ES2420514A1

ES2420514A1 - Formulaciones y extractos de Erica erigena para luchar contra el envejecimiento cutáneo

Info

Publication number: ES2420514A1
Application number: ES201200171A
Authority: ES
Inventors: Ana María MARTÍNEZ MORÁN
Original assignee: Caroi Line Cosmetica S L; Caroi'line Cosmetica Sl
Current assignee: Caroi Line Cosmetica S L; Caroi'line Cosmetica Sl
Priority date: 2012-02-22
Filing date: 2012-02-22
Publication date: 2013-08-23
Anticipated expiration: 2032-02-22
Also published as: ES2420514B1

Abstract

Formulaciones y extractos de Erica erigena para luchar contra el envejecimiento cutáneo. Extractos de Erica erigena, procedimiento de obtención y su uso cosmético, farmacéutico y/o alimentario como antioxidantes y/o antirradicalarios y/o filtros UV (ultravioleta) y/o estimuladores fibrobásticos. Extractos obtenidos a partir de hojas, raíces, tallos y flores secos y/o congelados, molidos y tamizados, extracción con agua, y/o alcoholes, evaporación de este disolvente posterior extracción con agua y/o glicoles del extracto seco y filtración; y su uso cosmético, farmacéutico y/o alimentario, para el cuidado de la piel y/o el cabello, como antioxidantes o inhibidores de radicales, como agentes para combatir el envejecimiento, protectores solares o estimuladores fibroblásticos. Formulaciones cosméticas y/o dermatológicas que contienen al menos un extracto vegetal de Erica erigena, capaces de prevenir y/o luchar contra el envejecimiento cutáneo, como antioxidantes o inhibidores de radicales, protectores solares o estimuladores fibroblásticos.

Description

FORMULACIONES Y EXTRACTOS DE ERICA ERIGENA PARA LUCHAR CONTRA EL ENVEJECIMIENTO CUTÁNEO.

OBJETO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se engloba dentro del campo técnico de los extractos vegetales de Erica erigena, y su obtención para su uso cosmético, farmacéutico y/o alimentario como antioxidantes y/o antirradicalarios y/o filtros UV (ultravioleta) y/o estimiladores fibroblásticos. La presente invención se refiere también a nuevas formulaciones cosméticas y/o dermatológicas que contienen al menos un extracto vegetal de Erica erigena, capaces de prevenir y/o luchar contra el envejecimiento cutáneo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

A principios del siglo XX Mulliken investigó la reactividad fotolumínica demostrando que durante el proceso de peroxidación y fotoexcitación se formaba un estado excitado del oxígeno (oxígeno singlete: 10"2). El desarrollo de estas investigaciones llevó a la introducción del término de especies reactivas de oxígeno (ERO) y de radicales libres de oxígeno (RLO) en el campo de la biología y a la demostración de que estas especies radicalarias eran las responsables de los efectos tóxicos del oxígeno.

Por lo tanto, dado que los ERO/RLO son especies que se generan de forma continuada como productos de la utilización celular del 02, en los organismos aerobios se han desarrollado estrategias biológicas para desactivarlos, como el sistema enzimático superóxido dismutasa, glutatión peroxidasa o catalasa.

Con frecuencia, estos mecanismos básicos de defensa no son suficientes para eliminar todas las especies radicalarias generadas de forma endógena (respiración celular y otros procesos fisiológicos) o las de origen exógeno (radiaciones, polución ambiental, fármacos, tóxicos) que desde el entorno inciden en el organismo. La pérdida de equilibrio entre el nivel de prooxidación y el tono antioxidante de un órgano o tejido puede producir daño celular y,

secundariamente, condicionar la aparición de estados de enfermedad. Se define

el estrés oxidativo como la situación de daño celular que resulta cuando la

generación y/o incidencia exógena de RLO supera la capacidad de los diferentes

mecanismos fisiológicos del organismo para prevenir o interceptar su

5: acumulación.

Además de los mecanismos de defensa enzimáticos a lo largo de la evolución

biológica, los organismos han desarrollado la capacidad de sintetizar moléculas

con actividad antioxidante: ubiquinona, glutatión, ceruloplasmina, transferina y

ácido úrico en mamíferos; y compuestos como ácido ascórbico (vitamina C), a

lO: tocoferol (vitamina E), ¡3-caroteno (pro-vitamina A), diversos flavonoides y otros

compuestos fenólicos en el caso de los vegetales. Así, es bien conocida la

relación entre el contenido fenólico de los extractos vegetales y su actividad

antioxidante [Y. S. Velioglu et al., Journal of Agricultura/ and Food Chemistry;

1998, 46 (10), 4113-4117].

15: Los antioxidantes naturales además de proteger al organismo del daño

producido por los radicales libres, responsables de las enfermedades

degenerativas como el cáncer, arterioesclerosis, artritis y procesos

neurodegenerativos y de envejecimiento; pueden presentar actividad

antibactericida, antivírica, antimutagénica, antiúlcera o anticarlogénica.

20: Además, si los antioxidantes naturales absorben radiación ultravioleta pueden

ser empleados como filtros solares [EP0781544B1]. La radiación UV (ultravioleta)

puede ser clasificada en UV-C (longitud de onda menor de 280 nm); UV-B

(longitud de onda entre 280 nm y 320 nm) y UV-A (longitud de onda entre 320 nm

y 400 nm). De estas radiaciones ultravioletas, la más letal es la radiación UV-C,

25: aunque la mayoría de la misma es absorbida por el ozono. Por ello, las que

pueden tener mayor influencia sobre la piel son las radiaciones UV-A y UV-B.

La piel es muy sensible al estrés oxidativo pudiendo éste afectar al

funcionamiento de los fibroblástos cuya función es la síntesis y mantenimiento de

la matriz extracelular, imprescindible para mantener la integridad del tejido

30: conjuntivo, produciendo: colágeno, sustancia fundamental y proteínas fibrosas,

como fibronectina y la laminina, y fibras elásticas, formadas por elastina

predominantemente y otras proteínas como fibrillina.

El envejecimiento cutáneo producido por la edad cronológica, alteraciones hormonales o el estrés oxidativo, produce, entre otros efectos, una disminución de la renovación celular y una alteración en el funcionamiento de los fibroblastos de la dermis, que disminuyen la síntesis de los componentes de la matriz extracelular, lo que rompe el equilibrio entre la construcción, reconstrucción y reparación de la dermis. Como consecuencia de estas alteraciones se produce una disminución del espesor de la piel, pérdida de elasticidad, flacidez y aparición de arrugas.

Es importante, por ello, el desarrollo de nuevos productos que combatan los efectos del envejecimiento, regenerando la estructura dérmica mediante la estimulación fibroblástica y, por ello también, la síntesis de colágeno.

Erica erigena (Piumbaginaceae) es una planta endémica de la Península Ibérica (España y Portugal), Irlanda y oeste de Francia.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención describe extractos de las hojas y/o flores y/o raices y/o tallos de Erica erigena su procedimiento de obtención y su uso cosmético, farmacéutico y/o alimentario, como antioxidantes y/o antirradicalarios y/o filtros UV (ultravioleta) y/o estimiladores fibroblásticos. La presente invención describe también nuevas formulaciones cosméticas y/o dermatológicas que contienen al menos un extracto vegetal de Erica erigena, capaces de prevenir y/o luchar contra el envejecimiento cutáneo.

Se describe, entre otras cosas, un nuevo procedimiento para la obtención de extractos de Erica erigena a partir de hojas y/o flores y/o raices y/o tallos, que permite emplear disolventes inocuos, como son agua, glicoles y otros alcoholes, de bajo coste y operación segura para obtener un producto estable, fácil de manejar, de adicionar a diferentes productos y que puede ser empleado como ingrediente de la industria cosmética. También describe dichos extractos de Erica erigena obtenidos por el procedimiento descrito, caracterizados por presentar, entre otros, elevado contenido fenólico y/o relevantes propiedades antioxidantes y/o antirradicalarias y/o de protección UV (ultravioleta) y/o de estimulación fibroblástica, que hace que puedan ser utilizados para el cuidado de la piel y/o el cabello, por ejemplo como antioxidantes o inhibidores de radicales, como agentes para combatir el envejecimiento, protectores solares o estimiladores fibroblásticos. Los extractos presentan frecuentemente mayor actividad antioxidante que antioxidantes sintéticos como el BHT (butirohidroxitolueno) o el BHA (butirohidroxianisol).

La presente invención se refiere a nuevas formulaciones cosméticas y/o dermatológicas que contienen al menos un extracto vegetal de Erica erigena, capaces de luchar contra el envejecimiento cutáneo por actividad antioxidante y/o antirradicalaria y/o de protección UV (ultravioleta) y/o de estimulación sobre los fibroblastos dérmicos humanos.

Las formulaciones cosméticas objeto de la presente invención contienen al menos un extracto de Erica erigena, preferentemente un extracto hidosoluble y, más concretamente hidroglicólico.

Las formulaciones cosméticas objeto de la presente invención contienen:

-: del orden del 01-10% en peso de extracto de Erica erigena.

Las formulaciones cosméticas objeto de la presente invención puede incluir uno

o varios componentes de uso conocido clásico en las formulaciones cosméticas y dermatológicas, por ejemplo y sin ser limitantes, colorantes, conservantes, perfumes, aceites, ceras, vitaminas, filtros UV (ultravioleta), tensoactivos, emulsionantes, glicoles, solventes y reguladores de pH, etc Según los

, conocimientos del estado de la técnica, se sabrá que agentes de formulación se pueden añadir a las formulaciones de la invención y en que cantidades.

Las formulaciones según la invención pueden presentarse en cualquier forma conocida en el ámbito de la cosmetogía y la dermatología.

La presente invención se refiere también a la utilización de formulaciones según la invención para prevenir y/o luchar contra el envejecimiento cutáneo mediante actividad antioxidante y/o antirradicalaria y/o de protección UV (ultravioleta) y/o estimulación fibroblástica.

La presente invención se refiere también a la utilización de extractos de Erica erigena, para la preparación de formulaciones cosméticas y/o dermatológicas para prevenir y/o luchar contra el envejecimiento cutáneo mediante actividad antioxidante y/o antirradicalaria y/o de protección UV (ultravioleta) y/o de estimulación fibroblástica.

Procedimiento de obtención de los extractos de Erica erigena

i) Preparación de las hojas, flores, raíces y tallos de Erica erigena:

Se emplean las hojas, flores, raices y/o tallos secos o congelados de Erica erigena preferentemente molidos, liofilizados y/o tamizados. Se someten a un molido, preferentemente en un molino de aspas, se liofilizan y se tamizan, preferentemente a tamaño de partícula de 0,6 mm. aproximadamente.

ii) Extracción de hojas, flores, raíces y/o tallos de Erica erigena con disolventes:

Las hojas, flores, raices y/o tallos secos o congelados de Erica erigena, preferentemente molidos, liofilizados y/o tamizados, se someten a un proceso de extracción sólido-líquido en continuo con disolventes.

Se emplean relaciones líquido:sólido elevadas, preferentemente de 30 g/g.

Como disolvente a extractar se emplean agua y/o disolventes hidroalcohólicos y/o alcohólicos. Se elige ventajosamente alcoholes C1 a C4 y, preferentemente, etanol o metanol. Entre ellos, se elige ventajosamente una mezcla etanol/agua

1:1.

La temperatura de la extracción es la de reflujo del disolvente o mezcla de disolventes de extracción y está en el rango de 60-120 oc y, preferentemente, entre 85-95 °C.

El tiempo de extracción está en el intervalo de 1 a 3 horas.

El proceso extractivo se realiza protegido de la luz para evitar posibles alteraciones.

El rendimiento del proceso extractivo oscila entre el 30% y el 55% (g/g).

iii) Obtención de Jos extractos secos y acuosos de Erica erigena:

Los extractos acuosos, alcohólicos o hidroalcohólicos obtenidos se someten a evaporación a vacío para eliminar el disolvente y obtener los extractos secos de E rica erigen a.

El agua se elimina mediante evaporación a vacío, preferentemente mediante liofilización.

Si, para la obtención de los extractos líquidos de la etapa iv), se emplean como disolventes de extracción agua o hidroglicoles, en algún caso puede eliminarse a vacío sólo el disolvente alcohólico de la etapa ii) y no eliminar el agua, obteniéndose extractos acuosos de Erica erigena.

iv) Obtención de los extractos líquidos de Erica erigena:

Los extractos secos o los extractos acuosos de Erica erigena obtenidos en la etapa iii), se someten a un nuevo proceso extractivo sólido-líquido en continuo con disolventes, preferentemente mediante maceración con agitación.

Se emplean relaciones líquido:sólido elevadas, preferentemente de 99 g/g.

Como disolvente a extractar se emplea agua y/o disoluciones hidroglicólicas y/o glicólicas. Se elige ventajosamente glicoles C2 a C6. Entre estos glicoles se prefiere utilizar propilenglicol y butilenglicol. Entre ellos, se elige ventajosamente

una mezcla butilenglicollagua 1:1.

La temperatura aproximadamente.: de extracción es la temperatura ambiente, 20 oc

El tiempo de extracción es de 1 a 7 días.

El proceso alteraciones.: extractivo se realiza protegido de la luz para evitar posibles

v) Obtención de los extractos líquidos filtrados de Erica erigena:

Los sólidos de los extractos líquidos obtenidos en la etapa iv), se separan por filtración, preferentemente mediante placa porosa del n° 3 ó 4, papel de filtro de gramaje 73 g/m2 o algodón, obteniéndose los extractos líquidos filtrados de Erica erigena.

Estos extractos se almacenan refrigerados, preferentemente a 4 °C, y protegidos de la luz para evitar posibles alteraciones.

Caracterización de los extractos de Erica erigena

i) Determinación de la absorción UV (ultravioleta) de los extractos de Erica erigena:

La radiación UV (ultravioleta) se clasifica en UV-C (longitud de onda menor de 280 nm); UV-B (longitud de onda entre 280 nm y 320 nm) y UV-A (longitud de onda entre 320 nm y 400 nm), por ello, si un producto absorbe radiación entre 250 a 400 nm puede ser empleado como filtro solar.

Se mide la absorbancia (Abs) de los extractos de Erica erigena obtenidos según el procedimiento de extracción, a la concentración de 100 ppm en agua destilada entre las longitudes de onda de 250 a 400 nm frente a un blanco de agua destilada. Todos presentan máximos de absorción en la región UV (ultravioleta).

Los extractos de Erica erigena a la longitud de onda de 280 nm presentan Abs > 0,500; a 320 nm presentan Abs > 0,250 y a 400 nm presentan Abs > O, 1OO.

ii) Determinación del contenido fenólico de los extractos de Erica erigena:

Los compuestos fenólicos presentan una elevada actividad antioxidante [Y S. Velioglu, op. cited (1998)]. Por ello, se determina el contenido fenólico de los extractos de Erica erigena según el método de Folin Ciocalteu's [A. Escarpa et al., Analytica Chimica Acta; 2001, 427(1), 119-127]. Se mide la absorbancia a 765 nm de una disolución de 0,5 mL del extracto antioxidante, 3,75 mL de agua destilada, 0,25 mL del reactivo de Folin Ciocalteau's (1: 1 con agua destilada) y 0,5 mL de Na2C03 al 1 O %; después de 1 hora a temperatura ambiente, frente a un blanco sin extracto. Se determina el contenido fenólico del extracto comparando la absorbancia con un recta patrón de ácido gálico (0-1 00 ppm).

Los extractos de Erica erigena obtenidos según el procedimiento de extracción, presentan, según el procedimiento descrito, un alto contenido fenólico, entre 2535%.

iii) Determinación de la actividad captadora del radical a, a-difenil-{3picri/hidraci/o (DPPtr) y de su equivalencia en BHT y BHA de los extractos líquidos filtrados de Erica erigena:

Para medir la actividad captadora del radical a,a-difenil-¡3-picrilhidracilo (DPPH") [/. Parejo et al., Journal of Agricultura/ and Food Chemistry; 2002, 50, 6882-6890], se mide la disminución de la absorbancia a 515 nm, después de 16 minutos, de una disolución de 2 mL de DPPH" 6 10-5 M en metanol y 50 J.!L del extracto antioxidante. El porcentaje de inhibición se calcula según la siguiente fórmula:

PI (Porcentaje de Inhibición) PI(%): [(Abs t=Omin-Abs t=16 min)/Abs t=Omin)]*100

Se mide la IC50 o concentración que inhibe el 50% del radical DPPH·.

Los extractos de Erica erigena, obtenidos según el procedimiento de extracción, presentan una ICsoentre 200 a 300 ppm.

La IC50 del BHA, medida según el mismo procedimiento, es de 240 ppm y la del BHT de 2790 ppm.

iv) Determinación de la actividad antioxidante o de reducción del hierro (FRAP) y de su equivalencia en ácido ascórbico o vitamina C de los extractos líquidos filtrados Erica erigena:

Se determina el poder reductor del hierro o actividad antioxidante de los extractos de Erica erigena según el método FRAP [Benzie JFF et al. Anal Biochem 1996; 239: 70-76]. Se mide la capacidad de reducir el complejo de Fe (111)/tripiridiltriazine y las actividades reductivas de los extractos se expresan como equivalentes nMde ácido ascórbico (AscAE)/g de extracto seco. A O, 1 mL del extracto antioxidante se le añaden 3 mL del reactivo FRAP se deja a temperatura ambiente durante 6 minutos. Se mide la absorbancia a 593 nm y se comparan los resultados con una recta patrón de ácido ascórbico o vitamina C (0, 1-1 mM).

Los extractos de Erica erigena obtenidos según el procedimiento de extracción, presentan a una concentración de 100 ppm un poder reductor del hierro equivalente a entre O, 150 mM a 0,250 mM en ácido ascórbico o vitamina C.

v) Determinación de la actividad inhibitoria del radical ABTs•+ y de su equivalente en Trolox, de Jos extractos líquidos filtrados de Erica erigena:

Para medir la capacidad de inhibición del radical ABTs•+ y determinar su equivalente en Trolox (equivalente soluble de la vitamina E o a-tocoferol) [R. Re et al., Free Radical Biology and Medicine; 1999, 26, 1231-1237], se prepara un tampón de PBS pH 7,4 (8,0 g NaCI, 0,2 g KH2P04, 1,15 g Na2HP04, 0,2 g KCI, 0,2 g azida sódica). Se prepara el reactivo de TEAC (38,4 mg ABTs•+ 7 mM, 6,62 mg persulfato potásico 2,45 mM en 10 mL de tampón PBS). Se agita

durante 16 horas en ausencia de luz. Se lee la absorbancia a 734 nm. Se diluye el reactivo hasta que presente una absorbancia próxima a 0,7. Se añaden 20 ¡..tL del extracto antioxidante a 2 ml del reactivo. Se calienta a 30 °C y se mide la

absorbancia 734 nm a los 1 O minutos. Se hace un control con etanol y un blanco con el tampón PBS. Se compara la absorbancia con los valores de una recta patrón con Trolox (0, 1 a 1 mM en agua destilada).

Los extractos líquidos de Erica erigena, obtenidos según el procedimiento de extracción, presentan una capacidad de inhibición del radical ABTs•+ entre 10-20 gr de Trolox/L de extracto.

vi) Determinación de la actividad estimuladora celular sobre una línea normal fibroblástica de piel humana de Jos extractos de Erica erigena:

Se mide la capacidad de estimulación celular sobre una línea normal fibroblástica de piel humana (HSF) según el método de contaje celular con Azul Tripano [Paduch et al., Journal of Ethnopharmaco/ogy; 2007, 110, 69-75]. Como control negativo las células de HSF son suspendidas en 1 mL de un medio de cultivo ligeramente enriquecido con un 2,5% de Suero de Ternero Fetal (STF). Como control positivo las células de HSF son suspendidas en 1 mL de un medio de cultivo completo con un 10% de Suero de Ternero Fetal (STF). Por cada tiempo de contacto y por cada concentración, se expresan los resultados en porcentaje de ganancia celular en referencia al testigo negativo determinado según la ecuación:

0, G . l ( células viables con el extracto )

;~o anancza ce u ar 1 = x 100

células viables con el testigo negativo

Los extractos líquidos de Erica erigena, obtenidos según el procedimiento de extracción, presentan un efecto positivo en la estimulación celular sobre una línea normal fibroblástica de piel humana, con un aumento en el porcentaje de ganancia celular en referencia al testigo negativo de entre el +0,4% al +33, 1%, para una gama de concentraciones de los extractos de entre 93,75 ¡.Jg/mL y 750,0 ¡.Jg/mL y después de un tiempo de contacto de entre 24 a 168 horas.

Otra de las ventajas características de la invención aparecerán por la lectura de los ejemplos que siguen a continuación, que son dados de manera ilustrativa de la invención y no deben ser entendidos como limitativos de la misma.

EJEMPLOS

Ejemplo 1:

Preparación del extracto seco hidrobutilenglicólico de las hojas de Erica erigena.

Las hojas congeladas con N2 líquido de Erica erigena, molidas y liofilizadas, se someten a un proceso extractivo sólido-líquido en continuo, con una relación líquido:sólido de 30 g/g, con una mezcla etanol/agua 1:1, a la temperatura de reflujo del disolvente (85-95 °C), durante 3 horas y protegido de la luz. Se evapora hasta sequedad, a vacío, el disolvente del extracto obtenido. El rendimiento de la extracción es del 53% (g/g).

-: Se midió la absorbancia de este extracto seco obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 1 a la concentración de 100 ppm en agua destilada a las longitudes de onda de 280 nm (Abs = 0,689), 320 nm (Abs = 0,299) y 400 nm (Abs = 0,132) frente a un blanco de agua destilada.

-: Contenido fenólico según el método de Folin Ciocalteu·s [A. Escarpa, op. cited (2001)]. Se mide la absorbancia a 765 nm de una disolución de 0,5 ml del extracto antioxidante, 3,75 ml de agua destilada, 0,25 ml del reactivo de Folin Ciocalteau·s (1 :1 con agua destilada) y 0,5 ml de Na2C03 al 10 %; después de 1 hora a temperatura ambiente, frente a un blanco sin extracto. Se determina el contenido fenólico del extracto comparando la absorbancia con un recta patrón de ácido gálico (0-100 ppm).

El extracto seco obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 1 presenta un contenido fenólico del 28%.

-: Actividad captadora del radical a,a-difenil-13-picrilhidracilo (DPPH•) [1. Parejo, op. cited (2002)]. Se mide la disminución de la absorbancia a 515 nm, después de 16 minutos, de una disolución de 2 ml de DPPH• 6 10-5 M en metano! y 50 f.I.L del extracto antioxidante. El porcentaje de inhibición se calcula según la siguiente fórmula:

Se midió la ICso o concentración que inhibe el 50% del radical DPPW.

El extracto seco obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 1 presenta una ICso =292 ppm. La actividad inhibitoria del BHA, medida según el mismo procedimiento, es mayor, pues presenta una ICso =240 ppm y la actividad inhibitoria del BHT es menor con una ICso = 2790 ppm.

-: Actividad antioxidante o de reducción del hierro (FRAP) [I.F.F. Benzie, op. cited (1996)]. Se mide la capacidad de reducir el complejo de Fe (111)/tripiridiltriazine y las actividades reductivas de los extractos se expresan como equivalentes nMde ácido ascórbico (AscAE)/g de extracto seco. A O, 1 ml del extracto antioxidante se le añaden 3 ml del reactivo FRAP se deja a temperatura ambiente durante 6 minutos. Se mide la absorbancia a 593 nm y se comparan los resultados con una recta patrón de ácido ascórbico o vitamina C (0, 1-1 mM).

El extracto seco obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 1, presenta a una concentración de 100 ppm un poder reductor del hierro equivalente a O, 180 mM en ácido ascórbico o vitamina C.

Ejemplo 2:

Preparación del extracto hidrobutilenglicó/ico de las hojas de Erica erigena.

El extracto seco de Erica erigena obtenido según el procedimiento descrito en el ejemplo 1 se somete a un nuevo proceso extractivo sólido-líquido en continuo, mediante maceración con agitación, con una relación líquido:sólido de 99 g/g, a temperatura ambiente y protegido de la luz, durante 7 días con una mezcla butilenglicol/agua 1:1. El extracto líquido de Erica erigena obtenido se filtra, mediante algodón, y el producto final, el extracto líquido filtrado de Erica erigena, se almacena refrigerado a 4 °C y protegido de la luz para evitar su alteración.

-: Se midió la absorbancia de este extracto líquido a la concentración de 100 ppm en agua destilada a las longitudes de onda de 280 nm (Abs =O, 701 ), 320 nm (Abs = 0,313) y 400 nm (Abs =O, 132) frente a un blanco de agua destilada.

-Contenido fenólico según el método de Folin Ciocalteu·s [A. Escarpa, op. cited (2001)]. Se mide la absorbancia a 765 nm de una disolución de 0,5 ml del extracto antioxidante, 3,75 ml de agua destilada, 0,25 ml del reactivo de Folin Ciocalteau's (1:1 con agua destilada) y 0,5 ml de Na2C03 al10 %; después de 1 hora a temperatura ambiente, frente a un blanco sin extracto. Se determina el contenido fenólico del extracto comparando la absorbancia con un recta patrón de ácido gálico (0-100 ppm).

El extracto líquido obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 2 presenta un contenido fenólico del 32%.

-: Actividad captadora del radical a,a-difenil-¡3-picrilhidracilo (DPPW) [/. Parejo, op. cited (2002)]. Se mide la disminución de la absorbancia a 515 nm, después de 16 minutos, de una disolución de 2 ml de DPPH• 6 1 o-s M en metanol y 50 11L del extracto antioxidante. El porcentaje de inhibición se calcula según la siguiente fórmula:

Se midió la ICso o concentración que inhibe el 50% del radical DPPW.

El extracto líquido obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 2 presenta una ICso = 239 ppm. La actividad inhibitoria del BHA, medida según el mismo procedimiento, es menor, pues presenta una ICso = 240 ppm, al igual que la del BHT con una ICso = 2790 ppm.

-: Actividad antioxidante o de reducción del hierro (FRAP) [/.F.F. Benzie, op. cited (1996)]. Se mide la capacidad de reducir el complejo de Fe (111)/tripiridiltriazine y las actividades reductivas de los extractos se expresan como equivalentes nMde ácido ascórbico (AscAE)/g de extracto seco. A O, 1 ml del extracto antioxidante se le añaden 3 ml del reactivo FRAP se deja a temperatura ambiente durante 6 minutos. Se mide la absorbancia a 593 nm y se comparan los resultados con una recta patrón de ácido ascórbico o vitamina C (O, 1-1 mM).

El extracto líquido obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 2, presenta a una concentración de 1 00 ppm un poder reductor del hierro equivalente a 0,202 mM en ácido ascórbico o vitamina C.

-Actividad capacidad de inhibición del radical ABTs•+ y determinación de su equivalente en Trolox (equivalente soluble de la vitamina E) [R. Re, op. cited (1999)]. Se prepara un tampón de PBS pH 7,4 (8,0 g NaCI, 0,2 g KH2P04, 1,15 g Na2HP04, 0,2 g KCI, 0,2 g azida sódica). Se prepara el reactivo TEAC (38,4 mg ABTs•+ 7 mM, 6,62 mg persulfato potásico 2,45 mM en 1 O ml de tampón PBS). Se agita durante 16 horas en ausencia de luz. Se lee la absorbancia a 734 nm. Se

diluye el reactivo hasta que presente una absorbancia próxima a O, 7. Se añaden 20 J..ll del extracto antioxidante a 2 ml del reactivo. Se calienta a 30 °C y se mide la absorbancia 734 nm a los 1 O minutos. Se hace un control con etanol y un blanco con el tampón PBS. Se compara la absorbancia con los valores de una

5 recta patrón con Trolox (0, 1 a 1 mM en agua destilada).

El extracto líquido obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 2 presenta una capacidad de inhibición del radical ABTs•+ de 10,40 gr de Trolox/L de extracto.

-: Actividad estimuladora celular sobre una línea normal fibroblástica de piel

10 humana según el método de contaje celular con Azul Tripano [Paduch et al., Journal of Ethnopharrnacology; 2007, 110, 69-75]. Se mide la capacidad de estimulación celular sobre una línea normal fibroblástica de piel humana (HSF) Como control negativo las células de HSF son suspendidas en 1 ml de un medio de cultivo ligeramente enriquecido con un 2,5% de Suero de Ternero Fetal (STF).

15 Como control positivo las células de HSF son suspendidas en 1 ml de un medio de cultivo completo con un 10% de Suero de Ternero Fetal (STF). Por cada tiempo de contacto y por cada concentración, se expresan los resultados en porcentaje de ganancia celular en referencia al testigo negativo.

El extracto líquido obtenido según el procedimiento descrito en este ejemplo 2 20 presenta un aumento en el porcentaje de ganancia celular mostrado en la siguiente tabla 1:

% Ganancia celular del extracto de Erica erigena (Ee2)

Concentration Ee2(f.l.g/ml): 24h 48h 72h 168h

1500: <0.0% <0.0% <0.0% <0.0%

750: +0,6% +9,9% +10,3% +6,4%

375: +0,4% +18,8% +16,0% +16,3%

187,5: +3,5% +17,3% +19,3% +21,1%

93,75: +3,3% +17,8% +25,9% +33,1%

% Ganancia celular del Control Positivo (1 0% FCS)

24h: 48h 72h 168h

+13,9%: +34, 1% +49,4% +103,9%

Tabla 1: Porcentaje de ganancia celular del extracto de Erica erigena Ee2.

Ejemplo 3: Ejemplo de formulación según la invención: Crema

Escualano 38%

Cera de oliva 5%

5 Extracto de Erica erigena 2% Emulsionante 10% Glicerina 5% Agua purificada 40%

10 Ejemplo 4: Ejemplo de formulación según la invención: Gel Lauril éter sulfato sódico 40% Extracto de Erica erigena 2% Dietanolamida de coco 5%

15 Agua purificada 53%

Claims

REIVINDICACIONES

1. Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena caracterizado porque comprende las siguientes etapas:

i) Secado o congelación, molienda, liofilización y/o tamización de hojas, flores, raices y/o tallos de Erica erigena.

ii) Extracción sólido-líquido en continuo de las hojas, flores, raices y/o tallos secos o congelados, molidos, liofilizados y/o tamizados de Erica erigena con disolventes acuosos, alcohólicos o hidroalcohólicos.

iii) Evaporación hasta sequedad del disolvente de la extracción de la etapa ii) para la obtención de los extractos secos de Erica erigena; o evaporación del disolvente alcohólico de la etapa ii) para la obtención de los extractos acuosos de Erica erigena.

iv) Extracción sólido-líquido en continuo de los extractos secos o acuosos de la etapa iii) con disolventes acuosos, alcohólicos, glicólicos o hidroglicólicos para la obtención de los extractos líquidos de Erica erigena.

v) Filtración de los extractos líquidos de la etapa iv) para la obtención de los extractos líquidos filtrados de Erica erigena y almacenamiento en frío y ausencia de luz.
2.

Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena, según la reivindicación 1, etapa i), caracterizado porque se emplean las hojas secas molidas en un molino de aspas, y se tamizan a tamaño de partícula de 0,6 mm. aproximadamente.
3.

Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena, según la reivindicación 1, etapa ii), caracterizado porque el proceso de extracción sólido-líquido en continuo con disolventes; se emplean relaciones líquido:sólido elevadas, preferentemente de 30 g/g; el disolvente es agua, o un alcohol C1 a C4, preferentemente metanol o etanol, o una mezcla metanol/agua, o etanol/agua; la temperatura de la extracción es la de reflujo del disolvente o mezcla de disolventes de extracción y está en el rango de 60-120 oC; el tiempo de extracción está en el intervalo de 1-3 horas; y el proceso extractivo se realiza protegido de la luz.
4.

Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena, según la reivindicación 3, caracterizado porque el disolvente de extracción es una mezcla etanol/agua 1: 1; Y la temperatura de la extracción es la de reflujo de la mezcla de disolventes y está en el rango de 85-95 oC.
5.

Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena, según la reivindicación 1, etapa ¡ji), caracterizado porque la evaporación hasta sequedad del disolvente para la obtención de los extractos secos de Erica erigena, se realiza a vacío y el agua se elimina, preferentemente, mediante liofilización.
6.

Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena, según la reivindicación 1, etapa iii), caracterizado porque la evaporación del disolvente alcohólico para la obtención de los extractos acuosos de Erica erigena, se realiza a vacío.
7.

Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena, según la reivindicación 1, etapa iv), caracterizado porque el proceso de extracción sólido-líquido en continuo con disolventes se realiza mediante maceración con agitación; se emplean relaciones líquido:sólido elevadas, preferentemente de 99 g/g; el disolvente es agua, o un glicol C2 a Ce, preferentemente propilenglicol o butilenglicol, o una mezcla propilenglicol/agua, o butilenglicol/agua; la temperatura de extracción es la temperatura ambiente, 20 oC aproximadamente; el tiempo de la extracción es de 1 a 7 días y se realiza protegido de la luz.
8.

Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena, según la reivindicación 7, caracterizado porque el disolvente de extracción es una mezcla butilenglicol/agua 1: 1.
9.

Procedimiento de obtención de extractos de Erica erigena, según la reivindicación 1, etapa v), caracterizado porque se filtran los extractos líquidos obtenidos en la etapa iv), preferentemente mediante placa porosa del nO 3 ó 4, papel de filtro de gramaje 73 g/m2 o algodón, obteniéndose los extractos líquidos filtrados de Erica erigena se almacenan en frío, preferentemente a 4 oC, y protegidos de la luz.
10.

Extractos secos de Erica erigena obtenidos según las revindicaciones 1 a 5.
11.

Extractos líquidos de Erica erigena obtenidos según las revindicaciones 1 a
9.
12.

Extractos de Erica erigena, según las reivindicación 10 Y 11, caracterizados por presentar absorción ultravioleta entre las longitudes de onda de 250 nm a 400 nm; por poseer un alto contenido fenólico; por su capacidad de inhibición del radical DPPW; por su capacidad de inhibición del radical ABTSe+; por su capacidad antioxidante o de reducción del hierro y por su capacidad de estimulación celular sobre una linea normal fibroblástica de piel humana.
13.

Extractos de Erica erigena, según la reivindicación 12, caracterizados por presentar a la concentración de 100 ppm a las longitudes de onda de de 280 nm presentan Abs > 0,500; a 320 nm presentan Abs > 0,250 Y a 400 nm presentan Abs > 0,100 por poseer un contenido fenólico entre 25-35%; por presentar una leso entre 200 a 300 ppm de inhibición del radical DPPHe; por su capacidad antioxidante o de reducción del hierro a 100 ppm equivalente a entre 0,150 mM a 0,250 mM en ácido ascórbico o vitamina e; por presenta una capacidad de inhibición del radical ABTSe + de entre 10-20 gr de TroloxlL de extracto y por su capacidad de estimulación celular sobre una linea normal fibroblástica de piel humana de entre el +0,4% al +33,1%, para una gama de concentraciones de los extractos de entre 93,75 IJg/mL y 750,0 IJg/mL y después de un tiempo de contacto de entre 24 a 168 horas.
14.

Extracto seco de las hojas de Erica erigena, según la reivindicación 13, caracterizado por presentar a la concentración de 100 ppm a las longitudes de onda de 280 nm (Abs =0,689), 320 nm (Abs =0,299) Y 400 nm (Abs =0,132); por poseer un contenido fenólico del 28%; por presentar una leso =292 ppm de inhibición del radical DPPHe y por su capacidad antioxidante o de reducción del hierro equivalente a 0,180 mM en ácido ascórbico o vitamina e.
15.

Extracto líquido filtrado de las hojas de Erica erigena, según la reivindicación 13, caracterizado por presentar a la concentración de 100 ppm a las longitudes de onda de 280 nm (Abs =0,701), 320 nm (Abs =0,313) Y 400 nm (Abs =0,132); por poseer un contenido fenólico del 32%; por presentar una leso = 239 ppm de inhibición del radical DPPHe, por su capacidad antioxidante o de reducción del hierro equivalente a 0,202 mM en ácido ascórbico o vitamina e; por presenta una capacidad de inhibición del radical ABTSe + de 10,40 gr de TroloxlL de extracto y por presentar una capacidad de estimulación celular sobre una linea

normal fibroblástica de piel humana del 33,1 % a la concentraciones de 93,75 IJg/mL y después de un tiempo de contacto de 168 horas.
16.

Uso de los extractos de Erica erigena, según las reivindicaciones 10 a 15, como agentes cosméticos para el cuidado de la piel y/o el cabello, destinados a actuar como agentes antienvejecimiento y antioxidantes, por prevenir las alteraciones derivadas de la oxidación celular o el estrés oxidativo, y por actuar como inhibidor de radicales y protector contra radiaciones ionizantes y radicales libres.
17.

Uso de los extractos de Erica erigen a , según la reivindicaciones 10 a 15, como agentes cosméticos para el cuidado de la piel y/o el cabello, destinados a actuar como absorbentes de la radiación UV (ultravioleta), lo que les aporta propiedades de filtros solares.
18.

Uso de los extractos de Erica erigena, según las reivindicaciones 10 a 15, como agentes cosméticos para el cuidado de la piel y/o el cabello, destinados a actuar como agentes antienvejecimiento, por actuar como estimuladores celulares sobre una linea normal fibroblástica de piel humana.
19.

Uso de los extractos de Erica erigena, según la reivindicaciones 10 a 15, en la industria farmacéutica y/o alimentaria como antioxidantes y/o antirradicalarios y/o protectores UV (ultravioleta) y/o estimuladores fibroblásticos.
20.

Utilización de extractos de Eriea erigena, según las reivindicaciones de 10 a 15, para la preparación de formulaciones cosméticas y/o dermatológicas para prevenir y/o luchar contra el envejecimiento cutáneo mediante actividad antioxidante y/o antirradicalaria y/o de protección UV (ultravioleta) y/o de estimulación fibroblástica.
21.

Formulaciones cosméticas y/o dermatológicas caracterizadas porque contienen al menos un extracto de Eriea erigena según las revindicaciones 10 a
15.
22.

Formulaciones cosméticas y/o dermatológicas, según la reivindicación 21, caracterizadas por presentar actividad antioxidante y/o antirradicalaria y/o de protección UV (ultravioleta) y/o de estimulación fibroblástica.
23.

Formulaciones cosméticas y/o dermatológicas, según las reivindicaciónes de 21 a 22, caracterizadas porque incluyen además uno o varios agentes de formulación o aditivos tales como colorantes, conservantes, perfumes, aceites, ceras, vitaminas, filtros UV (ultravioleta), tensoactivos, emulsionantes, glicoles, solventes y reguladores de pH.
24.

Utilización de las formulaciones cosméticas y/o dermatológicas, según las reivindicaciónes de 21 a 23, para prevenir y/o luchar contra el envejecimiento cutáneo mediante actividad antioxidante y/o antirradicalaria y/o de protección UV (ultravioleta) y/o de estimulación fibroblástica.