ES2862126T3 - Compuestos de pirimidín-hidroxiamida como inhibidores de histona desacetilasa - Google Patents

Compuestos de pirimidín-hidroxiamida como inhibidores de histona desacetilasa Download PDF

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David Tamang
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Ralph Mazitschek
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Abstract

Compuesto de fórmula I: **(Ver fórmula)** o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que, Rx se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo, -OH, -C(O)R1, -CO2R1, - C(O)N(R1)2, arilo, -C(S)N(R1)2 y S(O)2R1, en el que arilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo, Ry se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo, -OH, -C(O)R1, -CO2R1 y - C(O)N(R1)2, Rz se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, alquenilo C1-6, alquinilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo y heteroarilo, cada uno de los cuales puede sustituirse opcionalmente con alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo o -OH, y cada R1 se selecciona, independientemente en cada aparición, del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6- heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo, en el que cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3- 7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6- heteroarilo pueden sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo.

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos de pirimidín-hidroxiamida como inhibidores de histona desacetilasa
Solicitudes relacionadas
La presente solicitud reivindica prioridad de las solicitudes provisionales de patente US n° de serie 61/889.295, presentada el 10 de octubre de 20l3, n° 61/994.754, presentada el 26 de febrero de 2014 y n° 61/979.694, presentada el 15 de abril de 2014.
Antecedentes
Una diana biológica de interés reciente es la histona desacetilaa (HDAC) (ver, por ejemplo, un comentario sobre la utilización de inhibidores de las histona-desacetilasas para el tratamiento del cáncer: Marks et al. Nature Reviews Cancer 7, 194, 2001; Johnstone et al. Nature Reviews Drug Discovery 287). La modificación post-traduccional de las proteínas mediante acetilación y desacetilación de los residuos de lisina desempeña un papel crucial en la regulación de sus funciones celulares. Las HDAC son cinc hidrolasas que modulan la expresión génica mediante desacetilación de los residuos de N-acetil-lisina de las proteínas histonas y otros reguladores transcripcionales (Hassig et al., Curr. Opin. Chem. Biol. 1,300-308, 1997). Las HDAC participan en rutas celulares que controlan la forma y diferenciación celulares, y se ha mostrado que un inhibidor de HDAC resulta eficaz en el tratamiento de un cáncer que de otro modo sería recalcitrante (Warrell et al., J. Natl. Cancer Inst. 90, 1621-1625, 1998).
En este tiempo, se han identificado once HDAC humanas, que utilizan Zn como un cofactor (Taunton et al., Science 272, 408-411, 1996; Yang et al. J. Biol. Chem. 272:28001-28007, 1997. Grozinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.
96, 4868-4873, 1999; Kao et al., Genes Dev. 14:55-66, 2000. Hu et al. J. Biol. Chem. 275, 15254-15264, 2000; Zhou et al., Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A. 98, 10572-10577, 2001; Venter et al., Science 291, 1304-1351, 2001) y estos elementos se clasifican en tres clases (clase I, II y IV) basándose en la homología de las secuencias de sus ortólogos de levadura (O. Witt et al., Cancer Letters 277, 8-21,2009). Entre las HDAC de clase I se incluyen HDAC1, HDAC2, HDAC3 y HDAC8 y se denominan HDAC "clásicas", que implica un bolsillo catalítico con un ion Zn2+ en su base. El documento n° US 2012/121502 da a conocer compuestos pirimidín-hidroxiamida y la utilización de dichos compuestos en la inhibición de HDAC6 y en el tratamiento de diversas enfermedades, trastornos o condiciones relacionados con HDAC6.
Sigue existiendo una necesidad de preparación de inhibidores de HDAC estructuralmente diversos, particularmente que resulten inhibidores potentes y/o selectivos de clases particulares de HDAC y de HDAC individuales.
Descripción resumida de la invención
En la presente memoria se proporcionan compuestos, composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, y métodos de utilización de dichos compuestos para tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados a la actividad de HDAC, particularmente enfermedades y trastornos que implican cualquier tipo de expresión de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6. Entre las enfermedades que implican expresión de HDAC1, HDAC2 y/o HdAc 6 se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, diversos tipos de cáncer, enfermedades neurodegenerativas y hemoglobinopatías, tales como anemia de células falciformes y beta-talasemia.
De esta manera, en un aspecto, en la presente memoria se proporciona un compuesto de fórmula I:
Figure imgf000002_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización particular de la invención, en la presente memoria se proporciona un compuesto de fórmula II:
Figure imgf000003_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización particular de la invención, en la presente memoria se proporciona un compuesto de fórmula III:
Figure imgf000003_0002
En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de formula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona un método de inhibición de la actividad de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona un método de inhibición de la actividad de cada uno de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 respecto a otros HdAC en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En algunas realizaciones, el compuesto presenta una selectividad para cada uno de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 que es 5 a 1000 veces superior que para otros HDAC. En otras realizaciones, el compuesto presenta una selectividad para cada uno de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 al someterlo a ensayo en un ensayo de enzima HDAC, que es aproximadamente 5 a 1000 veces superior que para otros HDAC.
En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona un método de tratamiento de una enfermedad mediada por uno o más HDAC en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto que lo necesita, un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En algunas realizaciones, la enfermedad está mediada por HDAC1 y/o HDAC2. En otras realizaciones, la enfermedad está mediada por HDAC6. En otras realizaciones, la enfermedad está mediada por HDAC1 y/o HDAC2 y/o HDAC6.
En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona un método de tratamiento de una enfermedad en un sujeto, que comprende administrar en el mismo un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. En una realización, la enfermedad es una hemoglobinopatía. En otra realización, la enfermedad es la enfermedad de células falciformes. En todavía otra realización, la enfermedad es beta-talasemia.
En una realización adicional, la enfermedad es una enfermedad neurodegenerativa. La enfermedad neurodegenerativa puede seleccionarse de un grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, demencia del lóbulo frontotemporal, parálisis supranuclear progresiva, demencia corticobasal, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Charcot-Marie-Tooth y neuropatía periférica.
En una realización adicional, la enfermedad es un cáncer o una enfermedad proliferativa. El cáncer puede seleccionarse de un grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de colon y rectal, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer cerebral, cáncer renal, cáncer ovárico, cáncer de estómago, cáncer de piel, cáncer óseo, cáncer gástrico, cáncer de mama, glioma, glioblastoma, neuroblastoma, carcinoma hepatocelular, carcinoma renal papilar, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, leucemia, linfomas, mielomas, retinoblastoma, cáncer cervical, melanoma y/o cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer uterino, cáncer testicular, cáncer esofágico y tumores sólidos. En otra realización, el cáncer es cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, neuroblastoma, leucemia o linfomas. En todavía otra realización, el cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas (CPCNP) o cáncer pulmonar de células pequeñas. En otra realización, el cáncer es un cáncer hematológico. En una realización adicional, el cáncer hematológico es una leucemia o linfoma. El linfoma puede ser linfoma de Hodgkin o linfoma no de Hodgkin.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para inhibir la migración de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para inducir la maduración de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para alterar la progresión del ciclo celular de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para reducir la viabilidad y supervivencia de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para inducir la diferenciación de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para potenciar el tratamiento de ATRA de baja concentración de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para inducir la parada del ciclo celular de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para tratar el neuroblastoma en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 001, compuesto X o compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En una realización adicional de los métodos de tratamiento indicados en la presente memoria, el sujeto que debe tratarse es un ser humano.
Otros objetivos, características y ventajas resultarán evidentes a partir de la descripción detallada siguiente. La descripción detallada y ejemplos específicos se proporcionan a título ilustrativo únicamente debido a que diversos cambios y modificaciones dentro del espíritu y alcance de la invención resultarán evidentes para el experto en la materia a partir de dicha descripción detallada. Además, los ejemplos demuestran el principio de la invención.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 es un gráfico que muestra la inducción de la globina fetal (% de ARNm de HbG) tras la administración de compuesto 001 a una concentración de 1, 5 y 10 pM.
Figura 2A-F: se sometieron a ensayo el compuesto 001 y MS-275 (Entinostat) para sus efectos sobre la proliferación de progenitores hematopoyéticos eritroides, mieloides y megacariocíticos humanos en formulaciones de medio que contenían diversas citoquinas. Los paneles izquierdos muestran la concentración de inhibición al 50% del crecimiento de las colonias (IC50) de cada compuesto. Los paneles derechos muestran el número absoluto de colonias en cada placa en cada ensayo, que se representan gráficamente para el control de solvente (DMSO) o los compuestos indicados a 1 pM.
La figura 3a muestra las curvas de dosis-respuesta para el compuesto 001 el día 0, día 3, día 5 y día 7 con la dosis semimáxima (IC50) en cada día indicado mediante una línea discontinua.
La figura 3B muestra el crecimiento relativo de las células H929 durante el tiempo en ausencia de fármaco, así como en presencia de dosis crecientes de compuesto 001. La línea discontinua indica el nivel de viabilidad el día 0; de esta manera, las dosis superiores a 3 pM resultaron en una reducción neta de la viabilidad de las células H929.
La figura 4 es un grupo de gráficos que muestra los resultados de los ensayos de migración en células de neuroblastoma. La figura 4A es un gráfico que muestra los datos de migración normalizados (DO 570) de células de neuroblastoma SK-N-SH, normalizados respectos a los datos de CTG. La figura 4B es un gráfico que muestra los datos de migración normalizados (recuento celular) de células de neuroblastoma SK-N-SH, normalizados respectos a los datos de CTG. La figura 4C es un gráfico que muestra las células de neuroblastoma SK-N-SH (CTG normalizado respecto a DMSO). Se administró el compuesto 001 a diversas concentraciones. El gefitinib es un inhibidor de EGFR. Se utilizó EGFR para estimular la migración de las células de cáncer.
La figura 5 es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma BE(2)-C tras el tratamiento durante 4 días con compuesto X comparativo a una concentración de 0,5 pM (figura 5A), 1 pM (figura 5B) y 3 pM (figura 5C). La figura 5d muestra los resultados de un experimento de control positivo en el que se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 4 días con 1 pM de ATRA (ácido todo-trans-retinoico). La figura 5E muestra los resultados de un experimento de control negativo en el que las células de neuroblastoma BE(2)-C se trataron durante 4 días con 1 pM de un inhibidor selectivo de HdAc 6.
La figura 6 es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma SH-SY5Y tras el tratamiento durante 72 horas con 1 pM de ATRA (ácido todo-transretinoico) (figura 6A), un inhibidor selectivo de HDAC6 (figura 6B), el compuesto X comparativo (figura 6C) y otro inhibidor selectivo de HDAC6 (figura 6D).
La figura 7 es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma BE(2)-C tras el tratamiento durante 72 horas con 1 pM de ATRA (ácido todo-transretinoico) (figura 7A), un inhibidor selectivo de HDAC6 (figura 7B), el compuesto X comparativo (figura 7C) y otro inhibidor selectivo de HDAC6 (figura 7D).
La figura 8 es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración. La figura 8A es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma BE(2)-C tras el tratamiento durante 2 días con 3 pM de compuesto 001. La figura 8B es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma SH-SY5Y tras el tratamiento durante 2 días con 3 pM de compuesto 001. La figura 8C es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma BE(2)-C tras el tratamiento durante 2 días con 3 pM de compuesto X.
La figura 9 es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma BE(2)-C tras el tratamiento durante 48 horas con compuesto 001 a una concentración de 0,5 pM (figura 9A), 2 pM (figura 9B) y 4 pM (figura 9C). La figura 9D muestra los resultados de un experimento de control positivo en el que se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 48 horas con 1 pM de ATRA (ácido todo-trans-retinoico).
La figura 10 es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma BE(2)-C tras el tratamiento durante 4 días con un inhibidor selectivo de HDAC3 a una concentración de 1 pM (figura 10A), 0,5 pM (figura 10B) y 3 pM (figura 10C). La figura 10D muestra los resultados de un experimento de control positivo en el que se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 4 días con 1 pM de ATRA (ácido todo-trans-retinoico). La figura 10E muestra los resultados de un experimento de control negativo en el que las células de neuroblastoma BE(2)-C se trataron durante 4 días con 1 pM de un inhibidor selectivo de HDAC6.
La figura 11 es un grupo de gráficos que muestra el factor de cambio de los genes asociados a la maduración de las células de neuroblastoma BE(2)-C tras el tratamiento durante 48 horas con un inhibidor selectivo de HDAC6 a una concentración de 0,5 pM (figura 11A), 2 pM (figura 11B) y 4 pM (figura 11C). La figura 11D muestra los resultados de un experimento de control positivo en el que se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 48 horas con 1 pM de ATRA (ácido todo-trans-retinoico).
La figura 12 es un grupo de gráficos que muestra que los inhibidores selectivos de HDAC alteran la progresión del ciclo celular en células de neuroblastoma. La figura 12A es un gráfico que muestra el tratamiento de las células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 72 horas con 0, 0,5, 2 y 5 pM de un inhibidor selectivo de HDAC6. La figura 12B es un gráfico que muestra el tratamiento de las células de neuroblastoma de SH-SY5Y durante 72 horas con 0, 0,5, 2 y 5 pM de compuesto X comparativo. La figura 12C es un gráfico que muestra el tratamiento de células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 72 horas con 0, 0,5, 2 y 5 pM de compuesto 001. La figura 12D es un gráfico que muestra el tratamiento de las células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 72 horas con 0 y 1 pM de ATRA (ácido todo-trans-retinoico).
La figura 13 es un grupo de gráficos que muestra que los inhibidores selectivos de HDAC reducen la viabilidad y supervivencia del neuroblastoma. La figura 13A es un gráfico que muestra el tratamiento de las células de neuroblastoma SK-N-BE(2) con concentraciones variables de compuesto Y comparativo. Se midió la viabilidad y la señal de caspasa 3/7 a las 48 horas. La figura 13B es un gráfico que muestra el tratamiento de las células de neuroblastoma SK-N-BE(2) con concentraciones variables de compuesto X comparativo. Se midió la viabilidad y la señal de caspasa 3/7 a las 48 horas. La figura 13C es un gráfico que muestra el tratamiento de las células de neuroblastoma SK-SY5Y con concentraciones variables de compuesto Y comparativo. Se midió la viabilidad y la señal de caspasa 3/7 a las 48 horas. La figura 13D es un gráfico que muestra el tratamiento de las células de neuroblastoma SK-SY5Y con concentraciones variables de compuesto X comparativo. Se midió la viabilidad y la señal de caspasa 3/7 a las 48 horas.
La figura 14 es un grupo de gráficos que muestra que los inhibidores selectivos de HDAC reducen la viabilidad y supervivencia del neuroblastoma. La figura 14A es un gráfico que muestra el porcentaje de la población de células de neuroblastoma SK-N-BE2 en diversas etapas del ciclo celular 96 horas después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto Y comparativo. La figura 14B es un gráfico que muestra el porcentaje de la población de células de neuroblastoma SK-N-BE2 en diversas etapas del ciclo celular 96 horas después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto X comparativo. La figura 14C es un gráfico que muestra el porcentaje de la población de células de neuroblastoma SH-SY5Y en diversas etapas del ciclo celular 96 horas después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto Y comparativo. La figura 14D es un gráfico que muestra el porcentaje de la población de células de neuroblastoma SH-SY5Y en diversas etapas del ciclo celular 96 horas después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto X comparativo.
La figura 15 es un grupo de gráficos que muestra que los inhibidores selectivos de HDAC estimulan la diferenciación de las células de neuroblastoma. La figura 15A es un gráfico que muestra el índice de diferenciación de las células SK-N-BE2 que han sido tratadas con concentraciones variables de compuesto X comparativo y/o ATRA. La figura 15B es un gráfico que muestra el índice de diferenciación de las células SH-SY5Y que han sido tratadas con concentraciones variables de compuesto X comparativo y/o ATRA. La figura 15C es un gráfico que muestra el índice de diferenciación de las células SK-N-BE2 que han sido tratadas con concentraciones variables de compuesto Y comparativo y/o ATRA. La figura 15D es un gráfico que muestra el índice de diferenciación de las células SH-SY5Y que han sido tratadas con concentraciones variables de compuesto Y comparativo y/o ATRA. La figura 16 es un grupo de gráficos que muestra que los inhibidores selectivos de HDAC potencian ATRA a baja concentración. La figura 16A es un gráfico que muestra el índice de diferenciación de las células de neuroblastoma SK-N-BE(2) y SH-SY5Y que han sido tratadas con concentraciones variables de ATRA. La figura 16B es un gráfico que muestra el índice de diferenciación de las células SH-N-BE(2) que han sido tratadas con concentraciones variables de compuesto Y comparativo y/o ATRA. La figura 16B es un gráfico que muestra el índice de diferenciación de las células SK-N-BE(2) que han sido tratadas con concentraciones variables de compuesto X comparativo y/o ATRA.
La figura 17 es un grupo de gráficos que muestra que los inhibidores selectivos de HDAC inducen la parada del ciclo celular en células de neuroblastoma. La figura 17A es un gráfico que muestra el porcentaje de la población de células de neuroblastoma SK-N-BE(2) en diversas etapas del ciclo celular 4 días después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto Y comparativo y/o ATRA. La figura 17B es un gráfico que muestra el porcentaje de la población de células de neuroblastoma SK-N-BE(2) en diversas etapas del ciclo celular 4 días después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto X comparativo y/o ATRA. La figura 17C es un gráfico que muestra el factor de cambio de p21 en células SK-N-BE(2) 4 días después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto Y comparativo y/o ATRA. La figura 17D es un gráfico que muestra el factor de cambio de p21 en células SK-N-BE(2) 4 días después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto X comparativo y/o ATRA.
La figura 18 es un grupo de gráficos que muestra que los inhibidores selectivos de HDAC inducen la parada del ciclo celular en células de neuroblastoma. La figura 18A es un gráfico que muestra el porcentaje de la población de células de neuroblastoma SK-SY5Y en diversas etapas del ciclo celular 4 días después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto Y comparativo y/o ATRA. La figura 18B es un gráfico que muestra el porcentaje de la población de células de neuroblastoma SK-SY5Y en diversas etapas del ciclo celular 4 días después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto X comparativo y/o ATRA. La figura 18C es un gráfico que muestra el factor de cambio de p21 en células SH-SY5Y 4 días después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto Y comparativo y/o ATRA. La figura 18D es un gráfico que muestra el factor de cambio de p21 en células SH-SY5Y 4 días después del tratamiento con concentraciones variables de compuesto X comparativo y/o ATRA.
Descripción detallada
La presente solicitud se refiere, de manera general, a compuestos, composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos, y métodos de utilización de dichos compuestos para tratar o prevenir enfermedades o trastornos asociados a la actividad de HDAC, particularmente enfermedades y trastornos que implican cualquier tipo de expresión de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6. Entre dichas enfermedades se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, cáncer, enfermedades neurodegenerativas, anemia de células falciformes y beta-talasemia.
Se ha mostrado que la inhibición de HDAC1 y HDAC2 desreprime la globina fetal. La desrepresión o inducción de la hemoglobina fetal (HbF) es una estrategia terapéutica establecida en la enfermedad de células falciformes y también podría resultar eficaz en el tratamiento de la beta-talasemia. La hidroxiurea es actualmente el único fármaco con eficacia probada en la enfermedad de células falciformes (ECF). Dicha terapia es citotóxica, mal tolerada y sólo reduce la frecuencia y severidad de las crisis de células falciformes en un subgrupo de pacientes. No existen fármacos aprobados para el tratamiento de la beta-talasemia. La expresión de la globina fetal (y) está silenciada en adultos en parte por la acción de un complejo que contiene BCL11A y las HDAC 1 y 2. La ablación génica y la inhibició nquímica de HDAC1 o HDAC2 resulta en la desrepresión de la globina y en células eritroides derivadas de la médula ósea adulta (Bradner, Proc. Natl. Acad. Sci., 2010). Aunque se ha utilizado con éxito una diversidad de inhibidores de HDAC no específicos para inducir HbF, el desarrollo clínico adicional se ha visto limitado por su eficacia variable y posibles problemas relacionados con efectos secundarios fuera de diana observados en ensayos clínicos de pequeñas dimensiones. Por lo tanto, el desarrollo de inhibidores selectivos y potentes de HDAC1 y HDAC2 que conduce a la reactivación de HbF representa un enfoque terapéutico refinado y más dirigido para el tratamiento de ECF y betatalasemia.
También se ha mostrado que la expresión y actividad de HDAC2 se encuentran elevadas en las enfermedades neurodegenerativas (Guan, 2009; Morris, 20l3). El incremento de la expresión de HDAC2 perjudica la función cognitiva en ratones. La inhibición de HDAC2 mediante disrupción génica restaura la función cognitiva en modelos de ratón de enfermedad de Alzheimer (Guan, 2009; Morris, 2013; Graff, 2014). Además, la actividad de HDAC6 está implicada en enfermedades neurodegenerativas (Xiong, 2013; Simoes-Peres, 2013; Kim, 2012). La inhibición combinada de HDAC2 y HDAC6 podrían presentar un efecto más profundo sobre el desarrollo de enfermedades neurodegenerativas que la inhibición de cualquiera de los enzimas por sí solo.
También se ha mostrado que la expresión desregulada de HDAC1 resulta particularmente común en cánceres avanzados del sistema gastrointestinal, tales como, por ejemplo, carcinomas pancreático, colorrectal y hepático (hepatocelular), así como en cáncer de próstata y de mama. La expresión de HDAC2 y HDAC3 también está asociada con enfermedad en estadio avanzado y mal pronóstico en cánceres gástrico, prostático y colorrectal. HDAC2 también se sobreexpresa en el cáncer cervical. Se han publicado ensayos clínicos para el tratamiento de pacientes con tumores sólidos avanzados, linfomas y leucemias, incluyendo inhibidores de HDAc selectivos de clase I, tales como MS275, depsipéptido y MGCD0103 (O. Witt et al., Cancer Letters, 277, 8-21, 2009 y H-J. Kim y S.-C. Bae, Am. J. Transl. Res.
3(2): 166-179, 2011). También se ha observado que los HDAC reprimen la transcripción del VIH-1 (virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1) mediante sucesos de desacetilación, particularmente en células T CD4+ en reposo con infección latente.
De esta manera, es conocido que los inhibidores de HDAC pueden inducir la activación transcripcional del promotor de VIH-1, o reactivar VIH-1 latente a partir del reservorio vírico del paciente. Se acepta generalmente que la utilización de inhibidores de HDAC en el tratamiento de la infección por VIH puede resultar valiosa en la purga de reservorios de infección latente en pacientes, particularmente en pacientes sometidos a terapia antiretrovírica altamente activa (HAAT, por sus siglas en inglés).
Los compuestos indicados en la presente memoria presentan valores de IC50 de HDAC1 comprendidos entre 1 y 2000 nM y valores de IC50 de HDAC2 comprendidos entre 10 y 3000 nM, que muestran una selectividad de aproximadamente 2 a 100 veces respecto a HDAC3, respectivamente.
Los compuestos indicados en la presente memoria presentan valores de IC50 de HDAC6 comprendidos entre 1 y 20 nM, que demuestran una selectividad de aproximadamente 5 a 1000 veces que para otros HDAc .
Definiciones
Posteriormente se listan definiciones de diversos términos utilizados para describir la presente invención. Dichas definiciones se aplican a los términos tal como se utilizan en toda la presente especificación y reivindicaciones, a menos que se limiten en casos específicos, individualmente o como parte de un grupo más grande.
El número de átomos de carbono en un sustituyente alquilo puede indicarse mediante el prefijo "Cx-y," en el que 'x' es el número mínimo e 'y' es el número máximo de átomos de carbono en el sustituyente. De manera similar, una cadena Cx se refiere a una cadena de alquilo que contiene x átomos de carbono.
El término "aproximadamente" indica generalmente una posible variación no superior a 10%, 5% o 1% de un valor. Por ejemplo, "aproximadamente 25 mg/kg" generalmente indica, en su sentido más amplio, un valor entre 22,5 y 27,5 mg/kg, es decir, 25±25 mg/kg.
El término "alquilo" se refiere a fracciones de hidrocarburo de cadena lineal o ramificada saturados que contienen, en determinadas realizaciones, entre uno y seis, o entre uno y ocho, átomos de carbono, respectivamente. Entre los ejemplos de fracciones alquilo C1-6 se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, fracciones metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, terc-butilo, neopentilo y n-hexilo, y entre los ejemplos de fracciones alquilo C1-8 se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, las fracciones metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, terc-butilo, neopentilo, n-hexilo, heptilo y octilo.
El término "alquenilo" denota un grupo monovalente derivado de una fracción hidrocarburo que contiene, en determinadas realizaciones, entre dos y seis, o entre dos y ocho, átomos de carbono, y presenta por lo menos un doble enlace carbono-carbono. El doble enlace puede ser o no el punto de unión a otro grupo. Entre los grupos alquenilo se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, por ejemplo, etenilo, propenilo, butenilo, 1-metil-2-butén-1-ilo, heptenilo, octenilo y similares.
El término "alquinilo" denota un grupo monovalente derivado de una fracción hidrocarburo que contiene, en determinadas realizaciones, entre dos y seis, o entre dos y ocho, átomos de carbono, y presenta por lo menos un triple enlace carbono-carbono. El grupo alquinilo puede ser o no el punto de unión a otro grupo. Entre los grupos alquinilo representativos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, por ejemplo, etinilo, 1 -propinilo, 1 -butinilo, heptinilo, octinilo y similares.
El término "alcoxi" se refiere a una fracción -O-alquilo.
El término "arilo" se refiere a un sistema de anillos carbocíclico monocíclico o policíclico que presenta uno o más anillos aromáticos, fusionados o no fusionados, incluyendo, aunque sin limitación, fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo, idenilo y similares. En algunas realizaciones, los grupos arilo presentan 6 átomos de carbono. En algunas realizaciones, los grupos arilo presentan entre seis y diez átomos de carbono. En algunas realizaciones, los grupos arilo presentan entre seis y dieciséis átomos de carbono.
El término "cicloalquilo" denota un grupo monovalente derivado de un compuesto de anillo carbocíclico saturado o parcialmente saturado monocíclico o policíclico Entre los ejemplos de cicloalquilo C3-8 se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclopentilo y ciclooctilo, y entre los ejemplos de cicloalquilo C3-12 se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, biciclo[2.2.1]heptilo y biciclo[2.2.2]octilo. También se encuentran contemplados grupos monovalentes derivados de un compuesto anillo carbocíclico, monocíclico o policíclico, que presenta por lo menos un doble enlace carbono-carbono mediante la eliminación de un solo átomo de hidrógeno. Entre los ejemplos de dichos grupos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, ciclopropenilo, ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo, ciclooctenilo y similares.
El término "heteroarilo" se refiere a una fracción o sistema de anillos no fusionado o fusionado monocíclico o policíclico (p.ej., bicíclico, tricíclico o superior) que presenta por lo menos un anillo aromático, en el que uno o más de los átomos formadores de anillo es un heteroátomo, tal como oxígeno, azufre o nitrógeno. En algunas realizaciones, el grupo heteroarilo presenta uno a seis átomos de carbono, y en realizaciones adicionales, entre uno y quince átomos de carbono. En algunas realizaciones, el grupo heteroarilo contiene cinco a dieciséis átomos anulares de los que un átomo anular se selecciona de entre oxígeno, azufre y nitrógeno; cero, uno, dos o tres átomos anulares son heteroátomos adicionales seleccionados independientemente de entre oxígeno, azufre y nitrógeno, y los átomos anulares restantes son de carbono. Heteroarilo incluye, aunque sin limitación, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, pirrolilo, pirazolilo, imidazolilo, thiazolilo, oxazolilo, isooxazolilo, tiazolilo, tiadiazolilo, oxadiazolilo, thiophenilo, furanilo, indolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzooxazolilo, quinoxalinilo, acridinilo y similares.
El término "heterocicloalquilo" se refiere a un anillo de 3, 4, 5, 6 o 7 elementos no aromático o un grupo bicíclico o tricíclico fusionado de un sistema no fusionado, en el que: (i) cada anillo contiene entre uno y tres heteroátomos seleccionados independientemente de entre oxígeno, azufre y nitrógeno, (ii) cada anillo de 5 elementos presenta 0 a 1 doble enlace y cada anillo de 6 elementos presenta 0 a 2 dobles enlaces, (iii) los heteroátomos de nitrógeno y azufre pueden oxidarse opcionalmente, (iv) el heteroátomo de nitrógeno opcionalmente puede cuaternizarse, y (iv) cualquiera de los anillos anteriores puede fusionarse con un anillo de benceno. Entre los grupos heterocicloalquilo representativos se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, [1,3]dioxolano, pirrolidinilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, piperidinilo, piperazinilo, oxazolidinilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo y tetrahidrofurilo.
Según la invención, cualquiera de los arilos, arilos sustituidos, heteroarilos y heteroarilos sustituidos indicados en la presente memoria puede ser cualquier grupo aromático.
Los términos "halo" y "halógeno" se refieren a un átomo seleccionado de entre flúor, cloro, bromo y yodo.
El término "haloalquilo" se refiere a radicales alquilo en los que uno o más cualesquiera de los átomos de carbono del alquilo está sustituido con halo tal como se ha definido anteriormente. Haloalquilo comprende además los radicales monohaloalquilo, dihaloalquilo y polihaloalquilo. Entre los ejemplos de haloalquilo se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, fluorometilo, difluorometilo, trifluorometilo, clorometilo, diclorometilo, triclorometilo y pentafluoroetilo.
El término "HDAC" se refiere a histona desacetiladas, que son enzimas que eliminan los grupos acetilo de los residuos de lisina en las histonas nucleares, conduciendo de esta manera a la formación de una cromatina condensada y transcripcionalmente silenciada. Actualmente existen 18 histona desacetilasas conocidas, que se clasifican en cuatro grupos. HDAC de clase I, que incluyen HDAC1, HDAC2, HDAC3 y HDAC8, se relacionan con el gen RPD3 de levadura. HDAC de clase II, que incluyen HDAC4, HDAC5, HDAC6, HDAC7, h Da C9 y HDAC10, se relacionan con el gen Hda1 de levadura. HDAC de clase III, que también se conocen como sirtuinas, están relacionadas con el gen Sir2 e incluyen SIRT1-7. HDAC de clase IV, que contiene únicamente HDAC11, presenta características de HDAC de clase I y de clase II. El término "HDAC" se refiere a uno o más cualesquiera de las 18 histona desacetilasas conocidas, a menos que se especifique lo contrario.
El término "inhibidor" es sinónimo del término antagonista.
Los términos "aislado", "purificado" o "biológicamente puro" se refieren a material que se encuentra sustancial o esencialmente libre de componentes que normalmente lo acompañan tal como se encuentra en su estado nativo. La pureza y la homogeneidad se determinan típicamente utilizando técnicas de química analítica, tales como la electroforesis en gel de poliacrilamida o la cromatografía líquida de alto rendimiento. Particularmente, en realizaciones en las que el compuesto es por lo menos 85% puro, más preferentemente por lo menos 90% puro, más preferentemente por lo menos 95% puro, y lo más preferentemente por lo menos 99% puro.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellas sales de los compuestos formados mediante el procedimiento de la presente invención que, dentro del alcance del criterio médico razonable, resultan adecuadas para la utilización en contacto con los tejidos de seres humanos y otros animales sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares, y proporcionales a una proporción de beneficio/riesgo razonable. Adicionalmente, "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a derivados de los compuestos dados a conocer, en los que el compuesto parental se modifica mediante la conversión de una fracción ácido o base existente en su forma salina. Entre los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se incluyen, aunque sin limitarse a ellas, sales minerales o de ácido orgánico de residuos básicos, tales como aminas; sales de álcali u orgánicas de residuos ácidos, tales como ácidos carboxílicos, y similares. Entre las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se incluyen las sales no tóxicas convencionales del compuesto parental formado, por ejemplo, a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención pueden sintetizarse a partir del compuesto parental que contiene una fracción básica o ácida mediante métodos químicos convencionales. Generalmente, dichas sales pueden prepararse mediante la reacción de las formas de ácido o base libre de dichos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un solvente orgánico, o en una mezcla de los dos; generalmente, resultan preferentes medios no acuosos, tales como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Se encuentran listas de sales adecuadas en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., página 1418, 1985 y Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2, 1977, cada una de las cuales se incorpora en la presente memoria como referencia en su totalidad.
Las combinaciones de sustituyentes y variables contempladas por la presente invención son únicamente aquellas que resultan en la formación de compuestos estables. El término "estable" se refiere a compuestos que poseen estabilidad suficiente para permitir la fabricación y que mantienen la integridad del compuesto durante un periodo de tiempo suficiente para resultar útiles para los fines detallados en la presente memoria (p.ej., la administración terapéutica o profiláctica en un sujeto).
El término "sujeto" se refiere a un mamífero. Por lo tanto, un sujeto se refiere a, por ejemplo, perros, gatos, caballos, vacas, cerdos, cobayas y similares. Preferentemente, el sujeto es un ser humano. En el caso de que el sujeto es un ser humano; puede hacerse referencia al sujeto en la presente memoria como paciente.
Los términos "tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a un método de alivio o reducción de una enfermedad y/o sus síntomas acompañantes.
Compuestos de la invención
En un aspecto, la invención proporciona un compuesto de fórmula I:
Figure imgf000009_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en la que,
Rx se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo, -OH, -C(O)R1, -CO2R1, -C(O)N(R1)2, arilo, -C(S)N(R1)2 y S(O)2R1, en el que arilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -Oh , halo y haloalquilo,
Ry se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C i-6, alcoxi C i-6, halo, -OH, -C(O)R1, -CO2R1 y -C(O)N(R1)2, Rz se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1.6, alquenilo C1-6, alquinilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo y heteroarilo, cada uno de los cuales puede sustituirse opcionalmente con alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo o -OH, y
cada R1 se selecciona, independientemente en cada aparición, del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo, en el que cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo pueden sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo.
En una realización del compuesto de fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, Rx se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo, -OH, - C(O)R1, -CO2R1 y -C(O)N(R1)2, Ry se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo, -OH, -C(O)R1, -CO2R1 y -C(O)N(R1)2; Rz se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, alquenilo C1-6, alquinilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo y heteroarilo, cada uno de los cuales puede sustituirse opcionalmente con alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo o -OH, y cada R1 se selecciona, independientemente para cada aparición, del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo.
En una realización del compuesto de fórmula I, en la presente memoria se proporciona un compuesto de fórmula II:
Figure imgf000010_0001
0 una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en la que,
Rx se selecciona independientemente del grupo que consiste en arilo, -C(O)R1, -CO2R1, -C(O)N(R1)2, -C(S)N(R1)2 y S(O)2R1,
Ry se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-6 y halo, y
Rz se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo y heteroarilo.
En una realización del compuesto de fórmula II, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, Rx se selecciona independientemente del grupo que consiste en -C(O)R1, -CO2R1 y -C(O)N(R1)2, y Rz se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo y heteroarilo.
En una realización de los compuestos de fórmula I o II, Rz es alquilo C1-6 o arilo. En realizaciones preferentes de los compuestos de fórmula I o II, Rz es isopropilo o fenilo. En otra realización de los compuestos de fórmula I o II, Rz es metilo.
En otra realización de los compuestos de fórmula I o II, Rx es -C(O)N(R1)2 o -C(O)NHR1. En todavía otra realización de los compuestos de fórmula I o II, Rx es -C(O)R1 o -CO2R1. En todavía otra realización de los compuestos de fórmula 1 o II, Rx es - C(S)N(R1)2, -C(S)NHR1 o S p ^ R 1.
En una realización de los compuestos de fórmula I o II, por lo menos uno de R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, arilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo, en el que arilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo pueden sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo. En una realización adicional, R1 es -CH3, -CH2CH3, fenilo, -CH2-fenilo o -CH2-indolilo, en el que fenilo, -CH2-fenilo o -CH2-indolilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de alquilo C1-6y halo.
En otra realización de los compuestos de fórmula I o II, por lo menos uno de R1 se selecciona, independientemente para cada aparición, del grupo que consiste en alquilo C1-6, arilo y alquil C1-6-arilo. En una realización adicional, por lo menos uno de R1 puede ser -CH3, -CH2CH3, -CH2-fenilo o fenilo.
En otra realización de los compuestos de formula I o II, por lo menos uno de R1 es fenilo, en el que fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo y haloalquilo. En realizaciones preferentes, por lo menos uno de R1 es fenilo, en el que el fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre CH3 , -OCH3, flúor, cloro y CF3.
En todavía otra realización preferente de los compuestos de fórmula I o II, Ry es H.
En otra realización de los compuestos de fórmula I o II, Rx es -C(O)R1, y R1 es alquilo C i-6, alquil C i-6-arilo o alquil C i-6-heteroarilo, en el que alquil C1-6-arilo o alquil C1-6-heteroarilo pueden sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6 , alcoxi C1-6 , -OH, halo y haloalquilo. En una realización preferente, R1 es CH2-fenilo o CH2-indolilo, en el que CH2-fenilo o CH2-indolilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6 y halo.
En otra realización del compuesto de fórmula I, en la presente memoria se proporciona un compuesto de fórmula III:
Figure imgf000011_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
en la que,
Rx se selecciona del grupo que consiste en arilo, -C(O)R1, -CO2R1, -C(O)N(R1)2,-C(S)N(R1)2 y S(O)2R1, en el que arilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquiloC1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo, y
cada R1 se selecciona, independientemente en cada aparición, del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo, en el que alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo pueden sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo y haloalquilo.
En una realización de los compuestos de fórmula III, Rx es -C(O)NHR1, - C(S)NHR1 o S(O)2R1, y R1 se selecciona, independientemente en cada aparición, del grupo que consiste en alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6arilo y alquil C1-6-heteroarilo, en el que cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo y heteroarilo pueden sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo.
En otra realización de los compuestos de fórmula III, por lo menos uno de R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo, en el que arilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo.
En otra realización de los compuestos de formula III, por lo menos uno de R1 es arilo, en el que arilo se sustituye opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo y haloalquilo.
En una realización preferente de los compuestos de fórmula III, por lo menos uno de R1 es fenilo, en el que fenilo se sustituye opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre CH3, - OCH3, flúor, cloro y CF3.
En otra realización de los compuestos de fórmula I o III, Rx es -C(O)R1, y R1 es alquilo C1-6, alquil C1-6-arilo o alquil C1-6-heteroarilo, en el que alquil C1-6-arilo o alquil C1-6-heteroarilo pueden sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo. En una realización preferente, R1 es CH2-fenilo o CH2-indolilo, en el que CH2-fenilo o CH2-indolilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6 o halo.
Entre los compuestos representativos de fórmulas I, II y III se incluyen, aunque sin limitarse a ellos, los compuestos siguientes de la Tabla 1:
Tabla 1
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Tabla 1 (continuación)
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Tabla 1 (continuación)
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Tabla 1 (continuación)
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Tabla 1 (continuación)
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o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
En realizaciones preferentes, los compuestos de la presente invención presentan una o más de las propiedades siguientes: el compuesto es capaz de inhibir por lo menos una histona desacetilasa (HDAC); el compuesto es capaz de inhibir HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6; el compuesto inhibe selectivamente HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 sobre otras HDAC.
Otro objetivo de la presente invención es la utilización de un compuesto indicado en la presente memoria (p.ej., de cualquiera de las fórmulas en la presente memoria) en la preparación de un medicamento destinado a la utilización en el tratamiento de un trastorno o enfermedad en la presente memoria. Otro objetivo de la presente invención es la utilización de un compuesto tal como se indica en la presente memoria (p.ej., de cualquiera de las fórmulas en la presente memoria) para la utilización en el tratamiento de un trastorno o enfermedad en la presente memoria.
En otro aspecto, la invención proporciona un método de síntesis de un compuesto de fórmula I, fórmula II o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1. La síntesis de los compuestos de la invención puede encontrarse en los Ejemplos, posteriormente.
Otra realización es un método de preparación de un compuesto de cualquiera de las fórmulas en la presente memoria utilizando una cualquiera, o una combinación, de las reacciones indicadas en la presente memoria. El método puede incluir la utilización de uno o más intermediarios o reactivos químicos indicados en la presente memoria.
Otro aspecto es un compuesto marcado isotópicamente de cualquiera de las fórmulas indicadas en la presente memoria. En dichos compuestos puede introducirse uno o más isótopos que pueden ser o no radioactivos (p.ej., 3H, 2H, 14C, 13C, 35S, 32P, 125I y 131I). Dichos compuestos resultan útiles para estudios y diagnósticos del metabolismo de fármacos, así como aplicaciones terapéuticas.
Puede prepararse un compuesto de la invención en forma de una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable mediante la reacción de la forma de base libre del compuesto con un ácido inorgánico u orgánico farmacéuticamente aceptable. Alternativamente, puede prepararse una sal de adición de base farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la invención mediante la reacción de la forma de ácido libre del compuesto con una base inorgánica u orgánica farmacéuticamente aceptable.
Alternativamente, las formas salinas de los compuestos de la invención pueden prepararse utilizando sales de los materiales de partida o intermediarios.
Las formas de ácido libre o de base libre de los compuestos de la invención pueden prepararse a partir de la sal de adición de base o la sal de adición de ácido correspondiente, respectivamente. Por ejemplo, un compuesto de la invención en una forma de sal de adición de ácido puede convertirse en la base libre correspondiente mediante tratamiento con una base adecuada (p.ej., solución de hidróxido amónico, hidróxido sódico y similares). Un compuesto de la invención en una forma de sal de adición de base puede convertirse en el ácido libre correspondiente mediante tratamiento con un ácido adecuado (p.ej., ácido clorhídrico, etc.).
Pueden prepararse derivados protegidos de los compuestos de la invención por medios conocidos por el experto ordinario en la materia. Puede encontrarse una descripción detallada de técnicas aplicables a la creación de grupos protectores y su eliminación en T. W. Greene, "Protecting Groups in Organic Chemistry", 3a edición, John Wiley and Sons, Inc., 1999, y ediciones posteriores de la misma.
Pueden prepararse convenientemente, o formarse durante el procedimiento de la invención, compuestos de la presente invención en forma de solvatos (p.ej., hidratos). Pueden prepararse convenientemente hidratos de compuestos de la presente invención mediante recristalización a partir de una mezcla de solventes acuosos/orgánicos, utilizando solventes orgánicos, tales como dioxano, tetrahidrofurano o metanol.
Además, algunos de los compuestos de la presente invención presentan uno o más dobles enlaces, o uno o más centros asimétricos. Dichos compuestos pueden existir en forma de racematos, mezclas racémicas, enantiómeros individuales, diastereómeros individuales, mezclas diastereoméricas y formas isoméricas dobles cis- o trans- o E- o Z-, y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o (S)-, o como (D)- o (L)- para los aminoácidos. La totalidad de dichas formas isoméricas de dichos compuestos se encuentra expresamente incluida en la presente invención. Pueden prepararse isómeros ópticos a partir de sus precursores ópticamente activos respectivos mediante los procedimientos indicados anteriormente, o mediante resolución de las mezclas racémicas. La resolución puede llevarse a cabo en presencia de un agente de resolución, mediante cromatografía o mediante cristalización repetida o mediante alguna combinación de dichas técnicas que resulte conocida por el experto en la materia. Pueden encontrarse datos adicionales sobre las resoluciones en Jacques, et al., "Enantiomers, Racemates, and Resolutions" (John Wiley & Sons, 1981). Los compuestos de la presente invención también pueden representarse en múltiples formas tautoméricas; en tales casos, la invención incluye expresamente todas las formas tautoméricas de los compuestos indicados en la presente memoria. En el caso de que los compuestos indicados en la presente memoria contengan dobles enlaces olefínicos u otros centros de asimetría geométrica, y a menos que se indique lo contrario, se pretende que los compuestos incluyan isómeros geométricos tanto E como Z. De manera similar, se pretende que todas las formas tautoméricas se encuentren incluidas. La configuración de cualquier doble enlace carbono-carbono que aparezca en la presente memoria se selecciona únicamente por conveniencia y no pretende designar una configuración particular a menos que el texto lo indique; de esta manera, un doble enlace carbono-carbono ilustrado arbitrariamente en la presente memoria como trans puede ser cis, trans o una mezcla de los dos en cualquier proporción. La totalidad de dichas formas isoméricas de dichos compuestos se encuentra expresamente incluida en la presente invención. Todas las formas cristalinas de los compuestos indicados en la presente memoria se encuentran expresamente incluidas en la presente invención.
Los compuestos sintetizados pueden separarse de una mezcla de reacción y purificarse adicionalmente mediante un método tal como cromatografía de columna, cromatografía líquida de alto rendimiento o recristalización. Tal como apreciará el experto en la materia, métodos adicionales de síntesis de los compuestos de las fórmulas en la presente memoria resultarán evidentes para el experto ordinario en la materia. Adicionalmente, pueden llevarse a cabo diversas etapas sintéticas en una secuencia u orden alternado para proporcionar los compuestos deseados. Además, los solventes, temperaturas, duraciones de reacción, etc. indicados en la presente memoria se proporcionan con fines ilustrativos únicamente y el experto ordinario en la materia reconocerá que la variación de las condiciones de reacción puede producir los compuestos deseados de la presente invención. Las transformaciones de química sintética y metodologías de grupos protectores (protección y desprotección) útiles en la síntesis de los compuestos indicados en la presente memoria son conocidas de la técnica y entre ellas se incluyen, por ejemplo, las indicadas en R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989); T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2a ed., John Wiley and Sons, 1991; L. Fieser y M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1994, y L. Paquette, ed., Enciclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1995, y ediciones posteriores de los mismos.
Los compuestos de la invención se definen en la presente memoria mediante sus estructuras químicas y/o nombres químicos. En donde se hace referencia a un compuesto mediante tanto una estructura química como un nombre químico, y la estructura química y el nombre química entren en conflicto, la estructura química será determinante de la identidad del compuesto.
La indicación de una lista de grupos químicos en cualquier definición de una variable en la presente memoria incluye definiciones de esa variable en cualquier grupo individual o combinación de grupos listados. La indicación de una realización para una variable en la presente memoria incluye esa realización en forma de cualquier realización individual o en combinación con cualesquiera otras realizaciones o partes de las mismas.
Composiciones farmacéuticas
La invención proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los compuestos de la presente invención (fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1) o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, junto con un portador farmacéuticamente aceptables de los mismos.
Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención formulada junto con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. La expresión "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere a un relleno, diluyente, material de encapsulado o auxiliar de formulación de cualquier tipo no tóxico, sólido, semisólido o líquido inerte. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden administrarse en seres humanos y en otros animales por vía oral, rectal, parenteral, intracisternal, intravaginal, intraperitoneal, tópica (en forma de polvos, pomadas o gotas) o bucal, o en forma de un spray oral o nasal.
Los compuestos de la invención pueden administrarse en forma de composiciones farmacéuticas mediante cualquier vía convencional, en particular por vía entérica, por ejemplo oral, p.ej., en forma de tabletas o cápsulas, o por vía parenteral, p.ej., en forma de soluciones o suspensiones inyectables, por vía tópica, p.ej., en forma de lociones, geles, pomadas o cremas, o en una forma nasal o de supositorio. Las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la presente invención en forma libre o en una forma de sal farmacéuticamente aceptable asociada a por lo menos un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable pueden prepararse de una manera convencional mediante métodos de mezcla, granulado o recubrimiento. Por ejemplo, las composiciones orales pueden ser tabletas o cápsulas de gelatina que comprenden el ingrediente activo junto con a) diluyentes, p.ej., lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa y/o glicina, b) lubricantes, p.ej., sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o calcio y/o polietilenglicol; para tabletas también c) ligantes, p.ej., silicato de magnesio-aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa o carboximetilcelulosa sódica y/o polivinilpirrolidona; si se desea, d) desintegrantes, p.ej., almidones, agar, ácido algínico o su sal sódica, o mezclas efervescentes, y/o e) absorbedores, colorantes, saborizantes y edulcorantes. Las composiciones inyectables pueden ser soluciones o suspensiones isotónicas acuosas, y pueden prepararse supositorios a partir de emulsiones o suspensiones grasas. Las composiciones pueden esterilizarse y/o contener adyuvantes, tales como agentes conservantes, estabilizantes, humectantes o emulsionantes, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica y/o tampones. Adicionalmente, pueden contener además otras sustancias terapéuticamente valiosas. Entre las formulaciones adecuadas para las aplicaciones transdérmicas se incluyen una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención con un portador. Un portador puede incluir solventes farmacológicamente aceptables absorbibles para ayudar al paso a través de la piel del huésped. Por ejemplo, los dispositivos transdérmicos presentan la forma de un vendaje que comprende un elemento de refuerzo, un depósito que contiene el compuesto, opcionalmente con portadores, opcionalmente una barrera de control de tasa para administrar el compuesto en la piel del huésped a una tasa controlada y predeterminada durante un periodo de tiempo prolongado, y medios para fijar el dispositivo a la piel. También pueden utilizarse formulaciones transdérmicas de matriz. Las formulaciones adecuadas para la aplicación tópica, p.ej. en la piel y ojos, preferentemente son soluciones acuosas, pomadas, cremas o geles bien conocidos de la técnica. Pueden contener solubilizadores, estabilizadores, agentes potenciadores de la tonicidad, tampones y conservantes.
Los compuestos activos también pueden encontrarse en forma microencapsulada con uno o más excipientes, tal como se ha indicado anteriormente. Las formas de administración sólidas de las tabletas, grageas, cápsulas, píldoras y gránulos pueden prepararse con recubrimientos y cápsulas, tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. En dichas formas de administración sólidas, el compuesto activo puede mezclarse con por lo menos un diluyente inerte, tal como sacarosa, lactosa o almidón. Dichas formas de administración pueden comprender, además, tal como es la práctica normal, sustancias adicionales diferentes de los diluyentes inertes, por ejemplo lubricantes de tableteo y otros adyuvantes de tableteo, tales como estearato de magnesio y celulosa microcristalina. En el caso de las cápsulas, tabletas y píldoras, las formas de administración pueden comprender además agentes tamponadores.
Métodos de la invención
Según los métodos de tratamiento de la presente invención, se tratan o previenen trastornos en un sujeto, tal como un ser humano u otro animal, mediante la administración en el sujeto de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención, en cantidades y tiempos necesarios para conseguir el resultado deseado. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" de un compuesto de la invención se refiere a una cantidad suficiente del compuesto para reducir los síntomas de un trastorno en un sujeto. Tal como se entenderá bien en la técnica médica, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención se encontrará en una relación beneficio/riesgo razonable aplicable a cualquier tratamiento médico.
En general, los compuestos de la invención se administran en cantidades terapéuticamente eficaces mediante cualquiera de los modos habituales y aceptables conocidos de la técnica, individualmente o en combinación con uno o más agentes terapéuticos. La cantidad terapéuticamente eficaz puede variar ampliamente según la gravedad de la enfermedad, la edad y estado de salud relativo del sujeto, la potencia del compuesto utilizado y otros factores. En general, se indica que se obtienen resultados satisfactorios a dosis diarias de entre aproximadamente 0,03 y 2,5 mg/kg de peso corporal (0,05 a 4,5 mg/m2). Una dosis diaria indicada en un mamífero de mayor tamaño, p.ej., en seres humanos, se encuentra comprendida en el intervalo de entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 100 mg, administrados convenientemente, p.ej., en dosis divididas hasta cuatro veces al día, o en forma retardada. Las formas de dosis unitaria adecuadas para la administración oral comprenden entre aproximadamente 1 y 50 mg de ingrediente activo.
En determinadas realizaciones, una cantidad o dosis terapéutica de los compuestos de la presente invención puede encontrarse comprendida en el intervalo de entre aproximadamente 0,1 mg/kg y aproximadamente 500 mg/kg (entre aproximadamente 0,18 mg/m2 y aproximadamente 900 mg/m2), alternativamente entre aproximadamente 1 y aproximadamente 50 mg/kg (entre aproximadamente 1,8 y aproximadamente 90 mg/m2). En general, los regímenes de tratamiento según la presente invención comprenden la administración en el paciente que necesita de dicho tratamiento, de entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 1000 mg del compuesto o compuestos de la presente invención al día en dosis individuales o en múltiples dosis. Las cantidades o dosis terapéuticas también variarán según la vía de administración, así como la posibilidad de coutilización con otros agentes.
Con la mejora de la condición del sujeto, puede administrarse, en caso necesario, una dosis de mantenimiento del compuesto, composición o combinación de la presente invención. Posteriormente, la dosis o frecuencia de administración, o ambas, pueden reducirse, como función de los síntomas, hasta un nivel al que se conserve la condición mejorada una vez se han aliviado los síntomas hasta el nivel deseado, caso de que se cese el tratamiento. Sin embargo, el sujeto puede el tratamiento intermitente a largo plazo con cualquier recurrencia de los síntomas de la enfermedad.
Sin embargo, se entenderá que la utilización diaria total de los compuestos y composiciones de la presente invención será decidida por el médico responsable dentro del alcance del criterio médico responsable. La dosis de inhibición específica para cualquier paciente u organismo particular dependerá de una diversidad de factores, entre ellos el trastorno bajo tratamiento y la gravedad del trastorno, la actividad del compuesto específico utilizado, la composición específica utilizada, la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el sexo y dieta del paciente, el momento de la administración, la vía de administración y la tasa de excreción del compuesto específico utilizado, la duración del tratamiento, los fármacos utilizados en combinación o coincidentes con el compuesto específico utilizado y factores similares bien conocidos de la técnica médica.
En un aspecto, la invención proporciona un método de inhibición selectiva de la actividad de cada uno de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 respecto a otros HDAC en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En una realización, el compuesto presenta una selectividad para cada uno de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 que es aproximadamente 2 a 1000 veces superior que para otros HDAC. En otra realización, el compuesto presenta una selectividad para cada uno de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 al someterlo a ensayo en un ensayo de enzima HDAC, que es aproximadamente 2 a 1000 veces superior que para otros HDAC.
En otro aspecto, la invención proporciona un método de tratamiento de una enfermedad mediada por una HDAC, específicamente HDAC1, HDAC1 y/o HDAC6 en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, y sales farmacéuticamente aceptable de los mismos.
En otro aspecto, la invención proporciona un método de tratamiento de una enfermedad mediada por uno o más HDAC en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto que lo necesita, un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
La inhibición de HDAC1 y HDAC2 resulta suficiente para desreprimir la globina fetal. En células de médula ósea CD34+ humanas en cultivo sometidas a diferenciación eritroide, dichos compuestos indujeron un incremento dependiente de la dosis de la expresión de la hemoglobina fetal, en la que se observó una inducción de 2 veces con 1 pM y una inducción de 5 veces con 10 pM. La citotoxicidad de dichos compuestos era mínima y mostraba valores de IC50 de entre 1 y 5 pM. Los inhibidores selectivos de HDAC1 y HDAC2 de la presente invención presentan perfiles farmacocinéticos favorables. De esta manera, los compuestos son capaces de desreprimir la globina fetal mediante inhibición de HDAC. En una realización preferente, los compuestos pueden tratar la enfermedad de células falciformes o la beta-talasemia. Además, los compuestos pueden tratar un sujeto que sufre, o es susceptible de sufrir, una hemoglobinopatía.
La inhibición de HDAC, incluyendo la inhibición de HDAC1 y HDAC2 por compuestos selectivos, puede inducir la expresión de genes asociados a la formación de sinapsis y memora en neuronas en cultivo. Además, la inhibición de HDAC2 mediante disrupción génica puede conducir a la formación de nuevas sinapsis e incrementa el rendimiento cognitivo en ratones. La inhibición de HDAC6 con moléculas selectivas puede revertir los efectos de los transgenes neurodegenerativos en ratones, incluyendo la proteína precursora del amiloide y la presenelina 1. Los inhibidores selectivos de HDAC1, HDAC2 y HDAC6 de la presente invención serían capaces de potenciar la formación de sinapsis y de revertir los efectos de la proteína amiloide, disminuyendo de esta manera los síntomas de enfermedades neurodegenerativas tales como la enfermedad de Alzheimer mediante dos mecanismos complementarios.
En otro aspecto, la invención proporciona un método de activación de VIH latente en un sujeto, que comprende administrar en el mismo un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III o cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1. Pueden utilizarse los mismos compuestos para tratar infecciones por VIH. En otra realización, los compuestos pueden utilizarse en combinación con uno o más agentes antiretrovíricos para el tratamiento de las infecciones por el VIH. En una realización, la infección por VIH es por VIH-1.
Entre los agentes antiretrovíricos que pueden utilizarse en combinación con los inhibidores de HDAC de la presente invención se incluyen inhibidores de nucleósido transcriptasa inversa, inhibidores de no nucleósido transcriptasa inversa, inhibidores de proteasa, inhibidores de la captación/adsorción de virus, antagonistas de receptores víricos, inhibidores de la fusión vírica, inhibidores de la integrasa vírica, inhibidor de entrada, antagonista de correceptor, inhibidor de quinasa dependiente de ciclina e inhibidores de transcripción u otros agentes antiretrovíricos utilizados en el tratamiento de la infección por el VIH. Entre los agentes antiretrovíricos preferentes se incluyen efavirenz, sulfato de indinavir y raltegravir potasio.
Tal como se ha comentado anteriormente, la presente invención proporciona compuestos útiles para el tratamiento de diversas enfermedades. En determinadas realizaciones, los compuestos de la presente invención resultan útiles como inhibidores de las histona-desacetilasas (HDAC) y, de esta manera, resultan útiles como agentes anticáncer, y de esta manera pueden resultar útiles en el tratamiento del cáncer, mediante la producción de la muerte de células tumorales o mediante la inhibición del crecimiento de las células tumorales. Los compuestos de la invención son capaces de inducir apoptosis en células de cáncer; de esta manera, pueden tratar una enfermedad tal como un cáncer o enfermedad proliferativa.
En determinadas realizaciones, el cáncer es cáncer de pulmón, cáncer de colon y rectal, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer cerebral, cáncer renal, cáncer ovárico, cáncer de estómago, cáncer de piel, cáncer óseo, cáncer gástrico, cáncer de mama, glioma, glioblastoma, neuroblastoma, carcinoma hepatocelular, carcinoma renal papilar, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, leucemia, linternas, mielomas, retinoblastoma, cáncer cervical, melanoma y/o cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer uterino, cáncer testicular, cáncer esofágico y tumores sólidos. En algunas realizaciones, el cáncer es cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, neuroblastoma, leucemia o linfomas. En una realización adicional, el cáncer es cáncer pulmonar de células no pequeñas (CPCNP) o cáncer pulmonar de células pequeñas.
En realizaciones adicionales, el cáncer es un cáncer hematológico, tal como una leucemia o un linfoma. En una realización determinada, el linfoma es linfoma de Hodgkin o linfoma no de Hodgkin. En determinadas realizaciones, los compuestos inventivos son agentes anticáncer eficaces, que son activos contra células leucémicas y, de esta manera, resultan útiles para el tratamiento de las leucemias, p.ej., leucemia mieloide, linfocítica, mielocítica y linfoblástica.
En otro aspecto, la presente invención proporciona un método de tratamiento de un sujeto que sufre, o es susceptible de sufrir, linfoma de Hodgkin o linfoma no de Hodgkin, que comprende administrar en el sujeto que lo necesita una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención, para tratar de esta manera al sujeto que sufre, o es susceptible de sufrir, linfoma de Hodgkin o linfoma no de Hodgkin.
En diversas realizaciones, la invención proporciona un método de tratamiento del cáncer en un sujeto, que comprende además coadministrar uno o más de entre un agente quimioterapéutico, agente de radiación, agente hormonal, agente biológico o un agente antiinflamatorio en el sujeto. En algunas realizaciones, el agente quimioterapéutico es azacitidina, decitabina, clofarabina, erlotinib, bortezomib, carfilzomib, ixazomib, tamoxifeno, trastuzumab, raloxifeno, doxorrubicina, lenalidomida, pomalidomida, fluorouracilo/5-fu, pamidronato disodio, anastrozol, exemestano, ciclofosfamida, epirubicina, letrozol, toremifeno, fulvestrant, fluoximesterona, metotrexato, acetato de megastrol, docetaxel, paclitaxel, testolactona, aziridina, vinblastina, capecitabina, acetato de goselerina, ácido zoledrónico, taxol, vinblastina o vincristina.
En otra realización, el agente quimioterapéutico es un inhibidor de aromatasa.
En una realización, el agente biológico es rituximab, ipilimumab, bevacizumab, cetuximab, panitumumab, trastuzumab u otros anticuerpos monoclonales utilizados para el tratamiento del cáncer.
Entre los métodos delineados en la presente memoria se incluyen aquellos en los que se identifica el sujeto como en necesidad de un tratamiento indicado particular. La identificación de un sujeto en necesidad de dicho tratamiento puede ser a partir del criterio de un sujeto o un profesional sanitario y puede ser subjetivo (p.ej., una opinión) u objetivo (p.ej., medible mediante un ensayo o método diagnóstico).
Además, tal como se ha comentado anteriormente, los compuestos de la invención son inhibidores selectivos de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 y, de esta manera, resultan útiles en el tratamiento de trastornos moduladores por dichas histona-desacetilasas (HDAC). Por ejemplo, compuestos de la invención pueden resultar útiles en el tratamiento del cáncer (p.ej., cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, neuroblastoma, leucemia o linfomas, etc.). De acuerdo con lo anterior, en todavía otro aspecto, según los métodos de tratamiento de la presente invención, se eliminan las células tumorales, o se inhibe su crecimiento mediante la puesta en contacto de dichas células tumorales con un compuesto o composición inventivo, tal como se indica en la presente memoria.
De esta manera, en otro aspecto de la invención, se proporcionan métodos para el tratamiento del cáncer que comprenden administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto inventivo (es decir, de cualquiera de las fórmulas en la presente memoria), tal como se indica en la presente memoria, en un sujeto que lo necesita. En determinadas realizaciones, el sujeto se identifica como en necesidad de dicho tratamiento. En determinadas realizaciones, se proporciona un método para el tratamiento del cáncer, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto inventivo, o una composición farmacéutica que comprende un compuesto inventivo en un sujeto que lo necesita, en cantidades tales y durante un tiempo según resulten necesarios para conseguir el resultado deseado. En determinadas realizaciones de la presente invención, una "cantidad terapéuticamente eficaz" del compuesto inventivo o composición farmacéutica es aquella cantidad que resulta eficaz para eliminar o inhibir el crecimiento de las células tumorales. Los compuestos y composiciones, según el método de la presente invención, pueden administrarse utilizando cualquier cantidad y cualquier vía de administración eficaces para eliminar o inhibir el crecimiento de las células tumorales. De esta manera, la expresión "cantidad eficaz para eliminar o inhibir el crecimiento de células tumorales", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a una cantidad suficiente de agente para eliminar o inhibir el crecimiento de células tumorales. La cantidad exacta requerida variará de sujeto a sujeto, dependiendo de la especie, edad y condición general del sujeto, la gravedad de la infección, el agente anticáncer particular, su modo de administración y similares.
En determinadas realizaciones, el método implica la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo en un sujeto (incluyendo, aunque sin limitación, en un ser humano o animal) que lo necesita. En determinadas realizaciones, los compuestos inventivos resultan útiles para el tratamiento del cáncer y otros trastornos proliferativos, incluyendo, aunque sin limitarse a ellos, cáncer de pulmón (p.ej., cáncer de pulmón de células no pequeñas), cáncer de colon y rectal, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer cerebral, cáncer renal, cáncer ovárico, cáncer de estómago, cáncer de piel, cáncer óseo, cáncer gástrico, cáncer de mama, glioma, glioblastoma, neuroblastoma, carcinoma hepatocelular, carcinoma renal papilar, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, leucemia (p.ej., LMC, LMA, LLC y LLA), linfomas (no de Hodgkin y de Hodgkin), mielomas, retinoblastoma, cáncer cervical, melanoma y/o cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer uterino, cáncer testicular, cáncer esofágico y tumores sólidos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para inhibir la migración de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y. El compuesto X y el compuesto Y son comparativos.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para inducir la maduración de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para alterar la progresión del ciclo celular de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para reducir la viabilidad y supervivencia de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para inducir la diferenciación de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para potenciar el tratamiento de ATRA de baja concentración de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para inducir la parada del ciclo celular de una célula de neuroblastoma, que comprende administrar en la célula una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor selectivo de HDAC1, HDCA2 y/o HDCA6 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. El inhibidor selectivo de HDCA1, HDCA2 y/o HDCA6 puede ser cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en un compuesto de fórmula I, fórmula II, fórmula III, cualquiera de los compuestos presentados en la Tabla 1, compuesto X y compuesto Y.
En algunas realizaciones se proporcionan métodos para tratar el neuroblastoma en un sujeto, que comprende administrar en el sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de compuesto 001, compuesto X o compuesto Y.
En determinadas realizaciones, la invención proporciona un método de tratamiento de cualquiera de los trastornos indicados en la presente memoria, en los que el sujeto es un ser humano.
De acuerdo con lo anteriormente expuesto, la presente invención proporciona además un método para prevenir o tratar cualquiera de las enfermedades o trastornos indicados anteriormente en un sujeto que necesita dicho tratamiento, en el que el método comprende administrar en dicho sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Para cualquiera de los usos anteriores, la dosis requerida variará dependiendo del modo de administración, la condición particular que debe tratarse y el efecto deseado.
Ejemplos
Se proporcionan ejemplos seguidamente con fines ilustrativos y a fin de describir determinadas realizaciones específicas de la invención. Sin embargo, el alcance según las reivindicaciones no se encuentra en modo alguno limitado por los ejemplos proporcionados en la presente memoria. Resultarán evidentes para el experto en la materia diversos cambios y modificaciones de las realizaciones dadas a conocer y que dichos cambios y modificaciones, incluyendo, aunque sin limitación, aquellos relacionados con las estructuras químicas, sustituyentes, derivados, formulaciones y/o métodos de la invención, que pueden llevarse a cabo sin apartarse del espíritu de la invención y el alcance según las reivindicaciones adjuntas. Las definiciones de las variables en las estructuras en los esquemas en la presente memoria son acordes a las posiciones correspondientes en las fórmulas presentadas en la presente memoria.
Ejemplo 1: síntesis de 2-((1-acetil-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 003)
Figure imgf000023_0001
Etapa 1: a una solución de 1 (10,4 g, 56,5 mmoles) y TEA (11,4 g, 113 mmoles) en DCM (60 ml) se añadió gota a gota CbzCl (10 g, 56,5 mmoles) durante 30 min a 0°C. A continuación, la mezcla se sometió a agitación a temperatura ambiente (t.a.) durante 6 h. Se añadió H2O (50 ml), se lavó la capa orgánica con NaCl acuoso, se secó con Na2SO4 anhidro, se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (PE/EA=20:1), proporcionando el compuesto 2 en forma de un sólido blanco (11,6 g, rendimiento: 70%).
Etapa 2: a un matraz que contenía compuesto 3 (1,52 g, 13,1 mmoles) y compuesto 2 (3 g, 10,9 mmoles) en DMF (25 ml) se añadió NaH (1,09 g, 27,2 mmoles) a 0°C. Se sometió a agitación a 60°C durante 3 h. Se añadió H2O y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (AE). Las capas de AE agrupadas se concentraron al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (PE/AE=2:1), proporcionando el compuesto 4 en forma de un sólido amarillo (1,9 g, rendimiento: 54%).
Etapa 3: a una mezcla de compuesto 4 (1,89 g, 5,91 mmoles) en DMSO (15 ml) se añadió K2CO3 (2,4 g, 17,7 mmoles), la mezcla se sometió a agitación a 60°C. A continuación, a la reacción se añadió gota a gota H2O2 al 30% (17 ml, 177 mmoles). Tras completar la reacción, se añadió H2O y se filtró la mezcla de reacción. El sólido blanco resultante se secó, proporcionando el compuesto 5, 1,99 g, rendimiento: 70%).
Etapa 4: Una mezcla de compuesto 5 (6,2 g, 18,3 mmoles), NaClO (11 ml, 25,6 moles) y NaOH 3 N (17 ml, 51,3 mmoles) en t-BuOH (40 ml) se sometió a agitación a una temperatura de entre 0°C y t.a. durante la noche. La mezcla se concentró, se extrajo con AE (30 ml), se lavó con NaCl acuoso, se secó con Na2SO4 y se concentró, proporcionando el compuesto 6 (4,5 g, rendimiento: 80%).
Etapa 5: a una solución de compuesto 6 (2,0 g, 6,45 mmoles) en dioxano (18 ml) se añadió 2-cloropirimidín-5-carboxilato de etilo (1,08 g, 5,80 mmoles), N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (1,7 g, 12,9 mmoles) a 105°C. La reacción se sometió a agitación durante la noche. La mezcla de reacción se concentró al vacío y el residuo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (PE/AE=6:1), proporcionando el compuesto 7 (1,5 g, rendimiento: 51%).
Etapa 6: se añadió HBr/AcOH (6,0 ml) a un matraz que contenía compuesto 7 (3,0 g, 6,52 mmoles) a t.a. durante 3 h. Después, se añadieron 12 ml de Et2O, se filtró la mezcla de reacción y se secó el sólido, proporcionando el compuesto 8 (1,85 g, rendimiento: 70%) en forma de un sólido amarillo.
Etapa 7: a una solución de compuesto 8 (100 mg, 0,31 mmoles) en DCM (4 ml) se añadió Ac2O (47 mg, 0,46 mmoles) y Et3N (0,5 ml) a t.a.t. La reacción se sometió a agitación durante 2 h y la mezcla de reacción se concentró al vacío, proporcionando el compuesto 9 (120 g, rendimiento: 100%).
Etapa 8: a una solución de compuesto 9 (20 mg, 0,33 mmoles) en MeOH (2 ml) y DCM (1 ml) a 0°C se añadió NH2OH (0,4 ml) y se sometió a agitación durante 10 min. A continuación, se añadió NaOH/MeOH (0,8 ml) y la reacción se sometió a agitación durante 2 h. Se concentró la mezcla, se ajustó a un pH de 5 utilizando HCl 2 N, se extrajo con AE (10 ml) y se purificó mediante HPLC prep., proporcionando 2-((1-acetil-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (18 mg, 16%). RMN 1H (500 MHz, DMSO): 510,95 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,38 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,27 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,16 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,72 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,39 - 3,28 (m, 1H), 2,85 (t, J = 12,3 Hz, 1H), 2,61 (t, J = 12,5 Hz, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,97 - 1,86 (m, 1H), 1,77 (t, J = 11,0 Hz, 1H). CL-EM: m/z=356 (M+H)+
Ejemplo 2: síntesis de 4-((5-(hidroxicarbamoil)pirimidín-2-il)amino)-4-fenilpiperidín-1-carboxilato de bencilo (compuesto 002)
Figure imgf000024_0001
A una solución de compuesto 7 (460 mg, 1,0 mmol) en MeOH (10 ml) y DCM (3 ml) a 0°C se añadió NH2OH (1,0 ml) y se sometió a agitación durante 10 min. Se añadió NaOH/MeOH (2,0 ml) y la reacción se sometió a agitación durante 2 h. Se concentró la mezcla, se ajustó a un pH de 5 utilizando HCl 2 N, se extrajo con AE (10 ml), s elavó con NaCl acuoso, se secó con Na2SO4 y se concentró, proporcionando 4-((5-(hidroxicarbamoil)pirimidín-2-il)amino)-4-fenilpiperidín-1-carboxilato de bencilo (400 mg, 89%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10.94 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.40 -7.35 (m, 6H), 7.32 (dt, J = 9.1,4.5 Hz, 1H), 7.26 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 7.15 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 5.08 (s, 2H), 3.92 (d, J = 13.1 Hz, 2H), 3.15 (m, 2H), 2.60 (s, 2H), 1.87 (dd, J = 12.8, 9.1 Hz, 2H). CL-EM: m/z=448 (M+H)+
Ejemplo 3: síntesis de N-hidroxi-2-((4-fenil-1-(fenilcarbamoil)piperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 001)
Figure imgf000024_0002
Etapa 1: A una solución de compuesto 8 (85 mg, 0,26 mmoles) en THF (4 ml) se añadió isocianatobenceno (46 mg, 0,39 mmoles) y DIPEA (0,2 ml) a t.a. La reacción se sometió a agitación durante 2 h y seguidamente se concentró al vacío, proporcionando el compuesto 9 (80 g, rendimiento: 69%).
Etapa 2: A una solución de compuesto 9 (80 mg, 0,18 mmoles) en MeOH (3 ml) y DCM (1 ml) a 0°C se añadió NH2OH (0,2 ml). La reacción se sometió a agitación durante 10 min, momento en el que se añadió NaOH/MeOH (0,4 ml). La reacción se sometió a agitación durante 2 h. La mezcla de reacción resultante se concentró, se ajustó a pH=5 utilizando HCl 2 N, se extrajo con AE (10 ml) y se purificó mediante HPLC prep., proporcionando N-hidroxi-2-((4-fenil-1-(fenilcarbamoil)piperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (14 mg, 17%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 510,83 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,49 (s, 2H), 8,37 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,47-7,46 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,41-7,39 (d, J= 7,4 Hz, 2H), 7,29-7,26 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,23-7,20 (m, J = 7,7 Hz, 2H), 7,18-7,15 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,92 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 13,2 Hz, 2H), 3,13 (t, J = 12,1 Hz, 2H), 2,64 (d, J = 13,0 Hz, 2H), 1,90 (t, J = 11,0 Hz, 2H). CL-EM: m/z=433 (M+H)+
Ejemplo 4: síntesis de 4-((5-(hidroxicarbamoil)pirimidín-2-il)amino)-4-fenilpiperidín-1-carboxilato de etilo (compuesto 004)
Figure imgf000024_0003
Etapa 1: a una solución de compuesto 8 (106 mg, 1,0 mmol), cloroformato de etilo (400 mg, 1,0 mmol) en 5 ml de THF se añadió DIPEA (252 mg, 2,0 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a t.a. durante 4 h, monitorizando mediante LC-EM hasta que se había completado. Tras completarse, la mezcla de reacción se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía flash con PE/AE de 6:1 a 5:1, proporcionando el compuesto diana, el compuesto 9 (320 mg, 82%).
Etapa 2: a una solución de compuesto 9 (300 mg, 0,8 mmoles) en 5 ml de CH3OH/CH2Cl2 se añadió NH2OH (0,8 ml) gota a gota a 0°C. A continuación, la reacción se sometió a agitación durante 10 min a 0°C. Se añadió NaOH/CHsOH a la solución lentamente y se continuó sometiendo a agitación la reacción a 0°C durante 2 h. Tras ajustar el pH de la solución a 6 mediante la utilización de HCl conc., se precipitó el compuesto diana a partir de la solución en forma de un sólido blanco, se lavó con el solvente de mezcla de AE y PE, proporcionando 4-((5-(hidroxicarbamoil)pirimidín-2-il)amino)-4-fenilpiperidín-1-carboxilato de etilo en forma de un sólido blanco (200 mg, 65%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 510,93 (s, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,38 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,26 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,15 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 4,07 -4,00 (m, 2H), 3,88 (d, J = 11,1 Hz, 2H), 3,11 (s, 2H), 2,60 (d, J = 12,6 Hz, 2H), 1,86 (td, J = 13,1,4,3 Hz, 2H), 1,20 - 1,17 (m, 3 nH). CL-EM: m/z=386 (M+H)+
Ejemplo 5: síntesis de 2-((1-acetil-4-isopropilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidm-5-carboxamida (compuesto 005)
Figure imgf000025_0001
Etapa 1: a una solución de compuesto 1 (3 g, 14,28 mmoles) en un matraz de 3 cuellos enjuagado con N2 se añadió bis(trimetilsilil)amida de litio (LiHDMS) (1 M, 21,4 ml) a -78°C. La reacción se sometió a agitación durante 3 h, momento en el que se añadió lentamente 2-yodopropano (3,6 g, 21,43 mmoles). La solución de reacción se sometió a agitación a -78°C y después se calentó a t.a. durante la noche. La mezcla se desactivó con H2O (2 ml), se concentró, se disolvió en AE (200 ml) y se lavó con agua (100 ml) y NaCl saturado (aq., 100 ml). La capa orgánica se concentró, proporcionando el compuesto 2 en forma de un sólido marrón (4 g, 100%).
Etapa 2: a una solución de compuesto 2 (1 g, 3,97 mmoles) en DMSO (30 ml) se añadió K2CO3 (1,6 g, 11,9 mmoles) sometido a agitación a 60°C. D-urante un periodo de 2 h, se añadió gota a gota H2O2 (aq. al 30%, 5 ml). Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. Se añadió AE (100 ml) a la mezcla de reacción y seguidamente se lavó con agua (50 ml?) y NaCl saturado (aq., 50 ml). Las soluciones orgánicas agrupadas se secaron con Na2SO4 anhidro. El solvente se eliminó al vacío, obteniendo el compuesto 3 en forma de un sólido blanco (1 g, 90%).
Etapa 3: a una solución de compuesto 3 (2,7 g, 10 mmoles) en acetonitrilo (AN) (50 ml) se añadió KOH (aq. 4 N, 50 ml) y 1,3-dibromo-5,5-dimetilhydantoína (DBDMH) (2,81 g, 5 mmoles) a 0°C. La reacción se sometió a agitación a t.a. durante la noche. Se concentró la mezcla y se añadió HCl 1 N para ajustar el pH a ~6. La mezcla resultante se extrajo con EA (50 ml). A continuación, la fase acuosa se ajustó a pH~ 9 mediante la adición de KOH, y seguidamente se extrajo con AE (50 ml?). La fase de AE se secó con Na2SO4 anhidro y se concentró el solvente, obteniendo compuesto 4 en forma de un líquido incoloro (1 g, 40%).
Etapa 4: una solución de compuesto 4 (500 mg, 2,06 mmoles) y 2-cloropirimidín-5-carboxilato de etilo (384 mg, 2,06 mmoles) en N-metil-2-pirrolidona (NMP) (10 ml) enjuagado con N2 se sometió a agitación a 140°C durante 1 hora. Se añadió AE (100 ml) a la reacción y la mezcla resultante se lavó con agua (50 ml?) y NaCl saturado (aq., 50 ml). La solución orgánica resultante se concentró y se purificó mediante cromatografía de columna de gel de sílice (PE/AE=5/1), obteniendo el compuesto 5 en forma de un sólido blanco (120 mg, 15%).
Etapa 5: a una solución de compuesto 5 (200 mg, 0,51 mmoles) en DCM (5 ml) se añadió TFA (2 ml). La reacción se sometió a agitación a t.a. durante 30 min. Se concentró la mezcla, obteniendo el compuesto 6 en forma de un líquido marrón (200 mg, 90%).
Etapa 6: a una solución de compuesto 6 (200 mg, 0,709 mmoles) en DCM se añadió Et3N (214 mg, 2,13 mmoles) y cloruro de acetilo (56 mg, 0,709 mmoles) a 0°C. La reacción se sometió a agitación durante 1 hora, tiempo en el que se concentró la mezcla de reacción, obteniendo el compuesto 7 en forma de un líquido marrón (220 mg, 95%) Etapa 7: a una solución de 7 (220 mg) en MeOH (2 ml) se añadió NH2OH (aq. al 50%, 2 ml) y NaoH (saturado en MeOH, 2 ml) a 0°C. La reacción se sometió a agitación durante 1 hora. A continuación, se ajustó el pH de la mezcla de reacción a ~7 con HCl (aq.) 4 N, se concentró al vacío y se purificó mediante HPLC prep., obteniendo compuesto 8 en forma de un sólido blanco (68 mg, 35%). RMN 1H (500 MHz, DMSO): 5 10,97 (s, 1H), 8,57 (s, 2H), 7,44 (s, 1H), 4,28 - 4,20 (m, 1H), 3,69 - 3,58 (m, 1H), 3,21 - 3,06 (m, 1H), 2,66 - 2,57 (m, 1H), 2,57 - 2,53 (m, 1H), 2,42 -2,24 (m, 2H), 1,97 (s, 3H), 1,57 - 1,45 (m, 1H), 1,41 -1,28 (m, 1H), 0,82 (d, J= 6,9 Hz, 6H). CL-EM: m/z=322 (M+H)+
Ejemplo 6: síntesis de 4-((5-(hidroxicarbamoil)pirimidín-2-il)amino)-4-isopropilpiperidín-1-carboxilato de etilo (compuesto 006)
Figure imgf000026_0001
Etapa 1: a una solución de compuesto 6 (200 mg, 0,709 mmoles) en DCM se añadió Et3N (214 mg, 2,13 mmoles) y carbonocloridato de etilo (77 mg, 0,709 mmoles) a 0°C durante 1 hora. Se concentró la mezcla de reacción, obteniendo el compuesto 9 en forma de un líquido marrón (250 mg, 95%).
Etapa 2: a una solución de compuesto 9 (250 mg) en MeOH (2 ml) se añadió NH2OH (aq. al 50%, 2 ml) y NaOH (saturado en MeOH, 2 ml) a 0°C. La mezcla se sometió a agitación durante 1 hora, seguido del ajuste del pH de la solución de reacción a ~7 con HCl (aq.) 4 N; se concentró y se purificó mediante HPLC prep., obteniendo 4-((5-(hidroxicarbamoil)pirimidín-2-il)amino)-4-isopropilpiperidín-1-carboxilato de etilo en forma de un sólido blanco (67 mg, 30%). RMN 1H (500 MHz, DMSO): 5 10,95 (m, 1H), 8,97 (m, 1H), 8,57 (s, 2H), 7,40 (s, 1H), 4,01 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 3,89 - 3,73 (m, 2H), 3,53 - 3,23 (m, 2H), 3,02 - 2,78 (m, 2H), 2,60 - 2,52 (m, 1H), 2,40 - 2,26 (m, 2H), 1,44 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 1,16 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 0,82 (d, J = 6,9 Hz, 6H). CL-EM: m/z=352 (M+H)+
Ejemplo 7: síntesis de 4-((5-(hidroxicarbamoil)pirimidín-2-il)amino)-4-isopropilpiperidín-1-carboxilato de bencilo (compuesto 007)
Figure imgf000026_0002
Etapa 1: a una solución de compuesto 6 (200 mg, 0,709 mmoles) en DCM se añadió Et3N (214 mg, 2,13 mmoles) y carbonocloridato de bencilo (181 mg, 1,06 mmoles) a 0°C durante 2 h. Se concentró la mezcla, obteniendo el compuesto 11 en forma de un líquido marrón (300 mg, 95%).
Etapa 2: a una solución de compuesto 11 (300 mg) en MeOH (2 ml) se añadió NH2OH (aq. al 50%, 2 ml) y NaOH (saturado en MeOH, 2 ml) a 0°C. La mezcla se sometió a agitación durante 1 hora, seguido del ajuste del pH de la solución de reacción a ~7 con HCl (aq.) 4 N; se concentró y se purificó mediante HPLC prep., obteniendo 4-((5-(hidroxicarbamoil)pirimidín-2-il)amino)-4-isopropilpiperidín-1-carboxilato de bencilo en forma de un sólido blanco (78,1 mg, 28%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 510,99 (m, 1H), 8,57 (m, 2H), 7,53 - 7,26 (m, 6H), 5,06 (s, 2H), 3,94 - 3,72 (m, 2H), 3,07 - 2,77 (m, 2H), 2,61 - 2,53 (m, 1H), 2,42 - 2,24 (m, 2H), 1,59 - 1,29 (m, 2H), 0,81 (d, J = 6,8 Hz, 6H). CL-EM: m/z=414 (M+H)+
Ejemplo 8: síntesis de N-hidroxi-2-((1-((4-metoxifenil)carbamoil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 008)
Figure imgf000026_0003
Etapa 1: a una solución de compuesto 1 (10 g, 56,5 mmoles) en DCM (50 ml) se añadió TEA (11,4 g, 113 mmoles), seguido de CbzCl (10,4 g, 56,5 mmoles) mientras el sistema se encontraba en un baño de agua. La mezcla se sometió a agitación durante 3 h a t.a. Se añadió agua (50 ml) a la mezcla de reacción y se extrajo con AE (150 ml?). Se lavó la fase orgánica con sal saturada y se secó sobre Na2SO4. La concentración y purificación con una columna de gel de sílice con AE/PE=1/20 rindió el compuesto 2 (3 g, 18%) en forma de un aceite.
Etapa 2: a una solución de compuesto 2 (100 g, 0,36 moles) y cianuro de bencilo (59 g, 0,43 moles) en DMF (400 ml) se añadió NaH (37 g, 0,94 moles) a 0°C. Tras incrementar la temperatura a 60°C, la mezcla se sometió a agitación a 60°C durante la noche. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. Tras el enfriamiento, se añadió agua a la mezcla, resultando en un sólido verde. El compuesto diana se purificó mediante cromatografía flash con PE/EA desde 30:1 a 2:1, rindiendo el compuesto 3 (38 g, 79%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 3: a una solución de compuesto 3 (38 g, 112 mmoles) en 300 ml de DMSO se añadió H2O2 al 30% (190 ml, 2248 mmoles) lentamente a 0°C seguido de agitación durante 30 min. A continuación, se incrementó la temperatura lentamente a 40°C y se sometió a agitación durante 30 min adicionales. Tras incrementar la temperatura a 60°C, la mezcla se sometió a agitación a 60°C durante la noche. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. Tras el enfriamiento, se añadió agua a la mezcla, proporcionando un sólido blanco, que se aisló mediante filtración (38 g, ~95%).
Etapa 4: a una solución de compuesto 4 (38 g, 106 mmoles) en 400 ml de BuOH se añadió lentamente NaClO (64,2 ml, 149 mmoles), seguido de NaOH 3 N (99 ml, 298 mmoles) a 0°C. A continuación, la mezcla se sometió a agitación a t.a. durante la noche. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. Se concentró la mezcla y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se separó, se lavó y se secó. A continuación, la mezcla se disolvió en Et2O y se ajustó el pH a 2 utilizando HCl/dioxano. Se recogió el precipitado, rindiendo el compuesto diana 5 (38 g,100%).
Etapa 5: a una solución de compuesto 5 (9,6 g, 26 mmoles), 2-Cl-pyrimidine (4,9 g, 26 mmoles) en 150 ml de 1,4-dioxano se añadió DIPEA (7,7 g, 60 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 110°C durante la noche. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. Se añadió agua (50 ml) y la mezcla se extrajo con EtOAc. Los extractos orgánicos agrupados se lavaron y se secaron. El compuesto diana 6 (11 g, 90%) se purificó mediante cromatografía flash con PE/EA de 30:1 a 2:1.
Etapa 6: a una solución de compuesto 6 (1 g, 2,17 mmoles) en MeOH (15 ml) se añadió Pd/C (0,1 g, aq. al 10%) bajo N2. La reacción se sometió a agitación bajo una atmósfera de H2 durante la noche, seguido de la filtración a través de Celite y el lavado con MeOH. La concentración rindió el compuesto 7 (690 mg, 98%) en forma de un sólido amarillo pálido.
Etapa 7: a una mezcla de compuesto 7 (81 mg, 0,2 mmoles) y 1-isocyanato-4-metoxibenceno (21 mg, 0,2 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIp Ea (46 mg, 0,36 mmoles). La reacción se sometió a agitación durante 1h. a t.a., se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel (DCM:MeOH=10:1), proporcionando 8 (80 mg, 84%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 8: a una solución de compuesto 8 (80 mg, 0,16 mmoles) en MeOH (3 ml) y DCM (1 ml) a 0°C se añadió NH2OH (0,2 ml) seguido de filtración durante 10 min. A continuación, se añadió NaOH/MeOH (0,4 ml) y la reacción se sometió a agitación durante 2 h. Se concentró la reacción y se ajustó el pH a 5, seguido de la extracción con EA (10 ml). La purificación mediante HPLC prep. proporcionó el producto deseado, el compuesto 008 (15 mg, 21%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 58,60 (s, 1H), 8,32 (s, 2H), 8,19 (s, 1H), 7,40 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,27 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,16 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 4,00 (d, J = 13,4 Hz, 2H), 3,70 (s, 3H), 3,11 (t, J = 12,2 Hz, 2H), 2,63 (d, J = 12,3 Hz, 2H), 1,89 (t, J = 11,1 Hz, 2H). CL-EM: m/z=463 (M+H)+
Ejemplo 9: síntesis de 2-((1,4-difenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 009)
Figure imgf000027_0001
Etapa 1: una mezcla de compuesto 1 (200 mg, 0,49 mmoles), bromobenceno (77 mg, 0,49 mmoles), Pd2(dba)3 (20 mg, 0,02 mmoles), Xantphos (12 mg, 0,02 mmoles) y Cs2CO3 (480 mg, 1,47 mmoles) en tolueno (8 ml) se sometió a agitación a 95°C durante la noche bajo N2. Tras completarla, la reacción se filtró y se concentró y purificó mediante cromatografía en gel (PE: EA=1:1), proporcionando compuesto 2 (60 mg, 20%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 2: a una solución de compuesto 2 (60 mg, 0,15 mmoles) en MeOH (3 ml) y DCM (1 ml) a 0°C se añadió NH2OH (0,1 ml) seguido de agitación durante 10 min. A continuación, se añadió NaOH/MeOH (0,2 ml) y se sometió a agitación durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción, se ajustó el pH a 5 y se extrajo con eA (10 ml). La purificación mediante HPLC prep. proporcionó el producto deseado, el compuesto 009 (18 mg, 32%). r Mn 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,77 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,47 (d, J = 118,1 Hz, 2H), 8,14 (s, 1H), 7,43 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,28 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,22 - 7,14 (m, 3H), 6,96 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 6,74 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,58 (d, J = 12,2 Hz, 2H), 2,98 (t, J = 11,6 Hz, 2H), 2,72 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 2,09 (dd, J = 12,4, 9,3 Hz, 2H). CL-EM: m/z=390 (M+H)+ Ejemplo 10: síntesis de 2-((1-((2-fluorofenil)carbamoil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 010)
Figure imgf000028_0001
Etapa 1:a una mezcla de compuesto 1 (50 mg, 0,15 mmoles) y 1-fluoro-2-isocyanatobenceno (21 mg, 0,15 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIPEA (39 mg, 0,30 mmoles) a t.a. seguido de agitación durante 1 hora. Se concentró la mezcla de reacción y se purificó mediante cromatografía en gel (PE:EA=1:1), proporcionando el compuesto 2 (60 mg, 86%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 rindió el compuesto 010 (12 mg, 44%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 510,84 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,32 (d, J = 59,2 Hz, 3H), 8,18 (s, 1H), 7,47 - 7,35 (m, 3H), 7,28 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,17 (dd, J = 13,9, 6,5 Hz, 2H), 7,10 (dd, J = 6,7, 2,9 Hz, 2H), 3,98 (d, J = 13,0 Hz, 2H), 3,15 (t, J = 12,3 Hz, 2H), 2,64 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 1,92 (t, J = 10,9 Hz, 2H). CL-EM: m/z=451 (M+H)+
Ejemplo 11: síntesis de 2-((1-((3,4-diclorofenil)carbamoil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 011)
Figure imgf000028_0002
Etapa 1: a una mezcla de compuesto 1 (60 mg, 0,18 mmoles) y 1,2-dicloro-4-isocyanatobenceno (34 mg, 0,18 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIPEA (46 mg, 0,30 mmoles) a t.a. seguido de agitación durante 1 hora. Se concentró la mezcla de reacción y se purificó mediante cromatografía en gel (PE:EA=1:1), proporcionando el compuesto 2 (60 mg, 70%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 rindió el compuesto 011 (39 mg, 65%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,93 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 7,47 (s, 2H), 7,40 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,27 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,21 - 7,12 (m, 1H), 4,02 (d, J = 12,9 Hz, 2H), 3,15 (t, J = 12,4 Hz, 2H), 2,65 (d, J = 12,5 Hz, 2H), 1,91 (t, J = 10,8 Hz, 2H). CL-EM: m/z=502 (M+H)+
Ejemplo 12: síntesis de N-hidroxi-2-((1-(metil(fenil)carbamoil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 012)
Figure imgf000028_0003
Etapa 1: a una mezcla de compuesto 1 (40 mg, 0,12 mmoles) y cloruro metil(fenil)carbámico (21 mg, 0,12 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIp Ea (31 mg, 0,24 mmoles) a t.a. La reacción se sometió a agitación durante 1 h, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel (PE:EA=1:1), proporcionando el compuesto 2 (50 mg, 91%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 rindió el compuesto 012 (21 mg, 47%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 58,57 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,35 (t, J = 7,9 Hz, 2H), 7,29 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,24 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 3H), 7,08 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 13,4 Hz, 2H), 3,09 (s, 3H), 2,90 (t, J = 12,3 Hz, 2H), 2,44 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 1,69 (t, J = 10,9 Hz, 2H). CL-EM: m/z=447 (M+H)+
Ejemplo 13: síntesis de 2-((1-((3-fluorofenil)carbamoil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 013)
Figure imgf000029_0001
Etapa 1: a una mezcla de compuesto 1 (60 mg, 0,18 mmoles) y 1-fluoro-3-isocyanatobenceno (25 mg, 0,18 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIPEA (46 mg, 0,36 mmoles) a t.a. La reacción se sometió a agitación durante 1 h, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel (PE:EA=1:1), proporcionando el compuesto 2 (60 mg, 71%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 rindió el compuesto 013 (40 mg, 68%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,91 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,46 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,25 (dt, J = 20,3, 7,8 Hz, 4H), 7,16 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,72 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 4,03 (d, J = 13,4 Hz, 2H), 3,14 (t, J = 12,2 Hz, 2H), 2,65 (d, J = 12,7 Hz, 2H), 1,91 (t, J = 10,9 Hz, 2H). CL-EM: m/z=451 (M+H)+
Ejemplo 14: síntesis de 2-((1-((4-fluorofenil)carbamoil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 014)
Figure imgf000029_0002
Etapa 1: a una mezcla de compuesto 1 (70 mg, 0,18 mmoles) y 1-fluoro-4-isocyanatobenceno (25 mg, 0,18 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIPEA (46 mg, 0,36 mmoles) a t.a. La reacción se sometió a agitación durante 1 h, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel (DCM: EA=1:1), proporcionando el compuesto 2 (720 mg, 85%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 rindió el compuesto 014 (25 mg, 37%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,76 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,70 - 8,07 (m, 4H), 7,51 - 7,43 (m, 2H), 7,40 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,27 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,16 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 8,9 Hz, 2H), 4,02 (d, J = 13,2 Hz, 2H), 3,13 (t, J = 12,3 Hz, 2H), 2,64 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 1,90 (dd, J = 12,6, 9,3 Hz, 2H). CL-EM: m/z=451 (M+H)+
Ejemplo 15: síntesis de N-hidroxi-2-((4-fenil-1-(p-tolylcarbamoil)piperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 015)
Figure imgf000029_0003
Etapa 1: una mezcla de 1 (60 mg, 0,18 mmoles) y 1-isocyanato-4-metilbenceno (25 mg, 0,18 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIPEA (46 mg, 0,36 mmoles) a t.a., se sometió a agitación durante 1 hora, se concentró y se purificó mediante cromatografía en gel (DCM:MeOH=10:1), proporcionando 2 (70 mg, 85%) en forma de sólido blanco. Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 rindió el compuesto 015 (19 mg, 29%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 58,38 (dd, J = 107,5, 101,2 Hz, 4H), 7,31 (dd, J = 48,2, 18,7 Hz, 6H), 7,16 (s, 1H), 7,01 (s, 2H), 4,00 (s, 2H), 3,11 (s, 2H), 2,62 (s, 2H), 2,21 (d, J = 7,4 Hz, 3H), 1,89 (s, 2H). CL-EM: m/z=447 (M+H)+ Ejemplo 16: síntesis de N-hidroxi-2-((1-(metilcarbamoil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 016)
Figure imgf000030_0001
Etapa 1: a una mezcla de compuesto 1 (81 mg, 0,2 mmoles) y cloruro metilcarbámico (19 mg, 0,2 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIPEA (46 mg, 0,36 mmoles) a t.a. seguido de filtración durante 1 h. Se concentró la reacción y se purificó mediante cromatografía en gel (DCM:MeOH=10:1), proporcionando el compuesto 2 (50 mg, 61%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 rindió el compuesto 016 (22 mg, 46%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,71 (s, 1H), 8,95 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,37 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,26 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,15 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 6,40 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,80 (d, J = 13,1 Hz, 2H), 2,98 (t, J = 12,2 Hz, 2H), 2,60 -2,53 (m, 5H), 1,80 (dd, J = 12,6, 9,1 Hz, 2H). CL-EM: m/z=371 (M+H)+
Ejemplo 17: síntesis de N-hidroxi-2-((4-fenil-1-(fenilcarbamothioyl)piperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 017)
Figure imgf000030_0002
Etapa 1: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 proporcionó el compuesto 2 (40 mg, 58%). Etapa 2: a una mezcla de compuesto 2 (40 mg, 0,13 mmoles) e isothiocyanatobenceno (17 mg, 0,13 mmoles) en THF (2 ml) se añadió DIPEA (34 mg, 0,26 mmoles) a t.a. seguido de agitación durante 20 min. Se concentró la mezcla de reacción y se purificó mediante HPLC prep., proporcionando el compuesto 017 (13 mg, 22%) en forma de un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 59,29 (s, 1H), 8,68 - 8,23 (m, 3H), 7,41 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,29 (t, J = 5,1 Hz, 6H), 7,18 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,11 -7,02 (m, 1H), 4,64 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 3,39 (d, J = 12,0 Hz, 2H), 2,69 (d, J = 13,0 Hz, 2H), 2,01 (t, J = 11,2 Hz, 2H). CL-EM: m/z=449 (M+H)+
Ejemplo 18: síntesis de 2-((1-((3-fluorofenil)sulfonil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 018)
Figure imgf000030_0003
Etapa 1: a una solución de compuesto 1 (55 mg, 0,14 mmol), sulfocloruro de 3-fluorobenceno (27 mg, 0,14 mmol) en 5 ml de THF se añadió DIPEA (44 mg, 0,34 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a t.a. durante 2 h. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana (30 mg, 46%) se purificó mediante cromatografía flash con PE/AE (3:1).
Etapa 2: a una solución de compuesto 2 (30 mg, 0,06 mmoles) en 5 ml de CH3OH/CH2Cl2 se añadió lentamente NH2OH (2 ml) a 0°C seguido de agitación durante 10 min. A continuación, se añadió lentamente NaOH/CHsOH a la solución y se sometió a agitación durante 3 h. Tras eliminar el solvente de la solución, se ajustó el pH a 6 con HCl 2 N. El compuesto diana, compuesto 018, (13 mg, 46%) se purificó mediante HPLC prep. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 58,91 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,75 - 7,68 (m, 1H), 7,66 - 7,55 (m, 3H), 7,32 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,25 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,15 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 2,63 (t, J = 12,2 Hz, 4H), 2,00 (s, 2H). CL-EM: m/z=472 (M+H)+
Ejemplo 19: síntesis de 2-((1-((4-clorofenil)sulfonil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 019)
Figure imgf000031_0001
Etapa 1: a una solución de compuesto 1 (70 mg, 0,17 mmol) y sulfodoruro de 4-clorobenceno (36 mg, 0,17 mmol) en 5 ml de THF se añadió DIPEA (44 mg, 0,34 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a t.a. durante 2 h. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana, compuesto 2 (56 mg, 65%) se purificó mediante cromatografía flash con PE/AE (3:1).
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 18 rindió el compuesto 019. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 58,40 (t, J = 60,5 Hz, 2H), 8,02 (s, 1H), 7,79 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,73 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,24 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,15 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 3,59 (d, J = 11,3 Hz, 2H), 2,62 (dd, J = 25,8, 13,9 Hz, 4H), 1,99 (s, 2H). CL-EM: m/z=488 (M+H)+
Ejemplo 20: síntesis de N-hidroxi-2-((4-fenil-1-(o-tolylsulfonil)piperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 020)
Figure imgf000031_0002
Etapa 1: a una solución de compuesto 1 (55 mg, 0,14 mmoles) y sulfocloruro de 2-metilbenceno (26 mg, 0,14 mmoles) en 5 ml de THF se añadió DIPEA (44 mg, 0,34 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a t.a. durante 2 h. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana (40 mg, 62,5%) se purificó mediante cromatografía flash con PE/AE (3:1).
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 18 rindió el compuesto 020. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 58,96 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,58 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,44 (dd, J = 20,0, 7,7 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,26 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,15 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,53 (d, J = 12,1 Hz, 2H), 2,89 (t, J = 12,0 Hz, 2H), 2,67 (s, 2H), 2,59 (s, 3H), 1,96 (s, 2H). CL-EM: m/z=468 (M+H)+ Ejemplo 21: Síntesis de N-hidroxi-2-((4-fenil-1-tosylpiperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 021)
Figure imgf000031_0003
Etapa 1: a una solución de compuesto 1 (55 mg, 0,14 mmoles) y sulfocloruro de 4-metilbenceno (26 mg, 0,14 mmoles) en 5 ml de THF se añadió DIPEA (44 mg, 0,34 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a t.a. durante 2 h. Se utilizó CL-EM para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana (48 mg, 75%) se purificó mediante cromatografía flash con PE/AE (3:1).
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 18 rindió el compuesto 021. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,85 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 7,65 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,45 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,24 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,14 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 3,56 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 2,66 (s, 2H), 2,56 (t, J = 11,9 Hz, 2H), 2,41 (s, 3H), 2,00 (d, J = 10,5 Hz, 2H). CL-EM: m/z=468 (M+H)+
Ejemplo 22: síntesis de N-hidroxi-2-((4-fenil-1-((4-(trifluorometil)fenil)sulfonil)piperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 022)
Figure imgf000032_0001
Etapa 1: a una mezcla de compuesto 1 (55 mg, 0,13 mmoles) y cloruro de 4-(trifluorometil)benceno-1-sulfonilo (33 mg, 0,13 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIPEA (31 mg, 0,24 mmoles) a t.a. seguido de agitación durante 20 min. Se concentró la mezcla de reacción y se purificó mediante cromatografía en gel (PE:EA=2:1), proporcionando el compuesto 2 (55 mg, 79%) en forma de un sólido amarillo.
Etapa 2: a una solución de compuesto 2 (60 mg, 0,1 mmoles) en MeOH (3 ml) y DCM (1 ml) a 0°C se añadió NH2OH (0,1 ml) seguido de agitación durante 10 min. A continuación, se añadió NaOH/MeOH (0,2 ml) y la reacción se sometió a agitación durante 2 h, seguido de la concentración. Se ajustó el pH a 5 y se extrajo con EA (10 ml). La purificación mediante HPLC prep. proporcionó el compuesto 022 (20 mg, 38%). RMN 1H (500 MHz, d Ms O) 5 10,94 (s, 1H), 8,57 (t, J = 163,9 Hz, 3H), 8,03 (c, J = 8,4 Hz, 5H), 7,30 (d, J = 7,7 Hz, 2H), 7,24 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,15 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,64 (d, J = 12,1 Hz, 2H), 2,65 (t, J = 11,3 Hz, 4H), 2,01 (d, J = 11,1 Hz, 2H). CL-EM: m/z=522 (M+H)+.
Ejemplo 23: síntesis de N-hidroxi-2-((4-fenil-1-(fenilsulfonil)piperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 023)
Figure imgf000032_0002
Etapa 1: a una solución de compuesto 1 (80 mg, 0,25 mmol) y sulfocloruro de benceno (44 mg, 0,25 mmoles) en 5 ml de THF se añadió DIPEA (80 mg, 0,63 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a t.a. durante 3 h. Se utilizó la CL-EM para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana (60 mg, 51%) se purificó mediante cromatografía flash con PE/AE (2:1).
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 18 rindió el compuesto 023. RMN 1H (400 MHz, DMSO) 5 10,88 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,28 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,82 - 7,75 (m, 2H), 7,73 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,24 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,14 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 3,59 (d, J = 11,7 Hz, 2H), 2,67 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 2,58 (t, J = 11,9 Hz, 2H), 1,99 (t, J = 11,1 Hz, 2H). CL-EM: m/z=454 (M+H)+
Ejemplo 24: síntesis de 2-((1-((2,6-difluorofenil)carbamoil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidm-5-carboxamida (compuesto 024)
Figure imgf000032_0003
Etapa 1: a una mezcla de compuesto 1 (60 mg, 0,18 mmoles) y 1,3-difluoro-2-isocianatobenceno (28 mg, 0,18 mmoles) en THF (4 ml) se añadió DIPEA (46 mg, 0,36 mmoles) a t.a. seguido de agitación durante 20 min. Se concentró la reacción y se purificó mediante cromatografía en gel (PE:MeOH=2:1), proporcionando el compuesto 2 (70 mg, 81%) en forma de un sólido amarillo.
Etapa 2: un procedimiento análogo a la etapa 2 en el Ejemplo 9 rindió el compuesto 024 (28 mg, 43%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,94 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 8,24 (d, J = 12,1 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,32 - 7,22 (m, 3H), 7,17 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,10 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 3,97 (d, J = 13,5 Hz, 2H), 3,16 (t, J = 12,4 Hz, 2H), 2,64 (d, J = 12,6 Hz, 2H), 1,92 (t, J = 10,9 Hz, 2H). CL-EM: m/z=469 (M+H)+
Ejemplos 25-26 Síntesis de (R) y (S) N-hidroxi-2-((1-(3-metil-2-fenilbutanoyl)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuestos 025 y 026 )
Figure imgf000033_0001
Etapa 1: a una solución de compuesto 7 (200 mg, 0,50 mmoles) y ácido 3-metil-2-fenilbutanoico (90 mg, 0,50 mmoles) en 5 ml de DMF se añadió HOAT (68 mg, 0,50 mmoles), EDCI (78 mg, 0,50 mmoles) y DIPEA (129 mg, 1 mmol). La mezcla se sometió a agitación a 60°C durante la noche y se utilizó CL-EM para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto racémico 8 (200 mg, 83%) se purificó mediante filtración a través de gel de sílice tras la extracción mediante AE. La HPLC quiral proporcionó las dianas R y S por separado.
Etapa 2: a una solución de cada uno de los compuestos de la etapa anterior (40 mg, 0,08 mmoles) en 5 ml de CH3OH/CH2Cl2 se añadió NH2OH (0,1 ml) lentamente a 0°C seguido de filtración durante 10 min. Se añadió NaOH/CH3OH (0,3 ml) a la solución lentamente y se sometió a agitación durante 2 h. Tras eliminar el solvente de la solución, se ajustó el pH a 6 con HCl 2 N. El compuesto diana se purificó mediante HPLC prep., proporcionando el compuesto 025 (R) (26 mg, 26%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,93 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,18 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 7,39 - 7,25 (m, 6H), 7,25 - 7,13 (m, 2H), 7,09 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,21 -3,91 (m, 1H), 3,64 (dd, J = 22,1, 9,9 Hz, 1H), 3,38 -2,83 (m, 1H), 2,64 (s, 1H), 2,26 (s, 2H), 1,82 (d, J = 43,9 Hz, 1H), 1,44 (s, 1H), 1,05 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 0,96 (dd, J = 12,5, 6,4 Hz, 3H), 0,73 (s, 1H), 0,61 (t, J = 7,3 Hz, 3H), CL-EM: m/z=474 (M+H)+. Compuesto 026 (S): (27 mg, 27%), RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 10,94 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,18 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,39 -7,25 (m, 6H), 7,19 (dt, J = 14,9, 8,7 Hz, 2H), 7,08 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,02 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 13,6 Hz, 1H),4,14-3,97(m, 1H), 3,64 (dd, J = 21,8, 10,0 Hz, 1H), 3,02-2,86(m, 1H),2,63 (d, J = 11,8 Hz, 1H), 2,24 (d, J = 12,9 Hz, 2H), 1,91-1,70 (m, 1H), 1,44 (s, 1H), 0,96 (dd, J = 12,6, 6,4 Hz, 3H), 0,73 (s, 1H), 0,61 (t, J = 7,4 Hz, 3H). CL-EM: m/z=474 (M+H)+
Ejemplo 27: síntesis de (R)-N-hidroxi-2-((4-metil-1-(2-fenilpropanoyl)piperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuesto 027)
Figure imgf000033_0002
Etapa 1: se añadió lentamente bis(trimetilsilil)amida de litio (solución 1,0 M en THF, 240 ml, 240 mmoles) a un matraz de fondo redondo con compuesto 1 (25 g, 120 mmoles) a -76°C bajo N2. La reacción se sometió a agitación durante 4 h a -76°C. A continuación, se añadió yodo metano (15 ml, 240 mmoles) al sistema. La mezcla de reacción se sometió a agitación a -76°C durante 30 min y después se calentó hasta la temperatura ambiente durante la noche. La mezcla resultante se desactivó con 150 ml de NH4Cl acuoso saturado, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas se lavaron con agua y solución hipersalina y después se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron, proporcionando el compuesto diana 2 (25 g, 93%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 2: se añadió K2CO3 (31 g, 223 mmoles) a la solución del compuesto 2 (25 g, 111 mmoles) en DMSO (120 ml). A continuación, se añadió lentamente H2O2 (100 ml) a la reacción gota a gota a 60°C. La reacción se sometió a agitación durante la noche a 60°C. Tras completarla, se añadió agua y la mezcla se extrajo con EA. Las capas orgánicas se lavaron con agua y solución hipersalina y después se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron, proporcionando la diana, el compuesto 3 (26 g, 96%) en forma de un sólido blanco.
Etapa 3: el compuesto 3 (26 g, 107 mmoles) se disolvió con CH3CN (200 ml) y KOH 2 N (100 ml). A continuación, se añadió 1,3-dibromo-5,5-dimetilimidazolidine-2,4-dione (15 g, 54 mmoles) a la reacción y se sometió a agitación durante la noche. A continuación, se ajustó el pH de la reacción a 5 con HCl 2 N y se extrajo con EA para eliminar las impurezas. La fase acuosa se ajustó a un pH de 10. Se recogió el precipitado, proporcionando el producto deseado en forma de un sólido blanco (16 g, 69%).
Etapa 4: la solución de compuesto 4 (2 g, 9,34 mmoles), 2-cloropirimidín-5-carboxilato de etilo (2,6 g, 14,02 mmoles) y DIPEA (5,3 g, 28,03 mmoles) en 1,4-dioxano (25 ml) se calentó a 95°C durante la noche. La concentración y purificación mediante una columna de gel de sílice con EA/PE=1/5, proporcionó el compuesto 5 (1,8 g, 53%) en forma de un sólido amarillo pálido.
Etapa 5: a una solución de compuesto 5 (150 mg, 0,41 mmoles) en DCM (3 ml) se añadió TFA (3 ml) a t.a. La reacción se sometió a agitación durante 30 min. y la mezcla resultante se concentró, proporcionando el compuesto 6 sin purificación adicional (108 mg, 100%).
Etapa 6: a una solución de compuesto 6 (108 mg, 0,41 mmoles) y ácido (R)-2-fenilpropanoico (61,5 mg, 0,41 mmoles) en 5 ml de DCM se añadieron 2 ml de TEA. La mezcla se sometió a agitación a t.a. durante 2 h y se utilizó la CL-EM para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana 7 (100 mg, 62%) se purificó mediante filtración a través de gel de sílice.
Etapa 7: a una solución de compuesto 7 (100 mg, 0,25 mmoles) en 5 ml de CH3OH/CH2Cl2 se añadió lentamente NH2OH (1 ml) a 0°C seguido de filtración durante 10 min. Se añadió NaOH/CH3OH (2 ml) a la solución lentamente y después se sometió a agitación durante 2 h. Tras eliminar el solvente de la solución, se ajustó el pH a 6 con HCl 2 N. El compuesto diana, compuesto 027 (62 mg, 62%), se purificó mediante HPLC prep., rindiendo un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 5 11,04 (s, 1H), 8,58 (d, J = 10,3 Hz, 2H), 7,48 -7,41 (m, 1H), 7,36 -7,16 (m, 5H), 4,10 (cd, J = 20,4, 6,8 Hz, 1H), 3,96 (dd, J = 47,4, 13,4 Hz, 1H), 3,57 (dd, J = 37,9, 13,8 Hz, 1H), 3,22 (t, J = 11,3 Hz, 0,5H), 3,05 -2,86 (m, 1,5H), 2,27 (t, J = 15,7 Hz, 1H), 2,02 (t, J = 14,7 Hz, 1H), 1,46 (ddd, J = 28,7, 17,1, 7,1 Hz, 1H), 1,37 (s, 1H), 1,30 -1,20 (m, 3H),1,18(s, 0,5H), 1,17 (s, 1H), 0,56 (t, J = 10,4 Hz, 0,5H). CL-EM: m/z=384 (M+H)+
Ejemplo 28: síntesis de 2-((1-(2-(1H-indol-3-il)acetil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 028)
Figure imgf000034_0001
Etapa 1: a una solución de compuesto 7 (100 mg, 0,25 mmoles) y ácido 2-(1H-indol-3-il)acético (44 mg, 0,25 mmoles) en 5 ml de DMF se añadió HOAT (68 mg, 0,50 mmoles), EDCI (78 mg, 0,50 mmoles) y DIPEA (129 mg, 1 mmol). La mezcla se sometió a agitación a 60°C durante la noche. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana 8 (90 mg, 75%) en forma de un sólido amarillo se obtuvo mediante filtración por gel de sílice tras la extracción con EA.
Etapa 2: a una solución de compuesto 8 (90 mg, 0.19 mmoles) en 5 ml de CH3OH/CH2Cl2 se añadió NH2OH (0,2 ml) lentamente a 0°C; después, se sometió a agitación durante 10 min; se añadió NaOH/CH3OH (0,5 ml) a la solución lentamente; después, se sometió a agitación durante 2 h. Tras eliminar el solvente de la solución, se ajustó el pH a 6 con HCl 2 N. El compuesto diana, compuesto 028 (9 mg, 10%), se purificó mediante HPLC prep., rindiendo un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 510,92 (d, J = 11,9 Hz, 2H), 8,60 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,59 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,20 (dd, J = 18,3, 10,7 Hz, 3H), 7,10 (dd, J = 14,2, 7,4 Hz, 4H), 6,98 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 3,94 -3,86 (m, 1H), 3,84 (s, 1H), 3,78 (s, 1H), 3,23 (t, J = 12,3 Hz, 1H), 2,84 (t, J = 12,3 Hz, 1H), 2,36 (s, 1H), 1,66 (s, 1H), 1,40 (s, 1H). CL-EM: m/z=471 (M+II)+.
Ejemplos 29-30 Síntesis de (S) y (R) N-hidroxi-2-((1-(4-metil-2-fenilpentanoyl)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)pirimidín-5-carboxamida (compuestos 029 y 030)
Figure imgf000035_0001
Etapa 1: a una solución de ácido 2-fenilacético (250 mg, 1,84 mmoles) en THF (3 ml) se añadió LHDMS (4 ml, 4 mmoles) a 0°C bajo N2. La reacción se sometió a agitación durante 15 min; después, se añadió 1-iodo-2-metilpropane (0,23 ml, 2,02 mmoles) a la solución y se sometió a agitación a t.a. durante la noche. Tras completarla, se añadió agua y la mezcla se extrajo con EA. El compuesto diana 2 (335 mg, 95%) se obtuvo en forma de un sólido blanco seguido de la purificación mediante una columna de gel de sílice.
Etapa 2: a una solución de compuesto 2 (188 mg, 0,98 mmoles) y 2-(4-fenilpiperidm-4-ilamino)pirimidm-5-carboxilato de etilo (400 mg, 0,98 mmoles) en 5 ml de d Mf se añadió Ho a T (267 mg, 1,96 mmoles), EDCI (304 mg, 1,96 mmoles) y DIPEA (507 mg, 3,93 mmoles). La mezcla se sometió a agitación a 60°C durante la noche. Se utilizó la CCF para monitorizar el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana 3 (220 mg, 75%) se purificó mediante columna de gel de sílice con AE/PE=1/2. Se aisló el compuesto 3 a partir de la HPLC quiral, proporcionando el compuesto R- (90 mg, 41%) y el compuesto S-(90 mg, 41%).
Etapa 3: A una solución de compuestos de la etapa anterior (90 mg, 0,18 mmoles) en 5 ml de CH3OH/CH2Cl2 se añadió lentamente NH2OH (0,2 ml) a 0°C, seguido de filtración durante 10 min. Se añadió lentamente NaOH/CH3OH (0,4 ml) a la solución y después se sometió a agitación durante 2 h. Tras eliminar el solvente, se ajustó el pH a 6 con HCl 2 N. El compuesto diana se purificó mediante HPLC prep.: Compuesto 29 (S) (60 mg, 68%). RMN 1H (500 MHz, DMSO) 510,91 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,14 (d, J = 18,9 Hz, 1H), 7,44 - 7,23 (m, 6H), 7,13 (ddd, J = 30,2, 19,8, 8,3 Hz, 2H), 7,01 - 6,95 (m, 2H), 4,34 (s, 1H), 4,11 - 3,91 (m, 2H), 2,84 (ddd, J = 47,4, 25,9, 12,5 Hz, 1H), 2,72 -2,56 (m, 1H), 2,50 (s, 1H), 2,23 (d, J = 11,3 Hz, 0,5H), 1,90 - 1,79 (m, 2H), 1,75 -1,30 (m, 2,5H), 0,94 - 0,74 (m, 6H), 0,72 (s, 1H), CL-EM: m/z=488 (M+H)+. Compuesto 030 (R) (60 mg, 68%): RMN 1H (500 MHz, DMSO) 510,96 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,18 (d, J = 19,3 Hz, 1H), 7,43 -7,00 (m, 10H), 4,35 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,15 - 3,99 (m, 1H), 3,95 (d, J = 13,1 Hz, 0,5H), 3,29 (d, J = 12,5 Hz, 0,5H), 2,90 (dt, J = 24,4, 12,5 Hz, 1H), 2,59 (dd, J = 30,5, 16,2 Hz, 1H), 2,23 (d, J = 12,9 Hz, 0,5H), 1,94 - 1,74 (m, 1,5H), 1,54 -1,31 (m, 2,5H), 0,95 -0,79 (m, 6H), 0,72 (t, J = 11,1 Hz, 0,5H). CL-EM: m/z=488 (M+H)+
Ejemplo 31: síntesis de 2-((1-(2-(1H-indol-2-il)acetil)-4-fenilpiperidín-4-il)amino)-N-hidroxipirimidín-5-carboxamida (compuesto 031)
Figure imgf000035_0002
Etapa 1: a una solución de compuesto 7 (100 mg, 0,25 mmoles) y ácido 2-(1H-indol-2-il)acético (44 mg, 0,25 mmoles) en 5 ml de DMF se añadió HOAT (68 mg, 0,50 mmoles), EDCI (78 mg, 0,50 mmoles) y DIPEA (129 mg, 1 mmol). La mezcla se sometió a agitación a 60°C durante la noche y se monitorizó mediante CL-EM el nivel de completitud de la reacción. El compuesto diana 8 (80 mg, 766%) se obtuvo en forma de un sólido amarillo tras la extracción con AE y la filtración por gel de sílice
Etapa 2: a una solución de compuesto 8 (80 mg, 0,17 mmoles) en 5 ml de CH3OH/CH2Cl2 se añadió lentamente NH2OH (0,2 ml) a 0°C seguido de agitación durante 10 min. Se añadió NaOH/CH3OH (0,4 ml) a la solución lentamente y después se sometió a agitación durante 2 h. Tras eliminar el solvente de la solución, se ajustó el pH a 6 con HCl 2 N. La purificación mediante HPLC prep. rindió el compuesto diana, compuesto 031, (9 mg, 10%) en forma de un sólido blanco. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 510,94 (s, 2H), 8,61 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,42 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 7,3 Hz, 3H), 7,24 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 7,14 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,00 (t, J = 7,1 Hz, 1H), 6,92 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,20 (s, 1H), 4,34 (d, J = 13,4 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 16,1 Hz, 2H), 3,34 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 2,91 (t, J = 12,6 Hz, 1H), 2,64 (s, 1H), 1,88 - 1,70 (m, 2H). CL-EM: m/z=471 (M+H)+
Ejemplo 32: ensayos de enzima HDAC
Los compuestos para ensayo se diluyeron en DMSO a 50 veces la concentración final y se preparó una serie de dilución de tres veces de diez puntos. Los compuestos se diluyeron en tampón de ensayo (HEPES 50 mM, pH 7,4, KCl 100 mM, Tween-20 al 0,001%, BSA al 0,05%, TCEP 20 |j M) hasta 6 veces su concentración final. Los enzimas HDAC (obtenidos de BPS Biosciences) se diluyeron 1,5 veces su concentración final en tampón de ensayo. El sustrato tripéptido y la tripsina a una concentración final de 0,05 j M se diluyeron en tampón de ensayo 6 veces su concentración final. Las concentraciones de enzima finales utilizadas en dichos ensayos eran 3,3 ng/ml (HDAC1), 0,2 ng/ml (HDAC2), 0,08 ng/ml (HDAC3) y 2 ng/ml (HDAC6). Las concentraciones de sustrato finales utilizadas eran 16 j M (HDAC1), 10 j M (HDAC2), 17 j M (HDAC3) y 14 j M (HDAC6).
Se añadieron cinco j l de los compuestos y 20 j l de enzima a los pocillos de una placa de 384 pocillos opaca negra por duplicado. El enzima y compuesto se incubaron juntos a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se añadieron cinco j l de sustrato a cada pocillo; la placa se sometió a agitación durante 60 segundos y se introdujo en un lector de placas de microtitulación Victor 2. Se monitorizó el desarrollo de la fluorescencia durante 60 min y se calculó la relación lineal de la reacción. Se determinó la IC50 utilizando Graph Pad Prism mediante un ajuste de curva de cuatro parámetros. Los valores de IC50 obtenidos para varios de los compuestos de la presente invención se presentan en la Tabla 1.
Ejemplo 33: la inhibición farmacológica de las histona-desacetilasas (HDAC) 1, 2 o 3 presenta claros efectos sobre la viabilidad celular, diferenciación eritroide e inducción de la globina fetal (HbG)
En el presente ejemplo, se investigaron los efectos de los inhibidores selectivos de HDAC1, 2 o 3, sobre la citotoxicidad, la diferenciación eritroide y la inducción de HbG en células de médula ósea CD34+ humanas en cultivo.
Un compuesto anterior, el compuesto A, es un inhibidor de HDAC de clase I con valores de IC50 de 5, 5 y 8 nM contra HDAC1, 2 y 3, respectivamente (es decir, es un inhibidor no selectivo de HDAC). El compuesto 001 es 30 veces selectivo para HDAC1 y 2, con valores de IC50 de 38, 34 y 1010 nM contra HDAC1, 2 y 3, respectivamente. El tratamiento de las células durante 4 días con compuesto A (1 j M) resultó en una reducción de 20 veces de la viabilidad celular, mientras que el tratamiento con el compuesto 001 (1 j M) resultó en una reducción mínima de la viabilidad (12 veces) y en un incremento de 2 veces en el porcentaje de HbG respecto a otros transcritos de globina de tipo beta (ver la figura 1). Dicho resultado sugiere que la inhibición farmacológica de HDAC3 resulta citotóxico y es consistente con la justificación terapéutica para el diseño de los inhibidores selectivos de HDAC1 y 2.
Ejemplo 34: evaluación de compuestos de ensayo sobre la proliferación de progenitores hematopoyéticos eritroides, mieloides y megacariocíticos en formulaciones de medio que contenían diversas citoquinas.
El presente estudio evaluó el efecto potencial de los compuestos de ensayo sobre la proliferación de progenitores hematopoyéticos eritroides, mieloides y megacariocíticos humanos en formulaciones de medio que contenían diversas citoquinas. Se utilizaron para dichos estudios células de baja densidad de médula ósea humana normal derivadas de un donante de médula ósea normal (Lonza, Maryland). Se evaluaron progenitores clonogénicos de linajes eritroides (CFU-E, BFU-E) y de granulocitos-monocitos (CFU-GM) humanos en una formulación de medio a base de metilcelulosa semisólida que contenía rhIL-3 (10 ng/ml), rhGM-SCF (10 ng/ml), rhSCF (50 ng/ml) y Epo (3 U/ml). Se evaluaron los progenitores clonogénicos del linaje megacariocítico humano en una matriz a base de colágeno semisólido que contenía rhIL-3 (10 ng/ml), rhIL-6 (10 ng/ml) y rhTpo (50 ng/ml).
Se añadieron compuestos al medio, proporcionando las concentraciones deseadas finales. También se iniciaron cultivos de control de solvente (que no contenían compuesto, aunque sí DMSO al 0,1%), así como controles de estándar (que no contenían compuesto ni DMSO), para ambas formulaciones de medio. Se iniciaron ensayos de progenitores mieloides y eritroides humanos a razón de 2,5 x 104 células por cultivo y ensayos de progenitores megacariocíticos humanos con 1 x 105 células por cultivo. Tras 14 a 16 días de cultivo, se evaluaron colonias mieloides y eritroides microscópicamente y fueron puntuadas por personal formado. Las colonias se clasificaron en las categorías siguientes, basándose en el tamaño y la morfología: CFU-E, BFU-E y CFU-GM. Para el ensayo de megacariocitos humanos, los cultivos se transfirieron a partir de placas de 35 mm a portaobjetos de vidrio marcados, se fijaron (metanol/acetona) y después se tiñeron utilizando un anticuerpo anti-CD41 humano y un sistema de detección de fosfato alcalino siguiendo las instrucciones del fabricante. Las colonias fueron evaluadas y puntuadas por personal formado y se clasificaron en las categorías siguientes basándose en el tamaño: CFU-Mk (3-20), CFU-Mk (21-49) y CFU-Mk (> 50).
La desviación estándar media de tres cultivos de réplica se calculó para los progenitores en ambas formulaciones de medio. Para calcular la concentración de 50% de inhibición del crecimiento de las colonias (IC50) para cada compuesto, se generó una curva de dosis-respuesta representando el log de la concentración de compuesto frente al porcentaje de crecimiento de colonias de control utilizando Origin?8. A continuación, se ajustó una curva sigmoidal al gráfico y a partir de dicha curva, seguidamente se calculó la concentración inhibidora (j M) utilizando la ecuación de Boltzman,
Figure imgf000037_0001
en la que A1=e\ valor inicial (respuesta basal), A2 = 0 (respuesta máxima), x0=centro (concentración de fármaco que provoca una respuesta a medias entre Ai y A2) y cfx=pendiente de la curva en el punto medio determinado por Origin?8. Se muestran los resultados en las figuras 2A-F.
El presente ejemplo demuestra que el compuesto-001, un compuesto selectivo para HDAC1,2, presenta significativamente menos citotoxicidad contra eritroides, mieloides y megacariocitos que MS-275, un compuesto selectivo para HDAC1,2,3. Estos resultados sugieren que la inhibición selectiva de HDAC1 y 2 utilizando el compuesto-001 puede resultar en citotoxicidad in vivo significativamente inferior en el compartimiento hematopoyético que los inhibidores pan-HDAC.
Ejemplo 35: proliferación celular in vitro
Se sembraron células de mieloma humano H929 en placas de 96 pocillos y se cultivaron en presencia de niveles crecientes de compuesto 001 durante un periodo de hasta 7 días. Se evaluó la viabilidad celular utilizando el reactivo Aqueous One MTS los días 0 (inmediatamente después de la siembra), 3, 5 y 7. La figura 3A muestra las curvas de dosis-respuesta para el compuesto 001 el día 0, día 3, día 5 y día 7, en la que la dosis semimáxima (IC50) se indica en cada día mediante una línea discontinua. La figura 3B muestra el crecimiento relativo de las células H929 durante el tiempo en ausencia de fármaco, así como en presencia de dosis crecientes de compuesto 001. La línea discontinua indica el nivel de viabilidad el día 0; de esta manera, las dosis superiores a 3 ^M resultaron en una reducción neta de la viabilidad de las células H929.
Ejemplo 36: síntesis de N-(2-amino-5-(tiofén-2-i\)feni\)-2-cic\opropi\-1-(2-morfo\inoeti\)-1H-indo\-5-carboxamida (compuesto X, comparativo)
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Procedimiento experimental
Etapa 1: a una solución de compuesto 1 en DCE se añadió POBr3 e imidazol. La reacción se sometió a agitación a 80°C durante la noche. Se añadió agua y DCM a la reacción y se separaron las capas orgánicas, se lavaron con solución hipersalina y se secaron bajo presión reducida, proporcionando el compuesto 2.
Etapa 2: a una solución de compuesto 2 in DMSO se añadió compuesto a y KOH. La mezcla de reacción resultante se sometió a agitación a 45°C durante 4 h, se desactivó con H2O, y se extrajo con AE. Las capas orgánicas agrupadas se purificaron mediante cromatografía en gel, rindiendo el producto deseado, compuesto 3.
Etapa 3: una mezcla de compuesto 3, ácido ciclopropil borónico, Pd(OAc)2, triciclohexilfosfina y K3PO4 en tolueno y agua se sometió a agitación a 100°C bajo una atmósfera de N2 durante la noche. La mezcla se enfrió, se filtró y se concentró, obteniendo un residuo, que se purificó mediante CCF prep., obteniendo el compuesto 4.
Etapa 4: una mezcla de compuesto 4 y NaOH en EtOH y THF se sometió a agitación a 60°C durante 5 h. Se concentró la mezcla, obteniendo un residuo, al que se añadió ácido cítrico aq. sat. y se extrajo con AE. Se separaron las capas orgánicas, se secaron, se filtraron y se concentraron, obteniendo el compuesto 5.
Etapa 5: una mezcla de compuesto 5, 2-amino-4-(tiofén-2-il)fenilcarbamato de terc-butilo, HOAT, EDCI y DIPEA en DMF se sometió a agitación a 55°C durante la noche. Se añadió agua a la mezcla, y se extrajo con AE. Se separaron las capas orgánicas, se secaron, se filtraron y se concentraron, obteniendo un residuo, que se purificó mediante CCF prep., proporcionando el compuesto 6.
Etapa 6: a una solución de compuesto 6 en DCM se añadió TFA y se sometió a agitación a t.a. durante 1 h. Se concentró la mezcla, obteniendo un residuo, que se purificó mediante HPLC prep., proporcionando el compuesto 7. RMN 1H (500 MHz, DMSO) 89,63 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,79 - 7,73 (m, 1H), 7,51 (d, J = 2,1 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 7,29 (dd, J = 8,3, 2,1 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 5,0, 3,6 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,24 (s, 1H), 5,12 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 3,57 (s, 5H), 2,77 -2,58 (m, 2H), 2,09 (s, 1H), 1,02 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 0,76 (d, J = 4,4 Hz, 2H). CL-EM: m/z=487,2 (M+H)+.
La Tabla 2 a continuación muestra la IC50 (nM) del compuesto comparativo X para las HDAC 1, 2 y 3.
Tabla 2
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Ejemplo 37: el inhibidor selectivo de HDAC1/2/6 bloquea la migración del neuroblastoma
Muchas células de cáncer en cultivo son capaces de migrar a través de una membrana y esta actividad indica el potencial metastásico de las células de cáncer. La migración de la línea celular de neuroblastoma SK-N-SH se comparó en presencia o en ausencia de compuesto 001, un inhibidor de HDAC1/2/6. Las células de cáncer se sembraron y se cultivaron sobre una superficie de membrana y los números celulares en la otra cara de la membrana se contaron bajo un microscopio tras 12 horas. Un número reducido de células migradas por el inhibidor de HDAC1/2/6 sugiere una actividad de supresión de la migración del inhibidor de HDAC1/2/6. En el estudio, se añadió un inhibidor de HDAC a las células 2 horas antes o en el momento de medir la migración. Se investigó el efecto del inhibidor de HDAC1/2/6 sobre la migración de células de cáncer estimulada por factor de crecimiento epidérmico (EGF) utilizando 40 ng/ml de EGF en el ensayo.
El protocolo para el ensayo de migración era el siguiente. Los compuestos se prepararon en DMSO con solución patrón 400x a las concentraciones requeridas finales. Ver la Tabla 3.
Tabla 3
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Se añadieron 200 pl de medio RPMI1640 basal caliente al interior de los insertos, se dejaron rehidratar durante 2 horas en un incubador de tejidos humidificado, a 37°C, con una atmósfera de 5% CO2. Durante la rehidratación, las células se recolectaron con tripsina y después se resuspendieron en medio RPMI 1640 basal precalentado que contenía 500.000 células/ml o 250.000 células/ml. Los compuestos se diluyeron 20x con medio RPMI1640 basal. Se añadieron 25 pl de compuesto 20* a los 500 pl de suspensión celular para preparar la suspensión celular final con compuesto. Se añadieron 100 pl de compuesto 20x a 1.900 pl de medio RPMI1640 con FBS al 10% para obtener el medio final y se añadieron 500 pl del medio final a los pocillos de una nueva placa de 24 pocillos. Tras la rehidratación, se eliminó el medio de los insertos y después se añadieron 100 pl de la suspensión celular final a las cámaras. Se transfirieron las cámaras a los pocillos que contenían medio final. Se añadieron 100 pl/pocillo de suspensión celular final (se diluyó con medio final a 1/2 la densidad) a una placa de 96 pocillos (por triplicado). Tras 8 horas de incubación a 37°C, se separaron las células no invasoras de la superficie superior de la membrana con hisopos de algodón. Las células sobre la superficie inferior de la membrana se fijaron con paraformaldehído al 4% durante 15 minutos a temperatura ambiente y después se tiñeron con cristal violeta durante 30 minutos. Tras la tinción, los insertos se lavaron en PBS varias veces para garantizar que no quedaba cristal violeta sobre la membrana, excepto las células. Se contó el número de células migradas bajo un microscopio en cinco campos a una magnificación de 100x. Se sembraron las células viables en la placa de 96 pocillos con el mismo tratamiento que en el ensayo de migración y se midieron utilizando CTG (Cell Titer Glow).
Se muestran los resultados de estos experimentos en la figura 4.
Ejemplo 38: los inhibidores selectivos de HDAC1/2 inducen la maduración del neuroblastoma.
A continuación, se proporciona un resumen breve de los experimentos de maduración de neuroblastoma con HDAC. Se sembraron células adherentes en placas de 12 o 24 pocillos a razón de 106 células/pocillo y se dejó que se adhiriesen durante 2 a 4 horas. Los compuestos se dispensaron en DMSO a las concentraciones indicadas utilizando un sistema de manipulación de líquidos automatizado (Tecan D300) y se incubaron durante los tiempos indicados a 37°C con 5% de CO2. Se recolectaron las células y se extrajo el ARN utilizando el minikit Qiagen RNeasy siguiendo los protocolos del fabricante. Se cuantificó el ARN y se evaluaron los niveles relativos de expresión utilizando el kit TaqMan RNA-to-Ct de Applied Biosystems siguiendo los protocolos del fabricante y utilizando las sondas TaqMan indicadas.
El protocolo para los experimentos de maduración fue el siguiente. El día antes del experimento, se introdujeron las células en el matraz mediante duplicación del medio. A continuación, se recolectaron las células mediante adición de medio no enzimático de disociación celular y se incubaron a 37°C durante 15 minutos. Las células se transfirieron a un tubo de 50 ml y se pipetearon para crear una suspensión de células individuales. Las células se lavaron con tampón de PBS. A continuación, las células se resuspendieron en medio completo a razón de 5x105 células por ml. Seguidamente, se transfirieron 2 ml de células a placas de 24 o 12 pocillos. A continuación, se dispensaron los compuestos de tratamiento en cada pocillo utilizando el manipulador de líquidos D300. Seguidamente se incubaron las células durante el tiempo indicado a 37°C. Se recolectaron mediante raspado de las células y transferencia a un tubo de 2 ml. Las células se centrifugaron para formar un pellet. A continuación, se extrajo el ARN utilizando el minikit RNeasy de Qiagen siguiendo los protocolos del fabricante. Se registró la concentración de ARN. Se evaluaron los niveles relativos de ARN utilizando el kit TaqMan RNA-to-Ct de Applied Biosystems siguiendo los protocolos del fabricante y utilizando las sondas Taqman indicadas.
En un grupo de experimentos, se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 4 días con el compuesto comparativo X a una concentración de 0,5 pM (figura 5A), 1 pM (figura 5B) y 3 pM (figura 5C). Cada uno de los experimentos midió el factor de cambio de diversos genes asociados a la maduración, tales como TGM2, KCTD13, EGR1, JARID2, MAFF, p21, DUSP6, DDAH2, CRABP2, SLC29A1, KCTD12, ASCL1 y GATA3. La figura 5D muestra los resultados de un experimento de control positivo en el que se trataron células BE(2)-C durante 4 días con 1 pM de ATRA (ácido todo-trans-retinoico). La figura 5E muestra los resultados de un experimento de control negativo en el que las células BE(2)-C se trataron con 1 pM de un inhibidor selectivo de HDAC6. Los resultados de estos experimentos muestran que el compuesto comparativo X, un inhibidor selectivo de HDAC1/2, alteran los genes asociados a la maduración. Los efectos más fuertes se observaron a 3 pM de compuesto.
En otro grupo de experimentos, se trataron células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 72 horas con ATRA 1 pM (ácido todo transretinoico) (figura 6A), un inhibidor selectivo de HDAC6 (figura 6B), compuesto comparativo X (figura 6C) y otro inhibidor selectivo de HDAC6 (figura 6D). Cada uno de los experimentos midió el factor de cambio de diversos genes asociados a la maduración, tales como HOXD4, ADD3, p21, DDAH2, IGBFP5, PPIF, GATA3, CHGA y ASCL1. La Tabla 4, a continuación, muestras las IC50 en nM de los diversos compuestos.
Tabla 4
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Los resultados de estos experimentos muestran que el compuesto comparativo X, un inhibidor selectivo de HDAC1/2, alteran los genes asociados a la maduración.
En todavía otro grupo de experimentos, se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 72 horas con ATRA 1 pM (ácido todo transretinoico) (figura 7A), un inhibidor selectivo de HDAC6 (figura 7B), compuesto comparativo X (figura 7C) y otro inhibidor selectivo de HDAC6 (figura 7D). Cada uno de los experimentos midió el factor de cambio de diversos genes asociados a la maduración, tales como HOXD4, ADD3, p21, DDAH2, IGBFP5, PPIF, GATA3, CHGA y ASCL1. La Tabla 5, a continuación, muestras las IC50 en nM de los diversos compuestos.
Tabla 5
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Los resultados de estos experimentos muestran que el compuesto comparativo X, un inhibidor selectivo de HDAC1/2, alteran los genes asociados a la maduración.
En otro grupo de experimentos, se evaluó el factor de cambio de los genes asociados a la maduración. En un experimento, se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 2 días con compuesto 001 3 pM compuesto 001 (figura 8A). En un segundo experimento, se trataron células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 2 días con compuesto 001 3 pM (figura 8B). En un tercer experimento, se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 2 días con compuesto X comparativo 3 pM (figura 8C). Cada uno de los experimentos midió el factor de cambio de diversos genes asociados a la maduración, tales como21, CRABP2, JARID2, KCTD13, TGM2, ASCL1 y GATA3. Los resultados de estos experimentos muestran que el compuesto 001, un inhibidor selectivo de HDAC1/2/6, induce cambios en la expresión génica que son consistentes con la maduración.
En un grupo de experimentos, se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 48 horas con el compuesto 001 a una concentración de 0,5 pM (figura 9A), 2 pM (figura 9B) y 4 pM (figura 9C). La figura 9D muestra los resultados de un experimento de control positivo en el que se trataron células BE(2)-C durante 48 horas con ATRA 1 pM (ácido todo-trans-retinoico). Cada uno de los experimentos midió el factor de cambio de diversos genes asociados a la maduración, tales como VGF, TGM2, SYT11, RBP1, MAFF, JARID2, PTK2, HOXD4, EGR1, DUSP6, DDAH2, CRABP2, ADD3, SLC29A1, PPIF, KCTD12, IGFBP5, GATA3, CHGA y ASCL1. Los resultados de estos experimentos muestran que el compuesto 001 induce cambios en la expresión génica consistentes con la maduración a 4 pM, aunque no a 2 pM o menos. Los datos del ensayo HDAC2glo sugieren que se alcanzó una inhibición máxima de HDAC2 a 3-4 pM.
Un grupo de experimentos muestra que un inhibidor selectivo de HDAC3 no consigue modular los genes asociados a la maduración. Se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 4 días con un inhibidor selectivo de HDAC3 a 1 pM (figura 10A), 0,5 pM (figura 10B) y 3 pM (figura 10C). Cada uno de los experimentos midió el factor de cambio de diversos genes asociados a la maduración, tales como EGR1, CRABP2, Du SP6, p21, DDAH2, ASCL1, GATA3, IGFBP5, KCTD12 y SLC29A1. La figura 10D muestra los resultados de un experimento de control positivo en el que se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 4 días con 1 pM de ATRA (ácido todo-trans-retinoico). La figura 10E muestra los resultados de un experimento de control negativo en el que las células de neuroblastoma BE(2)-C se trataron durante 4 días con 1 pM de un inhibidor selectivo de HDAC6. Los resultados de estos experimentos muestran que un inhibidor selectivo de HDAC3 no alteraba la expresión génica de una manera consistente con la maduración del neuroblastoma. Además, la respuesta a la dosis fue modesta, o incluso inexistente.
Un grupo de experimentos muestra que un inhibidor selectivo de HDAC6 no consigue modular los genes asociados a la maduración. Se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 48 horas con un inhibidor selectivo de HDAC6 a 0,5 pM (figura 11A), 2 pM (figura 11B) y 4 pM (figura 11C). La figura 11D muestra los resultados de un experimento de control positivo en el que se trataron células de neuroblastoma BE(2)-C durante 48 horas con 1 pM de ATRA (ácido todo-trans-retinoico). Cada uno de los experimentos midió el factor de cambio de diversos genes asociados a la maduración, tales como VGF, TGM2, SYT11, RBP1, MAFF, JARID2, PTK2, HOXD4, EGR1, DUSP6, DDAH2, CRABP2, ADD3, SLC29A1, PPIF, KCTD12, IGFBP5, GATA3, CHGA y ASCL1. Los resultados de estos experimentos muestran que un inhibidor selectivo de HDAC6 no consiguió inducir robustamente cambios génicos consistentes con la maduración, ni siquiera con una exposición de 4 pM. Estos resultados son consistentes con un experimento anterior en el que la maduración no era evidente tras 1 pM de tratamiento.
Ejemplo 39: la inhibición de HDAC1/2 induce poblaciones celulares Sub-Gl incrementadas a una concentración en la que se está produciendo la maduración.
A continuación se proporciona un breve resumen de los experimentos de ciclo celular del neuroblastoma. Se sembraron células adherentes en placas de 12 pocillos a razón de 106 células/pocillo y se dejó que se adhiriesen durante 2 a 4 horas. Los compuestos se dispensaron en DMSO a las concentraciones indicadas utilizando un sistema de manipulación de líquidos automatizado (Tecan D300) y se incubaron durante los tiempos indicados a 37°C con 5% de CO2. Se recolectaron las células con solución de disociación celular libre de enzimas y se lavaron con solución salina tamponada. Las células se fijaron durante la noche con etanol al 100%. Se evaluó el ciclo celular mediante citometría de flujo utilizando el kit de solución de tinción de PI/ARNasa Molecular Probes FxCycle siguiendo los protocolos del fabricante.
El protocolo para los experimentos de ciclo celular fue el siguiente. El día antes del experimento, se introdujeron las células en el matraz mediante duplicación del medio. A continuación, se recolectaron las células mediante adición de medio de disociación celular no enzimático e incubación a 37°C durante 15 minutos. A continuación, las células se transfirieron a un tubo de 50 ml y se pipetearon para crear una suspensión de células individuales. Seguidamente, las células se lavaron con tampón de p BS. A continuación, las células se resuspendieron en medio completo a razón de 5x105 células por ml. Seguidamente, se transfirieron 2 ml de células a placas de 12 pocillos. A continuación, se dispensaron los compuestos de tratamiento en cada pocillo utilizando el manipulador de líquidos D300. Las células se incubaron durante el tiempo indicado a 37°C. A continuación, se recolectaron las células mediante adición de 500 pl de solución de disociación celular libre de enzimas y se incubaron a 37°C durante 15 minutos. A continuación, se centrifugaron las células formando un pellet y después se lavaron con PBS. Seguidamente, se añadieron 500 pl de EtOH al 100% y se incubaron a 4°C durante la noche. A continuación, las células se lavaron 3x con PBS. Seguidamente las células se resuspendieron en 500 ml de solución de PI/ARNasa FxCycle y se incubaron durante 2 a 4 horas a temperatura ambiente. Finalmente, las células se sometieron a ensayo mediante citometría de flujo.
Este grupo de experimentos muestra que la inhibición selectiva de HDAC altera la progresión del ciclo celular en las células de neuroblastoma. En un primer experimento, se trataron células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 72 horas con un inhibidor selectivo de HDAC60, 0,5, 2 y 5 pM (figura 12A). En un segundo experimento, se trataron células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 72 horas con un compuesto X comparativo 0, 0.5, 2 y 5 pM (figura 12B). En un tercer experimento, se trataron células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 72 horas con compuesto 001 0, 0.5, 2 y 5 pM compuesto 001 (figura 12C). En un experimento de control, se trataron células de neuroblastoma SH-SY5Y durante 72 horas con ATRA 0 y 1 pM (ácido todo transretinoico) (figura 12D). Cada uno de los experimentos se centraba en el porcentaje de la población celular que se encontraba en la fase G2, la fase S, la fase G1 y la fase sub-G1. Los resultados del presente experimento muestran que el compuesto 001 indujo una reducción en G1/G2 y un incremento en sub-G1 a concentraciones en las que se observaba maduración. Además, el compuesto X indujo cambios de ciclo celular similares en todos los grupos de tratamiento, incluso a dosis bajas asociadas a una maduración subóptima. Además, un inhibidor selectivo de HDAC6 indujo una reducción dependiente de la dosis en G1/G2 con un incremento correspondiente en sub-G1. Finalmente, ATRa presentó poco impacto sobre el ciclo celular a concentraciones asociadas a una maduración robusta en este punto temporal.
Ejemplo comparativo 40: la inhibición de HDAC reduce la viabilidad y supervivencia del neuroblastoma.
Se trataron células de neuroblastoma SK-N-BE(2) o SH-SY5Y con concentraciones variables de compuesto X o compuesto Y. Se midió la viabilidad y la señal de caspasa 3/7 a las 48 horas. Se midió el porcentaje de la población de las células en diversas etapas del ciclo celular a las 96 horas. Ver las figuras 13A-Dy las figuras 14A-D. Los resultados de estos experimentos muestran que se detectaban bajos niveles de apoptosis y muerte celular 48 horas después de HDACi, el tiempo en que se observaron cambios de expresión génica asociados a la diferenciación. Se puso de manifiesto un incremento en la población sub-G1 a las 96 horas de iniciar el tratamiento, indicando la muerte celular en tiempos posteriores.
Ejemplo comparativo 41: la inhibición de HDAC estimula la diferenciación del neuroblastoma.
Se trataron células de neuroblastoma SK-N-BE(2) o SH-SY5Y con concentraciones variables de compuesto X o Y, y/o ATRA (ácido todo transretinoico). Se midió el índice de diferenciación. Ver las figuras 15A-D. Los resultados de estos experimentos muestran que tanto el compuesto X como el compuesto Y indujeron un incremento del índice de diferenciación, y que el efecto resultó marcadamente potenciado al combinar un HDACi con ácido retinoico.
Ejemplo comparativo 42: la inhibición de HDAC potencia ATRA a baja concentración.
Se trataron células de neuroblastoma SK-N-BE(2) o SH-SY5Y con concentraciones variables de compuesto X o Y, y/o ATRA (ácido todo transretinoico). Se midió el índice de diferenciación. A modo de control, se trataron células de neuroblastoma SK-N-BE(2) o SH-SY5Y con concentraciones variables de ATRA. Ver las figuras 16A-C. Los resultados de estos experimentos muestran que la diferenciación con ATRA era subóptima a una concentración de 0,25 pM y que tanto el compuesto X como el compuesto Y potenciaron ATRA 0,25 pM.
Ejemplo comparativo 43: la inhibición de HDAC induce la parada del ciclo celular en las células de neuroblastoma.
Se trataron células de neuroblastoma SK-N-BE(2) o SH-SY5Y con concentraciones variables de compuesto X o Y, y/o ATRA (ácido todo transretinoico). Se midió el porcentaje de la población de las células en diversas etapas del ciclo celular después de 4 días. Además, también se calculó el factor de cambio de p21. Ver las figuras 17A-D. Tanto el compuesto X como el compuesto Y indujeron la parada del ciclo celular, siendo el compuesto Y el agente más potente. Los efectos de la combinación HDACi/ATRA eran modestos, con pocas diferencias en comparación con los agentes individuales.
Ejemplo comparativo 44: la inhibición de HDAC induce la parada del ciclo celular en las células de neuroblastoma.
Se trataron células de neuroblastoma SH-SY5Y con concentraciones variables de compuesto X o Y, y/o ATRA (ácido todo transretinoico). Se midió el porcentaje de la población de las células en diversas etapas del ciclo celular después de 4 días. Además, también se calculó el factor de cambio de p21. Ver las figuras 18A-D. Tanto el compuesto X como el compuesto Y indujeron la parada del ciclo celular, siendo el compuesto Y el agente más potente. Los efectos de la combinación HDACi/ATRA eran modestos, con pocas diferencias en comparación con los agentes individuales.
Ejemplo 45: síntesis de 2-(difenilamino)-N-(7-(hidroxiamino)-7-oxoheptil)pirimidín-5-carboxamida (compuesto A, comparativo)
Figure imgf000042_0001
Síntesis de intermediario 2: una mezcla de anilina (3,7 g, 40 mmoles), compuesto 1 (7,5 g, 40 mmoles) y K2CO3 (11 g, 80 mmoles) en DMF (100 ml) se desgasificó y se sometió a agitación a 120°C bajo N2 durante la noche. La mezcla de reacción se enfrió hasta la t.a. y se diluyó con EtOAc (200 ml), después se lavó con solución hipersalina saturada (200 ml x 3). Se separaron las capas orgánicas y se secaron sobre Na2SO4, se evaporaron a sequedad y se purificaron mediante cromatografía de gel de sílice (éteres de petróleo/EtOAc=10/1), proporcionando el producto deseado en forma de un sólido blanco (6,2 g, 64 %).
Síntesis de intermediario 3: una mezcla de compuesto 2 (6,2 g, 25 mmoles), yodobenceno (6,12 g, 30 mmoles), CuI (955 mg, 5,0 mmoles), Cs2CO3 (16,3 g, 50 mmoles) en TEOS (200 ml) se desgasificó y se purgó con nitrógeno. La mezcla resultante se sometió a agitación a 140°C durante 14 h. Tras enfriar hasta la t.a., el residuo se diluyó con EtOAc (200 ml). Se añadió EtOH al 95% (200 ml) y NH4F-H2O en gel de sílice [50g, pre-preparados mediante la adición de NH4F (100 g) en agua (1500 ml) a gel de sílice (500 g, malla 100-200)] y la mezcla resultante se mantuvo a t.a. durante 2 h. Los materiales solidificados se filtraron y se lavaron con EtOAc. El filtrado se evaporó a sequedad y el residuo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (éteres de petróleo/EtOAc=10/1), proporcionando un sólido amarillo (3 g, 38%).
Síntesis de intermediario 4: se añadió NaoH 2 N (200 ml) a una solución de compuesto 3 (3,0 g, 9,4 mmoles) en EtOH (200 ml). La mezcla se sometió a agitación a 60°C durante 30 min. Tras la evaporación del solvente, la solución se neutralizó con HCl 2 N, proporcionando un precipitado blanco. La suspensión se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml) y se separaron las capas orgánicas, se lavaron con agua (2x100 ml), solución hipersalina (2x100 ml) y se secaron sobre Na2SO4. La eliminación del solvente proporcionó un sólido marrón (2,5 g, 92 %).
Síntesis de intermediario 6: una mezcla de compuesto 4(2,5 g, 8,58 mmoles), compuesto 5(2,52 g, 12,87 mmoles), HATU (3,91 g, 10,30 mmoles) y DIPEA (4,43 g, 34,32 mmoles) se sometió a agitación a t.a. durante la noche. Tras filtrar la mezcla de reacción, el filtrado se evaporó a sequedad y el residuo se purificó mediante cromatografía de gel de sílice (éteres de petróleo/EtOAc=2/1), proporcionando un sólido marrón (2 g, 54 %). Síntesis de 2-(difenilamino)-N-(7-(hidroxiamino)-7-oxoheptil)pirimidín-5-carboxamida (compuesto A): una mezcla de compuesto 6 (2,0 g, 4,6 mmoles), hidróxido sódico (2 N, 20 ml) en MeOH (50 ml) y DCM (25 ml) se sometió a agitación a 0°C durante 10 min. Se enfrió hidroxilamina (al 50%) (10 ml) a 0°C y se añadió a la mezcla. La mezcla resultante se sometió a agitación a t.a. durante 20 min. Tras eliminar el solvente, la mezcla se neutralizó con HCl 1 M, proporcionando un precipitado blanco. El producto en bruto se filtró y se purificó mediante HPLC prep., proporcionando un sólido blanco (950 mg, 48%).
Ejemplo 46: síntesis de 2-((2-clorofenil)(fenil)amino)-N-(7-(hidroxiamino)-7-oxoheptil)pirimidín-5-carboxamida (compuesto Y, comparativo)
Figure imgf000043_0001
Síntesis de intermediario 2 Ver la síntesis de intermediario 2 en el Ejemplo 45
Síntesis de intermediario 3 Una mezcla de compuesto 2 (69,2 g, 1 equiv.), 1-cloro-2-iodobenceno (135,7 g, 2 equiv.), U2CO3 (42,04 g, 2 equiv.), K2CO3 (39,32 g, 1 equiv.), Cu (1 equiv. 45 ^m) en DMSO (690 ml) se desgasificó y se purgó con nitrógeno. La mezcla resultante se sometió a agitación a 1401C. El tratamiento final de la reacción proporcionó compuesto 3 con un rendimiento de 93%.
Síntesis de intermediario 4. Ver la síntesis de intermediario 4 en el Ejemplo 45.
Síntesis de intermediario 6. Ver la síntesis de intermediario 6 en el Ejemplo 45.
Síntesis de 2-((2-clorofenil)(fenil)amino)-N-(7-(hidroxiamino)-7-oxoheptil)pirimidín-5-carboxamida (compuesto B): ver la síntesis del compuesto A en el Ejemplo 45.
Incorporación por remisión
A menos que se indique lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria presentan los significados comúnmente conocidos por el experto ordinario en la materia.
Equivalentes
El experto en la materia reconocerá o podrá determinar, utilizando nada más que experimentación rutinaria, muchos equivalentes de las realizaciones específicas de la invención descritas en la presente memoria. Se pretende que dichos equivalentes se encuentren comprendidos en las reivindicaciones a continuación.

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES
    i . Compuesto de fórmula I:
    Figure imgf000044_0001
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
    en la que,
    Rx se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo, -OH, -C(O)R1, -CO2R1, -C(O)N(R1)2, arilo, -C(S)N(R1)2 y S(O)2R1, en el que arilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -Oh , halo y haloalquilo,
    Ry se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo, -OH, -C(O)R1, -CO2R1 y -C(O)N(R1)2,
    Rz se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, alquenilo C1-6, alquinilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo y heteroarilo, cada uno de los cuales puede sustituirse opcionalmente con alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo o -OH, y
    cada R1 se selecciona, independientemente en cada aparición, del grupo que consiste en H, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo, en el que cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo, heteroarilo, alquil C1-6-cicloalquilo, alquil C1-6-heterocicloalquilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo pueden sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo.
  2. 2. Compuesto según la reivindicación 1, que presenta la estructura de Fórmula II:
    Figure imgf000044_0002
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
    en la que,
    Rx se selecciona independientemente del grupo que consiste en arilo, -C(O)R1, -CO2R1, -C(O)N(R1)2, -C(S)N(R1)2 y S(O)2R1,
    Ry se selecciona del grupo que consiste en H, alquilo C1-6 y halo, y
    Rz se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, heterocicloalquilo C3-7, arilo y heteroarilo.
  3. 3. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que Rz es alquilo C1-6 o arilo, opcionalmente en el que Rz es isopropilo, metilo o fenilo.
  4. 4. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que Rx es -C(O)NHR1,-C(O)R1, -CO2R1,-C(S)NHR1 o S(O)2R1.
  5. 5. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que:
    (a) por lo menos uno de R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-6, arilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo, en el que arilo, alquil C1-6-arilo y alquil C1-6-heteroarilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, -OH, halo y haloalquilo,
    (b) por lo menos uno de R1 es -CH3, -CH2CH3, fenilo, -CH2-fenilo o -CH2-indolilo, en el que fenilo, -CH2-fenilo o -CH2-indolilo puede sustituirse opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6 o halo, o
    (c) por lo menos uno de R1 es fenilo, y en el que fenilo está sustituido opcionalmente con uno o más grupos seleccionados de entre alquilo C1-6, alcoxi C1-6, halo y haloalquilo.
  6. 6. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que Ry es H.
  7. 7. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, seleccionado de entre los siguientes:
    Figure imgf000045_0001
    (continuación)
    Figure imgf000046_0001
    (continuación)
    Figure imgf000047_0001
    o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
  8. 8. Composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
  9. 9. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la utilización en la inhibición de la actividad de HDAC1, HDAC2 y HDAC6 en un sujeto que lo necesita, opcionalmente para la utilización en la inhibición selectiva de la actividad de HDAC1, HDAC2 y HDAC6 respecto a otras HDAC en el sujeto que lo necesita, opcionalmente en el que el compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 presenta una selectividad para HDAC1, HDAC2 y HDAC6 al someterlo a ensayo en un ensayo de enzima HDAC aproximadamente 2 a 1000 veces mayor que otras HDAC.
  10. 10. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica según la reivindicación 8, para la utilización en el tratamiento de una enfermedad mediada por una o más HDAC en un sujeto que lo necesita, opcionalmente en el que las HDAC son HDAC1 y HDAC2, o en el que la HDAC es HDAC6.
  11. 11. Compuesto o composición para la utilización según la reivindicación 10, el que la enfermedad es:
    (a) una hemoglobinopatía,
    (b) enfermedad de células falciformes,
    (c) beta-talasemia,
    (d) una enfermedad neurodegenerativa, opcionalmente en la que la enfermedad neurodegenerativa se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, demencia del lóbulo frontotemporal, parálisis supranuclear progresiva, demencia corticobasal, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Charcot-Marie-Tooth y neuropatía periférica, o (e) un cáncer o una enfermedad proliferativa, opcionalmente en la que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de colon y rectal, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer cerebral, cáncer renal, cáncer ovárico, cáncer de estómago, cáncer de piel, cáncer óseo, cáncer gástrico, cáncer de mama, glioma, glioblastoma, neuroblastoma, carcinoma hepatocelular, carcinoma renal papilar, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, leucemia, linfomas, mielomas, retinoblastoma, cáncer cervical, melanoma y/o cáncer de piel, cáncer de vejiga, cáncer uterino, cáncer testicular, cáncer esofágico y tumores sólidos, por ejemplo en el que el cáncer es cáncer de pulmón, cáncer de colon, cáncer de mama, leucemia, un linfoma, neuroblastoma o cáncer pulmonar de células no pequeñas (CPCNP).
  12. 12. Compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o la composición farmacéutica según la reivindicación 8, para la utilización en el tratamiento de un sujeto que sufre, o es susceptible de sufrir, linfoma de Hodgkin.
  13. 13. Compuesto o composición para la utilización según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 12, en el que el sujeto es un ser humano.
  14. 14. Inhibidor selectivo de HDAC1, HDAC2 y/o HDAC6 seleccionado del grupo que consiste en un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la utilización en la inhibición de la migración de una célula de neuroblastoma, la inducción de la maduración de una célula de neuroblastoma, la alteración de la progresión del ciclo celular de una célula de neuroblastoma, la reducción de la viabilidad y supervivencia de una célula de neuroblastoma, la inducción de la diferenciación de una célula de neuroblastoma, la potenciación del tratamiento con ATRA a baja concentración de una célula de neuroblastoma o la inducción de la parada del ciclo celular de una célula de neuroblastoma.
  15. 15. Compuesto para la utilización en el tratamiento del neuroblastoma en un sujeto, en el que el compuesto es compuesto 001:
    Figure imgf000048_0001
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