ES2795666T3 - Una triazolopiridazina deuterada como un modulador de quinasa - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) **(Ver fórmula)** un N-óxido, una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que D representa deuterio.

Description

DESCRIPCIÓN

Una triazolopiridazina deuterada como un modulador de quinasa

Campo de la invención

La invención se refiere a un novedoso compuesto que funciona como un modulador de la proteína tirosina quinasa. Más particularmente, la invención se refiere a un nuevo compuesto que funciona como un inhibidor de c-Met.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a una triazolopiridazina como un inhibidor de tirosina quinasas, que incluye c-Met. Se ha informado de triazolopiridazinas con propiedades terapéuticas útiles, incluso en WO2007/075567.

Las proteínas quinasas son componentes enzimáticos de las rutas de transducción de señales que catalizan la transferencia del fosfato terminal del ATP al grupo hidroxi de los residuos de proteínas de tirosina, serina y/o treonina. Por lo tanto, los compuestos que inhiben las funciones de la proteína quinasa son herramientas valiosas para evaluar las consecuencias fisiológicas de la activación de la proteína quinasa. La sobreexpresión o la expresión inapropiada de proteínas quinasas normales o mutantes en mamíferos ha sido un tema de estudio extenso y se ha demostrado que juega un papel importante en el desarrollo de muchas enfermedades, incluyendo diabetes, angiogénesis, psoriasis, restenosis, enfermedades oculares, esquizofrenia, artritis reumatoide, aterosclerosis, enfermedad cardiovascular y cáncer. También se ha estudiado el beneficio cardiotónico de la inhibición de la quinasa. En resumen, los inhibidores de las proteínas quinasas tienen una utilidad particular en el tratamiento de enfermedades humanas y animales.

El receptor del factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) (también conocido como factor de dispersión (SF)), c-Met, es un receptor de tirosina quinasa que regula la proliferación celular, la morfogénesis y la motilidad. El gen c-Met se traduce en una proteína de 170 kD que se procesa en un receptor de superficie celular compuesto por una subunidad transmembrana beta de 140 kD y una subunidad alfa extracelular glicosilada de 50 kD.

Las mutaciones en c-Met, la sobreexpresión de c-Met y/o HGF/SF, la expresión de c-Met y HGF/SF por la misma célula, y la sobreexpresión y/o señalización aberrante de c-Met está presente en una variedad de tumores sólidos humanos y se cree que participa en la angiogénesis, desarrollo tumoral, invasión y metástasis.

Las líneas celulares con activación no controlada de c-Met, por ejemplo, son tanto altamente invasivas como metastásicas. Una diferencia notable entre las células normales y las transformadas que expresan el receptor c-Met es que la fosforilación del dominio de tirosina quinasa en las células tumorales a menudo es independiente de la presencia de ligando.

Se han identificado mutaciones/alteraciones de C-Met en un número de enfermedades humanas, incluidos tumores y cánceres - por ejemplo, carcinomas renales papilares humanos hereditarios y esporádicos, cáncer de mama, cáncer colorrectal, carcinoma gástrico, glioma, cáncer de ovario, carcinoma hepatocelular, carcinomas de células escamosas de cabeza y cuello, carcinoma testicular, carcinoma de células basales, carcinoma de hígado, sarcoma, mesotelioma pleural maligno, melanoma, mieloma múltiple, osteosarcoma, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, sarcoma sinovial, carcinoma de tiroides, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) y cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma de células de transición de vejiga urinaria, carcinoma testicular, carcinoma de células basales, carcinoma de hígado - y leucemias, linfomas y mielomas - por ejemplo, leucemia linfocítica aguda (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mieloide crónica (CML), leucemia neutrofílica crónica (CNL), leucemia indiferenciada aguda (AUL), linfoma anaplásico de células grandes (ALCL) ), leucemia prolinfocítica (PML), leucemia mielomonocáctica juvenil (JMML), ALL de células T adultas, AML con mielodisplasia trilinaje (AML/TMDS), leucemia de linaje mixto (MLL), síndromes mielodisplásicos (MDSs), trastornos mieloproliferativos (MPD), mieloma múltiple (MM), sarcoma mieloide, linfoma no Hodgkin y enfermedad de Hodgkin (también llamada linfoma de Hodgkin).

Debido al papel de la señalización aberrante de HGF/SF-Met en la patogénesis de diversos cánceres humanos, los inhibidores de la tirosina quinasa del receptor c-Met tienen amplias aplicaciones en el tratamiento de cánceres en los que la actividad de Met contribuye al fenotipo invasivo/metastásico, incluidos aquellos en el que c-Met no se sobreexpresa o de otra manera ni altera. Los inhibidores de c-Met también inhiben la angiogénesis y, por lo tanto, se cree que tienen utilidad en el tratamiento de enfermedades asociadas con la formación de nueva vasculatura, tal como la artritis reumatoide y la retinopatía.

También se cree que la sobreexpresión de c-Met es un predictor potencialmente útil para el pronóstico de ciertas enfermedades, tales como, por ejemplo, cáncer de mama, carcinoma de pulmón no microcítico, neoplasias endocrinas pancreáticas, cáncer de próstata, adenocarcinoma esofágico, cáncer colorrectal, carcinoma de glándulas salivales, linfoma difuso de células B grandes y carcinoma endometrial.

Se han ideado muchas estrategias para atenuar la señalización de Met aberrante en tumores humanos. Algunas de estas estrategias incluyen el uso de antagonistas de HGF e inhibidores de moléculas pequeñas.

La seguridad, farmacocinética, farmacodinámica y eficacia inicial del inhibidor de c-Met potente y selectivo con la siguiente estructura

(en lo sucesivo denominado compuesto A) se exploró en una fase I, el primer ensayo en humanos. Esto condujo a la detección de toxicidad renal inesperada. Estos datos contradecían las pruebas preclínicas que mostraban un perfil de toxicidad limpio en ratas y perros. Se realizaron extensos experimentos preclínicos adicionales para comprender la naturaleza de los efectos renales. Los datos del metabolismo apuntaban en la dirección del conejo por ser una especie de toxicología adecuada. Un estudio de toxicología en conejos mostró que el compuesto A sí afectó la función renal y el análisis histológico reveló la formación de cristales con consecuentes cambios degenerativos e inflamatorios en el riñón. Investigaciones adicionales sugirieron una generación de metabolitos insolubles dependientes de aldehído oxidasa, específicos de la especie, que causan daño renal a través de la formación de cristales en los túbulos renales. Se encontró que los siguientes metabolitos forman cristales:

Metabolito 1:

6-{Difluoro[6-(1H-pirazol-4-il) [1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}quinolin-2(1H) -ona.

Metabolito 2:

6-{Difluoro[6-(1-metil-1H-pirazol-4-il) [1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}quinolin-2(1H) -ona.

Solubilidad del metabolito 2:

a pH 4.84, solubilidad de 0.001 mg/ml

a pH 7.33, solubilidad de 0.002 mg/ml.

Debido a que no se identificaron estrategias viables para evitar la toxicidad renal, se abandonó el desarrollo clínico adicional del compuesto A.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona una novedosa triazolopiridazina como un modulador de la proteína tirosina quinasa, en particular un inhibidor de c-Met, y el uso de tal compuesto para reducir o inhibir la actividad quinasa de c-Met en una célula o un sujeto, y modular la expresión de c-Met en una célula o sujeto, y el uso de tal compuesto para prevenir o tratar en un sujeto un trastorno proliferativo celular y/o trastornos relacionados con c-Met. En particular, la presente invención se refiere a dicho compuesto para uso como medicamento, para uso en el tratamiento de un trastorno de proliferación celular y/o un trastorno relacionado con c-Met. La presente invención se refiere a dicho compuesto para uso en la prevención o tratamiento, en particular tratamiento, de cáncer, de un trastorno de proliferación celular y/o un trastorno relacionado con c-Met, o al uso de dicho compuesto para la fabricación de un medicamento para la prevención o el tratamiento, en particular el tratamiento, del cáncer, un trastorno de proliferación celular y/o un trastorno relacionado con c-Met.

La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable. Otro aspecto de la presente invención es una composición farmacéutica preparada mezclando el compuesto de la invención y un portador farmacéuticamente aceptable.

Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de la invención y de las reivindicaciones.

Figuras

Fig.1: A) transferencia Western para EBC-1; B) niveles de proteína pMet normalizados a actina en células EBC-1; C) transferencia Western para Snu-5 B: D) niveles de proteína pMet normalizados a actina en células Snu-5.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere al siguiente compuesto de fórmula (I)

y N-óxidos, sales y solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde D representa deuterio.

En un aspecto, la presente invención se refiere al siguiente compuesto de fórmula (I)

y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde D representa deuterio.

En un aspecto, la presente invención se refiere al siguiente compuesto de fórmula (I)

y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, en donde D representa deuterio

En un aspecto, la presente invención se refiere al siguiente compuesto de fórmula (I)

en donde D representa deuterio.

Se reconocerá que se produce alguna variación de la abundancia isotópica natural en un compuesto sintetizado dependiendo del origen de los materiales químicos utilizados en la síntesis. Por lo tanto, una preparación del compuesto A contendrá inherentemente pequeñas cantidades de deuterio. La concentración de tal deuterio de origen natural es pequeña (la abundancia natural es del 0.015%) e inmaterial en comparación con el contenido de deuterio del compuesto de esta invención.

El compuesto de la presente invención se distingue de tales formas menores de origen natural en que el término "compuesto" como se usa en esta invención se refiere a una composición de materia en la que la abundancia de deuterio es mucho mayor que la abundancia natural (0.015%), por ejemplo al menos 1000 veces mayor (15%).

En un aspecto de la invención, el compuesto de fórmula (I) tiene un contenido de deuterio en la posición 2 de la quinolina (D) de al menos 50% (relación D/H al menos 1:1), de al menos 60%, de al menos 70%, de al menos 80%, de al menos 90%, de al menos 91%, de al menos 92%, de al menos 93%, de al menos 94%, de al menos 95%, de al menos 96%, de al menos 97%, de al menos 98%, de al menos 99%. Preferiblemente, el contenido de deuterio en la posición 2 de la quinolina (D) es al menos 93%, más preferiblemente el contenido de deuterio en la posición 2 de la quinolina (D) es al menos 97% o 98%.

Cuando una posición se designa específicamente como "H" o "hidrógeno", o su representación química implica hidrógeno, se entiende que tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural.

Se encontró que con el presente compuesto de fórmula (I) la formación de metabolitos mediados por aldehído oxidasa insoluble/menos soluble está regulada por disminución. Esto puede disminuir la toxicidad renal.

Adicionalmente, se encontró que hay un cambio de metabolización para el presente compuesto de fórmula (I) en comparación con la metabolización del compuesto A (regulación ascendente de la formación de metabolitos mediada por CYP450). En el caso del presente compuesto de fórmula (I) se forma más del metabolito N-desmetilo con la siguiente estructura

(un metabolito activo) en comparación con la formación del metabolito N-desmetilo con la siguiente estructura

tras la administración del compuesto A. Esto puede reducir la dosis terapéuticamente efectiva para el compuesto de fórmula (I) en comparación con el compuesto A.

Además, se encontró que el compuesto de fórmula (I) también muestra inhibición de la absorción de 14C-metformina en células OCT2.

Como se usa más aquí más adelante, los términos "compuesto de fórmula (I)" y "compuestos de fórmula (I)" pretenden incluir también los N-óxidos, sales farmacéuticamente aceptables y solvatos de los mismos.

Sales farmacéuticamente aceptables

El compuesto de la presente invención también puede estar presente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable, en particular una sal de adición de ácido farmacéuticamente aceptable.

Para uso en medicamentos, las sales de los compuestos de esta invención se refieren a "sales farmacéuticamente aceptables" no tóxicas. Las formas de sal farmacéuticamente aceptables aprobadas por la FDA (Ref. International J. Pharm. 1986, 33, 201-217; J. Pharm. Sci., 1977, Jan, 66 (1), p1) incluyen sales de ácido /aniónicas o de base/catiónicas farmacéuticamente aceptables.

Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen, y no se limitan a, acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, dihidrocloruro, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobromuro, hidrocloruro, hidroxinaftoato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato y trietioduro. Los ácidos orgánicos o inorgánicos también incluyen, y no se limitan a, ácido yodhídrico, perclórico, sulfúrico, fosfórico, propiónico, glicólico, metanosulfónico, hidroxietanosulfónico, oxálico, 2-naftalenosulfónico, p-toluenosulfónico, ciclohexanosulfámico, sacarínico o trifluoroacético. Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención también incluyen formas estereoquímicamente isoméricas de las mismas.

Formas estereoquímicamente isoméricas

Un experto en la técnica reconocerá que el compuesto de fórmula (I), en particular en el caso de las sales, puede tener uno o más átomos de carbono asimétricos en su estructura. Se pretende que la presente invención incluya dentro de su alcance formas enantiómeras individuales de los compuestos, mezclas racémicas y mezclas de enantiómeros en los que está presente un exceso enantiomérico.

El término "enantiómero único" como se usa en el presente documento define todas las formas homoquirales posibles que puede poseer el compuesto de fórmula (I).

Las formas isoméricas estereoquímicamente puras se pueden obtener mediante la aplicación de principios conocidos de la técnica. Los diastereoisómeros pueden separarse mediante métodos de separación física tales como cristalización fraccionada y técnicas cromatográficas, y los enantiómeros pueden separarse entre sí mediante la cristalización selectiva de las sales diastereoméricas con bases o ácidos ópticamente activos o mediante cromatografía quiral. Los estereoisómeros puros también pueden prepararse sintéticamente a partir de materiales de partida estereoquímicamente puros apropiados, o usando reacciones estereoselectivas.

El término "isómero" se refiere a compuestos que tienen la misma composición y peso molecular pero difieren en propiedades físicas y/o químicas. Tales sustancias tienen el mismo número y tipo de átomos pero difieren en estructura. La diferencia estructural puede estar en la constitución (isómeros geométricos) o en la capacidad de rotar el plano de luz polarizada (enantiómeros).

El término "estereoisómero" se refiere a isómeros de constitución idéntica que difieren en la disposición de sus átomos en el espacio. Los enantiómeros y diastereómeros son estereoisómeros en los que un átomo de carbono sustituido asimétricamente actúa como un centro quiral.

El término "quiral" se refiere a la característica estructural de una molécula que hace imposible superponerla en su imagen especular.

El término "enantiómero" se refiere a una de un par de especies moleculares que son imágenes especulares entre sí y no son superponibles.

El término "diastereómero" se refiere a estereoisómeros que no son imágenes especulares.

Los símbolos "R" y "S" representan la configuración de los sustituyentes alrededor de un átomo o átomos de carbono quirales.

El término "racemato" o "mezcla racémica" se refiere a una composición compuesta de cantidades equimolares de dos especies enantioméricas, en donde la composición está desprovista de actividad óptica.

El término "homoquiral" se refiere a un estado de pureza enantiomérica.

El término "actividad óptica" se refiere al grado en que una molécula homoquiral o una mezcla no racémica de moléculas quirales gira un plano de luz polarizada.

El término "isómero geométrico" se refiere a isómeros que difieren en la orientación de los átomos sustituyentes en relación con un doble enlace carbono-carbono, con un anillo cicloalquilo o con un sistema bicíclico puenteado. Los átomos sustituyentes (distintos de H) en cada lado de un doble enlace carbono-carbono pueden estar en una configuración E o Z. En la configuración "E" (lado opuesto), los sustituyentes están en lados opuestos en relación con el doble enlace carbono-carbono; en la configuración "Z" (del mismo lado), los sustituyentes están orientados en el mismo lado en relación con el doble enlace carbono-carbono. Los átomos sustituyentes (distintos de H) unidos a un anillo carbocíclico pueden estar en una configuración cis o trans. En la configuración "cis", los sustituyentes están en el mismo lado en relación con el plano del anillo; en la configuración "trans", los sustituyentes están en lados opuestos en relación con el plano del anillo. Los compuestos que tienen una mezcla de especies "cis" y "trans" se denominan "cis/trans".

Debe entenderse que los diversos estereoisómeros sustituyentes, isómeros geométricos y mezclas de los mismos utilizados para preparar los compuestos de la presente invención están disponibles comercialmente, pueden prepararse sintéticamente a partir de materiales de partida disponibles comercialmente o pueden prepararse como mezclas isoméricas y luego obtenerse como isómeros resueltos que utilizan técnicas bien conocidas por los expertos en la técnica.

Los descriptores isoméricos "R", "S", "E", "Z", "cis" y "trans" se usan como se describe en el presente documento para indicar las configuraciones del átomo en relación con una molécula central y están destinados a ser utilizados como se define en la literatura (Recomendaciones IUPAC para la estereoquímica fundamental (Sección E), Pure Appl. Chem., 1976, 45: 13-30).

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse como isómeros individuales por síntesis específica de isómero o resolverse a partir de una mezcla isomérica. Las técnicas de resolución convencionales incluyen formar la base libre de cada isómero de un par isomérico usando una sal ópticamente activa (seguida de cristalización fraccionada y regeneración de la base libre), formando un éster o amida de cada uno de los isómeros de un par isomérico (seguido de separación cromatográfica y eliminación del auxiliar quiral) o la resolución de una mezcla isomérica bien sea de un material de partida o de un producto final utilizando t Lc preparativa (cromatografía en capa fina) o una columna de HPLC quiral (cromatografía líquida de alto rendimiento/presión).

Polimorfos y solvatos

Adicionalmente, el compuesto de la presente invención puede tener una o más formas cristalinas polimórficas o puede ser amorfo. Como tales, estas formas están destinadas a ser incluidas en el alcance de la invención. Además, el compuesto puede formar solvatos, por ejemplo con agua (es decir, hidratos) o solventes orgánicos comunes (por ejemplo, alcoholes). Como se usa en el presente documento, el término "solvato" significa una asociación física del compuesto de la presente invención con una o más moléculas de solvente. Esta asociación física implica diversos grados de enlace iónico y covalente, incluido el enlace de hidrógeno. En ciertos casos, el solvato podrá aislarse, por ejemplo, cuando se incorporan una o más moléculas de solvente en la red cristalina del sólido cristalino. El término "solvato" pretende abarcar tanto la fase de solución como los solvatos aislables. Ejemplos no limitantes de solvatos adecuados incluyen etanolatos, metanolatos y similares. Se pretende que la presente invención incluya dentro de su alcance solvatos del compuesto de la presente invención. También las sales farmacéuticamente aceptables y los N-óxidos del compuesto de la presente invención pueden formar un solvato. También los solvatos de las sales farmacéuticamente aceptables y los N-óxidos del compuesto de la invención están incluidos dentro del alcance de la invención.

Por lo tanto, en las realizaciones en las que el compuesto, la composición farmacéutica o la combinación de la presente invención se proporcionan para uso como medicamento o para el tratamiento de un trastorno, el término "administrar" abarcará los medios para tratar, mejorar o prevenir un síndrome, trastorno o enfermedad descritos aquí con el compuesto de la presente invención o un solvato del mismo, que obviamente se incluiría dentro del alcance de la invención, aunque no se divulga específicamente.

Preparación del compuesto de la presente invención.

El compuesto de fórmula (I) se puede preparar por deuteración reductora de un intermedio de fórmula (II) en el que W1 representa cloro, bromo o yodo, prefiriéndose yodo, en presencia de gas de deuterio y en presencia de un catalizador adecuado, tal como por ejemplo un catalizador de paladio, por ejemplo paladio sobre carbón 10% (10% Pd/C), o un catalizador de Pt, un catalizador de paladio, en particular paladio sobre carbón, prefiriéndose, un solvente adecuado o una mezcla de solventes, tal como por ejemplo metanol, metanol deuterado (d1-MeOD, d4-MeOD), tetrahidrofurano, N-metil-2-pirrolidona (NMP), o mezclas de los mismos, tal como una mezcla de tetrahidrofurano y metanol o una mezcla de tetrahidrofurano y metanol deuterado, prefiriéndose este último, y una base adecuada, tal como por ejemplo trietilamina o carbonato de sodio (Na2CO3), siendo preferido este último. El catalizador se seca preferiblemente ya que las trazas de agua pueden actuar como una fuente de hidrógeno. Además, el catalizador se deutera preferiblemente con gas deuterio para eliminar el hidrógeno unido al catalizador. Además, el catalizador se lava preferiblemente para eliminar el hidrógeno unido al catalizador. La relación v:v de metanol deuterado a tetrahidrofurano en la mezcla de solventes varía preferiblemente de 1:9 a 1:2, preferiblemente es 1:4.

El compuesto de fórmula (I) también se puede preparar haciendo reaccionar un intermedio de fórmula (III) en el que W2 representa un grupo saliente adecuado, tal como por ejemplo halo, por ejemplo cloro y similares, con un intermedio de fórmula (IV) en presencia de un solvente adecuado, tal como un alcohol, por ejemplo n-butanol

Para la síntesis de intermedios de fórmula (III) se hace referencia al documento WO2007/075567, que se incorpora aquí como referencia.

El compuesto de fórmula (I) también se puede preparar haciendo reaccionar un intermedio de fórmula (V) en el que W3 representa un grupo saliente adecuado, tal como por ejemplo halo, por ejemplo cloro y similares, con un intermedio de fórmula (VI) en presencia de un catalizador adecuado, tal como por ejemplo Pd2dba3, un ligando adecuado, tal como por ejemplo P(tBu3) BF4, una base adecuada, tal como por ejemplo Na2CO3y un solvente adecuado, tal como por ejemplo dioxano.

Para la síntesis de intermedios de fórmula (VI) se hace referencia al documento WO2007/075567, que se incorpora aquí como referencia.

Los intermedios de fórmula (V) se pueden preparar haciendo reaccionar un intermedio de fórmula (IV) con un intermedio de fórmula (VII) en donde W3 es como se definió anteriormente, en un solvente adecuado, tal como por ejemplo un alcohol, por ejemplo n-butanol

Para la síntesis de intermedios de fórmula (VII) se hace referencia al documento WO2007/075567, que se incorpora aquí como referencia.

Una realización de la presente invención se refiere a un proceso de preparación de un compuesto de fórmula (I) caracterizado por

a) deuteración reductora de un intermedio de fórmula (II) en el que W1 representa cloro, bromo o yodo en presencia de gas deuterio y en presencia de un catalizador adecuado, un solvente adecuado o una mezcla de solventes, y una base adecuada,

en la que D representa deuterio;

b) hacer reaccionar un intermedio de fórmula (III) en donde W2 representa un grupo saliente adecuado, con un intermedio de fórmula (IV) en donde D representa deuterio, en presencia de un solvente adecuado,

c) hacer reaccionar un intermedio de fórmula (V) en donde W3 representa un grupo saliente adecuado y en donde D representa deuterio, con un intermedio de fórmula (VI) en presencia de un catalizador adecuado, una base adecuada y un solvente adecuado,

o, si se desea, convertir el compuesto de fórmula (I), en una sal de adición de ácido no tóxica terapéuticamente activa mediante tratamiento con un ácido, o por el contrario, convertir la forma de sal de adición de ácido en la base libre mediante tratamiento con álcali, o si se desea, preparar solvatos o formas de N-óxido de los mismos.

A continuación se muestran ejemplos de síntesis de compuestos individuales.

Ejemplo 1

a) Secado del catalizador: El catalizador 10% Pd/C (Escat 1931, BASF) se secó antes de su uso. Se aplicaron las siguientes condiciones

- secador de gabinete, aplicando 85°C/<100 mbar/24 horas seguido de aplicar 85°C/<1 mbar/24 horas

- catalizador húmedo extendido en un vaso de precipitados (altura de llenado <5 mm, recipiente recubierto con un pañuelo de papel)

b) Predeuteración del catalizador: un matraz agitado (6 l, vidrio) que contiene 19.3 g de catalizador seco (10% Pd/C, Escat 1931, BASF), 40.6 g de carbonato de sodio (2 eq., 0.384 mol, Aldrich 71347), 1.61 tetrahidrofurano (t Hf) (Aldrich 87371) y 200 ml de dl-metanol (Aldrich 151939) se lavaron con nitrógeno. El matraz agitado se selló, se purgó con tres ciclos de deuterio/vacío y finalmente se colocó bajo una atmósfera de deuterio (1.05 bar, absoluto). Se inició el agitador y el catalizador se pre-deuteró a 25°C durante una hora.

La predeuteración se detuvo reemplazando la atmósfera de deuterio con nitrógeno. Finalmente, el solvente se eliminó por decantación.

c) Procedimiento de deuteración reductora: se añadió una suspensión de 96.5 g de material de partida 1 (0.192 mol) en 1.61 THF (Aldrich 87371) y 390 ml de dl-metanol (Aldrich 151939) a la mezcla de catalizador/aditivo predeuterado. El matraz agitado se selló, se purgó con tres ciclos de deuterio/vacío y finalmente se colocó bajo una atmósfera de deuterio (1.05 bar). Se inició el agitador y se monitorizó la absorción de deuterio. (Durante el tiempo de reacción de la primera hora, la absorción de deuterio estaba en un nivel muy bajo).

Después de 24 horas de tiempo de reacción, la deuteración se interrumpió reemplazando la atmósfera de deuterio con nitrógeno. Se tomó una muestra analítica y se analizó por HPLC. De acuerdo con el análisis de HPLC, el material de partida se convirtió completamente.

La mezcla de reacción se diluyó con 1 l de diclorometano (DCM), el catalizador se filtró y la torta del filtro se lavó con 500 ml de DCM. Para aislar el producto 2 deseado, el solvente se eliminó por evaporación a 45°C/vacío. Aproximadamente se aislaron 100 g de producto crudo como un sólido amarillo (que todavía contenía sales inorgánicas).

Extracción líquido-líquido: el producto crudo se recogió en 1.61 DCM/NaOH 111M y se transfirió a un embudo de separación. Después de mezclar, las dos capas se separaron y la capa orgánica se lavó con 1 l de agua desionizada. Todas las capas acuosas se extrajeron por segunda vez con 1 l de DCM. Las dos capas de DCM se combinaron, se secaron sobre Na2SO4 y finalmente el solvente se eliminó por evaporación (45°C/vacío).

Se aislaron 65.4 g de producto 2 (compuesto de fórmula (I)) como un sólido blanquecino. De acuerdo con el análisis por HPLC, la pureza del material fue del 97%. Con base en el análisis de 1H-RMN, el contenido de deuterio en la posición 2 de la unidad estructural quinolina fue del 98.6%

El material de partida 1 se preparó de acuerdo con el siguiente esquema de reacción:

material de partida 1 material de partida 2

Etapa 1: en presencia de un reactivo de oxidación adecuado, tal como por ejemplo mCPBA (ácido metacloroperbenzoico) y un solvente adecuado, tal como por ejemplo diclorometano. La reacción se realizó a temperatura ambiente.

Etapa 2: en presencia de TosCl (cloruro de tosilo; cloruro de 4-metilbencenosulfonilo), una base adecuada, tal como por ejemplo NaOAc (acetato de sodio) y un solvente adecuado, tal como por ejemplo diclorometano, seguido de reacción en presencia de LiOH y un solvente adecuado, tal como por ejemplo un alcohol, por ejemplo metanol

Etapa 3: en presencia de NaI, (CF3SO2) 2O (anhídrido tríflico; anhídrido trifluorometanosulfónico), en presencia de un solvente adecuado, tal como por ejemplo acetonitrilo y piridina.

Síntesis de material de partida 3

El material de partida 4 (400 g) (compuesto A; WO2007/075567), mCBA (ácido meta-cloroperbenzoico) (1.2 eq.) y diclorometano (10V) (1 V es 1 litro por kg de material de partida) se mezclaron durante 17 horas a temperatura ambiente. La mezcla se neutralizó con una solución acuosa saturada de Na² CO³ hasta pH> 8. La mezcla se agitó durante 0.5 horas. La mezcla se filtró y el sólido se lavó con agua hasta un pH de aproximadamente 7. El sólido se secó bajo vacío a temperatura ambiente. Rendimiento: 410 g de material de partida 3.

Síntesis de material de partida 2

Se mezclaron el material de partida 3 (410 g), TosCl (cloruro de tosilo; cloruro de 4-metilbencenosulfonilo) (2 eq.) y diclorometano (20 V) (1 V es 1 litro por kg de material de partida). Se añadió NaOAc (4 eq.) y la mezcla se agitó durante 2 horas. El solvente se eliminó bajo vacío. Se añadió metanol (20 V). La mezcla se agitó. Se añadió LOH.H² O (5 eq.) y la mezcla se agitó durante 17 horas a temperatura ambiente. La mezcla se concentró para eliminar 16 V de metanol y se añadieron 20 V de agua. La mezcla se neutralizó con HCl concentrado hasta un pH de aproximadamente 6. La mezcla se agitó durante 0.5 horas y se filtró. El sólido se secó bajo vacío a 50c. El sólido se suspendió con agua (10 V) durante 0.5 horas. La mezcla se filtró. El sólido se secó bajo vacío a 50°C. La etapa de suspensión y la etapa de secado se repitieron una vez. Rendimiento: 375 g de material de partida 2.

Síntesis de material de partida 1

El material de partida 2 (190 g), piridina (1 eq.) y acetonitrilo (10 eq.) se mezclaron y la mezcla se enfrió por debajo de 0°C. Se añadió (CF3SO2) 2O (4 eq.) lentamente gota a gota y se controló la temperatura de reacción para que no fuera superior a 5°C. Después de la adición, la mezcla se calentó hasta 20°C y se agitó durante 1 hora. La mezcla de reacción se enfrió por debajo de 0°C. Se añadió ((CF3SO2) 2O (1 eq.) gota a gota. Se añadió Nal (7 V) (1 V es 1 litro por kg de material de partida) lentamente y la temperatura de reacción se controló para que no fuera superior a 5°C. Después de la adición, la mezcla de reacción se calentó hasta 50°C y se agitó durante 17 horas a 50°C. Se añadió acetato de etilo, la mezcla se lavó con agua, solución de Na2S2O3 al 10%, salmuera. La capa orgánica se secó con Na2SO4 anhidro y se purificó con cromatografía en gel. Rendimiento: 98.5 g de material de partida 1.

Ejemplo 2:

• Síntesis del intermedio 1:

Se añadió ácido 3-cloroperoxibenzoico (13.5 g, 78.4 mmol) en porciones a 6-yodoquinolina (CAS 13327-31-6) (10 g, 39.2 mmol) en CHCl3 (300 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó durante 2 días y luego se vertió en una solución acuosa de K2Co 3 al 10%. La capa orgánica se extrajo con diclorometano (DCM). La capa orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó hasta sequedad para dar 10.5 g de intermedio 1 (99%).

• Síntesis del intermedio 2:

Una mezcla de intermedio 1 (5.2 g, 19.2 mmol) y una solución de NaOD (40% en D2O) (3.4 ml, 48.4 mmol) en D2O (100 ml) se calentó hasta 100°C durante 2 días. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente. Se añadió D2O y el precipitado se filtró, se lavó con D²O y se secó para producir 4.9 g de intermedio 2 (96%).

• Síntesis del intermedio 3:

Una mezcla de intermedio 2 (4.8 g, 17.64 mmol), HCOO-NH⁴ + (6.68 g, 0.106 mol) y Ni de Raney (6.2 g, 0.106 mol) en MeOH (metanol) (130 ml) se calentó hasta 60°C durante 1.5 horas La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se vertió en D²O, se basificó con K²CO³ y se extrajo con EtOAc (acetato de etilo). La capa orgánica se secó (MgSO⁴), se filtró y se evaporó hasta sequedad.

El residuo (4 g) se purificó por cromatografía sobre sílica gel (80 g de SiOH irregular 35-40 ^m, fase móvil: gradiente de 100% DCM a 95% Dc M 5% CH³OH 0.1% NH⁴OH). Las fracciones puras se recolectaron y se evaporaron hasta sequedad para dar 2.9 g de intermedio 3 (83%).

• Síntesis del intermedio 4:

Se añadió L-ascorbato de sodio (+) (2.32 g, 11.7 mmol) a una solución de CuSO4.5H2O (1.95 g, 7.8 mmol) en dimetilsulfóxido (DMSO) (25 ml) bajo N2 a temperatura ambiente y la mezcla se agitó durante 2 horas. Se añadió bromodifluoroacetato de etilo (0.55 ml, 4.3 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 1.5 horas seguido de la adición del intermedio 3 (1 g, 3.9 mmol). Después de calentar a 50°C durante 15 horas, la mezcla se enfrió hasta 10°C y se añadió NH2-NH2.H2O (4.76 ml, 78.1 mmol). Se añadió H2O (12 ml) gota a gota (exotérmico) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Se añadió EtOAc y la mezcla se filtró a través de una almohadilla corta de Celite®. La capa orgánica se extrajo, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó hasta sequedad.

El residuo (1 g) se purificó por cromatografía sobre sílica gel (40 g de sílica gel 30 ^m, fase móvil: gradiente de 100% DCM a 90% DCM 10% CH3OH 0.1% NH4OH). Las fracciones puras se recolectaron y se evaporaron hasta sequedad para dar 0.42 g de intermedio 4 (45%).

• Síntesis del intermedio 5:

Una solución de 3,6-dicloropiridazina (4.57 g, 0.0031 mol), (1-metil-1H-pirazol-4-il) éster de pinacol de ácido borónico (3.82 g, 0.0184 mol) y una solución de Na² CO³2M (18.3 ml) en dioxano (18.4 ml) se agitó durante 1 minuto. Se añadió PdCl2(PPh3)2 (1.29 g, 0.0018 mol) y la solución se calentó a 80°C durante 15 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se vertió en agua. Se añadió K2CO3 y la mezcla se filtró a través de una almohadilla corta de Celite®. La capa orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó hasta sequedad. El Celite® se lavó con CH2Cl2, el filtrado se secó (MgSO4) y se evaporó. El residuo se cristalizó en CH2Cl2. El precipitado se filtró y se secó para dar 1.5 g de un primer lote de intermedio 5 (42%). El filtrado se purificó por cromatografía sobre sílica gel (30 g de SiOH15-40 ^m, fase móvil: gradiente de CH2Cl2100% a CH2Cl295%/CH3OH 5%). Las fracciones puras se recolectaron y se evaporaron hasta sequedad para dar 1.58 g de un segundo lote de intermedio 5 (44%).

Rendimiento global = 86%

• Síntesis del compuesto de fórmula (I):

Una mezcla de intermedio 4 (0.41 g, 1.7 mmol) e intermedio 5 [943541-20-6] (0.335 g, 1.7 mmol) en nButanol (30 ml) se calentó a 125°C durante 15 horas. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se evaporó hasta sequedad. El residuo se purificó por cromatografía sobre sílica gel (40 g de SiOH irregular 35-40 ^m, fase móvil: gradiente de 100% DCM a 90% DCM 10% CH3OH 0.1% NH4OH). Las fracciones puras se recolectaron y se evaporaron hasta sequedad. El residuo (0.41 g) se purificó por SFC aquiral (cromatografía de fluido supercrítico) (fase estacionaria: 2 ETILPIRIDINA 6 ^m 150x21.2 mm, fase móvil: CO2 al 85%, MeOH al 15%). Las fracciones puras se recolectaron y se evaporaron hasta sequedad. El residuo (0.387 g) se cristalizó a partir de diisopropiléter. El precipitado se filtró y se secó para dar 0.315 g de compuesto de fórmula (I) (48%, el contenido de deuterio en la posición 2 de la unidad estructural quinolina = 93-94%). M.P. = 201.6°C (DSC).

Ejemplo 3

• Síntesis del intermedio 6:

Una mezcla de intermedio 4 (0.42 g, 1.76 mmol) y 3,6-didoropiridazina (0.788 g, 5.3 mmol) en nButanol (12 ml) se calentó a 130°C durante 2 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se evaporó hasta sequedad. Se añadió DCM y la mezcla se agitó con una solución acuosa de K2CO3 al 10%. La capa orgánica se extrajo, se secó (MgSO4), se filtró y se evaporó hasta sequedad. El residuo (0.9 g) se purificó por cromatografía sobre sílica gel (40 g de SiOH irregular 35-40 |jm, fase móvil: gradiente de 100% DCM a 95% DCM 5% CH3OH 0.1% NH4OH). Las fracciones puras se recolectaron y se evaporaron hasta sequedad para dar 0.385 g de intermedio 6 (66%).

• Síntesis del compuesto de fórmula (I)

En un tubo sellado, una solución de intermedio 6 (183 mg, 0.55 mmol), pinacol éster de ácido (1-metil-1H-pirazol-4-il)borónico (343 mg, 1.65 mmol), P(tBu3) BF4 (47.9 mg, 0.165 mmol) y una solución acuosa de Na²CO³2M (1.65 mL, 3.3 mmol) en dioxano (4 mL) se purgó con N2 durante 10 minutos. Se añadió Pd2dba3 (101 mg, 0.11 mmol) y la mezcla se purgó durante 5 minutos adicionales. La mezcla se calentó a 85°C durante 15 horas y se enfrió hasta temperatura ambiente. pinacol éster de ácido (1-metil-1H-pirazol-4-il)borónico (343 mg, 1.65 mmol), P(tBu3) BF4 (47.9 mg, 0.165 mmol), Pd2dba3 (101 mg, 0.11 mmol) y una solución acuosa de Na²CO³ 2M (1.65 mL, 3.3 mmol) se agregaron y la mezcla se calentó a 85°C durante 5 horas. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente, se vertió en H²O K²CO³ y se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó (MgSO⁴), se filtró y se evaporó hasta sequedad. El residuo se purificó por cromatografía sobre sílica gel (24 g de SiOH irregular 35-40 ^m, fase móvil: gradiente de 100% DCM a 95% DCM 5% CH³OH 0.1% NH⁴OH). Las fracciones puras se recolectaron y se evaporaron hasta sequedad para dar 58 mg de compuesto de fórmula (I) (28%, el contenido de deuterio en la posición 2 de la unidad estructural quinolina fue 93-94%).

Método de RMN utilizado para determinar el contenido de deuterio/hidrógeno en el Ejemplo 1 Instrumento Bruker Avance 300

Solvente CDCl3

Preparación de la muestra 10-25mg en 0.7ml CDCl3, filtrado

Cabeza de la sonda 5 mm QNP 1H/13

Programa de pulso zg30

Cantidad de barridos 16 o 254

Temperatura 29°C

Tiempo de relajacion 4.6 seg.

Desplazamientos químicos De acuerdo con la predicción de 1H-RMN, se espera un desplazamiento químico de 8.84ppm (ChemOffice). Con base en en el desplazamiento químico integral y esperado, la señal de hidrógeno se asignó en el rango de 8.9 a 9.0 ppm a la posición correspondiente.

Método de RMN utilizado para determinar el contenido de deuterio/hidrógeno en los ejemplos 2 y 3 Instrumento Bruker Avance III 500

Solvente DMSO o CDCl3

Preparación de la ~ 4mg en 0.7ml CDCl3 o DMSO

muestra

Cabeza de la sonda 5 mmTXI Z-GRD (1H/13C/15N)

Programa de pulso zg30

Cantidad de barridos 16

Temperatura 22°C

Tiempo de relajacion 1 seg.

Desplazamientos Relación de deuterio/hidrógeno medida con base en el desplazamiento químicos integral y químico a 9.02ppm

Método analítico de HPLC para la determinación de la pureza del producto en el Ejemplo 1 Instrumentos Agilent Chemstation 1100

Columna Agilent Eclipse Plus, C184.6 x 100 mm, 3.5um

Solvente A: Agua 0.1% TFA; B: ACN 0.1% TFA

Gradiente 1% B a 100% en 10 min, luego 2 min a 100% B; tiempo post: 2 min Flujo 1.0 ml/min.

Detección: UV (220 nm)

Temperatura 30°C

Concentración de la muestra 0.5 mg de producto en MeOH 1.0 ml

Volumen de inyección 1.0 |jL

Tiempo de ejecución 14 min.

Tiempos de retención: Producto 2 (compuesto de formula (I) ): 5.1 minutos.

Actividad biológica

Los siguientes ensayos representativos se pueden realizar para determinar las actividades biológicas del compuesto dentro del alcance de la invención. Se dan para ilustrar la invención de manera no limitativa.

Inhibición de la proliferación de células cancerosas que llevan amplificación de Met y dependen de la señalización de Met por el compuesto de fórmula (I)

Ensayo de proliferación con azul Alamar

Las células se sembraron en una placa de 96 pocillos en 180 j l de medio de crecimiento. Dependiendo de la prueba de curva de crecimiento, la cantidad de células por pocillo era diferente para cada línea celular. Las células se incubaron durante la noche en una incubadora a 37°C en una atmósfera humidificada con 5% de CO2. Al día siguiente: se preparó la placa de compuesto y se añadieron 4 j l de compuesto a 196 j l de medio precalentado. Se añadieron 20 j l de esto a 180 j l de células. Esto se incubó durante 4 días después de añadir el compuesto a 37°C en una atmósfera humidificada con CO2 al 5%. Después de los 4 días, se añadieron 40 j l de solución azul de Alamar. Esto se incubó a 37°C en una atmósfera humidificada de CO2 al 5% durante 4 horas (dependiendo de la línea celular, esto se probó antes a diferentes horas de incubación durante la prueba de la curva de crecimiento). Después de las 4 horas, se midió la fluorescencia a una excitación de 530 nm, emisión de 590 nm. La fluorescencia de control (tratamiento con DMSO) se tomó como 100% y la fluorescencia de las células incubadas con compuestos se calculó frente al control en %. Por lo tanto, se podría hacer una curva de respuesta a la dosis y se podría calcular una IC50.

Medio de crecimiento, medio de cultivo celular utilizado:

Para medio Snu-5 mediano

Para medio EBC-1

Resultados:

Inhibición de la fosforilación de Met en respuesta a la dosis por el compuesto de fórmula (I)

Transferencia Western

Línea celular: EBC-1 y Sun-5

Las muestras se ejecutaron en SDS-PAGE. Después de eso, el gel se procesó en una máquina I-Blot (Invitrogen). Principio: por electricidad, las proteínas se transfirieron a la membrana p Dv F.

La membrana PDVF se bloqueó primero durante 1 hora a temperatura ambiente con regulador de bloqueo (regulador de bloqueo Odyssey (PBS); Licor). Después del bloqueo, la membrana se incubó con el anticuerpo primario durante la noche a 4°C. Al día siguiente, las transferencias se lavaron con TBS-tween 0.1% 3 veces 5 minutos. El anticuerpo secundario se colocó sobre el punto de transferencia durante 1 hora a temperatura ambiente. Después de la incubación, los puntos de transferencia se lavaron con TBS-tween al 0.1% durante 3 veces 5 minutos. Los puntos de transferencia se escanearon en busca de señal.

Anticuerpos utilizados:

Anticuerpos primarios:

Tecnología de señalización celular # 3077, mAb de conejo anti-pMet (Tyr1234/1235), 1/2,000

Tecnología de señalización celular # 3127, mAb de ratón anti-Met (25H2), 1/1,000

Sigma A1978, mAb de ratón anti-b-Act, 1/30,000

Anticuerpos secundarios:

Invitrogen # A21076, Alexa Fluor® 680 IgG Anti-Comejo de Cabra (H+L), 1/4,000

Rockland # 610-732-124, Anticuerpo IgG de ratón (H&L) IRDye800® Conjugado Pre-adsorbido, 1/4,000

Los resultados se muestran en la Figura 1

Determinación farmacocinética in vivo del compuesto (I), el compuesto A y sus metabolitos en conejos blancos de Nueva Zelanda.

Se utilizaron conejos machos de Nueva Zelanda (Crl: KBL (NZW), Charles River, Francia) y conejos hembras de Nueva Zelanda (NZW INRA A1077, Center Lago). Por compuesto (compuesto de fócula (I) y compuesto A) se usaron un conejo macho y dos hembras con un peso medio de 2.6 ± 0.2 kg. Se obtuvo un perfil de tiempo de concentración plasmática completa de cada animal individual. La dieta estándar y el agua del grifo estaban disponibles ad libitum. El compuesto de fórmula (I) y el compuesto A se disolvieron ambos en una solución de grado de investigación (Captisol) SBE-B-CD (sulfobutiléter-beta-ciclodextrina) al 10% (p/v) a una concentración final de 1 mg/ml. Se añadieron HCl y PVP K30 para facilitar la disolución de los compuestos. Después de la disolución total, el pH se elevó hasta 2.6/2.7 con NaOH. Las formulaciones se almacenaron a temperatura ambiente, se protegieron de la luz y se analizaron cuantitativamente con LC-MS/MS el día de la preparación. La estabilidad de las formulaciones se verificó el día de la dosificación. Los animales se dosificaron oralmente por sonda a 10 ml/kg para obtener una dosis final de 10 mg/kg. De cada animal dosificado individualmente, se tomaron muestras de sangre a los 30 minutos, 1, 2, 4, 7 y 24 horas después de la administración oral. La sangre se recogió recolectó mediante múltiples muestras de una vena del oído lateral en tubos Multivette® 600 K3E (Sarstedt). Las muestras se colocaron inmediatamente sobre hielo derretido y se obtuvo plasma después de la centrifugación a 4°C durante 10 minutos a aproximadamente 1900 x g. Todas las muestras fueron protegidas de la luz del día y almacenadas a < -18°C antes del análisis. Las muestras de plasma se analizaron para el compuesto (I), el compuesto A, el metabolito 1, el metabolito 2, el metabolito 3 de N-desmetilo (que se calculó en la curva del metabolito 4 de N-desmetilo) y el metabolito 4 de N-desmetilo usando un Método LC-MS/Ms de investigación calificado. El rendimiento analítico clave (linealidad, límite superior e inferior de cuantificación, exactitud y precisión) del método se informó junto con las concentraciones plasmáticas. El límite inferior de cuantificación (LLOQ) para plasma fue de 1.00 ng/ml para todos los compuestos. Se realizó un análisis farmacocinético limitado utilizando Phoenix ™ Professional (Versión 6.2.1). Para todos los datos se utilizó un análisis no compartimental utilizando la regla trapezoidal lin/log con interpolación lin/log.

Resultados

Parámetros farmacocinéticos básicos del compuesto de fórmula (I) y sus metabolitos después de la administración oral única a 10 mg/kg de compuesto (I) en conejos machos y hembras. También se detectó el compuesto A (impureza)

Parámetros farmacocinéticos básicos del compuesto A y sus metabolitos después de la administración oral única a 10 mg/kg de compuesto A en conejos machos y hembras.

Metabolito 1:

6-{Difluoro[6-(1H-pirazol-4-il) [1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}quinolin-2(1H) -ona

Metabolito 2:

6-{Difluoro[6-(1 -metil-1H-pirazol-4-il) [1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil}quinolin-2(1H) -ona

N-desmetil metabolito 3;

N-desmetil metabolito 4;

6-{Difluoro[6-(1H-pirazol-4-il) [1,2,4]triazolo[4,3-b]piridazin-3-il]metil} quinolina

Un estudio in vitro sobre la inhibición del transporte de OCT2 (SLC22A2) por el compuesto de fórmula (I) Esto se probó utilizando células de ovario de hámster chino (CHO), parentales o transfectadas de forma estable con OCT2. Se usó 14C-metformina como sustrato OCT2.

Las líneas celulares CHO, parentales y transfectadas de manera estable con OCT2 se obtuvieron de Solvo Biotechnology (Hungría).

Las células CHO se cultivaron en DMEM-F12 (medio Eagle modificado de Dulbecco) suplementado con 0.03 mg/ml de L-Prolina, L-Glutamina al 1%, penicilina (50-100 U/ml), estreptomicina (50-100 pg/ml) y 10% (v/v) de ternera fetal o suero bovino (FCS), también denominado "medio de cultivo CHO".

1. Prueba de inhibición de OCT2

Formulaciones compuestas

De ser necesario, los compuestos no radiomarcados y radiomarcados se mezclaron para obtener la concentración química y radiactiva adecuada. Las soluciones madre (200x) se prepararon usando el solvente indicado en la Tabla a continuación. Se incluyeron controles de solvente adecuados. Los elementos de prueba y todos los compuestos inhibidores y de referencia requeridos se mencionan en la Tabla a continuación.

Procedimiento de incubación

T = -24 horas

Ambas células CHO parentales y OCT2 se sembraron en placas de 24 pocilios (1 ml/pocillo, 400000 células/pocillo) en medio de cultivo CHO.

Día del experimento

Los experimentos de transporte se realizaron en solución salina equilibrada de Hank Ca,+Mg (HBSS+/+) suplementado con HEPES 10 mM a pH 7.4. Todos los medios añadidos a las células y placas se mantuvieron a 37°C.

Antes de la incubación, las células de cada pocillo se lavaron dos veces con 1 ml de HBSS+/+ Hepes 10 mM, pH 7.4 a 37°C. A continuación, se añadió el medio de incubación, que contenía sustrato de referencia y los inhibidores (o solvente del inhibidor) (250 pl/pocillo).

En el momento de la administración de la dosis (0 min), se tomaron muestras de 150 pL de la solución de dosificación por triplicado para la determinación de las concentraciones iniciales por Conteo de centelleo líquido (LSC). Durante el período de incubación, las placas se mantuvieron a 37°C.

Para detener la reacción, se añadieron 1.5 ml de HBSS+/+ enfriado con hielo a cada pocillo y se aspiraron los líquidos. De nuevo, a cada pocillo se añadieron 2 ml de HBSS+/+ enfriado con hielo y se aspiró mientras se mantenía la placa en ángulo. Después de la aspiración del último pocillo, todos los pocillos fueron aspirados nuevamente cuidando de no tocar las células.

Para someter a lisis las células, se añadieron 250 pl de regulador de lisis de reactivo de extracción de proteínas de mamífero (M-PER) a cada pocillo y las placas se agitaron durante al menos 10 minutos (400 rpm). Para LSC, se tomó una muestra/pocillo de 150 pL y para el análisis de proteínas una muestra/pocillo de 25 pL. El análisis de proteínas se realizó de acuerdo con el método del ácido bicinconínico (BCA).

Análisis de los datos

Los datos se expresan en picomoles por mg de proteína por minuto y como porcentaje de control (control de solvente = DMSO). Se utilizó Sigmaplot para calcular los valores de IC50.

Resultados y discusión

La absorción de 14C-Metformina (sustrato OCT2) fue mucho mayor (7.39 y 17.2 veces) en las células CHO transfectadas con OCT2 en comparación con las células parentales. Esta absorción fue inhibida por el inhibidor de control positivo, quinidina 300 pM (85.5% y 100%). Estos datos indican que las condiciones de ensayo utilizadas funcionaron eficazmente para estudiar el efecto inhibitorio del compuesto de prueba sobre el transporte dependiente de OCT2.

El compuesto de fórmula (I) mostró inhibición de la absorción de 14C-metformina en células OCT2 con una IC50 de 0.67 ± 0.02 pM.

Prueba de citotoxicidad

La citotoxicidad del compuesto de fórmula (I) se determinó a 100 pM, y esto tanto en células CHO parentales como en OCT2. También se incluyó una condición de Triton-X100 al 1%, como reactivo citotóxico de control positivo. Después de 1 minuto de incubación, se aspiró el sobrenadante, las células secas se lavaron dos veces con 1 ml de HBSS++ Hepes 10 mM, pH 7.4 (37°C). Después de aspirar el regulador, se añadió una dilución 1/10 del reactivo de viabilidad PrestoBlue™ (Life Technologies) en HBSS+/+ Hepes 10 mM pH 7.4 y las placas se incubaron durante 60 minutos a 37°C, protegidas de la luz. Cada pocillo se muestreó (150 pL) en una placa negra de 96 pocillos y se midió la fluorescencia (Excitación: 560 nm/12 nm de ancho de banda, Emisión: 590 nm/12 nm de ancho de banda).

Resultados y discusión

Para el compuesto de fórmula (I) a 100 pM no se observaron efectos citotóxicos. Con el reactivo citotóxico de control positivo, una solución al 1% de Triton X-100, la viabilidad disminuyó drásticamente (véase la tabla a continuación). Esto indica que los posibles efectos inhibitorios no están relacionados con una pérdida de viabilidad celular.

Viabilidad celular (%) (después de 1 minuto de incubación)

Condición

en células parentales CHO en células CHO OCT2

(control DMSO) 100 100

Viabilidad celular (%) (después d e 1 minuto de incubación)

Condición

en células parentales CHO en células CHO OCT2

Compuesto de formula (I) 100 pM 10

103

Triton X-100 1% 0 0

Métodos de tratamiento/prevención; uso del compuesto

En otro aspecto de la solicitud, el compuesto de la solicitud puede usarse para inhibir la actividad o expresión de tirosina quinasa, incluida la actividad de c-Met, reducir la actividad o expresión de quinasa, incluida la actividad de c-Met, y modular la expresión de c-Met en un célula o un sujeto, o para tratar trastornos relacionados con la actividad o expresión de c-Met quinasa en un sujeto. Se cree que la inhibición de la actividad de c-Met modula indirectamente la expresión de c-Met.

En una realización de este aspecto de la solicitud, la presente solicitud proporciona un método para reducir o inhibir la actividad de quinasa de c-Met, y modular la expresión de c-Met en una célula que comprende la etapa de poner en contacto la célula con un compuesto de fórmula (I). La presente solicitud también proporciona un método para reducir o inhibir la actividad quinasa de c-Met, y modular la expresión de c-Met en un sujeto que comprende la etapa de administrar un compuesto de fórmula (I) al sujeto. La presente solicitud proporciona además un método para inhibir la proliferación celular en una célula que comprende la etapa de poner en contacto la célula con un compuesto de fórmula (I). La presente solicitud proporciona además el compuesto de fórmula (I) para reducir o inhibir la actividad quinasa de c-Met, y modular la expresión de c-Met.

El término "sujeto", como se usa en el presente documento, se refiere a un animal, preferiblemente un mamífero, lo más preferiblemente un humano, que ha sido objeto de tratamiento, observación o experimento.

El término "poner en contacto", como se usa en el presente documento, se refiere a la adición de compuesto a las células de tal manera que el compuesto es absorbido por la célula.

En otras realizaciones de este aspecto, la presente solicitud proporciona métodos tanto profilácticos como terapéuticos para tratar a un sujeto en riesgo de (o susceptible de) desarrollar un trastorno de proliferación celular o un trastorno relacionado con c-Met. Tales trastornos incluyen afecciones preexistentes relacionadas con la expresión de c-Met (o sobreexpresión) y/o la mutación de c-Met.

En un ejemplo, la solicitud proporciona métodos para prevenir en un sujeto un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met, que comprende administrar al sujeto una cantidad profilácticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula (I) y un fármaco portador aceptable La administración de dicho agente profiláctico puede ocurrir antes de la manifestación de síntomas característicos del trastorno proliferativo celular o trastorno relacionado con c-Met, de tal manera que se previene o, como alternativa, se retrasa su progresión. En particular, la invención proporciona el compuesto de fórmula (I) para uso en la prevención de un trastorno de proliferación celular o un trastorno relacionado con c-Met. La invención proporciona el uso del compuesto de fórmula (I) para la fabricación de un medicamento para prevenir un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met.

En otro ejemplo, la solicitud se refiere a métodos para tratar en un sujeto un trastorno de proliferación celular o un trastorno relacionado con c-Met que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula (I) y un fármaco portador aceptable La administración de dicho agente terapéutico puede ocurrir simultáneamente con la manifestación de síntomas característicos del trastorno, de tal manera que dicho agente terapéutico sirve como una terapia para compensar el trastorno proliferativo celular o los trastornos relacionados con c-Met. La invención proporciona el compuesto de fórmula (I) para uso en el tratamiento de un trastorno de proliferación celular o un trastorno relacionado con c-Met. La invención proporciona el uso del compuesto de fórmula (I) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno de proliferación celular o un trastorno relacionado con c-Met.

En otro ejemplo, la solicitud se refiere a métodos para modular en un sujeto un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met, de tal manera que la modulación del nivel de expresión de c-Met o de la actividad de c-Met puede actuar para mejorar el trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met, que comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende el compuesto de fórmula (I) y un portador farmacéuticamente aceptable. La invención proporciona el compuesto de fórmula (I) para uso en la modulación de un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met, de tal manera que la modulación del nivel de expresión de c-Met o de la actividad de c-Met pueda actuar para mejorar la trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met. La invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) para la fabricación de un medicamento para modular un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met, de tal manera que la modulación del nivel de expresión de c-Met o de la actividad de c-Met puede actuar para mejorar el trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met.

El término "cantidad profilácticamente efectiva" se refiere a una cantidad de un compuesto activo o agente farmacéutico que inhibe o retrasa en un sujeto la aparición de un trastorno que está siendo buscado por un investigador, veterinario, médico u otro clínico.

El término "cantidad terapéuticamente efectiva" como se usa en el presente documento, se refiere a una cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o medicinal en un sujeto que está siendo buscado por un investigador, veterinario, médico u otro clínico, que incluye alivio de los síntomas de la enfermedad o trastorno que se está tratando.

Se conocen métodos en la técnica para determinar dosis terapéutica y profilácticamente efectivas para la composición farmacéutica instantánea.

Se conocen métodos en la técnica para determinar cantidades terapéutica y profilácticamente efectivas para los compuestos actuales.

Como se usa en el presente documento, el término "composición" pretende abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de combinaciones de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.

Como se usa en el presente documento, los términos "trastornos relacionados con c-Met" o "trastornos relacionados con el receptor de tirosina quinasa c-Met" incluirán enfermedades asociadas o que implican actividad de c-Met, por ejemplo, la hiperactividad de c-Met, y condiciones que acompañan a estas enfermedades. El término "hiperactividad de c-Met" se refiere a 1) la expresión de c-Met en células que normalmente no expresan c-Met; 2) actividad de c-Met por células que normalmente no poseen c-Met activo; 3) aumento de la expresión de c-Met que conduce a la proliferación celular no deseada; o 4) mutaciones que conducen a la activación constitutiva de c-Met. Ejemplos de "trastornos relacionados con c-Met" incluyen trastornos que resultan de la sobreestimulación de c-Met debido a una cantidad anormalmente alta de c-Met o mutaciones en c-Met, o trastornos que resultan de una cantidad anormalmente alta de actividad de c-Met debido a cantidad anormalmente alta de c-Met o mutaciones en c-Met.

Se sabe que la sobreactividad de c-Met ha sido implicada en la patogénesis de un número de enfermedades, tales como trastornos de proliferación celular, trastornos neoplásicos y cánceres.

El término "trastornos de proliferación celular" se refiere a la proliferación celular no deseada de uno o más subconjuntos de células en un organismo multicelular que da como resultado un daño (es decir, incomodidad o disminución de la esperanza de vida) a los organismos multicelulares. Los trastornos proliferativos celulares pueden ocurrir en diferentes tipos de animales y humanos. Los trastornos proliferativos celulares incluyen trastornos neoplásicos (como se usa en el presente documento, un "trastorno neoplásico" se refiere a un tumor resultante de un crecimiento celular anormal o descontrolado) y otros trastornos proliferativos celulares.

Ejemplos de trastornos de proliferación celular relacionados con c-Met incluyen tumores y cánceres - por ejemplo, carcinomas renales papilares humanos hereditarios y esporádicos, cáncer de mama, cáncer colorrectal, carcinoma gástrico, glioma, cáncer de ovario, carcinoma hepatocelular, carcinomas de células escamosas de cabeza y cuello, carcinoma testicular, carcinoma de células basales, carcinoma de hígado, sarcoma, mesotelioma pleural maligno, melanoma, mieloma múltiple, osteosarcoma, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, sarcoma sinovial, carcinoma de tiroides, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) y cáncer de pulmón de células pequeñas, carcinoma de células transicionales de vejiga urinaria, carcinoma testicular, carcinoma de células basales, carcinoma de hígado -incluidas leucemias, linfomas y mielomas - por ejemplo, leucemia linfocítica aguda (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia promielocítica aguda (APL), leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia mieloide crónica (CML), leucemia neutrofílica crónica (CNL), leucemia aguda no diferenciada (AUL), linfoma anaplásico de células grandes (ALCL), leucemia prolinfocítica (PML), leucemia mielomonocítica juvenil (JMML), ALL de células T adultas, AML con mielodisplasia trilinaje (AML/TMDS), leucemia de linaje mixto (m Ll ), síndromes mielodisplásicos (MDSS), trastornos mieloproliferativos (MPD), mieloma múltiple, (MM), sarcoma mieloide, linfoma no Hodgkin y enfermedad de Hodgkin (también llamada linfoma de Hodgkin) - y enfermedades asociadas con la formación de nuevas vasculaturas, tales como la artritis reumatoide, y retinopatía.

Otros trastornos de proliferación celular en los que la hiperactividad de c-Met ha sido implicada en su patogénesis incluyen cánceres en los que la actividad de c-Met contribuye al fenotipo invasivo/metastásico, incluidos los cánceres en los que c-Met no se sobreexpresa o altera de otra manera.

En una realización adicional de este aspecto, la invención abarca una terapia de combinación para tratar o inhibir la aparición de un trastorno proliferativo celular o un trastorno relacionado con c-Met en un sujeto. La terapia de combinación comprende administrar al sujeto una cantidad terapéutica o profilácticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I), y una o más otras terapias de proliferación anti-celular que incluyen quimioterapia, radioterapia, terapia génica e inmunoterapia.

En una realización de la presente invención, el compuesto de la presente invención puede administrarse en combinación con quimioterapia. Como se usa en el presente documento, la quimioterapia se refiere a una terapia que implica un agente quimioterapéutica Por lo tanto, la presente invención se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula (I) y otro agente quimioterapéutico. Se puede usar una variedad de agentes quimioterapéuticos en los métodos de tratamiento combinado divulgados aquí. Los agentes quimioterapéuticos contemplados como ejemplos incluyen, pero no se limitan a: compuestos de platino (fármaco anticancerígeno que contiene platino) (por ejemplo, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino); compuestos de taxano (por ejemplo, paclitaxcel, docetaxol); compuestos de campototecina (irinotecan, topotecan); alcaloides de la vinca (por ejemplo, vincristina, vinblastina, vinorelbina); derivados de nucleósidos antitumorales (por ejemplo, 5-fluorouracilo, leucovorina, gemcitabina, capecitabina); agentes alquilantes (por ejemplo, ciclofosfamida, carmustina, lomustina, tiotepa); epipodofilotoxinas/podofilotoxinas (por ejemplo, etopósido, tenipósido); inhibidores de la aromatasa (por ejemplo, anastrozol, letrozol, exemestano); compuestos anti-estrógenos (por ejemplo, tamoxifeno, fulvestrant), antifolatos (por ejemplo, disodio premetrexado); agentes hipometilantes (por ejemplo, azacitidina); productos biológicos (por ejemplo, gemtuzamab, cetuximab, rituximab, pertuzumab, trastuzumab, bevacizumab, erlotinib); antibióticos/antraciclinas (por ejemplo, idarubicina, actinomicina D, bleomicina, daunorrubicina, doxorrubicina, mitomicina C, dactinomicina, carminomicina, daunomicina); antimetabolitos (por ejemplo, clofarabina, aminopterina, arabinósido de citosina, metotrexato); agentes de unión a tubulina (por ejemplo, combretastatina, colchicina, nocodazol); inhibidores de la topoisomerasa (por ejemplo, camptotecina); agentes diferenciadores (por ejemplo, retinoides, vitamina D y ácido retinoico); agentes bloqueantes del metabolismo del ácido retinoico (RAMBA) (por ejemplo, accutane); inhibidores de quinasas (por ejemplo, flavoperidol, mesilato de imatinib, gefitinib); inhibidores de farnesiltransferasa (por ejemplo, tipifarnib); inhibidores de histona desacetilasa; inhibidores de la ruta ubiquitina-proteasoma (por ejemplo, bortezomib, Yondelis); inhibidores de FGFR (receptor del factor de crecimiento de fibroblastos).

En una realización, los agentes quimioterapéuticos que pueden usarse en particular en combinaciones como se describe en el presente documento son compuestos de platino (fármacos anticancerígenos que contienen platino) (por ejemplo, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino) en particular en vista de la actividad inhibidora de OCT2 del compuesto de fórmula (I). Esta combinación puede reducir los efectos secundarios de los compuestos de platino y, por lo tanto, puede proporcionar un período de tratamiento más prolongado con los compuestos de platino. Por lo tanto, la invención se refiere a una combinación de un compuesto de fórmula (I) y un fármaco anticancerígeno que contiene platino, tal como por ejemplo cisplatino, carboplatino, oxaliplatino. En un aspecto, la presente invención se refiere a un producto que contiene como primer ingrediente activo un fármaco anticancerígeno que contiene platino, tal como por ejemplo cisplatino, carboplatino, oxaliplatino y como segundo ingrediente activo un compuesto de fórmula (I), como preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de pacientes que padecen cáncer.

En las combinaciones de la presente invención, el fármaco anticancerígeno que contiene platino, tal como por ejemplo cisplatino, carboplatino, oxaliplatino y el compuesto de fórmula (I) se puede formular en formas de dosificación farmacéutica separadas, que se pueden vender independientemente una de otra, pero con la indicación o instrucción para su uso combinado. Dicha indicación o instrucción puede ser en forma de un folleto para el paciente o similar, o en forma de cualquier comunicación, por ejemplo, en forma escrita u oral.

En una realización, los agentes quimioterapéuticos que pueden usarse en particular en combinaciones como se describe aquí son inhibidores de FGFR. Estas combinaciones pueden ser de particular interés porque el inhibidor de cMet de fórmula (I) puede usarse para prevenir la resistencia, retrasar la resistencia, prevenir la aparición de resistencia o retrasar la aparición de resistencia de un tumor o un cáncer a un inhibidor de FGFR, en particular un inhibidor de FGFR como se describe en este documento.

En un aspecto, la presente invención se refiere a un producto que contiene como primer ingrediente activo un inhibidor de FGFR, y como segundo ingrediente activo un compuesto de fórmula (I), como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de pacientes que sufren del cáncer

El inhibidor de FGFR y el compuesto de fórmula (I) pueden administrarse simultáneamente (por ejemplo, en composiciones separadas o unitarias) o secuencialmente en cualquier orden. En el último caso, los dos compuestos se administrarán dentro de un período y en una cantidad y manera que sea suficiente para asegurar que se logre un efecto ventajoso o sinérgico. Se apreciará que el método y el orden de administración preferidos y las cantidades y regímenes de dosificación respectivos para cada componente de la combinación dependerán del otro agente y compuestos medicinales particulares de las combinaciones de la presente invención que se administran, su ruta de administración, el tumor particular que está siendo tratado y el huésped particular que está siendo tratado. Los expertos en la técnica pueden determinar fácilmente el método y el orden de administración óptimos y las cantidades y el régimen de dosificación utilizando métodos convencionales y en vista de la información aquí expuesta.

La relación en peso de los compuestos de las combinaciones puede ser determinada por el experto en la técnica. Dicha relación y la dosis exacta y la frecuencia de administración dependen de los compuestos particulares de las combinaciones, la condición particular que está siendo tratada, la gravedad de la condición que está siendo tratada, la edad, el peso, el sexo, la dieta, el tiempo de administración y la condición física general del paciente particular, el modo de administración, así como otros medicamentos que el individuo puede estar tomando, como es bien sabido por los expertos en la técnica. Adicionalmente, es evidente que la cantidad diaria efectiva puede reducirse o aumentarse dependiendo de la respuesta del sujeto tratado y/o dependiendo de la evaluación del médico que prescribe las combinaciones de la presente invención. La relación peso por peso para el inhibidor de FGFR y el compuesto de fórmula (I) puede variar de 1/10 a 10/1, más en particular de 1/5 a 5/1, incluso más en particular de 1/3 a 3/1.

En una realización, el inhibidor de FGFR y el compuesto de fórmula (I) de las combinaciones de la presente invención se administran secuencialmente en cualquier orden, en programación de dosificación separados. En este caso, los dos compuestos se administrarán dentro de un período y en una cantidad y manera que sea suficiente para asegurar que se logre un efecto ventajoso o sinérgico.

En las combinaciones de la presente invención, el inhibidor de FGFR y el compuesto de fórmula (I) pueden formularse en formas farmacéuticas separadas, que pueden venderse independientemente una de otra, pero con la indicación o instrucciones para su uso combinado. Dicha indicación o instrucción puede ser en forma de un folleto para el paciente o similar, o en forma de cualquier comunicación, por ejemplo, en forma escrita u oral.

En las combinaciones de la presente invención, el inhibidor de FGFR y el compuesto de fórmula (I) pueden administrarse por la misma ruta de administración o por diferentes rutas de administración.

En una realización, el inhibidor de FGFR y el compuesto de fórmula (I) de las combinaciones de la presente invención se administran por la misma ruta de administración, en particular por vía oral.

La presente invención también se refiere a un producto farmacéutico o un paquete comercial que comprende una combinación de acuerdo con la presente invención, en particular junto con instrucciones para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento de una enfermedad mediada por la actividad de la tirosina quinasa del FGFR, especialmente un cáncer.

En una realización, en las combinaciones de la presente invención, el inhibidor de FGFR y el compuesto de fórmula (I) se administran simultáneamente.

En el caso de una combinación de la presente invención que comprende el compuesto X o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo como inhibidor de FGFR, puede ser ventajoso administrar dicho compuesto con menos frecuencia que el compuesto de fórmula (I) porque el compuesto X muestra propiedades lisosomotrópicas e inactivación prolongada de la diana.

El inhibidor de FGFR y el compuesto de fórmula (I) de las combinaciones de la presente invención también pueden formularse conjuntamente en una formulación individual.

En una realización, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y como primer ingrediente activo un inhibidor de FGFR, en particular un compuesto seleccionado de N-(3,5-dimetoxifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)quinoxalin-6-il]etano-1,2-diamina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo, y N-(2-fluoro-3,5-dimetoxifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo; y como segundo ingrediente activo, el compuesto de fórmula (I).

Ejemplos de inhibidores de FGFR

*) N-(3,5-dimetoxifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)quinoxalin-6-il]etano-1,2-diamina (compuesto X) se representa mediante la siguiente fórmula

*) N- (2-fluoro-3,5-dimetoxifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido [2,3-b]pirazin-6-amina (compuesto Y) está representada por la siguiente fórmula

Compuestos N-(3,5-dimetoxifenil)-N'-(1-metiletil)-N-[3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)quinoxalin-6-il]etano-1,2- diamina (compuesto X) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo, y N-(2-fluoro-3,5-dimetoxifenil)-N-(1H-imidazol-2-ilmetil)-3-(1-metil-1H-pirazol-4-il)pirido[2,3-b]pirazin-6-amina (compuesto Y) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un solvato del mismo, y su síntesis química se describe en WO2011/135376 y WO2013/061080, que se incorporan aquí como referencia. Se describen como inhibidores o moduladores de la actividad de ciertas proteínas tirosina quinasas, en particular FGFR, y por lo tanto los compuestos son útiles en el tratamiento o profilaxis, en particular el tratamiento, de estados o afecciones mediadas por esas tirosina quinasas, en particular FGFR. Los compuestos son útiles en el tratamiento o la profilaxis, en particular el tratamiento del cáncer.

En el documento WO2011/135376, el presente compuesto X también se ejemplifica como una sal de hidrocloruro. En el documento WO2013/061080, el presente compuesto Y también se ejemplifica como una sal de sulfato, como una sal de hidrocloruro, como una sal de fosfato, como una sal de lactato, como una sal de fumarato.

Los compuestos inhibidores de la quinasa FGFR X y Y descritos en este documento tienen un perfil de selectividad diferenciado que proporciona una nueva oportunidad para usar estos agentes direccionados en subgrupos de pacientes cuya enfermedad es impulsada por la desregulación de FGFR. Los compuestos inhibidores de la quinasa FGFR X y Y descritos en este documento exhiben una acción inhibitoria reducida sobre quinasas adicionales, particularmente VEGFR, más en particular VEGFR2 y PDGFR, en particular PDGFR-beta, y ofrecen la oportunidad de tener un perfil de efectos secundarios o toxicidad diferenciada y como tal, permiten un tratamiento más efectivo de estas indicaciones. Los inhibidores de VEGFR2 y PDGFR-beta están asociados con toxicidades tales como hipertensión o edema, respectivamente. En el caso de los inhibidores de VEGFR2, este efecto hipertensivo a menudo limita la dosis, puede estar contraindicado en ciertas poblaciones de pacientes y requiere tratamiento clínico. Los compuestos inhibidores de la quinasa FGFR X y Y descritos aquí son inhibidores de FGFR1,2, 3 y 4.

Factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR)

El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), un polipéptido, es mitogénico para las células endoteliales in vitro y estimula las respuestas angiogénicas in vivo. VEGF también se ha relacionado con angiogénesis inapropiada. Los VEGFR son proteínas tirosina quinasas (PTK). Las PTK catalizan la fosforilación de residuos específicos de tirosina en proteínas involucradas en la función celular, regulando así el crecimiento celular, la supervivencia y la diferenciación.

Se han identificado tres receptores PTK para VEGF: VEGFR-1 (Flt-1); VEGFR-2 (Flk-1 o KDR) y VEGFR-3 (Flt-4). Estos receptores están involucrados en la angiogénesis y participan en la transducción de señales. De particular interés es VEGFR-2, que es un receptor transmembrana PTK expresado principalmente en células endoteliales. La activación de VEGFR-2 por VEGF es una etapa crítica en la ruta de transducción de señales que inicia la angiogénesis tumoral. La expresión de VEGF puede ser constitutiva de las células tumorales y también puede regularse en respuesta a ciertos estímulos. Uno de tales estímulos es la hipoxia, donde la expresión de VEGF está sobrerregulada tanto en el tumor como en los tejidos del huésped asociados. El ligando de VEGF activa VEGFR-2 mediante la unión con su sitio de unión extracelular de VEGF. Esto conduce a la dimerización del receptor de los VEGFR y a la autofosforilación de los residuos de tirosina en el dominio de la quinasa intracelular de VEGFR-2. El dominio de la quinasa opera para transferir un fosfato del ATP a los residuos de tirosina, proporcionando así sitios de unión para la señalización de proteínas corriente abajo del VEGFR-2 lo que conduce finalmente al inicio de la angiogénesis.

PDGFR

Un tumor maligno es el producto de la proliferación celular no controlada. El crecimiento celular está controlado por un delicado equilibrio entre los factores que promueven el crecimiento y los que lo inhiben. En el tejido normal, la producción y la actividad de estos factores dan como resultado células diferenciadas que crecen de manera controlada y regulada que mantiene la integridad y el funcionamiento normales del órgano. La célula maligna ha evadido este control; se altera el equilibrio natural (a través de una variedad de mecanismos) y se produce un crecimiento celular aberrante no regulado. Un factor de crecimiento de importancia en el desarrollo de tumores es el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) que comprende una familia de factores de crecimiento de péptidos que envían señales a través de los receptores de tirosina quinasa de la superficie celular (PDGFR) y estimulan diversas funciones celulares que incluyen crecimiento, proliferación y diferenciación. *)

*) BGJ398 (3-(2,6-dicloro-3,5-dimetoxifenil) -1-[6-[4-(4-etilpiperazin-1-il) anilino]pirimidin-4-il]-1 -metilurea) que tiene la siguiente fórmula

*) AZD-4547 (N-(5-(3,5-dimetoxfenetil) -1H-pirazol-3-il) -4-((3S,5R) -3,5-dimetilpiperazin-1-il)benzamida) que tiene la siguiente fórmula

*) PD 173074 (N-[2-[[4-(Dietilamino)butil]amino]-6-(3,5-dimetoxifenil)pirido[2,3-cf]pirimidin-7-il]-W-(1,1-dimetiletil) urea) que tiene la siguiente fórmula

*) LY-2874455 ((R,E) -2-(4-(2-(5-(1-(3,5-didoropiridin-4-il)etoxi)-1H-indazol-3-il) vinil) -1H-pirazol-1-il)etanol) que tiene la s¡gu¡ente fórmula

*) Brivanib (alaninato) (S) -(R) -1-((4-((4-fluoro-2-metil-1H-indol-5-il) oxi)-5-metilpirrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-il) oxi) propan-2-il 2-aminopropanoato. *) Intedanib

*) Dovitinib

*) Cediranib

*) Masitinib

*) Orantinib

*) Ponatinib (AP24534)

*) E-7080 (lenvatinib)

*) E-3810 (lucitanib)

*) BAY1163877, TAS-120, ARQ087, ASP5878, FF284,

*) Anticuerpos o compuestos relacionados, tales como por ejemplo HGS1036/FP-1039; MFGR1877S; AV-370; GP369/AV-396b; HuGAL-FR21; anticuerpos monoclonales (BAY1179470, RG-7444)

Agentes útiles adicionales para las combinaciones como se describe en el presente documento incluyen verapamilo, un antagonista del calcio que se encontró que es útil en combinación con agentes antineoplásicos para establecer quimiosensibilidad en células tumorales resistentes a los agentes quimioterapéuticos aceptados y para potenciar la eficacia de tales compuestos en tumores malignos sensibles al fármaco. Véase Simpson WG, The calcium channel blocker verapamil and cancer chemotherapy. Cell Calcium. Dic de 1985; 6(6):449-67. Además, los agentes quimioterapéuticos aún por emerger se consideran útiles en combinación con el compuesto de la presente invención. En otra realización de la presente invención, el compuesto de la presente invención puede administrarse en combinación con radioterapia. Como se usa en el presente documento, "radioterapia" se refiere a una terapia que comprende exponer al sujeto que lo necesita a la radiación. Tal terapia es conocida por los expertos en la técnica. El esquema apropiado de radioterapia será similar a los ya empleados en terapias clínicas en las que la radioterapia se usa sola o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos.

En otra realización de la presente invención, el compuesto de la presente invención puede administrarse en combinación con una terapia génica. Como se usa en el presente documento, "terapia génica" se refiere a una terapia dirigida a genes particulares implicados en el desarrollo de tumores. Las posibles estrategias de terapia génica incluyen la restauración de genes defectuosos inhibidores del cáncer, transducción celular o transfección con ADN antisentido correspondiente a genes que codifican factores de crecimiento y sus receptores, estrategias basadas en ARN tales como ribozimas, señuelos de ARN, ARN mensajeros antisentido y moléculas de ARN de interferencia corta (ARNip) y los llamados 'genes suicidas'.

En otras realizaciones de esta invención, el compuesto de la presente invención puede administrarse en combinación con una inmunoterapia. Como se usa en el presente documento, "inmunoterapia" se refiere a una terapia direccionada a una proteína particular implicada en el desarrollo de tumores a través de anticuerpos específicos para tal proteína. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales contra el factor de crecimiento endotelial vascular se han utilizado en el tratamiento del cáncer.

Cuando se usa un segundo producto farmacéutico además del compuesto de la presente invención, los dos productos farmacéuticos se pueden administrar simultáneamente (por ejemplo, en composiciones separadas o unitarias) secuencialmente en cualquier orden, aproximadamente al mismo tiempo, o en programaciones de dosificación separados. En el último caso, los dos compuestos se administrarán dentro de un período y en una cantidad y manera que sea suficiente para asegurar que se logre un efecto ventajoso o sinérgico. Se apreciará que el método y el orden de administración preferidos y las cantidades y regímenes de dosificación respectivos para cada componente de la combinación dependerán del agente quimioterapéutico particular que se administre junto con el compuesto de la presente invención, su ruta de administración, el tumor particular que está siendo tratado y el huésped particular que está siendo tratado.

Como entenderán los expertos en la técnica, las dosis apropiadas de agentes quimioterapéuticos serán generalmente similares o menores que las ya empleadas en terapias clínicas en las que los agentes quimioterapéuticos se administran solos o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos.

Los expertos en la técnica pueden determinar fácilmente el método y el orden de administración óptimos y las cantidades y el régimen de dosificación utilizando métodos convencionales y en vista de la información aquí expuesta.

Solo a modo de ejemplo, los compuestos de platino se administran ventajosamente en una dosificación de 1 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo 50 a 400 mg/m2, particularmente para cisplatino en una dosificación de aproximadamente 75 mg/m2 y para carboplatino en aproximadamente 300 mg/m2 por curso de tratamiento. El cisplatino no se absorbe por vía oral y, por lo tanto, debe administrarse por inyección intravenosa, subcutánea, intratumoral o intraperitoneal.

Solo a modo de ejemplo, los compuestos de taxano se administran ventajosamente en una dosificación de 50 a 400 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, por ejemplo, de 75 a 250 mg/m2, particularmente para paclitaxel en una dosificación de aproximadamente 175 a 250 mg/m2 y para docetaxel en aproximadamente 75 a 150 mg/m2 por curso de tratamiento.

Solo a modo de ejemplo, los compuestos de camptotecina se administran ventajosamente en una dosificación de 0.1 a 400 mg por metro cuadrado (mg/m2) de área de superficie corporal, por ejemplo 1 a 300 mg/m2, particularmente para irinotecan en una dosificación de aproximadamente 100 a 350 mg/m2 y para topotecan en aproximadamente 1 a 2 mg/m2 por curso de tratamiento.

Solo a modo de ejemplo, los alcaloides de vinca se pueden administrar ventajosamente en una dosificación de 2 a 30 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, particularmente para vinblastina en una dosificación de aproximadamente 3 a 12 mg/m2, para vincristina en una dosificación de aproximadamente 1 a 2 mg/m2, y para vinorelbina en dosificación de aproximadamente 10 a 30 mg/m2 por curso de tratamiento.

Solo a modo de ejemplo, los derivados de nucleósidos antitumorales se pueden administrar ventajosamente en una dosificación de 200 a 2500 mg por metro cuadrado (mg/m2) de área de superficie corporal, por ejemplo 700 a 1500 mg/m2. El 5-fluorouracilo (5-FU) se usa comúnmente mediante administración intravenosa con dosis que varían de 200 a 500 mg/m2 (preferiblemente de 3 a 15 mg/kg/día). La gemcitabina se administra ventajosamente en una dosificación de aproximadamente 800 a 1200 mg/m2 y la capecitabina se administra ventajosamente en aproximadamente 1000 a 2500 mg/m2 por curso de tratamiento.

Solo a modo de ejemplo, los agentes alquilantes pueden administrarse ventajosamente en una dosificación de 100 a 500 mg por metro cuadrado (mg/m2) de área de superficie corporal, por ejemplo 120 a 200 mg/m2, particularmente para ciclofosfamida en una dosificación de aproximadamente 100 a 500 mg/m2, para clorambucilo en una dosificación de aproximadamente 0.1 a 0.2 mg/kg de peso corporal, para carmustina en una dosificación de aproximadamente 150 a 200 mg/m2, y para lomustina en una dosificación de aproximadamente 100 a 150 mg/m2 por curso de tratamiento.

Solo a modo de ejemplo, los derivados de podofilotoxina se pueden administrar ventajosamente en una dosificación de 30 a 300 mg por metro cuadrado (mg/m2) de área de superficie corporal, por ejemplo 50 a 250 mg/m2, particularmente para etopósido en una dosificación de aproximadamente 35 a 100 mg/m2 y para tenipósido en aproximadamente 50 a 250 mg/m2 por curso de tratamiento.

Solo a modo de ejemplo, los derivados de antraciclina pueden administrarse ventajosamente en una dosificación de 10 a 75 mg por metro cuadrado (mg/m2) de área de superficie corporal, por ejemplo de 15 a 60 mg/m2, particularmente para doxorrubicina en una dosificación de aproximadamente 40 a 75 mg/m2, para daunorubicina en una dosificación de aproximadamente 25 a 45 mg/m2, y para idarubicina en una dosificación de aproximadamente 10 a 15 mg/m2 por curso de tratamiento.

Solo a modo de ejemplo, los compuestos antiestrógenos pueden administrarse ventajosamente en una dosificación de aproximadamente 1 a 100 mg diarios dependiendo del agente particular y la afección que se va a tratar. El tamoxifeno se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de 5 a 50 mg, preferiblemente de 10 a 20 mg dos veces al día, continuando la terapia durante el tiempo suficiente para lograr y mantener un efecto terapéutico. El toremifeno se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de aproximadamente 60 mg una vez al día, continuando la terapia durante el tiempo suficiente para lograr y mantener un efecto terapéutico. El anastrozol se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de aproximadamente 1 mg una vez al día. El droloxifeno se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de aproximadamente 20-100 mg una vez al día. El raloxifeno se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de aproximadamente 60 mg una vez al día. Exemestano se administra ventajosamente por vía oral en una dosificación de aproximadamente 25 mg una vez al día.

Solo a modo de ejemplo, los productos biológicos pueden administrarse ventajosamente en una dosificación de aproximadamente 1 a 5 mg por metro cuadrado (mg/m2) de superficie corporal, o como se conoce en la técnica, si es diferente. Por ejemplo, trastuzumab se administra ventajosamente en una dosificación de 1 a 5 mg/m2, particularmente de 2 a 4 mg/m2 por curso de tratamiento.

Las dosificaciones pueden administrarse, por ejemplo, una vez, dos veces o más por curso de tratamiento, que pueden repetirse, por ejemplo, cada 7, 14, 21 o 28 días.

El compuesto de la presente invención se puede administrar a un sujeto por vía sistémica, por ejemplo, por vía intravenosa, oral, subcutánea, intramuscular, intradérmica o parenteral. El compuesto de la presente invención también se puede administrar a un sujeto localmente. Ejemplos no limitativos de sistemas de administración local incluyen el uso de dispositivos médicos intraluminales que incluyen catéteres, alambres, cánulas farmacológicas y revestimimentos endoluminales intravasculares para administración de fármacos. En particular, el compuesto de la presente invención se administra por vía oral.

El compuesto de la presente invención se puede administrar adicionalmente a un sujeto en combinación con un agente de direccionamiento para lograr una alta concentración local del compuesto en el sitio objetivo. Además, el compuesto de la presente invención puede formularse para liberación rápida o liberación lenta con el objetivo de mantener los fármacos o agentes en contacto con los tejidos objetivo durante un período que varía de horas a semanas.

La presente invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) en asociación con un portador farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica puede contener entre aproximadamente 0.1 mg y 1000 mg, preferiblemente aproximadamente 100 a 500 mg, del compuesto, y puede constituirse en cualquier forma adecuada para el modo de administración seleccionado.

La expresión "farmacéuticamente aceptable" se refieren a entidades moleculares y composiciones que no producen una reacción adversa, alérgica u otra reacción adversa cuando se administra a un animal o un humano, según corresponda. Los usos veterinarios se incluyen igualmente dentro de la invención y las composiciones "farmacéuticamente aceptables" incluyen composiciones tanto para uso clínico como veterinario.

Los portadores incluyen excipientes farmacéuticos necesarios e inertes, que incluyen, pero no se limitan a, aglutinantes, agentes de suspensión, lubricantes, saborizantes, edulcorantes, conservantes, colorantes y recubrimientos. Las composiciones adecuadas para administración oral incluyen formas sólidas, tales como píldoras, tabletas, capsuletas, cápsulas (incluyendo cada una formulaciones de liberación inmediata, liberación programada y liberación sostenida), gránulos y polvos, y formas líquidas, tales como soluciones, jarabes, elixires, emulsiones. y suspensiones. Las formas útiles para la administración parenteral incluyen soluciones estériles, emulsiones y suspensiones.

La composición farmacéutica de la presente invención también incluye una composición farmacéutica para la liberación lenta del compuesto de la presente invención. La composición incluye un portador de liberación lenta (típicamente, un portador polimérico) y un compuesto de la presente invención.

Los portadores biodegradables de liberación lenta son bien conocidos en la técnica. Estos son materiales que pueden formar partículas que capturan en el mismo un compuesto o compuestos activos y se degradan/disuelven lentamente en un entorno adecuado (por ejemplo, acuoso, ácido, básico, etc.) y de ese modo se degradan/disuelven en fluidos corporales y liberan los componentes activos en el mismo. Las partículas son preferiblemente nanopartículas (es decir, en el rango de aproximadamente 1 a 500 nm de diámetro, preferiblemente de aproximadamente 50-200 nm de diámetro y lo más preferiblemente de aproximadamente 100 nm de diámetro).

La presente invención también proporciona métodos para preparar las composiciones farmacéuticas de esta invención. El compuesto de fórmula (I), como ingrediente activo, se mezcla íntimamente con un portador farmacéutico de acuerdo con las técnicas de composición farmacéutica convencionales, portador que puede tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración, por ejemplo, oral o parenteral tal como intramuscular. Al preparar las composiciones en forma de dosificación oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales. Así, para preparaciones orales líquidas, tales como, por ejemplo, suspensiones, elixires y soluciones, los portadores y aditivos adecuados incluyen agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saborizantes, conservantes, agentes colorantes y similares; para preparaciones orales sólidas tales como, por ejemplo, polvos, capsuletas, cápsulas, cápsulas de gel y tabletas, los portadores y aditivos adecuados incluyen almidones, azúcares, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares. Debido a su facilidad de administración, las tabletas y las cápsulas representan la forma unitaria de dosificación oral más ventajosa, en cuyo caso obviamente se emplean portadores farmacéuticos sólidos. Si se desea, las tabletas pueden estar recubiertas con (azúcar) o con recubrimiento entérico mediante técnicas estándar. Para los parenterales, el portador usualmente comprenderá agua estéril, aunque pueden incluirse otros ingredientes, por ejemplo, para propósitos tales como ayudar a la solubilidad o para la conservación. También se pueden preparar suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear portadores líquidos apropiados, agentes de suspensión y similares. En preparación para la liberación lenta, por ejemplo, un portador de liberación lenta, típicamente un portador polimérico, y un compuesto de la presente invención se disuelven o dispersan primero en un solvente orgánico. La solución orgánica obtenida se agrega luego a una solución acuosa para obtener una emulsión de tipo aceite en agua. Preferiblemente, la solución acuosa incluye agentes con actividad de superficie. Subsecuentemente, el solvente orgánico se evapora de la emulsión de tipo aceite en agua para obtener una suspensión coloidal de partículas que contienen el portador de liberación lenta y el compuesto de la presente invención.

Las composiciones farmacéuticas de la presente memoria contendrán, por unidad de dosificación, por ejemplo, tableta, cápsula, polvo, inyección, cucharadita y similares, una cantidad del ingrediente activo necesaria para administrar una dosis eficaz como se describió anteriormente. Las composiciones farmacéuticas de la presente memoria contendrán, por unidad de dosificación unitaria, por ejemplo, tableta, cápsula, polvo, inyección, supositorio, cucharadita y similares, de aproximadamente 0.01 mg a 200 mg/kg de peso corporal por día. Preferiblemente, el rango es de aproximadamente 0.03 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, lo más preferiblemente, de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día. El compuesto puede administrarse en un régimen de 1 a 5 veces por día. Sin embargo, las dosis pueden variar dependiendo de los requisitos de los pacientes, la gravedad de la afección que se va a tratar y el compuesto que está siendo empleado. Se puede emplear el uso de la administración diaria o la dosificación posperiódica.

Preferiblemente, estas composiciones están en formas de dosificación unitarias tales como tabletas, píldoras, cápsulas, polvos, gránulos, soluciones o suspensiones parenterales estériles, aerosoles medidos o aspersiones líquidas, gotas, ampollas, dispositivos autoinyectores o supositorios; para administración oral, parenteral, intranasal, sublingual o rectal, o para administración por inhalación o insuflación. Alternativamente, la composición puede presentarse en una forma adecuada para la administración una vez a la semana o una vez al mes; por ejemplo, una sal insoluble del compuesto activo, tal como la sal de decanoato, puede adaptarse para proporcionar una preparación de depósito para inyección intramuscular. Para preparar composiciones sólidas tales como tabletas, el ingrediente activo principal se mezcla con un portador farmacéutico, por ejemplo ingredientes en tabletas convencionales tales como almidón de maíz, lactosa, sacarosa, sorbitol, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio, fosfato dicálcico o gomas, y otros diluyentes farmacéuticos, por ejemplo agua, para formar una composición sólida de preformulación que contiene una mezcla homogénea de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Cuando se hace referencia a estas composiciones de preformulación como homogéneas, se entiende que el ingrediente activo se dispersa uniformemente por toda la composición, de tal manera que la composición se puede subdividir fácilmente en formas de dosificación igualmente efectivas, tales como tabletas, píldoras y cápsulas. Esta composición sólida de preformulación se subdivide luego en formas de dosificación unitarias del tipo descrito anteriormente que contienen de 0.1 a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo de la presente invención. Las tabletas o píldoras de la novedosa composición pueden recubrirse o de otra forma combinarse para proporcionar una forma de dosificación que proporcione la ventaja de una acción prolongada. Por ejemplo, la tableta o píldora puede comprender una dosificación interna y un componente de dosificación externa, siendo esta última en forma de una envoltura sobre la primera. Los dos componentes pueden estar separados por una capa entérica que sirve para resistir la desintegración en el estómago y permite que el componente interno pase intacto al duodeno o se retrase su liberación. Se puede usar una variedad de materiales para tales capas o recubrimientos entéricos, incluyendo tales materiales un número de ácidos poliméricos con materiales tales como goma laca, alcohol acetílico y acetato de celulosa.

Las formas líquidas en las que el compuesto de fórmula (I) puede incorporarse para administración oral o por inyección incluyen soluciones acuosas, jarabes con sabor adecuado, suspensiones acuosas u oleosas y emulsiones saborizadas con aceites comestibles tales como aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de coco o aceite de cacahuate, así como elixires y vehículos farmacéuticos similares. Los agentes dispersantes o de suspensión adecuados para suspensiones acuosas incluyen gomas sintéticas y naturales tales como tragacanto, acacia, alginato, dextrano, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, polivinilpirrolidona o gelatina. Las formas líquidas en agentes de suspensión o dispersión adecuadamente saborizados también pueden incluir las gomas sintéticas y naturales, por ejemplo, tragacanto, acacia, metilcelulosa y similares. Para administración parenteral, se desean suspensiones y soluciones estériles. Las preparaciones isotónicas que generalmente contienen conservantes adecuados se emplean cuando se desea la administración intravenosa.

Ventajosamente, el compuesto de fórmula (I) puede administrarse en una dosis individual diaria, o la dosis diaria total puede administrarse en dosis divididas de dos, tres o cuatro veces al día. Adicionalmente, los compuestos para la presente invención pueden administrarse en forma intranasal mediante el uso tópico de vehículos intranasales adecuados, o mediante parches transdérmicos para la piel bien conocidos por los expertos en la técnica. Para administrarse en forma de un sistema de administración transdérmica, la administración de la dosificación será, por supuesto, continua en lugar de intermitente a lo largo del régimen de dosificación.

Por ejemplo, para la administración oral en forma de una tableta o cápsula, el componente activo del fármaco se puede combinar con un portador inerte oral, no tóxico, farmacéuticamente aceptable, tal como etanol, glicerol, agua y similares. Además, cuando se desee o sea necesario, aglutinantes adecuados; También se pueden incorporar en la mezcla lubricantes, agentes desintegrantes y agentes colorantes. Los aglutinantes adecuados incluyen, sin limitación, almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, tragacanto u oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegradores incluyen, sin limitación, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de xantano y similares.

La dosificación diaria del compuesto de la presente invención puede variar en un amplio rango de 1 a 5000 mg por humano adulto por día. Para la administración oral, las composiciones se proporcionan preferiblemente en forma de tabletas que contienen 0.01, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.5, 5.0, 10.0, 15.0, 25.0, 50.0, 100, 150, 200, 250 y 500 miligramos de ingrediente activo para el ajuste sintomático de la dosificación al paciente que se va a tratar. Normalmente se suministra una cantidad eficaz del fármaco a un nivel de dosificación de aproximadamente 0.01 mg/kg a aproximadamente 200 mg/kg de peso corporal por día. Particularmente, el rango es de aproximadamente 0.03 a aproximadamente 100 mg/kg o de aproximadamente 0.03 a aproximadamente 15 mg/kg de peso corporal por día, y más particularmente, de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día. El compuesto de la presente invención puede administrarse en un régimen de hasta cuatro o más veces por día, preferiblemente de 1 a 2 veces por día.

Los expertos en la técnica pueden determinar fácilmente las dosificaciones óptimas que se van a administrar, y variarán con el compuesto particular utilizado, el modo de administración, la concentración de la preparación, el modo de administración y el avance de la condición de enfermedad. Además, los factores asociados con el paciente particular que se está tratando, incluida la edad, el peso, la dieta y el tiempo de administración del paciente, darán lugar a la necesidad de ajustar las dosificaciones.

Los compuestos de la presente invención también pueden administrarse en forma de sistemas de administración de liposomas, tales como vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los liposomas pueden formarse a partir de una variedad de lípidos, que incluyen pero no se limitan a lípidos anfipáticos tales como fosfatidilcolinas, esfingomielinas, fosfatidiletanolaminas, fosfatidilcolinas, cardiolipinas, fosfatidilserinas, fosfatidilgliceroles, ácidos fosfatídicos, fosfatidilinositoles, diacil trimetilamonio propanos, diacil dimetilamonio propanos y estearilamina, lípidos neutros tales como triglicéridos y combinaciones de los mismos. Pueden contener bien sea colesterol o pueden estar libres de colesterol.

El compuesto de la presente invención también se puede administrar localmente. Se puede utilizar cualquier dispositivo de administración, tales como catéteres de administración de fármacos intravasculares, alambres, cánulas farmacológicas y recubrimiento endoluminal. El sistema de administración de tal dispositivo puede comprender un catéter de infusión local que administra el compuesto a una tasa controlada por el administrador.

Un dispositivo de administración de fármacos puede comprender un dispositivo médico intraluminal, preferiblemente una cánula, y una dosificación terapéutica de un compuesto de la invención.

El término "cánula" se refiere a cualquier dispositivo capaz de ser suministrado por un catéter. Una cánula se usa rutinariamente para prevenir el cierre vascular debido a anomalías físicas tales como el crecimiento interno no deseado del tejido vascular debido a un trauma quirúrgico. A menudo tiene una estructura tubular expansiva de tipo reticular apropiada para dejarse dentro del lumen de un conducto para aliviar una obstrucción. La cánula tiene una superficie de contacto con la pared del lumen y una superficie expuesta al lumen. La superficie de contacto con la pared del lumen es la superficie exterior del tubo y la superficie expuesta al lumen es la superficie interna del tubo. La cánula puede ser polimérica, metálica o polimérica y metálica, y opcionalmente puede ser biodegradable.

Comúnmente, las cánulas se insertan en el lumen en una forma no expandida y luego se expanden de forma autónoma o con la ayuda de un segundo dispositivo in situ. Un método típico de expansión se produce mediante el uso de un globo de angioplastia montado en un catéter que se infla dentro del vaso canulado o el conducto del cuerpo para cortar y romper las obstrucciones asociadas con los componentes de la pared del vaso y obtener un lumen ampliado. También se pueden utilizar cánulas autoexpandibles como se describe en el documento US 6,776,796 (Falotico et al.). La combinación de una cánula con fármacos, agentes o compuestos que previenen la inflamación y la proliferación, puede proporcionar el tratamiento más eficaz para la restenosis post-angioplasia.

El compuesto de fórmula (I) puede incorporarse o fijarse a la cánula en un número de formas y utilizando cualquier número de materiales biocompatibles. En una realización de ejemplo, el compuesto se incorpora directamente en una matriz polimérica, tal como el polipirrol polimérico, y subsecuentemente se recubre sobre la superficie externa de la cánula. El compuesto eluye de la matriz por difusión a través del polímero. Las cánulas y los métodos para recubrir fármacos en cánulas se discuten en detalle en la técnica. En otra realización de ejemplo, la cánula se recubre primero con una capa base que comprende una solución del compuesto, etileno-co-vinilacetato y polibutilmetacrilato. Luego, la cánula se recubre adicionalmente con una capa externa que comprende solamente polibutilmetacrilato. La capa externa actúa como una barrera de difusión para evitar que el compuesto se eluya demasiado rápido y que entre en los tejidos circundantes. El grosor de la capa externa o capa superior determina la tasa a la que el compuesto eluye de la matriz. Las cánulas y los métodos para el recubrimiento se analizan en detalle en la publicación de la OMPI WO9632907, la publicación U.S. No. 2002/0016625 y las referencias divulgadas en el mismo.

La solución del compuesto de la invención y los materiales/polímeros biocompatibles se pueden incorporar en o sobre una cánula de varias maneras. Por ejemplo, la solución puede asperjarse sobre la cánula o la cánula puede sumergirse en la solución. En una realización preferida, la solución se asperja sobre la cánula y luego se deja secar. En otra realización de ejemplo, la solución puede cargarse eléctricamente a una polaridad y la cánula puede cambiarse eléctricamente a la polaridad opuesta. De esta manera, la solución y la cánula se atraerán entre sí. Al usar este tipo de proceso de aspersión, se pueden reducir los desechos y se puede lograr un mayor control sobre el grosor del recubrimiento. El compuesto preferiblemente solo se fija a la superficie externa de la cánula que hace contacto con un tejido. Sin embargo, para algunos compuestos, todo la cánula puede estar recubierta. La combinación de la dosis de compuesto aplicada a la cánula y el recubrimiento de polímero que controla la liberación del fármaco es importante en la efectividad del fármaco. El compuesto permanece preferiblemente en la cánula durante al menos tres días hasta aproximadamente seis meses y más, preferiblemente entre siete y treinta días.

Se puede utilizar cualquier número de polímeros biocompatibles no erosionables junto con el compuesto de la invención. Es importante tener en cuenta que se pueden utilizar diferentes polímeros para diferentes cánulas. Por ejemplo, la matriz de etileno-co-vinilacetato y polibutilmetacrilato de etileno descrita anteriormente funciona bien con cánulas de acero inoxidable. Se pueden utilizar otros polímeros más eficazmente con cánulas formadas a partir de otros materiales, incluidos materiales que exhiben propiedades superelásticas tales como aleaciones de níquel y titanio.

La restenosis es responsable de una morbilidad y mortalidad significativas después de la angioplastia coronaria. La restenosis ocurre a través de una combinación de cuatro procesos que incluyen retroceso elástico, formación de trombos, hiperplasia de la íntima y remodelación de la matriz extracelular. Recientemente se han identificado varios factores de crecimiento que juegan un papel en estos procesos que conducen a la restenosis. Véase Schiele TM et. al., 2004, "Vascular restenosis -striving for therapy." Expert Opin Pharmacother. 5(11):2221-32. Las células vasculares del músculo liso (VSMC) expresan el receptor c-Met. La exposición al factor de crecimiento de hepatocitos, el ligando para c-Met, estimula a estas células a exhibir un fenotipo migratorio. Véase Taher et.al., Hepatocyte growth factor triggers signaling cascades mediating vascular smooth muscle cell migration. Biochem Biophys Res Commun. (2002) 298(1):80-6; Morishita R, Aoki M, Yo Y, Ogihara T. Hepatocyte growth factor as cardiovascular hormone: role of HGF in the pathogenesis of cardiovascular disease. Endocr J. (2002) Jun;49(3):273-84. Dado que la migración de VSMC de los medios a la íntima de las arterias desempeña un papel en el desarrollo de la aterosclerosis y la restenosis, se cree que los antagonistas de la actividad de la c-Met quinasa presentan una estrategia terapéutica viable en el tratamiento de estas enfermedades.

Por consiguiente, la presente solicitud proporciona un método para el tratamiento de trastornos relacionados con c-Met, que incluye restenosis, hiperplasia intimal o inflamación, en las paredes de los vasos sanguíneos, que comprende el suministro controlado, mediante la liberación desde un dispositivo médico intraluminal, tal como una cánula, del compuesto de la invención en cantidades terapéuticamente efectivas. En este contexto, la presente invención proporciona el compuesto de fórmula (I) para uso en el tratamiento de trastornos relacionados con c-Met, que incluyen restenosis, hiperplasia intimal o inflamación, en las paredes de los vasos sanguíneos.

Los métodos para introducir una cánula en un lumen de un cuerpo son bien conocidos y las cánulas recubiertas con compuesto de esta invención se introducen preferiblemente usando un catéter. Como apreciarán los expertos en la técnica, los métodos variarán ligeramente con base en la ubicación de la implantación de la cánula. Para la implantación de cánula coronaria, el catéter con globo que lleva la cánula se inserta en la arteria coronaria y la cánula se coloca en el sitio deseado. El globo se infla, expandiendo la cánula. A medida que la cánula se expande, la cánula hace contacto la pared del lumen. Una vez que se coloca la cánula, el globo se desinfla y se retira. La cánula permanece en su lugar con la superficie en contacto con el lumen que porta el compuesto directamente en contacto con la superficie de la pared del lumen. La implantación de la cánula puede ir acompañada de una terapia anticoagulante según sea necesario.

Las condiciones óptimas para la administración del compuesto para uso en la cánula de la invención pueden variar con los diferentes sistemas locales de administración utilizados, así como las propiedades y concentraciones de los compuestos utilizados. Las condiciones que pueden optimizarse incluyen, por ejemplo, las concentraciones de los compuestos, el volumen de suministro, la tasa de suministro, la profundidad de penetración de la pared del vaso, la presión de inflado proximal, la cantidad y el tamaño de las perforaciones y el ajuste del globo del catéter de suministro de fármacos. Las condiciones pueden optimizarse para la inhibición de la proliferación de células del músculo liso en el sitio de la lesión, de tal manera que no se produzca un bloqueo arterial significativo debido a la restenosis, medido, por ejemplo, por la capacidad proliferativa de las células del músculo liso o por cambios en la resistencia vascular resistencia o diámetro del lumen. Las condiciones óptimas se pueden determinar con base en los datos de estudios de modelos animales utilizando métodos computacionales de rutina.

Otro método alternativo para administrar compuestos de esta invención puede ser conjugar el compuesto con un agente de direccionamiento que dirige el conjugado a su sitio de acción previsto, es decir, a células endoteliales vasculares o a células tumorales. Se pueden usar tanto agentes de direccionamiento con anticuerpos como sin anticuerpos. Debido a la interacción específica entre el agente de direccionamiento y su correspondiente asociado de unión, un compuesto de la presente invención puede administrarse con altas concentraciones locales en o cerca de un sitio objetivo y, por lo tanto, trata el trastorno en el sitio objetivo de manera más efectiva.

Los agentes de direccionamiento de anticuerpos incluyen anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que se unen a un componente direccionable o accesible de una célula tumoral, vasculatura tumoral o estroma tumoral. El "componente direccionable o accesible" de una célula tumoral, vasculatura tumoral o estroma tumoral, es preferiblemente un componente expresado en la superficie, accesible en la superficie o localizado en la superficie. Los agentes de direccionamiento de anticuerpos también incluyen anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que se unen a un componente intracelular que se libera de una célula tumoral necrótica. Preferiblemente, tales anticuerpos son anticuerpos monoclonales, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que se unen a antígenos intracelulares insolubles presentes en células que pueden inducirse a ser permeables, o en fantasmas celulares de sustancialmente todas las células neoplásicas y normales, pero no están presentes o accesibles en el exterior de las células vivas normales de un mamífero. En la presente invención, el componente direccionable o accesible podría ser el receptor c-Met, ya que es accesible y se expresa en o cerca de los tejidos diana.

Como se usa en el presente documento, el término "anticuerpo" pretende referirse ampliamente a cualquier agente de unión inmunológico tal como IgG, IgM, IgA, IgE, F(ab')2, un fragmento univalente tal como Fab', Fab, Dab, también como anticuerpos modificados por ingeniería genética, tales como anticuerpos recombinantes, anticuerpos humanizados, anticuerpos biespecíficos y similares. El anticuerpo puede ser bien sea policlonal o monoclonal, aunque se prefiere el monoclonal. Existe un conjunto muy amplio de anticuerpos conocidos en la técnica que tienen especificidad inmunológica para la superficie celular de prácticamente cualquier tipo de tumor sólido (véase una Tabla de resumen sobre anticuerpos monoclonales para tumores sólidos en la Patente U.S. No. 5,855,866 de Thorpe et al). Los expertos en la técnica conocen métodos para producir y aislar anticuerpos contra tumores (Patente U.S. No.

5,855,866 de Thorpe et al., y Patente U.S. No. 6,34,2219 de Thorpe et al.).

Las técnicas para conjugar unidades estructurales terapéuticas con anticuerpos son bien conocidas, véase, por ejemplo, Amon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy", en Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), págs. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery", en Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), págs. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", en Monoclonal Antibodies '84: Biological and Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), págs. 475-506 (1985). También se pueden aplicar técnicas similares para unir los compuestos de la invención a agentes que no se dirigen a anticuerpos. Los expertos en la técnica conocerán, o podrán determinar, los métodos de formación de conjugados con agentes que no se dirigen a anticuerpos, tales como moléculas pequeñas, oligopéptidos, polisacáridos u otros compuestos polianiónicos.

Aunque cualquier unidad estructural de enlace que sea razonablemente estable en la sangre, se puede usar para enlazar los compuestos de la presente invención al agente de direccionamiento, se prefieren enlaces biológicamente liberables y/o separadores o enlazadores selectivamente escindibles. Los "enlaces biológicamente liberables" y los "espaciadores o enlazadores selectivamente escindibles" todavía tienen una estabilidad razonable en la circulación, pero son liberables, escindibles o hidrolizables solo o preferentemente bajo ciertas condiciones, es decir, dentro de cierto ambiente o en contacto con un agente particular. Tales enlaces incluyen, por ejemplo, enlaces disulfuro y trisulfuro y enlaces ácido-lábiles, como se describe en las patentes U.S. Nos. 5, 474,765 y 5,762,918 y enlaces sensibles a enzimas, incluidos enlaces peptídicos, ésteres, amidas, fosfodiésteres y glucósidos como se describe en las patentes U.S. Nos. 5,474,765 y 5,762,918. Tales características de diseño de liberación selectiva facilitan la liberación sostenida de los compuestos de los conjugados en el sitio objetivo deseado.

La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de la presente invención conjugado con un agente de direccionamiento y un portador farmacéuticamente aceptable.

La presente solicitud proporciona además un método para tratar un trastorno relacionado con c-Met, particularmente un tumor, que comprende administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula (I) conjugado con un agente de direccionamiento. Por lo tanto, la presente invención proporciona el compuesto de fórmula (I) conjugado con un agente de direccionamiento para uso en el tratamiento de un trastorno relacionado con c-Met, particularmente un tumor. La presente invención proporciona además el uso de un compuesto de fórmula (I) conjugado con un agente de direccionamiento para la preparación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno relacionado con c-Met, particularmente un tumor.

Cuando se usan proteínas tales como anticuerpos o factores de crecimiento, o polisacáridos como agentes de direccionamiento, se administran preferiblemente en forma de composiciones inyectables. La solución de anticuerpo inyectable se administrará en una vena, arteria o en el líquido cefalorraquídeo en el transcurso de 2 minutos a aproximadamente 45 minutos, preferiblemente de 10 a 20 minutos. En ciertos casos, la administración intradérmica e intracavitaria es ventajosa para tumores restringidos a áreas cercanas a regiones particulares de la piel y/o cavidades corporales particulares. Además, las administraciones intratecales pueden usarse para tumores localizados en el cerebro.

La dosis terapéuticamente efectiva del compuesto de la presente invención conjugado con un agente de direccionamiento depende del individuo, el tipo de enfermedad, el estado de la enfermedad, el método de administración y otras variables clínicas. Las dosificaciones efectivas se pueden determinar fácilmente utilizando datos de un modelo animal. Los animales experimentales que portan tumores sólidos se usan con frecuencia para optimizar las dosis terapéuticas apropiadas antes de traducir a un entorno clínico. Se sabe que tales modelos son muy confiables para predecir estrategias efectivas contra el cáncer. Por ejemplo, los ratones que portan tumores sólidos se usan ampliamente en las pruebas preclínicas para determinar los rangos de trabajo de los agentes terapéuticos que proporcionan efectos antitumorales beneficiosos con una toxicidad mínima.

La ruta HGF/MET se ha implicado en inducir un microambiente tumoral más inmunosupresor directamente regulando la actividad de las células T, así como indirectamente induciendo enzimas responsables de la anergia de las células T. Por lo tanto, la inhibición de la ruta Met por el compuesto de fórmula (I) puede estimular la respuesta inmune a los agentes de bloqueo del punto de regulación (los agentes de bloqueo del punto de regulación incluyen, por ejemplo, agentes de bloqueo de PD-1 y CTLA-4), así como aliviar la inmunosupresión inducida por el tumor y activar la respuesta inmune del huésped.

Si bien la especificación anterior enseña los principios de la presente invención, con ejemplos proporcionados con fines ilustrativos, se entenderá que la práctica de la invención abarca todas las variaciones, adaptaciones y/o modificaciones habituales que entran dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I)

un N-óxido, una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que D representa deuterio.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el compuesto es

base.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en el que el contenido de deuterio en la posición 2 de la quinolina (en la posición D) es al menos 93%.

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el contenido de deuterio en la posición 2 de la quinolina (en la posición D) es al menos 95%.

5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en el que el contenido de deuterio en la posición 2 de la quinolina (en la posición D) es al menos 98%.

6. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores para uso como medicamento.

7. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para uso en el tratamiento del cáncer.

8. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para uso en el tratamiento de un trastorno proliferativo celular.

9. Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable, y como ingrediente activo, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

10. Un proceso para preparar un compuesto como se reivindica en la reivindicación 1, caracterizado por la deuteración reductora de un intermedio de fórmula (II) en la que W1 representa cloro, bromo o yodo en presencia de gas deuterio y en presencia de un catalizador adecuado, un solvente adecuado o mezcla de solventes, y una base adecuada,

en la que D representa deuterio;

o, si se desea, convertir el compuesto de fórmula (I), en una sal de adición de ácido no tóxica terapéuticamente activa mediante tratamiento con un ácido, o por el contrario, convertir la forma de sal de adición de ácido en la base libre mediante tratamiento con álcali, o si se desea, preparar solvatos o formas de N-óxido de los mismos.

11. Una combinación de un compuesto como se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y otro agente quimioterapéutico.

12. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 11, en la que el agente quimioterapéutico es un inhibidor de quinasa.

13. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 12, en la que el inhibidor de quinasa es un inhibidor de FGFR.

14. Una combinación de acuerdo con la reivindicación 11, en la que el agente quimioterapéutico es un fármaco anticancerígeno que contiene platino.

15. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para uso en el tratamiento de un trastorno relacionado con c-Met.