ES2544869B2 - Derivados de piridazin-3(2H)-ona inhibidores selectivos de la isoforma B de la monoaminooxidasa - Google Patents

Abstract

Esta invención se refiere a derivados de piridazin-3(2H)-ona de estructura general I, II y III, que son inhibidores selectivos de la MAO-B, y a su uso para preparar medicamentos destinados a tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO-B, en particular trastornos degenerativos del sistema nervioso central (SNC), como la enfermedad de Parkinson (EP), la enfermedad de Alzheimer (EA) y otras demencias. Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 4, 5 ó 6 a través de una cadena alquílica de longitud variable (n = 1, 2, 3). Esta invención también se dirige a la preparación de dichos compuestos.

Description

Derivados de piridazin-3(2H)-ona inhibidores selectivos de la iso forma B de la monoaminooxidasa Sector de la técnica

5 Esta invención se refiere a nuevos compuestos derivados de piridazinona sustituidos en C4, C5 o C6 con fragmentos de ditiocarbamato y de estructura general 1, 11 Y 111, respectivamente, que son inhibidores selecti vos de la MAO-B, y a su uso para preparar medicamentos destinados a tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAOB, en particular trastornos degenerativos del sistema nervioso central (SNC), como la

10 enfennedad de Pakinson (EP), la enfennedad de Alzheimer (EA) y otras demencias. Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 4, 5 o 6 a través de una cadena alquílica de longitud variable. A continuación se detallan las fónnulas estructurales generales de las 3 series de compuestos, estructuras 1, Il YIU.

Estado de la técnica

Las monoaminooxidasas (MAO) son flavoen zimas presentes en la membrana externa de

20 las mitocondrias de las células del SNC y de tejidos periféricos, en donde cataJizan la desaminación oxidativa de aminas endógenas o exógenas para originar los aldehídos correspondientes, amoniaco y H202. Se conocen dos isoenzimas de la MAO, denominadas MAO-A y MAO-B, que comparten aproximadamente el 70% de la secuencia de aminoácidos y que se diferencian por su estructura tridimensional, por la

25 selectividad de sustrato, y por la existencia de inhibidores selectivos (Proc. Nall. Acad. Sci. U.S.A 105,5739-5744,2008; J. 8iol. Chem. 280(16), 15761-15766,2005). Ambas

isoenzimas desempeñan un papel importante en la regulación de la concentración de aminas biógenas en el cerebro; éste hecho junto con la selectividad de sustrato detennina la importancia clínica de los inhibidores de MAO (IMAO). Así, la MAO-A tiene mayor afinidad por la serotonina (5-·hídroxitnptamina, 5-HT), adrenalina (A) y

5 noradrenalina (NA) y es inhibida selectivamente por la clorgílína y moclobemida, mientras que la MAO-B degrada preferentemente la (l-feniletilamina y la bencilamina.y es inhibida selectivamente por la selegilina y rasagilina. También existen algunos IMAO que carecen de selectividad, como la iproniacida. En la figura l se detalla la estructura de los compuestos IMAO citados antenoOnnente.

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Figura 1

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EstudioOs funcioOnales sobre ambas isoenzimas han puesto de manifiesto que las MAO desempeñan un papel importante en la regulación de la concentración de aminas 15 biógenas en el cerebro, que están invoOlucradas en distintoOs procesos patológicos que afectan al SNC, lo que detennina la importancia clínica de loOs IMAO (Curr. Med, Chcm. 11, 2033-2043, 2004). La inhibición de la MAO-A en el SNC potencia los niveles de noradrenalina y serotoOnina, dos neurotransmisores implicadoOs en trastoOrnos depresivos, mientras que la inhibición de la MAO-B incrementa los niveles de

20 dopamina, que en la EP se encuentran mennados, lo que explica que loOs IMAO-A se utilicen como antidepresivos y ansiolíticos y loOs IMAO-B para el tratamiento de la EP. La EA es una enfennedad neurodegenerativa progresiva que supone el tipo mas habitual de demencia senil. Aunque su etioOlogía es múltiple y compleja está asoOciada a la

acumulación de placas p-amiloides (PA) en el cerebro, que puede promover la pérdida

de neuronas colinérgicas en la corteza cerebral y en el hipocampo, lo que explica la

deficiencia cognitiva y la pérdida de memoria que se manifiesta a corto plazo en los

pacientes con la EA (Velázquez Farmacología Básica y Clinica J7 ed. Panamericana:

5

Madrid 2005,329-335). Por consiguiente, e,l tratamiento fannacológico tradicional de la

EA implica la administración de inhibidores de la acetilcolinesterasa (Rang y Dale

Farmacología 6U ed. Elsevier: Barcelona 2008, 515-516 ), enzima que degrada la

acetilcolina. Sin embargo, se han realizado estudios que evidencian un incremento de

actividad de la MAO-B en el cerebro de pacientes que sufren deterninados trastornos

10

neurodegenerativos como por ejemplo la EP o la EA (Biochem. Pharmacol. 38, 555

561, 1989) Y han surgido nuevas expectativas terapéuticas. El aumento de actividad de

la MAO-B cerebral origina un incremento de las especies reactivas de oxígeno (ROS)

que contribuyen al estrés oxidativo y a la muerte neuronal. Aunque se requieren mas

estudios para clarificar los efectos bene:ficiosos de los IMAO-B en los procesos

15

neurodegenerativos, como la EA, dichos ef(!ctos se relacionan con la reducción de ROS,

que son neurotóxicas, y con el incremento de monoaminas en el cerebro de estos

pacientes (Neurotoxicology 25, 271-277, 2.004; Journal o/ Neuroscience Research 79,

172-179,2005)

En la actualidad la principal aplicación tera.péutica de los IMAO-B es en el tratamiento

2.0

de la EP (Translational Neurodegeneration 1: 10, 2012; Translational

Neurodegeneration 2.:19, 2013), un trastorno neurológico que afecta a la actividad

motora y que se debe a una disminución de los niveles de dopamina en el estriado,

provocada por la muerte progresiva de neuronas nigroestriadas. Aunque el tratamiento

clásico de la EP ha sido la administración de L-dopa (precusor de la dopamina) asociada

25

a un inhibidor de la enzima dopa descarboxilasa periférica, alternativas terapéuticas más

recientes implican la administración de inhibidores de la catecol-orto-metiltrasferasa

(COMT), como la entecapona, y también de IMAO-B selectivos, como la selegilina y la

rasagilina (Translational Neurodegeneration 1: IO, 2012).

Existen numerosos artículos y patentes que describen compuestos que actúan como

30

inhibidores selectivos de la MAO-B y sus aplicaciones en trastornos

neurodegenerativos, como por ejemplo derivados de cumarina (ES 2343347; J. Med.

Chem. 54,7 127-7131,2011) (compuesto 1, figura 2), y-cromonas (Bioorg. Med. Chem.

Letl. 20,2709-2712,2010; Bioorg. Med. Chem. Letl. 21, 707-709, 2011) (compuesto 2,

figura 2), pirazolinas y otros derivados de diazaheterociclos (J. Med. Chem. 48, 7113

7122,2005; Bioorg, Med Chem, Lett 20, 6479-6482, 2010; J, Med, Chem. 49,37433747, 2006; J. Med Chem. 50, 5364-537 1, 2007) (compuestos 3 y 4, figura 2), tiazolilhidrazinas (J. Med. Chem. 53, 6516-6520, 2010; Arch. Pharm. Chem. Life Sci. 346, 17-22, 2013) (compuesto S, figura 2), ditiolanotionas (W02006/089861)

(compuesto 6, figura 2), y aminas o amidi:lS derivadas de sistemas heterocíclicos (EP

1524267; WO 2004/007429; EPl524265, J. Med. Chem. 50, 922-931, 2007) (compuestos 7 y 8, figura 2).

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10 Figura 2 En la figura 2 se detalla la estructura de diversos compuestos con actividad lMAO-B. La piridazina es una diazina poco frecuente en productos naturales. Sin embargo, este heteronúcleo fonna parte de un reducido grupo de estructuras reconocidas como privilegiadas, debido a su capacidad de generar compuestos activos frente a numerosas

15 dianas, (Med. Chem. Comull. 2, 935-941, 201 1). Los derivados de piridazina poseen un

amplio espectro de actividad farma.cológica (cardiotónica, antihipertensiva, antiagregante plaquetaria, hipolipemiante, analgésica y antiinflamatoria, antinociceptiva, antidepresiva, ansiolítica, antagonista del GABA, hipoglucemiante, antiinfecciosa o antineoplásica entre otras) y muchos de ellos son análogos con 5 estructura de 3(2H)-piridazinona (Progress in Medicinal Chemistry, Elsevier Science Publishers Biomedical Division: Amsterdam 1990, 1-49; Progress in Medicinal Chemistry. Elsevier Science Publishers Bi'omedical Division: Amsterdam 1992, 141

183; Med. Chem. Res 22, 2539-2552, 2013).

El anillo de piridazina está presente en compuestos que actúan como inhibidores 10 selectivos de la MAO-B, se trata de sistemas policíclicos condensados (J. Med. Chem.

49,3743-3747,2006; J. Med Chem. 50, 5364-5371,2007; J. Med. ehem. 49,62646272, 2007) (compuesto 4, figura 2). Además, existen artículos y patentes referidos a

derivados de piridazina sencillos que actúan sobre otras dianas terapéuticas eficaces en trastornos neurodegenerativos, como por ejemplo agonistas del receptor GABAA (WO

15 2012/068161; WO 2010/127968) (compuesto 9, figura 3), agonistas del receptor cannabinoide CB2 (WO 2011/097553) (compuesto 10, figura 3), activadores de la proteína transportadora del glutamato (WO 2013/019938) (compuesto 11, figura 3),

moduladores la y-secretasa (Med. Chem. Lel!. 1, 184-1 87,2010; Bioorg. Med Chem.

Lett. 21, 4016-4019, 2011) (compuesto 12, figura 3), o inhibidores de la

20 oligomerización de la proteína tau (Biochemistry, 48, 7732-7745, 2009) (compuesto 13, figura 3), algunos de los cuales son derivados de 3-(2H)-piridazinona (compuestos 10,

12 Y 13).

Sin embargo, no se conocen derivados de 3(2H)-piridazinona que actúen como IMAOB selectivos.

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Figura 3 Los compuestos de la presente mvención carecen de relación estructural con los

5 descritos hasta el momento y se comportaron como inhibidores selectivos frente a la MAO-R Se trata de nuevos derivados de 3(2H)-piridazinona sustituidos en las posiciones 4, 5 o 6 con fragmentos de ditiocarbamato, enlazados a dichas posiciones a través de una cadena alquílica de longitud variable, que inhiben selectivamente la actividad de la MAO-B cuando se evalúa in vi/ro su bioactividad.

Descripción de la invención

La presente invención se refiere a nuevos compuestos derivados de piridazinona sustituidos en C4, e5 o C6 con fragmentos de ditiocarbamato y de estructura general 1,

15 11 Y 1II, respectivamente, que son inhibido res selectivos jn vUro de la MAO-B, y a su posible uso para preparar medicamentos destinados a tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO-B, en particular t.rastornos degenerativos del sistema nervioso central (SNC), como la enfennedad de Pakinson (EP), la enfennedad de Alzheimer (EA) y otras demencias.

20 Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 6 a través de una cadena alquílica de longitud variable y de fónnula general 1.

En donde, n es un número entero seleccionado de 1, 2,3, 4,5,6,7,8;

R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo CI-C6, un grupo carboxialquilo CI-C6, un grupo haloalquilo CI-C6, un grupo arilo C6-CI2, un grupo aralquilo C6-CI2, un grupo heteroarilo C4-CI2; RI es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo CI -C6, un

átomo de halógeno, R2

es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo CI -C6, un

átomo de halógeno, R4

RJ , idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo CI-C6, grupo heterocicloalquilo saturado CI-C6, un grupo arilo C6-CI2, un grupo aralquilo C6-CI2, un grupo heteroarilo C4-CI2.

RJ

O bien y R4 fonnan un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo Cs-Cs, un

heterocicloalquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-alquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Ca N-arilo sustituido, un heterocicloalquilo C~-Ca Ncicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Ca N-aralquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Ca N-acilo sustituido.

y preferentemente Res e HJ. fenilo (Ph) o bencilo (Bn). R' es H, halogeno (el, Br, 1) o una cadena alquílica R' es hidrógeno (H) o metilo (eH,). n es opcionalmente 1, 2 o 3.

R3 Y R4 pueden ser hidrógeno, grupos alquilo idénticos o distintos como metilo (CHJ) o etilo (CH2CH3) o junto con el átomo de nitrógeno (N) pueden constituir un anillo heterociclico de 5 o 6 miembros, que es ali fático o que incorpora un átomo de oxígeno

(O) o un segundo átomo de N. Este segundo átomo de N puede estar sustituido con un

grupo alquilo lineal (eH" eH,eH,) o cielico (cielopropilo), o con un grupo arilo (Ph),

aralquilo (Bn) o aroilo (benzoilo, Bz).

En un aspecto particular los compuestos dl~ fónnula general l están representados por

las fórmulas la,-a33 (tabla 1), Ib,-b33 (tabla 11), 1c,-c33 (tabla 111) y Id,-d33 (tabla IV) en

donde R I es preferentemente H.

Tabla I

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Tabla II

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Tabla 111

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1c32

1e33

Tabla IV

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Id, Idn

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Id,

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Id.

r-\ -N N-Rn '---'

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r-\ -N N-Ik '---'

Id u Idn Id.u

Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 5 a través de una cadena alquilica de longitud variable y de f6nn ul a general JI.

En donde,

n es un número entero seleccionado de 1,2, 3, 4, S, 6, 7, 8;

R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Cl-C6, un

S

grupo earboxialquilo C1-C6, un grupo haloalquilo Cl-C6, un grupo arilo C6-C12, un

grupo aralquilo Có-C12. un grupo heteroarilo C4-C12;

R¡ es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C¡ -Có,

un

átomo de halógeno,

R2

es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C¡-CÓ' un

10

átomo de halógeno,

R3 ,

R4 idénticos O diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo

alquilo C¡-Có,

grupo heterocicloalquilo saturado Cl-Có, un grupo arilo Có-C¡2, un

grupo aralquilo Có-C¡2, un grupo heteroarilo C4-C¡2.

O bien

R3 y R4 forman un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo CS-Cg. un

15

heterocicloalquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-alquilo sustituido, un

heterocicloalquilo Cs-Cs N-arilo sustituido, cicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo heterocicloalquilo Cs-Cs N-acilo sustituido.

y preferentemente

20 R es CH" fenilo (Ph) o beneilo (Bn). RI es H, halogeno (el, Br, 1) o una cadena alquílica R' es hidrógeno (H). n es opcionalmente 1, 2 o 3.

un heterocicloalquilo Cs-Cs NCs-Cs N-aralquilo sustituido, un

R3 Y R4pueden ser hidrógeno, grupos alquilo idénticos o distintos como metilo (CH3) o 25 etilo (CH2CH3) o junto con el átomo de nitrógeoo (N) pueden constituir un anillo heterocíclico de S O 6 miembros, que es ali fátíco o que incorpora un átomo de oxigeno

(O) o un segundo átomo de N. Este segundo átomo de N puede estar sustituido con un grupo alquilo lineal (CH" CH,CH, ) o eícli,co (eiclopropilo), o con un ¡¡rupo arilo (Ph), aralquilo (Bn) o aroilo (benzoilo, Bz).

En un aspecto particular los compuestos de fónnula general TI están representados por las fórmulas 1181-833 (tabla V), IIbl-b33 (tabla VI), IIcl-c)) (tabla VII) en donde R I Y R2 son preferentemente H,

Tabla V

lIa13

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Tabla VI

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IIb. I1b19 IIb30

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1Ib. lIb20 I1b31

"-N N-Bn \..J

libIO lIb21 IIbn

"-N N-Bz \..J

IIbll IIlm IIb33

Tabla VII

Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 4 al través de una cadena alquilica de longitud variable y de fónnula general 111.

En donde, n es un número entero seleccionado de 1. , 2, 3,4,5,6,7,8; R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo CI-C6. un grupo carboxialquilo C¡-C6, un grupo haloalquilo CI-C6. un grupo arilo C6-C12. un grupo aralquilo C;-CI2, un grupo heteroarilo C4-C¡2; R1 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo CI-C6, un átomo de halógeno, R2 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo CI-C6, un átomo de halógeno, R3, R4 idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C¡-C6, grupo heterocicloalquilo saturado CI-C6, un grupo afilo C6-C12, un grupo aralquilo C6-C12, un grupo heteroarilo C4-C12.

R3 y R4

O bien fonnan un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-alquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-arilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs Ncicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-aralquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-acilo sustituido.

y preferentemente R es eH" fenilo (Ph) o bencilo (Bn). R1 es H, halogeno (CI, Br, 1) o una cadena alquílica R' es hidrógeno (H). n es opcionalmente 1, 2 o 3. R3 Y R4 pueden ser hidrógeno, grupos alquilo idénticos o distintos como metilo (CH3) o etilo (CH2CH3) o junto con el átomo de nitrógeno (N) pueden constituir un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros, que es alifático o que incorpora un átomo de oxígeno

(O) o un segundo átomo de N. Este seb~ndo átomo de N puede estar sustituido con un grupo alquilo lineal (CH" CH,CH,) o cíclico (ciclopropilo), o con un grupo arilo (Ph),

aralquilo (8n) o aroito (benzoilo, Bz).

En un aspecto particular los compuestos de fónnula generaJ 1 están representados por

las fóm1Ulas lIIa,-a33 (tabla VIlI), IIIb,-b33 (tabla IX), IIIc,-c33 (tabla X) en donde R' Y R2

son preferentemente H.

Tabla VIII

25 Tabla IX

llla u

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1\ -N o \...../

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1\-N N-<]\...../

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1\ -N N-F'h \...../

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1\ -N N-Bn \...../

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Tabla X

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En otro aspecto la invención se refiere a un medicamento que comprende una molécula de fórmula (1), (11) o (IlI), como se ha descrito anteriormente, o una sal de ésta en un

soporte fannacéuticamente aceptable, con uno o más excipientes fannacéuticos aceptables. En una realización particular, dicho medicamento comprende además uno o más agentes terapéuticos adicionales.

5 Síntesis Los compuestos la-d, lIa-c y IlIa-e se podrían obtener mediante cualquier proceso químico conocido aplicable a compuestos similares. En otro aspecto la invención se refiere a un método para la síntesis de una molécula de

10 fónnula (1), (11) o (lll), como se han descrito anterionnente, caracterizado por que comprende al menos una etapa, en donde la 6(5)(4)-bromoalquil-3(2H)-piridazinona de fórmula (IV), (IX) o (XIII), una amina s<cundaria de fórmula V y disulfuro de caroono (CS2) reaccionan en presencia de base en un disolvente a temperatura ambiente. Los compuestos Ia-d de fónnula gencml I se obtuvieron mediante una reacción

15 multicomponcnte entre las 6-bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fónnula IV, una amina secundaria de fónnula V y disulfuro de carbono (CS2) en presencia de fosfato potásico anhidro (KJP04) como ejemplo de base, en dimetilfonnamida (DMF) como ejemplo de disolvente y a temperatura ambiente (t.a.), tal y como se muestra en el esquema 1.

20 Esquema 1

' " "

-

s , /

K~PO~ ..

DM F.t.L o § ,,( Y '"

~

,-, s

/ I

,

En donde R, Rl, R2, RJ, R4 Y n son como se han descrito anterionnente para los compuestos de fónnula 1.

25 El CS2 y las aminas de fónnula V son compuestos comerciales, mientras que las 6bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fónnula IV se pueden obtener a partir de las 6hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas de fónn ula VI, en donde R, R 1, R2 Y n son como se han descrito anterionnente, por bromación con tetrabromuro de carbono (CBr4) y trifenilfosfina (PPh3) o con N-bromosuccinimida (NBS) y PPhJ, adecuando

30 procedimientos estándar (J. Hererocyclic Clzem. 36, 985-990, 1999; Tefrahedron 50, 13575-13682, 1994).

Los precursores de estructura VI se pueden preparar en dos etapas (esquema 2) a partir de las 5-(terc-butildifenilsililoxialquil)-5-hidroxi(metoxi)-5H-furan-2-onas de estructura VII, en donde R 1, R2 Y n son como se han descrito anterionnente, y de manera similar a la descrita en la bibliografia (Bioorg. Med. Chem. Lell. 20, 6624-6627, 2010; Magn. 5 Reson. Chem., 49, 437-442, 2011). Una ;primera reacción de las furanonas VII con metilhidrazina (CHJNHNH2), fenilhidrazina (PhNHNH2) o bencilhidrazina (BnNHNH2) en etanol (EtOH), proporciona las 6-(terc-butildifenilsi1iloxialquil)-3(2H)-piridazinonas de estructura VIII, en donde R, R1, R2 Y n son como se han descrito anterionnente, que se transfonnan en las 6-hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas VI por reacción con fluoruro

10 de tetrabutilamonio (TBAF) en tetrahidrofurano (THF). Esquema 2

' ,

OTBDPS

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o 1. C~I_ TBAI' ..

):i- =M

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ETOH /, n T11F.t s.

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01-1 (OCH» \'11

° °

I

\'lll

15 Las furanonas de estructura VII se pueden preparar a partir de los correspondientes 2alquilfuranos por oxidación con oxígeno singlete, de manera análoga a la descrita en la bibliografia (Tetrahedron Lell. 45,5207-5209, 2004; Bioorg. Med. Chem. Lell. 20, 6624-6627,2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437-442,2011). Los compuestos I1a-c de fónnula general II se obtuvieron mediante una reacción

20 muIticomponente entre las 5-bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fónnula IX, una ami na secundaria de fónnula V y disulfuro de carbono (CSü en presencia de fosfato potásico anhidro (K3P04), en dimetilfonnamida (DMF) y a temperatura ambiente (t.a.), tal y como se muestra en el esquema 3. Esquema 3

/ "

R' B,

s~'"'R'

K P0 _

J4

R' S

o

• CS1 T /' o

" "', DMF, 1. a.

,-, R'

,/ IX V / 11

25 R R4

En donde R, Rl, R2, RJ, Y n son como se han descrito anterionnente para los compuestos de fónnu(a n.

El CS2 y las aminas de fónnula V son compuestos comerciales, mientras que las 5bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fónnula IX se pueden obtener a partir de las 5hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas de fónnula X, en donde R, R 1, R2 Y n son como se han descrito anterionnente, por bromación con tetrabromuro de carbono (CBr4) y

5 trifenilfosfina (PPh3) O con N-bromosuccinimida (NBS) y PPh3, adecuando procedimientos estándar (J. Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50, 13575-13682, 1994). Los precursores de estructura X se pueden preparar en dos etapas (esquema 4) a partir de las 4-(terc-butildifenilsililoxialquil)-5-hídroxi-5H-furan-2-onas de estructura XI, en

10 donde R 1, R2 Y n son como se han descrito anterionnente, y de manera similar a la descrita en la bibliografia (Bioorg. Med. ehem. Lell. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437-442, 2011). Una primera reacción de las furanonas XI con metilhidrazina (CH3NHNH2), fenilhidrazina (PhNHNH2) o bencilhidrazina (BnNHNH2) en etanol (EtOH), proporciona las 5-(terc-butildifenilsililoxialquil)-3(2H)-piridazinonas

15 de estructura XII, en donde R, R1, R2 Y n son como se han descrito anterionnente, que se transfonnan en las 5-hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas X por reacción con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) en tetrahidrofurano (THF).

Esquema 4

' n_>om~s •

1<"" RNHNHl _

)::); EtOII . ret1uJo O O

ON 20 XI

o

'~ ~:~D"TMF . OX:

}-TIIF.t a

N-N N-N

X

¡ XII ¡

Las furanonas de estructura XI se pueden preparar a partir de los correspondientes 3alquilfuranos por oxidación con oxígeno singlete, de manera análoga a la descrita en la bibliografia (Tetrahedron Lell. 45, 5207-:5209, 2004; Bioorg. Med. ehem. Lell. 20, 6624-6627,2010; Magn. Reson. e hem., 49, 437-442, 2011).

25 Los compuestos IlIa-c de fónnula general III se obtuvieron mediante una reacción multicomponente entre las 4-bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fónnula XlII, una amina secundaria dc fónnula V y disulfuro de carbono (CS2) en presencia de fosfato potásico anhidro (K3P04), en dimetilfonnamida (DMF) ya temperatura ambiente (t.a.), tal y como se muestra en el esquema 5.

R' ~ /

R''N~S:O

HN/' K ¡P04 • O R2

DMF. t... N-N

".. N-Nj

XIII v R

R3 R4

¡ / 111

En donde R, R1, R2, , Y n son como se han descrito anterionnente para los compuestos de f6nnula 111. El CS2 y las ami nas de fónnula V son compuestos comerciales, mientras que las 4

5 bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fónnu la XIII se pueden obtener a partir de las 4hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas de fónnula XIV, en donde R, R1• R2 Y n son como se han descrito anteriormente, por bromación con tetrabromuro de carhono (CBr4) y trifenilfosfina (PPh3) o con N-bromosuccinimida (NBS) y PPhl, adecuando procedimientos estándar (1. Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50,

10 13575-13682, 1994). Los precursores de estructura XIV se pueden preparar en dos etapas (esquema 6) a partir de las 3-(terc-butildifenilsililoxialquil)-5-hidroxi-5H-furan-2-onas de estructura XV, en donde R1, R2 Y n son como se han descrito anterionnente, y de manera similar a la descrita en la bibliografia (Bioorg. Med. e hem. Letl. 20, 6624-6627, 201 0; Magn.

15 Reson. Chem., 49, 437-442, 2011). Una 'primera reacción de las furanonas XV con metilhidrazina (CH3NHNH2), fenilhidrazina (PhNHNH2) o bencilhidrazina (BnNHNH2) en etanol (EtOH), proporciona las 5-(terc-butildifenilsililoxialquil)-3(2H)-piridazinonas de estructura XVI, en donde R, R1, R2 Y n son como se han descrito anterionnente, que se transfonnan en las 5-hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas XIV por reacción con

20 fluoruro dc tctrabutilamonio (TBAF) en tetrahidrofurano (THF). Esquema 6

"""'O~R'..

TOA' • "" ..

:-V

THF.1. J .

==< lí

O~V);;:

N-N}

OH

/ XIV

xv

Las furanonas de estructura XV se pueden preparar a partir de los correspondientes 325 alquilfuranos por oxidación con oxigeno singlete, de manera análoga a la descrita en la

bibliografia (Tetrahedron Lell. 45,5207-5209, 2004;

Bioorg. Med. Chem. Lell. 20,

6624-6627,2010; Magn. Reson. Chem. , 49, 437-442, 2011).

Los compuestos de fórmula la-d, I1 a-c y JlIIa-c inhiben selectivamente la isofonna B

de la MAO y pueden

ser utilizados para preparar medicamentos destinados a tratar

5

trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO-B, como trastornos degenerativos

del

sistema nervioso centraJ (SNC), como la enfermedad de Pakinson (EP), la

enfermedad de Alzheimer (EA) y otras demencias.

AlbTUnos compuestos representativos de fónnu)a !a-d, lIa-c y I1 la-c a los que se refiere

la presente invención son los Sil:"TUientes.

IO

a) N,N-dietilditiocarbamato de t,4-dimetil-6-oxo-1 ,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo

(Id,).

b)

Pirrolidinl-ilcarboditioato de 1,4-dimetil-6-oxo-I,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo

(Id,).

e)

Piperidin-I -ilcarboditioato de I,4-dimetil-6-oxo-1 ,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo

15

(Id.).

d)

Morfolin-4-ilcarboditioato de 1,4-dimetil-6-oxo-I .6-dihidropirid azin-3-ilrnetilo

(lds).

e)

4-benzoilpiperazin-l-ilcarboditioato de 1.4-dimetil-6-oxo-I ,6-dihidropiridazin

3-ilmetilo (ldl1).

20

t) Piperidin-I -ilcarboditioato de 2-( I-metil-6-oxo-I,6-dihidropiridazin-3-il)etilo

(la 15).

g)

Pirrolidin-I -ilcarboditioato de 3-(I -meti l-6-oxo-1 ,6-dihidropirid azin-3-il)propilo

(la,,).

h)

N.N-dietilditiocarbamato de l -bencil-6-oxo-I .6-dihidropiridazin-4-ilmetilo

25

(He,).

i)

Pirrolidin-l -iJcarboditioato de ¡ bencil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-4-ilrnetilo

(11<3).

j)

Piperidinl-ilcarboditioato de ¡··benci l-6-oxo-I .6-dihidropiridazi n-4-ilrnetilo

(lIe.).

30

k) Morfolin-4-il carboditioato de l-bencil-6-oxo-I,6-dihidropirid azin-4-ilrnc:tilo

(I1 e,).

1)

4-benzoilpiperazin-I-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-I ,6-dihidropiridazin-4

ilmetilo (I1ell).

m) Pirrolidin-l-i1carboditioato

de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazi n-5-ilmetilo

(lIIe3).

n)

Morfolin-4-ilcarboditioato de 1-bencil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-5-ilmetilo

(lile,).

o) 4-benzoilpiperazin-l-i1carboditioato de l-bencil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-5ilmetilo (1IIell).

Ejemplos Los ejemplos que se aportan a continuación deberán ser considerados para una mejor comprensión de la presente invención sin que supongan una limitación de la misma. Procedimientos generales Los espectros de resonancia magnética nuclear de protón (IH RMN) son acordes en todos los casos con las estructuras pro¡puestas. Los IH RMN se registraron en los espectro fotómetros Bruker 400 DPX y Bruker ARX 400, utilizando como disolvente c1orofonno deuterado (CDCb) o metanol deuterado (CDlOD). Los desplazamientos químicos se expresan en unidades 0, en partes por millón (ppm), relativas al tetrametilsilano (TMS), las constantes de acoplamiento (J) se indican en Hertzios (Hz), y la multiplicidad como sigue: s, singlete; d, doblete; t, triplete; m, multiplete. Los espectros de masas de alta resolución (EMAR) se realizaron en un espectrómetro Bruker Microtof Focus, utilizando ionización mediante eJectrospray (ESI) o ionización por impacto electrónico (El). Las reacciones que tienen lugar en atmósfera inerte se llevaron a cabo en atmósfera de argón (Ar). Todos los reacti vos comerciales se cogieron directamente de los frascos proporcionados JXlr el proveedor y se utilizaron sin purificar. Los disolventes orgánicos se secaron mediante procedimientos estándar (Voge/'s Textbook 01 Practica! Organic Che,.,,¡slry 5fh ed. Lnngmall Scientific alld Techllical: LolldOll 1989; Perrin, D. D., Annarego, W. L. F. Purifica/ion 01 Laboratory Chemicals. 6th ed. Butterworth-Heillemall Ltd.: Oxlord 2008) y se destilaron inmediatamente antes de su uso. Se siguió la evolución de las reacciones mediante cromatografia en capa fina, utilizando para ello placas de gel de sílice (Merck 60F2S4), que se visualizaron m(:diante luz UV y se revelaron mediante una disolución que contenía 3 g de pennanganato potásico (KMn04), 20 g de carbonato JXlhisico (K2C03), 5 mL de una disolución de hidróxido sódico 5% (NaOH 5%) y

300 mL de agua (H 20). Los productos se purificaron mediante cromatografia en columna a presión sobre gel de sílice Merck (230-400 mesh).

Ejemplo I

Preparación de N,N-dietilditiocarbamal'o de J,4-dimetil-6-oxo-J,6-dihidropiridazin3-ilmetilo (Idz). A una disolución de 5-(terc-butildifenilsililoximetil)-5-hidroxi-4-metil-5H-fiuan-2ona VIId (212 mg, 0,554 mmol) en EtOH absoluto (4 mL) se le adicionó a temperatura ambiente (t.a.) una disolución de CHJNHNH2 (0,06 mL. 1, 108 mmol) en EtOH absoluto (1 mL). La mezcla de reacción se mantuvo en agitación a reflujo durante 18 horas. Finalizada la reacción, y una vez fría la disolución resultante, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice, utilizando 4::omo eluyente hexano/acetato de etilo (3: 1), obteniéndose la 6-(terc-butildifenilsililoximetil)-2,5-dimetil-3(2H)-piridazinona VIIId, (313 mg, 52%), EMAR (ESI): miz calculado para C23H"N,O,Si [M+Hl', 393,19983; encontrado 393,19928.

'H RMN (CDCI,) 8. 7,68 (m, 4H,), 7,67 (m, 6H,), 6,70 (d, IH, J~I,I Hz), 4,64 (s, 2H), 3,62 (s, 3H,), 2,34 (d, 3H, J~l.I Hz), 1,01 (s,9H).

A una disolución del compuesto VIIId, (74 mg, 0,188 mmol) en THF (4 mL) se le adicionó, a t.a. y bajo atmósfera de argón (Ar), una disolución 1 M de TBAF en THF (0,2 mL, 0,188 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo en agitación, a t.a. y bajo atmósfera de Ar, durante 15 minutos. Finalizada la reacción, se le añadieron unas gotas de una disolución saturada de NaHCOJ. se mantuvo la agitación durante 15 minutos más y a continuación se secó con Na2S04 anhidro. La suspensión resultante se filtró y el filtrado se concentró a sequedad a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente acetato

de etilo/metanol (9,5:0,5), obteniéndose la 6-hidroximetil-2,5-dimetil-3(2H) piridazinona VId, (26 mg, 86%). EMAR (El): miz calculado para C,HION,O, [Ml\ 154,0742, encontrado 154,0735. 'H RMN (CDCh) 6: 6,70 (d, IH, J~I,I Hz), 4,58 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,21 (d,3H, J~I , I Hz). A una disolución del compuesto VId, (48 mg, 0,311 mmol) en CH,Ch (8 mL) se le adicionó sucesivamente CB" (207 mg, 0,623 mmol) y PPh, (163 mg 0,623 mmol).

La mezcla de reacción se mantuvo en agitación a reflujo bajo atmósfera de Ar durante 6 horas. Finalizada la n:acción, y una Vt:L. fría la disolución resultante, se trató con una disolución saturada de NaHC03 (2 mL), se extrajo con CH2Ch (3x5 mL) y el extracto orgánico se secó con Na2S04 anhidro. La suspensión resultante se filtró y el filtrado se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente acetato de

etilo/metanol (8,5: l ,5), obteniéndose la 6-bromometil-2,5-dimetil-3(2H) piridazinona ¡Vd, (65 mg, 96%). EMAR (ESI): miz calculado para C,HIOBrN,O, 216,99710 [M+Hl" encontrado 216,99627. 'H RMN (CDCh) 6: 6,73 (m, IH), 4,37 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 2,32 (d, 3H, J ~ 1,1 Hz). A una disolución de dietilamina (8111., 0,077 mmol) en DMF (1 mL) se le adicionó

CS2 (9 ~L, 0,14 1 mmol) y K3P04 (1 6 mg, 0,077 mmol). La mt!zcla así obtenida se agitó a t.a, y bajo atmósfera de Ar durante 30 minutos. A continuación se le

adicionó una disolución del compuesto IVd, (11 mg, 0,051 mmol) en DMF (1 mL) y se mantuvo la agitación en las mismas condiciones durante 22 horas. A continuación, la mezcla de reacción se trató con H20 (0,5 mL) y se concentró a sequedad a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/Hcetato de etilo 3: 1 y 1:3) obteniéndose el

compuesto Id, (14 mg, 97%). EMAR (ESI): miz [M+Hl' calculado para C"H20N,OS" 286,10423, encontrado 286,10546. 'H RMN (CDCh) 6: 6,69 (s, IH), 4,52 (s, 2H), 4,03 (c, 2H, J ~ 7,0 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,65 (c, 2H,J~ 7,0 Hz), 2,26 (s, 3H), 1,28 (m, 6H).

Ejemplo 2

Preparación de pirroli din-J-i1ca rbodili oato de 1, 4-dimelil-6-oxo-l, 6dihidropiridazin-3-ilmetilo (ldJ). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de pirrolidina (8 IlL, 0,096 mmol), CS, (11 IlL, 0,175 mmo!) y K, PO, (20 mg, 0,096 mmol) en DM F (1 mL) con una disolución del compuesto ¡Vd, (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por

cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1 y

hexanolacetato de etilo 1 :3) obteniéndos e el compuesto hb (13 mg, 100%). EMAR

(ESI): miz calculado para C12H"N,OS" 284,08858 [M+H]+, encontrado 284,08856. 'H RMN (CDCh) 6: 6,69 (m, IH), 4,55 (s, 2H), 3,94 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,65 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 2,26 (d, 3H, J = 1, 1Hz), 2,08 (m, 2H), 1,99 (m, 2H).

Ejemplo 3

Preparación de piperidin-/-ilcarboditioato de / ,4-dimetil-6-oxo-l,6dihidropiridazin-3-ilmetilo (ld4). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de piperidina (8 ~L, 0,081 mmol), CS, (9 ~L, 0,147 mmol) y K, PO. (17 mg, 0,08 I mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IVd, (15 mg, 0,069 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por

cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1 ,

1:1,1:3 y 1:4) obteniéndose el compuesto Id< (19 mg, 95%). EMAR (ESI): miz calculado para C"H20N,OS" 298,10423 [M+Ht, encontrado 298, I 0379. 'H RMN (CDCh) 6: 6,69 (m, IH), 4,53 (s, 2H), 4,28 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,26 (d, 3H, J = 1.0 Hz), 1,70(m, 6H).

Ejemplo 4

Preparación de morfo/in-4-i/ca¡rbodjtioato de 1,4-dimetil-6-oxo-J,6dihidropiridazin-3-i/meti/o (Ids). De acuerdo con el procedimiento desclito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de morfolina (8 ~L, 0,091 mmol), CS, (10 ~L, 0,165 mmol) y

K)P04 (19 mg, 0,091 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IVd. (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sil ice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1 , 1:2, y 1:4) obteniéndose el compuesto Id.s (13 mg, 94%). EMAR (ESI): mIz

calculado para C12H" N,O,S" 300,08349 [M+H]+, encontrado 300,08357. 'H RMN (CDCI,) 6: 6,70 (m, IH), 4,54 (s, 2H), 4,33 (m, 2H), 3,96 (m, 2H), 3,77 (m, 4H), 3,72 (s, 3H), 2,27 (d, 3H, J= 1,0 Hz).

Ejemplo 5

Preparación de 4-benzoilpiperazin-J -ilcarboditioato de J .4-dimetil-6-oxo-J.6dihidropiridazin-3-ilmetilo (Id 11). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de I-benzoilpiperazina (13 mg, 0,068 mmol), CS, (8 ~L, 0,132 mmol) y K,PO. (14 mg, 0,068 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del

compuesto IVdl (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (l mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 1: 1, 1:2 y 1 :4) obteniéndose el "ompuesto Id" (18 mg, 97%). EMAR (ESI): miz calculado para C19H" N.O,S" 403,12569 [M+Hl', encontrado 403,12569. 'H RMN (CDCb) 6: 7,43 (m, 5H), 6,71 (s, IH), 4,53 (s, 2H), 4, 18 (m, 4H), 3,84 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,65 (m, 2H), 2,26 (s, 3H).

Ejemplo 6

Preparación de piperidin-l-ilcarboditioato de 2-( J-melil-6-oxo-J,6dihidropiridazin-3-il)etilo (Ials). De acuerdo con el procedimiento descrito para IVdl, se trató una disolución de 6-(2

hidroxietil)-2-metil-3(2H)-piridazinona VIa" (6 mg, 0,039 mmol) en CH,Ch (6 mL) con CBe. (26 mg, 0,078 mmol) y PPb, (20 mg 0,078 mmol). El residuo obtenido se

purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice utilizando como eluyente

cloruro de metileno/metanol (88:2) obteniéndose la 6-(2-bromoetil)-2-metil-3(2H)

piridazinona IVall (7 mg, 83%).

'H RMN (CDCb) 6: 7,14 (d, IH, J ~ 9,4 Hz), 6,90 (d, I H, J ~ 9,4 Hz), 3,76 (s, 3H),

3.64 (t, 2H, J~ 7,0 Hz), 3,14 (t, 2H,J~ 7,0 Hz).

De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de piperidina (8 ~L, 0,081 mmol), CS, (9 ~L, 0,147 mmol) y K,PO. (17 mg, 0,081 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto

IVall (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexanolacetato de etilo 3:1,

1:1 y 1:3) obteniéndose el compuesto la .. (8,5 rng, 89%). EMAR (ESI): miz calculado para CllH20NJOS2, 298,10423 [M+H]+, encontrado 298,10432.

'H RMN (CDCb) 6: 7,25 (d, IH, J ~ 9,5 Hz), 6,89 (d, IH, J ~ 9,5 Hz), 4,29 (m, 2H), 3,86 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3.59 (t, 2H, J ~ 7,4 Hz), 3,00 (t, 2H, J ~ 7,4 Hz),

1.70 (m, 6H).

Ejemplo 7 Preparación de pirrolidin-I-ilcarbodjtjoato de 2-(l-metil-6-oxo-J.6dihidropiridazin-3-il)propilo (1325).

De acuerdo con el procedimiento descrito para (Vdl, se trató una disolución de 6-(2hidroxipropil)-2-metil-3(2H)-piridazinoJOa Vla", (6 mg, 0,036 mmol) en CH,Ch (6 mL) con CBr. (30 mg, 0,096 mmol) y PPh, (30 mg 0,114 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice utilizando

como eluyente cloruro de metileno/metanol (88:2) obteniéndose la 6-(2bromopropil)-2-metil-3(2H)-piridazinon.a IVa", (7 mg, 84%). EMAR (El): miz calculado para C,H"BrN,O, 230,0055 [Ml\ encontrado 230,0057. 'H RMN (CDCJ,) ó: 7,11 (d, IH, J~ 9,6 Hz), 6,89 (d, IH, J ~ 9,6 Hz), 3,75 (s, 3H), 3,47 (t, 2H, J ~ 6,4 Hz), 2,76 (t, 2H, J ~ 7,4 Hz), 2,22 (m, 2H).

De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de pirrolidina (8 ~L, 0,096 mmol), CS, (9 ~L, 0,147 mmol) y K,PO. (17 mg, 0,081 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IVa", (9 mg, 0,039 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexanolacetato de etilo L 1,

1 :2) obteniéndose el compuesto la" (11 mg, 95%). EMAR (ESI): miz calculado para C"H20N, OS" 298,10478 [M+Hr; encontrado 298,10432.

'H RMN (CDCJ,) ó: 7,13 (d, IH, J ~ 9,5 Hz), 6,89 (d, 1 H, J ~ 9,5 Hz), 3,93 (t, 2H, J ~6,9 Hz), 3,75 (s, 3H), 3,64 (t, 2H, J ~ 6,8 Hz), 3,36 (t, 2H, J~ 7,3 Hz), 2,71 (t,2H, J ~ 7,6 Hz), 2,07 (m, 4H), 1,98 (m, 2H).

Ejemplo 8

Preparación de N.N-dietilditiocarbamato de l-bellcil-6-oxo-I,6-dihidropiridazill-4ilmetilo (11<:2).

A una disolución de 3.(terc-butildifenihililoximetil)furano (3,00 g, ~.Q2 mmol) en

MeOH seco (40 mL) se le añadió diisopropiletilarnina (7 mL, 40,20 mmol) y rosa de

bengala (15 mg) y se purgó a t.a . con 0 2 durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a -7~ oc y se irradió con una lámpara de 200 W bajo atmósfera de 0 2 durante 5 h. A continuación se dejó que alcanzara la t.a. y se eliminó el disolvente a vacío. El residuo obtenido se disolvió en CH2Cb (40 mL) y se le añadió una disolución 0,12 M de ácido oxálico (350 mL) agit.!lndose durante 30 mino La mezcla resultante se extrajo con CH2Cb (3x 1 00 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron, se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromalografia en columna sobre gel de silice (eluyente acetato de etilolhexano 1:2), aislándose una mezcla en proporción 4: I de la 4-{terc-butildifenilsililoximetil)-5hidroxi-5H-furan-2-ona XII y de la 3-{terc-butildifenilsililoximetil)-5-hidroxi-5H

furan-2-ona XV, (3,29 g, 100%). EMAR (ES!): miz calculado para C2IH,,04Si, 369,15166 [M+1]; encontrado 369,15162.

A una disolución de la mezcla de los compuestos XII y XV I (531 rng, 1,44 mmol, proporción 4: 1) en etanol absoluto (15 rol) se le adicionó dihidrocloruro de

bencilhidrazina (BnNHNH,.2HCI, 562 mg, 2,88 mmol) y Et,N (0,6 mL, 4,30

mmol). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 7 h. A continuación se eliminó el disolvente a vacío, y el residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 9: 1), aislándose la 2bcncil-4-{terc-butildifenilsililoximeti1)piridazin-3(2H)-0na XVICl (43 ms, 32%) y a continuación la 2-bencil-5-{terc-butildi fenilsililoximetil )piridazin-3{2H)-ona Xllcl

(277 mg, 53%). 2-Bencil-4-(terc-butildifenilsililoximetil)pitidazin-3(2H)-ona XV!c, EMAR (ES!): miz calculado para C" HlIN,o,Si, 455,2 1493 [M+I]; encontrado 455,21371. 'H-RMN (CDCh, o): 7,85 (d, IH, J~4,O Hz), 7,63 (m, 4H), 7,51 (m, IH), 7,36 (m, 11 H), 5,29 (s, 2H), 4,73 (d, 2H, F 1,5 Hz), 1,12 (s, 9H). 2-Bencil-5-(terc-butildifenilsililoximetil)pitidazin-3(2H)-ona XIIc, EMAR (ESI): miz calculado para C"HlIN,O,Si, 455,2 1493 [M+I]; encontrado 455,2 1473. 'H-RMN (CDCh, 6): 7,64 (m, 5H, H6), 7,37 (m, IIH), 6.96 (m, IH), 5,32 (s, 2H), 4,55 (d, 2H, J~I,5 Hz), 1,09 (s, 9H).

De acuerdo con el procedimiento descrito para Vid, se trató una disolución de la 2-bencil-5-{terc-butildifenilsililoximetil)p:iridazin-3{2H)-ona XIIcl (247 rng, 0,54

mmol) en THF (5 mL) con una disolución 1 M de TBAF en THF (0,8 mL, 0,81

mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente acetato de etilo/m etanol 98:2), obteniéndose la 2-bencil-5hidroximetilpitidazin-3(2H)-ona Xc, (102 mg, 87%). EMAR (ES!): miz calculado para CI2HI3N,o" 217,097 15 [M+I]; en""nlr.do 217,09782.

De acuerdo con el procedimiento desclito para IVdl, se trató una disolución de 2-

bencil-5-hidroximetilpitidazin-3(2H)-ona Xc, (83 mg, 0,39 mmol) en CH,CJ, (5 mL) con CB" (256 mg, 0,77 mmol) y PPIu (202 mg, 0,77 mmol). El residuo

obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente dic1orometano/metanol 99,5:0,5) obteniéndose la 2-bencil-5-bromometilpiridazin

3(2H)-ona IXc, (62 mg, 58%). EMAR (ESI): mIz calculado para C" H" BrN,O, 279,01275 [M+I]; encontrado 279,01210. 'H-RMN (CDCb,~): 7,77 (d, IH, J~I,9 Hz), 7.40 (m, 2H), 7,29 (m, 3H), 6,85 (d, 1 H, J~I,9 Hz), 5.30 (s, 2H), 4,17 (s, 2H).

De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de dietilamina (3,9 ~L, 0,037 mmol), CS, (4,1 ~L, 0,068 mmol) y K,PO. (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto IXc, (9,5 mg, 0,034 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por

cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 4: 1,

3: 1, 2:1) obteniéndose el compuesto IIc, (10,2 mg, 86%). EMAR (ESI): mIz calculado para CI7H" N,OS" 348,12043 [M+Hl'; encontrado 348,11976 'H RMN (CDCb) 6: 7,84 (m, IH), 7,43 (m, 2H), 7,32 (m, 3H), 6,91 (m, IH), 5,30 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,03 (e, 2H, J ~ 6,5 Hz), 3,76 (e, 2H, J ~ 6,5 Hz), 1,30 (m, 6H).

Ejemplo 9

Preparación de pirrolidin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin

4-ilmeli/o (llc,).

De acuerdo con el procedimiento desclito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de pirrolidina (3,2 "L, 0,038 mmol), CS, (4,1 J-lL, 0,068 mmol)

y KJ P04 (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 rnL) con una disolución del compuesto

IXc, (10 mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por

cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1,

2:1) obteniéndose el compuesto IIc, (11 ,7 mg, 97%). EMAR (ESI): miz calculado

para CI7H,.N, OS" 346,10478 [M+Hl'; encontrado 346,19423. 'H RMN (CDCb) 6: 7,83 (d, IH, J ~ 2,1 Hz), 7,40 (m, 2H), 7,29 (m, 3H), 6,89 (m, lH), 5,28 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 3,91 (t, 2H, J ~ 6,9 HZ), 3,65 (t, 2H, J ~ 6,9 Hz), 2,09 (q, 2H, J~ 6,9 Hz), 2,00 (q, 2H, J= 6,9 Hz).

Ejemplo 10

Preparación de piperidin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin

4-ilmelilo (11«).

De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución dt: piperidina (3, I ~,L, 0,031 mmol), CS2 (3,5 )J.L, 0,057 mmol)

y K,PO, (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto [XCI (10 mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 4: 1, 3:1, 2:1) obteniéndose el compuesto HC4 (9,4 mg, 90%). EMAR (ESI): miz calculado para C"H"N,OS" 360, I 2043 [M+H)'; encontrado 360, I 1968. 'H RMN (CDC,,) ó: 7,82 (d, IH, J ~ 2,3 Hz), 7,41 (m, 2H), 7,29 (m, 3H), 6,88 (m, 1H), 5,28 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,26 (m, 2H), 3,87 (m, 2H), 1,71 (m,6H). Ejemplo ¡¡

Preparación de morfolin-4-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-I,6-dilridropiridazin

4-ilmerilo (11<5).

De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de morfolina (3,4 flL, 0,039 mmol), CS, (4,4 ~L, 0,072 mmol) Y K, PO, (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto [XCI (JO mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 4:1 ,

3: 1, 2: 1) obteniéndose el compuesto HC5 (1 2 mg, 92%). EMAR (ESI): miz calculado para C17H20N,O,S" 362,09969 [M+Ht; encontrado 362,09914. 'H RM N (CDC") ó: 7,80 (d, IH, J ~ 2 Hz), 7,41 (m, 2H), 7,30 (m, 3H), 6,89 (m, IH), 5,28 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,30 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,77 (m, 4H).

Ejemplo 12

Preparación de 4-benzoilpiperazin-J-ilcarboditioato de J -bellcil-6-oxo-I,6dihidropiridazin-4-ilmetilo (lIcII).

De acuerdo con el procedimiento desclito para la obtención del compuesto ld2, se trató una disolución de benzoilpiperazi:na (7 mg, 0,038 mmol), CS2 (4,1 )J.L,O,068 mmol) y KJP04 (8 rng, 0,037 mrnol) en DMF (2 rnL) con una disolución del compuesto [XCI (JO mg, 0,035 rnmol) en DMF (2 rnL). El residuo obtenido se

purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 2:1, 1:1) obteniéndose el compuesto IICll (12 rng, 74%). EMAR (ESI): miz calculado para C"H"N,O,S" 465, 14 I 89 [M+HJ\ encontrado 465,14134. 'H RMN (CDC") ó: 7,89 (d, IH, J ~ 2,3 Hz), 7,43 (m, 7H), 7,30 (m, 3H), 6,89 (m, IH), 5,28 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,39-3,54 (m, 8H).

Ejemplo 13

Preparación de pirrolidin-I-i1carboditioato de l-bencil-6-oxo-I,6-dihidropiridazin5-ilmeli/o (lIIc3). De acuerdo con el procedimiento descrito para Vldl, se trató una disolución de la 2-bencil-4-(terc-butildifenilsililoximetil)piridazin-3(2H)-ona XVlcl (70 mg, 0,15 mmol) en THF (5 mL) con una disolución 1M de TBAF en THF (0,2 mL, 0,23 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente acetato de etiJo/metanol 98:2), obteniéndose la 2-bencil-4hidroximetilpiridazin-3(2H)-ona XIVcl (25 mg, 75%). EMAR (ESI): miz calculado para C"H"N,O" 217,09715 [M+I]; encontrado 217,09651. De acuerdo con el procedimiento desclito para IVdl, se trató una disolución de 2-bencil-4-hidroximetilpiridazin-3(2H)-ona XIVc, (29 mg, 0,13 mmo\) en CH,Ci, (5 mL) con CBr4 (90 mg, 0,27 mmol) y PPh3 (70 mg, 0,27 mmo!). El residuo obtenido se purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 6: 1) obteniéndose la 2-bencil-4-bromometilpiridazin-3(2H)ona Xlllc, (31 mg,84%). 'H RMN (CDCh).: 7,77 (d, IH, J ~ 4 Hz), 7,46-7,41 (m, 2H), 7,36-7,27 (m, 4H), 5,35 (s, 2H), 4,39 (s, 2H). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una di solución de pirrolidina (3,9 ¡>L, 0,046 mmol), CS, (4,4 ~L, 0,072 mmol) y K3P04 (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto Xlllc, (10 mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó pnr cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente diclorometano, diclorometano/metanol 98:2) obteniéndose el compuesto IIJCJ (6,6 mg, 55%). EMAR (ESI): miz calculado para CI7H20N30S2. 346,10478 [M+Ht; encontrado 346,10451.

'H RMN (CDCb) J: 7,70 (d, lH, J ~ 4, 1Hz), 7,51 (d, I H, J ~ 4,1 Hz) 7,41-4,43 (m, 2H), 7,33-7,26 (m, 3H), 5,32 (s, 2H), 4 ,54 (s, 2H), 3,90 (t, 2H, J ~ 6,7 HZ), 3,63 (1, 2H,J~6,7 Hz), 2,05 (q, 2H,J~6,7 Hz), 1,95 (q, 2H,J~6,7 Hz).

Ejemplo 14 Preparación de morfolin-4-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-I,6-dihidropiridazin5-i1meli/o (lIIc5).

De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disoludón de morfolina (7 ~L, 0,080 nunol), CS2 (1 °~L, 0,160 mmol) y

K,PO, (17 mg, 0,079 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto XlIlc. (11 mg, 0,040 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó per

cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1) obteniéndose el compuesto IlIes (14 mg, 97%).

EMAR (ESI): miz calculado para CI7H",N,O,S" 362,09969 [M+Hl\ encontrado 362,09914. 'H RMN (CDCb) 6: 7,71 (d, IH, J = 4,1 Hz), 7,47 (d, IH, J =4,1 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,34-7,26 (m, 3H), 5,31 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,38-4,23 (m, 2H), 4,113,98 (m, 2H), 3,81-3,73 (m, 4H).

Ejemplo 15 Preparación de 4-benzoilpiperazin-·/ -i1carboditioato de l-bencil-6-oxo-/,6dihidropiridazin-4-ilmetilo (1IIcII).

De acuerdo con el procedimiento desclito para la obtención del compuesto Id2, se

trató una disolución de benzoilpiperazina (11,4 mg, 0,060 mmol), CS, (7 ¡1L, 0,112 mmol) y K,PO, (13 mg, 0,060 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto Xlllc, (9 mg, 0,030 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se

purificó por cromatografia en columna sobre gel de sílice (eluyente dic1orometano, dic1orometano/metanol 99: 1) obteniéndose el compuesto IlIcII (14 mg, 100%).

EMAR (ESI): miz calculado para C"H"N,O,S" 465,14189 [M+Ht; encontrado 465, 1407 1. 'H RMN (CDCb) 6: 7,73 (d, IH, J = 4,0 Hz), 7,48 (d , 1 H, J = 4,0 Hz), 7,42 (m, 7H), 7,31 (m, 3H), 5,33 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,18 (m, 4H), 3,83 (m, 2H), 3,62 (m, 2H).

Inhibición de las MAO

Determinación de la actividad de las iso/armas de la MAO

Se detenninaron los efectos de los compuestos de fónnulas 1, 11 Y 1II sobre la actividad de la monoaminooxidasa midiendo la producción de peróxido de hidrógeno (H202), y por consiguiente la producción de resorrufina a partir de ptiramina, W1 sustrato común a las dos isoenzimas (MAO-A y MAO-B). Para ello se utilizó el reactivo Amplex® Red (Molecular Probes, Eugene, Oregon, EE.UU.) y las isofonnas de la MAO presentes en la fracción microsomal, preparada a partir de

células de insectos (BTI-TN-5B 1-4) infectadas con baculovirus recombinantes, que contienen insertos de ADNe de Mt\O-A o MAO-B humana (Sigma-Aldrich Química S.A., Alcobendas, España). La producción de H202 catalizada por las 2 isofonnas de la MAO se puede detectar al utilizar el reactivo Amplex® Red (10-acetil-3,7-dihidroxifenoxazina), una sustancia no fluorescente, altamente sensible, que reacciona con el H2Cñ en presencia de la peroxidasa del rábano picante:: para producir Wl producto fluorescente, la resorrufina. En nuestros experimentos, la actividad de la MAO fue evaluada con el método mencionado anteriormente, adaptando el procedimiento general previamente descrito (Biochem. Biophys. Res. Comm. 344, 688-695, 2006). En primer lugar, se incubaron 0,1 mi de tampón fosfato sódico (0,05 M, pH 7,4), conteniendo distintas concentraciones de los nuevos compuestos en estudio (o los inhibidores de referencia) y la cantidad de MAO-A o MAOB recombinante humana requerida para obtener en nuestras condiciones experimentales la misma velocidad de reacción en presencia de ambas isoenzimas; es decir, para oxidar en ausencia de fármacos (grupo control) 165 pmoles de p-tiramina por minuto (MAO-A: 1,1 J.lg; actividad específica: 150 runoles de p-tiramina oxidados a phidroxifenilacetaldehido por minuto por mg de proteína; MAO-B: 7,5 J.lg; actividad específica: 22 nmoles de p-tiramina transformados por minuto por mg de proteína). Dicha incubación se realizó durante 15 minutos a 37°C en placas de 96 pocillos de fondo negro y plano (MicrotestTM pi ate, BD, Franklin Lakes, NJ, EE.UU.), ya colocadas en la cámara oscura del lector de fluorescencia (ver el modelo más abajo). Después del periodo de incubación, la reacción se inició añadiendo (concentraciones finales) 200 ~M de reactivo Amplex® Red, 1 unidad (U)/ml de peroxidasa de rábano picante y 1 mM de p-tiramina como sustrato, tanto para los estudios realizados con la MAO-A como para los realizados con la MAO-B. La producción de H20 2 y, por consiguiente, de resorrufina fue cuantificada a 37°C en un lector de fluorescencia de placa (FLX800TM, Bio-Tek® Instruments, Inc., Winooski, VT, EE.UU.), detenninando la fluorescencia generada (excitación 545 run, emisión 590 nm) durante 15 minutos, un periodo en el cual el incremento de la fluorescencia fue lineal desde el principio. Simultáneamente se realizaron experimentos control sustituyendo los fármacos (compuestos de fónnulas 1, II y III o los inhibidores de referencia) por las diluciones apropiadas de los vehículos. Además, se determinó la posible capacidad de los fánnacos para modificar la fluorescencia generada en la mezcla de reacción por una inhibición no enzimática (por ejemplo, por reacción directa con el reactivo Amplex® Red), y para ello los fánnacos se añadieron a soluciones que contenían solamente el reactivo Amplex® Red en tampón fosfato sódico. Se calculó la emisión de fluorescencia específica (utilizada para obtener los resultados finales) después de sustraer la actividad de fondo, que se detenninó en viales, en los que las soluciones con las isofonnas de la MAO se sustituyeron por solución de tampón fosfato sódico.

Presentación de los datos y análisis estadístico

Salvo indicación contraria, los resultados mostrados en el texto y en las tablas están expresados como la media ± error estándar de la media (e.e.m.) de cinco experimentos. La diferencia estadísticamente significativa entre dos medias (P < 0,05 o P < 0,0 1) fue determinada por análisis de varianza de una vía (ANOV A), seguida del test de comparación múltiple de Dunnett. Para estudiar los posibles efectos de los compuestos de fórmulas 1, 11 Y 111, Y de los inhibidores de referencia, sobre la actividad enzimática de las isoformas de la MAO, se evaluó la variación de fluorescencia por unidad de tiempo (cuantificada como unidades arbitrarias de fluorescencia/minuto) e indirectamente la producción de H202; y por consiguiente, los pmoles/min de resorrufina producidos en la reacción entre el H202 Y el reactivo Amplex® Red. Para ello, se utilizaron varias concentraciones de resorrufina con la finalidad de hacer una curva estándar, siendo X = pmoles de resorrufina e Y = unidades arbitrarias de fluorescencia. Los pmoles de resorrufina producidos son equivalentes a los pmoles de p-tiramina oxidados, puesto que la estequiometría de la reacción es 1: l. En estos experimentos, la actividad IMAO de los compuestos de fórmula 1, 11 YIII Y la de los inhibidores de referencia se expresó como Clso, es decir, corno la concentración de cada compuesto necesaria para producir una disminución del valor control de la actividad cnzimática de las isoformas de la MAO de un 50%. Para determinar la CIso de cada compuesto se utilizó el programa informático OriginTM

5.0 (Microcal Software, Inc., NorthamlPton, MA, EE.UU.). Los valores de Cl50 se calcularon a partir de las ecuaciones de las rectas obtenidas por regresión lineal (método de los mínimos cuadrados) de los puntos resultantes de representar el log

de la concentración molar del compuesto estudiado (eje de abscisas) frente al porcentaje de inhibición de la actividad MAO control conseguido con dicha concentración (eje de ordenadas). Esta. regresión lineal se realizó utilizando para cada compuesto los datos obtenidos con entre 4 y 6 concentraciones capaces de inhibir entre el 20% y el 80% la actividad enzimática control de las isoenzimas de la MAO. Además, se calculó el cociente [e l,. (MAO-A)]/[e l" (MAO-B)] como indicador de la selectividad en la inhibición mostrada sobre ambas isofonnas.

Fármacos y compuestos químicos

Los fánnacos y sustancias químicas utilizadas en los experimentos fueron los compuestos de fónnulas 1, 11 Y 111, la moclobemida (gentilmente suministrada por los laboratonos Hoffinan-La Roche, Basilea, Suiza), la selegilina y el fosfato de iproniacida (adquiridos en Sigma-Aldrich, España), la sal sódica de resorrufina, el hidrocloruro de c1orgilina, el hidrocJoruro de p-tiramina, el fostato sódico y la peroxidasa de rábano picante (suministrados en el kit para el ensayo de la MAO Amplex® Red de Molecular Probes). Las diluciones apropiadas de los compuestos mencionados anterionnente se prepararon en agua Milli-Q® (Millipore Ibérica S.A., Madrid, España) todos los días antes de su uso, a partir de las siguientes soluciones stock concentradas mantenidas a -20"e: los compuestos de fónnulas 1, JI Y JlI (O, l M) en dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma-Aldrich); la selegilina, la moclobemida, la iproniacida, la resorrufina, la c1orgilina, la p-tiramina y la peroxidasa de rábano picante (0, l M) en agua MiIIi-Q®. Debido a la fotosensibilidad de algunas sustancias utili zadas (por ejemplo, el reactivo Amplex® Red), todos los experimentos fueron realizados en la oscuridad. En ninguno de los ensayos, ni el agua Milli-Q® ni el vehículo utili zado (DMSO) tuvieron un efecto fannacológico signiHcativo.

Resultados

Los wmpueslos usados para la presente invención de fónnula general ., 11 y 111 son inhibidores selectivos de la MAO-B. En la tabla XI se muestran los valores de Clso en micromoles/L ( .... M) de los compuestos detallados anterionnente (ld2, 1m, Id4, Ids, Idll, 131S, 132s, IIc2, IIc3, 1IC4, IIcs, IICII, IlIc3, IIlcs, IlIclI).

Tabla XI. Valores de Clso de loló compuestos estudiados (incluyendo inhibidores de referencia) sobre la actividad enzimálica de las isoronnas de la MAO recombinante humana y relación de selectividad para la MAO-B ([Cho (MAO-A)]/(Cho (MAO-B)]).

Compuesto

CJ,o hMAO-A (uM) CI", hMAO-B (IlM) I.S.

'd,

000 o•• -

,.,

00 o -

'<4

0.0 7,48±0,34 13,4

,.,

.0. 38,57±1,74 2,6

Idll

._ 44,53±2,00 2,2

la "

- 11 ,88±0,53 >84b ,

,,"

. 66,49±4,43 >1,5"

""

. 44,25±2,95 >2,3b

""

••0.. 9,68±0,65 10,3

o."

.. 6,71±0,45 > t5b

IIc,

.. o.. --

lIclI

.. .. --

1JIC)

.. 33,96±2,26 >2,9"

lile,

.. 24,05±1,60 .. >4,2'

lIIell

---

Clorgilina

0,00S2±0,00092' 63,41 ±1,20 0,000082

SeleRilina

68,73±4,21' 0,017±0,0019 4.043

iproniacida

6,S6±0,76 7,S4±0,36 0,87

MocJobemida

361 ,38± 19,37 - <0,36"

Cada valor de eh eR la media ± la desviación estl'mdar media de 5 experimentos (0=5). a p < 0,01 con respecto al valor correspondiente de CISO obtenido frente a la MAO-B, detenninado por el test ANOV AlDunnett.

10 b VaJor calculado considerando como CI50 frente a la MAO-A o a la MAO-B la

concentración mas alta estudiada (100 j.tM o 1 mM). *lnactivo a 1 mM (mayor concentración estudiada) ""Inactivo a l 00 ~IM (la mayor concentración ensayada). A concentraciones superiores el compuesto precipita.

15 ••• A 100 J.l.M inhibe la actividad enzimática en un 45-50%. A concentraciones superiores el compuesto precipita. IS: Índice de selectividad hMAO-B = CIso (hMAO-A)/CIso (hMAO-B)

La mayoría de los compuestos de fórnlUla general 1, II Y III detallados en la tabla 20 resultan inactivos frente a MAO-A e inhiben la MAO-B con valores de CI~o en el rango mieromolar.

Los valores CIso de los compuestos de fónnula general 1, 11 Y III frente a MAO-B resultan comparables a los presentados por algunos de los inhibidores de referencia utilizados en el estudio como por ejemplo la iproniacida (inhibidor dual MAONMAO-B) pero con Índices de selectividad MAO-B superiores.

5 Los resultados obtenidos indican que la actividad y selectividad MAO-B de los compuestos de fónnula general 1, II YlB está mas influenciada por el tipo de amina presente en el fragmento ditiocarbamato que por la posición y magnitud cadena alquílica y que por la naturaleza del sustituyente en el N de anillo piridazinónico. Por consiguiente, la incorporación al anillo de piridazinona de fragmentos de

10 ditiocaroamato enlazados a la posición 4, 5 o 6 a través de una cadena alquilica de longitud variable, que da lugar a los compuestos de fónnula general 1, 11 Y UI proporciona inhibidores selectivos de MAO-B cuya estructura resulta muy novedosa para este tipo de actividad, ya que no se conocen derivados de piridazinona que actúen como inhibidores selectivos de la isofonna B de la MAO.

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES

   1. Moléculas de fórmula (1) (Il) Y (Ill):

   S R, R, )l /R3

   S R, S N

   "

   )l /R3 \

   R,

   O " S N

   N-N I " O R, R,

   N-N

   / Il

   R /

   R

   En donde: n es un número entero seleccionado de 1,2,3, 4,5,6,7,8; R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C¡-C6, un

   10 grupo carboxialquilo C¡-C6. un grupo haloalquilo CI-C6, un grupo arilo C6-CI2, un grupo aralquilo C6-CI2, un grupo heteroarilo C4-CI2; R1

   es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C¡-C6, un átomo de halógeno, R2

   es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C¡-C6, un

   15 átomo de halógeno, R3, R4 idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C¡-C6. grupo heterocicloalquilo saturado C¡-Có, un grupo arilo Có-CI2, un grupo aralquilo CÓ-C I2, un grupo heteroarilo C4-CI2,

   R3

   O bien y R4 forman un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo es-ca. un

   20 heterocicloalquilo Cs-Cs, un heterocidoalquilo Cs-Cs N-alquilo ·sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-ari1o sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs Ncicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-aralquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Ca N-acilo sustituido;

   y sus sajes farmacéuticamente aceptables.
2. 2. Una molécula según la reivindicación 1, donde n es un número entero seleccionado de 1, 2, 3.
3. 3. Una molécula según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde R es un 5 grupo seleccionado de: metilo, feniJo o bencilo.

4. 4.

   Una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde Rl es un átomo de hidrógeno.

5. 5.

   Una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde R2 es un átomo de hidrógeno o un grupo metilo.

   10 6. Una molécula según cualquiera de :las reivindicaciones 1 a 5, donde R3 y R" forman un grupo seleccionado de la s~guiente lista:
6. 7. Una molécula según la reivindicación 1, la cuaJ se incluye en la siguiente lista:

   ~

   eH,

   #

   S (

   CH,

   o

   y'-./

   o ¡-N# o sO

   S

   ", yN

   #

   ¡-N Id"

   S

   CH,

   syO

   o

   ", S o ¡-N#

   syO

   '·l'

   CH,

   syO S

   o

   ". S

   CH, '" syO

   S

   syO

   ". S

   S)--NO

   S

   o

   <N-N

   Ph

   SL/\ o

   ;N N-< PI>

   s "------1

   o

   <N-N

   Ph~N

   I

   PI> N"",

   o

   ~/\

   PI>

   S N N--\

   "------1

   O
7. 8. Un medicamento que comprende una molécula de fónnula (1), (H) o (l1I) según cualquiera de las reivindicaciones I a 7 o una sal de ésta en un soporte fannacéuticamente aceptable, con uno o más excipientes fannacéuticos aceptables.
8. 9. Un medicamento que comprende una molécula de fónmula (1), (11) o (1Il) según la .

   reivindicación 8 que inc1uya uno o más agentes terapeuticos adicionales.
9. 10. Uso de una molécula de fónnula (1), (H) o (JII) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la preparación de un medicamento para prevenir y/o

   tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO-B, en particular trastornos degenerativos del sistema nervioso central.
10. 11. Uso según la reivindicación 10, para el prevención y/o tratamiento de trastornos degenerativos preferentemente Parkinso:n, Alzheimer, demencia senil o ataxia.

    5 12. Un método para la síntesis de una molécula de fónnula (I), (11) o (111) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 caracterizado por que comprende al menos una etapa como se describe en el esquema 1, en donde la 6(S)(4)-bromoalquil3(2H)-piridazinona de fónnula (IV), (IX) o (XIII), una amina secundaria de fónnula V y disulfuro de carbono (CS2) reaccionan en presencia de base en un disolvente a

    10 temperatura ambiente.

    ' . . Condiciones bésicas

    .../ •

    disolvente

    ' R'

    v

    Esquema 1

    15 13. Un método según la reivindicación 12, en donde el disolvente es dirnt<tilfonnarnida (DMF) y la base KJP04.