ES2618677T3 - Ácido beta-fenil-alfa-hidroxil-propiónico sustituido, método de síntesis y su uso - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula (I):**Fórmula** en donde R1 y R2 son, por separado, OH, y R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F, Cl, Br, metoxi y etoxi; o, de manera alternativa, R1 y R2 forman juntos -OCH2O-, y R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, metoxi, etoxi y halógenos; R4 es OH, aciloxi, aroiloxi o aciloxi sustituido con un resto heterocíclico; R5 se selecciona de cicloalcoxilo,**Fórmula** con la condición de que cuando R1 y R2 son OH, R3 es H y R4 es OH, entonces R5 no es**Fórmula**
Description
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DESCRIPCION
Acido p-fenil-a-hidroxil-propionico sustituido, metodo de smtesis y su uso Campo tecnico
La presente invencion se refiere a un derivado del acido p-fenil-a-hidroxil-propionico sustituido, a un procedimiento para su smtesis y a su uso para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento y la prevencion de enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares.
Tecnica anterior
La Rafz de Dan-Shen (Radix Salviae militiorrhizae) es un medicamento tradicional chino para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares con indudables efectos terapeuticos. En la actualidad, se supone que el acido salvianico (denominacion qmmica: acido p-(3,4-dihidroxifenil)-a-hidroxil-propionico) es el principal ingrediente activo de los componentes solubles en agua de la Rafz de Dan-Shen. En ensayos farmacologicos se ha demostrado que el acido p-fenil-a-hidroxil-propionico es la fraccion farmacologicamente activa del acido propanoide, pero su potencia no es deseable. De este modo, se modifico el acido p-fenil-a-hidroxil- propionico y los derivados resultantes modificados podnan tener una potencia igual o mayor que el compuesto original, exhibiendo asimismo un efecto terapeutico mejorado en el tratamiento y la prevencion de enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares. Por ejemplo, el borneol es capaz de atravesar la barrera hematoencefalica, en tanto que el acido propanoide no exhibe una tendencia a atravesar la barrera hematoencefalica. Por lo tanto, se puede modificar la estructura del acido propanoide por la incorporacion de la estructura qmmica de borneol.
El documento CN 1583710 A describe el compuesto siguiente:
como el metabolito principal de compuestos eficaces de salvia de rafz roja.
Compendio de la invencion
Un objeto de la presente invencion es proporcionar un derivado de acido p-fenil-a-hidroxil-propionico sustituido y un procedimiento para su smtesis, asf como el uso del derivado del acido p-fenil-a-hidroxil-propionico sustituido en la fabricacion de un medicamento para la prevencion y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares.
En un aspecto de la presente invencion, se ofrece un derivado del acido p-fenil-a-hidroxil-propionico sustituido, concretamente un compuesto de la formula (I):
en donde R1 y R2 son, por separado, OH, y R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F, Cl, Br, metoxi y etoxi; o, de forma alternativa, R1 y R2 forman, conjuntamente, -OCH2O-, R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, metoxi, etoxi y halogenos;
R4 es OH o aciloxi;
R5 se selecciona de cicloalcoxilo,
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con la condicion de que cuando Ri y R2 son OH, R3 es H y R4 es OH, entonces R5 no es
es decir, el compuesto no es el ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo tal como se muestra en la formula (II).
En una realizacion de la presente invencion, R4 es OH.
En una realizacion adicional de la presente invencion, R4 es aroiloxi o aciloxi sustituido con un resto heterodclico. Preferiblemente, R4 es o-acetoxi-benzoiloxi, 3-piridinil-benzoiloxi o 4-piridinil-benzoiloxi.
En una realizacion adicional de la presente invencion, R5 es:
En todavfa una realizacion adicional, Ri y R2forman conjuntamente -OCH2O-.
En una realizacion preferida, cuando Ri y R2 forman conjuntamente -OCH2O-, entonces R3 = H.
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En otro aspecto de la presente invencion, se ofrece un procedimiento para sintetizar un compuesto de la formula (I), que comprende: hacer reaccionar un compuesto de formula (III) con un compuesto de formula (IV) o un hidrato del mismo, en presencia de un catalizador:
en donde R-i, R2, R3, R4 y Rs tienen los mismos significados que se han definido anteriormente para la formula (I), con la condicion de que cuando R1 y R2sean OH, R3 sea H y R4 sea OH, entonces R5 no es
0, de manera alternativa, el procedimiento comprende: hacer reaccionar un compuesto de formula (V) con un compuesto de formula (VI) 0 un hidrato del mismo, en presencia de un catalizador:
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en donde R1, R2, R3 y R5 tienen los mismos significados que se han definido anteriormente para la formula (I), y R4' es aciloxi;
en donde dicho catalizador se selecciona de H2SO4 concentrado, acido silicotungstico, acido fosfomolfodico, acido p- toluenosulfonico, S2O82"/ZrO2, tricloruro de aluminio, cloruro de cinc y/o cloruro de cinc. Resulta especialmente conveniente usar acido p-toluenosulfonico y/o S2O82"/ZrO2.
La proporcion molar de reaccion del compuesto de formula (III) al compuesto de formula (IV) puede ser 1:0,8 a 1:1,5, preferiblemente 1:1 a 1:1,5, mas preferiblemente, 1:1,25 a 1:1,5 y, de forma especialmente preferida, 1:1,5.
La proporcion molar de reaccion del compuesto de formula (V) al compuesto de formula (VI) puede ser 1:0,8 a 1:1,5, preferiblemente 1:1 a 1:1,5, mas preferiblemente, 1:1,25 a 1:1,5 y, de forma especialmente preferida, 1:1,5.
De manera opcional, la reaccion se lleva a cabo en un disolvente. El disolvente se puede seleccionar del grupo que consiste en acetato etflico, diclorometano, tetrahidrofurano, acetona, tolueno, 1,4-dioxano y N,N-dimetilformamida. Preferiblemente, el disolvente se selecciona del grupo que consiste en tetrahidrofurano, acetona, tolueno, 1,4- dioxano y N,N-dimetilformamida. Mas preferiblemente, el disolvente se selecciona de tetrahidrofurano y acetona. De forma especialmente preferida, se usa tetrahidrofurano como disolvente. Estos disolventes se pueden usar solos o en cualquier combinacion.
La temperatura de reaccion se puede variar en funcion del disolvente utilizado. De manera conveniente, se contola dentro del intervalo de 0°C a 150°C. Preferiblemente, la temperatura de reaccion es de 25°C a 100°C. Mas preferiblemente, la temperatura de reaccion es de 65°C.
La duracion de la reaccion puede ser de 2 h a 24 h, preferiblemente, de 5 h a 15 h, mas preferiblemente, de 8 h a 12 h y, de forma especialmente preferida, de 8 h.
Cuando se utiliza S2O82"/ZrO2 como catalizador, el S2O82"/ZrO2 se puede preparar opcionalmente por el siguiente procedimiento: agregar amoniaco acuoso a una solucion de ZrOC2 a 0 a 10°C hasta alcanzar un pH de 9 a 12, envejecer, lavar el granulado para eliminar el Cl-, calentar hasta sequedad en un horno, triturar, agregarlo entonces a una solucion de (NH4)2S2O8 para inmersion, filtrar, secar, triturar y, a continuacion, recocer a 500 a 700°C durante 2 a 5 h, lo que da como resultado S2O82-/ZrO2.
En un aspecto adicional de la presente invencion, se ofrece el compuesto de la presente invencion para usarlo en la prevencion y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares o cerebrovasculares.
Breve descripcion de los dibujos
Figura 1 muestra un esquema para la smtesis de un compuesto de formula (II) en el Ejemplo 1 (no es realizacion), es decir, ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo.
Figura 2 muestra el espectro de masa del producto final obtenido en el Ejemplo 1 (no es realizacion).
Figura 3 muestra el espectro infrarrojo del producto final obtenido en el Ejemplo 1 (no es realizacion).
Figura 4 muestra el espectro de RMN H1 del producto final obtenido en el Ejemplo 1 (no es realizacion).
Figura 5 muestra el espectro de RMN C13 del producto final obtenido en el Ejemplo 1 (no es realizacion).
La presente invencion se ilustra adicionalmente junto con los ejemplos de smtesis siguientes y los ensayos farmacodinamicos. No obstante, se debe entender que estos ejemplos pretenden unicamente ilustrar, pero, en ningun caso, limitar la presente invencion.
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Ejemplo 1 (no es realizacion): Smtesis (I) de ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo.
(1) Smtesis de acetil glicina
En un matraz de tres cuellos de 250 mL, se depositaron 0,33 mol de glicina y 100 mL de agua destilada y se agito vigorosamente hasta la disolucion y, bajo agitacion, se agregaron lentamente, gota a gota, 0,67 mol de antndrido acetico. La mezcla se agito vigorosamente de forma continua durante 50 min y, entonces, se filtro con succion. Los granulos de lavaron y secaron, dando como resultado un cristal blanco, con un rendimiento de 86,0%.
(2) Smtesis de 2-metil-4-(3,4-diacetoxi-benzilideno)-oxazolona
En un matraz de tres cuellos de 250 mL, se depositaron 0,20 mol de 3,4-dihidroxil-benzaldetndo, 0,24 mol de acetil glicina y 0,26 mol de acetato sodico anhidro; a continuacion, se agregaron 189 mL de antndrido acetico y se mezclo homogeneamente por agitacion. La reaccion se llevo a cabo durante 4 h en un bano de agua a 80°C bajo agitacion, a continuacion, la temperatura se elevo a 100°C y se continuo la reaccion durante 1 h bajo agitacion. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y, seguidamente, se introdujo en un refrigerador para enfriamiento adicional. Bajo agitacion, se agregaron a la mezcla de reaccion 100 mL de agua y en el fondo precipito un cristal de color amarillo. Despues de filtrar con succion, lavar y secar, se obtuvo un cristal amarillo con un rendimiento de 75,0%.
(3) Smtesis de acido p-(3,4-diacetoxi-fenil)-a-acetamido-acnlico
En un matraz se depositaron 0,15 mol de 2-metil-4-(3,4-diacetoxi-benzilideno)-oxazolona, 166 mL de acetona y 166 mL de agua destilada; a continuacion, se calento lentamente hasta ebullicion y se sometio a reflujo por calentamiento durante 3 h. La mezcla se decoloro usando carbon activo. Despues de filtrar, el filtrado se dispuso para cristalizacion, luego, se filtro con succion, se lavo y se seco, dando como resultado un polvo cristalino de color crudo, con un rendimiento de 72,9%.
(4) Smtesis de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-piruvico
A 0,25 mol de acido p-(3,4-diacetoxi-fenil)-a-acetamido-acnlico se agregaron 1.500 mL de acido clorhndrico 1 molL- 1. A continuacion, la mezcla se calento a reflujo, con agitacion, durante 8 h. Despues de decolorar usando carbon activo y de filtrar con succion, el filtrado se concentro para su precipitacion como cristal. La mezcla se filtro con succion, se lavo y seco, dando como resultado un cristal blanco suelto, con un rendimiento de 48,1%.
(5) Smtesis de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico
A 0,17 mol de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-piruvico se agregaron 112 g de amalgama de cinc y 1.808 mL de una solucion 1,4 molL-1 de acido clorhndrico, y la reaccion se llevo a cabo bajo calentamiento y tratamiento a reflujo durante 8 h. Despues de filtrar, el filtrado se extrajo usando acetato etflico de forma repetida y se seco usando Na2SO4 anhidro. Despues de retirar el acetato etflico, se obtuvo acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico, con un rendimiento de 40,3%.
(6) Smtesis del ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo.
En un matraz se depositaron 0,12 mol de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico y 0,18 mol de borneol, a continuacion, 0,86 g de acido p-toluenosulfonico o 2,00 g de S2Os2"/ZrO2 de produccion propia como catalizador, y 500 mL de tetrahidrofurano. La reaccion se llevo a cabo a 65°C durante 8 h. Despues de finalizar la reaccion, se retiraron el catalizador, el disolvente y el borneol que no habfan reaccionado para obtener una sustancia viscosa de color pardo que se separo adicionalmente usando cromatograffa de columna para obtener un aceite amarillento.
El catalizador S2Os2"/ZrO2 se preparo por un procedimiento que comprende las etapas siguientes; preparar una solucion 1 mol L-1 de ZrOCh con 0,025 mol de ZrOC^-8 H2O; agitar en un bano de agua helada; agregar lentamente, gota a gota, 6 molL-1 de amoniaco acuoso, hasta que el pH llegue a 10; envejecer durante 12 h; filtrar con succion; lavar la torta de filtro con agua destilada hasta que no sea posible determinar Cl- (usando la prueba de 0,1 mol L-1 de AgNOa); recocer la torta de filtro a 110°C durante 10 h; triturar; enjuagar en solucion 0,5 mol L-1 de (NH4^S2Oa durante 12 h; filtrar con succion; secar; triturar; y recocer en un horno de mufla a 600°C durante 3 h para obtener S2O82‘/ZrO2.
(7) El espectro de masa, espectro infrarrojo, espectro de RMN H1 y espectro de RMN C13 del aceite amarillento resultante
Figura 2 es el espectro de masa de aceite amarillento obtenido, que muestra que 351,7 es el pico del ion molecular de (M+H2O), y el aceite tiene un peso molecular de 333,69;
Figura 3 muestra el IR(KBr) v/cm'1: 3363,61 (OH), 2953,12 (CH3), 2913,90 (CH2), 1725,51 (C=O), 1608,20, 15121,53, 1450,32 (estructura basica del anillo de benceno), 1281,36 (C=O del ester), 1114,39 (C-O del hidroxilo secundario), 885,71 y 805,68 (anillo de benceno 1,2,4-trisustituido);
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Figura 4 muestra la RMN H1 (CD3COCD3, 500 MHz) 6: 6,57-7,64 (m, 3H, Ar-H), 4.10-4,32 (m, 1H, -CH(OH)-), 4,83 (t, 1H, -CH-), 2,79-2,92 (m, 2H, -CH2-);
Figura 5 muestra la RMN C13 (CDCI3, 500 MHz) 6: 174,790, 143,807, 143,056, 128,557, 121,549, 116,895, 115,488, 81,983, 71,646, 48,860, 47,881,44,798, 39,871, 36,506, 27,918, 27,057, 19,653, 18,774, 13,501.
Los datos de caracterizacion anteriores demostraron que se obtuvo el ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil- propionato de bornilo por smtesis.
Ejemplo 2 (no es realizacion): Smtesis (II) del ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo
La smtesis se llevo a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1, con la excepcion de que al matraz de tres cuellos se agregaron 0,12 mol de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico y 0,15 mol de borneol, a continuacion, 0,86 g de acido p-toluenosulfonico como catalizador y 500 mL de tetrahidrofurano, y la reaccion se efectuo a 65°C durante 12 h. Despues de finalizar la reaccion, se retiro el disolvente de reaccion por destilacion al vado y la sustancia viscosa resultante se trato al vado (1,3x10-3 Pa) usando una bomba de aceite en un bano de agua hirviendo para retirar el borneol y, seguidamente, se agregaron 200 mL de acetato efflico. La solucion resultante se lavo con solucion saturada de NaHCO3 para retirar el acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico y el acido p-toluenosulfonico que no hadan reaccionado. La capa de acetato efflico obtenida se concentro a presion reducida, dando como resultado una sustancia viscosa de color pardo que se separo adicionalmente por cromatograffa de columna, obteniendo un aceite amarillento. El aceite amarillento resultante tiene los mismos espectros de masa e infrarrojo que el del Ejemplo 1.
Ejemplo 3 (no es realizacion): Smtesis (III) del ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo
La smtesis se llevo a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1, con la excepcion de que al matraz de tres cuellos se agregaron 0,1 mol de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico y 0,12 mol de borneol, a continuacion, 1,33 g de S2Os2"/ZrO2 como catalizador y 400 mL de 1,4-dioxano, y la reaccion se efectuo a 100°C durante 8 h. Despues de finalizar la reaccion, el catalizador S2Os2"/ZrO2 se retiro por filtracion con succion y el disolvente se retiro por destilacion al vado, y la sustancia viscosa resultante se trato al vado (1,3x10-3 Pa) usando una bomba de aceite en un bano de agua hirviendo para retirar el borneol. La sustancia viscosa de color negro pardo se separo por cromatograffa de columna, obteniendo un aceite amarillento que tuvo los mismos espectros de masa e infrarrojo que en el Ejemplo 1.
Ejemplo 4 (no es realizacion): Smtesis (IV) del ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo
La smtesis se llevo a cabo por el mismo procedimiento que en el Ejemplo 1, con la excepcion de que al matraz de tres cuellos se agregaron 0,06 mol de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico y 0,09 mol de borneol, a continuacion, 0,60 g de tricloruro de aluminio como catalizador y 200 mL de N,N-dimetilformamida como disolvente, y la reaccion se efectuo a 150°C durante 10 h. Despues de finalizar la reaccion, el disolvente se retiro por destilacion al vado, y la sustancia viscosa resultante se trato al vado (1,3x10-3 Pa) usando una bomba de aceite en un bano de agua hirviendo para retirar el borneol. La sustancia viscosa de color negro pardo se separo por cromatograffa de columna, obteniendo un aceite amarillento que tuvo los mismos espectros de masa e infrarrojo que en el Ejemplo 1.
Ejemplo 5 (no es realizacion): Smtesis del ester de p-(4-clorofenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo
(1) Se sintetizo 2-metil-4-(4-cloro-benzilideno)-oxazolona de forma similar al Ejemplo 1(2), con la excepcion de que se utilizo 4-cloro-benzaldeddo en lugar de 3,4-dihidroxil-benzaldeddo. Se obtuvo un cristal de color pardo con un rendimiento de 87,4%.
(2) Smtesis de acido p-(4-clorofenil)-a-acetamido-acfflico
En un matraz, se depositaron 0,10 mol de 2-metil-4-(4-cloro-benzilideno)-oxazolona, 110 mL de acetona, 110 mL de agua y 2 mL de acido clorddrico concentrado, se calento lentamente hasta ebullicion y, a continuacion, se continuo calentando a reflujo durante 3 h. Despues de decolorar con carbon activo y filtrar, el filtrado se sometio a cristalizacion y se obtuvo un polvo cristalino de color naranja con un rendimiento de 81,1% por filtracion con succion, lavado y secado.
(3) Smtesis de acido p-(4-clorofenil)-piruvico
En un matraz, se depositaron 4,55 g de acido p-(4-clorofenil)-a-acetamido-acfflico, 91 mL de una solucion 1 mol L-1 de acido clorddrico y 45 mL de THF, y la mezcla se calento a reflujo durante 10 h. Despues de decolorar con carbon activo y filtrar, el filtrado se sometio a cristalizacion y se obtuvo un polvo cristalino de color blancuzco con un rendimiento de 77,3% por filtracion con succion, lavado y secado.
(4) Smtesis de acido p-(4-clorofenil)-a-hidroxil-propionico
En un matraz con 15,00 g de acido p-(4-clorofenil)-piruvico se agregaron 98 g de Zn(Hg), 219 mL de solucion 2,5 mol L-1 de acido clorddrico y 35 mL de THF y se calento a reflujo durante 10 h. Despues de filtrar mientras la mezcla
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de reaccion estaba caliente, se concentro el filtrado hasta alcanzar 80 mL y se dejo reposar durante la noche. Despues de filtrar con succion, lavar, secar y recristalizar en agua hirviendo, se obtuvo un cristal flocular con un rendimiento de 64,0%.
(5) Smtesis del ester de p-(4-clorofenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo
En un matraz de tres cuellos, se depositaron 0,12 mol de acido p-(4-clorofenil)-a-hidroxil-propionico y 0,15 mol de borneol; a continuacion, se agregaron 0,86 g de acido p-toluenosulfonico como catalizador y 500 mL de tetrahidrofurano, y la reaccion se llevo a cabo a 65°C durante 12 h. Despues de finalizar la reaccion, se retiro el disolvente de reaccion por destilacion al vado, la sustancia viscosa obtenida se trato al vacm (1,3x10-3 Pa) usando una bomba de aceite en un bano de agua hirviendo para retirar el borneol, a continuacion, se agregaron 200 mL de acetato etflico para obtener una solucion. La solucion resultante se lavo con solucion saturada de NaHCO3 para retirar el acido p-(4-clorofenil)-a-hidroxil-propionico y el acido p-toluenosulfonico que no habfan reaccionado. La fase organica obtenida se concentro al vacm dando como resultado una sustancia viscosa de color pardo que se separo por cromatograffa de columna para obtener un aceite amarillento.
IR(KBr) v/cm'1: 3461,45 (OH), 2981,99 (CH3), 2935,46 (CH2), 1731,08 (C=O), 1598,03, 1492,10, 1453,90 (estructura de base del anillo de benceno), 1269,86 (C=O del ester), 1106,22 (C-O del hidroxilo secundario), 846,84 (para- disustituido).
RMN H1 (500 MHz, CDCla) 6: 6,57-7,64 (m, 3H, Ar-H), 4,10-4,32 m, 1H, -CH(OH)-), 4,83 (t, 1H, -CH-), 2,79-2,92 (m, 2H, -CH2-), 1,205 (t, 3H, -CH3-);
RMN C13 (500 MHz, CDCla) 6: 13,5, 19,5, 19,5, 23,3, 30,2, 32,5, 40,8, 45,4, 49,4, 50,6, 71,3, 82,4, 128,7, 128,7, 129,1,129,1,131,5, 137,5, 170,8.
Ejemplo 6 (no es realizacion): Smtesis del ester de p-(3-metoxi-4-hidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo
(1) La 2-metil-4-(3-metoxi-4-acetoxi-benzilideno)-oxazolona se sintetizo de manera similar al Ejemplo 1(2), con la excepcion de que se utilizo 3-metoxi-4-hidroxil-benzaldel'ndo en lugar de 3,4-dihidroxil-benzaldel'ndo. Se obtuvo un cristal amarillo con un rendimiento de 73,5%.
(2) El acido p-(3-metoxi-4-acetoxi-fenil)-a-acetamido-acnlico se sintetizo de manera similar al Ejemplo 1(3), con la excepcion de que se uso 2-metil-4-(3-metoxi-4-acetoxi-benzilideno)-oxazolona en lugar de 2-metil-4-(3,4-diacetoxi- benzilideno)-oxazolona. Se obtuvo un polvo cristalino suelto de color crudo, con un rendimiento de 71,6%.
(3) El acido p-(3-metoxi-4-hidroxil-fenil)-piruvico se sintetizo de manera similar al Ejemplo 1(4), con la excepcion de que se uso acido p-(3-metoxi-4-acetoxi-fenil)-a-acetamido-acnlico en lugar de acido p-(3,4-diacetoxi-fenil)-a- acetamido-acnlico. Se obtuvo un polvo cristalino suelto, de color amarillento, con un rendimiento de 64,2%.
(4) El acido p-(3-metoxi-4-hidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico se sintetizo de manera similar al Ejemplo 5(4), con la excepcion de que se utilizo acido p-(3-metoxi-4-hidroxil-fenil)-piruvico en lugar de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)- piruvico. Se obtuvo un aceite o cristal de color amarillento, con un rendimiento de 77,8%.
(5) El ester de p-(3-metoxi-4-hidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo se sintetizo de manera similar al Ejemplo 5(5), con la excepcion de que se utilizo acido p-(3-metoxi-4-hidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico en lugar de acido p- (3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico. Se obtuvo un cristal de color amarillento, con un rendimiento de 59,8%.
IR(KBr) v/cm-1: 3363,61 (OH), 2953,12(CHs), 2913,90 (CH2), 1725,51(C=O), 1608,20, 1521,53, 1450,32 (estructura de base del anillo de benceno), 1281,36 (C=O del ester), 1114,39 (C-O del hidroxilo secundario), 885,71, 805,68 (anillo de benceno 1,2,4-trisustituido) 1237,58, 1027,61 (eter alqrnlico de arilo);
RMN H1 (400 MHz, CD3COCD3) 6: 6,679-6,869 (m, 3H, Ar-H), 4,920-4,983 (m, 1H, -CH-), 4,257-4,286 (t, 1H, - CH(OH)-), 3,819 (s, 3H, -OCH3), 2,804-2,978 (m, 2H,-CH2-);
RMN C13 (400 MHz, CD3COCD3) 6: 13,5, 19,5, 19,5, 23,3, 30,2, 32,5, 41,1, 45,4, 49,4, 50,6, 56,1, 71,3, 82,4, 113,1, 116,8, 121,4, 133,0, 142,9, 151,3, 170,8.
Ejemplo 7: Smtesis del ester de p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-(nicotinoiloxi)-propionato de mentilo
(1) La 2-metil-4-(benzo[1,3]dioxol-5-il-metileno)-oxazolona se sintetizo de manera similar al Ejemplo 1(2), con la excepcion de que se utilizo benzo[1,3]dioxol-5-carbaldel_ndo en lugar de 3,4-dihidroxil-benzaldel'ndo. Se obtuvo un cristal amarillo con un rendimiento de 76,5%.
(2) El acido p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-acetamido-acnlico se sintetizo de manera similar al Ejemplo 1(3), con la excepcion de que se uso 2-metil-4-(benzo[1,3]dioxol-5-il-metileno)-oxazolona en lugar de 2-metil-4-(3,4-diacetoxi- benzilideno)-oxazolona. Se obtuvo un polvo cristalino suelto de color crudo, con un rendimiento de 78,7%.
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(3) El acido p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-piruvico se sintetizo de manera similar al Ejemplo 1(4), con la excepcion de que se uso acido p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-acetamido-acnlico en lugar de acido p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-acetamido- acnlico. Se obtuvo un polvo cristalino suelto, de color amarillento, con un rendimiento de 65,4%.
(4) El acido p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-hidroxil-propionico se sintetizo de manera similar al Ejemplo 5(4), con la excepcion de que se utilizo acido p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-piruvico en lugar de acido p-(3,4-dihidroxil-fenil)-piruvico. Se obtuvo un aceite o cristal de color amarillento, con un rendimiento de 78,7%.
(5) El ester de p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-hidroxil-propionato de mentilo se sintetizo de manera similar al Ejemplo 5(5), con la excepcion de que se utilizo acido p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-hidroxil-propionico en lugar de acido p-(3,4- dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionico. Se obtuvo un aceite de color amarillento.
(6) Smtesis del ester de p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-(nicotinoiloxi)-propionato de mentilo
En un matraz de tres cuellos, se disolvieron 0,12 mol de ester de p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-hidroxil-propionato de mentilo en 0,15 mL de acetona y, a continuacion, se agrego una cantidad del catalizador DCC/DMAP. A un bano de hielo se agrego gota a gota una solucion de 0,15 mol de acido nicotmico disuelto en 5 mL de acetona. La reaccion se llevo a cabo en el bano de hielo durante 2 h y, a continuacion, a temperatura ambiente, durante 1 h. Despues de finalizar la reaccion, se efectuo una filtracion con succion al vado, se retiro el disolvente de reaccion por destilacion, y se agregaron 200 mL de acetato etflico a la sustancia viscosa resultante. La solucion obtenida se lavo con solucion saturada de NaHCO3 para retirar el acido nicotmico y el catalizador que no habfan reaccionado. La fase organica se concentro al vado dando como resultado una sustancia viscosa de color pardo que se separo por cromatograffa de columna para obtener un aceite de color amarillento, el ester de p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-(nicotinoiloxi)-propionato de mentilo, con un rendimiento de 45,5%.
IR(KBr) v/cm-1: 3056,56 (H-C=C), 2967,42 (CH3), 2940,54 (CH2), 1723,02 (C=O), 1597,32, 1520,17, 1462,10 (estructura de base del anillo de benceno), 1452,62, 1480,34, 1585 (estructura de base del anillo de piridina),1268,53 (C=O del ester), 1235,79, 1017,23 (eter alqrnlico de arilo), 1125,33 (C-O del hidroxilo secundario), 884,43 y 798,62 (1,2,4-trisustituido);
RMN H1 (400 MHz, CD3COCD3) 6: 7,56-9,00 (m, 4H, piridinio-H), 6,679-6,869 (m, 3H, Ar-H), 6,06 (s, 2H, -OCH2O-),
5.10 (m, 1H, -CH(O)-), 4,920-4,983 (m, 1H, -OCH(clcy)-), 2,804-2,978 (m, 2H, -CH2-);
RMN C13 (500 MHz, CD3COCD3) 6: 20,7, 21,0, 21,0, 22,3, 25,7, 28,5, 33,9, 37,8, 39,6, 47,1, 72,6, 75,6, 101,2, 112,7,
115.2, 121,0, 122,1, 126,0, 132,7, 136,4, 146,0, 148,7, 150,4, 151,4, 165,9, 170,8.
Ejemplo 8: Smtesis del ester de p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-(isonicotinoiloxi)-propionato de mentilo
La smtesis se llevo a cabo de manera similar al Ejemplo 7, con la excepcion de que se uso acido isonicotmico en lugar de acido nicotmico. Se obtuvo un producto final en forma de aceite amarillento, con un rendimiento de 47,83%, que fue el ester de p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-(isonicotinoiloxi)-propionato de mentilo.
IR(KBr) v/cm'1: 2966,27 (CH3), 2943,14 (CH2), 1720,82 (C=O), 1592,37, 1517,09, 1467,10 (estructura de base del anillo de benceno), 1452,24, 1484,56, 1598,23 (estructura de base del anillo de piridina),1267,67 (C=O del ester), 1237,58, 1027,61 (eter alqrnlico de arilo), 1103,14 (C-O del hidroxilo secundario), 880,43 y 795,81 (1,2,4- trisustituido);
RMN H1 (400 MHz, CD3COCD3) 6: 7,56-9,00 (m, 4H, piridinio-H), 6,679-6,869 (m, 3H, Ar-H), 6,06 (s, 2H, -OCH2O-),
5.10 (m, 1H, -CH(O)-), 4,920-4,983 (m, 1H, -OCH(clcy)-), 2,804-2,978 (m, 2H, -CH2-);
RMN C13 (500 MHz, CD3COCD3) 6: 20,7, 21,0, 21,0, 22,3, 25,7, 28,5, 33,9, 37,8, 39,6, 47,1, 72,6, 75,6, 101,2, 112,7,
115.2, 122,9, 122,9, 126,0, 132,7, 136,4, 146,0, 148,7, 150,3, 150,3, 165,9, 170,8.
Ejemplo 9: Smtesis del ester de p-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-a-(2-acetoxi-benzoiloxi)-propionato de bornilo Las etapas (1) a (4) de la smtesis fueron identicas a las etapas (1) a (4) del Ejemplo 7.
(5) El ester de p-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-a-hidroxil-propionato de bornilo se sintetizo de manera similar al Ejemplo 5(5), con la excepcion de que se utilizo borneol en lugar de mentol, y se obtuvo un aceite amarillento.
(6) El ester de p-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-a-(2-acetoxi-benzoiloxi)-propionato de bornilo se sintetizo de manera similar al Ejemplo 7(6), con la excepcion de que se utilizo acido 2-acetoxi-benzoico en lugar de acido nicotmico, y se uso ester de p-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-a-hidroxil-propionato de bornilo en lugar de ester de p-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-a- hidroxil-propionato de mentilo. Se obtuvo un aceite o cristal de color pardo claro a amarillo, con un rendimiento de 43,8%.
IR(KBr) v/cm-1: 2981,99 (CH3), 2935,46 (CH2), 1731,08 (C=O), 1598,03, 1492,10, 1453,90 (estructura de base del anillo de benceno), 1269,86 (C=O del ester), 1106,22 (C-O del hidroxilo secundario), 880,43 y 795,81 (1,2,4- trisustituido), 746,84 (orto-disustituido);
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RMN H1 (400 MHz, CD3COCD3) 6: 7,18-8,00 (m, 4H, Ar-H), 6,679-6,869 (m, 3H, Ar-H), 6,06 (s, 2H, -OCH2O-), 5,10 (m, 1H, -CH(O)-), 4,920-4,983 (m, 1H, -OCH(clcy)-), 2,804-2,978 (m, 2H, -CH2-);
RMN C13 (500 MHz, CD3COCD3) 6: 13,5, 19,5, 19,5, 20,3, 23,3, 30,2, 32,5, 37,8, 45,4, 49,4, 50,6, 56,1, 72,6, 82,1, 112,7, 115,2, 120,9, 121,0, 121,5, 125,5, 130,3, 132,7, 133,5, 146,0, 148,7, 153,6, 165,9, 169,0, 170,8.
Ejemplo 10: Smtesis de p-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-a-hidroxil-N-(3-fenil-1-etoxi-carbonil-propil)-propionamida
Las etapas (1) a (4) de la smtesis fueron identicas a las etapas (1) a (4) del Ejemplo 7.
(5) Smtesis del ester de 2-amino-4-fenil-butirato etilico
A 16,50 g de homofenilalanina se agregaron 350 mL de etanol anhidro y, bajo agitacion, se anadio gas seco de HCl. La adicion se interrumpio despues de 1,5 h y se cambio el aparato de reaccion. La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 1,5 h. Tras finalizar la reaccion, se retiro por destilacion la mayor parte del etanol para precipitar una gran cantidad de un cristal blanco y, despues de filtrar con succion, lavar y secar se obtuvieron 19,2 g de cristal blanco en agujas. El cristal blanco se disolvio en una solucion acuosa y utilizando una solucion de NaOH se ajusto el pH de la solucion resultante. La solucion se extrajo usando eter etilico. A continuacion, se retiro el disolvente, dando como resultado 14,92 g de un lfquido incoloro o amarillento, con un rendimiento de 78,2%.
(6) Smtesis de p-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-a-hidroxil-N-(3-fenil-1-etoxi-carbonil-propil)-propionamida
En un matraz se depositaron 0,40 g de acido p-(benzo[1,3]dioxol-5-il)-a-hidroxil-propionico y 12 mL de CH3CN, y el matraz se enfrio externamente con una mezcla de hielo y agua. Se agregaron 0,62 g de ester de 2-amino-4-fenil- butirato etilico y 0,02 g de DMAP, bajo la agitacion generada por una barra de agitacion magnetica. Despues de agitar la mezcla hasta su clarificacion, se agregaron 0,45 g de DCC. La temperatura de reaccion se elevo de manera natural hasta temperatura ambiente por agitacion y se llevo a cabo la reaccion a temperatura ambiente durante 5 h. Despues de retirar el disolvente por destilacion al vado, se agrego acetato etflico. La solucion obtenida en acetato etflico se lavo con solucion de NaHCO3, solucion acuosa de HCl y agua y, a continuacion, se destilo al vado para obtener un producto crudo del compuesto deseado. Despues de purificar el producto crudo por cromatograffa, se obtuvieron 0,39 g de un solido blanco, con un rendimiento de 51,3%.
IR(KBr) v/cm'1: 3417,2 (hidroxilo de alcohol), 3255,79 (NH), 2967,53 (CH3), 2934,21 (CH2), 1723,79 (C=O), 1669,97 (C=O de amida), 1593,37, 1515,19, 1463,13 (estructura de base del anillo de benceno), 1239,98, 1026,76 (eter alqrnlico de eter), 1111,35 (C-O del hidroxilo secundario), 884,45 y 792,17 (1,2,4-trisustituido); 698,69, 750,62 (anillo de benceno monosustituido);
RMN H1 (400 MHz, CD3COCD3) 6: 6,18-7,50 (m, 8H, Ar-H), 6,13 (s, 2H, -OCH2O-), 4,82 (m, 1H, -CH(NH)-), 4,55 (m, 1H, -CH(OH)-), 4,12 (q, 2H, -OCH2-), 2,804-2,978 (m, 2H, -PhCH2-), 2,30-2,54 (m, 4H, -CH2CH2-), 1,31 (t, 3H, -CH3);
RMN C13 (500 MHz, CD3COCD3) 6: 14,1, 30,3, 32,3, 41,7, 52,7, 61,3, 73,3, 101,2, 112,7, 115,2, 121,0, 126,1, 128,1, 128,1, 128,9, 128,9, 132,7, 138,0, 146,0, 148,7, 171,5, 172,7.
Ejemplo 11: Smtesis de 2-hidroxil-3-(benzo[1,3]-dioxol—5-il)-N-[2-hidroxil-3-(1-naftoxi)-propil]-propionamida Las etapas (1) a (4) de la smtesis fueron identicas a las etapas (1) a (4) del Ejemplo 7.
(5) Smtesis de eter epoxi-propflico de 1-naftilo
En un matraz de tres cuellos y fondo redondo, de 500 mL, se depositaron 10,03 g de 1-naftol, 3,1 g de NaOH, 20,4 g de epiclorhidrina (S/R) y 0,5 g de KI; a continuacion, se agregaron 330 mL de etanol. Seguidamente, el matraz se introdujo en un reactor de microondas. La reaccion se llevo a cabo a 30°C con agitacion y 300 W de irradiacion de microondas durante 12 min. A continuacion, se retiro la mezcla de reaccion y se filtro con succion, y el filtrado se concentro para obtener una sustancia oleosa. Se agrego H2O a la sustancia oleosa y la mezcla ase extrajo con eter etilico. Las capas etflicas se combinaron y lavaron con una solucion de NaOH y, entonces, se lavaron una vez con H2O. La capa de eter se seco usando sulfato de magnesio anhidro y se concentro para obtener 12,95 g del producto, con un rendimiento de 93,2%.
(6) Smtesis de 1-amino-3-(1-naftoxi)-2-propanol
En un matraz de reaccion especial para microondas, se depositaron 450 mL de amoniaco acuoso concentrado, se agregaron entonces 3,0 g de eter epoxi-propflico de 1-naftilo y la reaccion se llevo a cabo a 40°C bajo agitacion magnetica y 300 W de irradiacion de microondas durante 14 min. Tras finalizar la reaccion, la mezcla de reaccion se concentro al vado, se agrego acetato etflico y se ajusto el pH a acidez con hidrocloruro concentrado. Despues de filtrar con succion, se obtuvo hidrocloruro de 1-amino-3-(1-naftoxi)-2-propanol que, a continuacion, se seco para dar un solido blanco. El solido se disolvio en agua por calentamiento y se ajusto a pH alcalino. Despues de enfriar, precipito una gran cantidad de solido blanco. El precipitado se filtro con succion y se seco, dando como resultado 2,0 g de solido blanco, con un rendimiento de 63%.
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(7) Preparacion de 2-hidroxil-3-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-N-[2-hidroxil-3-(1-naftoxi)-propil]-propionamida
En 15 mL de acetona se disolvieron 0,43 g de 1-amino-3-(1-naftoxi)-2-propanol, a continuacion, se agregaron 0,45 g de DCC y 0,10 g de DMAP y, bajo agitacion magnetica, se agrego, gota a gota, acido p-(benzo[1,3]-dioxol-5-il)-a- hidroxil-propionico disuelto en 5 mL de acetona. La reaccion se llevo a cabo a temperatura ambiente durante 1 h y se produjo una gran cantidad de solido blanco. Tras finalizar la reaccion, la mezcla de reaccion se filtro con succion y el filtrado se concentro hasta sequedad, se agrego entonces acetato etflico al producto seco resultante y se lavo con solucion de NaHCO3. La capa de ester se concentro hasta sequedad, obteniendo de este modo una sustancia oleosa de color pardo que se purifico por cromatograffa lfquida preparativa. Se obtuvieron 0,27 g de un aceite amarillento, con un rendimiento de 32,8%.
IR(KBr) v/cm-1: 3409,82 (hidroxilo de alcohol), 3251,72 (NH), 2969,37 (CH3), 2944,74 (CH2), 1723,49 (C=O), 1664,74 (C=O de ester), 1591,77, 1519,90, 1469,21 (estructura de base del anillo de benceno), 1235,78, 1029,63 (eter alqrnlico de eter), 1101,15 (C-O del hidroxilo secundario), 885,53 y 794,61 (1,2,4-trisustituido); 3050 (estructura de base de naftaleno), 798,69, 780,62 (anillo de naftaleno monosustituido);
RMN H1 (400 MHz, CD3COCD3) 6: 6,75-8,30 (m, 10H, Ar-H), 6,13 (s, 2H, -OCH2O-), 3,55 (m, 2H, -CH2(NH)-), 4,55 (m, 1H, -COCH(OH)-), 4,35 (m, 1H, -CH(OH)-), 4,02 (q, 2H, -OCH2-), 2,90-3,07 (m, 2H, -PhCH2-);
RMN C13 (500 MHz, CD3COCD3) 6: 41,7, 45,1, 68,5, 71,3, 73,3, 101,2, 104,3, 112,7, 115,2, 120,4, 121,0, 122,2, 125,4, 126,1, 126,6, 127,4, 127,6, 132,7, 134,5, 146,0, 148,7, 156,8, 172,7.
Ejemplo de referencia 12: Ensayo farmacodinamico
1. Efectos del ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo (mencionado en lo sucesivo, de forma abreviada, “ester de salvianato de bornilo”; no es realizacion) sobre el flujo de sangre de la microcirculacion cerebral en ratas con oclusion de la arteria cerebral media.
60 ratas SD, con un peso corporal de 220 ± 20 g, se distribuyeron aleatoriamente en un grupo de control normal, un grupo de control de modelo, un grupo de inyeccion de acido salvianico (i.p., 1 mL/kg) y un grupo de ester de p-(3,4- dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo a dosis baja, media y alta, respectivamente (i.p. 5, 15 y 35 mL/kg). Las ratas de los grupos normal y de modelo recibieron el mismo volumen de solucion salina fisiologica por via i.p. Las ratas se anestesiaron por inyeccion intraperitoneal de pentotal sodico al 1% en una cantidad de 40 mg/kg, se colocaron en posicion supina, con la cabeza fija, y se secciono la piel a lo largo de la lmea cervical media. Se inserto una canula traqueal y se les permitio respirar de manera espontanea. Se aislaron la vena yugular comun y la arteria carotida comun, introduciendo una sutura para un uso posterior. Los animales se fijaron a un sistema estereotaxico para ratas, se practico una ventana craneal de 6x8 mm en la sien derecha con un taladro dental y, tras la hemostasia, se secciono con tijeras y abrio la duramadre cerebral para exponer la piamadre cerebral. La ventana se cubrio y sello con cemento de vidrio y dental y se fijo en la ventana craneal la sonda laser de un flujometro laser Doppler de la microcirculacion de sangre. A continuacion, los animales se fijaron en posicion lateral, se levanto la arteria carotida comun, se ligo en la zona proximal, se corto cuidadosamente con tijeras y se introdujo en la arteria una sutura de nailon con un diametro aproximado de 0,3 mm. Antes de insertar la sutura, se marco la distancia entre el corte de la arteria y la paropia de las ratas. Cuando la sutura de nailon introducida se aproximo a la posicion marcada, fue necesario ralentizar la velocidad de introduccion de la sutura, observando al mismo tiempo el flujo de sangre de la microcirculacion cerebral que muestra el flujometro laser Doppler de microcirculacion cerebral. Cuando la sutura alcanza la arteria cerebral media, se puede registrar un brusco descenso del flujo sangumeo de la microcirculacion. Despues de observar el descenso del flujo sangumeo de la microcirculacion, se continuo haciendo penetrar la sutura en aproximadamente 1 mm y se ligaron de manera segura el extremo distal de la seccion y la sutura en la arteria. Se elimino el resto de la sutura. Al final del ensayo, se analizo si la sutura de nailon bloquea el punto de inicio de la arteria cerebral media y se anularon los datos correspondientes a animales cuya arteria no estuviera bloqueada. Los animales del grupo de control no recibieron tratamiento. Despues de preparar la ventana craneal, se fijo la sonda del flujometro laser Doppler de la microcirculacion de sangre de tipo J 12200 en la ventana craneal y se mantuvo la sonda sin desplazamiento ni rotacion durante toda la prueba. Se registraron los flujos de microcirculacion antes de la ligadura y 5, 15, 30, 45 y 60 min despues de la misma; los datos de los animales incluidos en los grupos de tratamiento farmacologico se registraron en los mismos puntos de tiempo. El flujo sangumeo de microcirculacion observado al cabo de 1 min en cada uno de los momentos se designo como el flujo sangumeo de microcirculacion de ese punto de tiempo correspondiente.
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Tabla 1. Efectos sobre el flujo sangumeo de la microcirculacion cerebral en ratas con oclusion de la arteria cerebral media (n=10)
- Grupo
- Dosis Flujo sangumeo microcirculatorio (mL)
- 5 min
- 15 min 30 min 45 min 60 min
- Control
- / 65,3±5,7 67,4±7,4 67,8±6,8 65,1±5,9 64,2±8,5
- Modelo
- / 10,2±2,3 11,4±3,4 13,2±4,1 14,0±3,4 14,9±6,5
- Acido salvianico
- 1 mL/kg 10,8±3,6 20,1±6,9** 31,2±9,5** 33,0±6,8** 29,4±6,9**
- Medicamento de prueba
- 5 mg/kg 11,4±5,4 12,4±4,6 12,9±5,1 16,1±4,1 16,0±6,9
- Medicamento de prueba
- 15 mg/kg 9,4±3,7 12,8±5,6 20,7±3,2* 25,0±5,2** 24,4
- Medicamento de prueba
- 35 mg/kg 10,8±2,7 19,4±5,1** 32,7±6,2** 35,4±8,2** 35,2±5,8**
En comparacion con el grupo de modelo: *P<0,05; **P<0,01
Los resultados experimentales demuestran que, tras bloquear la arteria cerebral media, disminuyo rapidamente el flujo sangumeo de la microcirculacion cerebral en la region de aporte de sangre (lobulos frontal y parietal), manteniendo un nivel relativamente bajo. Solo despues de haber mantenido bloqueada la arteria durante 30 min aumento ligeramente el flujo sangumeo de la microcirculacion cerebral, lo que indico que los modelos de isquemia estuvieron correctamente establecidos. Mientras tanto, el flujo sangumeo de la microcirculacion cerebral aumento ligeramente 30 min o 15 min despues de la administracion del ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo a las dosis de 15 mg/kg y 35 mg/kg, respectivamente. Estos resultados senalan que la dilatacion arteriolar y el incremento del flujo sangumeo de la microcirculacion pueden tener posibles efectos positivos sobre las enfermedades cerebrovasculares causadas por isquemia, pero es necesario investigar el correspondiente mecanismo de accion.
2. Efectos protectores del ester de salvianato de bornilo sobre el dano cardiaco por isquemia- reperfusion (I/R)
52 ratas SD, con un peso corporal de 220 ± 20 g, se distribuyeron aleatoriamente en un grupo de control de modelo, un grupo de inyeccion de acido salvianico (i.m., 1 mL/kg) y un grupo de ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil- propionato de bornilo a dosis baja, media y alta (i.p., 5, 15 y 35 mg/kg). Las ratas de los grupos normal y de control de modelo recibieron el mismo volumen de solucion salina fisiologica por via i.p. La administracion a todos los grupos de ratas se llevo a cabo durante 5 dfas consecutivos. Cuando las ratas recibieron la ultima administracion, se les anestesio al mismo tiempo con pentobarbital sodico al 1,5% (i.p., 45 mg/kg), y se inserto un cateter en la arteria carotida derecha que se conecto, a traves de un transductor, a un sistema de registro fisiologico de ocho canales. Se introdujo una canula traqueal y se mantuvo el ritmo de ventilacion en 60 veces/minuto. Se abrio el torax y se uso una sutura 6/0 para formar un asa en un punto situado 1 a 2 mm de la rafz de la arteria coronaria descendente anterior; se introdujo a traves del asa un tubo de plastico y el asa se estrecho. Se registro la variacion del electrocardiograma. Un aumento o descenso de ST indico el exito de la ligadura. El color del tejido miocardico por debajo de la sutura de ligadura se oscurecio. 30 minutos mas tarde, se retiro el tubo de plastico para restaurar el flujo sangumeo de la arteria coronaria y provocar una hiperemia del tejido local durante la reperfusion. En los grupos sometidos a isquemia durante 30 min y reperfusion durante 30 min, se registraron las areas de infarto de miocardio antes del ensayo, despues de la isquemia durante 1 min y 30 min, y despues de la reperfusion durante 30 min; en los grupos sometidos a isquemia durante 30 min y reperfusion durante 2 h, se tomaron muestras de tejido cardiaco que se fijaron con formalina al 10%, se incluyeron en parafina, se cortaron en serie con un grosor de 4 pm y se sometieron por separado a ensayos de inmunohistoqmmica; las ratas incluidas en el grupo de operacion simulada se sometieron solamente a la introduccion de la sutura, pero no se ligaron sus arterias coronarias.
Efectos sobre las areas de infarto de miocardio causado por I/R del musculo cardiaco
Despues de someter a las ratas a isquemia y reperfusion durante 30 minutos, se ligaron nuevamente las coronarias descendentes anteriores y, a continuacion, fueron sacrificadas, se extrajeron rapidamente los corazones y se inyecto en las camaras cardiacas azul de Evans al 1% a traves de la aorta para diferenciar las regiones isquemicas de las no isquemicas. Despues de seccionar la auricula y el ventnculo derecho del corazon, los corazones se refrigeraron a -20°C durante 30 min, se depositaron en un canal para corte en secciones hecho a medida y se cortaron a lo largo del eje longitudinal para formar secciones muy finas de 2 mm. Estas secciones se sumergieron en solucion tampon de acido fosforico TTC al 1% (pH 7,4) y se incubaron a 37°C durante 30 min para distinguir las regiones en riesgo y las regiones necroticas. A continuacion, las secciones se fijaron con formaldetudo al 10% durante 24 h para potenciar el color de tincion para la fotograffa de contraste. Despues del tratamiento anterior, el tejido miocardico se dividio en: miocardio normal en azul, miocardio isquemico en rojo palido, y miocardio necrotico en gris. Se utilizo un software de analisis computadorizado para calcular el porcentaje del area de la region con infarto de miocardio (nec) basado en el area de la region de miocardio en riesgo (aar, es decir, miocardios isquemicos, incluidas la region con infarto isquemico y la region sin infarto isquemico) (nec/aar), y el porcentaje del area de la region de infarto de miocardio, basado en el area total del miocardio (nec/lv) para indicar el grado de infarto, asf como el porcentaje del area de miocardio en riesgo basado en el area del ventnculo izquierdo (aar/lv).
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Tabla 2. Efectos causados por la I/R del musculo cardiaco sobre las areas de infarto de miocardio
- Grupo
- Dosis Numero de animales aar/lv (%) nec/lv (%) nec/aar (%)
- Control de modelo
- / 12 67,10±11,40 50,52±15,65 64,10±13,03
- Acido salvianico
- 1 mL/kg 10 50,21±7,10* 41,41±5,49* 49,87±7,83*
- Medicamento de prueba
- 5 mg/kg 9 64,09±18,10 48,45±17,11 61,72±14,65
- Medicamento de prueba
- 15 mg/kg 10 63,02±15,98 48,23±15,34 62,63±13,82
- Medicamento de prueba
- 35 mg/kg 11 51,97±13,04* 40,21±12,65* 50,01±9,03*
En comparacion con el grupo de control de modelo: *P<0,05
Los resultados demostraron que, comparados con el grupo de control de modelo, los valores de aar/lv, nec/lv y nec/aar en el grupo de dosis alta se redujeron en 22,5%, 20,4% y 22% (P<0,01), respectivamente, lo cual indica que es posible reducir el area de infarto de miocardio provocada por la I/R del miocardio.
Efectos sobre la expresion de protemas Bax, Bcl-2, caspasa-3, MMP-2 y PPARy
Para la tincion, se utilizaron los metodos convencionales de la inmunohistoqmmica ABC y SP. Bax: anticuerpo policlonal anti-conejo (Santa CruzBio, Inc.) a una dilucion de1:200; Bcl22: anticuerpo policlonal anti-conejo (tBd Tianjin Biotechnological Center), a una dilucion de 1:100; caspasa-3: anticuerpo policlonal anti-conejo (Normarkers Fromont, CA), a una dilucion de 1:200; PPARy: anticuerpo policlonal anti-cabra (Santa CruzBio, Inc.), a una dilucion de 1:500. Los procedimientos espedficos se llevaron a cabo de acuerdo con las instrucciones de los kits ABC y SP. Para el desarrollo del color se uso DAB y se utilizo resina neutra para el montaje. Se utilizo PBS en lugar del primer anticuerpo como control negativo. Las celulas con expresion positiva de los polipeptidos de prueba fueron de color pardo-amarillo, en donde la protema MMP-2 estuvo presente en el citoplasma, Bcl-2 se expreso en la membrana nuclear y el citoplasma, Bax lo hizo principalmente en el citoplasma y parcialmente en el nucleo, y caspasa-3 se expreso principalmente en el nucleo y parcialmente en el citoplasma. Se uso el sistema de analisis de imagenes CMIAS para la seleccion aleatoria de campos de secciones muy finas y la seleccion automatica de puntos para analisis, y el analisis estadfstico se efectuo usando los valores medios de densidad optica o los valores integrales de densidad optica de las secciones muy finas de tejido miocardico.
Tabla 3. Efectos sobre la expresion de protemas de Bax, Bcl-2, caspasa-3, MMP-2 y PPARy (n=10)
- Grupo
- Dosis Valor de DO
- Bax
- Bcl-2 Caspasa-3 MMP-2 PPARy
- Control de modelo
- / 0,13±0,04 0,14±0,03 0,37±0,11 0,16±0,04 0,17±0,02
- Acido salvianico
- 1 mL/kg 0,08±0,02* 0,18±0,04 0,21±0,12** 0,12±0,05 0,34±0,08**
- Medicamento de prueba
- 5 mg/kg 0,12±0,03 0,15±0,03 0,35±0,14 0,14±0,05 0,16±0,05
- Medicamento de prueba
- 15 mg/kg 0,09±0,05 0,15±0,06 0,32±0,08 0,14±0,03 0,18±0,06
- Medicamento de prueba
- 35 mg/kg 0,07±0,03* 0,21±0,04* 0,20±0,07** 0,11±0,03* 0,18±0,10
En comparacion con el grupo de control de modelo: *P<0,05, **P<0,01.
Los resultados demostraron que la expresion de Bcl-2 y Bax se modifico efectivamente en la I/R de celulas del miocardio, lo cual indica que intervienen en la regulacion de la apoptosis celular. El ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a- hidroxil-propionato de bornilo podna reducir la expresion de las protemas Bax y caspasa-3 y aumentar la expresion de la protema Bcl-2, lo que senala que el ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo podna iniciar el mecanismo de auto-proteccion de las celulas contra los danos, induciendo la expresion de Bcl-2 y reduciendo los niveles de Bax y caspasa-3, revertir la apoptosis celular y el proceso de necrosis estimulado por la I/R del miocardio, mostrando de este modo efectos protectores sobre las celulas del miocardio.
MMP-2 se asocia con el dano de la I/R del musculo cardiaco, obtenida por la escision de troponina I que, a su vez, conducina directamente a la apoptosis celular. El inhibidor espedfico de MMP-2 podna mejorar la funcion cardiaca de ratas con I/R del miocardio, y los resultados han indicado que el ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil- propionato de bornilo sena capaz de provocar un descenso de la protema MMP-2, lo cual podna ser un mecanismo adicional del ester de p-(3,4-dihidroxil-fenil)-a-hidroxil-propionato de bornilo para proteger el miocardio contra el dano I/R.
3. Efectos del ester de salvianato de bornilo sobre la presion arterial y la funcion del ventnculo izquierdo en ratas anestesiadas
Las ratas se anestesiaron con una inyeccion intraperitoneal de uretano al 20%, 5 mL/kg, y fueron inmovilizadas; se practico una incision en la piel del cuello de las ratas, se aislaron los musculos cervicales anteriores, se expuso la 5 traquea y se inserto una canula traqueal; se aislo la arteria carotida comun, se introdujo un cateter cardiaco a traves de la arteria carotida comun hasta el ventnculo izquierdo, se midio la presion intraventricular izquierda con un transductor de presion (T-200) de un polfgrafo multicanal RM-6000 y el amplificador de portadora (AP-601G) del poKgrafo multicanal RM-6000; a continuacion, se introdujeron las senales de presion intraventricular izquierda en el amplificador diferencial (ED-601G) del polfgrafo multicanal RM-6000 para registrar la frecuencia maxima de 10 incremento y descenso de la presion intraventricular izquierda (dp/dtmax-dp/dtmax); se aislo la arteria femoral derecha y se midio la presion arterial usando la canula; se conecto un electrodo de registro del electrocardiografo para registrar un electrocardiograma de tipo II. Todos los datos se introdujeron en un sistema de adquisicion y procesamiento de datos PowerLab/8Sp a traves del polfgrafo multicanal rM-6000 y fueron registrados, analizados y procesados por el sistema PowerLab/8Sp.
15 El abdomen se abrio 1,5 cm por debajo del hueso xifoides para aislar el duodeno, usando tijeras de oftalmologfa se practico una pequena incision en el duodeno, alejada de los vasos sangumeos, se inserto un cateter y la incision se fijo por sutura. Al final de la operacion y un periodo de espera adicional de 30 min, se registraron los datos normales una vez estabilizados los indices que se debfan monitorizar.
Los medicamentos de prueba se administraron por via duodenal a traves del cateter y los indices de controlaron 5, 20 15, 30, 60, 90 y 120 min despues de la administracion. Se calcularon las tasas de variacion de los indices de
acuerdo con la formula siguiente, los cuales se usaron para los analisis estadfsticos entre grupos.
Tasa de variacion (%) = (Tras la administracion - Antes de la administracion) x 100
Antes de la administracion
3.1 Efectos sobre la frecuencia cardiaca de ratas anestesiadas
Los resultados experimentales indicaron que las dosis de 4,5 mg/kg, 9 mg/kg y 18 mg/kg del ester de salvianato de 25 bornilo no mostraron efectos importantes sobre la frecuencia cardiaca de las ratas anestesiadas; no se observan diferencias significativas en comparacion con el grupo de control en blanco; por el contrario, el hidrocloruro de verapamilo redujo significativamente la frecuencia cardiaca y se puede observar una diferencia significativa en comparacion con el grupo de modelo (P<0,05 o P<0,01) (Tabla 4).
3.2 Efectos sobre la presion arterial media, la presion sistolica y la presion diastolica de ratas anestesiadas
30 En el grupo que recibio la dosis de 18 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la presion arterial media, la presion sistolica y la presion diastolica de las ratas anestesiadas se redujeron de forma significativa tras la administracion y se registraron diferencias significativas (P<0,05 o P<0,01) en los puntos de tiempo de 15, 60, 90 y 120 min en comparacion con el grupo de control en blanco; en el grupo de 9 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la presion arterial media, la presion sistolica y la presion diastolica de las ratas anestesiadas mostraron tendencia a descender, 35 y se observaron diferencias significativas (P<0,05 o P<0,01) con respecto al grupo de control en blanco a los 15 y 60 min; en el grupo de 4,5 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la presion arterial media, la presion sistolica y la presion diastolica de las ratas anestesiadas no mostraron una variacion importante ni se registraron diferencias significativas con respecto al grupo de control en blanco; por el contrario, el hidrocloruro de verapamilo pudo reducir de manera significativa la presion arterial media, la presion sistolica y la presion diastolica de las ratas anestesiadas 40 y se observaron diferencias significativas (P<0,01) con respecto al grupo de control en blanco a los 5, 15, 30, 60, 90 y 120 min (Tablas 5, 6 y 7).
3.3 Efectos sobre la presion intraventricular izquierda en ratas anestesiadas
En el grupo de 18 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la presion intraventricular izquierda de las ratas anestesiadas se redujo de forma significativa tras la administracion y se registraron diferencias significativas (P<0,05 45 o P<0,01) a los 15, 30, 60, 90 y 120 min en comparacion con el grupo de control en blanco; en el grupo de 9 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la presion intraventricular izquierda de las ratas anestesiadas mostro tendencia a descender, y se observaron diferencias significativas (P<0,05 o P<0,01) con respecto al grupo de control en blanco a los 60 min; en el grupo de 4,5 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la presion intraventricular izquierda de las ratas anestesiadas no mostro una variacion importante tras la administracion, y no se registraron diferencias 50 significativas con respecto al grupo de control en blanco; por el contrario, el hidrocloruro de verapamilo redujo de manera significativa la presion intraventricular izquierda de las ratas anestesiadas y se observaron diferencias significativas (P<0,01) con respecto al grupo de control en blanco (Tabla 8).
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
3.4 Efectos sobre dp/dt y -dp/dt de ratas anestesiadas
En el grupo de 18 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la dp/dt de las ratas anestesiadas se redujo de forma significativa tras la administracion y se registraron diferencias significativas (P<0,05 o P<0,01) a los 15, 30, 60, 90 y 120 min en comparacion con el grupo de control en blanco; en el grupo de 9 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la dp/dt de las ratas anestesiadas mostro tendencia a descender, y se observaron diferencias significativas (P<0,05 o P<0,01) con respecto al grupo de control en blanco a los 60 y 120 min; en el grupo de 4,5 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la dp/dt de las ratas anestesiadas no se vio afectada significativamente por la administracion, y no se registraron diferencias significativas con respecto al grupo de control en blanco; por el contrario, el hidrocloruro de verapamilo redujo de manera significativa la dp/dt de las ratas anestesiadas y se observaron diferencias significativas (P<0,01) con respecto al grupo de control en blanco.
En los grupos de 9 mg/kg y 18 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la -dp/dt de las ratas anestesiadas mostro una tendencia a la reduccion y se observaron diferencias significativas (P<0,05 o P<0,01) con respecto al grupo de control en blanco a los 60 y 120 min; en el grupo de 4,5 mg/kg de ester de salvianato de bornilo, la -dp/dt de las ratas anestesiadas no se vio afectada significativamente por la administracion, y no se registraron diferencias significativas con respecto al grupo de control en blanco; por el contrario, el hidrocloruro de verapamilo redujo de manera significativa la -dp/dt de las ratas anestesiadas y se observaron diferencias significativas (P<0,01) con respecto al grupo de control de modelo (Tablas 9, 10).
Los resultados experimentales indican que el ester de salvianato de bornilo podna reducir la presion intraventricular izquierda, dp/dt y -dp/dt, lo cual permite suponer que el ester de salvianato de bornilo tiene los efectos de reducir la eficiencia cardiaca negativa de la contractilidad del miocardio; los efectos de reduccion de la eficiencia cardiaca negativa podnan ser la razon del descenso de la presion arterial media, la presion sistolica y la presion diastolica de las ratas anestesiadas.
Por otra parte, los resultados experimentales demostraron que se produjo una reduccion de la dp/dtmax, pero la frecuencia cardiaca no se modifico de manera significativa, es decir, la dp/dtmax no estuvo directamente correlacionada con la frecuencia cardiaca. El mecanismo de estos fenomenos requiere estudios adicionales.
4. Efectos protectores del ester de salvianato de bornilo sobre la isquemia aguda de miocardio en la rata
60 ratas de sexo masculino se distribuyeron aleatoriamente en un grupo de operacion simulada (0,5% de Poloxamero, 10 mL/kg), un grupo de control de modelo (0,5% de Poloxamero, 10 mL/kg), un grupo de verapamilo (comprimido de verapamilo, 10 mg/kg) y grupos de ester de salvianato de bornilo (10 mg/kg, 20 mg/kg y 40 mg/kg). 0,5 h despues de la administracion intragastrica de estas sustancias a las ratas, se registro un electrocardiograma estandar de II derivaciones (antes del modelaje) y se midio la altura del segmento ST-T. A continuacion, las ratas del grupo de operacion simulada se sometieron a la aplicacion de una malla en la arteria coronaria, sin ligadura, en tanto que las ratas de otros grupos se sometieron a una ligadura de la arteria coronaria, de acuerdo con el metodo siguiente, con el fin de establecer modelos de isquemia aguda de miocardio. Las ratas se anestesiaron con eter, se fijaron en posicion supina y se registraron sus electrocardiogramas normales (antes del modelaje). Se practico una incision en la piel del torax izquierdo bajo condiciones asepticas, se aislaron los cuartos musculos intercostales de manera roma, se extruyo el corazon por la aplicacion de una ligera presion sobre el torax derecho, se ligo la arteria coronaria descendente anterior izquierda en una posicion de 2 a 3 mm del origen de la arteria coronaria izquierda y entre el cono de la arteria pulmonar y la auricula cardiaca izquierda; seguidamente, el corazon se introdujo nuevamente en la cavidad toracica y se suturo la incision. Para prevenir infecciones, se aplico penicilina de forma topica. Despues de la operacion, se registro de inmediato el electrocardiograma de post-isquemia (0 min despues del modelaje) y se midio la altura del segmento ST-T. 24 horas despues de la operacion, los animales se anestesiaron nuevamente por inyeccion intraperitoneal de 5 mL/kg de uretano al 20% y se registro otra vez el electrocardiograma (24 h despues del modelaje), midiendo la altura del segmento ST-T; se extrajeron muestras de sangre de la aorta abdominal, se separaron los sueros y se determinaron las actividades de lactato deshidrogenasa (LDH), creatina quinasa (CK), isoenzima de creatina quinasa (CK-MB) y superoxido dismutasa (SOD), asf como el contenido de malondialdehudo (MDA); se extrajo el corazon abriendo el torax y se lavo con solucion salina fisiologica fna, se retiraron las auriculas cardiacas, los ventnculos cardiacos se cortaron de forma transversal para obtener 3 a 4 secciones muy finas, estas se sumergieron en solucion NBT al 0,25% y se tineron en un bano de agua a 37°C durante 10 min, se cortaron y pesaron los musculos cardiacos infartados y se calculo el porcentaje en peso de los musculos cardiacos infartados con respecto a los musculos cardiacos de todo el ventnculo del corazon (Tablas 11 a 14).
Los resultados demostraron que en todos los grupos tratados con dosis de ester de salvianato de bornilo, se redujo la proporcion de los musculos cardiacos infartados en la totalidad del ventnculo, observandose efectos relativamente potentes en los grupos de dosis media y alta (P<0,05 o P<0,01); en todos los grupos de dosis, las actividades de lactato deshidrogenasa (LDH), creatina quinasa (CK) e isoenzima de creatina quinasa (CK-MB) disminuyeron 24 h despues; la superoxido dismutasa (SOD) aumento en las ratas con isquemia aguda de miocardio, especialmente en el grupo de dosis alta (P<0,05); en los grupos de dosis media y alta, se observo una tendencia a la disminucion del contenido en suero de MDA, pero no se registraron diferencias significativas con respecto al grupo de control de modelo; 24 h despues de la ligadura de la arteria coronaria, se observo una elevacion del segmento ST-T en el
electrocardiograma, sobre todo en el grupo de dosis alta (P<0,05). Los resultados indicaron que el ester de salvianato de bornilo podna reducir el area del infarto de miocardio en la rata, mostrando efectos protectores sobre la isquemia aguda de miocardio en ratas.
Antes de la
Despues de la administracion
- VJI upu
- °° administracion 5' IS1 30' 60'. 90' 120’
- 2-5mMs;g 344.39*42.73 344.28*46.02 355.13*44.09 349.22*47.61 354.23*47.61 361.39*48.94 359.78*54.27
- V_/ Ul 1 11 Ul LI 1 13ICII IUU
- 2.23*5.30 5.66*7.27 4.44*1034 6.18*11.78 8.06*1553 7.37*1532
- (n-10)
- 25mL/kg 322.67*5838 326.83*50.06 328.47*46.72 337.91*49.80 332.98*55.18 333.84*54.39 327.03*57.06
- 2.42*11.78 4.05*20.61 6.63*18.47 5.03*19.64 5.4609.62 3.30*20.73
- Ester ac. DroDanoide de borneol 18mg/kg
- 357.28*36.29 35856*44.88 356.00*40.82 348.07*3931 357.22*47.10 35533*9.61 357.68*5336
- (n=10) '
- 0.22*4.94 -0.07*9.93 -2.01*12.45 0.39*13.05 -0.44*6.91 0.28*12.04
- Fptpr ac nrnnannidp dp hnrnpnl 9mg/ke
- 373.43*41.28 374.04*47.60 374.93*4751 361.94*4356 359.61*3930 354.38*62.30 354.09*4738
- (n=10)'
- 0.28*7.83 0.48*756 -3.00*5.83 -452*7.13 -4.13*1754 -4.62*1234
- Ester ac. DroDanoide de borneol45ingfl!g
- 329.43*43.77 337.41*47.67 347.56*4758 34851*52.11 365.43*32.77 369.71*3554 36036*51.95
- (n=10)
- 2.49*7.18 5.67*758 5.97*9.72 12.05*12.32 1331*13.05 9.40*630
- Control de verapamilo
- 11.4mg/kg 363.19*46.67 345.03*33.81 324.96*3650 322.02*51.09 317.91*5804 329.61*55.70 328.05*58.98
- (n=10)
- -4.63*4.08* * -9.67*11.64* * -10.32*16.56* -1131*19.30’ -7.75*20.11 -7.96*2139
- En comparacion con el grupo de control de Tween: *f>< 0.05, **p < 0.01
- Tabla 5: Efectos sobre la presion de contraccion (mmHg)
- Antes de la Despues de la administracion
- Grupo
- Dosis administracion 5' 15’ 30’ 60’ 90’ 120'
Control en bianco (n=10)
Control de Tween (n=10)
Ester ac. propanoide di (n=10)
Ester ac. propanoide di (n=10)
Ester ac. propanoide di (n=10)
Control de verapamilo (n=10)
- 2,5mL/lcg
- 117.57*2151 121.76*2337 123.75*2654 11851*32.99 118.80*31.50 118.40*33.16 12451*35.18
- 355*5.90 4.98*935 -0.09*15.39 0.07*10.36 -0.17*1258 550*24.03
- 25mL/kg
- 124.41*26.13 122.64*26.97 124.75*24.75 121.92*23.44 120.80*29.92 121.05*37.12 119.48*25.05
- -1«33±6*67 1.08*9.91 -0.79*13.70 -2.46*16.70 -1.80*16.77 -2.7*17.49
- 18mg/fcg
- 128.25*23.86 128.34*28.96 120.90*26.54 117.76*22.90 106.97*3232 104.23*32.16 113.34*24.47
- -0.06*12.42 -5.49*1453’ -7.74*1232 -1634*1950' -18.68*1831’ * -10.88*16.04’
- fmgfltg
- 132.26*20.00 131.10*2438 127.85*23.92 12258*23.46 115.46*23.90 12050*31.83 120.85*32.13
- -1.14*6.68 -357*7.14’ -7.38*8.66 -12.63*11.39’ ’ -8.80*16.65 -9.19*14.65’
- 4,5mg/ikg
- 129,06*22.13 12654*25.94 128.80*24.39 129.90*23.86 135.97*22.80 13155*25.10 12862*28.30
- -156*11.16 -0.05*10.13 053*11.47 5.64*891 256*13,11 -0.49*1238
- 137.10*28.79 115.30*19.35 98.48*16.13 94.47*17.17 9849*22.31 99.15*23.91 10258*27.01
- -14.92*9.40" -26.88*1131’ * -29.86*1230" -2655*1757" -2638*1738’ ’ -23.82*1816’ ’
En comparacion con el grupo de control de Tweenfp < 0.05, **p< 0.01
Tabla 6: Efectos sobre la presion diastolica (mmHg)
- f^ri inn
- Dosis Antes de la Despues de la administracion
- administracion____s'........ 15' 30’ 60' 90' 120'
- n bianco
- 2-SmL/kg 63.92*12.98 66.51*13.71 68.12*15.60 66.35*18.40 66.54*17.95 66.18*8.51 68.44*20.16
- i)
- 4.05*6.32 6.28*10.50 2.60*16.02 3.59*15.55 3.24*17.92 6.54*23.33
- e Tween
- 2.5mL/kg 67.56 ±14.29 66.2ftfcl4.25 67.6feD.23 66.42*13.11 65.95*16.45 66.05*1537 65.27*14.84
- 31
- -L57*&21 1.46*14.24 0.13*18.94 -1.21*2194 -0.75*2163 -1.67*22.83
- propanoide de borneol 18mgfl£g
- 73.04*11.87 72.55*16.58 68.87 ±14.57 66.68*11.95 60.98±16.D 60.29*15.88 61.54*13.73
- 0)
- -1.00*14.79 -5.45*15.82’ -7.68*16.90 -15.66121.14’ -16.74*18.37’ -14.64*19.58 ’
- propanoide de borneol ftmgflsg
- 69.2U15.19 68.02*18.77 66.18*19.00 62.90*17.46 59.10*16.07 63.12*19.81 62.58*22.20
- 0)
- -2.47*10.80 -5.33*9.64’ -9.50*10.75’ -14.30*13.75' ’ -8.83*17.11 -10.28*17.60’
- propanoide de borneol^^jg^
- 68.47*11.97 68.68*15.82 70.87*15.08 71.78*15.67 76.78*14.34 74.71*18.13 72.46*20.46
- 0)
- -0.08*12.81 3.38*12.17 4.78*14.39 12.13*9.39 8.47*17.66 4.39*16.80
- e verapamilo
- H.4mu/ks£ 75.39*19.27 59.69*12.55 50.08*9.88 48.00*9.98 48.81*11.47 49.38tD.27 51.84*13.93
- 0)
- -19.04*12.70" -31.18*15.04’ ’ -33.98*15.67’' -32.54*19.02* ’ -32.10*18.74’ * -29.18*17.73’ ’
- omparacion con el grupo de control de Tween: *p < o.OS, **p < ttJi
- Tabla 7: Efectos sobre la presion arterial media (mmHg)
- Dosis Antes de fa Despues de la administracion
- administracion...s*.............. 15' 30' 60' 90' 120'
- en bianco
- 2.5mL/kg 81.8tel5.30 84.93*16.35 86.66*18.78 83.87*22.97 83.96*22.23 8339*2330 87.13*25.01
- =10)
- 3.81*6.04 5.64*9.78 1.26*15.60 1.82*12.68 1.51*15.15 6.04*22.99
- de Tween
- 2.5n£L/kg 86.51*18.19 85.05*18.38 86.69*16.88 84.92*16.37 84.24*20.76 84.38*19.01 83.34*18.04
- ■ 10)
- -1.45*7.32 1.28*12.05 -0.32*16.30 -182*1929 -1.26*19.14 -2.22 *20.12
- c. propanoide de
- borneol i8ra^te 91.44*15.44 91.15*20.31 86.21*18.29 83.71*15.31 7631*2136 74.94*21.07 78.81*17.04
- ■ 10)
- -0.58*13.53 -5.52*14.99’ -7.79*14.45 -16.01*20.44’ -17.64*18.17’ -12.96*17.66’
- c. propanoide de
- borneol „ _ ftnogfltg 90.23*16.25 89.05*20.26 86.74*20.25 82.79*18.98 77.89*18.11 82.38*23.18 82.00*25.04
- -10)
- -1.79*8.69 -4.42*8.30' -8.42*9.56 -13.46*12.43’ -8.77*16.66 -9.71*15.95’
- -10)
- 4.5mp/kg 88.67*14.74 87.97*18.89 90.18*17.91 91.15*17.95 96.51*16.69 93.79*20.11 91.18*22.76
- -101*11.95 1.66*11.07 2.91*12.81 8.95*8.95 5.62*15.30 2.06*14.37
- 1=10)
- H.4insflig 95.96*22.22 78.22*14.31 66.21*11.57 63.49*11.93 65.37*1437 65.97*16.34 68.75*17.93
- -17.07*11.03" -29.16*13.09* ‘ -32.04*13.81’ ’ -29.68*18.40’ * -29.33*17,82’ ‘ -26.65*17.62’ ’
En comparacion con el grupo de control de Tween: *£< 0.05, **p < 0,01
- Grupo
- Dosis Antes de la Despues de la administracion
- administracion
- 5’ 15’ 30’ 60’ 90‘ 120’
- Control en bianco
- ,23nLL/feg 124,84*14.88 127.99*16.77 328.87*18.64 126.10*22.02 126.30*21.69 125.79*22.94 128.12*24.71
- (n= 10)
- 2.48*4.20 3.05*5.46 0.51*837 0.75*7.10 037*8.10 2.02*10.87
- Control de Tween
- 23mL/kg 126.46*14.18 125.76*1338 12732*12.98 12533*1436 124.91*16.52 12432*15.43 122.50*1536
- (n=10)
- -0.41*4.07 0.87*6.22 -0.61*837 -1.07*9.12 -1.45*9.18 -2.83*9.80
- Ester ac. propanoide de borneol
- 18mg/kg 131.93*16.79 131.90*18.96 126.28*18.51 124.81*18.94 120.67*23.43 117.91*22.68 119.85*2236
- (n=10)
- -0.01*7.29 -4.15*8.95' -5.46*7.09 -8.71*11.64' -10.81*11.60' -933*13.16 “
- Ester ac. propanoide de borneol
- 9mg,0cg 12839*1838 128.87*25.63 127.06*25.57 123.59*25.06 119.77*23.09 122.40*2638 121.85*2636
- (n=10)
- -0.03*8.26 -137*9.10 -4.07*837 -684*8.75' -4.88*1137 -5.47*9.76
- Ester ac. propanoide de borneol fn—
- 4.5mg/kg 128.68*20.18 128.67*18.24 130.13*18.12 129.67*17.48 13439*19.12 130.91*17.22 129.15*18.53
- ln |UJ
- 038*6.72 1.51*6.25 132*7.07 4.73*6.55 239*9.41 0.79*7.76
- (n=10)
- 11.4mg/kg 137.79*18.96 128.71*14.20 120.22*12.98 11639*13.59 115.68*1537 115.10*16.60 11839*16.55
- -6.24*4.79'' -12,21*7.42'! -14.73*8.91'' -15.14*12.14'' -15.59*12.52’ * -1334*1133 ”
En comparacion con el grupo de control de Tween: **p< 0.01
Tabla 9. Efectos sobre la tasa de variation de la presion intraventricular izquierda, MAX (mmHg/s)
Grupo
Dosis
Antes de la administration
Despues de la administracion
IS’
30'
60’
90l
120'
Control en bianco (n=10)
Control de Tween (n=10)
Ester ac. propanoide de borneol (n=10)
Ester ac. propanoide de borneol (n=10)
Ester ac. propanoide de borneol (n=10)
Control de verapamilo (n=10)
- 23mL/kg
- 5121.14940.7 53003*1071.0 5363.7*1193.1 52583*1366.8 5139.2*9263 50943*946.1 5408.2*13423
- 3.5*83 4.6*10.9 1.7*133 0.9*10.4 03*12.7 5.1*14.8
- 2.5mL/bg
- 5246.5*14.18 5252.7*13.38 5408.4*1298 5318.1*1436 52693*16.52 5295.0*15.43 52053*1536
- 1.3*12.6 4.5*183 2.5*21.3 1.6*21.5 2.0*20.2 0.2*21.8
- ISmg/kg
- 5695.0*1086.8 5694.7*1264.7 5470.3*1416.7 5186.9*11773 4905.3*1047.7 4676.5*941.1 3012.6*7773
- -03*93 -4.7*11.8' -8.9*11.5’ -12.4*18.7' -16.7*153’ ’ -10.9*12.4"
- Qmq/Irg
- 5435.8*1200.0 5388.9*1187.0 5321.6*1133.0 5179.1*1270.9 4966.9*1297.4 5113.5*1356.4 49593*1399.0
- -0.7±6.7 -1.6*7.4 -5.0*7.8 -9.2*10.0' -6.4*13.2 -9.7*11.2'
- 4,5mg/kg
- 53803*913.7 54293*1279.7 5435.9*1216.6 5408.8*1352.2 5760.1*1393.5 5706.1*1390.6 5512.7*1250.1
- 0.4*11.0 0.9*11.4 0.1*13.5 7.1*18.3 7.6*26.1 3.6*20.4
- 11.4mg/kg
- 5455.9*14183 4857.7*1002.4 4284.9*7933 41523*901.5 3919.4*784.0 3759.0*814.5 4044.6*844.9
- -9.7±7.0'' -19.6*11.8'' -22.1*14.0'' -25.4*173'' -28.1*19.0" -23.1*18.4''
En comparacion con el grupo de control de Tween:tp<0.05, **p< 0.01
K3
O
- Gru po
- Dosis
- Control en bianco (n=10)
- 2.5mL/feg
- Control de Tween (n=10)
- 2.5mL/kg
- Ester ac. propanoide de borneol
- (n=10)
- 18mg/kg
- Ester ac. propanoide de borneol ~ (n=10) W 8
Ester ac. propanoide de borneol^.Smg/kg (n= 10)
Control deverapamilo 114mslbs
(n=10) ‘
Despues de la admmistracion
Antes de la administracion
-3790.6*596.7
-3753.7*603.1
-4092.0*905.4
-38813*735.6
-4246.1*6693
-4215.6*1058.0
5’
-3865.0*679.8
L8±4.8
-3690.5*326.4
-14*2.7
-4103.4*981.2
0.0±7.8
-3908.5*1013.0 0.0*112 -4152.9*764.8 -2.2*83 -3812.9*779.3 -8.S±6.6' ’
15'
-3891.5*775.2 23*8.0 -37673*5513 0.9±8;5 -3991.9*948.6 -2.4±9.3 -3792.8*979JS -2.9*10.2 -4141.1*755.6 -2.4*9.! -3548.9*707.7 -14.5*9.9’ ‘
30'
-3879.0*9063 L3*LL4 -3692.4*698.4 -1.0*16.2 -3923.8*879.8 -3.9±8.2 -3696.8*997.3 -5.5*10.8 -4090.5*704.6 -3.6±6.5 -3416.6*767.5 -17.8*11^’ ‘
60’
-3883.4*781.9
2.0*10.4
-3673.8*721.5
-1.6*16.5.
-3744.3*8513
-7.9*14.0*
-3569.5*857.8
-8.3*10.2*
-4146.8*820.5
-2.4*10.2
-3436.8*691.1
-16.2*16.0“
90'
-3858.7*715.1 1.8*10.9 -3658.5*653.0 -1.8*16.4 -3659.3*806.3 -9.2*16.9 -3629.7*1013.3 -7.2*13.3 -4156.0*947.7 -2.2*15.9 -3247.4*773.2 -20.9*16.9’ *
120'
-3985.4*899.9 4.4*13.8 -3573.1*702.5 -4.4*15.4 -3692.1*8633 -8.8*16.9* -3541.7*917.7 -9.2*113’ -3995.2*837.9 -5.6*143 -3452.2*630.9 -16.3*11.4* *
En comparacion con el grupo de control de Tween:*p< 0.05, **p < 0.01
Tabla 11. Efectos sobre el area de infarto de miocardio en ratas
- Grupo
- Dosis (mg/kg) Numero de animales Peso del ventnculo (g) Peso de la region no infartada (g) Peso de la region infartada (g) Porcentaje (%)
- Operacion simulada
- / 10 0,66±0,03
- Control de modelo
- / 10 0,68±0,05 0,45±0,03 0,23±0,04 33,77±4,31
- Ester salvianato bornilo
- 10 10 0,68±0,09 0,47±0,07 0,20±0,05 30,09±5,69
- Ester salvianato bornilo
- 20 10 0,68±0,08 0,49±0,09 0,18±0,05* 25,73±6,35**
- Ester salvianato bornilo
- 40 10 0,63±0,07 0,45±0,06 0,18±0,04* 28,95±5,57**
- Verapamilo
- 10 10 0,65±0,09 0,46±0,08 0,18±0,04* 27,60±5,03**
En comparacion con el grupo de control de modelo: *P<0,05, **P<0,01
Tabla 12. Efectos sobre las actividades de LDH y CK en suero de ratas como isquemia de miocardio
- Grupo
- Dosis (mg/kg) Numero de animales CK (U/L) CK-MB (U/L LDH (U/L)
- Operacion simulada
- / 10 653,1±164,9** 565,3±122,2** 1091,7±259,7**
- Control de modelo
- / 10 1058,5±150,0 1422,6±182,3 2351,4±220,83
- Ester salvianato bornilo
- 10 10 1214,2±160,2* 1267,0±274,4 1663,7±374,43**
- Ester salvianato bornilo
- 20 10 894,5±176,3* 1074,1±116,8** 2022,7±202,63**
- Ester salvianato bornilo
- 40 10 778,0±177,1** 906,3±99,9** 1712,5±209,1**
- Verapamilo
- 10 10 752,2±102,8** 776,6±127,6** 1160,8±145,0**
En comparacion con el grupo de control de modelo: *P<0,05, **P<0,01
5 Tabla 13. Efectos sobre las actividades de SOD y MDA en suero de ratas con isquemia de miocardio
- Grupo
- Dosis (mg/kg) Numero de animales SOD (U/mL) MDA (nmol/mL)
- Operacion simulada
- / 10 155,08±21,45** 6,86±5,67*
- Control de modelo
- / 10 95,46±26,05 18,20±12,10
- Ester salvianato bornilo
- 10 10 117,66±31,97 21,69±27,94
- Ester salvianato bornilo
- 20 10 111,32±20,36 10,60±11,156
- Ester salvianato bornilo
- 40 10 119,63±23,53* 9,43±6,57
- Verapamilo
- 10 10 126,16±28,10* 11,86±5,93
En comparacion con el grupo de control de modelo: *P<0,05, **P<0,01
Tabla 14. Efectos sobre el segmento ST-T del ECG de ratas con isquemia de miocardio
- Grupo
- Dosis (mg/kg) Numero de animales Elevacion del segmento ST -T (mV)
- Antes del modelaje
- 0 min tras el modelaje 24 h tras el modelaje
- Operacion
- / 10 0,18±0,08 0,15±0,25 0,12±0,06
- simulada
- Tasa de
- variacion (%) 140,08±161,56 22,34±21,51**
- Control de
- / 10 0,20±0,09 0,19±0,41 0,23±0,10
- modelo
- Tasa de
- variacion (%) 155,67±158,10 92,67±91,35
- Ester salvianato
- 10 10 0,21±0,06 0,24±0,24 0,17±0,09
- bornilo
- Tasa de
- variacion (%) 95,00±78,34 49,00±36,27
- Ester salvianato
- 20 10 0,17±0,07 0,13±0,16 0,11±0,10
- bornilo
- Tasa de
- variacion (% 91,61±116,85 60,77±39,69
- Ester salvianato
- 40 10 0,21±0,06 0,36±0,17 0,18±0,07
- bornilo
- Tasa de
- variacion (%) 103,87±148,26 29,01±18,99*
- Verapamilo
- 10 10 0,23±0,04 0,36±0,17 0,18±0,07
- Tasa de
- variacion (%) 34,36±35,86* 19,17±20,94*
En comparacion con el grupo de control de modelo: *P<0,05, **P<0,01
Claims (11)
- REIVINDICACIONES1. Un compuesto de formula (I):
imagen1 en donde R1 y R2 son, por separado, OH, y R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, F, Cl, Br, metoxi y 5 etoxi; o, de manera alternativa, R1 y R2 forman juntos -OCH2O-, y R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OH, metoxi, etoxi y halogenos;R4 es OH, aciloxi, aroiloxi o aciloxi sustituido con un resto heterodclico;R5 se selecciona de cicloalcoxilo,imagen2 y10imagen3 con la condicion de que cuando R1 y R2 son OH, R3 es H y R4 es OH, entonces R5 no esimagen4 - 2. El compuesto segun la reivindicacion 1, en el que R4 es OH.
- 3. El compuesto segun la reivindicacion 1, en el que R4 es o-acetoxi-benzoiloxi, 3-piridin-benzoiloxi o 4-piridin- 15 benzoiloxi.
- 4. El compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que R5 es:
imagen5 510 - 5. El compuesto segun la reivindicacion 1, en el que Ri y R2 forman juntos -OCH2O-.
- 6.El compuesto segun la reivindicacion 5, en el que R3 = H, R4 =
imagen6 oimagen7 imagen8 - 7. El compuesto segun la reivindicacion 5, en el que R3 = H,
imagen9 R5 =imagen10 imagen11 - 9. Un procedimiento para sintetizar un compuesto segun la reivindicacion 1, que comprende hacer reaccionar un compuesto de formula (III) con un compuesto deformula (IV) o un hidrato del mismo, en presencia de un catalizador:
imagen12 en donde Ri, R2, R3, R4y R5tienen los mismos significados que en la formula (I), con la condicion de que cuando Ri y R2 son OH, R3 es H y R4 es OH, entonces R5 no esimagen13 o5 que comprende hacer reaccionar un compuesto de formula (V) con un compuesto de formula (VI) o un hidrato del mismo, en presencia de un catalizador:imagen14 en donde Ri, R2, R3 y R5 tienen los mismos significados que en la formula (I) y R4' es aciloxi;en donde el catalizador es H2SO4 concentrado, acido silicotungstico, acido fosfomolfodico, acido p-toluenosulfonico, 10 S2O82-/ZrO2, tricloruro de aluminio, cloruro de cinc y/o cloruro de magnesio. - 10. El procedimiento segun la reivindicacion 9, en el que la reaccion selleva a cabo en un disolvente.
- 11. El procedimiento segun la reivindicacion 10, en el que el disolvente es acetato etflico, diclorometano, tetrahidrofurano, acetona, tolueno, 1,4-dioxano y N,N-dimetilformamida, solos o en cualquier combinacion.
- 12. Un compuesto segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para usar en la prevencion o el tratamiento de 15 enfermedades cardiovasculares o cerebrovasculares.
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