ES2615238T3 - Derivados de tetrahidroquinolinas como inhibidores de bromodominio - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula (I) o una sal del mismo**Fórmula** en la que X e Y son independientemente CH o N a condición de que al menos uno de X e Y debe ser CH; R1 es un grupo C(O)OR4 en el cual R4 es alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-7; o R1 es un grupo seleccionado entre fenilo, piridilo, pirazinilo y pirimidinilo, estando dichos grupos opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes seleccionados entre halógeno, alquilo C1-4 y CN; R2 es alquilo C1-4; R3 es alquilo C1-4; R5 es hidrógeno y R6 es alquilo C1-4 sustituido con uno o más hidroxi o un grupo -NR7R8 en el que R7 y R8 son independientemente hidrógeno o un grupo alquilo C1-4; y m es 0, 1 o 2.
Description
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DESCRIPCION
Derivados de tetrahidroquinolinas como inhibidores de bromodominio Campo de la invencion
La presente invencion se refiere a derivados de tetrahidroquinolina, a composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos y a su uso en terapeutica.
Antecedentes de la invencion
Los genomas de los organismos eucariotas estan altamente organizados dentro del nucleo de la celula. Las cadenas largas de ADN bicatenario se envuelven alrededor de un octomero de protemas histonas (que mas por lo general comprenden dos copias de las histonas H2A, H2B H3 y H4) para formar un nucleosoma. Esta unidad basica se comprime adicionalmente por la agregacion y el plegamiento de los nucleosomas para formar una estructura de cromatina altamente condensada. Es posible una gama de diferentes estados de condensacion y lo cenido de esta estructura vana durante el ciclo celular, siendo mas compacta durante el proceso de division celular. La estructura de la cromatina desempena un papel cntico en la regulacion de la transcripcion genica, que no puede producirse eficientemente a partir de la cromatina muy condensada. La estructura de la cromatina esta controlada por una serie de modificaciones post traduccionales de las protemas histonas, en particular las histonas H3 y H4 y mas habitualmente dentro de las colas de las histonas que se extienden mas alla de la estructura del nucleosoma nucleo. Estas modificaciones incluyen la acetilacion, la metilacion, la fosforilacion, la ubiquitinacion, la SUMOilacion. Estas marcas epigeneticas se escriben y se borran por enzimas espedficas, que ubican los marcadores en residuos espedficos dentro de la cola de la histona, formando de este modo un codigo epigenetico, que despues es interpretado por la celula para permitir la regulacion espedfica de genes de la estructura de la cromatina y de este modo la transcripcion.
La acetilacion de histonas se asocia mas por lo general a la activacion de la transcripcion genica, ya que la modificacion relaja la interaccion del ADN y el octomero de histona cambiando la electrostatica. Ademas de este cambio ffsico, se unen protemas espedficas a residuos de lisina acetilados dentro de las histonas para leer el codigo epigenetico. Los bromodominios son dominios pequenos bien diferenciados (~110 aminoacidos) dentro de las protemas que se unen a residuos de lisina acetilados habitualmente pero no exclusivamente en el contexto de las histonas. Existe una familia de aproximadamente 50 protemas que se sabe que contienen bromodominios y tienen una gama de funciones dentro de la celula.
La familia BET de protemas que contienen bromodominios comprende 4 protemas (BRD2, BRD3, BRD4 y BRD-t), que contienen bromodominios en tandem capaces de unirse a dos residuos de lisina acetilados en estrecha proximidad, aumentando la especificidad de la interaccion. Se notifica que BRD2 y BRD3 se asocian a las histonas a lo largo de genes transcritos activamente y pueden estar implicadas en la facilitacion de la elongacion transcripcional (Leroy y col., Mol. Cell. 2008 30(1): 51-60), mientras que BRD4 parece estar implicada en el reclutamiento del complejo pTEF-p hacia genes inducibles, dando como resultado la fosforilacion de la ARN polimerasa y el aumento del rendimiento de la transcripcion (Hargreaves y col., Cell, 2009 138(1): 129-145). Tambien se ha notificado que BRD4 o BRD3 pueden fusionarse con NUT (protema nuclear en los testmulos) formando nuevos oncogenes de fusion, BRD4-NUT o BRD3-NUT, en una forma altamente maligna de neoplasia epitelial (French y col. Cancer Research, 2003, 63, 304-307 y French y col. Journal of Clinical Oncology, 2004, 22 (20), 4135-4139). Los datos sugieren que las protemas de fusion BRD-NUT contribuyen a la carcinogenesis (Oncogene, 2008, 27, 2237-2242). BRD-t se expresa unicamente en los testmulos y los ovarios. Se ha notificado que todos los miembros de la familia tienen alguna funcion en el control o la ejecucion de aspectos del ciclo celular y se ha demostrado que permanecen en complejo con los cromosomas durante la division celular - lo que senala un papel en el mantenimiento de la memoria epigenetica. Ademas, algunos virus hacen uso de estas protemas para unir sus genomas a la cromatina de la celula huesped, como parte del proceso de replicacion viral (You y col., Cell, 2004 117(3): 349-60).
La solicitud de patente japonesa JP2008-156311 desvela un derivado de bencimidazol que se dice que es un agente de union al bromodominio BRD2 que tiene utilidad con respecto a la infeccion/proliferacion vmca.
La solicitud de patente WO2009084693 desvela una serie de derivados de tienotriazolodiazepina que se dice que inhiben la union entre una histona acetilada y una protema que contiene un bromodominio que se dice que son utiles como agentes antineoplasicos.
Las solicitudes de patente PCT PCT/EP2010/066693(WO2011/054841) y PCT/EP2010/066701 (WO2011/054848) desvelan ambas una serie de derivados de tetrahidroquinolina que inhiben la union de los bromodominios de la familia BET con residuos de lisina acetilados. La solicitud de patente PCT WO2011/053851 describe un procedimiento para la identificacion de moleculas pequenas que inhiben la union del primer y el segundo bromodominio de las protemas de la familia BET humana a residuos de lisina acetilados. La solicitud de patente PCT WO2011/054843 desvela el uso de inhibidores del bromodominio en el tratamiento de enfermedades o afecciones autoinmunes e inflamatorias.
Se ha descubierto una nueva clase de compuestos que inhiben la union de los bromodominios con sus protemas acetiladas afines, mas particularmente una clase de compuestos que inhiben la union de los bromodominios de la familia BET a residuos de lisina acetilados. Dichos compuestos se denominaran en lo sucesivo en el presente documento "inhibidores de bromodominio".
5 Sumario de la invencion
En un primer aspecto de la presente invencion, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal del mismo, mas en particular una sal farmaceuticamente aceptable del mismo
En un segundo aspecto de la presente invencion, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un 10 compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y uno o mas vehfculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.
En un tercer aspecto de la presente invencion, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia, en particular en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio.
15 En un cuarto aspecto de la presente invencion, se proporciona el uso de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio.
Descripcion detallada de la invencion
La presente invencion se refiere a un compuesto de formula (I) o a una sal del mismo
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en la que
X e Y son independientemente CH o N a condicion de que al menos uno de X e Y debe ser CH;
R1 es un grupo C(O)OR4 en el que R4 es alquilo C1-3 o cicloalquilo C1-7; o
R1 es un grupo seleccionado entre fenilo, piridilo, pirazinilo y pirimidinilo estando dichos grupos opcionalmente 25 sustituidos con uno o dos sustituyentes seleccionados entre halogeno, alquilo C1-4 y CN;
R2 es alquilo C1-4;
R3 es alquilo C1-4;
R5 es hidrogeno y R6 es alquilo C1-4 sustituido con uno o mas grupos hidroxi o un grupo -NR7R8 en el que R7 y R8 son independientemente hidrogeno o un grupo alquilo C1-4; y 30 m es 0, 1 o 2.
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En una realizacion la invencion proporciona compuestos de formula (I) con estereoqmmica relativa cis a traves del anillo de tetrahidroquinolina con respecto a los sustituyentes en las posiciones 2 y 4 en el anillo. En una realizacion, el compuesto de formula (I) o una sal del mismo es el enantiomero (2s, 4R).
En una realizacion X e Y son los dos CH. En una realizacion adicional X es CH e Y es N. En una realizacion adicional X es N e Y es CH.
En una realizacion R1 es un grupo C(O)OR4 en el que R4 es isopropilo.
En una realizacion R1 se selecciona entre
En una realizacion R2 es metilo.
En una realizacion R3 es metilo.
En una realizacion m es 0. En una realizacion adicional m es 1. En una realizacion adicional m es 2. En una realizacion R5 es hidrogeno y R6 se selecciona entre
Aunque las realizaciones para cada variable se han enumerado en general anteriormente por separado para cada variable, la presente invencion pretende incluir todas las combinaciones de las realizaciones descritas anteriormente en el presente documento incluyendo las sales de los mismos.
Los compuestos de acuerdo con la invencion incluyen los Ejemplos 1-68 como se describen en el presente documento. Los compuestos particulares de la invencion incluyen:
2-(4-((2S,4R)-1-Acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)-W-(2-
(dimetilamino)etil)acetamida;
6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2- (dimetilamino)etil)nicotinamida; y
6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2-
hidroxietil)nicotinamida
o una sal de los mismos.
En toda la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario:
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• el termino "halogeno" se utiliza para describir un grupo seleccionado entre fluor, cloro o bromo;
• las expresiones "alquilo C1.3", "alquilo C1.4" y "alquilo C1.6" se utilizan para describir un grupo o una parte del grupo que comprende un grupo alquilo lineal o ramificado que contiene de 1 a 3, de 1 a 4 o de 1 a 6 atomos de carbono respectivamente. Los ejemplos adecuados de dichos grupos incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n- butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo y hexilo;
• la expresion "cicloalquilo C3-7" se utiliza para describir un anillo carbodclico no aromatico que contiene al menos tres y como maximo siete atomos de carbono. Los ejemplos de cicloalquilo C3-7 incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.
Se apreciara que la presente invencion incluye compuestos de formula (I) en forma de la base libre y en forma de sales de los mismos, por ejemplo en forma de una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos. En una realizacion la invencion se refiere a compuestos de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
Debido a su uso potencial en medicina, las sales de los compuestos de formula (I) son, deseablemente, farmaceuticamente aceptables. Las sales farmaceuticamente aceptables adecuadas pueden incluir sales de adicion de acido o base. Como se utiliza en el presente documento, la expresion 'sal farmaceuticamente aceptable' significa cualquier sal o solvato farmaceuticamente aceptable de un compuesto de la invencion, que tras la administracion al receptor es capaz de proporcionar (directa o indirectamente). Para una revision de las sales adecuadas vease Berge y col., J. Pharm. Sci., 66: 1-19, (1977). Normalmente, una sal farmaceuticamente aceptable puede prepararse facilmente utilizando un acido o base deseado segun sea apropiado. La sal resultante puede precipitar en la solucion y recogerse por filtracion o puede recuperarse por evaporacion del disolvente.
Una sal de adicion de acido farmaceuticamente aceptable puede formarse haciendo reaccionar un compuesto de formula (I) con un acido inorganico u organico adecuado (tal como acido bromlddrico, clortndrico, sulfurico, mtrico, fosforico, sucdnico, maleico, acetico, propionico, fumarico, dtrico, tartarico, lactico, benzoico, salidlico, glutamico, aspartico, p-toluenosulfonico, bencenosulfonico, metanosulfonico, etanosulfonico, naftalenosulfonico tal como acido 2-naftalenosulfonico o hexanoico), opcionalmente en un disolvente adecuado tal como un disolvente organico, para proporcionar la sal que por lo general se afsla por ejemplo por cristalizacion y filtracion. Una sal de adicion de acido farmaceuticamente aceptable de un compuesto de formula (I) puede comprender o ser, por ejemplo, una sal de bromhidrato, clorhidrato, sulfato, nitrato, fosfato, succinato, maleato, acetato, propionato, fumarato, citrato, tartrato, lactato, benzoato, salicilato, glutamato, aspartato, p-toluenosulfonato, bencenosulfonato, metanosulfonato, etanosulfonato, naftalenosulfonato (por ejemplo, 2-naftalenosulfonato) o hexanoato.
Otras sales no farmaceuticamente aceptables, por ejemplo, formiatos, oxalatos o trifluoroacetatos, pueden utilizarse, por ejemplo en el aislamiento de los compuestos de formula (I) y se incluyen dentro del ambito de la presente invencion.
La invencion incluye dentro de su ambito todas las formas estequiometricas y no estequiometricas de las sales de los compuestos de formula (I).
Se apreciara que muchos compuestos organicos pueden formar complejos con disolventes en los que se hacen reaccionar o en los que precipitan o cristalizan. Estos complejos se conocen como "solvatos". Por ejemplo, un complejo con agua se conoce como un "hidrato". Pueden utilizarse disolventes con altos puntos de ebullicion y/o capaces de formar enlaces de hidrogeno tales como agua, xileno, W-metil pirrolidinona, metanol y etanol para formar solvatos. Los procedimientos para la identificacion de solvatos incluyen, pero no se limitan a, RMN y microanalisis. Los solvatos de los compuestos de formula (I) estan dentro del ambito de la invencion.
La invencion incluye dentro de su ambito todas las formas estequiometricas y no estequiometricas posibles de los solvatos de los compuestos de formula (I).
La invencion abarca todos los profarmacos del compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, que tras la administracion al receptor son capaces de proporcionar (directa o indirectamente) el compuesto de la invencion o un metabolito activo o resto del mismo. Dichos derivados son reconocibles por los expertos en la materia, sin experimentacion excesiva. Sin embargo, se hace referencia a los contenidos de Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery, 5a Edicion, Vol. 1: Principles and Practice, que se incorpora en el presente documento por referencia en la medida de ensenar dichos derivados.
Los compuestos de formula (I) pueden estar en forma cristalina o amorfa. Ademas, algunas de las formas cristalinas de los compuestos de formula (I) pueden existir como polimorfos, que se incluyen dentro del ambito de la presente invencion. Las formas polimorficas de los compuestos de formula (I) pueden caracterizarse y diferenciarse utilizando un numero de tecnicas analtticas convencionales, incluyendo, pero no limitadas a, patrones de difraccion de rayos X de polvo (DRXP), espectros de infrarrojo (IR), espectros Raman, calorimetna diferencial de barrido (CDB), analisis termogravimetrico (ATG) y resonancia magnetica nuclear de estado solido (RMNES).
Los compuestos descritos en el presente documento contienen atomos quirales de manera que pueden formarse isomeros opticos, por ejemplo, enantiomeros o diastereoisomeros. En consecuencia, la presente invencion abarca
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todos los isomeros de los compuestos de formula (I) ya sea como isomeros individuals aislados tal como para estar sustancialmente libres del otro isomero (es decir, puros) o como mezclas (es decir, racematos y mezclas racemicas). Un isomero individual aislado tal como para estar sustancialmente libre del otro isomero (es decir, puro) puede aislarse de manera que este presente menos del 10%, en particular menos de aproximadamente el 1 %, por ejemplo menos de aproximadamente el 0,1 % del otro isomero.
La separacion de los isomeros puede conseguirse mediante tecnicas convencionales conocidas por los expertos en la materia, por ejemplo mediante cristalizacion fraccionada, cromatograffa o HPLC.
Ciertos compuestos de formula (I) pueden existir en una sola de varias formas tautomericas. Se entendera que la presente invencion abarca todos los tautomeros de los compuestos de formula (I) ya sea como tautomeros individuales o como mezclas de los mismos.
Se apreciara de lo anterior que dentro del ambito de la invencion se incluyen los solvatos, los isomeros y las formas polimorficas de los compuestos de formula (I) y las sales de los mismos.
Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos pueden fabricarse mediante una diversidad de procedimientos, incluyendo la qrnmica convencional. Cualquier variable previamente definida continuara teniendo el significado previamente definido a menos que se indique lo contrario. A continuacion se exponen procedimientos de smtesis generales ilustrativos y despues se preparan compuestos espedficos de formula (I) o sales de los mismos en los Ejemplos de trabajo.
La presente invencion proporciona adicionalmente un procedimiento para la preparacion de un compuesto de formula (I) o una sal del mismo que comprende hacer reaccionar un compuesto de formula (II)
en la que R1, R2, R3, X, Y y m son como se ha definido en la formula (I) con un compuesto de formula (III) o un derivado protegido del mismo
NR5R6 (III)
en la que R5 y R6 son como se ha definido en la formula (I).
La reaccion de los compuestos de formula (I) y formula (II) puede realizarse en un disolvente organico adecuado (por ejemplo DMF o acetonitrilo) con una amina (por ejemplo, DIPEA o trietilamina) en presencia de un agente activador adecuado (por ejemplo HATU o TBTU).
Los compuestos de formula (II) pueden prepararse mediante procedimientos descritos en el presente documento o mediante procedimientos analogos. Los compuestos de formula (III) estan disponibles en el mercado o pueden prepararse mediante procedimientos descritos en el presente documento o mediante procedimientos analogos a ellos.
Se apreciara por los expertos en la materia que puede ser ventajoso proteger uno o mas grupos funcionales de los compuestos descritos. Los ejemplos de grupos protectores y los medios para su retirada pueden encontrarse en "Protective Groups in Organic Synthesis" de T. W. Greene (4a edicion, J. Wiley and Sons, 2006). Los grupos protectores de aminas adecuados incluyen acilo (por ejemplo, acetilo, carbamato (por ejemplo, 2',2',2'- tricloroetoxicarbonilo, benciloxicarbonilo o t-butoxicarbonilo) y arilalquilo (por ejemplo, bencilo), que pueden retirarse mediante hidrolisis (por ejemplo, utilizando un acido tal como acido clorhndrico en dioxano o acido trifluoroacetico en diclorometano) o de forma reductora (por ejemplo, la hidrogenolisis de un grupo bencilo o benciloxicarbonilo o la eliminacion reductora de un 2',2',2'-tricloroetoxicarbonilo utilizando cinc en acido acetico) segun sea apropiado. Otros grupos protectores de aminas adecuados incluyen trifluoroacetilo (-COCF3) que puede retirarse mediante hidrolisis catalizada por bases.
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Se apreciara que en cualquiera de las v^as descritas anteriormente, el orden preciso de las etapas de smtesis mediante las que los diversos grupos y restos se introducen en la molecula puede variarse. Estara dentro de la experiencia del experto en la materia garantizar que los grupos o restos introducidos en una etapa del procedimiento no se vean afectados por transformaciones y reacciones posteriores, y seleccionar el orden de las etapas de smtesis en consecuencia.
Se cree que ciertos compuestos intermedios de formula (II) son nuevos y por tanto forman un aspecto adicional mas de la invencion.
Los compuestos de formula (I) y las sales de los mismos son inhibidores de bromodominio y por tanto se cree que tienen una utilidad potencial en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio.
Por tanto, la presente invencion proporciona un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia. El compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo puede utilizarse en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio.
Por tanto, la presente invencion proporciona un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de cualesquiera enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio.
Tambien se proporciona el uso de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio.
Tambien se desvela un procedimiento de tratamiento de enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
Convenientemente, el sujeto que lo necesita es un mairnfero, en particular un ser humano.
Como se utiliza en el presente documento, la expresion "cantidad eficaz" significa la cantidad de un farmaco o agente farmaceutico que desencadenara la respuesta biologica o medica de un tejido, sistema, animal o ser humano que esta siendo buscada, por ejemplo, por un investigador o medico. Ademas, la expresion "cantidad terapeuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, en comparacion con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha cantidad, da como resultado el tratamiento mejorado, la curacion, la prevencion o la mejora de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminucion de la velocidad de avance de una enfermedad o trastorno. La expresion tambien incluye dentro de su ambito cantidades eficaces para potenciar la funcion fisiologica normal.
Se cree que los inhibidores de bromodominio son utiles en el tratamiento de una diversidad de enfermedades o afecciones relacionadas con la inflamacion sistemica o tisular, las respuestas inflamatorias a la infeccion o a la hipoxia, la activacion y proliferacion celulares, el metabolismo lipfdico, la fibrosis y en la prevencion y el tratamiento de infecciones virales.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de una amplia diversidad de afecciones cronicas autoinmunes e inflamatorias tales como la artritis reumatoide, la osteoartritis, la gota aguda, la psoriasis, el lupus eritematoso sistemico, la esclerosis multiple, la enfermedad inflamatoria intestinal (enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), el asma, la enfermedad pulmonar obstructiva cronica, la neumonitis, la miocarditis, la pericarditis, la miositis, el eccema, la dermatitis (incluyendo la dermatitis atopica), la alopecia, el vitiligo, las enfermedades cutaneas ampollares, la nefritis, la vasculitis, la aterosclerosis, la enfermedad de Alzheimer, la depresion, el smdrome de Sjogren, la sialoadenitis, la oclusion venosa retiniana central, la oclusion venosa retiniana ramificada, el smdrome de Irvine-Gass (postcataratas y postquirurgico), la retinitis pigmentosa, la pars planitis, la retinocoroidopatfa en perdigonada, la membrana epirretiniana, el edema macular qrnstico, las telangiectasias parafoveales, las maculopatfas por traccion, los smdromes de traccion vitromacular, el desprendimiento de retina, la neurorretinitis, el edema macular idiopatico, la retinitis, el ojo seco (queratoconjuntivitis seca), la queratoconjuntivitis primaveral, la queratoconjuntivitis atopica, la uveftis anterior, la panuveftis, la uveitis posterior, el edema macular asociado a la uveftis, la escleritis, la retinopatfa diabetica, el edema macular diabetico, la distrofia macular relacionada con la edad, la hepatitis, la pancreatitis, la cirrosis biliar primaria, la colangitis esclerosante, la enfermedad de Addison, la hipofisitis, la tiroiditis, la diabetes de tipo I y el rechazo agudo de organos trasplantados.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de una amplia diversidad de afecciones inflamatorias agudas tales como la gota aguda, la arteritis de celulas gigantes, la nefritis incluyendo la nefritis por lupus, la vasculitis con afectacion de organos tal como la glomerulonefritis, la vasculitis incluyendo la arteritis de celulas gigantes, la granulomatosis de Wegener, la poliarteritis nodosa, la enfermedad de Behcet, la enfermedad de Kawasaki, la Arteritis de Takayasu, la piodermia gangrenosa, la vasculitis con afectacion de organos y el rechazo agudo de organos trasplantados.
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Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en la prevencion o el tratamiento de enfermedades o afecciones que involucran respuestas inflamatorias a infecciones por bacterias, virus, hongos, parasitos o sus toxinas, tales como la sepsis, el smdrome septico, el choque septico, la endotoxemia, el smdrome de respuesta inflamatoria sistemica (SRIS), el smdrome de disfuncion multiorganica, el smdrome de choque toxico, la lesion pulmonar aguda, el SDA (smdrome disneico del adulto), la insuficiencia renal aguda, la hepatitis fulminante, las quemaduras, la pancreatitis aguda, los smdromes post-quirurgicos, la sarcoidosis, las reacciones de Herxheimer, la encefalitis, la mielitis, la meningitis, la malaria y el SRIS asociado a infecciones virales tales como la gripe, el herpes zoster, el herpes simple y el coronavirus.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en la prevencion o el tratamiento de afecciones asociadas a la lesion por isquemia-reperfusion tales como el infarto de miocardio, la isquemia cerebrovascular (ictus), el smdrome coronario agudo, la lesion por reperfusion renal, el trasplante de organos, el injerto de derivacion de la arteria coronaria, los procedimientos de derivacion cardiopulmonar, la embolia pulmonar, renal, hepatica, gastrointestinal o de extremidades perifericas.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de trastornos del metabolismo lipfdico a traves de la regulacion de la APO-A1, tales como la hipercolesterolemia, la aterosclerosis y la enfermedad de Alzheimer.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de afecciones fibroticas tales como la fibrosis pulmonar idiopatica, la fibrosis renal, la estenosis post-operatoria, la formacion de queloides, la esclerodermia (incluyendo la morfea) y la fibrosis cardfaca.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en la prevencion y el tratamiento de infecciones virales tales como el virus del herpes, el virus del papiloma humano, el adenovirus y el poxvirus y otros virus de ADN.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento del cancer, incluyendo el hematico (tal como la leucemia, el linfoma y el mieloma multiple), el epitelial (incluyendo los carcinomas de pulmon, de mama y de colon), los carcinomas de la lmea media, los tumores mesenquimales, hepaticos, renales y neurologicos.
Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de patologfas cutaneas tales como el melanoma no maligno (la queratosis actmica y de celulas basales), el melanoma in situ, el carcinoma de celulas escamosas y el linfoma cutaneo de linfocitos T.
En una realizacion la enfermedad o afeccion para la que esta indicado un inhibidor de bromodominio se selecciona entre enfermedades asociadas al smdrome de respuesta inflamatoria sistemica, tales como la sepsis, las quemaduras, la pancreatitis, el traumatismo mayor, la hemorragia y la isquemia. En esta realizacion, el inhibidor de bromodominio se administrana en el punto de diagnostico para reducir la incidencia de: SRIS, la aparicion del choque, el smdrome de disfuncion multiorganica, que incluye la aparicion de la lesion pulmonar aguda, el SDA, la lesion renal aguda, hepatica, cardfaca y gastrointestinal y la mortalidad. En otra realizacion, el inhibidor de bromodominio se administrana antes de procedimientos quirurgicos u otros asociados a un alto riesgo de sepsis, hemorragia, dano tisular extenso, SRIS o SDMO (smdrome de disfuncion de multiples organos). En una realizacion particular la enfermedad o afeccion para la que esta indicado un inhibidor de bromodominio es la sepsis, el smdrome de sepsis, el choque septico o la endotoxemia. En otra realizacion, el inhibidor de bromodominio esta indicado para el tratamiento de la pancreatitis aguda o cronica. En otra realizacion el inhibidor de bromodominio esta indicado para el tratamiento de quemaduras.
En una realizacion la enfermedad o afeccion para la que esta indicado un inhibidor de bromodominio se selecciona entre las infecciones por herpes simple y sus reactivaciones, el herpes labial, las infecciones por herpes zoster y sus reactivaciones, la varicela, las culebrillas, el virus del papiloma humano, el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), la neoplasia del cuello uterino, las infecciones por adenovirus, incluyendo las enfermedades respiratorias agudas, las infecciones por poxvirus tales como la viruela vacuna y la viruela y el virus de la peste porcina africana. En una realizacion particular un inhibidor de bromodominio esta indicado para el tratamiento de infecciones cutaneas o del epitelio del cuello uterino por virus del papiloma humano.
La expresion "enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio", pretende incluir cualquiera o todas las patologfas anteriores.
En una realizacion, se proporciona un procedimiento para inhibir un bromodominio que comprende poner en contacto el bromodominio con un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
Aunque es posible que para su uso en terapia, un compuesto de formula (I) asf como las sales farmaceuticamente aceptables del mismo puedan administrarse como el producto qmmico en bruto, es habitual presentar el ingrediente activo como una composicion farmaceutica.
La presente invencion proporciona por tanto en un aspecto adicional, una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable y uno o mas vehmulos, diluyentes y/o excipientes farmaceuticamente aceptables. Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos, son como se han descrito anteriormente. El vehmulo o vehmulos, diluyente o diluyentes, o excipiente
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o excipientes deben ser aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la composicion y no perjudiciales para el receptor de la misma. De acuerdo con otro aspecto de la invencion, tambien se proporciona un procedimiento para la preparacion de una composicion farmaceutica que incluye mezclar un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, con uno o mas vehnculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables. La composicion farmaceutica puede ser para su uso en el tratamiento de cualquiera de las afecciones descritas en el presente documento.
Dado que los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos estan destinados para su uso en composiciones farmaceuticas, se entendera facilmente que se proporciona cada uno preferentemente en forma sustancialmente pura, por ejemplo, con una pureza de al menos el 60 %, mas convenientemente con una pureza de al menos el 75 % y preferentemente con una pureza de al menos el 85 %, especialmente con una pureza de al menos el 98 % (% en peso por peso).
Las composiciones farmaceuticas pueden presentarse en formas de dosificacion unitarias que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por dosis unitaria. Las composiciones de dosificacion unitaria preferidas son las que contienen una dosis o subdosis diaria o una fraccion apropiada de la misma, de un ingrediente activo. Por tanto, dichas dosis unitarias pueden administrarse mas de una vez al dfa. Las composiciones de dosificacion unitaria preferidas son las que contienen una dosis o subdosis diaria (para la administracion mas de una vez al dfa), como se ha indicado anteriormente, o una fraccion apropiada de la misma, de un ingrediente activo.
Las composiciones farmaceuticas pueden adaptarse para la administracion por cualquier via apropiada, por ejemplo por la via oral (incluyendo la bucal o la sublingual), rectal, por inhalacion, intranasal, topica (incluyendo la bucal, la sublingual o la transdermica), ocular (incluyendo la topica, la intraocular, la subconjuntival, la epiesclerotica o la subtenoniana), vaginal o parenteral (incluyendo la subcutanea, intramuscular, intravenosa o intradermica). Dichas composiciones pueden prepararse mediante cualquier procedimiento conocido en la tecnica de la farmacia, por ejemplo, poniendo en asociacion el ingrediente activo con el vehnculo o los vehnculos o el excipiente o los excipientes.
En una realizacion la composicion farmaceutica esta adaptada para la administracion parenteral, en particular para la administracion intravenosa.
En una realizacion la composicion farmaceutica esta adaptada para la administracion oral.
En una realizacion, la composicion farmaceutica esta adaptada para la administracion topica.
Una forma de dosificacion preferida que da como resultado la oclusion y la modificacion de la penetracion de la piel, ya sea para aumentar o para disminuir la exposicion sistemica de los compuestos de bromodominio, incluyendo pero no limitada a las formas farmaceuticamente aceptables de carboximetilcelulosa, un alginato, gelatina o polivinilpirrolidona.
Las composiciones farmaceuticas adaptadas para la administracion parenteral incluyen las soluciones de inyeccion esteriles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos y solutos que convierten la composicion en isotonica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes suspensores y agentes espesantes. Las composiciones pueden presentarse en recipientes de dosis unitarias o de multiples dosis, por ejemplo ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en un estado de secado por congelacion (liofilizado) que requiere solamente la adicion del vehnculo lfquido esteril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyeccion extemporanea pueden prepararse a partir de polvos esteriles, granulos y comprimidos.
Las composiciones farmaceuticas adaptadas para la administracion oral pueden presentarse como unidades individuales tales como capsulas o comprimidos; polvos o granulos; soluciones o suspensiones en lfquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; o emulsiones lfquidas de aceite-en-agua o emulsiones lfquidas de agua-en-aceite.
Por ejemplo, para la administracion oral en forma de un comprimido o capsula, el componente farmacologico activo puede combinarse con un vetnculo inerte, oral, atoxico, farmaceuticamente aceptable tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos adecuados para su incorporacion en comprimidos o capsulas pueden prepararse reduciendo el compuesto a un tamano fino adecuado (por ejemplo, mediante micronizacion) y mezclandolo con un vehnculo farmaceutico preparado de forma similar tal como un hidrato de carbono comestible, por ejemplo, almidon o manitol. Tambien pueden estar presentes agentes aromatizantes, conservantes, dispersantes y colorantes.
Las capsulas pueden fabricarse preparando una mezcla en polvo, como se ha descrito anteriormente, y llenando vainas de gelatina formadas. Pueden anadirse deslizantes y lubricantes tales como sflice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol solido a la mezcla de polvo antes de la operacion de llenado. Tambien puede anadirse un agente disgregante o solubilizante tal como agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiere la capsula.
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Ademas, cuando se desee o sea necesario, tambien pueden incorporarse aglutinantes, deslizantes, lubricantes, agentes edulcorantes, aromatizantes, agentes disgregantes y agentes colorantes adecuados en la mezcla. Los aglutinantes adecuados incluyen almidon, gelatina, azucares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de mafz, gomas naturales y sinteticas tales como goma arabiga, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes utilizados en estas formas de dosificacion incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitacion, almidon, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de xantano y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, preparando una mezcla en polvo, granulando o precomprimiendo, anadiendo un lubricante y disgregante y comprimiendo en comprimidos. Una mezcla en polvo se prepara mezclando el compuesto, adecuadamente triturado, con un diluyente o base como se ha descrito anteriormente y, opcionalmente, con un aglutinante tal como carboximetilcelulosa, un alginato, gelatina o polivinilpirrolidona, un retardante de la disolucion tal como parafina, un acelerador de la resorcion tal como una sal cuaternaria y/o un agente de absorcion tal como bentonita, caolm o fosfato dicalcico. La mezcla en polvo puede granularse humectandola con un aglutinante tal como jarabe, pasta de almidon, mudlago de goma arabiga o soluciones de materiales celulosicos o polimericos y forzandola a traves de una malla. Como alternativa a la granulacion, la mezcla en polvo puede hacerse pasar por la maquina de comprimir y el resultado son lingotes formados imperfectamente, rotos en granulos. Los granulos pueden lubricarse para evitar que se peguen a los troqueles formadores de comprimidos por medio de la adicion de acido estearico, una sal de estearato, talco o aceite de vaselina. Despues, la mezcla lubricada se comprime en comprimidos. Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos tambien pueden combinarse con un vedculo inerte lfquido y comprimirse en comprimidos directamente sin pasar por las etapas de granulacion o precompresion. Puede proporcionarse un recubrimiento protector transparente u opaco que consiste en un recubrimiento de sellado de goma laca, un recubrimiento de azucar o material polimerico y un recubrimiento de pulido de cera. Pueden anadirse colorantes a estos recubrimientos para distinguir diferentes dosificaciones unitarias.
Pueden prepararse fluidos orales tales como soluciones, jarabes y elixires en una forma de dosificacion unitaria de manera que una cantidad dada contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes pueden prepararse disolviendo el compuesto en una solucion acuosa adecuadamente aromatizada, mientras que los elixires se preparan mediante el uso de un vedculo alcoholico atoxico. Las suspensiones pueden formularse dispersando el compuesto en un vedculo atoxico. Tambien pueden anadirse solubilizantes y emulsionantes tales como alcoholes isoesteanlicos etoxilados y eteres de polioxietilensorbitol, conservantes, aditivos aromatizantes tales como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.
Cuando sea apropiado, las composiciones de dosificacion unitarias para la administracion oral pueden microencapsularse. La formulacion tambien puede prepararse para prolongar o mantener la liberacion por ejemplo recubriendo o embebiendo material particulado en polfmeros, cera o similares.
Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos tambien pueden administrarse en forma de sistemas de entrega liposomales, tales como vesfculas unilamelares pequenas, vesfculas unilamelares grandes y vesfculas multilamelares. Los liposomas pueden formarse a partir de una diversidad de fosfolfpidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.
Las composiciones farmaceuticas adaptadas para la administracion topica pueden formularse como pomadas, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, pulverizaciones, aerosoles o aceites. Dichas composiciones farmaceuticas pueden incluir aditivos convencionales incluyendo, pero no limitados a, conservantes, disolventes para ayudar a la penetracion del farmaco, cosolventes, emolientes, propulsores, agentes modificadores de la viscosidad (agentes gelificantes), tensioactivos y vedculos. En una realizacion, se proporciona una composicion farmaceutica adaptada para administracion topica que comprende entre el 0,01-10% o entre el 0,011 % del compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en peso de la composicion.
Para los tratamientos del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo la boca y la piel, las composiciones se aplican preferentemente en forma de una solucion, suspension, emulsion, pomada, crema, gel, pulverizacion o espuma topicos. Cuando se formula en una pomada, el ingrediente activo puede emplearse con una base de pomada ya sea parafrnica o miscible en agua. Como alternativa, el ingrediente activo puede formularse en una crema con una base de crema aceite-en-agua o una base agua-en-aceite. Cuando se formula en una pomada, el agente activo puede formularse con propulsores, tensioactivos, disolventes, cosolventes y agentes modificadores de la viscosidad.
Las composiciones farmaceuticas adaptadas para administraciones topicas al ojo incluyen colirios en los que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un vedculo adecuado, especialmente un disolvente acuoso. Las composiciones que se administran al ojo tendran un pH y una osmolalidad oftalmicamente compatibles. Pueden incluirse uno o mas agentes de ajuste y/o agentes tamponantes del pH oftalmicamente aceptables en una composicion de la invencion, incluyendo acidos tales como acido acetico, borico, dtrico, lactico, fosforico y clorddrico; bases tales como hidroxido de sodio, fosfato de sodio, borato de sodio, citrato de sodio, acetato de sodio y lactato de sodio; y tampones tales como citrato/dextrosa, bicarbonato sodio y cloruro de amonio. Dichos acidos, bases y tampones pueden incluirse en una cantidad necesaria para mantener el pH de la composicion en un intervalo oftalmicamente aceptable. Pueden incluirse una o mas sales oftalmicamente aceptables en la composicion en una cantidad suficiente para llevar la osmolalidad de la composicion a un intervalo oftalmicamente aceptable.
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Dichas sales incluyen las que tienen sodio, potasio o cationes de amonio y cloruro, citrato, ascorbato, borato, fosfato, bicarbonato, sulfato, tiosulfato o aniones bisulfito.
Un dispositivo de entrega ocular puede disenarse para la liberacion controlada de uno o mas agentes terapeuticos con velocidades de liberacion y cinetica de dosis sostenida y permeabilidad multiples definidas. La liberacion controlada puede obtenerse mediante el diseno de matrices polimericas que incorporan diferentes opciones y propiedades de polfmeros biodegradables/bioerosionables (por ejemplo, acetato de poli(etilen vinilo) (EVA), PVA superhidrolizado), hidroxialquilcelulosa (HPC), metilcelulosa (MC), hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), policaprolactona, acido poli(glicolico), acido poli(lactico), polianhudrido, de pesos moleculares de los polfmeros, cristalinidad de los polfmeros, relaciones de los copolfmeros, condiciones de procesamiento, acabado de superficie, geometna, adicion de excipientes y recubrimientos polimericos que potenciaran la difusion, erosion, disolucion y osmosis del farmaco.
Las composiciones farmaceuticas para la entrega ocular incluyen tambien una composicion acuosa gelificable in situ. Una composicion de este tipo comprende un agente gelificante en una concentracion eficaz para promover la gelificacion tras el contacto con el ojo o con el fluido lacrimal. Los agentes gelificantes adecuados incluyen, pero no se limitan a los polfmeros termoestables. La expresion "gelificable in situ" como se utiliza en el presente documento incluye no solamente lfquidos de baja viscosidad que forman geles tras el contacto con el ojo o con el fluido lacrimal, sino que tambien incluye lfquidos mas viscosos tales como semifluidos y geles tixotropicos que presentan un aumento sustancial de la viscosidad o la rigidez del gel tras la administracion al ojo. Vease, por ejemplo, Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57:1595-639, incorporado en el presente documento por referencia para los fines de sus contenidos de ejemplos de polfmeros para su uso en la entrega de farmacos oculares.
Las formas de dosificacion para la administracion nasal o por inhalacion pueden formularse convenientemente en forma de aerosoles, soluciones, suspensiones, geles o polvos secos.
Para composiciones adecuadas y/o adaptadas para la administracion por inhalacion, se prefiere que el compuesto de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables del mismo esten en una forma de tamano de partfcula reducido por ejemplo, obtenida mediante micronizacion. El tamano de partfcula de preferencia del compuesto o la sal de tamano reducido (por ejemplo, micronizado) se define por un valor de D50 de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 10 micrometres (que por ejemplo se mide utilizando difraccion de laser).
Las formulaciones de aerosol, por ejemplo para la administracion por inhalacion, pueden comprender una solucion o suspension fina de la sustancia activa en un disolvente acuoso o no acuoso farmaceuticamente aceptable. Las formulaciones en aerosol pueden presentarse en cantidades individuales o de multiples dosis en forma esteril en un recipiente sellado, que puede tomar la forma de un cartucho o recambio para su uso con un dispositivo o inhalador atomizador. Como alternativa, el recipiente sellado puede ser un dispositivo de dosificacion unitaria tal como un inhalador nasal de una sola dosis o un dosificador de aerosol equipado con una valvula dosificadora (inhalador de dosis dosificada) que esta destinado a desecharse una vez que los contenidos del recipiente se hayan agotado.
Cuando la forma de dosificacion comprende un dosificador de aerosol, este contiene preferentemente un propulsor adecuado a presion tal como aire comprimido, dioxido de carbono o un propulsor organico tal como un hidrofluorocarbono (HFC). Los propulsores de HFC adecuados incluyen 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano y 1,1,1,2- tetrafluoroetano. Las formas de dosificacion en aerosol tambien pueden tomar la forma de un atomizador de bomba. El aerosol presurizado puede contener una solucion o una suspension del compuesto activo. Esto puede requerir la incorporacion de excipientes adicionales, por ejemplo, cosolventes y/o tensioactivos para mejorar las caractensticas de dispersion y la homogeneidad de las formulaciones en suspension. Las formulaciones en solucion tambien pueden requerir la adicion de cosolventes tales como etanol.
Para composiciones farmaceuticas adecuadas y/o adaptadas para la administracion por inhalacion, la composicion farmaceutica puede ser una composicion inhalable de polvo seco. Una composicion de este tipo puede comprender una base de polvo tal como lactosa, glucosa, trehalosa, manitol o almidon, el compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo (preferentemente en una forma de tamano de partfcula reducido, por ejemplo, en forma micronizada), y opcionalmente un modificador del rendimiento tal como L-leucina u otro aminoacido y/o sales de metales de acido estearico tales como estearato de magnesio o calcio. Preferentemente, la composicion inhalable de polvo seco comprende una mezcla de polvo seco de lactosa, por ejemplo, monohidrato de lactosa, y el compuesto de formula (I) o la sal del mismo. Dichas composiciones pueden administrarse al paciente utilizando un dispositivo adecuado, tal como el dispositivo DISKUS®, comercializado por GlaxoSmithKline, que se describe por ejemplo en el documento GB 2242134 A.
Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos pueden formularse como una formulacion fluida para la entrega desde un dosificador de fluido, por ejemplo un dosificador de fluido que tiene una boquilla dosificadora o un orificio dosificador a traves del cual se dosifica una dosis medida de la formulacion fluida tras la aplicacion de una fuerza aplicada por el usuario a un mecanismo de bomba del dosificador de fluido. Dichos dosificadores de fluido estan generalmente provistos de un deposito de multiples dosis medidas de la formulacion fluida, siendo las dosis dosificables tras accionamientos secuenciales de la bomba. La boquilla u orificio de dosificacion pueden estar configurados para la insercion en los orificios nasales del usuario para la dosificacion
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por pulverizacion de la formulacion fluida en la cavidad nasal. Un dosificador de fluido del tipo mencionado anteriormente se describe e ilustra en el documento WO2005/044354A1.
Una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo dependera de un numero de factores que incluyen, por ejemplo, la edad y el peso del animal, la afeccion precisa que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulacion y la via de administracion, y en ultima instancia quedara a discrecion del medico o veterinario. En la composicion farmaceutica, cada unidad de dosificacion para la administracion oral o parenteral contiene preferentemente de 0,01 a 3000 mg, mas preferentemente de 0,5 a 1000 mg, de un compuesto de la invencion o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, calculados como la base libre. Cada unidad de dosificacion para la administracion nasal o por inhalacion contiene preferentemente de 0,001 a 50 mg, mas preferentemente de 0,01 a 5 mg, de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, calculado como la base libre.
Los compuestos farmaceuticamente aceptables de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos pueden administrarse en una dosis diaria (para un paciente adulto) de, por ejemplo, una dosis oral o parenteral de 0,01 mg a 3000 mg por dfa o de 0,5 a 1000 mg por dfa, o una dosis nasal o inhalada de 0,001 a 50 mg por dfa o de 0,01 a 5 mg por dfa, del compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, calculada como la base libre. Esta cantidad puede administrarse en una sola dosis por dfa o mas, por lo general en un numero (tal como dos, tres, cuatro, cinco o seis) de subdosis por dfa, de manera que la dosis diaria total es la misma. Una cantidad eficaz de una sal del mismo, puede determinarse como una proporcion de la cantidad eficaz del compuesto de formula (I) en su
Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos pueden emplearse solos o en combinacion con otros agentes terapeuticos. Las terapias de combinacion de acuerdo con la presente invencion comprenden por tanto la administracion de al menos un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y el uso de al menos otro agente farmaceuticamente activo. Preferentemente, las terapias de combinacion de acuerdo con la presente invencion comprenden la administracion de al menos un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y al menos otro agente farmaceuticamente activo. El compuesto o compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos y el otro agente o agentes farmaceuticamente activos pueden administrarse juntos en una sola composicion farmaceutica o por separado y, cuando se administran por separado esto puede ocurrir simultaneamente o secuencialmente en cualquier orden. Las cantidades del compuesto o compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos y el otro agente o agentes farmaceuticamente activos y los tiempos relativos de administracion se seleccionaran con el fin de conseguir el efecto terapeutico combinado deseado. Por tanto, en un aspecto adicional, se proporciona una combinacion que comprende un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y al menos otro agente farmaceuticamente activo.
Por tanto, en un aspecto, el compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y las composiciones farmaceuticas que comprenden dichos compuestos de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo pueden utilizarse en combinacion con, o incluir, uno o mas de otros agentes terapeuticos, por ejemplo seleccionados entre antibioticos, antivirales, glucocorticoesteroides, antagonistas muscarmicos, agonistas beta-2 y analogos de la vitamina D3. En un aspecto adicional un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, de acuerdo con la invencion puede utilizarse en combinacion con un agente terapeutico adicional que es adecuado para el tratamiento del cancer.
Se apreciara que cuando el compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo se administra en combinacion con otros agentes terapeuticos normalmente administrados por la via inhalatoria, intravenosa, oral o intranasal, la composicion farmaceutica resultante puede administrarse por las mismas vfas. Como alternativa, los componentes individuales de la composicion pueden administrarse por vfas diferentes.
Una realizacion de la invencion abarca las combinaciones que comprenden uno o dos de otros agentes terapeuticos.
Sera evidente para un experto en la materia que, cuando sea apropiado, el otro ingrediente o ingredientes terapeuticos pueden utilizarse en forma de sales, por ejemplo como sales de metales alcalinos o de aminas o como sales de adicion de acido, o profarmacos, o como esteres, por ejemplo esteres de alquilo inferior, o como solvatos, por ejemplo hidratos, para optimizar la actividad y/o estabilidad y/o caractensticas ffsicas, tales como la solubilidad, del ingrediente terapeutico. Sera evidente tambien que, cuando sea apropiado, los ingredientes terapeuticos pueden utilizarse en forma opticamente pura.
Las combinaciones referidas anteriormente pueden presentarse convenientemente para su uso en forma de una composicion farmaceutica y, por tanto, las composiciones farmaceuticas que comprenden una combinacion como se ha definido anteriormente junto con un diluyente o vehuculo farmaceuticamente aceptable, representan un aspecto adicional de la invencion.
Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos pueden prepararse mediante los procedimientos que se describen a continuacion o mediante procedimientos similares. Por tanto, los siguientes Intermedios y Ejemplos sirven para ilustrar la preparacion de los compuestos de formula (I) y las sales
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40
45
farmaceuticamente aceptables de los mismos.
Detalles experimentales generales
Todas las temperatures mencionadas son en °C.
Los nombres de los siguientes compuestos se han obtenido utilizando el programa de nomenclatura de compuestos "ACD Name Pro 6.02" o Chem Draw Ultra 12.0.
Abreviaturas
AcOH se refiere a acido acetico
BINAP se refiere a 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo
BOC se refiere a terc-butoxicarbonilo
VC se refiere a volumenes de columna
DCM se refiere a diclorometano
1,2-DCE se refiere a1,2-dicloroetano
DIPEA se refiere a diisopropiletilamina
DMSO se refiere a dimetilsulfoxido.
DMF se refiere a W,W-dimetilformamida
Eter se refiere a eter diefflico
Et2O se refiere a eter diefflico
EtOAc se refiere a acetato de etilo
FMOC se refiere a 9-fluorenilmetoxicarbonilo
HATU se refiere a hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HPLC se refiere a cromatograffa ffquida de alto rendimiento
IPA se refiere a propan-2-ol
i-Pr2O se refiere a eter di-isopropflico
LiAlH4 se refiere a hidruro de litio y aluminio
MDAP se refiere a Autopreparativa dirigida a masas que se refiere a HPLC preparativa dirigida a masas
MeCN se refiere a acetonitrilo
MeOH se refiere a metanol
MgSO4 se refiere a sulfato de magnesio
Pf se refiere a punto de fusion
t.a. se refiere a temperatura ambiente
Tr se refiere al tiempo de retencion
Na2SO4 se refiere a sulfato de sodio
TBTU se refiere a tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio
TMEDA se refiere a tetrametiletilendiamina
TFA se refiere a acido trifluoroacetico
THF se refiere a tetrahidrofurano
CCF se refiere a cromatograffa de capa fina
Metodologia de CLEM
Procedimiento de formiato (modificador de acido formico)
Condiciones de CL
El analisis por UPLC se realizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (d.i. de 50 mm * 2,1 mm, diametro de relleno de 1,7 pm) a 40 °C.
Los disolventes empleados fueron:
A = solucion al 0,1 % v/v de acido formico en agua B = solucion al 0,1 % v/v de acido formico en acetonitrilo
El gradiente empleado fue:
- Tiempo (min)
- Caudal (ml/min) % de A % de B
- 0
- 1 99 1
- 1,5
- 1 3 97
- 1,9
- 1 3 97
- 2,0
- 1 0 100
5
10
15
20
25
La deteccion por UV fue una senal sumada de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm. Condiciones de EM
EM
Waters ZQ
Modo de ionizacion Intervalo de exploracion Tiempo de exploracion Retardo entre exploraciones
electronebulizacion positiva y negativa de exploracion alterna 100 a 1000 UMA 0,27 s 0,10 s
Procedimiento de HpH (modificador de bicarbonato de amonio)
Condiciones de CL
El analisis por UPLC se realizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (d.i. de 50 mm * 2,1 mm, diametro de relleno de 1,7 pm) a 40 °C.
Los disolventes empleados fueron:
A = Carbonato acido de amonio 10 mM en agua ajustado a pH 10 con solucion de amomaco B = acetonitrilo
El gradiente empleado fue:
- Tiempo (min)
- Caudal (ml/min) % de A % de B
- 0
- 1 99 1
- 1,5
- 1 3 97
- 1,9
- 1 3 97
- 2,0
- 1 0 100
La deteccion por UV fue una senal sumada de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm. Condiciones de EM
EM
Waters ZQ
Modo de ionizacion Intervalo de exploracion Tiempo de exploracion Retardo entre exploraciones
electronebulizacion positiva y negativa de exploracion alterna 100 a 1000 UMA 0,27 s 0,10 s
Metodologia de MDAP
Procedimiento de formiato (modificador de acido formico)
Condiciones de CL
El analisis por HPLC se realizo ya sea en una columna Sunfire C18 (d.i. de 100 mm * 19 mm, diametro de relleno de 5 pm) o en una columna Sunfire C18 (d.i. de 150 mm * 30 mm, diametro de relleno de 5 pm) a temperatura ambiente.
Los disolventes empleados fueron:
A = solucion al 0,1 % v/v de acido formico en agua B = solucion al 0,1 % v/v de acido formico en acetonitrilo
Se desarrollo como un gradiente a lo largo de 15 o 25 min (desarrollo extendido) con un caudal de 20 ml/min (d.i. de 100 mm * 19 mm, diametro de relleno de 5 pm) o 40 ml/min (d.i. de 150 mm * 30 mm, diametro de relleno de 5 pm).
La deteccion por UV fue una senal sumada de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm.
Condiciones de EM
EM
Waters ZQ
Modo de ionizacion Intervalo de exploracion Tiempo de exploracion Retardo entre exploraciones
electronebulizacion positiva y negativa de exploracion alterna 100 a 1000 UMA 0,50 s 0,20 s
Procedimiento de HpH (modificador de bicarbonato de amonio)
Condiciones de CL
5 El analisis por HPLC se realizo ya sea en una columna Xbridge C18 (d.i. de 100 mm * 19 mm, diametro de relleno de 5 pm) o en una columna Xbridge C18 (d.i. de 150 mm * 30 mm, diametro de relleno de 5 pm) a temperatura ambiente.
Los disolventes empleados fueron:
A = Bicarbonato de amonio 10 mM en agua, ajustado a pH 10 con solucion de amomaco 10 B = acetonitrilo
Se desarrollo como un gradiente a lo largo de 15 o 25 min (desarrollo extendido) con un caudal de 20 ml/min (d.i. de 100 mm * 19 mm, diametro de relleno de 5 pm) o 40 ml/min (d.i. de 100 mm * 30 mm, diametro de relleno de 5 pm).
La deteccion por UV fue una senal sumada de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm.
Condiciones de EM
15
EM
Waters ZQ
Modo de ionizacion Intervalo de exploracion Tiempo de exploracion Retardo entre exploraciones
electronebulizacion positiva y negativa de exploracion alterna 100 a 1000 UMA 0,50 s 0,20 s
Intermedio 1
1-((2S,4R)-4-Ammo-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroqumolm-1(2H)-N)etanona
Una suspension de cloruro de aluminio (41,2 g, 309 mmol) en DCM (480 ml) a 0 °C en atmosfera de nitrogeno se 20 trato con una solucion de ((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de isopropilo (30 g, 81 mmol) en DCM (80 ml) mediante una canula y la mezcla resultante se agito a esta temperatura durante 30 min. La mezcla de reaccion se trato lentamente con una mezcla de trietilamina (136 ml, 975 mmol) y MeOH (48 ml) mediante una canula. La torta resultante formada se agito en EtOAc (800 ml), se aislo por filtracion y posteriormente se repartio entre DCM (800 ml) y solucion acuosa saturada de NaHCO3 (800 ml). Se anadio tartrato 25 de potasio y sodio (300 g) y la mezcla resultante se agito vigorosamente durante 2 h. Las fases se separaron y la fase de DCM se filtro a traves de un embudo sinterizado. El filtrado se seco (MgSO4) y se concentro al vacfo para proporcionar una primera cosecha de 1-((2S,4R)-4-amino-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (19,6 g, 69,2 mmol, rendimiento del 85%) en forma de una espuma de color amarillo. La fase acuosa se trato adicionalmente con DCM (800 ml) y la mezcla bifasica se agito durante la noche. Despues, las fases se separaron y 30 la fase organica se seco sobre (MgSO4) y se concentraron al vacfo para proporcionar una segunda cosecha de 1- ((2S,4R)-4-amino-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (3,4 g, 12,01 mmol, rendimiento del 14,78%). CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,77 min, MH+ = 283 (1 Br).
6-(((2S,4R)-1-Acetil-6-bromo-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-il)ammo)mcotmomtrMo
A una mezcla de 1-((2S,4R)-4-amino-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion 5 vease el Intermedio l) (2,28 g, 8,05 mmol) y 6-cloronicotinonitrilo (2,231 g, l6,l0 mmol) se le anadio NMP (20 ml) y la mezcla se trato con DIPEA (4,22 ml, 24,16 mmol). La mezcla se divide entre 2 matraces y cada matraz se lavo abundantemente con nitrogeno, se sello y se agito con irradiacion de microondas a 200 °C durante 2 h. Las mezclas de reaccion se combinaron y se repartieron entre agua y EtOAc. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (4 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con agua (3 veces), despues con salmuera y se secaron (MgSO4), se 10 filtraron y se concentraron al vacfo. El residuo solido de color marron se purifico mediante cromatograffa (gradiente de EtOAc en hexanos) para proporcionar 6-(((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4- il)amino)nicotinonitrilo (1,940 g, 5,04 mmol, rendimiento del 62,5%) en forma de una espuma de color amarillo palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,02 min, MH+ = 386 (1 Br).
Intermedio 3
15 4-((2S,4R)-1-Acetil-4-((5-cianopmdm-2-N)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-M)benzoato de metilo
A un matraz cargado con 6-(((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo (para una preparacion vease el Intermedio 2) (1,000 mg, 2,60 mmol), acido (4-(metoxicarbonil)fenil)boronico (561 mg, 3,11 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (300 mg, 0,260 mmol) y carbonato de potasio (1,076 mg, 20 7,79 mmol) se le anadieron DME (20 ml) y agua (4,0 ml). La mezcla resultante se agito a 100 °C en atmosfera de
nitrogeno durante 1 h, despues se enfrio a temperatura ambiente y se concentro al vacfo. El residuo se repartio entre EtOAc y agua y se separaron las fases. La fase organica se seco (MgSO4), se concentro al vacfo y el residuo se purifico mediante cromatograffa (columna de 10 g, gradiente de MeOH/DCM) para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil- 4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (1002 mg, 2,275 mmol, 25 rendimiento del 88 %) en forma de una espuma de color naranja. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,09 min, MH+ = 441.
Intermedio 4
Acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopmdm-2-M)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-M)benzoico
Una solucion de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 30 metilo (para una preparacion vease el Intermedio 3) (1,0 g, 2,270 mmol) en MeOH (15 ml) a temperatura ambiente
5
10
15
20
25
30
35
40
se trato con solucion de hidroxido de sodio acuoso (2 N, 2,27 ml, 4,54 mmol) y la mezcla resultante se agito a esta temperature durante 24 h. El volumen de MeOH se evaporo al vado y el residuo acuoso se trato con acido acetico (0,39 ml, 6,81 mmol) proporcionando un precipitado que se aislo por filtracion y se seco al vado a 40 °C para proporcionar acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (820 mg, 1,923 mmol, rendimiento del 85%) en forma de un solido de color amarillo. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,64 min, MH+ = 427.
Intermedio 5
6-(((2S,4R)-1-Acetil-2-metM-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-
il)amino)nicotinonitrilo
A un matraz cargado con 6-(((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo (para una preparacion vease el Intermedio 2) (847 mg, 2,199 mmol), bis(pinacolato)diboro (1228 mg, 4,84 mmol), PdCh(dppf) (161 mg, 0,220 mmol) y acetato de potasio (324 mg, 3,30 mmol) se le anadio DMSO (7 ml), la mezcla se desgasifico en atmosfera de nitrogeno y se agito en atmosfera de nitrogeno durante 1 h a 80 °C. Se anadieron porciones adicionales de bis(pinacolato)diboro (1 g), PdCl2(dppf) (100 mg) y acetato de potasio (150 mg) y la mezcla se agito durante 45 min. Se anadieron porciones adicionales de bis(pinacolato)diboro (1 g), PdCh(dppf) (100 mg) y acetato de potasio (150 mg) y la mezcla se agito durante 45 min la mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se trato con EtoAc y agua. La mezcla bifasica se filtro a traves de un lecho de Celite ™ (10 g) y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con agua (4 veces), despues con salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron al vado. La purificacion del residuo mediante cromatograffa [columna de 50 g, gradiente de EtOAc/hexanos] proporciono 6-(((2S,4R)-1-acetil-2- metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo (800 mg,
1,850 mmol, rendimiento del 84%) en forma de una goma de color rojo. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 1,08 min, MH+ = 433.
Intermedio 6
6-((2S,4R)-1-Acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)mcotmato de metilo
A un matraz cargado con 6-(((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-
tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo (para una preparacion vease el Intermedio 5) (800 mg, 1,850 mmol), 6- bromonicotinato de metilo (440 mg, 2,036 mmol), carbonato de potasio (767 mg, 5,55 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (214 mg, 0,185 mmol) se le anadieron tolueno (8 ml) y etanol (8 ml). La mezcla resultante se agito a 90 °C en atmosfera de nitrogeno durante 3 h momento en que se anadieron porciones de carbonato de potasio (384 mg) tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (107 mg) y 6-bromonicotinato de metilo (220 mg) y la agitacion de la mezcla de reaccion continuo durante 5 h. La mezcla se enfrio despues a la temperatura ambiente y se concentro al vado. El residuo se repartio entre EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4) y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa [columna de 25 g, gradiente de EtOAc/Hexanos] para proporcionar 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de etilo (600 mg, 1,317 mmol, rendimiento del 71,2 %) en forma de una espuma de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,07 min, MH+ = 456.
5
10
15
20
25
30
Acido 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)mcotmico
Una solucion de 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de metilo (para una preparacion vease el Intermedio 6) (580 mg, 1,273 mmol) en etanol (10 ml) se trato con una solucion de hidroxido de litio acuoso (1 N, 2,55 ml, 2,55 mmol) y la mezcla resultante se agito durante 2 h. El volumen de etanol se evaporo al vado y el residuo se diluyo con agua (aprox. 5 ml). La mezcla turbia se trato con acido acetico (0,146 ml, 2,55 mmol) y el precipitado formado se aislo por filtracion, se lavo con Et2O y se seco a 60 °C durante 16 h para proporcionar acido 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-6-il)nicotmico (410 mg, 0,959 mmol, rendimiento del 75 %) en forma de un solido de color amarillo palido que se utilizo en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,63 min, MH+ = 428.
Intermedio 8
2-(4-((2S,4R)-1-Acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)feml)acetato de etilo
A una solucion de 6-(((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin- 4-il)amino)nicotinonitrilo (para una preparacion vease el Intermedio 5) (1,67 g, 3,86 mmol), 2-(4-bromofenil)acetato de etilo (1,127 g, 4,64 mmol) y carbonato de potasio (1,602 g, 11,59 mmol) en tolueno (10 ml) y etanol (10,0 ml) se le anadio tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,446 g, 0,386 mmol) en atmosfera de nitrogeno. La mezcla de reaccion se calento a 100 °C durante 1 h, despues se repartio entre EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (25 g), eluyendo con un gradiente de EtOAc/ciclohexano (del 10 al 80 %). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vacfo para proporcionar 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetato de etilo (752 mg, 42 %) en forma de un aceite incoloro viscoso. CLEM (Formiato, 2 min), Tr =1,10 min, MH+ = 469.
Intermedio 9
Acido 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)feml)acetico,
sal de litio
A una solucion de 2-(4-((2S,4E)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-
il)fenil)acetato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 8) (300 mg, 0,640 mmol) en MeOH (5 ml) se le anadio una solucion de hidroxido de litio (0,768 ml, 0,768 mmol). La mezcla resultante se agito a 40 °C durante 2 h, despues de lo cual se concentro al vado para proporcionar el carboxilato de litio del acido 2-(4-((2S,4E)-1-acetil-4- 5 ((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetico (286 mg, 100%) en bruto en forma de un solido de color blanco que se utilizo en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 1,10 min, MH+ = 433.
Intermedio 10
Acido 3-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-
10 il)fenil)propanoico
A una solucion de 6-(((2S,4E)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin- 4-il)amino)nicotinonitrilo (para una preparacion vease el Intermedio 5) (382 mg, 0,884 mmol) y acido 3-(4- bromofenil)propanoico (243 mg, 1,060 mmol) en tolueno (6 ml) y etanol (6 ml) se le anadieron sucesivamente 15 tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (102 mg, 0,088 mmol) y carbonato de potasio (366 mg, 2,65 mmol). La mezcla resultante se agito a 80 °C durante 2 h, despues se repartio entre agua y EtOAc. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vado. El residuo en bruto se purifico mediante cromatograffa ultrarrapida sobre gel de sflice (25 g), eluyendo con EtOAc en ciclohexano (10-70 %). Las fracciones apropiadas se combinaron 20 y se concentraron a presion reducida para proporcionar acido 3-(4-((2S,4E)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2- metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)propanoico (209 mg, 52%) en forma de un solido de color blanco. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,91 min, MH+ = 455.
Intermedio 11
(2E)-2-Butenoilcarbamato de 1-metiletilo
25
Se cargo carbamato de isopropilo (30 g, 291 mmol, disponible de TCI) a un vaso Lara de 3 l y se anadio tetrahidrofurano (THF) (150 ml). Se anadio cloruro de (2E)-2-butenoflo (31,2 ml, 326 mmol, disponible de Aldrich) en atmosfera de nitrogeno y la camisa se enfrio a -30 °C. Cuando la temperatura de la solucion llego a -17 °C se anadio terc-butoxido de litio (1 M, 655 ml, 655 mmol) mediante una bomba peristaltica durante 2 h, manteniendo la 30 temperatura de reaccion entre -10 °C y -18 °C. Una vez que la adicion se habfa completado la mezcla se agito durante 30 min y se llevo a 0 °C. Se anadieron eter dietflico (450 ml) y acido clorddrico (1 M, 375 ml) y la mezcla se llevo a 20 °C con agitacion vigorosa. Se detuvo la agitacion, se dejo que las fases se separaran y la fase acuosa se escurrio. Se anadio salmuera (375 ml) y la mezcla se agito vigorosamente. Se detuvo la agitacion, se dejo que las fases se separaran y la fase acuosa se escurrio. La fase organica se seco (MgSO4), se filtro y se evaporo a un aceite 35 de color marron (60 g). Se aplico a una columna de sflice (40+M Biotage) y se eluyo con DCM/EtOAc (1:1 a 0:1, 10 VC). El producto que conteda las fracciones se evaporo a sequedad y se cargo en una columna de sflice Redisep Isco (1500 g) y se eluyo con un gradiente de EtOAc en ciclohexano (0-40 %). Las fracciones limpias, que conteman producto se evaporaron a un solido de color blanquecino (15,41 g). CLEM (Procedimiento C): Tr = 0,68, MH+ = 172
5
10
15
20
25
30
35
{(3S)-3-[(4-Bromofenil)amino]butanoil}carbamato de metiletilo
Se agito (2£)-2-butenoilcarbamato de 1 -metiletilo (para una preparacion vease el Intermedio 11) (9,38 g, 54,8 mmol) en tolueno (281 ml) en atmosfera de nitrogeno y se anadio (R-BINAP) ditriflatobis(acetonitrilo)paladio(II) (para una preparacion vease el intermedio 36) (3,35 g, 3,01 mmol). El catalizador formo una bola gomosa, la solucion se convirtio en una mezcla de color amarillo opaco y se agito durante 20 min. Se anadio 4-bromoanilina (14,14 g, 82 mmol), la solucion se volvio de un color marron claro transparente y el catalizador gomoso se disolvio adicionalmente. La mezcla se agito durante 16 h. De forma similar, un segundo lote de (2E)-2-butenoilcarbamato de 1 -metiletilo (Intermedio 11, 8,51 g, 49,7 mmol) se agito en tolueno (255 ml) en atmosfera de nitrogeno y se anadio (R-BINAP) ditriflatobis(acetonitrilo)paladio (II) (3,04 g, 2,73 mmol). El catalizador formo una bola gomosa, la solucion se convirtio en una mezcla de color amarillo opaco y se agito durante 20 min. Se anadio 4-bromoanilina (12,83 g, 74,6 mmol), la solucion se volvio de un color marron claro transparente y el catalizador gomoso se disolvio adicionalmente. La mezcla se agito durante 16 h.
Las dos mezclas de reaccion se combinaron y se cargaron en una columna de sflice Redisep de Isco de 1,5 kg. La columna se eluyo con DCM/MeOH (0% -> 0,5%, 19 VC). Las fracciones limpias, que conteman producto se evaporaron a un aceite de color marron palido. La mezcla se seco en un horno de vacfo durante la noche a 40 °C para proporcionar {(3S)-3-[(4-Bromofenil)amino]butanoil}carbamato de metiletilo en forma de un solido de color blanco (24,2 g, 67 % global).
CLEM (Procedimiento C): Tr = 0,91, MH+ = 343. ee = 92 %.
Intermedio 13
[(2S,4R)-6-Bromo-2-metM-1,2,3,4-tetrahidro-4-qumoliml]carbamato de 1-metiletilo
Se recogio {(3S)-3-[(4-bromofenil)amino]butanoil}carbamato de 1-metiletilo (para una preparacion vease el Intermedio 12) (17,9 g, 52,2 mmol) en etanol (150 ml) y se enfriaron hasta por debajo de -10 °C (temperatura interna) en un bano de CO2/acetona.
Se anadio NaBH4 (1,381 g, 36,5 mmol) seguido de cloruro de magnesio hexahidratado (11,35 g, 55,8 mmol) en agua (25 ml) manteniendo la temperatura por debajo de -5 °C. La mezcla se dejo en agitacion a <0 °C durante 1 hora despues se calento a temperatura ambiente y se agito durante 1 h. La suspension espesa resultante se vertio en una mezcla de acido cftrico (25,05 g, 130 mmol), HCl (1 M en agua, 205 ml, 205 mmol) y DCM (205 ml). La mezcla bifasica se agito a temperatura ambiente durante 1 h. Las fases se separaron y la fase organica se seco con Na2SO4, se filtro y se concentro para proporcionar el producto en forma de un solido de color marron claro (14,1 g). CLEM (procedimiento B): Tr =1,13, MH+ = 327
Intermedio 14
[(2S,4R)-1-Acetil-6-bromo-2-metiM,2,3,4-tetrahidro-4-qumoliml]carbamato de 1-metiletilo
Se recogio [(2S,4R)-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil]carbamato de 1-metiletilo (para una preparacion vease el intermedio 13) (14,1 g, 43,1 mmol) en DCM (400 ml) en atmosfera de nitrogeno a temperatura ambiente. Se anadio piridina (10,46 ml, 129 mmol), despues cloruro de acetilo (4,60 ml, 64,6 mmol), y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 16 h, despues se repartio entre EtOAc (2000 ml) y una solucion saturada acuosa de 5 NaHCO3 (800 ml). Las fases se separaron y la fase organica se lavo con agua y despues con salmuera (1500 ml de
cada uno) y despues se seco con Na2SO4 y se concentro al vado para producir un solido de color morado. El producto en bruto se recogio en el mmimo de DCM y se aplico a una columna Companion XL de 330 g y se eluyo con un gradiente acetato de etilo al 12-63 % en ciclohexano para proporcionar el producto en forma de un solido de color blanquecino (12,37 g).
10 CLEM (procedimiento B): Tr =1,03, MH+ = 369
[alfa]D = +281,1025 ° (T = 20,7 °C, celda de 10 mm, c = 0,508 g/100 ml, etanol).
Intermedio 15
4-[(2S,4R)-1-AcetN-2-metN-4-({[(1-metMetN)oxi]carboml}ammo)-1,2,3,4-tetrahidro-6-qumoliml]benzoato de etilo
15 Se mezclaron [(2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil]carbamato de 1-metiletilo (para una preparacion vease el Intermedio 14), (39,0 g, 106 mmol), acido {4-[(etiloxi)carbonil]fenil}boronico (22,5 g, 116 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (1,83 g, 1,58 mmol) se mezclaron en DME (430 ml) y la mezcla resultante se trato con solucion acuosa de Na2CO3 (2 N, 210 ml, 420 mmol). La mezcla se desgasifico al vado con varias inactivaciones con nitrogeno y despues se agito a 105 °C en atmosfera de nitrogeno durante aproximadamente 6 h 20 antes de dejarse enfriar a temperatura ambiente. La mezcla se repartio entre EtOAc y agua y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera. Despues, la fase organica se filtro a traves de un cartucho de sflice de 70 g, el cartucho se lavo con EtOAc. El filtrado y los lavados combinados se concentraron al vado. El residuo se trituro con Et2O despues se filtro. El solido obtenido se seco al aire para proporcionar 4-[(2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-({[(1-metiletil)oxi]carbonil}amino)-1,2,3,4-tetrahidro-6- 25 quinolinil]benzoato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 15) (35,2 g, 80,2 mmol, 76 %) en forma de un solido de color gris. El filtrado se concentro al vado y el residuo obtenido se trituro con Et2O (aproximadamente 30 ml). El solido formado se aislo por filtracion y se seco al aire para proporcionar 4-[(2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(][(1- metiletil)oxi]carbonil}amino)-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo en forma de un solido de color gris (5,96 g, 13,5 mmol, 13 %). CLEM (formiato, 2 min), tiempo de retencion 1,16 min, MH+ = 439
30 Intermedio 16
4-[(2S,4R)-1-acetil-4-ammo-2-metiM,2,3,4-tetrahidro-6-qumoMml]benzoato de etilo
Se anadio 4-[(2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-({[(1-metiletil)oxi]carbonil}amino)-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 15) (8,90 g, 20,30 mmol) a una suspension de cloruro de aluminio
35 (10,3 g, 77 mmol) en DCM (160 ml) enfriado con un bano de hielo/agua. La temperatura se elevo desde 0 °C a
aproximadamente 6 °C despues de la adicion. La mezcla resultante se agito a aproximadamente 0 °C durante 20 min y despues se trato con una solucion de MeOH (18 ml) y trietilamina (34 ml, 245 mmol) durante -30 s. La mezcla resultante se agito a 0 °C durante -30 min y despues se repartio entre EtOAc y una solucion acuosa saturada de NaHCO3.
40 La misma reaccion se realizo en paralelo, utilizando 4-[(2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-({[(1-
metiletil)oxi]carcarbonil}amino)-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 15) (0,89 g, 2,030 mmol), cloruro de aluminio (1,03 g, 7,72 mmol), trietilamina (3,4 ml, 24,53 mmol), DCM (16 ml) y MeOH (1,3 ml). Los productos de ambas reacciones se combinaron en esta etapa y la mezcla resultante se
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agito a temperature ambiente durante aproximadamente 10 min (volumen total: aproximadamente 1 l). La mezcla se filtro a traves de Celite™, el residuo insoluble se lavo con EtOAc y una solucion acuosa saturada de NaHCO3 y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (frita hidrofoba) y se concentraron al vado para proporcionar 4-[(2S,4R)-1-acetil-4-amino-2- metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil]benzoato de etilo (6,6 g, 84% - permitiendo la adicion del experimento paralelo) en forma de un solido de color crema. CLEM (formiato, 2 min), tiempo de retencion 0,73 min, [M-NH2]+ = 336
Intermedio 17
4-{(2S,4R)-1-AcetN-4-[(4-clorofenN)ammo]-2-metM-1,2,3,4-tetrahidro-6-qumolmM}benzoato de etilo
Se mezclaron 4-[(2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinilo]benzoato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 16) (6,6 g, 18,73 mmol), 1-bromo-4-clorobenceno (3,94 g, 20,60 mmol), bis(dibencilidenacetona)paladio (0) (690 mg, 1,2 mmol) y [2'-(diciclohexilfosfanil)-2-bifenilil]dimetilamina (Dave-phos) (590 mg, 1,499 mmol)) en tolueno (120 ml) y la mezcla resultante se trato con t-butoxido de sodio (2,52 g, 26,2 mmol). La reaccion se desgasifico al vado con varias inactivaciones con nitrogeno, se calento a 70 °C en atmosfera de nitrogeno durante 16 h, despues se dejo enfriar a temperatura ambiente y se filtro. El residuo insoluble se lavo con tolueno y despues Et2O. El filtrado y los lavados combinados se lavaron con agua (2 veces) y despues se extrajeron con acido clorddrico (2 N, 20 veces, dando como resultado la precipitacion de un aceite de color naranja que se recogio con las fases acidas acuosas. Los extractos acidos se lavaron con Et2O y las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (frita hidrofoba) y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa sobre un cartucho de sflice (330 g), eluyendo con un gradiente de EtOAc/ciclohexano (545 %). Las fracciones apropiadas se combinaron y se redujeron a sequedad al vado para proporcionar una espuma de color amarillo palido. Esta espuma se disolvio en EtOAc (50 ml) y se trato con sflice de tiourea funcional (0,56 g, neutralizador de paladio). La mezcla se agito a temperatura ambiente (atmosfera de aire) durante -20 min y despues se dejo a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se filtro y los residuos insolubles se lavaron con EtOAc. El filtrado combinado y los lavados se concentraron al vado para proporcionar 4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4- clorofenil)amino]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoato de etilo (3,7 g, 8,0 mmol, 32%) en forma de un aceite de color amarillo.
Intermedio 18
Acido 4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4-clorofeml)ammo] -2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoico
Se disolvio 4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 17) (5,41 g, 11,69 mmol) en etanol (100 ml) y la solucion se trato con solucion acuosa de NaOH (2 M, 50 ml, 100 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente (atmosfera de aire) durante aproximadamente 2 h, despues la mayor parte del etanol se retiro al vado. La solucion de color amarillo resultante se diluyo con agua (dando como resultado la formacion de un precipitado aceitoso de color amarillo). La fase acuosa se lavo dos veces con DCM (que no disolvio el precipitado formado previamente) y despues se acidifico con acido clorddrico (2 N) a pH 1 y se extrajo con EtOAc (2 veces). Las fases de EtOAc combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (frita hidrofoba) y se concentraron al vado. La espuma de color amarillo residual se trituro con Et2O durante aproximadamente 1 h. El solido resultante se aislo por filtracion, se lavo con Et2O y se seco al aire para proporcionar Acido 4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4-clorofenil)amino] -2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoico (4,41 g, 10,1 mmol, 87 %) en forma de un solido de color crema. CLEM (HpH), Tiempo de retencion 1,08 min, [MH]-= 433
1-((2S,4R)-6-Bromo-2-metil-4-((5-mtropiridm-2-il)ammo)-3,4-dihidroqumolm-1(2H)-M)etanona
A un matraz cargado con 1-((2S,4R)-4-amino-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una 5 preparacion vease el Intermedio 1) (2 g, 7,06 mmol) y 2-cloro-5-nitropiridina (2,240 g, 14,13 mmol) se anadio NMP (10 ml) y la mezcla resultante se trato con DIPEA (3,70 ml, 21,19 mmol). La mezcla se dividio entre 2 matraces, cada matraz se lavo con nitrogeno, se sello y la mezcla se agito con irradiacion de microondas a 200 °C durante 2 h. Las 2 mezclas de reaccion se combinaron, se diluyeron con agua y se extrajeron con EtOAc (4 veces). Las fases combinadas de EtOAc se lavaron con agua (3 veces) y despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se 10 concentraron al vado. El solido residual de color marron se purifico mediante cromatograffa eluyendo con un gradiente de EtOAc/hexanos, lo que proporciono 1-((2S,4R)-6-bromo-2-metil-4-((5-nitropiridin-2-il)amino)-3,4- dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (4,6 g, 11,35 mmol, rendimiento del 161%) en forma de una espuma de color marron palido. CLeM (HpH, 2 min), Tr = 1,08 min, MH+ = 405/407 (doblete).
Intermedio 20
15 4-((2S,4R)-1-Acetil-2-metil-4-((5-mtropiridm-2-M)ammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de metilo
A un matraz cargado con acido (2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-N-(5-nitro-2-piridinil)-1,2,3,4-tetrahidro-4- quinolinamina (para una preparacion vease el Intermedio 19) (4,1 g, 10,12 mmol), acido {4-
[(metiloxi)carbonil]fenil}boronico (2,185 g, 12,14 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (1,169 g, 1,012 mmol) y 20 carbonato de potasio (4,19 g, 30,4 mmol) se le anadieron DME (50 ml) y agua (10,0 ml) y la mezcla resultante se agito a 100 °C en atmosfera de nitrogeno durante 1 h, despues se enfrio a temperatura ambiente y se concentro al vacfo. El residuo se repartio entre EtOAc y agua y se separaron las fases. La fase organica se seco sobre MgSO4 y se concentro al vacfo. El residuo se purifico mediante cromatograffa eluyendo con un gradiente de EtOAc/hexanos, lo que proporciono 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5-nitropiridin-2-il)amino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de 25 metilo (4,3 g, 9,34 mmol, rendimiento del 92 %) en forma de una espuma de color naranja, CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,13 min, MH+ = 461.
Intermedio 21
4-((2S,4R)-1-Acetil-4-((5-ammopiridm-2-M)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-M)benzoato de metilo
A un matraz cargado con 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5-nitropiridin-2-il)amino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoato de metilo (para una preparacion vease el Intermedio 20) (2,43 g, 5,28 mmol), formiato de amonio (3,33 g, 52,8 mmol) y paladio sobre carbono (0,562 g, 5,28 mmol) se le anadio MeOH (50 ml) y la mezcla resultante se calento a reflujo durante 30 min. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente, se filtro a traves de Celite™ y el 5 residuo se lavo con MeOH y despues DMF. El filtrado metanolico y los lavados se combinaron y se concentraron al vado. El residuo se disolvio en EtOAc, se lavo con salmuera, se seco sobre MgSO4 y se concentro al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM para proporcionar 4-((2S,4R)- 1-acetil-4-((5-aminopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (2,0 g, 4,65 mmol, rendimiento del 88 %) en forma de una espuma de color rosa oscuro. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,94 min, MH+ = 10 431.
Intermedio 22
4-((2S,4R)-1-Acetil-2-metil-4-(pindm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de metilo
Una solucion de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-aminopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de
15 metilo (para una preparacion vease el Intermedio 21) (1,04 g, 2,416 mmol) en etanol (20 ml) a temperatura ambiente se trato con nitrito de isoamilo (0,813 ml, 6,04 mmol) y la mezcla resultante se agito durante 2 h a reflujo y despues se enfrio a temperatura ambiente. El volumen del disolvente se retiro al vado. El residuo se trato con EtOAc y salmuera y las dos fases se pasaron a traves de 10 G de Celite™, despues se separaron. La fase organica se seco sobre MgSO4 y se concentro al vado.
20 El residuo se purifico mediante cromatograffa, eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM, que proporciono 4- ((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (720 mg, 1,733 mmol, rendimiento del 71,7 %) en forma de una espuma de color rosa claro. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,10 min, MH+ = 416.
Intermedio 23
25 Acido 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metM-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoico
Se disolvio 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (para una preparacion vease el Intermedio 22) (700 mg, 1,685 mmol) en MeOH (10 ml) y se anadio solucion de hidroxido de sodio (2 M, 1,68 ml, 3,37 mmol). Despues de 6,5 h se anadieron 2 equivalentes adicionales de hidroxido de sodio 30 (2 M, 1,685 ml) y la mezcla de reaccion se agito durante la noche. Se concentro y el residuo se diluyo con agua. Se
anadio acido clorddrico (2 N, 1 ml) formando un precipitado que se aislo por filtracion y se seco para proporcionar acido 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (500 mg, 1,245 mmol, rendimiento del 73,9 %) en forma de un solido de color rosado. La fase acuosa se extrajo EtOAc (3 veces) y las fases organicas combinadas se secaron sobre MgSO4 despues se concentraron al vado para proporcionar un lote 35 adicional de acido 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (140 mg, 0,349 mmol, rendimiento del 20,70 %) en forma de una espuma de color amarillo. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,62 min, MH+ = 402.
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1-((2S,4R)-2-Metil-4-((5-mtropiridm-2-M)ammo)-6-(4,4,5,5-tetrametiM,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidro-
quinolin-1(2H)-il)etanona
A un matraz cargado con 1-((2S,4R)-6-bromo-2-metil-4-((5-nitropiridin-2-il)amino)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)- il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 19) (1,17 g, 2,89 mmol), bis(pinacolato)diboro (1,613 g, 6,35 mmol), PdCh(dppf) (0,211 g, 0,289 mmol) y acetato de potasio (0,425 g, 4,33 mmol) se le anadio DMSO (10 ml). La mezcla de reaccion se desgasifico (al vado durante 10 min con varias inactivaciones con nitrogeno) y se agito en atmosfera de nitrogeno durante 1,5 horas a 80 °C. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente durante 2 h y se diluyo con EtOAc y agua. La mezcla bifasica se filtro a traves de un lecho de Celite™ (10 g) y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con agua (4 veces) y despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa eluyendo con un gradiente de EtOAc/hexanos; que proporciono 1-((2S,4R)-2-metil-4-((5-nitropiridin-2- il)amino)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (1,03 g, 2,277 mmol, rendimiento del 79 %) en forma de una espuma de color marron claro. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,15 min, MH+ = 453.
Intermedio 25
6-((2S,4R)-1-Acetil-2-metil-4-((5-mtropiridm-2-il)ammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)mcotmato de etilo
A un matraz cargado con 1-((2S,4R)-2-metil-4-((5-nitropiridin-2-il)amino)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)- 3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 24) (1,03 g, 2,277 mmol), 6- bromonicotinato de metilo (0,541 g, 2,505 mmol), carbonato de potasio (0,944 g, 6,83 mmol) y
tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,263 g, 0,228 mmol) se le anadio una mezcla previamente desgasificada de tolueno (10 ml) y etanol (10 ml). La mezcla resultante se agito a 90 °C en atmosfera de nitrogeno. Despues de 3 h, se anadieron porciones adicionales de 6-bromonicotinato de metilo (0,271 g, 1,252 mmol), carbonato de potasio (0,472 g, 3,42 mmol) y tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,132 g, 0,114 mmol) y la mezcla de reaccion se calento durante otras 4 h. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente y se concentro al vado. El residuo en bruto se repartio entre EtOAc y agua, se separaron las fases y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. La purificacion del residuo mediante cromatograffa, eluyendo con un gradiente de EtOAc/hexanos proporciono 6-((2S,4R)-1-acetil-2- metil-4-((5-nitropiridin-2-il)amino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de etilo (740 mg, 1,556 mmol, rendimiento del 68,3 %) en forma de una espuma de color amarillo. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,15 min, MH+ = 476.
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A un matraz cargado con 6-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5-nitropiridin-2-il)amino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)nicotinato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 25) (780 mg, 1,640 mmol), formiato de amonio (1,034 mg, 16,40 mmol) y paladio sobre carbono (Pd al 10 %/C) (160 mg, 1,503 mmol) se le anadio etanol (15 ml) y la mezcla resultante se calento a reflujo durante 45 min. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente, se filtro a traves de Celite™, el residuo se lavo con EtOH y el filtrado y los lavados combinados se concentraron al vado. El residuo se disolvio en EtOAc, se lavo con salmuera, se seco sobre MgSO4 y se concentro al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM; que proporciono 6-((2S,4R)-1-Acetil-4- ((5-aminopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de etilo (450 mg, 1,010 mmol, rendimiento del 61,6 %) en forma de una espuma de color rosa. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,93 min, MH+ = 446.
Intermedio 27
6-((2S,4R)-1-Acetil-2-metil-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)mcotmato de etilo
Una solucion de 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-aminopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 26) (450 mg, 1,010 mmol) en etanol (10 ml) a temperatura ambiente se trato con nitrito de isoamilo (0,34 ml, 2,53 mmol) y la mezcla resultante se agito 1 h a reflujo, despues se enfrio a temperatura ambiente. El volumen del disolvente se evaporo al vado. El residuo se trato con EtOAc y salmuera y las dos fases se filtraron a traves de Celite™ (10 g) despues se separaron. La fase organica se seco sobre MgSO4 y se concentro al vado.
El residuo se purifico por cromatograffa, eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM; que proporciono 6-((2S,4R)-1- acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de etilo (240 mg, 0,557 mmol, rendimiento del 55,2 %) en forma de una espuma de color rosa claro. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,09 min, MH+ = 431.
Intermedio 28
Acido 6-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)mcotmico
Una solucion de 6-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 27) (240 mg, 0,557 mmol) en etanol (5 ml) se trato con hidroxido de litio acuoso (1 N, 1,115 ml, 1,115 mmol) y la mezcla resultante se agito a temperatura ambiente. Despues de 1 h la mayor parte
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del etanol se retiro al vado, el residuo se diluyo con agua (aprox. 2 ml) y la mezcla "turbia" se trato con acido acetico (0,064 ml, 1,115 mmol). El precipitado formado se aislo por filtracion, se lavo con Et2O y se seco a 60 °C durante 16 h para proporcionar acido 6-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinico (150 mg, 0,373 mmol, rendimiento del 66,9%) en forma de un solido de color amarillo palido que se utilizo en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,61 min, MH+ = 403.
Intermedio 29
((2S,4R)-1-Acetil-6-bromo-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-il)carbamato de terc-butilo
Una solucion de (2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinamina (11,3 g, 39,9 mmol) en DCM (120 ml) a temperatura ambiente se trato con trietilamina (16,69 ml, 120 mmol) y despues Boc2O (12,97 ml, 55,9 mmol) y la mezcla resultante se agito a esta temperatura durante 1 h. Se anadieron porciones adicionales de base y anddrido (20 %) y, despues de 30 min, la mezcla se lavo con solucion saturada acuosa de NaHCO3, se seco (frita hidrofoba) y se concentro al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa, eluyendo con un gradiente de EtOAc/hexano; que proporciono ((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de terc- butilo (9,2 g, 24,00 mmol, rendimiento del 60,1 %) en forma de una espuma de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,14 min, MH+ = 383/385.
Intermedio 30
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((terc-butoxicarboml)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de metilo
A un matraz cargado con ((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de terc-butilo (para una preparacion vease el Intermedio 29) (5 g, 13,05 mmol), acido (4-(metoxicarbonil)fenil)boronico (2,58 g, 14,35 mmol), tetraquis(trifenilfosfina)paladio(0) (1,507 g, 1,305 mmol) y carbonato de potasio (5,41 g, 39,1 mmol) se le anadio DME (50 ml) y agua (10,0 ml) y la mezcla resultante se agito a 100 °C en atmosfera de nitrogeno durante 1 h. La reaccion se enfrio a temperatura ambiente y la mayor parte del DME se evaporo al vado. El residuo se repartio entre EtOAc y agua y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa, eluyendo con un gradiente de EtOAc/hexanos; que proporciono 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((terc- butoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (5,35 g, 12,20 mmol, rendimiento del 94 %) en forma de una espuma de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,18 min, MH+ = 439.
Intermedio 31
Acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((terc-butoxicarboml)ammo)-2-metM-1,2,3, 4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico
Una solucion de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4 tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (para una preparacion vease el Intermedio 30) (5,23 g, 11,93 mmol) en MeOH (80 ml) se trato con hidroxido de litio acuoso (1 M, 17,89 ml, 17,89 mmol) y la mezcla resultante, que se convirtio en una suspension despues de 5 minutos, se agito. Despues de 24 h, se anadio hidroxido de litio (17,89 ml, 17,89 mmol) y la mezcla (que para 5 entonces era una solucion) se agito a 50 °C durante 3 h. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente, la mayor parte del MeOH se evaporo al vado y el residuo se trato con acido acetico (2,73 ml, 47,7 mmol). Despues de 5 min, se formo un precipitado, se aislo por filtracion, se lavo con agua y se seco a 45 °C al vado durante 16 h para proporcionar acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (4,88 g, 11,50 mmol, rendimiento del 96%) en forma de un solido de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 10 0,70 min, MH+ = 425.
Intermedio 32
4-((2S,4R)-1-acetil-4-ammo-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-(2-(dimetilammo)etil) benzamida
Una suspension de ((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2-(dimetilamino)etil)carbamoil)fenil)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4- 15 il)carbamato de terc-butilo (para una preparacion vease el Intermedio 41) triturado (8 g, posiblemente como la sal de PF6) se trato con 1,4-dioxano (30 ml) seguido de cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 40 ml, 160 mmol). Despues -30 min la mayor parte del dioxano se retiro y el residuo se disolvio en MeOH caliente (100 ml) a 70 °C durante 1,5 h. El material residual insoluble se filtro y se desecho. El filtrado se concentro al vado y se purifico utilizando una columna SCX (70 g, pre-acondicionada con MeOH). El cartucho se lavo con MeOH (200 ml) y se 20 eluyo con amomaco en MeOH (2 M, 200 ml). Las fracciones de amomaco metanolico se combinaron y se concentraron al vado para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2- (dimetilamino)etil)benzamida (3,65 g, 9,25 mmol, rendimiento del 84 %) en forma de una espuma de color amarillo. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,71 min, MH+ = 395.
Intermedio 33
25 5-((2S,4R)-1-Acetil-4-((5-cianopmdm-2-N)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-M)picolmato de metilo
Se combinaron 6-(((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo (para una preparacion vease el Intermedio 2) (3,25 g, 8,44 mmol), acido {6-[(metiloxi)carbonil]-3-piridinil}boronico (1,832 g, 10,12 mmol), acido {6-[metil(oxi)carbonil]3-piridinil}boronico (1,832 g, 10,12 mmol) y trietilamina (2,352 ml, 30 16,87 mmol) en MeOH (30 ml) y DME (5 ml). La mezcla de reaccion se dividio entre 2 viales y cada uno se calento a
120 °C durante 45 min. Las mezclas de reaccion en bruto se combinaron y se concentraron al vado para proporcionar 4,4 g de un solido de color marron en bruto. Este se purifico mediante cromatograffa sobre sflice (100 g), eluyendo con mas de 1500 ml de EtOAc (el compuesto se retiro por lixiviacion lentamente) para proporcionar 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picolinato de
35 metilo (2,94 g, 6,66 mmol, rendimiento del 79 %) en forma de un solido espumoso de color marron. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,81 min, MH+ = 442.
Se disolvio 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picolinato de metilo 5 (para una preparacion vease el Intermedio 33) (2,94 g, 6,66 mmol) en 1,4-dioxano anhidro (20 ml). Se anadio agua (20,0 ml) seguido de hidroxido de litio (0,319 g, 13,32 mmol) y la mezcla de reaccion se agito a t.a. Despues de 1 h, el dioxano 1,4 se retiro al vado y el residuo acuoso se trato con acido acetico (1,144 ml, 19,98 mmol). El precipitado de color naranja resultante se agito durante 20 min, se aislo por filtracion, se lavo con agua y se seco al vado durante la noche para proporcionar acido 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4- 10 tetrahidroquinolin-6-il)picolmico (2,16 g, 4,55 mmol, rendimiento del 68,3 %) en forma de un solido de color marron. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,68 min, MH+ = 428.
Intermedio 35
Acido 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metM-4-(femlammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoico
15 Se anadio Pd/C (22,1 mg, al 10 %, 0,208 mmol, que contema ~50 % de agua) a una solucion de acido 4-((2S,4R)-1- acetil-4-((4-clorofenil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 18) (369 mg, 0,848 mmol) y formiato de amonio (134 mg, 2,121 mmol) en etanol (5 ml) y DMF (1 ml) y la mezcla de reaccion se calento a reflujo. Despues de 1,5 h la mezcla de reaccion se enfrio a t.a. La mezcla de reaccion se filtro a traves de Celite™ y la torta del filtro se lavo con EtOH. El filtrado se concentro para proporcionar 20 un aceite de color marron claro (251 mg). La torta del filtro se lavo con una porcion adicional de EtOH:DMF 1:1 (50 ml) y se combino con el material anterior y se concentro para proporcionar acido 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4- (fenilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (306 mg, 0,764 mmol, rendimiento del 90%) en forma de un solido de color amarillo. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 1,01 min, MH+ = 401.
Intermedio 36
25 (R-BINAP)ditriflatobis(acetonitrilo)paladio(II)
Se agito R-(+)-BINAP (6,08 g, 9,76 mmol, disponible de Avocado) en DCM (626 ml) y se anadio diclorobis(acetonitrilo)paladio(II) (2,5 g, 9,64 mmol, disponible de Aldrich). La mezcla se agito en atmosfera de nitrogeno durante 30 minutos, la suspension no se habfa convertido en una solucion y se anadio mas DCM (100 ml). 30 La mezcla se agito durante 30 min y se anadio triflato de plata (5,00 g, 19,47 mmol, disponible de Aldrich) disuelto en
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acetonitrilo (250 ml). La mezcla cambio de una suspension turbia de color naranja a una suspension de color amarillo. La mezcla se agito durante 1 h, se filtro a traves de Celite™ y se evaporo hasta un solido de color naranja. El residuo se seco al vado (aproximadamente a 14 mbar (1,40 kPa) a temperature ambiente durante el fin de semana para proporcionar el producto deseado (10,69 g).
RMN 1 H (400 MHz, MeCN-d3) 8 ppm 2,0 (s, 6 H), 6,7 (d, 2H), 6,9 (m a, 4H), 7,1 (t a, 2H), 7,2 (t, 2H), 7,5-7,9 (m, 22H)
Intermedio 37
{(2S,4R)-1-acetN-6-[4-({[2-({[(1,1-dimetNetN)oxi]carboml}ammo)etN]ammo}carboml)feml]-2-metiM,2,3,4- tetrahidro-4-quinolinil}carbamato de 1-metiletilo
A un matraz cargado con acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 48) (82 mg, 0,2 mmol) y HATU (0,091 g, 0,240 mmol) se le anadio DMF (2 ml) y la mezcla se trato con DIPEA (0,105 ml, 0,600 mmol) a temperatura ambiente. Despues de 5 min, se anadio (2-aminoetil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo (0,047 ml, 0,300 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reaccion se repartio entre EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM para proporcionar {(2S,4R)-1-acetil-6-[4-({[2-({[(1,1-
dimetiletil)oxi]carbonil}amino)etil]amino}carbonil)fenil]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil}carbamato de 1-metiletilo (95 mg, 0,172 mmol, rendimiento del 86 %) en forma de una espuma de color un marron palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr =1,02 min, MH+ = 553.
Intermedio 38
{(2S,4R)-1-acetN-6-[4-(2-{[2-({[(1,1-dimetNetN)oxi]carboml}ammo)etN]ammo}-2-oxoetN)feml]-2-metiM,2,3,4- tetrahidro-4-quinolinil}carbamato de 1-metiletilo
A un matraz cargado con acido 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin- 6-il)fenil)acetico (para una preparacion vease Intermedio 50) (85 mg, 0,2 mmol) y HATU (91 mg, 0,240 mmol) se le anadio DMF (2 ml) y la mezcla se trato con DIPEA (0,105 ml, 0,600 mmol) a temperatura ambiente. Despues de 5 min, se anadio (2-aminoetil)carbamato de 1,1 -dimetiletilo (0,047 ml, 0,300 mmol), la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 3 h y despues se repartio entre EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa, eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM, para proporcionar {(2S,4R)-1-acetil-6-[4-(2-{[2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)etil]amino}-2-oxoetil)fenil]-2-metil- 1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil}carbamato de 1-metiletilo (56 mg, 0,099 mmol, rendimiento del 49,4%) en forma de una espuma de color amarillo palido. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,91 min, MH+ = 455.
5 A un matraz cargado con acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 4) ((70 mg, 0,164 mmol) y HATU (74,9 mg, 0,197 mmol) se le anadio DMF (3 ml) y la mezcla resultante se trato con DIPEA (0,086 ml, 0,492 mmol). Despues de 5 min, se anadio (2-aminoetil)carbamato de terc-butilo (52,6 mg, 0,328 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 1 h y despues se concentro al vado. El residuo se repartio entre EtOAc y agua y las fases se separaron. La fase 10 acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (3 veces), despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado para proporcionar (2-(4- ((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzamido)etil)carbamato de terc-butilo en forma de una espuma de color marron que se purifico adicionalmente por MDAP (HpH). Para proporcionar (2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-
15 il)benzamido)etil)carbamato de terc-butilo (65 mg, 0,114 mmol, rendimiento del 69,6%) en forma de un solido de color blanco. ClEm (HpH, 2 min), Tr = 1,00 min, MH+ = 569.
Intermedio 40
(2-(4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzamido)etil)carbamato de terc-butilo
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CLEM (pH alto, 2 min), Tr = 1,01 min, MH+ = 544 Intermedio 41
((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2-(dimetilammo)etil)carbamoil)feml)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-il)carbamato de terc-butilo
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A un matraz cargado con acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((terc-butoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 31) (4,88 g, 11,50 mmol) y HATU (5,25 g, 13,80 mmol) se le anadio DMF (2 ml). La mezcla resultante se trato con DIPEA (6,02 ml, 34,5 mmol), a continuacion, despues de 5 min con N1,N1-dimetiletano-1,2-diamina (1,317 g, 14,95 mmol). Despues de 0,5 h la mayor parte de la DMF se retiro al 30 vado. El residuo se trato con EtOAc y NaHCO3 saturado. Aparecio un solido insoluble que se aislo por filtracion y se
seco al vado a 60 °C durante 3h para proporcionar ((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2-(dimetilamino)etil)carbamoil)fenil)-2-
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metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de terc-butilo en forma de un solido de color blanco (8,5 g), que se utilizo sin purificacion adicional en la reaccion posterior. Las fases del filtrado se separaron y la acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado (3 veces), se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacfo para proporcionar un lfquido (2,1 g). Este lfquido se cargo en un cartucho SCX (50 g, pre-acondicionado con MeOH) el cartucho se lavo con MeOH (200 ml) y se eluyo con amomaco en MeOH (2 M, 200 ml). Las fracciones de amomaco metanolico se combinaron y se concentraron al vacfo para proporcionar una porcion adicional de ((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2-(dimetilamino)etil)carbamoil)fenil)-2-metil-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de terc-butilo (0,3 g, 0,6 mmol, rendimiento del 5 %) en forma de un solido de color naranja. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,94 min, MH+ = 495.
Intermedio 42
(1-(5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)picolmoil)azetidm-3- il)carbamato de terc-butilo
CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,97 min, MH+ = 582 Intermedio 43
(1-(5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)picolmoil)piperidm-4- il)carbamato de terc-butilo
CLEM (formico, 2 min), Tr = 0,97 min, MH+ = 610 Intermedio 44
4-(5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picolinoil)piperazina-
1-carboxilato de metilo
CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 1,00 min, MH+ = 596
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(2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofeml)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzamido)etil)carbamato de terc-butilo
CLEM (pH alto, 2 min), Tr = 1,20 min, MH- = 576 Intermedio 46
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarboml)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de metilo
A una solucion de ((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de isopropilo (5 g, 13,54 mmol) y 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)benzoato de metilo (3,90 g, 14,89 mmol) en DME (50 ml) y agua (10,0 ml) se le anadieron sucesivamente tetraquis(trifenilfosfina)paladio (1,565 g, 1,354 mmol) y carbonato de potasio (5,61 g, 40,6 mmol). La mezcla resultante se agito a 100 °C durante 1 h, despues de lo cual se dejo enfriar a la temperatura ambiente y se filtro a traves de Celite™. El filtrado se concentro al vado y el residuo se repartio entre EtOAc y agua. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentro al vacfo. El compuesto en bruto se purifico mediante cromatograffa ultrarrapida en un cartucho de gel de sflice (50 g) eluyendo con EtOAc en ciclohexano (5-60 %). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron a presion reducida para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-4- ((carbonilisopropoxi)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (4,64 g, 81 %) en forma de una goma de color blanco. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 1,09 min, MH+ = 425.
Intermedio 47
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarboml)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de litio
A una solucion de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (para una preparacion vease el Intermedio 46) (1,63 g, 3,84 mmol) en MeOH (20 ml) se le anadio hidroxido de litio (4,61 ml, 4,61 mmol). La mezcla resultante se agito a 40 °C durante 6 h, despues de lo cual se concentro a presion reducida para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-
tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de litio (1,65 g, 100 %) que no se purifico sino que se utilizo directamente en la etapa posterior. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,87 min, MH+ = 411.
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Se repartio 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de litio (1,05 g, 2,52 mmol) (para una preparacion vease el Intermedio 47) entre EtOAc y acido clortndrico (2 M). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado para proporcionar acido 4-((2S,4R)-1- acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (898 mg, 87%) en forma de un solido de color blanco. CLeM (Formiato, 2 min), Tr = 0,87 min, MH+ = 411.
Intermedio 49
2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarboml)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)feml)acetato de etilo
A un matraz cargado con (4-bromofenil)acetato de etilo (0,174 ml, 1,000 mmol), [(2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil]carbamato de 1 -metiletilo (416 mg, 1 mmol), carbonato de potasio (415 mg, 3,00 mmol) y PdCh(dppf) (73,2 mg, 0,100 mmol) se le anadieron 1,4-dioxano (6 ml) y agua (2,0 ml) y el matraz se lavo con nitrogeno. La mezcla resultante se agito con irradiacion de microondas a 120 °C durante 30 min despues se enfrio a temperatura ambiente. El volumen de dioxano se retiro al vado y el residuo se repartio entre EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa [(columna de 25 g, MeOH/DCM)] para proporcionar 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4- ((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetato de etilo (270 mg, rendimiento del 59,7 %). Este compuesto se utilizo en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,16, MH+ = 453.
Intermedio 50
Acido 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)acetico
A una solucion de {4-[(2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-({[(1-metiletil)oxi]carbonil}amino)-1,2,3,4-tetrahidro-6-
quinolinil]fenil}acetato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 49) (270 mg, 0,597 mmol) en MeOH (6 ml) y agua (2,0 ml) se le anadio hidroxido de sodio acuoso (2 N, 0,597 ml, 1,193 mmol) a temperatura ambiente y la mezcla resultante se agito durante 6 h. Se anadio hidroxido de sodio acuoso (2 N, 0,5 ml) y la mezcla se dejo reposar durante la noche. El volumen de MeOH se retiro al vado y el residuo resultante se repartio entre agua y Et2O y las fases se separaron. La fase acuosa se acidifico con acido clortndrico (2 N, 2 ml) y se extrajo dos veces
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con EtOAc. Las fases organicas combinadas se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado para proporcionar acido {4-[(2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-({[(1-metiletil)oxi]carbonil}amino)-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil]fenil}acetico
(200 mg, 0,471 mmol, rendimiento del 79 %) en forma de una espuma de color marron. Este compuesto se utilizo en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,65, MH+ = 425.
Intermedio 51
5-(((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-M)ammo)pirazma-2-carbomtrilo
Se combinaron 1-((2S,4R)-4-amino-6-bromo-2-metil-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion, vease el intermedio 1) (50 mg, 0,177 mmol), 5-cloropirazin-2-carbonitrilo (37,0 mg, 0,265 mmol) y DIPEA (0,123 ml, 0,706 mmol) en NMP (1,5 ml) y se calentaron en un matraz sellado con irradiacion de microondas a 200 °C durante 1 h. La mezcla se repartio entre agua (150 ml) y EtOAc (100 ml, 4 veces). Las fases organicas se combinaron, se lavaron con salmuera (100 ml, 2 veces), se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado. El residuo resultante se purifico mediante cromatograffa (columna de 25 g, gradiente de EtOAc/ciclohexano) para proporcionar 5-(((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)pirazina-2-carbonitrilo (61 mg, 0,158 mmol, rendimiento del 89 %) en forma de una goma de color marron.
CLEM (formiato, 2 min), Tr = 0,94 min, MH+ = 386/388.
Intermedio 52
5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopirazm-2-il)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)picolmato de metilo
Se combinaron 5-(((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)pirazina-2-carbonitrilo (para una preparacion, vease el Intermedio 51) (390 mg, 1,010 mmol), acido (6-(metoxicarbonil)piridin-3-il)boronico (219 mg, 1,21 mmol), PdCh(dppf) (111 mg, 0,151 mmol) y trietilamina (0,281 ml, 2,02 mmol) en una mezcla de MeOH seco (6 ml) y DME (1 ml). La mezcla se calento con irradiacion de microondas a 120 °C durante 45 minutos. Despues, la mezcla se concentro al vado y el residuo se purifico mediante cromatograffa (columna de 100 g, gradiente de EtOAc/ciclohexano) para proporcionar 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopirazin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-6-il)picolinato de metilo (389 mg, 0,879 mmol, rendimiento del 87 %) en forma de un solido de color rosa.
CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,84 min, MH+ = 443.
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Se anadio monohidrato de hidroxido de litio (83 mg, 1,97 mmol) en agua (5 ml) a 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5- cianopirazin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picolinato de metilo (para una preparaciOn, vease el Intermedio 52) (435 mg, 0,983 mmol) en 1,4-dioxano (5 ml) y la mezcla de reacciOn se agitO a temperature ambiente durante 70 minutos. Se anadiO acido acetico (0,169 ml, 2,95 mmol) y la mezcla resultante se agitO durante 10 minutos. La mezcla se filtrO, el sOlido recogido se lavO con agua, despues se secO en un horno de vado para proporcionar acido 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopirazin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picolmico (181 mg, 0,422 mmol, rendimiento del 43 %) en forma de un sOlido de color marrOn.
CLEM: (formiato, 2 min) Tr = 0,66 min, MH+ = 429.
Intermedio 54
5-((2S,4R)-1-acetil-4-ammo-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)picolmato de metilo
Se combinaron (2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinamina (para una preparaciOn, vease el Intermedio 1) (600 mg, 1,88 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)picolinato de metilo (593 mg, 2,25 mmol), PdCh(dppf) (206 mg, 0,282 mmol) y trietilamina (0,785 ml, 5,63 mmol) en DME (3 ml) y MeOH (12 ml) y la mezcla se calentO con irradiaciOn de microondas a 110 °C durante 45 minutos.
En un vial separado, se combinaron (2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinamina (para una preparaciOn, vease el Intermedio 1) (50 mg, 0,156 mmol), 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)picolinato de metilo (49,4 mg, 0,188 mmol), PdCh(dppf) (17,17 mg, 0,023 mmol) y trietilamina (0,065 ml, 0,469 mmol) en DME (0,5 ml) y MeOH (1 ml) y la mezcla se calentO con irradiaciOn de microondas a 110 °C durante 45 minutos. Las dos mezclas de reacciOn en bruto se combinaron y se concentraron al vado. El residuo se purificO mediante cromatograffa (columna de 100 g, EtOAc/ciclohexano seguido de gradiente de amomaco metanOlico 2 M/DCM). Las fracciones apropiadas se combinaron, se concentraron al vado y se secaron en un horno de vado para proporcionar un residuo. Este residuo se repartiO entre bicarbonato de sodio sat. ac. (100 ml) y DCM (100 ml, 3 veces). Las fases organicas se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrOfoba y se concentraron al vado para proporcionar 5-((2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picolinato de metilo (555 mg,
1,64 mmol, rendimiento del 87 %).
CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,53 min, MH+ = 340.
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A 5-((2S,4R)-4-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il-1-acetil)picolinato de metilo (para una preparacion, vease el Intermedio 54) (550 mg, 1,62 mmol) en MeOH (5 ml) se le anadio monohidrato de hidroxido de litio (78 mg, 3,24 mmol) en agua (5 ml) y la mezcla se agito a temperature ambiente durante 90 minutos. La mezcla se concentro al vado antes de anadir DCM. La mezcla se filtro, se seco al pasar a traves de una frita hidrofoba y se concentro al vado para proporcionar acido 5-((2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picoKnico (517 mg, 1,59 mmol, rendimiento del 98 %).
CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,38 min, MH+ = 326.
Intermedio 56
1-((2S,4R)-4-ammo-2-metil-6-(6-(morfolma-4-carboml)piridm-3-M)-3,4-dihidroqumolm-1(2H)-il)etanona
Se combinaron acido 5-((2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picoKnico (para una preparacion, vease el intermedio 55) (510 mg, 1,567 mmol), morfolina (0,149 ml, 1,72 mmol), HATU (656 mg, 1,724 mmol) y DIPEA (0,821 ml, 4,70 mmol) en DMF (5 ml) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante la noche. Se anadio morfolina (0,149 ml, 1,72 mmol) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 3h adicionales. La mezcla se concentro al vado antes de que se disolviera en DCM y se cargara en una columna acido de aminopropilo SPE (50 g). La columna se eluyo con MeOH al 10% en DCM y las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vado para proporcionar un residuo. Este residuo se purifico mediante cromatograffa (columna de 50 g, gradiente de amornaco metanolico 2 M/DCM) para proporcionar 1-((2S,4R)-4- amino-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (470 mg, 1,19 mmol, rendimiento del 76 %) en forma de un solido de color beige. CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,48 min, MH+ = 395.
Intermedio 57
4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de etilo
Se anadio rerc-butoxido de sodio (135 mg, 1,41 mmol) a una suspension de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-
1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 16) (450 mg, 1,28 mmol),
2-bromopiridina (403 mg, 2,55 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (40 mg, 0,102 mmol) y tris(dibencildienoacetona)dipaladio(0) (47 mg, 0,051 mmol) en tolueno anhidro (4,5 ml). La mezcla se calento con irradiacion de microondas a 120 °C durante 1 h en un vial sellado. La mezcla se repartio entre EtOAc y agua, la fase
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acuosa se extrajo dos veces con EtOAc, las fases organicas combinadas se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar un residuo. El residuo se purifico mediante cromatograffa (columna de 10 g, gradiente de EtOAc/ciclohexano seguido de gradiente de MeOH/EtOAc) para proporcionar 4- ((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino )-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de metilo (216 mg, 0,503 mmol, rendimiento del 39 %) en forma de una goma de color marron. CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,84 min, MH+ 430.
Intermedio 58
4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de litio
Se trato 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 57) (216 mg, 0,503 mmol) en EtOH (1 ml) y agua (0,5 ml) con monohidrato de hidroxido de litio (22 mg, 0,524 mmol) y la mezcla se agito a t.a. durante el fin de semana. Una porcion adicional de hidroxido de litio monohidratado (4 mg, 0,095 mmol) se anadio a la reaccion y la mezcla se agito durante 1 h. La mezcla se concentro a sequedad para proporcionar el producto en bruto 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2- ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de litio (160 mg) que se utilizo directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
CLEM: (Formiato, 2 min), Tr = 0,62 min, MH+ 402.
Intermedio 59
4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5-metMpiridm-2-M)ammo)1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de etilo
Se anadio ferc-butoxido de sodio (135 mg, 1,41 mmol)) a una suspension de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-
1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de etilo (para una preparacion vease el Intermedio 16) (450 mg, 1,28 mmol),
2-bromo-metilpiridina (439 mg, 2,55 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (40 mg,
0,102 mmol) y tris(dibencildienoacetona)dipaladio(0) (47 mg, 0,051 mmol) en tolueno anhidro (4,5 ml). La mezcla se calento con irradiacion de microondas a 120 °C durante 1 h en un vial sellado. La mezcla se repartio entre EtOAc y agua, la fase acuosa se extrajo dos veces con EtOAc, las fases organicas combinadas se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar un residuo. El residuo se purifico mediante cromatograffa (columna de 10 g, gradiente de EtOAc/ciclohexano seguido de gradiente de MeOH/EtOAc) para proporcionar un residuo. Este residuo se disolvio en una mezcla de EtOAc (0,6 ml) y ciclohexano (0,4 ml). La solucion se trato con ciclohexano (3 ml) para proporcionar una emulsion, que se dejo reposar a temperatura ambiente durante un fin de semana. La solucion se decanto del aceite de color marron oscuro precipitado y se concentro a sequedad en una corriente de nitrogeno para proporcionar un aceite. Este aceite se trituro con ciclohexano (3 ml, 2 veces), la goma residual se aislo retirando por decantacion el ciclohexano, se disolvio en EtOAc y se concentro a sequedad en una corriente de nitrogeno para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5- metilpiridin-2-il)amino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de etilo en bruto en forma de una espuma de color marron palido (240 mg) que se utilizo directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional.
CLEM: (formiato, 2 min), tr = 0,88 min, MH+ 444.
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Se trato 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5-metilpiridin-2-il)amino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de etilo (Intermedio 59) en bruto (238 mg) en EtOH (2 ml) y agua (1 ml) con monohidrato de hidroxido de litio (26 mg, 0,620 mmol). La solucion se agito a temperatura ambiente durante 5 h. Se anadio una porcion adicional de monohidrato de hidroxido de litio (4 mg, 0,095 mmol) y la mezcla se dejo a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentro a sequedad para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5-metilpiridin-2-il)amino)-
1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de litio en bruto en forma de una espuma de color marron (240 mg) que se utilizo directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM: (Formiato, 2 min), Tr = 0,65 min, MH+ 416.
Intermedio 61
((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-il)carbamato de ferc-butilo
Se combinaron ((2S,4R)-1-acetil-6-bromo-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de ferc-butilo (para una preparacion, vease el Intermedio 29) (2,0 g, 5,22 mmol), bis(pinacolato)diboro (2,92 g, 11,48 mmol), PdCh(dppf) (0,191 g, 0,261 mmol) y acetato de potasio (1,54 g, 15,65 mmol) en 1,4-dioxano (25 ml) y se desgasificaron. La mezcla despues se calento en una atmosfera de nitrogeno durante 75 min a 105 °C. La mezcla se concentro al vacfo y el residuo se purifico mediante cromatograffa (columna de 100 g, EtOAc/ciclohexano) para proporcionar ((2S,4R)- 1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de ferc-butilo (2,36 g, 4,94 mmol, rendimiento del 95 %).
CLEM: (formiato, 2 min), Tr =1,21 min, MH+ = 431.
Intermedio 62
6-((2S,4R)-1-acetil-4-((ferc-butoxicarboml)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)mcotmato de metilo
Se combinaron ((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-
il)carbamato de ferc-butilo (para una preparacion vease el Intermedio 61) (2,2 g, 5,11 mmol), 6-bromonicotinato de de metilo (1,325 g, 6,13 mmol), Pd(Pph3)4 (0,591 g, 0,511 mmol) y carbonato de potasio (2,120 g, 15,34 mmol) en metanol (10 ml) y DME (3 ml) y se calentaron con irradiacion de microondas a 100 °C durante 70 minutos .
En un vial separado, se combinaron ((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de ferc-butilo (para una preparacion vease el Intermedio 61) (2,2 g, 5,11 mmol), 6-
bromonicotinato de metilo (1,325 g, 6,13 mmol), Pd(PPh3)4 (0,591 g, 0,511 mmol) y carbonato de potasio (2,120 g, 15,34 mmol) en metanol (10 ml) y DME (3 ml) y se calentaron con irradiacion de microondas a 1O0 °C durante 70 minutos. Las dos mezclas de reaccion se combinaron y se repartieron entre agua (150 ml) y DCM (150 ml, 3 veces). La fase acuosa se acidifico a pH 3 mediante la adicion de HCl ac. y se extrajo con DCM (100 ml, 3 veces). Las fases 5 organicas combinadas se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((ferc-butoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)nicotinato de metilo en bruto (2,2 g) que se utilizo directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM: (formiato, 2 min), Tr =1,06 min, MH+ 440.
Intermedio 63
10 Acido 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((ferc-butoxicarboml)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)mcotmico
A una solucion en agitacion de 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((ferc-butoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)nicotinato de metilo en bruto (Intermedio 62) (2,2 g, 5,01 mmol) en MeOHI (12 ml), se le anadio monohidrato de hidroxido de litio (0,144 g, 6,01 mmol) en agua (12 ml) y se la mezcla se calento a 50 °C durante 70 minutos. Se 15 anadio MeOH (10 ml) y la mezcla se agito a 50 °C durante otros 50 minutos. La mezcla se dejo enfriar a temperatura ambiente antes de que se repartiera entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (150 ml) y DCM (150 ml, 3 veces). La fase acuosa se trato despues con HCl 2 M hasta acidez (pH ~3) antes de que se extrajera con DCM (150ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar acido 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((ferc-butoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4- 20 tetrahidroquinolin-6-il)nicotmico (2,08 g, 4,89 mmol). CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,86 min, MH+ 426.
Intermedio 64
((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(5-(morfolma-4-carboml)piridm-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-il)carbamato de
ferc-butilo
25 Se combinaron acido 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((ferc-butoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-
il)nicotmico (para una preparacion, vease el Intermedio 63) (2,05 g, 4,82 mmol), morfolina (2,084 ml, 24,09 mmol), HATU (2,015 g, 5,30 mmol) y DIPEA (2,52 ml, 14,45 mmol) en DMF (25 ml) y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante 90 minutos. La mezcla se concentro al vado antes de que se disolviera en DCM y se cargara en una columna SPE de aminopropilo (70 g). La columna se eluyo con MeOH al 10% en DCM y las fracciones 30 apropiadas se combinaron y se concentraron a sequedad al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa (columna de 100 g, gradiente de EtOAc/ciclohexano) para proporcionar ((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(5-(morfolina-4- carbonil)piridin-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de ferc-butilo (2,05 g, 4,14 mmol, rendimiento del 86 %). CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,86 min, MH+ 495.
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Clorhidrato de 1-((2S,4R)-4-ammo-2-metil-6-(5-(morfolma-4-carboml)piridm-2-il)-3,4-dihidroqumolm-1(2H)-
il)etanona
Se anadio acido clorlddrico 4 M en 1,4-dioxano (10,11 ml, 40,4 mmol) a ((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(5-(morfolina-4- carbonil)piridin-2-il)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de ferc-butilo (para una preparacion, vease el Intermedio 64) (2 g, 4,04 mmol) a temperatura ambiente, seguido de MeOH (10 ml) y DCM (10 ml) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 2 minutos. La mezcla se concentro al vado para proporcionar 1-((2S,4R)-4- amino-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (1,60 g, 3,71 mmol, rendimiento del 92 %).
CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,50 min, MH+ 395.
Intermedio 66
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de etilo
Se trataron 4-((2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de etilo (para una
preparacion, vease el Intermedio 16) (300 mg, 0,851 mmol) y 6-cloronicotinonitrilo (236 mg, 1,702 mmol) en NMP anhidro (5 ml) con DIPEA (0,445 ml, 2,55 mmol). El vial de reaccion se sello y se calento con irradiacion de microondas a 200 °C durante 2 h. La solucion enfriada se diluyo con agua a -20 ml, se agito y el solido pegajoso resultante se aislo por decantacion. El solido se disolvio en EtOAc, se lavo la solucion con salmuera y se seco al pasar a traves de una frita hidrofoba. La solucion se concentro al vado y el residuo se purifico por MDAP (formiato) para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de etilo en bruto (120 mg) en forma de una goma de color beige que se utilizo directamente en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM: (Formiato, 2 min), Tr = 1,12 min, MH+ 455.
Intermedio 67
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)benzoato de litio
Una solucion de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de etilo (Intermedio 66) en bruto (120 mg) en EtOH (2 ml) se trato con monohidrato de hidroxido de litio (13 mg, 0,303 mmol) y agua (1 ml). La mezcla se agito a temperatura ambiente durante -24 h. La solucion se concentro a sequedad para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoato de litio en bruto en forma de una espuma de color amarillo crujiente (110 mg) que se utilizo directamente
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en la siguiente etapa sin purificacion adicional. CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,87 min, MH+ 427.
Ejemplo 1
3-(4-((2S,4R)-1-AcetN-4-((5-cianopiNdm-2-N)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumoMn-6-N)feml)-W-(2-
(dimetilamino)etil)propanamida
A una solucion de acido 3-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)fenil)propanoico (para una preparacion vease el Intermedio 10) (58 mg, 0,128 mmol) y N1,N1-dimetiletano-1,2- diamina (22,50 mg, 0,255 mmol) en DMF (3 ml) se le anadieron HAtU (72,8 mg, 0,191 mmol) y DIPEA (0,067 ml, 0,383 mmol). La mezcla resultante se agito durante 30 min, despues, mezcla de reaccion se repartio entre agua y EtOAc. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces), las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo en bruto se disolvio en MeOH/DMSO 1:1 y se purifico por MDAP (formiato). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vado para proporcionar 3-(4-((2s,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)-N-(2-
(dimetilamino)etil)propanamida (34,6 mg, 48 %) en forma de un aceite incoloro viscoso. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,71 min, MH+ = 525.
Ejemplo 2
3-(4-((2S,4R)-1-Acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)-N-(2-
hidroxietil)propanamida
A una solucion de 3-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-
il)fenil)propanoico (para una preparacion vease el Intermedio 10) (44 mg, 0,097 mmol) y etanolamina (0,012 ml, 0,194 mmol) en dMf (3 ml) se le anadieron HATU (55,2 mg, 0,145 mmol) y DIPEA (0,051 ml, 0,290 mmol). La mezcla resultante se agito durante 40 min, despues se repartio entre agua y EtOAc. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces), las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo en bruto se disolvio en MeOH/DMSO 1:1 y se purifico por MDAP (formiato). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vado para proporcionar 3-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5- cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)-W-(2-hidroxietil)propanamida (22,8 mg, 47 %) en forma de un aceite de color amarillo viscoso. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,80 min, MH+ = 498.
5 A una solucion de acido 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)fenil)acetico, sal de litio (Intermedio 9) (l66 mg, 0,377 mmol) y etanolamina (0,034 ml, 0,565 mmol) en DMF (3 ml) se le anadieron HATU (287 mg, 0,754 mmol) y DIPEA (0,l97 ml, 1,131 mmol). La mezcla resultante se agito a temperature ambiente durante 1 h, la mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron 10 sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo en bruto se disolvio en MeOH/DMSO 1:1 y se purifico por MDAP (formiato). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vado para proporcionar 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)-N-(2- hidroxietil)acetamida (21 mg, 11 %) en forma de un aceite incoloro. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,76 min, MH+ = 484.
15 Ejemplo 4
2-(4-((2S,4R)-1-AcetN-4-((5-cianopiridm-2-N)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)feml)-W-(1,3-
dihidroxipropan-2-il)acetamida
A una solucion de acido 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- 20 il)fenil)acetico, sal de litio (para una preparacion vease el Intermedio 9) (169 mg, 0,384 mmol) y 2-aminopropano-1,3- diol (69,9 mg, 0,767 mmol) en dMf (2 ml) se le anadieron HATU (190 mg, 0,499 mmol) y DIPEA (0,201 ml, 1,151 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo en 25 bruto se disolvio en MeOH/DMSO 1:1 y se purificaron por MDAP (formiato). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vado para proporcionar 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-
1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)-A/-(1,3-dihidroxipropan-2-il)acetamida (83 mg, 42%) en forma de un aceite incoloro. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,73 min, MH+ = 514.
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A una solucion de acido 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)fenil)acetico, sal de litio (para una preparacion vease el Intermedio 9) (125 mg, 0,284 mmol) y W1,W1-dimetiletano- 1,2-diamina (32,5 mg, 0,369 mmol) en DMF (3 ml) se le anadieron HATU (162 mg, 0,426 mmol) y DIPEA (0,149 ml, 0,851 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 2 h, la mezcla de reaccion se diluyo con EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo en bruto se disolvio en MeOH/DMSO 1:1 y se purifico por MDAP (formiato). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron al vado para proporcionar 2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-6-il)fenil)-W-(2-(dimetilamino)etil)acetamida (59 mg, 41 %) en forma de un aceite incoloro. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,65 min, MH+ = 511.
Ejemplo 6
Clorhidrato de ((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2-ammoetil)carbamoil)feml)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-
il)carbamato de isopropilo
Una solucion de {(2S,4R)-1-acetil-6-[4-({[2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)etil]amino}carbonil)fenil]-2-metil-
1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil}carbamato de 1 -metiletilo (para una preparacion vease el Intermedio 37) (90 mg, 0,163 mmol) en dioxano (2 ml) se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 2 ml, 8,00 mmol) y la mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 5 h, despues se concentro al vado. El residuo resultante se trituro con Et2O y se aislo por filtracion para proporcionar clorhidrato de ((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2- aminoetil)carbamoil)fenil)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de isopropilo (68 mg, 0,139 mmol, rendimiento del 85 %) en forma de un solido de color amarillo palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,78 min.
Ejemplo 7
((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2-(dimetilammo)etil)carbamoil)feml)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-il)carbamato de isopropilo
A una solucion de acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 48) (67 mg, 0,163 mmol) y W1,W1-dimetiletano-1,2-diamina
(28,8 mg, 0,326 mmol) en DMF (2 ml) se le anadieron HATU (93 mg, 0,245 mmol) y DIPEA (0,086 ml, 0,490 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 1 h, despues se hidrolizo por adicion de agua y EtOAc. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo se disolvio en 5 MeOH/DMSO 1:1 y se purifico por MDAP (formiato). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron a presion reducida para proporcionar ((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2-(dimetilamino)etil)carbamoil)fenil)-2-metil-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-4-il)carbamato de isopropilo (35 mg, 41 %) en forma de un aceite incoloro viscoso. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,65 min, MH+ = 481.
Ejemplo 8
10 ((2S,4R)-1-acetM-6-(4-((2-hidroxietM)carbamoN)feml)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-M)carbamato de
isopropilo
A una solucion de acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((isopropoxicarbonil)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 48) (116 mg, 0,283 mmol) y etanolamina (0,034 ml, 15 0,565 mmol) en DMF (3 ml) se le anadieron HATU (161 mg, 0,424 mmol) y DIPEA (0,148 ml, 0,848 mmol). La
mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 1 h, despues se anadieron agua y EtOAc. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron al vado. El residuo se disolvio en MeOH/DMSO 1:1 y se purifico por MDAP (formiato). Las fracciones apropiadas se combinaron y se concentraron a presion 20 reducida para proporcionar ((2S,4R)-1-acetil-6-(4-((2-hidroxietil)carbamoil)fenil)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-
il)carbamato de isopropilo (102 mg, 80%) en forma de un solido de color blanco. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,76 min, MH+ = 454.
Ejemplo 9
Clorhidrato de ((2S,4R)-1-acetM-6-(4-(2-((2-ammoetM)ammo)-2-oxoetN)feml)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm- 25 4-il)carbamato de isopropilo
Una solucion de {(2S,4R)-1-acetil-6-[4-(2-{[2-({[(1,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)etil]amino}-2-oxoetil)fenil]-2-metil-
1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil}carbamato de 1 -metiletilo (para una preparacion vease el Intermedio 38) (60 mg, 0,106 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml) se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 2 ml, 8,00 mmol) y la
30 mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 5 h y despues se concentro al vado. El residuo se trituro con Et2O y el solido se aislo por filtracion para proporcionar clorhidrato de [(2S,4R)-1-acetil-6-(4-{2-[(2- aminoetil)amino]-2-oxoetil}fenil)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-4-quinolinil]carbamato de 1-metiletilo (28 mg, 0,056 mmol, rendimiento del 52,6 %) en forma de un solido de color amarillo palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,79 min, MH+ = 467.
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A un matraz cargado con acido 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)nicotmico (para una preparacion vease el Intermedio 7) (90 mg, 0,211 mmol) y HATU (96 mg, 0,253 mmol) se le anadio DMF (3 ml) y la mezcla resultante se trato con DIPEA (0,110 ml, 0,632 mmol). Despues de agitar durante 5 min, la mezcla se trato con W1,A/1-dimetiletano-1,2-diamina (37,1 mg, 0,421 mmol). Despues de agitar durante 3 min, la solucion se repartio entre EtOAc y solucion acuosa saturada de NaHCO3 y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (3 veces), despues se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico por MDAP (HpH). Las fracciones apropiadas se recogieron y se concentraron al vado. El residuo se disolvio posteriormente en MeOH y se seco (frita hidrofoba). El disolvente se retiro y el residuo se trituro en Et2O para proporcionar 6-((2S,4R)-1-acetil-4- ((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2-(dimetilamino)etil)nicotinamida (36 mg,
0,072 mmol, rendimiento del 34,4 %) en forma de un solido de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,73 min, MH+ = 471.
Ejemplo 11
6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-il)ammo)-2-metM-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-W-(1,3-dihidroxipropan-
2-il)nicotinamida
A un matraz cargado con acido 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)nicotmico (para una preparacion vease el Intermedio 7) (90 mg, 0,211 mmol) y HATU (96 mg, 0,253 mmol) se le anadio DMF (3 ml) y la mezcla resultante se trato con DIPEA (0,110 ml, 0,632 mmol). Despues de agitar durante 5 min, la mezcla se trato con 2-aminopropano-1,3-diol (38,4 mg, 0,421 mmol). Despues de agitar durante 3 min, la solucion se repartio entre EtOAc y solucion acuosa saturada de NaHCO3 y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (3 veces), despues se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico por MDAP (HpH). Las fracciones apropiadas se recogieron y se concentraron al vado. El residuo se disolvio posteriormente en MeOH y se seco (frita hidrofoba). El disolvente se retiro y el residuo se trituro en Et2O para proporcionar 6-((2S,4R)-1-acetil-4- ((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(1,3-dihidroxipropan-2-il)nicotinamida (26 mg, 0,052 mmol, rendimiento del 24,67 %) en forma de un solido de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,81 min, MH+ = 498.
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A un matraz cargado con acido 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)nicotmico (para una preparacion vease el Intermedio 7) (90 mg, 0,211 mmol) y HATU (96 mg, 0,253 mmol) se le anadio DMF (3 ml) y la mezcla resultante se trato con DIPEA (0,110 ml, 0,632 mmol). Despues de agitar durante 5 min, la mezcla se trato con 2-aminoetanol (0,013 ml, 0,211 mmol). Despues de agitar durante 3 min, la solucion se repartio entre EtOAc y solucion acuosa saturada de NaHCO3 y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (3 veces), despues se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico por MDAP (HpH). Las fracciones apropiadas se recogieron y se concentraron al vacfo. El residuo se disolvio posteriormente en MeOH y se seco (frita hidrofoba). El disolvente se retiro y el residuo se trituro en Et2O para proporcionar 6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5- cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2-hidroxietil)nicotinamida (37 mg, 0,079 mmol,
rendimiento del 37,3 %) en forma de un solido de color blanco. Cl/EM (HpH, 2 min), Tr = 0,70 min, MH+ = 501.
Ejemplo 13
4-((2S,4R)-1-acetN-4-((5-cianopiridm-2-N)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)-W-((S)-2,3-
dihidroxipropil)benzamida
Una solucion de acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 4) (90 mg, 0,211 mmol) en DMF (2 ml) se trato con EDC (48,5 mg, 0,253 mmol), clorhidrato de HOBT (38,8 mg, 0,253 mmol) y N-etilmorfolina (0,080 ml, 0,633 mmol) y despues de 3 minutos con (S)-3-aminopropano-1,2-diol (38,5 mg, 0,422 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 5 h, despues se anadieron EDC (48,5 mg, 0,253 mmol), N-etil morfolina (0,080 ml, 0,633 mmol), HOBT (38,8 mg, 0,253 mmol) y (S)-3-aminopropano-1,2-diol (38,5 mg, 0,422 mmol) adicional y la mezcla correspondiente se agito durante 16 h y despues se concentro al vacfo. El residuo se repartio entre agua y EtOAc y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (3 veces), despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vacfo. El residuo se purifico por MDAP para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-
1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-((S)-2,3-dihidroxipropil)benzamida (30 mg, 29%) en forma de un solido de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,75 min, MH+ = 500.
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Una solucion de acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 4) (90 mg, 0,211 mmol) en DMF (2 ml) se trato con EDC (48,5 mg, 0,253 mmol), clorhidrato de HOBT (38,8 mg, 0,253 mmol) y W-etilmorfolina (0,080 ml, 0,633 mmol) y despues de 3 min con 2-aminoetanol (0,025 ml, 0,422 mmol)). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 5 h, despues se anadieron EdC (48,5 mg, 0,253 mmol), W-etil morfolina (0,080 ml, 0,633 mmol), HOBT (38,8 mg, 0,253 mmol) y 2-aminoetanol adicional (0,025 ml, 0,422 mmol) y la mezcla correspondiente se agito durante 16 h y despues se concentro al vado. El residuo se repartio entre agua y EtOAc y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces) y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (3 veces), despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico por MDAP para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-
hidroxietil)benzamida (8 mg, 8 %) en forma de un solido de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,78 min, MH+ = 470.
Ejemplo 15
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiNdm-2-il)ammo)-2-metM-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-W-(1,3-dihidroxipropan-
2-il)benzamida
A un matraz cargado con acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 4) (90 mg, 0,211 mmol) y HATU (96 mg, 0,253 mmol) se le anadio DMF (3 ml) y la mezcla resultante se trato con DIPEA (0,111 ml, 0,633 mmol). Despues de 5 min, la mezcla se trato con 2-aminopropano-1,3-diol (38,5 mg, 0,422 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 1 h, despues de lo cual la mayor parte del disolvente se retiro y el residuo se repartio entre EtOAc y NaHCO3 acuoso saturado. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con y NaHCO3 acuoso saturado (3 veces), despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico por MDAP (HpH). Las fracciones apropiadas se recogieron y se concentraron al vado. El residuo se disolvio en MeOH y se seco (frita hidrofoba). Despues, el disolvente se retiro al vado y el residuo se trituro con Et2O para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-
1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(1,3-dihidroxipropan-2-il)benzamida (32 mg, 0,064 mmol, rendimiento del 30%) en forma de un solido de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,75 min, MH+ = 500.
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A un matraz cargado con acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 4) (100 mg, 0,234 mmol) y HATU (107 mg, 0,281 mmol) se le anadio DMF (2 ml) y la mezcla resultante se trato con DIPEA (0,123 ml, 0,703 mmol). Despues de 5 min, se anadio W1,W1-dimetiletano-1,2-diamina (41,3 mg, 0,469 mmol) y la mezcla se agito durante 30 min. El volumen de DMF se retiro y el residuo se repartio entre EtOAc y NaHCO3 acuoso saturado. Las fases se separaron y la fase organica se lavo con NaHCO3 acuoso saturado, se seco sobre MgSO4 y se concentro al vado. El residuo se purifico por MDAP (HpH). Las fracciones apropiadas se recogieron y se concentraron al vado. El residuo se co-evaporo con tolueno, se disolvio en 1,4-dioxano (4 ml) y posteriormente se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 1 ml). La mezcla resultante se agito durante 5 min a temperatura ambiente y se concentro al vado. El residuo obtenido se trituro con Et2O despues se seco al vado para proporcionar diclorhidrato de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2- il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-(dimetilamino)etil)benzamida, (38 mg, 0,067 mmol, rendimiento del 28,5 %) en forma de un solido de color amarillo muy palido. cLeM (High pH, 2 min), Tr = 0,87 min, MH+ = 497.
Ejemplo 17
Clorhidrato de 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridm-2-M)ammo)-2-metM-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-M)-W-(2- aminoetil)benzamida
Una suspension de (2-(4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-quinolin-6-
il)benzamido)etil)carbamato de terc-butilo (para una preparacion vease el Intermedio 39) (65 mg, 0,114 mmol) en
1,4-dioxano (1 ml) a temperatura ambiente se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 2 ml, 8,00 mmol) y la suspension resultante se agito a esta temperatura durante 1 h, despues se concentro al vado. El precipitado formado se trituro con Et2O, se aislo por filtracion y se seco al vado para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5- cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2-aminoetil)benzamida, clorhidrato (60 mg, 0,119 mmol, rendimiento del 104 %) en forma de un solido de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,75 min, MH+ = 469.
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4-((2S,4R)-1-acetM-2-metil-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-((S)-2,3-
dihidroxipropil)benzamida
Una solucion de aciso 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 23) (70 mg, 0,174 mmol) en DMF (2 ml) se trato con EDC (40,1 mg, 0,209 mmol), HOBT (32,0 mg, 0,209 mmol) y W-etilmorfolina (0,066 ml, 0,523 mmol) y despues de 3 minutos con (S)-
3- amino-propano-1,2-diol (15,89 mg, 0,174 mmol). La mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 5 h
despues se anadieron EdC (40,1 mg, 0,209 mmol), W-etilmorfolina (0,066 ml, 0,523 mmol), HOBT (32,0 mg, 0,209 mmol) y (S)-3-aminopropane-1,2-diol (15,89 mg, 0,174 mmol) adicionales y la mezcla se agito durante 16 h antes de concentrarse al vado. El residuo se repartio entre agua y EtOAc y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 acuoso saturado (3 veces) y despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. La trituracion del residuo con Et2O proporciono 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-((S)-2,3-
dihidroxipropil)benzamida (36 mg, 0,076 mmol, rendimiento del 43,5 %) en forma de un solido de color amarillo palido.
CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,76 min, MH+ = 475
Los siguientes analogos se prepararon utilizando el procedimiento anterior con la amina apropiada:- Ejemplo 19
4- ((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-(2-hidroxietil)benzamida
CL/EM (HpH, 2 min), Tr = 0,78 min, MH+ = 445
Ejemplo 20
4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-
(dimetilamino)etil)benzamida
4-((2S,4R)-1-acetM-2-metN-4-(pindm-2-Mammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumoMn-6-N)-N-(1,3-dihidroxipropan-2-
il)benzamida
5 A un matraz cargado con acido 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 23) (70 mg, 0,174 mmol) y HATU (80 mg, 0,209 mmol) se le anadio DMF (3 ml) y la solucion resultante se trato con DIPEA (0,091 ml, 0,523 mmol) y despues de 5 min mediante 2-aminopropano-1,3-diol (31,8 mg, 0,349 mmol). La reaccion se concentro al vado, el residuo se repartio entre agua y EtOAc. Las fases se separaron y la acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces). Las fases organicas combinadas se 10 lavaron con NaHCO3 saturado (3 veces) y despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico por MDAP (HpH) y el residuo se trituro con Et2O para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-2- metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(1,3-dihidroxipropan-2-il)benzamida (17 mg, 0,036 mmol, rendimiento del 20,55 %) en forma de un solido de color amarillo muy palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,74 min, MH+ = 475.
15 El siguiente analogo se preparo utilizando el procedimiento anterior con la amina apropiada:- Ejemplo 22
4-((2S,4R)-1-acetM-2-metN-4-(pindm-2-Mammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)-N-(2-ammoetN)benzamida
Una suspension de (2-(4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-
20 il)benzamido)etil)carbamato de ferc-butilo (para una preparacion vease el Intermedio 40) (35 mg, 0,064 mmol) en
1,4-dioxano (1 ml) a temperatura ambiente se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 2 ml, 8,00 mmol) y la suspension resultante se agito durante 1 h a esta temperatura y despues se concentro al vado. El residuo se trituro con Et2O, el solido se aislo por filtracion y se seco al vado domestico para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-2- metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-aminoetil)benzamida, clorhidrato (30 mg, 0,062 mmol, 25 rendimiento del 97 %) en forma de un solido de color amarillo muy palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,74 min, MH+ = 444.
Ejemplo 23
6-((2S,4R)-1-acetM-2-metN-4-(pindm-2-Mammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)-N-(2-
(dimetilamino)etil)nicotinamida
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A un matraz cargado con acido 6-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6- il)nicotmico (para una preparacion vease el Intermedio 28) (50 mg, 0,124 mmol) y HATU (56,7 mg, 0,149 mmol) se le anadio DMF (2 ml) y la mezcla resultante se trato con DIPEA (0,065 ml, 0,373 mmol) a continuacion, despues de 5 min con N1,N1-dimetiletano-1,2-diamina (21,90 mg, 0,248 mmol). La solucion resultante se agito a temperatura ambiente durante 30 min despues se repartio entre EtOAc y NaHCO3 saturado. La fase organica se separo y la fase acuosa se extrajo con EtOAc (2 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se dividio en 2 porciones y cada una se purifico por MDAP (HpH). Se recogieron las fracciones apropiadas y se concentraron al vado. El residuo se disolvio en MeOH y se concentro de nuevo, despues, se co-evaporo con tolueno. El residuo se disolvio a continuacion en 1,4-dioxano (2 ml) y se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 0,5 ml). Despues de 2 min el disolvente se evaporo al vado y el precipitado formado se trituro con Et2O, despues se seco al vado para proporcionar 6-((2S,4R)-1-acetil-2- metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-(dimetilamino)etil)nicotinamida, en forma de la sal de d- clorhidrato (37 mg, 0,068 mmol, rendimiento del 54,6 %) en forma de un solido de color amarillo. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,81 min, MH+ = 473.
Los siguientes analogos se prepararon utilizando el procedimiento anterior con la amina apropiada: - Ejemplo 24
6-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-(2-hidroxietM)mcotmamida
CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,73 min, MH+ = 446. Ejemplo 25
6-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(pindm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-(1,3-dihidroxipropan-2-
il)nicotinamida
CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,69 min, MH+ = 476. Ejemplo 26
4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(pinmidm-2-ilammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-(2-
(dimetilamino)etil)benzamida
A un matraz cargado con 4-((2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-
(dimetilamino)etil)benzamida (para una preparacion vease el Intermedio 32) (197 mg, 0,5 mmol), 2-bromopiridina
(238 mg, 1,500 mmol), ferc-butoxido de sodio (240 mg, 2,500 mmol), 2-(dimetilamino)-2'-(diciclohexilfosfino bifenilo (197 mg, 0,500 mmol) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (229 mg, 0,250 mmol) se le anadio tolueno desgasificado (4 ml) y la mezcla resultante se agito en atmosfera de nitrogeno a 100 °C. Despues de 2 h la mezcla se enfrio a temperatura ambiente y la mayor parte del disolvente se evaporo al vado. El residuo se repartio entre 5 EtOAc y solucion saturada de NaHCO3 y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado acuoso (3 veces), se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se disolvio en DCM y se cargo en una columna SCX (20 g). El cartucho se eluyo con DCM y despues amomaco en MeOH (2 N). Las fracciones de amomaco metanolico se concentraron al vado y se purificaron adicionalmente mediante cromatograffa (columna de 25 g, elucion con amomaco 2 N en gradiente de
10 MeOH/DCM) para proporcionar un residuo que se disolvio en 1,4-dioxano (4 ml) y la solucion se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 0,5 ml). El precipitado que se formo se aislo por filtracion y se seco a 60 °C al vado durante 2h para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(pirimidin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2- (dimetilamino)etil)benzamida, clorhidrato (93 mg, 0,183 mmol, 36,5 % rendimiento del 25 g) en forma de un solido de color amarillo palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,79 min, MH+ = 473.
15 Ejemplo 27
4-((2S,4R)-1-acetN-2-metN-4-(pirazm-2-Nammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumoMn-6-N)-N-(2-
(dimetilamino)etil)benzamida
A un matraz cargado con 4-((2S,4R)-1-acetil-4-amino-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-
20 (dimetilamino)etil)benzamida (para una preparacion vease el Intermedio 32) (197 mg, 0,5 mmol), ferc-butoxido de sodio (240 mg, 2,500 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (229 mg, 0,250 mmol) y 2-(dimetilamino)-2'- (diciclohexilfosfino)bifenilo (197 mg, 0,500 mmol) se le anadio tolueno desgasificado (4 ml). La mezcla resultante se trato con 2-cloropirazina (0,134 ml, 1,500 mmol) y despues se agito en atmosfera de nitrogeno a 100 °C durante ~45 min. La mezcla se enfrio a temperatura ambiente y la mayor parte del disolvente se evaporo al vado. El residuo 25 se repartio entre EtOAc y una solucion saturada de NaHCO3 y las fases se separaron. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado acuoso (3 veces), se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se disolvio en DCM y se cargo en una columna SCX (20 g). El cartucho se eluyo con DCM, despues con amomaco en MeOH (2 N). Las fracciones de amomaco metanolico se concentraron al vado y se purificaron adicionalmente mediante cromatograffa (columna de 25 g, elucion con 30 amomaco 2 N en gradiente de MeOH/DCM) para proporcionar un residuo que se disolvio en 1,4-dioxano (4 ml). La solucion se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4-dioxano (4 N, 0,5 ml). El precipitado formado se aislo por filtracion y se seco a 60 °C al vado durante 2 h para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(pirimidin-2-ilamino)-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-(dimetilamino)etil)benzamida, clorhidrato (93 mg, 0,183 mmol, rendimiento del 36,5%) en forma de un solido de color blanco. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,79 min, MH+ = 473.
35 Ejemplo 28
5-((2S,4R)-1-acetN-4-((5-cianopindm-2-N)ammo)-2-metM-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)-N-(2-
(dimetilamino)etil)picolinamida
Se disolvio acido 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picolmico 40 (para una preparacion vease el Intermedio 34) (60 mg, 0,140 mmol) en DMF anhidro (3 ml) y se anadio HATU (64,0 mg, 0,168 mmol). Se anadio DIPEA (0,074 ml, 0,421 mmol) y despues de otros 5 minutos de agitacion a r.t. Se
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anadio N1,N1-dimetiletano-1,2-diamina (0,019 ml, 0,281 mmol) y la mezcla de reaccion se agito durante la noche a t.a. la mezcla de reaccion se concentro al vado y se repartio entre EtOAc y agua. La fase organica se separo, se seco (Na2SO4) y se concentro para proporcionar un residuo de color amarillo que se purifico mediante cromatograffa sobre un cartucho de sflice (10 g), eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM (2-12%, mas de 120 mls) para proporcionar un solido de color amarillo palido (28 mg). Este solido se trato con 1,1 equivalentes de cloruro de hidrogeno 1 M en eter dietflico y la mezcla se trituro con eter dietflico para proporcionar 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5- cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2-(dimetilamino)etil)picolinamida, clorhidrato (32 mg, 0,054 mmol, 38,4 %), solido de color amarillo. CL/EM (formico, 2 min), Tr =0,65 min, MH+ = 498.
Los siguientes analogos se prepararon utilizando el procedimiento anterior con la amina apropiada:-
Ejemplo 29
5-((2S,4R)-1-acetM-4-((5-danopiridm-2-M)ammo)-2-metM-1,2,3,4-tetrahidroqumoMn-6-N)-N-(2-
hidroxietil)picolinamida
CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,74 min, MH+ = 471 Ejemplo 30
5-((2S,4R)-1-acetM-4-((5-cianopiridm-2-M)ammo)-2-metM-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)-N-(1,3-dihidroxipropan-
2-il)picolinamida
CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,70 min, MH+ = 501 Ejemplo 31
5-((2S,4R)-1-acetM-4-((5-cianopiridm-2-M)ammo)-2-metM-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)-N-(3-
hidroxipropil)picolinamida
5 CLEM (formiato, 2 min), Tr = 0,79 min, MH+ = 485 Ejemplo de referencia 33
6-(((2S,4R)-1-acetil-6-(6-(3-hidroxipirrolidma-1-carboml)piridm-3-il)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-
il)amino)nicotinonitrilo
10 CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,72 min, MH+ = 497 Ejemplo de referencia 34
6-(((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(6-(4-metilpiperazma-1-carboml)piridm-3-il)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-
il)amino)nicotinonitrilo
15 CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,64 min, MH+ = 510
5
6-(((2S,4R)-1-acetN-6-(6-(4-hidroxipiperidina-1 -carboml)piridm-3-M)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-4- il)amino)nicotinonitrilo
Ejemplo de referencia 36
6-(((2S,4R)-1-acetil]-6-(6-(4-ammopiperidma-1-carboml)piridm-3-N)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-
aminoil))nicotinonitrilo
10 Se disolvio (1-(5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-
il)picolinoil)piperidin-4-il)carbamato de ferc-butilo (para una preparacion vease el Intermedio 43) (0,258 ml, 0,313 mmol) en DCM anhidro (4 ml). TFA (1 ml, 12,98 mmol) y la mezcla de reaccion que se agito en atmosfera de nitrogeno a t.a. durante 8 h. La mezcla de reaccion se concentro al vado y se cargo en un cartucho SCX (5 g, pre- acondicionado con MeOH). El cartucho se lavo con MeOH (40 ml) y se eluyo con amomaco en MeOH (2m). Las 15 fracciones de amonfaco metanolico se concentraron para proporcionar un aceite de color naranja. El aceite se purifico adicionalmente mediante cromatograffa en un cartucho de sflice (10 g), eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM (al 2-12%, mas de 120 mls seguido de NH3 al 10% 2 M en MeOH/DCM para 120 mls para proporcionar un solido de color naranja palido. El solido se volvio a disolver en MeOH (1 ml) y se anadieron 1,1 equivalentes de cloruro de hidrogeno 1 M en eter dietflico. La mezcla se trituro con eter dietflico para proporcionar 620 (((2S,4R)-1-acetil-6-(6-(4-aminopiperidina-1-carbonil)piridin-3-il)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-
il)amino)nicotinonitrilo, clorhidrato (19 mg, 0,030 mmol, rendimiento del 8,59%) en forma de un solido de color naranja. CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,60 min, MH+ = 510.
Los siguientes analogos se prepararon utilizando el procedimiento anterior:-
Ejemplo de Referencia 37
25 6-(((2S,4R)-1-acetil-6-(6-(3-ammoazetidma-1-carboml)piridm-3-il)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-
il)amino)nicotinonitrilo
5
10
15
20
25
30
35
40
4-((2S,4R)-1-acetN-4-((4-clorofeml)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)-N-(2-
(dimetilamino)etil)benzamida
Se suspendio acido 4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 18) (150 mg, 0,345 mmol) en DCM (3 ml) y DMAP (51,5 mg, 0,422 mmol) y despues DCC (78,8 mg, 0,382 mmol). La reaccion se agito durante 5 min antes de que se anadiera N,N-dimetil- etilendiamina (33,4 mg, 0,379 mmol) en DCM (0,5 ml). La reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. La reaccion se concentro al vado. El residuo se recogio en el volumen mmimo de MeOH al 5 % en DCM y se aplico a un cartucho de 25 g y se dejo secar en el horno de vado a 40 °C durante 30 minutos. El cartucho se eluyo con de amomaco 2 M al 1 % en metanol en DCM durante 2 VC despues, amomaco 2 M al 1-10% en metanol durante 10 VC, despues se mantuvo al 10% durante 5 VC. El producto se aislo en forma de un solido de color amarillo que se purifico adicionalmente por MDAP (HpH). Las fracciones que conteman producto se concentraron al vado. El residuo se recogio en el volumen mmimo de MeOH y se aplico a un cartucho SCX (5 g) que se eluyo con MeOH (20 ml) y despues amomaco en MeOH (2M, 20 ml). La fraccion de amomaco se concentro al vado para proporcionar un aceite transparente. (85,8 mg, 0,17 mmoles). Este se recogio en el volumen mmimo de DCM y se anadieron 1,1 eq de HCl 1 M en Et2O (0,19 ml). El disolvente se retiro en una corriente de nitrogeno y se anadio Et2O (~2 ml) al residuo y despues se retiro en una corriente de nitrogeno para proporcionar 4-amino[(4-clorofenil)- {(2S,4R)-1-acetil-4]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}-N-[2-(dimetilamino)etil]benzamida (77,2 mg, 0,140 mmol, rendimiento del 40,7 %) en forma de un solido de color blanco.
CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0.85min, MH+ = 505.
Ejemplo 39
4-((2S,4R)-1-acetN-4-((4-clorofeml)ammo)-2-metiM,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-N)-N-(1,3-dihidroxipropan-2-
il)benzamida
Se cargo un matraz con acido 4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-
quinolinil}benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 18) (109 mg, 0,25 mmol), HOBT (45,9 mg, 0,300 mmol) y EDC (57,5 mg, 0,300 mmol), se anadio DCM (5 ml) y la mezcla resultante se trato con N-etilmorfolina (0,095 ml, 0,750 mmol). Despues de 5 min, la solucion de color amarillo palido se trato con 2-amino-1,3-propanodiol (29,6 mg, 0,325 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente. Despues de otras 4 h, se anadieron porciones adicionales de HOBT (22,95 mg, 0,150 mmol), EDC (28,75 mg, 0,150 mmol) y N-etil-morfolina (0,0475 ml, 0,375 mmol) y la mezcla de reaccion se agito durante la noche a t.a. Los compuestos volatiles se evaporaron al vado y el residuo se disolvio en EtOAc y agua. Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado acuoso (2 veces), despues con salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron al vado. El residuo se purifico mediante cromatograffa eluyendo con un gradiente de MeOH/DCM para proporcionar 4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}-N- [2-hidroxi-1-(hidroximetil)etil]benzamida (66 mg, 0,130 mmol, rendimiento del 52%) en forma de una espuma de color amarillo palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 0,95 min, MH+ = 508.
Los siguientes analogos se prepararon utilizando el procedimiento anterior utilizando la amina apropiada:-
5
CLEM (H pH, 2 min), Tr =1,00 min, MH+ = 478 Ejemplo 41
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofeml)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-((R)-2-
hidroxipropil)benzamida
CLEM (pH alto, 2 min), Tr = 1,03 min, MH+ = 492 10 Ejemplo 42
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofeml)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-((S)-2-
hidroxipropil)benzamida
CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,03 min, MH-= 490 15 Ejemplo 43
4-((2S,4R)-1-acetil-4-((4-clorofeml)ammo)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-((S)-2,3-
dihidroxipropil)benzamida
5 Una solucion de (2-{[(4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4-clorofenil)amino]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-
quinolinil}fenil)carbonil]amino}etil)carbamato de 1,1-dimetiletilo (para una preparacion vease el Intermedio 45) (57 mg, 0,099 mmol) en 1,4-dioxano (0,5 ml) a temperatura ambiente se trato con cloruro de hidrogeno en 1,4- dioxano (2 ml, 8,0 mmol) y la mezcla resultante se agito a temperatura ambiente durante 1,5 h y despues se concentro al vado. El residuo se co-evaporo con Et2O para proporcionar clorhidrato de 4-{(2S,4R)-1-acetil-4-[(4- 10 clorofenil)amino]-2-metil-1,2,3,4-tetrahidro-6-quinolinil}-N-(2-aminoetil)benzamida (32,5 mg, 0,063 mmol, rendimiento del 64,1 %) en forma de un solido de color amarillo palido. CLEM (HpH, 2 min), Tr = 1,01 min, MH+ = 477.
Ejemplo 45
4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(femlammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-(2-(dimetilammo)etil)benzamida
15 Se disolvio acido 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(fenilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico (para una preparacion vease el Intermedio 35) (90 mg, 0,225 mmol) en DMF anhidro (3 ml) y se anadio HATU (103 mg, 0,270 mmol). Se anadio DIPEA (0,118 ml, 0,674 mmol) a la mezcla y despues de otros 5 min de agitacion a t.a., N1,N1-dimetiletano-1,2-diamina (0,030 ml, 0,449 mmol). La mezcla de reaccion se agito a t.a. durante una noche, se concentro y se repartio entre EtOAc y agua. La fase organica se separo, se seco (Na2SO4) y se concentro. El 20 residuo de color amarillo se purifico mediante cromatograffa en un cartucho de sflice (10 g), eluyendo con MeOH/DCM (1-6 % mas de 120 mls, seguido de 6-20 % en mas de 120 mls) para proporcionar 4-((2S,4R)-1-acetil-2- metil-4-(fenilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(2(dimetilamino)etil)benzamida (24 mg, 0,05 mmol, rendimiento del 20 %) en forma de un solido de color marron claro. CLEM (formico, 2 min), Tr = 0,79 min, MH+ = 471.
Analogos preparados mediante el procedimiento anterior utilizando la amina apropiada:-
25 Ejemplos 46
4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(femlammo)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-6-il)-N-(2-hidroxietil)benzamida
CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,88 min, MH+ = 444
5
CLEM (Formiato, 2 min), Tr = 0,82 min, MH+ = 474.
Ejemplo de Referencia 48
6-(((2S,4R)-1-acetil-2-metil)-6-(6-(piperazma-1-carboml)piridm-3-il)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4- il)amino)nicotinonitrilo
Se disolvio 4-(5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-
10 il)picolinoil)piperazina-1-carboxilato de ferc-butilo (para una preparacion vease el Intermedio 44) (205 mg, 0,344 mmol), en DCM anhidro (4 ml). Se anadio TFA (1 ml, 12,98 mmol) a cada mezcla de reaccion, que se agito en atmosfera de nitrogeno a temperatura ambiente durante 7,5 h. La mezcla de reaccion se concentro y se cargo en un cartucho SCX (5 g, pre-acondicionado con MeOH). El cartucho se lavo con MeOH (40 ml) seguido de amomaco en MeOH (2 M) y la fraccion de amomaco metanolico se concentro. El residuo se cargo sobre un cartucho de sflice 15 (10 g) y el cartucho se lavo con MeOH al 10%/DCM, seguido de amomaco 2M al 10% en MeOH/DCM. Las
fracciones apropiadas se concentraron, el residuo se volvio a disolver en MeOH (1 ml) se trato con 1,1 equivalentes de cloruro de hidrogeno en eter dietflico (1 M). La trituracion con eter proporciono 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4- (fenilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-N-(1,3-dihidroxipropan-2-il)benzamida, clorhidrato en forma de un solido de color naranja (57 mg, 26,5 %). CLEM (formiato, 2 min) Tr = 0,60 min, 83 %, MH+ a 496
20 Ejemplo 49
5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopirazin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2-
hidroxietil)picolinamida
Se combinaron acido 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopirazin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)picolmico 25 (para una preparacion vease el Intermedio 53) (100 mg, 0,233 mmol), HATU (177 mg, 0,467 mmol) y DIPEA (0,122 ml, 0,700 mmol) en DMF (3 ml) y se agitaron a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se anadio 2- aminoetanol (0,029 ml, 0,350 mmol) y la mezcla de reaccion se agito durante 1,5 h. La mezcla se concentro al vacfo y se purifico por MDAP (formiato) para proporcionar 5-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopirazin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4- tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2-hidroxietil)picolinamida (42 mg, 0,089 mmol, rendimiento del 38 %). CLEM: (formiato,
5
10
15
20
25
30
35
1-((2S,4R)-2-metil-6-(6-(morfolma-4-carboml)piridm-3-M)-4-(piridm-2-ilammo)-3,4-dihidroqumolm-1(2H)-
il)etanona
Se combinaron 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 56) (40 mg, 0,101 mmol), 2-bromopiridina (0,019 ml, 0,203 mmol), 2'- (diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2 amina (8,0 mg, 0,020 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (9,3 mg, 10,1 pmol) y ferc-butoxido de sodio (19,5 mg, 0,203 mmol) en 1,4-dioxano (1 ml), se desgasificaron durante un periodo de 15 minutos y se calentaron con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. Se anadio una porcion adicional de tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (9,3 mg, 10,1 pmol), la reaccion se desgasifico y se calento la mezcla con irradiacion de microondas a 120 °C durante 20 minutos.
En un vial separado, se combinaron 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4- dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 56) (25 mg, 0,063 mmol), 2-bromopiridina (0,012 ml, 0,127 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (5,0 mg, 0,013 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (5,8 mg, 6,34 pmol) y ferc-butoxido de sodio (12,2 mg, 0,127 mmol) en 1, 4- dioxano (1 ml), se desgasificaron durante un periodo de 15 minutos y se calentaron con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos.
Las dos mezclas de reaccion en bruto se combinaron y se repartieron entre solucion ac. de bicarbonato de sodio (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado.
El residuo se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-4- (piridin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (36 mg, 0,076 mmol, rendimiento del 75%). CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,56 min, MH+ = 472.
Ejemplo de Referencia 51
1-((2S,4R)-2-metN-4-((5-metilpiridm-2-il)ammo)-6-(6-(morfolma-4-carboml)piridm-3-M)-3,4-dihidroqumolm-
1(2H)-il)etanona
Se combinaron 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion, vease el Intermedio 56) (80 mg, 0,203 mmol), 2-bromo-5-metilpiridina (69,8 mg, 0,406 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (16,0 mg, 0,041 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (18,6 mg, 0,020 mmol) y ferc-butoxido de sodio (39,0 mg, 0,406 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml). La mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 30 minutos. La mezcla se repartio entre solucion ac. de bicarbonato de sodio (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Las fases organicas se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado. El residuo resultante se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-2-metil-4-((5-metilpiridin-2- il)amino)-6-(6-(morfolin-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (13 mg, 0,027 mmol, rendimiento del 13 %) en forma de un solido de color blanquecino. CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,58 min, MH+ = 486.
5 Se combinaron 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil 6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion, vease el Intermedio 56) (80 mg, 0,203 mmol), 2-bromo-5-cloropiridina (78 mg, 0,406 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (16,0 mg, 0,041 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (18,6 mg, 0,020 mmol) y ferc-butoxido de sodio (27,3 mg, 0,284 mmol) en 1,4-dioxano (1ml). La mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C 10 durante 15 minutos. La mezcla se repartio entre solucion ac. de bicarbonato de sodio (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Las fases organicas se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vacfo. El residuo resultante se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-4-((5-cloropiridin-2-il)amino)-2- metil-6-(6-(morfolin-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (54 mg, 0,107 mmol, rendimiento del 53 %). ClEm: (formiato, 2 min), Tr = 0,86 min, MH+ = 506.
15 Ejemplo de Referencia 53
1-((2S,4R)-2-metil-6-(6-(morfolma-4-carboml)pmdm-3-M)-4-(pirazm-2-ilammo)-3,4-dihidroqumolm-1(2H)-
il)etanona
Se disolvieron 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona 20 (para una preparacion, vease el Intermedio 56) (80 mg, 0,203 mmol), 2-cloropirazina (0,036 ml, 0,406 mmol), 2'- (diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (16,0 mg, 0,041 mmol), tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (18,6 mg, 0,020 mmol) y ferc-butoxido de sodio (27,3 mg, 0,284 mmol) en 1,4-dioxano (2 ml). La mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. La mezcla se repartio entre solucion ac. de bicarbonato de sodio (50 ml) y DCM (50 ml, 3 25 veces). Las fases organicas se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vacfo. El residuo resultante se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-2-metil-6-(6-(morfolina-4- carbonil)piridin-3-il)-4-(pirazin-2-ilamino)-3,4-dihidro-quinolin-1(2H)-il)etanona (50 mg, 0,106 mmol, rendimiento del 52 %).
CLeM: (formiato, 2 min), Tr = 0,68 min, MH+ = 473.
30
5
10
15
20
25
30
Se combinaron 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil 6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion, vease el Intermedio 56) (80 mg, 0,203 mmol), 2-bromo-5-metilpirazina (70,2 mg, 0,406 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (16,0 mg, 0,041 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (18,6 mg, 0,020 mmol) y ferc-butoxido de sodio (27,3 mg, 0,284 mmol) en 1,4- dioxano (2 ml). La mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. La mezcla se repartio entre solucion ac. de bicarbonato de sodio (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Las fases organicas se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado. El residuo resultante se purifico por MDAP (HpH), seguido de purificacion adicional por MDAP (formiato) para proporcionar 1-((2S,4R)-2-metil-4-((5-metilpirazin-2-il)amino)-6-(6-(morfolina-4- carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (26 mg, 0,053 mmol, rendimiento del 26 %).
CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,71 min, MH+ = 487.
Ejemplo de Referencia 55
Formiato de 1-((2S,4R)-2-metil-6-(4-(morfolma-4-carboml)feml)-4-(piridm-2-ilammo)-3,4-dihidroqumolm-1(2H)- il)etanona
Se trataron 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de litio (para una preparacion vease el Intermedio 58) en bruto (40 mg) y HATU (41 mg, 0,108 mmol) en DMF (0,5 ml) con DIPEA (51,2 |jl, 0,294 mmol) y la mezcla se agito y se sometio a ultrasonidos hasta que se formo una solucion (<2 min). Esta solucion se anadio a morfolina (17 jl, 0,194 mmol), la mezcla se agito brevemente y despues se dejo reposar a temperatura ambiente durante 2 h. Se anadio una porcion adicional de morfolina (34 jl, 0,388 mmol) y la mezcla se dejo reposar durante la noche. La mezcla se diluyo con agua y se extrajo tres veces con DCM. Las fases organicas combinadas se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar un residuo. El residuo se purifico por MDAP (formiato) para proporcionar formiato de 1-((2S,4R)-2-metil-6-(4-(morfolina- 4-carbonil)fenil)-4-(piridin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (20 mg, 0,039 mmol, rendimiento del 10%) en forma de un cristal de color rosa palido.
CLEM: (formiato, 2 min), Tr 0,63 min, MH+ 471.
5
10
15
20
25
30
35
Formiato de 1-((2S,4R)-2-metil-4-((5-metilpiridm-2-il)ammo)-6-(4-(morfolma-4-carboml)feml)-3,4-
dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona
Una mezcla de 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5-metilpiridin-2-il)amino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de de litio (para una preparacion vease el Intermedio 60) en bruto (48 mg) y HATU (48 mg, 0,316 mmol) en DMF (0,5 ml) se trato con DIPEA (0,06 ml, 0,344 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 min para proporcionar una solucion que se anadio a morfolina (51 pl, 0,583 mmol). La mezcla se agito brevemente y despues se dejo a temperatura ambiente durante la noche. La solucion resultante se diluyo con agua y se deja reposar durante ~10 min. El precipitado resultante se aislo por filtracion y se lavo con agua. El precipitado aislado se disolvio en MeOH, se concentro a sequedad para proporcionar un residuo que se purifico por MDAP (formiato) para proporcionar formiato de 1-((2S,4R)-2-metil-4-((5-metilpiridin-2-il)amino)-6-(4-(morfolina-4-carbonil)fenil)-3,4-
dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona en forma de un vidrio de color amarillo palido (24 mg, 0,045 mmol, rendimiento del 8 %).
CLEM: (Formiato, 2 min), Tr = 0,66 min, MH+ 485.
Ejemplo de referencia 57
1-((2S,4R)-4-((5-cloropiridm-2-il)ammo)-2-metil-6-(5-(morfolma-4-carboml)piridm-2-M)-3)4-dihidroqumolm-
1(2H)-il)etanona
Se combinaron clorhidrato de 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin- (2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 65) (100 mg, 0,232 mmol), 2-bromo-5-cloropiridina (89 mg, 0,464 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (18,3 mg, 0,046 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (21,3 mg, 0,023 mmol) y ferc-butoxido de sodio (44,6 mg, 0,464 mmol) en 1,4- dioxano (2 ml) y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. Una porcion adicional de 2-bromo-5-cloropiridina (89 mg, 0,464 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (18,3 mg, 0,046 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio(0) (21,3 mg, 0,023 mmol) y ferc-butoxido de sodio (44,6 mg, 0,464 mmol) y 1,4- dioxano (1 ml) se anadieron y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. La mezcla de reaccion se repartio entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vacfo para proporcionar un residuo que se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-4-((5-cloropiridin-2-il)amino)-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4- dihidroquinolin-(2H)-il)etanona (34 mg, 0,067 mmol, rendimiento del 29 %) CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,83 min, MH+ 506.
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Se combinaron clorhidrato de 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin- 1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 65) (100 mg, 0,232 mmol), 2-cloropirazina (0,041 ml, 0,464 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (18,3 mg, 0,046 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (21,3 mg, 0,023 mmol) y ferc-butoxido de sodio (44,6 mg, 0,464 mmol) en 1,4- dioxano (2 ml) y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C, durante 25 minutos. Una porcion adicional de 2-cloropirazina (0,041ml, 0,464 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (18,3 mg, 0,046 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (21,3 mg, 0,023 mmol), ferc-butoxido de sodio (44,6 mg, 0,464 mmol) y 1,4- dioxano (1 ml) se anadieron y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. La mezcla de reaccion se repartio entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar un residuo que se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-4-(pirazin-2-ilamino)-3,4-
dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (40 mg, 0,085 mmol, rendimiento del 37 %). CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,68 min, MH+ 473
Ejemplo de Referencia 59
1-((2S,4R)-2-metN-4-((5-metilpiridm-2-il)ammo)-6-(5-(morfolma-4-carboml)piridm-2-M)-3,4-dihidroqumolm-
1(2H)-il)etanona
Se combinaron clorhidrato de 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin- 1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 65) (80 mg, 0,186 mmol), 2-bromo-5-metilpiridina (63,9 mg, 0,371 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (14,6 mg, 0,037 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (17 mg, 0,019 mmol) y ferc-butoxido de sodio (53,5 mg, 0,557 mmol) en 1,4- dioxano (2 ml) y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 130 °C durante 50 minutos. Una porcion adicional de 2-bromo-5-metilpiridina (63,9 mg, 0,371 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (14,6 mg, 0,037 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (17 mg, 0,019 mmol), ferc-butoxido de sodio (53,5 mg, 0,557 mmol) y 1,4- dioxano (1 ml) se anadieron y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 130 °C durante 25 minutos. La mezcla de reaccion se repartio entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar un residuo que se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-2-metil-4-((5-metilpiridin-2-il)amino)-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4- dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (38 mg, 0,078 mmol, rendimiento del 42 %). ClEm: (formiato, 2 min), Tr = 0,58 min, MH+ 486.
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Se combinaron clorhidrato de 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin- 1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 65) (100 mg, 0,232 mmol), 2-bromo-5-metilpirazina (80 mg, 0,464 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (27,4 mg, 0,070 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (42,5 mg, 0,046 mmol) y ferc-butoxido de sodio (66,9 mg, 0,696 mmol) en 1,4- dioxano (2 ml) y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 130 °C durante 40 minutos. La mezcla de reaccion se repartio entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar un residuo que se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2s,4R)-2-metil-4-((5-metilpirazin-2-il)amino)-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4- dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (38 mg, 0,078 mmol, rendimiento del 34 %). CLEM: (Formiato, 2 min), Tr = 0,71 min, MH+ 487
Ejemplo de Referencia 61
1-((2S,4R)-2-metil-6-(5-(morfolma-4-carboml)piridm-2-il)-4-(piridm-2-ilammo)-3,4-dihidroqumolm-1(2H)-
il)etanona
Se combinaron clorhidrato de 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin- 1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 65) (100 mg, 0,232 mmol), 2-bromopiridina (0,044 ml, 0,464 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (18,3 mg, 0,046 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (21,3 mg, 0,023 mmol) y ferc-butoxido de sodio (66,9 mg, 0,696 mmol) en 1,4- dioxano (2 ml) y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 130 °C durante 25 minutos. La mezcla de reaccion se repartio entre bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar un residuo que se disolvio en acetonitrilo (20 ml) y bicarbonato de amonio ac. 0,1 M (20 ml). La mezcla se filtro y el filtrado se concentro al vado para proporcionar un residuo que se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-2-metil-6-(5-(morfolina-4- carbonil)piridin-2-il)-4-(piridin-2-ilamino)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (41 mg, 0,087 mmol, rendimiento del 38 %). CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,55 min, MH+ 472
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1-((2S,4R)-4-((3-dorofeml)ammo)-2-metM-6-(6-(morfoNna-4-carbonM)piridm-3-M)-3,4-dihidroqumoMn-1(2W)-
il)etanona
Se combinaron 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion, vease el Intermedio 56) (100 mg, 0,254 mmol), 1-bromo-3-clorobenceno (0,060 ml, 0,507 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (20,0 mg, 0,05l mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (23,3 mg, 0,025 mmol) y ferc-butoxido de sodio (34,1 mg, 0,355 mmol) en 1,4- dioxano (2,5 ml). La mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. La mezcla se repartio entre agua (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Las fases organicas se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vacfo. El residuo resultante se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-4-((3-clorofenil)amino)-2-metil-
6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin 3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (58 mg, 0,115 mmol, rendimiento del 45 %).
CLeM: (formiato, 2 min), Tr = 1,00 min, MH+ = 505 Ejemplo de referencia 63
1-((2S,4R)-4-((3-dorofeml)ammo)-2-metM-6-(5-(morfoNna-4-carbonM)piridm-2-M)-3,4-dihidroqumoMn-1(2H)-
il)etanona
Se combinaron clorhidrato de 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin- 1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 65) (120 mg, 0,278 mmol), 1-bromo-3-clorobenceno (0,065 ml, 0,557 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,A/-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (21,9 mg, 0,056 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (25,5 mg, 0,028 mmol) y ferc-butoxido de sodio (37,5 mg, 0,390 mmol) en 1,4- dioxano (2 ml) y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. La mezcla de reaccion se repartio entre agua (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vacfo para proporcionar un residuo que se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-4- ((3-clorofenil)amino)-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (13 mg,
0,026 mmol, rendimiento del 9,2 %).
CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 1,00 min, MH+ 505.
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1-((2S,4R)-4-((4-dorofeml)ammo)-2-metN-6-(5-(morfoNna-4-carbonM)piridm-2-M)-3,4-dihidroqumoMn-1(2H)-
il)etanona
Se combinaron clorhidrato de 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin- 1(2H)-il)etanona (para una preparacion vease el Intermedio 65) (120 mg, 0,278 mmol), 1-bromo-4-clorobenceno (107 mg, 0,557 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (21,9 mg, 0,056 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (25,5 mg, 0,028 mmol) y ferc-butoxido de sodio (37,5 mg, 0,390 mmol) en 1,4- dioxano (2 ml) y la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos, antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 25 minutos. La mezcla de reaccion se repartio entre agua (50 ml) y DCM (50 ml, 3 veces). Los extractos organicos se combinaron, se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vado para proporcionar un residuo que se purifico por MDAP (HpH) para proporcionar 1-((2S,4R)-4- ((4-clorofenil)amino)-2-metil-6-(5-(morfolina-4-carbonil)piridin-2-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (15 mg,
0,030 mmol, rendimiento del 10,7 %).
CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 1,00 min, MH+ = 505.
Ejemplo de Referencia 65
6-(((2S,4R)-1-acetil-2-metM-6-(4-(morfolma-4-carbomlo)feml)-1,2,3,4-tetrahidroqumolm-4-
il)amino)nicotinonitrilo
Se trato el acido 4-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoico de litio en bruto (Intermedio 67) (55 mg) y HATU (53 mg, 0,140 mmol) en DMF anhidro (1 ml) con DlpEA (67,5 pl, 0,388 mmol). La mezcla se sometio a ultrasonidos brevemente para proporcionar una solucion, a la que se anadio morfolina (110 pl, 1,26 mmol). La solucion se dejo a temperatura ambiente durante la noche y despues se diluyo con agua a ~10 ml. La mezcla se diluyo adicionalmente con salmuera y se extrajo con DCM/EtOAc y despues EtOAc. Las fracciones organicas combinadas se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron a sequedad en una corriente de nitrogeno. El residuo resultante se purifico por MDAP (formiato) para proporcionar 6- (((2S,4R)-1-acetil-2-metil-6-(4-(morfolina-4-carbonil)fenil)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-4-il)amino)nicotinonitrilo (26 mg, 0,052 mmol) en forma de un vidrio incoloro. CLEM; (Formiato, 2 min) Tr = 0,85 min, MH+ 496.
5 Se combinaron 1-((2S,4R)-4-amino-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (para una preparacion, vease el Intermedio 56) (145 mg, 0,368 mmol), 2-bromo-5-fluoropiridina (129 mg, 0,735 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (29 mg, 0,074 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (34 mg, 0,037 mmol) y ferc-butoxido de sodio (71 mg, 0,739 mmol) en 1,4- dioxano (4 ml). La mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos antes de que se calentara con irradiacion 10 de microondas a 120 °C durante 30 minutos. Una porcion adicional de 2-bromo-5-fluoropiridina (129 mg, 0,735 mmol), 2'-(diciclohexilfosfino)-W,W-dimetil-[1,1'-bifenil]-2-amina (29 mg, 0,074 mmol),
tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (34 mg, 0,037 mmol) se anadieron, la mezcla se desgasifico durante un periodo de 15 minutos antes de que se calentara con irradiacion de microondas a 120 °C durante 30 minutos. La mezcla se repartio entre agua (20 ml) y DCM (15 ml, 3 veces). Las fases organicas se combinaron, se secaron 15 pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vacfo. El residuo resultante se purifico por cromatograffa (columna de 25 g, (gradiente de MeOH/DCM) para proporcionar 1-((2S,4R)-4-((5-fluoropiridin-2- il)amino)-2-metil-6-(6-(morfolina-4-carbonil)piridin-3-il)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (91 mg, 0,186 mmol, rendimiento del 51 %) CLEM: (Formiato, 2 min), Tr = 0,73 min, mH+ 490.
Ejemplo de referencia 67
20 Formiato de 1-((2S,4R)-2-metil-4-(piridm-2-Nammo)-6-(4-(pirrolidm-1-carboml)feml)-3,4-dihidroqumolm-1(2H)- il)etanona
Se trataron 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-(piridin-2-ilamino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de litio en bruto (para una preparacion vease el Intermedio 58) (40 mg) y HATU (41 mg, 0,108 mmol) en DMF (0,5 ml) con DIPEA 25 (51,2 |jl, 0,294 mmol) y la mezcla se agito y se sometio a ultrasonidos hasta que se formo una solucion (<2 min).
Esta solucion se anadio a pirrolidina (16 jl, 0,192 mmol), la mezcla se agito brevemente y despues se dejo reposar a temperatura ambiente durante 2 h. Se anadio una porcion adicional de morfolina (32 jl, 0,384 mmol) y la mezcla se dejo reposar durante la noche. La mezcla se diluyo con agua y se extrajo tres veces con DCM. Las fases organicas combinadas se secaron pasando a traves de una frita hidrofoba y se concentraron al vacfo para proporcionar un 30 residuo. El residuo se purifico por MDAP (formiato) para proporcionar formiato de 1-((2S,4R)-2-metil-4-(piridin-2- ilamino)-6-(4-(pirrolidin-1-carbonil)fenil)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona (23 mg, 0,046 mmol, 12%) en forma de un cristal de color rosa palido. CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,70 min, MH+ 455
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Formiato de 1-((2S,4R)-2-metN-4-((5-metMpiridm-2-N)ammo)-6-(4-(pirroMdma-1-carboml)fenM)-3,4-
dihidroquinolin-1(2H)-il)etanona
Una mezcla de 4-((2S,4R)-1-acetil-2-metil-4-((5-metilpiridin-2-il)amino)-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)benzoato de litio en bruto (para una preparacion vease el Intermedio 60) (48 mg) y HATU (48 mg, 0,316 mmol) en DMF (0,5 ml) se trato con DIPEA (0,06 ml, 0,344 mmol) y la mezcla se agito a temperature ambiente durante 5 min para proporcionar una solucion que se anadio a pirrolidina (48 pl, 0,575 mmol). La mezcla se agito brevemente y despues se dejo a temperatura ambiente durante la noche. La solucion resultante se diluyo con agua y se dejo reposar durante ~10 min. El precipitado resultante se aislo por filtracion y se lavo con agua. El precipitado aislado se disolvio en MeOH se concentro a sequedad para proporcionar un residuo que se purifico por MdaP (formiato) para proporcionar formiato de 1-((2S,4R)-2-metil-4-((5-metilpiridin-2-il)amino)-6-(4-(pirrolidin-1-carbonil)fenil)-3,4-dihidroquinolin-1(2H)- il)etanona (22 mg, 0,047 mmol, 7,5 %) en forma de un cristal de color amarillo palido.
CLEM: (formiato, 2 min), Tr = 0,73 min, MH+ 469.
COMPUESTOS DE REFERENCIA
Los detalles experimentales de los procedimientos de CL-EM A-F que se refieren en el presente documento son como se indican a continuacion:
La CL/EM (Procedimiento A) se realizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (d.i. de 50 mm x 2,1 mm, diametro del relleno 1,7 pm) a 40 grados centigrados, eluyendo con bicarbonato de amonio 10 mM en agua ajustada a pH 10 con solucion de amornaco (disolvente A) y acetonitrilo (disolvente B) utilizando el siguiente gradiente de elucion 0-1,5 min 1-97% de B, 1,5-1,9min 97% de B, 1,9-2,0min 100% de B a un caudal de 1 ml/min. La deteccion UV era una senal sumada de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masas se registraron en un espectrometro de masas Waters ZQ utilizando exploracion alterna por electronebulizacion positiva y negativa. Los datos de ionizacion se redondearon al entero mas cercano.
La CL/EM (Procedimiento B) se realizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (d.i. de 50 mm x 2,1 mm, diametro del relleno 1,7 pm) a 40 grados centfgrados, eluyendo con solucion al 0,1 % v/v de acido formico en agua (disolvente A) y al 0,1 % v/v de acido formico en acetonitrilo (disolvente B) utilizando el siguiente gradiente de elucion 0-1,5 min 3-100 % de B, 1,5-1,9 min 100 % de B, 1,9-2,0 min 3 % de B a un caudal de 1 ml/min. La deteccion UV era una senal sumada de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masas se registraron en un espectrometro de masas Waters ZQ utilizando exploracion alterna por electronebulizacion positiva y negativa. Los datos de ionizacion se redondearon al entero mas cercano.
La CL/EM (Procedimiento C) se realizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (d.i. de 50 mm x 2,1 mm, diametro del relleno 1,7 pm) a 40 grados centfgrados, eluyendo con solucion al 0,1 % v/v de acido trifluoroacetico en agua (disolvente A) y solucion al 1 % v/v de acido trifluoroacetico en acetonitrilo (disolvente B) utilizando el siguiente gradiente de elucion 0-1,5 min 3-100% de B, 1,5-1,9min 100% de B, 1,9-2,0min 3% de B a un caudal de 1 ml/min. La deteccion UV era una senal sumada de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masas se registraron en un espectrometro de masas Waters ZQ utilizando electronebulizacion positiva. Los datos de ionizacion se redondean al entero mas cercano.
La CL/EM (Procedimiento D) se realizo en una columna Supelcosil LCABZ + PLUS (3 pm, DI de 3,3°cm x 4,6°mm) eluyendo con HCO2H al 0,1 % y acetato de amonio 0,01 M en agua (disolvente A) y acetonitrilo al 95 % y HCO2H al 0,05 % en agua (disolvente B), utilizando el siguiente gradiente de elucion 0-0,7 minutos 0 % de B, 0,7-4,2 minutos 0 ^ 100 % de B, 4,2-5,3 minutos 100 % de B, 5,3-5,5 minutos 100 ^ 0 % de B a un caudal de 3 ml/minuto. Los espectros de masas (EM) se registraron en un espectrometro de masas Fisons VG Platform utilizando el modo de ionizacion por electronebulizacion positiva [(EN+ para proporcionar iones moleculares [M+H]+ y [M+NH4]+] o de ionizacion por electronebulizacion negativa [(EN- para proporcionar iones moleculares [M-H]']. Los datos analfticos de este aparato se proporcionan con el siguiente formato: [M+H]+ o [M-H]-.
La CL/EM (Procedimiento E) se realizo en una columna Chromolith Performance RP 18 (DI de 100 x 4,6 mm) eluyendo con acetato de amonio 0,01 M en agua (disolvente A) y 100 % de acetonitrilo (disolvente B), utilizando el siguiente gradiente de elucion 0-4 minutos 0-100 % de B, 4-5 minutos 100 % de B a un caudal de 5 ml/minuto.
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Los espectros de masas (EM) se registraron en un espectrometro de masas Micromass Platform-LC utilizando los modos de ionizacion positiva qmmica a presion atmosferica [AP+ para proporcionar iones moleculares MH+]
0 ionizacion negativa qmmica a presion atmosferica [AP- para proporcionar iones moleculares (M-H)-]. Los datos analfticos de este se proporcionan con el siguiente formato: [M+H]+ o [M-H]'.
La CL/EM (Procedimiento F) se realizo en una columna Sunfire C18 (d.i. de 30°mm x 4,6°mm, diametro de relleno de 3,5 pm) a 30 grados centigrados, eluyendo con una solucion de acido trifluoroacetico al 0,1 % v/v en agua (disolvente A) y solucion de acido trifluoroacetico al 0,1 % v/v en acetonitrilo (disolvente B) utilizando el siguiente gradiente de elucion 0-0,1 min 3% de B, 0,1-4,2 min 3-100% de B, 4,2-4.8 min 100% de B, 4,84,9 min 100-3 % de B, 4,9-5,0 min 3 % de B a un caudal de 3 ml/min de caudal. La deteccion de UV fue una senal promedio de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm y los espectros de masas se registraron en un espectrometro de masas utilizando ionizacion por electronebulizacion positiva. Los datos de ionizacion se redondearon al entero mas cercano.
La CL/EM (Procedimiento G) se realizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (d.i. de 50 mm x 2,1 mm, diametro de relleno de 1,7 pm) a 40 grados centfgrados, eluyendo con solucion al 0,1 % v/v de acido formico en agua (disolvente A) y solucion al 0,1 % v/v de acido formico en acetonitrilo (disolvente B) utilizando el siguiente gradiente de elucion 0-1,5 min 1-97 % de B, 1,5-1,9 min 97 % de B, 1,9-2,0 min del 97 al 100 % B a un caudal de
1 ml/min. La deteccion UV era una senal sumada de longitudes de onda de 210 nm a 350 nm. Los espectros de masas se registraron en un espectrometro de masas Waters ZQ utilizando exploracion alterna por electronebulizacion positiva y negativa. Los datos de ionizacion se redondearon al entero mas cercano.
CL/EMAR: La HPLC analftica se realizo en una columna Uptisphere-HSC (3 pm, DI de 33 * 3°mm) eluyendo con acetato de amonio 0,01 M en agua (disolvente A) y acetonitrilo al 100% (disolvente B), utilizando el siguiente gradiente de elucion 0-0,5 minutos 5 % de B, 0,5-3,75 minutos 5 ^ 100 % de B, 3,75-4,5 100 % de B, 4,5-5 100 ^ 5 % de B, 5-5,5 5 % de B a un caudal de 1,3 ml/minuto. Los espectros de masas (EM) se registraron en un espectrometro de masas Micromass LCT utilizando el modo de ionizacion por electronebulizacion positiva [EN+ para proporcionar iones moleculares MH+] o de ionizacion por electronebulizacion negativa [EN- para proporcionar iones moleculares (M-H)-].
La cromatograffa en capa fina (TLC) se refiere al uso de placas de TLC comercializadas por Merck recubiertas de gel de sflice 60 F254.
Compuesto de Referencia A: 2-metM-6-(metMoxi)-4H-3,1-benzoxazm-4-ona
Una solucion de acido 5-metoxiantramlico (Lancaster) (41,8 g, 0,25 mol) se calento a reflujo en anlmdrido acetico (230 ml) durante 3,5 h antes de concentrarse a presion reducida. El compuesto en bruto se concentro dos veces en presencia de tolueno antes de filtrarse y se lavo dos veces con eter para proporcionar el compuesto del tttulo (33,7 g, rendimiento del 71 %) en forma de un solido de color marron; CL/EM (Procedimiento D): m/z 192 [M+H]+, Tr 1,69 min.
Compuesto de Referencia B: [2-amino-5-(metiloxi)fenil](4-clorofenil)metanona
A una solucion de 2-metil-6-(metiloxi)-4H-3,1-benzoxazin-4-ona (para una preparacion vease el compuesto de referencia A) (40,0 g, 0,21 mol) en una mezcla de tolueno/eter (2/1) (760 ml) a 0 °C, se le anadio gota a gota una solucion de bromuro de 4-clorofenil-magnesio (170 ml, 1 M en Et2O, 0,17 mol). La mezcla de reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante 1 h antes de inactivarse con HCl 1 N (200 ml). La fase acuosa se extrajo con EtOAc (150 ml, 3 veces) y los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El compuesto en bruto se disolvio en EtOH (400 ml) y se anadio HCl 6 N (160 ml). La mezcla de reaccion se calento a reflujo durante 2 h antes de concentrarse
a un tercio de su volumen. El solido resultante se filtro y se lavo dos veces con eter antes de suspenderse en EtOAc y se neutralizase con NaOH 1 N. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (150 ml, 3 veces) y los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (150 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El compuesto del tttulo se obtuvo en forma de un solido de color amarillo (39 g, rendimiento del 88 %); 5 CL/EM (Procedimiento D): m/z 262 [M+H]+, Tr 2,57 min.
Compuesto de referencia C: W1-[2-[(4-clorofenil)carbonil]-4-(metiloxi)fenil]-W2-{[(9H-fluoren-9-il-
metil)oxi]carbonil}-L-a-asparaginato de metilo
Se disolvio cloruro de metil A/-{[(9H-fluoren-9-ilmetil)oxi]carbonil}L-a-aspartilo (Int. J. Peptide Protein Res. 1992, 40, 10 13-18) (93 g, 0,24 mol) en CHCl3 (270 ml) y se anadio [2-amino-5-(metiloxi)fenil](4-clorofenil)metanona (para una
preparacion vease el compuesto de Referencia B) (53 g, 0,2 mol). La mezcla resultante se agito a 60 °C durante 1 h antes de enfriarse y concentrarse al 60 % en volumen. Se anadio eter a 0 °C y el precipitado resultante se filtro y se desecho. El filtrado se concentro a presion reducida y se uso sin purificacion adicional.
Compuesto de Referencia D: [(3S)-5-(4-clorofenM)-7-(metMoxi)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepm-3- 15 il]acetato de metilo
A una solucion de N1-[2-[(4-clorofenil)carbonil]-4-(metiloxi)fenil]-N2-{[(9H-fluoren-9-ilmetil)oxi]carbonil}-L-a- asparaginato de metilo (para una preparacion, vease el compuesto de Referencia C) (0,2 mol supuestos) en DCM (500 ml) se le anadio EtsN (500 ml, 3,65 mol) y la mezcla resultante se sometio a reflujo durante 24 h antes de 20 concentrarse. La amina en bruto resultante se disolvio en 1,2-DCE (1,5 l) y se anadio AcOH (104 ml, 1,8 mol) cuidadosamente. La mezcla de reaccion se agito entonces a 60 °C durante 2 h antes de concentrarse al vacfo y se disolviese en DCM. La fase organica se lavo con HCl 1 N y la fase acuosa se extrajo con DCM (3 veces). Las fases organicas combinadas se lavaron dos veces con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El solido en bruto se recristalizo en MeCN conduciendo al compuesto del tttulo 25 (51 g) en forma de un solido de color amarillo palido. El filtrado podfa concentrarse y recristalizare en MeCN para
proporcionar otros 10 g del producto deseado Rf = 0,34 (DCM/MeOH: 95/5). EMAR (M+H)+ calculado para C19H-i835ClN2O4 373,0955; encontrado: 373,0957.
Compuesto de referencia E: [(3S)-5-(4-clorofeml)-7-(metMoxi)-2-tioxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepm-3- il]acetato de metilo
Una suspension de P4S10 (36,1 g, 81,1 mmol) y Na2CO3 (8,6 g, 81,1 mmol) en 1,2-DCE (700 ml) a temperatura ambiente se agito durante 2h antes de anadirse [(3S)-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4- benzodiazepin-3-il]acetato de metilo (para una preparacion vease el compuesto de referencia D) (16,8 g, 45,1 mmol). La mezcla resultante se agito a 70 °C durante 2 h antes de enfriarse y filtrarse. El solido se lavo dos 5 veces con DCM y el filtrado se lavo con NaHCO3 sat. y salmuera. La fase organica se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro a presion reducida. El producto en bruto se purifico mediante cromatograffa ultrarrapida en gel de s^lice (DCM/MeOH: 99/1) para proporcionar el compuesto del tftulo (17,2 g, rendimiento del 98 %) en forma de un solido de color amarillento. CL/EM (Procedimiento d): m/z 389 [M(35Cl)+H]+, Tr 2,64 min EMAR (M+H)+ calculado para C19H1835ClN2OaS 389,0727; encontrado 389,0714.
10 Compuesto de Referencia F: [(3S)-2-[(1Z)-2-acetilhidrazmo]-5-(4-clorofeml)-7-(metiloxi)-3H-1,4-benzodiazepm-
3-il]acetato de metilo
A una suspension de [(3S)-[5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-2-tioxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il]-acetato de metilo (para una preparacion vease el compuesto de Referencia E (9,0 g, 23,2 mmol) en THF (300 ml) a 0 °C se le 15 anadio monohidrato de hidrazina (3,4 ml, 69,6 mmol) gota a gota. La mezcla de reaccion se agito durante 5 h entre 5 °C y 15 °C antes de enfriarse a 0 °C. Despues, se anadio Et3N (9,7 ml, 69,6 mmol) lentamente y cloruro de acetilo (7,95 ml, 69,6 mmol) gota a gota. Despues, la mezcla se dejo calentar a temperatura ambiente durante 16 h antes de concentrarse a presion reducida. El producto en bruto se disolvio en DCM y se lavo con agua. La fase organica se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro al vacfo para proporcionar el compuesto del tftulo en bruto (9,7 g, 20 rendimiento del 98 %) que se uso sin purificacion adicional. Rf = 0,49 (DCM/MeOH: 90/10).
Compuesto de Referencia G: [(4S)-6-(4-clorofeml)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]tnazolo[4,3-
a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetato de metilo
El [(3S)-2-[(1Z)-2-acetilhidrazino]-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-3H-1,4-benzodiazepin-3-il]acetato de metilo en bruto 25 (para una preparacion, vease el compuesto de Referencia F) (9,7 g supuestos) se suspendio en THF (100 ml) y se anadio AcOH (60 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 2 dfas antes de concentrarse a presion reducida. El solido en bruto se trituro en /-Pr2O y se filtro para proporcionar el compuesto del tftulo (8,7 g, 91 % en 3 etapas) en forma de un solido de color blanquecino.
EMAR(M+H)+ calculado para C^cCl^Oa 411,1229; encontrado 411,1245.
Compuesto de Referencia H: acido [(4S)-6-(4-dorofenN)-1-metN-8-(metNoxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-
a][1,4]benzodiazepin-4-M]acetico
A una solucion de [(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetato de 5 metilo (para una preparacion vease el compuesto de referencia G) (7,4 g, 18,1 mmol) en THF (130 ml) se le anadio a temperature ambiente NaOH 1 N (36,2 ml, 36,2 mmol). La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 5 h antes de inactivarse con HCl 1 N (36,2 ml) y concentrarse al vado. Despues se anadio agua y la fase acuosa se extrajo con DCM (3 veces) y las fases organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida para proporcionar el compuesto del tftulo (7 g, rendimiento del 98 %) en forma de 10 un solido de color amarillo palido.
CL/EM (Procedimiento D): m/z 397 [M+H]+
Compuesto de referencia I: [5-({[(4S)-6-(4-dorofenM)-1-metN-8-(metMoxi)-4H[1,2,4]triazolo[4,3-
a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetil}amino)pentil]carbamato de 1,1-dimetiletilo
15 Una mezcla de acido [(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetico
(para una preparacion vease el compuesto de Referencia G) (1,0 g, 2,5 mmol), hAtU (1,9 g, 5 mmol) y DIPEA (0,88 ml, 5 mmol) se agito durante 80 minutos a temperatura ambiente, a esta se le anadio (4-aminobutil)carbamato de 1,1-dimetiletilo (1,05 ml, 5,0 mmol, disponible en Aldrich). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 h antes de concentrarse. El residuo se recogio en diclorometano y se lavo con HCl 1 N. La fase acuosa se 20 extrajo con diclorometano dos veces. La fase organica se lavo con hidroxido de sodio 1 N, seguido de una solucion saturada de cloruro de sodio, se seco sobre sulfato de sodio y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatograffa ultrarrapida sobre sflice utilizando diclorometano/metanol 95/5 para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un solido de color amarillo (1,2 g). CL/EM (Procedimiento D): Tr = 3,04 min.
Compuesto de referencia J: trifluoroacetato de N-(5-ammopentN)-2-[(4S)-6-(4-dorofenM)-1-metN-8-(metNoxi)- 25 4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetamida
A una solucion de [5-({[(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4- il]acetil}amino)pentil]carbamato de 1,1-dimetiletilo (para una preparacion, vease el compuesto de Referencia H) (0,2 g, 0,34 mmol) en diclorometano (3 ml) se le anadio acido trifluoroacetico (0,053 ml, gota a gota 0,68 mmol) a 30 0 °C. La mezcla de reaccion se agito durante 3 h de 0 °C a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se
concentro a sequedad para proporcionar el compuesto del tftulo en forma de un aceite higroscopico de color amarillo
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(200 mg) CL/EM (Procedimiento D): Tr = 2,33 min.
EMAR (M+H)+ calculado para C25H29CM6O2 481,2119; encontrado 481,2162.
Compuesto de Referencia K: mezcla de isomeros 5 y 6 de Fluor Alexa 488-W-(5-aminopentil)-2-[(4S)-6-(4- clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetamida
Se disolvio trifluoroacetato de N-(5-aminopentil)-2-[(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3- a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetamida (para una preparation, vease el Compuesto de Referencia J) (7,65 mg, 0,013 mmol) en N,N-dimetilformamida (DMF) (300 ^l) y se anadio al ester succinimidilico del acido carbox^lico Fluor Alexa 488 (mg, 7,77 ^mol, mezcla de isomeros 5 y 6, disponible de Invitrogen, numero de producto A-20100) en un tubo de centrifuga Eppendorf. Se anadio base de Hunig (7,0 ^l, 0,040 mmol) y la mezcla se mezclo agitando con formation de vortice durante la noche. Despues de 18 h la mezcla de reaction se evaporo a sequedad y el residuo se redisolvio en DMSO/agua (50 %, <1 ml total), se aplico a una columna preparativa Phenomenex Jupiter C18 y se eluyo con un gradiente de 95 % de A:5 % de B a 100 % de B (A = acido trifluoroacetico al 0,1 % en agua, B = TFA al 0,1 %/acetonitrilo al 90 %/agua al 10 %) a un caudal de 10 ml/min durante 150 minutos. Las fracciones impuras se combinaron y se volvio a purificar utilizando el mismo sistema. Las fracciones se combinaron y se evaporaron para proporcionar el producto del tftulo (2,8 mg) en forma de una mezcla de los 2 regioisomeros que se muestran. CL/EM (Procedimiento F); MH+ = 999, Tr = 1,88 min.
Procedimientos de ensayo biologico
Ensayo de union de anisotropia de fluorescencia
La union de los compuestos de formula (I) a los Bromodominios BRD2, BRD3 y BRD4 se evaluo utilizando un ensayo de union de anisotropia de fluorescencia.
Se incubaron juntos protema Bromodominio, ligando fluorescente (compuesto de Referencia K, vease anteriormente) y una concentration variable del compuesto de ensayo para alcanzar el equilibrio termodinamico en condiciones de manera que en ausencia de compuesto de ensayo el ligando fluorescente este significativamente (> 50 %) unido y en presencia de una concentracion suficiente de un inhibidor potente, la anisotropia del ligando fluorescente sin unir sea diferente de forma medible del valor de union.
Todos los datos se normalizaron a la media de 16 pocillos de control altos y 16 bajos en cada placa. Despues se aplico un ajuste de curva de cuatro parametros de la siguiente forma:
En la "a" es el mmimo, "b" es la pendiente de Hill, "c" es el pCI50 y "d" es el maximo.
Se expresaron bromodominios humanos recombinantes (BRD2 (1-473), BRD3 (1-435) y BRD4 (1-477)) en celulas de E. coli (en un vector pET15b) con un marcador de seis His en el extremo N-terminal. El bromodominio marcado con His se extrajo de las celulas de E. coli utilizando 0,1 mg/ml de lisozima y ultrasonidos. El bromodominio se purifico despues mediante cromatograffa de afinidad en una columna HP HisTrAP, eluyendo con un gradiente lineal de imidazol 10-500mM, durante 20 VC. La purification adicional se completo mediante la columna de exclusion por tamano Superdex 200 de calidad preparativa. La protema purificada se almaceno a -80 °C en HEPES 20 mM pH 7,5 y NaCl 100 mM.
Protocolo para el bromodominio BRD2: Todos los componentes se disolvieron en la composition tampon de HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM y CHAPS 0,5 mM con concentraciones finales de BRD2 de 75 nM, se anadio ligando fluorescente 5 nM. Se anadieron 10 ^l de esta mezcla de reaccion utilizando una micropipeta multipunto, a pocillos que contienen 100 nl de diversas concentraciones del compuesto de ensayo o del vehmulo DMSO (1 % final) en una placa de microtitulacion Greiner de bajo volumen, de color negro, de 384 pocillos y se equilibro en la oscuridad durante 60 minutos a temperatura ambiente. La anisotropia de fluorescencia se leyo en Envision (Aex = 485 nm,
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AEM = 530 nm; dicroica -505 nM).
Protocolo para el bromodominio BRD3: Todos los componentes se disolvieron en la composicion tampon de HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM y CHAPS 0,5 mM con concentraciones finales de BRD3 de 75 nM, se anadio ligando fluorescente 5 nM. Se anadieron 10 pl de esta mezcla de reaccion utilizando una micropipeta multipunto, a pocillos que contienen 100 nl de diversas concentraciones del compuesto de ensayo o del vehmulo DMSO (1 % final) en una placa de microtitulacion Greiner de bajo volumen, de color negro, de 384 pocillos y se equilibro en la oscuridad durante 60 minutos a temperatura ambiente. La anisotropfa de fluorescencia se leyo en Envision (Aex = 485 nm, AEM = 530 nm; dicroica -505 nM).
Protocolo para el bromodominio BRD4: Todos los componentes se disolvieron en la composicion tampon de HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM y CHAPS 0,5 mM con concentraciones finales de BRD4 de 75 nM, se anadio ligando fluorescente 5 nM. Se anadieron 10 pl de esta mezcla de reaccion utilizando una micropipeta multipunto, a pocillos que contienen 100 nl de diversas concentraciones del compuesto de ensayo o del vehmulo DMSO (1 % final) en una placa de microtitulacion Greiner de bajo volumen, de color negro, de 384 pocillos y se equilibro en la oscuridad durante 60 minutos a temperatura ambiente. La anisotropfa de fluorescencia se leyo en Envision (Aex = 485 nm, AEM = 530 nm; dicroica -505 nM).
Ensayo de Transferencia de Energia por Resonancia de Fluorescencia de Tiempo Resuelto (TERF-TR)
La union de los compuestos de formula (I) a los Bromodominios BRD2, BRD3 y BRD4 se evaluo utilizando un ensayo de transferencia de energfa por resonancia de fluorescencia de tiempo resuelto, que mide la union de un peptido de histona acetilado a la protema bromodominio.
La protema bromodominio, un peptido de histona y una concentracion variable del compuesto de ensayo se incubaron juntos para alcanzar el equilibrio termodinamico. El ensayo se configuro de manera que, en ausencia de compuesto de ensayo el bromodominio y el peptido se unieran de forma significativa (~30 %) y en presencia de una concentracion suficiente de un inhibidor potente, esta interaccion se interrumpiera conduciendo a una disminucion medible en la transferencia de energfa por resonancia fluorescente.
Peptido de histona:
H-Ser-Gly-Arg-Gly-Lys(Ac)-Gly-Gly-Lys(Ac)-Gly-Leu-Gly-Lys(Ac)-Gly-Gly-Ala-Lys(Ac)-Arg-His-Gly-Ser-Gly-Ser- Lys(Biotina)-OH. 3TFA
El peptido protegido se ensamblo en un sintetizador de fase solida utilizando una resina de Wang precargada y utilizando protocolos de smtesis de Fmoc convencionales. La lisina C-terminal se protegio mediante un grupo hiperlabil a los acidos lo que permite su extraccion selectiva en el extremo del conjunto y la union de la biotina. El peptido en bruto se obtuvo despues de la escision de la resina con una mezcla de acido trifluoroacetico (TFA), triisopropilsilano y agua (95:2,5:2,5) durante 3 horas a temperatura ambiente y despues se purifico usando una columna de fase inversa C18 utilizando un gradiente de agua tamponada con TFA al 0,1 %/acetonitrilo. Las fracciones resultantes se analizaron y las fracciones que teman una pureza del > 95 % por HPLC analttica y que proporcionaban el pm correcto (por espectroscopfa de masas MALDITOF) se agruparon y se liofilizaron. El material final se analizo por HPLC para confirmar la pureza.
Produccion de las protemas: Se expresaron bromodominios humanos recombinantes (BRD2 (1-473), BRD3 (1-435) y BRD4 (1-477)) en celulas de E. coli (en un vector pET15b) con un marcador de seis His en el extremo N-terminal. El bromodominio marcado con His se extrajo de las celulas de E. coli utilizando ultrasonidos y se purifico utilizando una columna Sepharose 6FF de mquel, las proteinas se lavaron y despues se eluyeron con Tris 50 mM-HCl pH 8,0, NaCl 300 mM, p-mercaptoetanol 1 mM e imidazol 20 mM. La purificacion adicional se realizo mediante cromatograffa de afinidad en una columna HP HisTrap, eluyendo con un gradiente lineal de cloruro de sodio 0500 mM, durante 20 volumenes de columna. La purificacion final se completo mediante la columna de exclusion por tamano de calidad preparativa Superdex 200. La protema purificada se almaceno a -80°C en HEPES 20 mM pH 7,5 y NaCl 100 mM. La identidad de las protemas se confirmo mediante identificacion genetica por masas de peptidos y el peso molecular predicho se confirmo por espectrometna de masas.
Protocolo para los ensayos del Bromodominio BRD2, 3 y 4: Todos los componentes del ensayo se disolvieron en la composicion tampon de HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 50 mM y CHAPS 0,5 mM. La concentracion final de protemas bromodominio era 100 nM y la del peptido de histona era 300 nM, estos componentes se mezclaron previamente y se dejaron equilibrar durante 1 hora en la oscuridad. Se anadieron 8 pl de esta mezcla de reaccion a todos los pocillos que conteman 50 nl de diversas concentraciones de compuesto de ensayo o vehmulo DMSO (0,5 % final) en placas de microtitulacion Greiner de bajo volumen, de color negro, de 384 pocillos y se incubaron en la oscuridad durante 60 minutos a temperatura ambiente. Se anadieron 2 pl de la mezcla de deteccion que contema el anticuerpo anti-6his marcado con XL665 y estreptavidina marcada con criptato de europio, a todos los pocillos, y se realizo una incubacion adicional en oscuridad de al menos 30 minutos. Las placas se leyeron en el lector de placas Envision, Aex= 317 nm, AEM del donador = 615 nm; AEM del aceptor = 655 nm; Dicroica LANCE dual). Se realizaron mediciones de intensidad de fluorescencia de tiempo resuelto en ambas longitudes de onda de emision y la relacion de aceptor/donante se calculo y se utilizo para el analisis de datos. Todos los datos se normalizaron a la media de
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16 pocillos de control altos y 16 bajos en cada placa. Despues se aplico un ajuste de curva de cuatro parametros de la siguiente forma:
En la "a" es el mmimo, "b" es la pendiente de Hill, "c" es el pCI50 y "d" es el maximo.
Los Ejemplos 1-68 se sometieron a ensayo en uno o mas de los ensayos anteriores y se descubrio que teman una pCI50 en el intervalo de 6,0 a 7,5. Se descubrio que los Ejemplos 1-5, 7, 10-19, 26, 28-31, 39-47, 49, 52 y 65 teman una pCI50 en el intervalo de 7,0-7,5 en al menos uno de los ensayos anteriores.
Medicion de la secrecion de IL-6 de la sangre entera inducida por LPS
La activacion de las celulas monodticas por agonistas de los receptores tipo toll tales como el lipopolisacarido bacteriano (LPS) da como resultado la produccion de mediadores inflamatorios clave incluyendo la IL-6. Se considera ampliamente que dichas vfas son fundamentales en la fisiopatologfa de una gama de trastornos autoinmunes e inflamatorios.
Los compuestos que se iban a ensayar se diluyeron para proporcionar un intervalo de concentraciones apropiadas de los cuales se anadio 1 pl de las soluciones madre diluidas a los pocillos de una placa de 96 pocillos. Despues de la adicion de la sangre entera (130 pl) las placas se incubaron a 37 grados (5 % de CO2) durante 30 min antes de la adicion de 10 pl de LPS 2,8 ug/ml, diluido en RPMI 1640 completo (concentracion final = 200 ng/ml), para proporcionar un volumen total de 140 pl por pocillo. Despues de una incubacion adicional durante 24 horas a 37 grados, se anadieron 140 pl de PBS a cada pocillo. Las placas se sellaron, se agitaron durante 10minutos y despues se centrifugaron (2500 rpm x 10 min). Se retiraron 100 pl del sobrenadante y se sometieron a ensayo los niveles de IL-6 mediante inmunoensayo (normalmente mediante la tecnologfa MesoScale Discovery), ya sea inmediatamente o despues de un almacenamiento a -20 grados. Se generaron curvas de respuesta a la dosis para cada compuesto a partir de los datos y se calculo un valor de CI50.
Los Ejemplos 2, 3, 5-7, 9-12, 14-16, 19-25, 28-32, 34, 37, 38, 40, 42, 44-46, 48-49, 51- 52, 54, 56-65 y 68 se sometieron a ensayo en el ensayo anterior y se descubrio que teman una pCI50 en el intervalo de 5,5-7,3..
Estos datos demuestran que los inhibidores de bromodominio sometidos a ensayo en el ensayo de sangre completa anterior inhibieron la produccion del mediador inflamatorio clave IL-6.
Modelo de endotoxemia en raton in vivo
Las altas dosis de endotoxina (lipopolisacarido bacteriano) administradas a los animales produjeron un smdrome de choque profundo que incluyo una fuerte respuesta inflamatoria, la desregulacion de la funcion cardiovascular, la insuficiencia de los organos y en ultima instancia la muerte. Este patron de respuesta es muy similar a la sepsis y al choque septico humanos, en los que la respuesta del cuerpo a una infeccion bacteriana significativa puede ser potencialmente mortal de manera similar.
Para someter a ensayo los compuestos para su uso en la invencion, a grupos de ocho ratones macho Balb/c se les proporciono una dosis letal de LPS 15mg/kg por inyeccion intraperitoneal. Noventa minutos mas tarde, a los animales se les administro por via intravenosa vedculo (ciclodextrina al 20 % etanol al 1 % en agua apirogena) o compuesto (10 mg/kg). La supervivencia de los animales se controlo en 4 dfas.
Ensayo de Crecimiento Oncologico
Se cultivaron estirpes celulares humanas (n = 33 que comprende 15 estirpes celulares de hemo, 14 estirpes celulares de mama y otras 4 estirpes celulares) en RPMI-1640 que contema suero bovino fetal al 10%, se sembraron 1000 celulas viables por pocillo en placas de 384 pocillos de color negro de fondo plano de poliestireno (Greiner n.° 781086) en 48 pl de medio de cultivo. Todas las placas se colocaron en 5 % de CO2, 37 °C durante la noche. El siguiente dfa se recolecto una placa con CellTiter-Glo (CTG, Promega n.° G7573) para una medida a tiempo igual a 0 (TO) y se anadio compuesto (titulacion de 20 puntos de 14,7 uM a 7 pM) a las placas restantes. La concentracion final de DMSO en todos los pocillos fue del 0,15 %. Las celulas se incubaron durante 72 horas o el tiempo indicado y cada placa se revelo con el reactivo CellTiter-Glo utilizando un volumen equivalente al volumen de cultivo celular de los pocillos. Las placas se agitaron durante aproximadamente 2 minutos y la senal quimioluminiscente se leyo en el Analyst Gt (Molecular Devices) o el Lector de Placas EnVision (Perkin Elmer).
Los resultados se expresaron como un porcentaje de la T0 y se representaron frente a la concentracion del compuesto. El valor de T0 se normalizo al 100 % y representaba el numero de celulas en el momento de la adicion del compuesto y los datos de respuesta a la concentracion se ajustaron con un ajuste de curva de 4 parametros utilizando el software XLfit (modelo 205). La concentracion que inhida el crecimiento celular en un 50 % (cCl50) era el punto medio de la "ventana de crecimiento" (entre el T0 y el control de DMSO). El valor Ymin-T0 se determino restando el valor T0 (100%) del valor Ymin (%) determinado a partir del ajuste de la curva de respuesta a la concentracion. Los valores de los pocillos sin celulas se restaron de todas las muestras para la correccion de fondo.
Claims (13)
- 5101520251. Un compuesto de formula (I) o una sal del mismo
imagen1 en la queX e Y son independientemente CH o N a condicion de que al menos uno de X e Y debe ser CH;R1 es un grupo C(O)OR4 en el cual R4 es alquilo C1-3 o cicloalquilo C3-7; oR1 es un grupo seleccionado entre fenilo, piridilo, pirazinilo y pirimidinilo, estando dichos grupos opcionalmente sustituidos con uno o dos sustituyentes seleccionados entre halogeno, alquilo C1-4 y CN;R2 es alquilo C1-4;R3 es alquilo C1-4;R5 es hidrogeno y R6 es alquilo C1-4 sustituido con uno o mas hidroxi o un grupo -NR7R8 en el que R7 y R8 son independientemente hidrogeno o un grupo alquilo C1-4; y m es 0, 1 o 2. - 2. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con la reivindicacion 1 en el que X e Y son ambos CH o en el que X es CH e Y es N.
- 3. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2 en el que R1 es un grupo C(O)OR4 en el que R4 es isopropilo.
- 4. Un compuesto o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2 en el que R1 se selecciona entre
imagen2 - 5. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 en el que R2 es metilo.
- 6. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 en el que R3 es metilo.
- 7. Un compuesto o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 en el que m es 0 o m es 1.
- 8. Un compuesto o sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en el que R5 es hidrogeno y R6 se selecciona entre
imagen3 - 9. Un compuesto o una sal del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 en el que el 5 compuesto de formula (I) es el enantiomero (2S,4R).
- 10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicacion 1 que se selecciona entre 2-(4-((2S,4R)-1-Acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)fenil)-W-(2- (dimetilamino)etil)acetamida;6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2- 10 (dimetilamino)etil)nicotinamida; y6-((2S,4R)-1-acetil-4-((5-cianopiridin-2-il)amino)-2-metil-1,2,3,4-tetrahidroquinolin-6-il)-W-(2- hidroxietil)nicotinamida o una sal del mismo.
- 11. Un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10 o una sal farmaceuticamente 15 aceptable del mismo.
- 12. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo como se define en 11 y uno o mas vehfculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.
- 13. Un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicacion 11 para su uso en terapia.20 14. Un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la reivindicacion 11 para suuso en el tratamiento del cancer o una afeccion autoinmune y/o inflamatoria cronica.
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