ES2637341T3 - Proteína de unión a neurotrofina P75NTR para su utilización terapéutica - Google Patents

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ES2637341T3 ES13711109.2T ES13711109T ES2637341T3 ES 2637341 T3 ES2637341 T3 ES 2637341T3 ES 13711109 T ES13711109 T ES 13711109T ES 2637341 T3 ES2637341 T3 ES 2637341T3
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    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto

Abstract

Una proteína de unión a neurotrofina p75NTR, donde la p75NTR(NBP) se une a cualquiera de NGF, BDNF, NT3 o NT4/5 con una afinidad de unión (Kd) de entre 0,1 nM y 50 nM, como se mide mediante resonancia de plasmones superficiales a 20 ºC, para su utilización en el tratamiento del dolor.

Description

Proteína de unión a neurotrofina P75NTR para su utilización terapéutica
Antecedentes de la invención
[0001] Las neurotrofinas factor de crecimiento neurotrófico (NGF, por sus siglas en inglés), factor neurotrófico
5 derivado del cerebro (BDNF, por sus siglas en inglés), neurotrofina 3 (NT-3) y neurotrofina 4/5 (NT-4/5) actúan por medio de cuatro receptores: el receptor neurotrófico p75 de baja afinidad (p75NTR, por sus siglas en inglés) y los receptores tirosina quinasa de alta afinidad; TrkA, TrkB y TrkC. El receptor de baja afinidad p75NTR se une y las cuatro neurotrofinas lo activan, y se ha descrito que funciona de manera independiente de los otros receptores. Sin embargo, los receptores Trk se activan de manera más selectiva, es decir, NGF es el ligando
10 selectivo para TrkA, BDNF el ligando para TrkB y NT-3, 4/5 los ligandos para TrkC. Asimismo, se ha descrito que cuando las proteínas p75NTR y Trk se coexpresan, forman complejos que alteran las señales de ambos receptores (Huang y Reichardt, 2003). De hecho, se ha insinuado que p75NTR facilita la selectividad de cada una de las neurotrofinas para su receptor Trk respectivo.
[0002] El p75NTR es un miembro de la superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNFR-SF, por
15 sus siglas en inglés) y fue el primer miembro de esta superfamilia que se caracterizó completamente. La superfamilia (codificada por unos 30 genes en los humanos) se define mediante dominios de unión a ligandos que consisten en una o más repeticiones (normalmente cuatro) de un dominio rico en cisteína (CRD, por sus siglas en inglés) de 40 aminoácidos que se identificó por primera vez en p75NTR (Johnson et al., 1986; Radeke et al., 1987). En cambio, los dominios intracelulares de todos los miembros de la familia de TNFR-SF no
20 comparten ningún motivo secuencial. Por consiguiente, los mecanismos de señales de las proteínas TNFR-SF varían considerablemente.
[0003] Una característica inusual de la estructura de p75NTR es la existencia de un dímero de p75NTR unido a disulfuro, formado por medio de residuos de cisteinil en los dominios transmembranales. Este enlace disulfuro se necesita para que el p75NTR realice una señalización eficaz dependiente de neurotrofinas y cumple una función 25 importante en la formación de un dominio intracelular y extracelular (Vilar et al., 2009b). Las neurotrofinas existen fisiológicamente como dímeros asociados de forma no covalente (Bothwell y Shooter, 1977) con una semivida de distribución de aproximadamente 5 min (Tria et al., 1994). La activación de p75NTR dependiente de neurotrofinas conlleva la asociación de un dímero de neurotrofina con dominios ricos en cisteína 2-4 de los dos dominios extracelulares de un dímero p75NTR (He y Garcia, 2004). Estudios recientes respaldan un modelo en 30 el que la unión a neurotrofinas hace que los dos dominios extracelulares de los dímeros p75NTR se junten más, lo que hace que los dominios intracelulares se separen en un movimiento similar al de las pinzas para caracoles centrado en el enlace disulfuro y hace posible una asociación de los dominios intracelulares con las proteínas adaptadoras de señales NRIF y TRAF6 (Vilar et al., 2009a, 2009b). Los enlaces disulfuro de dominio intratransmembranal, tal como están presentes en p75NTR, no se han descrito anteriormente en otros miembros
35 de la familia de TNFR-SF o en cualquier otra proteína membranal.
[0004] p75NTR se somete a ruptura proteolítica secuencial por medio de actividades α-secretasa y γ-secretasa y metaloproteinasas de matriz (MMP, por sus siglas en inglés), lo que libera su dominio intracelular (ICD, por sus siglas en inglés) en el citoplasma, de manera análoga a la vía de señalización dependiente de ruptura de la proteína precursora Notch y β-amiloide (Jung et al., 2003; Kanning et al., 2003). La liberación citoplásmica del
40 ICD de p75NTR mediante esta vía estimula la señalización mediante NRIF asociada (Kenchappa et al., 2006). La función del dominio extracelular de p75NTR, a continuación de la ruptura proteolítica mediante las actividades αsecretasa y γ-secretasa y las MMP no se entiende completamente.
[0005] Se ha documentado que NGF y otras neurotrofinas (BDNF, NT-3 y NT-4/5) cumplen una función primordial en la patología, por ejemplo, el dolor causado por la osteoartritis, la pancreatitis, la artritis reumatoide, 45 la psoriasis, el prurito y la esclerosis múltiple (Watanabe et al., 2010; Raychaudhuri et al., 2011; Barthel et al., 2009; Truzzi et al., 2011; McDonald et al., 2011; Yamaoka et al., 2007). Se ha demostrado que los anticuerpos selectivos a cualquiera de las neurotrofinas, bien NGF o BDNF, NT-3 y NT-4/5, reducen el dolor considerablemente. Asimismo, también se ha demostrado que los anticuerpos dirigidos a los receptores de neurotrofina p75NTR Trk A, Trk B o Trk C son eficaces en modelos de dolor (Orita S et al., 2010; Svensson P et 50 al., 2010; Iwakura et al., 2010; Cirilio et al., 2010; Pezet et al., 2010; Hayashi et al., 2011; Chu et al., 2011; Ueda et al., 2010; Ghilardi et al., 2010; Fukui et al., 2010). Fukui et al., (2010) en un modelo de dolor (alodinia mecánica después de un aplastamiento del nervio ciático) demostró una eficacia considerable en criterios de valoración relacionados con el dolor tras un tratamiento con un anticuerpo antip75NTR. A partir de este estudio, se llegó a la conclusión de que el tratamiento con un anticuerpo inhibitorio p75NTR redujo la expresión de CGRP
55 y p75NTR, lo que dio lugar a una reducción considerable del dolor.
[0006] La presente invención demuestra que el dominio extracelular de p75NTR, exógeno o endógeno después de la ruptura de la membrana celular actúa como una proteína de unión a neurotrofina o receptor soluble a cada una de las neurotrofinas NGF, BDNF, NT-3 y NT-4/5 y desempeña un papel primordial en la función, fisiología y
homeostasis de la función neurotrófica. Además, se describe la utilización del dominio extracelular de p75NTR para modular o neutralizar las acciones patológicas de los factores neurotróficos, incluidos NGF, BDNF, NT-3 y NT4/5, por ejemplo, en modelos de alodinia estática e hiperalgesia térmica. Por consiguiente, la proteína de unión a neurotrofina p75NTR es útil para el tratamiento del dolor y otras patologías relacionadas con el factor neurotrófico tales como la psoriasis, el eccema, la artritis reumatoide, la cistitis, la endometriosis y la osteoartritis.
Breve descripción de la invención
[0007] Según un primer aspecto de la presente invención, se da a conocer una proteína de unión a neurotrofina p75NTR, (NBP, por sus siglas en inglés) para su utilización en el tratamiento del dolor, como se define en la reivindicación. Según un segundo aspecto de la presente invención, se da a conocer una proteína de unión a neurotrofina p75NTR para su utilización según el primer aspecto donde, la p75NTR(NBP) comprende p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares. Preferiblemente, la p75NTR(NBP) se conecta a la una o más moléculas auxiliares por medio de uno o más enlaces. Según un tercer aspecto de la exposición, se da a conocer una molécula de ácido nucleico que codifica la p75NTR(NBP) o p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares de la p75NTR(NBP); según el primer o el segundo aspecto la molécula de ácido nucleico puede comprender también la codificación de una secuencia señal. También se da a conocer la utilización de la molécula de ácido nucleico para el tratamiento del dolor. Según un cuarto aspecto de la exposición, se da a conocer un vector de expresión replicable para la transfección de una célula, comprendiendo el vector la molécula de ácido nucleico del tercer aspecto; preferiblemente, el vector es un vector viral. También se da a conocer la utilización del vector para el tratamiento del dolor. Según un quinto aspecto de la exposición, se da a conocer una célula huésped que alberga la molécula de ácido nucleico del tercer o el cuarto aspecto. Según un sexto aspecto de la exposición, se da a conocer la p75NTR(NBP) para su utilización según el primer o segundo aspecto o modos de realización preferidos de la misma, o el ácido nucleico o vector para su utilización según el tercer y el cuarto aspecto donde la p75NTR(NBP) o la molécula de ácido nucleico o vector se utilizan de forma separada, secuencial o simultánea en una combinación combinada con un segundo compuesto farmacológicamente activo.
Descripción de las figuras
[0008]
Figura 1. Secuencia de dominio extracelular p75NTR; dominios de unión a neurotrofina destacados en negrita.
Figura 2. Fragmentos estándar peptídicos p75NBPP y coinmunoprecipitación de p75NTR(NBP) y NGF que muestran el complejo p75NTR(NBP) -NGF en el plasma humano.
Figura 3. Confirmación de secuencia MS/MS del pico WADAECEEIPGR (SEQ ID NO.7) mostrado en la figura
2.
Figura 4. p75NTR(NBP) inhibe la función NGF en la línea celular U20S que expresa TrkA y en la línea celular U20S que coexpresa TrkA y p75NTR.
Figura 5. p75NTR(NBP) soluble inhibe la función BDNF en la línea celular U20S que expresa TrkA y en la línea celular U20S que coexpresa TrkA y p75NTR.
Figura 6. Datos de Biocore que demuestran la unión de p75NTR(NBP) a BDNF y la competencia entre antiBDNF y p75NTR(NBP).
Figura 7. Inhibición p75NTR(NBP) de actividad NGF en células PC12
Figura 8. La proteína de unión a neurotrofina p75NTR(NBP) inhibe el efecto de dolor BDNF en un modelo de excitabilidad de los nervios
Figura 9. La proteína de unión a neurotrofina p75NTR(NBP) inhibe la hiperalgesia en un modelo UVIH
Figura 10. SEQ ID NO. 1 secuencia de aminoácidos completa de p75NTR humano
Figura 11. SEQ ID NO. 2 dominio extracelular de p75NTR humano que incluye secuencia señal
Figura 12. SEQ ID NO. 3 dominio extracelular de p75NTR humano sin secuencia señal
Figura 13. SEQ ID NO. 4 dominio 1 de unión a neurotrofina p75NTR(NBP) humana
Figura 14. SEQ ID NO. 5 dominio 2 de unión a neurotrofina p75NTR(NBP) humana
Figura 15. SEQ ID NO.6 dominio 3 de unión a neurotrofina p75NTR(NBP) humana
Figura 16. SEQ ID NO. 7 dominio 4 de unión a neurotrofina p75NTR(NBP) humana
Figura 17. SEQ ID NO. 8 dominio 5 de unión a neurotrofina p75NTR(NBP) humana
Figura 18. SEQ ID NO. 9 transferrina humana
Figura 19. SEQ ID NO. 10 albúmina humana
5 Figura 20. SEQ ID NO. 11 Fc IgG1 humana
Figura 21. SEQ ID NO. 12 Fc IgG2 humana
Figura 22. SEQ ID NO. 13 Fc IgG3 humana
Figura 23. SEQ ID NO. 14 Fc IgG4 humana
Figura 24. SEQ ID NO. 15 Fragmento Fc humano creado para semivida de suero extendida
10 Figura 25. SEQ ID NO. 16 Fragmento Fc humano creado para funciones de falta de efector
Figura 26. SEQ ID NO 17 enlace p75NTR(NBP)-Fc
Figura 27: SEQ ID NO. 18 enlace p75NTR(NBP)-Fc
Figura 28: SEQ ID NO. 19 enlace p75NTR(NBP)-Fc
Descripción detallada de la invención
15 [0009]
 Según un primer aspecto de la presente invención expuesto, se da a conocer una proteína de unión a neurotrofina p75NTR, p75NTR(NBP), para su utilización en el tratamiento del dolor o para la prevención y/o el tratamiento del dolor y/o los síntomas de dolor o para mejorar, controlar, reducir la incidencia del desarrollo o la evolución del dolor y/o los síntomas de dolor o retrasar los mismos. Preferiblemente, la
20 proteína de unión a neurotrofina p75NTR, p75NTR(NBP), está pegilada, más preferiblemente está glicosilada.
[0010] La proteína de unión a neurotrofina p75NTR, p75NTR(NBP), preferiblemente comprende (a) uno o más de los dominios de unión a neurotrofina 1 [SEQ ID NO. 4], 2 [SEQ ID NO. 5], 3 [SEQ ID NO. 6], 4 [SEQ ID NO. 7], o 5 [SEQ ID NO. 8]. Más preferiblemente, la p75NTR(NBP) comprende (b) cada uno de los dominios de unión
25 a neurotrofina 1 [SEQ ID NO. 4], 2 [SEQ ID NO. 5], 4 [SEQ ID NO. 7] y 5 [SEQ ID NO. 8] o (c) cada uno de los dominios de unión a neurotrofina 1 [SEQ ID NO. 4], 3 [SEQ ID NO. 6], 4 [SEQ ID NO. 7] y 5 [SEQ ID NO. 8]. Más preferiblemente, la p75NTR(NBP) comprende el dominio extracelular 2 [SEQ ID NO. 3] o una parte del mismo que comprende (a), (b) o (c) citados anteriormente. Más preferiblemente, la p75NTR(NBP) comprende el dominio extracelular 1 [SEQ ID NO. 2] o una parte del mismo que comprende (a), (b) o (c) citados anteriormente.
30 [0011] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) se une a cada una de las neurotrofinas NGF, NT3, BDNF y NT4/5, preferiblemente NGF, NT3, BDNF y NT4/5 humanas. Más preferiblemente, la p75NTR(NBP) se une a cada una de las neurotrofinas NGF, NT3, BDNF y NT4/5, preferiblemente NGF, NT3, BDNF y NT4/5 humanas, preferiblemente con una constante de unión equivalente a la secuencia completa nativa p75NTR [SEQ ID NO. 1
o igual que la misma. Las constantes de unión pueden determinarse mediante la utilización de los ensayos
35 descritos en el presente documento tales como la utilización de resonancia de plasmones superficiales a 20 ºC; los ensayos para las constantes de unión de proteína nativa se conocen y comprenden los ensayos a partir de células conocidos en la técnica. Preferiblemente, la p75NTR(NBP) protege una o más de las neurotrofinas mencionadas anteriormente de la degradación en plasma u otros fluidos corporales, in-vitro o in-vivo, y/o mantiene un equilibrio homeostático de una o más de las neurotrofinas mencionadas anteriormente en
40 comparación con su forma libre biológica.
[0012] La p75NTR(NBP) de la presente invención preferiblemente se une a cualquiera o cualesquiera de NGF, BDNF, NT3 o NT4/5 con una afinidad de unión (Kd) de entre aproximadamente 0,1 nM y aproximadamente 50 nM. En algunos modos de realización preferidos, la afinidad de unión (Kd) se encuentra entre aproximadamente 0,1 nM y cualquier cantidad de aproximadamente 0,2 nM, 0,5 nM, 1nM, 1,5 nM, 2 nM, 2,5 nM, 3 nM, 3,5 nM, 4 45 nM, 4,5 nM, 5 nM, 5,5 nM, 6 nM, 6,5 nM, 7 nM, 7,5 nM, 8 nM, 8,5 nM, 9 nM, 9,5 nM, 10 nM, 15 nM, 20 nM, 25 nM, 30 nM, 35 nM, 40 nM, 45 nM o 50 nM medido en un ensayo de unión in vitro para NGF, BDNF, NT3 o NT4/5 tal como se describe en el presente documento preferiblemente medido mediante resonancia de plasmones superficiales a 20 ºC. En algunos otros modos de realización preferidos, la afinidad de unión (Kd) es o es menor que una cantidad de aproximadamente 250 pM, 300 pM, 350 pM, 400 pM, 450 pM, 500 pM, 550 pM, 600 pM, 50 650 pM, 700 pM, 750 pM, 800 pM, 850 pM, 950 pM o 1 nM medido en un ensayo de unión in vitro para p75NTR(NBP) con las neurotrofinas tal como se describen en el presente documento, preferiblemente medido
mediante resonancia de plasmones superficiales a 20 ºC. En un modo de realización todavía más preferido, la afinidad de unión (Kd) es aproximadamente 0,3 nM o aproximadamente 1 nM, medido en un ensayo de unión in vitro para p75NTR(NBP) con las neurotrofinas tal como se describen en el presente documento, preferiblemente medido mediante resonancia de plasmones superficiales a 20 ºC.
5 [0013] Más preferiblemente, la p75NTR(NBP) incide en la actividad funcional de las neurotrofinas mencionadas anteriormente, (definido como modulación o disminución o aumento de la actividad funcional de las neurotrofinas) NGF, BDNF, NT3 o NT4/5, por ejemplo la actividad funcional de las neurotrofinas mencionadas anteriormente resultantes de su interacción con sus respectivos receptores.
[0014] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) incide en la actividad funcional de BDNF evaluada mediante el ensayo
10 funcional de cualesquiera del crecimiento y la diferenciación de las neuronas y las sinapsis, la supervivencia y la diferenciación en cultivo celular de neuronas, la señalización Trk, la estimulación del crecimiento axonal in vitro o in vivo.
[0015] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) incide en la actividad funcional de NGF evaluada mediante la medición de la unión de NGF a TrkA y su activación, como se demuestra en los ensayos clásicos de supervivencia
15 neuronal (tal como se describe en Cowan, W.M., Hamburger, V., Levi-Montalcini, R. Annu. Rev. Neurosci. 2001;24:551-600).
[0016] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) incide en la actividad funcional de NT3 evaluada mediante la medición de la actividad de la unión de NT3 al receptor Trk endógeno y su activación, como se demuestra en la fosforilación del receptor Trk, en ensayos indicadores de fosforilación de proteína quinasa activada por mitógeno
20 o ensayos de supervivencia celular y de extensión neurítica.
[0017] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) incide en la actividad funcional de NT4/5 evaluada mediante la medición de la fosforilación de NT4/5 in vitro o in vivo y mediante ensayos de activación, por ejemplo, en ensayos de fosforilación de proteína básica de la mielina (PBM) o, alternativamente, in vivo en un ensayo de angiogénesis mediante Matrigel del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF, por sus siglas en inglés)/angiogénesis
25 inducida por el factor de crecimiento fibroblástico básico.
[0018] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) se une a los residuos de contacto de una o más de las neurotrofinas NGF, NT3, BDNF y NT4/5 como se muestra en He y Garcia (2001) Science, 301, páginas 870 -805.
[0019] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) es soluble, preferiblemente soluble en solución acuosa, preferiblemente soluble en un fluido biológico tal como suero, plasma o sangre.
30  Según un segundo aspecto de la presente invención, se da a conocer una p75NTR(NBP) para su utilización según el primer aspecto donde la p75NTR(NBP) comprende p75NTR(NBP), estando preferiblemente la p75NTR(NBP) del primer aspecto conectada a una o más moléculas auxiliares. Preferiblemente, la p75NTR(NBP) se conecta a la una o más moléculas auxiliares por medio de uno o más enlaces.
[0020] Preferiblemente, la una o más moléculas auxiliares se seleccionan entre; (a) transferrina o una parte de la
35 misma, preferiblemente la transferrina es transferrina humana, preferiblemente SEQ ID NO. 9, (b) albúmina o una parte de la misma, preferiblemente la albúmina es albúmina humana, preferiblemente SEQ ID NO. 10 (c) una inmunoglobulina Fc o una parte de la misma, preferiblemente la inmunoglobulina Fc es inmunoglobulina humana Fc, (d) una cadena polimérica de polietilenglicol (e) una cadena de carbohidratos.
[0021] Como se utiliza en el presente documento, se entiende por "inmunoglobulina Fc" o "Ig Fc" la porción
40 carboxiterminal de una región constante de cadena de inmunoglobulina, preferiblemente una región constante de cadena pesada de inmunoglobulina o una parte de la misma. Preferiblemente, la inmunoglobulina Fc comprende 1) un dominio CH1, un dominio CH2 y un dominio CH3, opcionalmente con una región de bisagra de inmunoglobulina, 2) un dominio CH1 y un dominio CH2, opcionalmente con una región de bisagra de inmunoglobulina, 3) un dominio CH1 y un dominio CH3, opcionalmente con una región de bisagra de
45 inmunoglobulina, 4) un dominio CH2 y un dominio CH3, opcionalmente con una región de bisagra de inmunoglobulina o 5) una combinación de dos o más dominios seleccionados entre CH1, CH2 y CH3 opcionalmente combinados con una región de bisagra de inmunoglobulina. Preferiblemente, la inmunoglobulina Fc comprende al menos una región de bisagra de inmunoglobulina, un dominio CH2 y un dominio CH3 y opcionalmente un dominio CH1. Preferiblemente, la inmunoglobulina Fc comprende una Fc o una parte de una
50 Fc de una inmunoglobulina de isótopo seleccionada entre IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, más preferiblemente, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, sIgA, más preferiblemente IgG2 o IgG4, más preferiblemente IgG2, o consiste en las mismas. Opcionalmente, la inmunoglobulina Fc también comprende mutaciones de aminoácidos, deleciones, sustituciones o modificaciones químicas que sirven para minimizar la fijación del complemento o la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos o que mejoran la afinidad de unión al receptor Fc.
55 [0022] Más preferiblemente, la inmunoglobulina Fc comprende o consiste en cualquiera de: (a) un dominio CH2 o parte del mismo y un dominio CH3 o parte del mismo, (b) un dominio CH2 o parte del mismo, o (c) un dominio
CH3 o parte del mismo, donde la inmunoglobulina Fc o parte de la misma es del isotipo seleccionado entre IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, más preferiblemente, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, sIgA, más preferiblemente IgG2 o IgG4, más preferiblemente IgG2.
[0023] Preferiblemente, la inmunoglobulina Fc comprende la región carboxiterminal de una cadena pesada de
5 inmunoglobulina o consiste en la misma y puede comprender los dominios CH2 y/o CH3, o partes de los mismos, entre isotipos de anticuerpos IgG, IgA o IgD o los dominios CH2 y/o CH3 y/o CH4 o partes de los mismos entre IgM o IgE. Preferiblemente, la inmunoglobulina Fc comprende un fragmento de la Fc o consiste en el mismo, que comprende principalmente CH3 y una pequeña parte de CH2, como se puede derivar de la digestión de pepsina de la inmunoglobulina. Preferiblemente, la inmunoglobulina Fc comprende la región Fc completa o consiste en la
10 misma, que comprende CH2 y CH3, adicionalmente conectados a la región de bisagra que es un segmento corto de cadena pesada que conecta las regiones CH1 y CH2 en la inmunoglobulina intacta, que puede producirse por la digestión de la papaína de la inmunoglobulina. Preferiblemente, la región de bisagra de inmunoglobulina comprende o consiste en una región de bisagra o parte de una región de bisagra derivada de una IgG, preferiblemente IgG humana, más preferiblemente seleccionada entre IgG1, IgG2, IgG3, o IgG4, más
15 preferiblemente IgG1 o es, de forma alternativa, una especie o variante alélica de los modos de realización de región de bisagra anteriores. La región de bisagra o una parte de una región de bisagra de inmunoglobulina puede situarse en el extremo C-o N-terminal de la región Fc, preferiblemente en el extremo N-terminal.
[0024] Según un modo de realización preferido de la presente invención, la inmunoglobulina Fc preferiblemente comprende una Fc o una parte de una Fc de una inmunoglobulina o consiste en la misma, que comprende una o 20 más mutaciones de aminoácidos de la secuencia natural en la región CH2 que reducen la función efectora de Fc. Preferiblemente, estas mutaciones son A330, P331 a S330, S331 (numeración de aminoácidos con referencia a la secuencia natural IgG2, donde la región CH2 está en la región constante de IgG2 de cadena pesada humana. [Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624]. Preferiblemente, la inmunoglobulina Fc está glicosilada y altamente cargada de pH fisiológico, de modo que ayuda a solubilizar la p75NTR(NBP). La región Fc también permite la
25 detección de la p75NTR(NBP) mediante ELISA antiFc, por ejemplo, con fines de diagnóstico. La p75NTR(NBP) de la invención está preferiblemente sintetizada en una célula que glicosila la Ig Fc preferiblemente en sitios de glicosilación normales.
[0025] Preferiblemente, la inmunoglobulina Fc comprende o consiste en una región de inmunoglobulina humana Fc de secuencia de aminoácidos seleccionada entre SEQ ID No. 11, 12, 13, 14, 15 o 16 o una especie o variante
30 alélica de las mismas, o los dominios CH2 y/o CH3 o partes de los mismos derivadas de la SEQ ID NO. 11, 12, 13, 14, 15 o 16.
[0026] Según la presente invención, la p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares preferiblemente demuestra las propiedades biológicas ventajosas de solubilidad mejorada de p75NTR(NBP) y/o la estabilidad de p75NTR(NBP) y/o la semivida de suero mejorada de p75NTR(NBP). Se desea una mejora de la 35 solubilidad con el fin de maximizar la biodisponibilidad de la p75NTR(NBP) para su administración y con el fin de que se pueda determinar y llevar a cabo una dosis exacta de la p75NTR(NBP). La mejora de la solubilidad es ventajosa para superar el problema de los agregados, que no se desean, ya que provocan dolor en la administración in vivo y conllevan una posible inflamación. La mejora de la semivida de suero presenta la ventaja de facilitar niveles reducidos o una frecuencia reducida de la dosis requerida durante la utilización para el 40 tratamiento con el fin de conseguir el efecto terapéutico equivalente o mantenido de la p75NTR(NBP) administrada. Una prolongación de la semivida y una mayor estabilidad en sangre o suero presentan la ventaja de permitir una pauta posológica con dosis menos frecuentes y/o niveles de dosis menores, lo que reduce la posible toxicidad o los posibles efectos secundarios in vivo. En este caso, la p75NTR(NBP) es más potente en cuanto a su efecto terapéutico y/o más estable en la circulación. El número de dosis más bajo o menos 45 frecuentes resultantes es ventajoso en la minimización de cualquier posible efecto tóxico o efecto secundario potencialmente asociado a la administración de p75NTR(NBP). El peso molecular de la p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares también aumenta a lo largo de la p75NTR(NBP) solamente, lo que presenta la ventaja la molécula quedará bien retenida en la circulación sanguínea cuando se administre de forma intravenosa, lo que reduce el riesgo de penetración en sitios no deseados, por ejemplo, el sistema nervioso
50 central y lo que convierte a la molécula en adecuada para la retención o concentración en los tejidos diana.
[0027] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares demuestra una mejora en la solubilidad de p75NTR(NBP) y/o una mejora en la estabilidad de p75NTR(NBP) y/o una mejora en la semivida de suero en comparación con la p75NTR(NBP) no conectada de tal manera. Preferiblemente, la solubilidad mejorada es solubilidad en una solución acuosa tal como agua preferiblemente con excipientes tales como 55 tampones y/o sales a preferiblemente a un pH fisiológico, preferiblemente a entre pH 5 y pH 8, preferiblemente aproximadamente pH 7 o es solubilidad en un fluido biológico tal como suero o sangre. Preferiblemente, la estabilidad mejorada es estabilidad de actividad o integridad estructural de la proteína p75NTR(NBP) debido a los efectos de la desnaturalización, oxidación, fragmentación o agregación durante un periodo de tiempo, durante un periodo de almacenamiento o después de congelación y descongelación. La estabilidad estructural puede 60 calcularse mediante medidas estándar de desnaturalización, oxidación, agregación o agregación. La estabilidad
de actividad puede medirse mediante los ensayos de unión o ensayos funcionales expuestos en el presente documento. Se conocen métodos de medición de la semivida de suero de la proteína.
[0028] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares puede expresarse a altos niveles a partir de una variedad de células huésped de mamífero para proporcionar una única especie y puede 5 purificarse de forma eficaz mediante cromatografía de afinidad, por ejemplo, mediante unión a la proteína A de Staphylococcus aureus. Preferiblemente, la p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares puede dimerizar y, preferiblemente, el dímero tiene afinidad aumentada a las neurotrofinas NGF, BDNF, NT3 o NT4/5 en comparación con la p75NTR(NBP) no conectada de tal manera. Una unión más ajustada presenta la ventaja de una potencia mayor y una eficacia terapéutica mayor, como se calcula mediante los efectos de la
10 p75NTR(NBP), por ejemplo, como se determina mediante los ensayos funcionales de neurotrofina expuestos en el presente documento. Un aumento de la potencia presenta el beneficio de que la p75NTR(NBP) pueda utilizarse en cantidades de dosis menores para conseguir la misma eficacia terapéutica, de forma que se reduce la posible toxicidad o efectos secundarios in vivo.
[0029] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) de la invención tiene una semivida in vivo de aproximadamente 2, 4, 6,
15 8,10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152,154, 156, 158, 160, 62, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208 o 210 horas o más +/-1 hora; más preferiblemente la p75NTR(NBP) de la invención tiene una semivida in vivo de
20 aproximadamente 24 horas o más.
[0030] Más preferiblemente, la p75NTR(NBP) de la invención tiene una semivida in vitro de aproximadamente 2, 4, 6, 8,10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152,154, 156, 158, 160, 62, 164,
25 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208 o 210 días o más +/-1 día, más preferiblemente la p75NTR(NBP) de la invención tiene una semivida in vitro de aproximadamente 6 días o más. Preferiblemente, la estabilidad se mide a aproximadamente pH fisiológico, en una solución acuosa tamponada, preferiblemente a 20 ºC o 37 ºC.
[0031] Según los modos de realización preferidos anteriores, preferiblemente la semivida in vitro es semivida en
30 rata o semivida en humano, más preferiblemente en humano. Preferiblemente, la semivida se determina a partir de mediciones de suero de los niveles de p75NTR(NBP) de la invención tras administración in vivo, por ejemplo, mediante inyección intravenosa o subcutánea.
 Todavía según el segundo aspecto de la invención, el enlace se selecciona preferiblemente entre: (a) un enlace covalente, (b) un enlace no covalente, (c) un enlace peptídico, (d) un aminoácido o una pluralidad de
35 aminoácidos que comprende un péptido. Preferiblemente, la p75NTR(NBP) se conecta a más de una molécula auxiliar, opcionalmente cada molécula auxiliar es, bien la misma, bien diferente o una mezcla de la misma y la diferente. Mas preferiblemente, la más de una molécula auxiliar comprende un multímero o una pluralidad de moléculas auxiliares enlazadas a p75NTR(NBP) mediante un enlace y donde cada molécula puede ser la misma o diferente o una mezcla de la misma y la diferente.
40 [0032] Preferiblemente, el enlace comprende o consiste en un aminoácido o una pluralidad de los mismos o comprende o consiste en una secuencia polipeptídica de aminoácidos, preferiblemente aproximadamente 1 a aproximadamente 25 aminoácidos, preferiblemente cualquier cantidad entre 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, o 9 aminoácidos, más preferiblemente cualquier cantidad entre aproximadamente 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 22, 23 o 24 aminoácidos, más preferiblemente 13 aminoácidos.
45 [0033] Preferiblemente, el enlace comprende o consiste en una secuencia polipeptídica de aminoácidos que carece de cualquier estructura secundaria estable tal como una hélice alfa, hebra beta, hélice 310 y hélice pi, hélice de poliprolina, lámina alfa. Preferiblemente, la región de enlace comprende o consiste en una secuencia polipeptídica de aminoácidos que define un polipéptido flexible, dinámico o no estructurado tal como, por ejemplo, un bucle flexible o hélice aleatorio o vuelta flexible. Dichos polipéptidos no estructurados suelen
50 encontrarse en la conexión de regiones de estructura secundaria en moléculas proteicas grandes.
[0034] Preferiblemente, el enlace es una secuencia polipeptídica de aminoácidos que comprende una cantidad mayor que o aproximadamente de un 50 % de glicina y/o alanina y/o serina en p75NTR(NBP), más preferiblemente mayor que o aproximadamente de un 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 100 % de glicina y/o alanina y/o serina en p75NTR(NBP). Preferiblemente, la región de enlace comprende o 55 consiste en una secuencia polipeptídica de aminoácidos que comprende tanto glicina como serina, preferiblemente con una proporción mayor de glicina que de serina; preferiblemente, la región de enlace comprende o consiste en enlaces flexibles, SEQ ID NO. 17 (GGGGS)n (n = 1 a 4), o enlaces helicoidales, SEQ ID NO. 18 (EAAAK)n (n = 2 a 5) o enlaces polipeptídicos que incluyen principalmente residuos de aminoácidos
seleccionados entre glicina, serina, alanina y treonina que oscilan entre 1 y 10 repeticiones de cada aminoácido y cualquier combinación de los mismos.
[0035] Preferiblemente, el enlace solventa o evita el impedimento estérico de la molécula auxiliar, que podría interferir con la capacidad de unión a neurotrofina mencionada anteriormente o la actividad biológica de la
5 p75NTR(NBP) en comparación con la p75NTR(NBP) que no está enlazada a una molécula auxiliar. Por lo tanto, la región de enlace preferiblemente permite la flexibilidad entre la p75NTR(NBP) y la molécula auxiliar y permite la retención de la actividad biológica mencionada anteriormente de p75NTR(NBP) o su mejora en comparación con p75NTR(NBP) libre o nativa no enlazada de tal manera, como se determina mediante la unión a neurotrofinas mediante la utilización de ensayos de unión tales como los descritos en el presente documento.
10 [0036] Más preferiblemente, el enlace es inmunológicamente inerte, de manera que no provoca lisis mediada por complemento, no estimula la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (CCDA), no activa las células microglia o T. Preferiblemente, la región de enlace se reduce en una o más de estas actividades.
[0037] Más preferiblemente, el enlace comprende o consiste en un polipéptido conocido o predicho a partir de análisis estructural o predicción estructural para ser un polipéptido flexible o dinámico o no estructurado o para
15 carecer de una estructura secundaria estable.
[0038] Más preferiblemente, el enlace comprende o consiste en un polipéptido de secuencia de SEQ ID NO. 19 (GGGGS).
[0039] La p75NTR(NBP) de la invención también puede comprender un sitio de escisión proteolítica, opcionalmente interpuesto entre la p75NTR(NBP) y la molécula auxiliar. El sitio de escisión proteolítica puede
20 situarse en el enlace o en el cruce del enlace con la p75NTR(NBP) o/y la molécula auxiliar. La p75NTR(NBP) puede opcionalmente escindirse de la molécula auxiliar antes de la formulación y/o administración con fines terapéuticos.
[0040] Preferiblemente, el enlace y/o la una o más moléculas auxiliares no perjudican o perjudican considerablemente los siguientes aspectos de la p75NTR(NBP):
25 (a) su efecto en la actividad funcional de las neurotrofinas (definido como modulación o disminución o aumento de la actividad funcional de las neurotrofinas) NGF, BDNF, NT3 o NT4/5.
(b) su afinidad de unión para cualquiera entre NGF, BDNF, NT3 o NT4/5 con una afinidad de unión de entre aproximadamente 0,1 nM y aproximadamente 50 nM
(c) su capacidad para unirse a cada una de las neurotrofinas NGF, NT3, BDNF y NT4/5, preferiblemente 30 NGF, NT3, BDNF y NT4/5 humanas.
[0041] Según un modo de realización preferido de los aspectos uno y dos de la presente invención, se da a conocer una p75NTR(NBP) de la presente invención se da a conocer una p75NTR(NBP) para su utilización en el tratamiento del dolor donde la p75NTR(NBP) consiste en: (A) una p75NTR(NBP) de secuencia SEQ ID NO. 3, y opcionalmente (B) una inmunoglobulina Fc, y también opcionalmente consiste en la secuencia SEQ ID NO. 11 y
35 opcionalmente (C) un enlace, que consiste opcionalmente en la SEQ ID NO. 19.
 Según un tercer aspecto de la exposición, se da a conocer una molécula de ácido nucleico que codifica la p75NTR(NBP) o p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares según el primer o segundo aspecto. Preferiblemente, la molécula de ácido nucleico se utiliza en el tratamiento del dolor.
[0042] Según un modo de realización preferido de la presente exposición, la molécula de ácido nucleico también
40 puede comprender una región que codifica una secuencia señal, preferiblemente una secuencia señal de p75NTR, por ejemplo, una secuencia de ADN o ARN.
 Según un cuarto aspecto de la exposición, se da a conocer un vector de expresión replicable para la transfección de una célula, comprendiendo el vector la molécula de ácido nucleico del tercer aspecto; preferiblemente, el vector es un vector viral. Preferiblemente, el vector se utiliza en el tratamiento del dolor.
45  Todavía según el tercer o el cuarto aspecto de la invención, se da a conocer un método de expresión de la molécula de ácido nucleico o el vector de la invención para producir o secretar la p75NTR(NBP) o p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares. Preferiblemente, el método comprende la introducción de la molécula de ácido nucleico o vector en una célula y la expresión del ácido nucleico que se encuentra allí para producir o secretar la p75NTR(NBP) o p75NTR(NBP) conectada a una o más
50 moléculas auxiliares. Preferiblemente, la molécula de ácido nucleico o vector se introduce en la célula in vitro, de forma alternativa, in vivo. Preferiblemente, la p75NTR(NBP) o p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares expresada se expresa in vitro, opcionalmente también se aísla y se purifica, de forma alternativa, preferiblemente la p75NTR(NBP) o p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares expresada se expresa in vivo, preferiblemente la expresión in vivo constituye terapia génica.
Preferiblemente, el vector es un vector de expresión replicable, opcionalmente para la transfección de una célula de mamífero, preferiblemente el vector es un vector viral.
 Según un quinto aspecto de la exposición, se da a conocer una célula huésped que alberga la molécula de ácido nucleico o vector del tercer o el cuarto aspecto; preferiblemente la célula es una célula de mamífero.
5  Según un sexto aspecto de la exposición, se da a conocer la p75NTR(NBP) para su utilización según el primer o segundo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma, o el ácido nucleico o vector para su utilización según el tercer y el cuarto aspecto donde el dolor o síntoma de dolor se selecciona entre:
(a)
dolor agudo y/o dolor espontáneo,
(b)
dolor crónico y/o dolor continuo,
10 (c) dolor inflamatorio que incluye cualquiera entre el dolor de la artritis, el dolor provocado por la osteoartritis o la artritis reumatoide, provocada por enfermedades inflamatorias intestinales, psoriasis y eccema
(d) dolor nociceptivo,
(e) dolor neuropático, que incluye la neuropatía diabética dolorosa o el dolor asociado a la neuralgia 15 postherpética,
(f)
hiperalgesia,
(g)
alodinia,
(h)
dolor central, dolor central tras un ictus, dolor provocado por esclerosis múltiple, dolor provocado por
lesión de la médula espinal o dolor provocado por la enfermedad de Parkinson o epilepsia, 20 (i) dolor provocado por el cáncer,
(j)
dolor posoperatorio,
(k)
dolor visceral, incluido el dolor visceral digestivo y el dolor visceral no digestivo, dolor causado por trastornos gastrointestinales (GI), dolor provocado por trastornos intestinales funcionales (FBD, por sus siglas en inglés), dolor provocado por enfermedades intestinales inflamatorias (IBD, por sus siglas en
25 inglés), dolor provocado por dismenorrea, dolor pélvico, cistitis, cistitis intersticial o pancreatitis,
(l)
dolor musculoesquelético, mialgia, fibromialgia, espondilitis, artropatías seronegativas (no reumatoides), reumatismo no articular, distrofinopatía, glicogenólisis, polimiositis, piomiositis.
(m)
dolor cardíaco o vascular, dolor provocado por angina, infarto de miocardio, estenosis mitral, pericarditis, fenómeno de Raynaud, escleredoma, escleredoma o isquemia del músculo esquelético,
30 (n) dolor de cabeza incluida la migraña, migraña con aura, migraña sin aura, cefalalgia histamínica, cefalea tensional.
(o)
dolor orofacial, incluido el dolor dental, dolor miofascial temporomandibular o tinnitus, o
(p)
dolor de espalda, bursitis, dolor menstrual, migraña, dolor referido, neuralgia del trigémino, hipersensibilización, dolor provocado por trauma espinal y/o degeneración o apoplejía.
35  Según un séptimo aspecto de la exposición, se da a conocer la p75NTR(NBP) para su utilización según el primer o segundo aspecto o modos de realización preferidos de la misma, o la molécula de ácido nucleico o vector para su utilización según el tercer y el cuarto aspecto donde la p75NTR(NBP) o la molécula de ácido nucleico o vector se utilizan de forma separada, secuencial o simultánea en una combinación combinada con un segundo compuesto farmacológicamente activo. Preferiblemente, el segundo compuesto
40 farmacológicamente activo de la combinación se selecciona entre:
 un analgésico opioide, por ejemplo, morfina, heroína, hidromorfona, oximorfona, levorfanol, levalorfano, metadona, meperidina, fentanilo, cocaína, codeína, dihidrocodeína, oxicodona, hidrocodona, propoxifeno, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, buprenorfina, butorfanol, nalbufina o pentazocina;
45  un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAID, por sus siglas en inglés), por ejemplo, aspirina, diclofenaco, diflusinal, etolodaco, fenfubén, fenoprofeno, flufenisal, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, ketoprofeno, ketorolaco, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, nabumetona, naproxeno, nimesulida, nitroflurbiprofeno, olsalazina, oxaprozina, fenilbutazona, piroxicam, sulfasalazina, sulindaco, tolmetina o zomepiraco;
50  un sedante barbitúrico, por ejemplo, amobarbital, aprobarbital, butabarbital, butabital, mefobarbital, metarbital, metohexital, pentobarbital, fenobarbital, secobarbital, talbutal, teamilal o triopental;  una benzodiazepina que tenga una acción sedante, por ejemplo, clordiazepóxido, clorazepato, diazepam, flurazepam, lorazepam, oxazepam, temazepam o triazolam;  un antagonista H1 que tenga una acción sedante, por ejemplo, difenhidramina, pirilamina, prometazina,
55 clorfeniramina o clorciclizina;  un sedante tal como glutetimida, meprobamato, metacualona o dicloralfenazona;  un relajante del músculo esquelético, por ejemplo, baclofeno, carisoprodol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, metocarbamol u orfrenadina;
 un antagonista de los receptores NMDA, por ejemplo, dextrometorfano ((+)-3-hidroxi-N-metilmorfinano) 60 o su metabolito dextrorfano ((+)-3-hidroxi-N-metilmorfinano), ketamina, memantina, pirroloquinolina quinona, ácido cis-4-(fosfonometil)-2-piperidinecarboxílico, bupidino, EN-3231 (MorphiDex®, una
formulación de combinación de morfina y dextrometorfano), topiramato, neramexano o perzinfotel incluido un antagonista NR2B, por ejemplo, ifenprodil, traxoprodil o (-)-(R)-6-{2-[4-(3-fluorofenil)-4hidroxi-1-piperindinil]-1-hidroxietil-3,4-dihidro-2(1H)-quinolinona;
 un alfa adrenérgico, por ejemplo, doxazosina, tamsulosina, clonidina, guanfacina, dexmetatomidina, 5 modafinilo o 4-amino-6,7-dimetoxi-2-(5-metano-sulfonamido-1,2,3,4-tetrahidroisoquinol-2-il)-5-(2-piridil)
quinazolina;  un antidepresivo tricíclico, por ejemplo, desipramina, imipramina, amitriptilina o nortriptilina;  un anticonvulsivo, por ejemplo, carbamazepina, lamotrigina, topiramato o valproato;  un antagonista de taquicinina (NK), en particular, un antagonista NK-3, NK-2 o NK-1, por ejemplo,
10 (αR,9R)-7-[3,5-bis(trifluorometil)bencil]-8,9,10,1-tetrahidro-9-metil-5-(4-metilfenil)-7H-[1,4]diazocino[2,1g][1,7]-naftiridina-6-13-diona (TAK-637), 5-[[(2R,3S)-2-[(1R)-1-[3,5-bis(trifluorometil)fenil]etoxi-3-(4fluorofenil)-4-morfolinil]-metil]-1,2-dihidro-3H-1,2,4-triazol-3-ona (MK-869), aprepitant, lanepitant, dapitant o 3-[[2-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-metiolamino]-2-fenilpiperidina (2S,3S);
 un antagonista muscarínico, por ejemplo, oxibutinina, tolterodina, propiverina, cloruro de trospio, 15 darifenacina, solifenacina, temiverina e ipratropio;  un inhibidor selectivo de la COX-2, por ejemplo, celecoxib, rofecoxib, parecoxib, valdecoxib, deracoxib,
etoricoxib o lumiracoxib;  un analgésico de alquitrán de hulla, en particular paracetamol;  un neuroléptico tal como droperidol, clorpromazina, haloperidol, perfenazina, tioridazina, mesoridazina,
20 trifluoperazina, flufenazina, clozapina, olanzapina, risperidona, ziprasidona, quetiapina, sertindol, aripiprazol, sonepiprazol, blonanserina, iloperidona, perospirona, racloprida, zotepina, bifeprunox, asenapina, lurasidona, amisulprida, balaperidona, palindore, eplivanserina, osanetant, rimonabant, meclinertant, Miraxion® o sarizotan;
 un agonista de los receptores vaniloides (p. ej., resiniferatoxina) o un antagonista de los receptores
25 vaniloides (p. ej., capsazepina);  un beta adrenérgico tal como propranolol;  un anestésico local tal como mexiletina;  un corticoesteroide tal como dexametasona;  un agonista o antagonista del receptor 5-HT, en particular un agonista 5-HT1B/1D tal como eletriptán,
30 sumatriptán, zolmitriptán o rizatriptán;  un antagonista del receptor 5-HT2A tal como R(+)-alfa-(2,3-dimetoxi-fenil)-1-[2-(4-fluorofeniletil)]-4piperidinemetanol (MDL-100907);  un analgésico colinérgico (nicotínico), tal como isproniclina (TC-1734), (E)-N-metil-4-(3-piridinil)-3-buten1-amina (RJR-2403), (R)-5-(2-azetidinilmetoxi)-2-cloropiridina (ABT-594) o nicotina; 35  Tramadol®;
 un inhibidor de la PDEV, tal como 5-[2-etoxi-5-(4-metil-1-piperazinil-sulfonil)fenil]-1-metil-3-n-propil-1,6dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (sildenafilo), (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahidro-2-metil-6(3,4-metilenedioxifenil)-pirazino[2',1':6,1]-pirido[3,4-b]indol-1,4-diona(IC-351 o tadalafilo),2-[2-etoxi-5-(4etil-piperazina-1-il-1-sulfonil)-fenil]-5-metil-7-propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-ona (vardenafilo), 5
40 (5-acetil-2-butoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-etil-3-azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona, 5-(5acetil-2-propoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-isopropil-3-azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona, 5-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazina-1-ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-[2-metoxietil]-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3d]pirimidin-7-ona, 4-[(3-cloro-4-metoxibenzil)amino]-2-[(2S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]-N-(pirimidin-2ilmetil)pirimidina-5-carboxamida, 3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6,7-dihidro-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-5-il)-N
45 [2-(1-metilpirrolidin-2-il)etil]-4-propoxibenzenesulfonamida;  un cannabinoide;  antagonista del receptor metabotrópico de glutamato (mGluR1) subtipo 1;  un inhibidor de la recaptación de serotonina tal como sertralina, metabolito de la sertralina
desmetilsertralina, fluoxetina, norfluoxetina (metabolito de desmetil fluoxetina), fluvoxamina, paroxetina, 50 citalopram, metabolito del citalopram desmetilcitalopram, escitalopram, d,l-fenfluramina, femoxetina, ifoxetina, cianodotiepina, litoxetina, dapoxetina, nefazodona, cericlamina y trazodona;
 inhibidor de la recaptación de noradrenalina (norepinefrina), tal como maprotilina, lofepramina, mirtazepina, oxaprotilina, fezolamina, tomoxetina, mianserina, buproprión, metabolito de bupropión hidroxibupropión, nomifensina y viloxazina (Vivalan®), especialmente un inhibidor de la recaptación de
55 noradrenalina selectivo tal como reboxetina, en particular (S,S)-reboxetina;
 un inhibidor dual de la recaptación de serotonina y noradrenalina, tal como venlafaxina, metabolito de la venlafaxina O-desmetilvenlafaxina, clomipramina, metabolito de la clomipramina desmetilclomipramina, duloxetina, milnaciprán e imipramina;
 un inhibidor de la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS, por sus siglas en inglés) tal como ácido S-[2-[(1
60 iminoetil)amino]etil]-L-homocisteína, S-[2-[(1-iminoetil)-amino]etil]-4,4-dioxo-L-cisteína, S-[2-[(1iminoetil)amino]etil]-2-metil-L-cisteína, (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-5-heptenoico, 2[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)-butil]tio]-5-cloro-3-piridinecarbonitrilo; 2-[[(1R,3S)-3-amino-4hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-4-clorobenzonitrilo, (2S,4R)-2-amino-4-[[2-cloro-5-(trifluorometil)fenil]tio]-5
tiazolebutanol, 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil) butil]tio]-6-(trifluorometil)-3 piridinecarbonitrilo, 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1 -(5-tiazolil)butil]tio]-5-clorobenzonitrilo, N-[4-[2-(3clorobenzilamino)etil]fenil]tiofeno-2-carboxamidina, o guanidinoetildisulfuro;
 un inhibidor de la acetilcolinesterasa tal como donepezilo;
5  un antagonista de prostaglandina E2 subtipo 4 (EP4, por sus siglas en inglés) tal como ácido N-[({2-[4(2-etil-4,6-dimetil-1H-imidazo[4,5-c]piridin-1-il)fenil]etil}amino)-carbonil]-4-metilbenzenesulfonamida o ácido 4-[(1S)-1-({[5-cloro-2-(3-fluorofenoxi)piridin-3-il]carbonil}amino)etil]benzoico;
 un antagonista de leucotrieno B4; tal como ácido 1-(3-bifenil-4-ilmetil-4-hidroxi-croman-7-il)ciclopentanecarboxílico (CP-105696), ácido 5-[2-(2-Carboxietil)-3-[6-(4-metoxifenil)-5E10 hexenil]oxifenoxi]-valérico (ONO-4057) o DPC-11870,
 un inhibidor de la 5-lipoxigenasa, tal como zileutón, 6-[(3-fluoro-5-[4-metoxi-3,4,5,6-tetrahidro-2H-piran4-il])fenoxi-metil]-1-metil-2-quinolona (ZD-2138), o 2,3,5-trimetil-6-(3-piridilmetil),1,4-benzoquinona (CV6504);  un bloqueador de los canales de sodio, tal como lidocaína; o
15  un antagonista 5-HT3, tal como ondansetrón;
y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables correspondientes.
 Según un octavo aspecto de la presente exposición, se da a conocer un método de tratamiento, prevención, mejora, control y reducción de la incidencia del dolor o de cualquiera de los dolores anteriores y/o síntomas de dolor o de retraso del desarrollo o evolución de los mismos en un individuo, que comprende la
20 administración al individuo de una cantidad eficaz de la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y el cuarto aspecto. Preferiblemente, el individuo es un mamífero, por ejemplo un animal de compañía tal como un caballo, gato o perro o un animal de granja tal como una oveja, vaca o cerdo. Más preferiblemente el mamífero es un humano.
25  Según un noveno aspecto de la presente exposición, se da a conocer una composición farmacéutica para uno o más de entre el tratamiento, prevención, mejora, control y reducción de la incidencia del dolor o de cualquiera de los dolores anteriores /o síntomas, o retraso del desarrollo o evolución de los mismos, que comprende la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y el cuarto aspecto y un
30 portador farmacéuticamente aceptable y/o un excipiente. Preferiblemente, la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y cuarto aspecto o la composición farmacéutica del noveno aspecto está preparada o es adecuada para la administración por vía oral, sublingual, bucal, tópica, rectal, inhalatoria, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intracardíaca, intraósea, intradérmica,
35 intraperitoneal, transmucosa, vaginal, intravítrea, intraarticular, periarticular, local o epicutánea.
[0043] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y cuarto aspecto o la composición farmacéutica del noveno aspecto está preparada o es adecuada para la administración antes, y/o durante y/o después del comienzo del dolor o para dicha utilización.
40 [0044] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y el cuarto aspecto o la composición farmacéutica del noveno aspecto está prevista o preparada para su administración entre una y 7 veces por semana, más preferiblemente entre una y cuatro veces al mes, más preferiblemente entre una y seis veces por cada periodo de 6 meses, más preferiblemente de una a doce veces al año. Preferiblemente, el
45 medicamento está pensado o está preparado para administrarse de forma secundaria en un periodo seleccionado entre: una vez al día, una vez cada dos, tres, cuatro, cinco o seis días, semanalmente, una vez cada dos semanas, una vez cada tres semanas, mensualmente, una vez cada dos meses, una vez cada tres meses, una vez cada cuatro meses, una vez cada cinco meses, una vez cada seis meses, una vez cada siete meses, una vez cada ocho meses, una vez cada nueves meses, una vez cada diez meses, una vez cada once
50 meses o anualmente.
[0045] Más preferiblemente, la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y cuarto aspecto o la composición farmacéutica del noveno aspecto está pensada o está preparada para administrarse de forma secundaria por medio de una vía seleccionada entre una o más de una de las siguientes: oral, sublingual, bucal,
55 tópica, rectal, inhalatoria, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intraarterial o intramuscular, intracardíaca, intraósea, intradérmica, intraperitoneal, transmucosa, vaginal, intravítrea, epicutánea, intraarticular, periarticular o local.
[0046] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y cuarto aspecto o la
composición farmacéutica del noveno aspecto está prevista para o preparada para su administración a una concentración de entre aproximadamente 0,1 a aproximadamente 200 mg/ml; preferiblemente a cualquiera de aproximadamente 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 o 200 mg/ml +/-aproximadamente 10 % de error, más preferiblemente a
5 aproximadamente 50 mg/ml.
[0047] Preferiblemente, la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y cuarto aspecto o la composición farmacéutica del noveno aspecto está prevista para o preparada para su administración a una concentración de entre aproximadamente 0,1 a aproximadamente 200 mg/kg de peso corporal; preferiblemente a
10 cualquiera de aproximadamente 0,5, 1, 5, 10, 10,15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 o aproximadamente 200 mg/kg de peso corporal +/aproximadamente 10 % de error, más preferiblemente a aproximadamente 10 mg/kg.
 Según un décimo aspecto de la presente exposición, se da a conocer un conjunto que comprende:
(a) la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización
15 preferidos de la misma o la molécula de ácido nucleico o vector según el tercer y cuarto aspecto o la composición farmacéutica del noveno aspecto; e
(b) instrucciones para la administración de una cantidad eficaz de dicha p75NTR(NBP), molécula de ácido nucleico, vector o composición farmacéutica a un individuo para una o más de entre la prevención
o el tratamiento del dolor y/o los síntomas de dolor o para la mejora, el control, la reducción de la 20 incidencia del dolor y/o los síntomas de dolor, o el retraso del desarrollo o evolución de los mismos.
[0048] El conjunto puede incluir uno o más recipientes que contengan la p75NTR(NBP), el ácido nucleico, el vector o la composición farmacéutica descritos en el presente documento e instrucciones para su utilización según cualquiera de los métodos y utilizaciones de la invención. El conjunto también puede comprender una descripción de seleccionar un individuo adecuado para el tratamiento a partir de la identificación de si dicho
25 individuo tiene un dolor o un síntoma de dolor o presenta riesgo de tenerlo. Las instrucciones para la administración de la composición farmacéutica pueden incluir información en cuanto a la dosis, la pauta posológica y las vías de administración para el tratamiento previsto.
[0049] Según un undécimo aspecto de la presente exposición, se da a conocer la p75NTR(NBP) según el primer, el segundo o el séptimo aspecto o los modos de realización preferidos de la misma o la molécula de ácido 30 nucleico o vector según el tercer y cuarto aspecto o la composición farmacéutica del noveno aspecto para su utilización en una o más de entre la prevención o el tratamiento o para la mejora, control, reducción de la incidencia de una enfermedad o los síntomas de una enfermedad asociada a cualquiera una o más de las neurotrofinas NGF, BDNF, NT-3, NT-4/5 o el retraso del desarrollo o evolución de las mismas. -NGF (factor de crecimiento neurotrófico) se une a al menos dos clases de receptores: el p75NTR y el TrkA, una tirosina quinasa 35 transmembrana, está relacionado con el crecimiento axonal, la ramificación y la elongación. Se conocen las condiciones y los síntomas asociados al NGF. NGF se expresa en condiciones inflamatorias y en el dolor y se asocia a los mismos [Secuencia de proteínas NP_002497.2, NP_038637]. Además, se ha demostrado que NGF desempeña una función en un número de enfermedades cardiovasculares, tales como aterosclerosis coronaria, obesidad, diabetes tipo 2 y síndrome metabólico, así como en la esclerosis múltiple. Los niveles plasmáticos 40 reducidos de NGF (y también de BDNF) se han asociado a los síndromes coronarios agudos y los síndromes metabólicos. El NGF también está relacionado con diversos trastornos psiquiátricos, tales como la demencia, la depresión, la esquizofrenia, el autismo, el síndrome de Rett, la anorexia nerviosa y la bulimia nerviosa, y se ha relacionado también con el desarrollo de la enfermedad de Alzheimer y de trastornos neurodegenerativos. También se ha demostrado que el NGF acelera la cicatrización de heridas y hay pruebas de que podría ser útil
45 en el tratamiento de úlceras cutáneas y úlceras corneales; se ha demostrado que reduce la degeneración neural y estimula la regeneración nerviosa periférica en las ratas.
 BDNF (factor neurotrófico derivado del cerebro) es una neurotrofina que ayuda a la supervivencia neuronal y al crecimiento durante el desarrollo del sistema nervioso [Secuencia de proteínas NP 001137277.1, NP 001041604]. BDNF une los receptores de la superficie de la célula TrkB y p75NTR y también modula la
50 actividad del receptor nicotínico alfa 7. Se conocen las condiciones y los síntomas asociados a BDNF. Se ha demostrado que BDNF desempeña una función fundamental en la transmisión de dolor fisiológico y patológico, en particular en modelos de dolor agudo, dolor inflamatorio y dolor neuropático, donde se ha demostrado que la síntesis de BDNF aumenta de forma considerable; también se ha demostrado que BDNF aumenta en condiciones de dolor crónico, así como en condiciones adicionales, tales como eccema y
55 psoriasis. La disminución de BDNF se observa en la depresión, la esquizofrenia, el trastorno obsesivocompulsivo, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington, el síndrome de Rett y la demencia, así como en la anorexia nerviosa y la bulimia nerviosa.
 La neurotrofina-4 (NT-4), también conocida como neurotrofinas-5 (not-5), es un factor neurotrófico que señala principalmente a través de los receptores p75NTR y TrkB y estimula la supervivencia de las
neuronas simpáticas sensoriales periféricas. El péptido maduro de esta proteína es idéntico en todos los mamíferos examinados, incluidos los humanos, cerdos, ratas y ratones. [Secuencia de proteínas NP_006170, NP_937833]. La NT-4 se sintetiza mediante la mayoría de neuronas del ganglio de la raíz dorsal (DRG, por sus siglas en inglés) y de los ganglios simpáticos paravertebrales y prevertebrales, el asta
5 dorsal y ventral espinales, y se encuentra expresada en muchos tejidos incluidos la próstata, el timo, la placenta y el músculo esquelético. Se conocen las condiciones y los síntomas asociados a la NT-4/5. Los defectos en la NT4/5 se asocian a la susceptibilidad al glaucoma primario de ángulo abierto. También se ha demostrado que la neurotrofina 4 contribuye a la supervivencia celular del cáncer de mama y es una diana para inhibir el crecimiento tumoral. Se sabe que la NT-4/5 está relacionada con sistemas de señalización del dolor tales como el dolor nociceptivo; el aumento de NT-4/5 también se observa en condiciones inflamatorias crónicas de la piel, tales como dermatitis, eccema, lesiones de prurigo de dermatitis atópica. La disminución de NT-4/5 se observa en la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington.
 La neurotrofina-3 (NT-3) es una neurotrofina que está relacionada estructuralmente con beta-NGF, BDNF y NT-4, y que controla la supervivencia y la diferenciación de las neuronas de mamíferos y el mantenimiento 15 del sistema nervioso adulto, y puede afectar al desarrollo de las neuronas en el embrión cuando se expresa en la placenta humana. Se conocen las condiciones y los síntomas asociados a la NT3. Los ratones con deficiencia en NTF3 generados mediante reconocimiento genético muestran defectos de movimiento graves de las extremidades. La NT-3 señala a través de los receptores Trk y estimula el crecimiento y la supervivencia de las células nerviosas y gliales [Secuencia de proteínas NP_001096124.1 y NP_032768]. Las secuencias de aminoácidos de humano, ratón y rata NT-3 son idénticas. Se sabe que la NT3 y su receptor análogo, la tirosina quinasa C (TrkC), modulan el dolor neuropático y el dolor nociceptivo, y el mecanismo de nocicepción y propiocepción, por ejemplo la expresión de NT3 aumenta en las células del DRG pequeñas de animales neuropáticos. La expresión de NT3 también se asocia a neuropatías tales como la polineuropatía diabética y la neuropatía relacionada con el VIH, neuropatía de fibra grande incluida
25 la atrofia. También está relacionada con el desarrollo de la hiperalgesia (una disminución en el umbral de un estímulo nocivo normal), la alodinia (un estímulo no nocivo se convierte en nocivo), y el dolor espontáneo (dolor en ausencia aparente de estímulos) y es un modulador conocido del dolor muscular.
[0050] A continuación, se describirá la invención con referencia a los siguientes ejemplos, que se proporcionan con fines ilustrativos, no limitativos, de la invención.
[0051] Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar la invención, no para limitarla.
Ejemplos
Ejemplo 1. Detección del complejo neurotrófico-p75NTR(NBP) endógeno en el plasma humano
[0052] Se empleó un ensayo con la utilización de NGF basado en perlas magnéticas (Millipore Corp; MA) e inmunoprecipitación mediante la utilización de anticuerpo NGF antihumano biotinilado policlonal de oveja (Novus
35 Biologicals; CO) seguido de SISCAPA (Siscapa http://siscapa.com/home.html), determinados posteriormente mediante cromatografía de líquidos-espectrometría de masas/espectrometría de masas (LC-MS/MS, por sus siglas en inglés) (LLOQ 7 pg/ml), con el fin de proporcionar pruebas directas de la existencia de un complejo p75NTR/NGF en el plasma humano. El anticuerpo antiNGF policlonal se utilizó para cuantificar el NGF libre en el suero/plasma humano.
[0053] Las secuencias peptídicas (CAYGYYQDETTGR (SEQ ID NO. 4) VCEAGSGLVFSCQDK (SEQ ID NO. 6) WADAECEEIPGR (SEQ ID NO. 7)) del dominio extracelular de p75NTR (como se muestra en la fig. 2) se seleccionaron como patrones de p75NTR mediante LC-MS/MS tras la digestión de la quimera de p75NTR. La coinmunoprecipitación de p75NTR detectada en el ensayo de NGF total (como se describe anteriormente) fue capaz de demostrar la presencia de los péptidos de control de p75NTR, lo que proporcionó pruebas de un
45 complejo p75-NGF soluble en el suero humano. También se determinaron interacciones similares de p75NTR(NBP) y BDNF, NT-3 y NT4/5 mediante la utilización de coninmunoprecipitación con anticuerpos BDNF, NT-3 y NT4/5 respectivos. Estos ensayos demuestran la presencia de una proteína de unión a p75 neurotrófico soluble en el plasma de humanos unida a NGF, BDNF, NT-3 y NT4/5.
[0054] Los datos presentados en la figura 2 muestran fragmentos peptídicos estándar de p75NTR(NBP) solubles y la coinmunoprecipitación de p75NTR(NBP) y NGF que demuestran el complejo p75NTR(NBP) -NGF en el plasma humano. A partir de los resultados de los ensayos de coninmunoprecipitación de p75NTR(NBP) -NGF en plasma humano, resulta evidente que los péptidos clave que participan en la unión en el complejo neurotrofina-p75NTR(NBP) son: WADAECEEIPGR (SEQ ID NO. 7), CAYGYYQDETTGR (SEQ ID NO. 4), VCEAGSGLVFSCQDK (SEQ ID NO. 6), adicionalmente, se ha determinado que la secuencia
55 LDSVTSDVVSATEPCKP (SEQ ID NO. 8) también es importante en la unión.
[0055] Los experimentos se repitieron con BDNF y NT-3, y muestran la importancia de las mismas regiones de unión clave de p75NTR(NBP) y demuestran la coninmunoprecipitación de p75NTR(NBP) con BDNF y NT-3, lo que demuestra complejos p75NTR(NBP) -BDNF y p75NTR(NBP) -NT-3 en el plasma humano.
Ejemplo 2. p75NTR(NBP) soluble inhibe la función NGF en la línea celular U20S que expresa TrkA y en la línea celular U20S que coexpresa TrkA y p75NTR.
[0056] Se exploraron los efectos de p75NTR(NBP) en la función NGF en células U20S que expresan TrkA y células U20S que coexpresan TrkA y p75NTR (Discoverx Corp CA). El ensayo se llevó a cabo según la 5 metodología PathHunter (Discoverx Corp CA). En resumen, se compraron las células U20S que expresan TrkA y TrkA+p75NTR de DiscoveRx Corporation. Las células U20S que expresan TrkA y las células que coexpresan TrkA+p75NTR se colocaron en placas en medio esencial mínimo (MEM; Sigma Aldrich) + 0,5 % suero equino (Sigma Aldrich) a una densidad de 40.000 células/pocillo y se incubaron a 37 ºC durante una noche. Se extrajeron las placas de la incubadora 30 minutos antes de su utilización y se almacenaron a temperatura
10 ambiente.
[0057] NGFα (Sigma Aldrich) y p75NTR(NBP) -Fc (p75NTR(NBP) SEQ ID NO. 2 se unen a IgG-Fc SEQ ID NO. 12 mediante el enlace SEQ ID NO 17) o p75NTR(NBP) p75NTR(NBP) SEQ ID NO.2) o p75NTR(NBP) unido a albúmina, SEQ ID NO. 10, o p75NTR(NBP) p75NTR(NBP) SEQ ID NO. 2) unido a transferrina, SEQ ID NO. 9, se diluyeron en tampón de solución de sal equilibrada de Hanks (HBSS Sigma Aldrich) más un 0,25 % de albúmina
15 de suero bovino (ASB). El NGF se diluyó en serie para obtener concentraciones comprendidas entre 0 nM y 200 nM. La p75NTR(NBP) unida a Fc IgG, albúmina o transferrina se diluyó en HBSS para obtener una concentración de p75NTR de 100 ng/ml.
[0058] Se añadieron 5 µl de cada una de las concentraciones de NGF (0-200 nM) y 5 µl de p75NTR(NBP) +/portador a cada pocillo. Con la intención de entender el impacto sobre la preincubación, se incubó p75NTR(NBP) 20 +/-portador y NGF a temperatura ambiente durante 20 minutos antes de añadir 10 µl de esta mezcla a cada pocillo. Inmediatamente después de la adición de NGF y p75NTR(NBP) +/-portador, se añadieron 12 µl de solución de detección (Discoverx Corp CA) a cada pocillo y se incubó la placa a temperatura ambiente durante 60 minutos antes de su lectura en un lector de placas Parkard Victor 2. Se observaron curvas de dosis-respuesta y cambios en las curvas en respuesta a la adición de p75NTR(NBP). Independientemente del portador utilizado,
25 p75NTR(NBP) sin un portador, p75NTR(NBP)-Fc, p75NTR(NBP)-albúmina o p75NTR(NBP)-transferrina, se observaron supresiones y cambios en las curvas de respuesta a la dosis de NGF (véase la figura 4).
Ejemplo 3. p75NTR(NBP) inhibe la función BDNF en la línea celular U20S que expresa TrkB y en la línea celular U20S que coexpresa TrkB y p75NTR.
[0059] Se exploraron los efectos de p75NTR(NBP) en la función BDNF en células U20S que expresan TrkB y
30 células U20S que coexpresan TrkB y p75NTR (Discoverx Corp CA). El ensayo se llevó a cabo según la metodología PathHunter (Discoverx Corp CA). En resumen, se compraron las células U20S que expresan TrkB y TrkB+p75NTR de DiscoveRx Corporation. Las células U20S que expresan TrkB y las células que coexpresan TrkB+p75NTR se colocaron en placas en medio esencial mínimo (MEM; Sigma Aldrich) + 0,5 % suero equino (Sigma Aldrich) a una densidad de 40.000 células/pocillo y se incubaron a 37 ºC durante una noche. Se
35 extrajeron las placas de la incubadora 30 minutos antes de su utilización y se almacenaron a temperatura ambiente.
[0060] BDNFα (Sigma Aldrich) y p75NTR(NBP) -Fc (p75NTR(NBP) SEQ ID NO. 2 se unen a IgG-Fc SEQ ID NO. 12 mediante el enlace SEQ ID NO 17) o p75NTR(NBP) p75NTR(NBP) SEQ ID NO. 2), o p75NTR(NBP) unido a albúmina, SEQ ID NO. 10, o p75NTR(NBP) p75NTR(NBP) SEQ ID NO. 2) unido a transferrina, SEQ ID NO. 9, se
40 diluyeron en tampón de solución de sal equilibrada de Hanks (HBSS Sigma Aldrich) más un 0,25 % de albúmina de suero bovino (ASB). El BDNF se diluyó en serie para obtener concentraciones comprendidas entre 0 nM y 200 nM. La p75NTR(NBP) unida a Fc-IgG, albúmina o transferrina se diluyó en HBSS para obtener una concentración de p75NTR(NBP) de 100 ng/ml.
[0061] Se añadieron 5 µl de cada una de las concentraciones de BDNF (0-200 nM) y 5 µl de p75NTR(NBP) +/
45 portador a cada pocillo. Con la intención de entender el impacto sobre la preincubación, se incubó p75NTR(NBP) +/-portador y BDNF a temperatura ambiente durante 20 minutos antes de añadir 10 µl de esta mezcla a cada pocillo. Inmediatamente después de la adición de BDNF y p75NTR(NBP) +/-portador, se añadieron 12 µl de solución de detección (Discoverx Corp CA) a cada pocillo y se incubó la placa a temperatura ambiente durante 60 minutos antes de su lectura en un lector de placas Parkard Victor 2. Se observaron curvas de dosis-respuesta
50 y cambios en las curvas en respuesta a la adición de p75NTR(NBP). Independientemente del portador utilizado, p75NTR(NBP) sin un portador, p75NTR(NBP)-Fc, p75NTR(NBP)-albúmina o p75NTR(NBP)-transferrina, se observaron supresiones y cambios en las curvas de respuesta a la dosis de BDNF (véase la figura 5).
[0062] Ejemplo 4. Datos de Biocore que demuestran la unión de p75NTR(NBP) a BDNF y la competencia entre antiBDNF y p75NTR(NBP). Se diluyó P75-Fc (p75NTR(NBP)-Fc), (500 µg/ml) a una concentración de 25 µg/ml 55 en 10 mM de acetato pH 5,0 y se inmovilizó en el chip de Biocore mediante la utilización del tampón del análisis HBS-P (0,005 % P20) + 1 mg/ml de ASB. Se preparó una solución madre de BDNF (de los sistemas R y D) 2 uM en tampón HBS-P (0,0005 % P20) + 1 mg/ml de ASB. El experimento de competencia de BDNF se llevó a cabo con p75 y presencia o ausencia de MAB248 (anticuerpo BDNF sistemas R y D) con las siguientes concentraciones: i) MAB248 (500 nM) sólo, ii) BDNF (20 nM) + MAB248 (500 nM) iii) BDNF (20 nM) sólo y iv)
BDNF (20 nM) + MAB248 (100 nM). Todas las muestras se prepararon a partir de soluciones madre y se diluyeron en el tampón del análisis; HBS-P (0,005 % P20) + 1 mg/ml de ASB. Todas las muestras se reservaron a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de la inyección. Se inició un sensograma manual a través del chip de biocore a una velocidad de flujo de 50 ul/min. Se inyectó cada muestra durante 30 segundos en el orden
5 indicado anteriormente en un ciclo de sensograma distinto. Se llevó a cabo la regeneración en los casos necesarios con 5 mM de NaOH durante un ciclo de 12 segundos (10 ul). Como se muestra en la figura 6 p75NTR(NBP) se une a BDNF.
Ejemplo 5. Inhibición p75NTR(NBP) de actividad NGF en células PC12
[0063] Se demostró que p75NTR(NBP) inhibe considerablemente la actividad de NGF en células PC-12 y N2OS 10 que expresan TrkA y/o TrkA más p75 en la superficie celular, figura 7.
[0064] Las células PC12 de paso bajo (número de paso 20-24) se cultivaron directamente en placas de 96 pocillos en medio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM, por sus siglas en inglés) suplementadas con un 5 % de suero fetal bovino y un 10 % de suero equino inactivado mediante calor y de penicilina-estreptomicina (10 U/ ml-0,1 mg/ml), y se incubaron en atmósfera humidificada con un 5 % de CO2, a 37 ºC. Se añadió NGF (50 15 ng/ml) al medio de crecimiento para diferenciar las células PC12. Se añadió una concentración de dosis de p75NTR(NBP) de 200, 100, 50, 25, 12,5, 6,25, 3,1, 1,5, 0,78, 0,39, 0,2, 0,1 ng/ml a cada pocillo a través de la placa. Se incubó la placa a 37 ºC durante 24 horas, a lo que siguió una determinación de los números de células mediante un contador de células. Como se muestra en la figura 8, la adición de p75NTR(NBP) a los medios bloqueó de forma considerable la diferenciación de las células PC-12 a su fenotipo axonal. En presencia de NGF,
20 las células PC-12 se diferencian y forman un fenotipo de tipo neuronal. Esto se inhibió de manera dependiente de la dosis en respuesta a p75NTR(NBP). Se concluyó a partir de estos ensayos que la p75NTR(NBP) bloquea la acción de NGF.
Ejemplo 6. La proteína de unión neurotrófica p75NTR(NBP) inhibe el efecto de BDNF en la hiperalgesia mecánica en un modelo de excitabilidad de los nervios.
25 [0065] Se anestesiaron ratas Sprague-Dawley macho con isoflurano (5 % de oxígeno para la inducción, 1,5 -2,0 % en oxígeno para el mantenimiento). La médula espinal se expuso a laminectomía lumbar para descubrir la región L4 -L6 de la médula, y un microelectrodo de tungsteno insertado en el asta dorsal para registrar desde una neurona de rango dinámico amplio aislada. Las neuronas individuales WDR se aislaron de manera que la amplitud de potencial de acción de la unidad registrada fuera al menos 3 veces el nivel del ruido del punto de
30 referencia. Se amplificaron las respuestas mediante la utilización de un amplificador neurolog acoplado a CA y se registraron mediante la utilización del software CED spike2. Antes de la aplicación del fármaco, se obtuvieron 3 respuestas de punto de referencia estables (<10 % de variación) a un rango de estímulos naturales (roce, von Frey, pellizco y calor). El estímulo de roce se aplicó acariciando el centro del campo receptivo periférico con una brizna delgada de algodón. Se aplicaron el filamento de von Frey y calor (mediante la utilización de un chorro de
35 agua constante a 43 grados) durante un periodo de 10 segundos. Se aplicó un pellizco durante un periodo de 5 segundos. Una vez se obtuvieron las respuestas de puntos de referencia estables, se aplicó BDNF sólo (500 ng en 0,1 % de ASB) o BDNF (500 ng) + p75NTR(NBP) (500 ng preincubado durante 40 minutos antes de la inyección) al centro del campo receptivo en un volumen de 25 ul mediante la utilización de una jeringa para insulina. Se hizo un seguimiento de los efectos del fármaco durante 150 minutos y se llevaron a cabo pruebas en
40 intervalos de 10 min. Al término del experimento se sacrificó la rata mediante dislocación cervical.
[0066] Como se demuestra en la figura 8, BDNF provocó un aumento considerable en la excitabilidad neuronal y esto se amplificó después de estímulos. La adición de p75NTR(NBP) redujo de forma considerable la excitabilidad neuronal en respuesta a todos los estímulos; salino, BDNF, roce y pellizco. Resulta evidente que la p75NTR(NBP) reduce la excitabilidad neuronal y el dolor consiguiente.
45 Ejemplo 7. La proteína de unión neurotrófica p75NTR(NBP) inhibe la hiperalgesia en un modelo UVIH
Exposición de animales a UV
[0067] Se anestesiaron ratas Sprague Dawley Charles River (175-200 g) con una mezcla al 2 % de isofluorano O2. Se mantuvo la anestesia a través de una cápsula nasal al tiempo que se irradiaba la superficie plantar de la pata trasera derecha con 300 mJ/cm2 de UV (Saalmann CupCube system, Saalmann GmbH, Alemania; λ=28050 400 nm). La fuente de irradiación se adaptó a la superficie plantar de la pata trasera de la rata con la utilización del collar de liberación conformado (8x12 mm), conectado a la fuente de UV (equipo de administración e ingeniería de las instalaciones Pfizer). Se calibró la intensidad de las fuentes de UV mediante la utilización del radiómetro ABLE 1400A con el filtro SEL005/WBS320/TD (ABLE Instruments and Controls Ltd). La exposición a UV utilizada provoca eritema cutáneo en ratas ingenuas, pero ningún otro acontecimiento adverso (ninguna
55 pérdida de peso corporal, ningún signo de estrés ni de malestar obvio.
Evaluación de la hiperalgesia térmica
[0068] Se evaluó la hiperalgesia térmica mediante la prueba plantar en ratas (Ugo Basile, Italia) a lo que siguió un método modificado de Hargreaves et al (1988). Antes de la prueba, las ratas se habituaron al aparato (15-30 min). La prueba plantar consistió en tres cajas de metracrilato individuales sobre una mesa de vidrio elevada. Se alojaron dos ratas en cada caja de modo que pudieran someterse a prueba 6 ratas por aparato.
5 [0069] Se aplicó una fuente de calor por infrarrojos móvil directamente por debajo de la superficie plantar de la pata trasera de la rata. La latencia de retirada de la pata (PWL, por sus siglas en inglés) se definió como el tiempo (segundos) que tarda la rata en apartar la pata trasera de la fuente de calor. Se calibró la fuente para obtener una respuesta de 8-12 segundos en animales sin tratar (105-120 mW/cm2). Se estableció un punto límite automático de 20 segundos para evitar el daño tisular.
10 [0070] Se tomaron cinco registros de cada pata trasera de las ratas durante mediciones de punto de referencia (ratas ingenuas antes de las exposiciones a UV, día 0) y la confirmación del inicio de la hiperalgesia (días 1). Se llevaron a cabo dos sesiones al día el día 0 y el día 1.
[0071] Se recogieron tres registros por pata en su lugar para los puntos de referencia y cada punto de prueba durante la evaluación de la eficacia de los medicamentos el día 2, 3 y 4 (48, 72 y 96 horas tras la exposición a
15 UV, respectivamente). Las patas ilesas se evaluaron siempre en primer lugar.
[0072] La hiperalgesia térmica se define como los animales que muestran PWL ≥5 seg. débil, que se seleccionan para los ensayos.
Evaluación de la alodinia estática
[0073] Los animales se habitúan al fondo de alambre de las jaulas de ensayo antes de la evaluación de la 20 alodinia. Los animales se familiarizan con los pelos de von Frey mediante la aplicación de filamento de 15 g, 8 g
+ 4 g en el primer día de habituación, 4 g de filamento en el segundo día antes de que se lleve a cabo una medición completa de arriba abajo. La alodinia estática se evalúa mediante la aplicación de pelos de von Frey (Stoelting, Wood Dale, Illinois, EE.UU) en orden ascendente de fuerza (0,6, 1, 1,4, 2, 4, 6, 8, 10, 15 y 26 gramos) a la superficie plantar de las patas traseras. Cada pelo de von Frey se aplica a la pata durante un máximo de 6 25 segundos o hasta que se dé una respuesta de retirada. Una vez se haya establecido una respuesta de retirada a un pelo de von Frey, la pata se vuelve a someter a prueba, empezando con el filamento por debajo de la que se retiró y, posteriormente, con los filamentos restantes en secuencia de fuerza descendente hasta que no se dé ninguna retirada. La fuerza más alta de 26 g levanta la pata y provoca una respuesta, lo que representa el punto límite. Las patas traseras de cada animal se someten a prueba de este modo. La cantidad más baja de fuerza
30 requerida para provocar una respuesta se registra como el umbral de retirada de la pata (PWT, por sus siglas en inglés) en gramos. La alodinia estática se define como presente si los animales responden a un estímulo de 4 g o menor, que es inocuo en ratas normales.
[0074] Los animales se marcan antes de someterse a prueba y los que muestran alodinia que coincida con los criterios de inclusión se aleatorizan a partir de la PWL y se les administra dosis. El compuesto de ensayo se 35 dosifica y en momentos predeterminados (en función de las propiedades farmacocinéticas del compuesto de ensayo), después de la dosificación, se llevan a cabo mediciones en momentos seleccionados, después de la dosificación y se recogen todos los datos para su análisis. Como se demuestra en la figura 9, los datos de la PWL para la p75NTR(NBP) 10 mg/kg de forma subcutánea (NBPP-Fc indicada) se muestran en comparación con control, ibuprofeno, 100 mg/kg po y anticuerpo antiNGF 10 mg/kg de forma subcutánea; los datos para la
40 evaluación de la hiperalgesia térmica mostraron medidas equivalentes en cada caso.
Citas
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213> Homo sapiens
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212> PRT
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< 212> PRT
< 213> Homo sapiens
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< 211> 5
< 212> PRT
< 213> Artificial
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< 223> Secuencia de enlace
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< 221> MISC_FEATURE
< 222> (1)..(5)
< 223> (GGGGS) n (n = 3 a 4)
<400> 17
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<210> 18
< 211> 5
< 212> PRT
< 213> Artificial
10
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< 223> Secuencia de enlace
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< 221> MISC_FEATURE
< 222> (1)..(5)
15
< 223> (EAAAK) n (n = 2 a 5)
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< 212> PRT
< 213> Artificial
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< 223> Secuencia de enlace
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25

Claims (12)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Una proteína de unión a neurotrofina p75NTR, donde la p75NTR(NBP) se une a cualquiera de NGF, BDNF, NT3 o NT4/5 con una afinidad de unión (Kd) de entre 0,1 nM y 50 nM, como se mide mediante resonancia de plasmones superficiales a 20 ºC, para su utilización en el tratamiento del dolor.
    5 2. La p75NTR(NBP) para su utilización según la reivindicación 1 donde, la p75NTR(NBP) comprende
    (a) p75NTR(NBP) conectada a una o más moléculas auxiliares seleccionadas entre:
    (a)
    transferrina o una parte de la misma,
    (b)
    albúmina o una parte de la misma,
    (c)
    una inmunoglobulina Fc o una parte de la misma, 10 (d) una cadena polimérica de polietilenglicol,
  2. 3.
    La p75NTR(NBP) para su utilización según la reivindicación 2 donde, la p75NTR(NBP) se conecta a la una o más moléculas auxiliares a través de uno o más enlaces.
  3. 4.
    La p75NTR(NBP) para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde la p75NTR(NBP) es una p75NTR(NBP) humana.
    15 5. La p75NTR(NBP) para su utilización según cualquier reivindicación anterior donde la p75NTR(NBP) comprende uno o más de los dominios de unión a neurotrofina 1 [SEQ ID NO. 4], 2 [SEQ ID NO. 5], 3 [SEQ ID NO. 6], 4 [SEQ ID NO. 7] o 5 [SEQ ID NO. 8].
  4. 6. La p75NTR(NBP) para su utilización según cualquier reivindicación anterior donde la p75NTR(NBP) comprende
    20 (a) unao más de SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 5, SEQ ID NO. 6, SEQ ID NO. 7 o SEQ ID NO. 8,
    (b)
    SEQ ID NO. 3 o una parte correspondiente que comprende (a), o
    (c)
    SEQ ID NO. 2 o una parte correspondiente que comprende (a).
  5. 7. La p75NTR(NBP) para su utilización según las reivindicaciones 2-6 donde el enlace se selecciona entre:
    25 (a) un enlace covalente,
    (b)
    enlace no covalente,
    (c)
    un enlace peptídico,
    (d)
    un aminoácido o una pluralidad de aminoácidos que comprende un péptido.
  6. 8. La p75NTR(NBP) para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6 donde la
    30 p75NTR(NBP) se conecta a más de una molécula auxiliar, opcionalmente cada molécula auxiliar es, bien la misma, bien diferente o una mezcla de la misma y la diferente.
  7. 9. La p75NTR(NBP) para su utilización según la reivindicación 8, donde la más de una molécula auxiliar comprende un multímero de moléculas auxiliares enlazadas a p75NTR(NBP) mediante un enlace, y donde cada molécula puede ser la misma o diferente o una mezcla de la misma y la diferente.
    35 10. La p75NTR(NBP) para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde la p75NTR(NBP) consiste en
    (a)
    una p75NTR(NBP) de secuencia SEQ ID No. 3, y opcionalmente
    (b)
    una inmunoglobulina Fc, opcionalmente donde la inmunoglobulina Fc se selecciona entre SEQ
    ID No. 12, 15 y 16, y más opcionalmente 40 (c) un enlace, opcionalmente donde el enlace se selecciona entre SEQ ID No. 17, 18 y 19.
  8. 11.
    Una proteína de unión a neurotrofina p75NTR, p75NTR(NBP), donde la p75NTR(NBP) comprende uno o más de los dominios de unión a neurotrofina 1 [SEQ ID NO. 4], 2 [SEQ ID NO. 5], 3 [SEQ ID NO. 6], 4 [SEQ ID NO. 7], o 5 [SEQ ID NO. 8] para su utilización en el tratamiento del dolor.
  9. 12.
    La p75NTR(NBP) para su utilización según la reivindicación 11 donde la p75NTR(NBP) comprende
    45 (a) unao más de SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 5, SEQ ID NO. 6, SEQ ID NO. 7 o SEQ ID NO. 8,
    (b)
    SEQ ID NO. 3 o una parte correspondiente que comprende (a), o
    (c)
    SEQ ID NO. 2 o una parte correspondiente que comprende (a).
  10. 13. La p75NTR(NBP) para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde el dolor o síntoma de dolor se selecciona entre:
    (a)
    dolor agudo y/o dolor espontáneo,
    (b)
    dolor crónico y/o dolor continuo,
    (c)
    dolor inflamatorio que incluye cualquiera entre el dolor de la artritis, el dolor provocado por la
    osteoartritis o la artritis reumatoide, provocado por enfermedades inflamatorias intestinales, 5 (d) dolor nociceptivo,
    (e)
    dolor neuropático, que incluye la neuropatía diabética dolorosa o el dolor asociado a la neuralgia postherpética,
    (f)
    hiperalgesia,
    (g)
    alodinia,
    (h)
    dolor central, dolor central tras un ictus, dolor provocado por la esclerosis múltiple, dolor provocado por lesión de la médula espinal o dolor provocado por la enfermedad de Parkinson o la epilepsia,
    (i)
    dolor provocado por el cáncer,
    (j)
    dolor posoperatorio,
    15 (k) dolor visceral, incluido el dolor visceral digestivo y el dolor visceral no digestivo, dolor causado por trastornos gastrointestinales (GI), dolor provocado por trastornos intestinales funcionales (FBD), dolor provocado por enfermedades intestinales inflamatorias (IBD), dolor provocado por dismenorrea, dolor pélvico, cistitis, cistitis intersticial o pancreatitis,
    (l)
    dolor musculoesquelético, mialgia, fibromialgia, espondilitis, artropatías seronegativas (no reumatoides), reumatismo no articular, distrofinopatía, glicogenólisis, polimiositis, piomiositis,
    (m)
    dolor cardíaco o vascular, dolor provocado por angina, infarto de miocardio, estenosis mitral, pericarditis, fenómeno de Raynaud, escleredoma, escleredoma o isquemia del músculo esquelético,
    (n) dolor de cabeza incluida la migraña, migraña con aura, migraña sin aura, cefalalgia 25 histamínica, cefalea tensional.
    (o)
    dolor orofacial, incluido el dolor dental, dolor miofascial temporomandibular o tinnitus, o
    (p)
    dolor de espalda, bursitis, dolor menstrual, migraña, dolor referido, neuralgia del trigémino, hipersensibilización, dolor provocado por trauma espinal y/o degeneración o apoplejía.
  11. 14. La p75NTR(NBP) para su utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde la p75NTR(NBP) es para utilización separada, secuencial o simultánea en una combinación combinada con un segundo compuesto farmacológicamente activo, preferiblemente donde el segundo compuesto farmacológicamente activo de la combinación se selecciona entre;
     un analgésico opioide, por ejemplo, morfina, heroína, hidromorfona, oximorfona, levorfanol, levalorfano, metadona, meperidina, fentanilo, cocaína, codeína, dihidrocodeína, oxicodona, 35 hidrocodona, propoxifeno, nalmefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, buprenorfina, butorfanol,
    nalbufina o pentazocina;
     un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (NSAID), por ejemplo, aspirina, diclofenaco, diflusinal, etolodaco, fenfubén, fenoprofeno, flufenisal, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, ketoprofeno, ketorolaco, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, meloxicam, nabumetona, naproxeno, nimesulida, nitroflurbiprofeno, olsalazina, oxaprozina, fenilbutazona, piroxicam, sulfasalazina, sulindaco, tolmetina o zomepiraco;
     un sedante barbitúrico, por ejemplo, amobarbital, aprobarbital, butabarbital, butabital, mefobarbital, metarbital, metohexital, pentobarbital, fenobarbital, secobarbital, talbutal, teamilal
    o triopental; 45  una benzodiazepina que tenga una acción sedante, por ejemplo, clordiazepóxido, clorazepato, diazepam, flurazepam, lorazepam, oxazepam, temazepam o triazolam;  un antagonista H1 que tenga una acción sedante, por ejemplo, difenhidramina, pirilamina,
    prometazina, clorfeniramina o clorciclizina;
     un sedante tal como glutetimida, meprobamato, metacualona o dicloralfenazona;
     un relajante del músculo esquelético, por ejemplo, baclofeno, carisoprodol, clorzoxazona,
    ciclobenzaprina, metocarbamol u orfrenadina;
     un antagonista de los receptores NMDA, por ejemplo, dextrometorfano ((+)-3-hidroxi-Nmetilmorfinano) o su metabolito dextrorfano ((+)-3-hidroxi-N-metilmorfinano), ketamina, memantina, pirroloquinolina quinona, ácido cis-4-(fosfonometil)-2-piperidinecarboxílico,
    55 bupidino, EN-3231 (MorphiDex®, una formulación de combinación de morfina y dextrometorfano), topiramato, neramexano o perzinfotel incluido un antagonista NR2B, por ejemplo, ifenprodil, traxoprodil o (-)-(R)-6-{2-[4-(3-fluorofenil)-4-hidroxi-1-piperindinil]-1hidroxietil-3,4-dihidro-2(1H)-quinolinona;  un alfa adrenérgico, por ejemplo, doxazosina, tamsulosina, clonidina, guanfacina, dexmetatomidina, modafinilo o 4-amino-6,7-dimetoxi-2-(5-metano-sulfonamido-1,2,3,4tetrahidroisoquinol-2-il)-5-(2-piridil) quinazolina;
     un antidepresivo tricíclico, por ejemplo, desipramina, imipramina, amitriptilina o nortriptilina;  un anticonvulsivo, por ejemplo, carbamazepina, lamotrigina, topiramato o valproato; 38
     un antagonista de taquicinina (NK), en particular, un antagonista NK-3, NK-2 o NK-1, por ejemplo, (αR,9R)-7-[3,5-bis(trifluorometil)bencil]-8,9,10,11-tetrahidro-9-metil-5-(4-metilfenil)-7H[1,4]diazocino[2,1-g][1,7]-naftiridina-6-13-diona (TAK-637), 5-[[(2R,3S)-2-[(1R)-1-[3,5bis(trifluorometil)fenil]etoxi-3-(4-fluorofenil)-4-morfolinil]-metil]-1,2-dihidro-3H-1,2,4-triazol-3-ona
    5 (MK-869), aprepitant, lanepitant, dapitant o 3-[[2-metoxi-5-(trifluorometoxi)fenil]-metiolamino]-2fenilpiperidina (2S,3S);  un antagonista muscarínico, por ejemplo, oxibutinina, tolterodina, propiverina, cloruro de trospio, darifenacina, solifenacina, temiverina e ipratropio;  un inhibidor selectivo de la COX-2, por ejemplo, celecoxib, rofecoxib, parecoxib, valdecoxib,
    10 deracoxib, etoricoxib o lumiracoxib;  un analgésico de alquitrán de hulla, en particular paracetamol;  un neuroléptico tal como droperidol, clorpromazina, haloperidol, perfenazina, tioridazina,
    mesoridazina, trifluoperazina, flufenazina, clozapina, olanzapina, risperidona, ziprasidona, quetiapina, sertindol, aripiprazol, sonepiprazol, blonanserina, iloperidona, perospirona, 15 racloprida, zotepina, bifeprunox, asenapina, lurasidona, amisulprida, balaperidona, palindore,
    eplivanserina, osanetant, rimonabant, meclinertant, Miraxion® o sarizotan;  un agonista de los receptores vaniloides (p. ej., resiniferatoxina) o un antagonista de los receptores vaniloides (p. ej., capsazepina);  un beta adrenérgico tal como propranolol;
    20  un anestésico local tal como mexiletina;  un corticoesteroide tal como dexametasona;  un agonista o antagonista del receptor 5-HT, en particular un agonista 5-HT1B/1D tal como
    eletriptán, sumatriptán, zolmitriptán o rizatriptán;  un antagonista del receptor 5-HT2A tal como R(+)-alfa-(2,3-dimetoxi-fenil)-1-[2-(425 fluorofeniletil)]-4-piperidinemetanol (MDL-100907);
     un analgésico colinérgico (nicotínico), tal como isproniclina (TC-1734), (E)-N-metil-4-(3piridinil)-3-buten-1-amina (RJR-2403), (R)-5-(2-azetidinilmetoxi)-2-cloropiridina (ABT-594) o nicotina;
     Tramadol®;
    30  un inhibidor de la PDEV, tal como 5-[2-etoxi-5-(4-metil-1-piperazinil-sulfonil)fenil]-1-metil-3-npropil-1,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona (sildenafilo), (6R,12aR)-2,3,6,7,12,12ahexahidro-2-metil-6-(3,4-metilenedioxifenil)-pirazino[2',1':6,1]-pirido[3,4-b]indol-1,4-diona(IC-351
    o tadalafilo),2-[2-etoxi-5-(4-etil-piperazina-1-il-1-sulfonil)-fenil]-5-metil-7-propil-3H-imidazo[5,1f][1,2,4]triazin-4-ona (vardenafilo), 5-(5-acetil-2-butoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-etil-3-azetidinil)-2,6
    35 dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona, 5-(5-acetil-2-propoxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-isopropil-3azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona, 5-[2-etoxi-5-(4-etilpiperazina-1ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-[2-metoxietil]-2,6-dihidro-7H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-7-ona, 4-[(3cloro-4-metoxibenzil)amino]-2-[(2S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]-N-(pirimidin-2ilmetil)pirimidina-5-carboxamida, 3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6,7-dihidro-1H-pirazolo[4,3
    40 d]pirimidin-5-il)-N-[2-(1-metilpirrolidin-2-il)etil]-4-propoxibenzenesulfonamida;  un cannabinoide;  antagonista del receptor metabotrópico de glutamato (mGluR1) subtipo 1;  un inhibidor de la recaptación de serotonina tal como sertralina, metabolito de la sertralina
    desmetilsertralina, fluoxetina, norfluoxetina (metabolito de desmetil fluoxetina), fluvoxamina,
    45 paroxetina, citalopram, metabolito del citalopram desmetilcitalopram, escitalopram, d,lfenfluramina, femoxetina, ifoxetina, cianodotiepina, litoxetina, dapoxetina, nefazodona, cericlamina y trazodona;
     inhibidor de la recaptación de noradrenalina (norepinefrina), tal como maprotilina, lofepramina, mirtazepina, oxaprotilina, fezolamina, tomoxetina, mianserina, buproprión, metabolito de 50 bupropión hidroxibupropión, nomifensina y viloxazina (Vivalan®), especialmente un inhibidor de
    la recaptación de noradrenalina selectivo tal como reboxetina, en particular (S,S)-reboxetina;
     un inhibidor dual de la recaptación de serotonina y noradrenalina, tal como venlafaxina, metabolito de la venlafaxina O-desmetilvenlafaxina, clomipramina, metabolito de la clomipramina desmetilclomipramina, duloxetina, milnaciprán e imipramina;
    55  un inhibidor de la óxido nítrico sintasa inducible (iNOS) tal como ácido S-[2-[(1iminoetil)amino]etil]-L-homocisteína, S-[2-[(1-iminoetil)-amino]etil]-4,4-dioxo-L-cisteína, S-[2-[(1iminoetil)amino]etil]-2-metil-L-cisteína, (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1-iminoetil)amino]-5heptenoico, 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)-butil]tio]-5-cloro-3-piridinecarbonitrilo; 2[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-4-clorobenzonitrilo, (2S,4R)-2-amino-4-[[2
    60 cloro-5-(trifluorometil)fenil]tio]-5-tiazolebutanol, 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil) butil]tio]-6-(trifluorometil)-3 piridinecarbonitrilo, 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1 -(5tiazolil)butil]tio]-5-clorobenzonitrilo, N-[4-[2-(3-clorobenzilamino)etil]fenil]tiofeno-2carboxamidina, o guanidinoetildisulfuro;
     un inhibidor de la acetilcolinesterasa tal como donepezilo; 39
     un antagonista de prostaglandina E2 subtipo 4 (EP4) tal como N-[({2-[4-(2-etil-4,6-dimetil-1Himidazo[4,5-c]piridin-1-il)fenil]etil}amino)-carbonil]-4-metilbenzenesulfonamida o ácido 4-[(1S)-1({[5-cloro-2-(3-fluorofenoxi)piridin-3-il]carbonil}amino)etil]benzoico;
     un antagonista de leucotrieno B4; tal como ácido 1-(3-bifenil-4-ilmetil-4-hidroxi-croman-7-il)5 ciclopentanecarboxílico (CP-105696), ácido 5-[2-(2-Carboxietil)-3-[6-(4-metoxifenil)-5Ehexenil]oxifenoxi]-valérico (ONO-4057) o DPC-11870,
     un inhibidor de la 5-lipoxigenasa, tal como zileutón, 6-[(3-fluoro-5-[4-metoxi-3,4,5,6-tetrahidro2H-piran-4-il])fenoxi-metil]-1-metil-2-quinolona (ZD-2138), o 2,3,5-trimetil-6-(3-piridilmetil),1,4benzoquinona (CV-6504);
    10  un bloqueador de los canales de sodio, tal como lidocaína; o  un antagonista 5-HT3, tal como ondansetrón;
    y las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables correspondientes.
  12. 15. Una composición farmacéutica, que comprende la p75NTR(NBP) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 y un portador farmacéuticamente aceptable y/o un excipiente para su
    15 utilización en cualquiera una o más entre la prevención, la mejora, el control, la reducción de la incidencia del dolor o el retraso del desarrollo o evolución del mismo.
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