ES2581278T3 - Composiciones y métodos para la inmunomodulación - Google Patents

Abstract

Una isoforma de C4BP que carece de la cadena beta, para su uso en la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad inmunológica causada por una activación no deseada del sistema inmunitario, en la que si al menos una de las cadenas alfa que forman dicha isoforma es un mutante de deleción que carece de al menos una de las regiones CCP, la región CCP6 se conserva en dicha cadena alfa; y en la que la enfermedad inmunológica se selecciona del grupo que consiste en: (i) una enfermedad inmunoinflamatoria seleccionada del grupo que consiste en infarto o ictus, aterosclerosis, fibrosis pulmonar, síndrome de dificultad respiratoria aguda, asma, cáncer, preeclampsia y eclampsia; (ii) septicemia; (iii) una enfermedad autoinmunitaria seleccionada del grupo que consiste en: enfermedades sanguíneas autoinmunitarias, enfermedades autoinmunitarias de la musculatura, enfermedades autoinmunitarias del oído, enfermedades oculares autoinmunitarias, enfermedades autoinmunitarias del riñón, enfermedades cutáneas autoinmunitarias, enfermedades autoinmunitarias cardiovasculares, enfermedades autoinmunitarias endocrinas, enfermedades gastroentéricas autoinmunitarias, enfermedades nerviosas autoinmunitarias y enfermedades autoinmunitarias sistémicas seleccionadas del grupo que consiste en lupus eritematoso sistémico, síndrome antifosfolipídico, enfermedad linfoproliferativa autoinmunitaria, poliendocrinopatía autoinmunitaria, enfermedad de Bechet, enfermedad de Goodpasture, sarcoidosis, esclerodermia, síndrome de Sjogren y psoriasis; (iv) rechazo de trasplante; (v) enfermedad de injerto contra huésped; y (vi) una enfermedad de hipersensibilidad.

Description

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páginas 123-151 (CRC Press, Inc. 1997); y Bishop (ed.), Guide to Human Genome Computing, 2ª Ed. (Academic Press, Inc. 1998)).

-Mutantes de deleción que carecen de al menos una de las regiones CCP, siempre que se conserve la región CCP6 (véase el ejemplo 7) tales como, por ejemplo, mutantes que carecen del dominio CCP1, que carecen 5 del dominio CCP2, que carecen del dominio CCP3, que carecen del dominio CCP4, que carecen del dominio

CCP5, que carecen del dominio CCP7 y/o que carecen del dominio CCP8.

-Proteínas de fusión que comprenden una primera región que comprende la cadena α de C4BP y una segunda región que comprende un polipéptido que no forma parte de la cadena alfa de C4BP. La proteína de fusión de la presente invención puede comprender en dirección de amino terminal a carboxi terminal, (a) la región que comprende el dominio CCP6 y (b) la región que comprende un polipéptido que no forma parte de la cadena alfa de C4BP. Como alternativa, la proteína de fusión de la invención puede comprender, en dirección de amino terminal a carboxi terminal, (a) la región que comprende un polipéptido que no forma parte de la cadena alfa de C4BP y (b) la región que comprende el dominio CCP6. Los ejemplos de proteínas de fusión que mejoran las propiedades farmacocinéticas incluyen, sin limitación, fusiones con albúmina humana,

15 una región Fc de inmunoglobulina, dominios Fc, secuencias de poli Glu o poli Asp, ferritina y transferrina. Además, la fusión con secuencias polipeptídicas conformacionalmente desordenadas compuestas de los aminoácidos Pro, Ala y Ser (“PASilación”) o hidroxietilalmidón (HESilación.RTM) proporciona una vía sencilla para aumentar el volumen hidrodinámico del péptido C. Esta extensión adicional adopta una estructura voluminosa al azar que aumenta significativamente el tamaño de la proteína de fusión resultante. En una realización preferida, la región que comprende un polipéptido que no forma parte de la cadena alfa de C4BP es una región Fc de inmunoglobulina. Tal como se usa en el presente documento, se entiende que la expresión “región Fc de inmunoglobulina” significa la porción carboxilo terminal de una región constante de cadena de inmunoglobulina, preferentemente una región constante de cadena pesada de inmunoglobulina o una porción de la misma. Por

25 ejemplo, una región Fc de inmunoglobulina puede comprender 1) un dominio CH1, un dominio CH2 y un dominio CH3, 2) un dominio CH1 y un dominio CH2, 3) un dominio CH1 y un dominio CH3, 4) un dominio CH2 y un dominio CH3 o 5) una combinación de dos o más dominios CH y una región bisagra de inmunoglobulina. La región Fc de la proteína de fusión de la presente invención comprende o consiste en una Fc o una porción de una Fc de una inmunoglobulina de isotipo seleccionado entre IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, más preferentemente, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, sIgA, más preferentemente IgG2 o IgG4, lo más preferentemente IgG2.

La expresión “enfermedad inmunológica”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier enfermedad que esté causada por una activación no deseada del sistema inmunitario, incluyendo el sistema

35 inmunitario innato o adaptativo, así como el humoral o la rama celular del sistema inmunitario.

En una realización preferida, la enfermedad inmunológica se selecciona del grupo que consiste en una enfermedad inmunoinflamatoria, septicemia, enfermedad autoinmunitaria, rechazo de trasplante, enfermedad de injerto contra huésped y enfermedades de hipersensibilidad.

La expresión “enfermedad inmunoinflamatoria”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a enfermedades y trastornos inflamatorios en los que las células inmunitarias y/o las citocinas están implicadas en la patofisiología de la enfermedad o trastorno. Los ejemplos de enfermedades inmunoinflamatorias incluyen afecciones tales como artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artrosis, síndrome del distrés respiratorio agudo y asma. La

45 expresión enfermedad inmunoinflamatoria incluye trastornos inflamatorios tanto agudos como crónicos.

La expresión “trastorno inflamatorio agudo” pretende incluir trastornos y episodios de trastornos caracterizados por la rápida aparición de los síntomas asociados con una respuesta inflamatoria y síntomas de duración relativamente corta, mientras que un “trastorno inflamatorio crónico” pretende incluir trastornos caracterizados por la presencia continuada de síntomas asociados con una respuesta inflamatoria y una duración continua de los síntomas. Las enfermedades inmunoinflamatorias que pueden tratarse con los métodos de acuerdo con la presente invención incluyen, sin limitación, enfermedades cardiovasculares, tales como infarto o ictus, aterosclerosis, fibrosis pulmonar, artritis reumatoide, artritis reumatoide juvenil, artrosis, síndrome de dificultad respiratoria aguda, asma y cáncer. También están comprendidas entre las enfermedades inmunoinflamatorias que pueden tratarse de acuerdo con la

55 presente invención, enfermedades que aparecen durante el embarazo, tales como, preeclampsia y eclampsia. La preeclampsia es una enfermedad relacionada con el embarazo, caracterizada por, hipertensión, proteinuria y edema. Se entiende y debe definirse en el presente documento que la preeclampsia abarca y reside en un espectro de trastornos de preeclampsia, incluyendo insuficiencia placentaria, retraso del crecimiento intrauterino, aborto temprano, alumbramiento prematuro, muerte intrauterina y eclampsia.

El término “septicemia”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una respuesta sistémica del huésped a microorganismos en tejidos previamente estériles caracterizada por disfunción de órganos terminales alejada del sitio primario de infección. Para que se considere septicemia, tiene que haber una infección sospechada

o demostrada (mediante cultivo, tinción o reacción en cadena de la polimerasa (PCR)) o un síndrome clínico

65 patogénico de infección. Las pruebas específicas de infección incluyen RGB en fluido normalmente estéril (tal como orina o fluido cefalorraquídeo (FCR), pruebas de una víscera perforada (aire libre en rayos X o escáner TC

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abdominal, signos de peritonitis aguda), rayos X torácico (RXT) anormales coherentes con neumonía (con opacificación focal) o petequias, púrpura o púrpura fulminante. Los subconjuntos más críticos de la septicemia son la septicemia grave (septicemia con disfunción de órganos terminales aguda) y el choque séptico (septicemia con hipotensión arterial refractaria). Como alternativa, cuando se cumplen dos o más de los criterios de síndrome de 5 respuesta inflamatoria sin pruebas de infección, puede diagnosticarse a los pacientes simplemente de “SRIS”. Los pacientes con SRIS y disfunción de órganos terminales aguda pueden denominarse “SRIS agudo”. Se define que los pacientes tienen “septicemia grave” si tienen síntomas de septicemia más signos de hipoperfusión sistémica: disfunción de órganos terminales o lactato en suero mayor de 4 mmol/dl. Otros signos incluyen oliguria y estado mental alterado. Se define que los pacientes tienen choque séptico si tienen septicemia más hipotensión tras una resucitación agresiva con fluidos (típicamente más de 6 litros o 40 mg/kg de cristaloide). Los ejemplos de disfunción de órganos terminales incluyen lesión pulmonar aguda o síndrome de de dificultad respiratoria aguda, encefalopatía

o disfunción que afecta al hígado (alteración de la función sintética de proteínas y las funciones metabólicas), al riñón (oliguria y anuria, anomalías de electrolitos, sobrecarga de volumen) y al corazón (fallo cardíaco sistólico y diastólico).

15 Las afecciones sepitcémicas que pueden tratarse con la composición de acuerdo con la presente invención incluyen, sin limitación, la septicemia grave y el choque séptico. En una realización, la afección asociada con el síndrome septicémico se selecciona del grupo que consiste en una disfunción orgánica, preferentemente una disfunción de riñón o una disfunción del hígado, un síndrome de disfunción multiorgánica (SDMO), un síndrome de de dificultad respiratoria aguda (SDRA) y coagulación intravascular diseminada (DIC).

La septicemia puede estar inducida por una bacteria o más de una bacteria seleccionada del grupo que consiste en bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas. Preferentemente, la bacteria Gram negativa se selecciona del grupo que consiste en Escherichia coli, especies de Klebsiella, espcies de Serratia, especie de Enterobacter,

25 especies de Proteus, Pseudomonas aeruginosa, Haemophilus influenzae, especies de Neisseria y especies de Listeria. Como alternativa, la bacteria Gram positiva se selecciona del grupo que consiste en Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, estafilococos negativos a coagulasa, especies de Enterococcus, Streptococcus pyogenes y Streptococcus viridans. En una realización, se induce el síndrome septicémico por LPS. En otra realización más, la septicemia se induce por un microorganismo o más de un microorganismo seleccionado del grupo que consiste en bacterias anaerobias, hongos, rickettsias, clamidias, micoplasma, espiroquetas y virus.

Las expresiones “enfermedad autoinmunitaria”, “enfermedad asociada con la disfunción/desregulación inmunitaria” o “enfermedad inmunitaria inflamatoria” se usan a lo largo de la memoria descriptiva para referirse a una afección patógena en la que el sistema inmunitario del paciente da como resultado una enfermedad a causa de un 35 autoantígeno (autoinmunidad) o de un antígeno exógeno (disfunción/desregulación inmunitaria o enfermedad inflamatoria inmunitaria). La autoinmunidad está presente en todo el mundo hasta cierto punto. Normalmente es inofensiva y es probablemente un fenómeno universal de la vida de los vertebrados. Sin embargo, la autoinmunidad puede ser la causa de un amplio espectro de enfermedades humanas, conocidas como enfermedades autoinmunitarias. Este concepto de autoinmunidad como la causa de enfermedades humanas es relativamente nuevo y no se aceptó en las principales corrientes de pensamiento médico hasta las décadas de 1950 y 1960. Por lo tanto, las enfermedades autoinmunitarias se definen cuando se produce la progresión de autoinmunidad benigna a autoinmunidad patógena. Esta progresión se determina tanto por influencias genéticas como por desencadenantes ambientales. El concepto de la autoinmunidad como la causa real de enfermedad humana (en lugar de una consecuencia o acompañamiento inofensivo) puede usarse para establecer criterios que definen una enfermedad, 45 como una enfermedad autoinmunitaria. Las enfermedades autoinmunitarias o enfermedades que se caracterizan por que implican una disfunción o desregulación inmunitaria (enfermedad inmunoinflamatoria), que puede tratarse mediante la presente invención incluyen lupus eritematoso sistémico (LES), diabetes mellitus (tipo I), asma, colitis ulcerosa, enfermedad de Grave, artritis, incluyendo artritis reumatoide y artrosis, anemia perniciosa y esclerosis múltiple, entre otras muchas. Pueden tratarse numerosas enfermedades autoinmunitarias usando el método de la presente invención incluyendo enfermedades autoinmunitarias sanguíneas, incluyendo anemia perniciosa, anemia hemolítica autoinmunitaria, anemia aplásica, púrpura trombocitopénica idiopática, espondilitis anquilosante; enfermedades autoinmunitarias de la musculatura, incluyendo polimiositis y dermatomiositis, enfermedades autoinmunitarias del oído incluyendo pérdida auditiva autoinmunitaria y síndrome de Meniere, enfermedades autoinmunitarias oculares, de incluyendo síndrome de Mooren, síndrome de Reiter y enfermedad de Vogt-Koyanagi55 Harada, enfermedades autoinmunitarias del riñón incluyendo la glomerulonefritis y nefropatía por IgA; diabetes mellitus (tipo I); enfermedades cutáneas autoinmunitarias incluyendo pénfigo (enfermedades ampollosas autoinmunitarias), tales como pénfigo vulgar, pénfigo foliáceo, pénfigo eritematoso, penfigoide ampollar, vitíligo, epidermólisis ampollosa adquirida, psoriasis y alopecia areata; enfermedades autoinmunitarias cardiovasculares, incluyendo miocarditis autoinmunitaria, vasculitis incluyendo el síndrome de Churg-Strauss, arteritis de células gigantes, enfermedad de Kawasaki, poliarteritis nodosa, arteritis de Takayasu y granulomatosis de Wegener; enfermedades autoinmunitarias endocrinas, incluyendo enfermedad de Addison, hipoparatiroidismo autoinmunitario, hipofisitis autoinmunitaria, ooforitis autoinmunitaria, orquitis autoinmunitaria, enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto, síndrome poliglandular autoinmunitario de tipo I (PAS-I), síndrome poliglandular autoinmuniario de tipo 2 (PAS-2) y síndrome poliglandular autoinmunitario de tipo 3 (PAS-3); enfermedades gastroentéricas autoinmunitarias, 65 incluyendo hepatitis autoinmunitaria, cirrosis biliar primaria, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad celiaca, enfermedad de Crohn; enfermedades nerviosas autoinmunitarias, incluyendo esclerosis múltiple, miastenia

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grave, síndrome de Guillan-Barre y neuropatía desmielinizante inflamatoria crónica; y enfermedades autoinmunitarias sistémicas, incluyendo lupus eritematoso sistémico, síndrome antifosfolipídico, enfermedad linfoproliferativa autoinmunitaria, poliendocrinopatía autoinmunitaria, enfermedad de Bechet, enfermedad de Goodpasture, artritis, incluyendo artritis reumatoide, artrosis y artritis séptica, sarcoidosis, esclerodermia y síndrome

5 de Sjogren y psoriasis, entre otras.

La expresión “rechazo de trasplante”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una afección inmunitaria en la que una célula, tejido u órgano trasplantado no es aceptado por el organismo del receptor del trasplante. La expresión rechazo de trasplante abarca el rechazo de trasplante tanto agudo como crónico.

El “rechazo agudo” o “RA” es el rechazo por parte del sistema inmunitario de un receptor de trasplante cuando el tejido trasplantado es inmunológicamente exógeno. El rechazo agudo se caracteriza por infiltración del tejido trasplantado por células inmunitarias del receptor, que llevan a cabo su función efectora y destruyen el tejido trasplantado. La aparición del rechazo agudo es rápida y sucede generalmente en los seres humanos a las pocas

15 semanas después de la cirugía del trasplante.

El “rechazo crónico de trasplante o RC” sucede generalmente en seres humanos después de varios meses a años del injerto, incluso en presencia de una inmunosupresión exitosa del rechazo agudo. La fibrosis es un factor común en el rechazo crónico de todos los tipos de trasplantes de órganos. El rechazo crónico puede describirse típicamente mediante una diversidad de trastornos específicos que son característicos del órgano concreto. Por ejemplo, en los trasplantes de pulmón, dichos trastornos incluyen destrucción fibroproliferativa de la vía respiratoria (bronquiolitis obliterante); en los trasplantes de corazón o trasplantes de tejido cardíaco, tales como los reemplazos de válvulas, dichos trastornos incluyen aterosclerosis fibrótica; en los trasplantes de riñón, dichos trastornos incluyen nefropatía obstructiva, nefroesclerosis, nefropatía túbulointersticial; y en los trasplantes de hígado, dichos trastornos incluyen

25 síndrome de la desaparición del conducto biliar. El rechazo crónico también puede estar caracterizado por una lesión isquémica, denervación del tejido trasplantado, hiperlipidemia e hipertensión asociada con los fármacos inmunosupresores.

Tal como se conoce en el campo de los trasplantes, el órgano, tejido o células trasplantados pueden ser alogénicos

o xenogénicos, de tal forma que los injertos pueden ser aloinjertos o xenoinjertos. Una característica del fenotipo tolerante a los injertos detectado o identificado mediante los presentes métodos es que es un fenotipo que aparece sin terapia inmunosupresora, es decir, está presente en un huésped que no se está sometiendo a terapia inmunosupresora, de tal forma que no se están administrando agentes inmunosupresores al huésped. El injerto de trasplante puede ser cualquier órgano sólido y trasplante de piel. Los ejemplos de trasplantes de órganos que

35 pueden analizarse mediante los métodos descritos en el presente documento incluyen, pero sin limitación, trasplante de riñón, trasplante de páncreas, trasplante de hígado, trasplante de corazón, trasplante de pulmón, trasplante intestinal, trasplante de páncreas después de riñón y trasplante simultáneo de páncreas-riñón.

Los métodos de acuerdo con la presente invención también son adecuados para la prevención y/o tratamiento de la función del injerto retrasada (FIR) debido a lesión por isquemia-reperfusión. La expresión “función del injerto retrasada”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una forma de fallo renal agudo que da como resultado oliguria postrasplante, inmunogenicidad aumentada del aloinjerto y riesgo de episodios de rechazo agudo y supervivencia reducida a largo plazo. La FIR puede estar causada por diferentes factores relacionados con el donante y factores del trasplante pre-renales, renales o post-renales relacionados con el receptor. Sin embargo, una

45 causa importante de la función retrasada del injerto es la isquemia y la restitución del flujo sanguíneo en riñones dañados isquémicamente después de su conservación hipotérmica.

La expresión “enfermedad de injerto contra huésped” o EICH, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una afección que aparece cuando las células T presentes en el tejido donante atacan al huésped o receptor de las células o tejido injertado. Puede tratarse cualquier tipo de EICH mediante los agentes terapéuticos de la presente invención, incluyendo EICH aguda y EICH crónica.

La expresión “enfermedad de hipersensibilidad” se refiere a una afección en la que el sujeto tiene una sensibilidad anormal a un agente inocuo, conocido como alérgeno. La enfermedad de hipersensibilidad puede caracterizarse en

55 cuatro tipos, tipo I, tipo II, tipo III y tipo IV. El tipo I se describe como atópico o anafiláctico, que es el resultado de la liberación de mediadores de basófilos y mastocitos sensibilizados a IgE. El tipo II se describe como citotóxico, lo que implica anticuerpo de fijación a complemento con lisis celular o citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo. El tipo III se describe como mediado por complejo inmunitario, que se asocia con complejos de antígeno-anticuerpo solubles. El tipo IV se describe como mediado por células o hipersensibilidad retrasada que es el resultado de la liberación de linfocinas por linfocitos T sensibilizados después del contacto con un antígeno.

La prevención y/o tratamiento de una enfermedad inmunológica se logra mediante el aumento de las poblaciones de células dendríticas y/o células T reguladoras tolerogénicas.

65 Se entiende que la expresión “aumentar la población de células dendríticas tolerogénicas” significa que la administración de una isoforma de C4BP que carece de la cadena beta produce un aumento en el número de

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células dendríticas maduras. La capacidad de la variante para promover la generación de células dendríticas tolerogénicas puede determinarse, por ejemplo, midiendo los niveles de expresión en las células dendríticas de marcadores de maduración, tales como CD83, CD14 y/o CD1a de células dendríticas que se hayan madurado en presencia de la variante (ejemplos 1 y 2 de la presente invención). Por lo tanto, un péptido puede considerarse como

5 funcionalmente equivalente con la isoforma de C4BP que carece de cadena β si muestra una actividad de al menos el 100 %, al menos el 95 %, al menos el 90 %, al menos el 85 %, al menos el 80 %, al menos el 75 %, al menos el 70 %, al menos el 65 %, al menos el 60 % o al menos el 50 % de la actividad de la isoforma de C4BP que carece de β, en particular, la α7β0 o la α6β0.

10 Las variantes funcionalmente equivalentes del polipéptido CCP6 aislado (SEQ ID NO: 1) o de los polipéptidos de SEQ ID NO: 2-4 adecuadas para su uso incluyen, sin limitación:

-Péptidos resultantes de la derivatización de cualquiera de los péptidos anteriores, incluyendo derivados acilados, amidados, esterificados y similares.

15 -Péptidos resultantes de la modificación de cualquiera de los péptidos anteriores mediante sustituciones (por ejemplo, sustituciones de aminoácidos conservativas) y/o inserciones (por ejemplo, inserciones pequeñas de aminoácidos individuales o inserciones que abarcan 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 o más aminoácidos contiguos) y/o deleciones (por ejemplo, deleciones pequeñas de aminoácidos individuales o deleciones que abarcan 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20 o más aminoácidos contiguos). Por lo tanto, en determinadas realizaciones, una variante de una

20 secuencia peptídica nativa es una que difiere de una secuencia de origen natural en (i) una o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6 o más) sustituciones de aminoácidos conservativas, (ii) deleción de 1 o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6 o más) aminoácidos o (iii) una combinación de las mismas. Los aminoácidos delecionados o insertados pueden ser contiguos o no contiguos. Al producir dichos cambios, se tiene en consideración el índice hidropático de los aminoácidos ya que se

25 sabe que pueden sustituirse determinados aminoácidos por otros aminoácidos que tienen un índice o puntuación hidropática similar y dan como resultado un polipéptido con actividad biológica similar. Por ejemplo, el carácter hidropático relativo de un resto de aminoácido afecta a la estructura secundaria y terciaria del polipéptido resultante, lo que a su vez define la interacción del polipéptido con otras moléculas, tales como enzimas, sustratos, receptores, anticuerpos, antígenos y similares. Tal como se ha indicado

30 anteriormente, las sustituciones de aminoácidos se basan generalmente en la similitud relativa de los sustituyentes de la cadena lateral del aminoácido, por ejemplo, su hidrofobia, hidrofilia, carga, tamaño y similares. Las sustituciones ejemplares que tienen en consideración varias de las características anteriores se conocen bien por los expertos en la materia y se exponen a continuación en la tabla 2.

Sustituciones de aminoácidos

Resto original

Sustitución ejemplar de resto Resto original Sustitución ejemplar de resto

Ala

Gly;Ser Ile Leu;Val

Arg

Lys Leu Ile;Val

Asn

Gln;His Lys Arg

Asp

Glu Met Leu;Tyr

Cys

Ser Ser Thr

Gln

Asn Thr Ser

Glu

Asp Trp Tyr

Gly

Ala Tyr Trp

His

Asn;Gln Val Ile;Leu

Tabla 2. Sustituciones de aminoácidos 35 En una realización preferida, los péptidos se modifican reemplazando uno o más de los restos de serina por cisteína.

-Péptidos que tienen cualquiera de las secuencias anteriores pero modificadas para que incluyan cualquiera de una diversidad de grupos químicos o moléculas conocidos. Dichas modificaciones incluyen, pero sin 40 limitación, glucosilación, acetilación, acilación, ADP-ribosilación, amidación, unión covalente a polietilenglicol (por ejemplo, PEGilación), unión covalente de flavina, unión covalente de un resto hemo, unión covalente de un nucleótido o derivado de nucleótido, unión covalente de un lípido o derivado de lípido, unión covalente de fosfatidilinositol, reticulación, ciclación, formación de enlace disulfuro, desmetilación, formación de reticulaciones covalentes, formación de cistina, formación de piroglutamato, formilación, gamma

45 carboxilación, glucosilación, formación de ancla de GPI, hidroxilación, acilación, amidación, yodación, metilación, miristoilación, oxidación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, selenilación, sulfatación, ubiquitinación, modificaciones con ácidos grasos, adición de aminoácidos a proteínas mediada por ARN transferente, tal como arginilación, etc. También se incluyen los análogos de aminoácidos (incluyendo aminoácidos no naturales) y péptidos con enlaces sustituidos.

50 -Peptidomiméticos de los péptidos anteriores. Un “mimético de péptido” o “peptidomimético” se refiere a diversos tipos de clases de moléculas, en tanto que la molécula resultante imite o se asemeje a un elemento estructural secundario (o terciario localizado) deseado de un péptido. Por ejemplo, un peptidomimético es un oligómero que imita la estructura peptídica secundaria mediante el uso de isoésteres de enlaces amida y/o la

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modificación de la estructura peptídica nativa, incluyendo la extensión de cadena o la incorporación de heteroátomos; los ejemplos de estos incluyen azapéptidos, oligocarbamatos, oligoureas, beta-péptidos, gamma-péptidos, oligo(fenilenos etilenos), sulfonopéptidos vinílogos, glicinas poli-N-sustituidas (peptoides) y similares. Los expertos en la materia conocen bien métodos para diseñar y sintetizar peptidomiméticos. En

5 determinadas realizaciones, se contempla que se use un peptidomimético para superar la sensibilidad a proteasa, estabilizar la estructura secundaria y/o mejorar la biodisponibilidad en relación a un análogo de péptido CCP6 de origen natural. En determinadas realizaciones, un peptidomimético es un mimético de giro inverso, por ejemplo, un mimético de giro alfa, un mimético de giro beta, un mimético de giro beta bicíclico, un mimético de giro gamma o un mimético de giro gamma monocíclico.

Polinucleótidos, vectores y células hospedadoras

También se divulgan polinucleótidos que codifican los polipéptidos divulgados anteriormente. Por lo tanto, en otro aspecto se divulga un polinucleótido que codifica un polipéptido que comprende el dominio CCP6 de la cadena alfa

15 de C4BP o una variante funcionalmente equivalente del mismo, en el que dicho polipéptido no es la cadena alfa de C4BP de longitud completa y en el que dicho polipéptido no comprende una región de una proteína diferente de C4BP.

Se divulga un polinucleótido que codifica un péptido que tiene la secuencia seleccionada del grupo que consiste en la SEQ ID NO: 2, 3, 4 y 5 o una variante funcionalmente equivalente del mismo.

Los términos o expresiones “polinucleótido”, “ácido nucleico” y “molécula de ácido nucleico” se usan de manera intercambiable para referirse a formas poliméricas de nucleótidos de cualquier longitud. Los polinucleótidos pueden contener desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos y/o sus análogos. Los nucleótidos pueden tener una estructura

25 tridimensional y pueden llevar a cabo cualquier función, conocida o desconocida. El término “polinucleótido” incluye, por ejemplo, moléculas monocatenarias, bicatenarias y triple helicoidales, un gen o fragmento génico, exones, intrones, ARNm, ARNt, ARNr, ribozimas, ADNc, polinucleótidos recombinantes, polinucleótidos ramificados, plásmidos, vectores, ADN aislado de cualquier secuencia, ARN aislado de cualquier secuencia, sondas de ácidos nucleicos y cebadores. Además de una molécula de ácido nucleico nativa, una molécula de ácido nucleico también puede comprender moléculas de ácido nucleico modificadas. Tal como se usa en el presente documento, ARNm se refiere a un ARN que puede traducirse en una célula.

Los polinucleótidos divulgados anteriormente pueden comprender además una sola región promotora que regula la transcripción de la región que codifica los polipéptidos divulgados anteriormente siempre que dichos promotores 35 sean compatibles con las células en las que se van a expresar los polipéptidos. Los polinucleótidos que codifican los polipéptidos divulgados anteriormente pueden encontrarse aislados como tales o formando parte de vectores que permiten la propagación de dichos polinucleótidos en células hospedadoras adecuadas. Los vectores adecuados para la inserción de dichos polinucleótidos son vectores derivados de vectores de expresión en procariotas, tales como pUC18, pUC19, Bluescript y los derivados de los mismos, mp18, mp19, pBR322, pMB9, Co1E1, pCR1, RP4, fagos y vectores “lanzadera”, tales como pSA3 y pAT28, vectores de expresión en levaduras, tales como vectores del tipo de plásmidos de 2 micrómetros, plásmidos de integración, vectores YEP, plásmidos de centrómeros y similares, vectores de expresión en células de insecto, tales como vectores de la serie pAC y de pVL, vectores de expresiones en plantas, tales como las series pIBI, pEarleyGate, pAVA, pCAMBIA, pGSA, pGWB, pMDC, pMY, pORE y similares y vectores de expresión en células eucariotas, incluyendo baculovirus adecuados para transfectar

45 células de insecto usando cualquier sistema de baculovirus disponible en el comercio. Los vectores para células eucariotas incluyen preferentemente vectores víricos (adenovirus, virus asociados a adenovirus, retrovirus y en particular, lentivirus) así como vectores no víricos, tales como pSilencer 4.1-CMV (Ambion), pcDNA3, pcDNA3.1/hyg, pHMCV/Zeo, pCR3.1, pEFI/His, pIND/GS, pRc/HCMV2, pSV40/Zeo2, pTRACERHCMV, pUB6N5-His, pVAX1, pZeoSV2, pCI, pSVL and PKSV-10, pBPV-1, pML2d y pTDT1.

Los vectores también pueden comprender un gen indicador o marcador que permite identificar aquellas células que han incorporado el vector después de haberse puesto en contacto con estas. Los genes indicadores útiles incluyen lacZ, luciferasa, timidina cinasa, GFP y similar. Los genes marcadores útiles incluyen, por ejemplo, el gen de resistencia a neomicina, que confieren resistencia al aminoglucósido G418; el gen de higromicina fosfotransferasa, 55 que confiere resistencia a higromicina; el gen ODC, que confiere resistencia al inhibidor de ornitina descarboxilasa (2-(difluorometil)-DL-ornitina (DFMO); el gen de dihidrofolato reductasa, que confiere resistencia al metotrexato; el gen de puromicina-N-acetil transferasa, que confiere resistencia a la puromicina; el gen ble, que confiere resistencia a la zeocina, el gen de adenosina desaminasa, que confiere resistencia a 9-beta-D-xinofuranosa adenina; el gen de citosina desaminasa, que permite a las células crecer en presencia de N-(fosfonoacetil)-L-aspartato; timidina cinasa, que permite a las células crecer en presencia de aminopterina; el gen de xantina-guanina fosforibosiltransferasa, que permite a las células crecer en presencia de xantina y en ausencia de guanina; el gen trpB de E. coli, que permite a las células crecer en presencia de indol en lugar de triptófano; el gen hisD de E. coli, que permite a las células usar histidinol en lugar de histidina. El gen de selección se incorpora en un plásmido que puede incluir además un promotor adecuado para la expresión de dicho gen en células eucariotas (por ejemplo, los promotores CMV o 65 SV40), un sitio de inicio de la traducción optimizado (por ejemplo, un sitio que sigue las denominadas reglas de Kozak o un IRES), un sitio de poliadenilación tal como, por ejemplo, el sitio de poliadenilación o de fosfoglicerato

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CD11c-, IL-3Rαbajo; y aquellas que son CD11-IL-3Rαalto. El tratamiento con GM-CSF in vivo expande preferentemente a las CD CD11balto, CD11calto, mientras que se ha demostrado que el ligando Flt-3 expande a las CD CD11c+ IL-3Rαbajo y precursores de CD CD11c-IL-3Rαalto.

5 “Célula dendrítica tolerogénica” significa una célula dendrítica que deriva de una célula dendrítica inmadura expuesta a un estímulo de diferenciación que puede ser una combinación de citocinas, hormonas, vitaminas y otros agentes biológicos mediante la cual la célula dendrítica adquiere la capacidad de inducir tolerancia. Una célula dendrítica tolerogénica tiene baja capacidad para activar a células T efectoras pero una alta capacidad para inducir y activar células T reguladoras. Puede observarse una células dendrítica tolerogénica como una célula resistente a la maduración que actúa como “una CD inmadura” con un fenotipo estable que se conserva, incluso en presencia de señales proinflamatorias.

En una primera etapa, el método para obtener una población de células dendríticas tolerogénicas comprende incubar una población de precursores de células dendríticas en condiciones adecuadas para la formación de una

15 población de células dendríticas inmaduras.

La expresión “precursor de célula dendrítica”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier célula capaz de diferenciarse en una célula dendrítica inmadura en presencia de una citocina adecuada (específicamente, G-CSF, GM-CSF, TNF-a, IL-4, IL-13, SCF (ligando de c-kit), ligando de Flt-3 o una combinación de los mismos) y es preferentemente una célula que puede diferenciarse en una célula dendrítica inmadura en cuatro semanas o menos, más preferentemente en 20 días o menos, aún más preferentemente en 18 días o menos y aún más preferentemente en 16 días o menos. Los ejemplos de precursores de células dendríticas incluyen, pero sin limitación, precursores de células dendríticas mieloides, precursores de células dendríticas linfoides y precursores de células dendríticas plasmacitoides. Los marcadores fenotípicos superficiales expresados por varios

25 subconjuntos de precursores de células dendríticas se conocen bien en la técnica y pueden usarse con el fin de identificación, por ejemplo, mediante citometría de flujo o usando técnicas inmunohistoquímicas.

En una realización preferida, la población de precursores de células dendríticas es una población de precursores de células dendríticas monocíticas. Los “precursores de células dendríticas monocíticas”, tal como se usan en el presente documento, comprenden monocitos que tienen el receptor de GM-CSF en su superficie y otras células precursoras mieloides que responden a GM-CSF. Las células pueden obtenerse de cualquier tejido en donde residan, en particular tejidos linfoides, tales como el bazo, la médula ósea, los nódulos linfáticos y el timo. Los precursores de células dendríticas monocíticas también pueden aislarse del sistema circulatorio. La sangre periférica es una fuente fácilmente accesible de precursores de células dendríticas monocíticas. La sangre de cordón umbilical

35 es otra fuente de precursores de células dendríticas monocíticas.

Los precursores de células dendríticas monocíticas pueden obtenerse a partir de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) que pueden obtenerse de sangre completa diluida 1:1 con suero salino tamponado o de concentrados de leucocitos (fracciones de “capa leucocitaria”, Banco de Sangre MSKCC) mediante centrifugación estándar con Ficoll-Paque PLUS (sin endotoxinas, n.º 17-1440-03, Amersham Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Suecia). Los precursores de Mo-CD son PBMC adherentes a plástico de cultivo tisular (n.º 35-3003; Falcon, Becton-Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ) y pueden cultivarse en RPMI 1640 completo más suero humano normal (SHN) al 1 % en presencia de GM-CSF (1000 UI/ml) e IL-4 (500 UI/ml) con rellenado cada 2 días tal como se ha descrito. (Thurner B. et al., 1999, J. Immunol. Meth.; 223:1-15 y Ratzinger G. et al., 2004, J. Immunol. 173:2780

45 2791). En general, los precursores de células monocíticas pueden identificarse mediante la expresión de marcadores, tales como CD13 y CD33. Los precursores de células mieloides pueden diferenciarse en células dendríticas mediante las vías de CD14 o de CD1a. Por consiguiente, un precursor de célula dendrítica puede ser un precursor de célula dendrítica CD14+CD1a-o un precursor de célula dendrítica CD14-CD1a-. En determinadas realizaciones, un precursor de célula dendrítica mieloide puede caracterizarse por un fenotipo CD34+CD33+CD7-CD10-. En una realización preferida, el precursor de célula dendrítica mieloide es un monocito CD14+. El monocito CD14+ también puede expresar el receptor de GM-CSF.

Los precursores de células dendríticas que se están usando como material de partida para el método divulgado anteriormente pueden ser autólogos para el sujeto que se va a tratar. En otras realizaciones, las células dendríticas

55 que se están usando como material para los métodos divulgados anteriormente son células dendríticas heterólogas. Por ejemplo, si se va a tratar la enfermedad de injerto contra huésped, las células dendríticas que se van a usar como material de partida son células dendríticas que se obtuvieron del donante. El sujeto puede ser, por ejemplo, un ratón, una rata, un perro, un pollo, un caballo, una cabra, un burro o un primate. Más preferentemente, el sujeto es un ser humano.

La expresión “condiciones adecuadas para la formación de una población de células dendríticas inmaduras”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a condiciones que dan como resultado la diferenciación de los precursores de células dendríticas en células precursoras inmaduras. Las condiciones adecuadas incluyen, por ejemplo, el cultivo durante aproximadamente tres días en presencia de SCF (50 ng/ml), GM-CSF (500 U/ml) y TNF-a 65 (50 ng/ml) seguido de cultivo en presencia de CSF (50 ng/ml), GM-CSF (500 U/ml), IL-4 (250 U/ml) y TNF-α (50

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semisólido, por ejemplo, que contiene agar, metilcelulosa, etc. La población celular puede suspenderse de manera conveniente en un medio nutriente adecuado, tal como DMEM, HBSS, dPBS, RPMI de Iscove, medio Iscove, DMEM

o RPMI-1640 y similares, normalmente complementados con suero de ternero fetal (aproximadamente un 5-10 %), L-glutamina, un tiol, particularmente 2-mercaptoetanol y antibióticos, por ejemplo, penicilina y estreptomicina.

5 Opcionalmente, pueden usarse técnicas convencionales, tales como observación morfológica y tinción inmunoquímica, para verificar la presencia de células dendríticas. Por ejemplo, puede evaluarse la pureza de las células dendríticas mediante citometría de flujo usando anticuerpos marcados con fluorocromo dirigidos contra uno o más de los marcadores de la superficie celular característicos.

En determinadas realizaciones, se divulgan métodos para producir células dendríticas tolerogénicas específicas de antígeno. Para generar células dendríticas tolerogénicas específicas de antígeno, se somete a las células dendríticas a un método tal como se ha divulgado anteriormente para inhibir la maduración de las células dendríticas y posteriormente o de manera concurrente, se ponen en contacto las células dendríticas con uno o más antígenos

15 contra los que se desea la tolerancia. Si se van a usar células dendríticas tolerogénicas para tratar una enfermedad autoinmunitaria, el antígeno o antígenos son los antígenos que cansan la reacción inmunitaria que subyace a la enfermedad inmunitaria. En determinadas realizaciones más específicas, las células dendríticas tolerogénicas (es decir, células dendríticas cuya maduración se ha inhibido mediante un método tal como se ha divulgado anteriormente) se ponen en contacto con una diversidad de antígenos diferentes para producir una población de células dendríticas tolerogénicas específicas de antígeno. En otras realizaciones, por ejemplo, si las células dendríticas tolerogénicas se van a usar para tratar la enfermedad de injerto contrahuésped, las células dendríticas tolerogénicas (es decir, células dendríticas cuya maduración se ha inhibidor mediante un método tal como se divulga anteriormente) se ponen en contacto con tejido del injerto, en el que el tejido está en complejo con o unido a anticuerpo para producir una población de células dendríticas tolerogénicas específicas para antígenos del injerto.

25 En determinadas realizaciones, las células dendríticas tolerogénicas específicas de antígeno pueden generarse (a) poniendo en contacto una célula dendrítica inmadura con una isoforma de C4BP que carece de la cadena beta, un polipéptido tal como se ha divulgado anteriormente, un péptido tal como se ha divulgado anteriormente, un polinucleótido tal como se ha divulgado anteriormente o un vector tal como se ha divulgado anteriormente y (b) exponiendo a la célula a un antígeno, en el que el antígeno es el antígeno contra el que se desea tolerancia, por ejemplo, un autoantígeno. En una realización específica, las etapas (a) y (b) se llevan a cabo secuencialmente, de tal forma que la etapa (a) se lleva a cabo en primer lugar seguido de la etapa (b). Las células dendríticas tolerogénicas específicas de antígeno también pueden cargarse con antígeno para su presentación transduciendo las células con ARN que codifica el antígeno (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos n.º 6.387.701; la

35 Patente de Estados Unidos n.º 6.670.186; la Solicitud de Estados Unidos n.º 10/362.715). Los métodos divulgados anteriormente también pueden combinarse con otros métodos conocidos en la técnica para proporcionar ventajas adicionales (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos n.º 5.831.068; la Solicitud de Estados Unidos n.º 11/246.387).

En algunas realizaciones, las células dendríticas tolerogénicas se usan para producir células T reguladoras (véase, por ejemplo, la Solicitud de Patente de Estados Unidos n.º 10/661.804). En resumen, pueden producirse células T reguladoras a partir de una población que comprende células T CD4+ y/o células T CD8+. Estas poblaciones de células T pueden aislarse de un sujeto o pueden cultivarse. También pueden usarse subpoblaciones de células T, tales como, por ejemplo, poblaciones clasificadas según los marcadores superficiales para que comprendan

45 poblaciones enriquecidas de células particulares (por ejemplo, células T CD4+CD25+ o células T CD4+CD25-). Entonces las células T se cultivan o incuban con células dendríticas tolerogénicas. Si las células T reguladoras se producen in vitro, las células dendríticas tolerogénicas pueden ser alogénicas para o singénicas con las células T. En algunas realizaciones, las CD tolerogénicas se cargan con antígeno (por ejemplo, se pulsan con antígeno o se transfectan con ARN que codifica el antígeno). En dichas realizaciones, las CD tolerogénicas pueden presentar el antígeno a células T. Durante la producción de células T reguladoras, pueden exponerse las células T a y/o cultivarse con las CD tolerogénicas una vez o más de una vez. Por ejemplo, pueden cultivarse las células T con CD durante días o semanas; las CD en el cultivo mixto pueden rellenarse en caso necesario. En algunas realizaciones, el cultivo continuará hasta que se haya obtenido una cantidad terapéutica de células T reguladoras. Pueden usarse otras técnicas de cultivo y/o aditivos para mejorar los resultados obtenidos; por ejemplo, el medio de cultivo también

55 puede contener citocinas, tales como IL-2.

En general, las células T reguladoras secretan IL-10 y/o TGF-beta (véase, por ejemplo, Walsh et al., 2004, J. Clin. Invest. 114: 1398-1403); se conocen en la técnica ensayos para confirmar la secreción de estas citocinas. En algunas realizaciones, las células T reguladoras inhibirán una reacción de linfocitos mixtos en al menos un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 75 %, 90 %, 95 % o 100 %. Los ensayos de reacción de linfocitos mixtos se conocen bien en la técnica. Las células T reguladoras pueden ser específicas de antígeno. Las células T reguladoras CD4+ CD25+ expresan generalmente marcadores de la superficie celular característicos, incluyendo CD4, CD25 y Foxp3; se conocen bien en la técnica ensayos para marcadores de la superficie celular.

65 Células dendríticas tolerogénicas obtenidas usando isoformas de C4BP que carecen de la cadena β y usos terapéuticos de las mismas

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En otro aspecto, se divulgan células dendríticas tolerogénicas obtenidas diferenciando y/o madurando células dendríticas en presencia de una isoforma de C4BP que carece de la cadena β, un polipéptido que comprende la cadena alfa de C4BP, un péptido tal como se ha definido anteriormente, un polinucleótido que codifica cualquiera de

5 dichos polipéptidos o un vector que comprende dicho polipéptido.

Las células dendríticas tolerogénicas se caracterizan por que muestran una o más de las siguientes características:

-La célula es HLA-DR+`. El término “positiva”, cuando se aplica a un marcador dado, indica que el nivel de expresión de un marcador de la superficie celular particular en una CD tolerogénica producida mediante un método tal como se ha divulgado anteriormente es sustancialmente el mismo que en una célula de control adecuada (por ejemplo, una CD inmunoestimuladora madura nativa, o una CD inmunoestimuladora nativa obtenida mediante maduración in vitro).

-La célula es CD80-, CD83-, CD86-, CD1a-, CCR7-, IDO-y/o BIC-1-. El término “negativa”, cuando se aplica a

15 un marcador dado, indica que el nivel de expresión de un marcador de la superficie celular específico en una CD tolerogénica producida mediante un método tal como se ha divulgado anteriormente se reduce en un 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% o 100% o es indetectable en comparación con el nivel de expresión del mismo marcador de la superficie celular en una célula de control adecuada (por ejemplo, una CD inmunoestimuladora madura nativa, o una CD inmunoestimuladora nativa obtenida mediante maduración in vitro). -La célula no secreta o secreta cantidades reducidas de citocinas inflamatorias, tales como IL-12p70, TNF-α, IFN-γ, IL-8 y/o IL-6 con respecto a las células dendríticas maduras. La expresión “cantidades reducidas”, cuando se aplica a una citocina dada, indica que el nivel de expresión de una citocina dada en una CD tolerogénica producida mediante un método tal como se ha divulgado anteriormente se reduce en un 10 %,

25 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% o 100% o es indetectable en comparación con el nivel de expresión del mismo marcador de la superficie celular en una célula de control adecuada (por ejemplo, una CD inmunoestimuladora madura nativa, o una CD inmunoestimuladora nativa obtenida mediante maduración in vitro). -La célula secreta cantidades aumentadas de IL-10 con respecto a las células dendríticas maduras. La expresión “secreta cantidades aumentadas”, cuando se aplica a una citocina dada, indica que el nivel de secreción de una citocina particular en un a CD tolerogénica producida mediante un método tal como se ha divulgado anteriormente está aumentada en un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % en comparación con el nivel de secreción del mismo marcador de la superficie celular en una célula de control adecuada (por ejemplo, una CD inmunoestimuladora madura

35 nativa, o una CD inmunoestimuladora nativa obtenida mediante maduración in vitro). -La célula muestra una morfología redondeada. La expresión “morfología redondeada”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una morfología en la que las células muestran una serie de proyecciones que sobresalen de la superficie celular que está reducida en un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % o es indetectable en comparación con el número de proyecciones en una célula de control adecuada (por ejemplo, una CD inmunoestimuladora madura nativa, o una CD inmunoestimuladora nativa obtenida mediante maduración in vitro). La morfología de una célula puede determinarse, por ejemplo, mediante microscopía electrónica de barrido, tal como se describe en el ejemplo 4 de la presente invención. -La célula permanece viable después del proceso de diferenciación/maduración. El término “viable”, tal como

45 se usa en el presente documento, se refiere a poblaciones en las que menos del 50 %, menos del 40 %, menos del 30 %, menos del 20 %, menos del 10 %, menos del 5 %, menos del 4 %, menos del 3 %, menos del 2 % o menos del 1 % sufren apoptosis después del tratamiento con un estímulo de maduración. La apoptosis puede determinarse mediante cualquier método conocido comúnmente en la técnica, tal como tinción de anexina V/7-ADD, ensayo de activación de caspasa-3, ensayo TUNEL y de fragmentación de ADN, determinación del potencial de membrana mitocondrial y similares. -La célula muestra un comportamiento quimiotáctico reducido hacia CCL21 con respecto a las células dendríticas maduras. La expresión “comportamiento quimiotáctico reducido”, tal como se usa en el presente documento, indica que el nivel de quimiotaxis de una célula producida mediante un método tal como se ha divulgado anteriormente hacia CCL21 en una CD tolerogénica está aumentado en un 10 %, 20 %, 30 %,

55 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % o es indetectable en comparación con el nivel de quimiotaxis hacia la misma citocina en una célula de control adecuada (por ejemplo, una CD inmunoestimuladora madura nativa, o una CD inmunoestimuladora nativa obtenida mediante maduración in vitro). El comportamiento quimiotáctico de una célula dendrítica tolerogénica hacia CCL21 puede determinarse, por ejemplo, tal como se describe en el ejemplo 5 de la presente invención y/o

-La célula muestra una capacidad reducida para inhibir la proliferación de células T alogénicas con respecto a las células dendríticas maduras. La expresión “capacidad reducida para inhibir la proliferación de células T alogénicas”, tal como se usa en el presente documento, indica que el nivel de proliferación de las células T alogénicas puestas en contacto con una célula producida mediante un método tal como se ha divulgado anteriormente está reducido en un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 97 %, 65 98 %, 99 % o 100 % o es indetectable, en comparación con el nivel de proliferación observado en células T alogénicas puestas en contacto con una célula de control adecuada (por ejemplo, una CD

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Los autores de la presente invención también han descubierto que el factor H es capaz de inhibir la activación de células dendríticas y de promover la adquisición de rasgos característicos de células tolerogénicas. Tal como se muestra en los ejemplos 9 a 15 de la presente invención, el factor H es capaz de regular negativamente marcadores de activación de Mo-CD humanas y la liberación de citocinas inflamatorias por Mo-CD maduradas con LPS.

5 Además, el factor H modifica la morfología de las Mo-CD humanas, reduce el potencial endocítico de las CD inmaduras, reduce la quimiotaxis de Mo-CD humanas y la proliferación de células T alogénicas en respuesta a la exposición a células dendríticas.

Además, los autores de la presente invención han descubierto que el factor H genera células dendríticas tolerogénicas que tienen una capacidad estimuladora de células T reducida y la capacidad no solo de prevenir la diferenciación de Th1 en condiciones proinflamatorias, sino también de generar células T reguladoras.

Por lo tanto, en otro aspecto, se divulga una composición de materia seleccionada del grupo que consiste en

15 (i) Factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo,

(ii) Un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo y

(iii) Un vector que comprende un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo

para su uso en la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad inmunológica.

Por lo tanto, en otro aspecto, se divulga el uso de una composición de materia seleccionada del grupo que consiste en

25 (i) Factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo,

(ii) Un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo y

(iii) Un vector que comprende un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo

para la fabricación de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad inmunológica

En otro aspecto, se divulga un método para la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad inmunológica en un sujeto que lo necesite que comprende la administración a dicho sujeto de una composición de materia seleccionada del grupo de:

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(i)

Factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo,

(ii)

Un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo y

(iii) Un vector que comprende un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo.

En otro aspecto, se divulga un método para aumentar las poblaciones de células dendríticas tolerogénicas y/o de células T reguladoras en un sujeto que lo necesite que comprende la administración a dicho sujeto de una composición de materia seleccionada del grupo de:

45 (i) Factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo,

(ii) Un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo y

(iii) Un vector que comprende un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo.

En otro aspecto, se divulga una composición de materia seleccionada del grupo que consiste en:

(i)

Factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo,

(ii)

Un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente equivalente del mismo y

(iii) Un vector que comprende un polinucleótido que codifica un factor H o una variante funcionalmente 55 equivalente del mismo

para su uso en el aumento de poblaciones de células dendríticas tolerogénicas y/o de células T reguladoras.

La expresión “factor H”, tal como se usa en el presente documento se refiere a una glucoproteína de 155 kDa que se encuentra en el plasma humano a una concentración de aproximadamente 550 μg/ml y que comprende 20 CCP dispuestos de cabeza a cola, de los cuales los cuatro CCP N-terminales contienen la actividad reguladora de complemento y los dos CCP C-terminales median la unión a la superficie y el reconocimiento de la diana. El factor H regula la activación del complemento en células propias al poseer actividad tanto de cofactor para la escisión de C3b mediada por factor I como actividad aceleradora de la descomposición contra la convertasa C3 de la vía alternativa, 65 C3bBb. El factor H protege a las células propias de la activación del complemento pero no a bacterias/virus, en tanto

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