BR112018072869B1 - Compostos de s-triazina 2,4,6-trissubstituídos, seus usos, e composição farmacêutica - Google Patents

Compostos de s-triazina 2,4,6-trissubstituídos, seus usos, e composição farmacêutica Download PDF

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Abstract

A presente invenção refere-se a um composto s-triazínico 2,4,6-trissubstituído representado pela Fórmula geral (I), (I) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, profármacos ou solvatos, um método de preparo e ao uso desses compostos no preparo de fármacos para prevenir ou tratar doenças associadas com a desregulação de proteínas quinases e vimentina e vacuolização celular, além de, especificamente, fármacos para tratar ou impedir o crescimento do câncer e metástases, fibrose tecidual e aterosclerose.

Description

Campo Técnico
[001] A presente invenção se refere a um gênero de compostos 2,4,6-trissubstituídos da 1,3,5-triazina (também denominada triazina simétrica ou sim-triazina, s-triazina) ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos ou solvatos, métodos de preparo e a usos dos mesmos.
Antecedentes da Técnica
[002] Além das formas bem conhecidas de morte celular, como apoptose, necrose, autofagia e outras semelhantes, uma nova forma de morte celular, metuose, foi revelada nos últimos anos. A característica dessa forma de morte é um deslocamento do citoplasma normal por va- cúolos grandes, cheios de líquido, gerados por vesículas macropinocití- cas ou macropinossomos no interior da célula. Consequentemente, a célula perde sua capacidade metabólica e a integridade de sua membrana sem a retração celular e fragmentação nuclear associadas com apopto- se, além de significativamente diferente de necrose e autofagia (Maltese et al. Methuosis: nonapoptotic cell death associated with vacuolization of macropinosome and endosome compartments. Am J Pathol. 2014; 184 (6):1630-42). Devido ao mecanismo da metuose ser diferente daquele da apoptose celular, um fármaco que provoque a morte celular por metuose poderia superar a resistência de células tumorais a fármacos antiapoptó- ticos ou a fármacos que atuam através de outros mecanismos e, portanto, abriria um novo espaço para o desenvolvimento de terapias contra o câncer (Robinson et al. Synthesis and evaluation of indole-based chal- cones as inducers of methuosis, a novel type of nonapoptotic cell death. J Med Chem. 2012; 55 (5):1940-56; Kitambi et al. Vulnerability of glioblastoma cells to catastrophic vacuolization and death induced by a small molecule. Cell. 2014; 157(2):313-28; Trabbic et al. Synthesis and biological evaluation of indolyl-pyridinil-propenones having either methuosis or microtubule disruption activity. J Med Chem. 2015; 58 (5):2489-512).
[003] Vimentina é uma importante proteína da família dos fila mentos intermediários, expressa em células mesenquimais, incluindo células do tecido conjuntivo, muscular, endotélio vascular e sangue. A evolução altamente conservadora e a expressão dinâmica durante diferentes estágios do desenvolvimento sugerem que a vimentina é fisio- logicamente importante. Junto com os microtúbulos e os microfilamen- tos de actina, os filamentos intermediários formam o citoesqueleto. Além de ter como função melhorar a resistência mecânica das células para que sustentem o formato celular, a integridade do citoesqueleto e a distribuição espacial ordenada da estrutura subcelular, a vimentina pode também regular a função da integrina, a fim de afetar a adesão e a migração celular; colaborar com a dineína, como microtúbulos, mi- crofilamentos e os semelhantes, para afetar o transporte de vesículas através da membrana; e atuar como um arcabouço do receptor e da proteína quinase, afetando, assim, a transdução de sinais, etc. (Ivaska et al. Novel functions of vimentin in cell adhesion, migration, and signaling. Exp Cell Res. 2007; 313 (10):2050-62).
[004] A vimentina está estreitamente relacionada com o metabolis mo lipídico, tendo controle sobre o transporte do colesterol derivado de lipoproteína de baixa densidade (LDL) desde o lisossomo até locais onde é esterificado (Sarria et al. A functional role for vimentin intermediate filaments in the metabolism of lipoprotein-derived cholesterol in human SW- 13 cells. J Biol Chem. 1992 Sep 25; 267 (27):19455-63). Em vista da alta expressão da vimentina nas células do endotélio vascular e do músculo liso, definir a vimentina como alvo poderia ser uma estratégia que vale a pena tentar, visando o desenvolvimento de novos fármacos para tratar ou prevenir doenças cardiovasculares como aterosclerose. A expressão da vimentina é um marcador da transição epitélio-mesequimal (EMT). A EMT não só é um mecanismo essencial em processos fisiológicos normais, como no desenvolvimento embrionário e reparo tecidual, mas também uma rota indispensável em processos patológicos como na fibrose de órgãos e formação e progressão de tumores (Gonzalez et al. Signaling mechanisms of the epithelial-mesenchymal transition. Sci Signal. 2014; 7 (344): re8). Portanto, com uso da vimentina como alvo para interferir no processo de EMT, é possível desenvolver um novo fármaco para promover a regeneração de tecidos, inibir a degeneração de órgãos, tratar a fibrose tecidual, prevenir metástases tumorais, etc. (Davis et al. Targeting EMT in cancer: opportunities for pharmacological intervention. Trends Pharmacol Sci. 2014; 35(9): 479-88).
Sumário
[005] Como resultado de um estudo sobre a relação estrutura- atividade, a presente invenção provê um tipo específico de compostos que são altamente eficazes em causar a morte celular através de me- tuose. Partindo dessa base, um método confiável, eficaz para captura (fishing) de uma proteína-alvo com uma sonda é utilizado para separar e identificar a proteína-alvo do composto que causa morte celular por metuose, em que se verifica se a proteína-alvo é a vimentina.
[006] Portanto, a presente invenção provê um gênero de compos tos de s-trazina 2,4,6-trissubstituídos, um método de preparo e o uso desses compostos para regulação de proteína quinase e vimentina e indução de metuose celular.
[007] De acordo com a presente invenção, o composto de s- trazina 2,4,6-trissubstituído é representado pela Fórmula (I): em que:
[008] R1 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C12 alquila, C1-C6 alcoxila, C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, hidro- ximetila, aminometila;
[009] R2 é -NR4R5, em que R4 e R5 são selecionados indepen dentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila e C1-C6 haloalquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado ou insaturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico pode ser substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila, em que R6 é hidrogênio, hidroxila, C1-C6 alquila ou C1-C6 haloalquila;
[0010] R3 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C12 alquila, C1-C6 alcoxila, C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, hidro- ximetila, aminometila ou -CORa;
[0011] em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecio nados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substi- tuintes selecionados a partir de halogênio ou NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional, selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila;
[0012] em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocí- clico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S; e
[0013] X é NH ou O, ligado ao grupo fenila em posição para ou meta.
[0014] A presente invenção inclui ainda sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos ou solvatos do composto representado pela Fórmula (I).
[0015] Em uma ou mais modalidades, R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro.
[0016] Em uma ou mais modalidades, R2 é -NR4R5, em que R4 e R5 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila e C1-C6 haloalquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado ou insaturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico pode ser substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila, em que R6 é hidrogênio, hidroxila ou C1-C6 alquila.
[0017] Em uma ou mais modalidades, R2 é -NR4R5, em que R4 e R5 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel he- terocíclico pode ser substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila, em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila.
[0018] Em uma ou mais modalidades, R2 é -NR4R5, em que R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6 e O, sendo que o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de hidroxila e C1-C6 alquila, em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila.
[0019] Em uma ou mais modalidades, R3 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C6 alquila, hidroximetila, aminometila ou -CORa, em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substi- tuintes, selecionados a partir de halogênio ou NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional, selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S.
[0020] Em uma ou mais modalidades, R3 é halogênio, C1-C6 alco- xila ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O.
[0021] Em uma ou mais modalidades, X é NH, ligado ao grupo fe- nila em posição para ou meta.
[0022] Em uma ou mais modalidades, na Fórmula (I):
[0023] R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro;
[0024] R2 é -NR4R5, em que R4 e R5 são selecionados indepen dentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado ou insaturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico pode ser substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio, hidroxila ou C1-C6 alquila; e
[0025] R3 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C6 alquila, hidroximetila, aminometila ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio ou NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 al- quinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo, opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S.
[0026] Em uma ou mais modalidades, na Fórmula (I):
[0027] R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro;
[0028] R2 é -NR4R5, em que R4, R5 e o átomo de nitrogênio liga do aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6 e O, sendo que o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de hidroxila e C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila;
[0029] R3 é halogênio ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sen do que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila opcionalmente substituída com 3-(C2-C6 al- quinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O; e
[0030] X é NH, ligado ao grupo fenila em posição para ou meta.
[0031] Em algumas modalidades, de preferência:
[0032] R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro;
[0033] R2 é -NR4R5, em que R4 e R5 são selecionados indepen dentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila e C1-C6 haloalquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado ou insaturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico pode ser substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio, hidroxila ou C1-C6 alquila;
[0034] R3 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C6 alquila, hidroximetila, aminometila ou -CONR7R8, em que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila opcionalmente substituída; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N, O ou S; sendo que C1-C6 alquila pode ser opcionalmente substituída com um ou mais halogênio, C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino;
[0035] X é um NH ou O em posição para ou meta.
[0036] Em algumas modalidades, mais preferivelmente:
[0037] R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro;
[0038] R2 é -NR4R5, em que R4 e R5 são selecionados indepen dentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico pode ser substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila;
[0039] R3 é hidrogênio, halogênio, ou -CONR7R8, em que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocí- clico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um hete- roátomo adicional selecionado a partir de N, O ou S; sendo que C1-C6 alquila pode ser opcionalmente substituída com um ou mais C1-C6 al- quilamino, di-C1-C6 alquilamino;
[0040] X é NH ou O em posição para ou meta.
[0041] De preferência, o composto da Fórmula (I) acima inclui: (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazinil-2-amino)fenil)ureia (L1); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazinil-2-amino)fenil)ureia (L2); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-estirenil- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L3); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-estirenil- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L4); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(3-hidroxiazetidin-1-il)-6-estirenil- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L5); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-cloroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L6); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-cloroestire- nil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L7); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L8); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L9); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(4-cloroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L10); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(4-cloroestire- nil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L11); (E)-1-(3-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(4-cloroestire- nil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L12); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(4-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L13); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(4-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L14); (E)-1-(3-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(4-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L15); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L16); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L17); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-nitro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L18); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-nitro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L19); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-dimetilamino-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L20); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(pirrolidin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L21); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(3-hidroxiazetidin-1-il)-6-(3-nitro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L22); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5-tri- azinil-2-amino)fenil)ureia (L23); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-estirenil- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L24); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-cloroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L25); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L26); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L27); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-nitro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L28); (E)-N,N-dimetil-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida (L29); (E)-1-(4-((4-metilpiperidin-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolin- 1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L30); (E)-1-(4-((4-metilpiperazin-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolin- 1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L31); (E)-N-(2-(dimetilamino)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-esti- renil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida (L32); (E)-N-(2-(dietilamino)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-esti- renil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida (L33); (E)-N-(3-(dimetilamino)propil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6- estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida (L34); (E)-N-(2-(pirrolidin-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-es- tirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida (L35); (E)-N-(2-(piperidin-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-es- tirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida (L36); (E)-N-(2-(morfolin-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-es- tirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida (L37); (E)-1-(4-metoxifenil)-3-(4-((4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazin-2-il)oxo)fenil)ureia (L38); (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-((4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazin-2-il)oxo)fenil)ureia (L39); (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-((4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazin-2-il)oxo)fenil)ureia (L40); (E)-N-(2-(3-(1-butin-4-il)-3H-diaziridin-3-il)etil)-4-(3-(4-((4- (morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazin-2-il)amino)fenil)ureia)benzamida (79); e (E)-1-(4-carboxifenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazinil-2-amino)fenil)ureia (14).
Descrição dos Desenhos
[0042] Figura 1. Efeito inibidor in vitro de compostos em vários ti pos de células tumorais. 8 compostos com diferentes características estruturais (no 38-no 45, os quais são L20, L21, L16, L18, L14, L10, L13 e L11, respectivamente) foram escolhidos. Para células tumorais originárias de 11 tipos diferentes de fontes celulares, determinou-se a atividade do mesmo composto em células tumorais distintas e a sensibilidade do mesmo tumor a compostos de características estruturais diferentes. Para cada composto, as barras da esquerda para a direita são associadas com H522, HCT15, Hela, HepG2, HT1080, KG1, LNCap, MCF7, OVCAR3, SK-mel28 e U87, respectivamente. Os dados provêm de três conjuntos independentes de experimentos, expressos em média ± erro padrão.
[0043] Figura 2. Vacuolização de células tumorais. 100 microlitros de meio de cultura (RPMI1640, glutamina 2 mmol, soro fetal bovino 10%) contendo 103 células de adenocarcinoma do cólon humano (HCT15) ou células de glioma cerebral humano (U87) e um solvente DMSO controle ou o composto no 40 100 nM (L16) foram espalhados sobre uma placa de cultura celular de 96 cavidades, e a imagem morfológica da célula foi obtida sob um microscópio de contraste de fase depois de cultivada em CO2 5% e 37oC por 96 horas. Tanto as células HCT5 (lado superior direito) como as células U87 (lado inferior direito) tratadas com o composto no 40 100 nM mostraram vacuolização significativa.
[0044] Figura 3. A capacidade dos compostos testados para inibir o crescimento celular não se correlaciona com a sua capacidade para provocar vacuolização celular. 37 compostos (L1-L37) foram testados quanto à capacidade para inibir o crescimento e induzir a vacuolização de células de glioma humano (U87). O composto no 50 (L1) exibe a capacidade mais forte para provocar vacuolização celular.
[0045] Figura 4. Vista esquemática mostrando um fluxograma para captura de uma proteína-alvo com uma sonda. O processo de captura com a sonda compreende a ligação específica in situ do composto- sonda a uma proteína de uma célula in vivo; a ligação cruzada cova lente in situ entre o grupo fotossensível do composto-sonda e sua proteína-alvo sob irradiação UV; ligação específica do grupo alquinila do composto-sonda ao grupo azido do composto de isolamento via uma reação click; e isolamento da proteína-alvo especificamente unida ao composto-sonda com a ajuda da ligação do grupo biotina no composto de isolamento com uma microesfera de estreptavidina-agarose.
[0046] Figura 5. Composto-ferramenta para captura de uma proteí na-alvo com uma sonda. Entre os compostos testados, o composto no 50 exibe a capacidade mais forte para provocar vacuolização celular. Com base em uma análise de uma relação estrutura-atividade, a ligação de um grupo fotossensível ao composto no 50 em uma posição mostrada na figura para obter um composto-sonda no 79 pode não afetar a bioatividade do composto no 50. É também verificado por experimentação que o composto no 79 e o composto no 50 podem resultar no mesmo fenótipo celular. Para facilitar a separação em fase sólida e reduzir a não especificidade, criou-se um composto no 80 com uma cadeia longa ligando uma biotina a um grupo azido para uma reação click.
[0047] Figura 6. Separação e identificação de proteína-alvo. O composto no 79 usado como sonda é ligado in situ a uma proteína-alvo dentro de uma célula, em que uma ligação covalente fotopromovida é formada e, a seguir, reage com o composto no 80 para realizar a separação em fase sólida e purificação da proteína-alvo. A. Esquerda: Proteínas capazes de ligação específica com o composto no 79, detectadas pela técnica de Western Blotting (conforme indicado pelas setas); direita: proteínas-alvo específicas separadas por eletroforese em gel PAGE conforme indicado por coloração com azul de Coomassie. B. Conforme mostrado pelo mapeamento de segmentos de peptídeos associado à análise de sequências por MALDI-espectrometria de massa (MALDI-MS/MS), as proteínas-alvo correspondem a sequências de proteínas conhecidas no banco de dados. As partes em negrito subli- nhado são as sequências compatíveis. As duas proteínas isoladas com cerca de 60 KD e cerca de 200 KD correspondem à mesma sequência proteica conhecida. C. As informações sobre correspondência de proteínas mostram que a proteína-alvo do composto é a vimentina (SEQ ID NO:1).
[0048] Figura 7. Resultados da ancoragem (docking) entre o com posto no 50 e a proteína-alvo. A: 3KLT (número no sistema da proteína; a porção esférica no centro é a região ativa da proteína) do tetrâ- metro de vimentina originado no PDB (banco de dados de proteínas); B: Composto no 50 para o docking; C: pontuações das 10 melhores configurações do composto no 50 resultantes do docking entre 3KLT e o composto no 50 utilizando o programa Discovery Studio 3.0 e o método de docking LibDock do programa; D: vista mostrando a interação entre a configuração do composto no 50 com a pontuação mais alta (indicada pela cor púrpura) e vimentina; E: aminoácidos formando ligações de hidrogênio com o composto no 50 após a desproteinização, em que os dois aminoácidos, Arg273 e Tyr276, formam ligações de hidrogênio com o anel de triazina no composto no 50.
Descrição Detalhada
[0049] Deve ser apreciado que, no âmbito desta invenção, as vá rias características técnicas (p. ex., os vários âmbitos dos vários grupos) definidas nas modalidades descritas acimas e as várias características técnicas a serem especificamente descritas a seguir (p. ex., nos Exemplos) podem ser combinadas entre si, para que formem soluções técnicas preferidas.
[0050] Neste relatório descritivo, "alquila" se refere a C1-C12 alqui la, por exemplo, C1-C6 alquila, como metila, etila, n-propila, iso-propila, n-butila, iso-butila, terc-butila, n-amila, etc.
[0051] "Anel heterocíclico" se refere a um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S. O anel heterocíclico pode ser um anel heterocíclico saturado ou insaturado. Os anéis heterocícli- cos exemplares incluem, entre outros, por exemplo, morfolinila, pirroli- dinila, piperazinila, piperidinila, azetidinila, pirazolila, etc.
[0052] "Halogênio" inclui F, Cl, Br e I. "Carboxila" se refere a -COOH.
[0053] Em "3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila", alquinila da C2-C6 alquinila está em geral situada na posição 1. Em algumas modalidades, "3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila" é "3-(1-butin-4-il)-3H- diaziridin-3-ila".
[0054] Neste relatório descritivo, NR7R8 e NR9R10 podem ser mo- no-C1-C6 alquilamino ou di-C1-C6 alquilamino, em que C1-C6 alquila pode ser opcionalmente substituída, por exemplo, com um ou mais átomos de halogênio, mono-C1-C6 alquilamino ou di-C1-C6 alquilamino, ou por um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo N e opcionalmente N ou O adicional. Esses anéis heterocíclicos incluem, entre outros piperidinila, piperazinila, pirrolidinila, morfolinila, etc. O anel heterocíclico pode também ser opcionalmente substituído, por exemplo, com C1-C6 alquila.
[0055] Neste relatório descritivo, quando um grupo é substituído, o número dos substituintes pode ser, por exemplo, 1, 2, 3 ou 4. Em geral, a menos que especificado de outra forma, os substituintes podem ser selecionados a partir de halogênio, C1-C6 alquila, hidroxila, carboxi- la, amino, mono-C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, nitro, 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila, grupo heterocíclico (p. ex., morfolinila, pirroli- dinila, piperazinila, piperidinila, azetidinila, pirazolila, etc.), C6-C14 arila (p. ex., fenila) e os semelhantes.
[0056] Além disso, termos relacionados como "isômero", "racema to", "pró-fármaco", "solvato", usados no presente, obviamente não têm significados diferentes dos significados gerais dos referidos termos na técnica. Os técnicos no assunto devem conhecer os significados desses termos. Por exemplo, o termo "isômero" se refere a um de dois ou mais compostos com a mesma composição molecular, porém com estruturas e propriedades diferentes. O termo "racemato" se refere a uma mistura equimolar de uma molécula quiral opticamente ativa com seu enantiômero. O termo "pró-fármaco", também chamado fármaco precursor, precursor de fármaco e termos semelhantes, se refere a um composto somente exibindo ação farmacológica depois da conversão in vivo. O termo "solvato" se refere a uma mistura constituída por um solvente e um composto.
[0057] À luz da plasticidade e heterogeneidade dos tumores, vi sando uma pluralidade de vias de transdução de sinais, distintamente relacionadas com proliferação e morte de células tumorais, e integrando farmacóforos que atuam em moléculas-alvo dessas vias de sinalização, a presente invenção propõe um novo gênero de compostos, ou seja, compostos de s-triazina formados pela substituição com diaril ureia, aril vinila e anel heterocíclico saturado com nitrogênio (oxigênio), em que esse gênero de compostos possui uma estrutura da Fórmula (I) como segue: em que R1, R2, R3 e X são descritos acima.
[0058] Em algumas modalidades, R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro; mais preferivelmente H, F, Cl ou nitro.
[0059] Em várias formas da estrutura no presente, quando é um grupo diferente de hidrogênio, R1 está geralmente localizado em posição meta ou para do anel fenila.
[0060] Em algumas modalidades, R4 e R5 em R2 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila e C1-C6 haloalquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado ou insaturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico pode ser substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio, hidroxila, ou C1C6 alquila. Em algumas modalidades, R4 e R5 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1C6 alquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcional-mente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico pode ser substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila. Em algumas modalidades, R2 é - NR4R5, em que R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6 e O, sendo que o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de hidroxila e C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila. Em algumas modalidades, os anéis heterocíclicos saturados de 4 a 6 membros incluem, entre outros morfolinila, pirrolidinila, piperazinila, piperidinila, azetidinila.
[0061] Em algumas modalidades, R3 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C6 alquila, hidroximetila, aminometila ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio ou NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel he- terocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroáto- mo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S. Em algumas modalidades, R3 é halogênio, C1-C6 alcoxila ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O. Em algumas modalidades, o anel hetero- cíclico formado por R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois, e o anel heterocíclico formado por R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois incluem, entre outros piperidinila, piperazinila, pirrolidinila e morfolinila.
[0062] Em várias formas da estrutura no presente, quando é um grupo diferente de H, R3 está em geral localizado em posição meta ou para do grupo fenila.
[0063] Em algumas modalidades, X é NH, ligado ao grupo fenila em posição para ou meta. Em algumas modalidades, X é O, ligado ao grupo fenila em posição para.
[0064] Conforme descrito acima, os vários substituintes ou carac terísticas técnicas nas várias modalidades do presente podem ser combinados arbitrariamente no âmbito da estrutura da Fórmula (I). Assim, por exemplo, em algumas modalidades, na Fórmula (I), R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro; R2 é -NR4R5, em que R4 e R5 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila e C1-C6 haloalquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado ou insa- turado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico pode ser substituído com hidroxila, ha- logênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio, hidroxi- la, ou C1-C6 alquila; e R3 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxi- la, C1-C6 alquila, hidroximetila, aminometila ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio ou NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 al- quinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S. Em outras modalidades, na Fórmula (I), R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro; R2 é - NR4R5, em que R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6 e O, sendo que o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de hidroxila e C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila; R3 é halogê- nio ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O; e X é NH, ligado ao grupo fenila em posição para ou meta.
[0065] Em algumas modalidades, o composto da Fórmula (I) do presente possui uma estrutura mostrada pela Fórmula (I-1) ou Fórmula (I-2) como segue: em que:
[0066] R1 é selecionado a partir de um grupo constituído por hi drogênio, halogênio ou nitro;
[0067] R2 é selecionado a partir de um grupo constituído por mor- folinila, pirrolidinila, piperazinila, e azetidinila opcionalmente substituída com hidroxila ou C1-C6 alquila; e
[0068] R3 é halogênio ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocícli- co saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroáto- mo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel he- terocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um he- teroátomo adicional selecionado a partir de N ou O.
[0069] Em algumas modalidades da Fórmula (I-2) acima, R3 é ha- logênio.
[0070] Em algumas modalidades, o composto da Fórmula (I) do presente possui uma estrutura mostrada pela Fórmula (I-3) como segue: em que:
[0071] R1 é H;
[0072] R2 é morfolinila;
[0073] Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O.
[0074] Em algumas modalidades da Fórmula (I-1), R1 é seleciona do a partir de um grupo constituído por hidrogênio, halogênio e nitro; R2 é morfolinila; R3 é halogênio ou -CORa; em que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H- diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O. Em algumas modalidades, nesses compostos, R1 (no caso de um substituinte diferente de hidrogênio) e R3 estão localizados independentemente em posição meta ou para do grupo fenila, respectivamente. Em algumas modalidades, nesses compostos, quando é um substituinte diferente de hidrogênio, R1 está localizado em posição meta do anel fenila, e R3 está localizado em posição para do grupo fenila. Em algumas modalidades, nesses compostos, o anel heterocíclico sa- turado inclui, entre outros, piperazinila, piperidinila, pirrolidinila, morfo- linila. Em algumas modalidades, esses compostos podem ser especialmente usados para induzir a agregação de vesículas em células tu- morais, levando, assim, à morte celular por metuose.
[0075] Os compostos de s-trazina 2,4,6-trissubstituídos da inven ção podem ser sintetizados utilizando os métodos a seguir:
[0076] Esquema sintético 1: Metafenilenodiamina ou parafenileno- diamina (1) é utilizado como material de partida, do qual um grupo amino é protegido por (Boc)2O para obter o intermediário 2 que reage com um de vários tipos de isocianatos de fenila substituídos para obter o intermediário 3, do qual o grupo protetor Boc (t-butiloxicarbonila) é removido via ácido trifluoroacético para obter o intermediário 4; cloreto cianúrico (5) é reagido com brometo de metilmagnésio (CH3MgBr) para preparar o intermediário 6 que reage com um de vários tipos de ben- zaldeídos substituídos sob refluxo de ácido clorídrico concentrado para obter o intermediário 7, o qual é clorado com oxicloreto de fósforo para obter o intermediário 8; e o intermediário 8 e o intermediário 4 passam por uma reação catalisada por di-isopropiletilamina para obter o intermediário 9 que reage com uma amina heterocíclica, como morfolina ou metilpiperazina, na presença de di-isopropiletilamina para obter um composto-alvo.
[0077] As fórmulas de reação no Esquema sintético 1 são como segue: em que R1, R2, R3 são descritos acima.
[0078] Reagentes nas fórmulas de reação do esquema sintético acima: (a) uma base, de preferência carbonato de potássio, (Boc)2O, água, tetra-hidrofurano, DMF; (b) isocianato de fenila substituído, diclo- reto de metileno; (c) ácido trifluoroacético, dicloreto de metileno; (d) uma solução de brometo de metilmagnésio em tetra-hidrofurano; (e) benzaldeído substituído, ácido clorídrico concentrado; (f) oxicloreto de fósforo; (g) di-iso-propiletilamina, tetra-hidrofurano; (h) amina heterocí- clica, di-iso-propiletilamina, tetra-hidrofurano.
[0079] As fórmulas estruturais dos compostos-alvo do Esquema sintético 1 podem incluir:
[0080] Esquema sintético 2: Metafenilenodiamina ou parafenilenodi- amina (1) é utilizado como material de partida, do qual um grupo amino é protegido por (Boc)2O, para obter o intermediário 2 que reage com p- aminobenzoato de metila na presença de trifosgênio para obter o intermediário 10, do qual o grupo protetor Boc é removido via ácido trifluoroa- cético para obter o intermediário 11; cloreto cianúrico (5) é reagido com brometo de metilmagnésio para preparar o intermediário 6 que reage com um de vários tipos de benzaldeídos substituídos sob refluxo de ácido clorídrico concentrado para obter o intermediário 7, o qual é clorado com oxicloreto de fósforo para obter o intermediário 8; e o intermediário 8 e o intermediário 11 passam por uma reação catalisada por di- isopropiletilamina para obter o intermediário 12 que reage ainda com uma amina heterocíclica como morfolina ou metilpiperazina, na presença de di-isopropiletilamina, para obter o composto 13; o composto 13 é hi- drolisado na presença de hidróxido de lítio mono-hidratado e acidificado com ácido clorídrico para obter o intermediário 14, o qual finalmente sofre uma reação de condensação com uma de várias aminas na presença dos catalisadores HOBt (1-hidroxibenzotriazol), EDCl [cloridrato de 1-(3- dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida] para obter um composto-alvo.
[0081] As fórmulas de reação no Esquema sintético 2 são como segue: em que R1, R2, R3 são descritos acima.
[0082] Reagentes nas fórmulas de reação do esquema sintético acima: (a) uma base, de preferência carbonato de potássio, (Boc)2O, água, tetra-hidrofurano, DMF; (b) trifosgênio, trietilamina, p- aminobenzoato de metila, dicloreto de metileno; (c) ácido trifluoroacéti- co, dicloreto de metileno; (d) uma solução de brometo de metilmagné- sio em tetra-hidrofurano; (e) benzaldeído substituído, ácido clorídrico concentrado, refluxo por 12 horas; (f) oxicloreto de fósforo, refluxo por 16 horas; (g) di-iso-propiletilamina, tetra-hidrofurano; (h) amina hetero- cíclica, di-iso-propiletilamina, tetra-hidrofurano; (i) hidróxido de lítio mono-hidratado, tetra-hidrofurano, água, ácido clorídrico concentrado; (j) HOBt, EDCI, trietilamina, amina substituída, DMF.
[0083] A fórmula estrutural do composto-alvo do Esquema sintéti co 2 é mostrada como o exemplo seguinte:
[0084] Esquema sintético 3: cloreto cianúrico (5) é reagido com bro- meto de metilmagnésio para preparar o intermediário 6 que reage com um de vários tipos de benzaldeídos substituídos sob refluxo de ácido clorídrico concentrado para obter o intermediário 7, o qual é clorado com oxicloreto de fósforo para obter o intermediário 8; o intermediário 8 reage com sódio p-nitrofenol para obter o intermediário 15; o intermediário 15 reage com uma amina heterocíclica, como morfolina ou metil piperazina, na presença do catalisador di-isopropiletilamina para obter o composto 16. O composto 16 é reduzido em um sistema de pó de ferro e cloreto de amônio para obter o intermediário 17 que reage com um de vários tipos de isocianatos de fenila substituído para obter um composto-alvo.
[0085] As fórmulas de reação no Esquema sintético 3 são como segue: em que R1, R2, R3 são descritos acima. Em algumas modalidades, R1 é hidrogênio; grupos retiradores de elétrons como halogênio, nitro, etc; grupos doadores de elétrons como alquila, amino, hidroxila, hidroxime- tila, aminometila, aminoformil, etc; R2 é amino, alquilamino, arilamino, heteroarilamino; R3 é hidrogênio; grupos retiradores de elétrons como halogênio, nitro, etc; grupos doadores de elétrons como alquila, amino, hidroxila, hidroximetila, aminometila.
[0086] Reagentes nas fórmulas de reação do esquema sintético acima: (a) uma solução de brometo de metilmagnésio em tetra- hidrofurano; (b) benzaldeído substituído, ácido clorídrico concentrado, refluxo por 12 horas; (c) oxicloreto de fósforo, refluxo por 16 horas; (d) água, tetra-hidrofurano, sódio p-nitrofenol; (e) amina heterocíclica, di- iso-propiletilamina, tetra-hidrofurano; (f) pó de ferro, cloreto de amônio, etanol, água, refluxo por 3 horas; (g) isocianato de fenila substituído, dicloreto de metileno.
[0087] A fórmula estrutural do composto-alvo do Esquema sintéti co 3 é mostrada no exemplo a seguir:
[0088] As etapas dos processos específicos para os compostos serão descritas detalhadamente nos Exemplos.
[0089] As etapas acima podem ser modicadas pelos técnicos no assunto para aumentar os rendimentos. Os técnicos podem determinar um esquema sintético no conhecimento básico sobre o assunto, por exemplo, escolhendo reagentes, solventes e temperaturas, utilizando vários grupos protetores convencionais para evitar reações laterais para aumentar os rendimentos.
[0090] A presente invenção inclui ainda sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos ou solvatos do composto representado pela Fórmula (I). Os exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais inorgânicos e orgânicos, como sais cloridrato, sais bromidrato, sais fosfato, sais sulfato, sais citrato, sais lactato, sais tartarato, sais maleato, sais fumarato, sais mandelato e sais oxalato; e sais inorgânicos e orgânicos formados com bases como hidróxido de sódio, tri(hidroximetil)aminometano (TRIS, trometamol) e N-metil glicosamina. Os exemplos de pró-fármacos incluem ésteres simples de compostos contendo carboxila; ésteres de compostos contendo hidroxila; iminas de compostos contendo amino; uretanos de compostos contendo amino; acetais ou cetais de compostos contendo álcool.
[0091] A presente invenção inclui ainda composições farmacêuti cas de sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos ou solvatos do composto representado pela Fórmula (I). As composições farmacêuticas podem compreender ainda vários veículos farmaceuticamente aceitável, os quais convencionalmente são utilizados para preparar composições farmacêuticas. Neste relatório descritivo, "veículo farma- ceuticamente aceitável" se refere a um componente inativo, como uma carga sólida, semissólida ou líquida, um diluente, um material de revestimento, um agente auxiliar de formulação ou um excipiente, usados junto com o composto da invenção para formar uma "composição farmacêutica" a ser administrada a um indivíduo. O veículo farmaceuti- camente aceitável não é tóxico para o sujeito da administração na dose e concentração utilizadas, e é compatível com os outros componentes na formulação. O veículo farmaceuticamente aceitável é adequado para a formulação empregada. Por exemplo, caso um agente terapêutico deva ser administrado via oral, o veículo pode ser uma cápsula de gel. Caso o agente terapêutico deva ser administrado via subcutânea, o veículo, desejavelmente não é irritante para pele e não produz reação no ponto da injeção. A composição farmacêutica pode estar em qualquer forma adequada de uma formulação, como comprimido, drá- gea e cápsula.
[0092] Em geral, a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapêutica ou preventivamente eficaz de um sal farmacêutico aceitável, pró-fármaco ou solvato do composto da Fórmula (I) da invenção. Neste relatório descritivo, "quantidade eficaz" significa uma quantidade do composto, ou de seu sal farmaceuticamente aceitável, pró-fármaco ou solvato, que permite o tratamento ou prevenção eficaz no processo de tratamento ou prevenção de uma doença. A "quantidade eficaz" pode ser variada de acordo com o ingrediente ativo administrado, o modo de administração, a doença e a sua gravidade, a condição de saúde, a idade, o peso corporal, a história familiar, a constituição genética, o estágio do desenvolvimento patológico, o tipo de tratamento conduzido antes da administração e simultaneamente e outras características individuais do indivíduo a ser tratado.
[0093] Os compostos aqui descritos exibem forte efeito inibidor para uma pluralidade de células tumorais de vários tipos. Portanto, os compostos da Fórmula (I) e os compostos da Fórmulas (I-1), (I-2) e (I3) podem ser utilizados para prevenir e tratar vários tumores sólidos e tumores hematológicos, incluindo, entre outros, câncer de pulmão (p. ex., câncer de pulmão de não pequenas células), câncer de cólon, câncer cervical, câncer de fígado, fibrossarcoma, eritroleucemia, câncer de próstata, câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer de ovário, melanoma, glioma cerebral e os semelhantes.
[0094] Alguns dos compostos da invenção podem provocar a mor- te não apoptótica de células tumorais - metuose. Essa forma de morte é atribuída à ligação específica desse gênero de compostos a um filamento intermediário celular, ou seja, à vimentina. Portanto, a invenção também diz respeito ao uso dos compostos revelados para interferir em processos fisiopatológicos relacionados com a vimentina e para tratar doenças associadas com a mesma, incluindo, entre outros, transição epitélio-mesenquimal; diferenciação de células-tronco; crescimento infiltrativo, metástase, resistência a fármacos e recidiva de tumores; fibrose tecidual; doenças infecciosas e doenças cardiovasculares (p. ex., aterosclerose), etc. Em algumas modalidades, a invenção provê o uso dos compostos aqui descritos no preparo de fármacos para prevenção ou tratamento de doenças da mama associadas com desregulação da vimentina; formação, transporte e secreção de vesículas; e/ou vacuolização celular. Além disso, as doenças da mama associadas com desregulação da vimentina; formação, transporte e se-creção de vesículas; e/ou vacuolização celular incluem cânceres, doenças neurodegenerativas, fibrose tecidual e aterosclerose. E ainda mais, as doenças da mama associadas com desregulação da vimenti- na; formação, transporte e secreção de vesículas; e/ou vacuolização celular incluem vários tumores sólidos, como câncer de cólon, câncer de pâncreas, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de mama, câncer de tireoide, câncer de fígado, câncer de rim, câncer de pulmão, câncer de próstata, sarcoma, glioma, etc, e leucemia, mieloma múltiplo e os semelhantes. Em algumas modalidades, as doenças infecciosas aqui descritas incluem, entre outros doenças causadas por infecção viral, como doenças causadas por infeção pelo vírus da hepatite C, vírus da SARS, HIV e vírus da dengue, etc.
[0095] Por conseguinte, em algumas modalidades, a invenção provê o uso dos compostos mostrados pela Fórmula (I), dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos ou solvatos no preparo de fármacos para tratar ou prevenir tumores. Em algumas modalidades, a invenção provê os compostos mostrados pela Fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos ou solvatos para tratar ou prevenir tumores. Os tumores são descritos acima.
[0096] Em algumas modalidades, a invenção provê o uso dos com postos mostrados pela Fórmula (I) e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos ou solvatos no preparo de fármacos para interferir com o transporte de vesículas celulares e a sua liberação para fora das células, ou no preparo de fármacos para promover a morte celular por metuose, ou no preparo de fármacos para tratar ou prevenir doenças mediadas pela vimentina. Alternativamente, em algumas modalidades, a invenção provê os compostos mostrados pela Fórmula (I) do presente e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis, pró-fármacos ou solvatos para interferir com o transporte de vesículas celulares e a sua liberação para fora das células, promover a morte celular por metuose e para tratar ou prevenir doenças mediadas pela vimentina. Especificamente, as doenças mediadas pela vimentina incluem aquelas associadas com transição epitélio-mesenquimal; diferenciação de células- tronco; metástase, resistência a fármacos e recidiva de tumores; fibrose tecidual; e doenças cardiovasculares (p. ex., aterosclerose). E ainda mais, os tumores incluem vários tumores sólidos como câncer de cólon, câncer de pâncreas, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de mama, câncer de tireoide, câncer de fígado, câncer de rim, câncer de pulmão, câncer de próstata, sarcoma, glioma, e tumores hematológicos como leucemia, mieloma múltiplo e os semelhantes.
[0097] Em algumas modalidades, a invenção provê ainda um mé todo para tratar ou prevenir tumores, incluindo tumores sólidos e tumores hematológicos, em que o método compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto mostrado pela Fórmula (I) do presente ou de uma composição farmacêutica des- te. A invenção provê ainda um método para interferir com o transporte de vesículas celulares e a sua liberação para fora das células, promover a morte celular por metuose e para tratar ou prevenir doenças mediadas pela vimentina, em que o método compreende a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto mostrado pela Fórmula (I) ou de uma composição farmacêutica deste. Os fárma- cos podem ser administrados através de uma via adequada para alcançar o objetivo previsto. Por exemplo, os fármacos podem ser administrados pela via parenteral, subcutânea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica, bucal, intratecal, encefálica, nasal ou externa. Uma dose do fármaco pode ser determinada em vista da idade, condição de saúde, peso corporal, tratamento paralelo, frequência do tratamento de um paciente e da eficiência do tratamento desejada.
[0098] A fim de demonstrar melhor o conteúdo técnico da inven ção, a invenção será ilustrada mais detalhadamente com referência aos exemplos específicos a seguir aos quais a invenção não está limitada. Deve-se entender que os compostos da Fórmula (I), quando mencionados, incluem os compostos apresentados pelas Fórmulas (I1), (I-2) e (I-3) do presente. A menos que indicado de outra forma, os métodos e reagentes utilizados nos exemplos são métodos e reagentes convencionais na técnica.
[0099] Nos exemplos a seguir em que compostos foram sintetiza dos, um processo de trabalho convencional é a adição de uma quantidade adequada de água a um líquido de reação depois de concluída uma reação, seguida pela separação de uma fase orgânica e uma fase aquosa e a combinação de fases orgânicas provenientes de uma série de operações de separação. Se necessário, a secagem é conduzida utilizando uma solução de HCl 5% e/ou NaSO4 saturado em sequência, seguido por filtração e secagem a vácuo para obter um produto bruto que é separado e purificado por cromatografia em coluna para obter um produto final.
Exemplo 1: Síntese de L16 1) Preparo de 4-((t-butiloxicarbonil)amino)anilina (2)
[00100] p-fenilenodiamina (3,24 g, 30,0 mmol) e carbonato de potássio (1,52 g, 11,0 mmol) foram dissolvidos em 10 mL de DMF e 5 mL de água. À temperatura ambiente, uma solução de (Boc)2O (2,18 g, 10,0 mmol) em tetra-hidrofurano (30 mL) foi adicionada gota a gota, lentamente. Depois do gotejamento, a solução foi agitada à temperatura ambiente para reação por 4 horas. O líquido de reação foi despejado em 100 mL de água gelada, extraído com dicloreto de metileno (200 mL) e lavado em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente, seguido por cromatografia em coluna de sílica gel para obter 1,79 g de sólido branco com rendimento de 86%.
2) Preparo de 1-(4-clorofenil)-3-(4-((t-butiloxicarbonil)amino)fenil)ureia (3)
[00101] À temperatura ambiente, uma solução de isocianato de p- clorofenila (461 mg, 3,0 mmol) em dicloreto de metileno (5 mL) foi adicionada gota a gota, lentamente a uma solução do intermediário 2 (625 mg, 3,0 mmol) em dicloreto de metileno (10 mL), seguido por agitação à temperatura ambiente por 5 horas depois de concluído o gote- jamento. O líquido de reação foi filtrado diretamente por sucção, e a torta de filtro foi seca, obtendo-se 977 mg de sólido branco com rendimento de 90%.
3) Preparo de 1-(4-clorofenil)-3-(4-aminofenil)ureia (4)
[00102] À temperatura ambiente, uma solução de ácido trifluoroacé- tico (47 mg, 4,16 mmol) em dicloreto de metileno (5 mL) foi adicionada gota a gota, lentamente a uma solução do intermediário 3 (188 mg, 0,52 mmol) em dicloreto de metileno (10 mL), seguido por agitação à temperatura ambiente for 3 horas depois de concluído o gotejamento. O líquido de reação foi seco diretamente por evaporação rotativa, e o pH foi ajustado com carbonato de sódio saturado para enfraquecer a alcalinidade. O resultante foi extraído com acetato de etila, seguido por lavagem em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente para obter 129 mg de sólido branco com rendimento de 95%. RMN 1H (300 MHz, DMSO): δ 8,63 (s, 1H, NH); 8,16 (s, 1H, NH); 7,45 (d, 2H, J=8,8 Hz); 7,29 (d, 2H, J=8,8 Hz); 7,06 (d, 2H, J=8,6 Hz); 6,50 (d, 2H, J=8,6 Hz); 4,80 (s, 2H, -NH2).
4) 2-metil-4,6-dicloro-1,3,5-triazina (6)
[00103] Sob a proteção de gás nitrogênio a -20 °C, uma solução de brometo de metilmagnésio em éter dietílico (3 mL, 9 mmol) foi adicionada gota a gota, lentamente a uma solução de cloreto cianúrico (1,38 g, 7,5 mmol) em 8 mL de tetra-hidrofurano; depois do gotejamento, a mistura foi agitada à temperatura ambiente para reação por 2 horas e; a seguir, a reação foi interrompida e resfriada pela adição de 20 mL de cloreto de amônio saturado. O líquido de reação foi extraído duas vezes com 20 mL de acetato de etila e 20 mL de cloreto de sódio saturado; e a fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro. Depois da cromatografia em coluna de sílica gel, foram obtidos 615 mg de sólido branco com rendimento de 50%. RMN 1H (CDCl3) δ: 2,71 (s, 3H, CH3).
5) 2,4-di-hidróxi-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazina (7)
[00104] O intermediário 6 (1,60 g, 9,76 mmol) e 3-nitrobenzaldeído (1,47 g, 9,76 mmol) foram dissolvidos em 30 mL de ácido clorídrico concentrado, aquecidos até 100 °C e deixados reagir por 12 horas sob agitação. A reação foi interrompida. O líquido de reação foi resfriado até a temperatura ambiente, despejado em 60 mL de água gelada, filtrado por sucção e lavado em sequência com 10 mL de acetato de eti- la e 10 mL de água-éter de petróleo. A torta de filtro foi seca, obtendo- se 2,01 g de produto bruto branco com rendimento de 79,2%.
6) 2,4-dicloro-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazina (8)
[00105] Uma mistura líquida do intermediário 7 (960 mg, 3,69 mmol) e oxicloreto de fósforo (10 mL) foi aquecida até 140 °C e deixada reagir por 19 horas sob agitação. A reação foi interrompida. O líquido de reação foi resfriado até a temperatura ambiente e seco por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 60 mL de água gelada, extraída com 60 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente. Depois da croma- tografia em coluna de sílica-gel, foram obtidos 660 mg de sólido branco com rendimento de 60,2%.
7) 1-(4-clorofenil)-3-(4-cloro-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino) fenil)ureia (9)
[00106] Sob a proteção de gás nitrogênio, o intermediário 4 (342 mg, 1,15 mmol), o intermediário 8 (300 mg, 1,15 mmol) e di-iso- propiletilamina (149 mg, 1,15 mmol) foram dissolvidos em 50 mL de tetra-hidrofurano e deixados reagir por 5 horas à temperatura ambiente sob agitação. Depois de concluída a reação, metade do solvente foi removida por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 60 mL de água, extraída com 120 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro; o solvente foi evaporado completamente; 2 mL de etanol anidro foram adicionados, seguido por ultrassonicação por 30 segundos e filtração por sucção. A torta de filtro foi seca, obtendo-se 522 mg de produto bruto com rendimento de 86,9%.
8) 1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazi- nil-2-amino)fenil)ureia (L16)
[00107] Sob a proteção de gás nitrogênio, o intermediário 9 (270 mg, 0,52 mmol), morfolina (181 mg, 2,08 mmol) e di-isopropiletilamina (202 mg, 1,56 mmol) foram dissolvidos em 60 mL de tetra-hidrofurano e deixados reagir por 4 horas à temperatura ambiente sob agitação. Depois de concluída a reação, metade do solvente foi removida por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 100 mL de água, extraída com 100 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro; o solvente foi evaporado completamente; 1 mL de etanol anidro foi adicionado, seguido por ultrassonicação por 30 segundos e filtração por sucção. A torta de filtro foi seca, obtendo-se 206 mg de sólido amarelo claro com rendimento de 69,0%. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 9,46 (s, 1H), 9,19 (s, 1H), 8,96 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,10 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,53 -7,58 (m, 1H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,73 (m, 4H), 3,59 (m, 4H) ppm. HRMS calculado para C28H26ClN8O4 [M+H]+: 573,1760, encontrado: 573,1750.
Exemplo 2: Síntese de L31 1) Preparo de 4-((t-butiloxicarbonil)amino)anilina (2)
[00108] P-fenilenodiamina (3,24 g, 30,0 mmol) e carbonato de potássio (1,52 g, 11,0 mmol) foram dissolvidos em 10 mL de DMF e 5 mL de água. À temperatura ambiente, uma solução de (Boc)2O (2,18 g, 10,0 mmol) em tetra-hidrofurano (30 mL) foi adicionada gota a gota, lentamente. Depois do gotejamento, a solução foi agitada à temperatura ambiente para reação por 4 horas. O líquido de reação foi despejado em 100 mL de água gelada, extraído com dicloreto de metileno (200 mL) e lavado em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente. Depois da cromatografia em coluna de sílica gel, foram obtidos 1,79 g de sólido branco com rendimento de 86%.
2) Preparo de 4-(3-(4-((t-butiloxicarbonil)amino)fenil)ureia)benzoato de metila (10)
[00109] Em um banho de gelo uma solução de p-aminobenzoato de metila (500 mg, 3,3 mmol) em dicloreto de metileno (5 mL) foi adicionada gota a gota, lentamente a uma solução de trifosgênio (980,1 mg, 3,3 mmol) em dicloreto de metileno (10 mL). Depois do gotejamento, uma solução de trietilamina (667 mg, 6,6 mmol) em dicloreto de meti- leno (5 mL) foi adicionada gota a gota. Depois do gotejamento, o solvente no líquido de reação foi seco por evaporação rotativa. Adicionou- se dicloreto de metileno (20mL) mais uma vez e o intermediário 2 (618 mg, 2,97 mmol), seguido por agitação à temperatura ambiente por 5 horas. Carbonato de sódio saturado foi adicionado ao líquido de reação para ajustar o pH e enfraquecer a alcalinidade. O líquido de reação foi extraído com acetato de etila e lavado em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro. O solvente foi evaporado completamente. O resultante foi lavado com acetato de etila/éter de petróleo, com razão volumétrica = 1/4, e filtrado por sucção. A torta de filtro foi seca, obtendo-se 600 mg de sólido branco com rendimento de 52,4%. RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 9,20 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,88 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,58 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,41-7,30 (m, 4H), 3,82 (s, 3H), 1,47 (s, 9H) ppm.
3) Preparo de 4-(3-(4-aminofenil)ureia)benzoato de metila (11)
[00110] À temperatura ambiente, uma solução de ácido trifluoroacé- tico (474 mg, 4,16 mmol) em dicloreto de metileno (5 mL) foi adicionada gota a gota, lentamente a uma solução do intermediário 10 (200 mg, 0,52 mmol) em dicloreto de metileno (10 mL), seguido por agitação à temperatura ambiente por 3 horas depois de concluído o gote- jamento. O líquido de reação foi seco diretamente por evaporação rotativa, e o pH foi ajustado com carbonato de sódio saturado para enfraquecer a alcalinidade. O resultante foi extraído com acetato de etila, seguido por lavagem em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente para obter 141 mg de sólido branco com rendimento de 95%. RMN 1H (300 MHz, DMSO): δ 8,63 (s,1H); 8,16 (s,1H); 7,45 (d, J=8,8 Hz, 2H,); 7,29 (d, J=8,8 Hz, 2H); 7,06 (d, 8,6 Hz , 2H); 6,50 (d, J=8,6 Hz, 2H); 4,80 (s, 2H ), 3,82 (s, 3H).
4) 2-metil-4,6-dicloro-1,3,5-triazina (6)
[00111] Sob a proteção de gás nitrogênio a -20°C, uma solução de brometo de metilmagnésio em éter dietílico (3 mL, 9 mmol) foi adicionada gota a gota, lentamente a uma solução de cloreto cianúrico (1,38 g, 7,5 mmol) em 8 mL de tetra-hidrofurano; depois do gotejamento, a mistura foi colocada à temperatura ambiente para reação por 2 horas sob agitação; e, a seguir, a reação foi interrompida e resfriada pela adição de 20 mL de cloreto de amônio saturado. O líquido de reação foi extraído duas vezes com 20 mL de acetato de etila e 20 mL de cloreto de sódio saturado; e a fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro. Depois da cromatografia em coluna de sílica gel, foram obtidos 615 mg de sólido branco com rendimento de 50%. RMN 1H (CDCl3) δ: 2,71 (s, 3H, CH3).
5) 2,4-di-hidróxi-6-estirenil-1,3,5-triazina (7)
[00112] O intermediário 6 (1,60 g, 9,76 mmol) e benzaldeído (1,04 g, 9,76 mmol) foram dissolvidos em 30 mL de ácido clorídrico concentrado, aquecidos até 100 °C e deixados reagir por 12 horas sob agitação. A reação foi interrompida. O líquido de reação foi resfriado até a temperatura ambiente, despejado em 60 mL de água gelada, filtrado por sucção e lavado em sequência com 10 mL de acetato de etila e 10 mL de água-éter de petróleo. A torta de filtro foi seca, obtendo-se 1,66 g de produto bruto branco com rendimento de 79,2%.
6) 2,4-dicloro-6-estirenil-1,3,5-triazina (8)
[00113] Uma mistura líquida do intermediário 7 (794 mg, 3,69 mmol) e oxicloreto de fósforo (10 mL) foi aquecida até 140 °C e deixada reagir por 19 horas sob agitação. A reação foi interrompida. O líquido de reação foi resfriado até a temperatura ambiente e seco por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 60 mL de água gelada, extraída com 60 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente. Depois da croma- tografia em coluna de sílica gel, foram obtidos 560 mg de sólido branco com rendimento de 60,2%.
7) 1 -(4-(metoxicarbonil)fenil)-3-(4-cloro-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-ami- no)fenil)ureia (12)
[00114] Sob a proteção de gás nitrogênio, o intermediário 11 (441 mg, 1,75 mmol), o intermediário 8 (500 mg, 1,75 mmol) e di-iso- propiletilamina (226 mg, 1,75 mmol) foram dissolvidos em 50 mL de tetra-hidrofurano e deixados reagir por 5 horas à temperatura ambiente sob agitação. Depois de concluída a reação, metade do solvente foi removida por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 60 mL de água, extraída com 120 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro; o solvente foi evaporado completamente; 2 mL de etanol anidro foram adicionados, seguido por ultrassonicação por 30 segundos e filtração por sucção. A torta de filtro foi seca, obtendo-se 762 mg de produto bruto com rendimento de 86,9%.
8) 1 -(4-(metoxicarbonil)fenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il))-6-estirenil-1,3,5-tri- azinil-2-amino)fenil)ureia (13)
[00115] Sob a proteção de gás nitrogênio, o intermediário 12 (840 mg, 1,68 mmol), morfolina (584 mg, 6,72 mmol) e di-isopropiletilamina (651 mg, 5,04 mmol) foram dissolvidos em 60 mL de tetra-hidrofurano e deixados reagir por 4 horas à temperatura ambiente sob agitação. Depois de concluída a reação, metade do solvente foi removida por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 100 mL de água, extraída com 100 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfa- to de sódio anidro; o solvente foi evaporado completamente; 1 mL de etanol anidro foram adicionados, seguido por ultrassonicação por 30 segundos e filtração por sucção. A torta de filtro foi seca, obtendo-se 639 mg de sólido amarelo-claro com rendimento de 69,0%. RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 9,61 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,75-7,64 (m, 4H), 7,60 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,42 (t, J = 7,6 Hz, 5H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (s, 7H), 3,69 (s, 4H)ppm.
9) Preparo de ácido 4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2- amino)fenil)ureia)benzoico (14)
[00116] À temperatura ambiente, o intermediário 13 (300 mg, 0,54 mmol) e hidróxido de lítio mono-hidratado (68,5 mg, 1,63 mmol) foram dissolvidos em tetra-hidrofurano (10 mL), metanol (5 mL) e água (1mL), aquecidos ao refluxo e agitados para reação por 12 horas. Depois de concluída a reação, o líquido de reação foi filtrado por sucção. O pH da torta de filtro foi ajustado para 4 com ácido clorídrico 2M, seguido por filtração por sucção. A torta de filtro foi seca, e 1 mL de etanol anidro foi adicionado. Após ultrassonicação por 30 segundos, a torta de filtro foi filtrada por sucção e seco para obter 171 mg de sólido amarelo claro com rendimento de 59,0%. RMN 1H (300 MHz, DMSO) δ 12,33 (s, 1H), 9,59 (s, 1H), 9,41 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 7,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,77-7,63 (m, 4H), 7,59 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,51-7,36 (m, 5H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (s, 4H), 3,69 (s, 4H)ppm.
10) 1-(4-((4-metilpiperazin-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-es- tirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia (L31)
[00117] À temperatura ambiente, o intermediário 14 (100 mg, 0,186 mmol), HOBt (32,7 mg, 0,242 mmol), DMF (2 mL), EDCI (53,5 mg, 0,279 mmol), 4-metilpiperazina (24,2 mg, 0,242 mmol) e trietilamina (37,6 mg, 0,372 mmol) foram adicionados em sequência a um balão de reação de 25 mL e agitados para reação por 8 horas. Depois de concluída a reação, o líquido de reação foi despejado em 10 mL de água gelada, extraído com dicloreto de metileno (20 mL) e lavado com água e salmoura saturada em sequência. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente, seguido por cromatografia em coluna de sílica-gel para obter 87,6 mg de sólido amarelo-claro com rendimento de 76%. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 9,60 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,65-7,72 (m, 4H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,41-7,43 (m, 5H), 7,34 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (m, 4H), 3,69 (m, 4H), 3,50 (m, 4H), 2,33 (m, 4H), 2,21 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,98; 168,92; 164,41; 152;41; 141,17; 138,65; 135,20; 134,18; 134,09; 129,45; 128,91; 128,55; 128,18; 127,76; 127,14; 120,57; 118,71; 117,30; 65,96; 54,78; 53,58; 47,60; 45,50; 43,38. HRMS calculado para C34H38N9O3 [M+H]+: 620,3092, encontrado: 620,3105.
Exemplo 3: Síntese de L39 1) 2-metil-4,6-dicloro-1,3,5-triazina (6)
[00118] Sob a proteção de gás nitrogênio a -20 °C, uma solução de brometo de metilmagnésio em éter dietílico (3 mL, 9 mmol) foi adicionada gota a gota, lentamente a uma solução de cloreto cianúrico (1,38 g, 7,5 mmol) em 8 mL de tetra-hidrofurano; depois do gotejamento, a mistura foi colocada à temperatura ambiente para reação por 2 horas sob agitação; e, a seguir, a reação foi interrompida e resfriada pela adição de 20 mL de cloreto de amônio saturado. O líquido de reação foi extraído duas vezes com 20 mL de acetato de etila e 20 mL de cloreto de sódio saturado; e a fase orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro. Depois da cromatografia em coluna de sílica gel, foram obtidos 615 mg de sólido branco com rendimento de 50%. RMN 1H (CDCl3) δ: 2,71 (s, 3H, CH3).
2) 2,4-di-hidróxi-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazina (7)
[00119] O intermediário 6 (1,60 g, 9,76 mmol) e 3-nitrobenzaldeído (1,47 g, 9,76 mmol) foram dissolvidos em 30 mL de ácido clorídrico concentrado, aquecidos até 100 °C e deixados reagir por 12 horas sob agitação. A reação foi interrompida. O líquido de reação foi resfriado até a temperatura ambiente, despejado em 60 mL de água gelada, filtrado por sucção e lavado em sequência com 10 mL de acetato de eti- la e 10 mL de água-éter de petróleo. A torta de filtro foi seca, obtendo- se 2,01 g de produto bruto branco com rendimento de 79,2%.
3) 2,4-dicloro-6-(3-nitroestirenil)-1,3,5-triazina (8)
[00120] Uma mistura líquida do intermediário 7 (960 mg, 3,69 mmol) e oxicloreto de fósforo (10 mL) foi aquecida até 140 °C e deixada reagir por 19 horas sob agitação. A reação foi interrompida. O líquido de reação foi resfriado até a temperatura ambiente e seco por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 60 mL de água gelada, extraída com 60 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente. Depois da croma- tografia em coluna de sílica-gel, foram obtidos 660 mg de sólido branco com rendimento de 60,2%.
4) 2-cloro-4-(4-nitrofenoxi)-6-(estirenil)-1,3,5-triazina (15)
[00121] Sob a proteção de gás nitrogênio, o intermediário 8 (78 mg, 0,31 mmol) foi dissolvido em 5 mL de tetra-hidrofurano; e sódio p- nitrofenol (50 mg, 0,31 mmol) foi dissolvido em 5 mL de água. A solução aquosa de sódio p-nitrofenol foi adicionada gota a gota, lentamente ao líquido misturado do intermediário 8 e deixada reagir à temperatura ambiente por 3 horas sob agitação. Depois de concluída a reação, metade do solvente foi removida por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 20 mL de água, extraída com 50 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro; o solvente foi evaporado completamente; 0,5 mL de etanol anidro foi adicionado, seguido por ul- trassonicação por 30 segundos e filtração por sucção. A torta de filtro foi seca, obtendo-se 84 mg de produto bruto com rendimento de 76,9%.
5) 2-(morfolin-1-il)-4-(4-nitrofenoxi)-6-(estirenil)-1,3,5-triazina (16)
[00122] Sob a proteção de gás nitrogênio, o intermediário 15 (84 mg, 0,24 mmol), morfolina (63 mg, 0,72 mmol) e di-isopropiletilamina (93 mg, 0,72 mmol) foram dissolvidos em 15 mL de tetra-hidrofurano e deixados reagir por 4 horas à temperatura ambiente sob agitação. Depois de concluída a reação, metade do solvente foi removida por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 30 mL de água, extraída com 30 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro; o solvente foi evaporado completamente; 0,5 mL de eta- nol anidro foi adicionado, seguido por ultrassonicação por 30 segundos e filtração por sucção. A torta de filtro foi seca, obtendo-se 84 mg de sólido amarelo claro com rendimento de 86,0%.
6) 4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazina-2-oxo)anilina (17)
[00123] Pó de ferro (100 mg, 1,79 mmol) e cloreto de amônio (40 mg, 0,74 mmol) foram dissolvidos em 10 mL de solução aquosa de etanol (razão volumétrica etanol/água 8:2) e aquecidos ao refluxo. O intermediário 16 (100 mg, 0,247 mmol) foi adicionado rapidamente ao líquido de reação acima, e a reação prosseguiu sob refluxo por 2 horas. Depois de concluída a reação, foi realizada filtração por sucção e o etanol no filtrado foi removida por evaporação rotativa. A parte restante foi despejada em 30 mL de água, extraída com 30 mL de acetato de etila e lavada em sequência com água e salmoura saturada. A fase orgânica foi coletada e seca com sulfato de sódio anidro. O preparo da areia foi realizado, seguido por cromatografia, em que o eluente foi éter de petróleo:acetato de etila = 3:1. Foram obtidos 85 mg de produto puro com rendimento de 91,5%. RMN 1H (300 MHz, DMSO): δ 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,43-7,41 (m, 3H), 6,92 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,58 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 5,04 (s, 2H), 3,87 (s, 2H), 3,66-3,60 (m, 4H) ppm.
7) (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-((4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazin-2-il) oxo)fenil)ureia (L39)
[00124] À temperatura ambiente, uma solução de isocianato de p- clorofenila (37,8 mg, 0,346 mmol) em dicloreto de metileno (3 mL) foi adicionada gota a gota, lentamente a uma solução do intermediário 17 (92,5 mg, 0,246 mmol) em dicloreto de metileno (5 mL), seguido por agitação à temperatura ambiente por 5 horas depois de concluído o gotejamento. O líquido de reação foi filtrado diretamente por sucção, e a torta de filtro foi seca, obtendo-se 117 mg de sólido branco com rendimento de 90%. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,86 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 7,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,73-7,11 (m, 2H), 7,52-7,45 (m, 4H), 7,42-7,40 (m, 3H), 7,34 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,17 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,89 (s, 2H), 3,67 (s, 2H), 3,60 (s, 4H) ppm.
Exemplo 4: Preparo dos compostos L1-L15, L17-L30, L32-L38 e L40
[00125] Os compostos L1-L15 e L17-L28 foram preparados utilizando o mesmo método e materiais correspondentes que no Exemplo 1; os compostos L29-L30 e L32-L37 foram preparados utilizando o mesmo método e materiais correspondentes que no Exemplo 2; e os compostos L38 e L40 foram preparados utilizando o mesmo método e materiais correspondentes que no Exemplo 3. Dados relacionados para os compostos resultantes são mostrados a seguir: L1 (no 50): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,57 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,93 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,65 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,49 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,43-7,38 (m, 5H), 7,32 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ), 3,68 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,99; 164,43; 163,80; 152,46; 138,83; 138,63; 135,22; 134,17; 134,11; 129,44; 128,90; 128,55; 127,76; 127,16; 125,13; 120,58; 119,58; 118,75; 65,96; 43,37. HRMS calculado para C28H27ClN7O2 [M+H]+: 528,1909; encontrado: 528,1918. L2 (no 52): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,65 (s, 1H), 8,78 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 7,62 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,48-7,38 (m, 7H), 7,11 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 6,90 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ), 3,69 (m, 4H) ppm. HRMS calculado para C28H27FN7O2 [M+H]+: 512,2205, encontrado: 512,2215. L3 (no 51): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,53 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,93 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,71 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,44-7,39 (m, 5H), 7,32 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 15,9 Hz, 1H),3,83 (m, 4H ), 2,39 (m, 4H), 2,23 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,99; 164,28; 163,80; 152,47; 138,83; 138,51; 135,24; 134,25; 134,05; 129,40; 128,89; 128,55; 127,75; 127,27; 125,12; 120,52; 119,57; 118,76; 54,34; 45,74; 42,73. HRMS calculado para C29H30ClN8O [M+H]+: 541,2175, encontrado: 541,2190. L4 (no 53): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,55 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,56 (s, 1H), 7,92 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,48-7,38 (m, 7H), 7,12 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (m, 4H ), 2,39 (m, 4H), 2,23 (s,3H) ppm. HRMS calculado para C29H30FN8O[M+H]+; 525,2521, encontrado: 525,2534. L5 (no 57): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,56 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,98 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,74-7,69 (m, 3H), 7,49 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,08 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 5,78 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,61-4,59 (m, 1H ), 4,37-4,32 (m, 2H ), 3,90-3,86 (m, 2H ) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,8; 165,4; 163,5; 152,5; 138,6; 135,2; 134,4; 133,9; 129,4; 128,9; 128,6; 127,8; 127,2; 125,1; 120,3; 119,5; 118,7; 60,9; 59,2. HRMS calculado para C27H25ClN7O2 [M+H]+: 514,1753, encontrado: 514,1765. L6 (no 54): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,56 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,90 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,66 (d, J = 9,0 Hz, 3H), 7,50 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,43 (dd, J = 13,2; 6,6 Hz, 4H), 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ), 3,69 (m, 4H) ppm. HRMS calculado para C28H26Cl2N7O2 [M+H]+: 562,1520, encontrado: 562,1505. L7 (no 60): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,56 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 7,91 (d, J = 15,9 Hz, 1H) 7,81 (s, 1H), 7,63-7,69 (m, 3H), 7,44-7,49 (m, 4H), 7,40 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,12 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ), 3,69 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,74; 164,37; 163,83; 158,75; 155,60; 152,72; 137,54; 137,07; 136,23; 134,43; 133,91; 133,72; 130,63; 129,00; 127,36; 126,32; 120,67; 119,72; 119,62; 118,55; 115,33; 115,03; 65,95; 43,35. HRMS calculado para C28H26Cl FN7O2 [M+H]+: 546,1815, encontrado: 546,1821. L8 (no 55): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,56 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,90 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,66 (d, J = 9,0 Hz, 3H), 7,50 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,43 (dd, J = 13,2; 6,6 Hz, 4H), 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,84 (m, 4H), 2,39 (m, 4H), 2,23 (s, 3H). RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,75; 164,23; 163,84; 152,47; 138,83; 137,57; 136,96; 134,19; 134,10; 133,71; 130,63; 128,98; 128,55; 127,37; 127,31; 125,13; 120,59; 119,59; 118,78; 54,34; 45,73; 42,74. HRMS calculado para C29H29 Cl2N8O [M+H]+: 575,1836, encontrado: 575,1840. L9 (no 61): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,50 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H) 7,82 (s, 1H), 7,63-7,69 (m, 3H), 7,44-7,49 (m, 4H) ,7,39 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,12 (t, J = 8,8 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,84 (m, 4H ), 2,39 (m, 4H), 2,23 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,7; 164,2; 163,8; 158,8; 155,6; 152,8; 137,5; 136,9; 134,3; 133,7; 130,6; 129,0; 127,4; 126,3; 120,6; 119,8; 119,7; 118,6; 115,4; 115,1; 54,3; 45,7; 42,7. HRMS calculado para C29H29Cl FN8O [M+H]+: 559,2131, encontrado: 559,2144. L10 (no 43): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 10,46 (s, 1H), 10,22 (s, 1H), 9,52 (s, 1H), 7,90 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,53-7,61 (m, 4H), 7,44-7,52 (m, 4H), 7,28 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (m, 4H ), 3,68 (m, 4H) ppm. HRMS calculado para C28H26Cl2N7O2 [M+H]+: 562,152, encontrado: 562,1517. L11 (no 45): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,6 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,88 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,63 (d, J = 8,4 Hz, 1H) ,7,43-7,49 (m, 4H), 7,38 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,11 (t, J = 8,8 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ), 3,68 (m, 4H) ppm. HRMS calculado para C28H26Cl FN7O2 [M+H]+: 546,1815, encontrado: 546,1822. L12 (no 49): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,60 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,91 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,537,58 (m, 1H), 7,39 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,21 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 6,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,73 (m, 4H ), 3,59 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,8; 164,0; 152,4; 141,8; 141,6; 137,3; 134,2; 134,0; 133,9; 130,3; 130,2; 129,5; 128,9; 120,6; 118,8; 113,7; 108,0; 107,8; 104,8; 104,5; 65,9; 43,3. HRMS calculado para C28H26ClFN7O2 [M+H]+: 546,1815, encontrado: 546,1823. L13 (no 44): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,50 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,46-7,50 (m, 4H), 7,39 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (m, 4H ), 2,38 (m, 4H), 2,23 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,9; 164,5; 163,8; 152,5; 138,9; 137,1; 134,2; 133,8; 129,5; 128,9; 128,6; 128,1; 125,1; 120,5; 119,5; 118,7; 54,3; 45,7; 42,7. HRMS calculado para C29H29Cl2N8O[M+H]+: 575,1836, encontrado: 575,1837. L14 (no 42): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,51 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 7,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,64 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,51-7,47 (m, 4H), 7,39 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,91 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,85 (m, 4H ), 2,38 (m, 4H), 2,25 (s, 3H) ppm. HRMS calculado para C29H29Cl FN8O [M+H]+: 559,2131, encontrado: 559,2134. L15 (no 48): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,61 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 8,98 (s, 1H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H),7,89 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,667,72 (m, 4H), 7,60 (d, J = 8,8 Hz, 2H),7,39-7,44 (m, 4H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ), 3,82 (s, 3H ), 3,69 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 164,2; 163,8; 160,8; 152,4; 141,7; 137,2; 134,2; 134,0; 133,8; 130,3; 130,2; 129,5; 118,7; 113,7; 107,7; 104,8; 104,4; 54,0; 45,3; 42,3. HRMS calculado para C29H29ClFN8O [M+H]+: 559,2131, encontrado: 559,2136. L17 (no 62): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,58 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,06 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,63-7,69 (m, 2H), 7,44-7,49 (m, 2H), 7,40 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,07 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,84 (m, 4H ), 3,70 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 164,33; 163,86; 158,69; 152,79; 148,33; 137,14; 136,31; 134,58; 133,76; 133,56; 130,31; 130,13; 123,60; 122,39; 120,71; 119,57; 119,46; 118,39; 115,32; 115,03; 65,96; 43,36. HRMS calculado para C28H26FN8O4 [M+H]+: 557,2056, encontrado: 557,2060. L18 (no 41): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,53 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,20 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 8,03 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,73-7,64 (m, 3H), 7,50 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,41 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,05 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,84 (m, 4H), 2,39 (m, 4H), 2,23 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,53; 164,18; 163,86; 152,48; 148,31; 138,85; 137,15; 136,20; 134,16; 133,55; 130,28; 128,53; 125,09; 123,58; 122,37; 120,60; 119,56; 118,74; 54,33; 45,72; 42,72. HRMS calculado para C29H29ClN9O3 [M+H]+: 586,2076, encontrado: 586,2082. L19 (no 63): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,52 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,64-7,69 (m, 2H), 7,44-7,49 (m, 2H), 7,40 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,06 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,85 (m, 4H), 2,40 (m, 4H), 2,24 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,6; 164,2; 158,8; 152,7; 148,3; 137,2; 136,2; 134,3; 134,0; 133,6; 130,3; 123,6; 122,4; 120,6; 119,8; 119,7; 118,7; 115,4; 115,1; 54,4; 45,7; 42,7. HRMS calculado para C29H29FN9O3 [M+H]+: 570,2372, encontrado: 570,2384. L20 (no 38): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,50 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,21 (dd, J = 8,0 Hz, J=1,8 Hz, 2H), 8,03 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,74-7,69 (m, 3H), 7,49 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,06 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,233,17 (m, 6H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,19; 164,90; 163,64; 152,48; 148,35; 138,86; 137,19; 135,97; 134,36; 133,98; 133,59; 130,32; 128,55; 125,09; 123,56; 122,29; 120,41; 119,56; 118,74; 35,86. HRMS calculado para C28H24ClN8O3 [M+H]+: 531,1654, encontrado: 531,1667. L21 (no 39): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,49 (s, 1H), 8,79 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 8,49 (s, 1H), 8,21 (dd, J = 8,0 Hz, J=1,8 Hz, 2H), 8,01 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,77-7,69 (m, 3H), 7,49 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,06 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,623,57 (m, 4H ), 1,96-1,94 (m, 4H ) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6): 162,87; 152,47; 148,35; 138,85; 137,19; 134,55; 133,83; 133,61; 130,33; 128,55; 125,09; 123,55; 122,24; 120,21; 119,55; 118,75; 45,99; 24,76. HRMS calculado para C28H26ClN8O3 [M+H]+: 557,1811, encontrado: 557,1816. L22 (no 58): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,56 (s, 1H), 8,88 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,98 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,68-7,74 (m, 3H), 7,49 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,39 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,32 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,08 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 5,78 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 4,58-4,61 (m, 1H), 4,32-4,37 (m, 2H), 3,86-3,90 (m, 2H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,36; 165,26; 163,55; 152,51; 148,31; 138,88; 137,09; 136,14; 134,29; 134,05; 133,65; 130,27; 128,54; 125,06; 123,57; 122,25; 120,42; 119,49; 118,67; 60,93; 59,23. HRMS calculado para C27H24ClN8O4[M+H]+: 559,1604, encontrado: 559,1609. L23 (no 64): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,63 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,01 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,69-7,71 (m, 2H), 7,49 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,39 (m, 3H), 7,33 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,257,16 (m, 2H), 6,93 (m, 1H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,87 (m, 4H), 3,69 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 170,09; 164,44; 163,90; 152,30; 140,28; 139,66; 138,92; 138,71; 135,25; 129,42; 128,85; 128,55; 127,77; 127,06; 125,28; 119,68; 113,68; 112,19; 109,91; 66,03; 43,41. HRMS calculado para C28H27ClN7O2 [M+H]+: 528,1909, encontrado: 528,1916. L24 (no 65): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,58 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,00 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,69-7,71 (m, 2H) 7,50 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,38 (m, 3H), 7,32 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,187,21 (m, 2H), 6,94 (m, 1H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,87 (m, 4H), 2,39 (m, 4H), 2,23 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 170,1; 164,3; 163,9; 152,3; 140,3; 139,7; 138,8; 135,3; 129,4; 128,8; 128,6; 128,5; 127,8; 127,1; 125,2; 119,6; 113,6; 112,1; 109,9; 54,5; 45,8; 42,8. HRMS calculado para C29H30ClN8O [M+H]+: 541,2226, encontrado: 541,2236. L25 (no 59): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,64 (s, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,98 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,68 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,43-7,50 (m, 4H), 7,32 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,16-7,26 (m, 2H), 6,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,94 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,88 (m, 4H ), 3,69 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,84; 164,38; 163,91; 152,30; 140,20; 139,67; 138,72; 137,55; 137,36; 133,71; 130,57; 129,01; 128,76; 128,61; 128,53; 127,32; 126,37; 125,25; 119,62; 113,72; 112,23; 109,94; 66,02; 43,40. HRMS calculado para C28H26Cl2N7O2[M+H]+: 562,1520, encontrado: 562,1530. L26 (no 56): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,62 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,12 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,67 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,17-7,34 (m, 4H), 7,06 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,94 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 3,91 (m, 4H ), 2,41 (m, 4H), 2,25 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,8; 164,2; 163,9; 152,3; 140,3; 139,7; 138,7; 137,6; 137,2; 133,7; 130,6; 129,0; 128,9; 128,6; 127,3; 126,4; 125,3; 119,6; 113,7; 112,2; 109,9; 54,5; 45,8; 42,8. HRMS calculado para C29H29Cl2N8O[M+H]+: 575,1836, encontrado: 575,1842. L27 (no 66): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,62 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,18 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,11 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,65 (t, J = 7,0 Hz, 1H) 7,45 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,14-7,32 (m, 4H), 7,05 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,93 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 3,87 (m, 4H ), 3,67 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,63; 164,37; 163,94; 152,32; 148,28; 140,18; 139,95; 139,70; 138,72; 137,13; 136,59; 133,59; 130,21; 129,96; 128,60; 128,49; 125,24; 123,56; 122,31; 119,59; 113,72; 112,22; 109,91; 66,03; 43,42; 30,37. HRMS calculado para C28H26Cl2N8O4[M+H]+: 573,1687, encontrado: 573,1760. L28 (no 67): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,60 (s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,20 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 8,12 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,67 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,17-7,34 (m, 4H), 7,06 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,94 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 3,89 (m, 4H), 2,39 (m, 4H), 2,23 (s, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,6; 164,2; 163,9; 152,3; 148,3; 140,2; 139,7; 138,7; 137,1; 133,6; 130,2; 130,0; 128,6; 128,5; 123,6; 122,4; 119,6; 113,7; 112;1; 109,9; 54,5; 45,8; 42,8. HRMS calculado para C29H29ClN9O3 [M+H]+: 586,2076, encontrado: 586,2085. L29 (no 70): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,60 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 7,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,72-7,65 (m, 4H), 7,51 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,46-7,40 (m, 5H), 7,36 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (m, 4H ), 3,69 (m, 4H), 2,97 (s, 6H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 170,0; 164,4; 163,8; 152,4; 141,0; 138,7; 135,2; 134,1; 129,5; 129,2; 128,9; 128,2; 127,8; 120,6; 118,7; 117,2; 66,0; 43,4. HRMS calculado para C31H33N8O3 [M+H]+: 565,1670, encontrado: 565,2676. L30 (no 76): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,56 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,71-7,64 (m, 4H) , 7,50 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,44-7,39 (m, 5H), 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ), 3,69 (m, 4H), 3,33 (m, 2H), 2,89 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 1,63-1,61 (m, 3H), 1,12-1,01 (m, 2H), 0,92 (d, J=6,1 Hz, 3H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 168,85; 164,44; 163,81; 152,42; 140,92; 135,22; 134,18; 134,11; 129,25; 128,91; 128,08; 127,87; 127,76; 120,59; 118,72; 117,34; 65,96; 43,37; 30,47; 21,57. HRMS calculado para C35H39N8O3 [M+H]+: 619,3140, encontrado: 619,3151. L32 (no 73): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,64 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,37 (t, J=5,4 Hz, 1H), 7,99 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,85 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,77-7,70 (m, 4H), 7,58 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,52-7,45 (m, 5H), 6,93 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,88 (m, 4H ), 3,74 (m, 4H), 3,493,45 (m,2H), 2,67 (t, J=6,1 Hz,2H), 2,41 (s, 6H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 165,83; 164,45; 163,81; 152,38; 142,63; 138,65; 134,21; 134,08; 129,44; 128,91; 128,13; 127,75; 127,19; 120,59; 118,70; 116,90; 65,96; 57,73; 44,50; 43,37; 36,55. HRMS calculado para C33H38N9O3 [M+H]+: 608,3092, encontrado: 608,3104. L33 (no 74): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,61 (s, 1H), 9,54 (s, 1H), 9,25 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,72 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 5,8 Hz, 5H), 6,89 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 3,82 (s, 4H), 3,70 (s, 4H), 3,00 (dd, J = 14,2; 7,0 Hz, 4H), 2,85 (s, 4H), 1,17 (t, J = 7,2 Hz, 6H). HRMS calculado para C35H42N9O3 [M+H]+: 636,3405, encontrado: 636,3417. L34 (no 77): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,61 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,37 (t, J=5,4 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,77 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,72-7,64 (m, 4H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,43-7,41 (m, 5H), 6,88 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,82 (m, 4H ), 3,69 (m, 4H), 3,293,24 (m,2H), 2,27 (t, J=6,9 Hz,2H), 2,15 (s, 6H), 1,69-1,62 (m,2H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 165,6; 164,4; 152,4; 142,5; 135,2; 134,2; 134,1; 129,5; 128,9; 128,0; 127,8; 127,5; 120,6; 118,7; 116,9; 65,9; 56,9; 45,1; 43,3; 37,6; 27.1. HRMS calculado para C34H40N9O8 [M+H]+: 662,3249, encontrado: 662,3255. L35 (no 75): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,61 (s, 1H), 9,51 (s, 1H), 9,23 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,95 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,69 (dd, J = 17,5; 7,5 Hz, 4H), 7,54 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,43 (d, J = 4,6 Hz, 5H), 6,89 (d, J = 15,7 Hz, 1H), 3,83 (s, 4H), 3,70 (s, 4H), 3,44 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 2,83 (d, J = 45,5 Hz, 6H), 1,76 (s, 4H). RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,95; 165,83; 164,41; 163,77; 152,51; 142,80; 138,66; 135,21; 134,26; 134,05; 129,44; 128,91; 128,19; 127,76; 127,15; 126,95; 124,86; 120,59; 118,41; 116,69; 65,96; 54,46; 53,48; 45,44; 43,35; 37,46; 29,27; 29,00; 22,89. HRMS calculado para C35H40N9O3 [M+H]+: 634,3249, encontrado: 634,3264. L36 (no 72): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,66 (s, 1H), 9,50 (s, 1H), 9,22 (s, 1H), 8,52 (s,1H), 7,99 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,77-7,70 (m, 4H), 7,60 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,49-7,43 (m, 5H), 6,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,87 (m, 4H), 3,74 (m, 4H), 3,54-3,52 (m, 2H), 2,80 (m, 6H), 1,66 (m, 4H), 1,49 (m,2H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,98; 165,91; 164,40; 163,76; 152,47; 142,80; 138,62; 135,19; 134,19; 134,10; 129,43; 128,91; 128,20; 127,75; 127,12; 126,92; 120,58; 118,49; 116,76; 65,96; 56,77; 53,26; 43,35; 35,56; 24,15; 22,77. HRMS calculado para C36H42N9O3 [M+H]+: 648,3405, encontrado: 648,3423. L37 (no 71): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 9,60 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,27 (t,J=5,2 Hz,1H), 7,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,65-7,72 (m, 4H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,40-7,46 (m, 5H), 7,34 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (m, 4H), 3,69 (m, 4H), 3,56 -3,59 (m, 4H), 3,35 (m, 2H), 2,43-2,50 (m, 6H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 169,99; 165,67; 164,41; 163,78; 152,34; 142,49; 138,67; 135,19; 134,23; 134,01; 129,45; 128,91; 128,08; 127,76; 127,40; 127,12; 120,56; 118,77; 116,98; 66,15; 65,96; 57,44; 53,27; 43,35; 36,41. HRMS calculado para C35H40N9O4 [M+H]+: 650,3198, encontrado: 650,3212. L38 (no 84): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,67 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 7,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,74-7,72 (m, 2H), 7,49 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,42-7,40 (m, 2H), 7,36 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,67 (s, 2H), 3,60 (s, 4H) ppm. L39 (no 85): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,86 (s, 1H), 8,80 (s, 1H), 7,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,73-7,11 (m, 2H), 7,52-7,45 (m, 4H), 7,42- 7,40 (m, 3H), 7,34 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,17 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,93 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,89 (s, 2H), 3,67 (s, 2H), 3,60 (s, 4H) ppm. L40 (no 86): RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 8,76 (s, 1H), 8,74 (s, 1H), 8,70 (s, 1H), 7,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,72-7,70 (m, 2H), 7,50-7,45 (m, 5H), 7,42-7,40 (m, 2H), 7,15-7,10 (m, 4H), 6,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,89 (s, 2H), 3,67 (s, 2H), 3,60 (s, 4H) ppm.
Exemplo 5: Testes in vitro de compostos quanto à atividade neoplásica (experimentos com MTT) 1) Materiais experimentais
[00126] MTT, meio de cultura RPM1640, soro fetal bovino, placa com 96 cavidades, incubadora termostática com CO2, leitor de micro- placas American BIO-RAD680, linhagens celulares câncer de pulmão de não pequenas células humano (H522) e linhagens celulares de glioma cerebral humano (U87) foram todos obtidos comercialmente. 2) Etapas experimentais (1) Inoculação da célula: Uma suspensão de célula única foi preparada com meio de cultura suplementado com soro fetal bovino 10%, espalhada em placas de 96 cavidades com 5000 células por cavidade, cada cavidade com volume de 100 μL, e cultivada durante a noite. (2) Preparo de soluções do composto: uma solução estoque de um composto em DMSO foi diluída em uma bancada estéril com meio de cultura em 5 concentrações a serem testadas, em que uma diluição dupla foi empregada entre duas concentrações adjacentes. (3) As soluções dos compostos em várias concentrações foram adicionadas à placa de 96 cavidades cultivada durante a noite, com 100 μL adicionados por cavidade, cavidades triplicadas para cada concentração. Como as cavidades na periferia podem sofrer efeito de borda e são suscetíveis à contaminação, nenhuma célula ou compos- tos foram adicionados a essas cavidades e, em vez disso, foram adicionados 100 μL de solução de cultura como branco. Adicionalmente, cavidades 100% foram definidas, contendo as células e 100 μL de meio de cultura sem qualquer composto. As placas foram incubadas em uma incubadora termostática a 37 °C por 48 horas. (4) Coloração: 10 μL de solução de MTT (5 mg/mL, preparada com PBS) foram adicionados à placa de 96 cavidades para coloração. Após 4 horas de incubação, foi realizada centrifugação a 2500 rpm por 10 minutos. Depois, uma pipeta múltipla foi utilizada para sugar a solução de cultura para fora das cavidades, cuidadosamente, sem retirar as células, mantendo a ponta da pipeta voltada para baixo. 150 μL de DMSO foram adicionados e misturados em um agitador por 5-10 minutos. Aguardou-se até que os cristais estivessem totalmente dissolvidos, e um valor de OD foi medido para cada cavidade utilizando o leitor de microplacas a 570 nm. A taxa de inibição foi calculada como segue: Taxa de inibição (%) = (valor OD médio de cavidades 100% - valor OD médio de cavidade com composto) / (valor OD médio de cavidades 100% - valor OD médio de cavidades de branco) x 100%
[00127] Os resultados experimentais dos compostos estão listados na tabela a seguir:
[00128] "NA" significa que o composto não tem ei feito inibidor sobre a proliferação de células tumorais quando a concentração mais alta (31,6 μM) foi testada.
[00129] ">30" significa que o composto tem algum efeito inibidor sobre células tumorais, mas a taxa de inibição é <50%, quando a con-centração mais alta (31,6 μM) foi testada.
Exemplo 6: Amplo espectro e seletividade dos compostos na inibição de células tumorais
[00130] 8 compostos (no 38 ao no 45, L20, L21, L16, L18, L14, L10, L13 e L11 em sequência) foram escolhidos para serem testados quanto à capacidade de inibir o crescimento de 11 tipos de células tumorais humanas. O método foi o mesmo que no Exemplo 5. As linhagens celulares testadas foram: linhagem celular de câncer de pulmão de não pequenas células humano (H522), linhagem celular de adenocarcinoma de cólon humano (HCT15), linhagem celular de câncer cervical humano (Hela), linhagem celular de câncer de fígado humano (HepG2), linhagem celular de fibrossarcoma humano (HT1080), linhagem celular de eritroleucemia humana (KG1), linhagem celular de câncer de próstata humano (LNCaP), linhagem celular de câncer de mama humano (MCF7), linhagem celular de câncer de ovário humano (OVAR3), linhagem celular de melanoma humano (SK-mel28) e linhagem celular de glioma cerebral humano (U87). Os resultados experimentais são mostrados na Figura 1.
Exemplo 7: Vacuolização e morte por metuose de células tumorais
[00131] Depois de tratados com certos compostos de estruturas particulares, foi observado que vários tipos de células mostravam um grande grau de acúmulo de vesículas no citoplasma, um fenótipo de vacuolização celular. Algumas células tornaram-se gradualmente redondas e, no final, explodiram. Essas alterações são compatíveis com as características de morte celular por metuose (Figura 2).
[00132] A fim de comparar a capacidade de diferentes compostos provocarem vacuolização celular, 100 μL de meio de cultura (RPMI1640, glutamina 2 mmol, soro fetal bovino 10%), incluindo 103 células U87 de glioma humano e concentrações finais de 0,01; 0,0316; 0,1; 0,316; 1,0 e 3,160 μM, respectivamente, dos compostos a serem testados, foram inoculados em uma placa de cultura com 96 cavidades. Depois de cultivada em CO2 5% e 37 oC por 96 horas, a morfologia das células foi observada sob um microscópico em alta amplificação, e a capacidade dos compostos para provocar vacuolização celular foi pontuada. Foi atribuída pontuação 5 quando ocorria vacuoliza- ção óbvia a 10 nM, pontuação 4 a 31,6 nM, pontuação 3 a 100 nM, pontuação 2 a 316 nM, pontuação 1 a 1000 nM e pontuação 0 foi dada se nenhuma vacuolização ocorresse em qualquer concentração.
[00133] A Figura 3 mostra a capacidade dos compostos de estruturas diferentes provocarem vacuolização celular e a capacidade para inibirem a proliferação celular. Os resultados específicos são mostrados abaixo: Observação: O composto no 51 não é mostrado na Figura 3; o composto no 68 é um sal cloreto do composto L16 (no 40).
[00134] Além disso, os compostos 79 e 14 descritos no Exemplo 8 foram testados de acordo com o método descrito nesse Exemplo, e receberam as pontuações 4,5 e 1,5 pontuações, respectivamente, para vacuolização.
Exemplo 8: Captura de uma proteína-alvo com uma sonda
[00135] A Figura 4 resume o isolamento e a identificação de uma proteína-alvo correspondente a uma composto que provoca vacuolização celular. As etapas relacionadas são descritas sucintamente a seguir. Síntese da sonda (Figura 5): Rota sintética e síntese de composto no 79: em que a cadeia lateral C1 foi preparada tendo como referência o mé- todo descrito no artigo (Li, Z., Hao P., Li L. et al. Design and synthesis of terminal alkyne-containing diazirine photo-crosslinkers and their incorporation into kinase inhibitors for cell- and tissue-based proteome profiling. Angew. Chem.Int. Ed., 2013, 52, 8551-8556).
[00136] O Composto 14 ((E)-1-(4-carboxifenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)- 6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia) foi preparado utilizando o método do Exemplo 2 e materiais correspondentes, e o seus dados de espectro de massa são como segue: RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 12,33 (s, 1H), 9,59 (s, 1H), 9,41 (s, 1H), 9,09 (s, 1H), 7,94 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,77-7,63 (m, 4H), 7,59 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,51-7,36 (m, 5H), 6,89 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,83 (s, 4H), 3,69 (s, 4H)ppm.
(E) - N-(2-(3-(1-butin-4-il)-3H-diaziridin-3-il)etil)-4-(3-(4-((4-(morfolin-1-il)- 6-estirenil-1,3,5-triazin-2-il)amino)fenil)ureia)benzamida (79)
[00137] À temperatura ambiente, o intermediário 14 (100 mg, 0,186 mmol), HOBt (32,7 mg, 0,242 mmol), DMF (2 mL), EDCI (53,5 mg, 0,279 mmol), C1 (33,0 mg, 0,242 mmol) e trietilamina (37,6 mg, 0,372 mmol) foram adicionados em sequência a um balão de reação de 25 mL e agitados para reação por 8 horas. Depois de concluída a reação, o líquido de reação foi despejado em 10 mL de água gelada, extraído com dicloreto de metileno (20 mL) e lavado em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente. Depois da croma- tografia em coluna de sílica gel, foram obtidos 92,8 mg de sólido ama-relo claro com rendimento de 76%. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ 9,62 (s, 1H), 8,94 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,34 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,67-7,74 (m, 4H), 7,55 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,42 -7,48 (m, 5H), 6,90 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 3,84 (m, 4H), 3,71 (m, 4H), 3,13-3,20 (m, 2H), 2,87 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 2,04 (td, J = 7,4 Hz, J = 2,5 Hz, 2H), 1,62-1,69 (m, 4H) ppm. RMN 13C (75 MHz, DMSO-d6) δ: 170,05; 165,66; 164,41; 163,87; 152,16; 142,45; 140,30; 139,59; 138,91; 135,22; 129,44; 128,87; 128,63; 128,07; 127,77; 127,40; 127,01; 117,02; 113,69; 112,13; 109,78; 83,13; 71,72; 66,05; 43,41; 34,27; 31,99; 31,30; 27,28; 12,67. ES-MSm/Z: 655,5 [M-H]-, C36H36N10O3(PM = 656,7). Rota sintética e síntese do composto no 80:
[00138] Em que o reagente N1 e a biotina eram produtos disponíveis comercialmente.
N-(2-(2-(2-(2-azidoetoxi)etoxi)etoxi)etan-1-il)biotinamida (80)
[00139] À temperatura ambiente, biotina (94 mg, 0,385 mmol, biotina), HOBt (74,5 mg, 0,551 mmol), DMF (2 mL), EDCI (106 mg, 0,551 mmol), N1 [80 mg, 0,367 mmol, denominado 2-(2-(2-(2-azidoetoxi) etoxi)etoxi)etan-1-amina] e trietilamina (55,7 mg, 0,551 mmol) foram adicionados em sequência a um balão de reação de 25 mL e agitados para reação por 8 horas. Depois de concluída a reação, o líquido de reação foi despejado em 10 mL de água gelada, extraído com dicloreto de metileno (20 mL) e lavado em sequência com água e salmoura saturada. A camada orgânica foi seca com sulfato de sódio anidro, e o solvente foi evaporado completamente. Depois da cromatografia em coluna de sílica-gel, foram obtidos 123 mg de sólido amarelo-claro com rendimento de 72%. RMN 1H (300 MHz, DMSO-d6) δ: 4,31 (m, 1H, CH-1-biotina), 4,14 (m, 1H, CH-4-biotina), 3,55-3,52 (m, 8H, O(CH2CH2O)-PEG), 3,40-3,38 (m, 4H, CH2NH e CH2N3-PEG), 3,10 (m, 1H, CH-3-biotina), 2,83 (dd, 1H, J = 4,8; 12,3 Hz, CH-2a-biotina), 2,60- 2,56 (m, 1H, CH-2b-biotina), 2,07 (t, 2H, J =7,2 Hz, CH2CO-biotina), 1,50-1,30 (m, 6 H,(CH2)3-biotina).
[00140] Cultura celular: Uma quantidade de células U87 de glioma humano foi semeada em uma placa de Petri de 150 cm2 e cultivada por 48 horas para atingir 75-90% de confluência. O meio de cultura foi substituído por um meio previamente aquecido contendo uma sonda 0,5 μM (composto no 79) ou um volume equivalente de DMSO controle. As células continuaram em cultura por 3 horas.
[00141] Reticulação promovida por UV: As células foram lavadas duas vezes com solução salina com tampão fosfato (PBS) previamente resfriada. A placa de cultura celular foi colocada sobre gelo, e as células foram irradiadas com luz ultravioleta (uma lâmpada de ultravioleta com potência de 100 W, comprimento de onda 350 nm ou 315-385 nm) através da parte superior da placa por 1 hora. Alternativamente, uma quantidade mínima de PBS pré-resfriado (10 mL/150 cm2) foi adicionada à placa de cultura celular que foi então colocada sobre um irradiador de ultravioleta. A parte inferior da placa de cultura celular recebeu irradiação por 30 minutos (comprimento de onda 315-385 nm, tempo ajustado em vista da energia ultravioleta).
[00142] Preparo da solução de lise celular: As células foram dissociadas com tripsina, precipitadas por centrifugação e lavadas duas vezes com PBS. As células foram ressuspensas em tampão de lise com HEPES (Hepes 25 mM, cloreto de sódio 150 mM, cloreto de magnésio 2 mM, NP-40 0,1%, inibidor de proteases, pH 7,5), homogeneizadas por uma ultrassonicação curta (dispensável), misturadas por rotação a 4 oC por 30 minutos e, a seguir, centrifugadas a 4 oC por 10 minutos em alta velocidade. A concentração proteica do lisado celular foi medida utilizando o método de Bradford.
[00143] Pré-depuração (clearance): 1 mL de lisado celular (1-2 mg/mL) foi adicionado a microesferas de estreptavidina-agarose pré- equilibradas com tampão HEPES (Hepes 25 mM, cloreto de sódio 150 mM, cloreto de magnésio 2 mM, pH 7,5) e misturado por rotação a 4 oC por 2 horas ou durante a noite. O sobrenadante foi mantido após a centrifugação.
[00144] Reação click: 940 μL do sobrenadante, conforme descrito acima, foram adicionados a uma mistura de reação recentemente preparada (20 μL de CuSO4 50 mM, 10 μL de TBTA 10 mM recém- preparado, a saber, tris[(1-benzil-1H-1,2,3-triazol-4-il)metil]amina, 20μL de TCEP 50mM, a saber, tris(2-carboxietil)fosfina e 10μL 1mM do composto no 80) e gentilmente misturados à temperatura ambiente por 2 horas. Um volume duplo de acetona pré-resfriado a -20 oC foi adicionado para interromper a reação. O resultante foi centrifugado a 4 oC por 10 minutos em alta velocidade (13000 rpm) para precipitar a proteína. O pellet de proteína foi lavado duas vezes com 500 μL de metanol pré-esfriado e dissolvido em 1 mL de SDS 0,1%/PBS com ultrassonicação.
[00145] Purificação da proteína-alvo: A solução da proteína, novamente dissolvida conforme descrito acima, foi adicionada a microesfe- ras de estreptavidina-agarose (volume do pellet: 200 μL) equilibradas com PBS, misturada por rotação a 4 oC por 2 horas ou durante a noite e centrifugada para precipitar as microesferas de agarose. As microes- feras foram lavadas uma vez com SDS 0,1/PBS e quatro vezes com PBS, um volume de microesferas equivalente a 2x o tampão SDS de carregamento foi adicionado e ferveu-se por 15 minutos. Após centrifugação, o sobrenadante foi carregado em SDS 10%-PAGE para separação das proteínas. O gel foi então corado com 20 mL de uma solução com azul de Coomassie por 1 hora, depois descorado com o dobro 2x 500 mL de água destilada por 2x1 horas. Bandas específicas de proteínas foram cortadas do gel descorado (Figura 6, A).
[00146] Identificação das proteínas: O mapeamento de segmentos de peptídeos associado à análise de sequências por MALDI- espectrometria de massa (MALDI-MS/MS) foi utilizado para identificar a proteína purificada. As sequências de segmentos peptídicos da no banco de dados (Figura 6, B, C).
Exemplo 9: Resultados do docking molecular do composto no 50 com a proteína-alvo
[00147] O programa Discovery Studio 3.0 foi escolhido e o método de docking LibDock no programa foi utilizado para ancorar 3KLT do tetrâmero de vimentina originado no PDB (banco de dados de proteínas) (ver A na Figura 7) e o composto no 50 (B na Figura 7). Um bol- são ativo esférico de cor rosa foi construído tendo em vista o ligante ser carregado pelo próprio 3KLT, em que o raio foi definido em 10 Â; o número de pontos na rede era 1000; o método utilizado para produzir configurações foi o Best; o número máximo de configurações geradas de pequena molécula foi definido em 255; e os parâmetros restantes eram os padrões. Foram obtidas as pontuações das 10 melhores configurações para o composto no 50 (ver C na Figura 7). Em seguida, foi fornecida uma imagem mostrando a interação entre a vimentina e a configuração do composto no 50 com a pontuação mais alta (D na Figura 7). Além disso, os aminoácidos que formaram ligações de hidrogênio com o composto no 50 depois da desproteinização foram mostrados também (E na Figura 7). Como pode ser visto, apenas dois aminoácidos, Arg273 e Tyr276, formaram ligações de hidrogênio com o anel de triazina no composto no 50.

Claims (14)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a Fórmula Geral (I): ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na qual R1 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C12 alquila, C1-C6 alcoxila, C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, hidro- ximetila ou aminometila; R2 é -NR4R5, sendo que R4 e R5 são selecionados indepen-dentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila e C1-C6 haloalquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado ou insaturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com hidroxila, halogê- nio, nitro, amino ou C1-C6 alquila, em que R6 é hidrogênio, hidroxila, C1-C6 alquila, ou C1-C6 haloalquila; R3 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C12 alquila, C1-C6 alcoxila, C1-C6 alquilamino, di-C1-C6 alquilamino, hidro- ximetila, aminometila ou -CORa; Ra é OH ou NR7R8, em que R7 e R8 são selecionados inde-pendentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio ou NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S; e X é NH ou O, ligado ao grupo fenila em posição para ou meta.
2. Composto, ousalfarmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro; e/ou R2 é -NR4R5, em que R4 e R5 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila, C1-C6 haloalquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado ou insaturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com hidroxila, halogê- nio, nitro, amino ou C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio, hidroxila ou C1-C6 alquila; e/ou R3 é hidrogênio, halogênio, nitro, amino, hidroxila, C1-C6 alquila, hidroximetila, aminometila ou -CORa; sendo que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio, C1-C6 alquila opcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados a partir de halogênio ou NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 al- quinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcio- nalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por N, O e S; e/ou X é NH, ligado ao grupo fenila em posição para ou meta.
3. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que: R2 é -NR4R5, sendo que R4 e R5 são selecionados indepen-dentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6, O e S, sendo que o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com hidroxila, halogênio, nitro, amino ou C1-C6 alquila, em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila; e/ou R3 é halogênio, C1-C6 alcoxila ou -CORa; sendo que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 al- quinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O.
4. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que de que R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6 e O, sendo que o anel heterocíclico é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de um grupo constituído por hidroxila e C1-C6 alquila, em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila;
5. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro; R2 é -NR4R5, sendo que R4, R5 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de um grupo constituído por NR6 e O, sendo que o anel hete- rocíclico é opcionalmente substituído com um substituinte selecionado a partir de hidroxila e C1-C6 alquila; em que R6 é hidrogênio ou C1-C6 alquila; R3 é halogênio ou -CORa; sendo que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diazi- ridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; sendo que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, con- tendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O; e X é NH, ligado ao grupo fenila em posição para ou meta.
6. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que apresenta uma estrutura representada pela Fórmula (I-1), (I-2) ou (I-3): nas quais: na Fórmula (I-1) ou (I-2), R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro; R2 é selecionado a partir de um grupo constituído por mor- folinila, pirrolidinila, piperazinila, e azetidinila, os quais são opcionalmente substituídos com hidroxila ou C1-C6 alquila; e R3 é halogênio ou CORa; sendo que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diazi- ridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; sendo que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O; na Fórmula (I-3), R1 é H; R2 é morfolinila; Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados in-dependentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H-diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; em que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O.
7. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que, na Fórmula (I-1): R1 é hidrogênio, halogênio ou nitro; R2 é morfolinila; e R3 é halogênio ou CORa; sendo que Ra é OH ou NR7R8, sendo que R7 e R8 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por C1-C6 alquila opcionalmente substituída com NR9R10, e C1-C6 alquila substituída com 3-(C2-C6 alquinil)-3H- diaziridinila; ou R7, R8 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O, e opcionalmente substituído com C1-C6 alquila; sendo que R9 e R10 são selecionados independentemente a partir de um grupo constituído por hidrogênio e C1-C6 alquila; ou R9, R10 e o átomo de nitrogênio ligado aos dois formam um anel heterocíclico saturado de 4 a 6 membros, contendo opcionalmente um heteroátomo adicional selecionado a partir de N ou O.
8. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que quando R1 é um grupo diferente de hidrogênio, R1 e R3 estão localizados, cada qual independentemente, em posição meta ou para do grupo fenila.
9. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que quando R1 é um grupo diferente de hidrogênio, R1 está localizado em posição meta do grupo fenila, e R3 está localizado em posição para do grupo fenila;
10. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 7 a 9, caracterizado pelo fato de que o anel heterocíclico saturado é selecionado a partir de um grupo constituído por piperazinila, piperidinila, pirrolidinila e morfolinila.
11. Composto, ou sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado a partir de um grupo constituído por: (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-estirenil- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-estirenil- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(3-hidroxiazetidin-1-il)-6-estirenil- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-cloroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-cloroestire- nil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(4-cloroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(4-cloroestire- nil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(3-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(4-cloroestire- nil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(4-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(4-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(3-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(4-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-nitro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-nitro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-dimetilamino-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(pirrolidin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-(4-(3-hidroxiazetidin-1-il)-6-(3-nitro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5-tri- azinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-estirenil- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-cloroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-cloro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(morfolin-1-il)-6-(3-nitroestirenil)- 1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(3-(4-(4-metilpiperazin-1-il)-6-(3-nitro- estirenil)-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-N,N-dimetil-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5-tri- azinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida; (E)-1-(4-((4-metilpiperidin-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolin- 1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-1-(4-((4-metilpiperazin-1-il)formil)fenil)-3-(4-(4-(morfolin- 1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia; (E)-N-(2-(dimetilamino)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-esti- renil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida; (E)-N-(2-(dietilamino)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-esti- renil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida; (E)-N-(3-(dimetilamino)propil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6- estirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida; (E)-N-(2-(pirrolidin-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-es- tirenil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida; (E)-N-(2-(piperidin-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-esti- renil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida; (E)-N-(2-(morfolin-1-il)etil)-4-(3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-esti- renil-1,3,5-triazinil-2-amino)fenil)ureia)benzamida; (E)-1-(4-metoxifenil)-3-(4-((4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazin-2-il)oxo)fenil)ureia; (E)-1-(4-clorofenil)-3-(4-((4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazin-2-il)oxo)fenil)ureia; (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-((4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazin-2-il)oxo)fenil)ureia; (E)-N-(2-(3-(1-butin-4-il)-3H-diazirin-3-il)etil)-4-(3-(4-((4- (morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5-triazin-2-il)amino)fenil)ureia)benzamida; e (E)-1-(4-carboxifenil)-3-(4-(4-(morfolin-1-il)-6-estirenil-1,3,5- triazinil-2-amino)fenil)ureia.
12. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende o composto, ou sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
13. Uso do composto, ou do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um fármaco para tratamento ou prevenção de câncer de cólon, câncer de pâncreas, câncer de ovário, câncer gástrico, câncer de mama, câncer de tireoide, câncer de fígado, câncer de rim, câncer de pulmão, câncer de próstata, sarcoma, glioma, leucemia e mieloma múltiplo.
14. Uso do composto, ou do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um fármaco para di-agnosticar, tratar ou prevenir aterosclerose.
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