ES2637595T3 - Derivados de 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1H-imidazo[4,5-c]quinolina - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo **(Ver fórmula)** en la que: R1 es hidrógeno o alquilo C1-3 y R2 se selecciona de entre - alquilo C1-6; y - alquilo C2-6 sustituido con hidroxi, alcoxi C1-4 o un grupo NRaRb en la que Ra y Rb son independientemente hidrógeno o alquilo C1-4, o Ra y Rb se combinan junto con el N al que están unidos para formar un anillo heterociclilo; o R1 y R2 se combinan junto con el N al que están unidos para formar un anillo heterociclilo; R3 es hidrógeno, alquilo C1-3 o CH2OH; R4 se selecciona de entre - un grupo fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-4, CF3, halógeno, hidroxi o alcoxi C1-4; - un grupo heteroaromático opcionalmente sustituido con alquilo C1-4, CF3, halógeno, hidroxi o alcoxi C1-4; - un grupo tetrahidropiranilo; - un grupo tetrahidrofuranilo; - un grupo cicloalquilo C3-7; y - un grupo CH2OMe.

Description

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DESCRIPCION

Derivados de 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolina Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a compuestos novedosos, composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos y a su uso en terapia.

Antecedentes de la invencion

Los genomas de los organismos eucariotas estan altamente organizados en el interior del nucleo de la celula. Las cadenas largas de ADN duplex estan envueltas alrededor de un octomero de proteinas de histona (que normalmente comprende dos copias de histonas H2A, H2B H3 y H4) para formar un nucleosoma. A continuacion, esta unidad basica se comprime adicionalmente mediante la agregacion y el plegado de los nucleosomas para formar una estructura de cromatina altamente condensada. Son posibles una gama de diferentes estados de condensacion, y la tension u opresion de esta estructura varia durante el ciclo celular, siendo mas compacta durante el proceso de division celular. La estructura de la cromatina desempena un papel critico en la regulacion de la transcripcion genica, que no puede ocurrir de manera eficiente a partir de la cromatina altamente condensada. La estructura de la cromatina esta controlada por una serie de modificaciones postraduccionales de las proteinas histonas, en particular las histonas H3 y H4, y mas comunmente dentro de las colas de las histonas que se extienden mas alla de la estructura nucleosomica del nucleo. Estas modificaciones incluyen acetilacion, metilacion, fosforilacion, ubiquitinilacion, SUMOilacion. Estas marcas epigeneticas son escritas y borradas por enzimas especificas, que colocan las etiquetas en residuos especificos dentro de la cola de la histona, formando de esta manera un codigo epigenetico, que a continuacion es interpretado por la celula para permitir una regulacion especifica del gen de la estructura de la cromatina y, por lo tanto, la transcripcion.

La acetilacion de histonas se asocia, en la mayoria de los casos, con la activacion de la transcripcion genica, ya que la modificacion afloja la interaccion del ADN y el octomero de las histonas cambiando la electrostatica. Ademas de este cambio fisico, proteinas especificas se unen a los residuos de lisina acetilada dentro de las histonas para leer el codigo epigenetico. Los bromodominios son pequenos dominios distintos (~ 110 aminoacidos) dentro de las proteinas que se unen comunmente a los residuos de lisina acetilada, pero no exclusivamente en el contexto de las histonas. Hay una familia de aproximadamente 50 proteinas que se conoce que contienen bromodominios, y tienen una gama de funciones dentro de la celula.

La familia BET de proteinas que contienen bromodominios comprende 4 proteinas (BRD2, BRD3, BRD4 y BRD-t) que contienen bromodominios en tandem capaces de unirse a dos residuos de lisina acetilados en estrecha proximidad, aumentando la especificidad de la interaccion. Se ha informado de que BRD2 y BRD3 se asocian con histonas a lo largo de genes transcritos activamente y pueden estar implicadas en facilitar la elongacion transcripcional (Leroy et al, Mol. Celda. 200830 (1):51 -60), mientras que BRD4 parece estar implicada en la captacion del complejo pTEF-p a genes inducibles, resultando en la fosforilacion de la ARN polimerasa y una mayor produccion transcripcional (Hargreaves et al, Cell, 2009 138 (1): 129-145). Se ha informado tambien de que BRD4 o BRD3 pueden fusionarse con NUT (proteina nuclear en los testiculos) formando nuevos oncogenes de fusion, BRD4-NUT o BRD3-NUT, en una forma altamente maligna de neoplasia epitelial (French et al. Cancer Research, 2003, 63, 304-307 y French et al. Journal of Clinical Oncology, 2004, 22 (20), 4135-4193). Los datos sugieren que las proteinas de fusion BRD-NUT contribuyen a la carcinogenesis (Oncogene, 2008, 27, 2237-2242). La BRD-t se expresa unicamente en los testiculos y en el ovario. Se ha informado de que todos los miembros de la familia tienen alguna funcion en el control o en la ejecucion de aspectos del ciclo celular, y se ha demostrado que permanecen en complejo con los cromosomas durante la division celular (lo que sugiere un papel en el mantenimiento de la memoria epigenetica). Ademas, algunos virus hacen uso de estas proteinas para fijar sus genomas a la cromatina de la celula huesped, como parte del proceso de replicacion viral (You et al Cell, 2004 117(3): 349-60).

La solicitud de patente japonesa JP2008-156311 divulga un derivado de benzimidazol que se dice es un agente de union de bromodominio BRD2 que tiene utilidad con respecto a la infeccion/proliferacion de virus.

La solicitud de patente WO2009084693A1 divulga una serie de derivados de tienotriazolodiazepieno que se dice que inhiben la union entre una histona acetilada y una proteina que contiene bromodominio, que se dice que son utiles como agentes anticancerigenos.

La solicitud de patente PCT PCT/EP2010/066699 divulga una serie de derivados de quinolina que inhiben la union de los bromodominios de la familia BET con residuos de lisina acetilados. Los documentos WO2007/075468 y WO2004/058759 divulgan imidazoquinolinas utiles como modificadores de la respuesta inmune. Se ha encontrado una clase novedosa de compuestos que inhiben la union de los bromodominios con sus proteinas acetiladas

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analogas, mas particularmente una clase de compuestos que inhiben la union de bromodominios de la familia BET a residuos de lisina acetilados. En adelante, dichos compuestos se denominaran "inhibidores de bromodominio".

Sumario de la invencion

En un primer aspecto de la presente invencion, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo

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En un segundo aspecto de la presente invencion, se proporciona una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y uno o mas vehiculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.

En un tercer aspecto de la presente invencion, se proporciona un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia, en particular en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio.

En un cuarto aspecto de la presente invencion, se proporciona el uso de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio.

Descripcion detallada de la intencion

La presente invencion se refiere a compuestos de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos

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en la que:

R1 es hidrogeno o alquilo C1-3 y R2 se selecciona de entre

• alquilo C1-6; y

• alquilo C2-6 sustituido con hidroxi, alcoxi C1-4 o un grupo NRaRb en la que Ra y Rb son independientemente hidrogeno o alquilo C1-4, o Ra y Rb se combinan junto con el N al que estan unidos para formar un anillo heterociclilo;

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o

R1 y R2 se combinan junto con el N al que estan unidos para formar un anillo heterociclilo;

R3 es hidrogeno, alquilo C1-3 o CH2OH;

R4 se selecciona de entre

• un grupo fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-4, CF3, halogeno, hidroxi o alcoxi C1-4;

• un grupo heteroaromatico opcionalmente sustituido con alquilo C1-4, CF3, halogeno, hidroxi o alcoxi C1-4;

• un grupo tetrahidropiranilo;

• un grupo tetrahidrofuranilo;

• un grupo cicloalquilo C3-7; y

• un grupo CH2OMe.

En una realizacion, R1 y R2 se combinan junto con el N al que estan unidos para formar un anillo piperidinilo o morfolinilo.

En una realizacion adicional, R1 es hidrogeno y R2 es alquilo C1-4 (tal como metilo, etilo, isopropilo o isobutilo).

En una realizacion adicional, R1 es hidrogeno y R2 es alquilo C2-4 (tal como metilo o etilo) sustituido con hidroxi o metoxi.

En una realizacion adicional, R1 es hidrogeno y R2 es alquilo C2-4 (tal como etilo) sustituido por NRaRb, en la que Ra y Rb son ambos hidrogeno o Ra y Rb se combinan junto con el N al que estan unidos forman un anillo morfolinilo.

En una realizacion, R3 es hidrogeno y R4 es tetrahidropiranilo.

En una realizacion adicional, R3 es hidrogeno o metilo y R4 es piridilo (tal como 2-piridilo).

En una realizacion adicional, R3 es hidrogeno o metilo y R4 es pirazolilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-4.

En una realizacion adicional, R3 es hidrogeno o metilo y R4 es fenilo.

En una realizacion adicional, R3 es metilo y R4 es un grupo -CH2OMe.

Tal como se usa en la presente memoria, el termino “sustituido” se refiere a sustitucion con el sustituyente o los sustituyentes indicados, permitiendose multiples grados de sustitucion, a menos que se indique lo contrario. Cuando el sustituyente esta en un anillo que comprende un heteroatomo, el sustituyente puede estar situado en un carbono o un heteroatomo, si este ultimo es apropiado.

Aunque las realizaciones para cada variable han sido enumeradas generalmente por separado para cada variable, se pretende que la presente invencion incluya todas las combinaciones de las realizaciones descritas anteriormente, incluyendo sus sales.

Los compuestos particulares segun la invencion son:

2-({7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -[(1 R)-1 -feniletil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il}amino)etanol;

2-{[7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2- il]amino}etanol;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-N-etil-8-metoxi-1-(1-metoxipropan-2-il)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

N1-(7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-1 -((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il)etan-1,2- diamina;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(4-morfolinil)etil]-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5- c]quinolin-2-amina;

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7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5- c]quinolin-2-amina;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-N-etil-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

N-[7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1 -[1 -metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il]-1,2- etanediamina;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-N-[2-(4-morfolinil)etil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin- 2-amina;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2- amina;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1-(2-piridinilmetil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-2-(4-morfolinil)-1 -[(1 R)-1 -feniletil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolina;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -[(1 R)-1 -feniletil]-2-(1 -piperidinil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolina;

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-2-(4-morfolinil)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolina;

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-N-etil-8-metoxi-1 -(1 -(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)etil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N,N-dimetil-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2- amina; y

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N-(2-metoxietil)-1-((R)-1-(piridin-2-il)etil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina o una sal de los mismos.

En la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario:

• El termino "halogeno" se usa para describir un grupo seleccionado de entre fluor, cloro o bromo;

• Los terminos "alquilo C1-3", "alquilo C1-4" y "alquilo C1-6" se usan para describir un grupo o una parte del grupo que comprende un grupo alquilo lineal o ramificado que contiene de 1 a 3, de 1 a 4 o de 1 a 6 atomos de carbono, respectivamente. Otras referencias deben ser interpretadas de manera similar. Los ejemplos adecuados de dichos grupos incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, t-butilo, pentilo y hexilo;

• El termino “alcoxi C1-4" incluye ejemplos tales como metoxi, etoxi, propiloxi, isopropiloxi, n-butiloxi, isobutiloxi y t-butiloxi;

• El termino "cicloalquilo C3-7" se usa para describir un anillo carbociclico no aromatico que contiene al menos tres y como maximo siete atomos de carbono. Los ejemplos de cicloalquilo C3-7 incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo.

• Tal como se usa en la presente memoria, el termino “grupo heteroaromatico” se refiere a un grupo aromatico monociclico de 5 o 6 miembros en el que 1, 2, 3, 4 de los atomos de carbono estan reemplazados por un heteroatomo seleccionado independientemente de entre O, S y N; o a un grupo aromatico biciclico de 8 a 11 miembros en el que 1, 2, 3, 4 o 5 de los atomos de carbono estan reemplazados por un heteroatomo seleccionado independientemente de entre O, S y N. Los ejemplos de grupos heteroaromaticos monociclicos de 5 o 6 miembros incluyen pirrolinilo, furanilo, tienilo, pirrolilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, piridinilo, triazolilo, triazinilo, piridazilo, pirimidinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, pirazinilo, pirazolilo y pirimidinilo. Los ejemplos de grupos heteroaromaticos biciclicos de 8 a 11 miembros incluyen 6H-tieno[2,3-b]pirrolilo, imidazo[2,1-b][1,3]tiazolilo, imidazo[5,1- b][1,3]tiazolilo, indolilo, isoindolilo, indazolilo, bencimidazolilo, [1,3]tiazolo[3,2-b][1,2,4]triazolilo, benzoxazolilo, por ejemplo, benzoxazol-2-ilo, benzisoxazolilo, benzotiazolilo, benzoisotiazolilo, benzotienilo, benzofuranilo, naftridinilo, quinolilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinolinilo e isoquinolilo.

• Tal como se usa en la presente memoria, el termino “heterociclilo" o “anillo heterociclilo" se refiere a un anillo no aromatico, saturado, de 4-7 miembros, que comprende 1, 2 o 3 heteroatomos seleccionados de entre O, N y S. Los ejemplos de dichos grupos incluyen pirrolidinilo, morfolinilo, piperidinilo y piperazinilo.

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Se apreciara que la presente invencion cubre compuestos de formula (I) como la base libre y como sales de los mismos, por ejemplo, como una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos. En una realizacion, la invencion se refiere a compuestos de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos.

Debido a su posible uso en medicina, idealmente, las sales de los compuestos de formula (I) son farmaceuticamente aceptables. Las sales farmaceuticamente aceptables adecuadas pueden incluir sales de adicion de acido o de base. Tal como se usa en la presente memoria, la expresion “sal farmaceuticamente aceptable” significa cualquier sal o solvato farmaceuticamente aceptable de un compuesto de formula (I) que, tras ser administrada al receptor, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente). En una realizacion, la expresion “sal farmaceuticamente aceptable” significa cualquier sal farmaceuticamente aceptable de un compuesto de formula (I), que, tras ser administrada al receptor, es capaz de proporcionar (directa o indirectamente). Para una revision acerca de las sales adecuadas, vease Berge et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977). Tipicamente, una sal farmaceuticamente aceptable puede prepararse facilmente usando un acido o base deseados segun sea apropiado. La sal resultante puede precipitarse de la solucion y puede recogerse mediante filtracion o puede recuperarse mediante evaporacion del disolvente.

Una sal de adicion de base farmaceuticamente aceptable puede formarse mediante reaccion de un compuesto de formula (I) con una base inorganica u organica adecuada (por ejemplo, trietilamina, etanolamina, trietanolamina, colina, arginina, lisina o histidina), opcionalmente en un disolvente adecuado, para dar la sal de adicion de base que es aislada normalmente, por ejemplo, mediante cristalizacion y filtracion. Las sales de bases farmaceuticamente aceptables incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio y potasio, sales de metales alcalinoterreos tales como sales de calcio y magnesio y sales con bases organicas, incluyendo sales de aminas primarias, secundarias y terciarias tales como isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexilamina y N-metil-D-glucamina.

Una sal de adicion de acido farmaceuticamente aceptable puede formarse mediante reaccion de un compuesto de formula (I) con un acido inorganico u organico adecuado (tal como acido bromhidrico, clorhidrico, sulfurico, nitrico, fosforico, succinico, maleico, acetico, propionico, fumarico, citrico, tartarico, lactico, benzoico, salicilico, glutamaico, aspartico, p-toluenosulfonico, bencenosulfonico, metanosulfonico, etanosulfonico, naftalensulfonico tal como acido 2-naftalensulfonico o hexanoico), opcionalmente en un disolvente adecuado tal como un disolvente organico, para dar la sal que se aisla normalmente, por ejemplo, mediante cristalizacion y filtracion. Una sal de adicion de acido farmaceuticamente aceptable de un compuesto de formula (I) puede comprender o puede ser, por ejemplo, un bromhidrato, clorhidrato, sulfato, nitrato, fosfato, succinato, maleato, acetato, propionato, fumarato, citrato, tartrato, lactato, benzoato, salicilato, glutamato, aspartato, p-toluenosulfonato, bencenosulfonato, metanosulfonato, etanosulfonato, naftalenosulfonato (por ejemplo, 2-naftalenosulfonato) o hexanoato.

Pueden usarse otras sales no farmaceuticamente aceptables, por ejemplo, formiatos, oxalatos o trifluoroacetatos, por ejemplo, en el aislamiento de los compuestos de formula (I), y estan incluidos dentro del ambito de la presente invencion.

La invencion incluye dentro de su ambito todas las posibles formas estequiometricas y no estequiometricas de las sales de los compuestos de formula (I).

Se apreciara que muchos compuestos organicos pueden formar complejos con disolventes en los que se hacen reaccionar o a partir de los que se precipitan o cristalizan. Estos complejos se conocen como "solvatos". Por ejemplo, un complejo con agua se conoce como un "hidrato". Pueden usarse disolventes con altos puntos de ebullicion y/o capaces de formar enlaces de hidrogeno tales como agua, xileno, N-metilpirrolidinona, metanol y etanol para formar solvatos. Los procedimientos para la identificacion de solvatos incluyen, pero no se limitan a, RMN y microanalisis. Los solvatos de los compuestos de formula (I) estan dentro del ambito de la invencion.

La invencion incluye dentro de su ambito todas las formas estequiometricas y no estequiometricas posibles de los solvatos de los compuestos de formula (I).

Los compuestos de formula (I) pueden estar en forma cristalina o amorfa. Ademas, algunas de las formas cristalinas de los compuestos de formula (I) pueden existir como polimorfos, que estan incluidos dentro del ambito de la presente invencion. Las formas polimorficas de los compuestos de formula (I) pueden caracterizarse y diferenciarse usando una serie de tecnicas analiticas convencionales, incluyendo, pero sin limitarse a, patrones de difraccion de rayos X en polvo (XRPD), espectros infrarrojos (IR), espectros Raman, calorimetria diferencial de barrido (DSC), analisis termogravimetrico (TGA) y resonancia magnetica nuclear de estado solido (SSNMR).

Ciertos compuestos descritos en la presente memoria pueden contener uno o mas atomos quirales de manera que puedan formarse isomeros opticos, por ejemplo, enantiomeros o diastereoisomeros. Por consiguiente, la presente invencion abarca todos los isomeros de los compuestos de formula (I), bien como isomeros individuales aislados de manera que esten sustancialmente libres del otro isomero (es decir, puros) o bien como mezclas (es decir, racematos y mezclas racemicas). Un isomero individual aislado de manera que quede sustancialmente libre del otro

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isomero (es decir, puro) puede ser aislado de manera que haya presente menos del 10%, particularmente menos de aproximadamente el 1%, por ejemplo, menos de aproximadamente el 0,1%, del otro isomero.

La separacion de los isomeros puede conseguirse mediante tecnicas convencionales conocidas por las personas con conocimientos en la materia, por ejemplo, mediante cristalizacion fraccionada, cromatografia o HPLC.

Ciertos compuestos de formula (I) pueden existir en una de diversas formas tautomeras. Se entendera que la presente invencion abarca todos los tautomeros de los compuestos de formula (I), bien como tautomeros individuales o bien como mezclas de los mismos.

A partir de lo indicado anteriormente, se apreciara que dentro del ambito de la invencion se incluyen los solvatos, isomeros y las formas polimorficas de los compuestos de formula (I) y sus sales.

Los compuestos de formula (I) o sus sales pueden prepararse mediante una diversidad de procedimientos, incluyendo la quimica estandar. Cualquier variable definida previamente continuara teniendo el significado definido previamente, a menos que se indique lo contrario. A continuacion, se exponen procedimientos sinteticos ilustrativos generales y, a continuacion, se preparan compuestos especificos de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables en los ejemplos de trabajo. Estos procedimientos forman aspectos adicionales de la presente invencion.

En un aspecto adicional, se proporciona un procedimiento de preparacion de un compuesto de formula (I) que comprende un procedimiento seleccionado de entre (a), (b), (c), (d) y (e) en el que

(a) comprende hacer reaccionar un compuesto de formula (II)

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en la que R3 y R4 son tal como se han definido en la formula (I) y Hal es halogeno con un compuesto de formula (III)

NR1R2 (III)

en la que R1 y R2 son tal como se han definido en la formula (I).

(b) comprende hacer reaccionar un compuesto de formula (IV)

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en la que R3 y R4 son tal como se han definido en la formula (I) con un compuesto de formula S = C = NR1R2 (V)

en la que R1 y R2 son tal como se han definido en la formula (I);

(c) cuando NR1R2 es NH2, hacer reaccionar un compuesto de formula (IV) con bromuro de ciananogeno;

(d) comprende hacer reaccionar un compuesto de formula (IV) tal como se ha definido anteriormente con un compuesto de formula (VI)

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(e) comprende hacer reaccionar un compuesto de formula (IV) tal como se ha definido anteriormente con un compuesto de formula (VII)

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Procedimiento (a)

Un grupo Hal apropiado es cloro. La reaccion entre el compuesto de formula (II) y la formula (III) puede llevarse a cabo en un disolvente inerte opcionalmente en presencia de una base.

Los compuestos de formula (II) pueden prepararse mediante procedimientos descritos en la presente memoria o mediante procedimientos analogos a los mismos. Los compuestos de formula (III) estan disponibles comercialmente.

Procedimiento (b)

La reaccion entre el compuesto de formula (IV) y el compuesto de formula (V) puede llevarse a cabo en un disolvente inerte (tal como metanol). Los compuestos de formula (IV) pueden prepararse mediante los procedimientos descritos en la presente memoria o mediante procedimientos analogos a los mismos. Los compuestos de formula (V) estan disponibles comercialmente.

Procedimiento (c)

La reaccion entre el compuesto de formula (IV) y el compuesto de formula (V) puede llevarse a cabo en un disolvente inerte (tal como etanol). Los compuestos de formula (IV) pueden prepararse mediante procedimientos descritos en la presente memoria o mediante procedimientos analogos a los mismos. El bromuro de cinanogeno esta disponible comercialmente.

Procedimiento (d)

La reaccion entre el compuesto de formula (IV) y el compuesto de formula (VI) puede llevarse a cabo en un disolvente inerte (tal como acetonitrilo). Los compuestos de formula (IV) pueden prepararse mediante

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procedimientos descritos en la presente memoria o mediante procedimientos analogos a los mismos. Los compuestos de formula (VI) estan disponibles comercialmente.

Procedimiento (e)

La reaccion entre el compuesto de formula (IV) y el compuesto de formula (VII) puede llevarse a cabo en un disolvente inerte (tal como etanol). Los compuestos de formula (VII) pueden prepararse mediante procedimientos descritos en Eur. J. Org. Chem. 2010 (19) 3641-3649.

Las personas con conocimientos en la materia apreciaran que puede ser ventajoso proteger uno o mas grupos funcionales de los compuestos descritos anteriormente. Los ejemplos de grupos protectores y los medios para su eliminacion pueden encontrarse en T. W. Greene "Protective Groups in Organic Synthesis" (4a edicion, J. Wiley and Sons, 2006). Los grupos protectores de amina adecuados incluyen acilo (por ejemplo, acetilo, carbamato (por ejemplo, 2',2',2'-tricloroetoxicarbonilo, benciloxicarbonilo o t-butoxicarbonilo) y arilalquilo (por ejemplo, bencilo), que puede eliminarse mediante hidrolisis (por ejemplo, usando un acido, tal como acido clorhidrico en dioxano o acido trifluoroacetico en diclorometano) o reductivamente (por ejemplo, hidrogenolisis de un grupo bencilo o benciloxicarbonilo o eliminacion reductora de un grupo 2',2',2'-tricloroetoxicarbonilo usando zinc en acido acetico) segun sea apropiado. Otros grupos protectores de amina adecuados incluyen trifluoroacetilo (-COCF3) que puede eliminarse mediante hidrolisis catalizada por una base.

Se apreciara que, en cualquiera de las rutas descritas anteriormente, puede variarse el orden preciso de las etapas sinteticas mediante las cuales se introducen los diversos grupos y restos en la molecula. Estara dentro de la habilidad del experto en la tecnica asegurar que grupos o restos introducidos en una etapa del procedimiento no se veran afectados por transformaciones y reacciones posteriores, y seleccionar el orden de las etapas sinteticas en consecuencia.

Se cree que ciertos compuestos intermedios descritos anteriormente son novedosos y, por lo tanto, forman un aspecto adicional de la invencion.

Los compuestos de formula (I) y sus sales son inhibidores de bromodominio y, de esta manera, se cree que tienen utilidad potencial en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales esta indicado un inhibidor de bromodominio.

La presente invencion proporciona de esta manera un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia. El compuesto de formula (I) o una sal farmaceutica de la misma puede usarse en el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales esta indicado un inhibidor de bromodominio.

De esta manera, la presente invencion proporciona un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de cualquier enfermedad o afeccion para la cual este indicado un inhibidor de bromodominio. En otra realizacion, se proporciona un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de afecciones autoinmunes y/o inflamatorias cronicas. En una realizacion adicional, se proporciona un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento del cancer.

Se proporciona tambien el uso de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de enfermedades o afecciones para las cuales esta indicado un inhibidor de bromodominio.

Se describe tambien un procedimiento para tratar enfermedades o afecciones para las cuales este indicado un inhibidor de bromodominio en un sujeto que lo necesita, que comprende administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

De manera adecuada, el sujeto que lo necesita es un mamifero, particularmente un ser humano.

Tal como se usa en la presente memoria, la expresion "cantidad eficaz" significa la cantidad de un farmaco o un agente farmaceutico que provocara la respuesta biologica o medica de un tejido, sistema, animal o ser humano que busca, por ejemplo, un investigador o un clinico. Ademas, la expresion "cantidad terapeuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, en comparacion con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha cantidad, resulta en un tratamiento, curacion, prevencion o mejoria, mejorados, de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminucion en la tasa de avance de una enfermedad o un trastorno. La expresion incluye tambien dentro de su ambito cantidades eficaces para mejorar la funcion fisiologica normal.

Se cree que los inhibidores de bromodominio son utiles en el tratamiento de una diversidad de enfermedades o afecciones relacionadas con la inflamacion sistemica o tisular, respuestas inflamatorias a infeccion o hipoxia,

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activacion y proliferacion celular, metabolismo lipidico, fibrosis y en la prevencion y el tratamiento de infecciones virales.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de una amplia variedad de enfermedades autoinmunes e inflamatorias cronicas tales como artritis reumatoide, osteoartritis, gota aguda, psoriasis, lupus eritematoso sistemico, esclerosis multiple, enfermedad inflamatoria intestinal (enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa), asma, enfermedad pulmonar obstructiva cronica, neumonitis, miocarditis, pericarditis, miositis, eczema, dermatitis (incluyendo dermatitis atopica), alopecia, vitiligo, enfermedades de la piel ampollosa, nefritis, vasculitis, aterosclerosis, enfermedad de Alzheimer, depresion, sindrome de Sjogren, sialoadenitis, oclusion de la vena retiniana central, oclusion de la ramificacion de la vena retiniana, sindrome de Irvine-Gass (post-catarata y post- quirurgico), retinitis pigmentosa, pars planitis, retinocoroidopatia en perdigonada, membrana epirretiniana, edema macular quistico, telangiectasia parafoveal, maculopatias traccionales, sindromes de traccion vitreomacular, desprendimiento de retina, neurorretinitis, edema macular idiopatico, retinitis, ojo seco (queratoconjuntivitis sicca), queratoconjuntivitis vernal, queratoconjuntivitis atopica, uveitis anterior, uveitis pan, uveitis posterior, edema macular asociado a uveitis. escleritis, retinopatia diabetica, edema de macula diabetico, distrofia macular relacionada con la edad, escleritis, hepatitis, pancreatitis, cirrosis biliar primaria, colangitis esclerosante, enfermedad de Addison, hipofisitis, tiroiditis, diabetes tipo I y rechazo agudo de organos trasplantados.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de una amplia variedad de afecciones inflamatorias agudas tales como gota aguda, arteritis de celulas gigantes, nefritis incluyendo nefritis lupica, vasculitis con afectacion de organos tal como glomerulonefritis, vasculitis incluyendo arteritis de celulas gigantes, granulomatosis de Wegener, poliarteritis nodosa, enfermedad de Behget, enfermedad de Kawasaki, arteritis de Takayasu, pioderma gangrenoso, vasculitis con afectacion de organos y rechazo agudo de organos trasplantados.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en la prevencion o el tratamiento de enfermedades o afecciones que implican respuestas inflamatorias a infecciones con bacterias, virus, hongos, parasitos o sus toxinas, tales como sepsis, sindrome de sepsis, choque septico, endotoxemia, sindrome de respuesta inflamatoria sistemica (SIRS), sindrome de disfuncion multiorganica, sindrome de choque toxico, lesion pulmonar aguda, SDRA (sindrome de dificultad respiratoria en adultos), insuficiencia renal aguda, hepatitis fulminante, quemaduras, pancreatitis aguda, sindromes posquirurgicos, sarcoidosis, reacciones de Herxheimer, encefalitis, mielitis, meningitis, malaria y SIRS asociado con infecciones virales tales como gripe, herpes zoster, herpes simple y coronavirus.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en la prevencion o el tratamiento de afecciones asociadas con lesiones de isquemia-reperfusion tales como infarto de miocardio, isquemia cerebrovascular (apoplejia), sindromes coronarios agudos, lesion por reperfusion renal, trasplante de organos, injerto de bypass en arteria coronaria, procedimientos de bypass cardiopulmonar, embolismo pulmonar, renal, hepatico, gastrointestinal o extremidad periferica.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de trastornos del metabolismo de lipidos mediante la regulacion de APO-A1 tales como hipercolesterolemia, aterosclerosis y enfermedad de Alzheimer.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de afecciones fibroticas tales como fibrosis pulmonar idiopatica, fibrosis renal, estenosis postoperatoria, formacion de cicatrices queloides, esclerodermia (incluida morfea) y fibrosis cardiaca.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en la prevencion y el tratamiento de infecciones virales tales como virus del herpes, virus del papiloma humano, adenovirus y poxvirus y otros virus de ADN.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento del cancer, incluyendo hematologicos (tales como leucemia, linfoma y mieloma multiple), epiteliales (incluyendo carcinomas de pulmon, mama y colon), carcinomas de linea media, tumores mesenquimales, hepaticos, renales y neurologicos.

Los inhibidores de bromodominio pueden ser utiles en el tratamiento de patologias dermicas tales como melanoma no maligno (queratosis actinica y celulas basales) melanoma in situ, carcinoma de celulas escamosas y linfoma cutaneo de celulas T.

En una realizacion, la enfermedad o afeccion para la que esta indicado un inhibidor de bromodominio se selecciona de entre enfermedades asociadas con el sindrome de respuesta inflamatoria sistemica, tales como sepsis, quemaduras, pancreatitis, traumatismo mayor, hemorragia e isquemia. En esta realizacion, el inhibidor de bromodominio se administraria en el punto de diagnostico para reducir la incidencia de: SIRS, comienzo de shock, sindrome de disfuncion de multiples organos, que incluye el comienzo de lesion pulmonar aguda, SIRS, lesion renal, hepatica, cardiaca y gastrointestinal aguda y mortalidad. En otra realizacion, el inhibidor de bromodominio se administraria antes de procedimientos quirurgicos u otros procedimientos asociados con un alto riesgo de sepsis, hemorragia, dano tisular extenso, SIRS o MODS (sindrome de disfuncion de multiples organos). En una realizacion

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particular, la enfermedad o afeccion para la que esta indicado un inhibidor de bromodominio es sepsis, sindrome de sepsis, choque septico y endotoxemia. En otra realizacion, el inhibidor de bromodominio esta indicado para el tratamiento de pancreatitis aguda o cronica. En otra realizacion, el bromodominio esta indicado para el tratamiento de quemaduras.

En una realizacion, la enfermedad o afeccion para la que esta indicado un inhibidor de bromodominio se selecciona de entre infecciones y reactivaciones de herpes simple, herpes labial, infecciones y reactivaciones de herpes zoster, varicela, herpes, virus del papiloma humano, virus de inmunodeficiencia humana (VIH), neoplasia cervical, infecciones por adenovirus, incluyendo enfermedades respiratorias agudas, infecciones por poxvirus tales como viruela vacuna y viruela y virus de la peste porcina africana. En una realizacion particular, un inhibidor de bromodominio esta indicado para el tratamiento de infecciones por el virus del papiloma humano de piel o epitelio cervical.

La expresion "enfermedades o afecciones para las que esta indicado un inhibidor de bromodominio", pretende incluir cada uno o la totalidad de entre los estados de enfermedad anteriores.

Aunque es posible que, para su uso en terapia, un compuesto de formula (I) asi como sus sales farmaceuticamente aceptables puedan administrarse como el producto quimico en bruto, es comun presentar el ingrediente activo como una composicion farmaceutica.

Por lo tanto, la presente invencion proporciona en un aspecto adicional una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable y uno o mas vehiculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables. Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables son tal como se han descrito anteriormente. El vehiculo o los vehiculos, el diluyente o los diluyentes o el excipiente o los excipientes deben ser aceptables en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la composicion y no deben ser daninos para el receptor de la misma. Segun otro aspecto de la invencion, se proporciona tambien un procedimiento de preparacion de una composicion farmaceutica que incluye mezclar un compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, con uno o mas vehiculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables. La composicion farmaceutica puede usarse en el tratamiento de cualquiera de las condiciones descritas en la presente memoria.

Debido a que los compuestos de formula (I) estan destinados para su uso en composiciones farmaceuticas, se comprendera facilmente que cada uno de ellos se proporciona preferentemente en forma sustancialmente pura, por ejemplo, una pureza de al menos el 60%, de manera mas adecuada una pureza de al menos el 75% y preferentemente una pureza de al menos el 85%, especialmente una pureza de al menos el 98% (% en peso por peso).

Las composiciones farmaceuticas pueden presentarse en formas de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por dosis unitaria. Las composiciones de dosis unitarias preferentes son aquellas que contienen una dosis o sub-dosis diaria, o una fraccion apropiada de la misma, de un ingrediente activo. Por lo tanto, dichas dosis unitarias pueden administrarse mas de una vez al dia. Las composiciones de dosis unitarias preferentes son aquellas que contienen una dosis o sub-dosis diaria (para su administracion mas de una vez al dia), tal como se ha indicado anteriormente en la presente memoria, o una fraccion apropiada de la misma, de un ingrediente activo.

Las composiciones farmaceuticas pueden adaptarse para su administracion mediante cualquier via apropiada, por ejemplo, mediante via oral (incluyendo bucal o sublingual), rectal, inhalada, intranasal, topica (incluyendo bucal, sublingual o transdermica), ocular (incluyendo topica, intraocular, subconjuntival, epiescleral o debajo de la capsula de Tenon), vaginal o parenteral (incluyendo subcutanea, intramuscular, intravenosa o intradermica). Dichas composiciones pueden prepararse mediante cualquier procedimiento conocido en la tecnica de farmacia, por ejemplo, asociando el ingrediente activo con el vehiculo o los vehiculos o el excipiente o los excipientes.

En una realizacion, la composicion farmaceutica esta adaptada para la administracion parenteral, particularmente la administracion intravenosa.

En una realizacion, la composicion farmaceutica esta adaptada para la administracion oral.

En una realizacion, la composicion farmaceutica esta adaptada para la administracion topica.

Una forma de dosificacion preferente que resulta en la oclusion y la modificacion de la permeacion de la piel para aumentar o disminuir la exposicion sistemica de compuestos de bromodominio, incluye, pero no se limita a, las formas farmaceuticamente aceptables de carboximetilcelulosa, un aliginato, gelatina o polivinilpirrolidona.

Las composiciones farmaceuticas adaptadas para la administracion parenteral incluyen soluciones inyectables esteriles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos y solutos que

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convierten la composicion en isotonica con la sangre del receptor deseado; y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes. Las composiciones pueden presentarse en recipientes de dosis unitaria o multi-dosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en un estado liofilizado (secado por congelacion) que requiere solamente la adicion del vehiculo liquido esteril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes del uso. Pueden prepararse soluciones y suspensiones inyectables extemporaneas a partir de polvos, granulos y comprimidos esteriles.

Las composiciones farmaceuticas adaptadas para la administracion oral pueden presentarse como unidades discretas tales como capsulas o comprimidos; polvos o granulos; soluciones o suspensiones en liquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; o emulsiones liquidas de aceite en agua o emulsiones liquidas de agua en aceite.

Por ejemplo, para la administracion oral en forma de un comprimido o una capsula, el componente de farmaco activo puede combinarse con un vehiculo inerte, oral, no toxico, farmaceuticamente aceptable, tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos adecuados para su incorporacion en comprimidos o capsulas pueden prepararse reduciendo el compuesto a un tamano fino adecuado (por ejemplo, mediante micronizacion) y mezclando con un vehiculo farmaceuticamente preparado de manera similar, tal como un carbohidrato comestible, por ejemplo, almidon o manitol. Pueden estar presentes tambien agentes aromatizantes, conservantes, dispersantes y colorantes.

Las capsulas pueden fabricarse preparando una mezcla en polvo, tal como se ha descrito anteriormente, y rellenando envolturas o vainas de gelatina formadas. Pueden anadirse agentes deslizantes y lubricantes, tales como silice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol solido antes de la operacion de llenado. Puede anadirse tambien un agente desintegrante o solubilizante tal como agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio para mejorar la disponibilidad del medicamento cuando se ingiere la capsula.

Ademas, cuando se desee o sea necesario, pueden incorporarse tambien aglutinantes, deslizantes, lubricantes, agentes edulcorantes, aromatizantes, desintegrantes y agentes colorantes adecuados a la mezcla. Los aglutinantes adecuados incluyen almidon, gelatina, azucares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maiz, gomas naturales y sinteticas tales como goma arabiga, tragacanto o alginato sodico, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificacion incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen, sin limitacion, almidon, metil celulosa, agar, bentonita, goma xantana y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, preparando una mezcla de polvos, granulando o triturando, anadiendo un lubricante y desintegrante y prensando para formar comprimidos. Se prepara una mezcla en polvo mezclando el compuesto, triturado de manera adecuada, con un diluyente o base tal como se ha descrito anteriormente, y opcionalmente, con un aglutinante tal como carboximetilcelulosa, un aliginato, gelatina o polivinilpirrolidona, un retardante de solucion tal como parafina, un acelerador de resorcion tal como una sal cuaternaria y/o un agente de absorcion tal como bentonita, caolin o fosfato dicalcico. La mezcla en polvo puede granularse humedeciendola con un aglutinante tal como jarabe, pasta de almidon, mucilago de acadia o soluciones de materiales celulosicos o polimericos y forzandola a traves de una pantalla. Como una alternativa a la granulacion, la mezcla en polvo puede ser introducida en la maquina de formacion de comprimidos y el resultado son capsulas formadas imperfectamente rotas en granulos. Los granulos pueden lubricarse para prevenir que se peguen a los troqueles formadores de tabletas mediante la adicion de acido estearico, una sal estearato, talco o aceite mineral. A continuacion, la mezcla lubricada se comprime en comprimidos. Los compuestos de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables pueden combinarse tambien con un vehiculo inerte que fluye libremente y pueden comprimirse directamente en comprimidos sin pasar por las etapas de granulacion o de formacion de capsulas. Puede proporcionarse un revestimiento protector transparente u opaco que consiste en una capa selladora de goma laca, un revestimiento de azucar o material polimerico y un revestimiento pulido de cera. Pueden anadirse colorantes a estos revestimientos para distinguir las dosis unitarias diferentes.

Los fluidos orales, tales como soluciones, jarabes y elixires, pueden prepararse en forma de unidad de dosificacion de manera que una cantidad determinada contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes pueden prepararse disolviendo el compuesto en una solucion acuosa adecuadamente aromatizada, mientras que los elixires se preparan mediante el uso de un vehiculo alcoholico no toxico. Las suspensiones pueden formularse dispersando el compuesto en un vehiculo no toxico. Pueden anadirse tambien solubilizantes y emulsionantes tales como alcoholes isoestearilicos etoxilados y eteres de polioxietilen sorbitol, conservantes, aditivos saborizantes tales como aceite de menta o edulcorantes naturales o sacarina u otros edulcorantes artificiales y similares.

Cuando sea apropiado, las composiciones de dosificacion unitarias para la administracion oral pueden ser microencapsuladas. La formulacion puede prepararse tambien para prolongar o mantener la liberacion tal como por ejemplo revistiendo o incluyendo material en particulas en polimeros, cera o similares.

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Los compuestos de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables pueden administrarse tambien en forma de sistemas de liberacion de liposomas, tales como pequenas vesiculas unilamelares, grandes vesiculas unilamelares y vesiculas multilamelares. Los liposomas pueden formarse a partir de una diversidad de fosfolipidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.

Las composiciones farmaceuticas adaptadas para la administracion topica pueden formularse como unguentos, cremas, suspensiones, emulsiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, espumas, pulverizaciones, aerosoles o aceites. Dichas composiciones farmaceuticas pueden incluir aditivos convencionales que incluyen, pero no se limitan a, conservantes, disolventes para ayudar a la penetracion del farmaco, co-solventes, emolientes, propelentes, agentes modificadores de la viscosidad (agentes gelificantes), tensioactivos y vehiculos. En una realizacion, se proporciona una composicion farmaceutica adaptada para la administracion topica que comprende entre el 0,01-10%, o entre el 0,01-1% del compuesto de formula (I), o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en peso de la composicion.

Para los tratamientos del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo, boca y piel, las composiciones se aplican preferentemente como una solucion, suspension, emulsion, unguento, crema, gel, pulverizacion o espuma topica. Cuando se formula en un unguento, el ingrediente activo puede emplearse con una base de unguento parafinico o miscible con agua. De manera alternativa, el ingrediente activo puede formularse en una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite.

Las composiciones farmaceuticas adaptadas para administraciones topicas para los ojos incluyen gotas oculares en las que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un vehiculo adecuado, especialmente un disolvente acuoso. Las composiciones a administrar al ojo tendran un pH y una osmolalidad oftalmicamente compatibles. Pueden incluirse uno o mas agentes de ajuste del pH y/o agentes tamponantes oftalmicamente aceptables en una composicion de la invencion, incluyendo acidos tales como acidos acetico, borico, citrico, lactico, fosforico y clorhidrico; bases tales como hidroxido sodico, fosfato sodico, borato sodico, citrato sodico, acetato sodico y lactato sodico; y tampones tales como citrato/dextrosa, bicarbonato sodico y cloruro amonico. Dichos acidos, bases y tampones pueden incluirse en una cantidad requerida para mantener el pH de la composicion en un intervalo oftalmicamente aceptable. Una o mas sales oftalmicamente aceptables pueden incluirse en la composicion en una cantidad suficiente para llevar la osmolalidad de la composicion a un intervalo oftalmicamente aceptable. Dichas sales incluyen aquellas que tienen cationes de sodio, potasio o amonio y aniones de cloruro, citrato, ascorbato, borato, fosfato, bicarbonato, sulfato, tiosulfato o bisulfito.

Puede disenarse un dispositivo de administracion ocular para la liberacion controlada de uno o mas agentes terapeuticos con multiples velocidades de liberacion y cineticas de dosis sostenida y permeabilidad definidas. La liberacion controlada puede obtenerse mediante el diseno de matrices polimericas que incorporan diferentes opciones y propiedades de polimeros biodegradables/bioerosionables (por ejemplo, acetato de poli(etilen vinilo) (EVA), PVA superhidrolizado), hidroxialquilcelulosa (HPC), metilcelulosa (MC), hidroxipropilmetil celuilosa (HPMC), policaprolactona, acido poli(glicolico), acido poli(lactico), polianhidrido, de pesos moleculares polimericos, cristalinidad polimerica, relaciones de copolimeros, condiciones de procesamiento, acabado superficial, geometria, adicion de excipientes y revestimientos polimericos que mejoraran la difusion, la erosion, la disolucion y la osmosis de farmacos.

Las composiciones farmaceuticas para el suministro ocular tambien incluyen una composicion acuosa gelificable en el sitio. Dicha composicion comprende un agente gelificante en una concentracion eficaz para promover la gelificacion con el contacto con el ojo o con el fluido lacrimal. Los agentes gelificantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, polimeros termoendurecibles. L expresion “gelificable en el sitio”, tal como se usa en la presente memoria, no solo incluye liquidos de baja viscosidad que forman geles tras el contacto con el ojo o con fluido lagrimal, sino que incluye tambien liquidos mas viscosos tales como geles semi-fluidos y tixotropicos que exhiben una viscosidad sustancialmente mayor o una rigidez de gel tras la administracion al ojo. Vease, por ejemplo, Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3; 57: 1595-639, incorporado a la presente memoria por referencia debido a sus ensenanzas de ejemplos de polimeros para su uso en la administracion ocular de farmacos.

De manera conveniente, las formas de dosificacion para la administracion nasal o inhalada pueden formularse como aerosoles, soluciones, suspensiones, geles o polvos secos.

Para las composiciones adecuadas y/o adaptadas para la administracion inhalada, es preferente que el compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, este en una forma con un tamano de particula reducido, por ejemplo, obtenido mediante micronizacion. El tamano de particula preferente del compuesto o sal de tamano reducido (por ejemplo, micronizado) se define por un valor D50 de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 10 micrometros (por ejemplo, medido usando difraccion laser).

Las formulaciones en aerosol, por ejemplo, para la administracion inhalada, pueden comprender una solucion o suspension fina de la sustancia activa en un disolvente acuoso o no acuoso farmaceuticamente aceptable. Las

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formulaciones de aerosol pueden presentarse en cantidades unicas o multiples en forma esteril en un recipiente sellado, que puede adoptar la forma de un cartucho o recarga para su uso con un dispositivo de atomizacion o un inhalador. De manera alternativa, el recipiente sellado puede ser un dispositivo dispensador unitario tal como un inhalador nasal de dosis unica o un dispensador de aerosol equipado con una valvula dosificadora (inhalador de dosis medida) que esta destinado a ser desechado una vez agotado el contenido del recipiente.

Cuando la forma de dosificacion comprende un dispensador de aerosol, contiene preferentemente un propelente adecuado bajo presion tal como aire comprimido, dioxido de carbono o un propelente organico tal como un hidrofluorocarburo (HFC). Los propelentes HFC adecuados incluyen 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano y 1,1,1,2- tetrafluoroetano. Las formas de dosificacion en aerosol pueden adoptar tambien la forma de un atomizador de bomba. El aerosol presurizado puede contener una solucion o una suspension del compuesto activo. Esto puede requerir la incorporacion de excipientes adicionales, por ejemplo, co-disolventes y/o tensioactivos para mejorar las caracteristicas de dispersion y la homogeneidad de las formulaciones en suspension. Las formulaciones en solucion pueden requerir tambien la adicion de co-disolventes tales como etanol.

Para las composiciones farmaceuticas adecuadas y/o adaptadas para la administracion inhalada, la composicion farmaceutica puede ser una composicion inhalable de polvo seco. Dicha composicion puede comprender una base en polvo tal como lactosa, glucosa, trehalosa, manitol o almidon, el compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo (preferentemente, en forma de tamano de particula reducido, por ejemplo, en forma micronizada), y opcionalmente un modificador del rendimiento tal como L-leucina u otro aminoacido y/o sales de metales de acido estearico tales como estearato de magnesio o de calcio. Preferentemente, la composicion inhalable en polvo seco comprende una mezcla de polvo seco de lactosa, por ejemplo, lactosa monohidratada y el compuesto de formula (I) o una sal del mismo. Dichas composiciones pueden administrarse al paciente usando un dispositivo adecuado tal como el dispositivo DISKUS®, comercializado por GlaxoSmithKline que se describe por ejemplo en el documento GB 2242134 A.

Los compuestos de formula (I) y las sales farmaceuticamente aceptables de los mismos pueden formularse como una formulacion fluida para su suministro desde un dispensador de fluido, por ejemplo, un dispensador de fluido que tiene una boquilla dispensadora u orificio dispensador a traves del cual se dispensa una dosis medida de la formulacion fluida tras la aplicacion de una fuerza aplicada por el usuario a un mecanismo de bomba del dispensador de fluido. Dichos dispensadores de fluido estan provistos generalmente de un deposito de multiples dosis medidas de la formulacion fluida, pudiendose dispensar las dosis mediante accionamientos de bomba secuenciales. La boquilla u orificio dispensador puede estar configurada para su insercion en las fosas nasales del usuario para dispensar mediante pulverizacion la formulacion de fluido al interior de la cavidad nasal. Un dispensador de fluido del tipo indicado anteriormente se describe y se ilustra en el documento WO-A-2005/044354.

Una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo dependera de una serie de factores que incluyen, por ejemplo, la edad y el peso del animal, la condicion precisa que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulacion y la via de administracion y, en ultima instancia, estara a la discrecion del medico o veterinario asistente. En la composicion farmaceutica, cada unidad de dosificacion para la administracion oral o parenteral contiene preferentemente de 0,01 a 3.000 mg, mas preferentemente de 0,5 a 1.000 mg, de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, calculada como la base libre. Cada unidad de dosificacion para la administracion nasal o inhalada contiene preferentemente de 0,001 a 50 mg, mas preferentemente de 0,01 a 5 mg, de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, calculada como la base libre.

Los compuestos farmaceuticamente aceptables de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables pueden administrarse en una dosis diaria (para un paciente adulto) de, por ejemplo, una dosis oral o parenteral de 0,01 mg a 3.000 mg por dia o de 0,5 a 1.000 mg por dia, o una dosis nasal o inhalada de 0,001 a 50 mg por dia o de 0,01 a 5 mg por dia, del compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, calculada como la base libre. Esta cantidad puede administrarse en una unica dosis al dia o mas normalmente en un numero (tal como dos, tres, cuatro, cinco o seis) de sub-dosis por dia, de manera que la dosis diaria total sea la misma. Una cantidad eficaz de una sal del mismo puede determinarse como una proporcion de la cantidad eficaz del compuesto de formula (I).

Los compuestos de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables pueden emplearse solos o en combinacion con otros agentes terapeuticos. De esta manera, las terapias de combinacion segun la presente invencion comprenden la administracion de al menos un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y el uso de al menos otro agente farmaceuticamente activo. Preferentemente, las terapias de combinacion segun la presente invencion comprenden la administracion de al menos un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y al menos otro agente farmaceuticamente activo. El compuesto o los compuestos de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables y los otros agentes farmaceuticamente activos pueden administrarse juntos en una sola composicion farmaceutica o por separado y, cuando se

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administran por separado, esto puede ocurrir simultanea o secuencialmente en cualquier orden. Las cantidades del compuesto o los compuestos de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables y el otro agente o agentes farmaceuticamente activos y los tiempos de administracion relativos se seleccionaran con el fin de conseguir el efecto terapeutico combinado deseado. De esta manera, en un aspecto adicional, se proporciona una combinacion que comprende un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, y al menos otro agente farmaceuticamente activo.

De esta manera, en un aspecto, el compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo y las composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun la invencion pueden usarse en combinacion con, o pueden incluir uno o mas agentes terapeuticos diferentes, por ejemplo seleccionados de entre antibioticos, antivirales, glucocorticosteroides, antagonistas muscarinicos, agonistas beta-2 y analogos de vitamina D3. En un aspecto adicional, un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun la invencion puede usarse en combinacion con otro agente terapeutico que es adecuado para el tratamiento de cancer.

Se apreciara que, cuando el compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo se administra en combinacion con otros agentes terapeuticos administrados normalmente por via inhalada, intravenosa, oral o intranasal, la composicion farmaceutica resultante puede ser administrada mediante las mismas vias. De manera alternativa, los componentes individuales de la composicion pueden administrarse mediante diferentes vias.

Una realizacion de la invencion abarca combinaciones que comprenden uno o dos agentes terapeuticos diferentes.

Sera evidente para una persona con conocimientos en la materia que, cuando sea apropiado, el o los otros ingredientes terapeuticos pueden usarse en forma de sales, por ejemplo, como sales de metales alcalinos o de amina o como sales de adicion de acido, o profarmacos, o como esteres, por ejemplo esteres alquilicos inferiores, o como solvatos, por ejemplo hidratos, para optimizar la actividad y/o estabilidad y/o las caracteristicas fisicas, tales como la solubilidad, del ingrediente terapeutico. Sera evidente tambien estara claro que, cuando sea apropiado, los ingredientes terapeuticos pueden usarse en una forma opticamente pura.

Las combinaciones a las que se ha hecho referencia anteriormente pueden presentarse, de manera conveniente, para su uso en forma de una composicion farmaceutica y, de esta manera, las composiciones farmaceuticas que comprenden una combinacion tal como se ha definido anteriormente junto con un diluyente o vehiculo farmaceuticamente aceptable representan un aspecto adicional de la invencion.

Los compuestos de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables pueden prepararse mediante los procedimientos descritos a continuacion o mediante procedimientos similares. De esta manera, los siguientes intermedios y ejemplos sirven para ilustrar la preparacion de los compuestos de formula (I) y sus sales farmaceuticamente aceptables.

Detalles experimentales generales

Todas las temperaturas indicadas estan en 0C.

Los nombres de los siguientes compuestos se han obtenido usando el programa de nomenclatura de compuestos "ACD Name Pro 6.02" o Chem Draw Ultra 12.0.

Abreviaturas

NMP

-N-metil-2-pirrolidona

AcOH

- acido acetico

DCM

- diclorometano

DME

- 1,2-dimetoxietano

DMF

- N,N-dimetilformamida

HOBT

- 1-(hidroxi)benzotriazol

EDC

- 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodimida

Eter dietilico

- eter dietilico

(Cont.)

EtOAc

- acetato de etilo

/-Pr2O

- eter diisopropilico

CH3CN

- acetonitrilo

MeOH

- metanol

THF

- tetrahidrofurano

RT

- temperatura ambiente

Rt

- tiempo de retencion

DIPEA

- N,N-diisopropiletilamina

CS2

- disulfuro de carbono

Na2CO3

- carbonato de sodio

NaHCO3

- bicarbonato sodico

NaNO2

- nitrito de sodio

NaOH

- hidroxido de sodio

Na2SO4

- sulfato de sodio

POCl3

- oxicloruro de fosforo (III)

Pd/C

- paladio sobre carbono

MCPBA

- acido m-cloroperbenzoico

CDCl3

- cloroformo deuterado

MTBE

t-butileter de metilo

BOC

- tert-butiloxicarbonilo

Catalizador PEPPSI

- dicloruro de [1,3-bis(2,6-diisopropilfenil)imidazol-2-ilideno] (3-cloropiridil)paladio (II)

DMSO-d6

- dimetilsulfoxido deuterado

N

- 1 Normal (concentracion)

Metodoloqia LC/MS

Procedimiento Formato (Modificador de acido formico)

5 Condiciones LC

El analisis de UPLC se realizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (50 mm x 2,1 mm, i.d. 1.7 |jm de diametro de empaque) a 40oC.

Los disolventes empleados fueron:

A = solucion al 0,1% v/v de acido formico en aqua

10 B = solucion al 0,1% v/v de acido formico en acetonitrilo

El qradiente empleado fue:

Tiempo (min)

Caudal (ml/min) %A %B

0

1 99 1

1,5

1 3 97

1,9

1 3 97

2,0

1 0 100

10

La deteccion UV era una senal sumada de una longitud de onda entre 210 nm y 350 nm. Condiciones de MS

Waters ZQ

Electropulverizacion de exploracion alterna positiva y negativa 100 a 1.000 AMU 0,27 seg

MS

Modo de ionizacion Rango de exploracion Tiempo de exploracion Retardo entre exploraciones : 0,10 seg Procedimiento HpH (modificador de bicarbonato de amonio)

Condiciones LC

El analisis de UPLC se realizo en una columna Acquity UPLC BEH C18 (50 mm x 2,1 mm, i.d. 1.7 pm de diametro de empaque) a 40°C.

Los disolventes empleados fueron:

A = hidrogeno carbonato amonico 10 mM en agua ajustado a pH 10 con solucion de amoniaco B = acetonitrilo El gradiente empleado fue:

Tiempo (min)

Caudal (ml/min) %A %B

0

1 99 1

1,5

1 3 97

1,9

1 3 97

2,0

1 0 100

5

La deteccion UV fue una senal sumada en una longitud de onda de 210 nm a 350 nm. Condiciones de MS

MS

Modo de ionizacion Rango de exploracion Tiempo de exploracion Retardo entre exploraciones Metodologi'a MDAP

: Waters ZQ

: Electropulverizacion de exploracion alterna positiva y negativa : 100 a 1.000 AMU : 0,27 seg : 0,10 seg

10

15

20

Procedimiento Formato

Condiciones LC

El analisis de HPLC se realizo en una columna Sunfire C18 (100 mm x 19 mm, i.d 5 pm de diametro de empaque) o en una columna Sunfire C18 (150 mm x 30 mm, i.d. 5 pm de diametro de empaque) a temperatura ambiente.

Los disolventes empleados fueron:

A = solucion al 0,1% v/v de acido formico en agua

B = solucion al 0,1% v/v de acido formico en acetonitrilo

Ejecutar como un gradiente durante 15 o 25 minutos (ejecucion extendida) con un caudal de 20 ml/min (100 mm x 19 mm, i.d 5 pm de diametro de empaque) o 40 ml/min (150 mm x 30 mm, i.d. 5 pm de diametro de empaque).

La deteccion UV fue una senal sumada de una longitud de onda de 210 nm a 350 nm.

Condiciones de MS

: Waters ZQ

: Electropulverizacion de exploracion alterna positiva y negativa : 100 a 1.000 AMU : 0,50 seg

MS

Modo de ionizacion Rango de exploracion Tiempo de exploracion Retardo entre exploraciones : 0,20 seg Procedimiento HpH Condiciones LC

El analisis de HPLC se realizo en una columna Bridge C18 (100 mm x 19 mm, i.d 5 pm de diametro de empaque) o una columna Xbridge C18 (100 mm x 30 mm, 5 pm de diametro de empaque) a temperatura ambiente.

Los disolventes empleados fueron:

A = bicarbonato de amonio 10 mM en agua, ajustado a pH 10 con solucion de amoniaco B = acetonitrilo

Ejecutar como un gradiente durante 15 o 25 minutos (ejecucion extendida) con un caudal de 20 ml/min (100 mm x 19 mm, i.d 5 pm de diametro de embalaje) o 40 ml/min (100 mm x 30 mm, i.d 5 pm de diametro de embalaje).

La deteccion UV fue una senal sumada de una longitud de onda de 210 nm a 350 nm.

Condiciones de MS

MS

Modo de ionizacion Rango de exploracion Tiempo de exploracion Retardo entre exploraciones

: Waters ZQ

: Electropulverizacion de exploracion alterna positiva y negativa : 100 a 1.000 AMU : 0,50 seg : 0,20 seg

En los procedimientos siguientes, despues de cada material de partida, se proporciona tipicamente una referencia a un intermedio por numero. Esto se proporciona meramente como ayuda al quimico experto. No es necesario que el material de partida sea preparado a partir del lote al que se hace referencia.

Cuando se hace referencia al uso de un procedimiento "similar" o "preparado de manera similar", tal como apreciaran las personas con conocimientos en la materia, dicho procedimiento puede implicar una variacion menor, por ejemplo, la temperatura de reaccion, la cantidad de reactivo/disolvente, el tiempo de reaccion, las condiciones de tratamiento o las condiciones de purificacion cromatografica.

Intermedio 1

Se combinaron 3-iodo-4-(metoxi)nitrobenceno (50 g, 179 mmol), acido (3,5-dimetil-4-isoxazolil)bor6nico (27,8 g, 197 mmol) y carbonato de cesio (117 g, 358 mmol) en un RBF de 500 ml con DME (80 ml) y agua (40 ml) y la mezcla se 10 desgasific6 con nitr6geno durante 10 min, a continuaci6n, se anadi6 el catalizador PEPPSI (3,04 g, 4,48 mmoles) y la mezcla se calent6 a 90°C durante 4 h bajo una atm6sfera de nitr6geno. La reacci6n enfriada se diluy6 con EtOAc (800 ml), la capa organica se separ6 y se lav6 con soluci6n al 10% de sulfito de sodio. El disolvente se sec6 y se evapor6 en vacio para dar un s6lido de color marr6n que se tritur6 con eter (200 ml) y el producto s6lido se lav6 con eter (100 ml) para dar 3,5-dimetil-4-[2-(metiloxi)-5-nitrofenil]isoxazol (43,9 g, 177 mmol, rendimiento del 99%) como 15 un s6lido de color beige LCMS (formiato) Rt 0,99 min, MH+ 249

Intermedio 2

[3-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-(metiloxi)fenil]amina

20

Se disolvio 3,5-dimetil-4-[2-(metiloxi)-5-nitrofenil]isoxazol (para una preparaci6n, vease el intermedio 1) (43,9 g, 177 mmol) en EtOAc (1 litro) diluido con etanol (1 litro) y se anadi6 a Pd/C (8 g, 5% p/p, 50% de agua, Tipo E101 NO/W) en un matraz de hidrogenaci6n de 5 litros bajo vacio, habiendo purgando primero el recipiente dos veces con ciclos

25 de vacio/nitr6geno. La mezcla se agit6 durante 24 h. No hubo absorci6n de hidr6geno durante las primeras 8-10 h, a continuaci6n, absorci6n constante hasta que se consumen aproximadamente 20 litros. La mezcla se purg6 con 3x ciclo de vacio/nitr6geno y, a continuaci6n, se filtr6 a traves de Celite™ bajo nitr6geno y el filtrado se evapor6 en vacio para dar [3-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-(metiloxi)fenil]amina 3-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-(metiloxi)anilina (38,6 g, 177 mmol, rendimiento del 100%) como un s6lido cristalino marr6n. LCMS (formiato) Rt 0,50 min, MH+ 219

30 Intermedio 3

({[3-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-(metiloxi)fenil]amino}metiliden)propanodioato de dietilo

35

Se disolvi6 [3-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-(metiloxi)fenil]amina (para una preparaci6n vease el intermedio 2) (39 g, 179 mmoles) en [(etiloxi)metiliden]propanodioato de dietilo (38,6 g, 179 mmol) y se calent6 a 130°C, dando una efervescencia constante a medida que se evaporaba el etanol. La soluci6n se calent6 durante 1 h, a continuaci6n, 40 se enfri6 a temperatura ambiente y se evapor6 en vacio para dar un aceite de color marr6n. El producto se disolvi6 en DCM (100 ml) y se carg6 en una columna de silice de 750 g, a continuaci6n, se eluy6 con EtOAc al 0-100% de EtOAc/ciclohexano para dar ({[3-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-metiloxi)fenil]amino}metiliden)propanodioato de dietilo (59,5 g, 153 mmol, rendimiento del 86%) como un s6lido cristalino de color amarillo palido. LCMS (formiato) Rt 1,15 min, MH+ 389.

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Intermedio 4

Se anadio ({[3-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-(metiloxi)fenil]amino}metiliden)propanodioato de etilo (para una preparacion, vease el intermedio 3) (35 g, 90 mmol), en pequenas porciones, durante 10 minutos, a eter difenilico 10 en ebullicion (500 ml), resultando en una vigorosa efervescencia. La mezcla se calento a reflujo durante 20 minutos, el calentador se apago y se retiro del recipiente y la solucion se dejo enfriar en aire durante 2 horas a 40°C, dando cierta precipitacion de un solido granular de color marron. La mezcla se diluyo con eter (300 ml) y se dejo reposar durante la noche, a continuacion, se filtro y el solido se lavo con eter (2 x 200 ml) y se seco para dar 7-(3,5-dimetil- 4-isoxazolil)-4-hidroxi-6-(metiloxi)-3-quinolincarboxilato de etilo (28,4 g, 83 mmol, rendimiento del 92%). LCMS 15 (formiato) Rt 0,73 min, MH+ 343

Intermedio 5

Acido 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-hidroxi-6-(metiloxi)-3-quinolincarboxi'lico

20

Se suspendio 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-hidroxi-6-(metiloxi)-3-quinolincarboxilato de etilo (para una preparacion vease el intermedio 4) (28,4 g, 83 mmol) en una mezcla de etanol (200 ml) y NaOH (2 M, 124 ml, 249 mmol) y la 25 mezcla se calento a reflujo durante la noche, a continuacion, se evaporo a aproximadamente 100 ml de volumen y la solucion resultante se lavo con MTBE (100 ml). La capa acuosa se acidifico a pH 4 con HCl 1 M, a continuacion, el solido resultante se recogio mediante filtracion y se lavo con agua y se seco durante la noche a 40°C en el horno de vacio para dar acido 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-4-hidroxi-6-(metiloxi)-3-quinolincarboxilico (24,5 g, 78 mmol, rendimiento del 94%) como un solido de color amarillo palido. LCMS Rt 0,76 min, MH+ 315

30 Intermedio 6

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4(1H)-quinolinona

35

Se anadio acido 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4-oxo-1,4-dihidro-3-quinolincarboxilico (para una preparacion, vease el intermedio 5) (8 g, 25,5 mmol), en porciones pequenas, a eter difenilico a reflujo (150 ml) y la solucion resultante se agito durante 30 minutos, a continuacion, se dejo enfriar a 35°C antes de la adicion de eter 40 dietilico (200 ml). La suspension resultante se filtro y el producto solido se lavo con eter (100 ml) para dar 7-(3,5- dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4(1 H)-quinolinona (6,9 g, 25,5 mmol, rendimiento del 100%) como un solido de color beige. LCMS (formiato) Rt 0,61, MH+ 271.

Intermedio 7

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5

Se anadio acido nitrico (1,86 g, 1,32 ml, 29,5 mmol), gota a gota, a una solucion agitada de 7-(3,5-dimetil-4- isoxazolil)-6-(metiloxi)-4(1H)-quinolinona (para una preparacion, vease el intermedio 6) (6,9 g, 25,6 mmol) en acido propionico (70 ml). Despues de la adicion completa, la mezcla de reaccion se agito a 100oC durante 1 h. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente, el solido se separo mediante filtracion, se lavo con eter dietilico y se 10 seco para dar 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-nitro-4-quinolinol (5,0 g, 15,86 mmol, rendimiento del 62,1%) como un solido de color amarillo brillante. LCMS (formiato) Rt 1,15 min, MH+ 316

Intermedio 8

4-(4-cloro-6-metoxi-3-nitroquinolin-7-il)-3,5-dimetilisoxazol

15

Se disolvio 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-3-nitroquinolin-4(1H)-ona (para una preparacion, vease el intermedio 6) (4,78 g, 15,16 mmol) en POCl3 (10Ml, 107 mmol) y la mezcla se calento a 110°C durante 3 horas, a continuacion, 20 se enfrio y se evaporo en vacfo, El residuo se suspendio en tolueno (20 ml) y se evaporo en vacfo, a continuacion, el residuo se suspendio en DCM (100 ml) y solucion saturada de hidrogenocarbonato sodico (100 ml) y se agito durante 10 minutos. La capa organica se seco y se evaporo y el residuo se disolvio en DCM (10 ml) y se cargo en una columna de silice de 100 g, a continuacion, se eluyo con 0-60% de EtOAc/ciclohexano para dar 4-(4-cloro-6- metoxi-3-nitroquinolin-7-il)-3,5-dimetilisoxazol (3,21 g, 9,62 mmol, rendimiento del 63,4%) como un polvo de color 25 amarillo brillante. LCMS (formiato) Rt 1,13 min, MH+ 334

Intermedio 9

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30

4-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-quinolincarboxamida

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Se calento acido 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4-oxo-1,4-dihidro-3-quinolincarboxilico (para una preparacion, vease el intermedio 5) (36 g, 115 mmol) en POCl3 (33 ml, 354 mmol) durante 4 horas, a continuacion, 35 se dejo enfriar a temperatura ambiente y se dejo reposar durante la noche. La mezcla se evaporo en un evaporador rotatorio, a continuacion, el residuo de color marron se sometio a destilacion azeotropica hasta la sequedad con tolueno (2 x 300 ml) y la goma de color marron oscuro resultante se disolvio en THF (300 ml) y se anadio gota a gota a una solucion concentrada de hidroxido amonico (100 ml, 0,880) enfriando en un bano de hielo. La mezcla se agito durante 30 minutos, a continuacion, se evaporo hasta la mitad del volumen, se diluyo con agua (100 ml) y el 40 solido de color marron oscuro resultante se recogio mediante filtracion, se lavo con agua (100 ml) y se seco en estufa de vacfo a 50°C durante tres dias para dar 4-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3- quinolincarboxamida (33,2 g, 100 mmol, rendimiento del 87%) como un solido de color marron. LCMS (formiato) Rt 0,80 min, MH+ 332

Intermedio 10

45 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4-{[(1R)-1-feniletil]amino}-3-quinolincarboxamida

5

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Se disolvio 4-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-quinolincarboxamida (para una preparacion, vease el intermedio 9) (3,33 g, 10,04 mmol) en NMP (10 ml) y DIpEa (1,8 ml, 10 mmol) y [(1R)-1-feniletil]amina (1,58 g, 13,05 mmol), a continuacion, la solucion se calento a 120°C durante 18 horas, a continuacion, se enfrio a temperatura ambiente, se diluyo con agua (100 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 100 ml). La capa organica se lavo con agua (2 x 100 ml), se seco con sulfato sodico y se evaporo en vacio para dar una goma de color marron. Esta se disolvio en DCM (20 ml) y se cargo en un cartucho de silice de 100 g, a continuacion, se eluyo con MeOH/DCM (0-10%) y las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6- (metiloxi)-4-{[(1R)-1-feniletil]amino}-3-quinolincarboxamida (3,5 g, 8,40 mmol, rendimiento del 84%) como un solido de color beige. LCMS (formiato) Rt 0,84 min, MH+ 417

Intermedio 11

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-[(1R)-1-feniletil]-1,3-dihidro-2H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-ona

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Se disolvio 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4-{[(1R)-1-feniletil]amino}-3-quinolincarboxamida (para una preparacion, vease el intermedio 10) (3,3 g, 7,92 mmol) en metanol (50 ml) y se enfrio en un bano de hielo, a continuacion, se anadio hidroxido de potasio (0,667 g, 11,89 mmol) y la solucion se agito durante 20 minutos, a continuacion, se anadio diacetato de yodobenceno (3,32 g, 10,30 mmol) y la mezcla se agito durante otras 3 horas. La solucion se evaporo en vacio y el residuo se disolvio en DCM y se cargo en una columna de silice de 100 g, a continuacion, se eluyo con MeOH/DCM (0-10%) para dar 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -[(1 R)-1 -feniletil]- 1,3-dihidro-2H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-ona (2,03 g, 4,90 mmol, rendimiento del 61,8%) como una espuma de color beige. LCMS (formiato) Rt 0,99 min, MH+ 415

Intermedio 12

2-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-[(1fl)-1-feniletil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolina

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5

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Se calento 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -[(1 R)-1 -feniletil]-1,3-dihidro-2H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-ona (para una preparacion, vease el intermedio 11) (0,33 g, 0,796 mmol) en una mezcla de POCh (1 ml, 10,73 mmol) y PCl5 (0,166 g, 0,796 mmol) a 120°C durante 5 horas, a continuacion, se enfrio y se dejo reposar a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se evaporo en vacio y, a continuacion, el residuo se suspendio en tolueno y se evaporo hasta formar una goma de color marron. Esta se disolvio en DCM (20 ml) y se lavo con solucion saturada de hidrogenocarbonato de sodio, a continuacion, la capa organica se cargo en un cartucho de silice de 25 g. La columna se eluyo con EtOAc/ciclohexano (0-100%) y las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 2-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-[(1R)-1-feniletil]-1H-imidazo[4,5-c]quinolina 31 mg, 0,072 mmol, rendimiento del 8,99%) como un vidrio de color beige. LCMS (formiato) Rt 1,05 min, MH+ 433.

Intermedio 13

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]-3-quinolincarboxamida

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Se disolvio 4-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-quinolincarboxamida (para una preparacion, vease el intermedio 9) (1,890 g, 5,70 mmol) en NMP (5 ml), se anadio DIPEA (2,487 ml, 14,24 mmol) seguido de (tetrahidro- 2H-piran-4-il)metanamina (0,82 g, 7,12 mmol) y la mezcla se calento a 120°C durante 3 horas, a continuacion, se enfrio y la solucion de color marron se cargo en un cartucho SCX-2 de 70 g, la columna se lavo con metanol (200 ml) y, a continuacion, se eluyo con amoniaco metanolico 2 M (100 ml) y metanol (100 ml). El eluyente se evaporo en vacio para dar un solido de color marron. Este se trituro con EtOAc (30 ml) y el solido se recogio mediante filtracion para dar 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]-3-quinolincarboxamida (1,58 g, 3,85 mmol, rendimiento del 54,1%) como un solido de color marron. LCMS (formiato) Rt 0,64, MH+ 411

Intermedio 14

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1,3-dihidro-2H-imidazo[4,5-c]quinolin-

2-ona

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Se suspendio 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-4-[(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]-3-quinolincarboxamida (para una preparacion, vease el intermedio 13) (1,50 g, 3,65 mmol) en metanol (50 ml) y se anadio hidroxido de potasio (0,308 g, 5,48 mmoles). La mezcla se agito durante 20 minutos, a continuacion, se enfrio en un bano de hielo y se anadio diacetato de yodobenceno (1,530 g, 4,75 mmol), a continuacion, la mezcla se agito durante 2 horas adicionales a 0°C. Aparecio un precipitado delgado de color beige y despues de 30 minutos de agitacion adicionales, la mezcla se filtro y el solido se lavo con metanol (5 ml), a continuacion, se seco en el horno de vacio para dar 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1,3-dihidro-2H-imidazo[4,5- c]quinolin-2-ona (1,400 g, 3,43 mmol, rendimiento del 94%) como un polvo de color beige. LCMS (formiato) Rt 0,65 min, MH+ 409

Intermedio 15

2-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolina

5

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20

25

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35

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Se disolvio 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1,3-dihidro-2H-imidazo[4,5- c]quinolin-2-ona (para una preparacion, vease el intermedio 14) (220 mg, 0,539 mmol) en POCh (2 ml, 21,46 mmol), PCl5 (0,2 g, 0,960 mmol) y la mezcla se calento a 120°C durante 24 h. La mezcla de reaccion se evaporo en vacio para dar un solido de color beige. Se disolvio en DCM (3 ml) y se cargo en una columna de silice de 25 g, a continuacion, se eluyo con 0-10% de amoniaco metanolico 2 M/DCM (25 volumenes de columna) y las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 2-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1- (tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolina (14,2 mg, 0,033 mmol, rendimiento del 6,18%) como un solido de color beige. LCMS (formiato) Rt 0,81 min, MH+ 427.

Intermedio 16

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-3-nitro-N-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-4-amina

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Se disolvio 4-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-nitroquinolina (para una preparacion, vease el intermedio 8) (1,06 g, 3,18 mmol) en NMP (5 ml), a continuacion, se anadieron DIPEA (0,56 ml, 3,18 mmol) y (tetrahidro-2H-piran-4-il)metanamina (0,75 g, 6,51 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion cambio inmediatamente de color y en 5 minutos se formo un precipitado espeso de color amarillo. La mezcla se agito durante 20 minutos, a continuacion, se diluyo con agua (30 ml) y se agito durante 10 minutos. El precipitado se recogio mediante filtracion y se lavo con agua (2 x 20 ml), a continuacion, se seco en vacio para dar 7-(3,5- dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-3-nitro-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-4-amina (1,22 g, 2,96 mmol, rendimiento del 93%) como un solido de color amarillo brillante. LCMS (formiato) Rt 0,88 min, MH+ 413

Intermedio 17

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-N4-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-3,4-quinolindiamina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-3-nitro-N-(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-4-amina (para una preparacion, vease el intermedio 16) (1,2 g, 2,91 mmol) en una mezcla de acetato de etilo (60 ml) y metanol (10 ml) y se hidrogeno sobre Pd/C (0,310 g, 2,91 mmol, 5% p/p, 50% de agua, NO/W) tipo E101 durante 24 h a presion atmosferica bajo una bureta de hidrogeno. La mezcla se filtro y se evaporo y el residuo se disolvio en DCM (3 ml) y

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se cargo en una columna de silice de 50 g, a continuacion, se eluyo con 0-15% de amoniaco metanolico 2 M/DCM y las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4- (tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-3,4-diamina (0,45 g, 1,177 mmol, rendimiento del 40,4 %) como un solido de color amarillo palido. LCMS (formiato) Rt 0,68 min, MH+ 384

Intermedio 18

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Se disolvieron 1-(metiloxi)-2-propanamina (0,35 g) y 4-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-nitroquinolina (para una preparacion, vease el intermedio 8) (0,74 g, 2,217 mmol) en una mezcla de trietilamina (0,30 ml, 2,2 mmol) y NMP (3 ml) y la solucion se dejo reposar durante 30 minutos a temperatura ambiente, a continuacion, se diluyo con agua (20 ml) y la suspension resultante se agito durante 20 minutos, a continuacion, se filtro y el solido resultante se lavo con agua (10 ml) y se seco en el horno de vacio a 50°C para dar el compuesto del titulo como un solido de color amarillo brillante. (0,80 g, 2,070 mmol, rendimiento del 93%). LCMS (formiato) Rt 0,97 MH+ 387

Intermedio 19

7-(3,5-dimetil-4-Isoxazolil)-N4-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-6-(metiloxi)-3,4-quinolindiamina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N-(1-metoxipropan-2-il)-3-nitroquinolin-4-amina (0,80 g, 2,070 mmol) en EtOAc (120 ml) y se hidrogeno usando un aparato de hidrogenacion de flujo (H cube™, ajustes: hidrogeno completo, presion atmosferica, caudal de 1 ml/min). El eluyente se evaporo en vacio para dar el compuesto del titulo como una goma de color naranja (0,73 g, 99%). LCMS (formiato) Rt 0,73 min, MH+ 357.

Intermedio 20

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-nitro-N-(2-piridinilmetil)-4-quinolinamina

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Una mezcla de 4-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-nitroquinolina (1,5 g, 3,5 mmoles) y 2- (aminometil)piridina (1,46 g, 13,5 mmol) en dioxano (10 ml) se agito a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla de reaccion se enfrio y el disolvente se evaporo. El residuo se cromatografio [50-100% acetato de

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etilo/ciclohexano] para dar el compuesto del titulo como un solido de color amarillo (1,5 g, 3,70 mmol, rendimiento del 82%). LCMS (formiato) Rt 0,86 min, MH+ 406.

Intermedio 21

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-N4-(2-piridinilmetil)-3,4-quinolindiamina

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Se anadio paladio al 10% sobre carbono, 50% de pasta acuosa, (300 mg, 20% en peso) a una solucion de 7-(3,5- dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-3-nitro-N-(2-piridinilmetil)-4-quinolinamina (1,5 g, 3,70 mmol) en acetato de etilo (90 ml) y etanol (10 ml). La mezcla de reaccion se agito en una atmosfera de hidrogeno durante 3 h. La mezcla de reaccion se filtro a traves de Celite™. El disolvente se evaporo del filtrado. El residuo se cromatografio [metanol al 5%/DCM] para dar el compuesto del titulo como un aceite de color marron (1,23 g, 3,28 mmol, rendimiento del 89%). LCMS (formiato) Rt 0,63 min, MH+ 376

Intermedio 22

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etil)quinolin-3,4-diamina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N-(1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etil)-3-nitroquinolin-4-amina (0,20 g, 0,473 mmol, para la preparacion, vease el intermedio 23) en EtOAc (80 ml) y se hidrogeno usando un hidrogenador de flujo (H-cube™, ajustes: modo de hidrogeno completo, presion atmosferica, 20°C, caudal de 1 ml/min) para dar una solucion de color naranja. El eluyente se evaporo en vacio para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(1- (1 -metil-1 H-pirazol-4-il)etil)quinolin-3,4-diamina (0,17 g, 0,433 mmol, rendimiento del 91%) como una goma de color naranja que se uso sin purificacion adicional. LCMS (formiato) Rt 0,66 min, MH+ 393.

Intermedio 23

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N-(1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etil)-3-nitroquinolin-4-amina

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Se calentaron 4-(4-cloro-6-metoxi-3-nitroquinolin-7-il)-3,5-dimetilisoxazol (200 mg, 0,599 mmol, para la preparacion, vease el intermedio 8) y [1 -(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)etil]amina (113 mg, 0,9 mmol) en una mezcla de DIPEA (0,324 ml, 1,858 mmol) y NMP (15 ml) a 120°C durante 4 h. La mezcla de reaccion se enfrio a temperatura ambiente, se diluyo con agua (300 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 200 ml). La fase organica combinada se lavo con agua (300 ml) y salmuera (200 ml), se seco con sulfato sodico y se evaporo. La goma resultante se disolvio en DCM (3 ml), se cargo en un cartucho de silice de 100 g y se eluyo con amoniaco metanolico 2 M/DCM (0-12%). Las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N-(1-(1-metil-1H-pirazol- 4-il)etil)-3-nitroquinolin-4-amina (0,21 g, 0,497 mmol, rendimiento del 83%) que se uso en la etapa subsiguiente sin purificacion adicional. LCMS (formiato) Rt 0,87 min, MH+ 423.

Intermedio 24

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-3-nitro-N-((R)-1-(piridin-2-il)etil)quinolin-4-amina

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A una solucion de 4-(4-cloro-6-metoxi-3-nitroquinolin-7-il)-3,5-dimetilisoxazol (para una preparacion, vease el intermedio 8) (1 g, 3,00 mmol) en 1,4-dioxano (6,5 ml) se le anadio (R)-1-(piridin-2-il)etanamina (0,549 g, 4,49 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante 5 horas. Se anadio una porcion adicional de (R)-1- (piridin-2-il)etanamina (0,255 g, 2,25 mmol) y la mezcla se agito a temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se elimino a presion reducida y el residuo se purifico mediante cromatografia (columna de 50 g, gradiente de ciclohexano/EtOAc) para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-3-nitro-N-((R)-1-(piridin-2- il)etil)quinolin-4-amina (1,15 g, 2,74 mmol, rendimiento del 92%) como un solido de color naranja. LCMS: (Formiato, 2 min), Rt 0,98 min, MH+ 420.

Intermedio 25

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-((R)-1-(piridin-2-il)etil)quinolin-3,4-diamina

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A una suspension de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-3-nitro-N-((R)-1-(piridin-2-il)etil)quinolin-4-amina (intermedio 24) (1,05 g, 2,503 mmol) en EtOH (20 ml) se anadio cloruro de estano (II) (1,66 g, 8,76 mmol) y la mezcla se agito a 40°C durante 2,5 horas. La mezcla de reaccion se basifico a pH 12 usando una solucion de hidroxido de sodio 2M. Se anadio agua (30 ml) y la suspension acuosa se extrajo con DCM (3 x 30 ml). Las capas organicas se combinaron, se secaron pasandolas a traves de una frita hidrofoba y se concentraron hasta la sequedad bajo una corriente de nitrogeno. El residuo resultante se purifico mediante cromatografia (columna de 100 g, gradiente de amoniaco metanolico 2 M) para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-((R)-1-(piridin-2- il)etil)quinolin-3,4-diamina (543 mg, 1,39 mmol, rendimiento del 56%) como una goma de color marron oscuro. LCMS: (Formiato, 2 min) Rt 0,69 min, MH+ 390.

Ejemplo 1

2-({7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-[(1 R)-1-feniletil]-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il}amino)etanol

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Se disolvio 2-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-[(1R)-1-feniletil]-1H-imidazo[4,5-c]quinolina (para una 10 preparacion, vease el intermedio 12) (30 mg, 0,035 mmol) en NMP (0,5 ml), se anadio etanolamina (30 mg) y la mezcla se calento a 150°C durante 30 minutos, a continuacion, se enfrio, se anadio a agua (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml). La fase organica se lavo con agua (2 x 10 ml), se seco y se evaporo. El residuo se disolvio en DCM (2 ml), se cargo en una columna de silice de 10 g y se eluyo con amoniaco metanolico 2 M/DCM (0-10%). Las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 2-({7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1- 15 [(1R)-1-feniletil]-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il}amino)etanol (8,4 mg, 0,018 mmol, rendimiento del 53,0%) como un vidrio de color marron claro. LCMS (formiato) Rt 0,77 min, MH+ 458

1H RMN (400 MHz, CDCls) 5H 9,0 (1 H, s), 7,88 (H, s), 7,35-7,45 (6H, m), 6,95 (1 H, br s), 6,12 (1 H, br s), 4,60 (1 H, m), 3,80-3,84 (2H, m), 3,62-3,58 (2H, m), 3,45 (3H, s), 2,33 (3H, s), 2,15 (3H, s), 2,07 (3H, d)

Ejemplo 2

20 2-{[7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il] amino}etanol

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30 Se disolvieron 2-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5- c]quinolina (para una preparacion, vease el intermedio 15) (14 mg, 0,033 mmol) y etanolamina (0,020 ml, 0,327 mmol) en NMP (2 ml) y se calento a 180°C en el microondas durante 1 hora, a continuacion, se enfrio y se cargo en un cartucho SCX-2 de 10 g, lavando con metanol (30 ml). El cartucho se eluyo a continuacion con amoniaco metanolico 2 M (30 ml) y el eluyente se evaporo en vacio para dar una goma de color marron poco soluble. Se 35 disolvio en DMSO (1 ml) y se purifico con MDAP (formiato) para dar 2-{[7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1- (tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il]amino}etanol (0,80 mg, 1,772 p moles, rendimiento del 5,40%) como un vidrio de color amarillo palido. LcMS (formiato) Rt 0,62 min, MH+ 452

1H RMN (400 MHz, MeOD) 5H 8,59 (1H, s), 7,82 (1H, s), 7,43 (1H, s), 4,32 (2H, d), 3,93 (3H, s), 3,74 (2H, t), 3,58 (2H, dd), 3,08 (2H, t), 2,86 (2H, dt), 2,27 (1H, m), 2,21 (3H, s), 2,04 (3H, s), 1,96 (2H, dd), 1,73 (2H, dt)

40 Ejemplo de Referencia 3

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-3,4-diamina (para una preparacion, vease el intermedio 17) (32 mg, 0,084 mmol) en etanol (3 ml) y se anadio bromuro de cianogeno (8,86 mg, 0,084 mmol), a continuacion, la mezcla se agito durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo hasta la sequedad, el residuo se disolvio en DMSO (1 ml) y se purifico mediante MDAP (formiato) para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-1 -(tetrahid ro-2H-piran-4-il)metil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2- amina (4,5 mg, 0,011 mmol, rendimiento del 13,2%) como un vidrio de color amarillo. LCMS (formiato) Rt 0,65 min, MH+ 408

1H RMN (400 MHz, CDCls) 9,05 (1 H, s), 8,10 (1 H, s), 7,38 (1 H, s), 6,33 (2H,br s), 4,35 (2H, d), 4,05 (2H, d), 3,93 (3H, s), 3,30 (2H, m), 2,40 (1 H, m), 2,35 (3H, s), 2,21 (3H, s), 1,65 (4H, m)

Los ejemplos 4 y 5 se prepararon de manera similar.

Ejemplo de referencia 4

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-(2-piridinilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina

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A partir de 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-6-(metiloxi)-N4-(2-piridinilmetil)-3,4-quinolinodiamina (para una preparacion, vease el intermedio 17) (35 mg) y bromuro de cianogeno (10 mg) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (12 mg, 32%). LCMS (formiato) Rt 0,61 min, MH+ 401

Ejemplo de Referencia 5

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina

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A partir de 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-N4-(1-metil-2-(metiloxi)etil]-6-(metiloxi)-3,4-quinolinodiamina (para una preparacion, vease el intermedio 17) (23 mg, (70 mg) y bromuro de cianogeno (20 mg) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (23 mg, 30%). LCMS (formiato) Rt 0,67 min, MH+ 382

Ejemplo 6

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-N-etil-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-

amina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-3,4-diamina (para una 10 preparacion, vease el intermedio 17) (100 mg, 0,261 mmol) en metanol y se anadio isotiocianato de etilo (45,6 mg, 0,523 mmol). La mezcla se calento a 50°C durante 6 horas, se enfrio y se evaporo en vacio para dar un residuo solido de color beige. Este se volvio a disolver en THF (5 ml) y se anadio EDC (100 mg, 0,523 mmol), a continuacion, la mezcla se calento a 60°C durante la noche. El disolvente se evaporo en vacio y el residuo se disolvio en DCM (10 ml) y se lavo con agua (10 ml), la capa organica se seco y se evaporo y el residuo se disolvio 15 en DCM (2 ml) y se cargo en una columna de silice de 10 g, a continuacion, se eluyo con amoniaco metanolico 2 M/DCM (0-10%) y las fracciones que contienen producto se evaporaron en vacio para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4- il)-N-etil-8-metoxi-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina (37 mg, 0,085 mmol, rendimiento del 32,5%) como un vidrio incoloro. LCMS (formiato) Rt 0,71 min, MH+ 436

1H RMN (400 MHz, CDCls) 5H 9,05 (1 H, s), 7,95 (1 H, s), 7,32 (1 H, s), 4,39 (1 H, t), 4,21 (2H, d), 4,00 (2H, dd), 20 3,91 (3H, s), 3,69 (2H, tt), 3,32 (2H, dt), 2,38 (1 H, m), 2,35 (3H, s), 2,22 (3H, s), 1,52-1,70 (4H, m), 1,35 (3H, t)

Los siguientes ejemplos se prepararon de manera similar.

Ejemplo 7

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-N-etil-8-metoxi-1-(1-metoxipropan-2-il)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina

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30 A partir de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-3,4-diamina (para una

preparacion, vease el intermedio 17) (70 mg) y 1-isotiocianato-2-metilpropano (50 mg) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (52 mg, 61%). LCMS (formiato) Rt 0,79 min, MH+ 464

Ejemplo 8

N1-(7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il)etan- 35 1,2-diamina

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A partir de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-3,4-diamina (para una preparacion, vease el intermedio 17) (70 mg) y (2-isotiocianatoetil)carbamato de 1,1-dimetiletilo (50 mg). El producto crudo aislado se trato con TFA (2 ml) en DCM (10 ml), la mezcla se agito durante 1 hora, a continuacion, se evaporo en vacio. El residuo se disolvio en DMSO (1 ml) y se purifico mediante MDAP (procedimiento HpH) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (26 mg, 31%). LCMS (HpH) Rt 0,73 min, MH+ 451

Ejemplo 9

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(4-morfolinil)etil]-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-

c]quinolin-2-amina

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A partir de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-3,4-diamina (para una preparacion, vease el intermedio 17) (70 mg) y 4-(2-isotiocianatoetil)morfolina (50 mg) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (57 mg, 60%). LCMS (formiato) Rt 0,51 min, MH+ 521

Ejemplo 10

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-

c]quinolin-2-amina

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A partir de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-3,4-diamina (para una preparacion, vease el intermedio 17) (70 mg) y 1-isotiocianato-2-(metiloxi)etano (50 mg) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (55 mg, 65%). LCMS (formiato) Rt 0,68 min, MH+ 466

Ejemplo 11

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-N-etil-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina

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A partir de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(1-metoxipropan-2-il)quinolin-3,4-diamina (para una preparacion, vease el intermedio 17) (70 mg) e isotiocianatoetano (50 mg) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (42 mg, 52%). LCMS (formiato) Rt 0,78 min, MH+ 410

Ejemplo 12

N-[7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il]-1,2-

etanodiamina

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A partir de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(1-metoxipropan-2-il)quinolin-3,4-diamina (70 mg) y (2- isotiocianatoetilo)carbamato de 1,1 -dimetiletilo (50 mg). El producto crudo aislado se trato con TFA (2 ml) en DCM (10 ml), la mezcla se agito durante 1 hora, a continuacion, se evaporo en vacio. El residuo se disolvio en DMSO (1 ml) y se purifico mediante MDAP (HpH) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (4,5 mg, 4%). LCMS (HpH) Rt 0,77 min, MH+ 425

Ejemplo 13

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-N-[2-(4-morfolinil)etil]-1H-imidazo[4,5-c]

quinolin-2-amina

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A partir de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(1-metoxipropan-2-il)quinolin-3,4-diamina (para una preparacion, vease el intermedio 19) (70 mg) y 4-(2-isotiocianatoetil)morfolina (50 mg) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (45 mg, 46%). LCMS (formiato) Rt 0,56 min, MH+ 495

Ejemplo 14

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1H-imidazo[4,5-c]

quinolin-2-amina

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A partir de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(1-metoxipropan-2-il)quinolin-3,4-diamina (para una preparacion, vease el intermedio 19) (70 mg) y 1 -isotiocianato-2-(metiloxi)etano (50 mg) para dar el compuesto del titulo como un solido de color beige (41 mg, 47%). LCMS (formiato) Rt 0,56 min, MH+ 440.

Ejemplo 15

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1-(2-piridinilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-

amina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(piridin-2-ilmetil)quinolin-3,4-diamina (35 mg, 0,093 mmol) en etanol (5 ml) y se anadio isotiocianato de 2-metoxietilo (22 mg, 0,186 mmol), a continuacion, la solucion se calento a 60°C durante 3 horas, se enfrio y se evaporo en vacio. El residuo se disolvio en THF (5,0 ml) y se anadio EDC (35,7 mg, 0,186 mmol), a continuacion, la solucion se calento a 60°C durante 3 horas, se enfrio y se evaporo en vacio y el residuo se purifico mediante MDAP (formiato) para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N-(2- metoxietil)-1-(piridin-2-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina (25 mg, 0,055 mmol, rendimiento del 58,5%) como un solido de color beige. LCMS (formiato) Rt 0,66 min, MH+ 459

Ejemplo 16

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-2-(4-morfolinil)-1-[(1R)-1-feniletil]-1H-imidazo[4,5-c]quinolina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-[(1 R)-1-feniletil]-1,3-dihidro-2H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-ona (para una preparacion, vease el intermedio 11) (0,16 g, 0,386 mmol) en POCl3 (1 ml, 10,73 mmol) y se calento a 100°C durante 3 dias. La mezcla de reaccion se evaporo en vacio para dar una goma de color negro. El residuo se disolvio en NMP (2 ml) y se anadio morfolina (2 ml, 22,96 mmol), a continuacion, la solucion se calento en el microondas a 150°C durante 1 hora. La mezcla de reaccion se cargo en un cartucho SCX-2 de 20 g y se lavo con metanol (40 ml), a continuacion, se eluyo con amoniaco metanolico 2 M y el eluyente se evaporo en vacio para dar un aceite de color ambar. Se disolvio en DMSO (1 ml) y se purifico mediante MDAP (HpH) para dar 7-(3,5-dimetil-4- isoxazolil)-8-(metiloxi)-2-(4-morfolinil)-1-[(1R)-1-feniletil]-1H-imidazo[4,5-c]quinolina (1,4 mg, 2,90 pmoles, rendimiento del 0,750%). LCMS (formiato) Rt 0,86 min, MH+ 484

Ejemplo 17

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-[(1R)-1-feniletil]-2-(1-piperidinil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolina

Se disolvio 2-cloro-7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-[(1R)-1-feniletil]-1H-imidazo[4,5-c]quinolina (30 mg, 0,069 mmol) (para una preparacion, vease el intermedio 12) en NMP (0,5 ml), se anadio piperidina (0,2 ml, 2,020 10 mmol) y la mezcla se calento a 150°C durante 30 minutos, a continuacion, se enfrio, se anadio a agua (10 ml) y se extrajo con EtOAc (10 ml). El disolvente se lavo con agua (2 x 10 ml), se seco y se evaporo. El residuo se disolvio en DCM (2 ml), se cargo en una columna de silice de 10 g, se eluyo con amoniaco metanolico 2 M/DCM (0-10%) y las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1- [(1R)-1-feniletil]-2-(1-piperidinil)-1H-imidazo[4,5 -c]quinolina (18 mg, 0,037 mmol, rendimiento del 53,9%) como un 15 solido de color ambar. LCMS (formiato) Rt 1,05 min, MH+ 482

Ejemplo 18

7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-2-(4-morfolinil)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]

quinolina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1,3-dihidro-2H-imidazo[4,5- c]quinolin-2-ona (220 mg, 0,539 mmol) (para una preparacion vease el intermedio 14) en POCl3 (2 ml, 21,46 mmol), PCl5 (0,2 g, 0,960 mmol) y la mezcla se calento a 120°C durante 24 horas. La mezcla de reaccion se evaporo en vacio para dar un solido de color beige. El solido se disolvio en NMP (0,5 ml) y se anadio morfolina (0,3 ml, 3,44 30 mmol), a continuacion, la solucion se calento en el microondas a 150°C durante 1 hora. La solucion se cargo en un cartucho SCX-2 de 20 g y se lavo con metanol (30 ml), a continuacion, se eluyo con amoniaco metanolico 2 M (30 ml) y el eluyente se evaporo en vacio para dar una goma de color beige. Esta se disolvio en DCM (3 ml) y se cargo en una columna de silice de 25 g, a continuacion, se eluyo con amoniaco metanolico 2 M/DCM (0-10%, 25 volumenes de columna) y las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 7-(3,5-dimetil- 35 4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-2-(4-morfolinil)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolina (4,7 mg, 9,84 pmoles, rendimiento del 1,827%) como un solido de color beige. LCMS (formiato) Rt 0,70 min, MH+ 478

Ejemplo 19

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-N-etil-8-metoxi-1-(1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina

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Se disolvio 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-(1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etil)quinolin-3,4-diamina (70 mg, 0,178 mmol, para una preparacion vease el intermedio 22) en etanol (5 ml) y se anadio etilisotiocianato (31,1 mg, 0,357 mmol). La solucion se calento a 60°C durante 3 horas, a continuacion, se enfrio y se evaporo en vacio. El residuo se disolvio en THF y se calento a 60°C durante 4 horas, a continuacion, se evaporo en vacio y el residuo se disolvio en DMSO y se purifico mediante MDAP (procedimiento formico. Las fracciones que contenian el producto se evaporaron en vacio para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-N-etil-8-metoxi-1-(1-(1-metil-1H-pirazol-4-il)etil)-1H- imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina (32 mg, 0,072 mmol, rendimiento del 40,3%) como un solido de color beige. LCMS (formiato) Rt 0,71 min, MH+ no encontrado.

Ejemplo 20

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N,N-dimetil-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-

amina

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Se combinaron 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)quinolin-3,4-diamina (para la preparacion, vease el intermedio 17) (50 mg, 0,131 mmol) y cloruro de N-(diclorometilen)-N-metilmetanamnio) (42,5 mg, 0,261 mmol) en acetonitrilo anhidro (0,5 ml) y se calento a 120°C durante 10 minutos (microondas). La mezcla de reaccion se redujo hasta la sequedad bajo una corriente de nitrogeno y el residuo se disolvio en DMSO (1 ml) y se purifico mediante MDAP (HpH). El disolvente se evaporo bajo una corriente de nitrogeno para dar 7-(3,5- dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N,N-dimetil-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina (44 mg, 0,101 mmol, rendimiento del 77%) como una goma de color amarillo.

LCMS (formiato) Rt 0,70 min, MH+ 436

Ejemplo 21

7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N-(2-metoxietil)-1-((R)-1-(piridin-2-il)etil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-

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A una solucion de 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-6-metoxi-N4-((R)-1-(piridin-2-il)etil)quinolin-3,4-diamina (para una preparacion, vease el intermedio 25) (538 mg, 1,38 mmol) en EtOH (40 ml) se anadio 1-isotiocianato-2-metoxietano (0,30 ml, 2,76 mmol) y la mezcla se calento a 60°C durante 5,5 horas. Se anadio una porcion adicional de 1- isotiocianato-2-metoxietano (0,15 ml, 1,38 mmol) y la mezcla de reaccion se calento a 60°C durante la noche. La mezcla se concentro en vacfo, el residuo se disolvio en THF (40 ml), se anadio EDC (530 mg, 2,76 mmoles) y la mezcla se calento a 60°C durante 4 horas. La mezcla se concentro en vacfo y el residuo se purifico mediante cromatografia (columna de 100 g, gradiente amoniaco metanolico 2M/DCM) para dar el producto crudo que se purifico adicionalmente mediante MDAP (HpH) para dar 7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N-(2-metoxietil)-1-((R)- 1-(piridin-2-il)etil)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina (122 mg, 0,258 mmol, rendimiento del 19%) como un solido de color blanco. LCMS: (Formiato, 2 min), Rt 0,73 min, MH+ 473.

Compuestos de referencia

Los detalles experimentales de los procedimientos LC-MS D y F, tal como se hace referencia en los compuestos de referencia a continuacion, son los siguientes:

Se llevo a cabo LC/MS (Procedimiento D) en una columna Supelcosil LCABZ+PLUS (3 pm, 3,3 cm x 4,6 mm ID) eluyendo con HCO2H al 0,1% y acetato de amonio 0,01 M en agua (disolvente A) y 95% de acetonitrilo y 0,05% de HCO2H en agua (disolvente B), usando el siguiente gradiente de elucion 0-0,7 minutos 0% de B, 0,7-4,2 minutos 0^100% de B, 4,2-5,3 minutos 100% de B, 5,3-5,5 minutos 100^0% de B a un caudal de 3 ml/minuto. Los espectros de masas (MS) se registraron en un espectrometro de masas Fisons VG Platform usando modos de ionizacion positiva por electropulverizacion [(ES+ve para dar iones moleculares [M+H]+ y [M+NH4]+] o ionizacion negativa por electropulverizacion [(ES-ve para dar ion molecular [M-H]-]. Los datos analiticos obtenido usando este aparato se proporcionan con el siguiente formato: [M+H]+ o [M-H]-.

Se llevo a cabo LC/MS (Procedimiento F) en una columna Sunfire C18 (30 mm x 4,6 mm i.d. 3,5 pm de diametro de empaque) a 30 grados centigrados, eluyendo con una solucion al 0,1% v/v de acido trifluoroacetico en agua (disolvente A) y una solucion al 0,1% v/v de acido trifluoroacetico en acetonitrilo (disolvente B) usando el siguiente gradiente de elucion 0-0,1 min 3% de B, 0,1-4,2 min 3-100% de B, 4,2-4,8 min 100% de B, 4,8-4,9 min 100-3% de B, 4,9-5,0 min 3% de B a un caudal de 3 ml/min. La deteccion UV fue una senal promediada de una longitud de onda de 210 nm a 350 nm y los espectros de masas se registraron en un espectrometro de masas usando ionizacion por electropulverizacion positiva. Los datos de ionizacion se redondearon al entero mas proximo.

LC/HRMS: La HPLC analitica se llevo a cabo en una columna Uptisfere-hsc (3 pm 33 x 3 mm id) eluyendo con acetato de amonio 0,01 M en agua (disolvente A) y acetonitrilo al 100% (disolvente B) usando el siguiente gradiente de elucion 0-0,5 minutos 5% de B, 0,5-3,75 minutos 5^100% de B, 3,75-4,5 100% B, 4,5-5 100^5% de B, 5-5,5% de B a un caudal de 1,3 ml/minuto. Los espectros de masas (MS) se registraron en un espectrometro de masas LCT de micromasa usando modos de ionizacion positiva por electrovaporizacion [ES+ve para dar iones moleculares MH+] o ionizacion negativa por electrovaporizacion [ES-ve para dar iones moleculares (M-H)-].

La CCF (cromatografia de capa fina) se refiere al uso de placas de CCF comercializadas por Merck revestidas con gel de silice 60 F254.

Compuesto de referencia A: 2-metil-6-(metiloxi)-4H-3,1-benzoxazin-4-ona

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Una solucion de acido 5-metoxiantranilico (Lancaster) (41,8 g, 0,25 mol) se sometio a reflujo en anhidrido acetico (230 ml) durante 3,5 horas antes de ser concentrada a presion reducida. A continuacion, el compuesto crudo se concentro dos veces en presencia de tolueno antes de ser filtrado y lavado dos veces con eter para proporcionar el compuesto del titulo (33,7 g, rendimiento del 71%) como un solido de color marron; LC/MS (Procedimiento D): m/z 192 [M+H]+, Rt 1,69 min.

Compuesto de referencia B: [2-amino-5-(metiloxi)fenil](4-clorofenil)metanona

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A una solucion de 2-metil-6-(metiloxi)-4H-3,1-benzoxazin-4-ona (para una preparacion, vease el compuesto de referencia A) (40,0 g, 0,21 mol) en una mezcla (2/1) de tolueno/eter (760 ml) a 0°C se anadio gota a gota una solucion de bromuro de 4-clorofenilmagnesio (170 ml, 1 M en eter dietilico, 0,17 moles). La mezcla de reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante 1 hora antes de ser desactivada con HCl 1N (200 ml). La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 150 ml) y los extractos organicos combinados se lavaron con salmuera (100 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. A continuacion, el compuesto crudo se disolvio en etanol (400 ml) y se anadio HCl 6 N (160 ml). La mezcla de reaccion se sometio a reflujo durante 2 horas antes de ser concentrada a un tercio en volumen. El solido resultante se filtro y se lavo dos veces con eter antes de ser suspendido en EtOAc y neutralizado con hidroxido sodico 1N. La capa acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 150 ml) y los compuestos organicos combinados se lavaron con salmuera (150 ml), se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El compuesto del titulo se obtuvo como un solido de color amarillo (39 g, rendimiento del 88%); LC/MS (Procedimiento D): m/z 262 [M+H]+, Rt 2,57 min.

Compuesto de referencia C: N1-[2-[(4-clorofenil)carbonil]-4-(metiloxi)fenil]-N2-{[(9H-fluoren-9-ilmetil)oxi] carbonil}-L-n-asparaginata

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Se disolvio N-{[(9H-fluoren-9-ilmetil)oxi]carbonil}-L-a-aspartilo cloruro de metilo (Int. J. Peptide Protein Res. 1992,40, 13-18) (93 g, 0,24 moles) en CHCl3 (270 ml) y se anadio [2-amino-5-(metiloxi)fenil](4-clorofenil)metanona (para una preparacion, vease el compuesto de referencia B) (53 g, 0,2 moles). La mezcla resultante se agito a 60°C durante 1 hora antes de ser enfriada y concentrada al 60% en volumen. Se anadio eter a 0°C y el precipitado resultante se filtro y se desecho. El filtrado se concentro a presion reducida y se uso sin purificacion adicional.

Compuesto de referencia D: [(3S)-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3- il]acetato de metilo

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A una solucion de N1-[2-[(4-clorofenil)carbonil]-4-(metiloxi)fenil]-N2-{[(9H-fluoren-9-ilmetil)oxi]carbonil}-L-a-

asparaginato de metilo (para una preparacion, vease el compuesto de referencia C) (supuestos 0,2 moles) en DCM (500 ml) se anadio Et3N (500 ml, 3,65 mol) y la mezcla resultante se sometio a reflujo durante 24 horas antes de ser concentrada. La amina cruda resultante se disolvio en 1,2-DCE (1,5 l) y se anadio cuidadosamente AcOH (104 ml, 1,8 mol). La mezcla de reaccion se agito a continuacion a 60°C durante 2 horas antes de ser concentrada en vacio y disuelta en DCM. La capa organica se lavo con HCl 1 N y la capa acuosa se extrajo con DCM (x3). Las capas organicas combinadas se lavaron dos veces con agua y salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida. El solido crudo se recristalizo en MeCN conduciendo al compuesto del titulo (51 g) como un solido de color amarillo palido. El filtrado puede concentrarse y recristalizarse en MeCN para dar a otros 10 g del producto deseado Rf = 0,34 (DCM/MeOH: 95/5).

HRMS MH + calculado para C19H1835ClN2O4 373.0955; Encontrado 373,0957.

Compuesto de referencia E: [(3S)-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-2-tioxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il] acetato de metilo

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Una suspension de P4S10 (36,1 g, 81,1 mmol) y Na2CO3 (8,6 g, 81,1 mmol) en 1,2-DCE (700 ml) a temperatura ambiente se agito durante 2 horas antes de la adicion de [(3S)-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-2-oxo-2,3-dihidro-1H-1,4- benzodiazepin-3-il]acetato de metilo (para una preparacion, vease el compuesto de referencia D) (16,8 g, 45,1 mmol). La mezcla resultante se agito a 70°C durante 2 horas antes de ser enfriada y filtrada. El solido se lavo dos veces con DCM y el filtrado se lavo con hidrogenocarbonato sodico saturado y salmuera. La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro a presion reducida. El producto crudo se purifico mediante cromatografia flash sobre gel de silice (DCM/MeOH: 99/1) para proporcionar el compuesto del titulo (17,2 g, rendimiento del 98%) como un solido de color amarillo. LC/MS (Procedimiento D): m/z 389 [M (35Cl)+H]+, Rt 2,64 min HRMS MH+ calculado para C1gH1e35ClN2O3S 389,0727; Encontrado 389,0714.

Compuesto de referencia F: [(3S)-2-[(1Z)-2-acetilhidrazin]-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-3H-1,4-benzodiazepin-

3-il]acetat de metilo

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A una suspension de [(3S)-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-2-tioxo-2,3-dihidro-1H-1,4-benzodiazepin-3-il]acetato de metilo (para una preparacion, vease el compuesto de referencia E) (9,0 g, 23,2 mmol) en THF (300 ml) a 0°C se anadio gota a gota monohidrato de hidrazina (3,4 ml, 69,6 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante 5 horas entre 5°C y 15°C antes de ser enfriada a 0°C. A continuacion, se anadio lentamente Et3N (9,7 ml, 69,6 mmol) y se anadio gota a gota cloruro de acetilo (7,95 ml, 69,6 mmol). A continuacion, la mezcla se dejo calentar a temperatura ambiente durante 16 horas antes de concentrar bajo presion reducida. El producto crudo se disolvio en DCM y se lavo con agua. La capa organica se seco sobre Na2SO4, se filtro y se concentro en vacio para dar el compuesto crudo del titulo (9,7 g, rendimiento del 98%) que se uso sin purificacion adicional. Rf = 0,49 (DCM/MeOH: 90/10).

Compuesto de referencia G: [(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]

benzodiazepin-4-il]acetato de metilo

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El [(3S)-2-[(1Z)-2-acetilhidrazin]-5-(4-clorofenil)-7-(metiloxi)-3H-1,4-benzodiazepin-3-il]acetato de metilo crudo (para una preparacion, vease el compuesto de referencia F) (supuesto 9,7 g) se suspendio en THF (100 ml) y se anadio AcOH (60 ml) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 2 dias antes de ser concentrada a presion reducida. El solido crudo se trituro en i-Pr2O y se filtro para dar el compuesto del titulo (8,7 g, 91% en 3 etapas) como un solido blanquecino.

HRMS MH+ calculado para C21H20ClN4O3 411.1229; Encontrado 411,1245.

Compuesto de referencia H: Acido [(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4] benzodiazepin-4-il]acetico

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A una solucion de [(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetato de etilo (para una preparacion, vease el compuesto de referencia G) (7,4 g, 18,1 mmol) en THF (130 ml) a temperatura ambiente se anadio hidroxido sodico 1N (36,2 ml, 36,2 mmol). La mezcla de reaccion se agito a esta temperatura durante 5 horas antes de ser desactivada con HCl 1 N (36,2 ml) y concentrada en vacio. A continuacion, se anadio agua y la capa acuosa se extrajo con DCM (x3) y las capas organicas combinadas se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron a presion reducida para dar el compuesto del titulo (7 g, rendimiento del 98%) como un solido de color amarillo palido.

Compuesto de referencia H: [5-({[(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-

a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetil}amino)pentil]carbamato de 1,1 -dimetiletilo

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Una mezcla de acido [(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetico (para una preparacion, vease el compuesto de referencia G) (1,0 g, 2,5 mmoles), HATU (1,9 g, 5 mmol) y DIPEA (0,88 ml, 5 mmol) se agito durante 80 minutos a temperatura ambiente, a esta se anadio (4-aminobutil)carbamato de 1, 1 -dimetiletilo (1,05 ml, 5,0 mmol, disponible en Aldrich). La mezcla de reaccion se agito a temperatura ambiente durante 2 horas antes de ser concentrada. El residuo se recogio en diclorometano y se lavo con HCl 1N.

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La capa acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. La capa organica se lavo con hidroxido de sodio 1N, seguido de una solucion saturada de cloruro sodico, se seco sobre sulfato sodico y se concentro. El residuo se purifico mediante cromatografia flash sobre silice usando diclorometano/metanol 95/5 para dar el compuesto del titulo como un solido de color amarillo (1,2 g). LC/MS (Procedimiento D): rt = 3,04 min.

Compuesto de referencia J: Trifluoroacetato de N-(5-aminopentil)-2-[(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)- 4H-[1,2,4]triazolo[4, 3-a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetamida

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A una solucion de [5-({[(4S)-6-(4-clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4- il]acetil}amino)pentil]carbamato de 1,1 -dimetiletilo (para una preparacion, vease el compuesto de referencia H) (0,2 g, 0,34 mmol) en diclorometano (3 ml), 0,68 mmol) gota a gota a 0°C. La mezcla de reaccion se agito durante 3 horas de 0°C a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se concentro hasta la sequedad para proporcionar el compuesto del titulo como un aceite de color amarillo higroscopico (200 mg)

LC/MS (Procedimiento D): rt = 2,33 min.

HRMS MH+ calculado para C25H29ClN6O2 481.21 19; Encontrado 481,2162.

Compuesto de referencia K: Mezcla de isomeros 5- y 6- de Alexa Fluor 488-N-(5-aminopentil)-2-[(4S)-6-(4- clorofenil)-1-metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-4-il]acetamida

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Se disolvio N-(5-aminopentil)-2-[(4S)-6-(4-clorofenil)-1 -metil-8-(metiloxi)-4H-[1,2,4]triazolo[4,3-a][1,4]benzodiazepin-

4-il] acetamida (para una preparacion, vease el compuesto de referencia J) (7,65 mg, 0,013 mmol) en N,N- dimetilformamida (DMF) (300 pl) y se anadio a Alexa Fluor 488 ester succinimidilico de acido carboxilico (5 mg, 7,77 pmol, mezcla de isomeros5 y 6, disponible en Invitrogen, numero de producto A-20100) en un tubo de centrifuga Eppendorf. Se anadio la base de Hunig (7,0 pl, 0,040 mmol) y la mezcla se agito mediante vortice durante la noche. Despues de 18 horas, la mezcla de reaccion se evaporo hasta la sequedad y el residuo se volvio a disolver en DMSO/agua (50%, <1 ml total), se aplico a una columna preparativa Phenomenex Jupiter C18 y se eluyo con un gradiente de 95% de A: 5% de B a 100% de B (A = acido trifluoroacetico al 0,1% en agua, B = 0,1% de TFA/90% de acetonitrilo/10% de agua) a un caudal de 10 ml/min durante 150 minutos. Las fracciones impuras se combinaron y se volvieron a purificar usando el mismo sistema. Las fracciones se combinaron y se evaporaron para producir el producto del titulo (2,8 mg) como una mezcla de los 2 regioisomeros mostrados. LC/MS (Procedimiento F): MH+ = 999, rt = 1,88 min.

Procedimientos de ensayos biologicos Ensayo de union de anisotropi'a de fluorescencia

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La union de los compuestos de formula (I) a un bromodominio BRD2, BRD3 y BRD4 puede evaluarse usando un ensayo de union de anisotropfa de fluorescencia.

La protema bromodominio, el ligando fluorescente (vease el compuesto de referencia K) y una concentracion variable del compuesto de ensayo se incubaron juntos para alcanzar el equilibrio termodinamico bajo condiciones tales que, en ausencia del compuesto de ensayo, el ligando fluorescente esta significativamente unido (> 50%) y, en presencia de una concentracion suficiente de un potente inhibidor, la anisotropfa del ligando fluorescente no unido es sensiblemente diferente del valor unido.

Todos los datos se normalizaron a la media de los 16 pocillos de control alto y 16 pocillos de control bajo en cada placa. A continuacion, se aplico un ajuste de curva de cuatro parametros de la siguiente forma:

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En la que 'a' es el mmimo, 'b' es la pendiente, 'c' es el valor plC50 y 'd' es el maximo.

Los bromodominios recombinantes humanos (bromodominio BRD2 (1-473), bromodominio BRD3 (1-435) y bromodominio BRD4 (1-477)) se expresaron en celulas de E coli (en un vector pET15b) con un marcador seis-His en el terminal N. El bromodominio marcado con His se extrajo de E coli usando 0,1 mg/ml de lisozima y sonicacion. A continuacion, el bromodominio se purifico mediante cromatograffa de afinidad en una columna HisTRAP HP, eluyendo con un gradiente lineal de 10-500 mM de Imidazol, en 20 Cv. La purificacion adicional se completo con una columna de exclusion Superdex 200 de tamano de grado de preparacion. La protema purificada se almaceno a -80°C en HEPES 20 mM pH 7,5 y NaCl 100 mM.

Protocolo para el bromodominio BRD2: Todos los componentes se disolvieron en una composicion de tampon de HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM y CHAPS 0,5 mM con concentraciones finales de bromodominio 2, 75 nM, ligando fluorescente 5 nM. Se anadieron 10 pl de esta mezcla de reaccion usando un micropunto multipunto a pocillos que contenfan 100 nl de varias concentraciones del compuesto de ensayo o vehfculo DMSO (1% final) en una placa de microtitulacion Greer 384, negra, de bajo volumen, y se equilibro en la oscuridad durante 60 min a temperatura ambiente. La anisotropfa de fluorescencia se leyo en Envision (Aex = 485 nm, AEM = 530 nm, dicroico - 505 nM).

Protocolo para el bromodominio BRD3: Todos los componentes se disolvieron en tampon de composicion HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mm y CHAPS 0,5 mM con concentraciones finales de bromodominios 3 75 nM, ligando fluorescente 5 nM. Se anadieron 10 pl de esta mezcla de reaccion usando un micropunto multiple a pocillos que contenfan 100 nl de varias concentraciones de compuesto de ensayo o vehfculo DMSO (1% final) en placa de microtitulacion Greer 384, negra, de bajo volumen, y se equilibro en la oscuridad durante 60 minutos a temperatura ambiente. La anisotropfa de fluorescencia se leyo en Envision (Aex = 485 nm, AEM = 530 nm, dicroico -505 nM).

Protocolo para el bromodominio BRD4: Todos los componentes se disolvieron en tampon de composicion HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mm y CHAPS 0,5 mM con concentraciones finales de bromodiminio 4 75 nM, ligando fluorescente 5 nM. Se anadieron 10 pl de esta mezcla de reaccion usando un micropunto multiple a pocillos que contenfan 100 nl de varias concentraciones de compuesto de ensayo o vehfculo DMSO (1% final) en placa de microtitulacion Greer 384, negra, de bajo volumen, y se equilibro en la oscuridad durante 60 minutos a temperatura ambiente. La anisotropfa de fluorescencia se leyo en Envision (Aex = 485 nm, AEM = 530 nm, dicroico-505 nM).

Ensayo de transferencia de energia por resonancia de fluorescencia (TR-FRET) con resolucion temporal

La union de los compuestos de formula (I) a los bromodominios BRD2, BRD3 y BRD4 se evaluo usando un ensayo de union por transferencia de energfa por resonancia fluorescente con resolucion temporal, que mide la union de un peptido de histona acetilado a la protema bromodominio.

La protema bromodominio, el peptido de histona y una concentracion variable del compuesto de ensayo se incubaron juntos para alcanzar el equilibrio termodinamico. El ensayo esta configurado de manera que, en ausencia del compuesto de ensayo, el bromodominio y el peptido estan significativamente unidos (~ 30%) y, en presencia de una concentracion suficiente de un potente inhibidor, esta interaccion se interrumpe conduciendo a una cafda medible en la transferencia de energfa por resonancia fluorescente.

Peptido de histona:

H- Se r-G ly-Arg-Gly- Ly s (Ac )-G ly-G ly-Ly s( Ac V G ly-Leu -G ly-Ly s( Ac )-Gly- G ly-Ala-Ly s (Ac Arg-His-Gly-Ser-Gly-Ser-Lys(Biotin)-OH, 3TFA

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El peptido protegido se ensamblo en un sintetizador en fase solida usando resina Wang precargada y utilizando protocolos de sintesis Fmoc estandar. La lisina C-terminal se protegio con un grupo labil a hiperacido que permitia su eliminacion selectiva al final del ensamblaje y la union de la biotina. El peptido crudo se obtuvo despues de la escision de la resina con una mezcla de acido trifluoroacetico (TFA), triisopropilsilano y agua (95:2,5:2,5) durante 3 horas a temperatura ambiente y, a continuacion, se purifico usando una columna de fase inversa C18 utilizando un gradiente de agua/acetonitrilo tamponado con TFA al 0,1%. Las fracciones resultantes se analizaron y las fracciones con una pureza > 95%, segun HPLC analitica, y que daban el mw correcto (mediante espectroscopia de masa MALDiTOF) se reunieron y se liofilizaron. El material final se analizo mediante HPLC para confirmar la pureza.

Produccion de proteinas: Los bromodominios humanos recombinantes (BRD2 (1-473), BRD3 (1-435) y BRD4 (1477)) se expresaron en celulas E coli (en un vector pET15b) con un marcador seis-His en el terminal N. El bromodominio marcado con His se extrajo de E coli usando sonicacion y se purificaron usando una columna sepharose 6FF de niquel, las proteinas se lavaron y, a continuacion, se eluyeron con Tris-Hcl 50 mM, pH 8,0. NaCl 300 mM, p-mercaptoetanol 1 mM e Imidazol 20 mM. Se realizo una purificacion adicional mediante cromatografia de afinidad en una columna HisTRAP HP, eluyendo con un gradiente lineal de cloruro sodico de 0-500 mM, en 20 volumenes de columna. La purificacion final se completo con la columna de exclusion Superdex 200 de tamano de preparacion. La proteina purificada se almaceno a -80°C en HEPES 20 mM pH 7,5 y NaCl 100 mM. La identidad de las proteinas se confirmo mediante huella dactilar en masa de peptidos y el peso molecular predicho se confirmo mediante espectrometria de masas.

Protocolo para los ensayos de bromodominios BRD2, 3 y 4: Todos los componentes del ensayo se disolvieron en una composicion de tampon de HEPES 50 mM pH 7,4, NaCl 50 mM y CHAPS 0,5 mM. La concentracion final de las proteinas de bromodominio fue de 100 nM y el peptido de histona fue de 300 nM, estos componentes se mezclaron previamente y se permitio que se equilibraran durante 1 hora en la oscuridad. Se anadieron 8 pl de esta mezcla de reaccion a todos los pocillos que contenian 50 nl de varias concentraciones de compuesto de ensayo o vehiculo DMSO (0,5% final) en placas de microtitulacion Greiner 384, negras, de bajo volumen, y se incubaron en oscuridad durante 60 minutos a temperatura ambiente. Se anadieron 2 pl de mezcla de deteccion que contenia anticuerpo marcado con XL665 anti-6h y estreptavidina marcada con criptato de europio a todos los pocillos y se realizo una incubacion adicional en oscuridad de al menos 30 minutos. A continuacion, las placas se leyeron en el lector de placas Envision, (Aex = 317nm, donante AEM = 615nm; aceptor AEM = 665nm; Dicroico LANCE dual). Se realizaron mediciones de intensidad de fluorescencia con resolucion temporal a ambas longitudes de onda de emision y se calculo la relacion de aceptor/donante y esta se uso para el analisis de los datos. Todos los datos se normalizaron a la media de 16 pocillos de control alto y los 16 pocillos de control bajo en cada placa. A continuacion, se aplico un ajuste de curva de cuatro parametros de la siguiente forma:

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En la que 'a' es el minimo, 'b' es la pendiente, 'c' es el plC50 y 'd' es el maximo.

Los ejemplos 1-21 se ensayaron en cada uno de los ensayos anteriores y se encontro que tenian un valor plC50 comprendido en el intervalo de 6,0 a 7,3. Se encontro que los ejemplos 1,4, 6-10, 13, 15-18, 20 y 21 tenian un valor plC50 comprendido en el intervalo de 7,0 a 7,3 en al menos uno de los ensayos anteriores.

Medicion de la secrecion de IL-6 inducida por LPS de sangre completa

La activacion de celulas monociticas por agonistas de receptores de tipo toll, tales como lipopolisacarido bacteriano (LPS), resulta en la produccion de mediadores inflamatorios clave, incluyendo IL-6. Se considera en general que dichas vias son centrales para la fisiopatologia de una serie de trastornos autoinmunes e inflamatorios.

Los compuestos a ensayar se diluyen para dar una gama de concentraciones apropiadas de las cuales 1 pl de las existencias diluidas se anade a una placa de 96 pocillos. Despues de la adicion de sangre completa (130 pl), las placas se incuban a 370C (5% de CO2) durante 30 minutos antes de la adicion de 10 pl de 2,8 pg/ml de LPS, diluido en RPMI 1640 completo (concentracion final = 200 ng/ml), para dar un volumen total de 140 ul por pocillo. Despues de una incubacion adicional durante 24 horas a 37 grados, se anadieron 140 pl de PBS a cada pocillo. Las placas se sellaron, se agitaron durante 10 minutos y, a continuacion, se centrifugaron (2.500 rpm x 10 min). Se retiraron 100 pl del sobrenadante y los niveles de IL-6 se ensayaron mediante inmunoensayo (tipicamente mediante la tecnologia MesoScale Discovery), bien inmediatamente o bien despues de un almacenamiento a -20 grados. Se generaron curvas de respuesta de concentracion para cada compuesto a partir de los datos y un se calculo un valor IC50.

Se encontro que los ejemplos 1-3, 6-11, 14, 18, 20 y 21 que se ensayaron en el ensayo anterior tenian un valor plC50 comprendido en el intervalo 5 5-7,0 aparte de los ejemplos 2 y 8 que tenian un valor pIC50 < 5,5.

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Estos datos demuestran que los inhibidores de bromodominio ensayados en el ensayo de sangre total anterior inhibieron la produccion del mediador inflamatorio clave IL-6.

Modelo In vivo de endotoxemia de raton

Las altas dosis de endotoxina (lipopolisacarido bacteriano) administradas a los animales producen un sindrome de choque profundo que incluye una fuerte respuesta inflamatoria, desregulacion de la funcion cardiovascular, fallo organico y, en ultima instancia, la muerte. Este patron de respuesta es muy similar a la sepsis humana y al choque septico, donde la respuesta del cuerpo a una infeccion bacteriana significativa puede ser similarmente mortal.

Para ensayar los compuestos para su uso en la invencion, se administra, mediante inyeccion intraperitoneal, una dosis letal de 15 mg/kg de LPS a grupos de ocho ratones machos Balb/c. Noventa minutos mas tarde, los animales se dosificaron, por via intravenosa, con vehiculo (20% de ciclodextrina 1% de etanol en agua apirogena) o compuesto (10 mg/kg). La supervivencia de los animales se supervisa a los 4 dias.

Ensayo oncologico de crecimiento celular

Se cultivaron lineas celulares humanas (n = 33 que comprendian 15 lineas celulares heme, 14 lineas celulares de mama y 4 lineas celulares diferentes) en RPMI-1640 que contenia suero bovino fetal al 10%, se sembraron 1.000 celulas viables por pocillo en placas de poliestireno, negras, fondo plano, de 384 pocillos (Greiner #781086) en 48 gl de medio de cultivo. Todas las placas se colocaron al 5% de CO2, 37°C durante la noche. Al dia siguiente, se recolecto una placa con CellTiter-Glo (CTG, Promega #G7573) durante un tiempo igual a la medicion 0 (TO) y se anadio el compuesto (titulacion de 20 puntos de 14,7 pM a 7 pM) a las placas restantes. La concentracion final de DMSO en todos los pocillos fue del 0,15%. Las celulas se incubaron durante 72 horas o el tiempo indicado y cada placa se desarrollo con reactivo CellTiter-Glo usando un volumen equivalente al volumen de cultivo celular en los pocillos. Las placas se agitaron durante aproximadamente 2 minutos y la senal quimioluminiscente se leyo en el Analyst GT (Molecular Devices) o EnVision Plate Reader (Perkin Elmer).

Los resultados se expresan como un porcentaje del T0 y se representan con relacion a la concentracion del compuesto. El valor T0 se normalizo al 100% y representa el numero de celulas en el momento de la adicion del compuesto y los datos de respuesta a la concentracion se ajustaron con un ajuste de curva de 4 parametros usando el software XLfit (modelo 205). La concentracion que inhibio el crecimiento celular en un 50% (gIC50) es el punto medio de la "ventana de crecimiento" (entre el T0 y el control DMSO). El valor Ymin - T se determina restando el valor T 0 (100%) del valor Ymin (%) determinado a partir del ajuste de la curva de respuesta a la concentracion. Los valores correspondientes a los pocillos sin celulas fueron restados de todas las muestras para la correccion de fondo.

Claims (14)

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   REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo

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   en la que:

   R1 es hidrogeno o alquilo C1-3 y R2 se selecciona de entre

   • alquilo C1-6; y

   • alquilo C2-6 sustituido con hidroxi, alcoxi C1-4 o un grupo NRaRb en la que Ra y Rb son independientemente hidrogeno o alquilo C1-4, o Ra y Rb se combinan junto con el N al que estan unidos para formar un anillo heterociclilo; o

   R1 y R2 se combinan junto con el N al que estan unidos para formar un anillo heterociclilo;

   R3 es hidrogeno, alquilo C1-3 o CH2OH;

   R4 se selecciona de entre

   • un grupo fenilo opcionalmente sustituido con alquilo C1-4, CF3, halogeno, hidroxi o alcoxi C1-4;

   • un grupo heteroaromatico opcionalmente sustituido con alquilo C1-4, CF3, halogeno, hidroxi o alcoxi C1-4;

   • un grupo tetrahidropiranilo;

   • un grupo tetrahidrofuranilo;

   • un grupo cicloalquilo C3-7; y

   • un grupo CH2OMe.
2. 2. Un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun la reivindicacion 1, en el que R1 y R2 se combinan junto con el N al que estan unidos para formar un anillo piperidinilo o morfolinilo.
3. 3. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun la reivindicacion 1, en el que R1 es hidrogeno y R2 es alquilo C1-4.
4. 4. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun la reivindicacion 1, en el que R1 es hidrogeno y R2 es alquilo C2-4 sustituido con hidroxi o metoxi.
5. 5. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun la reivindicacion 4, en el que el grupo alquilo C1-4 es etilo.
6. 6. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun la reivindicacion 1, en el que R1 es hidrogeno y R2 es alquilo C2-4 sustituido por NRaRb ,en la que Ra y Rb son ambos hidrogeno o Ra y Rb se combinan junto con el N al que estan unidos para formar un anillo morfolinilo.
7. 7. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun la reivindicacion 6, en el que el grupo alquilo C2-4 es etilo.

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8. 8. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que R3 es hidrogeno y R4 es tetrahidropiranilo.
9. 9. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que R3 es hidrogeno o metilo y R4 es piridilo o fenilo.
10. 10. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 -7, en el que R3 es metilo y R4 es un grupo -Ch^OMe.
11. 11. Compuesto segun la reivindicacion 1, que se selecciona de entre

    2-({7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -[(1 R)-1 -feniletil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il}amino)etanol;

    2-{[7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2- il]amino}etanol;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-N-etil-8-(metiloxi)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

    7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-N-etil-8-metoxi-1-(1-metoxipropan-2-il)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

    N1-(7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il)etane- 1,2-diamina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(4-morfolinil)etil]-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5- c]quinolin-2-amina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5- c]quinolin-2-amina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-N-etil-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

    N-[7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1 -[1 -metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-il]-1,2- etanediamina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-N-[2-(4-morfolinil)etil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin- 2-amina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-1-[1-metil-2-(metiloxi)etil]-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2- amina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-N-[2-(metiloxi)etil]-1-(2-piridinilmetil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-2-(4-morfolinil)-1 -[(1 R)-1 -feniletil]-1 H-imidazo[4,5-c]quinolina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-1 -[(1 R)-1 -feniletil]-2-(1 -piperidinil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolina;

    7-(3,5-dimetil-4-isoxazolil)-8-(metiloxi)-2-(4-morfolinil)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-ilmetil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolina;

    7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-N-etil-8-metoxi-1 -(1 -(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)etil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-amina;

    7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N,N-dimetil-1-((tetrahidro-2H-piran-4-il)metil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinolin-2- amina; y

    7-(3,5-dimetilisoxazol-4-il)-8-metoxi-N-(2-metoxietil)-1-((R)-1-(piridin-2-il)etil)-1 H-imidazo[4,5-c]quinotin-2-amina o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
12. 12. Una composicion farmaceutica que comprende un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo como se define en la reivindicacion 1 y uno o mas vehiculos, diluyentes o excipientes farmaceuticamente aceptables.
13. 13. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo como se define en la reivindicacion 1 para su uso en terapia.
14. 14. Compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo como se define en la reivindicacion 1 para su uso en el tratamiento del cancer o una afeccion cronica autoinmune y/o inflamatoria.