ES2883023T3

ES2883023T3 - Derivados de péptidos de dolaproína-dolaisoleuina citotóxicos para el tratamiento del cáncer

Info

Publication number: ES2883023T3
Application number: ES15799069T
Authority: ES
Inventors: Brian Alan Mendelsohn; Julien Dugal-Tessier; Stuart Daniel Barnscher
Original assignee: Agensys Inc
Current assignee: Agensys Inc
Priority date: 2014-05-28
Filing date: 2015-05-27
Publication date: 2021-12-03
Anticipated expiration: 2035-05-27
Also published as: US11312748B2; JP6995160B2; RU2747989C2; EP3149024A4; EP3149024B9; US20200325170A1; JP2022027896A; SG11201609739UA; EP3149024B1; CN107041139A; US20170190735A1; JP2017519740A; KR102413079B1; RU2016150426A3; JP7292366B2; EP3149024A1; JP2020128405A; US20220204557A1; KR20170005495A; WO2015183978A1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I): **(Ver fórmula)** en donde R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo; X está ausente; R3 es un grupo de la fórmula: **(Ver fórmula)** en donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH, -NH2, -SH, -N3, alquilo, alquenilo, alquinilo, -alquil- OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, o -alquil-N3; R4 es un grupo de la fórmula:**(Ver fórmula)** en donde R17 es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N3 o - alquil-CO2H; y R18 es -H, -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquilo, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N3 o -alquil-CO2H; R5 es sec-butilo o isobutilo; R6 es -H o alquilo; R7 es -H, alquilo, -CO2Ra, -CONRbRc, fenilo sustituido o no sustituido, o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; R8 es -H, alquilo, fenilo sustituido o no sustituido, o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; en donde Ra es -H o alquilo; Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo; R9 es -H o alquilo; o R9 se toma junto con R4 y los átomos a los que están unidos para formar un anillo de heterocicloalquilo sustituido o no sustituido; R10 es -H o alquilo; R11 es -H o alquilo; R12 es -H o alquilo; R13 es -H o alquilo; y R14 es -H, -OH o alquilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCIÓN

Derivados de péptidos de dolaproína-dolaisoleuina citotóxicos para el tratamiento del cáncer

Campo de invención

En la presente memoria se proporcionan análogos de péptidos de dolaproína-dolaisoleuina, composiciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos y tales compuestos para su uso en métodos de tratamiento del cáncer.

Antecedentes

El cáncer es la segunda causa principal de muerte humana superada solo por la enfermedad coronaria. En los EE. UU., el cáncer es responsable de casi 1 de cada 4 muertes. En todo el mundo, millones de personas mueren de cáncer cada año. Solo en los Estados Unidos, según lo informado por la Sociedad Estadounidense contra el Cáncer, el cáncer causa la muerte de más de medio millón de personas al año, con más de 1,5 millones de casos nuevos diagnosticados por año. Si bien las muertes por enfermedades cardíacas han disminuido significativamente, las resultantes del cáncer en general están aumentando. En la primera parte del próximo siglo, se prevé que el cáncer se convierta en la principal causa de muerte a menos que se encuentren nuevos medicamentos.

En todo el mundo, varios cánceres se destacan como las principales causas de muerte. En particular, los carcinomas de pulmón, próstata, mama, colon, páncreas, ovario y vejiga representan las principales causas de muerte por cáncer. Con muy pocas excepciones, el cáncer metastásico es fatal. Por otra parte, incluso para aquellos pacientes con cáncer que inicialmente sobreviven a sus cánceres primarios, la experiencia común ha demostrado que sus vidas se ven drásticamente alteradas. Muchos pacientes con cáncer experimentan fuertes ansiedades impulsadas por la conciencia de la posibilidad de recurrencia o fracaso del tratamiento. Muchos pacientes con cáncer experimentan debilidad física después del tratamiento. Además, muchos pacientes con cáncer experimentan recurrencia.

Las nuevas terapias contra el cáncer prometedoras incluyen las dolastatinas y los análogos sintéticos de la dolastatina tales como las auristatinas (Patentes de Estados Unidos Núm. 5.635.483, 5.780.588, 6.323.315, y 6.884.869; Shnyder et al. (2007) Int. J. Oncol. 31:353-360; Otani, M. et al. Jpn. J. Cáncer Res. 2000, 91, 837-844; Publicaciones Internacionales PCT Núm. WO 01/18032 A3, WO 2005/039492, WO 2006/132670, y WO 2009/095447; Fennell, B.J. et al. J. Antimicrob. Chemther. 2003, 51, 833-841). Se ha demostrado que las dolastatinas y las auristatinas interfieren en la dinámica de los microtúbulos, interrumpiendo así la división celular (Woyke et al. (2001) Antimicrob. Agentes Chemother. 45(12): 3580-3584) y tienen actividad anticancerosa (Patente de Estados Unidos Núm. 5.663.149) y antifúngica (Pettit et al. (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965). Desafortunadamente, a pesar del entusiasmo inicial, la dolastatina 10 mostró malos resultados como agente único en los ensayos clínicos de fase II (Shnyder (2007), más arriba,). Ciertos compuestos de la familia de las auristatinas se han mostrado más prometedores como candidatos clínicos con una eficacia y características farmacológicas mejoradas que las dolastatinas (Pettit et al. (1995) Anti-Cancer Drug Des. 10:529-544; Pettit et al. (1998) Anti-Cancer Drug Des. 13:243-277; Shnyder (2007), más arriba,. Se han descrito varios análogos sintéticos de este tipo estructural (Patente de Estados Unidos Núm. 6.569.834; Patente de Estados Unidos Núm. 6.124.431; y Pettit et al. (2011) J. Nat. Prod. 74: 962-968).

Las auristatinas tienen varias propiedades que las hacen atractivas para el desarrollo farmacéutico. En primer lugar, estos compuestos son extremadamente potentes. En segundo lugar, su preparación es sencilla debido al armazón peptídico. En tercer lugar, poseen buenos perfiles farmacocinéticos y metabólicos en comparación con los péptidos en general o con otras clases de fármacos contra el cáncer en particular.

El documento WO2013/173393A1 se refiere a agentes citotóxicos que se unen a tubulina.

El documento WO2007/008603A1 se refiere a análogos peptídicos de auristatina de MeVal-Val-Dil-Dap-Phe (MMAF), que tienen remplazos o modificaciones de la cadena lateral del resto de fenilalanina C-terminal que se proporcionan solos o unidos a ligandos a través de varios conectores.

Pettit, G. R. et al., Anti-Cander Drug Design, Oxford University Press, Basingstoke, vol. 13, núm. 4, ISSN 0266-9536, páginas 243 - 277 se refiere al diseño de fármacos contra el cáncer que incluyen análogos de péptidos.

El documento EP0695758A2 se refiere al aislamiento, elucidación y replicación sintética de amidas y ésteres de pentapéptidos.

El documento WO2014/072888A1 se refiere a anticuerpos anti-IL-13-Ra2 y productos conjugados de anticuerpofármaco.

El documento WO2014/072897A1 se refiere a anticuerpos anti-Notch3, productos conjugados de anticuerpo-fármaco anti-Notch3.

El documento WO2013072813A2 se refiere a pentapéptidos citotóxicos, a productos conjugados de anticuerpofármaco de los mismos.

A pesar de los avances significativos, sigue existiendo la necesidad de nuevos agentes terapéuticos contra el cáncer con propiedades farmacéuticas deseables.

Compendio

En un aspecto, la invención proporciona un compuesto de Fórmula (I):

en donde

R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo;

X está ausente;

R3 es un grupo de la fórmula:

en donde R¹⁵y R¹⁶son cada uno independientemente -H, -OH, -NH2, -SH, -N3, alquilo, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, o -alquil-N³;

R4 es un grupo de la fórmula:

en donde R¹⁷es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, - alquil-SH, -alquil-N³o -alquil-CO2H; y R¹⁸es -H, -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquilo, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N³o -alquil-CO2H;

R5 es sec-butilo o isobutilo;

R⁶es -H o alquilo;

R⁷es -H, alquilo, -CO2Ra, -CONRbRc, fenilo sustituido o no sustituido, o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; R⁸es -H, alquilo, fenilo sustituido o no sustituido o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido;

en donde Ra es -H o alquilo;

Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo;

R⁹es -H o alquilo; o R⁹se toma junto con R⁴y los átomos a los que están unidos para formar un anillo de heterocicloalquilo sustituido o no sustituido;

R¹⁰es -H o alquilo;

R¹¹es -H o alquilo;

R¹²es -H o alquilo;

R¹³es -H o alquilo; y

R¹⁴es -H, -OH o alquilo;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En una realización R¹⁵y R¹⁶son cada uno independientemente -H o alquilo; R⁷es -H, -CO2Ra, -CONRbRc o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; R⁸es fenilo sustituido o no sustituido, o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; y R¹⁴es -H.

En otra realización R¹⁵y R¹⁶son cada uno metilo. En una realización adicional, R¹⁷es -OH, -NH2, -SH o-N³; y R¹⁸es -H o alquilo. En otra realización adicional, R⁷es -H, -CO2Ra o -CONRbRc; y R⁸es fenilo.

En otra realización R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

X está ausente;

y Rb y uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R⁸es -H, alquilo C1-C6, fenilo sustituido o no sustituido o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido;

R⁹es -H;

R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R¹⁴es -H, alquilo C1-C6 u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización R¹y R²son cada uno independientemente -H o metilo;

X está ausente;

R3 es

en donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o metilo;

R4 es

> en donde R17 es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, aminometilo, alquinilo, alquenilo o azidometilo; y R18 es -H o metilo;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R7 es -H, metilo, -CO2Ra, o -CONRbRc; en donde Ra es -H o metilo; y Rb y Rc son cada uno independientemente -H o metilo;

R8 es -H, metilo, etilo, piridinilo, piperidinilo, fenilo no sustituido, fenilo sustituido con halo;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno metilo; y

R14 es -H, metilo u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

X está ausente;

r 15 R 1B

R3 es ^{j v Í / v}en donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o alquilo C1-C6;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R7 es -H, alquilo C1-C6, -CÜ2Ra, -CONRbRc, tetrazolilo o tiazolilo; en donde Ra es -H o alquilo C1-C6; y Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R8 es -H, alquilo C1-C6, fenilo sustituido o no sustituido o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R14 es -H, alquilo C1-C6 u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización R1 y R2 son cada uno metilo;

X está ausente;

^{r 17 R 1B}

_{R4 es un grupo de fórmula:}I _{>en donde R17 es -N3, -NH2, -OH, -SH y R18 es -H o metilo;}

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R7 es -CO2Ra, o -CONRbRc, en donde Ra es -H o alquilo C1-C6; Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R8 es fenilo;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno metilo; y

R14 es -H;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

X está ausente;

^{R17 R18}

_{R4 es}I _{3 en donde R17 es -N3; y R18 es -H o alquilo C1-C6;}

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R7 es alquilo C1-C6, -CONRbRc, tetrazolilo o tiazolilo; en donde Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R14 es -H, alquilo C1-C6 u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otra realización, X está ausente;

R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R7 es -CONRbRc, en donde Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R14 es -H, alquilo C1-C6 u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

En otras realizaciones, el compuesto se puede seleccionar del grupo que consiste en:

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(S)-2-(dimetilamino)-N-((S)-3-hidroxi-1 -(((3R,4S,5i)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida;

(2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(2S)-2-(dimetilamino)-N-((2S)-3-hidroxi-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((2S)-2-((1 R,2R))-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piperidin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida;

(2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((2S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piperidin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(S)-N-((S)-3-amino-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamida;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato; (S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-4-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-4-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-mercapto-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato; ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-mercapto-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico; ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico; ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

ácido (S)-2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico;

(25.35) -3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(fenetilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1 R,2R)-3-(((1S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-azido-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-((4-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-azido-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-((2-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(fenetilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((1 S,2R)-1 -hidroxi-1 -fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-((4-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-((2-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(S)-4-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(fenetilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(S)-4-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((1 S,2R)-1 -hidroxi-1 -fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(S)-4-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-((4-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(S)-4-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-((2-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilpent-4-inamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de metilo;

(25.35) -N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-azido-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -(terc-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-valinato de metilo;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-6-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilhexanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de metilo;

ácido (S)-3-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-4-(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-3-(((S)-1 -metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-4-oxobutanoico;

(2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((1 S,2R)-1 -hidroxi-1 -fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-isoleucinato de metilo;

(25.35) -3-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -(terc-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)propanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de metilo;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de metilo;

(25.35) -N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido) butanamida;

((2S,3S)-3-azido-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -(terc-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de ferc-butilo;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3 -metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanina;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-( dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de ferc-butilo;

(25.35) -3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(1 H-tetrazol-5-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-azido-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(1 H-tetrazol-5-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida;

(25.35) -3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida; ((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-( dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de ferc-butilo;

(25.35) -3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(1 H-tetrazol-5-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida; y

(25.35) -3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida; o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

En una realización adicional, el compuesto es (2S,3S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1-amino-1-oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida, o las sales farmacéuticamente aceptables de la misma.

En un segundo aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del compuesto del primer aspecto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En un tercer aspecto, la invención proporciona un compuesto como se define en el primer aspecto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica como se define en el segundo aspecto, para su uso en un método de tratamiento de un cáncer en un sujeto que necesita tal tratamiento.

En el contexto de la invención, las referencias a métodos de tratamiento deben entenderse como referencias a los compuestos y composiciones de la invención para su uso en dichos métodos. Por consiguiente, los aspectos y realizaciones relacionados con métodos de tratamiento deben entenderse como relacionados con un compuesto o composición para su uso en el sentido anterior.

Breve descripción de las figuras

La FIG. 1 muestra datos de polimerización de tubulina in vitro para tubulina tratada con el Ejemplo 2, Ejemplo 4 y Ejemplo 6. La tubulina no tratada (Tampón) muestra el nivel basal de polimerización de tubulina. Se utilizaron como controles un estabilizador de tubulina (Paclitaxel) y un desestabilizador de tubulina (Control). Todos los compuestos se utilizaron a una concentración final de 10 pM.

La FIG. 2 muestra datos de polimerización de tubulina in vitro para tubulina tratada con el Ejemplo 1, Ejemplo 3 y Ejemplo 5. La tubulina no tratada (Tampón) muestra el nivel basal de polimerización de tubulina. Se utilizaron como controles un estabilizador de tubulina (Paclitaxel) y un desestabilizador de tubulina (Control). Todos los compuestos se utilizaron a una concentración final de 10 pM.

La FIG. 3 muestra datos de polimerización de tubulina in vitro para tubulina tratada con el Ejemplo 8, Ejemplo 9 y Ejemplo 12. La tubulina no tratada (Tampón) muestra el nivel basal de polimerización de tubulina. Se utilizaron como controles un estabilizador de tubulina (Paclitaxel) y un desestabilizador de tubulina (Control). Todos los compuestos se utilizaron a una concentración final de 10 pM.

La FIG. 4 muestra datos de polimerización de tubulina in vitro para tubulina tratada con el Ejemplo 7, Ejemplo 10 y Ejemplo 11. La tubulina no tratada (Tampón) muestra el nivel basal de polimerización de tubulina. Se utilizaron como controles un estabilizador de tubulina (Paclitaxel) y un desestabilizador de tubulina (Control). Todos los compuestos se utilizaron a una concentración final de 10 pM.

La FIG. 5 muestra datos de polimerización de tubulina in vitro para tubulina tratada con el Ejemplo 19, Ejemplo 20 y Ejemplo 21. La tubulina no tratada (Tampón) muestra el nivel basal de polimerización de tubulina. Se utilizaron como controles un estabilizador de tubulina (Paclitaxel) y un desestabilizador de tubulina (Control). Todos los compuestos se utilizaron a una concentración final de 10 pM.

La FIG. 6 muestra datos de polimerización de tubulina in vitro para tubulina tratada con el Ejemplo 13, Ejemplo 16 y Ejemplo 22. La tubulina no tratada (Tampón) muestra el nivel basal de polimerización de tubulina. Se utilizaron como controles un estabilizador de tubulina (Paclitaxel) y un desestabilizador de tubulina (Control). Todos los compuestos se utilizaron a una concentración final de 10 pM.

La FIG. 7 muestra datos de polimerización de tubulina in vitro para tubulina tratada con el Ejemplo 14, Ejemplo 15, Ejemplo 18, Ejemplo 20 y Ejemplo 23. La tubulina no tratada (Tampón) muestra el nivel basal de polimerización de tubulina. Se utilizaron como controles un estabilizador de tubulina (Paclitaxel) y un desestabilizador de tubulina (Control). Todos los compuestos se utilizaron a una concentración final de 10 pM.

La FIG. 8 muestra datos de polimerización de tubulina in vitro para tubulina tratada con el Ejemplo 17, Ejemplo 19, Ejemplo 25 y Ejemplo 26. La tubulina no tratada (Tampón) muestra el nivel basal de polimerización de tubulina. Se utilizaron como controles un estabilizador de tubulina (Paclitaxel) y un desestabilizador de tubulina (Control). Todos los compuestos se utilizaron a una concentración final de 10 |uM.

La FIG. 9 muestra los resultados para los Ejemplos 1, 2, 3 y Paclitaxel en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 10 muestra los resultados para los Ejemplos 1, 2, 3 y Paclitaxel en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCT15, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 11 muestra los resultados para los Ejemplos 1, 2, 3 y Paclitaxel en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 12 muestra los resultados de los Ejemplos 4, 5 y 6 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 13 muestra los resultados de los Ejemplos 4, 5 y 6 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCT15, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 14 muestra los resultados de los Ejemplos 4, 5 y 6 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 15 muestra los resultados de los Ejemplos 7, 8 y 9 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 16 muestra los resultados de los Ejemplos 7, 8 y 9 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCT15, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 17 muestra los resultados de los Ejemplos 7, 8 y 9 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 18 muestra los resultados de los Ejemplos 10, 11 y 12 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 19 muestra los resultados de los Ejemplos 10, 11 y 12 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCT15, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 20 muestra los resultados de los Ejemplos 10, 11 y 12 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 21 muestra los resultados de los Ejemplos 13, 14 y 15 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 22 muestra los resultados de los Ejemplos 13, 14 y 15 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 23 muestra los resultados de los Ejemplos 16, 21 y 22 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 24 muestra los resultados de los Ejemplos 16, 21 y 22 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 25 muestra los resultados de los Ejemplos 17, 18 y 19 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 26 muestra los resultados de los Ejemplos 17, 18 y 19 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 27 muestra los resultados de los Ejemplos 20 y 23 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 28 muestra los resultados de los Ejemplos 20 y 23 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 29 muestra los resultados de los Ejemplos 25 y 26 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células PC3, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

La FIG. 30 muestra los resultados de los Ejemplos 25 y 26 en un experimento de citotoxicidad in vitro utilizando células HCC-1954, como se describe en el Ejemplo B1. Se realiza una representación gráfica de los datos como porcentaje de supervivencia frente a la concentración del compuesto de prueba, en comparación con los pocillos de control no tratados.

Descripción detallada

Como se emplean en la presente memoria, los términos "que incluye", "que contiene" y "que comprende" se utilizan en su sentido abierto, no limitante.

Para proporcionar una descripción más concisa, algunas de las expresiones cuantitativas proporcionadas en la presente memoria no están calificadas con el término "aproximadamente". Se entiende que, tanto si el término "aproximadamente" se utiliza explícitamente como si no, se pretende que cada cantidad determinada en la presente memoria se refiera al valor determinado real, y también se pretende que se refiera a la aproximación a tal valor determinado que se podría inferir razonablemente basándose en la experiencia normal en la técnica, incluyendo equivalentes y aproximaciones debido a las condiciones experimentales y/o de medición para tal valor determinado. El término "alquilo", por sí mismo o como parte de otro término, se refiere a un hidrocarburo C1-C12 saturado que contiene átomos de carbono normales, secundarios, terciarios o cíclicos. Los grupos alquilo concretos son los que tienen de 1 a 8 átomos de carbono, de 1 a 6 átomos de carbono o de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a: metilo (Me), etilo (Et), n-propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ferc-butilo (tBu), n-pentilo, isopentilo, ferc-pentilo, y n-hexilo, isohexilo. En algunas realizaciones, un grupo alquilo tiene átomos de carbono normales, secundarios o terciarios y no tiene átomos de carbono cíclicos.

El término "alquenilo", por sí mismo o como parte de otro término, se refiere a un hidrocarburo C2-C12 que contiene átomos de carbono normales, secundarios, terciarios o cíclicos con al menos un sitio de insaturación, es decir, un doble enlace carbono-carbono, sp2. Los grupos alquenilo concretos son los que tienen de 2 a 8 átomos de carbono, de 2 a 6 átomos de carbono o de 2 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: vinilo ( CH=CH2), alilo (-CH2CH2=CH2), ciclopentenilo (-C5H7) y 5-hexenilo (-CH2CH2CH2CH2CH=CH2). En algunas realizaciones, un grupo alquenilo tiene átomos de carbono normales, secundarios o terciarios y no tiene átomos de carbono cíclicos.

El término "alquinilo", por sí mismo o como parte de otro término, se refiere a un hidrocarburo C2-C12 que contiene átomos de carbono normales, secundarios, terciarios o cíclicos con al menos un sitio de insaturación, es decir, un triple enlace carbono-carbono, sp. Los grupos alquinilo concretos son los que tienen de 2 a 8 átomos de carbono, de 2 a 6 átomos de carbono o de 2 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: etinilo (-C=CH) y 2-propinilo (-CH2C=CH). En algunas realizaciones, un grupo alquinilo tiene átomos de carbono normales, secundarios o terciarios y no tiene átomos de carbono cíclicos.

El término "alcoxi" se refiere a un grupo -O-alquilo, en donde O es el punto de unión al resto de la molécula, y alquilo se define como antes.

El término "heterocicloalquilo" se refiere a una estructura anular monocíclica o policíclica fusionada, puenteada o espiro que está saturada o parcialmente saturada y tiene de 3 a 12 átomos anulares por estructura anular seleccionados entre átomos de carbono y hasta tres heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre. Los grupos heterocicloalquilo concretos son los que tienen de 3 a 8 átomos anulares o de 5 a 7 átomos anulares por estructura anular. La estructura anular puede contener opcionalmente hasta dos grupos oxo en miembros del anillo de carbono o azufre. Las entidades ilustrativas, en forma de radicales debidamente unidos, incluyen:

El término "heteroarilo" se refiere a un heterociclo aromático monocíclico, bicíclico fusionado o policíclico fusionado (estructura anular que tiene átomos anulares seleccionados entre átomos de carbono y hasta cuatro heteroátomos seleccionados entre nitrógeno, oxígeno y azufre) que tiene de 3 a 12 átomos anulares por heterociclo. Los grupos heteroarilo concretos son aquellos que tienen de 3 a 8 átomos anulares o de 5 a 7 átomos anulares por estructura anular. Los ejemplos ilustrativos de grupos heteroarilo incluyen las siguientes entidades, en forma de radicales debidamente unidos:

Los términos "heterociclo", "heterocíclico" o "heterociclilo" como se emplean en la presente memoria abarcan los radicales tanto "heterocicloalquilo" como "heteroarilo" como se definen anteriormente.

Los expertos en la técnica reconocerán que las especies de grupos heterociclilo, heteroarilo y heterocicloalquilo enumeradas o ilustradas anteriormente no son exhaustivas, y que también se pueden seleccionar especies adicionales dentro del alcance de estos términos definidos.

El término "halógeno" representa cloro, flúor, bromo o yodo. El término "halo" representa cloro, flúor, bromo o yodo. El término "sustituido" significa que el grupo o radical especificado portan uno o más sustituyentes. El término "no sustituido" significa que el grupo especificado no tiene sustituyentes. El término "opcionalmente sustituido" significa que el grupo especificado no está sustituido o está sustituido con uno o más sustituyentes. Cuando el término "sustituido" se utiliza para describir un sistema estructural, se pretende que la sustitución se produzca en cualquier posición permitida por la valencia en el sistema.

Se pretende que cualquier fórmula proporcionada en la presente memoria represente compuestos que tienen estructuras representadas por la fórmula estructural, así como ciertas variaciones o formas. En particular, los compuestos de cualquier fórmula proporcionada en la presente memoria pueden tener centros asimétricos y, por lo tanto, existir en diferentes formas enantioméricas. Todos los isómeros ópticos y estereoisómeros de los compuestos de fórmula general, y sus mezclas, se consideran dentro del alcance de la fórmula. Por tanto, se pretende que cualquier fórmula proporcionada en la presente memoria represente un racemato, una o más formas enantioméricas, una o más formas diastereoméricas, una o más formas atropisoméricas y mezclas de las mismas. Además, ciertas estructuras pueden existir como isómeros geométricos (es decir, isómeros cis y trans), como tautómeros o como atropisómeros. Además, se pretende que cualquier fórmula proporcionada en la presente memoria haga referencia también a cualquiera de los hidratos, solvatos y formas amorfas y polimórficas de tales compuestos, y mezclas de los mismos, incluso si tales formas no se enumeran explícitamente. En algunas realizaciones, el disolvente es agua y los solvatos son hidratos.

También se pretende que cualquier fórmula proporcionada en la presente memoria represente formas no marcadas, así como formas marcadas isotópicamente de los compuestos. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas proporcionadas en la presente memoria, excepto que uno o más átomos se reemplazan por un átomo que tiene una masa atómica o número másico seleccionados. Los ejemplos de isótopos que se pueden incorporarse a los compuestos descritos en la presente memoria incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor, cloro y yodo, tales como ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹P, ³²P, ³⁵S,¹⁸F, ³⁶Cl y ¹²⁵I, respectivamente. Tales compuestos marcados isotópicamente son útiles en estudios metabólicos (preferiblemente con ¹⁴C), estudios cinéticos de reacción (con, por ejemplo, ²H o ³H), técnicas de detección o generación de imágenes [tales como la tomografía por emisión de positrones (PET) o la tomografía computarizada por emisión de fotón único (SPECT)] que incluyen ensayos de distribución en tejido de sustrato o fármaco, o en el tratamiento radiactivo de pacientes. En particular, un compuesto marcado con ¹⁸F o ¹¹C puede ser particularmente preferido para estudios de PET o SPECT. Adicionalmente, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio (es decir, ²H) puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, mayor semivida in vivo o menores requisitos de dosificación. Los compuestos marcados isotópicamente descritos en la presente memoria y los profármacos de los mismos se pueden preparar generalmente llevando a cabo los procedimientos descritos en los esquemas o en los ejemplos y preparaciones descritos a continuación sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible por un reactivo no marcado isotópicamente.

Cuando se hace referencia a cualquier fórmula proporcionada en la presente memoria, no se pretende que la selección de un radical concreto de una lista de posibles especies para una variable especificada defina la misma elección de la especie para la variable que aparece en otra parte. En otras palabras, cuando una variable aparece más de una vez, la elección de la especie de una lista específica es independiente de la elección de la especie para la misma variable en otra parte de la fórmula, a menos que se indique lo contrario.

Se pretende que la nomenclatura "Ci-Cj" siendo j>i, cuando se aplica en la presente memoria a una clase de sustituyentes, se refiera a las realizaciones de cualquiera de las composiciones, usos o métodos descritos en la presente memoria para los cuales todos y cada uno de los miembros carbonados, desde i hasta j incluyendo i y j, se materialicen de forma independiente. A modo de ejemplo, el término C1-C3 se refiere independientemente a realizaciones que tienen un miembro carbonado (C1), realizaciones que tienen dos miembros carbonados (C2) y realizaciones que tienen tres miembros carbonados (C3).

El término alquilo Cn-Cm se refiere a una cadena alifática, ya sea lineal o ramificada, con un número total N de miembros carbonados en la cadena que satisface n < N < m, siendo m > n.

Los nombres químicos enumerados en la presente memoria se generaron utilizando el soporte lógico AutoNOM™. Si hay una discrepancia entre una estructura química y el nombre enumerado para esa estructura, prevalece la estructura.

De acuerdo con las consideraciones interpretativas anteriores sobre asignaciones y nomenclatura, se entiende que la referencia explícita en la presente memoria a un conjunto implica, cuando sea químicamente significativo y salvo que se indique lo contrario, una referencia independiente a las realizaciones de tal conjunto, y una referencia a todas y cada una de las posibles realizaciones de subconjuntos del conjunto al que se hace referencia explícitamente. En los compuestos de Fórmula (I), R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6. En algunas realizaciones, R1 y R2 son cada uno independientemente -H o metilo. En algunas realizaciones, R1 y R2 son cada uno independientemente alquilo. En algunas realizaciones, R1 y R2 son ambos metilo. En algunas realizaciones, R1 y R2 son ambos -H.

En los compuestos de Fórmula (I), X está ausente.

En los compuestos de Fórmula (I), R3 es " " • en donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH, -NH2, -SH, -N3, alquilo, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, o -alquil-N³. En algunas realizaciones, R¹⁵y R¹⁶son cada uno independientemente -H, alquilo, -(CH2)0-6CeCH, -(CH2)0-6CH=CH2, -(CH2)0-6OH, -(CH2)0-6NH2, -(CH2)0-6SH, o -(CH²)^0-6N³. En algunas realizaciones, R¹⁵y R¹⁶son cada uno independientemente -H, -OH o alquilo. En algunas realizaciones, R¹⁵y R¹⁶son cada uno independientemente -H, -OH o metilo. En algunas realizaciones, R¹⁵es -OH y R¹⁶es hidrógeno. En algunas realizaciones, R¹⁵es -OH y R¹⁶es metilo.

En ciertas realizaciones, R3 está en la configuración estereoquímica R con respecto al resto de la molécula. En otras realizaciones, R3 está en la configuración estereoquímica S con respecto al resto de la molécula. En ciertas realizaciones, el propio grupo R3 contiene uno o más centros quirales, y esos estereocentros están cada uno independientemente en la configuración R o S.

_{En los compuestos de Fórmula (I), R4 es un grupo de la fórmula:}

en donde R17 es -OH, -NH2,

-SH, -N³, -CO2H, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N3 o -alquil-CO2H; y R18 es -H, -OH, -NH2, -SH, -N³, -CO2H, alquilo, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N³o -alquil-CO2H Rl7 „R 18

En algunas realizaciones, R4 es > en donde R17 es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N³o -alquil-CO2H, y R¹⁸es -H, -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N³o -alquil-CO2H. En otras realizaciones más, R¹⁷y R¹⁸son cada uno independientemente -(CH2)0-6CeCH, -(CH2)0-6CH=CH2, -(CH2)0-6OH, -(CH2)0-6NH2, -(CH2)0-6SH, o -(CH²)^0-6N³y R¹⁸también puede ser -H o alquilo. En algunas realizaciones, R¹⁷y R¹⁸son cada uno independientemente -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquil-NH2, o -alquil-N³y R¹⁸también puede ser -H o alquilo. En algunas realizaciones, R¹⁷y R¹⁸son cada uno independientemente -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, -CH2NH2, o -CH2N3 y R¹⁸también puede ser -H o metilo. En ciertas realizaciones, R⁴se toma junto con R⁹y los átomos a los que están unidos para formar un anillo de heterocicloalquilo sustituido o no sustituido. En ciertas realizaciones, R⁴se toma junto con R⁹y los átomos a los que están unidos para formar un anillo de heterocicloalquilo de 5 a 7 miembros, que puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos seleccionados entre -OH, -NH2, -SH y -N3. En ciertas realizaciones, el anillo de heterocicloalquilo es un anillo de pirrolidina, que puede estar no sustituido o sustituido con uno o más grupos seleccionados entre -OH, -NH2, -SH y -N³.

En ciertas realizaciones, R4 está en la configuración estereoquímica R con respecto al resto de la molécula. En otras realizaciones, R4 está en la configuración estereoquímica S con respecto al resto de la molécula. En ciertas realizaciones, el propio grupo R4 contiene uno o más centros quirales, y esos estereocentros están cada uno independientemente en la configuración R o S.

En ciertas realizaciones, R5 es sec-butilo. En otras realizaciones, R5 es isobutilo. En ciertas realizaciones, R5 está en la configuración estereoquímica R con respecto al resto de la molécula. En otras realizaciones, R5 está en la configuración estereoquímica S con respecto al resto de la molécula. En algunas realizaciones, el centro quiral dentro del grupo R5 está en la configuración R y, en otras realizaciones, ese centro está en la configuración S.

En ciertas realizaciones, R⁶es -H. En otras realizaciones, R⁶es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C8 , alquilo C1-C4 , metilo o etilo.

En los compuestos de Fórmula (I), R⁷es -H, alquilo, -CÜ2Ra, -CONRbRc, fenilo sustituido o no sustituido, o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; y R⁸es -H, alquilo, fenilo sustituido o no sustituido o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; en donde Ra es -H o alquilo, y Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo;

En ciertas realizaciones, R⁷y R⁸son cada uno independientemente fenilo sustituido o no sustituido o un anillo heterocíclico sustituido o no sustituido, en donde fenilo o el anillo heterocíclico pueden estar sustituidos con uno o más grupos seleccionados entre halo, oxo, hidroxi, amino, alquilo y alcoxi. En otras ciertas realizaciones, R⁷es un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros no sustituido. En otras ciertas realizaciones, R⁷es un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros sustituido. En otras ciertas realizaciones, R⁸es fenilo que está opcionalmente sustituido con halo.

En ciertas realizaciones, R⁷está en la configuración estereoquímica R con respecto al resto de la molécula. En otras realizaciones, R⁷está en la configuración estereoquímica S con respecto al resto de la molécula.

En ciertas realizaciones, R⁸está en la configuración estereoquímica R con respecto al resto de la molécula. En otras realizaciones, R⁸está en la configuración estereoquímica S con respecto al resto de la molécula.

En algunas realizaciones, R⁷es -CO2Ra -CONRbRc; tetrazolilo o tiazolilo, en donde Ra es -H o alquilo, por ejemplo, alquilo Ci -C⁶o metilo; y Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6 o metilo; y

R⁸es fenilo que está opcionalmente sustituido con halo.

En algunas realizaciones, R9 es -H. En otras realizaciones, R9 es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C8 , alquilo Ci -C4, metilo o etilo. En algunas realizaciones, R9 es -H o metilo. En algunas realizaciones, R9 es metilo.

En algunas realizaciones, R10 es -H. En otras realizaciones, R10 es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C8 , alquilo C1-C4 , metilo o etilo. En algunas realizaciones, R10 es -H o metilo. En algunas realizaciones, R10 es metilo.

En algunas realizaciones, R¹¹es -H. En otras realizaciones, R¹¹es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C8 , alquilo C1-C4 , metilo o etilo. En algunas realizaciones, R¹¹es -H o metilo. En algunas realizaciones, R¹¹es metilo.

En algunas realizaciones, R¹²es -H. En otras realizaciones, R¹²es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C8 , alquilo C1-C4 , metilo o etilo. En algunas realizaciones, R¹²es -H o metilo. En algunas realizaciones, R¹²es metilo.

En algunas realizaciones, R¹³es -H. En otras realizaciones, R¹³es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C8 , alquilo C1-C4 , metilo o etilo. En algunas realizaciones, R¹³es -H o metilo. En algunas realizaciones, R¹³es metilo.

En algunas realizaciones, R¹⁴es -H. En algunas realizaciones, R¹⁴es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6, metilo o etilo. En algunas realizaciones, R¹⁴es -OH.

En ciertas realizaciones, R¹⁴está en la configuración estereoquímica R con respecto al resto de la molécula. En otras realizaciones, R¹⁴está en la configuración estereoquímica S con respecto al resto de la molécula.

En algunas realizaciones, R⁷es -CO2Ra, en donde Ra es -H o alquilo, por ejemplo, alquilo C1-fenilo; y R¹⁴es -H. En algunas realizaciones, R⁷es -CONRbRc, en donde Rb y Rc son cada uno independientemente

-H o alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6 o metilo; R⁸es fenilo; y R¹⁴es -H. En algunas realizaciones, R⁷es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6 o metilo; R⁸es fenilo; y R¹⁴es -OH. En algunas realizaciones, R⁷es metilo, R⁸es fenilo y R¹⁴es -Oh . En algunas realizaciones, R⁷y R¹⁴son ambos -H y R⁸es piridinilo, piperidinilo, fenilo no sustituido o fenilo sustituido con halo, por ejemplo, flúor, cloro o bromo. En algunas realizaciones, R⁷es -CO2Ra, en donde Ra es -H o alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6 o metilo; R⁸es -H o alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6 o metilo; y R¹⁴es alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6, metilo o etilo. En algunas realizaciones, R⁷es -CO2Ra, en donde Ra es -H o alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6 o metilo; R⁸es -H o alquilo, por ejemplo, alquilo C1-C6 o metilo; y R¹⁴es -OH.

En ciertas realizaciones,

R¹y R²son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

X está ausente;

donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o alquilo C1-C6;

n donde R17 es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, -alquil(Ci-6)-NH2, alquinilo, alquenilo o —alquil(Ci-

alquilo C1-C6;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R⁷es -H, alquilo C1-C6, -CÜ2Ra, -CONRbRc, tetrazolilo o tiazolilo; en donde Ra es -H o alquilo C1-C6; y Rb y Rc son cada uno -H o alquilo C1-C6;

R⁹es -H;

R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R¹⁴es -H, alquilo C1-C6 u -OH.

En ciertas realizaciones,

R¹y R²son cada uno independientemente -H o metilo;

X está ausente;

donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o metilo;

donde R17 es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, aminometilo, alquinilo, alquenilo o azidometilo; y R18 es -H o metilo;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R7 es -H, metilo, -CO2Ra, o -CONRbRc; en donde Ra es -H o metilo; y Rb y Rc son cada uno -H o metilo;

R9 es -H;

R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³son cada uno metilo; y

R¹⁴es -H, metilo u -OH.

En ciertas realizaciones,

R¹y R²son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

X está ausente;

donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o alquilo C1-C6;

donde R17 e s -N3 y R18 es-H o metilo;

R⁵es sec-butilo;

R⁶es -H;

R⁷es -H, alquilo C1-C6, -CO2Ra, -CONRbRc, tetrazolilo o tiazolilo; en donde Ra es -H o alquilo C1-C6; y Rb y Rc son cada uno -H o alquilo C1-C6;

R⁹es -H;

R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R¹⁴es -H, alquilo C1-C6 u -OH.

En algunas realizaciones de Fórmula (I), en donde,

R1 y R2 son cada uno metilo;

X está ausente;

Rl® R16

R3 es un grupo de la fórmula: .~L

en donde R15 y R16 son cada uno metilo;

R4 es un grupo de la fórmula:

en donde R17 es -N3, -NH2, -OH, -SH y R18 es -H o metilo;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R7 es -CO2Ra o CONRbRc,

en donde Ra es -H o alquilo C1-C6;

Rb y Rc son cada uno independientemente H o alquilo C1-C6;

R8 es fenilo;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno independientemente metilo; y

R14 es -H.

En ciertas realizaciones, los compuestos de Fórmula (I) se seleccionan del grupo que consiste en:

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-W-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(S)-2-(dimetilamino)-N-((S)-3-hidroxi-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R, 2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida; (2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(2S)-2-(dimetilamino)-N-((2S)-3-hidroxi-1 -(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((2S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piperidin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-4-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato; (S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-4-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(25.35) -3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1 R,2R)-3-(((1 S,2R)-1-hidroxi-1-fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(25.35) -N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(25.35) -3-azido-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -(ferc-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-6-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilhexanaamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de metilo;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,4S)-4-azido-1-(dimetil-L-valil)-N-metilpirrolidin-2-carboxamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de metilo;

ácido (S)-3-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-4-(((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R, 2R)-1 -metoxi-3-(((S)-1 -metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-4-oxobutanoico;

(25.35) -3-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido) -N-metilbutanamida;

(25.35) -3-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -(ferc-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida;

(25.35) -N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida;

((2S,3S)-3-azido-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -(ferc-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalanina;

((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de ferc-butilo;

(25.35) -3-azido-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(1 R-tetrazol-5-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida;

(25.35) -3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida; ((2R,3R)-3-((S)-1-((3fí,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de ferc-butilo;

(25.35) -3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(1 H-tetrazol-5-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-W-metilbutanamida; y

(25.35) -3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-W-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-W-metilbutanamida; y las sales farmacéuticamente aceptables de la misma.

También se proporcionan en la presente memoria las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula (I), preferiblemente de los descritos anteriormente y los compuestos específicos ilustrados en la presente memoria, las composiciones farmacéuticas que comprenden tales sales y los métodos para utilizar tales sales. Se pretende que una "sal farmacéuticamente aceptable" signifique una sal de un ácido o base libre de un compuesto representado en la presente memoria que no es tóxico, es biológicamente tolerable o biológicamente adecuado de otro modo para su administración al sujeto. Véase, en general, S.M. Berge et al. "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19. Las sales farmacéuticamente aceptables preferidas son aquellas que son farmacológicamente eficaces y adecuadas para el contacto con los tejidos de sujetos sin una toxicidad, irritación o respuesta alérgica indebidas. Un compuesto descrito en la presente memoria puede poseer un grupo suficientemente ácido, un grupo suficientemente alcalino o ambos tipos de grupos funcionales y, en consecuencia, reaccionar con varias bases inorgánicas u orgánicas y ácidos inorgánicos y orgánicos para formar una sal farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición de ácido tales como sulfatos, pirosulfatos, bisulfatos, sulfitos, bisulfitos, fosfatos, monohidrogenofosfatos, dihidrogenofosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloruros, bromuros, yoduros, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilato, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butino-1,4-dioatos, hexino-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, metilsulfonatos, propilsulfonatos, besilatos, xilenosulfonatos, naftaleno-1-sulfonatos, naftaleno-2-sulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, yhidroxibutiratos, glicolatos, tartratos, y mandelatos, y sales con bases inorgánicas tales como sodio, potasio, magnesio, calcio, aluminio y similares o bases orgánicas tales como metilamina, etilamina, etanolamina, lisina, ornitina y similares, sales con varios aminoácidos o derivados de aminoácidos tales como acetil leucina y similares, sales de amonio, etc.

Para fines de tratamiento, las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos descritos en la presente memoria pueden comprender adicionalmente uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. Un excipiente farmacéuticamente aceptable es una sustancia que no es tóxica y, por lo demás, es biológicamente adecuada para su administración a un sujeto. Tales excipientes facilitan la formulación y administración de un compuesto descrito en la presente memoria y son compatibles con el ingrediente activo. Los ejemplos de excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen estabilizadores, lubricantes, tensioactivos, diluyentes, antioxidantes, aglutinantes, agentes colorantes, emulsionantes o agentes modificadores del sabor. En realizaciones preferidas, las composiciones farmacéuticas son composiciones estériles.

Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria se pueden formular en forma de soluciones, emulsiones, suspensiones o dispersiones en disolventes o portadores farmacéuticos adecuados, o en forma de píldoras, comprimidos, pastillas, supositorios, polvos para reconstitución o cápsulas junto con portadores sólidos de acuerdo con métodos convencionales conocidos en la técnica para la preparación de diversas formas de dosificación. Para aplicaciones tópicas, los compuestos descritos en la presente memoria se formulan preferiblemente en forma de cremas o pomadas o un vehículo similar adecuado para administración tópica. Las composiciones farmacéuticas y los compuestos descritos en la presente memoria se pueden administrar en los métodos inventivos mediante una ruta de suministro adecuada, p. ej., oral, nasal, parenteral, rectal, tópica, ocular o por inhalación.

Se pretende que los términos "tratar" o "tratamiento" como se emplean en la presente memoria hagan referencia a la administración de un compuesto descrito en la presente memoria a un sujeto con el fin de crear un beneficio terapéutico. El tratamiento incluye revertir, mejorar, aliviar, inhibir el progreso o disminuir la gravedad de una enfermedad, trastorno o afección, o uno o más síntomas de cáncer. El término "sujeto" se refiere a un paciente mamífero que necesita tal tratamiento, tal como un ser humano.

En los métodos de tratamiento proporcionados en la presente memoria, "una cantidad eficaz" significa una cantidad o dosis suficiente para producir generalmente el beneficio terapéutico deseado en sujetos que necesitan tal tratamiento. Las cantidades o dosis eficaces de los compuestos descritos en la presente memoria se pueden determinar mediante métodos de rutina, tales como modelos, escalada de dosis o ensayos clínicos, teniendo en cuenta factores de rutina. p. ej., el modo o vía de administración o suministro del fármaco, la farmacocinética del agente, la gravedad y el curso de la infección, el estado de salud, la afección y el peso del sujeto, y el criterio del médico a cargo. Una dosis ilustrativa está en el intervalo de aproximadamente de 1 pg a 2 mg de compuesto activo por kilogramo de peso corporal del sujeto por día, preferiblemente de aproximadamente 0,05 a 100 mg/kg/día, o de aproximadamente 1 a 35 mg/kg/día, o de aproximadamente 0,1 a 10 mg/kg/día. La dosificación total se puede administrar en unidades de dosificación únicas o divididas (p. ej., BID, TID, QID).

Los compuestos descritos en la presente memoria se pueden utilizar en composiciones o métodos farmacéuticos combinados con ingredientes activos adicionales en el tratamiento del cáncer. Los ingredientes activos adicionales se pueden administrar por separado de un compuesto descrito en la presente memoria o se pueden incluir con un compuesto descrito en la presente memoria en una composición farmacéutica proporcionada en la presente memoria. Por ejemplo, los ingredientes activos adicionales son aquellos que se sabe o se descubre que son eficaces en el tratamiento del cáncer, incluidos los activos contra otra diana asociada con el cáncer, tal como, pero sin limitarse a, Velcade, Rituximab, Metotrexato, Herceptin, Vincristina, Prednisona, Irinotecán, o similares, o una combinación de los mismos. Tal combinación puede servir para aumentar la eficacia, disminuir uno o más efectos secundarios o disminuir la dosis requerida de un compuesto divulgado.

Los compuestos de fórmula (I) se describirán ahora con referencia a esquemas sintéticos ilustrativos para su preparación general a continuación y los ejemplos específicos que siguen. Los expertos en la técnica reconocerán que, para obtener los diversos compuestos de la presente memoria, las sustancias de partida se pueden seleccionar adecuadamente de modo que los sustituyentes deseados en última instancia sean llevados a través del esquema de reacción con o sin protección según sea apropiado para producir el producto deseado. Alternativamente, puede ser necesario o deseable emplear, en lugar del sustituyente deseado en última instancia, un grupo adecuado que pueda ser llevado a través del esquema de reacción y reemplazado según sea apropiado con el sustituyente deseado. Además, un experto en la técnica reconocerá que se pueden utilizar grupos protectores para proteger ciertos grupos funcionales (grupos amino, carboxi o de cadena lateral) de las condiciones de reacción, y que tales grupos se eliminan en condiciones convencionales cuando sea apropiado. Cada una de las reacciones representadas en el esquema A se lleva a cabo preferiblemente a una temperatura de aproximadamente la temperatura ambiente a la temperatura de reflujo del disolvente orgánico utilizado. A menos que se especifique lo contrario, las variables son las definidas anteriormente en referencia a la Fórmula (I).

Con referencia al Esquema A, la preparación de compuestos de fórmula (I) comienza con una forma ácida protegida de dolaisoleuina (Dil) marcada (A) (véase Pettit et al. (1994) J. Org. Chem. 59: 1796-1800). El compuesto (A) se representa con un grupo protector de éster terc-butílico, pero un experto en la técnica puede seleccionar un sustituto apropiado. El acoplamiento con una valina o derivado de isoleucina (B) protegidos con nitrógeno, en donde PG es un grupo protector de amino adecuado tal como un grupo Boc (t-butoxicarbonilo) o fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc), se efectúa en condiciones convencionales de acoplamiento de péptidos. Por ejemplo, las reacciones se llevan a cabo en presencia de cianofosfonato de dietilo (DEPC), PyBrOP, PyBOP, BOP, diisopropilcarbodiimida (DIC), diciclohexilcarbodiimida (DCC), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida) (EDCI), 1-hidroxibenzotriazol (HOBt), 1-hidroxi-7-aza-benzotriazol (HOAt), HBTU (hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1-il-W,W,W,W-tetrametiluronio), HATU (hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio) y similares, o una combinación de los mismos. Las reacciones se llevan a cabo típicamente en presencia de una base de amina terciaria, tal como diisopropiletilamina. Los disolventes adecuados incluyen diclorometano, N,N-dimetilformamida (DMF), dimetilsulfóxido (DMSO), acetato de etilo y similares. El grupo protector de amino del dipéptido (C) resultante se elimina mediante desprotección en condiciones adecuadas. Por ejemplo, cuando PG es un grupo Boc, el compuesto (C) se trata con ácido trifluoroacético para formar la amina libre (D). Cuando PG es un grupo Fmoc, el compuesto (C) se trata con piperidina o dietilamina para producir el compuesto (D). El compuesto (D) se acopla a continuación al derivado de aminoácido (E), en forma protegida si fuera necesario, en condiciones de acoplamiento de péptidos como se describe anteriormente, para generar tripéptido (F). El tratamiento con ácido elimina el grupo protector carboxi para proporcionar ácido libre (G).

Con referencia al esquema B, la dolaproína protegida con amino (Dap) designada como (H) (véase Pettit et al. (1994) J. Org. Chem. 59:6287-6295) se acopla con amina (J) (que se prepara utilizando métodos conocidos por los expertos en la técnica) en condiciones de acoplamiento de péptidos como se describe anteriormente. El dipéptido resultante (K) se desprotege como se comentó para el Esquema A para proporcionar el compuesto (L).

Esquema C

Acoplamiento de Péptido

(G)+ (L) ' ' » 0)

Con referencia al Esquema C, el ácido (G) y la amina (L) se acoplan en condiciones de acoplamiento de péptidos como se comentó anteriormente para proporcionar compuestos de Fórmula (I). Cuando el resultado de la reacción es una forma protegida de Fórmula (I), se emplean condiciones de desprotección adecuadas para proporcionar el compuesto objetivo.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar pero no limitar las composiciones, usos y métodos proporcionados en la presente memoria. Los compuestos se preparan utilizando los métodos generales descritos anteriormente.

Las siguientes abreviaturas químicas se utilizan en todos los Ejemplos: Dov (dolavalina); Abu (ácido 2-aminobutírico); Dil (dolaisoleuina); Dpr (ácido 2,3-diaminopropiónico); Su (succinimidinilo); Dab (ácido 2,4-diaminobutírico); Dap (dolaproína); Bzl (bencilo); y Tr (tritilo).

Los tiempos de retención de LCMS se obtuvieron en una columna Aquity UPLC BeH C81,7 pm 2,1 x 50 mm, 40°C, utilizando uno de los siguientes métodos (como se indica):

Método A: 0-0,50 min: isocrático agua 80/acetonitrilo 10/ácido fórmico al 1% en agua 10; 0,50-3,50 min: gradiente lineal agua 80/acetonitrilo 10/ácido fórmico al 1% en agua 10 a agua 0/acetonitrilo 90/ ácido fórmico al 1% en agua 10; 3,50-3,99 min isocrático agua 0/acetonitrilo 90/ ácido fórmico al 1% en agua 10; 3,99-4,00 min gradiente lineal agua 0/acetonitrilo 90/ácido fórmico al 1% en agua 10 a agua 80/acetonitrilo 10/ácido fórmico al 1% en agua 10.

Método B: 0-0,50 min: isocrático agua 85/acetonitrilo 5/ácido fórmico al 1% en agua 10; 0,50-1,60 min: gradiente lineal agua 85/acetonitrilo 5/ ácido fórmico al 1% en agua 10 a agua 0/acetonitrilo 98/ácido fórmico al 1% en agua 2; 1,60-1,80 min isocrático agua 0/acetonitrilo 98/ácido fórmico al 1% en agua 2; 1,80-1,90 min gradiente lineal agua 0/acetonitrilo 98/ ácido fórmico al 1% en agua 2 a agua 85/acetonitrilo 5/ ácido fórmico al 1% en agua 10; 1,90-2,00 min isocrático agua 85/acetonitrilo 5/ácido fórmico al 1% en agua 10.

Ejemplo 1

(S)-metil 2-((2R3R)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (8,00 g, 17,1 mmoles) y sal de H-Phe-OMe HCl (4,42 g, 20,5 mmoles) en CH2G 2 (20 mL) se le añadió diisopropiletilamina (DIEA; 9,13 mL, 51,3 mmoles), seguido de dietilpirocarbonato (DEPC; 5,15 mL, 34,2 mmoles). Después de 10 h, el análisis por cromatografía líquida/espectrometría de masas (LCMS) mostró que se había completado la reacción. Se aisló Boc-Dap-Phe-OMe mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 gm, 60 Á, 3,0 x 17,0 cm) utilizando MeOH de 2% a 10% en CH2G 2 como eluyente. Se obtuvo un total de 7,45 g de Boc-Dap-Phe-OMe (16,61 mmoles, rendimiento de 97%).

A una solución a temperatura ambiente agitada de Boc-Dap-Phe-OMe (4,67 g, 10,4 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadió ácido trifluoroacético (TFA; 10 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,52 g de H-Dap-Phe-OMe (6,23 mmoles, 59%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Ser (Bzl)-OH (2,82 g, 6,76 mmoles) e hidrocloruro de H-Dil-OtBu (2,00 g, 6,76 mmoles) en acetato de etilo (EtOAc; 15 ml) se le añadió DIEA (2,17 ml, 12,2 mmoles). La solución se enfrió a (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió DIEA (2,17 ml, 12,2 mmoles) a la mezcla de reacción. La solución se enfrió a (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió yoduro de 2-cloro-1 -metilpiridinio (CMPI; 2,76 g, 10,8 mmoles) a la mezcla de reacción y se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (150 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. Se aisló Fmoc-Ser(Bzl)-Dil-OtBu mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 gm, 60 Á, 3,0 x 17,0 cm) utilizando EtOAc de 18% a 90% en hexanos como eluyente. Se obtuvo un total de 3,75 g de Fmoc-Ser(Bzl)-Dil-OtBu (5,69 mmoles, rendimiento de 84%).

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Ser(Bzl)-Dil-OtBu (1,79 g, 2,72 mmoles) en MeCN (5 ml) se le añadió piperidina (4 ml). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se extrajo con hexanos y la capa de MeCN se concentró a vacío para producir H-Ser(Bzl)-Dil-OtBu bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Ser(Bzl)-Dil-OtBu bruto y Dov (0,790 g, 5,44 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,45 ml, 8,16 mmoles), seguido de HATU (2,07 g, 5,44 mmoles). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,882 g de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OtBu (1,30 mmoles, 48%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OtBu (0,288 g, 0,425 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió TFA (4 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OH bruto y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,163 g, 0,467 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,303 ml, 1,70 mmoles), seguido de HATU (0,323 g, 0,850 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío.El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,217 g de Dov-Ser(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OMe (0,228 mmoles, 54%) en forma de la sal de TFA.

Una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OMe (0,217 g, 0,228 mmoles) y paladio sobre carbón activado (base de Pd al 10%, 0,174 g) en MeOH (5 ml) se hidrogenó en condiciones de reflujo. Después de 48 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,104 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,121 mmoles, 47%). LCMS RT = 2,32 min (Método A); ESI-MS m/z 748,72 [M+H]+; HRMS m/z 748,4846 [C39H65N5O9+H]+.

Ejemplo 2

(S)-metil 2-((2R3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((2S,3fl)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Thr(Bzl)-OH (2,92 g, 6,76 mmoles) e hidrocloruro de H-Dil-OtBu (2,00 g, 6,76 mmoles) en EtOAc (15 ml) se le añadió DIEA (2,17 ml, 12,2 mmoles). La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió DIEA (2,17 ml, 12,2 mmoles) a la mezcla de reacción. La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió CMPI (2,76 g, 10,8 mmoles) a la mezcla de reacción y se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (100 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. Se aisló Fmoc-Thr(Bzl)-Dil-OtBu mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 pm, 60 Á, 3,0 x 17,0 cm) utilizando EtOAc de 18% a 90% en hexanos como eluyente. Se obtuvo un total de 3,71 g de Fmoc-Thr(Bzl)-Dil-OtBu (5,51 mmoles, rendimiento de 82%).

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Thr(Bzl)-Dil-OtBu (3,71 g, 5,51 mmoles) en MeCN (5 ml) se le añadió piperidina (4 ml). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se extrajo con hexanos y la capa de MeCN se concentró a vacío para producir H-Thr(Bzl)-Dil-OtBu bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Thr(Bzl)-Dil-OtBu bruto y Dov (1,60 g, 11,0 mmoles) en DMF (20 ml) se le añadió DIEA (2,95 ml, 16,5 mmoles), seguido de HATU (4,19 g, 11,0 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 1,09 g de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OtBu (1,58 mmoles, 29%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-OtBu (0.331 g, 0.478 mmoles) en CH2Cl2 (5 mL) se le añadió TFA (4 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Los compuestos orgánicos volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-OH bruto y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,183 g, 0,526 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,341 ml, 1,92 mmoles), seguido de HATU (0,364 g, 0,957 mmoles). Después de 24 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,290 g de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OMe (0,300 mmoles, 63%) en forma de la sal de TFA.

Una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OMe (0,290 g, 0,300 mmoles) y paladio sobre carbón activado (base de Pd al 10%, 0,232 g) en MeOH (5 ml) se hidrogenó. Después de 24 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,129 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,147 mmoles, 43%). LC^mS RT = 2,40 min (Método A); ESI-MS m/z 762,75 [M+H]+; HRMS m/z 762,5009 [C40H67N5O9+H]+.

Ejemplo 3

(S)-2-(dimetilamino)-N-((S)-3-hidroxi-1 -(((3R.4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R.2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (10,0 g, 21,4 mmoles) y 2-(2-piridil)etilamina (3,83 ml, 32,0 mmoles) en CH2G 2 (20 mL) se le añadió DIEA (11,4 mL, 64,1 mmoles), seguido de DEPC (4,83 mL, 32,0 mmoles). Después de agitar durante la noche, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Se aisló boc-Dap-2-(2-piridil)etilamina mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 gm, 60 Á, 3,0 x 17,0 cm) utilizando MeOH de 2% a 10%/NEt³al 1% en CH2G 2 como eluyente. Se obtuvo un total de 7,42 g de Boc-Dap-2-(2-piridil)etilamina (19,0 mmoles, rendimiento de 89%).

A una solución a temperatura ambiente agitada de Boc-Dap-2-(2-piridil)etilamina (7,42 g, 19,0 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadió TFA (10 mL). Después de agitar durante la noche, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 4,50 g de H-Dap-(2-piridil)etilamina (11,1 mmoles, 59%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OtBu (0,287 g, 0,423 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió TFA (4 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OH bruto y sal de TFA de H-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,136 g, 0,466 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,302 ml, 1,70 mmoles) seguido de HATU (0,322 g, 0,847 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,258 g de Dov-Ser(Bzl)-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,288 mmoles, 68%) en forma de la sal de TFA.

Una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,258 g, 0,330 mmoles), formiato de amonio (0,062 g, 0,991 mmoles) y paladio sobre carbón activado (Base de Pd al 10%, 0,100 g) en MeOH (5 ml) se hidrogenó. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,014 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,017 mmoles, 5%). LCMS RT = 1,76 min (Método A); ESI-MS m/z 691,56 [M+H]+; HRMS m/z 691,4755 [C³⁶H⁶²N⁶O⁷+H]+.

Ejemplo 4

(2S.3ff)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-((3R.4S.5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R.2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-ilo)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente de Dov-Thr(Bzl)-Dil-OtBu (0.357 g, 0.618 mmoles) en CH2CI2 (5 mL) se le añadió TFA (4 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Los compuestos orgánicos volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-OH bruto y sal de TFA de H-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,198 g, 0,680 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,441 ml, 2,47 mmoles), seguido de HATU (0,470 g, 1,24 mmoles) y HOBt (0,189 g, 1,24 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,356 g de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,392 mmoles, 63%) en forma de la sal de TFA.

Una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,356 g, 0,392 mmoles), formiato de amonio (0,085 g, 1,35 mmoles) y paladio sobre carbón activado (Base de Pd al 10%, 0,175 g) en MeOH (5 ml) se hidrogenó. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,010 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,012 mmoles, 3%). LCMS RT = 1,72 min (Método A); ESI-MS m/z 705,56 [M+H]+; 728,33 [M+Na]+; HRMS m/z 705,4917 [C³⁷H⁶⁴N⁶O⁷+H]+.

Ejemplo 5

(2S)-2-(dimetilamino)-N-((2S)-3-hidroxi-1 -(((3R.4S,5S)-3-metoxi-1 -((2S)-2-((1 R.2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piperidin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida

El compuesto del título se obtuvo en forma de un subproducto de la etapa de hidrogenación en el Ejemplo 3. Se obtuvo un total de 0,010 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,001 mmoles). LCMS RT = 1,83 min (Método A); ESI-MS m/z 697,76 [M+H]+; HRMS m/z 697,5226 [C36H68N6O7+H]+.

Ejemplo 6

(2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-((3R.4S,5S)-3-metoxi-1-((2S)-2-((1 R.2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piperidin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

El compuesto del título se obtuvo en forma de un subproducto de la etapa de hidrogenación en el Ejemplo 4. Se obtuvo un total de 0,010 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,012 mmoles). LCMS RT = 1,81 min (Método A); ESI-MS m/z 711,43 [M+H]+; HRMS m/z 711,5389 [C37H70N6O7+H]+.

Ejemplo 7

(S)-metil 2-((2R.3R)-3-((S)-1-((3R.4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una solución a temperatura ambiente agitada de (2S,3S)-Fmoc-Abu(3-N3)-OH (1,00 g, 2,74 mmoles) e hidrocloruro de H-Dil-OtBu (0,810 g, 2,74 mmoles) en EtOAc (10 ml) se le añadió DIEA (0,880 ml, 4,93 mmoles). La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió DIEA (0,880 ml, 4,93 mmoles) a la mezcla de reacción. La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió CMPI (1,12 g, 4,38 mmoles) a la mezcla de reacción y se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (100 ml x 2), seguido de salmuera (20 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío para producir Fmoc-Abu(3-N3)-Dil-OtBu (1,12 g, 1,84 mmoles) que se utilizó sin purificación adicional.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Abu(3-N3)-Dil-OtBu (1,00 g, 1,65 mmoles) en MeCN (10 ml) se le añadió piperidina (2 ml). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se extrajo con hexanos y la capa de MeCN se concentró a vacío para producir H-Abu(3-N3)-Dil-OtBu que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Abu(3-N3)-Dil-OtBu y Dov (0,478 g, 3,29 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,880 ml, 4,94 mmoles), seguido de HATU (1,25 g, 3,29 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,670 g de Dov-Abu(3-N3)-Dil-OtBu (1,07 mmoles, 65%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Abu(3-N3)-Dil-OtBu (0,289 g, 0,425 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió TFA (5 mL). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir sal de TFA de Dov-Abu(3-N3)-Dil-OH que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3-N3)-Dil-OH (1,04 g, 1,82 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (1,59 g, 3,44 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,18 g, 1,60 ml, 9,11 mmoles), seguido de la adición de HATU (1,74 g, 4,56 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. ^El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1%. Se obtuvo un total de 935 mg del compuesto del título en forma de la sal de ácido fórmico (1,12 mmoles, 49%). LCMS RT = 1,09 min (Método A); ESI-MS m/z 787,53 [M+H]+; HRMS m/z 787,5072 [C40H66NbOb+H]+.

Ejemplo 8

(S)-metil 2-((2R.3R)-3-((S)-1-((3R.4S,5S)-4-((S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Dpr(Boc)-OH (1,44 g, 3,38 mmoles) e hidrocloruro de H-Dil-OtBu (1,00 g, 3,38 mmoles) en EtOAc (10 ml) se le añadió DIEA (1,08 ml, 6,08 mmoles). La solución se enfrió a (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió DIEA adicional (1,08 ml, 6,08 mmoles) a la mezcla de reacción y la solución a 0°C se agitó durante 20 min. A continuación, se añadió CMPI (1,38 g, 5,41 mmoles) a la mezcla de reacción y se dejó que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (100 ml x 2), seguido de salmuera (20 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. Se aisló Fmoc-Dpr(Boc)-Dil-OtBu mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 60 Á, 3,0 x 17,0 cm) utilizando EtOAc de 18% a 90% en hexanos como eluyente. Se obtuvo un total de 1,27 g de Fmoc-Dpr(Boc)-Dil-OtBu (1,90 mmoles, 56% de rendimiento).

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Dpr(Boc)-Dil-OtBu (1,27 g, 1,90 mmoles) en MeCN (10 ml) se le añadió piperidina (2 ml). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se extrajo con hexanos y la capa de MeCN se concentró a vacío para producir H-Dpr(Boc)-Dil-OtBu bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Dpr(Boc)-Dil-OtBu bruto y Dov (0,552 g, 3,80 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,02 ml, 5,70 mmoles), seguido de HATU (1,45 g, 3,80 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 ^ Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,598 g de Dov-Dpr(Boc)-Dil-OtBu (0,871 mmoles, 46%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Dpr(Boc)-Dil-OtBu (1,52 g, 2,65 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadió TFA (5 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de Dov-Dpr-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Dpr-Dil-OH (1,00 g, 1,89 mmoles) y Fmoc-OSu (0,891 g, 2,64 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadió DIEA (0,460 mL, 2,64 mmoles). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 ^ Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 1,49 g de Dov-Dpr(Fmoc)-Dil-OH enriquecido en forma de la sal de ácido fórmico.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de ácido fórmico de Dov-Dpr(Fmoc)-Dil-OH (1,20 g, 1,75 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,982 g, 2,13 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,970 g, 1,30 ml, 7,514 mmoles) seguido de la adición de HATU (1,43 g, 3,76 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 ^ 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 1,01 g de Dov-Dpr(Fmoc)-Dil-Dap-Phe-OMe (1,04 mmoles, 56%).

A una solución agitada a 23°C de Dov-Dpr(Fmoc)-Dil-Dap-Phe-OMe (1,01 g, 1,04 mmoles) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 3 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la solución de reacción bruta se le añadieron hexanos. La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 ^ 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 413 g del compuesto del título en forma de la sal de ácido fórmico (0,521 mmoles, 50%). LCMS RT = 2,10 min (Método A); ESI-MS m/z 747,84 [M+H]+; HRMS m/z 747,5008 [C39H66N6Ob+H]+.

Ejemplo 9

(S)-N-((S)-3-amino-1 -(((3R.4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R.2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamida

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de Dov-Dpr(Fmoc)-Dil-OH bruto y sal de TFA de H-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,230 g, 0,789 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,511 ml, 2,87 mmoles), seguido de HATU (0,545 g, 1,43 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (25 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío.El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 ^ Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,150 g de Dov-Dpr(Fmoc)-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina en forma de la sal de TFA (0,146 mmoles, 20%).

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Dpr(Fmoc)-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,150 g, 0,146 mmoles) en MeCN (10 ml) se le añadió piperidina (2 ml). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se extrajo con hexanos y la capa de MeCN se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,089 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,111 mmoles, 75%). LCMS RT = 1,52 min (Método A); ESI-MS m/z 690,67 [M+H]+; HRMS m/z 690,4917 [C36H63N7Ü6+H]+.

Ejemplo 10

(S)-metil 2-((2R3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de diciclohexilamina de N-Boc-4-Azido-Alanina (1,02 g, 2,47 mmoles) e hidrocloruro de H-Dil-OtBu (0,730 g, 2,74 mmoles) en EtOAc (10 ml) se le añadió DIEA (0,792 ml, 4,44 mmoles). La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió DIEA (0,792 ml, 4,44 mmoles) a la mezcla de reacción. La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió CMPI (1,01 g, 3,95 mmoles) a la mezcla de reacción y se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (100 ml x 2), seguido de salmuera (20 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío para producir N-Boc-4-Azido-Ala-Dil-ÜtBu bruto (1,08 g, 2,29 mmoles) que se utilizó sin purificación adicional.

A una solución a temperatura ambiente de N-Boc-4-Azido-Ala-Dil-ÜtBu (1,08 g, 2,29 mmoles) en CH2Cl2 (5 mL) se le añadió TFA (3 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de H-4-Azido-Ala-Dil-ÜH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de Dov (0,739 g, 5,09 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,36 ml, 7,63 mmoles), seguido de HATU (1,95 g, 5,09 mmoles). Después de 10 min, se añadió H-4-Azido-Ala-Dil-ÜH bruto a la mezcla de reacción. Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,130 g de Dov-4-Azido-Ala-Dil-ÜH (0,261 mmoles, 10%) en forma de la sal de TFA.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-4-Azido-Ala-Dil-ÜH (0,130 g, 0,261) y sal de TFA de H-Dap-Phe-ÜMe (0,205 g, 0,588 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,140 ml, 0,783 mmoles), seguido de HATU (0,198 g, 0,522 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtÜAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,015 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,017 mmoles, 7%). LCMS RT = 2,36 min (Método A); ESI-MS m/z 773,48 [M+H]+; HRMS m/z 773,4916 [C³⁹H⁶⁴N⁸Ü⁸+H]+.

Ejemplo 11

(S)-metil 2-((2R3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((S)-4-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de diciclohexilamina de N-Boc-4-azido-homoalanina (1,01 g, 2,37 mmoles) e hidrocloruro de H-Dil-ÜtBu (0,700 g, 2,37 mmoles) en EtÜAc (10 ml) se le añadió DIEA (0,759 ml, 4,26 mmoles). La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió DIEA (0,759 ml, 4,26 mmoles) a la mezcla de reacción. La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió CMPI (0,967 g, 3,79 mmoles) a la mezcla de reacción y se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (100 ml x 2), seguido de salmuera (20 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre una capa de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío para producir N-Boc-4-Azido-homoAla-Dil-OtBu bruto (1,09 g, 2,25 mmoles) que se utilizó sin purificación adicional.

A una solución a temperatura ambiente de N-Boc-4-Azido-homoAla-Dil-OtBu (1,09 g, 2.25 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió TFA (3 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Los compuestos orgánicos volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de H-4-AzidohomoAla-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de Dov (0,652 g, 4,49 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,20 ml, 6,73 mmoles), seguido de HATU (1,71 g, 4,49 mmoles). Después de 10 min, se añadió sal de TFA de H-4-Azido-homoAla-Dil-OH bruto a la mezcla de reacción. Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,127 g de Dov-4-Azido-homoAla-Dil-OH (0,223 mmoles, 10%) en forma de la sal de TFA.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-4-Azido-homoAla-Dil-OH (0,127 g, 0,223) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,198 g, 0,568 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,140 ml, 0,783 mmoles), seguido de HATU (0,198 g, 0,522 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,015 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,017 mmoles, 7%). LCMS RT = 2,38 min (Método A); ESI-MS m/z 787,49 [M+H]+; HRMS m/z 787,5078 [C40H66N8O8+H]+.

Ejemplo 12

(S)-metil 2-((2R3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((S)-4-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Dab(Boc)-OH (1,54 g, 3,38 mmoles) e hidrocloruro de H-Dil-OtBu (1,00 g, 3,38 mmoles) en EtOAc (10 ml) se le añadió DIEA (1,08 ml, 6,08 mmoles). La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió DIEA adicional (1,08 ml, 6,08 mmoles) a la mezcla de reacción y la solución a 0°C se agitó durante 20 min. A continuación, se añadió CMPI (1,38 g, 5,41 mmoles) a la mezcla de reacción y se dejó que la mezcla de reacción se calentara a temperatura ambiente. Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (100 ml x 2), seguido de salmuera (20 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. Se aisló Fmoc-Dab(Boc)-Dil-OtBu mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 gm, 60 Á, 3,0 x 17,0 cm) utilizando EtOAc de 18% a 90% en hexanos como eluyente. Se obtuvo un total de 1,18 g de Fmoc-Dpr(Boc)-Dil-OtBu (1,73 mmoles, rendimiento de 51%).

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Dab(Boc)-Dil-OtBu (1,18 g, 1,73 mmoles) en MeCN (10 ml) se le añadió piperidina (2 ml). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se extrajo con hexanos y la capa de MeCN se concentró a vacío para producir H-Dab(Boc)-Dil-OtBu bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Dab(Boc)-Dil-OtBu bruto y Dov (0,502 g, 3,46 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,925 ml, 5,19 mmoles), seguido de HATU (1,32 g, 3,46 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,410 g de Dov-Dab(Boc)-Dil-OtBu (0,583 mmoles, 34%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Dab(Boc)-Dil-OtBu (0,240 g, 0,419 mmoles) en CH2Cl2 (5 mL) se le añadió TFA (2 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de Dov-Dab-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de Dov-Dab-Dil-OH TFA (0,175 g, 0,406 mmoles) y Fmoc-OSu (0,151 g, 0,447 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió DIEA (0,080 mL, 0,447 mmoles). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío. La mezcla de reacción bruta se disolvió en EtOAc y se lavó con HCl 0,1 M (100 ml x 2), seguido de salmuera (20 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre una capa de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío para producir Dov-Dab(Fmoc)-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-OH bruto (0,363 g, 0,556 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,194 g, 0,420 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,291 ml, 1,67 mmoles), seguido de HATU (0,424 g, 1,11 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (30 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,2% como eluyente. Se obtuvo un total de 449 mg de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-Phe-OMe enriquecido en forma de la sal de ácido fórmico.

Se añadió piperidina (5 ml) a una solución a temperatura ambiente agitada enriquecida con sal de ácido fórmico de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-Phe-OMe (0,449 g) en MeCN (10 ml). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se extrajo con hexanos y la capa de MeCN se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC con una columna Phenomenex Gemini NX C18 10 g Max-RP 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1 % como eluyente. Se obtuvo un total de 43,0 g del compuesto del título en forma de la sal de ácido fórmico (0,053 mmoles, 13%). LCMS RT = 1,24 min (Método B); ESI-MS m/z 761,57 [M+H]+; HRMS m/z 761,5165 [C40H68N⁶O8+H]+.

Ejemplo de Referencia 13

(S)-2-((S)-2-(aminoxi)-3-metilbutanamido)-N-((3R4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R2ñ)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N,3-dimetilbutanamida

A una solución de hidrocloruro de H-Dil-OtBu (0,60 g, 2,03 mmoles) y Fmoc-Val-OH (0,829 g, 2,44 mmoles) agitando en EtOAc (3 ml) se le añadió DIEA (0,65 ml, 3,7 mmoles). La reacción se enfrió a 0°C y se agitó durante 20 min, seguido de la adición de DIEA (0,65 ml, 3,7 mmoles). La mezcla de reacción se enfrió (0°C) durante otros 20 min, seguido de la adición de CMPI (0,83 g, 3,7 mmoles). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción se lavó con HCl 1 M (25 ml x 2) y salmuera (50 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. Se aisló Fmoc-Val-Dil-OtBu mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 gm, 60 Á, 3,0 x 17,0 cm) utilizando EtOAc de 18% a 90% en hexanos como eluyente. Se obtuvo un total de 1,1 g de Fmoc-Val-Dil-OtBu (1,9 mmoles, rendimiento de 93%).

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Val-Dil-OtBu (0,883 g, 1,52 mmoles) y Boc-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,451 g, 1,52 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadió TFA (5 mL). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir Fmoc-Val-Dil-OH bruto y sal de TFA de H-Dap-2-(2-piridil)etilamina, que se utilizaron sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de H-Dap-2-(2-piridil)etilamina bruta y Fmoc-Val-Dil-OH en EtOAc (2 ml) se le añadió DIEA (1,10 ml, 6,08 mmoles), seguido de DEPC (0,92 ml, 6,08 mmoles). Después de 15 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción se lavó con una solución saturada de NaHCO³(50 ml) seguida de agua (50 ml x 2). La fracción orgánica se filtró a través de una capa de sulfato de magnesio y se concentró a vacío. El aceite viscoso resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 gm, 60 Á, 23 x 123 mm) utilizando MeOH de 5% a 10% en CH2G 2 como eluyente. Se obtuvo un total de 0,888 g de Fmoc-Val-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina (1,11 mmoles, rendimiento de 73%).

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Val-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina (1,75 g, 2,19 mmoles) en CH2CI2 (5 mL) se le añadió piperidina (5 mL). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir H-Val-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina bruta que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Val-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina bruta y N-Boc-N-hidroxiVal-OH (0,390 g, 1,67 mmoles) en DMF (5 ml) se le añadió DIEA (0,797 ml, 5,02 mmoles), seguido de HATU (1,28 g, 3,34 mmoles). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío para producir 0,563 g de N-Boc-N-hidroxiVal-Val-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina bruta (0,712 mmoles, 43%) que se utilizó sin purificación adicional.

A una solución a temperatura ambiente de N-Boc-N-hidroxiVal-Val-Dil-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,563 g, 0,712 mmoles) en DMF (2 ml) se le añadió TFA (2 ml). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,209 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,302 mmoles, 43%). LCMS RT = 1,70 min (Método A); ESI-MS m/z 691,53 [M+H]+; HRMS m/z 691,4755 [C³⁶H⁶²N⁶O⁷+H]+.

Ejemplo de Referencia 14

((2P.3P)-3-((S)-1-((3P.4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-hidroxipropanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-

A una solución a temperatura ambiente agitada de H-Ser(Bzl)-OH (0,500 g, 2,56 mmoles) y paraformaldehído (1,15 g, 38,4 mmoles) en MeOH (10 ml) se le añadió HCO2NH4 (0,808 g, 12,8 mmoles) y paladio sobre carbón activado (base de Pd al 10%, 0,250 g). Después de 72 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,168 g de N,N-dimetilSer(Bzl)-OH (0,498 mmoles, 19%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Val-Dil-OtBu bruto (13,3 g, 22,8 mmoles) en CH2Cl2 (20 mL) se le añadió piperidina (15 mL). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir H-Val-Dil-OtBu bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Val-Dil-OtBu bruto y sal de TFA de N,N-dimetilSer(Bzl)-OH (0,780 g, 3,49 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,25 ml, 6,99 mmoles), seguido de HATU (1,77 g, 4,66 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,220 g de N,N-dimetilSer(Bzl)-Val-Dil-OtBu (0,325 mmoles, 14%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente, sal de TFA de N,N-dimetilSer(Bzl)-Val-Dil-OtBu (0,220 g, 0,325 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió TFA (2 mL). Después de 10 h, el análisis mediante lCm S mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de N,N-dimetilSer(Bzl)-Val-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de N,N-dimetilSer(Bzl)-Val-Dil-OH bruto y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,166 g, 0,477 mmoles) en DMF (5 ml) se le añadió DIEA (0,207 ml, 1,30 mmoles), seguido de HATU (0,330 g, 0,868 mmoles). Después de 4 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,201 g de N,N-dimetilSer(Bzl)-Val-Dil-Dap-Phe-OMe (0,211 mmoles, 49%) en forma de la sal de TFA.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de N,N-dimetilSer(Bzl)-Val-Dil-Dap-Phe-OMe (0,201 g, 0,211 mmoles) y NH4HCO2 (2.00 g, 31,7 mmoles) en MeOH (6 ml) y agua (1,0 ml) se le añadió Pd al 10%/C (10 mg). La solución se agitó vigorosamente a temperatura ambiente. Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción, junto con la hidrólisis del éster metílico de fenilalanina. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 63,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,074 mmoles, 31%). LCMS RT = 2,01 min (Método A); ESI-MS m/z 734,61 [M+H]+; HRMS m/z 734,4715 [C3bH63N5O9+H]+.

Ejemplo de Referencia 15

((2fl.3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((S)-2-((2S.3fl)-2-(dimetilamino)-3-hidroxibutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-

A una solución a temperatura ambiente agitada de H-Thr(Bzl)-OH (2,00 g, 9,56 mmoles) y paraformaldehído (9,87 g, 95,6 mmoles) en MeOH (40 ml) se le añadió HCO2NH4 (3.01 g, 47,8 mmoles) y paladio sobre carbón activado (base de Pd al 10%, 1,00 g). Después de 72 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 1,54 g de N,N-dimetilThr(Bzl)-OH (4,38 mmoles, 19%) en forma de la sal de TFA.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Val-Dil-OtBu bruto y sal de TFA de N,N-dimetilThr(Bzl)-OH (1,21 g, 5,10 mmoles) en DMF (20 ml) se le añadió DIEA (1,82 ml, 10,2 mmoles), seguido de HATU (2,59 g, 6,80 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (15 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,161 g de N,N-dimetilThr(Bzl)-Val-Dil-OtBu (0,234 mmoles, 7%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de N,N-dimetilThr(Bzl)-Val-Dil-OtBu (0,220 g, 0,325 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió TFA (2 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de N,N-dimetilThr(Bzl)-Val-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de N,N-dimetilThr(Bzl)-Val-Dil-OH bruto y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,118 g, 0,339 mmoles) en DMF (5 ml) se le añadió DⁱE^a(0,147 ml, 0,927 mmoles), seguido de HATU (0,235 g, 0,618 mmoles). Después de 4 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,186 g de N,N-dimetilThr(Bzl)-Val-Dil-Dap-Phe-OMe (0,193 mmoles, 62%) en forma de la sal de TFA.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de N,N-dimetilThr(Bzl)-Val-Dil-Dap-Phe-OMe (0,186 g, 0,193 mmoles) y NH4HCO2 (2.00 g, 31,7 mmoles) en MeOH (6 ml) y agua (1,0 ml) se le añadió Pd al 10%/C (100 mg). La solución se agitó vigorosamente a temperatura ambiente. Después de 72 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción, junto con la hidrólisis del éster metílico de fenilalanina. La mezcla de reacción se filtró a través de un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 63,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,073 mmoles, 38%). LCMS RT = 2,04 min (Método A); ESI-MS m/z 748,58 [M+H]+; HRMS m/z 748,4854 [C39H65N5O9+H]+.

Ejemplo 16

ácido (S)-2-((2R.3R)-3-((S)-1-((3R.4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3-N³)-Dil-Dap-Phe-OMe (60 mg, 0,067 mmoles) en MeOH (0,1 ml) y THF (0,1 ml) se le añadió monohidrato de hidróxido de litio (9,6 mg, 0,229 mmoles) en agua (0,1 ml). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 55,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,062 mmoles, 93%). LCMS RT = 2,25 min (Método A); ESI-MS m/z 773,45 [M+H]+; HRMS m/z 773,49119 [C39H64NbOb+H]+.

Ejemplo de Referencia 17

(S)-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1- oxoheptan-4-il)-2-((2S,3R)-2-(dimetilamino)-3-hidroxibutanamido)-N,3-dimetilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de N,N-dimetilThr-Val-Dil-Dap-Phe-OH (40 mg, 0,053 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadieron cloruro de amonio (5,72 mg, 0,107 mmoles), DIEA (28,6 pL, 0,160 mmoles) y EDCI (30,3 mg, 0,107 mmoles). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 28,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,037 mmoles, 70%). LCMS RT = 2,14 min (Método A); ESI-MS m/z 747,61 [M+H]+; HRMS m/z 747,5017 [C39H66N60^b+H]+.

Ejemplo de Referencia 18

(S)-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-hidroxipropanamido)-N,3-dimetilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de N,N-dimetilSer-Val-Dil-Dap-Phe-OH TFA (12 mg, 0,016 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadieron cloruro de amonio (1,00 mg, 0,019 mmoles), DIEA (3,21 pL, 0,018 mmoles) y EDCI (5,09 mg, 0,018 mmoles). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 10,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,014 mmoles, 83%). LCMS RT = 2,07 min (Método A); ESI-MS m/z 733,63 [M+H]+; HRMS m/z 733,4866 [C3^bH64N⁶O^b+H]+.

Ejemplo 19

(S)-metil 2-((2R3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((fl)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-mercapto-N-metilpropanamido)-3-metoxv-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Cys(Trt)-OH (3,96 g, 6,76 mmoles) e hidrocloruro de H-Dil-OtBu (2,00 g, 6,76 mmoles) en EtOAc (15 ml) se le añadió DIEA (2,17 ml, 12,2 mmoles). La solución se enfrió (0°C) y se agitó durante 20 min. Se añadió DIEA adicional (2,17 ml, 12,2 mmoles) a la mezcla de reacción y la solución a 0°C se agitó durante 20 min. A continuación, se añadió CMPI (2,76 g, 10,8 mmoles) a la mezcla de reacción y se dejó que la mezcla de reacción alcanzara la temperatura ambiente. Después de 12 h, el análisis mediante ^lC^mS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (100 ml x 2), seguido de salmuera (20 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. Se aisló Fmoc-Cys(Trt)-Dil-OtBu mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (gel de sílice de 40 pm, 60 Á, 3,0 x 17,0 cm) utilizando EtOAc de 18% a 90% en hexanos como eluyente. Se obtuvo un total de 4,73 g de Fmoc-Cys(Trt)-Dil-OtBu (5,72 mmoles, 85% de rendimiento).

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-Cys(Trt)-Dil-OtBu (2,61 g, 3,16 mmoles) en MeCN (10 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se extrajo con hexanos y la capa de MeCN se concentró a vacío para producir H-Cys(Trt)-Dil-OtBu bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de H-Cys(Trt)-Dil-OtBu bruto y Dov (0,916 g, 6,31 mmoles) en DMF (15 ml) se le añadió DIEA (1,69 ml, 9,47 mmoles), seguido de HATU (2,40 g, 6,31 mmoles). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 1,40 g de Dov-Cys(Trt)-Dil-OtBu (1,66 mmoles, 52%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Cys(Trt)-Dil-OtBu (1,40 g, 1,66 mmoles) en CH2G2 (10 mL) se le añadió TFA (5 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de Dov-Cys(Trt)-Dil-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Cys(Trt)-Dil-OH (0,225 g, 285 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,139 g, 0,301 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,237 ml, 1,33 mmoles), seguido de HOBt (0,102 g, 0,666 mmoles) y HATU (0,253 g, 0,666 mmoles). Después de agitar durante la noche, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (50 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío y se utilizaron sin purificación adicional.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Cys(Trt)-Dil-Dap-Phe-OMe (0,568 g, 0,507 mmoles) se le añadió TFA (10 ml). Después de 12 h a 60°C, el análisis mediante LCm S mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 10,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA del dímero con puente disulfuro (0,011 mmoles, 3%). LCMS RT = 2,50 min (Método A); ESI-MS m/z 764,60 [M+H]+; HRMS m/z 763,4547 z = 2.

Ejemplo 20

ácido (S)-2-((2R3fl)-3-((S)-1-((3fl.4S,5S)-4-((fl)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-mercapto-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (6,47 g, 13,8 mmoles) y sal de HCl de H-Phe-OtBu (3,91 g, 15,2 mmoles) en DCM (20 ml) se le añadió DIEA (8,78 ml, 55,2 mmoles), seguido de DEPC (3,12 ml, 20,7 mmoles). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La materia orgánica volátil se evaporó a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Boc-Dap-Phe-OtBu (5,25 g, 10,7 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadió TFA (10 mL). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción como una mezcla del ácido carboxílico de fenilalanina libre y el éster tBu. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,85 g de sal de TFA de H-Dap-Phe-OtBu (5,65 mmoles) en forma de un aceite de color ámbar y se obtuvo un total de 2,01 g de sal de TFA de H-Dap-Phe-OH (4,49 mmoles) en forma de un aceite de color amarillo.

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Cys(Trt)-Dil-OH bruta (0,208 g) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OtBu (0,144 g, 0,369 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,219 ml, 1,23 mmoles), seguido de HATU (0,234 g, 0,615 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,509 g de Dov-Cys(Trt)-Dil-Dap-Phe-OtBu enriquecido en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Cys(Trt)-Dil-Dap-Phe-OtBu enriquecido (0,509) se le añadió TFA (5 ml). La solución se calentó a 60°C y se agitó durante 24 h. Después de 24 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 56,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,065 mmoles, 25%). LCMS RT = 2,32 min (Método A); ESI-MS m/z 750,60 [M+H]+; HRMS m/z 750,4460 [C³⁸H⁶³N⁵O^bS+H]+.

Ejemplo 21

ácido (S)-2-((2R3R)-3-((S)-1-((3R.4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-metilpropanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-OH bruto (0,232 g) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OtBu (0,196 g, 0,389 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,326 ml, 1,83 mmoles), seguido de HATU (0,348, 0,914 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,378 g de Dov-Ser(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OtBu (0,380 mmoles, 98%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OtBu (0,455 g, 0,517 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió TFA (2 mL). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

Se hidrogenó una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Ser(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OH bruto de la etapa anterior y paladio sobre carbón activado (base de Pd al 10%, 10,0 mg) en MeOH (10 ml). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,115 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,136 mmoles, 28%). LCMS RT = 2,10 min (Método A); ESI-MS m/z 734,61 [M+H]+; HRMS m/z 734,4708 [C³⁸H⁶³N⁵O⁹+H]+.

Ejemplo 22

ácido (S)-2-((2R3R)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico

A una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-OH bruto (0,180 g) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OtBu (0,148 g, 0,294 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,246 ml, 1,38 mmoles), seguido de HATU (0,262, 0,690 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 ^ Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,298 g de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OtBu (0,296 mmoles, 78%) en forma de la sal de TFA.

A una solución a temperatura ambiente de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OtBu (0,298 g, 0,296 mmoles) en CH2G 2 (5 mL) se le añadió TFA (2 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para producir la sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OH bruto que se utilizó sin purificación adicional.

Se hidrogenó una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-Phe-OH bruto de la etapa anterior y paladio sobre carbón activado (base de Pd al 10%, 10,0 mg) en MeOH (10 ml). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 ^ Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 0,120 g del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,139 mmoles, 47%). LCMS RT = 2,22 min (Método A); ESI-MS m/z 748,62 [M+H]+; HRMS m/z 748,4842 [C39H65N5O9+H]+.

Ejemplo de Referencia 23

(S)-metil 2-((2R3R)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-hidroxipropanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

Una suspensión a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de N,N-dimetilSer(Bzl)-Val-Dil-Dap-Phe-OMe (50,0 mg, 0,053 mmoles) y paladio sobre carbón activado (base de Pd al 10%, 10 mg) en MeOH (10 ml) se hidrogenó. Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas y el producto filtrado se concentró. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 ^ Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 8,00 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,009 mmoles, 18%). LCMS RT = 2,38 min (Método A); ESI-MS m/z 748,57 [M+H]+; HRMS m/z 748,4849 [C39H65N5O9+H]+.

Ejemplo de Referencia 24

(S)-metil 2-((2R3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((S)-2-((2S,3fl)-2-(dimetilamino)-3-hidroxibutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

El compuesto del título se puede preparar utilizando métodos análogos a los descritos en los Ejemplos y esquemas sintéticos generales.

Ejemplo 25

(S)-metil 2-((2fl.3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OMe (10 mg, 0,011 mmoles) en THF (0,10 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,022 ml, 0,022 mmoles). Después de 4 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción y se añadió H2O (0,05 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 6,00 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,007 mmoles, 62%). LCMS RT = 2,12 min (Método A); ESI-MS m/z 761,63 [M+H]+; HRMS m/z 761,5159 [C40H68N6O8+H]+.

Ejemplo 26

ácido (S)-2-((2fl.3fl)-3-((S)-1-((3fl.4S,5S)-4-((2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoico

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OH (10 mg, 0,011 mmoles) en THF (0,10 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,022 ml, 0,022 mmoles). Después de 4 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción y se añadió H2O (0,05 ml) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,00 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,002 mmoles, 21%). LCMS RT = 2,02 min (Método A); ESI-MS m/z 747,65 [M+H]+; HRMS m/z 747.5008 [C³⁹H⁶⁶N⁶O⁸+H]+.

Ejemplo 27

(2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3fl.4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 fl.2fl)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(fenetilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución agitada a 25°C de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (6,47 g, 13,8 mmoles) y fenetilamina (3,914 g, 15,19 mmoles) en CH2Cl2 (20 mL) se le añadió DIEA (8,76 mL, 55,2 mmoles), seguido de DEPC (3,12 mL, 20,7 mmoles). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 4,04 g de Boc-Dap-fenetilamina (10,3 mmoles). LCMS RT = 3,00 min (Método A); ESI-MS m/z 391,37 [M+H]+.

A una solución agitada a 25°C de Boc-Dap-fenetilamina (4,04 g, 10,3 mmoles) en CH2CI2 (15.0 mL) se le añadió TFA (15,0 mL). Después de 14 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío y el aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,51 g de H-Dap-fenetilamina (6,21 mmoles) en forma de la sal de TFA. LCMS RT = 1,72 min (Método A); ESI-MS m/z 291,29 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (0,300 g, 0,526 mmoles) y sal de H-Dap-fenetilamina TFA (0,191 g, 0,471 mmoles) en DMF (5 ml) se le añadió DIEA (0,343 ml, 1,97 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,501 g, 1,31 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron utilizando sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío.El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 196 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,233 mmoles, 49%). LCMS RT = 2,45 min (Método A); ESI-MS m/z 729,55 [M+H]+; HRMS m/z 729,5030 [C³⁸H⁶⁴N⁸O⁶+H]+.

Ejemplo 28

(2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-A/-((3R4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R2ñ)-3-(((1 S,2R)-1 -hidroxi-1 -fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (10,0 g, 0,021 moles) y (1R,2S)-(-)-Norefedrina (3,87 g, 0,026 moles) en CH2G 2 (20 mL) se le añadió DIEA (11,4 mL, 0,064 moles) y DEpC (6,44 mL, 0,043 moles). Después de 14 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la mezcla de reacción bruta se le añadió HCl 0,1 M (20,0 ml). La capa orgánica se separó, se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío para producir un producto bruto. Se obtuvo un total de 7,92 g de Boc-Dap-(1 R,2S)-(-)-Norefedrina (18,8 mmoles, 88%). LCMS RT = 2,25 min (Método A); ESI-MS m/z 421,31 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Boc-Dap-(1R,2S)-(-)-Norefedrina (7,92 g, 18,8 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadió TFA (10 mL). Después de 10 h, el análisis mediante lCm S mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se preparó un total de 5,00 g de H-Dap-(1R,2S)-(-)-Norefedrina (11,5 mmoles, 61%) en forma de la sal de TFA. LCMS RT = 1,10 min (Método A); ESI-MS m/z 321,33 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (0,300 g, 0,526 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-(1R,2S)-(-)-Norefedrina (0,211 g, 0,486 mmoles) en DMF (5 mL) se le añadió DIEA (0.351 mL, 1,97 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,501 g, 1,31 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron utilizando sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 g Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 128 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,147 mmoles, 30%). LCMS RT = 1,95 min (Método A); ESI-MS m/z 759,65 [M+H]+; HRMS m/z 759,5121 [C39H66N^bO7+H]+.

Ejemplo 29

(2S,3S)-3-azido-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R2fl)-3-((4-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (5,00 g, 10,7 mmoles) y 2-(4-clorofenil)etilamina (1,85 g, 11,7 mmoles) en CH2G 2 (20 mL) se le añadieron DIEA (6,78 mL, 42,7 mmoles) y DEPC (2,41 mL, 16,0 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La materia orgánica volátil se evaporó a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 4,25 g de Boc-Dap-2-(4-clorofenil)etilamina (10,0 mmoles, 94%). LCMS RT = 3,10 min (Método A); ESI-MS m/z 425,32 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Boc-Dap-2-(4-clorofenil)etilamina (4,25 g, 10,0 mmoles) en CH2CI2 (15 mL) se le añadió TFA (15 mL). Después de 10 h, el análisis mediante lCm S mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se preparó un total de 2,27 g de H-Dap-2-(4-clorofenil)etilamina (5,18 mmoles, 52%) en forma de la sal de TFA. LCMS RT = 2,05 min (Método A); ESI-MS m/z 325,24 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (0,526 g, 0,923 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-2-(4-clorofenil)etilamina (0,347 g, 0,792 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,602 ml, 3,46 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,878 g, 2,30 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron utilizando sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 596 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,680 mmoles, 85%). LCMS RT = 2,38 min (Método A); ESI-MS m/z 763,71 [M+H]+; HRMS m/z 763,4633 [C³⁸H⁶³N⁸O⁶Cl+H]+.

Ejemplo 30

(2S,3S)-3-azido-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 ñ.2ñ)-3-((2-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (5,00 g, 10,7 mmoles) y 2 -(2 -clorofenil)etilamina (1,85 g, 11,7 mmoles) en CH2CI2 (10 mL) se le añadió DIEA (4,76 mL, 26,7 mmoles) y De PC (2,41 mL, 16,0 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La materia orgánica volátil se evaporó a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 3,98 g de Boc-Dap-2-(2-clorofenil)etilamina (9,37 mmoles, 88%). LCMS RT = 3,04 min (Método A); ESI-MS m/z 425,23 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Boc-Dap-2-(2-clorofenil)etilamina (3,98 g, 9,37 mmoles) en CH2CI2 (5 mL) se le añadió TFA (5 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se preparó un total de 2,87 g de H-Dap-2-(2-clorofenil)etilamina (6,55 mmoles, 70%) en forma de la sal de TFA. LCMS RT = 1,83 min (Método A); ESI-MS m/z 325,22 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (0,450 g, 0,789 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-2-(2-clorofenil)etilamina (0,320 g, 0,731 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,515 ml, 2,96 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,751 g, 1,97 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 253 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,289 mmoles, 32% basado en RSM). LCMS RT = 1,26 min (Método B); ESI-MS m/z 763,60 [M+H]+; HRMS m/z 763,4632 [C38H63NbO6CI+H]+.

Ejemplo 31

(2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3ñ.4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R.2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(fenetilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-PE (25 mg, 0,030 mmoles) en THF (0,5 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,045 ml, 0,045 mmoles). Después de 1 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla deo reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 9,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de ácido fórmico (0,012 mmoles, 41%). LCMS RT = 1,02 min (Método B); ESI-MS m/z 703,71 [M+H]+; HRMS m/z 703,5117 [C38H66N6O6 H]+.

Ejemplo 32

(2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-(((1 S,2R)-1 -hidroxi-1 -fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Norefedrina (27 mg, 0,031 mmoles) en THF (0,3 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,046 ml, 0,046 mmoles). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido trifluoroacético acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 6,8 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,008 mmoles, 26%). LCMS RT = 1,95 min (Método B); ESI-MS m/z 733,72 [M+H]+; HRMS m/z 733,5227 [C³⁹H⁶⁸N⁶O⁷+H]+.

Ejemplo 33

(2S,3S)-3-amino-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-((4-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-2 -(4-clorofenil)etilamina (117 mg, 0,133 mmoles) en THF (0,3 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,2 ml, 0,2 mmoles). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 9,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de ácido fórmico (0,011 mmoles, 9%). LCMS RT = 0,97 min (Método B); ESI-Ms m/z 737,51 [M+H]+; HRMS m/z 737,4731 [C³⁸H⁶⁵N⁶O⁶Cl+H]+.

Ejemplo 34

(2S,3S)-3-amino-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-((2-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal del ácido fórmico de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-2 -(2 -clorofenil)etilamina (46 mg, 0,057 mmoles) en THF (1,0 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,085 ml, 0,085 mmoles). Después de 1 h, la mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 13,6 mg del compuesto del título en forma de la sal de ácido fórmico (0,017 mmoles, 30%). LCMS RT = 1,03 min (Método B); ESI-MS m/z 737.57 [M+H]+; HRMS m/z 737,4731 [C³⁸H⁶⁵N⁶O⁶Cl+H]+.

Ejemplo 35

(S)-4-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R.4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R.2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(fenetilamino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-OH (0,450 g, 0,587 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-fenetilamina (0,200 g, 0,495 mmoles) en DMF (15 ml) se le añadió DIEA (0,360 ml, 2,07 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,526 g, 1,38 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron utilizando sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 276 mg de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-fenetilamina (0,266 mmoles, 54%) en forma de la sal de ácido fórmico. LCMS RT = 1,37 min (Método B); ESI-MS m/z 925,48 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-fenetilamina (0,276 g, 0,266 mmoles) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la mezcla de reacción bruta se le añadieron hexanos. La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 98,0 mg del compuesto del título en forma de una sal de ácido fórmico (0,120 mmoles, 45%). LCMS RT = 1,02 min (Método B); ESI-MS m/z 703,78 [M+H]+; HRMS m/z 703,5117 [C38H66N6O6+H]+.

Ejemplo 36

(S)-4-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-(((1 S,2R)-1 -hidroxi-1 -fenilpropan-2-il)amino)-1-metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal TFA de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-OH (0,459 g, 0,599 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-(1R,2S)-(-)-Norefedrina (0,225 g, 0,518 mmoles) en DMF (15 ml) se le añadió DIEA (0,376 ml, 2,11 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,536 g, 1,41 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron utilizando sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 449 mg de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-(1R,2S)-(-)-Norefedrina (0,420 mmoles, 81%) en forma de la sal de ácido fórmico. LCMS RT = 1,35 min (Método B); ESI-MS m/z 955,74 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de ácido fórmico de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-(1 R,2S)-(-)-Norefedrina (0,449 g, 0,420 mmoles) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió piperidina (5 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la mezcla de reacción bruta se le añadieron hexanos. La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 53,0 mg del compuesto del título en forma de una sal de ácido fórmico (0,068 mmoles, 14%). LCMS RT = 0,79 min (Método B); ESI-MS m/z 733,71 [M+H]+; HRMS m/z 733,5227 [C39H6^bN6O7+H]+.

Ejemplo 37

(S)-4-amino-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-((4-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-OH (0,255 g, 0,333 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-2-(4-clorofenil)etilamina (0,127 g, 0,290 mmoles) en D^mF (10 ml) se le añadió DIEA (0,204 ml, 1,17 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,298 g, 0,781 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron utilizando sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 190 mg de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-2-(4-clorofenil)etilamina (0,177 mmoles, 61%) en forma de la sal de ácido fórmico. LCMS RT = 1,49 min (Método B); ESI-MS m/z 959,62 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de ácido fórmico Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-2-(4-clorofenil)etilamina (0,190 g, 0,177 mmoles) en acetonitrilo (5 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 10 h, el análisis mediante lCm S mostró que se había completado la reacción. A la mezcla de reacción bruta se le añadieron hexanos. La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 118 mg del compuesto del título en forma de una sal de ácido fórmico (0,151 mmoles, 85%). LCMS RT = 1,06 min (Método B); ESI-MS m/z 737,55 [M+H]+; HRMS m/z 737,4729 [C3sH65N6O6Cl+H]+.

Ejemplo 38

(S)-4-amino-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-((2-clorofenetil)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-OH (0,306 g, 0,399 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-2-(2-clorofenil)etilamina (0,170 g, 0,388 mmoles) en DMF (5 ml) se le añadió DIEA (0,300 g, 400 pl, 2,29 mmoles), seguido de la adición de HATU (360 mg, 0,944 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini 10p Max-RP 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 115 mg de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-2-(2-clorofenil)etilamina (0,120 mmoles, 26%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS RT = 1,40 min (Método B); ESI-MS m/z 959,75 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Dov-Dab(Fmoc)-Dil-Dap-2-(2-clorofenil)etilamina (0,115 g, 0,120 mmoles) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió piperidina (2 ml). Después de 3 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la mezcla de reacción bruta se le añadieron hexanos. La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 30,0 mg del compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (0,041 mmoles, 34%). LCMS RT = 1,15 min (Método B); ESI-MS m/z 737,68 [M+H]+; HRMS m/z 737,4729 [C³sH⁶⁵N⁶O⁶Cl+H]+.

Ejemplo 39

((2R.3R)-3-((S)-1-((3R.4S,5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilpent-4-inamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de metilo

A una solución agitada a 25°C de Boc-propargilGIy-OH (1,00 g, 4,69 mmoles) y sal de HCl de H-Dil-OtBu (1,15 g, 3,90 mmoles) en EtOAc (10 ml) se le añadió DIEA (1,49 ml, 9,38 mmoles). La solución se enfrió a (0°C) y se agitó durante 20 min y se añadió una porción adicional de DIEA (1,49 ml, 9,38 mmoles) y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 20 min. A continuación, se añadió CMPI (1,80 g, 7,04 mmoles) a la mezcla de reacción que se dejó que se calentara a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La mezcla de reacción bruta se lavó con HCl 0,1 M (20 ml x 2), seguido de salmuera (20 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar el producto bruto. Se obtuvo un total de 2,05 g de Boc-propargilGly-Dil-OtBu (4,50 mmoles, 96%). LCm S rT = 3,46 min (Método A); ESI-MS m/z 455,42 [M+H]+.

A una solución agitada a 25°C de Boc-propargilGly-Dil-OtBu (2,05 g, 4,50 mmoles) en CH2G 2 (6 mL) se le añadió TFA (6 mL). Después de 14 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se concentraron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 1,30 g de H-propargilGly-Dil-OH en forma de la sal de TFA (3,16 mmoles, 70%).

A una solución agitada a 25°C de Dov (1,27 g, 8,71 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (2,33 ml, 13,1 mmoles), seguido de HATU (3,32 g, 8,71 mmoles). Después de 10 min, se añadió a la reacción una solución de sal de TFA de H-propargilGly-Dil-OH (1,30 g, 3,16 mmoles) en DMF. Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 455 mg de Dov-propargilGly-Dil-OH en forma de la sal de TFA (0,844 mmoles, rendimiento de 27%). LCMS RT = 1,65 min (Método a ); ESI-MS m/z 425,95 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de TFA de Dov-propargilGly-Dil-OH (0,198 g, 0,367 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,156 g, 0,338) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,222 mL, 1,40 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,355 g, 0,931 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron utilizando sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 10,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,012 mmoles, 3%). Lc Ms RT = 2,50 min (Método A); ESI-MS m/z 756,44 [M+H]+; HRMS m/z 756,4902 [C⁴¹H⁶⁵N⁵O^b+H]+.

Ejemplo 40

(2S,3S)-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amjno-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de ácido fórmico de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OH (42,1 mg, 0,051 mmoles), cloruro de amonio (7,9 mg, 0,148 mmoles), TBTU (52,5 mg, 0,163 mmoles) en DMF (0,2 ml) se le añadió base de Hunig (0,045 ml, 0,258 mmoles). Después de 16 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10 p C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en hidróxido de amonio acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 13,4 mg del compuesto del título (0,017 mmoles, 33%). LCMS RT = 1,05 min (Método B); ESI-MS m/z 772,61 [M+H]+; HRMS m/z 772,5078 [C39H65NsO7+H]+.

Ejemplo 41

(2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R.4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R.2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución agitada a 23°C de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (0,300 g, 0,526 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-2-(2-piridil)etilamina (0,287 g, 0,709 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (343 ^ , 1,97 mmoles) seguido de la adición de HATU (0,501 g, 1,31 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante ^lC^mS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10^ C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 139 mg del compuesto del título (0,190 mmoles, 29%). LCMS RT = 0,916 min (Método B); ESI-MS m/z 730,64 [M+H]+; HRMS m/z 730,4985 [C³⁷H⁶³N⁹O⁶+H]+.

Ejemplo 42

(2S,3S)-3-azido-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-(((S)-1 -(te/r-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de ácido fórmico de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OH (24,0 mg, 0,029 mmoles), hidrocloruro de terc-butilamina (7,9 mg, 0,072 mmoles), HATU (24,5 mg, 0,064 mmoles) en DMF (0,2 ml) se le añadió base de Hunig (0,022 ml, 0,124 mmoles). Después de 18 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10 ^ C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en hidróxido de amonio acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 15,4 mg del compuesto del título (0,017 mmoles, 59%). LCMS RT = 1,27 min (Método B); ESI-MS m/z 828,8 [M+H]+; HRMS m/z 828,5671 [C³⁹H⁶⁶N⁶O^b+H]+.

Ejemplo 43

((2R.3R)-3-((S)-1-((3R.4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-valinato de metilo

A una suspensión a 23°C agitada de Boc-Dap-OH diciclohexilamina (4,00 g, 8,54 mmoles) y sal de HCl de H-Val-OMe (1,80 g, 10,7 mmoles) en CH2G 2 (20 mL) se le añadió DIEA (4,44 g, 6,00 mL, 34,4 mmoles), seguido de la adición de HATU (2,15 g, 2,00 mL, 0,013 moles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto, que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 6,80 g de Boc-Dap-Val-OMe en forma de un aceite incoloro (17,0 mmoles, 80%). LCMS RT = 1,33 min (Método B); ESI-MS m/z 401,6 [M+H]+.

Se agitó una suspensión a 23°C de Boc-Dap-Val-OMe (6,80 g, 17,0 mmoles) en HCl 4,0 M en dioxano (20 ml). Después de 4 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 4,57 g de H-Dap-Val-OMe en forma de la sal de HCl (13,6 mmoles, 80%). LCMS RT = 0,726 min (Método B); ESI-MS m/z 301,45 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH TFA (0,144 g, 0,253 mmoles) y sal de HCl de H-Dap-Val-OMe (0,332 g, 0,985 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,222 g, 0,300 ml, 1,72 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,240 g, 0,631 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10p C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 129 mg del compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo pálido (0,175 mmoles, 55%). LCMS RT = 1,15 min (Método B); ESI-MS m/z 739,75 [M+H]+; HRMS m/z 739,5074 [C36H66NbOb+H]+.

Ejemplo 44

((2P.3P)-3-((S)-1-((3P.4S,5S)-4-((S)-6-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilhexanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilproianoil)-L-fenilalaninato de metilo

A una suspensión a 23°C agitada de Boc-Lys(Fmoc)-OH (5,60 g, 12,0 mmoles) y H-Dil-OtBu HCl (3,06 g, 10,9 mmoles) en EtOAc (20 ml) se le añadió DIEA (4,44 g, 6,00 ml, 34,4 mmoles). La solución se enfrió a 0°C y se agitó durante 0,5 h. Después de 0,5 h, se añadió DIEA adicional (4,44 g, 6,00 ml, 34,4 mmoles) a la mezcla de reacción y la reacción a 0°C se agitó durante 0,5 h. A continuación, se añadió CMPI (4,20 g, 16,4 mmoles) a la mezcla de reacción que se dejó que se calentara lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 10 h. La reacción bruta se lavó con HCl 1 M (30 ml x 2), seguido de salmuera (25 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. Se obtuvo un total de 7,38 g de Boc-Lys(Fmoc)-Dil-OtBu en forma de un sólido de color amarillo pálido (10,4 mmoles, 86%). LCMS RT = 1,85 min (Método B); ESI-Ms m/z 710,1 [M+H]+.

Se agitó una suspensión a 23°C de Boc-Lys(Fmoc)-Dil-OtBu (7,38 g, 10,4 mmoles) en HCl 4,0 M en dioxano (10,0 ml). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 7,05 g de H-Lys(Fmoc)-Dil-OH en forma de una sal de HCl de color amarillo pálido (0,012 mol, 89%). LCMS RT = 1,20 min (Método B); ESI-MS m/z 554,54 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Dov-OH (2,50 g, 17,2 mmoles) en DMF (20 ml) se le añadió DIEA (4,44 g, 6,00 ml, 0,034 moles), seguido de la adición de HATU (4,82 g, 12,6 mmoles). Después de 5 min, se añadió sal de HCl de H-Lys(Fmoc)-Dil-OH (7,05 g, 0,012 moles) a la mezcla de reacción. Después de 4 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. ^El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 4,45 g de Dov-Lys(Fmoc)-Dil-OH en forma de un sólido de color amarillo pálido (6,54 mmoles, 78%). LCMS RT = 1,21 min (Método B); ESI-MS m/z 681,68 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Dov-Lys(Fmoc)-Dil-OH (2,17 g, 3,19 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-OMe (1,78 g, 3,85 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,65 g, 2,20 ml, 12,7 mmoles), seguido de la adición de HATU (1,94 g, 5,10 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini 10p Max-RP 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,25 g de Dov-Lys(Fmoc)-Dil-Dap-Phe-OMe en forma de un sólido de color amarillo pálido (2,23 mmoles, 70%). LCMS RT = 1,29 min (Método B); eSi-MS m/z 1011,77 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Dov-Lys(Fmoc)-Dil-Dap-Phe-OMe (2,25 g, 2,23 mmoles) en acetonitrilo (20 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la solución de reacción bruta se le añadieron hexanos. La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 898 mg del compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (1,14 mmoles, 51%). LCMS RT = 0,840 min (Método B); ESI-MS m/z 789,5 [M+H]+; HRMS m/z 789,5482 [C42H72N6O^b+H]+.

Ejemplo 45

((2R.3R)-3-((S)-1-((3R.4S,5S)-4-((2S,4S)-4-azido-1-(dimetil-L-valil)-N-metilpirrolidina-2-carboxamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilproianoil)-L-fenilalaninato de metilo

A una suspensión a 23°C agitada de cis-Fmoc-Pro(4 -N³)-OH (2,00 g, 5,27 mmoles) y H-Dil-OtBu ■ HCl (1,49 g, 5,27 mmoles) en EtOAc (20 ml) se le añadió DIEA (2,22 g, 3,0 ml, 17,2 mmoles). La solución se enfrió a 0°C y se agitó durante 0,5 h. A la mezcla de reacción enfriada se le añadió DIEA adicional (2,22 g, 3,0 ml, 17,2 mmoles) y la mezcla de reacción a 0°C se agitó durante 0,5 h. A continuación, se añadió CMPI (2,03 g, 7,93 mmoles) a la mezcla de reacción que se dejó que se calentara lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 10 h. La reacción bruta se lavó con HCl 1 M (30 ml x 2), seguido de salmuera (25 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. El producto bruto se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 3,13 g de cis-Fmoc-Pro(4-N³)-Dil-OtBu en forma de un aceite de color amarillo (5,05 mmoles, 76%). LCMS RT = 1,73 min (Método B); ESI-MS m/z 621,46 [M+H]+.

A una solución agitada a 23°C de cis-Fmoc-Pro(4-N³)-Dil-OtBu (3,13 g, 4,04 mmoles) en acetonitrilo (20 ml) se le añadió piperidina (10 ml). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la mezcla de reacción bruta se le añadieron hexanos. La capa de acetonitrilo se concentró a vacío y el producto bruto se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 1,57 g de H-Pro(4 -N³)-Dil-OtBu en forma de un aceite transparente (3,95 mmoles, 88%). LCMS RT = 1,19 min (Método B); ESI-MS m/z 398,50 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Dov-OH (1,03 g, 7,12 mmoles) y H-Pro(4 -N³)-Dil-OtBu (1,57 g, 3,56 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,84 g, 2,50 ml, 0,014 moles), seguido de la adición de HATU (2,03 g, 5,33 mmoles). Después de 3 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2 ). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 817 mg de Dov-Pro(4 -N³)-Dil-OtBu en forma de un sólido blanco (1,56 mmoles, 44%). LCMS RT = 1,21 min (Método B); ESI-MS m/z 525,28 [M+H]+.

Se agitó una suspensión a 23°C de Dov-Pro(4-N³)-Dil-OtBu (0,817 g, 1,56 mmoles) en HCl dioxano 3,0 M. Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 704 mg de Dov-Pro(4-N³)-Dil-OH en forma de la sal de HCl (1,39 mmoles, 89%). LCMS RT = 0,676 min (Método B); ESI-MS m/z 469,44 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de HCl de Dov-Pro(4 -N³)-Dil-OH (0,120 g, 0,256 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (0,143 g, 0,310 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,132 g, 0,200 ml, 1,02 mmoles), seguido de la adición de HATU (0,156 g, 0,410 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 37,0 mg del compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo (0,046 mmoles, 18%). LCMS RT = 1,13 min (Método B); ESI-MS m/z 799,43 [M+H]+; HRMS m/z 799,5064 [C41H66NbOb+H]+.

Ejemplo 46

ácido (S)-3-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-4-(((3R.4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R.2R)-1 -metoxi-3-(((S)-1 -metoxi-1-oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-4-oxobutanoico

A una suspensión a 23°C agitada de Boc-Asp(OBzl)-OH (5,00 g, 15,5 mmoles) y sal de TFA de H-Dil-OtBu (4,36 g, 15,5 mmoles) en EtOAc (20 ml) se le añadió DIEA (6,00 g, 8,10 ml, 46,41 mmoles). La mezcla de reacción se enfrió a 0°C y se agitó durante 0,5 h. Después de 0,5 h, se añadió DIEA adicional (6,00 g, 8,01 ml, 46,4 mmoles) a la mezcla de reacción y se agitó durante 0,5 h. A continuación, se añadió CMPI (5,93 g, 23,2 mmoles) a la mezcla de reacción que se dejó que se calentara lentamente a temperatura ambiente y se agitó durante 10 h. La reacción bruta se lavó con HCl 1 M (30 ml x 2), seguido de salmuera (25 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtró y se concentró a vacío. El producto bruto se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 7,85 g de Boc-Asp(OBzl)-Dil-OtBu en forma de un aceite de color pardo (13,9 mmoles, 90%). LCMS RT = 1,72 min (Método B); ESI-MS m/z 565,3 [M+H]+.

Se agitó una solución a 23°C de Boc-Asp(OBzl)-Dil-OtBu (7,85 g, 13,9 mmoles) en HCl 4,0 M en dioxano (20 ml). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 7,85 g de H-Asp(OBzl)-Dil-OH enriquecido en forma de la sal de HCl. LCMS RT = 0,951 min (Método B); ESI-MS m/z 409,40 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Dov-OH (3,00 g, 20,7 mmoles) en DMF (20 ml) se le añadió DIEA (6,96 g, 9,40 ml, 0,054 moles) y HATU (7,60 g, 19,9 mmoles), seguido de la adición de sal de HCl de H-Asp(OBzl)-Dil-OH enriquecido (7,85 g). Después de 4 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,00 g de Dov-Asp(OBzl)-Dil-OH en forma de un sólido de color blanco (3,74 mmoles, 28%). LCMS RT = 1,10 min (Método B); ESI-^mS m/z 536,5 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Dov-Asp(OBzl)-Dil-OH (1,00 g, 1,87 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (1,04 g, 2,25 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,970 g, 1,30 ml, 7,47 mmoles), seguido de la adición de HATU (1,14 g, 2,99 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 1,25 g de Dov-Asp(OBzl)-Dil-Dap-Phe-OMe (1,44 mmoles, 77%) en forma de un sólido de color naranja. LCMS RT = 1,21 min (Método B); eSi-MS m/z 866,6 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Dov-Asp(OBzl)-Dil-Dap-Phe-OMe (0,525 g, 0,606 mmoles) en MeOH (10 ml) se le añadió Pd/C al 10% (50 mg), seguido de la adición de una atmósfera de hidrógeno. Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se filtró sobre un lecho de tierra de diatomeas, seguido de la evaporación de los compuestos orgánicos volátiles. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 6,00 mg del compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (0,008 mmoles, 1%). LCMS RT = 1,04 min (Método B); ESI-MS m/z 776,43 [M+H]+; HRMS m/z 776,4794 [C40H65N5O10+H]+.

Ejemplo 47

(2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-((3fl.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R2ñ)-3-(((1 S,2R)-1 -hidroxi-1 -fenilpropan-2-il)a

etoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Dov-Thr(Bzl)-Dil-OH (561 mg, 0,883 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-(1R,2S)-(-)-Norefedrina (345 mg, 0,794 mmoles) en DMF (20 ml) se le añadió DIEA (417 mg, 562 pl, 3,23 mmoles) seguido de la adición de HATU (820 mg, 2,15 mmoles). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío.El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 326 mg de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-(1R,2S)-(-)-Norefedrina en forma de un sólido de color blanco (0,396 mmoles, 37%). LCMS RT = 1,20 min (Método B); ESI-Ms m/z 824,76 [M+H]+.

Una suspensión a 23°C agitada de Dov-Thr(Bzl)-Dil-Dap-(1R,2S)-(-)-Norefedrina (326 mg, 0,396 mmoles) en MeOH (10 ml) se cargó en un reactor de hidrogenación de flujo continuo utilizando un RaNi (CatCart) y temperatura elevada (120 °C) y presión (80 bar). Después de la elución, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto, que se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 15 mg del compuesto del título en forma de un sólido de color blanco (0,020 mmoles, 5%). LCMS RT = 1,17 min (Método B); ESI-MS m/z 734.5 [M+H]+; HRMS m/z 734,5053 [C³⁹H⁶⁷N⁵O⁸+H]+.

Ejemplo de Referencia 48

((2R3fl)-3-((S)-1-((3fl.4S.5S)-4-((S)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N,3-dimetilbutanamido)-3-metoxi-5-

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Dov-Val-Dil-OH (583 mg, 1,07 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Ser-OMe (783 mg, 1,97 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (223 mg, 0,324 ml, 1,72 mmoles), seguido de la adición de HATU (1,03 g, 2,71 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 704 mg del compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo pálido (1,01 mmoles, 74%). LCMS RT = 0,917 min (Método B); ESI-MS m/z 700,43 [M+H]+; HRMS m/z 700,4843 [C³⁵H⁶⁵N⁵O⁹+H]+.

Ejemplo 49

((2fl.3fl)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilproyanoil)-L-isoleucinato de metilo

A una suspensión a 23°C agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (6,62 g, 14,1 mmoles) y H-lle-OMe (3,08 g, 21,2 mmoles) en CH2Cl2 (20 mL) se le añadió DIEA (7,30 g, 9,90 mL, 56,5 mmoles), seguido de la adición de HATU (3,44 g, 3,20 mL, 0,021 moles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 8,56 g de Boc-Dap-lle-OMe en forma de un aceite de color pardo (20,7 mmoles, 88%). LCMS RT = 1,51 min (Método B); ESl-MS m/z 415,16 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Boc-Dap-lle-OMe (6,62 g, 16,0 mmoles) en CH2G 2 (20 mL) se le añadió TFA (10 mL). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 3,55 g de H-Dap-lle-OMe en forma de un sólido de color amarillo (8,29 mmoles, 52%). lCm S RT = 0,691 min (Método B); ESl-MS m/z 315,16 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (150 mg, 0,329 mmoles) y H-Dap-Ile-OMe (207 mg, 0,657 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (170 mg, 0,220 ml, 1,31 mmoles), seguido de la adición de HATU (251 mg, 0,657 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 90% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 148 mg del compuesto del título en forma de un sólido de color amarillo pálido (0,197 mmoles, 60%). LCMS RT = 1,43 min (Método B); ESI-MS m/z 753,48 [M+H]+; HRMS m/z 753,5224 [C³⁷H⁶⁸N⁸O⁸+H]+.

Ejemplo 50

(2S,3S)-3-amino-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-NH²(13.4 mg, 0,017 mmoles) en THF (0,1 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,035 ml, 0,035 mmoles). Después de 3 h, se añadió trimetilfosfina adicional (1 M, 0,020 ml, 0,020 mmoles). Después de otra hora, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La solución se diluyó con agua y DMF y se dejó reposar durante 30 min. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10 p C18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en hidróxido de amonio acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 5,8 mg del compuesto del título (0,008 mmoles, 45%). LCMS RT = 0,85 min (Método B); ESI-MS m/z 746,6 [M+H]+; HRMS m/z 746,5173 [C³⁹H⁶⁷N⁷O⁷+H]+.

Ejemplo 51

(2S,3S)-3-amino-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-(((S)-1 -(te/c-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-NHf-Bu (15,4 mg, 0,019 mmoles) en THF (0,1 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,037 ml, 0,037 mmoles). Después de 3 h, se añadió trimetilfosfina adicional (1 M, 0,020 ml, 0,020 mmoles). Después de otra hora, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La solución de reacción se diluyó con agua y DMF y se dejó reposar durante 30 min. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10 p C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en hidróxido de amonio acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,7 mg del compuesto del título (0,003 mmoles, 18%). LCMS RT = 0,85 min (Método B); ESI-MS m/z 746,6 [M+H]+; HRMS m/z 802.5799 [C⁴³H⁷⁵N⁷O⁷+H]+.

Ejemplo 52

((2R.3R)-3-((S)-1-((3R.4S,5S)-4-((S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)propanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de metilo

A una suspensión a 23°C agitada de Fmoc-MeVal-OH (1,03 g, 2,90 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (1,35 ml, 7,74 mmoles), seguido de la adición de HATU (1,11 g, 2,90 mmoles). Después de 5 min, se añadió a la mezcla de reacción H-4-Azido-Ala-Dil-OH (0,610 g, 2,90 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (15 ml) y se extrajo con EtOAc (40 ml x 2). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 348 mg de Fmoc-MeVal-4-Azido-Ala-Dil-OH (0,535 mmoles, 28%) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS RT = 1,80 min (Método B); ESI-MS m/z 651,3 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Fmoc-MeVal-4-Azido-Ala-Dil-OH (348,00 mg, 0,535 mmoles) y H-Dap-Phe-OMe (372,66 mg, 1,07 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (276 mg, 0,400 ml, 2,14 mmoles) seguido de la adición de HATU (408 mg, 1,07 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción con la desprotección del grupo Fmoc al mismo tiempo. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 5,00 mg del compuesto del título (0,006 mmoles, 1%). LCMS RT = 1,08 min (Método B); ESI-MS m/z 759,5 [M+H]+; HRMS m/z 759,4753 [C³⁸H⁶²N⁸O⁸+H]+.

Ejemplo 53

((2R3P)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((2S.3S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilproianoil)-L-fenilalaninato de metilo

A una suspensión a 23°C agitada de Fmoc-MeVal-OH (2,46 g, 6,96 mmoles) y H-Abu(3 -N³)-Dil-OtBu (2,46 g, 6,38 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (3,30 g, 4,5 ml, 25,5 mmoles), seguido de la adición de HATU (3,65 g, 9,57 mmoles). Después de 6 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 3,16 g de Fmoc-MeVal-Abu(3-N3)-Dil-OtBu (4,12 mmoles, 65%) en forma de la sal de ácido fórmico. LCMS RT = 2,08 min (Método A); ESI-MS m/z 722,7 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de ácido fórmico de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-OtBu (3,16 g, 4,12 mmoles) en CH2Cl2 (5,0 mL) se le añadió TFA (10,0 mL). Después de 14 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un aceite. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en TFA acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,26 g de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-OH (2,90 mmoles, 66%) en forma de la sal de TFA. LCMS RT = 1,80 min (Método B); ESI-MS m/z 665,3 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-OH (80,0 mg, 0,103 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OMe (83,9 mg, 0,182 mmoles) en DMF (2 ml) se le añadió DIEA (0,083 ml, 0,481 mmoles) seguido de la adición de HATU (91,8 mg, 0,241 mmoles). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con DMF y se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 97,0 mg de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OMe (0,093 mmoles, 77%) en forma de la sal de ácido fórmico. LCMS RT = 1,90 min (Método b); ESI-MS m/z 995,6 [M+H]+.

A una solución agitada a 23°C de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OMe (97,0 mg, 0,093 mmoles) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la solución de reacción bruta se le añadieron hexanos (25 ml x 3) para extraer subproductos no polares. La capa de acetonitrilo se concentró a vacío y el aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 g 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en NH4OH acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 74,0 mg del compuesto del título (0,096 mmoles, 103%) en forma de un sólido de color blanco. LCMS RT = 1,09 min (Método B); ESI-MS m/z 773,5 [M+H]+; HRMS m/z 773,4911 [C³⁹H⁶⁴N⁸O⁸+H]+.

Ejemplo 54

(2S,3S)-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R.2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida

A una suspensión a 23°C agitada de Bod-Dap-OH diciclohexilamina (10,0 g, 21,3 mmoles) y sal de HCl de H-Phe-NH2 (6,42 g, 32,0 mmoles) en CH2Cl2 (20.0 mL) se le añadió DIEA (11,0 g, 14,9 mL, 85,3 mmoles) seguido de la adición de DEPC (5,19 g, 4,80 mL, 0,032 moles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se lavó con H2O (25 ml x 2), seguido de salmuera (25 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a vacío. El aceite de naranja bruto se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice de 40 gm, 60 Á, tamaño) utilizando metanol de 2% a 10% en CH2G 2 como eluyente. Se obtuvo un total de 7,25 g de Boc-Dap-Phe-NH2 (16,7 mmoles, 78%) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS RT = 1,28 min (Método B); ESI-MS m/z 434,19 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Boc-Dap-Phe-NH2 (7.25 g, 16,7 mmoles) en CH2G 2 (10 mL) se le añadió TFA (10 mL). Después de 5 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto, que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 6,00 g de H-Dap-Phe-NH2 en forma de un sólido naranja (13,4 mmoles, 80%). LCMS RT = 0,691 min (Método B); ESI-MS m/z 334,17 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-OH (456 mg, 0,586 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-NH2 (457 mg, 1,02 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,350 g, 0,500 ml, 2,74 mmoles) seguido de la adición de HATU (0,520 g, 1,37 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 g 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 526 mg de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-NH²en forma de la sal de ácido fórmico (0,513 mmoles, 75%). LCMS RT = 1,81 min (Método B); Es I-Ms m/z 980,39 [M+H]+.

A una solución agitada a 23°C de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-NH²(525 mg, 0,513 mmoles) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la solución de reacción bruta se le añadieron hexanos (15 ml x 3). La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 g 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en TFA acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 354 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,406 mmoles, 79%). LCMS RT = 1,15 min (Método B); ESI-MS m/z 758,24 [M+H]+; HRMS m/z 758,4915 [C^3bH⁶³N⁹O⁷+H]+.

Ejemplo 55

((2S,3S)-3-azido-N-((3R.4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -(te/c-butilamino)-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OH (111 mg, 0,113 mmoles), hidrocloruro de tere-butilamina (31,5 mg, 0,287 mmoles), HATU (92,0 mg, 0,242 mmoles) en DMF (1,0 ml) se le añadió base de Hunig (0,079 ml, 0,454 mmoles). Después de 1 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con acetato de etilo y la fracción orgánica se lavó con HCl 1 N y salmuera. La fracción orgánica se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró a presión reducida. El aceite de color amarillo bruto se disolvió en piperidina (2,0 ml) y acetonitrilo (5,0 ml). Después de 1 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La capa de acetonitrilo se extrajo con hexanos (2x) y la capa de acetonitrilo se concentró a presión reducida. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10 p C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en hidróxido de amonio acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 50,3 mg del compuesto del título (0,062 mmoles, 55%). LCMS RT = 1,29 min (Método B); ESI-MS m/z 814,1 [M+H]+; HRMS m/z 814,5541 [C42H71 N⁹O⁷+H]+.

Ejemplo 56

((2R3fl)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((2S.3S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de tere-butilo

A una solución agitada a 25°C de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (6,47 g, 13,8 mmoles) y H-Phe-OtBu (3,91 g, 15,2 mmoles) en DCM (20 ml) se le añadió DIEA (8,76 ml, 55,2 mmoles), seguido de la adición de DEPC (3,12 ml, 20,7). Después de 8 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 5,35 g de Boc-Dap-Phe-OtBu (10,9 mmoles, 79%). LCMS RT = 2,89 min (Método A); ESI-MS m/z 491,48 [M+H]+.

A una solución a temperatura ambiente agitada de Boc-Dap-Phe-OtBu (5,25 g, 10,7 mmoles) en CH2G 2 (10,0 mL) se le añadió TFA (10,0 mL). Después de 12 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Synergi 10 p Max-RP 80 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,05% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,85 g de H-Dap-Phe-OtBu en forma de la sal de TFA (5,65 mmoles, 68%). LCMS RT = 1,82 min (Método A); ESI-MS m/z 391,02 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-OH (410 mg, 0,527 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OtBu (482 mg, 0,956 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (319 mg, 430 pL, 2,47 mmoles) seguido de la adición de HATU (470 mg, 1,23 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción junto con la eliminación de 10% del grupo Fmoc. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 26,0 mg del compuesto del título en forma de una sal de ácido fórmico de color blanco (0,030 mmoles, 5%). LCMS RT = 1,41 min (Método B); ESI-MS m/z 815,33 [M+H]+; HRMS m/z 815,5383 [C42H70N^bO^b+H]+.

Ejemplo 57

((2R3R)-3-((S)-1-((3R4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamido)-3-

A una suspensión a 23°C agitada de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-OH TFA (410 mg, 0,527 mmoles) y sal de H-Dap-Phe-OtBu TFA (482 mg, 0,956 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (319 mg, 430 pL, 2,47 mmoles) seguido de la adición de HATU (470 mg, 1,23 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante lCm S mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 648 mg de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OtBu en forma de una sal de ácido fórmico de color blanco (0,598 mmoles, 97%). LCMS RT = 1,41 min (Método B); ESI-MS m/z 1037,41 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de ácido fórmico de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OtBu (648 mg, 0,598 mmoles) en CH2G 2 (5.00 mL) se le añadió TFA (5,00 mL). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un aceite de color pardo. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en TFA acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 502 mg de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OH en forma de la sal de TFA (0,458 mmoles, 77%). LCMS RT = 1,81 min (Método B); ESI-MS m/z 981,22 [M+H]+.

A una solución agitada a 23°C de sal de TFA de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-OH (392 mg, 0,382 mmoles) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la solución de reacción bruta se le añadieron hexanos (15 ml x 3). La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en TFA acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 360 mg del compuesto del título enriquecido en forma de la sal de TFA. LCMS RT = 1,19 min (Método B); ESI-MS m/z 759,13 [M+H]+; HRMS m/z 759,4755 [C³⁸H⁶²N^bO^b+H]+.

Ejemplo 58

((2fl,3fl)-3-((S)-1-((3fl.4S,5S)-4-((2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilproianoil)-L-fenilalaninato de terc-butilo

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (327 mg, 0,574 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-Phe-OtBu (0,340 g, 0,675 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,370 g, 0,500 ml, 2,87 mmoles) seguido de la adición de HATU (0,550 g, 1,43 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 453 mg (0,518 mmoles, 72%) del compuesto del título en forma de la sal de ácido fórmico. LCMS RT = 1,42 min (Método B); ESI-MS m/z 828,94 [M+H]+; HRMS m/z 829,5536 [C⁴³H⁷²N⁸O⁸+H]+.

Ejemplo 59

(2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3fl.4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 fl.2fl)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(1 H-tetrazol-5-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una suspensión a 23°C agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (2,48 g, 5,29 mmoles) y (S)-2-fenil-1-(1H-tetrazol-5-il)etanamina (1,00 g, 5,29 mmoles) en CH2Cl2 (20,0 mL) se le añadió DIEA (2,73 g, 3,7 mL, 21,1 mmoles) seguido de la adición de DEPC (1,29 g, 1,20 mL, 7,93 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 2,52 g de Boc-Dap-(S)-2-fenil-1-(1H-tetrazol-5-il)etanamina (4,99 mmoles, 94%) en forma de la sal de ácido fórmico. LCMS RT = 1,35 min (Método B); ESI-MS m/z 459,2 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Boc-Dap-(S)-2-fenil-1-(1H-tetrazol-5-il)etanamina (2,52 g, 4,99 mmoles) en CH2G 2 (10,0 mL) se le añadió TFA (5,00 mL). Después de 5 h, el análisis mediante lCm S mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío para proporcionar un producto bruto que se utilizó sin purificación adicional. Se obtuvo un total de 2,43 g de H-Dap-(S)-2-Fenil-1-(1H-tetrazol-5-il)etanamina (5,14 mmoles, 84%) en forma de la sal de TFA. LCMS RT = 0,575 min (Método B); ESI-MS m/z 359,2 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (305 mg, 0,668 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-(S)-2-fenil-1-(1H-tetrazol-5-il)etanamina (0,36 g, 1,002 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,35 g, 0,5 ml, 2,67 mmoles) seguido de la adición de HATU (509 mg, 1,34 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 47,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de ácido fórmico (0,056 mmoles, 8%). LCMS RT = 1,24 min (Método B); ESI-Ms m/z 797,3 [M+H]+; HRMS m/z 797,5139 [C39H64N12O⁶+H]+.

Ejemplo 60

(2S,3S)-3-azido-N-((3R.4S,5S)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(1 H-tetrazol-5-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-OH (0,491 g, 0,631 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-(S)-2-fenil-1-(1H-tetrazol-5-il)etanamina (0,532 g, 1,13 mmoles) en DMF (10 ml) se le añadió DIEA (0,381 g, 0,500 ml, 2,97 mmoles) seguido de la adición de HATU (0,57 g, 1,486 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C1810 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 125 mg de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-(S)-2 -Fenil-1 -(1 H-tetrazol-5 -il)etanamina en forma de la sal de ácido fórmico (0,119 mmoles, 16%). lCm S RT = 1,94 min (Método B); ESI-MS m/z 1005,35 [M+H]+.

A una solución agitada a 23°C de Fmoc-MeVal-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-(S)-2 -Fenil-1 -( 1 H-tetrazol-5-il)etanamina (525 mg, 0,499 mmoles) en acetonitrilo (10 ml) se le añadió piperidina (5 ml). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. A la solución de reacción bruta se le añadieron hexanos (x3). La capa de acetonitrilo se concentró a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en TFA acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 20,0 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,022 mmoles, 5%). LCMS RT = 1,37 min (Método B); ESI-MS m/z 783,42 [M+H]+; HRMS m/z 783,4979 [C3bH62N1206+H]+.

Ejemplo 61

(2S,3S)-3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R.4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una suspensión a 23°C agitada de sal de diciclohexilamina de Boc-Dap-OH (1,95 g, 4,154 mmoles) y (S)-2-fenil-1-(2-tiazol-2-il)etilamina (1,00 g, 4,154 mmoles) en CH2G2 (20.0 mL) se le añadió DIEA (2,15 g, 2,9 mL, 16,615 mmoles) seguido de la adición de DEPC (1,01 g, 0,9 mL, 0,006 moles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se lavó con H2O (25 ml x 2), seguido de salmuera (25 ml x 2). La fracción orgánica se secó sobre un lecho de MgSO⁴, se filtró y se concentró a vacío. Se obtuvo un total de 1,65 g de Boc-Dap-(S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etanamina (3,48 mmoles, 84%) en forma de un aceite de color amarillo. LCMS RT = 1,59 min (Método B); ESI-MS m/z 475,2 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de Boc-Dap-(S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etanamina (1,65 g, 3,49 mmoles) en CH2Cl2 (10.0 mL) se le añadió TFA (10,0 mL). Después de 4 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. Las sustancias orgánicas volátiles se evaporaron a vacío. El aceite bruto se disolvió en DMF (5 ml) y trietilamina (1 ml) para alcanzar un pH de 8. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en TFA acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 935 mg de H-Dap-(S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etanamina (1,92 mmoles, 55%) en forma de la sal de TFA. LCMS RT = 1,04 min (Método B); ESI-MS m/z 375,0 [M+H]+.

A una suspensión a 23°C agitada de sal de TFA de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-OH (302 mg, 0,661 mmoles) y sal de TFA de H-Dap-(S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etanamina (247 mg, 0,661 mmoles) en DMF (10 mL) se le añadió DIEA (0,34 g, 0,5 mL, 2,65 mmoles) seguido de HATU (504 mg, 1,32 mmoles). Después de 10 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se diluyó con bicarbonato de sodio saturado (10 ml) y se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). Las fracciones orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre un lecho de sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron a vacío. El aceite bruto se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini NX-C18 10 p 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 10% a 90% en TFA acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 111 mg del compuesto del título en forma de la sal de TFA (0,120 mmoles, 18%). LCMS RT = 1,33 min (Método B); ESI-MS m/z 812.2 [M+H]+; HRMS m/z 812,4835 [C⁴¹H⁶⁵NsO⁶S+H]+.

Ejemplo 62

((2fl.3fl)-3-((S)-1-((3fl.4S,5S)-4-((2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de tere-butilo

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de ácido fórmico de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-Of-Bu (102,5 mg, 0,117 mmoles) en DMF (1,0 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,350 ml, 0,350 mmoles). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10 p C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 70,1 mg del compuesto del título en forma de una sal de ácido fórmico (0,083 mmoles, 70%). LCMS RT = 1,22 min (Método B); ESI-MS m/z 803,3 [M+H]+; HRMS m/z 803,5642 [C⁴³H⁷⁴N⁶O^b+H]+.

Ejemplo 63

(2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3fl.4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 fl.2fl)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1 -(1 H-tetrazol-5-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1 -il)-5-metil-1 -oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de ácido fórmico de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-tetrazol (19,4 mg, 0,023 mmoles) en DMF (0,2 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,068 ml, 0,068 mmoles). Después de 2 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10 p C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 9,9 mg del compuesto del título en forma de una sal de ácido fórmico (0,012 mmoles, 53%). LCMS RT = 1,07 min (Método B); ESI-MS m/z 771,2 [M+H]+; HRMS m/z 771,5233 [C39H66N10Ob+H]+.

Ejemplo 64

(2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3fl,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 fl,2fl)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida

A una solución a temperatura ambiente agitada de sal de ácido fórmico de Dov-Abu(3 -N³)-Dil-Dap-Phe-tiazol (37,2 mg, 0,043 mmoles) en THF (0,2 ml) se le añadió trimetilfosfina en THF (1 M, 0,090 ml, 0,090 mmoles). Después de 1 h, el análisis mediante LCMS mostró que se había completado la reacción. La mezcla de reacción bruta se purificó mediante RP-HPLC preparativa con una columna Phenomenex Gemini-NX 10 ^ C-18 110 Á (150 x 30 mm) utilizando MeCN de 5% a 95% en ácido fórmico acuoso al 0,1% como eluyente. Se obtuvo un total de 16,8 mg del compuesto del título en forma de una sal de ácido fórmico (0,020 mmoles, 47%). LCMS RT = 1,15 min (Método B); ESI-MS m/z 786,2 [M+H]+; HRMS m/z 786,4940 [C41H67N7Ü6S+H]+.

Ejemplo B1

Experimentos de citotoxicidad in vitro

La eficacia in vitro de los compuestos se midió evaluando su actividad citotóxica en diversas líneas de células cancerosas. Este ensayo se realizó en placas de 96 pocillos transparente tratadas para cultivo de tejido. Las líneas celulares utilizadas fueron PC3 (carcinoma de próstata humano), HCC-1954 (carcinoma ductal mamario humano) y HCT15 (adenocarcinoma colorrectal humano, que expresa Pgp). Las células se sembraron a aproximadamente 1.000-1.500 células por pocillo en 50 ^ de medio de crecimiento (RPMI-1640 suero bovino fetal inactivado por calor al 10%) y se incubaron durante la noche a 37°C con 5% de CO2 para permitir que se adhirieran. Al día siguiente, se añadieron a cada pocillo por triplicado 50 ^ de una provisión de partida 2x de control de vehículo (DMSÜ) o compuestos a concentraciones variables. Además, se utilizaron pocillos de control sin células o con células no tratadas solas. Las placas se incubaron en la incubadora de cultivo de tejidos humidificada con 5% de CÜ2 a 37°C durante 4 a 6 días después de la adición de compuestos para medir la citotoxicidad. Después de 4 a 6 días, se añadieron 20 ^ de reactivo de viabilidad celular PrestoBlue™ (Life Technologies Núm. A13261) por pocillo. Las placas se incubaron a 37°C durante 1 a 2 h. La fluorescencia se registró a 540 ex/590 em utilizando el lector de placas Biotek Synergy™ H4. Los datos representativos se representan gráficamente como porcentaje de supervivencia en comparación con los pocillos de control no tratados. Los datos de los compuestos probados en este ensayo se representan gráficamente como porcentaje de supervivencia en comparación con los pocillos de control no tratados, como se muestra en las Figuras 9-30.

Ejemplo B2

Determinación de la polimerización de tubulina

La inhibición de la polimerización de tubulina por los compuestos descritos en la presente memoria se evaluó en tubulina de cerebro bovino. Para evaluar la actividad de los compuestos, se sembró tubulina a aproximadamente 400 ^ por pocillo en 100 ^ de tampón de tubulina general, y a continuación, se trató con una concentración final de compuesto 10 ^ por duplicado al inicio del ensayo. Los ensayos de polimerización de tubulina se llevaron a cabo normalmente a 37°C durante 60 min después de la adición de los compuestos de prueba. La polimerización de tubulina se determinó mediante espectroscopia de absorbancia utilizando el valor de densidad óptica a 340 nm. Para evaluar la cantidad de tubulina polimerizada, se obtuvo el valor de densidad óptica a 340 nm cada minuto después de la adición de los compuestos de prueba. Para el análisis, se comparó el grado de polimerización de la tubulina por la tubulina tratada con el compuesto con el del control, que era tubulina tratada con tampón. En particular, los estudios de inhibición de la tubulina se realizaron utilizando el HTS-Tubulin Polimerization Assay Kit (Cytoskeleton Inc.; Núm. de Catálogo BK004P), utilizando el siguiente protocolo de muestra:

1. Precalentar el espectrofotómetro y las placas de 96 pocillos a 37°C durante 30 min antes de comenzar el ensayo. Una placa caliente es esencial para una alta actividad de polimerización y resultados reproducibles.

2. Introducir todos los parámetros del lector de placas (absorbancia a 340 nm, 37°C, una lectura por minuto) para que el espectrofotómetro esté listo para su uso. Una vez que la tubulina se divide en alícuotas en los pocillos a 37°C, la lectura debe comenzar de inmediato.3

3. Calentar 500 ^ de tampón de tubulina general a temperatura ambiente. Se necesita tampón caliente para diluciones de ligando de tubulina.

4. El paclitaxel se incluye como control. Utilizar 10 pL de paclitaxel por pocilio, lo que lleva la concentración final a 10 pM final.

5. Elaborar tampón de ensayo frío: tampón de tubulina general, GTP 1 mM, glicerol al 10%.

6. Resuspender 4 mg de tubulina con 1 ml de tampón de ensayo frío para llevar la concentración final de proteína de 4 mg/ml. Colocar los tubos en hielo y espera 3 minutos para la resuspensión completa de la proteína.

7. Preparar el compuesto seleccionado a una concentración de 10X en tampón de ensayo.

8. Pipetear 10 pL del compuesto concentrado 10X en el número requerido de pocillos de la placa precalentada. Incubar la placa durante 2 min a 37°C.

9. Pipetea 10 pL de tampón de ensayo solo en dos pocillos de control (tubulina tratada con tampón).

10. Pipetear 100 pL de tubulina en el número requerido de pocillos (dos pocillos deben ser los controles de compuesto cero, que están tratados con tampón).

11. Colocar inmediatamente la placa en el espectrofotómetro a 37°C y comenzar a registrar la densidad óptica a 340 nm cada minuto. El aumento de los valores de densidad óptica a 340 nm equivale a un aumento de la polimerización de tubulina.

Los datos de los compuestos probados en este ensayo se presentan en las Figuras 1-8.

Ejemplo B3

Determinación de la eficacia in vivo de los compuestos de prueba: Evaluación de la eficacia en la línea celular SW780 de cáncer de vejiga humano establecida por vía subcutánea implantada en ratones SCID ICR Para estudios in vivo en animales, los compuestos de prueba se diluyen con histidina 20 mM, sacarosa al 5%, pH 6 con DMSO al 15%. Los ratones SCID ICR macho (Taconic Farm, Hudson, NY) se alojan en jaulas microaisladoras convencionales para roedores. Los controles ambientales para las estancias de los animales están configurados para mantener una temperatura entre 20-24°C, una humedad relativa entre 30% y 70% y un ciclo aproximado de 12 h de luz/12 h de oscuridad. Se proporcionan alimentos y agua ad libitum. Después de 72 h de aclimatación, a los ratones se les implantan células cancerosas de vejiga humana SW780 (2 x 106 células/ratón), suspendida en Cultrex (Trevigen, Inc.) completo al 50% mezclado con PBS (Gibco), y se controla la velocidad de crecimiento del tumor. Cuando el volumen tumoral promedio alcanza ~200 mm3, los tumores tienen el mismo tamaño y los ratones se asignan al azar a los grupos de tratamiento (n = 8 o 10). Los ratones portadores de tumores se tratan i.v. con vehículo o compuesto de prueba a 2 o 4 mg/kg (mpk) en un programa de dosificación QW durante 3 semanas. El volumen tumoral se evalúa dos veces por semana utilizando una medición con calibre.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I):

en donde

R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo;

X está ausente;

R3 es un grupo de la fórmula:

R4 es un grupo de la fórmula:

en donde R¹⁷es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N³o -alquil-CO2H; y R¹⁸es -H, -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquilo, alquenilo, alquinilo, -alquil-OH, -alquil-NH2, -alquil-SH, -alquil-N³o -alquil-CO2H;

R5 es sec-butilo o isobutilo;

R6 es -H o alquilo;

R7 es -H, alquilo, -CO2Ra, -CONRbRc, fenilo sustituido o no sustituido, o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; R8 es -H, alquilo, fenilo sustituido o no sustituido, o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido;

en donde Ra es -H o alquilo;

Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo;

R9 es -H o alquilo; o R9 se toma junto con R4 y los átomos a los que están unidos para formar un anillo de heterocicloalquilo sustituido o no sustituido;

R10 es -H o alquilo;

R11 es -H o alquilo;

R12 es -H o alquilo;

R13 es -H o alquilo;

y

R14 es -H, -OH o alquilo;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en donde

R15 y R16 son cada uno independientemente -H o alquilo;

R7 es -H, -CO2Ra, -CONRbRc o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido;

R8 es fenilo sustituido o no sustituido, o anillo heterocíclico sustituido o no sustituido; y

R14 es -H.

3. El compuesto de la reivindicación 2, en donde R15 y R16 son cada uno metilo.

4. El compuesto de la reivindicación 3, en donde

R17 es -OH, -NH2, -SH o -N3; y

R18 es -H o alquilo.

5. El compuesto de la reivindicación 4, en donde

R7 es -H, -CO2Ra o -CONRbRc; y

R8 es fenilo.

6. El compuesto de la reivindicación 1, en donde

R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

X está ausente;

R3 es

en donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o alquilo C1-C6;

^{R17 R18}

_{R4 es}I _{> en donde R17 es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, alquilo C1-C6-NH2, alquinilo, alquenilo o -alquilo C 1-}C6-N3; y R18 es -H o alquilo C1-C6;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R7 es -H, alquilo C1-C6, -CO2Ra, -CONRbRc, tetrazolilo o tiazolilo; en donde Ra es -H o alquilo C1-C6; y Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R14 es -H, alquilo C1-C6 u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. El compuesto de la reivindicación 1, en donde

R1 y R2 son cada uno independientemente -H o metilo;

X está ausente;

R3 es

en donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o metilo;

R4 es

en donde R¹⁷es -OH, -NH2, -SH, -N3, -CO2H, aminometilo, alquinilo, alquenilo o azidometilo; y R¹es -H o metilo;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R9 es -H;

R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³son cada uno metilo; y

R¹⁴es -H, metilo u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

8. El compuesto de la reivindicación 1, en donde

R¹y R²son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

X está ausente;

^{R15 R16}

_{R3 es}I _{> en donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o alquilo C1-C6;}

^{r 17 R 1S}

_{R4 es}I _{> en donde R17 es -N3; y R18 es -H o metilo;}

R⁵es sec-butilo;

R⁶es -H;

R⁷es -H, alquilo C1-C6, -CO2Ra, -CONRbRc, tetrazolilo o tiazolilo; en donde Ra es -H o alquilo C1-C6; y Rb cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R⁹es -H;

R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R¹⁴es -H, alquilo C1-C6 u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

9. El compuesto de la reivindicación 1, en donde

R¹y R²son cada uno metilo;

X está ausente;

^{R15 R16}

_{R3 es un grupo de la fórmula:}I _{> en donde R15 y R16 son cada uno metilo;}

^{R17 R18}

_{R4 es un grupo de fórmula:}I _{> en donde R17 es -N3, -NH2, -OH, -SH, y R18 es -H o metilo;}

R⁵es sec-butilo;

R⁶es -H;

R⁷es -CO2Ra o -CONRbRc, en donde Ra es -H o alquilo C1-C6; Rb y Rc son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

R⁸es fenilo;

R⁹es -H;

R¹⁰, R¹¹, R¹²y R¹³son cada uno metilo; y

R¹⁴es -H;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

10. El compuesto de la reivindicación 1, en donde

R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

X está ausente;

^{r 15 R 1S}

_{R3 es}I _>• _{en donde R15 y R16 son cada uno independientemente -H, -OH o alquilo C1-C6;}

R4 es

en donde R¹⁷es -N3; y R¹⁸es -H o alquilo C1-C6;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R14 es -H, alquilo C1-C6 u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

11. El compuesto de la reivindicación 1, en donde

X está ausente;

R1 y R2 son cada uno independientemente -H o alquilo C1-C6;

^{R15 R16}

R4 es en donde R17 es -N3; y R18 es -H o metilo;

R5 es sec-butilo;

R6 es -H;

R9 es -H;

R10, R11, R12 y R13 son cada uno independientemente alquilo C1-C6; y

R14 es -H, alquilo C1-C6 u -OH;

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

12. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:

(S)-2-(dimetilamino)-N-((S)-3-hidroxi-1 -(((3R,4S,5i)-3-metoxi-1 -((S)-2-((1 R,2R)-1 -metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)(metil)amino)-1-oxopropan-2-il)-3-metilbutanamida; (2S,3R)-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-3-hidroxi-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-((2-(piridin-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida;

(S)-metil 2-((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((S)-4-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanamido)-3-fenilpropanoato;

(25.35) -N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida;

((2S,3S)-3-azido-N-((3R,4S,5S)-1 -((S)-2-((1 R,2R)-3-(((S)-1 -(terc-butilamino)-l -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1-il)-3-metoxi-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida;

(25.35) -3-azido-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida; ((2R,3R)-3-((S)-1-((3R,4S,5S)-4-((2S,3S)-3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-metilbutanamido)-3-metoxi-5-metilheptanoil)pirrolidin-2-il)-3-metoxi-2-metilpropanoil)-L-fenilalaninato de ferc-butilo;

(25.35) -3-amino-2-((S)-2-(dimetilamino)-3-metilbutanamido)-N-((3R,4S,5S)-3-metoxi-1-((S)-2-((1 R,2R)-1-metoxi-2-metil-3-oxo-3-(((S)-2-fenil-1-(tiazol-2-il)etil)amino)propil)pirrolidin-1-il)-5-metil-1-oxoheptan-4-il)-N-metilbutanamida; 0 sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

13. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el compuesto es (2S,3S)-N-((3R,4S,5S)-1-((S)-2-((1R,2R)-3-(((S)-1 -amino-1 -oxo-3-fenilpropan-2-il)amino)-1 -metoxi-2-metil-3-oxopropil)pirrolidin-1 -il)-3-metoxi-5-metil-1 -oxoheptano-4-il)-3-azido-N-metil-2-((S)-3-metil-2-(metilamino)butanamido)butanamida, o sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

14. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del compuesto de la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

15. Un compuesto como se define en la reivindicación 1 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o una composición farmacéutica como se define en la reivindicación 14 para su uso en un método de tratamiento de un cáncer en un sujeto que necesita tal tratamiento.