ES2875577T3 - Compuestos de isoquinolina y de naftidrina - Google Patents

Compuestos de isoquinolina y de naftidrina

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ES2875577T3 ES18708558T ES18708558T ES2875577T3 ES 2875577 T3 ES2875577 T3 ES 2875577T3 ES 18708558 T ES18708558 T ES 18708558T ES 18708558 T ES18708558 T ES 18708558T ES 2875577 T3 ES2875577 T3 ES 2875577T3
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Gang Liu
Yuan Tian
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Abstract

Un compuesto de la fórmula **(Ver fórmula)** en la que X es CH o N; Q es CH3 o H; R es **(Ver fórmula)** o**(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos de isoquinolina y de naftidrina
La presente invención proporciona compuestos de isoquinolina y de naftidrina o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, y el uso de los compuestos en terapia. Los compuestos de isoquinolina y de naftidrina de esta invención son inhibidores de la quinasa reguladora de señales de la apoptosis 1 (ASK1).
La ASK1 es un miembro de la gran familia de la proteína cinasa activada por mitógenos ("MAP3K"). La activación y la señalización de ASK1 están asociadas a una amplia gama de enfermedades. Los compuestos que inhiben ASK1 son deseables para su uso en el tratamiento de las afecciones mediadas por ASK1.
Los compuestos que inhiben la ASK1 resultan convenientes para usar en el tratamiento de la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA). La esteatohepatitis no alcohólica es una enfermedad hepática con una constelación etiológica caracterizada por esteatosis hepática macrovesicular, inflamación de los hepatocitos y fibrosis. Actualmente, no existe ningún medicamento aprobado específicamente para el tratamiento de la esteatohepatitis no alcohólica. Se necesitan medicamentos farmacéuticos que ofrezcan opciones de tratamiento adicionales para los pacientes que sufren esteatohepatitis no alcohólica.
La patente estadounidense n° 8,742,126 divulga la 5-(4-ciclopropil-1H-imidazol-1-il)-N-(6-(4-isopropil-4H-1,2,4-triazol-3-il)piridin-2-il)-2-fluoro-4-metilbenzamida como un inhibidor de la ASK1.
La publicación de la solicitud de patente de EE.UU. n° US 2015/0342943 divulga un procedimiento de prevención y/o de tratamiento de enfermedades hepáticas usando un inhibidor de la ASK1.
Se necesitan compuestos que tengan actividad inhibidora de la ASK1.
La presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I
Figure imgf000002_0001
en la que
X se selecciona del grupo formado por CH y N;
Q se selecciona del grupo formado por CH3 y H;
R se selecciona del grupo formado por
Figure imgf000002_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una forma de realización, X es CH y Q es CH3.
En una forma de realización, X es N y Q es H.
En una realización X es CH; Q es CH3; y R es
Figure imgf000003_0001
En una forma de realización X es CH; Q es CH3; y R es
Figure imgf000003_0002
En una forma de realización X es N; Q es H; y R es
Figure imgf000003_0003
En una forma realización X es N; Q es H; y R es
Figure imgf000003_0004
En una forma de realización, el compuesto de Fórmula I es 7-(4-ciclopropilimidazoM-il)-2-[6-(4-isopropiM,2,4-triazol-3-il)-2-piridil]-6-metil-3,4-dihidroisoquinolin-1-ona o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una forma de realización, el compuesto de Fórmula I es 3-(4-ciclopropilimidazoM-il)-6-[6-(4-isopropiM,2,4-triazol-3-il)-2-piridil]-7,8-dihidro-1,6-naftiridin-5-ona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
La presente invención proporciona un procedimiento para tratar una afección mediada por la actividad de la ASK 1, que comprende administrar al mamífero que necesita el tratamiento, una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La presente invención también proporciona un procedimiento para tratar una enfermedad hepática, que comprende la administración a un mamífero que lo necesita, de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. La presente invención proporciona un procedimiento para tratar la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), que comprende la administración a un mamífero que lo necesite de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, o de una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otra forma de realización, la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en terapia. Además, se proporciona un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica, para su uso en el tratamiento NASH.
En otra forma de realización, se proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades hepáticas. Preferentemente el medicamento es para el tratamiento de la EHNa .
Un compuesto de la presente invención se formula preferentemente como composiciones farmacéuticas administradas por cualquier vía que haga que el compuesto sea biodisponible. Lo más preferentemente es que dichas composiciones sean para administración oral. Las composiciones farmacéuticas de este tipo y los procesos para prepararlas son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo Remington: The Science and Practice of Pharmacy (L.V. Allen, editor, 22a edición, Pharmaceutical Press, 2012).
Los compuestos de la presente invención se pueden proporcionar como una sal farmacéuticamente aceptable. "Sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a las sales del compuesto de la invención que se consideran aceptables para el uso clínico y/o veterinario. Las sales farmacéuticamente aceptables y la metodología común para prepararlas son bien conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo P. Stahl, et al., Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, (VCHA/Wiley-VCH, 2002)
Un ser humano es un mamífero preferente. Tal como se usa aquí, "paciente" se refiere a un mamífero que necesita el tratamiento. Tal como se usa en el presente documento, el término "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto se refiere a una cantidad, o una dosis, que son eficaces para tratar un trastorno o una enfermedad, tal como la EHNA, la enfermedad renal crónica o la nefropatía diabética, tal como se describe en el presente documento. El profesional que realiza el diagnóstico, como experto en la materia, puede determinar fácilmente una cantidad efectiva mediante el uso de técnicas convencionales y observando los resultados obtenidos en circunstancias análogas. Al determinar la cantidad o la dosis eficaces de un compuesto, se tienen en cuenta varios factores, entre los que se incluyen, pero sin limitarlos, el compuesto que se va a administrar; la coadministración de otros agentes, si se usan; la especie de mamífero; su tamaño, edad y estado de salud general; el grado de afectación o la gravedad del trastorno; la respuesta del paciente individual; el modo de administración; las características de biodisponibilidad del preparado administrado; el régimen de dosis seleccionado; el uso de otra medicación concomitante; y otras circunstancias relevantes.
La composición farmacéutica se administra a un paciente en cantidades eficaces para tratar la enfermedad hepática, más particularmente, la EHNA. La cantidad o la dosis adecuadas y eficaces para tratar a un paciente las puede determinar un profesional sanitario.
Los términos "tratamiento" y "tratar'', tal y como se usan en este documento, tienen la intención de referirse a todos los procesos en los que puede haber una ralentización, una interrupción, una detención, un control o una parada de la progresión de un trastorno existente y/o de los síntomas del mismo, pero no indican necesariamente una eliminación total de todos los síntomas.
El término "enfermedad hepática", tal y como se usa en el presente documento, abarca las afecciones hepáticas o los síntomas asociados a la mediación de la ASK1, por ejemplo, la enfermedad hepática metabólica, la esteatosis, la fibrosis hepática, la colangitis esclerosante primaria (CEP), la cirrosis, la fibrosis hepática, la enfermedad del hígado graso no alcohólico (HGNA), la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), la lesión por isquemia reperfusión hepática y la cirrosis biliar primaria (CBP).
El término "vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptables" significa que el vehículo, el diluyente y los excipientes son farmacéuticamente compatibles con los demás ingredientes de la composición. En una forma de realización particular, las composiciones farmacéuticas se formulan como un comprimido o una cápsula para la administración oral. El comprimido o la cápsula pueden incluir un compuesto de la presente invención en una cantidad eficaz para tratar la enfermedad hepática, en particular la EHNA.
Las abreviaturas usadas en este documento están definidas según Aldrichimica Acta, Vol. 17, No. 1, 1984. Otras abreviaturas están definidas de la siguiente manera: "ACN" se refiere a acetonitrilo; "ADP" se refiere a difosfato de adenosina; "AIBN" se refiere a azobisisobutironitrilo; "ATP" se refiere a trifosfato de adenosina; "BSA" se refiere a la albúmina de suero bovino; "DCM" se refiere al diclorometano; "DMEDA" se refiere a la N,N'-dimetiletilendiamina; "DMEM" se refiere al medio de Eagle modificado de Dulbecco; "DMF" se refiere a dimetilformamida; "DMSO" se refiere a dimetilsulfóxido; "DTT" se refiere a ditiotreitol; "EtOH" se refiere a etanol o alcohol etílico; "FA" se refiere a ácido fórmico; "FBS" se refiere a suero bovino fetal; "HEK" se refiere a riñón embrionario humano; "HPLC" se refiere a cromatografía líquida de alto rendimiento; "IC50" se refiere a la concentración de un agente que produce el 50 % de la respuesta inhibitoria máxima posible para ese agente; "MAP" se refiere a la proteína activada por mitógenos; "MeOH" se refiere al metanol o alcohol metílico; "MOPS" se refiere al (ácido 3-(N-morfolino)propanosulfónico); "NBS" se refiere a la N-bromosuccinimida; "NIS" se refiere a la N-yodosuccinimida; "NP-40" se refiere a NP-40 tipo Tergitol que es nonil fenoxipolietoxietanol; "pASK1" se refiere a ASK1 fosforilada; "PE" se refiere a éter de petróleo; "TBAF" se refiere a fluoruro de tetra-n-butilamonio; "TFA" se refiere a ácido trifluoroacético; "THF" se refiere a tetrahidrofurano; "TMSCN" se refiere a trimetilsililcianuro; "t(R)" se refiere a tiempo de retención.
Los productos intermedios descritos en las siguientes preparaciones pueden contener varios grupos protectores nitrogenados, hidroxilados y ácidos, tales como los ésteres. El grupo protector variable puede ser el mismo o diferente en cada caso, dependiendo de las condiciones particulares de reacción y de las transformaciones particulares a realizar. Las condiciones de protección y de desprotección son bien conocidas por el experto en la técnica y están descritas en la literatura. Véase, por ejemplo Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, (T. Greene and P. Wuts, eds., 2d ed. 1991).
Los compuestos de la presente invención, o las sales de los mismos, pueden prepararse mediante varios procedimientos conocidos en la técnica, algunos de los cuales se ilustran en las secciones de Preparaciones y los Ejemplos a continuación. Los pasos de síntesis específicos para cada una de las rutas descritas pueden combinarse de diferentes maneras, para preparar compuestos de la invención, o sales de los mismos. Los productos de cada etapa pueden recuperarse mediante procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica, que incluyen la extracción, la evaporación, la precipitación, la cromatografía, la filtración, la trituración y la cristalización. Los reactivos y los materiales de partida están fácilmente disponibles para un experto en la técnica. Otros pueden prepararse mediante técnicas estándar de químicas orgánica y heterocíclica que son análogas a las síntesis de compuestos estructuralmente similares conocidos y a los procedimientos descritos en las secciones de Preparaciones y Ejemplos que vienen a continuación, incluyendo cualquier procedimiento novedoso.
Todos los sustituyentes, a menos que se indique lo contrario, son los definidos anteriormente. Los reactivos y los materiales de partida son generalmente fáciles de conseguir para un experto en la técnica. Otros se pueden preparar mediante técnicas estándar de químicas orgánica y heterocíclica que son análogas a las síntesis de compuestos estructuralmente similares conocidos y a los procedimientos descritos en las secciones de Preparaciones y Ejemplos que vienen a continuación, incluyendo cualquier procedimiento novedoso.
Preparaciones y ejemplos
Preparación 1
6-Aminopiridin-2-carbohidrazida
Figure imgf000005_0001
A una solución de 6-aminopiridin-2-carboxilato de metilo (145 g, 953 mmol) en MeOH (1,5 L) se añade hidrato de hidrazina (118 g, 2310 mmol). Se agita la mezcla de reacción a 75 °C bajo atmósfera de nitrógeno durante 16 horas. Se enfría la mezcla a temperatura ambiente y se recoge el precipitado por filtración y se seca al vacío para dar el compuesto del título (130 g, 89,7 %) como un sólido blanco. 1H NMR (40o MHz, d6-DMSO) 59,15 (br, 1H), 7,51 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,10 (d, J=7,2 Hz, 1H), 6,60 (d, J=8,4 Hz, 1H), 6,07 (br, 2H), 4,47 (br, 2H).
Preparación 2
N,6-Bis[(E)-dimetilaminometilenamino]piridin-2-carboxamida
Figure imgf000005_0002
Se agita una mezcla de 6-aminopiridin-2-carbohidrazida (65,0 g, 427 mmol) en N,N-dimetilformamida dimetil acetal (600 g, 5040 mmol) a 95 °C durante 16 horas. Se enfría la mezcla a temperatura ambiente y se concentra a presión reducida para dar un residuo amarillo. Se suspende el residuo en EtOAc (300 mL) y se agita durante 30 minutos a 25 °C. Se recoge el precipitado resultante por filtración y se seca al vacío para dar el compuesto del título (95,0 g, 84,8 %) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 58,85 (s, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,68 (t, J=7,6 Hz, 1H), 7,50 -7,45 (m, 1H), 6,91 (d, J= 7,6 Hz, 1H), 3,13 (s, 3H), 3,00 (s, 3H), 2,86 (s, 6H).
Preparación 3
6-(4-Isopropil-1,2,4-triazol-3-il)pyridin-2-amine
Figure imgf000006_0001
A una solución de N,6-bis[(E)-dimetilaminometilenmino]piridin-2-carboxamida (105,0 g, 360 mmol) en ACN (450 mL) y ácido acético (120 mL) se añade propan-2-amina (100 g, 1690 mmol) en porciones manteniendo la temperatura por debajo de 30 °C. Se agita la mezcla resultante a 110 °C durante 60 horas. Se enfría la mezcla de reacción a 25 °C y se elimina el disolvente a presión reducida. El residuo se disuelve en agua (500 mL) y se ajusta el pH ~10 con NaOH acuoso (1 N). Se recoge el precipitado resultante por filtración y se disuelve en DCM (500 mL), se seca sobre Na2SO4 anhidro y se concentra a presión reducida para dar un residuo blanco. Se suspende el residuo en EtOAc (100 mL), se agita durante 15 minutos y se añade lentamente PE (200 mL). Se recoge el precipitado resultante por filtración y se seca al vacío para dar el compuesto del título (47,0 g, 62,9 %) como un sólido blanquecino. ES/MS (m/z): 204,1 (M+H), LCMS: t(R) = 0,565 min en 0-30 % A a B, (Xtimate C18, 2,1*30 mm, 3 pm). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) 58,75 (s, 1H), 7,57 (t, J=8,0 Hz, 1H), 7,20 (d, J=7,2 Hz, 1H), 6,65 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,52 (spt, J=6,8 Hz, 1H), 1,52 (d, J=6,8 Hz, 6H).
Preparación 4
2-Cloro-6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)piridina
Figure imgf000006_0002
A una suspensión de 6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)piridin-2-amina (60,0 g, 289,2 mmol) en DCM (1200 mL) se añade cloruro de benciltrietilamonio (133,2 g, 578,4 mmol), seguido de la adición gota a gota de nitrito de terc-butilo (124,8 g, 1156,8 mmol) a 0 °C. La mezcla se calienta a 30 °C y se agita durante 17 horas. Se inactiva la reacción mediante la adición de NaHCO3 (1200 mL) aq. y se extrae el producto con DCM (3x1500 mL). Se lavan los extractos orgánicos con salmuera, se secan sobre Na2SO4 y se concentran al vacío para dar el producto bruto (64,363 g, 289,2 mmol) como un sólido amarillo. Se purifica el material mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 1 % de MeOH en DCM para dar el compuesto del título (36,4 g, 52,6 %) como un sólido marrón. ES/MS m/z: (35Cl/37Cl) 223,0/ 225,0 (M+H). 1HNMR (400 MHz, CDCl3) 58,37 (s, 1H), 8,26 (dd, J=0,8, 7,8 Hz, 1H), 7,80 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,38 (dd, J=0,8, 7,8 Hz, 1H), 5,67 - 5,57 (m, 1H), 1,59 - 1,54 (m, 6H) y 13CNMR(100 MHz, CDCl3) 5 = 150,63, 150,03, 148,31, 142,49, 139,82, 124,72, 122,38, 49,18, 23,72.
Preparación 5
2-Bromo-6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)piridina
Figure imgf000006_0003
A una solución de 6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)piridin-2-amina (10,0 g, 48,2 mmol) en dibromometano (150 mL) se añade bromuro de benciltrietilamonio (45,3 g, 193 mmol) y nitrito de terc-butilo (49,7 g, 482 mmol) a 25 °C. Se agita la mezcla a 25 °C durante 6 horas. Se inactiva la reacción con la adición de NaHCO3 aq. (30 mL) y se extrae el producto con DCM (150 mL). Se lavan los extractos orgánicos con salmuera (15 mL), se secan sobre Na2SO4 y se concentran al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 2,5 % al 3,3 % de MeOH en DCM para dar el compuesto del título (5,4 g, 37,7 %) como un sólido amarillo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 5 8,30 (s, 1H), 8,26 - 8,18 (m, 1H), 7,67 - 7,61 (m, 1H), 7,47 (d, J=8,0 Hz, 1H), 5,63 - 5,41 (m, 1H), 1,50 (d, J=7,2 Hz, 6H).
Preparación 6
6-Bromo-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona
Figure imgf000007_0001
Se añade MeSO3H (118 g, 1220 mmol, 80,0 mL) a una mezcla de 5-bromoindan-1-ona (25,0 g, 118 mmol) en DCM (200 mL) a 0 °C. Se añade NaN3 (7,78 g, 118 mmol) lentamente en porciones a esta mezcla. A continuación, se agita la mezcla durante 30 minutos más. Se agita la mezcla de reacción a 22 °C durante 16 horas. El pH se ajusta a 10 con una mezcla acuosa de NaOH (20 % en peso). Se extrae la mezcla con DCM (3x450 mL), se combinan los extractos orgánicos, se secan sobre MgSO4 y se elimina el disolvente a presión reducida para dar el material bruto como un aceite amarillo. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 50 % de EtOAc en PE para dar el compuesto del título (19,0 g, 34,8 %) como un sólido amarillo. ES/MS m/z(79Br/81Br): 225,8/ 227,8 (M+H), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 57,91 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,48 (dd, J=1,8, 8,3 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 6,84 (br s, 1H), 3,57 (dt, J=2,8, 6,7 Hz, 2H), 2,98 (t, J=6,5 Hz, 2H).
Preparación 7
6-Metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona
Figure imgf000007_0002
A una mezcla de 6-bromo-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona (19,0 g, 82,4 mmol), CH3B(OH)2 (20,8 g, 329 mmol) y Na2CO3 (18,4 g, 165 mmol) en 1,4-dioxano (200 mL) y agua (10,0 mL) se añade [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (2,46 g, 3,29 mmol) bajo atmósfera de nitrógeno y se agita la mezcla a 105 °C durante 16 horas bajo atmósfera de nitrógeno. Se filtra la suspensión a través de una almohadilla de tierra de diatomeas y se lava la torta del filtro con DCM (3x250 mL). Los filtrados combinados se lavan con agua (100 mL) y salmuera (80 mL), se secan sobre Na2SO4 y el disolvente se evapora a presión reducida. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 50 % de EtOAc en PE para dar el compuesto del título (13,0 g, 95,2 %) como un sólido amarillo. ES/MS (m/z): 162,0 (M+H), 1H NMR (400 m Hz , CDCl3) 57,94 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,15 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,89 (br s, 1H), 3,55 (dt, J=2,9, 6,6 Hz, 2H), 2,94 (t, J=6,5 Hz, 2H), 2,37 (s, 3H).
Preparación 8
7-Iodo-6-metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona
Figure imgf000007_0003
A una suspensión de 6-metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona (10,0 g, 60,3 mmol) en H2SO4 (200 mL) se añade NIS (14,0 g, 60,3 mmol) lentamente en porciones a -10 °C y se agita la mezcla de reacción a -10 °C durante 30 minutos. Se vierte la mezcla de reacción en agua helada (450 mL) y se extrae la solución con EtOAc (3x600 mL). Se lavan los extractos orgánicos combinados con solución saturada de NaHCO3 y salmuera, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran hasta obtener un residuo. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 50 % de EtOAc en PE para dar el compuesto del título (22,0 g) como un sólido amarillo. Se tritura el sólido con MeOH/DCM=1/20 (300 mL) y se filtra para dar el compuesto del título (7,54 g, 33,0 %) como un sólido blanco. ES/MS (m/z): 288,0 (M+H), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 58,45 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 6,93 (br s, 1H), 3,54 (dt, J=2,8, 6,7 Hz, 2H), 2,89 (t, J=6,7 Hz, 2H), 2,44 (s, 3H).
Preparación 9
7-(1-Isopropilpirazol-4-il)-6-metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona
Figure imgf000008_0001
A una solución de 7-yodo-6-metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona (178,0 mg, 0,5890 mmol) en 1,4-dioxano (5,5 mL) y agua (0,7 mL) se añade 1-isopropil-4-(4,4,5,5-tetrametiM,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazol (01147 g, 0,4712 mmol), el complejo de diclorometano de dicloruro de 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno-paladio(II) (0,0491 g, 0,0589 mmol) y K2CO3 (0,163 g, 1,178 mmol). Se desgasifica la mezcla con nitrógeno y se agita a 100 °C durante 2 horas en condiciones de microondas. Se filtra la mezcla a través de un cartucho de gel de sílice de 2 cm y se elimina el disolvente al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 4 % de MeOH en DCM para dar el compuesto del título (142,0 mg, 85,05 %) como un aceite amarillo. ES/MS (m/z): 270,2 (M+H).
Preparación 10
7-(4-Ciclopropilimidazol-1-il)-6-metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona
Figure imgf000008_0002
A una suspensión de 7-yodo-6-metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona (446,0 mg, 1,476 mmol), 4-ciclopropil-1H-imidazol (218,4 mg, 1,919 mmol) en DMSO (2,5 mL) se añade K2CO3 (0,408 g, 2,952 mmol). Se desgasifica la mezcla con una corriente de N2 durante 5 minutos. Se añaden secuencialmente L-Prolina (0,034 g, 0,295 mmol) y CuI (0,0562 g, 0,295 mmol) y se agita la mezcla resultante a 130 °C durante 5 horas en condiciones de microondas. Se inactiva lentamente la mezcla de reacción con agua (30 mL). Se extrae la fase acuosa con EtOAc (2x80 mL) y se lava con salmuera saturada (25 mL). Se secan los extractos orgánicos sobre Na2SO4, se filtran y se evaporan hasta sequedad. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 4 % de MeOH en DCM para dar el compuesto del título (0,198 g, 47,68 %) como un sólido blanco. ES/MS (m/z): 268,0 (M+H).
Preparación 11
5-bromo-2-(bromometil)piridin-3-carboxilato de etilo
Figure imgf000008_0003
A una suspensión de 5-bromo-2-metil-piridin-3-carboxilato de etilo (9,00 g, 36,9 mmol) y NBS (6,63 g, 37,2 mmol) en CCl4 (100 mL) se añade AIBN (605 mg, 3,69 mmol) bajo una atmósfera de N2 y se agita la mezcla de reacción a 80 °C durante 16 horas. Se inactiva la reacción con Na2S2O3 acuoso saturado (200 mL) y se extrae la mezcla con DCM (3x350 mL). Se lavan los extractos orgánicos con salmuera, se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran a presión reducida hasta obtener un residuo. Se purifica el residuo por cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 5 % de EtOAc en PE para dar el compuesto del título (8,30 g, 64,8 %) como un semisólido rojo. ES/MS m/z(79Br/81Br): 321,8/323,8/325,8 (M+H), 1H RMN (400 MHz, CDCl3) 58,74 (d, J=2,5 Hz, 1H), 8,39 (d, J=2,5 Hz, 1H), 4,98 (s, 2H), 4,44 (q, J=7,4 Hz, 2H), 1,44 (t, J=7,0 Hz, 3H).
Preparación 12
5-bromo-2-(cianometil)piridin-3-carboxilato de etilo
Figure imgf000008_0004
A una solución de 5-bromo-2-(bromometil)piridin-3-carboxilato de etilo (7,20 g, 20,7 mmol) en CH3CN (100 mL) se añade TBAF (1,0 mol/L) en THF (31,1 mL, 31,1 mmol) y TMSCN (3,15 g, 31,1 mmol) a 0 °C. Se agita la mezcla de reacción a 20 °C durante 2 horas. Se lava la mezcla con agua (100 mL) y se extrae con EtOAc (3x150 mL). Se secan los extractos orgánicos sobre MgSO4 y se elimina el disolvente a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 10 % de EtOAc en PE para dar el compuesto del título (5,00 g, 54,0 %, aproximadamente 65 % de pureza) como un semisólido blanco. ES/MS m/z(79Br/81Br): 268,9/ 270,9 (M+H).
Preparación 13
3-Bromo-7,8-dihidro-6H-1,6-naftiridin-5-ona
Figure imgf000009_0001
A una mezcla de 5-bromo-2-(cianometil)piridin-3-carboxilato de etilo (4,64 g, 10,4 mmol, 60,2 % en masa) en EtOH (150 mL) se añade Raney-Ni (50 % en masa en agua, 0,464 g, 2,71 mmol). Se agita la mezcla a 50 °C bajo hidrógeno (103 kPa) durante 2 horas. Se filtra la suspensión a través de una almohadilla de tierra de diatomeas y se lava la torta del filtro con EtOH (3x120 mL). Se concentra el filtrado y se purifica por cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 3,3 % de MeOH en DCM para dar un residuo (3,5 g) como un sólido amarillo. Se purifica el material aún más por medio de Pre-HPLC: Columna LC: Phenomenex Synergi Max-RP 250x50 mmx10 ^m; A: H2O (0,1 % TFA); B: ACN, gradiente: 5-35 % B en A; temperatura de la columna: temperatura ambiente; caudal: 110 mL/min. Tras la purificación previa a la HPLC, se evapora el eluyente para eliminar los disolventes orgánicos. Se ajusta el pH de la solución acuosa residual con Na2CO3 (sólido) a pH ~10 y se extrae con DCM (3x200 mL). Se lavan los extractos orgánicos combinados con H2O (100 mL) y salmuera (100 mL), se secan sobre Na2SO4, se filtran y se concentran para dar el compuesto del título (800 mg, 31,2 %) como un sólido amarillo. ES/MS m/z(79Br/81Br): 226,9/228,9 (M+H), LCMS: t(R) = 1,552 min, (Xtimate C18, 2,1x30 mm, 3 |jm), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 58,69 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,45 (d, J=2,4 Hz, 1H), 6,50 (br s, 1H), 3,66 (dt, J=2,8, 6,8 Hz, 2H), 3,17 (t, J=6,8 Hz, 2H).
Preparación 14
3-(4-Ciclopropilimidazol-1-il)-7,8-dihidro-6H-1,6-naftiridin-5-ona
Figure imgf000009_0002
A una solución de 3-bromo-7,8-dihidro-6H-1,6-naftiridin-5-ona (0,100 g, 0,437 mmol) y 4-ciclopropil-1H-imidazol (0,0709 g, 0,655 mmol) en DMF (5,00 mL) se añade K2CO3 (0,181 g, 1,31 mmol). Se desgasifica la mezcla con una corriente de N2 durante 5 minutos. Se añaden secuencialmente DMEDA (0,0193 g, 0,218 mmol) y Cul (0,0832 g, 0,437 mmol) y se agita la mezcla resultante a 110 °C durante 16 horas bajo N2. Se extrae la mezcla con EtOAc (2x75mL) y se lava con salmuera saturada (3x25 mL). Se secan los extractos orgánicos sobre Na2SO4, se filtran y se evaporan hasta sequedad. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 5 % de MeOH en DCM para dar el compuesto del título (0,060 g, 48,6 %) como un sólido verde claro. ES/MS (m/z): 255,0 (M+H), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 58,74 (d, J=3,2 Hz, 1H), 8,33 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,31 (br s, 1H), 3,73 (dt, J=3,2, 6,8 Hz, 2H), 3,39 - 3,15 (m, 2H), 1,99 - 1,90 (m, 1H), 0,96 - 0,88 (m, 4H).
Preparación 15
3-(1-Isopropilpirazol-4-il)-7,8-dihidro-6H-1,6-naftiridin-5-ona
Figure imgf000009_0003
A una solución de 3-bromo-7,8-dihidro-6H-1,6-naftiridin-5-ona (0,0750 g, 0,328 mmol) y 1-isopropil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)pirazol (0,116 g, 0,492 mmol) en 1,4-dioxano (4,00 mL) y agua (1,00 mL) se añade Na2CO3 (0,104 g, 0,983 mmol) y Pd(PPh3)4 (0,0759 g, 0,0655 mmol). Se agita la mezcla a 110 °C durante 16 horas bajo N2. Se extrae la mezcla con dCm (2x75mL) y se lava con salmuera saturada (25 mL). Se secan los extractos orgánicos sobre Na2SO4, se filtran y se evaporan hasta sequedad. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 3,3 % de MeOH en DCM para dar el compuesto del título (0,0800 g, 90,5 %) como un sólido blanco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 58,71 (d, J=2,0 Hz, 1H), 8,31 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 600 (br s, 1H), 4,49 (spt, J=6,8 Hz, 1H), 3,61 (dt, J=3,2, 6,4 Hz, 2H), 3,14 (t, J=6,4 Hz, 2H), 1,50 (d, J=6,8 Hz, 6H)
Ejemplo 1
7-(1-Isopropilpirazol-4-il)-2-[6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)-2-piridil]-6-metil-3,4-dihidroisoquinolin-1-ona
Figure imgf000010_0001
2-Cloro-6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)piridina (150,4 mg, 0,6011 mmol), 7-(1-isopropilpirazol-4-il)-6-metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona (142,0 mg, 0,501 mmol), XantPhos Pd G3 (0,05001 g, 0,05009 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (XantPhos) (0,0299 g, 0,05009 mmol) y Cs2CO3 (0,2856 g, 0,8766 mmol) se añaden junto con 1,4-dioxano (4,0 mL). Se calienta la mezcla resultante a 110 °C y se agita durante 3 horas en condiciones de microondas. Se filtra la mezcla a través de un cartucho de gel de sílice de 2 cm y se elimina el disolvente al vacío. Se purifica el residuo aún más por medio de Pre-HPLC: Columna LC: SunFire C1830 x 100 mm 5 ^m; A: H2O (0,1 % FA); B: ACN (0,1 % FA), gradiente: 38-53 % B en A a 0-10 min, parada a 17 min; temperatura de la columna: temperatura ambiente; caudal: 30 mL/min, t(R) = 8,8 minutos (UV). Se disuelve el material en agua y se liofiliza para dar el compuesto del título (130,0 mg, 54,11 %) como un sólido blanco. ES/MS (m/z): 456,3 (M+H).
Ejemplo 2
7-(4-Ciclopropilimidazol-1-il)-2-[6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)-2-piridil]-6-metil-3,4-dihidroisoquinolin-1-ona
Figure imgf000010_0002
2-Cloro-6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)piridina (99,2 mg, 0,397 mmol), 7-(4-ciclopropilimidazol-1-il)-6-metil-3,4-dihidro-2H-isoquinolin-1-ona (93,0 mg, 0,331 mmol), XantPhos Pd G3 (0,033 g, 0,0331 mmol), 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno (XantPhos) (0,0201 g, 0,0331 mmol) y Cs2CO3 (0,188 g, 0,578 mmol) se añaden juntos en 1,4-dioxano (3,0 mL). Se calienta la mezcla resultante a 110 °C y se agita durante 3 horas en condiciones de microondas. Se filtra la mezcla a través de un cartucho de gel de sílice de 2 cm y se elimina el disolvente al vacío. Se purifica el residuo aún más por medio de Pre-HPLC: Columna LC: XBridge C1830 x 100 mm 5 ^m; A: H2O (10 mM n H4HC03); B: ACN, gradiente: 27-42 % B en A a 0-12 min, parada a 17 min; temperatura de la columna: temperatura ambiente; caudal: 35 mL/min, t(R) = 7,9 minutos (UV). Se disuelve el material en agua y se liofiliza para dar el compuesto del título (50,0 mg, 31,7 %) como un sólido blanco. ES/MS (m/z): 454,0 (M+H).
Ejemplo 3
3-(4-Ciclopropilimidazol-1-il)-6-[6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)-2-piridil]-7,8-dihidro-1,6-naftiridin-5-ona; hidroclururo
Figure imgf000010_0003
Una solución de 2-bromo-6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)piridina (0,0819 g, 0,276 mmol), 3-(4-ciclopropilimidazol-1-il)-7,8-dihidro-6H-1,6-naftiridin-5-ona (0,060 g, 0,212 mmol) y Cs2CO3 (0,208 g, 0,637 mmol) en 1,4-dioxano (4,00 mL) se agita durante 1 minuto bajo N2. Se añaden secuencialmente XantPhos (0,0368 g, 0,0637 mmol) y Pd2(dba)3 (0,0200 g, 0,0212 mmol) y se agita la mezcla resultante a 110 °C durante 5 horas bajo N2. Se diluye la mezcla con DCM (2x75mL) y se lava con salmuera saturada (25 mL). Se seca la capa orgánica sobre Na2SO4, se filtra y se evapora hasta sequedad. Se purifica el producto bruto mediante cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 5 % de MeOH en DCM para dar un residuo. Se purifica el material aún más por Pre-HPLC: Columna LC: YMC-Actus Triart C18 150x30 5 ^m; A: H2O (0,05 % HCl); B: ACN, gradiente: 0-70 % B en A; temperatura de la columna: temperatura ambiente; caudal: 25 mL/min. Se disuelve el material en agua y se liofiliza para dar el compuesto del título (0,0468 g, 44,6 %) como sólido blanco. ES/MS (m/z): 441,0 (M+H), LCMS: t(R) = 1,303 min en 10-80 % A a B, 4 min cromatografía (Xtimate C182,1x30 mm), 1H NMR (400 MHz, CD3OD) 59,84 (s, 1H), 9,52 (d, J=1,6 Hz, 1H), 9,09 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,78 (d, J=3,2 Hz, 1H), 8,25 -8,21 (m, 1H), 8,17 (t, J=7,6 Hz, 1H), 8,11 -8,07 (m, 1H), 7,97 (s, 1H), 5,70 (td, J=6,4, 13,2 Hz, 1H), 4,51 (t, J=6,4 Hz, 2H), 3,51 (t, J=6,4 Hz, 2H), 2,16 -2,01 (m, 1H), 1,71 (d, J=6,4 Hz, 6H), 1,22 - 1,15 (m, 2H), 0,99 - 0,93 (m, 2H)
Ejemplo 4
3-(1-Isopropilpirazol-4-il)-6-[6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)-2-piridil]-7,8-dihidro-1,6-naftiridin-5-ona
Figure imgf000011_0001
A una solución de 3-(1-isopropilpirazol-4-il)-7,8-dihidro-6H-1,6-naftiridin-5-ona (0,0800 g, 0297 mmol) y 2-bromo-6-(4-isopropil-1,2,4-triazol-3-il)piridina (0,114 g, 0,386 mmol) en 1,4-dioxano (6,00 mL) se añade Cs2CO3 (0,242 g, 0,741 mmol). Se desgasifica la mezcla con una corriente de N2 durante 5 minutos. Se añaden secuencialmente XantPhos (0,0343 g, 0,0593 mmol) y Pd2(dba)3 (0,0280 g, 0,0297 mmol) y se agita la mezcla resultante a 110 °C durante 3 horas bajo N2. Se extrae la mezcla con DCM (2x75mL) y se lava con salmuera saturada (25 mL). Se secan los extractos orgánicos sobre Na2SO4, se filtran y se evaporan hasta sequedad. Se purifica el producto bruto por cromatografía flash en gel de sílice, eluyendo con un gradiente del 0 % al 5 % de MeOH en DCM. El residuo se recristaliza de agua y CH3CN y se seca por liofilización para dar el compuesto del título (0,1165 g, 85,6 %) como un sólido amarillo claro. ES/MS (m/z): 443,1 (M+H), LCMS: t(R = 1,918 min en 10-80 % A a B A: H2O (0,05 % HCl); B: ACN, 4 min cromatografía (Xtimate C182,1*30 mm), 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 5 8,83 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,50 (d, J=2,4 Hz, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,14 (d, J=7,2 Hz, 1H), 8,06 - 7,99 (m, 1H), 7,96 - 7,91 (m, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 5,52 (quin, J=6,8 Hz, 1H), 4,62 - 4,52 (m, 1H), 4,36 (t, J=6,8 Hz, 2H), 3,35 (t, J=6,4 Hz, 2H), 1,58 (d, J=1,6 Hz, 6H), 1,57 (d, J=1,6 Hz, 6H).
Ensayos biológicos
Efecto del inhibidor de la ASK1 determinado por el ensayo enzimático de la ASK1
El propósito de este ensayo es determinar el efecto de los inhibidores de la ASK1 en la producción de ADP por ASK1. Se usa el dominio catalítico recombinante de ASK1 humana (hASK1) marcado con glutatión S-transferasa, y la cinasa MAP humana de longitud completa marcada con histidina (MKK6) y el ATP son el sustrato y el cofactor, respectivamente.
El ensayo se realiza usando un kit de ensayo de quinasa ADP-Glo™ (Promega, Catálogo # V9102) de acuerdo con el protocolo del fabricante con las siguientes modificaciones. Brevemente, hASK1 (0,25 nM) y Mk K6 (300 nM) en un tampón (10 mM MOPS pH 7,0; 10 mM Mg-Acetato; 1 mM DTT; 0,025% NP-40; 0,05% BSA; 1,5% glicerol) se incuban con inhibidores de ASK1 a concentraciones variables que van de 10,00 uM a 0,17 nM durante 15 minutos, seguido de la incubación con ATP (100 uM) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se añade el reactivo ADP-Glo™ para terminar la reacción de la cinasa y agotar el ATP restante. A continuación se añade el reactivo de detección de quinasas para convertir el ADP en ATP. Se mide el ATP recién sintetizado mediante una reacción de luciferasa/luciferina, y se determina la luminiscencia con Envision (PerkinElmer). Las intensidades de luminiscencia se analizan con GeneData y se ajustan a una curva logística de 4 parámetros respuesta de dosis-inhibidor para determinar los valores IC50, usando los efectos de la 5-(4-ciclopropil-1H-imidazol-1-il)-2-fluoro-4-metil-N-{6-[4-(propan-2-il)-4H-1,2,4-triazol-3-il]piridin-2-il}benzamida como estándar y el vehículo DMSO para una inhibición del 100 % y del 0 %, respectivamente.
Los compuestos de los Ejemplos 1-4 del presente documento se ensayan esencialmente como se ha descrito anteriormente y presentan valores de IC50 como se muestra en la Tabla 1 a continuación.
Figure imgf000012_0001
Estos resultados indican que los compuestos de los Ejemplos 1-4 inhiben la actividad enzimática de ASK1 como se muestra en la Tabla 1.
Efecto del inhibidor de ASK1 determinado por el ensayo de autofosforilación de ASK1 (Thr838)
El propósito de este ensayo es determinar el efecto de los inhibidores de ASK1 en la autofosforilación de la ASK1 estimulada por H2O2 en Thr838 en células HEK293 que sobreexpresan ASK1 humano.
Las células HEK293 que sobreexpresan la ASK1 humana de longitud completa marcada con hemaglutinina (HA) se mantienen en DMEM suplementado con 10 % de FBS a 37 °C y el 5 % de CO2. Para el ensayo, se colocan las células en placas de 96 pocillos recubiertas de matrigel (25.000 células/pocillo) y se incuban durante la noche. Las células se tratan con inhibidores de ASK1 a concentraciones variables que van desde 10,00 pM a 0,17 nM durante 1 hora, seguido de la estimulación con 1 mM de H2O2 durante 10 minutos. A continuación, se lisan las células con tampón de lisis de fluorescencia homogénea resuelta en el tiempo (HTRF®) (Cisbio, Catálogo n° 64KL1FDF) que contiene inhibidores de fosfatasas (ThermoFisher, Catálogo n° 78430). La pASK1 se cuantifica mediante HTRf®, usando un par de anticuerpos anti-HA y anti-pASKl (Thr838) personalizados por Cisbio, en Envision (PerkinElmer) con longitudes de onda de emisión y excitación de 620 y 665 nm, respectivamente. Los cocientes de las intensidades de fluorescencia a 665 nm y 620 nm se analizan con GeneData y se ajustan a una curva logística de 4 parámetros respuesta a la dosisinhibidor para determinar los valores de IC50, usando los efectos de la 5-(4-ciclopropil-1H-imidazol-1-il)-2-fluoro-4-metil-N-{6-[4-(propan-2-il)-4H-1,2,4-triazol-3-il]piridin-2-il}benzamida como estándar y el vehículo DMSO como inhibición del 100 % y del 0 %, respectivamente.
Los compuestos del Ejemplo 1-4 del presente documento se prueban esencialmente como se ha descrito anteriormente y presentan valores de IC50 como se muestra en la Tabla 2 a continuación.
Cuadro 2
Figure imgf000012_0002
Estos resultados indican que los compuestos de los Ejemplos 1-4 inhiben la autofosforilación de la ASK1 estimulada por H2O2 en Thr838 en células HEK293 como se muestra en la Tabla 2 anterior.

Claims (12)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de la fórmula
Figure imgf000013_0001
en la que
X es CH o N;
Q es CH3 o H;
R es
Figure imgf000013_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que X es N.
3. Un compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que Q es H.
4. Un compuesto según la reivindicación 1 en el que X es CH.
5. Un compuesto según la reivindicación 1 o la reivindicación 4 en el que Q es CH3.
6. Un compuesto según una de las reivindicaciones 1 o 5, en el que R es
Figure imgf000013_0003
7. Un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 5, en el que R es
Figure imgf000013_0004
8. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es 3-(4-ciclopropilimidazol-1-il)-6-[6-(4-isopropil-1.2.4- triazol-3-il)-2-piridil]-7,8-dihidro-1,6-naftiridin-5-ona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que el compuesto es 7-(4-ciclopropilimidazol-1-il)-2-[6-(4-isopropil-1.2.4- triazol-3-il)-2-piridil]-6-metil-3,4-dihidroisoquinolin-1-ona, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un vehículo, un diluyente y un excipiente farmacéuticamente aceptables.
11. Un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para su uso en terapia.
12. Un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para su uso en el tratamiento de la EHNA.
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