesto (79b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (2.47 g, 11.88 mmol) en acetona/agua (26 mL, relación 12:1), utilizando NaOH (0.97 g, 24.35 mmol) y 4-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)butanoato de terc-butilo (79a) (4.25 g, 13.06 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23 Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 24 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-70%) el 4-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)butanoato de terc-butilo (79b) (1.66 g, 5.17 mmol, 43.5% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.14 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.83 - 7.64 (m, 2H), 6.62 -6.40 (m, 2H), 5.86 (s, 2H), 3.98 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 2.28 (t, J= 7.3 Hz, 2H), 1.81 (p, J= 6.9 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H); MS (ES+) 322.5 (M+1), 344.5 (M+Na); (ES-) 356.5 (M+Cl).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-((4-(terc-butoxi)-4-oxobutoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (79c)
El compuesto (79c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c)
(1.0 g, 1.9 mmol) usando EDCI (0.55 g, 2.85 mmol) y 4-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)butanoato de terc-butilo (79b) (0.67 g, 2.09 mmol) en DMF (20 mL) y piridina (4 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (24 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] y HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] el 3-(2-((4-(N-((4-(terc-butoxi)-4-oxobutoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (79c) (128 mg, 0.154 mmol, 8.12% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.74 (d, J= 24.7 Hz, 1H), 10.32 (brs, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J= 30.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.08 - 7.95 (m, 2H), 7.88 - 7.68 (m, 4H), 7.12 - 6.92 (m, 2H), 6.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 17.6 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.79 - 4.60 (m, 1H), 4.26 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.27 - 3.14 (m, 2H), 2.37 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 1.89 (p, J= 6.9 Hz, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.23 - 1.07 (m, 12H), 0.48 - 0.39 (m, 2H), 0.30 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 830.8 (M+1); (ES' ) 864.9 (M+Cl).
Figure imgf000097_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2-etoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (80c)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 2-etoxietilo y (4-nitrofenilo) (80a)
El compuesto (80a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (6.11 g, 29.4 mmol) en THF (50 mL) usando 2-etoxietanol (3 mL, 31.0 mmol) y trietilamina (9.49 mL, 68.1 mmol). Esto dio después del tratamiento el carbonato de 2-etoxietilo y (4-nitrofenilo) (80a) (7.53 g, 95% de rendimiento) como un jarabe marrón que se puede usar como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1H NMR (300 MHz, DIVISOR) 88.40 - 8.23 (m, 2H), 7.65 - 7.50 (m, 2H), 4.41 - 4.30 (m, 2H), 3.72 - 3.60 (m, 2H), 3.48 (p, J = 7.1 Hz, 2H), 1.13 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
Etapa 2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-etoxietilo (80b)
El compuesto (80b) se preparó a partir del dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (6.11 g, 29.4 mmol) en acetona (100 mL), usando solución acuosa de NaOH 1 M (61.7 mL, 61.7 mmol) y una solución de carbonato de etoxietilo y (4-nitrofenilo) (80a) (7.5 g, 29.4 mmol) en acetona (25 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 80 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 al 100%) el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-etoxietilo (80b) (7.0 g, 95% de rendimiento) como un sólido marrón; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 89.13 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 7.87 - 7.54 (m, 2H), 6.67 - 6.36 (m, 2H), 5.86 (s, 2H), 4.13 - 4.05 (m, 2H), 3.61 - 3.52 (m, 2H), 3.46 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.12 (t, J = 7.0 Hz, 3H); MS (ES+) 252.3 (M+1), (ES-) 250.4 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2-etoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (80c)
El compuesto (80c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c)
(0.5 g, 0.98 mmol) usando EDCI (0.28 g, 1.47 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-etoxietilo (80b) (0.31 g, 1.23 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 25 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] seguido de liofilización, el hidrocloruro de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2-etoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (80c) (0.25 g, 34% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.63 - 10.38 (m, 1H), 9.29 - 8.73 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.67 - 8.47 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.99 (s, 2H), 7.93 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.74 - 7.60 (m, 2H), 7.10 - 6.94 (m, 2H), 6.73 (s, 1H), 6.05 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.11 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.57 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.45 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.29 - 3.14 (m, 2H), 2.49 - 2.37 (m, 1H), 1.17 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 1.11 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.05 - 0.91 (m, 7H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 766.7 (M+Na).
Figure imgf000098_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropilcarbamoil)oxi)etilo (81d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropilcarbamoil)oxi)etilo (81 b)
El compuesto (81b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(cidopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (1.0 g, 2.63 mmol) en DMF (5 mL) usando N,N'-dicidohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.88 g, 3.02 mmol) e isopropilcarbamato de 1 -cloroetilo (81a) (1.08 g, 6.57 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Dugar, Sundeep et al.; en la solicitud Int. PCT, 2012137225). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropilcarbamoil)oxi)etilo (81b) (0.76 g, 57% de rendimiento) como un jarabe amarillo; 1H Nm R (300 MHz, Dm So -cÍ6) 89.70 y 9.65 (2s, 1H), 8.68 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 8.25 (dd, J = 8.1, 5.8 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 25.3, 7.6 Hz, 1H), 7.07 - 6.91 (m, 2H), 6.68 (dd, J= 5.7, 1.7 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.48 -5.36 (m, 1H), 3.91 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 3.51 (dt, J= 12.8, 6.3 Hz, 1H), 3.23 (dd, J = 13.4, 7.0 Hz, 2H), 1.18 - 1.03 (m, 4H), 1.05 - 0.92 (m, 6H), 0.52 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropilcarbamoil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (81c)
La oxidación de la preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropilcarbamoil)oxi)etilo (81b)
(0.73 g, 1.43 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropilcarbamoil)oxi)etoxi)carbonil)piridina-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (81c) (0.7 g, 93% de rendimiento) como un sólido amarillo; MS (ES+) 548.3 (M+Na), (ES-) 524.3 (M-1). Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropilcarbamoil)oxi)etilo (81d)
El compuesto (81d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropilcarbamoil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (13c) ((0.69 g, 1.31 mmol) usando EDCI (0.302 g, 1.575 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.346 g,, 1.313 mmol) en DMF (2 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 24 g, eluyendo con mezcla de EtOAc y metanol 9:1 en hexanos del 0 al 100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropilcarbamoil)oxi)etilo (81d) (0.088 g, 9% de rendimiento) como un polvo amarillo claro; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.63 - 10.37 (m, 1H), 9.36 - 8.79 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.68 - 8.41 (m, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.05 - 7.92 (m, 4H), 7.91 (s, 1H), 7.75 - 7.57 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.10 - 6.95 (m, 2H), 6.77 -6.65 (m, 1H), 6.05 (d, J= 18.0 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.99 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.61 -3.42 (m, 1H), 3.28 - 3.18 (m, 2H), 1.68 - 1.48 (m, 2H), 1.39 - 1.21 (m, 6H), 1.21 - 1.03 (m, 4H), 1.05 - 0.91 (m, 6H), 0.91 - 0.80 (m, 2H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 771.8 (M+1), 793.7 (M+Na), (ES-) 805.9 (M+Cl).
Figure imgf000099_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(isopropoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (82a)
El compuesto (82a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (1.1 g, 2.16 mmol) utilizando EDCI (0.62 g, 3.23 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de isopropilo (63b) (0.57 g, 2.59 mmol) en DMF (17 mL) y piridina (8 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (12 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] y después HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(isopropoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (82a) (65 mg, 4% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.67 (d, J = 20.0 Hz, 1H, D2O intercambiable), 10.28 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.63 (d, J = 28.2 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.91 (m, 2H), 7.84 - 7.66 (m, 4H), 7.12 - 6.93 (m, 2H), 6.73 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.13 -5.93 (m, 1H), 5.45 (d, J = 11.7 Hz, 1H), 5.10 - 4.95 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.46 - 2.38 (m, 2H), 1.32 (d, J = 6.2 Hz, 6H), 1.17 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.11 - 0.94 (m, 7H), 0.49 - 0.38 (m, 2H), 0.30 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 730.7 (M+1); Análisis calculado para: C3sH43N5O9.2 H2O.3 HCl: C, 58.03; H, 5.96; N, 8.90; encontrado: C, 57.94; H, 6.13; N, 8.92.
Figure imgf000100_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-propoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (83c)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 4-nitrofenilo y (2-propoxietilo) (83a)
El compuesto (83a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (10 g, 48.1 mmol) en THF (150 mL) usando 2-propoxietanol (5.51 g, 52.9 mmol) y trietilamina (14.76 mL, 106 mmol). Esto dio después de tratamiento el carbonato de 4-nitrofenilo y (2-propoxietilo) (83a) (7.2 g, 56% de rendimiento) que se puede usar en la siguiente etapa sin más purificación; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 88.36 - 8.26 (m, 2H), 7.60 - 7.51 (m, 2H), 4.41 - 4.30 (m, 2H), 3.70 - 3.61 (m, 2H), 3.39 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.58 - 1.45 (m, 2H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
Etapa-2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-propoxietilo (83b)
El compuesto (80b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) ((4.92 g, 23.63 mmol) en acetona/agua (26 mL, 12:1), usando hidróxido de sodio (1.94 g, 48.5 mmol) y carbonato de 4-nitrofenilo y (2-propoxietilo) (83a) (7.0 g, 26.0 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-70%] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-propoxietilo (83b) (1.66 g, 44% de rendimiento) como un sólido amarillo. 1 H Nm R (300 MHz, DMSO-d6) 8 9.10 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 7.82 - 7.64 (m, 2H), 6.60 - 6.43 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 4.13 - 4.03 (m, 2H), 3.61 - 3.50 (m, 2H), 3.37 - 3.31 (m, 2H), 1.58 - 1.41 (m, 2H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H); MS (ES-) 264.5 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-propoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (83c)
El compuesto (83c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (1.0 g, 1.90 mmol) usando EDCI (0.55 g, 2.85 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-propoxietilo (83b) (0.55 g, 2.09 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (24 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] y después HPLC preparativa [columna C18, eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-propoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (83c) (26 mg, 2% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.47 (brs, 1H, D2O intercambiable), 10.69 (d, J = 25.6 Hz, 1H, D2O intercambiable), 10.17 br(s, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J = 29.6 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.96 (m, 2H), 7.86 - 7.69 (m, 4H), 7.15 - 6.93 (m, 2H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.06 (dd, J = 17.7, 1.5 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 10.7 Hz, 1H), 4.79 - 4.60 (m, 1H), 4.42 - 4.25 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.71 - 3.57 (m, 2H), 3.27 - 3.15 (m, 3H), 1.51 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 1.26 - 1.00 (m, 12H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.48 - 0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 774.7 (M+1); (ES-) 808.8 (M+Cl); Análisis calculado para C40H47N5O11.HCM.2 5 H2O: C, 57.69; H, 6.11; N, 8.41; encontrado: C, 57.77; H, 5.98; N, 8.31.
Figure imgf000101_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2,3-dihidroxipropoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (84a)
A una solución agitada de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (77c) (0.15 g, 0.19 mmol) en acetonitrilo (5 mL) se añadió HCl ac. 1 N (0.37 mL, 0.37 mmol), se continuó agitando durante 2 h. El exceso de disolvente se evaporó a presión reducida. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida [EZ-PREP, columna C-18, 30 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y acetonitrilo al 0-100%], los tubos deseados se combinaron y liofilizaron para proporcionar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2,3-dihidroxipropoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (84a) (0.079 g, 55% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 11.15 y 12.5 (2bs, 1H, D2O intercambiable), 10.85 y 10.78 (2s, 1H), 10.36 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.66 y 8.56 (2bs, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.10 - 7.93 (m, 2H), 7.88 - 7.56 (m, 4H), 7.12 -6.96 (m, 2H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.09 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.78 - 4.63 (m, 1H), 4.33 (dd, J = 11.0, 3.7 Hz, 1H), 4.18 (dd, J = 11.1,6.5 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.82 - 3.70 (m, 1H), 3.54 - 3.36 (m, 2H), 3.27 - 3.18 (m, 2H), 1.23 - 1.09 (m, 10H), 0.49 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe/D2O) 810.67 y 10.63 (2s, 1H), 9.08 - 8.93 y 8.93 - 8.80 (2m, 1H), 8.25 - 8.15 (m, 1H), 8.05 - 7.88 (m, 2H), 7.81 - 7.58 (m, 4H), 7.09 - 6.84 (m, 2H), 6.60 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.43 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.75 - 4.56 (m, 1H), 4.30 (dd, J = 11.2, 3.6 Hz, 1H), 4.24 - 4.12 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.80 - 3.72 (m, 1H), 3.49 - 3.33 (m, 2H), 3.28 - 3.07 (m, 2H), 1.27 - 0.99 (m, 10H), 0.51 - 0.34 (m, 2H), 0.31 - 0.14 (m, 2H); MS (ES+): 762.6 (M+1); MS (ES-): 796.5 (M+Cl); Análisis calculado para: C3 s H43 N5 O12 -2H2 O-1HCl C, 54.58; H, 5.76; Cl, 4.51; N, 8.33; encontrado: C, 54.71; H, 5.80; Cl, 4.25; N, 8.39.
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Preparación del 6-((ciclopropNmetN)carbamoN)-3-(2-((4-(N-((2-hidroxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (85d) Etapa-1: Preparación del carbonato de 2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etilo y (4-nitrofenilo) (85a)
El compuesto (85a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (1.09 g, 5.39 mmol) en THF (40 mL) usando 2-(terc-butildimetilsililoxi)etanol (1 g, 5.67 mmol) y trietilamina (0.95 mL, 6.81 mmol). Esto dio después de tratamiento el carbonato de 2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etilo y (4-nitrofenilo) (85a) (1.65 g, 85% de rendimiento) como un sólido de color naranja claro que se puede utilizar como tal en la siguiente etapa sin más purificación.
Etapa-2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etilo (85b) El compuesto (85b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) 1.01 g, 4.83 mmol) en acetona (30 mL), agua (5 mL) usando una solución acuosa de NaOH 6 M (2.01 mL, 12.08 mmol) y una solución de carbonato de 2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etilo y (4-nitrofenilo) (85a) (1.65 g, 4.83 mmol) en acetona (10 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, MeOH:EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100% como eluyente] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etilo (85b) (1.05 g, 64% de rendimiento) como una masa pastosa; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.11 (s, 1H), 8.63 (s, 1 H), 7.75 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.60 - 6.50 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 4.08 - 3.97 (m, 2H), 3.84 - 3.72 (m, 2H), 0.86 (s, 9H), 0.06 (s, 6H); MS (ES-) 372.4 (M+Cl).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-((2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (85c)
El compuesto (85c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c)
(0.45 g, 0.88 mmol) usando EDCI (0.20 g, 1.06 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etilo (85b) (0.30 g, 0.88 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, EtOAc en hexanos del 0 al 100% como eluyentes] el 3-(2-((4-(N-((2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (85c) (0.20 g, 27% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 810.62 - 10.40 (m, 1H), 9.29 - 8.79 (m, 2H), 8.67 - 8.43 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.08-7.59 (m, 6H), 7.13 - 6.95 (m, 2H), 6.82 - 6.65 (m, 1H), 6.05 (dd, J= 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.51 - 5.39 (m, 1H), 4.06 (dd, J = 6.0, 4.2 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.79 (dd, J = 6.0, 4.3 Hz, 2H), 3.28 - 3.16 (m, 2H), 2.47 - 2.28 (m, 1H), 1.28 - 0.89 (m, 10H), 0.86 (s, 9H), 0.50 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.24 (m, 2H), 0.05 (s, 6H).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2-hidroxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (85d)
El compuesto (85d) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-((2-((terc-butildimetilsilil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (85c) (0.19 g, 0.23 mmol) en diclorometano (2 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.18 mL, 2.29 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por HPLC preparativa [columna C18, eluyendo con ACN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%], seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2-hidroxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (85d) (0.075 g, 46% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 812.49 (s, 1H), 11.13 (s, 1H), 10.90 - 10.63 (m, 1H), 10.37 (s, 1H), 8.73 - 8.45 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.11- 7.89 (m, 2H), 7.89-7.68 (m, 4H), 7.11 - 6.95 (m, 2H), 6.80 - 6.67 (m, 1H), 6.07 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.45 (dd, J = 11.3, 1.4 Hz, 1H), 4.30 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.68 (t, J = 4.9 Hz, 2H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.47 - 2.33 (m, 1H), 1.18 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.16 - 1.01 (m, 1H), 1.04 - 0.92 (m, 6H), 0.49 - 0.40 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 716.7 (M+1), MS (ES-) 750.7 (M+Cl).
Figure imgf000103_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)- 3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (86d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (86b)
El compuesto (86b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (3.04 g, 8.0 mmol) en DMF (80 mL) utilizando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (2.93 g, 10.0 mmol) y carbonato de 1 -cloroetilo y ((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metilo) (86a) (2.86 g, 12.0 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Ascher, Gerd y Thirring, Klaus, en la solicitud Int. PCT, 2004067536). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 80 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos al 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (86b) (3.48 g, 75% de rendimiento) como una cera amarilla; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.49 - 9.37 (m, 1H), 8.53 - 8.36 (m, 1H), 8.00 (dd, J= 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.86 - 6.64 (m, 2H), 6.44 - 6.27 (m, 1H), 5.75 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.18 (dd, J = 11.4, 1.3 Hz, 1H), 4.04 - 3.83 (m, 2H), 3.82 - 3.68 (m, 2H), 3.68 - 3.60 (m, 3H), 3.47 - 3.33 (m, 1H), 3.05 - 2.92 (m, 2H), 1.15 - 0.75 (m, 10H), 0.31 - 0.13 (m, 2H), 0.08 - -0.06 (m, 2H); MS (ES+): 583.5 (M+1), 605.5 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (86c)
La oxidación del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -((((2,2-dimetil-1.3- dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (86b)
(3.21 g, 5.51 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1 dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((cidopropNmetN)carbamoN)-2-((1-((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (86c) (3.19 g, , 97% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DIVISOR) 812.6 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.66 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 8.0, 1.0 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 17.8, 11.2 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.69 - 6.55 (m, 1H), 5.92 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.39 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 4.12 -3.92 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.65 (dd, J = 8.5, 5.9 Hz, 1H), 3.33 - 3.18 (m, 2H), 1.37 - 1.11 (m, 10H), 0.54 - 0.41 (m, 2H), 0.34 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+): 599.6 (M+1), 621.6 (M+Na); MS (ES-): 597.7 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ddopropNmetN)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (86d)
El compuesto (86d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((cidopropNmetN)carbamoN)-2-((1-((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (86c) (1.45 g, 2.42 mmol) utilizando e Dc I (0.7 g, 3.63 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.64 g, 2.42 mmol) en DMF (15 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (dos columnas: [EZ-PREP, columna C-18, 30 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y acetonitrilo al 0-100%]; segunda columna: gel de sílice, 40 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%]) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(((2,2-dimetil-1.3- dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (86d) (0.23 g, 11% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.55 y 10.48 (2bs, 1H), 9.12 y 8.93 (2bs, 2H, D2O intercambiable), 8.66 y 8.58 (2bs, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 - 7.83 (m, 4H), 7.80 - 7.57 (m, 2H), 7.15 - 6.90 (m, 2H), 6.75 - 6.48 (m, 1H), 6.06 (dd, J= 17.7, 1.5 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.28 - 4.14 (m, 1H), 4.11 - 3.92 (m, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.63 (dd, J = 8.3, 6.0 Hz, 1H), 3.23 (s, 2H), 1.72 - 1.53 (m, 2H), 1.43 - 1.02 (m, 18H), 1.00 - 0.77 (m, 3H), 0.56 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+): 844.8 (M+1); Análisis calculado para: C44H53N5O1 2 0.5 H2O: C, 61.96; H, 6.38; N, 8.21; encontrado: C, 62.08; H, 6.24; N, 8.10.
Figure imgf000104_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (87 a)
La hidrólisis del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (86d) (0.17 g, 0.2 mmol) en acetonitrilo (5 mL) usando HCl ac. 1 N (0.201 mL, 0.201 mmol), según el procedimiento descrito en el esquema 84, dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [EZ-PREP, columna C-18, 30 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y acetonitrilo al 0-100%], seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2,2-dimetil-1,3-dioxolan-4-il)metoxi)carbonil)oxi)etilo (87 a) (0.067 g, 0.083 mmol, 41% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.03 y 11.06 (2bs, 1H, D2O intercambiable), 10.80 y 10.72 (2s, 1H), 10.34 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.69 y 8.57 (2s, 1H), 8.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.11 - 7.92 (m, 2H), 7.77 (d, J = 6.5 Hz, 4H), 7.15 - 6.92 (m, 2H), 6.63 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.90 (bs, 1H, D2O intercambiable), 4.25 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 4.18 - 3.96 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.67 - 3.57 (m, 1h), 3.37 - 3.13 (m, 4H, observado después del intercambio con D2O), 1.78 - 1.56 (m, 2H), 1.51 - 0.95 (m, 10H), 0.96 - 0.78 (m, 3H), 0.53 - 0.36 (m, 2H), 0.34 - 0.16 (m, 2H); MS (ES+): 804.7 (M+1); MS (ES-): 838.9 (M+Cl); Análisis calculado para: C41 H49 N5 O12 -2H2OHCl: C, 56.19; H, 6.21; Cl, 4.05; N, 7.99; encontrado: C, 56.28; H, 6.01; Cl, 4.02; N, 7.93.
Esquema 88
Figure imgf000105_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etilo (88d)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 1 -cloroetilo y hexilo (88a)
A una solución helada de hexan-1-ol (6.14 mL, 48.9 mmol) en DCM (100 mL) y piridina (4.35 mL, 53.8 mmol) se añadió cloroformiato de 1 -cloroetilo (23b) (5.28 mL, 48.9 mmol) y se dejó calentar a temperatura ambiente durante la noche. El sólido obtenido se separó por filtración, se añadió agua (150 mL) al filtrado y las capas se separaron. La capa orgánica se secó, filtró y evaporó a sequedad para proporcionar el carbonato de 1 -cloroetilo y hexilo (88a) (9.88 g, 97% de rendimiento) como aceite transparente; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 86.50 (q, J = 5.7 Hz, 1H), 4.16 (td, J = 6.5, 0.9 Hz, 2H), 1.76 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 1.68 - 1.53 (m, 1H), 1.45 - 1.15 (m, 7H), 0.93 - 0.79 (m, 3H). Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etilo (88b)
El compuesto (88b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (3.04 g, 8.0 mmol) en DMF (5 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (2.93 g, 10.0 mmol) y carbonato de 1 -cloroetilo y hexilo (88a) (2.5 g, 12.0 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 25 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos al 0-50%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etilo (88b) (3.91 g, 88% de rendimiento) como una cera amarilla; 1H nMr (300 MHz, DMSO-cfe) 8 9.68 (s, 1h), 8.80 - 8.62 (m, 1H), 8.26 (dd, J= 8.0, 1.2 Hz, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.07 (dd, J = 8.0, 0.8 Hz, 1H), 7.13 - 6.91 (m, 2H), 6.67 -6.58 (m, 1H), 6.01 (dd, J = 17.8, 1.1 Hz, 1H), 5.53 - 5.31 (m, 1H), 4.09 - 3.95 (m, 2H), 3.90 (d, J = 3.7 Hz, 3H), 3.27 - 3.22 (m, 2H), 1.69 - 1.42 (m, 2H), 1.36 - 1.03 (m, 10H), 0.94 - 0.71 (m, 3H), 0.54 - 0.39 (m, 2H), 0.36 -0.19 (m, 2H); MS (ES+): 575.5 (M+Na); MS (ES-): 551.7 (M-1).
Etapa-3: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5- vinilbenzoico (88c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etilo (88b) (3.86 g, 6.98 mmol) usando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (88c) (3.15 g, 79% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 812.66 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.64 (bs, 1H), 8.21 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.95 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.98 (dd, J = 17.8, 11.3 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.71 -6.53 (m, 1H), 5.91 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.38 (dd, J= 11.3, 1.4 Hz, 1H), 4.12 - 3.96 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.29 - 3.17 (m, 2H), 1.66 - 1.46 (m, 2H), 1.35 - 1.02 (m, 10H), 0.95 - 0.72 (m, 3H), 0.54 - 0.39 (m, 2H), 0.35 -0.21 (m, 2H); MS (ES+): 591.6 (M+Na); MS (ES-): 567.6 (M-1).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etilo (88d)
El compuesto (88d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (88c) (1.3 g, 2.29 mmol) usando EDCI (0.66 g, 3.43 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.60 g, 2.29 mmol) en DMF (30 mL) y piridina (10 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [EZ-Prep, columna C-18, 50 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y acetonitrilo al 0-100%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etilo (88d) (0.787 g, 0.967 mmol, 42% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 812.32 y 11.09 (2bs, 1H, D2O intercambiable), 10.78 y 10.74 (2s, 1H), 10.36 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.66 y 8.57 (2s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 - 7.94 (m, 2H), 7.92 - 7.65 (m, 4H), 7.16 - 6.92 (m, 2H), 6.81 - 6.48 (m, 1H), 6.08 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.26 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 4.15 - 3.94 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.31 - 3.16 (m, 2H), 1.78 - 1.61 (m, 2H), 1.58 - 1.46 (m, 2H), 1.46 - 0.98 (m, 16H), 0.96 - 0.75 (m, 6H), 0.53 - 0.37 (m, 2H), 0.35 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+): 814.8 (M+1), 836.8 (M+Na); Análisis calculado para: C44 H55 N5 O10 -2H2 OHCl: C, 59.62; H, 6.82; Cl, 4.00; N, 7.90; encontrado: C, 59.77; H, 6.53; Cl, 3.84; N, 8.05.
Figure imgf000106_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((((S)-5-(terc-butoxi)-4-hidroxi-5-oxopentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (89d)
Etapa-1: Preparación del (S)-2-hidroxi-5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentanoato de terc-butilo (89b)
El compuesto (89b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (0.44 g, 2.13 mmol) en DCM (20 mL) usando (S)-2,5-dihidroxipentanoato de terc-butilo (89a) (0.45 g, 2.36 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Zhang, Dan-Wei et al.; en Tetrahedron, 65(48), 9997-10001; 2009) y piridina (0.91 mL, 2.36 mmol). Esto dio después del tratamiento el (S)-2-hidroxi-5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentanoato de terc-butilo (89b) (0.32 g, 38% de rendimiento) como un jarabe marrón que se puede usar como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 88.40 - 8.24 (m, 2H), 7.64 - 7.44 (m, 2H), 5.30 (d, J = 5.8 Hz, 1H, D2O intercambiable), 4.26 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.94 (dt, J = 6.2, 4.0 Hz, 1H), 1.85 - 1.56 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).
Etapa-2: Preparación del (S)-5-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)-2-hidroxipentanoato de terc-butilo (89c)
El compuesto (89c) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (0.2 g, 0.96 mmol) en acetona (30 mL), utilizando una solución de NaOH (solución 1 M, 7.3 mL, 7.3 mmol) y una solución de (S)-2-hidroxi-5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentanoato de terc-butilo (89b) (0.31 g, 0.87 mmol) en acetona (30 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 al 100%) el (S)-5-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)-2-hidroxipentanoato de terc-butilo (89c) (0.2 g, 64% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.15 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.63 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.87 - 7.58 (m, 2H), 6.65 - 6.45 (m, 2H), 5.85 (s, 2H, D2O intercambiable), 5.23 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 4.06 - 3.92 (m, 2H), 3.90 (dd, J = 6.0, 3.4 Hz, 1H), 1.73 - 1.50 (m, 4H), 1.41 (s, 9H).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-((((S)-5-(terc-butoxi)-4-hidroxi-5-oxopentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 11 -(isobutiriloxi)etilo (89d)
El compuesto (89d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.26 g, 0.51 mmol) usando EDCI (0.19 g, 0.61 mmol) y (S)-5-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)-2-hidroxipentanoato de terc-butilo (89c) (0.18 g, 0.51 mmol) en DMF (1 mL) y piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] seguido de cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 26 g) eluyendo con HCl al 0.1% y acetonitrilo seguido de liofilización que proporcionó el 3-(2-((4-(N-(((((S)-5-(terc-butoxi)-4-hidroxi-5-oxopentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (89d) (0.25 g, 58% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 812.61 - 12.13 (m, 1H, D2O intercambiable), 11.36 - 10.98 (m, 1H, D2O intercambiable), 10.83 - 10.59 (m, 1H), 10.53 - 10.19 (m, 1H, D2O intercambiable), 8.71 - 8.43 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.96 (m, 2H), 7.82 - 7.73 (m, 4H), 7.11 - 6.94 (m, 2H), 6.80 - 6.63 (m, 1H), 6.07 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.38 - 4.20 (m, 1H), 4.03 - 3.75 (m, 5H), 3.29 - 3.08 (m, 2H), 2.46 - 2.39 (m, 1H), 1.85 - 1.56 (m, 4H), 1.41 (s, 9H), 1.18 (d, J= 5.2 Hz, 3H), 1.12 - 1.03 (m, 1H), 1.03 - 0.91 (m, 6H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 844.8 (M+1), 866.8 (M+Na).
Figure imgf000107_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((dimetilcarbamoil)oxi)etilo (90d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((dimetilcarbamoil)oxi)etilo (90b)
El compuesto (90b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (1.0 g, 2.63 mmol) en DMF (5 mL) usando N,N'-dicidohexil-4-morfolinacarboxamidina (0.89 g, 3.02 mmol) y dimetilcarbamato de 1 -cloroetilo (90a) 1.0 g, 6.57 mmol; n° CAS 92600-24-3). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 125 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((dimetilcarbamoil)oxi)etilo (16b) (0.73 g, 56% de rendimiento) como un jarabe amarillo; MS (ES+) 518.5 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((cidopropNmetN)carbamoN)-2-((1-((dimetilcarbamoil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (90c) La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((dimetilcarbamoil)oxi)etilo (90b) (0.71 g, 1.43 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1 dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((dimetilcarbamoil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (90c) (0.81 g, 110% de rendimiento) como un sólido amarillo; MS (ES+0 534.3 (M+Na), (ES-) 510.4 (M-1). Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((dimetilcarbamoil)oxi)etilo (90d) El compuesto (90d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((dimetilcarbamoil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (90c) (0.8 g, 1.56 mmol) utilizando EDCI (0.36 g, 1.87 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.412 g, 1.564 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 12 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%) seguido de cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 26 g) eluyendo con HCl al 0.1% y acetonitrilo, seguido de liofilización, proporcionó el hidrocloruro de 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(2-((4-(N-((hexNoxi)carbonN)carbamimidoN)fenN)carbamoN)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((dimetilcarbamoil)oxi)etilo (90d) (0.029 g, 3% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.58 (s, 1H), 8.74 - 8.59 (m, 1H), 8.61 - 8.46 (m, 1H), 8.21 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.91 (m, 2H), 7.86 - 7.70 (m, 4H), 7.12 - 6.96 (m, 2H), 6.77 - 6.59 (m, 1H), 6.06 (d, J= 17.9 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.28 - 4.14 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.80 - 2.62 (m, 6H), 1.73 -1.57 (m, 2H), 1.42 - 1.25 (m, 7H), 1.26 -1.13 (m, 2H), 1.13 - 1.01 (m, 1H), 0.94 - 0.83 (m, 3H), 0.50 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 757.6 (M+1), (ES-) 791.6 (M+Cl); Análisis calculado para: C40H4sN6O9.HCl.2 H2O: C, 57.93; H, 6.44; N, 10.13; encontrado: C, 57.87; H, 6.23; N, 9.97.
Figure imgf000108_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2S,3S)-1-etoxi-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)oxi)etilo (91 d)
Etapa-1: Preparación del (2S,3S)-2-(((1-cloroetoxi)carbonil)amino)-3-metilpentanoato de etilo (91a) El compuesto (91a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 88 a partir del hidrocloruro de (2S,3S)- 2-amino-3-metilpentanoato de etilo (3.0 g, 15.33 mmol) y carbonocloridato de 1-cloroetilo (23b) (2.56 mL, 23.00 mmol) en THF (50 mL) usando trietilamina (8.55 mL, 61.3 mmol). Esto dio después del tratamiento el (2S,3S)-2-(((1-cloroetoxi)carbonil)amino)-3-metilpentanoato de etilo (91a) (4.5 g, 110% de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 8.14 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.64 - 6.48 (m, 1H), 4.24 - 3.98 (m, 2H), 4.00 - 3.87 (m, 1H), 3.31 - 3.10 (m, 2H), 1.90 - 1.63 (m, 4H), 1.48 - 1.30 (m, 1H), 1.25 -1.13 (m, 3H), 1.07 (td, J = 7.0, 3.7 Hz, 2H), 0.93 - 0.72 (m, 3H); MS (ES-) 300.4 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2S,3S)-1-etoxi-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)oxi)etilo (91b)
El compuesto (91b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(cidopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (3.0 g, 7.89 mmol) en DMF (30 mL) utilizando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (3.47 g, 11.83 mmol) y (2S,3S)-2-((1-cloroetoxi)carbonilamino)-3-metilpentanoato de etilo (91a) (3.14 g, 11.83 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 125 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2S,3S)-1-etoxi-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)oxi)etilo (91b) (313 mg, 7% de rendimiento) como un jarabe espeso amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 89.74 - 9.58 (m, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.32 - 8.18 (m, 1H), 8.16 - 8.03 (m, 2H), 7.98 - 7.73 (m, 1H), 7.13 - 6.87 (m, 2H), 6.74 - 6.59 (m, 1H), 6.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 9.8 Hz, 3H), 3.28 - 3.16 (m, 2H), 1.90 - 1.58 (m, 1H), 1.56 - 1.28 (m, 2H), 1.24 - 1.02 (m, 6H), 0.89 - 0.70 (m, 9H), 0.56 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 610.6 (M+1), 632.5 (M+Na).
Etapa-3: Preparación del ácido 2-(2-((7S)-7-((S)-sec-butil)-3-metil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-6-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (91c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2S,3S)-1-etoxi-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)oxi)etilo (91b) (0.30 g, 0.49 mmol) utilizando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido 2-(2-((7S)-7-((S)-sec-butil)-3-metil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-6-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (91c) (0.31 g, 100%) como un sólido amarillo; MS (ES+) 648.5 (M+Na), 624.5 (M-1).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2S,3S)-1-etoxi-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)oxi)etilo (91d)
El compuesto (91d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(((hexiloxi)carbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5 vinilbenzoico (88c) (0.30 g, 0.48 mmol) usando EDCI (0.14 g, 0.73 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.18 g, 0.68 mmol) en DMF (2 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 25 g, eluyendo con mezcla de acetato de etilo y metanol 9:1 en hexanos del 0 al 100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4- (N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((2S,3S)-1-etoxi-3-metil-1-oxopentan-2-il)carbamoil)oxi)etilo (91d) (0.065 g, 15% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.89 - 10.65 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.28 (s, 2H, D2O intercambiable), 9.05 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.73 - 8.39 (m, 4H, 3H D2O intercambiable), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.13 - 7.96 (m, 2H), 7.90 - 7.71 (m, 4H), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 6.87 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.17 - 6.01 (m, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 3.80 (s, 1H), 3.24 (s, 2H), 1.95 - 1.67 (m, 1H), 1.44 - 0.97 (m, 6H), 0.93 - 0.67 (m, 6H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.35 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 671.5 (M+1), 693.4 (M+Na); Análisis calculado para: C46H58N6O11.0.5 H2O: C, 62.78; H, 6.76; N, 9.55; Encontrado: C, 62.81; H, 6.78; N, 9.13.
Figure imgf000109_0001
Preparación del ácido (2S)-5-((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3il)-4- metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)-2-hidroxipentanoico (92a)
El compuesto (92a) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-((((S)-5-(terc-butoxi)-4-hidroxi-5-oxopentN)oxi)carbonN)carbamimidoN)fenN)carbamoN)-5-metoxi-4-vinNfenN)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (89c) (0.1 g, 0.12 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.18 mL, 2.37 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 26 g) eluyendo con HCl acuoso al 0.1% y acetonitrilo al 0-100%, seguido de liofilización, el ácido (2S)-5-((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)-2-hidroxipentanoico (92a) (0.041 g, 44% de rendimiento) sal de hidrocloruro como un sólido blanco. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.69 (d, J = 22.0 Hz, 1H), 8.57 (d, J= 25.8 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.11 - 7.92 (m, 2H), 7.77 (s, 4H), 7.14 - 6.90 (m, 2H), 6.74 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 6.06 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.41 - 4.17 (m, 2H), 4.06 - 3.94 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.43 (p, J = 1.9 Hz, 1H), 1.84 -1.73 (m, 3H), 1.69 - 1.51 (m, 1H), 1.18 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 1.14 - 1.01 (m, 1H), 1.05 - 0.92 (m, 6 H), 0.49 - 0.40 (m, 2H), 0.31 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 788.7 (M+1); Análisis calculado para: C40H45N5O12.HCl.2 H2O: C, 55.84; H, 5.86; Cl, 4.12; N, 8.14; encontrado: C, 55.56; H, 5.70; Cl, 4.11; N, 8.06.
Figure imgf000110_0001
Preparación del ácido (4-((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)butanoico (93a)
El compuesto (93a) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-((4-(terc-butoxi)-4-oxobutoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (79c) (70 mg, 0.084 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.260 mL, 3.37 mmol). Esto dio después del tratamiento y purificación dos veces por cromatografía HPLC de fase inversa preparativa (C18, 26 g) eluyendo con HCl acuoso al 0.1% y acetonitrilo al 0 -1 0 0 %, seguido de liofilización, el ácido (4-((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)butanoico (93a) (26 mg, 40% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 12.19 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.62 (d, J = 21.9 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.60 (d, J = 26.5 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.32 - 8.20 (m, 1H), 8.09 - 7.95 (m, 3H), 7.93 -7.81 (m, 2H), 7.79 - 7.59 (m, 3H), 7.10 - 6.95 (m, 2H), 6.67 - 6.50 (m, 1H), 6.06 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.52 - 5.36 (m, 2H), 4.78 - 4.59 (m, 1H), 4.19 - 4.02 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.24 - 3.16 (m, 2H), 2.38 - 2.27 (m, 2H), 1.92 -1.77 (m, 2H), 1.24 - 1.08 (m, 11H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.35 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 774.8 (M+1); 796.5 (M+Na); Análisis calculado para: C39H43N5O12.HCL2.7 5 H2O: C, 54.48; H, 5.80; Cl, 4.12; N, 8.15; encontrado: C, 54.58; H, 5.46; Cl, 3.99; N, 8.01.
Figure imgf000111_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((5-hidroxipentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (94e)
Etapa-1: Preparación del pivalato de 5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentilo (94b)
El compuesto (89b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (3.41 g, 16.92 mmol) en DCM (50 mL) usando pivalato de 5-hidroxipentilo (94a) (3.19 mL, 16.92 mmol, preparado según el procedimiento de la bibliografía descrito por J. R. Al Dulayymi et al.; en Tetrahedron 62 (2006) 11867-11880) y trietilamina (5.89 mL, 42.3 mmol). Esto dio después del tratamiento el pivalato de 5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentilo (94b) (5.30 g, 89% de rendimiento) como un jarabe marrón que se usó como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 8.32 (dd, J= 9.4, 2.5 Hz, 2H), 7.63 - 7.50 (m, 2H), 4.26 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 4.02 (q, J = 6.5 Hz, 2H), 1.81 - 1.64 (m, 2H), 1.61 (ddd, J = 10.5, 8.2, 5.5 Hz, 2H), 1.50 - 1.36 (m, 2H), 1.14 (d, J = 2.4 Hz, 9H); MS (ES-) 388.4 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del pivalato de 5-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)pentilo (94c)
El compuesto (94c) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (3.06 g, 14.72 mmol) en acetona (30 mL), usando solución acuosa de NaOH (1 N, 30.9 mL, 30.9 mmol) y una solución de pivalato de 5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentilo (94b) (5.2 g, 14.72 mmol) en acetona (30 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 40 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 al 100%) el pivalato de 5-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)pentilo (94c) (3.00 g, 58% de rendimiento) como un jarabe marrón; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.13 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.62 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.85 - 7.60 (m, 2H), 6.67 - 6.45 (m, 2H), 5.84 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.00 (dt, J= 11.0, 6.4 Hz, 4H), 1.68 - 1.54 (m, 4H), 1.39 (qd, J= 7.8, 7.2, 4.3 Hz, 2H), 1.13 (s, 9H); MS (ES+) 350.4 (M+1), 372.4 (M+Na), (ES-) 348.4 (M-1).
Etapa-3: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 5-hidroxipentilo (94d)
A una solución agitada de pivalato de 5-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)pentilo (94c) (2.1 g, 6.01 mmol) en metanol (30 mL) se añadió carbonato de potasio (0.21 g, 1.5 mmol) a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La mezcla de reacción se concentró a vacío y el residuo se suspendió en acetato de etilo (100 mL). La capa de acetato de etilo se lavó con agua (2 x 50 mL), salmuera (50 mL), se secó, se filtró y se concentró al vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 40 g eluyendo con una mezcla de acetato de etilo y metanol 9:1 en hexanos) para producir el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 5-hidroxipentilo (94d) (0.4 mg, 25% de rendimiento) como un jarabe marrón; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.15 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.64 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.74 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.84 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.39 (t, J = 5.1 Hz, 1H, D2O intercambiable), 3.98 (q, J = 7.2, 6.7 Hz, 2H), 1.57 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 1.50 - 1.24 (m, 6H); MS (ES-) 264.5 (M-1).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((5-hidroxipentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (94e)
El compuesto (94e) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.75 g, 1.47 mmol) usando EDCI (0.34 g, 1.76 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 5-hidroxipentilo (94d) (0.39 g, 1.47 mmol) en DMF (2 mL) y piridina (2 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con EtOAc/MeoH (9:1) en hexano al 0-60%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((5-hidroxipentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (94e) (125 mg, 11% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.68 - 10.24 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.31 - 8.74 (m, 2H, D2O intercambiable), 8.66 - 8.43 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.99 (s, 2H), 7.92 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.75 - 7.55 (m, 2H), 7.12 - 6.92 (m, 2H), 6.73 (s, 1H), 6.05 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.44 (dd, J= 11.2, 1.5 Hz, 1H), 4.38 (t, J= 5.1 Hz, 1H, D2O intercambiable), 3.99 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.43 - 3.35 (m, 2H), 3.27 - 3.19 (m, 2H), 2.49 - 2.32 (m, 1H), 1.59 (p, J= 6.8 Hz, 2H), 1.52 - 1.28 (m, 4H), 1.17 (d, J= 5.4 Hz, 3H), 1.14 - 1.05 (m, 1H), 1.06 - 0.90 (m, 6H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 758.715 (M+1), 780.723 (M+Na); HPLC: t= 4.40 min, 94.93%; Análisis calculado para: C40H47N5O10.H2O: C, 61.92; H, 6.37; N, 9.03. Encontrado: C, 62.19; H, 6.18; N, 8.87.
Figure imgf000112_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((1-hidroxipropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (95e)
Etapa-1: preparación del 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ol (95a)
A una solución de propano-1,2-diol (8.6 g, 113 mmol) en DCM anhidro (120 mL) a 0°C se le añadió imidazol (7.69 g, 113 mmol) y una solución de TBS-Cl (17.03 g, 113 mmol) en diclorometano. La mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente y se diluyó con DCM y agua. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, salmuera, se secó, se filtró y se concentró al vacío para dar el 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ol (95a) (19.2 g, 89% de rendimiento) como un aceite transparente, que se usó como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 84.47 (d, J = 4.6 Hz, 1H, D2O intercambiable), 3.63 - 3.52 (m, 1H), 3.47 (dd, J = 9.8, 5.3 Hz, 1H), 3.27 (dd, J = 9.8, 6.4 Hz, 1H), 1.01 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); MS (ES+) 213.4 (M+Na); (ES-) 189.3 (M-1).
Etapa-2: Preparación del carbonato de 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ilo y (4-nitrofenilo) (95b)
El compuesto (95b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (10.04 g, 48.3 mmol) en THF (150 mL) usando el 1-((tercbutildimetilsilil)oxi)propan-2-ol (95a) (9.2 g, 48.3 mmol) y trietilamina (14.82 mL, 106 mmol). Esto dio después del tratamiento el carbonato de 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ilo y (4-nitrofenilo) (95b) (9.3 g, 54% de rendimiento) como un aceite transparente, que se usó como tal en la siguiente etapa sin más purificación. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-da) 88.40 - 8.17 (m, 2H), 7.59 - 7.42 (m, 2H), 4.97 - 4.46 (m, 1H), 3.81 - 3.61 (m, 2H), 1.27 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.05 (d, J = 1.7 Hz, 6H); MS (ES+) 378.5 (M+Na).
Etapa-3: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ilo (95c)
El compuesto (85b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (3.73 g, 17.90 mmol) en acetona/H2O ( 26 mL, relación: 12:1) utilizando hidróxido de sodio (1.468 g, 36.7 mmol) y carbonato de 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ilo y (4-nitrofenilo) (95b) (7 g, 19.69 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con MeOH:EtOAc (9:1) en hexanos al 0-100%] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ilo (95c) (3.2 g, 9.10 mmol, 50.8% de rendimiento) como un semisólido. 1 H n Mr (300 MHz, Dm So -^6) 89.07 (brs, 1 H, D2O intercambiable), 8.54 (brs, 1H, D2O intercambiable), 7.75 - 7.59 (m, 2H), 6.56 - 6.40 (m, 2H), 5.78 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.77 - 4.56 (m, 1H), 3.67 - 3.56 (m, 1H), 3.56 - 3.45 (m, 1H), 1.10 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.80 (s, 9H), -0.01 (d, J= 3.3 Hz, 6H); MS (ES+) 352.6 (M+1); (ES-) 350.6 (M-1).
Etapa-4: Preparación del 3-(2-((4-(N-(((1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (95d)
El compuesto (95d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (1 g, 1.9 mmol) utilizando EDCI (0.47 g, 2.47 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ilo (95c) (0.73 g, 2.09 mmol) en DMF (50 mL) y piridina (10 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] y después HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-(((1-((tercbutildimetilsilil)oxi)propan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo 1 -(isobutiriloxi)etilo (95d) (0.36 mg, 22% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.49 (d, J = 22.7 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.02 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.54 (s, 1H, D2O intercambiable), 822 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.08 - 7.85 (m, 5H), 7.74 - 7.59 (m, 2H), 7.11 - 6.94 (m, 2H), 6.63 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.83 - 4.61 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.69 - 3.56 (m, 2H), 3.27 - 3.17 (m, 2H), 1.20 - 1.08 (m, 13H), 0.85 (s, 9H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.22 (m, 2H), 0.05 (d, J= 3.1 Hz, 6H; MS (ES+) 861.3 (M+1);
Etapa-5: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((1-hidroxipropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (95e)
A una solución de 3-(2-((4-(N-(((1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (95d) (0.32 g, 0.37 mmol) en DCM (15 mL) se añadió HCl (4 N en dioxano, 0.93 mL, 3.72 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción se concentró al vacío y se purificó dos veces mediante HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] para dar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((1-hidroxipropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (95e) (21 mg, 8% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H Nm R (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 12.41 (brs, 1H, D2O intercambiable), 11.16 (brs, 1H, D2O intercambiable), 10.84 (d, J= 15.2 Hz, 1H, D2O intercambiable), 10.36 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J = 28.6 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.10 - 7.96 (m, 2H), 7.87 - 7.66 (m, 4H), 7.11 - 6.96 (m, 2H), 6.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.10 (d, J= 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 5.03 - 4.88 (m, 1H), 4.71 (p, J= 6.3 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.60 - 3.51 (m, 2H), 3.27 - 3.17 (m, 2H), 1.27 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.23 - 1.04 (m, 11H), 0.49 - 0.40 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 746.7 (M+1); (ES­ ) 780.8 (M+Cl); Análisis calculado para C38H43N5O11HCL2 H2O: C, 55.78; H, 5.91; N, 8.56; encontrado: C, 55.59; H, 5.91; N, 8.54.
Figure imgf000114_0001
Preparación del 6-((ciclopropNmetN)carbamoN)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (96d)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 2-morfolinoetilo y (4-nitrofenilo) (96a)
El compuesto (96a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (2 g, 9.92 mmol) en THF (100 mL) usando 2-morfolinoetanol (1.367 g, 10.42 mmol) y trietilamina (2.77 mL, 19.84 mmol). Esto dio después del tratamiento el carbonato de 2-morfolinoetilo y (4-nitrofenilo) (96a) (2.8 g, 9.45 mmol, 95% de rendimiento) como un jarabe naranja oscuro espeso; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.35 - 8.30 (m, 2H), 7.59 - 7.53 (m, 2H), 4.35 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.56 (q, J = 7.0, 5.9 Hz, 4H), 2.64 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.47 - 2.40 (m, 4H).
Etapa-2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-morfolinoetilo (96b)
El compuesto (85b) se preparó a partir del dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.5 g, 7.21 mmol) en acetona/H2O (40 mL, relación: 3:1) utilizando hidróxido de sodio (0.634 g, 15.86 mmol) y una solución de carbonato de 2-morfolinoetilo y (4-nitrofenilo) (96a) (2.78 g, 9.37 mmol) en acetona (30 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con EtOAc en hexanos al 0-100%] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-morfolinoetilo (96b) (0.7 g, 33% de rendimiento) como un sólido naranja claro. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.09 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 7.79 - 7.69 (m, 2H), 6.60 - 6.51 (m, 2H), 5.85 (s, 2H), 4.09 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.61 - 3.52 (m, 4H), 2.54 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.46 - 2.35 (m, 4H); MS (ES+) 585.6 (2M+1), MS (ES-) 291.4 (M-1), 327.5 (M+Cl).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (96c)
El compuesto (96c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (58d) (0.3 g, 0.47 mmol) usando EDCI (0.11 g, 0.56 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 2-morfolinoetilo (96b) (0.14 g, 0.47 mmol) en DMF (4 mL) y piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-100%] y después HPLC preparativa [eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (96c) (0.19 g, 44% de rendimiento) como un polvo blanco; MS (ES+) 936.8 (M+Na), MS (ES-) 949.0 (M+Cl).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (96d)
El compuesto (96d) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (96c) (0.19 g, 0.21 mmol) en diclorometano (2 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.24 mL, 3.12 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [gel de sílice 26 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((2-morfolinoetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (96d) (0.12 g, 71% de rendimiento) sal de hidrocloruro como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.95 (s, 1H), 10.85 - 10.51 (m, 2H), 8.67 - 8.34 (m, 4H), 8.24 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.10 - 7.96 (m, 2H), 7.94 - 7.62 (m, 4H), 7.12 - 6.96 (m, 2H), 6.93 - 6.82 (m, 1H), 6.09 (dd, J= 17.9, 5.7 Hz, 1H), 5.45 11.4 Hz, 1H), 4.71 - 4.43 (m, 3H), 3.90 (s, 9H), 3.70 - 3.00 (m, 6H), 2.19 - 1.95 (m, 1H), 1.37 - 0.99 (m, 4H), 0.98 - 0.75 (m, 6H), 0.53 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 814.9 (M+1), MS (ES-) 849.6 (M+Cl);
Figure imgf000115_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-(((1-aminopropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (97e)
Etapa-1: Preparación del (2-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)propil)carbamato de terc-butilo (97b)
El compuesto (97b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (3.79 g, 18.26 mmol) en THF (100 mL) usando 2-hidroxipropilcarbamato de tere-butilo (97 a) (3.2 g, 18.26 mmol) y trietilamina (5.60 mL, 40.2 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-50%) el (2-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)propil)carbamato de terc-butilo (97b) (5 g, 80% de rendimiento) como un aceite amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 88.42 - 8.20 (m, 2H), 7.64 - 7.43 (m, 2H), 7.17 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 4.89 - 4.68 (m, 1H), 3.36 - 3.26 (m, 1H), 3.18 - 3.04 (m, 1H), 1.38 (s, 9H), 1.266.4 Hz, 3H); MS (ES+) 363.4 (M+Na); (ES-) 375.4 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1-((terc-butoxicarbonil)amino)propan-2-ilo (97c)
El compuesto (97c) se preparó a partir del dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (3.06 g, 14.69 mmol) en acetona/H2O (26 mL, relación: 12:1) usando hidróxido de sodio (1.21 g, 30.1 mmol) y (2-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)propil)carbamato de terc-butilo (97b) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [(gel de sílice, 12 g) eluyendo con acetato de etilo/MeOH (9:1) en hexanos del 0 al 100%] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1-((terc-butoxicarbonil)amino)propan-2-ilo (97c) (2.23 g, 45% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H n Mr (300 MHz, DMsO-cfe) 89.13 (brs, 1H, D2O intercambiable), 8.63 (brs, 1H, D2O intercambiable), 7.75 (dd, J = 8.7, 1.5 Hz, 2H), 6.95 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 6.63 - 6.44 (m, 2H), 5.85 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.71 (q, J= 6.2 Hz, 1H), 3.15 - 2.91 (m, 2H), 1.37 (s, 9H), 1.12 (d, J = 6.3 Hz, 3H); MS (ES+) 337.5 (M+1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-(((1-((terc-butoxicarbonil)amino)propan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1- ((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (97d)
El compuesto (97d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (1 g, 1.90 mmol) usando EDCI (0.47 g, 2.47 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de 1 -((terc-butoxicarbonil)amino)propan-2-ilo (97c) (0.64 g, 1.90 mmol) en DMF/piridina (60 mL, 4:2) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (24 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-60%] el 3-(2-((4-(N-(((1-((terc-butoxicarbonil)amino)propan-2- il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (97d) (89 mg, 6% de rendimiento) como un sólido blanco. MS (ES+) 845.8 (M+1).
Etapa-4: Preparación del 3-(2-((4-(N-(((1-aminopropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (97e)
El compuesto (97e) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-(((1-((terc-butoxicarbonil)amino)propan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (97d) (85 mg, 0.10 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.16 mL, 2.01 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [gel de sílice 26 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-(((1-aminopropan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (97e) (35 mg, 47% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.80 (d, J= 22.2 Hz, 1H, D2O intercambiable), 10.30 (brs, 1H, D2O intercambiable), 8.61 (d, J = 28.8 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.35 (s, 3H, D2O intercambiable), 8.25 - 8.15 (m, 1H), 8.06 - 7.95 (m, 2H), 7.92 - 7.63 (m, 5H), 7.11 - 6.94 (m, 2H), 6.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 5.45 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 5.20 - 5.03 (m, 1H), 4.77 - 4.60 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.28 - 2.99 (m, 4H), 1.36 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 1.26 - 1.05 (m, 12H), 0.50 - 0.38 (m, 2H), 0.31 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 745.7 (M+1); 767.6 (M+Na); (ES' ) 779.8 (M+Cl); Análisis calculado para C33H44N6O10.2 HCl.4 H2O: C, 51.29; H, 6.12; Cl, 7.97; N, 9.45; encontrado: C, 51.11; H, 5.83; Cl, 7.94; N, 9.39.
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Preparación del 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(2-((4-(N-((((2R,3S,4S)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (98e) Etapa-1: Preparación de carbonato de ((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metilo y (4-nitrofenilo) (98b)
El compuesto (98b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (0.17 g, 0.86 mmol) en THF (10 mL) usando ((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metanol (98a) (0.15 g, 0.86 mmol) y trietilamina (0.18 mL, 1.29 mmol). Esto dio después del tratamiento el carbonato de ((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metilo y (4-nitrofenilo) (98b) (0.25 g, 86% de rendimiento) como un jarabe espeso naranja oscuro que se usó como tal para la siguiente etapa. Etapa-2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de ((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metilo (98c)
El compuesto (98c) se preparó a partir del dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.15 g, 0.71 mmol) en acetona (10 mL) usando hidróxido de sodio acuoso 6 N (0.26 mL, 1.56 mmol) y una solución de carbonato de ((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metilo y (4-nitrofenilo) (98b) (0.24 g, 0.71 mmol) en acetona (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [(gel de sílice, 12 g) eluyendo con acetato de etilo/MeOH (9:1) en hexanos del 0 al 100%] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de ((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metilo (98c) (0.08 g, 34% de rendimiento) como una espuma incolora.1H NMR (300 MHz, CDCla) 87.74 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.67 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 4.89 (dd, J = 5.4, 3.3 Hz, 1H), 4.82 - 4.73 (m, 1H), 4.35 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 4.20 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 4.05 - 3.98 (m, 2H), 1.52 (s, 3H), 1.34 (s, 3H).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (98d)
El compuesto (98d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.12 g, 0.23 mmol) utilizando EDCI (0.04 g, 0.21 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de ((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-il)metilo (98c) (0.07 g, 0.21 mmol) en DMF (2 mL) y piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (24 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetiltetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4 il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (98d) (0.08 g, 46% de rendimiento) como un polvo blanco; MS (ES+) 828.6 (M+1), 850.6 (M+Na).
Etapa-4: Preparación del 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(2-((4-(N-((((2R,3S,4S)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (98e)
El compuesto (98e) se preparó a partir del 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(2-((4-(N-((((3aR,4R,6aS)-2,2-dimetNtetrahidrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-N)metoxi)carbonN)carbamimidoN)fenN)carbamoN)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (98d) (0.08 g, 0.097 mmol) en diclorometano (2 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.074 mL, 0.97 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [gel de sílice 26 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%] seguido de liofilización, el 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(2-((4-(N-((((2R,3S,4S)-3,4-dihidroxitetrahidrofuran-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (98e) (0.042 g, 0.053 mmol, 55.2% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 812.66 - 12.23 (m, 1H), 11.30 - 11.04 (m, 1H), 10.84 - 10.63 (m, 1H), 10.50 - 10.26 (m, 1H), 8.67 - 8.44 (m, 1H), 8.27 - 8.17 (m, 1H), 8.09 - 7.94 (m, 2H), 7.77 (s, 4H), 7.13 - 6.96 (m, 2H), 6.80 - 6.68 (m, 1H), 6.06 (d, J = 17.9 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.46 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 4.23 (dd, J = 11.5, 5.3 Hz, 1H), 4.03 (t, J = 3.9 Hz, 1H), 3.97 - 3.78 (m, 7H), 3.57 (ddd, J = 11.6, 8.1,4.3 Hz, 2H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.47 - 2.30 (m, 1H), 1.17 (s, 3H), 1.15 - 0.98 (m, 1H), 1.04 - 0.90 (m, 6H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 788.7 (M+1).
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Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((((2R,3R,4S)-3,4-dihidroxipirrolidin-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (99e)
Etapa-1: Preparación del (3aR,4R,6aS)-2,2-dimetil-4-((((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metil)dihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99b)
El compuesto (99b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir del cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (1.94 g, 9.33 mmol) en THF (30 mL) usando (3aR,4R,6aS)-4-(hidroximetil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99a) (2.55 g, 9.33 mmol, n° CAS 154905-24-5) y trietilamina (2.86 mL, 20.52 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 80 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-30%] el (3aR,4R,6aS)-2,2-dimetil-4-((((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metil)dihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99b) (1.79 g, 9 44% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H Nm R (300 MHz, DMSO-cfe) 88.41 - 8.28 (m, 2H), 7.66 - 7.49 (m, 2H), 4.80 - 4.56 (m, 2H), 4.38 - 4.09 (m, 3H), 3.66 (t, J = 11.9 Hz, 1H), 3.50 - 3.25 (m, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.35 (s, 3H), 1.26 (s, 3H); MS (ES+): 461.4 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del (3aR,4R,6aS)-4-(((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99c)
El compuesto (99c) se preparó a partir del dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.01 g, 4.84 mmol) en acetona/agua (40 mL) usando hidróxido de sodio (0.37 g, 9.29 mmol) y el (3aR,4R,6aS)-4-(hidroximetil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99a) (1.77 g, 4.04 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 80 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%] el (3aR,4R,6aS)-4-(((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99c) (1.33 g, 3.06 mmol, 76% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.15 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 7.77 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.71 -6.35 (m, 2H), 5.88 (s, 2H), 4.80 - 4.69 (m, 1H), 4.63 (t, J = 6.6 Hz, 1H), 4.18 - 3.91 (m, 3H), 3.60 (t, J = 13.8 Hz, 1H), 3.48 - 3.28 (m, 1H), 1.39 (d, J = 5.4 Hz, 9H), 1.35 (s, 3H), 1.25 (s, 3H); MS (ES-): 433.5 (M-1).
Etapa-3: Preparación del (3aR,4R,6aS)-4-(((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99d)
El compuesto (99d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (1.00 g, 1.90) utilizando EDCI (0.55 g, 2.85 mmol) y el (3aR,4R,6aS)-4-(((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99c) (0.83 g, 1.90 mmol) en DMF (30 mL) y piridina (10 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con metanol en DCM al 0-100%] el (3aR,4R,6aS)-4-(((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99d) (0.446 g, 0.473 mmol, 24.90% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 812.14 (s, 1H), 10.68 - 10.35 (m, 1H), 10.10 (s, 1H), 8.54 - 8.21 (m, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.86 - 7.65 (m, 2H), 7.67 - 7.32 (m, 4H), 6.90 - 6.61 (m, 2H), 6.37 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 5.81 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.18 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 4.60 - 4.51 (m, 1H), 4.50 - 4.32 (m, 2H), 4.04 (s, 2H), 3.99 - 3.81 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.43 - 3.14 (m, 2H), 3.03 - 2.86 (m, 2H), 1.19 - 1.03 (m, 11H), 1.02 - 0.72 (m, 14H), 0.27 - 0.11 (m, 2H), 0.07 - -0.07 (m, 2H); MS (ES+): 943.9 (M+1); MS (ES-): 977.9 (M+Cl).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((((2R,3R,4S)-3,4-dihidroxipirrolidin-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (99e)
El compuesto (99e) se preparó a partir del (3aR,4R,6aS)-4-(((((4-(2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzamido)fenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de terc-butilo (99d)
(0.20 g, 0.22 milimoles) en diclorometano (10 mL) utilizando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.33 mL, 4.31 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [EZ-PREP, columna C-18, 40 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y en acetonitrilo al 0-50%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((((2R,3R,4S)-3,4-dihidroxipirrolidin-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (99e) (0.029 mmol, 13% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 811.15 - 10.49 (m, 1H), 9.82 (bs, 1H, D2O intercambiable), 9.44 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.76 - 8.50 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.10 - 7.97 (m, 2H), 7.92 - 7.69 (m, 6H), 7.16 - 6.91 (m, 2H), 6.63 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 17.9 Hz, 1H), 5.4511.5 Hz, 1H), 4.77 - 4.66 (m, 1H), 4.64 - 4.40 (m, 2H), 4.12 (s, 1H), 4.04 - 3.96 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.71 - 3.01 (m, 6H), 1.37 - 0.91 (m, 10H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 035 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+): 803.6 (M+1); MS (ES-): 837.6 (M+Cl); Análisis calculado para: C40 H46 N6 O12 -3H2 O-2.5HCl: C, 50.68; H, 5.79; N, 8.86; encontrado: C, 50.85; H, 5.70; N, 8.97.
Esquema 100
Figure imgf000120_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((1-hidroxipropan-2-il)oxi)carbonil)oxi)etilo (100e)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 1 -((terc-butildimetMsMil)oxi)propan-2-ilo y (1-cloroetilo) (100a) El compuesto (100a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 88 a partir de 1-((tercbutildimetilsilil)oxi)propan-2-ol (95a) (2.5 g, 13.13 mmol) y carbonocloridato de 1-cloroetilo (23b) (1.417 mL, 13.13 mmol) en DCM (50 mL) usando piridina (1.2 mL). Esto dio después del tratamiento el carbonato de 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ilo y (1-cloroetilo) (100a) (3.81 g, 98% de rendimiento) como un aceite transparente que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 86.60 - 6.31 (m, 1H), 4.90 - 4.55 (m, 1H), 3.78 - 3.47 (m, 2H), 1.71 (dd, J = 5.7, 2.8 Hz, 3H), 1.16 (dd, J = 6.5, 4.4 Hz, 3H), 0.85 - 0.78 (m, 9H), 0.02 - 0.02 (m, 6H).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2,2,3,3,6-pentametil-8-oxo-4,7,9-trioxa-3-silaundecan-10-ilo (100b)
El compuesto (100b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (2.09 g, 5.50 mmol) en DMF (50 mL) utilizando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (2.02 g, 6.88 mmol) y carbonato de 1-((terc-butildimetilsilil)oxi)propan-2-ilo y (1-cloroetilo) (100a) (1.633 g, 5.50 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 80 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos al 0-100%) el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2,2,3,3,6-pentametil-8-oxo-4,7,9-trioxa-3-silaundecan-10-ilo (100b) (1.781 g, 51% de rendimiento) como una cera amarilla; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 89.71 - 9.64 (m, 1H), 8.80 - 8.53 (m, 1H), 8.30 - 8.22 (m, 1H), 8.18 - 7.98 (m, 2H), 7.13 - 6.81 (m, 2H), 6.74 - 6.41 (m, 1H), 5.99 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.43 (dd, J = 11.3, 1.4 Hz, 1H), 4.81 - 4.52 (m, 2H), 4.01 - 3.79 (m, 3H), 3.70 - 3.48 (m, 1H), 3.23 (s, 2H), 1.33 - 0.97 (m, 7H), 0.90 -0.64 (m, 9H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.36 - 0.23 (m, 2H), 0.10 - -0.15 (m, 6H); MS (ES-): 639.7 (M-1).
Etapa-3: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(3,7,10,10,11,11-hexametil-5-oxo-2,4,6,9-tetraoxa-10-siladodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (100c)
La oxidación del 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2,2,3,3,6-pentametil-8-oxo-4,7,9-trioxa-3-silaundecan-10-ilo (100b)
(1.7 g, 2.65 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1 dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(3,7,10,10,11,11-hexametil-5-oxo-2,4,6,9-tetraoxa-10-siladodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (100c) (1.719 g, 2.62 mmol, 99% de rendimiento) como un sólido blanco. El compuesto era lo suficientemente puro para continuar a la siguiente etapa; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 812.57 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15 - 6.77 (m, 2H), 6.69 - 6.50 (m, 1H), 5.91 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.39 11.3 Hz, 1H), 4.78 - 4.59 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.70 - 3.49 (m, 1H), 3.30 - 3.14 (m, 2H), 1.22 - 1.08 (m, 8H), 0.83 y 0.77 (2s, 9H), 0.52 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.22 (m, 2H), 0.04 - -0.07 (m, 6H); MS (ES+): 679.7 (M+1); MS (ES-): 655.7 (M-1).
Etapa-4: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2,2,3,3,6-pentametil-8-oxo-4.7.9- trioxa-3-silaundecan-10-ilo (100d)
El compuesto (100d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(3,7,10,10,11,11-hexametil-5-oxo-2,4,6,9-tetraoxa-10-siladodecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (100c) (1.00 g, 1.52 mmol) usando EDCI (0.44 g, 2.28 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de hexilo (36a) (0.40 g, 1.52 mmol) en DMF (15 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2,2,3,3,6-pentametil-8-oxo-4.7.9- trioxa-3-silaundecan-10-ilo (100d) (1.3 g, 95% de rendimiento) como un sólido blanco, que se utilizó como tal en la siguiente etapa; MS (ES+): 902.9 (M+1); MS (ES-): 937.1 (M+Cl).
Etapa-5: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((1-hidroxipropan-2-il)oxi)carbonil)oxi)etilo (100e)
A una solución agitada de 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 2,2,3,3,6-pentametil-8-oxo-4.7.9- trioxa-3-silaundecan-10-ilo (100d) (1.25 g, 1.39 mmol) en THF (30 mL) a 0°C, se añadió TBAF (0.54 g, 2.078 mmol) y se calentó a temperatura ambiente durante un período de 2 h. El residuo se diluyó con solución acuosa den NH4 Cl (75 mL) y se extrajo con acetato de etilo (2 x 150 mL). Las capas orgánicas combinadas se secaron, se filtraron, se evaporaron a sequedad. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%] para proporcionar para proporcionar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((hexiloxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-((((1-hidroxipropan-2-il)oxi)carbonil)oxi)etilo (100e) (0.028 g, 3% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.64 - 10.33 (m, 1H), 9.00 (bs, 2H, D2O intercambiable), 8.76 - 8.46 (m, 1H), 8.26 - 8.20 (m, 1H), 8.08 - 7.88 (m, 4H), 7.71 - 7.56 (m, 2H), 7.16 - 6.90 (m, 2H), 6.79 - 6.43 (m, 1H), 6.05 (dd, J = 17.7, 1.5 Hz, 1H), 5.44 11.5 Hz, 1H), 4.90 (t, J= 5.8 Hz, 1H, D2O intercambiable), 4.70 - 4.50 (m, 1H), 4.12 - 3.94 (m, 2H), 3.95 - 3.78 (m, 3H), 3.43 - 3.35 (m, 1H), 3.27 - 3.15 (m, 2H), 1.67 - 1.49 (m, 2H), 1.41 - 1.01 (m, 12H), 0.92 - 0.75 (m, 5H), 0.54 - 0.37 (m, 2H), 0.33 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+): 788.6 (M+1), 810.8 (M+Na); Análisis calculado para C41 H49 NsOn ^1.25H2 O: C, 60.77; H, 6.41; N, 8.64; encontrado: C, 60.87; H, 6.89; N, 8.30.
Figure imgf000122_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((2-(((S)-2-amino-3-metNbutanoN)oxi)etoxi)carbonN)carbamimidoN)fenN)carbamoN)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutirMoxi)etilo (101e)
Etapa-1: Preparación del (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 2-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (101 b)
El compuesto (101b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (1.27 g, 6.31 mmol) en THF (50 mL) usando (S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 2-hidroxietilo (101a) (1.5 g, 5.74 mmol, preparado según el procedimiento de la bibliografía descrito por Albrecht, Wolfgang et al.; en la solicitud Int. PCT, 2014096425) y trietilamina (3.20 mL, 22.96 mmol). Esto dio después del tratamiento el (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 2-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (101b) (2.30 g, 94% de rendimiento) como un jarabe marrón que se usó como tal en la siguiente etapa sin más purificación; MS (ES+): 449.5 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 2-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (101c)
El compuesto (101c) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.45 g, 6.99 mmol) en acetona (30 mL), utilizando solución de NaOH (solución 1 N, 14.8 mL, 14.8 mmol) y una solución de (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 2-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (101b) (2.98 g, 6.99 mmol) en acetona (30 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, 40 g eluyendo con acetato de etilo y hexanos del 0 al 100%) el (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 2-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (101c) (1.11 g, 38% de rendimiento) como un sólido marrón; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.13 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.69 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.75 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 6.66 - 6.45 (m, 2H), 5.87 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.25 (d, J= 40.7 Hz, 4H), 3.85 (dd, J= 8.1, 6.3 Hz, 1H), 1.37 (s, 9H), 0.88 (s, 3H), 0.85 (s, 3H); MS (ES+) 423.6 (M+1), (ES-) 457.7 (M+Cl).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((S)-7-isopropil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (101d)
El compuesto (101d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (1.21 g, 2.36 mmol) utilizando EDCI (0.545 g, 2.84 mmol) y (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 2-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (101c) (1.0 g, 2.37 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((S)-7-isopropil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (101d) (0.41 g, 19% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.51 (d, J= 23.9 Hz, 1h, D2O intercambiable), 9.32 - 9.09 (m, 1H, D2O intercambiable), 8.99 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.56 (d, J = 26.9 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 - 7.83 (m, 5H), 7.70 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.18 (d, J= 8.1 Hz, 1H),
7.10 - 6.96 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.05 (dd, J = 17.8, 1.5 Hz, 1H), 5.49 - 5.37 (m, 1H), 4.42 - 4.30 (m, 1H), 4.31
- 4.07 (m, 3H), 3.88 (d, J= 4.8 Hz, 3H), 3.23 (s, 2H), 2.43 1.7 Hz, 1H), 2.13 - 1.88 (m, 1H), 1.37 (d, J = 2.1 Hz,
9H), 1.30 (s, 0H), 1.22 - 1.13 (m, 3H), 1.11 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 1.04 - 0.92 (m, 6H), 0.91 - 0.78 (m, 6H), 0.51 -0.40 (m, 2H), 0.33 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 915.9 (M+1), 937.8 (M+Na).
Etapa-4: Preparación del 3-(2-((4-(N-((2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutirMoxi)etMo (101e)
El compuesto (101e) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((S)-7-isopropil-11,11-dimetil-6,9-dioxo-2,5,10-trioxa-8-azadodecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (101d) (0.39 g, 0.43 mmol) en diclorometano (10 mL) usando ácido
2,2,2-trifluoroacético (0.65 mL, 8.52 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto
dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 100 g) eluyendo
con HCl al 0.1% y acetonitrilo seguido de liofilización, el hidrocloruro de 3-(2-((4-(N-((2-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinatode 1 -(isobutiriloxi)etilo (19e) (0.075 g, 22% de rendimiento) como un
sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 12.51 (s, 1H, D2O intercambiable), 11.30 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.81 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 10.41 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.65 (s, 3H, D2O intercambiable),
8.62 - 8.47 (m, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.12 - 7.93 (m, 2H), 7.90 - 7.64 (m, 4H), 7.15 - 6.89 (m, 2H), 6.82 - 6.63 (m, 1H), 6.09 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 5.45 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 4.71 - 4.26 (m, 4H), 3.94 - 3.84 (m, 4H), 3.32 - 3.09 (m, 2H), 2.50 - 2.34 (m, 1H), 2.31 - 2.10 (m, 1H), 1.23 - 1.14 (m, 3H), 1.14 - 1.09 (m, 1H), 1.10 - 0.83 (m, 12H), 0.53 - 0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 815.8 (M+1).
Figure imgf000123_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-(((5-aminopentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (102d)
Etapa-1: Preparación del (5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentil)carbamato de terc-butilo (102b)
El compuesto (102b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (1.98, 9.84 mmol) en THF (30 mL) usando (5-hidroxipentil)carbamato de
terc-butilo (102a) (2.0 g, 9.84 mmol) y trietilamina (4.11 mL, 29.5 mmol). Esto dio después del tratamiento el (5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentil)carbamato de terc-butilo (102b) (1.2 g, 33% de rendimiento) como un jarabe
marrón que se usó como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.39 -8.23 (m, 2H), 7.64 - 7.37 (m, 2H), 6.83 (td, J= 15.6, 14.0, 5.8 Hz, 1H), 4.24 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.90 (dq, J =
12.7, 6.5 Hz, 2H), 1.37 (d, J = 1.1 Hz, 15H); MS (ES-) 403.5 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-(((5-((tercbutoxicarbonil)amino)pentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (102c)
El compuesto (102c) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (29d) (0.5 g, 0.797 mmol) en DMF usando el (5-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)pentil)carbamato de terc-butilo (102b) (0.44 g, 1.20 mmol) y trietilamina (0.33 mL, 2.39 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [(gel de sílice, 12 g eluyendo con mezcla de acetato de etilo y metanol 9:1 en hexanos (del 0 al 100%)] el 3-(2-((4-(N-(((5-((tercbutoxicarbonil)amino)pentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (102c) (74 mg, 11% de rendimiento) como un sólido blanco; MS (ES+) 857.6 (M+1).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-(((5-aminopentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (102d)
El compuesto (102d) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-(((5-((terc-butoxicarbonil)amino)pentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (102c) (0.07 g, 0.082 mmol) en diclorometano (5 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.126 mL, 1.63 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 100 g) eluyendo con HCl acuoso al 0.1% y acetonitrilo, seguido de liofilización, el hidrocloruro de 3-(2-((4-(N-(((5-aminopentil)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (102d) (0.037 g, 55% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 810.73 (d, J= 17.1 Hz, 1H), 8.58 (d, J= 24.9 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.13 - 7.63 (m, 9H, 3H D2O intercambiable), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 6.74 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 6.07 17.9 Hz, 1H), 5.45 11.5 Hz, 1H), 4.25 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 2.77 (m, 2H), 2.44 (m, 1H), 1.77 - 1.52 (m, 4H), 1.43 (m, 2H), 1.18 (s, 3H), 1.15 - 1.03 (m, 1H), 1.05 - 0.88 (m, 6H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 757.8 (M+1), (ES-) 791.9 (M+Cl); Análisis calculado para; C40H48N6O9.2 HCL3.5 H2O: C, 53.81; H, 6.43; N, 9.41; encontrado: C, 53.34; H, 6.41; N, 9.38.
Figure imgf000124_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((((S)-5-oxopirrolidin-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (103c)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 4-nitrofenilo y (S)-((5-oxopirrolidin-2-il)metilo) (103b)
El compuesto (103b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (0.88 g, 4.34 mmol) en THF (20 mL) usando (S)-5-(hidroximetil)pirrolidin-2-ona (103a) (0.5 g, 4.34 mmol) y trietilamina (0.6 mL, 4.34 mmol). Esto dio después del tratamiento el carbonato de 4-nitrofenilo y (S)-((5-oxopirrolidin-2-il)metilo) (103b) (1.1 g, 3.93 mmol, 90% de rendimiento) como masa pastosa que se utilizó como tal en la siguiente etapa sin más purificación; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.37 - 8.28 (m, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.62 - 7.52 (m, 2H), 4.20 (d, J= 5.3 Hz, 2H), 3.94 - 3.81 (m, 1H), 2.25 - 2.02 (m, 3H), 1.88 - 1.63 (m, 1H).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((((S)-5-oxopirrolidin-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (103c)
El compuesto (103c) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir del 3-(2-(4-carbamimidoilfenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-(ciclopropilmetilcarbamoil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (29d) (0.4 g, 0.637 mmol) en DMF (3 mL) usando TEA (0.178 mL, 1.28 mmol) y carbonato de 4-nitrofenilo y (S)-((5-oxopirrolidin-2-il)metilo) (103b) (0.27 g, 0.96 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, MeOH-EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100% como eluyente] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-((((S)-5-oxopirrolidina-2-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (103c) (0.065 g, 13% de rendimiento) como un polvo blanco; 1H NMR (300 Mhz, DMSO-cfe) 8 10.63 - 10.41 (m, 1H), 9.38-8.88 (m, 2H), 8.68 - 8.45 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.89 (m, 3H), 7.80 (s, 1H), 7.77-7.60 (m, 3H), 7.12 - 6.96 (m, 2H), 6.80-6.69 (m, 1H), 6.10 - 6.00 (m, 1H), 5.48 - 5.40 (m, 1H), 4.05 - 3.88 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.82 - 3.72 (m, 1H), 3.29 - 3.16 (m, 2H), 2.78 - 1.99 (m, 4H), 1.86 - 1.70 (m, 1H), 1.17 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.16 - 1.03 (m, 1H), 1.05-0.92 (m, 6H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 769.7 (M+1); Análisis calculado para C40H44N6O10.2 H2O: C, 59.69; H, 6.01; N, 10.44; encontrado: C, 59.61; H, 5.82; N, 10.42.
Figure imgf000125_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((1-((5-((4R)-2-oxohexahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanoil)oxi)propan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (104b)
A una solución de 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-(4-(N-((1-hidroxipropan-2-iloxi)carbonil)carbamimidoil)fenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isopropoxicarboniloxi)etilo (95e) (0.13 g, 0.178 mmol) y ácido 5-((4S)-2-oxohexahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanoico D(+) (biotina) (104a) (0.065 g, 0.27 mmol) en DMF (6 mL), se añadió DMAP (4.36 mg, 0.036 mmol), piridina (2 mL) y EDCI (0.051 g, 0.268 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente, se diluyó con agua (20 mL), se acidificó con HCl 1 N y se extrajo con acetato de etilo (2 x 50 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (50 mL), se secaron, filtraron y evaporaron al vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna ultrarrápida [EZ-PREP, columna C-18, 50 g, eluyendo con HCl ac. al 0.1% en agua y en acetonitrilo al 0-50%], y se liofilizó, para proporcionar el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((1-((5-((4R)-2-oxohexahidro-1H-tieno[3,4-d]imidazol-4-il)pentanoil)oxi)propan-2-il)oxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (104b) (0.019 g, 0.020 mmol, 11% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 12.4 (bs, 1H, D2O intercambiable), 10.84 - 10.48 (m, 1H), 10.2 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.77 - 8.41 (m, 1H), 8.31 - 8.11 (m, 1H), 8.10 - 7.88 (m, 2H), 7.89
- 7.55 (m, 5H), 7.18 - 6.86 (m, 2H), 6.71 - 6.55 (m, 1H), 6.52 - 6.22 (m, 2H, D2O intercambiable), 6.05 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 5.14 (s, 1H), 4.71 (s, 1H), 4.47 - 4.04 (m, 4H), 3.885.1 Hz, 3H), 3.32 -2.95 (m, 3H), 2.77 (s, 1H), 2.55 - 2.45 (m, 2H), 2.43 - 2.17 (m, 2H), 1.70 - 0.93 (m, 17H), 0.54 - 0.36 (m, 2H), 0.34 - 0.17 (m, 2H); MS (ES+): 972.7 (M+1).
Figure imgf000125_0002
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2-(dimetilamino)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (105c)
Etapa-1: Preparación del hidrocloruro de carbonato de 2-(dimetilamino)etilo y (4-nitrofenMo) (105b)
A una solución de 2-(dimetilamino)etanol (105a) (1 g, 11.22 mmol) en THF (40 mL) se añadió carbonocloridato de 4-nitrofenilo (24a) (2.261 g, 11.22 mmol) en porciones a 0 C (baño de hielo-agua) en atmósfera de argón. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h, se diluyó con EtOAc (30 mL) y se agitó durante unos minutos. El sólido obtenido se recogió por filtración, se lavó con EtOAc (2 x 4 mL) y se secó al vacío para proporcionar el hidrocloruro de carbonato de 2-(dimetilamino)etilo y 4-nitrofenilo (105b) (2.22 g, 7.64 mmol, 68.1% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 88.17 - 8.06 (m, 2H), 7.03 - 6.90 (m, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.17 - 3.06 (m, 2H), 2.76 (s, 6H).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2-(dimetilamino)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (105c)
El compuesto (105c) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir del 3-(2-(4-carbamimidoilfenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-(ciclopropilmetilcarbamoil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (29d) (0.4 g, 0.64 mmol) en DMF (3 mL) usando TEA 0.27 mL, 1.91 mmol) y el hidrocloruro de carbonato de 2-(dimetilamino)etilo y (4-nitrofenilo) (105b) (0.28 g, 0.96 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [C18, 26 g, acetonitrilo y agua (HCl al 0.1%) del 0 al 50% como eluyentes] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((2-(dimetilamino)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (105c) (0.04 g, 9% de rendimiento) sal de hidrocloruro como un polvo blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.90 - 10.60 (m, 1H), 8.70 - 8.47 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.10 - 7.93 (m, 2H), 7.91 - 7.70 (m, 4H), 7.16 - 6.95 (m, 2H), 6.80 - 6.67 (m, 1H), 6.15 - 5.99 (m, 1H), 5.51 - 5.38 (m, 1H), 4.68 - 4.51 (m, 2H), 3.96-3.83 (m, 3H), 3.52 - 3.39 (m, 2H), 3.29 - 3.16 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.81 (s, 3H), 2.47 - 2.29 (m, 1H), 1.23-1.14 (m, 3H), 1.14 - 1.03 (m, 1H), 1.05 - 0.92 (m, 6H), 0.51 - 0.38 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 743.7 (M+1), 765.7 (M+Na).
Figure imgf000126_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(3-metil-5-oxo-2,4,7,10-tetraoxaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (106d)
Etapa-1: Preparación del 2-(2-metoxietoxi)acetato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (106b)
El compuesto (106b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 33 a partir del carbonato de 1 -cloroetilo y (4-nitrofenilo) (23a) (5 g, 20.36 mmol), ácido 2-(2-metoxietoxi)acético (106a) (6.94 mL, 61.1 mmol) y óxido de plata (4.72 g, 20.36 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 120 g, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-100%] el 2-(2-metoxietoxi)acetato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (106b) (5.84 g, 84% de rendimiento). 1H n Mr (300 MHz, DMSO-cfe) 88.41 - 8.27 (m, 2H), 7.69 - 7.50 (m, 2H), 6.82 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 1.3 Hz, 2H), 3.61 (dd, J= 9.9, 5.8 Hz, 2H), 3.50 - 3.40 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 1.56 (d, J= 5.4 Hz, 3H); MS (ES+) 366.2 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del 2-(2-metoxietoxi)acetato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (106c)
El compuesto (106c) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (3.4 g, 16.34 mmol) en acetona (75 mL), NaOH (solución 1 N, 34.3 mL, 34.3 mmol) y 2-(2-metoxietoxi)acetato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (106b) (5.61 g, 16.34 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 125 g, eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-70%] el 2-(2-metoxietoxi)acetato de 1-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (106c) (1.42 g, 26% de rendimiento) como un jarabe marrón; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.17 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.87 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.87 - 7.69 (m, 2H,), 6.84 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.67 - 6.40 (m, 2H), 5.94 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.11 (s, 2H), 3.61 -3.52 (m, 2H), 3.43 (dd, J = 5.8, 3.6 Hz, 2H), 3.22 (s, 3H), 1.44 (d, J = 5.4 Hz, 3H); MS (ES+) 340.3 (M+1), 362.4 (M+Na), (ES-) 338.3 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(3-metil-5-oxo-2,4,7,10-tetraoxaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (106d)
El compuesto (106d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (1.84 g, 3.62 mmol) utilizando EDCI (1.04 g, 5.42 mmol) y 2-(2-metoxietoxi)acetato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (106c) (1.35 g, 3.98 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [primera columna: gel de sílice (80 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-100%, segunda columna: gel de sílice, (40 g), eluyendo con metanol en diclorometano al 0-10%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(3-metil-5-oxo-2,4,7,10-tetraoxaudecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (106d) (1.9 g, 63% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.53 (d, J = 23.7 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.23 (d, J = 14.0 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.56 (d, J = 27.1 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.88 (m, 4H), 7.68 (s, 2H), 7.11 - 6.96 (m, 2H), 6.84 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.05 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.51 - 5.33 (m, 1H), 4.12 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.62 - 3.53 (m, 2H), 3.48 - 3.38 (m, 2H), 3.22 (s, 5H), 2.48 - 2.30 (m, 1H), 1.45 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.21 - 1.13 (m, 3H), 1.15 - 1.06 (m, 1H), 1.05 - 0.90 (m, 6H), 0.50 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 832.4 (M+1), 854.7 (M+Na); Análisis calculado para: C42 H49 N5 O13 (H2 O)1.25 : C, 59.04; H, 6.08; N, 8.20; encontrado: C, 59.03; H, 5.94; N, 8.04.
Figure imgf000127_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(3-metil-5-oxo-2,4,7,10,13-pentaoxatetradecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (107d)
Etapa-1: Preparación del 2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)acetato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (107b) El compuesto (107b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 33 a partir del carbonato de 1-cloroetilo y (4-nitrofenilo) (23c) (5 g, 20.36 mmol), ácido 2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)acético (107 a) (9.37 mL, 10.88 mmol) y óxido de plata (4.72 g, 20.36 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 120 g, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-100%] el 2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)acetato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (107b) (5.65 g, 71% de rendimiento). 1H NMR (300 MHz, DIVISOR) 88.42 - 8.27 (m, 2H), 7.65 - 7.53 (m, 2H), 6.83 (p, J = 5.4, 5.0 Hz, 1H), 4.24 (d, J= 1.3 Hz, 2H), 3.65 - 3.57 (m, 2H), 3.57 - 3.47 (m, 4H), 3.47 - 3.38 (m, 2H), 3.24 (d, J= 1.4 Hz, 3H), 1.57 (d, J= 5.4 Hz, 3H); MS (ES+) 410.3 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del 2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)acetato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (107c)
El compuesto (107c) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (2.9 g, 13.94 mmol) en acetona (60 mL), NaOH (solución 1 N, 29.3 mL, 29.3 mmol) y 2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)acetato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (107b) (5.4 g, 13.94 mmol) en acetona (20 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (125 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-70%] el 2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)acetato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (107c) (1.2 g, 22.45% de rendimiento) como un jarabe marrón. 1H NMR (300 m Hz , DMsO-cfe) 89.17 (s, 1 H, D2O intercambiable), 8.87 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.82 - 7.70 (m, 2H), 6.84 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.59 - 6.50 (m, 2H), 5.93 (s, 2H, D2O intercambiable), 4.12 (s, 2H), 3.57 (dd, J = 6.5, 3.5 Hz, 2H), 3.56 - 3.44 (m, 4H), 3.46 - 3.36 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 1.44 (d, J= 5.4 Hz, 3H); MS (ES+) 384.3 (M+1), (ES-) 382.4 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(3-metil-5-oxo-2,4,7,10,13-pentaoxatetradecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (107d)
El compuesto (107d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (1.53 g, 3.00 mmol) usando EDCI (0.86 g, 4.50 mmol) y de 2-(2-(2-metoxietoxi)etoxi)acetato 1-((((4- aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (107c) (1.15 g, 3.00 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [primera columna: gel de sílice (80 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-100%; segunda columna: gel de sílice, (40 g), eluyendo con metanol en diclorometano al 0-10%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(3-metil-5-oxo-2,4,7,10,13-pentaoxatetradecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (107d) (1.51 g, 56% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H Nm R (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.53 (d, J= 25.5 Hz, 1H, D2O intercambiable), 9.22 (d, J = 25.3 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.57 (d, J = 28.1 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 17.7 Hz, 4H), 7.80 - 7.56 (m, 2H), 7.10 - 6.95 (m, 2H), 6.83 - 6.68 (m, 2H), 6.17 - 5.94 (m, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.22 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 2.61 - 2.30 (m, 2H), 1.43 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.05 (dd, J = 7.0, 5.3 Hz, 6H), 1.05 - 0.88 (m, 7H), 0.50 - 0.40 (m, 2H), 0.32 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 786.7 (M+1), 808.7 (M+Na), (ES-) 784.8 (M-1); Análisis calculado para: C44H5aN5O14.H2O:C, 59.12; H, 6.20; N, 7.83; encontrado; C, 59.24; H, 6.14; N, 7.72.
Figure imgf000129_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-decaoxatriacontan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (108d)
Etapa-1: Preparación del carbonato de 4-nitrofenilo y 2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxaoctacosan-28-ilo (108b) El compuesto (108b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (0.53 g, 2.57 mmol) en THF (8 mL) utilizando 2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxaoctacosan-28-ol (108a) (1.00 g, 2.33 mmol) y trietilamina (0.72 mL, 5.13 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 80 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-30%] el 3-(2-((4-(N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-decaoxatriacontan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (108b) (1.11 g, 1.870 mmol, 80% de rendimiento) como un aceite amarillo espeso; 1H NMR (300 MHz, DIVISOR) 88.42 - 8.26 (m, 2H), 7.66 - 7.46 (m, 2H), 4.42 - 4.30 (m, 2H), 3.77 - 3.67 (m, 2H), 3.62 - 3.37 (m, 32H), 3.23 (s, 3H); MS (ES+): 616.6 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de (2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxaoctacosan-28-ilo (108c)
El compuesto (108c) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (0.46 g, 2.22 mmol) en acetona/agua (20 mL) utilizando hidróxido de sodio (0.17 g, 4.26 mmol) y carbonato de 4-nitrofenilo y 2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxaoctacosan-28-ilo (108b) (1.1 g, 1.85 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 24 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de (2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxaoctacosan-28-ilo (108c) (0.24 g, 22% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.12 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.64 (bs, 1H, D2O intercambiable), 7.88 - 7.62 (m, 2H), 6.69 - 6.35 (m, 2H), 5.86 (bs, 2H, D2O intercambiable), 4.09 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.61 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.56 - 3.40 (m, 32H), 3.23 (s, 3H); MS (ES+): 590.7 (M+1). Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-decaoxatriacontan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (108d)
El compuesto (108d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-((isopropoxicarbonil)oxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (38c) (0.25 g, 0.47) utilizando EDCI (0.11 g, 0.59 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de (2,5,8,11,14,17,20,23,26-nonaoxaoctacosan-28-ilo (108c) (0.23 g, 0.39 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [tres columnas separadas: EZ-PREP, columna C-18, 30 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y en acetonitrilo al 0-100%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29-decaoxatriacontan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-((isopropoxicarbonil)oxi)etilo (108d) (0.032 g, 7% de rendimiento) como un sólido blanco higroscópico; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.97 (s, 1H), 10.68 - 10.39 (m, 1H), 8.75 - 8.47 (m, 1H), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.05 - 7.93 (m, 1H), 7.92 - 7.79 (m, 2H), 7.78 - 7.60 (m, 2H), 7.16 - 6.90 (m, 2H), 6.71 - 6.56 (m, 1H), 6.05 (d, J= 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.82 - 4.59 (m, 1H), 4.35 - 4.17 (m, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.71 - 3.60 (m, 2H), 3.59 - 3.37 (m, 34H), 3.22 (s, 3H), 1.28 - 1.03 (m, 10H), 0.51 - 0.36 (m, 2H), 0.34 - 0.17 (m, 2H); MS (ES+): 1121.7 (M+Na).
Figure imgf000130_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(benzoiloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (109c)
Etapa-1: Preparación del benzoato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (109a)
El compuesto (109a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 33 a partir del carbonato de 1-cloroetilo y (4-nitrofenilo) (23c) (4.08 g, 16.61 mmol), ácido benzoico (6.09 g, 49.8 mmol) y óxido de plata (3.85 g, 16.61 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 120 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos (del 0 al 20 al 100%)] el benzoato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (109a) (2.82 g, 51% de rendimiento) como un aceite espeso transparente; MS (ES+): 354.3 (M+Na);
Etapa-2: Preparación del benzoato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (109b)
El compuesto (109b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (1.76 g, 8.45 mmol) en acetona (50 mL), NaOH (solución 1 N, 17.75 mL, 17.75 mmol) y benzoato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (109a) (2.80 g, 8.45 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%] el benzoato de 1-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (109b) (1.24 g, 45% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.18 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.86 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.96 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 7.77 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 7.72 - 7.64 (m, 1H), 7.54 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 7.03 (q, J= 5.4 Hz, 1H), 6.54 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 5.93 (s, 2H, D2O intercambiable), 1.57 (d, J= 5.4 Hz, 3H); MS (ES+): 328.3 (M+1); 350.3 (M+Na); MS (ES-): 362.1 (M+Cl).
Etapa-3: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(benzoiloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (109c)
El compuesto (109c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1- (isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (2.25 g, 4.40 mmol) usando EDCI (1.05 g, 5.50 mmol) y benzoato de 1-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (109b) (1.20 g, 3.67 mmol) en DMF (20 mL) y piridina (10 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos al 0-100%] el 3-(2-((4-(N-((1-(benzoiloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (109c) (1.21 g, 40% de rendimiento) como un sólido blanco.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.57 y 10.49 (2s, 1H, D2O intercambiable), 9.26 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.19 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.61 y 8.52 (2s, 1H), 8.22 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 8.10 - 7.83 (m, 6H), 7.77 - 7.61 (m, 3H), 7.53 (t, J= 7.7 Hz, 2H), 7.16 - 6.92 (m, 3H), 6.87 - 6.60 (m, 1H), 6.06 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.29 - 3.16 (m, 2H), 2.46 - 2.29 (m, 1H), 1.58 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.29 - 0.86 (m, 10H), 0.54 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+): 842.4 (M+Na); MS (ES-): 818.6 (M-1); Análisis calculado para: C44H45N5O1 1 H2O: C, 63.07; H, 5.65; N, 8.3 6 ; encontrado: C, 63.46; H, 5.61; N, 8.24.
Figure imgf000131_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((etiltio)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (110c)
Etapa-1: Preparación del carbonotioato de S-etilo y O-(4-nitrofenilo) (110a)
El compuesto (110a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de cloroformiato de 4-nitrofenilo (24a) (13.38 g, 64.4 mmol) en THF (150 mL) usando etanotiol (4 g, 64.4 mmol) y trietilamina (19.74 mL, 142 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, eluyendo con EtOAc en hexano al 0-50% %] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((etiltio)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (110c) (10 g, 68% de rendimiento) como un aceite amarillo claro, que se usó en la siguiente etapa sin más purificación. 1 H NMR (300 MHz, DMSo-cfe) 88.42 - 8.19 (m, 2H), 7.64 -7.44 (m, 2H), 2.99 (q, J= 7.3 Hz, 2H), 1.31 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
Etapa-2: Preparación del (4-aminofenil)(imino)metilcarbamotioato de S-etilo 110b)
El compuesto (110b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (In) (5 g, 24.03 mmol) en acetona/H2O (52 mL, relación: 12:1, v/v) utilizando hidróxido de sodio (2.018 g, 50.5 mmol) y carbonotioato de S-etilo y O-(4-nitrofenilo) (110a) (8.19 g, 36.0 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice (40 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-70%] el (4-aminofenil)(imino)metilcarbamotioato de S-etilo 110b) (4.2 g, 18.81 mmol, 78% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 9.25 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.74 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.80 - 7.65 (m, 2H), 6.63 - 6.48 (m, 2H), 5.94 (s, 2H, D2O intercambiable), 2.73 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 1.21 (t, J = 7.3 Hz, 3H); MS (ES+) 224.2 (M+1), 246.3 (M+Na); (ES-) 222.2 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((etiltio)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutirMoxi)etilo (110c)
El compuesto (110c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (3.40 g, 6.65 mmol) usando EDCI (1.74 g, 9.07 mmol) y (4-aminofenil)(imino)metilcarbamotioato de S-etilo 110b) (1.35 g, 6.05 mmol) en DMF (15 mL) y piridina (15 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida dos veces mediante [sílice (120 g) eluyendo con EtoAc/MeOH (9:1) en hexano del 0 al 50%] y después dos veces más mediante [sílice (120 g), eluyendo con MeOH en DCM al 0-15%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((etiltio)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (110c) (1.59 g, 37% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.53 (d, J = 24.9 Hz, 1h, D2O intercambiable), 9.31 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.05 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.56 (d, J= 29.8 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 25.3 Hz, 4H), 7.77 - 7.57 (m, 2H), 7.10 - 6.94 (m, 2H), 6.80 - 6.65 (m, 1H), 6.05 (dd, J= 17.7, 1.5 Hz, 1H), 5.44 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.23 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.75 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.48 - 2.30 (m, 1H), 1.27 - 1.13 (m, 6H), 1.12 - 1.05 (m, 1H), 1.02 - 0.91 (m, 6H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 715.3 (M+1), 738.3 (M+Na), 714.6 (M-1) 750.3 (M+Cl).
Figure imgf000132_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (111d)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (111b)
El compuesto (111b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (3 g, 7.89 mmol) en DMF (30 mL) usando N,N'-diciclohexil-4-morfolinacarboxamidina (2.78 g, 9.46 mmol) y 4-(clorometil)-5-metil-1,3-dioxol-2-ona (l l la ) (1.76 g, 11.83 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, MeOH:EtOAc (9:1) en hexanos como eluyentes, del 0 al 100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo ( lllb ) (3.4 g, 6.90 mmol, 88% de rendimiento) como una espuma incolora; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 9.63 (s, 1H), 8.76 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.26 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.14 - 8.01 (m, 2H), 7.06 - 6.85 (m, 2H), 5.98 (dd, J = 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.3 Hz, 1H), 5.08 - 4.88 (m, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.22 (p, J = 6.7 Hz, 2H), 1.99 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.16 - 1.00 (m, 1H), 0.50 - 0.40 (m, 2H), 0.32 - 0.24 (m, 2H).
Etapa-2: Preparación del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (111c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3 dioxol-4-il)metilo (111b) (3.4 g, 6.90 mmol) usando el procedimiento descrito en la etapa 11 del esquema 1 dio después del tratamiento el ácido 2-(6-((ciclopropNmetN)carbamoN)-2-(((5-metN-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (lile ) (3.3 g, 94% de rendimiento) como un sólido amarillo claro; 1H NMR (300 MHz, DIVISOR) 812.55 (s, 1H), 8.68 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.97 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.03 - 6.82 (m, 2H), 5.96 - 5.84 (m, 1H), 5.43 - 5.34 (m, 1H), 5.05 - 4.87 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.22 (q, J= 6.2 Hz, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.19 - 1.13 (m, 1H), 0.50 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 531.3 (M+23), MS (ES-) 507.2 (M-1).
Etapa-3: Preparación del 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (111d)
El compuesto (111d) se preparó a partir del ácido 2-(6-((cidopropNmetN)carbamoN)-2-(((5-metN-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (111c)
(0.52 g, 1.02 mmol) utilizando EDCI (0.196 g, 1.02 mmol) e isobutirato de 1-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a) (0.3 g, 1.02) en DMF (15 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 24 g, usando MeOH:EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100% como eluyente] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (111d) (0.13 g, 0.166 mmol, 16.22% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.44 (s, 1H), 9.35 - 9.09 (m, 2H), 8.64 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 -7.88 (m, 4H), 7.63 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.09 - 6.91 (m, 2H), 6.77 (q, J= 5.3 Hz, 1H), 6.11 - 5.97 (m, 1H), 5.43 11.4 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 2.8 Hz, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.28 - 3.14 (m, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.43 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.06 (dd, J = 7.0, 5.3 Hz, 7H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 784.5 (M+1).
Figure imgf000133_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (112b)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (112a)
El compuesto (112a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (111c)
(0.7 g, 1.38 mmol) utilizando EDCI (0.26 g, 1.38 mmol) y (2S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (54a) (0.58 g, 1.38 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, usando MeOH:EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100% como eluyente] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de ((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (112a) (0.4 g, 32% de rendimiento) como un sólido gomoso; MS (ES+) 913.7 (M+1), MS (ES-) 947.6 (M+Cl);
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (112b)
El compuesto (112b) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (112a) (0.4 g, 0.44 mmol) en diclorometano (3 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.68 mL, 8.76 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [gel de sílice 26 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-((1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (112b) (0.13 g, 37% de rendimiento) sal de HCl como sólido naranja claro; 1H NMR (300 MHz, DMsO-cfe) 8 10.63 (s, 1H), 10.21 -9.61 (m, 2H), 8.64 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 8.60 - 8.48 (m, 3H), 8.20 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.05 - 7.91 (m, 2H), 7.84 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.72 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.10 - 6.90 (m, 3H), 6.13 - 5.97 (m, 1H), 5.52 - 5.37 (m, 1H), 4.98 (bs, 2H), 4.04 - 3.50 (m, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.29 - 3.14 (m, 2H), 2.27 - 2.09 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.56 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.15 - 1.02 (m, 1H), 1.03 - 0.89 (m, 6H), 0.50 - 0.36 (m, 2H), 0.32 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+) 813.5 (M+1), MS (ES-) 847.5 (M+Cl).
Figure imgf000134_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((acetoximetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (113c)
Etapa-1: Preparación del acetato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (113b)
El compuesto (113b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (2.6 g, 12.49 mmol) en DMF (5 mL) usando acetato de (((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metilo (113a) (3.51 g, 13.74 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Alexander, Jose; en la solicitud de Pat. Eur., 167451) y trietilamina (5.22 mL, 37.5 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, MeOH-EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 80% como eluyentes] el acetato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (113b) (2.1 g, 67% de rendimiento) como un sólido naranja claro; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 89.16 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.61 - 6.51 (m, 2H), 5.94 (s, 2H), 5.69 (s, 2H), 2.06 (s, 3H).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-((acetoximetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (113c)
El compuesto (113c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (2.44 g, 4.78 mmol) utilizando EDCI (0.92 g, 4.78 mmol) y acetato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (113b) (1.2 g, 4.78 mmol) en DMF (20 mL) y piridina (8 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, MeOH-EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100% como eluyentes] el 3-(2-((4-(N-((acetoximetoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (113c) (1.62 g, 46% de rendimiento) como un polvo blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 810.64 - 10.41 (m, 1H), 9.22 (s, 2H), 8.67 - 8.44 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.88 (m, 4H), 7.77 - 7.58 (m, 2H), 7.15 - 6.94 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.71 (s, 2H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.29 - 3.18 (m, 2H), 2.44 - 2.29 (m, 1H), 2.06 (s, 3H), 1.23 - 0.89 (m, 10H), 0.52 - 0.38 (m, 2H), 0.32 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 744.0 (M+1), 767.0 (M+Na).
Figure imgf000135_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (114e)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-cloroetilo (114a)
El compuesto (114a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 37 a partir del ácido 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolínico (2a) (4 g, 10.52 mmol) en EtOAc (60 mL), agua (60 mL) usando hidrogenosulfato de tetrabutilamonio (0.36 g, 1.05 mmol) y sulfocloridato de 1-cloroetilo (2.353 g, 13.14 mmol). Esto dio después del tratamiento el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1 -cloroetilo (114a) (4.6 g, 99% de rendimiento) como un jarabe marrón claro; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.71 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.73 (td, J = 6.2, 2.4 Hz, 1H), 8.28 (dt, J = 8.0, 2.2 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.10 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1H), 7.10 - 6.91 (m, 2H), 6.54 (qd, J = 5.7, 3.1 Hz, 1H), 6.00 (dd, J = 17.8, 1.4 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.30 - 3.19 (m, 2H), 1.46 (dd, J = 5.7, 3.4 Hz, 3H), 1.18 - 1.05 (m, 1H), 0.54 - 0.37 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 465.3 (M+Na), (ES-) 477.2 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (114b)
El compuesto (114b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 8 a partir del 6- ((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-cloroetilo (114a) (4.5 g, 10.1 6 mmol) en DMF (25 mL) usando N,N'-dicidohexil-4-morfolinacarboxamidina (3.73 g, 12.7 mmol) y Boc-L-isoleucina (2.82 g, 12.19 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice 40 g, eluyendo con acetato de etilo/hexanos, 0-100%) el 6-((cidopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (114b) (2.84 g, 44% de rendimiento) como un sólido amarillo claro; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.74 - 9.63 (m, 1H), 8.71 - 8.48 (m, 1H), 8.33 - 8.23 (m, 1H), 8.14 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 - 7.09 (m, 1H), 7.11 - 6.85 (m, 2H), 6.82 - 6.62 (m, 1H), 6.01 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 3.95 - 3.87 (m, 3H), 3.79 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 3.25 (s, 3H), 1.35 (d, J = 3.8 Hz, 9H), 1.25 (dd, J = 12.3, 7.2 Hz, 3H), 1.17 (dd, J = 10.1, 6.0 Hz, 3H), 0.74 (td, J = 15.5, 13.4, 9.6 Hz, 6H), 0.53 - 0.37 (m, 2H), 0.37 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 660.4 (M+Na).
Etapa-3: Preparación del ácido 2-(2-((6S)-6-((S)-sec-butil)-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (114c)
La oxidación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-formil-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (114b)
(2.1 g, 3.29 mmol) usando el procedimiento como se describe en la etapa 11 del esquema 1, dio después del tratamiento el ácido 2-(2-((6S)-6-((S)-sec-butil)-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (114c) (2.51 g, 117% de rendimiento) como un sólido amarillo; MS (ES+) 654.3 (M+1), 676.4 (M+Na), (ES-) 652.5 (M-1). Etapa-4: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (114d)
El compuesto (114d) se preparó a partir del ácido 2-(2-((S)-6-((S)-sec-butil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (23c) (2.5 g, 3.82 mmol) usando EDCI (1.5 equiv.) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida hexilo (1n) (0.915 g, 4.4 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (114d) (2.25 g, 73% de rendimiento) que se usó en la siguiente etapa sin más purificación; MS (ES+) 771.5 (M+1), (ES-) 805.6 (M+Cl).
Etapa-5: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (114e)
El compuesto (114e) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (114d) (2.21 g, 2.74 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (4.22 mL, 54.7 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 26 g) eluyendo con HCl al 0.1% y acetonitrilo, seguido de liofilización, el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (114e) (0.960 g, 47.2% de rendimiento) como un sólido marrón claro. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.89 - 10.65 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.28 (s, 2H, D2O intercambiable), 9.05 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.73 - 8.39 (m, 4H, 3H D2O intercambiable), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.13 - 7.96 (m, 2H), 7.90 - 7.71 (m, 4H), 7.12 - 6.94 (m, 2H), 6.87 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 6.17 - 6.01 (m, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (d, J= 2.8 Hz, 3H), 3.80 (s, 1H), 3.24 (s, 2H), 1.95 - 1.67 (m, 1H), 1.44 - 0.97 (m, 6H), 0.93 - 0.67 (m, 6H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.35 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 671.5 (M+1), 693.4 (M+Na); Análisis calculado para: C36H42N6O7.2 HCl.4 H2O: C, 53.01; H, 6.43; N, 10.30; Cl, 8.69; encontrado ; C, 53.10; H, 6.28; N, 10.38; Cl, 8.61.
Figure imgf000137_0001
Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (115b)
Etapa-1: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (115a)
El compuesto (115a) se preparó a partir del ácido 2-(2-((S)-6-((S)-sec-butil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (62b) (3.0 g, 4.69 mmol) usando EDCI (1.5 equiv.) y dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida hexilo (1n) (1.12 g, 5.39 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por CombiFlash (gel de sílice, 80 g) eluyendo con metanol en diclorometano del 0 al 20%) el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (115a) (2.25 g, 73% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 10.77 (s, 1H), 9.23 (s, 2H), 9.03 (s, 2H), 8.42 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 22.7 Hz, 2H), 7.79 (s, 4H), 7.28 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.12 - 6.93 (m, 2H), 6.06 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.96 - 5.61 (m, 2H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.87 - 3.82 (m, 1H), 3.28 - 3.18 (m, 2H), 1.75 - 1.55 (m, 1H), 1.42 - 1.19 (m, 10H), 1.10 (dq, J = 13.5, 7.4, 6.8 Hz, 2H), 0.73 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.32 - 0.20 (m, 2H); MS (ES+) 757.5 (M+1).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (115b)
El compuesto (115b) se preparó a partir del 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (115a) (1.15 g, 1.45 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (2.23 mL, 29.0 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida (C18, 26 g) eluyendo con HCl al 0.1% y acetonitrilo, seguido de liofilización, el 3-(2-((4-carbamimidoilfenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (115b) (0.370 g, 35% de rendimiento) como un sólido blanco. 1 H Nm R (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.80 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.26 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.99 (s, 2H, D2O intercambiable), 8.52 (d, J = 29.4 Hz, 4H, 3H D2O intercambiable), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 12.3 Hz, 2H), 7.80 (s, 4H), 7.15 - 6.94 (m, 2H), 6.09 (d, J = 18.0 Hz, 1H), 5.90 (d, J = 35.2 Hz, 2H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.90 (d, J = 4.8 Hz, 4H), 3.22 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 1.83 (s, 1H), 1.43 - 1.24 (m, 1H), 1.24 - 0.98 (m, 2H), 0.88 - 0.69 (m, 6H), 0.44 (dd, J = 7.0, 5.2 Hz, 2H), 0.28 (t, J = 4.9 Hz, 2H); MS (ES+) 657.4 (M+1), 679.4 (M+Na), (ES-) 691.5 (M+Cl); Análisis calculado para MF: C35H40N6O7.2 HCl.3 H2O: C, 53.64; H, 6.17; N, 10.72; Cl, 9.05; encontrado: C, 53.30; H, 6.17; N, 10.67; Cl, 9.07.
Figure imgf000138_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(fenoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etMo (116c)
Etapa-1: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de fenilo (116b)
El compuesto (116b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23 a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (6 g, 28.8 mmol) en acetona/H2O (52 mL, relación: 12:1, v/v) utilizando hidróxido de sodio (2.42 g, 60.6 mmol) y carbonato de 4-nitrofenilfenilo y fenilo (116a) (11.21 g, 43.3 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Um, Ik-Hwan et al.; en Bulletin of the Chemical Society of Japan, 85(9), 1007-1013; 2012). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [primera columna: gel de sílice (80 g), eluyendo con DMA80 en DCM al 0-50%; segunda columna: gel de sílice (80 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-100%] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de fenilo (116b) (1.75 g, 24% de rendimiento) como un sólido amarillo. 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 89.11 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.88 (s, 1H, D2O intercambiable), 7.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.44 - 7.21 (m, 2H), 7.22 - 7.00 (m, 3H), 6.56 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.95 (s, 2H, D2O intercambiable); MS (ES+) 256.3 (M+1); 278.3 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(fenoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (116c)
El compuesto (110c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (2.97 g, 5.82 mmol) usando EDCI (1.52 g, 7.93 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de fenilo (116b) (1.35 g, 6.05 mmol) en DMF (15 mL) y piridina (15 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [primera columna: sílice (24 g), eluyendo con EtOAc/MeOH (9:1) en hexano al 0-40%; segunda columna: prep-HPLC [columna C18, eluyendo con CH3CN en agua (que contiene HCl al 0.1%) al 0-100%] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(fenoxicarbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo 116c) (192 mg, 0.257 mmol, 4.86% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 Mh z , DMSO-cfe) 810.71 (d, J = 19.9 Hz, 1H, D2O intercambiable), 10.13 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.58 (d, J= 26.3 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (s, 2H), 7.95 - 7.65 (m, 5H), 7.55 - 7.39 (m, 2H), 7.37 - 7.20 (m, 3H), 7.07 - 6.94 (m, 2H), 6.74 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.28 - 3.17 (m, 2H), 2.46 - 2.32 (m, 1H), 1.18 (d, J = 5.3 Hz, 3H), 1.14 - 1.OS (m, 1H), 1.03 - 0.95 (m, 6H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+ ) 748.4 (M+1), 770.4 (M+Na), 782.4 (M+Cl); Análisis calculado para C41H41N5O9. i 7 5 H2O.HCl C, 60.36; H, 5.62; Cl, 4.35; N, 8.58; encontrado: C, 60.54; H, 5.63; Cl, 3.98; N, 8.58.
Figure imgf000139_0001
Preparación del 6-((ciclopropNmetN)carbamoN)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metN-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (117b)
A una solución del 3-(2-(4-carbamimidoNfenNcarbamoN)-5-metoxi-4-vinNfenN)-6-(ciclopropilmetilcarbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (29d) (0.3 g, 0.478 mmol) en DMF (5 mL) se añadió TEA (0.133 mL, 0.956 mmol), carbonato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo y 4-nitrofenilo (117a) (0.169 g, 0.574 mmol; preparado según el procedimiento descrito por Rahmathullah, Syed M. et al.; en Journal of Medicinal Chemistry, 42(19), 3994-4000; 1999) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se vertió en agua (100 mL) y la suspensión resultante se extrajo con EtOAc (2 x 80 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, se secaron, filtraron, concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, MeOH - EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 80% como eluyentes] para proporcionar el 6-((cidopropNmetN)carbamoN)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metN-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (117b) (0.16 g, 43% de rendimiento) como un polvo blanco; 1H NMR (300 m Hz , DMSO-d6) 810.63 - 10.42 (m, 1H), 9.25 - 9.00 (m, 2H), 8.66 - 8.46 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.06 - 7.59 (m, 6H), 7.11 - 6.95 (m, 2H), 6.81 - 6.67 (m, 1H), 6.11 - 6.00 (m, 1H), 5.44 (d, J = 11.3 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.27 - 3.18 (m, 2H), 2.46 - 2.30 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 1.21 - 0.90 (m, 10H), 0.49 - 0.39 (m, 2H), 0.30 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 784.5 (M+1); Análisis calculado para C40H41N5O12.H2O; C, 59.92; H, 5.41; N, 8.73; encontrado C, 60.11; H, 5.46; N, 8.66.
Figure imgf000139_0002
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (118c) Etapa-1: Preparación del ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (118b)
El compuesto (118b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (4.09 g, 19.65 mmol) en acetona (60 mL), agua (20 mL) usando hidróxido de sodio (1.73 g, 43.2 mmol) y carbonato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo y (4-nitrofenilo) (117a) (5.8 g, 19.65 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice, 80 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos del 0 al 100%] el ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de (5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (118b) (1.8 g, 32% de rendimiento) como un sólido; MS (ES+) 314.3 (M+Na), MS (ES-) 290.3 (M-1).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (118b)
El compuesto (118b) se preparó a partir del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (10c) (0.8 g, 1.28 mmol) usando EDCI (0.25 g, 1.28 mmol) y ((4-aminofenil)(imino)metil)carbamato de ((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metilo (118b) (0.37 g, 1.28 mmol) en DMF (8 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, usando MeOH:EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100% como eluyentes] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (118b) (0.32 g, 0.356 mmol, 27.8% de rendimiento) como un sólido gomoso; MS (ES+) 899.5 (M+1), 921.6 (M+Na).
Etapa-3: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (118c)
El compuesto (118a) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2- ((4-(N-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de ((S)-((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (118b) (0.32 g, 0.36 mmol) en diclorometano (5 mL) utilizando ácido 2,2,2-trifluoroacético (0.55 mL, 7.12 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [EZ-PREP, columna C-18, 26 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y en acetonitrilo al 0-50%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(5-metoxi-2-((4-(N-(((5-metil-2-oxo-1,3-dioxol-4-il)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de (S)-((2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (118c) (0.11 g, 39% de rendimiento) como un sólido naranja claro; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-de) 810.77 (s, 1H), 8.65 - 8.41 (m, 5H), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 - 7.97 (m, 2H), 7.88 -7.71 (m, 4H), 7.11 - 6.96 (m, 2H), 6.15 - 6.03 (m, 1H), 6.03 - 5.71 (m, 2H), 5.51 - 5.41 (m, 1H), 5.15 (s, 2H), 3.97 - 3.83 (m, 4H), 3.29 - 3.15 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 1.16 - 0.99 (m, 1H), 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 0.50 - 0.41 (m, 2H), 0.32 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 799.5 (M+1), MS (ES-) 833.6 (M+Cl); Análisis calculado para C40H42N6O12.2 HCl.3 H2O; C, 51.90; H, 5.44; N, 9.08; Cl, 7.66; encontrado C, 51.50; H, 5.50; N, 9.04; Cl, 7.38.
Figure imgf000141_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-(benzoiloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (119c)
Etapa-1: Preparación del benzoato de 1-(((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)etilo (119a)
El compuesto (109a) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 33 a partir de carbonato de 1 -cloroetilo y (4-nitrofenilo) (23c) (20 g, 81 mmol), ácido picolínico (30.1 g, 244 mmol) y óxido de plata (18.87 g, 81 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 120 g, eluyendo con acetato de etilo en hexanos al 0-100%] para proporcionar el picolinato de 1-((4-nitrofenoxi)carboniloxi)etilo (119a) (2.53 g, 9% de rendimiento) como un aceite espeso transparente; 1 H NMR (300 MHz, DIVISOR) 88.82 - 8.73 (m, 1H), 8.42 - 8.26 (m, 2H), 8.19 - 8.10 (m, 1H), 8.05 (td, J = 7.7, 1.7 Hz, 1H), 7.76 - 7.68 (m, 1H), 7.64 - 7.56 (m, 2H), 7.05 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 1.71 (d, J = 5.4 Hz, 3H); MS (ES+): 355.2 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del benzoato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (119b)
El compuesto (119b) se preparó a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (1.685 g, 8.10 mmol) en acetona (25 mL), NaOH (solución 1 N, 17.00 mL, 17.00 mmol) y picolinato de 1-((4-nitrofenoxi)carboniloxi)etilo (119a) (2.69 g, 8.10 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 23. Esto dio después del tratamiento el picolinato de 1-((4-aminofenil)(imino)metilcarbamoiloxi)etilo (119b) (1.72 g, 65% de rendimiento) como un sólido amarillo; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) 8 9.18 (bs, 1H, D2O intercambiable), 8.88 (s, 1H, D2O intercambiable), 8.73 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 8.15 - 7.95 (m, 2H), 7.78 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.67 (t, J= 6.1 Hz, 1H), 7.16 - 6.97 (m, 1H), 6.54 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 5.95 (bs, 2H, D2O intercambiable), 1.58 (d, J= 5.4 Hz, 3H); MS (ES+): 351.2 (M+Na); MS (ES-): 363.3 (M+Cl).
Etapa-3: Preparación del 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(5-metoxi-2-(4-(N-((1-(picolinoiloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenilcarbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1 -(isobutiriloxi)etilo (119c)
El compuesto (119c) se preparó a partir del ácido 2-(6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (3.13 g, 6.14 mmol) (2.25 g, 4.40 mmol) utilizando EDCI (1.05 g, 5.50 mmol) y picolinato de 1-((4-aminofenil)(imino)metilcarbamoiloxi)etilo (119b) (1.68 g, 5.12 mmol) en DMF (30 mL) y piridina (15 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 80 g, eluyendo con acetato de etilo/metanol (9:1) en hexanos al 0-100%] el 6-(ciclopropilmetilcarbamoil)-3-(5-metoxi-2-(4-(N-((1-(picolinoiloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenilcarbamoil)-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (119c) (0.69 g, 16% de rendimiento) como un sólido blanquecino; 1 H Nm R (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.65 - 10.38 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.42 - 9.05 (m, 1H), 8.74 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.68 - 8.44 (m, 1H, D2O intercambiable), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.15 - 7.90 (m, 6H), 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 - 7.57 (m, 3H), 7.15 - 6.92 (m, 3H), 6.74 (s, 1H), 6.05 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.29 -3.16 (m, 2H), 2.46 - 2.29 (m, 1H), 1.62 (dd, J = 17.2, 5.4 Hz, 3H), 1.29 - 0.86 (m, 10H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.34 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+): 821.4 (M+1), 843.3 (M+Na); MS (ES-): 820.6 (M-1).
Figure imgf000142_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (120b)
Etapa-1: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropMmetil)carbamoil)picoMnato de (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (120a)
El compuesto (120a) se preparó a partir del ácido (S)-2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-(6-isopropil-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (10c) (3 g, 4.79 mmol) usando EDCI (1.1 g, 5.75 mmol) y acetato de 1-((((4 -aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (46a) (1.27 g, 4.79 mmol) en DMF (20 mL) y piridina (7 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, usando MeOH:EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100% como eluyentes] el 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (120a) (2.84 g, 68% de rendimiento) como una espuma incolora; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 810.56 (s, 1H), 9.32 - 9.08 (m, 2H), 8.51 - 8.36 (m, 1H), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 8.9 Hz, 3H), 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.25 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.14 - 6.94 (m, 2H), 6.76 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.95 - 5.57 (m, 2H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.82 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 3.28 - 3.16 (m, 2H), 1.99 (s, 3H), 1.97 - 1.85 (m, 1H), 1.43 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.33 (s, 9H), 1.14 - 0.99 (m, 1H), 0.79 (d, J = 6.8 Hz, 6H), 0.52 - 0.39 (m, 2H), 0.31 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 873.5 (M+1), 871.6 (M-1).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (120b)
El compuesto (120b) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metilo (120a) (2.8 g, 3.21 mmol) en diclorometano (30 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (3.71 mL, 48.1 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [C18, 130 g, eluyendo con HCl acuoso al 0.1% en agua y en acetonitrilo al 0-50%] seguido de liofilización, la sal de HCl del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)metilo (120b) (0.81 g, 31% de rendimiento) como un polvo blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.77 (s, 1H), 8.65 - 8.40 (m, 4H), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 9.7 Hz, 2H), 7.88 - 7.70 (m, 4H), 7.11 - 6.95 (m, 2H), 6.90 - 6.78 (m, 1H), 6.08 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 6.03 - 5.72 (m, 3H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.31 - 3.15 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 1.50 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 1.16 - 1.00 (m, 1H), 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 6H), 0.51 - 0.40 (m, 2H), 0.31 - 0.23 (m, 2H); MS (ES+) 773.4 (M+1), MS (ES-) 807.5 (M+Cl).
Figure imgf000143_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (121b)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (121a)
El compuesto (121a) se preparó a partir del ácido 2-(2-((S)-6-((S)-sec-butil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (62b) (4.0 g, 6.25 mmol) usando EDCI (1.8 g, 9.38 mmol) e isobutirato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a) 2.12 g, 7.19 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después de tratamiento el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (121a) (3.05 g, 53.3% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 810.58 (s, 1H), 9.22 (d, J = 26.0 Hz, 2H), 8.42 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 8.3 Hz, 3H), 7.74 - 7.62 (m, 3H), 7.27 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.10 - 6.97 (m, 2H), 6.77 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.92 - 5.56 (m, 2H), 5.44 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.94 -3.80 (m, 4H), 3.23 (s, 2H), 1.65 (s, 1H), 1.43 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.38 - 1.21 (m, 9H), 1.17 - 0.97 (m, 9H), 0.82 - 0.63 (m, 6H), 0.53 - 0.37 (m, 2H), 0.34 - 0.18 (m, 2H); MS (ES+) 915.6 (M+1), 937.5 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (121b)
El compuesto (121b) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (121a) (3.0 g, 3.28 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (5.5 mL, 65.6 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [C18, 275 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi))etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de (((2S,3s)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (121b) (1.35 g, 46.4% de rendimiento) sal de dihidrocloruro como un polvo blanco; 1H NMR (300 MHz, DMsO-de) 8 10.79 (s, 1H, D2O intercambiable), 10.36 - 9.61 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.16 (d, J = 69.0 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.78 - 8.57 (m, 4H, D2O intercambiable), 8.51 - 8.38 (m, 1H), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.89 - 7.66 (m, 4H), 7.12 - 6.95 (m, 2H), 6.90 - 6.75 (m, 1H), 6.24 - 6.01 (m, 1H), 6.02 - 5.66 (m, 2H), 5.54 - 5.29 (m, 1H), 3.89 (s, 4H), 3.23 (s, 2H), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 1.96 - 1.76 (m, 1H), 1.59 - 1.44 (m, 3H), 1.44 - 1.27 (m, 1H), 1.27 - 1.12 (m, 1H), 1.12 - 0.97 (m, 7H), 0.95 - 0.65 (m, 6H), 0.54 - 0.37 (m, 2H), 0.37 - 0.20 (m, 2H); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6-D2O) 88.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.84 -7.58 (m, 4H), 7.09 - 6.93 (m, 2H), 6.78 (dq, J = 22.3, 5.4 Hz, 1H), 6.02 (dd, J = 17.8, 1.6 Hz, 1H), 5.96 - 5.81 (m, 1H), 5.83 - 5.66 (m, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.91 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.27 - 3.10 (m, 2H), 2.59 - 2.51 (m, 1H), 1.84 - 1.72 (m, 1H), 1.55 - 1.42 (m, 3H), 1.39 - 1.22 (m, 1H), 1.21 - 1.10 (m, 1H), 1.11 - 0.96 (m, 7H), 0.83 - 0.67 (m, 6H), 0.50 - 0.38 (m, 2H), 0.31 - 0.18 (m, 2H); MS (ES+) 815.5 (M+1); CHN calculado para C42H50N0O11. i 7 5 HCl.3 H2O: C, 54.08; H, 6.24; Cl, 6.65; N, 9.01. Encontrado: C, 54.07; H, 5.91; Cl, 6.80; N, 8.99.
Figure imgf000144_0001
Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((cidopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (122b)
Etapa-1: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropMmetil)carbamoil)picoMnato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (122a)
El compuesto (122a) se preparó a partir del ácido 2-(2-((S)-6-((S)-sec-butil)-10,10-dimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (62b) (3.0 g, 4.69 mmol) usando EDCI (1.35 g, 7.03 mmol) y acetato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (46a) (1.43 g, 5.39 mmol) en DMF (5 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después de tratamiento el 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (122a) (2.65 g, 64% de rendimiento) como un sólido blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 610.57 (s, 1H, D2O intercambiable), 9.22 (d, J= 24.0 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.43 (s, 1H), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 - 7.86 (m, 4H), 7.68 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.15 - 6.97 (m, 2H), 6.76 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 6.05 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.97 - 5.58 (m, 2H), 5.44 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 3.95 - 3.77 (m, 4H), 3.29 - 3.07 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.65 (s, 1H), 1.43 (d, J= 5.4 Hz, 3H), 1.37 - 1.21 (m, 10H), 1.20 - 0.99 (m, 2H), 0.72 (q, J= 7.2 Hz, 6H), 0.52 - 0.40 (m, 2H), 0.32 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 887.5 (M+1), 909.5 (M+Na).
Etapa-2: Preparación del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (122b)
El compuesto (122b) se preparó a partir del 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metilo (122a) (2.5 g, 2.82 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (4.34 mL, 56.4 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [C18, 275 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%] seguido de liofilización, el 3-(2-((4-(N-((1-acetoxietoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)picolinato de (((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)metilo (122b) (350 mg, 15.78% de rendimiento) sal de dihidrocloruro como un polvo blanco; 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 610.84 - 10.52 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.08 (d, J = 93.4 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.65 -8.39 (m, 4H, D2O intercambiable), 8.25 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.09 - 7.95 (m, 2H), 7.90 - 7.64 (m, 4H), 7.10 - 6.94 (m, 3H), 6.87 - 6.71 (m, 1H), 6.07 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 6.01 - 5.64 (m, 2H), 5.45 (d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.95 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.23 (s, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.90 - 1.75 (m, 1H), 1.48 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.43 - 1.25 (m, 1H), 1.24 - 0.98 (m, 2H), 0.87 - 0.80 (m, 3H), 0.80 - 0.72 (m, 3H), 0.50 - 0.41 (m, 2H), 0.31 - 0.24 (m, 2H); 1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6-D2O) 68.61 - 8.49 (m, 1H), 8.24 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 7.80 (dd, J = 8.9, 2.2 Hz, 2H), 7.76 - 7.62 (m, 2H), 7.10 - 6.94 (m, 2H), 6.87 - 6.70 (m, 1H), 6.03 (d, J = 17.8 Hz, 1H), 5.98 - 5.82 (m, 1H), 5.82 - 5.68 (m, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.30 - 3.14 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.86 - 1.72 (m, 1H), 1.47 (t, J = 5.8 Hz, 3H), 1.39 - 1.22 (m, 1H), 1.21 - 0.99 (m, 2H), 0.79 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 0.77 - 0.68 (m, 3H), 0.49 - 0.40 (m, 2H), 0.29 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 787.4 (M+1); Análisis calculado para C40H46N0O11.2 HCl.3 H2O: C, 52.58; H, 5.96; Cl, 7.76; N, 9.20; encontrado: C, 52.48; H, 5.91; Cl, 7.52; N, 9.25.
Figure imgf000145_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (123b)
Etapa-1: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (123a)
El compuesto (123a) se preparó a partir del ácido 2-(2-((6S)-6-((S)-sec-butil)-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)-6-((ciclopropilmetil)carbamoil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (114c) (5.3 g, 8.11 mmol) usando EDCI (2.31 g, 12.16 mmol) e isobutirato de 1-(((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a) (2.73 g, 9.32 mmol) en DMF (7 mL) y piridina (5 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de1-(((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (123a) (4.42 g, 59% de rendimiento) como un sólido blanco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-cfe) 610.49 (d, J = 37.5 Hz, 1 H, D2O intercambiable), 9.20 (d, J = 21.3 Hz, 2H, D2O intercambiable), 8.43 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.05 -7.86 (m, 4H), 7.68 (s, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.11 - 6.96 (m, 2H), 6.77 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 6.05 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.81 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 3.24 (s, 2H), 1.65 (s, 1H), 1.43 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.40 - 1.26 (m, 9H), 1.28 - 0.98 (m, 13H), 0.74 (q, J = 8.9, 8.1 Hz, 6H), 0.51 - 0.39 (m, 2H), 0.33 - 0.19 (m, 2H); MS (ES+) 930.5 (M+1).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (123b)
El compuesto (123b) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)etilo (123a) (4.4 g, 4.74 mmol) en diclorometano (30 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (7.3 mL, 95 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [C18, 275 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%], seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((2S,3S)-2-amino-3-metilpentanoil)oxi)etilo (123b) (1.8 g, 46% de rendimiento) sal de dihidrocloruro como un polvo blanco; 1H Nm R (300 m Hz , DMSO-cfe) 6 10.76 (d, J = 18.5 Hz, 1H, D2O intercambiable), 10.45 - 9.69 (m, 1H, D2O intercambiable), 9.14 (d, J = 70.4 Hz, 1H, D2O intercambiable), 8.57 (s, 3H, D2O intercambiable), 8.42 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.10 - 7.98 (m, 2H), 7.88 - 7.66 (m, 4H), 7.13 - 6.96 (m, 2H), 6.93 - 6.79 (m, 2H), 6.10 (dd, J = 17.7, 5.9 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 4H), 3.24 (s, 2H), 2.65 - 2.45 (m, 1H), 1.94 - 1.69 (m, 1H), 1.52 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.45 - 1.22 (m, 3H), 1.25 - 0.99 (m, 9H), 0.92 - 0.68 (m, 6H), 0.52 - 0.40 (m, 2H), 0.34 - 0.21 (m, 2H); MS (ES+) 829.5 (M+1), 851.4 (M+Na), (ES-) 863.6 (M+Cl).
Figure imgf000146_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (124b)
Etapa-1: 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (124a)
El compuesto (124a) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((6S)-6-isopropil-3,10,10-trimetil-5,8-dioxo-2,4,9-trioxa-7-azaundecan-1-oil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (58a) (2.5 g, 3.91 mmol) usando EDCI (0.9 g, 4.69 mmol) e isobutirato de 1-((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)etilo (48a) (1.14 g, 3.91 mmol) en DMF (10 mL) y piridina (3 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N -((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (124a) (2.25 g, 63% de rendimiento) como una espuma incolora; MS (ES+) 914.5 (M+1), MS (ES-) 949.6 (M+Cl).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (124b)
El compuesto (124b) se preparó a partir del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)etilo (124a) (2 g, 2.18 mmol) en diclorometano (20 mL) usando ácido 2,2,2-trifluoroacético (2.53 mL, 32.8 mmol) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 8. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna de fase inversa [C18, 150 g, acetonitrilo en HCl al 0.1% en agua como eluyentes, del 0 al 50%] seguido de liofilización, el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(((S)-2-amino-3-metilbutanoil)oxi)etilo (124b) (0.65 g, 33.5% de rendimiento), sal de dihidrocloruro como un polvo blanco; 1H NMR (300 m Hz , DMSO-cfe) 8 10.75 (s, 1H), 10.27 - 9.91 (m, 2H), 8.72 - 8.34 (m, 4H), 8.24 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.11 - 7.97 (m, 2H), 7.89 - 7.71 (m, 4H), 7.12 - 6.97 (m, 2H), 6.93 - 6.77 (m, 2H), 6.10 (dd, J = 17.4, 5.3 Hz, 1H), 5.45 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 3.98 - 3.80 (m, 4H), 3.24 (s, 2H), 2.65 - 2.52 (m, 1H), 2.08 (s, 1H), 1.51 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 1.34 - 1.00 (m, 10H), 0.97 - 0.76 (m, 6H), 0.53 - 0.38 (m, 2H), 0.34 - 0.22 (m, 2H); MS (ES+) 815.5 (M+1), MS (ES-) 849.5 (M+Cl).
Figure imgf000147_0001
Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((isobutiriloxi)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (125c)
Etapa-1: isobutirato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (125b)
El compuesto (125b) se preparó según el procedimiento descrito en la etapa 1 del esquema 24 a partir de dihidrocloruro de 4-aminobencimidamida (1n) (2.3 g, 11.05 mmol) en DMF (10 mL) usando isobutirato de ((4-nitrofenoxi)carbonil)oxi)metilo (125a) (3.76 g, 13.26 mmol, preparado según el procedimiento descrito por Chrusciel, Robert A. et al.; en la solicitud Int. PCT, 2015120062) y trietilamina (5.22 mL, 37.5 mmol). Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 40 g, eluyendo con MeOH-EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 80%] el isobutirato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (125b) (0.2 g, 6.5% de rendimiento) como un sólido naranja claro; 1H NMR (300 MHz, DMSO-de) 89.16 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 7.82 - 7.72 (m, 2H), 6.55 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.92 (s, 2H), 5.72 (s, 2H), 2.62 - 2.52 (m, 1H), 1.09 (d, J = 7.0 Hz, 6H).
Etapa-2: Preparación del 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((isobutiriloxi)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (125c)
El compuesto (125c) se preparó a partir del ácido 2-(6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-2-((1-(isobutiriloxi)etoxi)carbonil)piridin-3-il)-4-metoxi-5-vinilbenzoico (29c) (0.4 g, 0.78 mmol) utilizando EDCI (0.16 g, 0.86 mmol) e isobutirato de ((((4-aminofenil)(imino)metil)carbamoil)oxi)metilo (125b) (0.2 g, 0.71 mmol) en DMF (3 mL) y piridina (1 mL) según el procedimiento descrito en la etapa 4 del esquema 2. Esto dio después del tratamiento y la purificación por cromatografía en columna ultrarrápida [gel de sílice 12 g, MeOH-EtOAc (9:1) en hexanos del 0 al 100% como eluyentes] el 6-((ciclopropilmetil)carbamoil)-3-(2-((4-(N-(((isobutiriloxi)metoxi)carbonil)carbamimidoil)fenil)carbamoil)-5-metoxi-4-vinilfenil)picolinato de 1-(isobutiriloxi)etilo (125c) (0.14 g, 25% de rendimiento) como un polvo blanco; 1H Nm R (300 MHz, DMSO-cfe) 8 10.62 - 10.36 (m, 1H), 9.21 (s, 2H), 8.70 - 8.41 (m, 1H), 8.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.07 - 7.89 (m, 4H), 7.79 - 7.59 (m, 2H), 7.12 - 6.92 (m, 2H), 6.74 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 6.05 (dd, J = 17.7, 1.6 Hz, 1H), 5.73 (s, 2H), 5.44 (dd, J = 11.2, 1.5 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.24 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.64 - 2.52 (m, 1H), 2.46 - 2.29 (m, 1H), 1.18 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.09 (d, J = 7.0 Hz, 6H), 1.04 - 0.92 (m, 7H), 0.52 - 0.40 (m, 2H), 0.32 - 0.24 (m, 2H); MS (ES+) 772.4 (M+1), 794.3 (M+Na), MS (ES-) 806.5 (M+Cl).
Ejemplo 126: Biodisponibilidad de profármacos de inhibidores de calicreína
La farmacocinética plasmática de los compuestos se determinó utilizando tres ratas macho Sprague Dawley después de la administración de una dosis oral única. Todos los animales se pusieron en una jaula metabólica para ratas, se aislaron y se mantuvieron en ayunas aproximadamente 15 horas antes de la dosificación. Se pusieron marcadores de identificación en cada animal. Cada animal se pesó antes de la administración de la dosis. A los animales se les administró por vía oral una formulación de solución del compuesto de ensayo en agua o una combinación de agua/propilenglicol, en una dosis de 10 mg/kg. Se unieron agujas de sonda a jeringas y se llenaron con la cantidad apropiada de artículo de ensayo para administrar. Se recogieron muestras de sangre (aproximadamente 500 jl) de tres ratas antes de la dosis (tiempo 0), 0.5, 1, 2, 4, 8, 12 y 24 h, respectivamente, según la duración del estudio. Las muestras se recogieron en microtubos de centrífuga etiquetados que contenían (solución de heparina) como anticoagulante. El plasma se recogió inmediatamente de la sangre por centrifugación a 14000 rpm durante 3 min a 4°C y se almacenó por debajo de -70°C hasta el bioanálisis. Se analizaron muestras de plasma individuales para el compuesto original, ácido 3-[2-(4-carbamimidoil-fenilcarbamoil)-5-metoxi-4-vinil-fenil]-6-(ciclopropilmetil-carbamoil)-piridina-2-carboxílico. Como se muestra en la Tabla 1, los compuestos de ensayo produjeron diversos grados de exposición al compuesto original. Los compuestos de ensayo proporcionaron generalmente una biodisponibilidad mejorada del compuesto original en comparación con la administración del compuesto original en soluciones acuosas.
Tabla-1: AUC0-última hora (área bajo la curva) después de la administración de una única dosis oral (10 mg/kg) a ratas Sprague Dawley macho [A = 0-1000 ng/mL; B = 1001-10000 ng/mL; C > 10000 ng/mL]
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Equivalentes
La memoria descriptiva escrita anterior se considera suficiente para permitir que un experto en la técnica ponga en práctica la invención. El alcance de la presente invención no está limitado por los ejemplos proporcionados, ya que los ejemplos pretenden ser una ilustración única de un aspecto de la invención y otras realizaciones funcionalmente equivalentes están dentro del alcance de la invención. Diversas modificaciones de la invención además de las mostradas y descritas en el presente documento resultarán evidentes para los expertos en la técnica a partir de la descripción anterior y estarán dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas. Las ventajas y objetos de la invención no están necesariamente abarcados por cada realización de la invención.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado de la siguiente tabla:
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ı52
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2. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado de la siguiente tabla:
Figure imgf000154_0002
Figure imgf000155_0001
3. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado de la siguiente tabla:
Figure imgf000155_0002
Figure imgf000156_0001
4. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado de la siguiente tabla:
Figure imgf000156_0002
Figure imgf000157_0001
5. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado de la siguiente tabla:
Figure imgf000157_0002
Figure imgf000158_0001
6. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado de la siguiente tabla:
Figure imgf000158_0002
7. El compuesto según la reivindicación 1, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, seleccionado de la siguiente tabla:
Figure imgf000159_0001
8. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en el tratamiento del angioedema adquirido o angioedema hereditario; en donde opcionalmente el angioedema hereditario es angioedema hereditario de tipo I, angioedema hereditario de tipo II o angioedema hereditario de tipo III.
9. El compuesto para uso de la reivindicación 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en el tratamiento del angioedema adquirido
10. El compuesto para uso de la reivindicación 8, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en el tratamiento del angioedema hereditario
11. El compuesto para uso de la reivindicación 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el angioedema hereditario es angioedema hereditario de tipo I.
12. El compuesto para uso de la reivindicación 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde el angioedema hereditario es angioedema hereditario de tipo II.
13. El compuesto para uso de la reivindicación 10, en donde el angioedema hereditario es angioedema hereditario de tipo III.
14. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en la inhibición de la coagulación sanguínea.
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