ES2629735T3 - Derivados de GLP-1 doblemente acilados - Google Patents

Abstract

Un derivado de un péptido GLP-1, donde el péptido comprende un primer residuo de K en una posición correspondiente a la posición 26 de GLP-1 (7- 37) (SEQ ID NO:1), un segundo residuo de K en una posición correspondiente a la posición 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y ocho cambios de aminoácidos como máximo en comparación con GLP-1 (7-37), donde el derivado comprende dos restos de prolongación unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, mediante un conector, donde el resto de prolongación es Quím. 2: Quím. 2 : HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*, en el cual y es un número entero en el intervalo de 6-13; y el conector comprende Quím. 3a : *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NR1R2]-CO-*, donde q es un número entero en el intervalo de 0-5, R1 y R2 representan de manera independiente *-H o *-CH3 y w es un número entero en el intervalo de 0-5; o un éster, amida o sal farmacéuticamente aceptable de este.

Description

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DESCRIPCION

Derivados de GLP-1 doblemente acilados Campo tecnico

La presente se refiere a derivados de analogos del peptido analogo al glucagon tipo 1 (GLP-1), mas en concreto a ciertos derivados doblemente acilados en K26 y en K34 del GLP-1 y a su uso farmaceutico.

Antecedentes

En Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, n.° 9, pags. 1664-669 se divulgan derivados de GLP-1 (7-37) que estan doblemente acilados en K2634.

El documento WO 99/43706 A1 divulga varios derivados mono- y doblemente acilados de GLP-1.

El documento WO 98/08871 A1 divulga varios derivados de GLP-1, incluidos algunos que estan doblemente acilados.

El documento WO 2011/080103 A1 divulga varios derivados de GLP-1 que estan doblemente acilados en K2637. Compendio

Los derivados de GLP-1 de la invencion estan acilados en las lisinas naturales en las posiciones 26 y 34. Las cadenas laterales son restos de union a album en que comprenden un resto de prolongacion seleccionado entre acidos grasos con un grupo carboxifenoxi distal que esta acilado, mediante un conector espedfico, a un grupo de lisina del peptido GLP-1, preferentemente en el grupo epsilon-amino de este.

El peptido GLP-1 puede ser GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) o un analogo de este que tiene en total hasta ocho cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1 (7-37). Los cambios son, de manera independiente, una o mas adiciones, una o mas deleciones y/o una o mas sustituciones.

Mas en concreto, la invencion se refiere a un derivado de un peptido GLP-1, donde el peptido comprende un primer residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1), un segundo residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y como maximo ocho cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1 (7-37), donde el derivado comprende dos restos de prolongacion unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, cada uno mediante un conector, donde el resto de prolongacion es Qmm. 2: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*,en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13; y cada conector comprende Qmm. 3a: *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NR-iR2]-CO-*, donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, R1 y R2 representan de manera independiente un radical de hidrogeno (*-H) o metilo (*-CHa) y w es un numero entero en el intervalo de 0-5; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

La invencion tambien se refiere al uso de un derivado de este tipo como un medicamento, en particular al uso en el tratamiento y/o prevencion de todas las formas de diabetes, trastornos de la alimentacion, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales y/o el smdrome del ovario poliqmstico y/o para retrasar o prevenir la evolucion de la enfermedad diabetica.

Tambien se divulgan productos intermedios en forma de analogos de GLP-1 novedosos, que son relevantes para preparar ciertos derivados de la invencion.

Tambien se divulga un compuesto intermedio en forma de un compuesto protegido novedoso (Qmm. 39, Ejemplo 19) que se puede utilizar en la smtesis del compuesto del Ejemplo 13 de la presente y compuestos similares.

Los derivados de la invencion son activos desde un punto de vista biologico. Tambien, o como alternativa, pueden tener un perfil farmacocinetico prolongado. Tambien, o como alternativa, tienen una biodisponibilidad oral elevada. Estas propiedades son importantes para desarrollar la siguiente generacion de compuestos de tipo GLP-1 para la administracion subcutanea, intravenosa y/o, en particular, oral.

La liraglutida es un derivado monoacilado de GLP-1 para administrar una vez al dfa y comercializado desde 2009 por Novo Nordisk A/S. Este compuesto se divulga en el documento WO 98/08871 A1 (Ejemplo 37).

El documento WO 06/097537 A2 divulga entre otros derivados de GLP-1 la semaglutida (Ejemplo 4), que es un derivado monoacilado de GLP-1 para administrar una vez a la semana y que esta desarrollando Novo Nordisk A/S.

Descripcion

En las siguientes secciones, las letras griegas se pueden representar por su sfmbolo o por el correspondiente nombre escrito, por ejemplo: a = alfa; p = beta; £ = epsilon; y = gamma; u> = omega; etc. Asimismo, la letra griega p puede estar representada por "u", por ejemplo, en pL=uL, o en pM=uM.

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Un asterisco (*) en una formula qmmica indica i) un punto de union, ii) un radical y/o iii) un electron no compartido.

En un primer aspecto, la invencion se refiere a un derivado de un peptido GLP-1, donde el peptido comprende un primer residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1), un segundo residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y como maximo ocho cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1 (7-37), donde el derivado comprende dos restos de prolongacion unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, mediante un conector, donde el resto de prolongacion es Qmm. 2:

Qmm. 2: HOOC-CaH4-O-(CH2)y-CO-*

en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13; y el conector comprende

Qmm. 3: *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NR-,R2]-CO-*,

donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, R1 y R2 representan de manera independiente un radical de hidrogeno *-H o *-CH3 y w es un numero entero en el intervalo de 0-5; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

Peptidos y analogos de GLP-1

La expresion «peptido GLP-1», tal como se utiliza en la presente, se refiere al peptido analogo al glucagon tipo 1 (GLP-1 (7-37)), cuya secuencia se incluye en la lista de secuencias como la SEQ ID NO:1 o un analogo de esta. El peptido que tiene la secuencia de la SEQ ID NO:1 tambien se puede denominar GLP-1 «natural».

La expresion «analogo de GLP-1», tal como se utiliza en la presente, se refiere a un peptido o a un compuesto que es una variante de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

En la lista de secuencias, al primer residuo aminoaddico de la SEQ ID NO:1 (histidina) se le asigna el n.° 1. Sin embargo, segun lo que es habitual en la tecnica, se hace referencia a este residuo de histidina como n.° 7 y los residuos aminoaddicos posteriores se enumeran en consecuencia y se acaba con la glicina n.° 37. Por lo tanto, por lo general, cualquier referencia en la presente a un numero de un residuo aminoaddico o un numero de la posicion de la secuencia de GLP-1 (7-37) es respecto a la secuencia que comienza con His en la posicion 7 y acaba con Gly en la posicion 37.

Los analogos de GLP-1 de los derivados de la invencion se pueden describir haciendo referencia i) al numero del residuo aminoaddico en el GLP-1 (7-37) natural que corresponde al residuo aminoaddico que se cambia (es decir, la posicion correspondiente en el GLP-1 natural) y ii) al propio cambio.

El analogo de GLP-1 que forma parte del derivado de la invencion comprende como maximo ocho cambios de aminoacidos cuando se compara con el GLP-1 (7-37) natural (SEQ ID NO:1). En otras palabras, es un peptido de GLP-1 (7-37) en el que se han cambiado varios residuos aminoaddicos en comparacion con el GLP-1 (7-37) natural (SEQ ID NO:1). Estos cambios pueden representar, de manera independiente, una o mas sustituciones, adiciones y/o deleciones de aminoacidos.

Los siguientes son ejemplos no limitantes de la nomenclatura de analogos apropiada.

Por ejemplo, el analogo [Imp7, Aib8]-GLP-1-(7-37) se refiere al peptido de GLP-1 (7-37) que tiene, cuando se compara con el GLP-1 natural, las siguientes sustituciones: La sustitucion de la histidina en la posicion 7 con imidazopropionilo (que tambien se puede denominar desaminohistidina (desH)) y la sustitucion de la alanina en la posicion 8 con Aib (acido a-aminoisobutrnco). Este analogo tambien se puede denominar de manera resumida (7Imp, 8Aib), donde se hace referencia a GLP-1 (7-37).

Los analogos «que comprenden» ciertos cambios especificados pueden comprender cambios adicionales cuando se comparan con la SEQ ID NO:1.

Como es evidente de los ejemplos anteriores, los residuos aminoaddicos se pueden identificar por su nombre completo, su codigo de una letra y/o su codigo de tres letras. Estas tres maneras son totalmente equivalentes.

Las expresiones «una posicion equivalente a» o la «posicion correspondiente» se pueden utilizar para caracterizar el sitio de cambio en una secuencia variante de GLP-1 (7-37) haciendo referencia al GLP-1 (7-37) natural (SEQ ID NO:1). Las posiciones equivalentes o correspondientes, asf como tambien el numero de cambios, se deducen facilmente, por ejemplo, simplemente mediante la escritura y con una inspeccion a ojo; y/o se puede utilizar un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar, tal como «align» que es una alineacion de Needleman- Wunsch. El algoritmo se describe en Needleman, S.B. y Wunsch, C.D., (1970), Journal of Molecular Biology, 48: 443-453 y Myers and W. Miller describen el programa «align» en «Optimal Alignments in Linear Space» CABIOS (computer applications in the biosciences) (1988) 4:11-17. Para la alineacion, se pueden utilizar la matriz de calificacion por defecto BLOSUM50 y la matriz de identidad por defecto, y la penalizacion por el primer residuo en un

hueco se puede fijar en -12 o, preferentemente, a -10 y las penalizaciones por residuos adicionales en un hueco a -2 o, preferentemente, a -0.5.

Un ejemplo de tal alineacion se inserta a continuation en la presente, en el cual la secuencia n.° 1 (SEQ_ID_NO_1) es la SEQ ID NO:1, y la secuencia n.° 2 (ANALOGO) es su analogo (8Aib, 22E, 30E).

5 # Secuencias alineadas: 2

# 1: SEQ_ID_NO_1 1

# 2: ANALOGO

# Matriz: EBLOSUM62

# Penalization por el hueco: 10.0

10 # Penalizaci6n_extension: 0.5

# Longitud: 31

# Identidad: 28/31 (90.3%)

# Similitud: 28/31 (90.3%)

# Huecos: 0/31 (0.0%)

15 # Calificacion: 145.0

imagen1

Como se puede deducir de la alineacion anterior, en el caso de que se incluyan en la secuencia aminoacidos no naturales tales como Aib, a efectos de la alineacion estos se pueden reemplazar con X. Si se desea, X se puede corregir posteriormente a mano.

El termino «peptido» como se utiliza, por ejemplo, en el contexto de los analogos de GLP-1 de los derivados de la 20 invention, se refiere a un compuesto que comprende una serie de aminoacidos interconectados mediante enlaces de tipo amida (o peptidicos).

Los peptidos de la invencion comprenden al menos cinco aminoacidos constituyentes conectados mediante enlaces peptidicos. En las realizaciones particulares, el peptido comprende al menos 10, preferentemente al menos 15, mas preferentemente al menos 20, aun mas preferentemente al menos 25 o de la manera mas preferida al menos 28 25 aminoacidos.

En las realizaciones particulares, el peptido esta compuesto por al menos cinco aminoacidos constituyentes, preferentemente compuesto por al menos 10, al menos 15, al menos 20, al menos 25 o de la manera mas preferida compuesto por al menos 28 aminoacidos.

En las realizaciones particulares adicionales, el peptido esta a) compuesto por o b) constituido por i) 28, ii) 29, iii) 30, 30 iv) 31, v) 32 o vi) 33 aminoacidos.

En una realization aun mas particular, el peptido esta constituido por aminoacidos interconectados mediante enlaces peptidicos.

Los aminoacidos son moleculas que contienen un grupo amino y un grupo de acido carboxflico y, de manera opcional, uno o mas grupos adicionales, a menudo denominados cadena lateral.

35 El termino «aminoacido» incluye los aminoacidos proteinogenos (codificados por el codigo genetico, incluidos los aminoacidos naturales y los aminoacidos estandar), asi como tambien los no proteinogenos (que no se encuentran en las protemas y/o no estan codificados por el codigo genetico estandar) y los aminoacidos sinteticos. Por lo tanto, los aminoacidos se pueden seleccionar a partir del grupo de aminoacidos proteinogenos, aminoacidos no proteinogenos y/o aminoacidos sinteticos.

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Los ejemplos no limitantes de aminoacidos que no estan codificados por el codigo genetico son el gamma- carboxiglutamato, ornitina y fosfoserina. Los ejemplos no limitantes de aminoacidos sinteticos son los isomeros D de los aminoacidos tales como la D-alanina y D-leucina, Aib (acido a-aminoisobutrnco), p-alanina y desaminohistidina (desH, nombre alternativo del acido imidazopropionico, abreviado Imp).

En lo que sigue, se debe sobreentender que todos los aminoacidos espedficos para los cuales no se precise el isomero optico se refieren al isomero L (a menos que se especifique lo contrario), por ejemplo, cuando se hace referencia al aminoacido espedfico de la glutamina, se pretende hacer referencia a la L-glutamina, a menos que se afirme lo contrario. Por otra parte, cuando los aminoacidos se describen con formulas mas generales tales como formulas empmcas o formulas estructurales y cuando no se muestre la estereoqmmica, se pretende que estas formulas engloben todos los estereoisomeros.

Los derivados y analogos de GLP-1 de la invencion tienen actividad GLP-1. Este termino se refiere a la capacidad de unirse al receptor de GLP-1 e iniciar una ruta de transduccion de senales que resulte en una accion insulinotropica u otros efectos fisiologicos tal como se sabe en la tecnica. Por ejemplo, los analogos y derivados de la invencion se pueden estudiar para determinar su actividad GLP-1 utilizando uno o mas de los ensayos descritos en los Ejemplos 20-21 de la presente. El ensayo de union al receptor de GLP-1 descrito en el Ejemplo 22 tambien se puede utilizar, si es relevante, como una medida de la actividad GLP-1 o, de manera mas precisa, la afinidad por el receptor de GLP-1 (el experimento con poca HSA).

Derivados de GLP-1

El termino «derivado», tal como se utiliza en la presente en el contexto de un peptido o un analogo de GLP-1, se refiere a un peptido o analogo de GLP-1 modificado qmmicamente en el cual se han unido de manera covalente uno o mas sustituyentes al peptido. El sustituyente tambien se puede denominar cadena lateral.

En una realizacion particular, la cadena lateral es capaz de formar agregados no covalentes con la albumina y promover de esta manera la circulacion del derivado con el torrente sangumeo y tambien posee el efecto de prolongar el tiempo de accion del derivado, debido a que el agregado del derivado de gLP-1 y la albumina unicamente se desintegra de manera lenta para liberar el ingrediente farmaceutico. Asf pues, el sustituyente o cadena lateral, como un todo, se denomina preferentemente resto de union a la albumina.

En otra realizacion particular, el resto de union a la albumina comprende una porcion que es especialmente relevante para la union a la albumina y, por lo tanto, la prolongacion, donde la porcion se puede denominar en consecuencia un resto de prolongacion. El resto de prolongacion puede estar en el extremo o cerca del extremo opuesto del resto de union a la albumina, respecto a su punto de union al peptido.

En una realizacion aun mas particular, el resto de union a la albumina comprende una porcion entre el resto de prolongacion y el punto de union al peptido, donde la porcion se puede denominar un conector, resto conector, espaciador o similares. El conector puede ser opcional y, asf pues, en ese caso el resto de union a la albumina puede ser identico al resto de prolongacion.

En realizaciones particulares, el resto de union a la albumina y/o el resto de prolongacion es lipofilo y/o tiene carga negativa a pH fisiologico (7.4).

El resto de union a la albumina, el resto de prolongacion o el conector puede estar unido de manera covalente a un residuo de lisina del peptido GLP-1 por acilacion.

En una realizacion preferida, un ester activo del resto de union a la albumina, que comprende preferentemente un resto de prolongacion y un conector, se une de manera covalente a un grupo amino de un residuo de lisina, de manera preferente un grupo epsilon-amino de este, al formarse un enlace amida (este proceso se denomina acilacion).

A menos que se indique lo contrario, cuando se hace referencia a una acilacion de un residuo de lisina, se sobreentiende que es un grupo epsilon-amino de este.

Un derivado que comprende dos restos de prolongacion unidos a un primer y un segundo residuo de K (es decir, a K26 y K34) mediante un conector se puede decir que es un derivado que se ha acilado dos veces, doblemente acilado o con una acilacion dual en los grupos epsilon-amino del primer y segundo residuos de lisina, por ejemplo, en la posicion 26 y 34, respectivamente, del peptido GLP-1.

A efectos de la presente, las expresiones «resto de union a albumina», «resto de prolongacion» y «conector» pueden incluir tanto las formas que han reaccionado como las que no han reaccionado de estas moleculas. Si se hace referencia a una forma o a la otra queda claro a partir del contexto en el que se utiliza la expresion.

En un aspecto, cada resto de prolongacion comprende o esta constituido por un resto de prolongacion seleccionado de manera independiente entre Qmm. 2:

Qmm. 2: HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*

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en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13.

En una realizacion, *-(CH2)y-* se refiere a un alquileno lineal en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13.

La expresion «acido graso» se refiere a acidos monocarboxflicos alifaticos que tienen de 4 a 28 atomos de carbono, preferentemente no esta ramificado y/o incluso no numerado y puede ser saturado o insaturado.

La nomenclatura es la habitual en la tecnica, por ejemplo, en las formulas anteriores, *-COOH asf tambien como HOOC-* se refiere a carboxi; *-C6H4-* a fenileno; *-CO-*, as^ tambien como *-OC-*, a carbonilo (O=C<**); C6H5-O-* a fenoxi. Ademas, CO-* se refiere a C(=O)-*. Por ejemplo, en cualquier formula (R-CO-*) de la presente (donde R es tal como se ha definido para cada formula), R-CO-* se refiere a R-C(=O)-*. En realizaciones particulares, los radicales aromaticos, tales como el fenoxi y el fenileno, pueden estar en para.

Tal como se ha explicado anteriormente, los derivados de GLP-1 de la presente invencion, estan doblemente acilados, es decir, dos restos de union a la albumina estan unidos de manera covalente al peptido GLP-1.

En una realizacion particular, los dos restos de union a la albumina (es decir, la totalidad de las cadenas laterales) son similares, de manera preferente sustancialmente identicos o, de la manera mas preferida, identicos.

En otra realizacion particular, los dos restos de prolongacion son similares, de manera preferente sustancialmente identicos o, de la manera mas preferida, identicos.

En una realizacion aun mas particular, los dos conectores son similares, de manera preferente sustancialmente identicos o, de la manera mas preferida, identicos.

La expresion «sustancialmente identicos» incluye las diferencias de la identidad que son debidas a la formacion de una o mas sales, esteres y/o amidas; preferentemente la formacion de una o mas sales, esteres de metilo y amidas simples; mas preferentemente la formacion de no mas de dos sales, esteres de metilo y/o amidas simples; aun mas preferentemente la formacion de no mas de una sal, ester de metilo y/o amida simple; o de la manera mas preferida, la formacion de no mas de una sal.

En el contexto de los compuestos qmmicos tales como los restos de union a la albumina, los restos de prolongacion y conectores, se puede determinar la similitud y/o identidad utilizando cualquier programa informatico y/o algoritmo adecuado conocido en la tecnica.

Por ejemplo, la similitud de dos restos de prolongacion, dos conectores y/o dos cadenas laterales enteras se puede determinar de manera conveniente utilizando las huellas moleculares. La huella es un metodo matematico de representacion de una estructura qmmica (remttase, por ejemplo, a Chemoinformatics: A textbook, Johann Gasteiger y Thomas Engel (Eds), Wiley-VCH Verlag, 2003).

Los ejemplos de huellas adecuadas incluyen, sin caracter limitante, las huellas UNITY, huellas MDL y/o huellas ECFP, tales como huellas ECFP_6 (ECFP significa huellas de conectividad extendida).

En realizaciones particulares, los dos restos de prolongacion, los dos conectores y/o las dos cadenas laterales enteras se representan como a) huellas ECFP_6; b) huellas UNITY y/o c) huellas MDL.

Preferentemente, se utiliza el coeficiente de Tanimoto para calcular la similitud de dos huellas, sin importar que se utilice a), b) o c).

En realizaciones particulares, sin importar que se utilice a), b) o c), los dos restos de prolongacion, los dos conectores y/o las dos cadenas laterales enteras tienen, respectivamente, una similitud de al menos 0.5 (50%); preferentemente de al menos 0.6 (60%); mas preferentemente de al menos 0.7 (70%), o de al menos 0.8 (80%); aun mas preferentemente de al menos 0.9 (90%); o de la manera mas preferida de al menos 0.99 (99%), tal como una similitud de 1.0 (100%).

Se pueden calcular las huellas UNITY utilizando el programa SYBYL (se puede adquirir de Tripos, 1699 South Hanley Road, San Luis, MO 63144-2319 EE. UU). Se pueden calcular las huellas ECFP_6 y MdL utilizando el programa Pipeline Pilot (se puede adquirir de Accelrys Inc., 10188 Telesis Court, Suite 100, San Diego,CA 92121, EE. UU.).

Para consultar mas detalles remftase, por ejemplo, a J. Chem. Inf. Model. 2008, 48, 542-549; J. Chem. Inf. Comput. Sci. 2004, 44, 170-178; J. Med. Chem. 2004, 47, 2743-2749; J. Chem. Inf. Model. 2010, 50, 742-754; asf como tambien SciTegic Pipeline Pilot Chemistry Collection: Basic Chemistry User Guide, marzo de 2008, SciTegic Pipeline Pilot Data Modeling Collection, 2008 - ambos de Accelrys Software Inc., San Diego, EE. UU., y las directrices
http://www.tripos.com/tripos_resources/fileroot/pdfs/Unity_111408.pdfy
http://www.tripos.com/data/SYBYL/SYBYL_072505.pdf.

Un ejemplo de un calculo similar se inserta a continuacion en la presente, donde se compara una cadena lateral entera conocida de un derivado de GLP-1 conocido con uno de sus esteres de metilo:

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Utilizando a) las huellas ECFP_6 la similitud es 0.798, utilizando b) las huellas UNITY la similitud es 0.957; y utilizando las huellas MDL la similitud es 0.905

En caso de dos cadenas laterales identicas (restos de union a la albumina) el derivado se puede denominar simetrico.

En realizaciones particulares, el coeficiente de similitud es de al menos 0.80, preferentemente al menos 0.85, mas preferentemente al menos 0.90, aun mas preferentemente al menos 0.95 o de la manera mas preferida al menos

0.99.

Cada uno de los dos conectores del derivado de la invention comprende el siguiente primer elemento conector (A): Qmm. 3a: *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NRiR2]-CO-*, donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, Ri y R2 representan de manera independiente un *-H (un radical de hidrogeno) o *-CH3 (metilo) y w es un numero entero en el intervalo de 0-5.

Un ejemplo no limitante de un conector que comprende el primer elemento conector de Qmm. 3a es la lisina o mas bien, un di-radical de lisina. La lisina se puede utilizar de manera preferente como un conector en su version omega, donde omega se refiere al hecho de que es el grupo amino en el atomo de C distal de la cadena sustituyente de alquilo el que se transforma en el radical (en *-NH). Por lo general, en la presente la position omega de la lisina se denomina la posicion epsilon (el atomo alfa es el atomo de C adyacente a la funcion de tipo acido carboxflico, y cada atomo de C anterior se designa entonces utilizando las letras griegas siguientes beta, gamma, delta y asi sucesivamente, hasta que se alcanza el atomo de C al que esta unido el grupo *-NH y es en el caso de la lisina el atomo epsilon. En consecuencia, cuando w = 0, R1 y R2 representan ambos *-H, y q = 4, la formula Qmm. 3a se refiere a un di-radical de epsilon-lisina (eps-Lys; Qmm. 6).

Otro ejemplo no limitante de un conector que comprende este primer elemento conector de Qmm. 3a es la Na,Na- dimetillisina, o mas bien un di-radical de este residuo (6-amino-(S)-2-(dimetilamino)hexanoilo). Asimismo, la Na,Na- dimetillisina se puede utilizar de manera preferente como un conector en su version omega, donde omega se refiere al hecho de que es el grupo amino en el atomo de C distal de la cadena sustituyente de alquilo el que se transforma en el radical (en *-NH). Asimismo, por lo general, en la presente la posicion omega de la Na,Na-dimetillisina se denomina la posicion epsilon (el atomo alfa es el atomo de C adyacente a la funcion de tipo acido carboxflico, y cada atomo de C anterior se designa entonces utilizando las letras griegas siguientes beta, gamma, delta y asi sucesivamente, hasta que se alcanza el atomo de C al que esta unido el grupo *-NH y es en el caso de la N,N- dimetillisina el atomo epsilon. En consecuencia, cuando w = 0, R1 y R2 representan ambos *-CH3, y q = 4, la formula Qmm. 3a se refiere a un di-radical de Na,Na-dimetil-epsilon-lisina (de manera resumida «N,N-dimetil-eps-Lys»; Qmm. 6a).

En una realization preferida, el primer elemento conector esta en su forma L.

El conector puede comprender una o dos veces Qmm. 3a). Cuando z es 2, los elementos Qmm. 3a estan interconectados preferentemente mediante un enlace de tipo amida. Por ejemplo, el conector puede comprender dos veces epsilon-Lys (2xeps-Lys; 2xQmm. 6).

El conector (cada uno del primer y segundo conector) puede adicionalmente (es decir, ademas de una o dos veces el primer elemento conector (A)) comprender uno o mas elementos conectores adicionales, por ejemplo, elementos conectores seleccionados de manera independiente entre el segundo (B) y/o tercer (C) elementos conectores, tal como se definen a continuacion:

Un segundo elemento conector (B):

Qmm. 12:

imagen3

donde k es un numero entero en el intervalo de 1-5 y n es un numero entero en el intervalo de 1-5.

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En una realization particular, cuando k = 1 y n = 1, este elemento conector se puede denominar OEG o acido 8- amino-3,6-dioxaoctanoico y/o puede estar representado por la siguiente formula:

Qmm. 12a *-NH-(CH2)2-O-(CH2)2-O-CH2-CO-*.

Un tercer elemento conector (C), acido gamma-glutamico (gGlu):

Qmm. 14:

imagen4

En el gamma-Glu (gGlu) es el grupo gamma-carboxi del aminoacido acido glutamico el que se utiliza aqm para la conexion a otro elemento conector, o el grupo epsilon-amino de la lisina.

En una realizacion particular no limitante, cada conector esta constituido por Qmm. 14 y dos veces Qmm. 6 (Qmm.14-2xQmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del resto de prolongation y en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o segundo residuo de K del analogo de GLP-1.

Por ejemplo, el primer conector esta constituido por (Qmm.14-2xQmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del primer resto de prolongacion y en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer residuo de K del analogo de GLP-1; y el segundo conector esta constituido por (Qmm.14-2xQmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del segundo resto de prolongacion y en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del segundo residuo de K del analogo de GLP-1.

Obviamente, tan solo para mantener un buen orden: Aqm y en adelante, la frase «en la secuencia indicada» significa que el extremo *-NH del primer elemento conector mencionado (aqm Qmm. 14) esta conectado al extremo CO-* del elemento prolongador y el extremo CO-* del ultimo elemento conector mencionado (aqm la ultima de las dos repeticiones de Qmm. 6) esta conectado al grupo epsilon-amino del residuo de K en cuestion del analogo de GLP-1.

Los derivados de la invention pueden existir en diferentes formas estereoisomericas que tienen la misma formula molecular y secuencia de atomos unidos, pero que difieren unicamente en la orientation tridimensional de sus atomos en el espacio. El estereoisomerismo de los derivados de la invencion ejemplificados se indica en la section experimental, tanto en los nombres como en las estructuras, utilizando la nomenclatura habitual. A menos que se indique lo contrario, la invencion se refiere a todas las formas estereoisomericas del derivado reivindicado.

La concentration en plasma de los derivados de GLP-1 de la invencion se puede determinar utilizando cualquier metodo adecuado. Por ejemplo, se puede utilizar LC-MS (cromatografia liquida-espectroscopia de masas) o inmunoensayos tales como RIA (radioinmunoensayo), ELISA (ensayo de inmunoadsorcion enzimatica) y LOCI (inmunoensayo de canalization de oxigeno luminiscente). Se pueden consultar protocolos generales para los ensayos adecuados de RIA y ELISA en, por ejemplo, las pags. 116-118 del documento WO09/030738. Un ensayo preferido es el ensayo LOCI, por ejemplo, descrito en el Ejemplo 24 de la presente.

Productos intermedios

Tambien se divulga un producto intermedio en forma de un analogo de GLP-1 seleccionado entre los siguientes analogos de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1): (i) 8Aib; (ii) 7Imp, 8Aib; (iii) 8Aib, 22E; o (iv) 8Aib, 22E, 30E; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de cualquiera de los analogos de (i), (ii), (iii) o (iv).

Tambien se divulga un producto intermedio en forma de un compuesto conector protegido novedoso que se puede utilizar en la smtesis del compuesto del Ejemplo 13 de la presente y compuestos similares, concretamente el compuesto acido (S)-2-dimetilamino-6-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)hexanoico, con la estructura de Qmm. 39:

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o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

Ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable

Los productos intermedios, analogos y derivados de la invencion pueden estar en forma de un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable.

Las sales se forman, por ejemplo, mediante una reaccion qmmica entre una base y un acido, por ejemplo: 2 NH3 + H2SO4 ^ (NH4)2SO4.

La sal puede ser una sal basica, una sal acida o puede que no sea ninguno de estos casos (es decir, una sal neutra). En agua, las sales basicas producen iones de hidroxido y las sales acidas iones de hidronio.

Las sales de los derivados de la invencion se pueden formar anadiendo cationes o aniones que reaccionan con los grupos anionicos o cationicos, respectivamente. Estos grupos pueden estar situados en el resto peptidico y/o en la cadena lateral de los derivados de la invencion.

Los ejemplos no limitantes de grupos anionicos de los derivados de la invencion incluyen grupos carboxflicos libres en la cadena lateral, en caso de que los haya, asi como tambien en el resto peptidico. El resto peptidico a menudo incluye un grupo de acido carboxflico libre en el extremo C y tambien puede incluir grupos carboxflicos libres en residuos aminoaddicos internos tales como Asp y Glu.

Los ejemplos no limitantes de grupos cationicos en el resto peptidico incluyen el grupo amino libre en el extremo N, si esta presente, asi como tambien cualquier grupo amino libre de los residuos aminoaddicos basicos internos tales como His, Arg y Lys.

El ester de los derivados de la invencion se puede formar, por ejemplo, mediante la reaccion de un grupo de acido carboxflico libre con un alcohol o un fenol, que da lugar al reemplazo de al menos un grupo hidroxilo por un grupo alcoxi o ariloxi.

El grupo carboxflico libre en el extremo C del peptido y/o cualquier grupo carboxflico libre en la cadena lateral puede participar en la formacion del ester.

La amida de los derivados de la invencion se puede formar, por ejemplo, mediante la reaccion de una forma activada de un grupo de acido carboxflico libre con una amina o una amina sustituida, o mediante la reaccion de un grupo amino libre o sustituido con una forma activada de un acido carboxflico.

En la formacion de la amida puede participar el grupo carboxflico libre en el extremo C del peptido, cualquier grupo carboxflico libre en la cadena lateral, el grupo amino libre en el extremo N del peptido y/o cualquier grupo amino libre o sustituido del peptido en el peptido y/o la cadena lateral.

En una realizacion particular, el peptido o el derivado esta en forma de una sal farmaceuticamente aceptable. En otra realizacion particular, el derivado esta en forma de una amida farmaceuticamente aceptable, preferentemente con un grupo amida en el extremo C del peptido. En una realizacion aun mas particular, el peptido o el derivado esta en forma de un ester farmaceuticamente aceptable.

Propiedades funcionales

En un primer aspecto, los derivados de la invencion tienen una buena potencia. Tambien, o como alternativa, en un segundo aspecto pueden tener un perfil farmacocinetico prolongado. Tambien, o como alternativa, en un tercer aspecto tienen una biodisponibilidad oral elevada. Tambien, o como alternativa, el numero de mutaciones en el peptido GLP-1 (analogo de GLP-1) es bajo.

Actividad biologica (potencia)

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De acuerdo con el primer aspecto, los derivados de la invencion, asf como tambien los peptidos GLP-1 constituyentes como tales, son potentes o activos desde un punto de vista biologico. De hecho, los derivados de la invencion tienen una potencia sorprendentemente buena.

Mas en particular, se ha demostrado que el elemento conector Qmm. 3a, de manera sorprendente e inesperada, es superior cuando se compara con los elementos conectores conocidos en lo que se refiere a la potencia o actividad biologica del producto final resultante, el derivado de GLP-1.

Por ejemplo, cuando se utiliza un conector constituido por (Qmm. 14-2xQmm.6) o (Qmm.14-2xQmm.6a), en lugar del conector "gGlu-2xOEG" (Qmm. 14-2xQmm. 13), que esta consolidado en la tecnica y tiene una reputacion muy buena, los derivados de GLP-1 resultantes de la presente invencion son, de manera sorprendente e inesperada, mucho mas potentes en comparacion con estos derivados de GLP-1 de vanguardia que son los mejores en su clase.

De manera sorprendente e inesperada, esto parece que es aun mas pronunciado cuando el prolongador es del tipo Qmm. 2, en comparacion con otros prolongadores de vanguardia y establecidos tales como los acidos alfa-omega- dicarboxflicos.

En una realizacion particular, la potencia y/o actividad se refiere a la potencia in vitro, es decir, el rendimiento en un ensayo del receptor de GLP-1 funcional, mas en concreto a la capacidad de activar el receptor de GLP-1 humano.

La potencia in vitro se puede determinar, por ejemplo, en un medio que contiene membranas que expresan el receptor de GLP-1 humano y/o en un ensayo con celulas enteras que expresan el receptor de GLP-1 humano.

Por ejemplo, las membranas plasmaticas purificadas de una lmea celular transfectada estable que expresan el receptor de GLP-1 se pueden estimular con el analogo o derivado de GLP-1 en cuestion y medir la potencia de la produccion de cAMP, por ejemplo, en funcion de la competencia entre el cAMP formado de manera endogena y el cAMP marcado con biotina anadido de manera exogena, que se puede capturar utilizando un anticuerpo espedfico, por ejemplo, tal como se describe en el Ejemplo 20.

Asimismo, o como alternativa, la respuesta del receptor de GLP-1 humano se puede medir en un ensayo con un gen indicador, por ejemplo, en una lmea celular BHK transfectada de manera estable que expresa el receptor de GLP-1 humano y contiene el ADN para el elemento de respuesta a cAMP (CRE, por sus siglas en ingles) acoplado a un promotor y el gen para la luciferasa de luciernaga (CRE luciferasa). Cuando se produce cAMP como resultado de la activacion del receptor de GLP-1 esto a su vez conlleva que se exprese la luciferasa. Se puede determinar la luciferasa anadiendo luciferina, que la enzima convierte en oxiluciferina y produce bioluminiscencia, que se mide y es una medida de la potencia in vitro. En el Ejemplo 21 se describe un ejemplo no limitante de un ensayo de este tipo.

La expresion «mitad de la concentracion eficaz maxima» (EC50) se refiere por lo general a la concentracion que induce una respuesta intermedia entre la lmea base y el maximo, haciendo referencia a la curva de respuesta a la dosis. La EC50 se utiliza como una medida de la potencia de un compuesto y representa la concentracion con la que se observa el 50% de su efecto maximo.

La potencia in vitro de los derivados de la invencion se puede determinar tal como se ha descrito anteriormente y determinar la EC50 del derivado en cuestion. Cuanto mas bajo sea el valor de la EC50, mejor sera la potencia.

En una realizacion mas particular, el derivado de la invencion tiene una potencia in vitro que corresponde a una EC50 igual o inferior a 10 000 pM, mas preferentemente inferior a 5000 pM, aun mas preferentemente inferior a 1000 pM o de la manera mas preferida inferior a 500 pM (por ejemplo, determinada tal como se describe en el Ejemplo 20). En una realizacion aun mas particular, el derivado de la invencion tiene una potencia que corresponde a una EC50 con un 0% de HSA inferior a 400 pM, preferentemente inferior a 300 pM, mas preferentemente inferior a 200 pM, aun mas preferentemente inferior a 150 pM o de la manera mas preferida inferior a 100 pM (por ejemplo, determinada tal como se describe en el Ejemplo 21).

Asimismo, o como alternativa, la capacidad de los derivados de la invencion de unirse al receptor de GLP-1 (afinidad por el receptor) se puede medir y, si es relevante, utilizar como una medida de la actividad GLP-1. Por ejemplo, las membranas plasmaticas purificadas de una lmea celular transfectada estable que expresa el receptor de GLP-1 humano se puede estimular con el analogo o derivado de GLP-1 en cuestion y medir su capacidad de desplazar 125I- GLP-1 del receptor. Esto se puede determinar, por ejemplo, tal como se describe en el Ejemplo 22. Por lo general, la union al receptor de GLP-1 con una concentracion baja de albumina debe ser tan buena como sea posible, lo que corresponde a un valor de IC50 bajo. En realizaciones particulares, el valor de IC50 de un derivado de la invencion, en presencia de un 0.001% de HSA (poca albumina) es inferior al valor correspondiente de IC50 para la semaglutida, preferentemente inferior a un 90% de este, mas preferentemente inferior a un 80% de este, aun mas preferentemente inferior a un 70% de este o de la manera mas preferida inferior a un 50% de este.

En otra realizacion particular, los derivados de la invencion son potentes in vivo, lo que se puede determinar tal como existe constancia en la tecnica en cualquier modelo en animales adecuado asf como tambien en ensayos clmicos.

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El raton diabetico db/db es un ejemplo de un modelo en animales adecuado y el efecto hipoglucemico en sangre y/o el efecto de perdida de peso corporal se puede determinar en tales ratones in vivo, para el efecto de perdida de peso corporal preferentemente despues de una administracion de una unica dosis.

El cerdo LYD es otro ejemplo de un modelo en animales adecuado y la reduccion de la ingesta de alimentos se puede determinar en un estudio PD en tales cerdos in vivo, por ejemplo, tal como se describe en el Ejemplo 25. Los derivados de la invencion son muy potentes in vivo, lo que se pone en evidencia por una apreciable reduccion en la ingesta de alimentos en este estudio PD en cerdos.

Prolongacion - union al receptor/poca y mucha albumina

De acuerdo con el segundo aspecto, los derivados de la invencion son prolongados.

La capacidad de los derivados de la invencion para unirse al receptor de GLP-1 en presencia de una concentracion baja y elevada de albumina, respectivamente, se puede determinar tal como se describe en el Ejemplo 22.

Por lo general, la union al receptor de GLP-1 con una concentracion baja de albumina debe ser tan buena como sea posible, lo que corresponde a un valor de IC50 bajo.

El valor de IC50 con una concentracion elevada de albumina es una medida de la influencia de la albumina en la union del derivado al receptor de GLP-1. Tal y como se sabe, los derivados de GLP-1 tambien se unen a la albumina. Por lo general, este es un efecto deseable, que prolonga su permanencia en el plasma. Por lo tanto, el valor de IC50 con una concentracion elevada de albumina sera, por lo general, mas elevado que el valor de IC50 con una concentracion baja de albumina, lo que corresponde a una reduccion de la union al receptor de GLP-1 provocada por la union de la albumina que compite por la union al receptor de GLP-1.

Asimismo, o como alternativa, la union de los derivados a la albumina se puede medir utilizando el ensayo del Ejemplo 21, que se puede llevar a cabo tanto en ausencia de albumina serica como en presencia de albumina serica. Un aumento de la potencia in vitro, valor de EC50, en presencia de albumina serica indica una afinidad por la albumina serica y representa un metodo para predecir un perfil farmacocinetico prolongado de la sustancia de prueba en los modelos en animales.

Prolongacion - semivida in vivo

De acuerdo con el segundo aspecto, los derivados de la invencion son prolongados.

La prolongacion se puede determinar como semivida de eliminacion (Ty2) in vivo en ratas despues de la administracion i.v., tal como se describe en el Ejemplo 24. En realizaciones particulares, la semivida en ratas es de al menos 10 horas, preferentemente al menos 12 horas o de la manera mas preferida al menos 15 horas.

O, la prolongacion se puede determinar en otra especie animal, por ejemplo, como semivida de eliminacion (Ty2) in vivo en minicerdos despues de la administracion i.v., tal como se describe en el Ejemplo 23. En realizaciones particulares, la semivida de eliminacion en minicerdos es de al menos 8 horas, preferentemente al menos 24 horas, aun mas preferentemente al menos 40 horas, todavfa mas preferentemente al menos 60 horas o de la manera mas preferida al menos 80 horas.

Sorprendentemente, los inventores de la presente identificaron una clase novedosa de derivados de GLP-1 objeto de la presente invencion, que tienen una potencia elevada y a la vez, preferentemente, una semivida larga.

Biodisponibilidad oral

De acuerdo con el tercer aspecto, los derivados de la invencion tienen una elevada biodisponibilidad oral.

La biodisponibilidad oral de los derivados de GLP-1 comerciales es muy baja. La biodisponibilidad oral de los derivados de GLP-1 en desarrollo para la administracion i.v. o s.c. tambien es baja.

En consecuencia, en la tecnica se necesitan derivados de GLP-1 con una mejor biodisponibilidad oral. Tales derivados podnan ser candidatos adecuados para la administracion oral, siempre que, por lo general, su potencia sea principalmente satisfactoria y/o siempre que su semivida sea tambien, por lo general, satisfactoria.

Por lo general, el termino biodisponibilidad se refiere a la fraccion de una dosis administrada de un principio activo farmaceutico (API, por sus siglas en ingles), tal como un derivado de la invencion, que alcanza la circulacion sistemica sin haber variado. Por definicion, cuando se administra un API por via intravenosa, su biodisponibilidad es un 100%. Sin embargo, cuando se administra mediante otras vfas (tal como via oral) su biodisponibilidad disminuye (debido a la degradacion y/o absorcion completa y metabolismo de primer paso). La informacion sobre la biodisponibilidad es importante cuando se calculan las dosificaciones para las vfas de administracion no intravenosa.

La biodisponibilidad oral absoluta compara la biodisponibilidad (estimada como el area bajo la curva o AUC) del API en la circulacion sistemica tras la administracion oral, con la biodisponibilidad del mismo API tras la administracion

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intravenosa. Es la fraccion del API absorbido mediante la administracion que no es intravenosa comparada con la administracion intravenosa correspondiente del mismo API. Si se utilizan diferentes dosis la comparacion se debe normalizar respecto a la dosis; en consecuencia cada AUC se corrige dividiendo por la correspondiente dosis administrada.

Se obtiene un grafico de la concentracion plasmatica del API frente al tiempo despues de la administradon oral e intravenosa. La biodisponibilidad absoluta (F) es, con la correccion para la dosis, la AUC oral dividida por la AUC intravenosa.

En una realizacion particular, el derivado de la invencion tiene una biodisponibilidad oral absoluta que es superior que la de la semaglutida, preferentemente al menos un 10% superior, mas preferentemente al menos un 20% superior, aun mas preferentemente al menos un 30% superior o de la manera mas preferida al menos un 40% superior. En realizaciones particulares adicionales, tiene una biodisponibilidad oral absoluta que es al menos 1.5 veces la de la semaglutida, preferentemente al menos 2.0 veces, mas preferentemente al menos 3.0 veces, aun mas preferentemente al menos 4.0 veces o de la manera mas preferida al menos 5.0 veces la de la semaglutida.

Antes de estudiar la biodisponibilidad oral, los derivados de la invencion se pueden formular de manera conveniente tal como existe constancia en el campo de las formulaciones orales de los compuestos insulinotropicos, por ejemplo, utilizando una o mas cualesquiera de las formulaciones descritas en el documento WO 2008/145728.

En una realizacion particular, los derivados de la invencion tienen una estabilidad gastrointestinal muy buena. La estabilidad gastrointestinal se puede determinar in vitro, incubando el derivado con un extracto del sistema gastrointestinal de seres humanos diluido de manera adecuada, o de una especie animal relevante tal como minicerdos, cerdos LYD, perros o ratas, en condiciones relevantes desde un punto de vista fisiologico y durante un periodo de tiempo relevante desde un punto de vista fisiologico. La estabilidad se puede mejorar aun mas cuando el derivado se combina con uno o mas inhibidores enzimaticos relevantes en una cantidad eficaz. La estabilidad gastrointestinal in vitro se puede medir utilizando metodos habituales conocidos en la tecnica. Preferentemente, la estabilidad gastrointestinal de los derivados de la invencion mejora en comparacion con la semaglutida y/o en comparacion con el derivado del Ejemplo 2 del documento WO 2011/080103 A1. Preferentemente, el derivado de la invencion es al menos tan estable como cualquiera de estos dos compuestos comparativos, preferentemente la estabilidad mejora en al menos un 10%, al menos un 20%, al menos un 30%, al menos un 40% o al menos un 50%; mas preferentemente en al menos un 75%, al menos un 100%, al menos un 150%, al menos un 175% o al menos un 200%, en comparacion con la estabilidad de cualquiera de estos dos compuestos comparativos.

Propiedades bioffsicas

De acuerdo con el cuarto aspecto, los derivados de la invencion tienen buenas propiedades biofisicas. Estas propiedades incluyen, sin caracter limitante, estabilidad ffsica y/o solubilidad. Se pueden medir estas y otras propiedades bioffsicas utilizando metodos habituales conocidos en el campo de la qrnmica de protemas. En una realizacion particular, estas propiedades mejoran en comparacion con el GLP-1 natural (SEQ ID NO:1). La variacion de las propiedades oligomericas de los derivados puede ser responsable al menos en parte de la mejora de las propiedades bioffsicas.

Se describen realizaciones particulares adicionales de los derivados de la invencion en las secciones tituladas «REALIZACIONES PARTICULARES» y «REALIZACIONES PARTICULARES ADICIONALES» antes de la seccion experimental.

Procesos de produccion

La produccion de peptidos como el GLP-1 (7-37) y analogos de GLP-1 es muy conocida en la tecnica.

El resto GLP-1 de los derivados de la invencion, es decir, GLP-1 (7-37) o un analogo de este, se puede generar, por ejemplo, mediante la smtesis clasica de peptidos, por ejemplo, smtesis de peptidos en fase solida utilizando la qrnmica de t-Boc o Fmoc u otras tecnicas muy consolidadas; remftase, por ejemplo, a Greene y Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, 1999, Florencio Zaragoza Dorwald, "Organic Synthesis on solid Phase", Wiley-VCH Verlag GmbH, 2000, y "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis", editado por W.C. Chan y P.D. White, Oxford University Press, 2000.

Asimismo, o como alternativa, se pueden producir mediante metodos recombinantes, es decir, cultivando una celula hospedadora que contiene una secuencia de ADN que codifica el analogo y es capaz de expresar el peptido en un medio nutriente adecuado en condiciones que permiten la expresion del peptido. Son ejemplos no limitantes de celulas hospedadoras adecuadas para la expresion de estos peptidos: Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, asf como tambien las lmeas celulares de mairffferos BHK o CHO.

Estos derivados de la invencion que incluyen aminoacidos no naturales y/o mimeticos mono- o dipepffdicos N- terminales unidos covalentemente se pueden producir, por ejemplo, tal como se describe en la parte experimental. O remftase, por ejemplo, a Hodgson et al.: "The synthesis of peptides and proteins containing non-natural amino acids",

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Chemical Society Reviews, vol. 33, n.° 7 (2004), pags. 422-430; y el documento WO 2009/083549 A1 titulado "Semirecombinant preparation of GLP-1 analogues".

En la parte experimental se incluyen ejemplos espedficos de metodos para preparar varios de los derivados de la invencion.

Composiciones farmaceuticas

La composicion farmaceutica que comprende un derivado de la invencion, o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este, y un excipiente farmaceuticamente aceptable se puede preparar tal como se conoce en la tecnica.

El termino «excipiente» se refiere de manera amplia a cualquier componente que no es el principio o principios activos terapeuticos. El excipiente puede ser una sustancia inerte, una sustancia inactiva y/o una sustancia que no es activa como un medicamento.

El excipiente puede tener varias finalidades, por ejemplo, como portador, vetuculo, diluyente, adyuvante del comprimido y/o para mejorar la administracion y/o la absorcion de la sustancia activa.

En la tecnica existe constancia de la formulacion de principios farmaceuticamente activos con varios excipientes, remftase, por ejemplo, a Remington: The Science and Practice of Pharmacy (por ejemplo, 19.a edicion (1995), y cualesquiera ediciones posteriores).

Son ejemplos no limitantes de los excipientes: los disolventes, diluyentes, tampones, conservantes, agentes reguladores de la tonicidad, agentes quelantes y estabilizantes.

Los ejemplos de las formulaciones incluyen formaciones lfquidas, es decir, formulaciones acuosas, es decir, formulaciones que comprenden agua. Una formulacion lfquida puede ser una solucion o una suspension. Una formulacion acuosa comprende normalmente al menos un 50% en peso de agua o al menos un 60%, 70%, 80% o incluso al menos un 90% en peso de agua.

Como alternativa, una composicion farmaceutica puede ser una formulacion solida, por ejemplo, una composicion liofilizada o secada por aspersion, que se puede utilizar tal cual o a la que el medico o el paciente anade disolventes y/o diluyentes antes de su uso.

El pH en una formulacion acuosa puede tener cualquier valor entre pH 3 y pH 10, por ejemplo, de aproximadamente 7.0 a aproximadamente 9.5; o de aproximadamente 3.0 a aproximadamente 7.0.

Una composicion farmaceutica puede comprender un tampon. El tampon se puede seleccionar, por ejemplo, a partir del grupo constituido por acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, dihidrogenofosfato de sodio, hidrogenofosfato de disodio, fosfato de sodio y tris(hidroximetil)aminometano, bicina, tricina, acido malico, succinato, acido maleico, acido fumarico, acido tartarico, acido aspartico y mezclas de estos.

Una composicion farmaceutica puede comprender un conservante. El conservante se puede seleccionar, por ejemplo, a partir del grupo constituido por fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p- hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol, p-hidroxibenzoato de butilo, 2-feniletanol, alcohol bendlico, clorobutanol y tiomerosal, bronopol, acido benzoico, imidurea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p- hidroxibenzoato de etilo, cloruro de benzetonio, clorfenesina (3p-clorfenoxipropano-1,2-diol) y mezclas de estos. El conservante puede estar presente con una concentracion de 0.1 mg/mL a 20 mg/mL

Una composicion farmaceutica puede comprender un agente isotonico. El agente isotonico se puede seleccionar, por ejemplo, a partir del grupo constituido por una sal (por ejemplo, cloruro de sodio), un azucar o azucar alcoholico, un aminoacido (por ejemplo, glicina, histidina, arginina, lisina, isoleucina, acido aspartico, triptofano, treonina), un alditol (por ejemplo, glicerol (glicerina), 1,2-propanodiol (propilenglicol), 1,3-propanodiol, 1,3-butanodiol), polietilenglicol (por ejemplo, PEG400) y mezclas de estos. Se puede utilizar cualquier azucar tal como mono-, di- o polisacaridos, o glucanos hidrosolubles, que incluyen, por ejemplo, fructosa, glucosa, manosa, sorbosa, xilosa, maltosa, lactosa, sacarosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina ciclodextrina, alfa y beta HPCD, almidon soluble, almidon hidroxietilico y carboximetilcelulosa-Na. Un azucar alcoholico se define como un hidrocarburo C4-C8 que contiene al menos un grupo -OH e incluye, por ejemplo, manitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol.

Una composicion farmaceutica puede comprender un agente quelante. Se puede seleccionar un agente quelante, por ejemplo, entre sales de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA), acido dtrico y acido aspartico, y mezclas de estas.

Una composicion farmaceutica puede comprender un estabilizante. El estabilizante puede ser, por ejemplo, uno o mas inhibidores de la oxidacion, inhibidores de la agregacion, surfactantes y/o uno o mas inhibidores de proteasas.

La expresion «formacion de agregados» se refiere a una interaccion ffsica entre las moleculas polipeptfdicas que da como resultado la formacion de oligomeros, que pueden seguir siendo solubles, o agregados grandes visibles que

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precipitan a partir de la solucion. La formacion de agregados por parte de un polipeptido durante el almacenamiento de una composicion farmaceutica Kquida puede afectar de manera adversa la actividad biologica de ese polipeptido, lo que da como resultado una perdida de la eficacia terapeutica de la composicion farmaceutica. Ademas, la formacion de agregados puede provocar otros problemas tales como el bloqueo de tubos, membranas o bombas cuando se administra la composicion farmaceutica que contiene el polipeptido utilizando un sistema de infusion.

Una composicion farmaceutica puede comprender una cantidad de una base de tipo aminoacido suficiente para disminuir la formacion de agregados del peptido durante el almacenamiento de la composicion. La expresion «base de tipo aminoacido» se refiere a uno o mas aminoacidos (tales como metionina, histidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, acido aspartico, triptofano o treonina) o analogos de estos. Cualquier aminoacido puede estar presente en su forma basica libre o en su forma salina. Puede estar presente cualquier esteroisomero (es decir, L, D o una mezcla de estos) de la base de tipo aminoacido.

Se puede anadir metionina (u otros aminoacidos sulfuricos o analogos de aminoacidos) para inhibir la oxidacion de los residuos de metionina en sulfoxido de metionina cuando el peptido es un polipeptido que comprende al menos un residuo de metionina susceptible de tal oxidacion. Se puede utilizar cualquier estereoisomero de la metionina (L o D) o combinaciones de estos.

Una composicion farmaceutica puede comprender un estabilizador seleccionado a partir del grupo de polfmeros de peso molecular elevado o compuestos moleculares bajos. El estabilizador se puede seleccionar entre polietilenglicol (por ejemplo, PEG 3350), alcohol polivimlico (PVA), polivinilpirrolidona, carboxi-/hidroxicelulosa o derivados de esta (por ejemplo, HPC, HPC-SL, HPC-L y HPMC), ciclodextrinas, sustancias que contienen azufre como monotioglicerol, acido tioglicolico y 2-metiltioetanol y diferentes sales (por ejemplo, cloruro de sodio).

Una composicion farmaceutica puede comprender agentes estabilizantes adicionales tales como, sin caracter limitante, metionina y EDTA, que protegen el polipeptido contra la oxidacion de la metionina y un surfactante no ionico, que protege el polipeptido contra la agregacion asociada con la congelacion-descongelacion o el cizallamiento mecanico.

Una composicion farmaceutica puede comprender uno o mas surfactantes, por ejemplo, un surfactante, al menos un surfactante o diferentes surfactantes. El termino «surfactante» se refiere a cualesquiera moleculas o iones que comprenden una parte hidrosoluble (hidrofila) y una parte liposoluble (lipofila). El surfactante se puede seleccionar, por ejemplo, a partir del grupo constituido por surfactantes anionicos, surfactantes cationicos, surfactantes no ionicos y/o surfactantes zwitterionicos.

Una composicion farmaceutica puede comprender uno o mas inhibidores de proteasas tales como, por ejemplo, EDTA (acido etilendiaminotetraacetico) y/o benzamidinaHCl.

Los ingredientes adicionales, opcionales, de una composicion farmaceutica incluyen, por ejemplo, agentes humectantes, emulsionantes, antioxidantes, agentes formadores de masa, iones metalicos, vehfculos oleaginosos, protemas (por ejemplo, albumina serica humana o gelatina) y/o un zwitterion (por ejemplo, un aminoacido tal como la betama, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina).

Aun mas, se puede formular una composicion farmaceutica tal como existe constancia en el campo de las formulaciones orales de los compuestos insulinotropicos, por ejemplo, utilizando una o mas cualesquiera de las formulaciones descritas en el documento WO 2008/145728.

Una dosis administrada puede contener 0.01 mg -100 mg del derivado, o 0.01-50 mg, o 0.01-20 mg, o 0.01 mg -10 mg del derivado.

El derivado se puede administrar en forma de una composicion farmaceutica. Se puede administrar a un paciente que lo necesite en varios puntos, por ejemplo, en puntos topicos tales como la piel o puntos mucosales; en puntos en los que no se produzca absorcion tales como en una arteria, en una vena o en el corazon; y en puntos que conlleven absorcion tales como en la piel, bajo la piel, en un musculo o en el abdomen.

La via de administracion puede ser, por ejemplo, lingual; sublingual; bucal; en la boca; oral; en el estomago; en el intestino; nasal; pulmonar, tal como a traves de los bronquiolos, los alveolos o una combinacion de estos; parenteral, epidermica; dermica; transdermica; conjuntival; uretral; vaginal; rectal; y/o ocular. En una realizacion particular, la via de administracion es oral.

Se puede administrar una composicion en varias formas farmaceuticas, por ejemplo, como una solucion; una suspension; una emulsion; una microemulsion; emulsiones multiples; una espuma; un balsamo; una pasta; una escayola; un unguento; un comprimido; un comprimido recubierto; un chicle; un enjuague; una capsula tal como capsulas de gelatina duras o blandas; un supositorio; una capsula rectal; gotas; un gel; un espray; un polvo; un aerosol; un inhalatorio; gotas oftalmicas; un unguento oftalmico; un enjuague oftalmico; un ovulo vaginal; un anillo vaginal; un unguento vaginal; una solucion para inyeccion; una solucion de transformacion in situ tal como gelificacion in situ, endurecimiento, precipitacion y cristalizacion in situ; una solucion para infusion; o como un implante. Ademas, se puede mezclar una composicion en un portador farmacologico o sistema de suministro

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farmacologico, por ejemplo, para mejorar la estabilidad, biodisponibilidad y/o solubilidad. Se puede unir una composicion a un sistema de este tipo mediante interacciones covalentes, hidrofobas y/o electrostaticas. El objetivo de tal mezcla puede ser, por ejemplo, reducir los efectos adversos, conseguir la cronoterapia y/o aumentar el cumplimiento terapeutico del paciente.

Tambien se puede utilizar una composicion en la formulacion de sistemas de suministro farmacologico de liberacion controlada, sostenida, prolongada, retardada y/o lenta.

Se puede llevar a cabo la administracion parenteral mediante inyeccion subcutanea, intramuscular, intraperitoneal o intravenosa utilizando una jeringuilla, opcionalmente una jeringuilla en forma de boffgrafo o mediante una bomba de infusion.

Se puede administrar una composicion por via nasal en forma de una solucion, una suspension o un polvo; se puede administrar por via pulmonar en forma de un espray en polvo o ffquido.

La administracion transdermica es otra opcion adicional mas, por ejemplo, mediante inyeccion sin jeringuilla, desde un parche tal como un parche iontoforetico o mediante una via transmucosal, por ejemplo, por via bucal.

Una composicion puede ser una composicion estabilizada. La expresion «formulacion estabilizada» se refiere a una formulacion con una mayor estabilidad ffsica y/o qmmica, preferentemente ambas. En general, una formulacion debe ser estable durante su uso y almacenamiento (de acuerdo con las condiciones de almacenamiento y uso recomendadas) hasta que se alcance la fecha de caducidad.

La expresion «estabilidad ffsica» se refiere a la tendencia del polipeptido a formar agregados insolubles y/o inactivos desde un punto de vista biologico como resultado de la exposicion al estres termomecanico y/o interaccion con interfases y superficies (tales como superficies hidrofobas) desestabilizantes. La estabilidad ffsica de una formulacion polipepffdica acuosa se puede evaluar por medio de la inspeccion visual y/o mediante medidas de la turbidez despues de la exposicion a un estres mecanico/ffsico (por ejemplo, agitacion) a diferentes temperaturas durante diferentes periodos de tiempo. Como alternativa, se puede evaluar la estabilidad ffsica utilizando un agente espectroscopico o sonda del estado conformacional del polipeptido tal como, por ejemplo, tioflavina T o sondas del «parche hidrofobico».

La expresion «estabilidad qmmica» se refiere a los cambios qmmicos (en particular covalentes) en la estructura del polipeptido que dan lugar a la formacion de productos de degradacion qmmica que tienen potencialmente una menor potencia biologica y/o un mayor efecto inmunogeno en comparacion con el polipeptido intacto. Se puede evaluar la estabilidad qmmica midiendo la cantidad de productos de degradacion qmmica en diferentes puntos temporales despues de la exposicion a diferentes condiciones ambientales, por ejemplo, mediante SEC-HPLC y/o RP-HPLC.

El tratamiento con un derivado de acuerdo con la presente invencion tambien se puede combinar con una o mas sustancias activas desde un punto de vista farmacologico adicionales, por ejemplo, seleccionadas entre agentes antidiabeticos, agentes contra la obesidad, agentes reguladores del apetito, agentes contra la hipertension, agentes para el tratamiento y/o la prevencion de complicaciones resultantes de la diabetes o asociadas con ella y agentes para el tratamiento y/o la prevencion de complicaciones y trastornos resultantes de la obesidad o asociados con ella. Son ejemplos de estas sustancias activas desde un punto de vista farmacologico: La insulina, sulfonilureas, biguanidas, meglitinidas, inhibidores de glucosidasas, antagonistas de glucagon, inhibidores de DPP-IV (dipeptidilpeptidasa-IV), inhibidores de enzimas hepaticas que participan en la estimulacion de la gluconeogenesis y/o glucogenolisis, moduladores de la captacion de glucosa, compuestos que modifican el metabolismo de los ffpidos tales como agentes antihiperlipidemicos como inhibidores de HMG CoA (estatinas), polipeptidos inhibidores gastricos (analogos de GIP), compuestos que reducen la ingesta de alimentos, agonistas de RXR y agentes que actuan en el canal de potasio dependiente de ATP de las celulas p; colestiramina, colestipol, clofibrato, gemfibrozil, lovastatina, pravastatina, simvastatina, probucol, dextrotiroxina, neteglinida, repaglinida; bloqueadores p tales como alprenolol, atenolol, timolol, pindolol, propranolol y metoprolol, inhibidores de ACE (enzima convertidora de angiotensina) tales como benazepril, captopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, alatriopril, quinapril y ramipril, bloqueadores del canal del calcio tales como nifedipina, felodipina, nicardipina, isradipina, nimodipina, diltiazem y verapamil, y bloqueantes a tales como doxazosina, urapidil, prazosina y terazosina; agonistas de tipo CART (transcrito regulado de cocama y anfetamina), antagonistas de tipo NPY (neuropeptido Y), agonistas de tipo PPY, agonistas del receptor Y2, agonistas del receptor Y4, agonistas del receptor mixto Y2/Y4, agonistas de MC4 (melanocortina 4), antagonistas de tipo orexina, agonistas de tipo TNF (factor de necrosis tumoral), agonistas de tipo CRF (factor liberador de corticotropina), antagonistas de tipo CRF BP (protema de union al factor liberador de corticotropina), agonistas de tipo urocortina, agonistas de p3, oxintomodulina y analogos, agonistas de tipo MSH (hormona estimuladora de melanocitos), antagonistas de tipo MCH (hormona concentradora de melanocitos), agonistas de tipo CCK (colecistocinina), inhibidores de la recaptacion de serotonina, inhibidores de la recaptacion de serotonina y noradrenalina, compuestos noradrenergicos y de serotonina mixtos, agonistas de tipo 5HT (serotonina), agonistas de tipo bombesina, antagonistas de tipo galanina, hormona del crecimiento, compuestos liberadores de la hormona del crecimiento, agonistas de tipo TRH (hormona liberadora de tireotropina), moduladores de UCP 2 o 3 (protema desacopladora 2 o 3), agonistas de tipo leptina, agonistas de tipo DA (bromocriptina, doprexina),

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inhibidores de lipasas/amilasas, moduladores de RXR (receptor retinoide X), agonistas de TR p; antagonistas de tipo histamina H3, agonistas o antagonistas del polipeptido inhibidor gastrico, gastrina y analogos de gastrina.

El tratamiento con un derivado de acuerdo con esta invencion tambien se puede combinar con una cirug^a que influencie la cantidad de glucosa y/o homeostasis lipfdica tal como el cerclaje gastrico o la derivacion gastrica.

Indicaciones farmaceuticas

La presente invencion tambien se refiere al uso de un derivado de la invencion como un medicamento.

En realizaciones particulares, el derivado de la invencion se puede utilizar para los siguientes tratamientos medicos, todos relacionados preferentemente de una manera u otra con la diabetes:

(i) prevencion y/o tratamiento de todas las formas de diabetes, tales como la hiperglucemia, diabetes de tipo 2, tolerancia alterada a la glucosa, diabetes de tipo 1, diabetes no dependiente de la insulina, MODY (diabetes del adulto de comienzo juvenil), diabetes gestacional y/o para reducir HbAIC;

(ii) retraso o prevencion de la evolucion de la enfermedad diabetica, tal como evolucion de la diabetes de tipo 2, retraso de la evolucion de la tolerancia alterada a la glucosa (IGT, por sus siglas en ingles) en diabetes de tipo 2 que requiere insulina y/o retraso de la evolucion de la diabetes de tipo 2 que no requiere insulina en diabetes de tipo 2 que requiere insulina;

(iii) mejora de la funcion de las celulas p, tal como disminucion de la apoptosis de las celulas p, aumento de la funcion de las celulas p y/o masa de las celulas p y/o para restaurar la sensibilidad a la glucosa de las celulas p;

(iv) prevencion y/o tratamiento de trastornos cognitivos;

(v) prevencion y/o tratamiento de trastornos de la alimentacion tales como la obesidad, por ejemplo, mediante la disminucion de la ingesta de alimentos, reduccion del peso corporal, supresion del apetito, induccion de la saciedad; tratamiento o prevencion del trastorno de sobreingesta compulsiva, bulimia nerviosa y/u obesidad inducida por la administracion de un antipsicotico o un esteroide; reduccion de la movilidad gastrica y/o retraso del vaciado gastrico;

(vi) prevencion y/o tratamiento de complicaciones diabeticas, tales como la neuropatfa que incluye la neuropatfa periferica; nefropatia por retinopatfa;

(vii) mejora de los parametros lipfdicos tales como la prevencion y/o tratamiento de la dislipidemia, reduccion de los lfpidos sericos totales; reduccion del HDL; reduccion del LDL pequeno y denso; reduccion del VLDL:

(viii) reduccion de los trigliceridos; reduccion del colesterol; aumento del HDL; reduccion de la cantidad plasmatica de lipoprotema a (Lp(a)) en un ser humano; inhibicion de la generacion de la apolipoprotema a (apo(a)) in vitro y/o in vivo;

(ix) (iix) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cardiovasculares tales como el smdrome X; aterosclerosis; infarto de miocardio; cardiopatfa coronaria; accidente cerebrovascular, isquemia cerebral; una enfermedad cardfaca temprana o cardiovascular temprana tal como la hipertrofia ventricular izquierda; arteriopatfa coronaria; hipertension esencial; urgencia hipertensiva aguda; cardiomiopatfa; insuficiencia cardiaca; tolerancia al esfuerzo; insuficiencia cardiaca cronica; arritmia; disritmia cardfaca; smcope; aterosclerosis; insuficiencia cardiaca cronica moderada; angina de pecho; reoclusion de la derivacion cardiaca; claudicacion intermitente (atheroschlerosis oblitterens); disfuncion diastolica; y/o disfuncion sistolica;

(x) prevencion y/o tratamiento de enfermedades gastrointestinales tales como el smdrome del intestino irritable; smdrome del intestino delgado o enfermedad de Crohn; dispepsia; y/o ulceras gastricas;

(xi) prevencion y/o tratamiento de enfermedades cnticas, tal como el tratamiento de un paciente enfermo en estado cntico, un paciente con una enfermedad por polinefropatfa cntica (CIPNP, por sus siglas en ingles) y/o un potencial paciente de CIPNP; prevencion de la enfermedad cntica o desarrollo de CIPNP; prevencion, tratamiento y/o cura del smdrome de la respuesta inflamatoria sistemica (SIRS, por sus siglas en ingles) en un paciente; y/o para la prevencion o reduccion de la probabilidad de que un paciente padezca una bactericemia, septicemia y/o choque septico durante la hospitalizacion; y/o

(xii) prevencion y/o tratamiento del smdrome del ovario poliqrnstico (PCOS, por sus siglas en ingles).

En una realizacion particular, la indicacion se selecciona a partir del grupo constituido por (i)-(iii) y (v)-(iix), tal como las indicaciones (i), (ii), y/o (iii); o la indicacion (v), indicacion (vi), indicacion (vii), y/o la indicacion (iix).

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En otra realizacion particular, la indicacion es (i). En una realizacion mas particular, la indicacion es (v). En una realizacion aun mas particular, la indicacion es (v).

Son especialmente preferidas las siguientes indicaciones: Diabetes de tipo 2 y/u obesidad.

Realizaciones particulares

Las siguientes son realizaciones particulares de la invencion:

1. Un derivado de un peptido GLP-1,

donde el peptido comprende un primer residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP-1 (737) (SEQ iD NO:1), un segundo residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y ocho cambios de aminoacidos como maximo en comparacion con GLP-1 (7-37),

donde el derivado comprende dos restos de prolongacion unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, mediante un conector, donde

el resto de prolongacion es Qmm. 2:

Qmm. 2 : HOOC-CaH4-O-(CH2)y-CO-*,

en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13; y

el conector comprende

Qmm. 3a : *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NR-,R2]-CO-*,

donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, R1 y R2 representan de manera independiente *-H o *-CH3 y w es un numero entero en el intervalo de 0-5;

o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

2. El derivado de la realizacion 1, donde w es 0.

3. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, donde el conector comprende

Qmm. 4a : *-NH-(CH2)q-CH(NR-,R2)-CO-*.

4. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-3, donde q su numero entero en el intervalo de 3-5.

5. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-4, donde q es 4.

6. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-5, donde R1 y R2 son identicos.

7. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-6, donde R1 y R2 representan ambos *-H.

8. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-7, donde el conector comprende

Qmm. 3 : *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NH2]-CO-*.

9. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-8, donde el conector comprende

Qmm. 4 : *-NH-(CH2)q-CH(NH2)-CO-*.

10. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-9, donde Qmm. 3a es un di-radical de lisina.

11. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-10, donde Qmm. 4a es un di-radical de lisina.

12. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-11, donde Qmm. 3 es un di-radical de lisina.

13. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-12, donde Qmm. 4 es un di-radical de lisina.

14. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-13, donde el conector comprende

Qmm. 6 : *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*.

15. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-14, donde R1 y R2 representan ambos *-CH3.

16. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-15, donde Qmm. 3a es un di-radical de un residuo de Na,Na- dimetillisina (6-amino-(S)-2-(dimetilamino)hexanoilo).

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17. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-16, donde Qmm. 4a es un di-radical de lisina.

18. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-17, donde el conector comprende

Qmm. 6a : *-NH-(CH2)4-CH(N(CHs)2)-CO-*.

19. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-18, donde el conector comprende z veces Qmm. 3a, donde z es un numero entero en el intervalo de 1-2.

20. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-19, donde el conector comprende z veces Qmm. 4a, donde z es un numero entero en el intervalo de 1-2.

21. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-20, donde el conector comprende z veces Qmm. 3, donde z es un numero entero en el intervalo de 1-2.

22. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-21, donde el conector comprende z veces Qmm. 4, donde z es un numero entero en el intervalo de 1-2.

23. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-22, donde el conector comprende z veces Qmm. 6a, donde z es un numero entero en el intervalo de 1-2.

24. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-23, donde el conector comprende z veces Qmm. 6, donde z es un numero entero en el intervalo de 1-2.

25. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-24, donde z es 1.

26. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-25, donde z es 2.

27. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-26, donde cuando z es 2, los dos elementos Qmm. 3a, Qmm.

4a, Qmm. 3, Qmm. 4, Qmm. 6a, o Qmm. 6, respectivamente, estan interconectados mediante un enlace de tipo

amida.

28. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-27, donde el conector comprende

2xQmm.6 : *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*.

29. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-28, donde el conector comprende 2xQmm. 6a: *-NH-(CH2)4- CH(N(CHs)2)-CO-NH-(CH2)4-CH(N(CHs)2)-CO-*.

30. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-29, donde el elemento Qmm. 3a, Qmm. 4a, Qmm. 3, Qmm. 4, Qmm. 6a, Qmm. 6, 2xQmm. 6, o 2xQmm. 6a, respectivamente, esta conectado en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o el segundo residuo de K del peptido GLP-1.

31. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-30, donde Qmm. 3a, Qmm. 4a, Qmm. 6, Qmm. 6a, Qmm. 3, Qmm. 4, 2xQmm. 6, o 2xQmm. 6a, respectivamente, es un primer elemento conector.

32. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-31, donde el conector comprende un segundo elemento conector, Qmm. 12:

O

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Qmm. 12: >

donde k es un numero entero en el intervalo de 1-5 y n es un numero entero en el intervalo de 1-5.

33. El derivado de la realization 32, donde k es 1.

34. El derivado de cualquiera de las realizaciones 32-33, donde n es 1.

35. El derivado de cualquiera de las realizaciones 32-34, donde el segundo elemento conector es

Qmm. 13:

O

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36. El derivado de cualquiera de las realizaciones 32-35, donde Qmm. 13 se incluye m veces, donde m es 0 o un numero entero en el intervalo de 1-2.

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37. El derivado de cualquiera de las realizaciones 32-36, donde m es 0.

38. El derivado de cualquiera de las realizaciones 32-36, donde m es 1.

39. El derivado de cualquiera de las realizaciones 32-26, donde m es 2.

40. El derivado de cualquiera de las realizaciones 32-39, donde cuando m no es 1, los elementos Qmm. 13 estan

interconectados mediante un enlace o enlaces de tipo amida.

41. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-40, donde el conector comprende un tercer elemento conector de Qmm. 14:

Qmm. 14:

imagen8

42. El derivado de la realizacion 41, donde Qmm. 14 se incluye p veces, donde p es 0 o un numero entero en el intervalo de 1-3.

43. El derivado de la realizacion 42, donde p es 0.

44. El derivado de la realizacion 42, donde p es 1.

45. El derivado de cualquiera de las realizaciones 42-44, donde Qmm. 14 es un di-radical de L-Glu.

46. El derivado de cualquiera de las realizaciones 42-45, donde cuando p no es 0 ni 1, los elementos Qmm. 14 estan

interconectados mediante un enlace o enlaces de tipo amida.

47. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-46, donde el conector y el resto de prolongacion estan interconectados mediante un enlace de tipo amida.

48. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-47, donde el conector y el peptido GLP-1 estan interconectados mediante un enlace de tipo amida.

49. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-48, donde el conector esta unido a un grupo epsilon-amino del primer o el segundo residuo de K.

50. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-49 donde el conector esta constituido por Qmm. 14 y dos veces Qmm. 6 (Qmm.14-2xQmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del resto de prolongacion y en su extremo CO-* al grupo epsilon- amino del primer o segundo residuo de K del peptido GLP-1.

51. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-49 donde el conector esta constituido por Qmm. 14, dos veces Qmm. 13 y dos veces Qmm. 6 (Qmm.14-2xQmm.13-2xQmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del resto de prolongacion y en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o segundo residuo de K del peptido GLP-1.

52. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-49 donde el conector esta constituido por Qmm. 14, dos veces Qmm. 13 y Qmm. 6 (Qmm.14-2xQmm.13-Qmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del resto de prolongacion y en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o segundo residuo de K del peptido GLP-1.

53. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-49 donde el conector esta constituido por Qmm. 14 y dos veces Qmm. 6a (Qmm.14-2xQmm.6a), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del resto de prolongacion y en su extremo CO-* al grupo epsilon- amino del primer o segundo residuo de K del peptido GLP-1.

54. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-53, donde y es un numero impar.

55. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-53, donde y es un numero par.

56. El derivado de la realizacion 54, donde y es 9.

57. El derivado de la realizacion 54, donde y es 11.

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58. El derivado de la realizacion 55, donde y es 10.

59. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-58, donde Qmm. 2 se representa mediante

(i)

Qmm. 2a:

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o

(ii)

Qmm. 2b:

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60. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-59, donde los dos restos de prolongation son sustancialmente identicos.

61. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-60, donde los dos restos de prolongacion tienen una similitud de al menos 0.5; preferentemente de al menos 0.6; mas preferentemente de al menos 0.7, o de al menos 0.8; aun mas preferentemente de al menos 0.9; o de la manera mas preferida de al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0.

62. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-61, donde los dos conectores son sustancialmente identicos.

63. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-62, donde los dos conectores tienen una similitud de al menos

0.5; preferentemente de al menos 0.6; mas preferentemente de al menos 0.7, o de al menos 0.8; aun mas preferentemente de al menos 0.9; o de la manera mas preferida de al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0.

64. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-83, donde las dos cadenas laterales constituidas por el resto de prolongacion y el conector son sustancialmente identicas.

65. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-64, donde las dos cadenas laterales constituidas por el resto de prolongacion y el conector tienen una similitud de al menos 0.5; preferentemente de al menos 0.6; mas preferentemente de al menos 0.7, o de al menos 0.8; aun mas preferentemente de al menos 0.9; o de la manera mas preferida de al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0.

66. El derivado de cualquiera de las realizaciones 60-65, donde las dos estructuras qmmicas que se van a comparar se representan como huellas, tales como a) huellas ECFP_6; b) huellas UNITY; y/o c) huellas MDL; y donde para cada una de a), b) y c) se usa preferentemente el coeficiente de Tanimoto para calcular la similitud de las dos huellas.

67. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-66, donde el primer residuo de K se denomina K26.

68. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-67, donde el segundo residuo de K se denomina K34.

69. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-68, donde la position correspondiente a la position 26 de GLP- 1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica mediante la escritura y una inspection a ojo.

70. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-69, donde la posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP- 1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica mediante la escritura y una inspeccion a ojo.

71. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-70, donde el numero de cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica mediante la escritura y una inspeccion a ojo.

72. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-71, donde la posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP- 1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica utilizando un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar.

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73. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, donde la posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP- 1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica utilizando un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar.

74. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-73, donde el numero de cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica utilizando un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar.

75. El derivado de cualquiera de las realizaciones 72-74, donde el programa de alineacion es una alineacion de Needleman-Wunsch.

76. El derivado de cualquiera de las realizaciones 72-75, donde se utiliza la matriz de calificacion por defecto y la matriz de identidad por defecto.

77. El derivado de cualquiera de las realizaciones 72-76, donde la matriz de calificacion es BLOSUM62.

78. El derivado de cualquiera de las realizaciones 72-77, donde la penalizacion por el primer residuo en un hueco es -10 (menos diez).

79. El derivado de cualquiera de las realizaciones 72-78, donde la penalizacion por residuos adicionales en un hueco es -0.5 (menos cero punto cinco).

80. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-79, donde el peptido no comprende residuos de K a excepcion del primer y el segundo residuo de K.

81. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-80, donde el peptido es GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

82. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-80, donde el peptido es un analogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

83. El derivado de la realizacion 82, donde el cambio o los cambios de aminoacidos se producen en una o mas posiciones que corresponden a las siguientes posiciones de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1): Posicion 7, 8, 22 y/o 30.

84. El derivado de cualquiera de las realizaciones 82-83, donde el analogo comprende al menos uno de los siguientes cambios: Imp7, Aib8, E22y/o E30.

85. El derivado de cualquiera de las realizaciones 82-84, donde el analogo comprende Imp7.

86. El derivado de cualquiera de las realizaciones 82-85, donde el analogo comprende Aib8.

87. El derivado de cualquiera de las realizaciones 82-86, donde el analogo comprende E22.

88. El derivado de cualquiera de las realizaciones 82-86, donde el analogo no comprende E22.

89. El derivado de cualquiera de las realizaciones 82-88, donde el analogo comprende E30.

90. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-89, donde, para determinar los cambios en el peptido, la secuencia de aminoacidos del peptido se compara con la secuencia de aminoacidos del GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) natural.

91. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-90, donde, para determinar una posicion en un peptido que corresponde a una posicion espedfica en el GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) natural, la secuencia de aminoacidos del peptido se compara con la secuencia de aminoacidos del GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) natural.

92. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-91, donde la comparacion de la secuencia de aminoacidos del peptido con la de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se realiza mediante la escritura y una inspeccion a ojo.

93. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-92, donde la comparacion de la secuencia de aminoacidos del peptido con la de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se realiza utilizando un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar.

94. El derivado de la realizacion 93, donde el programa de alineacion es una alineacion de Needleman-Wunsch.

95. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-94, donde se utiliza la matriz de calificacion por defecto y la matriz de identidad por defecto.

96. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-95, donde la matriz de calificacion es BLOSUM62.

97. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-96, donde la penalizacion por el primer residuo en un hueco es -10 (menos diez).

5

10

15

20

25

30

35

40

98. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-97, donde la penalizacion por residuos adicionales en un hueco es -0.5 (menos cero punto cinco).

99. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-98, donde la posicion correspondiente a cualquiera de las posiciones indicadas de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica mediante la escritura y una inspeccion a ojo.

100. El derivado de cualquiera de las realizaciones 93-99, donde la posicion correspondiente a cualquiera de las posiciones indicadas de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica tal como se describe para la posicion 26 y la posicion 34 en cualquiera de las realizaciones 55-62.

101. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-100, donde el peptido tiene como maximo tres cambios de aminoacidos.

102. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-101, donde el peptido tiene como maximo dos cambios de aminoacidos.

103. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-102, donde el peptido tiene como maximo un cambio de aminoacidos.

104. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-103, donde el peptido no tiene ningun (0) cambios de aminoacidos.

105. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-104, donde el peptido tiene como mmimo una modificacion de aminoacidos.

106. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-105, donde el peptido tiene como mmimo dos cambios de aminoacidos.

107. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-106, donde el peptido tiene como mmimo tres cambios de aminoacidos.

108. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-107, donde el peptido tiene un cambio de aminoacidos.

109. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-108, donde el peptido tiene dos cambios de aminoacidos.

110. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-109, donde el peptido tiene tres cambios de aminoacidos.

111. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-110, donde los cambios, si los hay, son sustituciones.

112. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-111, donde el analogo a) comprende un analogo de GLP-1 de Formula I; y/o b) es un analogo de GLP-1 de Formula I:

Formula I : Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa1g-Xaa20-

Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Lys-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Lys-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,

donde

Xaa7 es L-histidina, imidazopropionilo (Imp), a-hidroxihistidina, D-histidina, desaminohistidina (desH), 2- aminohistidina, p-hidroxihistidina, homohistidina, Wa-acetilhistidina, WMormilhistidina, a-fluorometilhistidina, a- metilhistidina, 3-piridylalanina, 2-piridylalanina o 4-piridilalanina;

Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, acido (1-aminociclopropil)carboxflico, acido (1- aminociclobutil)carboxflico, acido (1-aminociclopentil)carboxflico, (1-aminociclohexil)carboxflico, (1- aminocicloheptil)carboxflico o acido (1-aminociclooctil)carboxflico;

Xaa-12 es Phe o Leu;

Xaa-16 es Val o Leu;

Xaa18 es Ser, Val o Leu;

Xaa-^ es Tyr o Gln;

Xaa20 es Leu o Met;

Xaa22 es Gly, Glu o Aib;

Xaa23 es Gln, Glu o Arg;

Xaa25 es Ala o Val;

5

10

15

20

25

30

35

Xaa27 es Glu o Leu;

Xaa30 es Ala, Glu o Arg;

Xaa3i es Trp o His Xaa33 es Val;

Xaa35 es Gly o Aib;

Xaa36 es Arg o Gly;

Xaa37 es Gly o Arg; y

Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Arg o esta ausente.

113. El derivado de la realizacion 112, donde el peptido de Formula I es un analogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

114. El derivado de la realizacion 112, donde el peptido de Formula I es GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

115. El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-114, donde Xaa7 es His o Imp (desH); Xaa8 es Ala o Aib; Xaa-12 es Phe; Xaa-i6 es Val; Xaa-i8 es Ser; Xaa-ig es Tyr; Xaa20 es Leu; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln; Xaa25 es Ala; Xaa27 es Glu; Xaa30 es Ala o Glu; Xaa31 es Trp; Xaa33 es Val; Xaa34 es Gln; Xaa35 es Gly; Xaa36 es Arg; Xaa37 es Gly; y Xaa38 esta ausente.

116.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-115, donde Xaa7 es His.

117.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-115, donde Xaa7 es Imp.

118.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-117, donde Xaa8 es Ala.

119.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-117, donde Xaa8 es Aib.

120.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-119, donde Xaa-12 es Phe.

121.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-120, donde Xaa-16 es Val.

122.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-121, donde Xaa-18 es Ser.

123.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-122, donde Xaa-^ es Tyr.

124.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-123, donde Xaa20 es Leu.

125.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-124, donde Xaa22 es Gly.

126.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-124, donde Xaa22 es Glu.

127.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-124, donde Xaa22 no es Glu.

128.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-127, donde Xaa23 es Gln.

129.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-128, donde Xaa25 es Ala.

130.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-129, donde Xaa27 es Glu.

131.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-130, donde Xaa30 es Ala.

132.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-130, donde Xaa30 es Glu.

133.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-132, donde Xaa31 es Trp.

134.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-133, donde Xaa33 es Val.

135.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-134, donde Xaa35 es Gly.

136.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-135, donde Xaa36 es Arg.

137.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-136, donde Xaa37 es Gly.

138.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 112-137, donde Xaa38 esta ausente

5

10

15

20

25

30

35

40

45

139. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-138, donde el peptido comprende los siguientes cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1):

(i) 8Aib; (ii) 7Imp, 8Aib; (iii) 8Aib, 22E; o (iv) 8Aib, 22E, 30E.

140. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-139, donde el peptido presenta los siguientes cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1):

(i) 8Aib; (ii) 7Imp, 8Aib; (iii) 8Aib, 22E; o (iv) 8Aib, 22E, 30E.

141. Un compuesto, preferentemente de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-140 seleccionado entre los

siguientes: Qmm. 21, Qmm. 22, Qmm. 23, Qmm. 24, Qmm. 25, Qmm. 26, Qmm. 27, Qmm. 28, Qmm. 29, Qmm. 30, Qmm. 31, Qmm. 32, Qmm. 33, Qmm. 34, Qmm. 35, Qmm. 36, Qmm. 37 y Qmm. 38; o un ester, amida o sal

farmaceuticamente aceptable de este.

142. Un compuesto, preferentemente un compuesto de la realizacion 141, caracterizado por su nombre y seleccionado de una lista de cada uno de los nombres de los compuestos de los Ejemplos 1-18 de la presente; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

143. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-142, que presenta actividad GLP-1.

144. El derivado de la realizacion 143, donde la actividad GLP-1 se refiere a la capacidad de activar el receptor de GLP-1 humano.

145. El derivado de la realizacion 144, donde la activacion del receptor de GLP-1 humano se mide en un ensayo in vitro, como la potencia de la produccion de cAMP.

146. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-145 que tiene la potencia correspondiente a una EC50

a) inferior a 10 000 pM, preferentemente inferior a 8000 pM, mas preferentemente inferior a 5000 pM, aun mas preferentemente inferior a 4000 pM o de la manera mas preferida inferior a 3000 pM;

b) inferior a 2000 pM, preferentemente inferior a 1200 pM, mas preferentemente inferior a 1000 pM, aun mas preferentemente inferior a 800 pM o de la manera mas preferida inferior a 600 pM;

c) inferior a 400 pM, preferentemente inferior a 300 pM, mas preferentemente inferior a 200 pM, aun mas preferentemente inferior a 150 pM o de la manera mas preferida inferior a 100 pM; o

d) inferior a 80 pM, preferentemente inferior a 60 pM, mas preferentemente inferior a 50 pM, aun mas preferentemente inferior a 40 pM o de la manera mas preferida inferior a 30 pM.

147. El derivado de la realizacion 146, donde la potencia se determina como la EC50 para simular la formacion de cAMP en un medio que contiene el receptor de GLP-1 humano, tal como un medio con la siguiente composicion (concentraciones finales en el ensayo) TRIS-HCl 50 mM; HEPES 5 mM; MgCh, 6H2O 10 mM; NaCl 150 mM; 0.01% de Tween; 0.1% de BSA; IBMX 0.5 mM; ATP 1 mM; GTP 1 pM, preferentemente utilizando una lmea celular transfectada estable tal como BHK467-12A (tk-ts13) y/o utilizando para la determinacion de cAMP un ensayo del receptor funcional, por ejemplo, basado en la competencia entre el cAMP formado de manera endogena y el cAMP marcado con biotina anadido de manera exogena, en dicho ensayo, preferentemente, se captura el cAMP utilizando un anticuerpo espedfico y/o donde un ensayo aun mas preferido es el ensayo AlphaScreen cAMP, de la manera mas preferida el descrito en el Ejemplo 20.

148. El derivado de cualquiera de las realizaciones 144-145, donde la activacion del receptor de GLP-1 humano se mide en un ensayo in vitro, en un ensayo con un gen indicador.

149. El derivado de la realizacion 148, donde el ensayo se lleva a cabo en una lmea celular BHK transfectada de manera estable que expresa el receptor de GLP-1 humano y contiene el ADN para el elemento de respuesta a cAMP (CRE) acoplado a un promotor y el gen para la luciferasa de luciernaga (CRE luciferasa).

150. El derivado de la realizacion 149, donde cuando ha finalizado la incubacion del ensayo se anade luciferina y se mide la luminiscencia.

151. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-150, donde el ensayo se lleva a cabo en ausencia de albumina serica (0% de HSA, concentracion final en el ensayo).

152. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-151, donde el ensayo se lleva a cabo en presencia de un 1% de albumina serica (HSA, concentracion final en el ensayo).

153. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-152, donde las celulas son celulas BHK con BHK-ts13 como una lmea celular progenitora.

5

10

15

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35

40

45

154. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-153, donde las celulas se derivan del clon FCW467-12A.

155. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-154, donde las celulas se cultivan con un 5% de CO2 en un medio de cultivo celular, se obtienen alfcuotas y se almacenan en nitrogeno lfquido.

156. El derivado de la realizacion 155, donde el medio de cultivo celular es un 10% de FBS (siglas en ingles de suero bovino fetal), 1 mg/mL de G418, MTX (metotrexato) 240 nM y 1% de pen/estrep (penicilina/estreptomicina).

157. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-156, donde antes de cada ensayo se toma una alfcuota del cultivo celular y se lava dos veces en PBS antes de suspenderla en la concentracion deseada en el tampon de ensayo.

158. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-157, donde para las placas de 96 pocillos se lleva a cabo la suspension para obtener una concentracion final de 5x103 celulas/pocillo.

159. El derivado de cualquiera de las realizaciones 157-158, donde el tampon de ensayo es tampon de ensayo al

1%, que esta constituido por un 2% de ovalbumina, 0.2% de Pluronic F-68 y un 2% de hSa en medio de ensayo.

160. El derivado de cualquiera de las realizaciones 157-158, donde el tampon de ensayo es tampon de ensayo al

0%, que esta constituido por un 2% de ovalbumina y un 0.2% de Pluronic F-68 en medio de ensayo.

161. El derivado de cualquiera de las realizaciones 159-160, donde el medio de ensayo esta constituido por DMEM sin rojo de fenol, Hepes 10 mM y 1x Glutamax.

162. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-161, donde el procedimiento del ensayo comprende las siguientes etapas:

i) Las reservas de celulas se descongelan en un bano de agua a 37 °C;

ii) las celulas se lavan tres veces en PBS;

iii) las celulas se cuentan y se ajustan a 5x103 celulas/50 |jL (1x105 celulas/mL) en medio de ensayo y se transfiere una alfcuota de 50 jL de celulas a cada pocillo en la placa de ensayo;

iv) las reservas de los compuestos de prueba y los compuestos de referencia, si hay alguno, se diluyen hasta una concentracion de 0.2 jM en tampon de ensayo al 0% para el ensayo con 0% de HSA o tampon de ensayo al 1% para el ensayo con 1% de HSA; y los compuestos se diluyen 10 veces para obtener un intervalo adecuado de concentraciones (tales como: 2x10'7 M, 2x10'8 M; 2x10'9 M, 2x10'1° M, 2x10'11M, 2x10'12 M y 2x10'13 M), y para cada compuesto tambien se incluye un control con un blanco de tampon de ensayo;

v) se transfiere una alfcuota de 50 jL de un compuesto o blanco por triplicado desde la placa de dilucion hasta la placa de ensayo y los compuestos se estudian con concentraciones adecuadas (tales como las siguientes concentraciones finales: 1x10'7 M, 1x10'8 M; 1x10'9 M, 1x10■1° M, 1x10'11 M, 1x10'12 M y 1x10'13 M);

vi) la placa de ensayo se incuba durante 3 h en un incubador con un 5% de CO2 a 37°C;

vii) la placa de ensayo se retira del incubador y se permite que este a la temperatura ambiente durante 15 min;

ixx) se anade una alfcuota de luciferina (tal como el reactivo steadylite plus) de 100 jL a cada pocillo de la placa de ensayo;

ix) se cubre cada placa de ensayo para protegerla de la luz y se agita durante 30 min a la temperatura ambiente; y

x) se lee cada placa de ensayo, por ejemplo, en un instrumento TopCount NXT de Packard.

163. El derivado de la realizacion 162, donde los datos del instrumento TopCount se transfieren al software GraphPad Prism 5 para los calculos deseados.

164. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-163, donde se promedian los valores para cada triplicado, se realiza una regresion no lineal y se calculan los valores de EC50.

165. El derivado de cualquiera de las realizaciones 162-164, donde la regresion es log(agonista) frente a la respuesta-pendiente de la variable (cuatro parametros)).

166. El derivado de cualquiera de las realizaciones 144-195, donde la potencia se determina tal como se ha descrito en cualquiera de las realizaciones 148-165.

5

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40

45

167. El derivado de la realizacion 166, donde la potencia se determina tal como se ha descrito en el Ejemplo 21.

168. El derivado de cualquiera de las realizaciones 143-167 que tiene la potencia correspondiente a una EC50 con un 0% de HSA

a) inferior a 400 pM, preferentemente inferior a 300 pM, mas preferentemente inferior a 200 pM, aun mas preferentemente inferior a 150 pM o de la manera mas preferida inferior a 100 pM;

b) inferior a 80 pM, preferentemente inferior a 60 pM, mas preferentemente inferior a 50 pM, aun mas preferentemente inferior a 40 pM o de la manera mas preferida inferior a 30 pM; o

c) inferior a 25 pM, preferentemente inferior a 20 pM, mas preferentemente inferior a 15 pM, aun mas preferentemente inferior a 10 pM o de la manera mas preferida inferior a 8.0 pM.

169. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-168, cuyo valor de EC50 no es superior a 20 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

170. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-169, cuyo valor de EC50 no es superior a 15 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

171. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-170, cuyo valor de EC50 no es superior a 10 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

172. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-171, cuyo valor de EC50 no es superior a 5 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

173. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-172, cuyo valor de EC50 no es superior a 2,5 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

174. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-173, cuyo valor de EC50 es inferior al valor de EC50 de la semaglutida.

175. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-174, cuyo valor de EC50 es inferior a 0.75 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

176. El derivado de cualquiera de las realizaciones 148-175, cuyo valor de EC50 es inferior a 0.50 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

177. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-166, para el cual la afinidad de union al receptor de GLP-1 (IC50) en presencia de aproximadamente un 0.001% de HSA (poca albumina) es

a) inferior a 500 nM, preferentemente inferior a 250 nM, mas preferentemente inferior a 100 nM o de la manera mas preferida inferior a 50 nM;

b) inferior a 12 nM, preferentemente inferior a 10 nM, mas preferentemente inferior a 8.0 nM, aun mas preferentemente inferior a 6.0 nM, todavfa mas preferentemente inferior a 5.0 nM o de la manera mas preferida inferior a 3.0 nM;

c) inferior a 2.0 nM, preferentemente inferior a 1.0 nM, aun mas preferentemente inferior a 0.80 nM o de la manera mas preferida inferior a 0.60 nM; o

d) inferior a 0.40 nM, preferentemente inferior a 0.30 nM, aun mas preferentemente inferior a 0.20 nM o de la manera mas preferida inferior a 0.10 nM.

178. El derivado de la realizacion 144, donde la activacion del receptor de GLP-1 humano se mide como la afinidad de union al receptor de GLP-1 (IC50) en presencia de aproximadamente un 0.001% de HSA (poca albumina).

179. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-178, para el cual la afinidad de union al receptor de GLP-1 (IC50) en presencia de aproximadamente un 2.0% de HSA (mucha albumina) es

a) inferior a 1000 nM, preferentemente inferior a 900 nM, mas preferentemente inferior a 800 nM;

b) inferior a 700 nM, preferentemente inferior a 500 nM, mas preferentemente inferior a 300 nM; o

c) inferior a 200 nM, preferentemente inferior a 100 nM o mas preferentemente inferior a 50 nM.

180. El derivado de cualquiera de las realizaciones 177-179, donde la afinidad de union al receptor de GLP-1 se mide en funcion del desplazamiento de 125I-GLP-1 del receptor, preferentemente utilizando un ensayo de union SPA.

5

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25

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35

40

45

181. El derivado de cualquiera de las realizaciones 177-180, donde el receptor de lmea celular transfectada estable, preferentemente una lmea celular de hamster, celular renal de una cna de hamster tal como BHK tk-ts13.

182. El derivado de cualquiera de las realizaciones 177-181, donde el valor concentracion con la que se desplaza un 50% de 125I-GLP-1 del receptor.

183. El derivado de cualquiera de las realizaciones 177-182, donde la afinidad de union al receptor de GLP-1 (IC50) se determina tal como se describe en el Ejemplo 22.

184. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-183, que tiene una biodisponibilidad oral, preferentemente una biodisponibilidad oral absoluta, que es superior a la de la semaglutida.

185. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-184, que tiene una biodisponibilidad oral, preferentemente una biodisponibilidad oral absoluta, que es superior a la de la liraglutida.

186. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-185, donde el derivado es eficaz para reducir la glucosa en sangre in vivo en ratones db/db.

187. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-186, donde el derivado es eficaz para reducir el peso corporal in vivo en ratones db/db.

188. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-187, el cual, en un estudio PD en cerdos, reduce la ingesta de alimentos en el dfa 1, 2, 3 y/o 4 despues de la administracion s.c. de una unica dosis del derivado, en comparacion con un grupo de control tratado con el vehmulo.

189. El derivado de la realizacion 188, donde la dosis es de 0.3, 1, 3, 10 o 30 nmol/kg; preferentemente de 3.0 nmol/kg.

190. El derivado de cualquiera de las realizaciones 188-189, donde la ingesta de alimentos en el dfa 1 es de un 80% o inferior, preferentemente de un 60% o inferior, mas preferentemente de un 50% o inferior o de la manera mas preferida de un 40% o inferior, donde el porcentaje es relativo a la ingesta de alimentos del grupo de control.

191. El derivado de cualquiera de las realizaciones 188-190, donde la ingesta de alimentos en el dfa 2 es de un 80% o inferior, preferentemente de un 60% o inferior o mas preferentemente de un 40% o inferior, donde el porcentaje es relativo a la ingesta de alimentos del grupo de control.

192. El derivado de cualquiera de las realizaciones 188-191, donde el estudio se lleva a cabo y los datos se compilan y analizan tal como se describe en el Ejemplo 25.

193. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-192, el cual tiene un perfil de accion mas prolongado que la liraglutida.

194. El derivado de la realizacion 193, donde la prolongacion se refiere a la semivida in vivo en una especie animal relevante, tal como ratones db/db, ratas, cerdos y/o, preferentemente, minicerdos; donde el derivado se administra i) s.c. y/o ii) i.v.; preferentemente ii) i.v.

195. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-194, donde la semivida de eliminacion (Ty) despues de la administracion i.v. en ratas es superior a la de la semaglutida.

196. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-195, donde la semivida de eliminacion (Ty) despues de la administracion i.v. en ratas es al menos a) un 25% superior, b) un 50% superior, c) un 75% superior, d) un 100% superior (=el doble) o e) un 150% superior que la semivida de eliminacion de la semaglutida.

197. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-196, donde la semivida de eliminacion (Ty2) despues de la administracion i.v. en ratas es al menos dos veces, preferentemente al menos 2y veces la semivida de eliminacion de la semaglutida.

198. El derivado de cualquiera de las realizaciones 193-197, donde la semivida se determina en estudios farmacocineticos in vivo en ratas, por ejemplo, tal como se describe en el Ejemplo 24.

199. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-198, donde la semivida de eliminacion (Ty) despues de la administracion i.v. en minicerdos es

a) de al menos 8 horas, preferentemente de al menos 16 horas, mas preferentemente de al menos 24 horas, aun mas preferentemente de al menos 32 horas o de la manera mas preferida de al menos 40 horas;

b) de al menos 50 horas, preferentemente de al menos 55 horas, mas preferentemente de al menos 60 horas, aun mas preferentemente de al menos 65 horas; o

GLP-1 se prepara utilizando una mas preferentemente una lmea

de IC50 se determina como la

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c) de al menos 70 horas, preferentemente de al menos 75 horas, mas preferentemente de al menos 80 horas, todav^a mas preferentemente de al menos 85 horas o aun mas preferentemente de al menos 90 horas.

200. El derivado de la realization 199, donde los minicerdos son minicerdos macho Gottingen.

201. El derivado de cualquiera de las realizaciones 199-200, donde los minicerdos tienen una edad de 7-14 meses y pesan preferentemente entre 16-35 kg.

202. El derivado de cualquiera de las realizaciones 199-201, donde a los minicerdos se les aloja de manera individual y se les alimenta una o dos veces al dia, preferentemente con una dieta para minicerdos SDS.

203. El derivado de cualquiera de las realizaciones 199-202, donde la dosis del derivado se administra i.v. despues de al menos 2 semanas de aclimatacion.

204. El derivado de cualquiera de las realizaciones 199-203, donde se priva a los animales de alimentos durante aproximadamente 18 h antes de la administration de la dosis y entre 0 y 4 h despues de la administration de la dosis y durante todo el periodo tienen acceso al agua sin restricciones.

205. El derivado de cualquiera de las realizaciones 199-204, donde el derivado de GLP-1 se disuelve en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, 0.05% de tween 80, pH 7.4, hasta una concentration adecuada, preferentemente entre 20-60 nmol/mL.

206. El derivado de cualquiera de las realizaciones 199-205, donde la inyeccion intravenosa de los derivados se proporciona en un volumen correspondiente a 1-2 nmol/kg.

207. El derivado de cualquiera de las realizaciones 199-206, donde la semivida de elimination (T/) se determina en estudios farmacocineticos in vivo en minicerdos, por ejemplo, tal como se describe en el Ejemplo 23.

216. Un compuesto seleccionado entre el acido (S)-2-dimetilamino-6-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)hexanoico; y

Qmm. 39:

imagen11

o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

217. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-207 como un medicamento.

218. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-207 en el tratamiento y/o prevention de todas las formas de diabetes, trastornos de la alimentation, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales y/o el smdrome del ovario poliqmstico y/o para retrasar o prevenir la evolution de la enfermedad diabetica.

219. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-207 en la production de un medicamento para el tratamiento y/o prevencion de todas las formas de diabetes, trastornos de la alimentacion, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales y/o el smdrome del ovario poliqmstico y/o para retrasar o prevenir la evolucion de la enfermedad diabetica.

La invention tambien se refiere a un derivado de un analogo de GLP-1, donde el analogo comprende un primer residuo de K en una position correspondiente a la position 26 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1), un segundo residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y como maximo ocho cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1 (7-37), donde el derivado comprende un primer y un segundo resto de prolongation unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, mediante un primer y segundo conector, respectivamente, donde el primer y el segundo resto de prolongacion es Qmm. 2:

Qmm. 2 : HOOC-C6H4-O-(CH2)y-CO-*,

en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13; y el primer y el segundo conector comprenden Qmm. 3a : *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NR1R2]-CO-*,

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donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, Ri y R2 representan de manera independiente *-H (un radical de hidrogeno) o *-CH3 (metilo) y w es un numero entero en el intervalo de 0-5; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este; asf como tambien cualquiera de las realizaciones anteriores 2-220 anexas a este documento como realizaciones dependientes.

Realizaciones particulares adicionales

Las siguientes son realizaciones particulares adicionales de la invencion:

1. Un derivado de un peptido GLP-1,

donde el peptido comprende un primer residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP-1 (737) (SEQ ID NO:1), un segundo residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y ocho cambios de aminoacidos como maximo en comparacion con GLP-1 (7-37),

donde el derivado comprende dos restos de prolongacion unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, mediante un conector, donde

el resto de prolongacion es Qmm. 2:

Qmm. 2 : HOOC-CaH4-O-(CH2)y-CO-*,

en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13; y

el conector comprende

Qmm. 3 : *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NH2]-CO-*,

donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, y w es un numero entero en el intervalo de 0-5; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

2. El derivado de la realizacion 1, donde Qmm. 3 esta conectado en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o el segundo residuo de K del peptido GLP-1.

3. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-2, donde el conector comprende z veces Qmm. 3, donde z es un numero entero en el intervalo de 1-2.

4. El derivado de la realizacion 3, donde z es 1.

5. El derivado de la realizacion 3, donde z es 2.

6. El derivado de cualquiera de las realizaciones 3 y 5, donde cuando z es 2, los elementos Qmm. 3 estan interconectados mediante un enlace de tipo amida.

7. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-6, donde w es 0.

8. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-7, donde q es 4.

9. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-8, donde el conector comprende Qmm. 4: *-NH-(CH2)q-CH(NH2)- CO-*, donde q es un numero entero en el intervalo de 3-5.

10. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-9, donde q es 4.

11. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-10, donde Qmm. 3 o Qmm, 4, respectivamente, es un di-radical de lisina.

12. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-11, donde el conector comprende

Qmm. 6 : *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*.

13. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-12, donde el conector comprende

2xQmm.6 : *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*.

14. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-13, donde Qmm. 3, Qmm. 4a, Qmm. 6 o 2xQmm. 6, respectivamente, es un primer elemento conector.

15. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-14, donde el conector comprende un segundo elemento conector, Qmm. 12:

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Quim. 12:

donde k es un numero entero en el intervalo de 1-5 y n es un numero entero en el intervalo de 1-5.

16. El derivado de la realizacion 15, donde k es 1.

17. El derivado de cualquiera de las realizaciones 15-16, donde n es 1.

18. El derivado de cualquiera de las realizaciones 15-17, donde el segundo elemento conector es

Quim. 13:

imagen13

19. El derivado de cualquiera de las realizaciones 15-18, donde Quim. 13 se incluye m veces, donde m es 0 o un numero entero en el intervalo de 1-2.

20. El derivado de la realizacion 10, donde m es 0, 1 o 2.

21. El derivado de cualquiera de las realizaciones 19-20, donde m es 0.

22. El derivado de cualquiera de las realizaciones 19-20, donde m es 1.

23. El derivado de cualquiera de las realizaciones 19-20, donde m es 2.

24. El derivado de cualquiera de las realizaciones 19-23, donde cuando m no es 1, los elementos Quim. 13 estan interconectados mediante un enlace o enlaces de tipo amida.

25. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-24, donde el conector comprende un tercer elemento conector de Quim. 14:

imagen14

26. El derivado de la realizacion 25, donde Quim. 14 se incluye p veces, donde p es 0 o un numero entero en el intervalo de 1-3.

27. El derivado de la realizacion 25, donde p es 0.

28. El derivado de la realizacion 25, donde p es 1.

29. El derivado de cualquiera de las realizaciones 25-28, donde Quim. 14 es un di-radical de L-Glu.

30. El derivado de cualquiera de las realizaciones 25-29, donde cuando p no es 0 ni 1, los elementos Quim. 14 estan

interconectados mediante un enlace o enlaces de tipo amida.

31. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-30, donde el conector y el resto de prolongacion estan interconectados mediante un enlace de tipo amida.

32. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-31, donde el conector y el peptido GLP-1 estan interconectados mediante un enlace de tipo amida.

33. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-32, donde el conector esta unido a un grupo epsilon-amino del primer o el segundo residuo de K.

34. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-33 donde el conector esta constituido por Quim. 14 y dos veces Quim. 6 (Qmm.14-2xQmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del resto de prolongacion y en su extremo CO-* al grupo epsilon- amino del primer o segundo residuo de K del peptido GLP-1.

35. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-33 donde el conector esta constituido por Quim. 14, dos veces Quim. 13 y dos veces Quim. 6 (Qmm.14-2xQmm.13-2xQmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y

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en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del resto de prolongation y en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o segundo residuo de K del peptido GLP-1.

36. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-33 donde el conector esta constituido por Qmm. 14, dos veces Qmm. 13 y Qmm. 6 (Qmm.14-2xQmm.13-Qmm.6), interconectados mediante enlaces de tipo amida y en la secuencia indicada, conectado en su extremo *-NH al extremo CO-* del resto de prolongacion y en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o segundo residuo de K del peptido GLP-1.

37. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-36, donde y es un numero impar.

38. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-36, donde y es un numero par.

39. El derivado de la realization 37, donde y es 9.

40. El derivado de la realizacion 37, donde y es 11.

41. El derivado de la realizacion 38, donde y es 10.

42. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-41, donde Qmm. 2 se representa mediante

imagen15

43. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-42, donde los dos restos de prolongacion son sustancialmente identicos.

44. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-43, donde los dos restos de prolongacion tienen una similitud de al menos 0.5; preferentemente de al menos 0.6; mas preferentemente de al menos 0.7, o de al menos 0.8; aun mas preferentemente de al menos 0.9; o de la manera mas preferida de al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0.

45. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-44, donde los dos conectores son sustancialmente identicos.

46. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-45, donde los dos conectores tienen una similitud de al menos

0.5; preferentemente de al menos 0.6; mas preferentemente de al menos 0.7, o de al menos 0.8; aun mas preferentemente de al menos 0.9; o de la manera mas preferida de al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0.

47. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-46, donde las dos cadenas laterales constituidas por el resto de prolongacion y el conector son sustancialmente identicas.

48. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-47, donde las dos cadenas laterales constituidas por el resto de prolongacion y el conector tienen una similitud de al menos 0.5; preferentemente de al menos 0.6; mas preferentemente de al menos 0.7, o de al menos 0.8; aun mas preferentemente de al menos 0.9; o de la manera mas preferida de al menos 0.99, tal como una similitud de 1.0.

49. El derivado de cualquiera de las realizaciones 43-48, donde las dos estructuras qmmicas que se van a comparar se representan como huellas, tales como a) huellas ECFP_6; b) huellas UNITY; y/o c) huellas MDL; y donde para cada una de a), b) y c) se usa preferentemente el coeficiente de Tanimoto para calcular la similitud de las dos huellas.

50. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-49, donde el primer residuo de K se denomina K26.

51. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-50, donde el segundo residuo de K se denomina K34.

52. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-51, donde la position correspondiente a la position 26 de GLP- 1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica mediante la escritura y una inspection a ojo.

53. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-52, donde la posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP- 1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica mediante la escritura y una inspeccion a ojo.

54. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-53, donde el numero de cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica mediante la escritura y una inspeccion a ojo.

55. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-54, donde la posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP- 1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica utilizando un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar.

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56. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-55, donde la posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP- 1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica utilizando un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar.

57. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-65, donde el numero de cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica utilizando un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar.

58. El derivado de cualquiera de las realizaciones 56-57, donde el programa de alineacion es una alineacion de Needleman-Wunsch.

59. El derivado de cualquiera de las realizaciones 57-58, donde se utiliza la matriz de calificacion por defecto y la matriz de identidad por defecto.

60. El derivado de cualquiera de las realizaciones 57-59, donde la matriz de calificacion es BLOSUM62.

61. El derivado de cualquiera de las realizaciones 57-60, donde la penalizacion por el primer residuo en un hueco es -10 (menos diez).

62. El derivado de cualquiera de las realizaciones 57-61, donde la penalizacion por residuos adicionales en un hueco es -0.5 (menos cero punto cinco).

63. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-62, donde el peptido no comprende residuos de K a excepcion del primer y el segundo residuo de K.

64. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-63, donde el peptido es GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

65. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-63, donde el peptido es un analogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

66. El derivado de la realizacion 65, donde el cambio o los cambios de aminoacidos se producen en una o mas posiciones que corresponden a las siguientes posiciones de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1): Posicion 7, 8, 22 y/o 30.

67. El derivado de cualquiera de las realizaciones 65-66, donde el analogo comprende al menos uno de los siguientes cambios: Imp7, Aib8, E22y/o E30.

68. El derivado de cualquiera de las realizaciones 65-67, donde el analogo comprende Imp7.

69. El derivado de cualquiera de las realizaciones 65-68, donde el analogo comprende Aib8.

70. El derivado de cualquiera de las realizaciones 65-69, donde el analogo comprende E22.

71. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-69, donde el analogo no comprende E22.

72. El derivado de cualquiera de las realizaciones 65-71, donde el analogo comprende E30.

73. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-72, donde, para determinar los cambios en el peptido, la secuencia de aminoacidos del peptido se compara con la secuencia de aminoacidos del GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) natural.

74. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-73, donde, para determinar una posicion en un peptido que corresponde a una posicion espedfica en el GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) natural, la secuencia de aminoacidos del peptido se compara con la secuencia de aminoacidos del GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) natural.

75. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-74, donde la comparacion de la secuencia de aminoacidos del peptido con la de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se realiza mediante la escritura y una inspeccion a ojo.

76. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-75, donde la comparacion de la secuencia de aminoacidos del peptido con la de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se realiza utilizando un programa de alineacion de peptidos o protemas estandar.

77. El derivado de la realizacion 76, donde el programa de alineacion es una alineacion de Needleman-Wunsch.

78. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-77, donde se utiliza la matriz de calificacion por defecto y la matriz de identidad por defecto.

79. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-78, donde la matriz de calificacion es BLOSUM62.

80. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-79, donde la penalizacion por el primer residuo en un hueco es -10 (menos diez).

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81. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-80, donde la penalizacion por residuos adicionales en un hueco es -0.5 (menos cero punto cinco).

82. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-81, donde la posicion correspondiente a cualquiera de las posiciones indicadas de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica mediante la escritura y una inspeccion a ojo.

83. El derivado de cualquiera de las realizaciones 76-82, donde la posicion correspondiente a cualquiera de las posiciones indicadas de GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1) se identifica tal como se describe para la posicion 26 y la posicion 34 en cualquiera de las realizaciones 55-62.

84. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-83, donde el peptido tiene como maximo tres cambios de aminoacidos.

85. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-84, donde el peptido tiene como maximo dos cambios de aminoacidos.

86. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-85, donde el peptido tiene como maximo un cambio de aminoacidos.

87. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-86, donde el peptido no tiene ningun (0) cambio de aminoacidos.

88. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-87, donde el peptido tiene como mmimo una modificacion de aminoacidos.

89. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-88, donde el peptido tiene como mmimo dos cambios de aminoacidos.

90. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-89, donde el peptido tiene como mmimo tres cambios de aminoacidos.

91. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-90, donde el peptido tiene un cambio de aminoacidos.

92. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-90, donde el peptido tiene dos cambios de aminoacidos.

93. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-90, donde el peptido tiene tres cambios de aminoacidos.

94. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-93, donde los cambios, si los hay, son sustituciones.

95. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-94, donde el analogo a) comprende un analogo de GLP-1 de Formula I; y/o b) es un analogo de GLP-1 de Formula I:

Formula I : Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa1g-Xaa20-

Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Lys-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Lys-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,

donde

Xaa7 es L-histidina, imidazopropionilo (Imp), a-hidroxihistidina, D-histidina, desaminohistidina (desH), 2- aminohistidina, p-hidroxihistidina, homohistidina, Wa-acetilhistidina, WMormilhistidina, a-fluorometilhistidina, a- metilhistidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;

Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, acido (1-aminociclopropil)carboxflico, acido (1- aminociclobutil)carboxflico, acido (1-aminociclopentil)carboxflico, acido (1-aminociclohexil)carboxflico, acido (1- aminocicloheptil)carboxflico o acido (1-aminociclooctil)carboxflico;

Xaa-12 es Phe o Leu;

Xaa-16 es Val o Leu;

Xaa18 es Ser, Val o Leu;

Xaa-^ es Tyr o Gln;

Xaa20 es Leu o Met;

Xaa22 es Gly, Glu o Aib;

Xaa23 es Gln, Glu o Arg;

Xaa25 es Ala o Val;

Xaa27 es Glu o Leu;

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Xaa30 es Ala, Glu o Arg;

Xaa3 es Trp o His Xaa33 es Val;

Xaa35 es Gly o Aib;

Xaa36 es Arg o Gly;

Xaa37 es Gly o Arg; y

Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Arg o esta ausente.

96. El derivado de la realizacion 95, donde el peptido de Formula I es un analogo de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

97. El derivado de la realizacion 95, donde el peptido de Formula I es GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1).

98. El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-97, donde Xaa7 es His o Imp (desH); Xaa8 es Ala o Aib; Xaai2 es Phe; Xaai6 es Val; Xaai8 es Ser; Xaaig es Tyr; Xaa20 es Leu; Xaa22 es Gly o Glu; Xaa23 es Gln; Xaa25 es Ala; Xaa27 es Glu; Xaa30 es Ala o Glu; Xaa3i es Trp; Xaa33 es Val; Xaa34 es Gln; Xaa35 es Gly; Xaa36 es Arg; Xaa37 es Gly; y Xaa38 esta ausente.

99. El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-98, donde Xaa7 es His.

i00.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-98, donde Xaa7 es Imp.

ioi.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i00, donde Xaa8 es Ala.

i02.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i00, donde Xaa8 es Aib.

i03.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i02, donde Xaai2 es Phe.

i04.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i03, donde Xaaia es Val.

i05.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i04, donde Xaai8 es Ser.

CD O

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i05, donde Xaa^ es Tyr.

i07.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i06, donde Xaa20 es Leu.

o 0°

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i07, donde Xaa22 es Gly.

i09.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i07, donde Xaa22 es Glu.

ii0.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i08, donde Xaa22 no es Glu.

iii.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii0, donde Xaa23 es Gln.

ii2.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-iii, donde Xaa25 es Ala.

ii3.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii2, donde Xaa27 es Glu.

ii4.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii3, donde Xaa30 es Ala.

ii5.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii4, donde Xaa30 es Glu.

ii6.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii5, donde Xaa3i es Trp.

ii7.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii6, donde Xaa33 es Val.

ii8.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii7, donde Xaa35 es Gly.

ii9.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii8, donde Xaa36 es Arg.

o CM

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-ii9, donde Xaa37 es Gly.

i2i.

El derivado de cualquiera de las realizaciones 95-i20, donde Xaa38 esta ausente

i22. El derivado de cualquiera de las realizaciones i-i2i, donde el peptido comprende los siguientes cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-i(7-37) (SEQ ID NO:i):

5

10

15

20

25

30

35

40

45

(i) 8Aib; (ii) 7Imp, 8Aib; (iii) 8Aib, 22E; o (iv) 8Aib, 22E, 30E.

123. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-122, donde el peptido presenta los siguientes cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1):

(i) 8Aib; (ii) 7Imp, 8Aib; (iii) 8Aib, 22E; o (iv) 8Aib, 22E, 30E.

124. Un compuesto, preferentemente de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-123 seleccionado entre los

siguientes: Qmm. 21, Qmm. 22, Qmm. 23, Qmm. 24, Qmm. 25, Qmm. 26, Qmm. 27, Qmm. 28, Qmm. 29, Qmm. 30,

Qmm. 31 y Qmm. 32; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

125. Un compuesto, preferentemente un compuesto de la realizacion 124, caracterizado por su nombre y seleccionado de una lista de cada uno de los nombres de los compuestos de los Ejemplos 1-12 de la presente; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

126. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-125, que presenta actividad GLP-1.

127. El derivado de la realizacion 126, donde la actividad GLP-1 se refiere a la capacidad de activar el receptor de GLP-1 humano.

128. El derivado de la realizacion 127, donde la activacion del receptor de GLP-1 humano se mide en un ensayo in vitro, como la potencia de la produccion de cAMP.

129. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-128 que tiene la potencia correspondiente a una EC50

a) inferior a 10000 pM, preferentemente inferior a 8000 pM, mas preferentemente inferior a 5000 pM, aun mas preferentemente inferior a 4000 pM o de la manera mas preferida inferior a 3000 pM;

b) inferior a 2000 pM, preferentemente inferior a 1200 pM, mas preferentemente inferior a 1000 pM, aun mas preferentemente inferior a 800 pM o de la manera mas preferida inferior a 600 pM;

c) inferior a 400 pM, preferentemente inferior a 300 pM, mas preferentemente inferior a 200 pM, aun mas preferentemente inferior a 150 pM o de la manera mas preferida inferior a 100 pM; o

d) inferior a 80 pM, preferentemente inferior a 60 pM, mas preferentemente inferior a 50 pM, aun mas preferentemente inferior a 40 pM o de la manera mas preferida inferior a 30 pM.

130. El derivado de la realizacion 129, donde la potencia se determina como la EC50 para simular la formacion de cAMP en un medio que contiene el receptor de GLP-1 humano, tal como un medio con la siguiente composicion (concentraciones finales en el ensayo) TRIS-HCl 50 mM; HEPES 5 mM; MgCh, 6H2O 10 mM; NaCl 150 mM; 0.01% de Tween; 0.1% de BSA; IBMX 0.5 mM; ATP 1 mM; GTP 1 pM, preferentemente utilizando una lmea celular transfectada estable tal como BHK467-12A (tk-ts13) y/o utilizando para la determinacion de cAMP un ensayo del receptor funcional, por ejemplo, basado en la competencia entre el cAMP formado de manera endogena y el cAMP marcado con biotina anadido de manera exogena, en dicho ensayo, preferentemente, se captura el cAMP utilizando un anticuerpo espedfico y/o donde un ensayo aun mas preferido es el ensayo AlphaScreen cAMP, de la manera mas preferida el descrito en el Ejemplo 20.

131. El derivado de cualquiera de las realizaciones 127-128, donde la activacion del receptor de GLP-1 humano se mide en un ensayo in vitro, en un ensayo con un gen indicador.

132. El derivado de la realizacion 131, donde el ensayo se lleva a cabo en una lmea celular BHK transfectada de manera estable que expresa el receptor de GLP-1 humano y contiene el ADN para el elemento de respuesta a cAMP (CRE) acoplado a un promotor y el gen para la luciferasa de luciernaga (CRE luciferasa).

133. El derivado de la realizacion 132, donde cuando ha finalizado la incubacion del ensayo se anade luciferina y se mide la luminiscencia.

134. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-133, donde el ensayo se lleva a cabo en ausencia de albumina serica (0% de HSA, concentracion final en el ensayo).

135. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-134, donde el ensayo se lleva a cabo en presencia de un 1% de albumina serica (HSA, concentracion final en el ensayo).

136. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-135, donde las celulas son celulas BHK con BHK-ts13 como una lmea celular progenitora.

137. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-136, donde las celulas se derivan del clon FCW467-12A.

138. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-137, donde las celulas se cultivan con un 5% de CO2 en un medio de cultivo celular, se obtienen almuotas y se almacenan en nitrogeno lfquido.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

139. El derivado de la realizacion 138, donde el medio de cultivo celular es un 10% de FBS (siglas en ingles de suero bovino fetal), 1 mg/mL de G418, MTX (metotrexato) 240 nM y 1% de pen/estrep (penicilina/estreptomicina).

140. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-139, donde antes de cada ensayo se toma una alfcuota del cultivo celular y se lava dos veces en PBS antes de suspenderla en la concentracion deseada en el tampon de ensayo.

141. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-140, donde para las placas de 96 pocillos se lleva a cabo la suspension para obtener una concentracion final de 5x103 celulas/pocillo.

142. El derivado de cualquiera de las realizaciones 140-141, donde el tampon de ensayo es tampon de ensayo al

1%, que esta constituido por un 2% de ovalbumina, 0.2% de Pluronic F-68 y un 2% de hSa en medio de ensayo.

143. El derivado de cualquiera de las realizaciones 140-141, donde el tampon de ensayo es tampon de ensayo al

0%, que esta constituido por un 2% de ovalbumina y un 0.2% de Pluronic F-68 en medio de ensayo.

144. El derivado de cualquiera de las realizaciones 142-143, donde el medio de ensayo esta constituido por DMEM sin rojo de fenol, Hepes 10 mM y 1x Glutamax.

145. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-144, donde el procedimiento del ensayo comprende las siguientes etapas:

i) Las reservas de celulas se descongelan en un bano de agua a 37 °C;

ii) las celulas se lavan tres veces en PBS;

iii) las celulas se cuentan y se ajustan a 5x103 celulas/50 |jL (1x105 celulas/mL) en medio de ensayo y se transfiere una alfcuota de 50 jL de celulas a cada pocillo en la placa de ensayo;

iv) las reservas de los compuestos de prueba y los compuestos de referencia, si hay alguno, se diluyen hasta una concentracion de 0.2 jM en tampon de ensayo al 0% para el ensayo con 0% de HSA o tampon de ensayo al 1% para el ensayo con 1% de HSA; y los compuestos se diluyen 10 veces para obtener un intervalo adecuado de concentraciones (tales como: 2x10'7 M, 2x10'8 M; 2x10'9 M, 2x10'1° M, 2x10'11 M, 2x10'12 M y 2x10'13 M), y para cada compuesto tambien se incluye un control con un blanco de tampon de ensayo;

v) se transfiere una alfcuota de 50 jL de un compuesto o blanco por triplicado desde la placa de dilucion hasta la placa de ensayo y los compuestos se estudian con concentraciones adecuadas (tales como las siguientes concentraciones finales: 1x10'7 M, 1x10'8 M; 1x10'9 M, 1x10■1° M, 1x10'11 M, 1x10'12 M y 1x10'13 M);

vi) la placa de ensayo se incuba durante 3 h en un incubador con un 5% de CO2 a 37°C;

vii) la placa de ensayo se retira del incubador y se permite que este a la temperatura ambiente durante 15 min;

ixx) se anade una alfcuota de luciferina (tal como el reactivo steadylite plus) de 100 jL a cada pocillo de la placa de ensayo;

ix) se cubre cada placa de ensayo para protegerla de la luz y se agita durante 30 min a la temperatura ambiente; y

x) se lee cada placa de ensayo, por ejemplo, en un instrumento TopCount NXT de Packard.

146. El derivado de la realizacion 145, donde los datos del instrumento TopCount se transfieren al software GraphPad Prism 5 para los calculos deseados.

147. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-146, donde se promedian los valores para cada triplicado, se realiza una regresion no lineal y se calculan los valores de EC50.

148. El derivado de cualquiera de las realizaciones 145-147, donde la regresion es log(agonista) frente a la respuesta-pendiente de la variable (cuatro parametros)).

149. El derivado de cualquiera de las realizaciones 127-128, donde la potencia se determina tal como se ha descrito en cualquiera de las realizaciones 131-148.

150. El derivado de la realizacion 149, donde la potencia se determina tal como se ha descrito en el Ejemplo 21.

151. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-150, cuyo valor de EC50 no es superior a 20 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

5

10

15

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25

30

35

40

45

152. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-151, cuyo valor de EC50 no es superior a 15 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

153. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-152, cuyo valor de EC50 no es superior a 10 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

154. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-153, cuyo valor de EC50 no es superior a 5 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

155. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-154, cuyo valor de EC50 no es superior a 2,5 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

156. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-155, cuyo valor de EC50 es inferior al valor de EC50 de la semaglutida.

157. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-156, cuyo valor de EC50 es inferior a 0.75 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

158. El derivado de cualquiera de las realizaciones 131-157, cuyo valor de EC50 es inferior a 0.50 veces el valor de EC50 de la semaglutida.

159. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-158, para el cual la afinidad de union al receptor de GLP-1 (IC50) en presencia de aproximadamente un 0.001% de HSA (poca albumina) es

a) inferior a 500 nM, preferentemente inferior a 250 nM, mas preferentemente inferior a 100 nM o de la manera mas preferida inferior a 50 nM;

b) inferior a 10 pM, preferentemente inferior a 8.0 pM, todavfa mas preferentemente inferior a 6.0 pM, aun mas preferentemente inferior a 5.0 pM o de la manera mas preferida inferior a 3.0 pM;

c) inferior a 2.0 nM, preferentemente inferior a 1.0 nM, aun mas preferentemente inferior a 0.80 nM o de la manera mas preferida inferior a 0.60 nM; o

d) inferior a 0.40 nM, preferentemente inferior a 0.30 nM, aun mas preferentemente inferior a 0.20 nM o de la manera mas preferida inferior a 0.10 nM.

160. El derivado de la realizacion 127, donde la activacion del receptor de GLP-1 humano se mide como la afinidad de union al receptor de GLP-1 (IC50) en presencia de aproximadamente un 0.001% de HSA (poca albumina).

161. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-160, para el cual la afinidad de union al receptor de GLP-1 (IC50) en presencia de aproximadamente un 2.0% de HSA (mucha albumina) es

a) inferior a 1000 nM, preferentemente inferior a 800 nM;

b) inferior a 700 nM, preferentemente inferior a 500 nM, mas preferentemente inferior a 300 nM; o

c) inferior a 200 nM, preferentemente inferior a 100 nM o mas preferentemente inferior a 50 nM.

162. El derivado de cualquiera de las realizaciones 159-161, donde la afinidad de union al receptor de GLP-1 se mide en funcion del desplazamiento de 125I-GLP-1 del receptor, preferentemente utilizando un ensayo de union SPA.

163. El derivado de la realizacion 161, donde el receptor de GLP-1 se prepara utilizando una lmea celular transfectada estable, preferentemente una lmea celular de hamster, mas preferentemente una lmea celular renal de una cna de hamster tal como BHK tk-ts13.

164. El derivado de cualquiera de las realizaciones 159-163, donde el valor de IC50 se determina como la concentracion con la que se desplaza un 50% de 125I-GLP-1 del receptor.

165. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-164, que tiene una biodisponibilidad oral, preferentemente una biodisponibilidad oral absoluta, que es superior a la de la semaglutida.

166. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-165, que tiene una biodisponibilidad oral, preferentemente una biodisponibilidad oral absoluta, que es superior a la de la liraglutida.

167. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-166, donde el derivado es eficaz para reducir la glucosa en sangre in vivo en ratones db/db.

168. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-167, donde el derivado es eficaz para reducir el peso corporal in vivo en ratones db/db.

5

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15

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30

35

40

45

169. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-168, el cual, en un estudio PD en cerdos, reduce la ingesta de alimentos en el dfa 1,2, 3 y/o 4 despues de la administracion s.c. de una unica dosis del derivado, en comparacion con un grupo de control tratado con el vehnculo.

170. El derivado de la realizacion 169, donde la dosis es de 0.3, 1, 3, 10 o 30 nmol/kg; preferentemente de 3.0 nmol/kg.

171. El derivado de cualquiera de las realizaciones 169-170, donde la ingesta de alimentos en el dfa 1 se reduce hasta un 80% o menos, preferentemente hasta un 60% o menos, mas preferentemente hasta un 50% o menos o de la manera mas preferida hasta un 40% o menos.

172. El derivado de cualquiera de las realizaciones 169-171, donde la ingesta de alimentos en el dfa 2 se reduce hasta un 80% o menos, preferentemente hasta un 60% o menos o mas preferentemente hasta un 40% o menos.

173. El derivado de cualquiera de las realizaciones 169-172, donde el estudio se lleva a cabo y los datos se compilan y analizan tal como se describe en el Ejemplo 25.

174. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-173, el cual tiene un perfil de accion mas prolongado que la liraglutida.

175. El derivado de la realizacion 174, donde la prolongacion se refiere a la semivida in vivo en una especie animal relevante, tal como ratones db/db, ratas, cerdos y/o, preferentemente, minicerdos; donde el derivado se administra i) s.c. y/o ii) i.v.; preferentemente ii) i.v.

176. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-175, donde la semivida de eliminacion (Ty) despues de la administracion i.v. en ratas es superior a la de la semaglutida.

177. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-176, donde la semivida de eliminacion (Ty) despues de la administracion i.v. en ratas es al menos a) un 25% superior, b) un 50% superior, c) un 75% superior o d) un 100% superior (=el doble) que la semivida de eliminacion de la semaglutida.

178. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-177, donde la semivida de eliminacion (Ty2) despues de la administracion i.v. en ratas es al menos dos veces la semivida de eliminacion de la semaglutida.

179. El derivado de cualquiera de las realizaciones 174-178, donde la semivida se determina en estudios farmacocineticos in vivo en ratas, por ejemplo, tal como se describe en el Ejemplo 24.

180. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-179, donde la semivida de eliminacion (Ty) despues de la administracion i.v. en minicerdos es

a) de al menos 8 horas, preferentemente de al menos 16 horas, mas preferentemente de al menos 24 horas, aun mas preferentemente de al menos 32 horas o de la manera mas preferida de al menos 40 horas; o

b) de al menos 50 horas, preferentemente de al menos 55 horas, mas preferentemente de al menos 60 horas o aun mas preferentemente de al menos 65 horas.

181. El derivado de la realizacion 180, donde los minicerdos son minicerdos macho Gottingen.

182. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-181, donde los minicerdos tienen una edad de 7-14 meses y pesan preferentemente entre 16-35 kg.

183. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-182, donde a los minicerdos se les aloja de manera individual y se les alimenta una o dos veces al dfa, preferentemente con una dieta para minicerdos SDS.

184. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-183, donde la dosis del derivado se administra i.v. despues de al menos 2 semanas de aclimatacion.

185. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-184, donde se priva a los animales de alimentos durante aproximadamente 18 h antes de la administracion de la dosis y entre 0 y 4 h despues de la administracion de la dosis y durante todo el periodo tienen acceso al agua sin restricciones.

186. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-185, donde el derivado de GLP-1 se disuelve en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, 0.05% de tween 80, pH 7.4, hasta una concentracion adecuada, preferentemente entre 20-60 nmol/mL.

187. El derivado de cualquiera de las realizaciones 180-186, donde la inyeccion intravenosa de los derivados se proporciona en un volumen correspondiente a 1-2 nmol/kg.

196. Una composicion farmaceutica que comprende un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1187 y un excipiente farmaceuticamente aceptable.

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40

45

197. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-187 como un medicamento.

198. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-187 en el tratamiento y/o prevencion de todas las formas de diabetes, trastornos de la alimentacion, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales y/o el smdrome del ovario poliqmstico y/o para retrasar o prevenir la evolucion de la enfermedad diabetica.

199. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones 1-187 en la produccion de un medicamento para el tratamiento y/o prevencion de todas las formas de diabetes, trastornos de la alimentacion, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales y/o el smdrome del ovario poliqmstico y/o para retrasar o prevenir la evolucion de la enfermedad diabetica.

La invencion tambien se refiere a un derivado de un analogo de GLP-1, donde el analogo comprende un primer residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1), un segundo residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y como maximo ocho cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1 (7-37), donde el derivado comprende un primer y un segundo resto de prolongacion unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, mediante un primer y segundo conector, respectivamente, donde el primer y el segundo resto de prolongacion es Qmm. 2:

Qmm. 2 : HOOC-CaH4-O-(CH2)y-CO-*,

en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13; y el primer y el segundo conector comprenden Qmm. 3 : *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NH2]-CO-*,

donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5 y w es un numero entero en el intervalo de 0-5; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este; asf como tambien cualquiera de las realizaciones anteriores 2200 anexas a este documento como realizaciones dependientes.

La invencion tambien se refiere a

a) . Un derivado de un peptido GLP-1,

donde el peptido comprende un primer residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP- 1 (7-37) (sEq ID NO:1), un segundo residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y ocho cambios de aminoacidos como maximo en comparacion con GLP-1 (7-37);

donde el derivado comprende dos restos de prolongacion unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, mediante un conector, donde el resto de prolongacion es Qmm. 2:

Qmm. 2 : HOOC-CaH4-O-(CH2)y-CO-*,

en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13, y

el conector comprende Qmm. 3:

Qmm. 3 : *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NH2]-CO-*,

donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, y w es un numero entero en el intervalo de 0-5; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

b) . El derivado de la realizacion a), donde Qmm. 3 esta conectado en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o el segundo residuo de K del peptido GLP-1.

c) . El derivado de cualquiera de las realizaciones a)-b), donde el conector comprende z veces Qmm. 3, donde z es un numero entero en el intervalo de 1-2.

d) . El derivado de cualquiera de las realizaciones a)-c), donde w es 0.

e) . El derivado de cualquiera de las realizaciones a)-d), donde q es 4.

f) . El derivado de cualquiera de las realizaciones a)-e), donde el conector comprende

Qmm. 4 : *-NH-(CH2)q-CH(NH2)-CO-*, donde q es un numero entero en el

intervalo de 3-5.

g) . El derivado de cualquiera de las realizaciones a)-f), donde el conector comprende

Qmm. 6 : *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*.

5

10

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35

40

h) . El derivado de cualquiera de las realizaciones a)-g), donde y es 9, 10 u 11.

i) . El derivado de cualquiera de las realizaciones a)-h), donde el analogo comprende un analogo de GLP-1 de Formula I:

Formula I : Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaai2-Thr-Ser-Asp-Xaai6-Ser-Xaai8-Xaaig-

Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-Xaa25-Lys-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa3i-Leu-Xaa33-Lys-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,

donde

Xaa7 es L-histidina, imidazopropionilo (Imp), a-hidroxihistidina, D-histidina, desaminohistidina (desH), 2- aminohistidina, p-hidroxihistidina, homohistidina, Wa-acetilhistidina, W-formilhistidina, a-fluorometilhistidina, a- metilhistidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;

Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, acido (i-aminociclopropil)carboxflico, acido (i- aminociclobutil)carboxflico, acido (1-aminociclopentil)carbox^lico, acido (1-aminociclohexil)carbox^lico, acido (i- aminocicloheptil)carbox^lico o acido (i-aminociclooctil)carboxflico;

Xaai2 es Phe o Leu;

Xaai6 es Val o Leu;

Xaai8 es Ser, Val o Leu;

Xaaig es Tyr o Gln;

Xaa20 es Leu o Met;

Xaa22 es Gly, Glu o Aib;

Xaa23 es Gln, Glu o Arg;

Xaa25 es Ala o Val;

Xaa27 es Glu o Leu;

Xaa30 es Ala, Glu o Arg;

Xaa3i es Trp o His

Xaa33 es Val;

Xaa35 es Gly o Aib;

Xaa36 es Arg o Gly;

Xaa37 es Gly o Arg; y

Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Arg o esta ausente.

j) . Un compuesto seleccionado entre los siguientes: Qmm. 2i, Qmm. 22, Qmm. 23, Qmm. 24, Qmm. 25, Qmm. 26, Qmm. 27, Qmm. 28, Qmm. 29, Qmm. 30, Qmm. 3i y Qmm. 32; o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

k) . Una composicion farmaceutica que comprende un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones a)-j), y un excipiente farmaceuticamente aceptable.

l) . El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones a)-j) como un medicamento.

m) . El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones a)-j) en el tratamiento y/o prevencion de todas las formas de diabetes, trastornos de la alimentacion, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales y/o el smdrome del ovario poliqmstico y/o para retrasar o prevenir la evolucion de la enfermedad diabetica.

n) . El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones a)-j) en la produccion de un medicamento para el tratamiento y/o prevencion de todas las formas de diabetes, trastornos de la alimentacion, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales y/o el smdrome del ovario poliqmstico y/o para retrasar o prevenir la evolucion de la enfermedad diabetica.

Ejemplos

5

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35

Al inicio de esta parte experimental aparece una lista de abreviaturas y despues una seccion que incluye metodos generales para sintetizar y caracterizar los analogos y derivados de la invencion. Despues aparecen varios ejemplos relacionados con la preparacion de derivados de GLP-1 espedficos y al final se han incluido varios ejemplos relacionados con la actividad y propiedades de estos analogos y derivados (seccion titulada metodos farmacologicos).

Los ejemplos sirven para ilustrar la invencion.

Lista de abreviaturas

Aib:

Acido a-aminoisobutmco

AcOH:

Acido acetico

API:

Principio activo farmaceutico

AUC:

Area bajo la curva

BG:

Glucosa en sangre

BHK

Rinon de cna de hamster

BW:

Peso corporal

Boc:

t-Butiloxicarbonilo

Bom:

Benciloximetilo

BSA:

Albumina serica bovina

Bzl:

Bencilo

CAS:

Chemical Abstracts Service (Servicio de Resumenes Cientfficos)

Clt:

2-Clorotritilo

Colidina:

2,4,6-trimetilpiridina

DCM:

Diclorometano

Dde:

1-(4,4-Dimetil-2,6-dioxociclohexilideno)etilo

DesH:

Desaminohistidina (tambien se puede denominar como acido imidazopropionico, Imp)

DIC:

Diisopropilcarbodiimida

DIPEA:

Diisopropiletilamina

DMEM:

Medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM)

EDTA:

Acido etilendiaminotetraacetico

EGTA:

Acido etilenglicoltetraacetico

FBS:

Suero bovino fetal

FCS:

Suero de ternero fetal

Fmoc:

9-Fluorenilmetiloxicarbonilo

HATU:

(Hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio)

HBTU:

(Hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3 tetrametiluronio)

HEPES:

Acido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinoetanosulfonico

HFIP

1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol o hexafluoroisopropanol

HOAt:

1-Hidroxi-7-azabenzotriazol

HOBt:

1-Hidroxibenzotriazol

5

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35

HPLC:

HSA:

IBMX:

Imp:

i.v.

ivDde:

IVGTT:

LCMS:

LYD:

MALDI-MS: MALDI-TOF MS: MeOH:

Mmt:

Mtt:

MTX:

NMP:

OBz:

OEG:

OPfp:

OPnp:

OSu:

OfBu:

Oxyma Pure ®: Pbf:

PBS:

PD:

Pen/Strep:

PK:

RP:

RP-HPLC:

RT:

Rt:

s.c.:

SD:

SEC-HPLC:

SEM:

SPA:

Cromatrograffa Ifquida de alta resoIucion AIbumina serica humana

3- IsobutiI-1-metiIxantina

Acido imidazopropionico (tambien denominado desaminohistidina, DesH)

Por via intravenosa

1-(4,4-DimetiI-2,6-dioxocicIohexiIideno)-3-metiIbutiIo Test intravenoso de toIerancia a Ia gIucosa Cromatograffa Kquida - Espectroscop^a de masas Landrace Yorkshire Duroc Remftase a MALDI-TOF MS

Espectroscopfa de masas de desorcion/ionizacion Iaser asistida por Ia matriz - Tiempo de vueIo MetanoI

4- MetoxitritiIo 4-MetiItritiIo Metotrexato W-metiIpirroIidona Ester de benzoiIo

Acido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico

PentafIuorofenoxi

para-Nitrofenoxi

Esteres de O-succinimidiIo (esteres de hidroxisuccinimida)

Ester de f-butiIo

Ester effIico deI acido cianohidroximinoacetico

2,2,4,6,7-PentametiIdihidrobenzofuran-5-suIfoniIo

SoIucion saIina tamponada con fosfato

Farmacodinamica

PeniciIina/Estreptomicina

Farmacocinetica

Fase inversa

Cromatograffa ffquida de aIta resoIucion de fase inversa

Temperatura ambiente

Tiempo de retencion

Por via subcutanea

Desviacion estandar

Cromatograffa Kquida de aIta resoIucion de excIusion por tamano Error estandar de Ia media Ensayo de centeIIeo por proximidad

5

10

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40

SPPS:

Smtesis de peptidos en fase solida

tBu:

tert-Butilo

TFA:

Acido trifluoroacetico

TIS:

Triisopropilsilano

TLC:

Cromatograffa de capa fina

Tos:

Tosilato (o para-toluenosulfonilo)

Tris:

Tris(hidroximetil)aminometano o 2-amino-2-hidroximetilpropano-1,3-diol

Trt:

Trifenilmetilo (tritilo)

Trx:

Acido tranexamico

UPLC:

Cromatrograffa Kquida de ultrarresolucion

Materiales y metodos

Materiales

Complejo de a-picolina-borano (CAS 3999-38-0)

Ester etflico del acido cianohidroximinoacetico (CAS 3849-21-6)

Acido W-a,A/-p-di-Fmoc-L-2,3-Diaminopropionico (CAS 201473-90-7)

Acido 3,5-di-tert-butil-4-hidroxibenzoico (CAS 1421-49-4)

Acido 3,5-di-tert-butilbenzoico (CAS 16225-26-6)

Acido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico (CAS 166108-71-0)

Acido 17-(9-fluorenilmetiloxicarbonilamino)-9-aza-3,6,12,15-tetraoxa-10-on-heptadecanoico (IRIS Biotech GmbH)

Ester 1-terf-butilico del acido Fmoc-L-glutamico (CAS 84793-07-7)

Acido 2-(2-metoxietoxi)acetico (CAS 16024-56-9)

W-a,A/-£-Bis(9-fluorenilmetiloxicarbonil)-L-lisina (CAS 78081-87-5)

Acido 1-[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carboml]pipendine-4-carboxflico (CAS 148928-15-8)

Acido Fmoc-8-aminocapnlico (CAS 126631-93-4)

Acido 4-fenilbutmco (CAS 1716-12-7)

Acido 4-(4-nitrofenil)butmco (CAS 5600-62-4)

Acido 4-(4-clorofenil)butmco (CAS 4619-18-5)

Acido Fmoc-6-aminohexanoico (CAS 88574-06-5)

Acido Fmoc-12-aminododecanoico (CAS 128917-74-8)

Ester tert-butilico del acido 4-(9-carboxinoniloxi)benzoico (preparado tal como se describe en el Ejemplo 25, etapa 1 y 2 del documento WO 2006/082204)

Ester tert-butilico del acido 4-(8-carboxioctiloxi)benzoico (M.p.: 71-72 °C).

1H RMN (300 MHz, CDCls, 5h): 7.93 (d, J=8.9 Hz, 2 H); 6.88 (d, J=8.9 Hz, 2 H); 4.00 (t, J=6.4 Hz, 2 H); 2.36 (t, J=7.4 Hz, 2 H); 1.80 (m, 2 H); 1.65 (m, 2 H);1.59 (s, 9 H); 1.53-1.30 (m, 8 H) (preparado tal como se describe en el Ejemplo 25, etapa 1 y 2 del documento WO 2006/082204, reemplazando el 10-bromodecanoato de metilo por 9- bromononanoato de etilo (CAS 28598-81-4)) Ester tert-butilico del acido 4-(7-carboxiheptiloxi)benzoico (espectro de 1H RMN (300 MHz, CDCla, 5h): 7.93 (d, J=9.0 Hz, 2 H); 6.88 (d, J=9.0 Hz, 2 H); 4.00 (t, J=6.5 Hz, 2 H); 2.37 (t, J=7.4 Hz, 2 H); 1.80 (m, 2 H); 1.64 (m, 2 H);1.59 (s, 9 H); 1.53-1.33 (m, 6 H)) (preparado tal como se describe en el Ejemplo 25, etapa 1 y 2 del documento WO 2006/082204, reemplazando el 10-bromodecanoato de metilo por 7- bromoheptanoato de etilo (CAS 29823-18-5)).

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Metodos qmmicos

Esta seccion se divide en dos: Seccion A, que se refiere a los metodos generales (de preparacion (A1) y de deteccion y caracterizacion (A2)) y la Seccion B, en la cual se describe la preparacion y caracterizacion de varios ejemplos espedficos de los compuestos.

A. Metodos generales

A1. Metodos de preparacion

Esta seccion se refiere a los metodos de la smtesis de peptidos en fase solida (metodos de SPPS, incluidos los metodos para la desproteccion de los aminoacidos, metodos para escindir el peptido de la resina y para su purificacion, asf como tambien metodos para detectar y caracterizar los peptidos resultantes (metodos de LCMS, MALDI y UPLC). La smtesis en fase solida de los peptidos se puede mejorar en algunos casos utilizando dipeptidos protegidos en el enlace amida del dipeptido con un grupo que se pueda escindir en condiciones acidas tal como, sin caracter limitante, 2-Fmoc-oxi-4-metoxibencilo o 2,4,6-trimetoxibencilo. En los casos en los que esta presente una treonina en el peptido, se pueden utilizar dipeptidos de pseudoprolina (se pueden adquirir, por ejemplo, de Novabiochem, remftase tambien a W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403). Los derivados de aminoacidos protegidos con Fmoc utilizados fueron los estandar recomendados: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc- Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH o, Fmoc-Val-OH etc. suministrados por, por ejemplo, Anaspec, Bachem, Iris Biotech o Novabiochem. Donde no se especifica nada mas, se utilizan los aminoacidos en su forma L natural. El aminoacido N-terminal se protegio con Boc en el grupo alfa-amino (por ejemplo, Boc-His(Boc)-OH o Boc-His(Trt)-OH para los peptidos con His en el extremo N). En el caso de la union modular del resto de union a la albumina utilizando SPPS, se utilizaron los siguientes componentes basicos protegidos de manera adecuada tales como, sin caracter limitante, el acido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico, el acido Fmoc-tranexamico, Fmoc-Glu-OtBu, el ester mono-ferf-butflico del acido octadecanodioico, el ester mono-ferf- butflico del acido nonadecanodioico, el ester mono-ferf-butflico del acido tetradecanodioico o el ester ferf-butflico del acido 4-(9-carboxinoniloxi)benzoico. Todas las operaciones indicadas a continuacion se realizaron a una escala de smtesis de 250 pmol.

1. Smtesis del esqueleto peptidico protegido unido a la resina Mefodo: SPPS_P

Se llevo a cabo SPPS_P en un Sintetizador de Peptidos en Fase Solida Prelude de Protein Technologies (Tucson, AZ 85714 EE. UU.) a una escala de 250 pmol utilizando un exceso de seis veces de Fmoc-aminoacidos (300 mM en NMP con HOAt u Oxyma Pure® 300 mM) respecto a la carga de la resina, por ejemplo, carga baja de Fmoc-Gly- Wang (0.35 mmol/g). La desproteccion de Fmoc se realizo utilizando un 20% de piperidina en NMP. El acoplamiento se llevo a cabo utilizando 3 : 3 : 3 : 4 aminoacido/(HOAt u Oxyma Pure®)/DIC/colidina en NMP. Se llevaron a cabo lavados superiores con NMP y DCM (7 mL, 0.5 min, 2 x 2 cada uno) entre las etapas de desproteccion y acoplamiento. Por lo general el tiempo de acoplamiento fue de 60 minutos. Algunos aminoacidos que incluyen, sin caracter limitante, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Aib-OH o Boc-His(Trt)-OH se «acoplaron de manera doble», lo que significa que despues del primer acoplamiento (por ejemplo, 60 min), se dreno la resina y se anadieron mas reactivos (aminoacido, (HOAt u Oxyma Pure®), DIC y colidina) y se permitio que la mezcla reaccionara de nuevo (por ejemplo, 60 min).

Mefodo: SPPS_L

Se llevo a cabo SPPS_L en un sintetizador de peptidos Liberty con microondas de CEM Corp. (Matthews, NC 28106, EE. UU.) a una escala de 250 pmol o 100 pmol utilizando un exceso de seis veces de Fmoc-aminoacidos (300 mM en NMP con HOAt u Oxyma Pure® 300 mM) respecto a la carga de la resina, por ejemplo, carga baja de Fmoc-Gly-Wang (0.35 mmol/g). Se llevo a cabo la desproteccion de Fmoc utilizando un 5% de piperidina en NMP a una temperatura de hasta 75 °C durante 30 segundos; despues la resina se filtro y se lavo con NMP y la desproteccion de Fmoc se repitio esta vez durante 2 minutos a 75 °C. El acoplamiento se llevo a cabo utilizando 1 : 1 : 1 aminoacido/(HOAt u Oxyma Pure®)/DIC en NMP. Por lo general, el tiempo de acoplamiento y la temperatura fueron de 5 minutos y de hasta 75 °C. Se utilizo un tiempo de acoplamiento mas largo para las reacciones a mayor escala, por ejemplo, de 10 min. Los aminoacidos de tipo histidina se acoplaron de manera doble a 50 °C o se acoplaron de manera cuadruple si el anterior aminoacido estaba impedido desde un punto de vista esterico (por ejemplo, Aib). Los aminoacidos de tipo arginina se acoplaron a Rt durante 25 minutos y a continuacion se calentaron hasta 75 °C durante 5 min. Algunos aminoacidos tales como, sin caracter limitante, Aib, se «acoplaron de manera doble» lo que significa que tras el primer acoplamiento (por ejemplo, 5 min a 75 °C), se dreno la resina y se anadieron mas reactivos (aminoacido, (HOAt u Oxyma Pure®) y DIC) y la mezcla se calento de nuevo (por ejemplo, 5 min a 75 °C). Se llevaron a cabo lavados con NMP (5 x 10 mL) entre las etapas de desproteccion y acoplamiento.

Mefodo: SPPS A

La resina peptidilo protegida se sintetizo de acuerdo con la estrategia Fmoc en un sintetizador de peptidos 433 de Applied Biosystems a una escala de 250 pmol o 1000 pmol con un exceso de Fmoc-aminoacidos de tres o cuatro veces, utilizando los protocolos FastMoc Uv suministrados por el proveedor que emplean acoplamientos mediados por HBTU (2-(hexafluorofosfato de 1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3 tetrametiluronio) o HATU (hexafluorofosfato de 0-(7- 5 azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio) en NMP y monitorizacion por UV para la desproteccion del grupo protector Fmoc, en algunos casos se utilizaron acoplamientos dobles, lo que significa que tras el primer acoplamiento la resina se drena y se anaden mas Fmoc-aminoacidos y reactivos. La resina de partida utilizada para la smtesis de las amidas peptfdicas fue una resina Rink-Amida y una resina Wang precargada (por ejemplo, carga baja de Fmoc-Gly-Wang o Fmoc-Lys(Mtt)-wang) o resina de clorotritilo para los peptidos con un carboxi C-terminal. 10 Los derivados de aminoacidos protegidos utilizados fueron Fmoc-aminoacidos estandar (suministrados por, por ejemplo, Anaspec o Novabiochem) suministrados en cartuchos pesados previamente adecuados para el sintetizador ABI433A con la excepcion de los aminoacidos no naturales tales como Fmoc-Aib-OH (acido Fmoc-aminoisobutmco). El aminoacido N-terminal se protegio con Boc en el grupo alfa-amino (por ejemplo, se utilizo Boc-His(Boc)-OH o Boc-His(Trt)-OH para los peptidos con His N-terminal). En el grupo epsilon-amino de las lisinas de la secuencia se 15 protegio con Mtt, Mmt, Dde, ivDde o Boc, dependiendo de la via de union del resto de union a la albumina y el espaciador. La smtesis de los peptidos se puede mejorar en algunos casos utilizando dipeptidos protegidos en el enlace amida del dipeptido con un grupo que se pueda escindir en condiciones acidas tal como, sin caracter limitante, 2-Fmoc-oxi-4-metoxibencilo o 2,4,6-trimetoxibencilo. En los casos en los que este presente en el peptido una serina o una treonina, se pueden utilizar dipeptidos de pseudoprolina (remftase, por ejemplo, al catalogo de 20 Novobiochem 2009/2010 o la version mas nueva, o W.R. Sampson (1999), J. Pep. Sci. 5, 403).

Metodo: SPPS_M

SPPS_M se refiere a la smtesis de la resina de peptidilo protegida utilizando qmmica de Fmoc manual. La qmmica de acoplamiento fue DIC/(HOAt u Oxyma Pure®)/colidina en NMP con un exceso molar de 4-10 veces. Las condiciones de acoplamiento fueron 1-6 h a la temperatura ambiente. La desproteccion de Fmoc se llevo a cabo con 25 un 20-25% de piperidina en NMP (3 x 20 mL, 10 min cada vez) seguida por lavados con NMP (4 x 20 mL).

2. Smtesis de las cadenas laterales Monoesteres de diacidos grasos

Cuando se calientan a reflujo durante toda la noche los diacidos C8, C10, C12, C14, C16 y C18 con anhndrido de Boc DMAP t-butanol en tolueno se obtiene predominantemente el monoester de t-butilo. Despues del tratamiento de 30 la reaccion se obtiene una mezcla del monoacido, diacido y diester. La purificacion se lleva a cabo mediante lavado, filtracion a traves de un lecho corto de sflice y recristalizacion.

3. Union de las cadenas laterales al esqueleto peptidico protegido unido a la resina

Cuando esta presente una acilacion en una cadena lateral de lisina, el grupo epsilon-amino de la lisina que se va a acilar se protege con Mtt, Mmt, Dde, ivDde o Boc, dependiendo de la ruta de union del resto de prolongacion y el 35 conector. La desproteccion de Dde- o ivDde se llevo a cabo con un 2% de hidrazina en NMP (2 x 20 mL, 10 min cada vez) seguida por lavados con NMP (4 x 20 mL). La desproteccion de Mtt o Mmt se llevo a cabo con un 2% de TFA y un 2-3% de TIS en DCM (5 x 20 mL, 10 min cada vez) seguida por lavados con DCM (2 x 20 mL), MeOH al 10% y DIPEA al 5% en DCM (2 x 20 ml) y NMP (4 x 20 ml) o mediante tratamiento con hexafluoroisopropanol/DCM (75:25, 5 x 20 ml, 10 min cada vez) seguido por lavados como los anteriores. En algunos casos el grupo Mtt se 40 elimino mediante etapas automaticas en el sintetizador de peptidos Liberty. Se llevo a cabo la desproteccion de Mtt con hexafluoroisopropanol o hexafluoroisopropanol/DCM (75:25) a la temperatura ambiente durante 30 min seguida por lavados con DCM (7 mL x 5) y despues lavados con NMP (7 mL x 5). El resto de prolongacion y/o el conector se puede unir al peptido por acilacion del peptido unido a la resina o por acilacion en solucion del peptido no protegido. En el caso de union del resto de prolongacion y/o conector a la resina peptidilo protegida, la union puede ser 45 modular utilizando SPPS y componentes basicos protegidos de manera adecuada.

Metodo: SC_P

Se elimino el grupo protector de N-e-lisina tal como se ha descrito anteriormente y la modificacion qmmica de la lisina se llevo a cabo mediante una o mas etapas automaticas en el sintetizador de peptidos Prelude utilizando componentes basicos protegidos de manera adecuada tal como se ha descrito anteriormente. Se llevaron a cabo 50 acoplamientos dobles tal como se ha descrito en SPPS_P con acoplamientos de 3 horas.

Metodo: SC_L

Se elimino el grupo protector de N-e-lisina tal como se ha descrito anteriormente y la modificacion qmmica de la lisina se llevo a cabo mediante una o mas etapas automaticas en el sintetizador de peptidos Liberty utilizando componentes basicos protegidos de manera adecuada tal como se ha descrito anteriormente. Los acoplamientos 55 dobles se llevaron a cabo tal como se ha descrito en SPPS_L.

Metodo: SC A

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Se elimino el grupo protector de N-e-lisina tal como se ha descrito anteriormente y la modificacion qmmica de la lisina se llevo a cabo mediante una o mas etapas automaticas en el sintetizador de peptidos ABI utilizando componentes basicos protegidos de manera adecuada tal como se ha descrito en SPPS_A.

Metodo: SC_M1

Se elimino el grupo protector de N-e-lisina tal como se ha descrito anteriormente. Se disolvio el resto de prolongacion o conector activo (ester activo o antndrido simetrico) tal como el monoester 2,5-dioxopirrolidin-14lico del acido octadecanodioico (Ebashi et al. EP511600, 4 equivalentes molares respecto al peptido unido a la resina) en NMP (25 mL), se anadio a la resina y se agito durante toda la noche a la temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se filtro y la resina se lavo exhaustivamente con NMP, DCM, 2-propanol, metanol y eter dietflico.

Metodo: SC_M2

Se elimino el grupo protector de N-e-lisina tal como se ha descrito anteriormente. El resto de prolongacion se disolvio en NMP/DCM (1:1, 10 mL). Se anadio el reactivo activante tal como HOBt u Oxyma Pure® (4 equivalentes molares respecto a la resina) y DIC (4 equivalentes molares respecto a la resina) y la solucion se agito durante 15 min. La solucion se anadio a la resina y se anadio DIPEA (4 equivalentes molares respecto a la resina). La resina se agito de 2 a 24 horas a la temperatura ambiente. La resina se lavo con NMP (2 x 20 mL), NMP/DCM (1:1,2 x 20mL) y DCM (2 x 20 mL).

Metodo: SC_M3

Se disolvio el resto de prolongacion o conector activo (ester activo o antndrido simetrico) tal como el monoester 2,5- dioxopirrolidin-14lico del acido octadecanodioico (Ebashi et al. EP511600), 1-1.5 equivalentes molares respecto al peptido unido a la resina, en un disolvente organico tal como acetonitrilo, THF, DMF, DMSO o en una mezcla de agua/disolvente organico (1-2 mL) y se anadio a una solucion del peptido en agua (10-20 mL) junto con 10 equivalentes molares de DIPEA. En el caso de grupos protectores en el resto de prolongacion tal como tert-butilo, la mezcla de reaccion se liofilizo durante toda la noche y el peptido crudo aislado se desprotegio posteriormente. En el caso de grupos protectores de tipo tert-butilo, la desproteccion se llevo a cabo disolviendo el peptido en una mezcla de acido trifluoroacetico, agua y triisopropilsilano (90:5:5). Despues de 30 min se evaporo la mezcla al vacfo y el peptido crudo se purifico mediante HPLC preparativa tal como se describe mas adelante.

4. Escision del peptido unido a la resina con o sin cadenas laterales unidas y purificacion

Metodo: CP_M1

Despues de la smtesis, la resina se lavo con DCM y el peptido se escindio de la resina mediante un tratamiento de 2-3 horas con TFA/TIS/agua (95/2.5/2.5 o 92.5/5/2.5) seguido por precipitacion con eter dietflico. El peptido se disolvio en un disolvente adecuado (tal como, por ejemplo, acido acetico al 30%) y se purifico mediante RP-HPLC estandar en una columna C18 de 5 pM utilizando acetonitrilo/agua/TFA. Las fracciones se analizaron mediante una combinacion de metodos de UPLC, MALDI y LCMS y las fracciones apropiadas se combinaron y liofilizaron.

Metodo: CP_L1

Despues de la smtesis, la resina se lavo con DCM y el peptido se escindio de la resina utilizando un Sistema de Escision por Microondas CEM Accent (CEM Corp., Carolina del Norte). La escision de la resina se llevo a cabo a 38 °C durante 30 minutos mediante tratamiento con TFA/TIS/agua (95/2.5/2.5) seguido por la precipitacion con eter dietflico. El peptido se disolvio en un disolvente adecuado (tal como, por ejemplo, acido acetico al 30%) y se purifico mediante RP-HPLC estandar en una columna C18 de 5 pM utilizando acetonitrilo/agua/TFA. Las fracciones se analizaron mediante una combinacion de metodos de UPLC, MALDI y LCMS y las fracciones apropiadas se combinaron y liofilizaron.

A2. Metodos generales para la deteccion y caracterizacion

1. Metodos de LC-MS

Metodo: LCMS01v1

Se llevo a cabo LCMS01v1 en una disposicion constituida por un sistema de UPLC Acquity de Waters y un espectrometro de masas LCT Premier XE de Micromass. Eluyentes:

A: 0.1% de acido formico en agua

B: 0.1% de acido formico en acetonitrilo. El analisis se llevo a cabo a RT inyectando un volumen apropiado de la muestra (preferentemente 2-1 pL) en la columna que se eluyo con un gradiente de A y B. Las condiciones de UPLC, configuracion del detector y configuracion del espectrometro de masas fueron: Columna: Acquity UPLC BEH de Waters, C-18, 1.7 pm, 2.1 mm x 50mm. Gradiente: Lineal 5% - 95% de acetonitrilo durante 4.0 min (de manera alternativa 8.0 min) con 0.4 mL/min. Deteccion: 214 (emision del analogo a partir de TUV (siglas en

5

10

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30

35

ingles de detector de UV sintonizable)) medio de ionizacion MS: Barrido API-ES: 100-2000 amu (de manera alternativa 500-2000 amu), etapa 0.1 amu.

2. Metodos de UPLC

Metodo: UPLC02v1

El analisis RP se llevo a cabo utilizando un sistema UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Se recogio la detection UV a 214 nm y 254 nm utilizando una columna ACQUlTY UPLC BEH130, C18, 130A, 1.7um, 2.1 mm x 150 mm, 40 °C. El sistema de UPLC se conecto a dos depositos de eluyente que conteman: A: un 99.95% de H2O, un 0.05% de TFA; B: un 99.95% de CH3CN, un 0.05% de TfA. Se utilizo el siguiente gradiente lineal: de un 95% de A, 5% de B a un 95% de A, 5% B

Metodo: UPLC07v1

El analisis RP se llevo a cabo utilizando un sistema UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Se recogio la deteccion UV a 214 nm y 254 nm utilizando una columna kinetex 1.7u C18, 100A 2.1 x 150 mm, 60 °C. El sistema de UPLC se conecto a dos depositos de eluyente que conteman: A: un 90% de agua y un 10% CH3CN con (NH4)2HPO4 0.045 M, pH 3.6, B: un 20% de isopropanol, un 20% de agua y un 60% de CH3CN. Se utilizo el siguiente gradiente en etapas: un 35% de B y un 65% de A durante 2 minutos, despues de un 35% de B y un 65% de A a un 65% de B y un 35% de A durante 15 minutos, despues de un 65% de B y un 35% de A a un 80% de B y un 20% de A durante 3 minutos con una tasa de flujo de 0.5 mL/min.

Metodo: UPLC06v1

El analisis RP se llevo a cabo utilizando un sistema UPLC de Waters equipado con un detector de banda dual. Se recogio la deteccion UV a 214 nm y 254 nm utilizando una columna kinetex 1.7u C18, 100A 2.1 x 150 mm, 60 °C. El sistema de UPLC se conecto a dos depositos de eluyente que conteman: A: Un 90% de agua y un 10% de MeCN con (NH4)2HPO4 0.045 M, pH 3.6, B: un 20% de isopropanol, un 20% de agua y un 60% de Ch3CN. Se utilizo el siguiente gradiente en etapas: un 25% de B y un 75% de A durante 2 minutos, despues de un 25% de B y un 75% A a un 55% de B y un 45% de A durante 15 minutos, despues de un 55% de B y un 45% de A a un 80% de B y un 20% de A durante 3 minutos con una tasa de flujo de 0.5 mL/min.

3. Metodo de MALDI-MS

Metodo: MALOI01v1

Los pesos moleculares se determinaron utilizando espectroscopia de masas de desorcion e ionizacion laser asistida por la matriz de tiempo de vuelo registrada en un Microflex o Autoflex (Bruker). Se utilizo una matriz de acido alfa- ciano-4-hidroxicinamico.

B. Compuestos de ejemplo

Ejemplo 1

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4-

carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£3a-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)- 4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1-(7-37)-peptido

Qmm. 21:

imagen16

Metodo de preparacion: SPPS_P; SC_P; CP_M1 MALDI01v01: m/z calc.: 4721 m/z observada: 4720 Metodo de UPLC: UPLC07v1: Rt = 9.2 min Metodo de UPLC: UPLC02v1: Rt = 7.8 min 5 Ejemplo 2

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1- 10 (7-37)-peptido

Qmm. 22:

imagen17

Metodo de preparacion: SPPS_P; SC_P; CP_M1 MALDI01v01: m/z calc.: 5101.8 m/z observada: 5100.3 15 Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 12.9 min

Ejemplo 3

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoii]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[lmp7,Aib8]-GLP-1- 20 (7-37)-peptido

Qmm. 23:

imagen18

MALDI01v01: m/z calc.: 4762.5 m/z observada: 4759.4

Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 13.2 min 5 Ejemplo 4

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-GLP-1-(7- 10 37)-peptido

Qmm. 24:

imagen19

Metodo de preparation: SPPS_P; SC_P; CP_M1 MALDI01v01: m/z calc.: 5087.8 m/z observada: 5086.1 15 Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 12.6 min

Ejemplo 5

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-

amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-GLP-1-(7-

37)-peptido

Qmm. 25:

5

imagen20

MALDI01v01: m/z calc.: 5059.7 m/z observada: 5057.5 Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 11.1 min Ejemplo 6

10 N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoii]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]amino]hexano il], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]amino]hexano il]-[Aib8]-GLP-1-(7-37)-peptido

15 Qmm. 26:

imagen21

Metodo de preparation: SPPS_P; SC_P; CP_M1 MALDI01v01: m/z calc.: 5358.2 m/z observada: 5356.2

Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 11.3 min Ejemplo 7

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]amino]hexano 5 il], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]amino]hexano il]-[Aib8]-GLP-1-(7-37)-peptido

Qmm. 27:

imagen22

10 Metodo de preparation: SPPS_P; SC_P; CP_M1

MALOI01v01: m/z calc.: 5330.1 m/z observada: 5328.8 Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 9.8 min Ejemplo 8

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4- 15 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1-

(7-37)-peptido

Qmm. 28:

5

10

15

imagen23

Metodo de preparacion: SPPS_P; SC_L; SC_M1; CP_M1

Metodo de LCMS LCMS01v01: m/z: observada m/3 1692, m/4 1269, m/5 1016; Rt = 2.17 min Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 11.5 min Ejemplo 9

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]ammo]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22]-

GLP-1-(7-37)-peptido

Qmm. 29:

imagen24

Metodo de preparacion: SPPS_P; SC_P; CP_M1 MALDI01v01: m/z calc.: 5173.8 m/z observada: 5170.4 Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 12.9 min Ejemplo 10

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-

[Aib8,Glu22,Glu30]-GLP-1-(7-37)-peptido

Qmm. 30:

imagen25

5 Metodo de preparacion: SPPS_P; SC_P; CP_M1

MALDI01v01: m/z calc.: 5231.9 m/z observada: 5230.5 Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 13.2 min Ejemplo 11

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4- 10 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1-(7- 37)-peptido

Qmm. 31:

15

imagen26

Metodo de preparacion: SPPS_P; SC_P; CP_M1 MALDI01v01: m/z calc.: 4749.5 m/z observada: 4749.6

UPLC07v01: Rt = 11.4 min Ejemplo 12

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

5 [[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]aminoihexanoil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1*-(7-

37)-peptido

Qmm. 32:

imagen27

Metodo de preparation: SPPS_P; SC_P; CP_M1 10 MALDI01v01: m/z calc.: 4777.4 m/z observada: 4777.5

Metodo de UPLC: UPLC07v01: Rt = 13.2 min Ejemplo 13

N£26-[(2S)-6-[[(2S)-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-2- (dimetilamino)hexanoil]amino]-2-(dimetilamino)hexanoil], N£34-[(2S)-6-[[(2S)-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

15 carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-2-(dimetilamino)hexanoil]amino]-2-(dimetilamino)hexanoil]- [Imp7,Aib8]-GLP-1-(7-37)-peptido

Qmm. 33:

imagen28

Metodo de preparacion:

20 A una solution acuosa de AcOH 2 M que contema un 10% de NMP (3 mL) del compuesto en el ejemplo 3 (14 500 nmol) se anadio formaldehido (25 pl, 37%). La mezcla se agito durante 10 min y se anadio una solucion del complejo de a-picolina-borano en NMP (150 pL). La mezcla se agito durante 40 min. Despues de una conversion completa, se elevo el pH hasta aproximadamente 11.5 con NaOH 1 M y se agito durante 30 min. A continuation, se ajusto el pH a 7.4 con Hcl 1 N. La solucion se diluyo con 45 mL de H2O y se purifico mediante RP-HPLC estandar en una columna 25 C18 de 5 pM utilizando acetonitrilo/agua/TFA. Las fracciones se analizaron mediante una combination de metodos

de UPLC, MALDI y LCMS y las fracciones apropiadas se combinaron y liofilizaron.

Metodo de UPLC: UPLC02v1: Rt = 9.1 min

Metodo de LCMS LCMS01 v1: Rt = 2.2 min, m/z 1625 (m/3), 1219 (m/4), 975 (m/5), 813 (m/6)

Ejemplo 14

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4- 5 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11 -(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-

[Aib8,Glu22,Glu30]-GLP-1-(7-37)-peptido

Qmm. 34:

imagen29

Metodo de preparation: SPPS_P; SC_P; CP_M1 Metodo de UPLC: UPLC02v1: Rt = 8.5 min MALOI01v1: m/z calc.: 5203.9 m/z observada: 5204.3 Ejemplo 15

15 N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11 -(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11 -(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22]-

GLP-1-(7-37)-peptido

20 Qmm. 35:

imagen30

Metodo de preparation: SPPS_P; SC_P; CP_M1 Metodo de UPLC: UPLC02v1: Rt = 8.6 min MALDI01v1: m/z calc.:5145.8 m/z observada: 5146.6 5 Ejemplo 16

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(3S)-4-carboxi-4-[10-(3-

carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)- 4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLp-1-(7-37)-peptido

Qmm. 36:

imagen31

Metodo de preparacion: SPPS_P; SC_M2; CP_M1 Metodo de UPLC: UPLC02v1: Rt = 8.2 min

LCMS01 v1: Rt = 1.7 min, m/z 1574 (m/3), 1181 (m/4), 945 (m/5), 788 (m/6)

Ejemplo 17

15 N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[11 -(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[lmp7,Aib8]-GLP-1-

(7-37)-peptido

Qmm. 37:

imagen32

Metodo de UPLC: UPLC01v1: Rt = 12.56 min

Metodo de LCMS: LCMS01v1: Rt = 2.1 min, m/z 1578 (m/3), 1184 (m/4), 947 (m/5)

5 Ejemplo 18

N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]aminojhexanoil]amino]hexanoil]-GLP-1-(7-37)-

peptido

10 Qmm. 38:

imagen33

Metodo de preparation: SPPS_P; SC_P; CP_M1 Metodo de UPLC: UPLC01v1, Rt = 12.08 min

Metodo de LCMS: LCMS01 v1: Rt = 2.0 min, m/z 1579 (m/3), 1185 (m/4), 948 (m/5) 15 Ejemplo 19

Acido (S)-2-dimetilamino-6-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)hexanoico

Qmm. 39:

5

10

15

20

25

30

35

40

imagen34

El compuesto de Qmm. 39 se prepara de la siguiente manera (mas detalles a continuacion):

cu^oh °^f°H 0H

cf H,N* -Fmoc

*

T

HN^/V^-NH-Fmoc

A,

CH,0 ac.

r

dioxano

O 'O

NaBH ,. AcOH dioxano, MeOH

El material de partida, el acido (S)-2-fe/f-butoxicarbonilamino-6-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)hexanoico (Novabiochem F; 28.0 g, 59.8 mmol), se suspendio en 1,4-dioxano (800 mL), se anadio una solucion de cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (7.2 M, 500 mL) y la suspension resultante se agito a la temperatura ambiente durante toda la noche. A continuacion, se filtro y se lavo exhaustivamente con 1,4-dioxano y eter dietflico antes de secar al vado. Se obtuvo el clorhidrato del acido (S)-2-amino-6-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)hexanoico como un solido blanco.

Rendimiento: 23.58 g (96%)

RMN: Espectro de 1H RMN (300 MHz, MeOD-d4, dH): 7.80 (d, J=7.4 Hz, 2 H); 7.64 (d, J=7.4 Hz, 2 H); 7.477.25 (m, 4 H); 4.58-4.29 (m, 2 H); 4.14-4.25 (m, 1 H); 3.95 (t, J=6.3 Hz, 1 H); 3.19-2.73 (m, 2 H); 2.09-1.71 (m,

2 H); 1.65-1.14 (m, 4 H)

El producto de la reaccion anterior (13.1 g, 32.4 mmol) y una solucion acuosa de formaldeddo (aprox. al 35%, 13.2 mL) se disolvieron en una mezcla de 1,4-dioxano/metanol (300 mL, 1:1) y la solucion resultante se enfrio hasta 0 °C. A continuacion, se anadio con cuidado borohidruro de sodio (5.50 g, 145 mmol) en tres porciones en 15 minutos y se ajusto el pH de la mezcla de reaccion hasta pH 5.5 anadiendo acido acetico (14.4 mL). A continuacion, se anadio una segunda porcion de formaldeddo acuoso (aprox. al 35%, 13.2 mL) a la mezcla de reaccion y se anadio con cuidado otra parte de borohidruro de sodio (5.50 g, 145 mmol) en tres porciones. Se permitio que la mezcla de reaccion se calentara hasta la temperatura ambiente y se agito durante 60 minutos mas. El analisis por HPLC-MS revelo una conversion total del material de partida, por lo tanto, se desactivo la reaccion anadiendo una solucion acuosa de hidrogenocarbonato de sodio al 10% (aprox. 20 mL) hasta pH 7.0. A continuacion, se diluyo la mezcla de reaccion con una solucion acuosa saturada de cloruro de sodio y se extrajo con cloroformo (5 x 500 mL). Se recogieron las fracciones que conteman el producto deseado (TLC) y se secaron con sulfato de magnesio anhidro. A continuacion, la solucion se filtro y los disolventes se eliminaron a presion reducida. El producto crudo se disolvio en cloroformo caliente (300 mL) y se anadio una mezcla de eter dietflico/hexano (2:1, 700 mL). El precipitado formado se filtro, se lavo con eter dietflico antes de secar al vado para obtener el compuesto del trtulo como un polvo blanco.

Rendimiento: 14.26 g

LC-MS (Sunfire 4.6 mm x 100 mm, acetonitrilo/agua de 35:65 a 100:0 + 0.1% de FA): Rt = 3.71 min

LC-MS m/z: 397.4 (M+H)+.

El producto crudo recogido (36.5 g) de los 3 lotes anteriores se sometio a una cromatografia en columna RP (Cromasil C18, 100A, 13 ^m, 7.5 x 41 cm, tasa de flujo 200 mL/min, acetonitrilo/agua de 20:80 a 45:55, deteccion UV 220 nm). Las fracciones que conteman el producto se recogieron y se liofilizaron. Se obtuvo el acido (S)-2- dimetilamino-6-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)hexanoico como un polvo blanco fino.

Rendimiento: 20.21 g

RMN: Espectro de 1H RMN (300 MHz, AcOD-d4, dH): 7.87-7.72 (m, 2 H); 7.70-7.57 (m, 2 H); 7.53-7.20 (m, 4

H); 4.66-4.36 (m, 2 H); 4.35-4.12 (m, 1 H); 3.98-3.77 (m, 1 H); 3.32-3.10 (m, 2 H); 2.95 (s, 6 H); 2.16-1.73 (m, 2

H, superpuestos); 1.69-1.16 (m, 4 H)

LC-MS (Sunfire 4.6 mm x 100 mm, acetonitrilo/agua de 35:65 a 100:0 + 0.1% de FA): Rt = 3.11 min

5

10

15

20

25

30

35

40

45

LC-MS m/z: 397.2 (M+H)+

Este producto intermedio se puede utilizar en la smtesis del compuesto del Ejemplo 13 y otros compuestos con el mismo conector.

Metodos farmacoloaicos

Ejemplo 20: Potencia in vitro (AlphaScreen; membranas)

El objetivo de este ejemplo es estudiar la actividad, o potencia, de los derivados de GLP-1 in vitro.

Se determino la potencia de los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-3 tal como se describe a continuacion, es decir, como la estimulacion de la formacion de AMP dclico (cAMP) en un medio que contiene membranas que expresan el receptor de GLP-1 humano.

Principio

Se estimularon membranas plasmaticas purificadas de una lmea celular transfectada estable, BHK467-12A (tk-ts13), que expresaban el receptor de GLP-1 humano, con el analogo o derivado de GLP-1 en cuestion, y se midio la potencia de la produccion de cAMP utilizando el kit de ensayo cAMP AlphaScreen de Perkin Elmer Life Sciences. El principio basico del ensayo AlphaScreen es una competencia entre el cAMP endogeno y el biotina-cAMP anadido de manera exogena. Se logra la captura de cAMP utilizando un anticuerpo espedfico conjugado con microesferas aceptoras.

Cultivo celular y preparacion de las membranas

Se seleccionaron una lmea celular transfectada estable y un clon con expresion elevada para el cribado. Las celulas se cultivaron en un 5% de CO2 en DMEM, 5% de FCS, 1% de Pen/Strep (penicilina/estreptomicina) y 0.5 mg/mL del marcador de seleccion G418.

Se lavaron las celulas 2X con una confluencia de aproximadamente un 80% con PBS y se recolectaron con Versene (solucion acuosa de la sal de tetrasodio del acido etilendiaminotetraacetico), se centri fugaron 5 min a 1000 rpm y se elimino el sobrenadante. Todos los pasos adicionales se llevaron a cabo en hielo. El sedimento celular se homogeneizo con Ultrathurax durante 20-30 s en 10 mL de Tampon 1 (Na-HEPES 20 mM, EDTA 10 mM, pH=7.4), se centrifugo 15 min a 20 000 rpm y el sedimento se resuspendio en 10 mL de Tampon 2 (Na-HEPES 20 mM, EDTA

0.1 mM, pH=7.4). La suspension se homogeneizo durante 20-30 s y se centrifugo 15 min a 20 000 rpm. La suspension en el Tampon 2, la homogeneizacion y la centrifugacion se repitio una vez y las membranas se resuspendieron en el Tampon 2. Se determino la concentracion proteica y las membranas se almacenaron a -80 °C hasta su uso.

El ensayo se lleva a cabo en placas de 96 pocillos de fondo plano (Costar n.° de cat.: 3693). El volumen final por pocillo fue de 50 pL.

Soluciones y reactivos

Kit de ensayo cAMP AlphaScreen de Perkin Elmer Life Sciences (n.° de cat.: 6760625M); que contiene microesferas aceptoras Anti-cAMP (10 U/pL), microesferas donantes de estreptavidina (10 U/pL) y caMp biotinilado (133 U/pL).

Tampon AlphaScreen, pH=7.4: TRIS-HCl 50 mM (Sigma, n.° de cat.: T3253); HEPES 5 mM (Sigma, n.° de cat.: H3375); MgCh, 6H2O 10 mM (Merck, n.° de cat.: 5833); NaCl 150 mM (Sigma, n.° de cat.: S9625); 0.01% de Tween (Merck, n.° de cat.: 822184). Se anadieron los siguientes componentes al Tampon AlphaScreen antes de su uso (concentraciones finales indicadas): BSA (Sigma, n.° de cat.: A7906): 0.1%; IbMx (Sigma, n.° de cat.: I5879): 0.5 mM; ATP (Sigma, n.° de cat.: A7699): 1 mM; GTP (Sigma, n.° de cat.: G8877): 1 pM.

Patron de cAMP (factor de dilucion en el ensayo = 5): Solucion de cAMP: 5 pL de una reserva de cAMP 5 mM + 495 pL de Tampon AlphaScreen.

Se preparo una serie de diluciones adecuadas en Tampon AlphaScreen del patron de cAMP asf como tambien del analogo o derivado de GLP-1 que se iba a estudiar, por ejemplo, las siguientes ocho concentraciones del compuesto de tipo GLP-1: 10'7, 10'8, 10'9, 10-10, 10-11, 10'12, 10'13 y 10'14M, y una serie de, por ejemplo, 10'6 a 3x10'11 de cAMP.

Membrana/microesferas aceptoras

Se prepararon las membranas a partir de celulas hGLP-1/ BHK 467-12A con una concentracion de 6 pg/pocillo correspondiente a 0.6 mg/mL (la cantidad de membranas utilizadas por pocillo puede variar) «Sin membranas»: Microesferas acepto las (15 pg/mL) en tampon AlphaScreen

«6 pg/pocillo de membranas»: membranas + Microesferas aceptoras (15 pg/mL final) en tampon AlphaScreen.

5

10

15

20

25

30

35

Se anadio una alfcuota (10 jL) de «Sin membranas» al patron de cAMP (por pocillo en pocillos duplicados) y los controles positivos y negativos.

Se anadio una alfcuota (10 jL) de «6 jg/pocillo de membranas» a GLP-1 y los analogos (por pocillo en pocillos duplicados o triplicados)

Control pos.: 10 jL de "sin membranas" + 10 jL de Tampon AlphaScreen

Control neg.: 10 jL de "sin membranas" + 10 jL de Solucion de reserva de cAMP (50 jM)

Como las microesferas son sensibles a la luz directa, todas las manipulaciones se produjeron en la oscuridad (tan oscuro como fue posible) o con luz verde. Todas las ilusiones se realizaron en hielo.

Procedimiento

1. Preparar el Tampon AlphaScreen.

2. Disolver y diluir el GLP-1/Analogos/patron de cAMP en Tampon AlphaScreen.

3. Preparar la Solucion de microesferas donantes mezclando microesferas donantes de estreptavidina (2 unidades/pocillo) y cAMP biotinilado (1.2 unidades/pocillo) y e incubar 20-30 min en la oscuridad a la temperatura ambiente.

4. Anadir el cAMP/GLP-1/Analogos a la placa: 10 jL por pocillo.

5. Preparar la solucion de membrana/Microesferas aceptoras y anadirla a las placas: 10 jL por pocillo.

6. Anadir las Microesferas donantes: 30 jL por pocillo.

7. Envolver la placa en papel aluminio e incubar en el agitador durante 3 horas (muy despacio) a RT.

8. Contar en el AlphaScreen, cada placa se preincuba en el AlphaScreen durante 3 minutos antes de contar. Resultados

Se calcularon los valores de EC50 [pM] utilizando el software Graph-Pad Prism (version 5) y se muestran a continuacion en la Tabla 1. Se confirmo la potencia de todos los derivados in vitro.

Tabla 1: Potencia in vitro (AlphaScreen; membranas)

Compuesto de Ejemplo n.°

EC5o/pM

1

77

2

205

3

295

Todos los derivados excepto dos presentaron una buena potencia in vitro que corresponde a una EC50 inferior a 1200 pM.

A efectos de comparacion, el compuesto n.° 13 en la Tabla 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, n.° 9, pags. 1664-669 (GLP-1(7-37) acilado en K2634 con bis-diacido-C12) presento una potencia in vitro correspondiente a una EC50 de 1200 pM.

Ejemplo 21: Potencia in vitro (CRE luciferasa; celulas enteras)

El objetivo de este ejemplo es estudiar la actividad, o potencia, de los derivados de GLP-1 in vitro. La potencia in vitro es la medida de la activacion del receptor de GLP-1 humano en un ensayo con celulas enteras.

Se determino la potencia de los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 3-18 tal como se describe a continuacion. Se incluyo la semaglutida a efectos de comparacion.

Principio

Se determino la potencia in vitro midiendo la respuesta del receptor de GLP-1 humano en un ensayo con un gen indicador. El ensayo se llevo a cabo en una lmea celular BHK transfectada de manera estable que expresa el receptor de GLP-1 humano y contiene el ADN para el elemento de respuesta a cAMP (CRE) acoplado a un promotor y el gen para la luciferasa de luciernaga (CRE luciferasa). La activacion del receptor de GLP-1 humano conlleva la produccion de cAMP que a su vez conlleva la expresion de la protema luciferasa. Cuando la incubacion del ensayo

5

10

15

20

25

30

35

40

45

finalizo, se anadio el sustrato de la luciferasa (luciferina) y la enzima convirtio la luciferina en oxiluciferina y produjo biolumininscencia. Se midio la luminiscencia y fue la lectura del ensayo.

Con el fin de estudiar la union de los derivados a la albumina, el ensayo se llevo a cabo en ausencia de albumina serica as^ como tambien en presencia de una concentracion considerablemente elevada de albumina serica (concentracion final en el ensayo de un 1.0%). Un aumento de la potencia in vitro, valor de EC50, en presencia de albumina serica indica una afinidad por la albumina serica y representa un metodo para predecir un perfil farmacocinetico prolongado de la sustancia de prueba en los modelos en animales.

Cultivo celular y preparacion

Las celulas utilizadas en este ensayo (clon FCW467-12A/KZ10-1) fueron celulas BHK con BHKTS13 como lmea celular progenitora. Las celulas se derivaron de un clon (FCW467-12A) que expresa el receptor de GLP-1 humano y se establecieron mediante una transfeccion adicional con CRE luciferasa para obtener el presente clon.

Las celulas se cultivaron en un 5% de CO2 en medio de cultivo celular. Se obtuvieron alfcuotas y se almacenaron en nitrogeno lfquido. Antes de cada ensayo, se tomo una alfcuota y se lavo dos veces en PBS antes de suspenderla para obtener la concentracion deseada en el tampon de ensayo espedfico. Para las placas de 96 pocillos se llevo a cabo la suspension para obtener una concentracion final de 5x103 celulas/pocillo.

Materiales

En el ensayo se utilizaron los siguientes compuestos qmmicos: Pluronic F-68 (10%) (Gibco 2404), albumina serica humana (HSA) (Sigma A9511), ovalbumina (Sigma A5503), DMEM sin rojo de fenol (Gibco 11880-028), Hepes 1 M (Gibco 15630), Glutamax 100x (Gibco 35050) y steadylite plus (PerkinElmer 6016757).

Tampones

El medio de cultivo celular estuvo constituido por un 10% de FBS (suero bovino fetal), 1 mg/mL de G418, MTX (metotrexato) 240 nM y 1% de pen/estrep (penicilina/estreptomicina). El medio de ensayo estuvo constituido por DMEM sin rojo de fenol, Hepes 10 mM y 1x Glutamax. El tampon de ensayo al 1% estuvo constituido por un 2% de ovalbumina, un 0.2% de Pluronic F-68 y un 2% de HSA en medio de ensayo. El tampon de ensayo al 0% estuvo constituido por un 2% de ovalbumina y un 0.2% de Pluronic F-68 en medio de ensayo.

Procedimiento

1) Las reservas de celulas se descongelaron en un bano de agua a 37 °C.

2) Las celulas se lavaron tres veces en PBS.

3) Las celulas se contaron y se ajusto la concentracion hasta un valor de 5x103 celulas/50 pL (1x105 celulas/mL) en medio de ensayo. Se transfirio una alfcuota de 50 pL de celulas a cada pocillo de la placa de ensayo.

4) Se diluyeron las reservas de los compuestos de prueba y compuestos de referencia hasta una concentracion de 0.2 pM en el tampon de ensayo 0% para el ensayo de CRE luciferasa con un 0% de HSA y en tampon de ensayo al 1% para el ensayo de CRE luciferasa con HSA. Los compuestos se diluyeron 10 veces para obtener las siguientes concentraciones: 2x10'7 M, 2x10'8 M; 2x10'9 M, 2x10'1° M, 2x10'11 M, 2x10'12 M y 2x10'13 M. Para cada compuesto tambien se incluyo un control con un blanco de tampon de ensayo.

5) Se transfirio una alfcuota de 50 pL del compuesto o blanco por triplicado de la placa de dilucion a la placa de ensayo. Se estudiaron los compuestos con las siguientes concentraciones finales: 1x10'7 M, 1x10-8 M; 1x10'9 M, 1x10-10 M, 1x10-11 M, 1x10'12 M y 1x10'13 M.

6) La placa de ensayo se incubo durante 3 h en un incubador con un 5% de CO2 a 37°C.

7) La placa de ensayo se retiro del incubador y se permitio que estuviera a la temperatura ambiente durante 15 min.

8) Se anadio una alfcuota de 100 pL del reactivo steadylite plus a cada pocillo de la placa de ensayo (el reactivo era sensible a la luz).

9) Se cubrio cada placa de ensayo con papel de aluminio para protegerla de la luz y se agito durante 30 min a la temperatura ambiente.

10) Se leyo cada placa de ensayo en un instrumento TopCount NXT de Packard.

Calculos y resultados

Se transfirieron los datos desde el instrumento TopCount hasta el software GraphPad Prism. El software promedia los valores para cada replica y realiza una regresion no lineal. Se calcularon los valores de EC50 con el software y se muestran a continuacion en la Tabla 2 (en pM).

Tabla 2: Potencia in vitro (CRE luciferasa)

Compuesto de Ejemplo n.°

EC50/PM (0% de HSA) EC50/pM (1% de HSA) EC50/PM (relacion entre 1% de HSA/0% de HSA)

1

6.4 236 37

2

10 827 82

3

146 158 1.1

4

34 320 9.4

5

52 165 3.2

6

17 102 6.0

7

36 68 1.9

8

25 78 3.2

9

5.7 136 24

10

8.7 251 29

11

4.3 47

11

12

5.4 99 18

13

30 367 12

14

13 1263 108

15

7.0 683 96

16

16

56 3.5

17

16 379 24

18

8.7 296 34

5 Todos los derivados presentaron una buena potencia in vitro que corresponde a una EC50 con 0% de HSA inferior a 200 pM.

A efectos de comparacion, el compuesto n.° 13 en la Tabla 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, n.° 9, pags. 1664-669 (GLP-1(7-37) acilado en K2634 con bis-diacido-C12) presento una potencia in vitro correspondiente a una EC50 con un 0% de HSA de 440 pM, una EC50 con un 1% de HSA de 3317 pM, y una relacion (1% de HSA / 0% 10 de HSA) de 7.5.

Ejemplo 22: Union al receptor de GLP-1

El objetivo de este experimento es estudiar la union del receptor de GLP-1 a los derivados de GLP-1 y como la union esta potencialmente influenciada por la presencia de la albumina. Esto se realiza en un experimento in vitro tal como se describe a continuacion.

15 Se midio la afinidad de union de los derivados de GLP-1 de los Ejemplos 1-18 al receptor de GLP-1 humano en funcion de su capacidad de desplazar 125I-GLP-1 del receptor. Con el fin de estudiar la union de los derivados a la albumina, el ensayo se llevo a cabo con una concentracion baja de albumina (aproximadamente de un 0.001%, correspondiente a su cantidad residual en el trazador), asf como tambien con una concentracion elevada de albumina (2.0% anadido). Un desplazamiento en la afinidad de union, IC50, indica que el peptido en cuestion se une 20 a la albumina y, por lo tanto, predice un potencial perfil farmacocinetico prolongado del peptido en cuestion en los modelos en animales.

Condiciones

Especie (in vitro): Hamster

Criterio de valoracion biologico: Union al receptor Metodo de ensayo: SPA Receptor: Receptor de GLP-1 Lmea celular: BHK tk-ts13

5 Cultivo celular y purificacion de las membranas

Se seleccionaron una lmea celular transfectada estable y un clon con expresion elevada para el cribado. Las celulas se cultivaron en un 5% de CO2 en DMEM, 10% de FCS, 1% de Pen/Strep (penicilina/estreptomicina) y 1.0 mg/mL del marcador de seleccion G418.

Se lavaron las celulas (aprox. un 80% de confluencia) dos veces en PBS y se recolectaron con Versene (solucion 10 acuosa de la sal de tetrasodio del acido etilendiaminotetraacetico), tras lo cual se separaron por centrifugacion a 1000 rpm durante 5 min. Las celulas/sedimento celular se deben mantener en hielo en la medida de lo posible en las siguientes etapas. El sedimento celular se homogeneizo con Ultrathurrax durante 20-30 segundos en una cantidad adecuada de Tampon 1 (que depende de la cantidad de celulas pero, por ejemplo, 10 mL). El homogeneizado se centrifugo a 20 000 rpm durante 15 minutos. El sedimento se resuspendio (homogeneizo) en 10 mL de Tampon 2 y 15 se centrifugo de nuevo. Esta etapa se repitio una vez mas. El sedimento resultante se resuspendio en el Tampon 2 y se determino la concentracion proteica. Las membranas se almacenaron a -80 °C.

Tampon 1: Na-HEPES 20 mM + EDTA 10 mM, pH 7.4

Tampon 2: Na-HEPES 20 mM + EDTA 0,1 mM, pH 7.4

Ensayo de union:

20 SPA:

Los compuestos de prueba, membranas, partfculas SPA y [125I]-GLP-1(7-36)NH2 se diluyeron en tampon de ensayo. Se anadieron 50 pL (microlitros) de HSA (del experimento con «mucha albumina» que conteman un 2% de HSA) o tampon (del experimento con «poca albumina» que contema un 0.001% de HSA) a Optiplate y se anadieron 25 pL de los compuestos de prueba. Se anadieron 5-10 pg de protema de membrana/muestra (50 pL) correspondientes a 25 0.1-0.2 mg de protema/mL (preferentemente, se optimiza para cada preparacion de membranas). Se anadieron las

partfculas SPA (microesferas SPA con aglutinina de germen de trigo, Perkin Elmer, #RPNQ0001) en una cantidad de 0.5 mg/pocillo (50 pL). La incubacion se hizo comenzar con [125I]-GLP-1]-(7-36)NH2 (concentracion final de 0.06 nM correspondiente a 49.880 DPM, 25 pL). Las placas se sellaron con PlateSealer y se incubaron durante 120 minutos a 30 °C con agitacion. Las placas se centrifugaron (1500 rpm, 10 min) y se contaron con Topcounter.

30 Tampon de ensayo:

HEPES 50 mM

EGTA 5 mM

MgCl2 5 mM

0.005% de Tween

35 pH 7.4

la HSA fue SIGMA A1653

Calculos

Se leyo el valor de IC50 a partir de la curva como la concentracion con la que se desplaza un 50% de 125I-GLP-1 del receptor.

40 Por lo general, la union al receptor de GLP-1 con una concentracion baja de albumina debe ser tan buena como sea posible (buena potencia), lo que corresponde a un valor de IC50 bajo.

El valor de IC50 con una concentracion elevada de albumina es una medida de la influencia de la albumina en la union del derivado al receptor de GLP-1. Tal y como se sabe, los derivados de GLP-1 tambien se unen a la albumina. Por lo general, este es un efecto deseable, que prolonga su presencia en el plasma. Por lo tanto, el valor 45 de IC50 con una concentracion elevada de albumina sera, por lo general, mas elevado que el valor de IC50 con una concentracion baja de albumina, lo que corresponde a una reduccion de la union al receptor de GLP-1 provocada por la union de la albumina que compite por la union al receptor de GLP-1.

Resultados

Se obtuvieron los siguientes resultados:

Tabla 3: Afinidad de union al receptor

Compuesto de Ejemplo n.°

IC5o/nM (poca HSA) IC5o/nM (mucha HSA)

1

0.52 21

2

0.73 448

3

0.82 218

4

0.93 264

5

2.35 244

6

1.02 163

7

1.37 89

8

2.08 295

9

0.84 >1000

10

1.36 >1000

11

0.49 68

12

0.26 150

13

1.63 958

14

2.01 618

15

1.13 329

16

0.63 53

17

11.1 >1000

18

0.04 35

Todos los derivados presentaron una IC50 (poca albumina) inferior a 12.0 nM. En lo que se refiere a la IC50 (mucha 5 albumina), todos los derivados menos tres presentaron una IC50 (mucha albumina) inferior a 1000 nM.

A efectos de comparacion, el compuesto n.° 13 en la Tabla 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, n.° 9, pags. 1664-669 (GlP-1(7-37) acilado en K2634 con bis-diacido-C12) presento una IC50 (poca albumina) de 17.7 nM, y una IC50 (mucha albumina) de 908 nM.

Ejemplo 23: Estudio farmacocinetico (PK) en minicerdos

10 El objetivo de este estudio es determinar la prolongacion in vivo de los derivados de GLP-1 despues de la administracion i.v. a minicerdos, es decir, la prolongacion del tiempo de accion. Esto se realiza en un estudio farmacocinetico (PK) donde se determina la semivida de eliminacion del derivado en cuestion. La semivida de eliminacion se refiere por lo general al periodo de tiempo necesario para reducir a la mitad una cierta concentracion plasmatica, medida despues de la fase de distribucion inicial.

15 Los derivados de los Ejemplos 3 y 6 se sometieron al estudio PK A (vease mas adelante), mientras que los derivados de los Ejemplos 2 y 13 se sometieron al estudio PK B (vease mas adelante).

Estudio A: Para los estudios se utilizaron minicerdos macho Gottingen obtenidos de Ellegaard Gottingen Minipigs (Dalmose, Dinamarca) con una edad de aproximadamente 7-14 meses y un peso de aproximadamente 16-35 kg. A los minicerdos se les alojo de manera individual y se restringio la alimentacion a una o dos veces al dfa con dieta 20 para cerdos SDS (Special Diets Services, Essex, UK). Despues de al menos 2 semanas de aclimatacion se implantaron dos cateteres venosos centrales permanentes en la vena cava caudal o craneal en cada animal. Se concedio 1 semana de recuperacion a los animales despues de la cirugfa y a continuacion, se utilizaron para estudios farmacocineticos repetidos con un periodo de reposo farmacologico adecuado entre las sucesivas administraciones de dosis del derivado de GLP-1.

5

10

15

20

25

30

35

40

Se privo a los animales de alimentos durante aproximadamente 18 h antes de la administracion de la dosis y entre 0 y 4 h despues de la administracion de la dosis pero durante todo el periodo tuvieron acceso al agua sin restricciones.

Los derivados de GLP-1 se disolvieron en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, 0.05% de tween 80, pH

7.4, hasta por lo general una concentracion de 20-60 nmol/mL. Se administraron inyecciones intravenosas (el volumen correspondiente a normalmente 1-2 nmol/kg, por ejemplo, 0.033ml/kg) de los compuestos a traves de un cateter, y se obtuvieron muestras de sangre en puntos temporales predefinidos durante hasta 13 dfas despues de la administracion de las dosis (preferentemente, a traves del otro cateter). Se recogieron las muestras de sangre (por ejemplo, 0.8 mL) en tampon EDTA (8 mM) y a continuacion, se centrifugaron a 4 °C y 1942 G durante 10 minutos.

Estudio B: Para los estudios se utilizaron minicerdos macho Gottingen obtenidos de Ellegaard Gottingen Minipigs (Dalmose, Dinamarca) con una edad de aproximadamente 5 meses y un peso de aproximadamente 9 kg. A los minicerdos se les alojo en jaulas con lechos de paja, en cada jaula se juntaron seis y se restringio la alimentacion a una o dos veces al dfa con dieta para minicerdos Altromin 9023 (Chr. Petersen A/S, DK-4100 Ringsted). Se utilizaron los cerdos para estudios farmacocineticos repetidos con un periodo de reposo farmacologico adecuado entre las sucesivas administraciones de dosis del derivado de GLP-1. Se concedio un periodo de aclimatacion de 1 semana durante el cual se entreno a los minicerdos para que se apoyaran sobre la espalda para la obtencion de muestras de sangre y en una eslinga para la administracion i.v. de dosis. La manipulacion, administracion de dosis y obtencion de muestras sangumeas de los animales en su totalidad las realizara personal formado y experto.

Se privo a los animales de alimentos durante aproximadamente 18 h antes de la administracion de la dosis y entre 0 y 4 h despues de la administracion de la dosis pero durante todo el periodo tuvieron acceso al agua sin restricciones.

Los derivados de GLP-1 se disolvieron en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, 0.05% de tween 80, pH

7.4, hasta por lo general una concentracion de 20-60 nmol/mL. Se administraron las inyecciones intravenosas (el volumen correspondiente a normalmente 2 nmol/kg, por ejemplo, 0.1 mL/kg) de los compuestos en forma de inyecciones intravenosas mediante Venflon insertado en una vena de la oreja mientras se colocaban sin anestesiar en una eslinga. El volumen de la dosis fue de 0.1 mL/kg y se obtuvieron muestras de sangre en puntos temporales predefinidos durante hasta 17 dfas despues de la administracion de las dosis (las muestras se extrajeron con una jeringuilla a partir de la vena yugular). Se recogieron las muestras de sangre (por ejemplo, 0.8 mL) en tampon EDTA (8 mM) y a continuacion, se centrifugaron a 4 °C y 2000 G durante 10 minutos.

Obtencion de muestras y analisis (estudio A y B): Se pipeteo el plasma en tubos Micronic en hielo seco y se mantuvo a -20 °C hasta que se analizaron para determinar la concentracion en plasma del respectivo compuesto de tipo GLP-1 utilizando Elisa o un ensayo similar con anticuerpos o LC-MS. Se analizaron los perfiles individuales de concentracion en plasma-tiempo con un modelo no compartimentalizado en Phoenix WinNonLin ver. 6.2. (Pharsight Inc., Mountain View, CA, EE. Uu.) y se determinaron las semividas de eliminacion (media harmonica) resultantes.

Resultados

Se estudiaron los compuestos de los Ejemplos 2, 3, 6 y 13 y los resultados se muestran a continuacion en la Tabla 4.

Tabla 4: Semivida en minicerdos

Compuesto de Ejemplo n.°

PK iv en minicerdos, T'A (horas)

2

68

3

66

6

93

13

79

Todos los compuestos estudiados tuvieron una semivida muy buena, muy por encima de las 50 horas.

A efectos de comparacion, el compuesto n.° 13 en la Tabla 1 de Journal of Medicinal Chemistry (2000), vol. 43, n.° 9, pags. 1664-669 (GlP-1(7-37) acilado en K2634 con bis-diacido-C12) presento una semivida de 5 horas.

Ejemplo 24: Estudio farmacocinetico (PK) en ratas

El objetivo de este Ejemplo es estudiar la semivida in vivo en ratas.

Se realizaron estudios farmacocineticos in vivo en ratas con los derivados de GLP-1 de varios de los Compuestos de ejemplo, tal como se describe a continuacion. Se incluyo la semaglutida a efectos de comparacion.

5

10

15

20

25

30

35

40

45

Se obtuvieron ratas macho Sprague Dawley de la misma edad con un peso corporal de aproximadamente 400 g de Taconic (Dinamarca) y se les asigno el tratamiento mediante una simple aleatorizacion segun el peso corporal, de manera aproximada 4 ratas por grupo.

Los derivados de GLP-1 (aproximadamente 6 nmol/mL) se disolvieron en fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, 0.05% de tween 80, pH 7.4. Se administraron inyecciones intravenosas (1.0 mL/kg) de los compuestos con una jeringuilla en la vena de la cola de ratas conscientes. Se obtuvieron muestras de sangre de la vena sublingual durante 5 dfas despues de administrar la dosis. Se recogieron las muestras de sangre (200 jL) en tampon EDTA (8 mM) y a continuacion, se centrifugaron a 4 °C y 10 000 G durante 5 minutos. Las muestras de plasma se mantuvieron a -20 °C hasta que se analizaron para determinar la concentracion en plasma del respectivo compuesto de tipo GLP-1.

Se determino la concentracion en plasma de los compuestos de tipo GLP-1 utilizando un Inmunoensayo de canalizacion de oxfgeno luminiscente (LOCI), en terminos generales segun lo describen para la determinacion de la insulina Poulsen y Jensen en Journal of Biomolecular Screening 2007, vol. 12, pags. 240-247. Las microesferas donantes se recubrieron con estreptavidina, mientras que las microesferas aceptoras se conjugaron con un anticuerpo monoclonal que reconoce un epftopo central/C-terminal del peptido. Se biotinilo otro anticuerpo monoclonal, espedfico para el extremo N. Se combinaron los tres reactivos con el analito y formaron un inmunoclomplejo de dos sitios. La iluminacion del complejo libero atomos de oxfgeno singlete de las microesferas donantes que fueron canalizados en las microesferas receptoras y desencadenaron la quimioluminiscencia que se midio en un lector de placas Envision. La cantidad de luz fue proporcional a la concentracion del compuesto.

Se analizaron los perfiles de concentracion en plasma-tiempo utilizando Phoenix WinNonLin ver. 6.2, Pharsight Inc., Mountain View, CA, EE. UU.) y se calculo la semivida (Ty2) utilizando los perfiles individuales de concentracion en plasma-tiempo de cada animal.

Resultados

Los resultados se muestran a continuacion en la Tabla 5.

Tabla 5: Semivida en ratas

Compuesto de Ejemplo n.°

PK en ratas T1A (horas)

1

13

2

17

8

14

11

10

Todos los compuestos estudiados tuvieron una semivida de 10 horas o mas. La semivida de la semaglutida estudiada en la misma configuracion pero con n=8 fue de 11 horas.

Ejemplo 25: Estudio farmacodinamico (PD) en cerdos

El objetivo de este experimento fue estudiar el efecto de un par de Compuestos de ejemplo en la ingesta de alimentos en cerdos. Esto se realizo en un estudio farmacodinamico (PD) tal como se describe a continuacion, en el cual se midio la ingesta de alimentos de 1 a 4 dfas despues de la administracion de una unica dosis del derivado de GLP-1, en comparacion con un grupo de control tratado con vefuculo.

Se utilizaron cerdos hembra Landrace Yorkshire Duroc (LYD) con una edad de aproximadamente 3 meses que pesaban aproximadamente 30-35 kg (n=3-4 por grupo). Se alojo a los animales en un grupo durante aproximadamente 1 semana durante la aclimatacion a las instalaciones para los animales. Durante el periodo experimental, se coloco a los animales en jaulas individuales al menos 2 dfas antes de la administracion de la dosis y durante la totalidad del experimento para medir la ingesta individual de alimentos. Se alimento a los animales sin restricciones con forraje para cerdos (Svinefoder Danish Top) en todo momento tanto durante el periodo de aclimatacion como el experimental. Se monitorizo la ingesta de alimentos de manera informatica registrando el peso de forraje cada 15 minutos. El sistema utilizado fue Mpigwin (Ellegaard Systems, Faaborg, Dinamarca).

Se disolvieron los derivados de GLP-1 en un tampon de fosfato (fosfato de sodio 50 mM, cloruro de sodio 145 mM, 0.05% de tween 80, pH 7.4) con concentraciones de 12, 40, 120, 400 o 1200 nmol/ml que corresponden a dosis de 0.3, 1, 3, 10 o 30 nmol/kg. El tampon de fosfato actua como vefuculo. A los animales se les administro una unica dosis subcutanea del derivado de GLP-1 o el vehfculo (volumen de la dosis de 0.025 mL/kg) la manana del dfa 1 y se midio la ingesta de alimentos durante 1 dfa despues de administrar la dosis. En el ultimo dfa de cada estudio, 1-4 dfas despues de la administracion de la dosis, se obtuvo una muestra de sangre del corazon de animales anestesiados para medir la exposicion plasmatica del derivado de GLP-1. Posteriormente se sacrifico a los animales

Claims (12)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   1. Un derivado de un peptido GLP-1,

   donde el peptido comprende un primer residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 26 de GLP-1 (737) (SEQ ID NO:1), un segundo residuo de K en una posicion correspondiente a la posicion 34 de GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO:1) y ocho cambios de aminoacidos como maximo en comparacion con GLP-1 (7-37),

   donde el derivado comprende dos restos de prolongacion unidos a dicho primer y segundo residuo de K, respectivamente, mediante un conector, donde

   el resto de prolongacion es Qmm. 2:

   Qmm. 2 : HOOC-CaH4-O-(CH2)y-CO-*,

   en el cual y es un numero entero en el intervalo de 6-13; y

   el conector comprende

   Qmm. 3a : *-NH-(CH2)q-CH[(CH2)w-NR-,R2]-CO-*,

   donde q es un numero entero en el intervalo de 0-5, R1 y R2 representan de manera independiente *-H o *-CH3 y w es un numero entero en el intervalo de 0-5;

   o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.
2. 2. El derivado de la reivindicacion 1, donde w es 0.
3. 3. El derivado de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde Qmm. 3a se representa mediante

   Qmm. 4a : *-NH-(CH2)q-CH(NR-,R2)-CO-*,

   donde q es un numero entero en el intervalo de 3-5.
4. 4. El derivado de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde q es 4.
5. 5. El derivado de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde Qmm. representa mediante

   Qmm. 6

   *-NH-(CH2)4-CH(NH2)-CO-*-
6. 6. El derivado de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde Qmm. representa mediante

   Qmm. 6a

   : *-NH-(CH2)4-CH(N(CHa)2)-CO-*.

   3a o Qmm. 4a,

   3a o Qmm. 4a,

   respectivamente, se

   respectivamente, se
7. 7. El derivado de cualquiera de las realizaciones 1-6, donde Qmm. 3a, Qmm. 4a, Qmm. 6a o Qmm. 6, respectivamente, esta conectado en su extremo CO-* al grupo epsilon-amino del primer o el segundo residuo de K del peptido GLP-1.
8. 8. El derivado de cualquiera de las reivindicaciones 1-7, donde y es 9, 10 u 11.
9. 9. El derivado de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, donde el peptido GLP-1 presenta como maximo tres cambios de aminoacidos en comparacion con GLP-1(7-37) (SEQ ID NO:1).
10. 10. El derivado de cualquiera de las reivindicaciones 1-9, donde el peptido GLP-1 es un peptido de Formula I:

    Xaa7-Xaa8-Glu-Gly-Thr-Xaa12-Thr-Ser-Asp-Xaa16-Ser-Xaa18-Xaa19-Xaa20-Glu-Xaa22-Xaa23-Ala-

    Xaa25-Lys-Xaa27-Phe-Ile-Xaa30-Xaa31-Leu-Xaa33-Lys-Xaa35-Xaa36-Xaa37-Xaa38,

    donde

    Xaa7 es L-histidina, imidazopropionilo (Imp), a-hidroxihistidina, D-histidina, desaminohistidina (desH), 2- aminohistidina, p-hidroxihistidina, homohistidina, Wa-acetilhistidina, WMormilhistidina, a-fluorometilhistidina, a- metilhistidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina o 4-piridilalanina;

    Xaa8 es Ala, Gly, Val, Leu, Ile, Thr, Ser, Lys, Aib, acido (1-aminociclopropil)carboxflico, acido (1- aminociclobutil)carboxflico, acido (1-aminociclopentil)carboxflico, (1-aminociclohexil)carboxflico, (1- aminocicloheptil)carboxflico o acido (1-aminociclooctil)carboxflico;

    Xaa-12 es Phe o Leu;

    Xaa16 es Val o Leu;

    Xaa18 es Ser, Val o Leu;

    Xaai9 es Tyr o Gln;

    Xaa20 es Leu o Met;

    5 Xaa22 es Gly, Glu o Aib;

    Xaa23 es Gln, Glu o Arg;

    Xaa25 es Ala o Val;

    Xaa27 es Glu o Leu;

    Xaa30 es Ala, Glu o Arg;

    10 Xaa31 es Trp o His

    Xaa33 es Val;

    Xaa35 es Gly o Aib;

    Xaa36 es Arg o Gly;

    Xaa37 es Gly o Arg; y

    15 Xaa38 es Ser, Gly, Ala, Glu, Pro, Arg o esta ausente.
11. 11. Un compuesto seleccionado entre los siguientes: Qmm. 21:

    imagen1

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[10-(4- 20 carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)- 4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLp-1-(7-37)-peptido,

    Qmm. 22:

    imagen2

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    5 carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1-

    (7-37)-peptido,

    Qmm. 23:

    imagen3

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4- 10 carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

    [[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[Imp7,Aib8]-GLP-1- (7-37)-peptido,

    imagen4

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    5 carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-GLP-1-(7- 37)-peptido,

    Qmm. 25:

    imagen5

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4- 10 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

    carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-GLP-1-(7-

    37)-peptido,

    Qmm. 26:

    I o

    o

    cr

    HN

    -K. o

    imagen6

    /V£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]amino]hexano il], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]amino]hexano il]-[Aib8]-GLP-1-(7-37)-peptido,

    HO

    imagen7

    imagen8

    gig

    CD 1 CD X X CD ^ CD

    .e x .g

    o V o

    C

    CD ■ CD

    X C? x

    CD Zi CD SZ

    .E CN

    E “

    ^ CN CD £=!

    jo £L

    ±’§£

    ' m CM.

    CD

    I

    ,§

    E

    i CO

    i

    CM

    CO

    CM

    3

    a

    ' o

    c

    : E

    CP

    o

    c

    _co

    "3

    jQ

    g o

    E S

    CO Q_ — -<1) O Q_ C i

    n |s-

    CJ fA

    CD ■ T5 h-

    gx

    9 CL O _l

    S o

    zz oo

    ° -g

    ■e <

    ; co JU a —

    CM

    h-

    o

    imagen9

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

    carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

    5 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1-

    (7-37)-peptido,

    Qmm. 29:

    imagen10

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4- 10 carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22]-

    GLP-1-(7-37)-peptido,

    imagen11

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    5 carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]- [Aib8,Glu22,Glu30]-GLP-1-(7-37)-peptido,

    Qmm. 31

    imagen12

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4- 10 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

    [[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1-(7- 37)-peptido,

    imagen13

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoii]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

    [[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLP-1-(7- 5 37)-peptido,

    Qmm. 33:

    imagen14

    N£26-[(2S)-6-[[(2S)-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-2- (dimetilamino)hexanoil]amino]-2-(dimetilamino)hexanoil], N£34-[(2S)-6-[[(2S)-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[12-(4-

    10 carboxifenoxi)dodecanoilamino]butanoil]amino]-2-(dimetilamino)hexanoil]amino]-2-(dimetilamino)hexanoil]- [Imp7,Aib8]-GLP-1-(7-37)-peptido,

    Qmm. 34:

    imagen15

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

    carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11 -(45 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]- [Aib8,Glu22,Glu30]-GLP-1-(7-37)-peptido,

    Qmm. 35:

    imagen16

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4- 10 carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2- amino-6-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-carboxi-4-[11 -(4-

    carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]etoxi]etoxi]acetil]amino]hexanoil]-[Aib8,Glu22]-

    GLP-1-(7-37)-peptido,

    Qmm. 36:

    imagen17

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(3S)-4-carboxi-4-[10-(3-

    carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)- 4-carboxi-4-[10-(4-carboxifenoxi)decanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil]-[Aib8]-GLp-1-(7-37)-peptido,

    5 Qmm. 37:

    imagen18

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

    carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

    [[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]aminojhexanoil]amino]hexanoil]-[Imp7',Aib8]-GLP-1- 10 (7-37)-peptido,

    Qmm. 38:

    imagen19

    N£26-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-[[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-

    carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoii]amino]hexanoil]amino]hexanoil], N£34-[(2S)-2-amino-6-[[(2S)-2-amino-6-

    [[(4S)-4-carboxi-4-[11-(4-carboxifenoxi)undecanoilamino]butanoil]aminojhexanoil]amino]hexanoil]-GLP-1-(7-37)- 5 peptido,

    Qmm. 39:

    imagen20

    y acido (S)-2-dimetilamino-6-(9H-fluoren-9-ilmetoxicarbonilamino)hexanoico;

    o un ester, amida o sal farmaceuticamente aceptable de este.

    10 12. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11 como un medicamento.
12. 13. El uso de un derivado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-11 en el tratamiento y/o prevention de todas las formas de diabetes, trastornos de la alimentation, enfermedades cardiovasculares, enfermedades gastrointestinales y/o el smdrome del ovario poliqmstico y/o para retrasar o prevenir la evolution de la enfermedad diabetica.