ES2392611T3 - Compuestos de quinoxalina macrocíclica como inhibidores de la proteasa NS3 del VHC - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable:**Fórmula**

Description

Compuestos de quinoxalina macrocíclica como inhibidores de la proteasa NS3 del VHC

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos macrocíclicos que son útiles como inhibidores de la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C (VHC), la síntesis de dichos compuestos y al uso de dichos compuestos para tratar la infección por VHC y/o reducir la probabilidad o la gravedad de la infección por VHC

Antecedentes de la invención

La infección por virus de la hepatitis C (VHC) es un problema de salud importante que conduce a enfermedad hepática crónica, tal como cirrosis y carcinoma hepatocelular en un número importante de individuos infectados.Los tratamientos actuales para la infección por VHC incluyen a inmunoterapia con interferón-α recombinante en solitario

o en combinación con el análogo de nucleósido ribavirina.

Varias enzimas codificadas por virus son supuestas dianas para intervención terapéutica, incluyendo una metaloproteasa (NS2-3), una serina proteasa (NS3), una helicasa (NS3) y una ARN polimerasa dependiente de ARN (NS5B). La proteasa NS5 se localiza en el dominio N-terminal de la proteína NS3. NS4A proporciona un cofactor para la actividad de NS3.

Los posibles tratamientos para la infección por VHC se han tratado en las diferentes referencias, incluyendo Balsano, Mini Rev. Med. Chem. 8(4):307-318, 2008, Rönn et al., Current Topics in Medicinal Chemistry 8:53.3-562, 2008, Sheldon et al., Expert Opin. Investig, Drugs 16(8):1171-1181, 2007, and De Francesco et al., Antiviral Research 58:1-16, 2003.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto macrocíclico de fórmula (I) y/o sales farmacéuticamente del mismo. El compuesto y sus sales son inhibidores de la proteasa NS3 del VHC. El compuesto y sus sales tienen aplicaciones terapéuticas y de investigación..

Por tanto, un primer aspecto de la presente invención describe un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

La presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la presente invención y procedimientos de preparar dichas composiciones farmacéuticas. También se describen procedimientos de tratar o reducir la probabilidad o gravedad de la infección por VHC.

Otras Realizaciones, aspectos y características de la presente invención se describen adicionalmente o serán evidentes a partir de la siguiente descripción, ejemplos y reivindicaciones adjuntas.

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) y/o sales farmacéuticamente aceptables del mismo. El compuesto y sus sales farmacéuticamente aceptables son útiles en la inhibición de la proteasa NS3 del VHC, el tratamiento de la infección por VHC y/o la reducción de la la probabilidad o gravedad de la infección por VHC. Aplicaciones profilácticas incluyen, por ejemplo, tratamiento tras sospecha de exposición pasada al VHC por medios tales como transfusión de sangre, intercambio de fluidos corporales, mordiscos, punciones accidentales con agujas

o exposición a la sangre de un paciente durante cirugía.

Como ingredientes de la composición farmacéutica, los compuestos y sales pueden ser el agente terapéutico primario. Cuando sea adecuado se puede combinar con otros agentes terapéuticos, incuidos, entre otros, antivirales del VHC, antiinfecciosos, inmunomoduladores, antibióticos o vacunas.

Los inhibidores de NS3 son también útiles en la preparación y ejecución de ensayos de exploración para compuestos antivirales. Por ejemplo, dichos compuestos se pueden usar para aislar mutantes enzimáticos, que son excelentes herramientas de exploración para compuestos antivirales más potentes. Además, los compuestos se pueden usar para establecer o determinar el sitio de unión de otros compuestos antivirales frente al VHC, por ejemplo, por inhibición competitiva.

Como se describe en el Ejemplo 2, el compuesto de fórmula (I) se comparó con el compuesto de los Ejemplos 110 y 118 del documento WO 2008/057209 y tiene varias ventajas.

1. Composición y procedimientos

Las diferentes realizaciones incluyen lo siguiente:

(a)

Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I) y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

(b)

La composición farmacéutica de (a), que comprende además un segundo agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste en agentes antivirales de VHC, inmunomoduladores y agentes antiinfecciosos.

(c)

La composición farmacéutica de (b), en la que el agente antiviral del VHC es un antiviral seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de la proteasa del VHC e inhibidores de polimerasa NS5B de VHC.

(d)

Una combinación farmacéutica que es (i) un compuesto de fórmula I y (ii) un segundo agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste en agentes antivirales de VHC, inmunomoduladores y agentes antiinfecciosos; en la que el compuesto de fórmula I y el segundo agente terapéutico se emplean cada uno en una cantidad que hace la combinación eficaz para inhibir la proteasa NS3 de VHC o para tratar y/o prevenir y/o reducir la probabilidad o gravedad de la infección por VHC.

(e)

La composición de (d), en la que el agente antiviral del VHC es un antiviral seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de la proteasa de VHC e inhibidores de polimerasa de NS5B del VHC.

También se describe:

(f)

Un procedimiento para inhibir la proteasa NS3 de VHC en un sujeto que lo necesite que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula I.

(g)

Un procedimiento para tratar una infección por VHC y/o reducir la probabilidad o gravedad de la infección por VHC en un sujeto que lo necesite que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de fórmula (I).

(h)

El procedimiento de (g), en el que el compuesto de fórmula (I) se administra en combinación con una cantidad eficaz de al menos un segundo agente terapéutico seleccionado del grupo que consiste en agentes antivirales de VHC, inmunomoduladores y agentes antiinfecciosos.

(i)

El procedimiento de (h), en el que el agente antiviral de VHC es un antiviral seleccionado del grupo que consiste en inhibidores de proteasa de VHC e inhibidores de polimerasa de NS5B de VHC.

(j)

Un procedimiento para inhibir la proteasa NS3 de VHC en un sujeto que lo necesite que comprende administrar al sujeto la composición farmacéutica de (a), (b) o (c) o la combinación de (d) o (e).

(k)

Un procedimiento para tratar una infección por VHC y/o reducir la probabilidad o la gravedad de la infección por VHC en un sujeto que lo necesite que comprende administrar al sujeto la composición farmacéutica de (a),

(b)

o (c) o la combinación de (d) o (e).

(l)

Un compuesto de fórmula (I) para uso como un medicamento, para uso en la prevención o el tratamiento de la infección por VHC o para uso (i) en, (ii) como un medicamento para, o (iii) para uso en la preparación de un medicamento para: (a) inhibir la proteasa NS3 de VHC, o (b) tratar una infección por VHC y/o reducir la probabilidad o la gravedad de la infección por VHC. En estos usos, los compuestos de la presente invención pueden emplearse opcionalmente en combinación con uno o más segundos agentes terapéuticos seleccionados de agentes antivirales de VHC, agentes antiinfecciosos e inmunomoduladores.

En todas estas reaizaciones, el compuesto puede usarse opcionalmente en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

Como se usa en el presente documento, el término "o” indica alternativas que puede, cuando sea adecuado, combinarse. Por tanto, el término “o” incluye cada alternativa indicada por separado además de su combinación si la combinación no es mutualmente excluyente.

Una referencia a un compuesto también incluye complejos estables del compuesto, tal como un hidrato estable. Un compuesto “estable” es un compuesto que puede prepararse y aislarse y cuya estructura y propiedades permanecen

o puede causarse que permanezcan esencialmente sin cambios durante un periodo de tiempo suficiente para permitir el uso del compuesto para los fines descritos en este documento (por ejemplo, administración terapéutica o profiláctica a un sujeto).

II. Administración y composiciones

El término “administración” y variantes del mismo (por ejemplo, “administrar” un compuesto) significa proporcionar el compuesto o un profármaco del compuesto al individuo que necesite tratamiento. Cuando un compuesto de la

invención o un profármaco del mismo se proporciona en combinación con otro o más agentes activos (por ejemplo, agentes antivirales útiles para tratar una infección por VHC), se entiende que la “administración” y sus variantes incluyen cada una el suministro concurrente y secuencial del compuesto o sal y otros agentes

Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en forma de sales farmacéuticamente aceptables. La expresión “sal farmacéuticamente aceptable” se refiere a una sal del compuesto parental que tiene actividad y que no es indeseable ni biológicamente ni de otro modo (por ejemplo, no es tóxica ni perjudicial de otro modo para el destinatario de la misma). Las sales adecuadas incluyen sales de adición de ácido que, por ejemplo, pueden formarse mezclando de una solución del compuesto con una solución de un ácido farmacéuticamente aceptable tal como ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido acético, ácido trifluoroacético o ácido benzoico. Los compuestos que llevan un resto ácido, se pueden mezclar con sales farmacéuticamente aceptables adecuadas para proporcionar, por ejemplo, sales de metales alcalinos (por ejemplo, sales de sodio o potasio), sales de metales alcalinotérreos (por ejemplo, sales de calcio o de magnesio) y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados tales como sales de amonio cuaternario. Además, en el caso de que esté presente un grupo ácido (-COOH) o alcohol, pueden emplearse ésteres farmacéuticamente aceptables para modificar las características de solubilidad o hidrólisis del compuesto.

Como se usa en el presente documento, el término "profármaco" pretende incluir una forma o un compuesto inactivas del fármaco que se convierte en la forma o compuesto activo mediante la acción de enzimas agentes químicos o procesos metabólicos en el cuerpo de un individuo al que se le administra.

Como se usa en el presente documento, el término “composición” pretende incluir un producto que comprende los ingredientes especificados así como cualquier producto que sea el resultado, directa o indirectamente, de combinar los ingredientes especificados.

Por “farmacéuticamente aceptable” se entiende que los ingredientes de la composición farmacéutica deben ser compatibles entre sí y no perjudiciales para el destinatario de la misma.

“El término “sujeto” (alternativamente denominado en el presente documento “paciente”) como se usa en este documento se refiere a un animal, preferentemente un mamífero, más preferentemente un ser humano, que ha sido el objeto de un tratamiento, una observación o un experimento.

La expresión “cantidad eficaz” indica una cantidad que ejerce un efecto profiláctico o terapéutico. Para un paciente infectado por VHC, una cantidad eficaz es suficiente para alcanzar uno o más de los siguientes efectos: reducir la capacidad del VHC para replicarse, reducir la carga del VHC e incrementar el aclaramiento viral. Para un paciente no infectado por VHC, una cantidad eficaz es suficiente para alcanzar uno o más de los siguientes: una menor susceptibilidad a la infección por VHC y una capacidad menor de que el virus infeccioso establezca la infección persistente para enfermedad crónica.

Para el fin de inhibir la proteasa NS3 de VHC y tratar una infección por VHC y/o reducir la probabilidad o la gravedad de los síntomas de la infección por VHC, los compuestos de la presente invención, opcionalmente en forma de una sal, pueden administrarse por cualquier medio que produzca contacto del agente activo con el sitio de acción del agente. Pueden administrarse por cualquier medios convencionals disponibles para usar junto con compuestos farmacéuticos, como agentes terapéuticos individuales o en una combinación de agentes terapéuticos. Pueden administrarse en solitario, pero normalmente se administran con un vehículo farmacéutico seleccionado en base a la vía de administración seleccionada y a la práctica farmacéutica convencional.

Los compuestos de la invención pueden administrarse, por ejemplo, por una o más de las vías siguientes: oral, parenteral (incluyendo inyecciones subcutánea, intravenosa, intramuscular, inyección intraesternal o técnicas de infusión), inhalación (tal como por pulverización) o por vía rectal, en forma de una dosificación unitaria de una composición farmacéutica que contiene una cantidad eficaz del compuesto y vehículos, adyuvantes y excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales. Las preparaciones líquidas adecuadas para administración oral (por ejemplo, suspensiones, jarabes, elixires y similares) pueden prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica y pueden emplear cualquiera de los medios habituales tales como agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares. Las preparaciones sólidas adecuadas para administración oral (por ejemplo, polvos, píldoras, cápsulas y comprimidos) pueden prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica y pueden emplear excipientes sólidos tales como almidones, azúcares, caolín, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares. Las composiciones parenterales pueden prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica y normalmente emplean agua estéril como vehículo y, opcionalmente, otros ingredientes tales como adyuvantes de la solubilidad. Las soluciones inyectables pueden prepararse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica en los que el vehículo comprende una solución salina, una solución de glucosa o una solución que contiene una mezcla de solución salina y glucosa. Guía adicional para los procedimientos adecuados para usar en la preparación de composiciones farmacéuticas de la presente invención y de ingredientes adecuados para usar en dichas composiciones se proporciona en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20 edición (ed. A. R Gennaro, Mack Publishing Co., 2000).

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse por vía oral en un intervalo de dosificación de 0,001 a 1000 mg/kg de peso corporal de mamífero (por ejemplo, ser humano) al día en una sola dosis o en dosis divididas.

Un intervalo de dosificación preferido es de 0,01 a 500 mg/kg de peso corporal al día por vía oral en una sola dosis o en dosis divididas. Otro intervalo de dosificación preferido es de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal al día por vía oral en dosis individuales o divididas. Para administración oral, las composiciones pueden proporcionarse en forma de comprimidos o cápsulas que contienen de 1,0 a 500 miligramos del ingrediente activo, particularmente 1, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 400 y 500 miligramos del ingrediente activo para el ajuste sintomático de la dosificación al paciente que se va a tratar. El nivel de dosis específica y la frecuencia de dosificación para cualquier paciente particular pueden variar y dependerán de una diversidad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la estabilidad metabólica y la duración de la acción de ese compuesto, la edad, peso corporal, estado general, sexo, dieta, modo y momento de administración, velocidad de excreción, combinación farmacológica, la gravedad de la afección particular y el huésped que se está sometiendo a terapia.

III. Tratamiento de combinación

Los compuestos macrocíclicos de quinoxalina descritos en el presente documento se pueden usar en un tratamiento de combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales. Los agentes terapéuticos adicionales incluyen los dirigidos al VHC, dirigidos a un agente causante de la enfermedad diferente o los potenciadores del sistema inmunitario. Agentes que potencian el sistema inmunitario incluyen los que generalmente potencian el sistema inmunitario y los que producen una respuesta inmunitaria específica contra el VHC. Los agentes terapéuticos adicionales dirigidos contra el VHC incluyen agentes dirigidos contra la NS3 y los agentes dirigidos a otras actividades del VHC tales como NSSA y NS5B y los agentes dirigidos a las actvidades de la célula huésped implicadas en la replicación del VHC.

Diferentes inhibidores del VHC se describen en diferentes publicaciones. Los compuestos macrocíclicos útiles como inhibidores, inhibidores de la proteasa del VHC se rescriben en los documentos WO06/119061,WO7/015785,WO7/016441,WO07/148135,WO08/051475, WO 08/051477, WO 08/051514, WO 08/057209. Otros inhibidores de la proteasa NS3 del VHC se divulgan el las publicaciones de solicitud de patente internacional WO 98/22496, WO 98/46630, WO 99/07733, WO 99/07734, WO 99/38888, WO 99/50230, WO 99/64.442, WO 00/09543, WO 00/59929, WO 02/48116, WO 02/48172, la patente británica nº GB 2 337 262, y la patente de EE.UU. Nº 6,323,180.

Ejemplos adicionales de agentes terapéuticos que pueden estar presentes en una combinación incluyen ribavirina, levovirina, viramidina, timosina alfa-1, interferón-β, interferon-α, interferón-α pegilado (peginterferón-α), una combinación de interferon-α y ribavirina, una combinación de peginterferón-α y ribavirina, una combinación de interferon-α y levovirina y una combinación de peginterferón-α y levovirina. El interferón-α incluye, pero sin limitación, interferón-α2a recombinante (tal como interferón Roferon disponible en Hoffmann-LaRoche, Nutley, NJ), interferónα-2a pegilado (Pegasys), interferón-α2b (tal como interferón Intron-A disponible en Schering Corp., Kenilworth, NJ), interferón-α-2b pegilado (Peglntron), un interferón de consenso recombinante (tal como interferón alfacón-1), y un producto de interferón-α purificado. El interferón de consenso recombinante de Amgen tiene el nombre comercial Infergen®. La levovirina es el L-enantiómero de la ribavirina que ha demostrado una actividad inmunomoduladora similar a ribavirina. La viramidina representa un análogo de ribavirina que se describe en el documento WO 01/60379. Los componentes individuales de la combinación pueden administrarsev por separado en diferentes momentos durante el transcurso de la terapia o simultáneamente en formas de combinación divididas o individuales.

La ribavirina, levovirina y viramidina pueden ejercer sus efectos anti-VHC por modulación de combinaciones intracelulares de nucleótidos de guanina por inhibición de la enzima intracelular inosina monofosfato deshidrogenasa (IMPDH). LaIMPDH es la enzima limitante de velocidad en la ruta biosintética en la biosíntesis de nucleótidos de guanina de novo. La ribavirina se fosforila fácilmente intracelularmente y el derivado monofosfato es un inhibidor de IMPDH. Por lo tanto, la inhibición de IMPDH representa otra diana útil para el descubrimiento de inhibidores de la replicación de VHC. Por lo tanto, los compuestos de la presente invención también pueden administrarse en combinación con el inhibidor de IMPDH, tal como VX-497, que se describe en el documento WO 97/41211 y WO 01/00622; otro inhibidor de IMPDH tal como el descrito en el documento WO 00/25780; o micofenolato de mofetilo [véase A. C. Allison y E. M. Eugui, Agents Action, 44 (Supl.): 165 (1993)].

Para el tratamiento de una infección por VHC, los compuestos de la presente invención también pueden administrarse en combinación con el agente antiviral amantadina (1-aminoadamantano). Para una descripción completa de este agente, véase J. Kirschbaum, 12 Anal. Profiles Drug Subs. 1-36 (1983).

Para el tratamiento de una infección por VHC, los compuestos de la presente invención también pueden administrarse en combinación con el agente antiviral inhibidor de polimerasa R7128 (Roche).

Los compuestos de la presente invención también pueden combinarse para el tratamiento de una infección por VHC con ribonucleósidos 2’-C-ramificados antivirales descritos en R. E. Harry-O’kuru, y col., J. Org. Chem., 62:1754-1759 (1997); M. S. Wolfe, y col., Tetrahedron Lett, 36: 7611-7614 (1995); Patente de Estados Unidos Nº 3.480.613; el Número de Publicación Internacional WO 01/90121, los documentos WO 01/92282 WO 02/32920 (25 de abril de 2002); WO 04/002999 y WO 04/003000 y WO 04/002422. Dichos ribonucleósidos 2’-C-ramificados incluyen, pero sin limitación, 2’-Cmetil-citidina, 2’-C-metil-uridina, 2’-C-metil-adenosina, 2’-C-metil-guanosina y 9-(2-C-metil-_-D

ribofuranosil)-2,6-diaminopurina y el éster de aminoácido correspondiente de los hidroxilos C-2’, C-3’ y C-5’ de ribosa y los ésteres de 1,3-propanodiol cíclico opcionalmente sustituido correspondientes de los derivados 5’-fosfato.

Los compuestos de la presente invención también pueden combinarse para el tratamiento de una infección por VHC con otros nucleósidos que tienen propiedades anti-VHC, tales como los descritos en las publicaciones de solicitud de patente internacional WO 02/51425,WO01/79246,WO02/32920,WO02/48165 y WO2005/003147 (incluyendo R1656, (2’R)-2’-desoxi-2’-fluoro-2’-C-metilcitidina, mostrados como los compuestos 3-6 en la página 77); los documentos WO 01/68663; WO 99/43691; WO 02/18404 and WO2006/021341, y la solicitud de patente de EE.UU. US 2005/0038240, incluyendo 4’-azido nucleósidos tales como R1626, 4’-azidocitidina; las publicaciones de solicitud de patente de EE.UU. US 2002/0019363, US 2003/0236216, US 2004/0006007 y US 2004/0063658; y las publicaciones de solicitud de patente internacional WO 02/100415, WO 03/026589, WO 03/026675, WO 03/093290, WO 04/011478, WO 04/013300 y WO 04/028481.

Para el tratamiento de una infección por VHC, los compuestos de la presente invención también pueden administrarse en combinación con un agente que sea un inhibidor de la polimerasa NS5B de VHC. Dichos inhibidores de la polimerasa NS5B de VHC que pueden usarse como terapia de combinación incluyen, pero sin limitación, los descritos en las publicaciones de patente internacional PublicationsWO02/057287, WO02/057425, WO03/068244, WO2004/000858, WO04/003138 y WO2004/007512; la patente de EE.UU. nº 6,777,392 y la publicación de solicitud de patente de EE.UU. US2004/0067901. Otros inhibidores de la polimerasa de VHC de este tipo incluyen, pero sin limitación, valopicitabina (NM-283; Idenix) y 2’-F-2’-beta-metilcitidina (véase también el documento WO 2005/003147.

En una realización, los inhibidores nucleosídicos de la polimerasa NS5B de VHC que se usan en combinación con los presentes inhibidores de la proteasa NS3 de VHC se seleccionan de los siguientes compuestos: 4-amino-7-(2-Cmetil-β-D-arabinofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina; 4-metilamino-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-dimetilamino-7-(2-C-metil-β-Dribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-ciclopropilamino-7-(2-C-metil-_-D-ribofuranosil)-7Hpirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C-vinil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C-hidroximetil-β-D-ribofuranosil)-7Hpirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C-fluorometil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-5-metil-7(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; ácido 4-amino-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7Hpirrolo[2,3d]pirimidin-5-carboxílico; 4-amino-5-bromo-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-5cloro-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-5-fluoro-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7Hpirrolo[2,3-d]pirimidina; 2,4-diamino-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 2-amino-7-(2-C-metilβ-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 2-amino-4-ciclopropilamino-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7Hpirrolo[2,3-d]pirimidina; 2-amino-7-(2-C-metil-β-Dribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(3H)-ona; 4-amino-7-(2-Cetil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(2-C,2-O-dimetilβ-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina; 7-(2-C-metil-_-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(3H)-ona; 2-amino-5-metil-7-(2-C,2-O-dimetilβ-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4(3H)-ona; 4-amino-7-(3-desoxi-2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7Hpirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(3-desoxi-2-C-metil-β-D-arabinofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-2fluoro-7-(2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(3-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7Hpirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(3-C-metil-β-D-xilofuranosil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(2,4-di-C-metilβ-D-ribofuranosil)-7Hpirrolo[2,3-d]pirimidina; 4-amino-7-(3-desoxi-3-fluoro-2-C-metil-β-D-ribofuranosil)-7H-pirrolo[2,3d]pirimidina; y los 5’-trifosfatos correspondientes; o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Los compuestos de la presente invención también pueden combinarse para el tratamiento de una infección por VHC con inhibidores no nucleosídicos de la polimerasa de VHC tales como los descritos en las publicaciones de solocitud de patente internacional WO 01/77091; WO 01/47883; WO 02/04425; WO 02/06246; WO 02/20497; WO 2005/016927 (en concreto JTK003); y VHC-796 (Viropharma Inc.).

En una realización, los inhibidores no nucleosídicos de la polimerasa NS5B de VHC que se usan en combinación con los presentes inhibidores de la proteasa NS3 de VHC se seleccionan de los siguientes compuestos: ácido 14ciclohexil-6-[2-(dimetilamino)etil]-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14ciclohexil-6-(2-morfolin-4-iletil)-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14-ciclohexil-6[2-(dimetilamino)etil]-3-metoxi-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14-ciclohexil-3metoxi-6-metil-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; metil({[(14-ciclohexil-3-metoxi-6-metil5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-il)carbonil]amino}sulfonil)acetato; ácido ({[(14-ciclohexil-3metoxi-6-metil-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-il)carbonil]amino}sulfonil) acético; 14-ciclohexil-N[(dimetilamino)sulfonil]-3-metoxi-6-metil-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxamida; ácido 3cloro-14-ciclohexil-6-[2-(dimetilamino)etil]-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5] benzodiazocin-11-carboxílico; bis(trifluoroacetato) de N-(11-carboxi-14-ciclohexil-7,8-dihidro-6H indolo[1,2-e][1,5] benzoxazocin-7-il)-N,Ndimetiletano-1,2-diaminio; ácido 14-ciclohexil-7,8-dihidro-6H-indolo[1,2-e][1,5]benzoxazocin-11-carboxílico; ácido 14ciclohexil-6-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14-ciclohexil-3-metoxi6-metil-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14-ciclohexil-6[2(dimetilamino)etil]-3-metrioxi-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14ciclohexil-6-[3-(dimetilamino)propil]-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14ciclohexil-7-oxo-6-(2-piperidin-1-iletil)-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14

ciclohexil-6-(2-morfolin-4-iletil)-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14ciclohexil-6-[2-(dietilamino)etil]-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14ciclohexil-6-(1-metilpiperidin-4-il)-7-oxo-5,6,7,8tetrariydroindolo[2,1a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; 14-ciclohexilN-[(dimetilamino)sulfonil]-7-oxo-6-(2-piperidin-1-iletil)-5,6,7,8-tetrahidroindolo [2,1-a][2,5]benzodiazocin-11carboxamida; 14-ciclohexil-6-[2-(dimetilamino)etil]-N-[(dimetilamino)sulfonil]-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1a][2,5]benzodiazocin-11-carboxamida; ácido 14-ciclopentil-6-[2-(dimetilamino)etil]-7-oxo-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14-ciclohexil-5,6,7,8-tetrahidroindo [2,1-a][2,5]benzodiazocin-11carboxílico; ácido 6-alil-14-ciclohexil-3-metoxi-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14-ciclopentil-6-[2-(dimetilamino)etil]-5,6,7,8-tetrahidroindolo[2,1-a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 14ciclohexil-6-[2-(dimetilamino)etil]-5,6,7,8-tetrahidroiridolo[2,1a][2,5]benzodiazocin-11-carboxílico; ácido 13-ciclohexil5-metil-4,5,6,7-tetrahidrofuro[3’,2’:6,7][1,4]diazocino[1,8-a]indol-10-carboxílico; ácido 15-ciclohexil-6-[2(dimetilamino)etil]-7-oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-indolo[2,1a][2,6]benzodiazonin-12-carboxílico; ácido 15-ciclohexil-8oxo-6,7,8,9-tetrahidro-5H-indolo[2,1-a][2,5]benzodiazonin-12-carboxílico; ácido 13-ciclohexil-6-oxo-6,7-dihidro-5Hindolo[1,2-d][1,4]benzodiazepin-10-carboxílico; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

IV. Evaluación de los compuestos

Los compuestos descritos en el presente documento se pueden evaluar según diferentes actividades, tales como la capacidad para inhibir la actividad de NS3 del VHC, la actividad del replicón del VHC y la actividad de replicación del VHC usando técnicas bien conocidas en la técnica (véase, por ejemplo, Carroll et al., J. Biol. Chem. 278:1197911984,2003.)

Uno de dichos ensayos es el ensayo de fluorescencia con resolución temporal de la proteasa NS3 del VHC (TRF) como se describe más adelante y en Mao et al., Anal. Biochem. 373:1-8, 2008 y en la publicación de solicitud de patente internacional WO 2006/102087. Un ensayo de la proteasa NS3 se puede realizar, por ejemplo, en un volumen fina del tampón de ensayo de 100 ml que contiene HEPES 50 mM, pH 7,.5, 150 mM NaCl, 15 % de glicerol, 0,15 % TRITON X-100, 10 mM DTT, y 0,1 % PEG 8000. La protrasa NS3 y NS4A se preincuba con varias concentraciones de inhibidores en DMSO durante 30 minutos. La reacción se inicia añadiendo el sustrato peptídico TRF (concentración final 100 nM). La hidrólisis del sustrato por la actividad proteasa de NS3 se inactiva tras 1 hora a temperatura ambiente con 100 ml de HEPES 500 mM a pH 5,5. El producto fluorescente se detectó usando un Victor V2 o fluorímetro de Fusión (Perkin Elmer Life y Analytical Sciences) con excitación a 340 nm y emisión a 615 nm con un retraso de 400 Is. Las concentraciones de ensayo de diferentes formas enzimáticas se seleccionaron con una relación de señal respecto a fondo de 10-30. Los valores de CI50 obtuvieron usando un ajuste de cuatro parámetros. Los valores Ki derivan de los valores de CI50 usando la fórmula siguiente,

en la que [S] es la concentración del sustrato peptídico en la reacción y Km es la constante de Michaelis. Véase Gallinari et al., 38 BIOCHEM. 5620-32(1999); P. Gallinari et al., 72 J. VIROL. 6758-69 (1998); M. Taliani et al., 240 ANAL. BIOCHEM. 60-67 (1996); Mao et al., Analytical Biochemistry 373: 1-8, 2008.

V. Producción de compuestos generales

La presente invención también incluye procedimientos para preparar compuestos de fórmula (I). Los compuestos de la presente invención pueden prepararse fácilmente de acuerdo con los siguientes esquemas de reacción y ejemplos

o modificaciones de los mismos, usando materiales de partida y reactivos fácilmente disponibles en el mercado y procedimientos de síntesis convencionales. En estas reacciones, también es posible hacer uso de variantes que son conocidas entre los especialistas en la técnica, pero no se mencionan en más detalle. Además, otros procedimientos para preparar los compuestos de la invención serán fácilmente evidentes para una persona especialista en la técnica a la luz de los siguientes esquemas de reacción y ejemplos. A menos que se indique otra cosa, todas las variables son como se han definido anteriormente. Los siguientes esquemas de reacción y ejemplos sólo sirven para ilustrar la invención y su práctica.

Los catalizadores de metátesis de olefina incluyen las siguientes especies a base de rutenio: F. Miller et al., 118 J. AM. CHEM. Soc. 9606 (1996); G. Ki ngsbury et al., 121 J. Am. Chem. Soc. 791 (1999); H. Scholl et al., 1 ORG. LETT. 953 (1999); solicitud de patente de EE.UU. US2002/0107138; K. Furstner et al., 64 J. ORG. CHEM. 8275 (1999). La utilidad de estos catalizadores en la metátesis de cierre de anillo se conoce bien en la bibliografía (por ejemplo, Trnka y Grubbs, 4 ACC. CHEM. RES. 18 (2001).

Los siguientes ejemplos sólo sirven para ilustrar la invención y su práctica.

Lista de abreviaturas

Lista de abreviaturas

DCM / CH2Cl2 diclorometano

40 Intermedio B1: 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valina

(continuación)

DCE

1,2 dichloroetano

DIEA

diisopropiletilamina

DMF

Dimetilformamida

DMSO

dimetilsulfóxido

Dppf

difenifosfofinoferroceno

Et2O

éter dietílico

EtOAc

acetato de etilo

HATU

Hexafluorofosfato de O-(7-Azabenzotriazol-1-il-N,N,N',N'-tetrametiluronio

HCl

ácido clorhídrico

TMSCl

Clorotrimetilsilano

TBAF

Fluoruro de tetra-n-butilamonio

DMAP

Dimetilamino piridina

MeCN

acetonitrilo

MeOH

metanol

Pd/C

paladio sobre carbono

TBTU TFA

Tetrafluoroborato de O-benzotriazol-1-il-N,N,N’,N’-tetrametiluronio Ácido trifluoroacético

THF

tetrahydofuran

Cromatografía ultrarrápida

Purificación usando Biotage Horizon con cartucho de gel de sílice y gradiente de

fase móvil especificado

HPLC

Cromatografía de líquidos de alto rendimiento con masa automática o

desencadenada por UV usando MeCN acidificado y gradientes de H2O como fase

móvil

MHz

Megahertzios

Síntesis de los intermedios

Intermedios A

Nº de Estructura

Nombre Referencia

Intermedio

bibliográfica

A1

(1R,2S)-1-Amino-N-(ciclopropilsulfoniyl)-2-vinilciclo Wang et al, US

propanocarboxamida clorhidrato 6,995,174

Etapa 1: [(1E)-hepta-1,6-dien-1-iloxi](trimetil)silano

Una solución (0,5 M) de bromuro de butenil magnesio en THF (1,4 eq.) se trató a -78 ºC con Cu(I)Br.SMe2 (0,05 eq) y HMPA (2,4 eq). La mezcla se agitó durante 10 min y, después, se añadió una solución (1 M) de acroleína (1 eq) y TMSCI (2 eq) en THF durante 1 hora de forma que la temperatura interna permaneció por debajo, de -68 ºC. La mezcla resultante se agitó a -78 ºCdurante 2 horas y después se trató con un exceso de Et3N y se diluyó con hexanos. Después de alcanzar la temperatura ambiente, la mezcla se trató con una porción pequeña de H2O y se filtró a través de CELITE. El filtrado se lavó 10 veces con H2O y se después con salmuera. La capa orgánica se secó y los volátiles se eliminaron, dando un residuo que se destiló a presión reducida (20 mbar). La fracción recogida a 80-86 ºCcontenía el compuesto del título (58 %) en forma de un líquido incoloro. RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 5 6,19 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 5,85 - 5,75 (m, 1H), 5,02 - 4,92 (m, 3H), 2,08 - 2,02 (m, 2H), 1,94 - 1,88 (m, 2H), 1,46 - 1,38 (m, 2H), 0,18 (s, 9H).

Etapa 2: trans-2-pent-4-en-1-ilciclopropanol

Una solución (0,45 M) del compuesto anterior en hexanos se trató con una solución (15 %) de Et2Zn (1,2 eq) en tolueno y la solución resultante se enfrió en un baño de hielo. Gota a gota se añadió diyodometano (1,2 eq), después la solución se agitó durante 1 hora antes de calentar hasta 20 ºC. Se añadió piridina (6 eq) y la pasta se agitó durante 15 min y se vertió en éter de petróleo. La mezcla se filtró repetidamente a través de celite hasta obtener una solución transparente. Esta mezcla se concentró a 100 mbar y la solución que permaneció (que contenía {[ (trans)-2pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}silano, tolueno y piridina) se adiluyó además con THF. La mezcla se enfrió hasta 0 ºC y se trató gota a gota con una solución de of TBAF (1M (1,2 eq) ) en THF. Tras 10 minutos la mezcla se dejó calentar hasta 20 ºC y tras 1 h más se vertió en H2O. La fase acuosa se extrajo con EtOAc y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, después se secaron. La eliminación de los volátiles dio un residuo que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (eluyente 0-66 % Et2O/éter de petróleo) para dar el compuesto del título (71 %) como líquido incoloro. RMN de 1H (400 MHz, CDCl3) 5 5,85 - 5,75 (m, 1H), 5,00 (dd, J = 17,1, 1,6 Hz, 1H), 4,94 (br d, J =10,4 Hz, 1H), 3,20 (aparente dt, J = 6,4, 2,5 Hz, 1H), 2,10 - 2,04 (m, 2H), 1,52 - 1,44 (m, 2H), 1,29 - 1,19 (m, 1H), 1,15 - 1,07 (m, 1H), 0,95 - 0,87 (m, 1H), 0,71 - 0,66 (m,1H), 0,31 (aparente c, J = 6,0 Hz, 1H)..

Etapa 3: 3-metil-N-(oxometileno)-L-valinato de metilo

Una solución (0,39 M) de 3-metil-L-valinato de metilo en una mezcla de 2:1 de NaHCO3 saturado y CH2Cl2 se enfrió en un baño de hielo y se agitó rápidamente. La mezcla se trató con trifosgeno (0,45 eq) en una porción y la mezcla resultante se agitó durante 0,5 h. La reacción se diluyó con CH1Cl2 y se separaron las capas. La fase acuosa se extrajo con CH2Cl2 y los extractos orgánicos combinados se lavaron con salmuera, después se secaron. La eliminación del disolvente dio el compuesto del título en forma de una aceite transparente que se mantuvo durante 12 h al vacío (0,1 mbar) y después se usó directamente en la etapa siguiente. RMN 1H (CDCl3) 5 3,79 (s, 3H), 3,75 (s, 1H), 1,00 (s, 9H).

Etapa 4: 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valinato de metilo y 3-metil-N-({[(1S,2S)-2pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valinato de metilo

Una solución (0,45 M) trans-2-pent-4-en-1-ilciclopropanol en tolueno se trató con 3-metil-N-(oxometileno)-L-valinato de metilo (1,1 eq) y después DMAP (1 eq). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 12 horas, después se enfrió hasta 20 ºC y se añadieron EtOAc y la capa orgánica se separó y se lavó con HCl 1N, salmuera, y se secó. La eliminación de los volátiles dio un residuo que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (eluyente 0-30 % Et2O/éter de petróleo). Las primeras fracciones contenían 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valinato de metilo (38 %) como un aceite. EM (ES+, m/z) 298 (M+H)+.

Las últimas fracciones contenían 3-metil-N-({[(1RS,2S)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valinato de metilo (28 %) como un aceite. EM (ES+, m/z) 298 (M+H)+.

Etapa 5: 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valina

Una solución (0,1 M) de 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valinato de metilo en una mezcla de 2:1 de MeOH/H2O se trató con LiOH.H2O (4 eq) y después se calentó a 60 ºC durante 4 horas. La mezcla se enfrió y se concentró hasta la mitad del volumen, después se diluyó con EtOAc y se acidificó con HCl acuoso (1N). La capa orgánica se separó y se lavó con salmuera y se secó. La eliminación de los volátiles dio el compuesto del título (98 %) en forma de un aceite. EM (ES+, m/z) 284 (M+H)+.

Intermedios C Intermedio C1: (4R)-4-[(3-cloro-7-metoxiquinoxalin-2-il)oxi]-L-prolinato de metilo, clorhidrato

Etapa 1: 6-metoxiquinoxalina-2,3-diol

Una suspensión de 4-metoxibenceno-1,2-diamina diclorhidrato en oxalato de dietilo (8 eq) se trató con Et3N (2 eq) y después se calentó a 150 ºC durante 2 h. La mezcla se enfrió y se filtró, después se recogió el sólido y se lavó con H2O y EtOH. El residuo se secó para proporcionar el compuesto del título (69 %). EM (ES+, m/z) 193 (M+H)+.

Etapa 2: 3-cloro-6-metoxiquinoxalina-2-ol

10 Una solución (1,53 M) de 6-metoxiquinoxalina-2,3-diol en DMF se trató con SOCl2 (1 eq) y se calentó a 110 ºC. Tras 1,5 h, la mezcla de reacción se enfrió y se vertió en HCl acuoso (1 N). El precipitado resultante se filtró y se lavó con H2O y Et2O.. El sólido seco contenía predominantemente el compuesto del título como una mezcla con 6metoxiquinoxalina-2,3-diol y 2,2-dicloro-6-metoxiquinoxalina. Este material se usó directamente en la etapa

15 siguiente. EM (ES+, m/z) 211 (M+H)+.

Etapa 3: 2-metil (2S,4R)-4-[(3-cloro-7-metoxiquinoxalin-2-il)oxi]pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo

Una solución (0,35 M) de 3-cloro-6-metoxiquinoxalina-2-ol en NMP se trató con Cs2CO3 (1,5 eq) y 1-tert-butyl 2-metil

20 (2S,4S)-4-{[(4-bromofenil)sulfonil]oxi}pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo (1,1 eq). La mezcla resultante se agitó a 50 ºC durante 18 horas, después se añadió una porción (0,1 eq) de 2-metil (2S,4S)-4-{[(4bromofenil)sulfonil]oxi}pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butilo. Después de agitar durante 2 horas, la mezcla se enfrió y se diluyó con H2O y EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se lavaron con HCl (1 N) acuoso, NaHCO3 saturado acuoso y salmuera. La fase orgánica seca se concentró hasta un residuo que se purificó mediante

25 cromatografía ultrarrápida (eluyente 0-6 % EtOAc/éter de petróleo para dar el compuesto del título (35 %) como sólido. EM (ES+, m/z) 438 (M+H)+.

Etapa 4: (4R)-4-[(3-cloro-7-metoxiquinoxalin-2-il)oxi]-L-prolinato de metilo, clorhidrato

Una solución de (0,62 M)de 2-metil (2S,4R)-4-[(3-cloro-7-metoxiquinoxalin-2-il)oxi]pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1terc-butilo en CH2Cl2 se trató con una solución (4 M) de HCl en dioxano (5 eq). La mezcla se agitó a 0 ºC durante 2

5 horas y se trató con una solución (4 M) de HCl en (2 eq). Tras 5 horas, la reacción se juzgó completa y la mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se trituró con Et2O, para proporcionar el compuesto del título (95 %) como un sólido. EM (ES+, m/z) 338 (M+H)+.

Ejemplo 1: {[(1R,2S)-1-({[(1aR,5S,8S.10R,22aR)-5-terc-butil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a, 3,4,5,6, 9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanocicloprona [18,19][1,10,3,6] dioxadiazaciclonona

10 decino [11,12-b]quinoxalin-8-il]carbonil}amino)-2-vinilciclopropil]carbonil}(ciclopropilsulfonil) azanida de potasio

Etapa 1: 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valil-(4R)-4-[(3-cloro-7-metoxi- quinoxalin-2il)oxi]-L-prolinato de metilo

Una solución (0,2 M) (4R)-4-[(3-cloro-7-metoxiquinoxalin-2-il)oxi]-L-prolinato clorhidrato de metilo (se trató con 3metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valina (1,1 eq), DIEA (5 eq) y HATU (1,2 eq). La mezcla resultante se agitó a 0-5 ºC durante 5 h y se diluyó con EtOAc.. La capa orgánica se separó y se lavó con HCl (1 N) acuoso, NaHCO3 saturado acuoso y salmuera. La capa orgánica seca se concentró a presión reducida para dar un

20 residuo que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (eluyente 10-30 % EtOAc/éter de petróleo) para dar el compuesto del título (96 %) como un aceite. EM (ES+, m/z) 604 (M+H)+.

Etapa 2: 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valil-(4R)-4-[(7-metoxi-3-vinil-quinoxalin-2il)oxi]-L-prolinato de metilo

Una solución (0,1 M) 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valil-4R)4-[(3-cloro-7metoxiquinoxalin-2-il)oxi]-L-prolinato de metilo en EtOH se trató con trifluoruro(vinil)borato de potasio (1,5 eq) y trietilamina (1,5 eq). La mezcla resultante se desgasificó, después se añadió el aducto PdCl2(dppf)-CH2Cl2 adduct

5 (0,1 eq). La mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora, después se enfrió hasta la temperatura ambiente con H2O y EtOAc. La fase orgánica se separó, se lavó con agua y salmuera, después se secó. La eliminación de los volátiles dio un residuo que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (eluyente 20-30 % EtOAc/éter de petróleo) para dar el compuesto del título como una espuma amarilla que se usó directamente en la etapa siguiente. EM (ES+, m/z) 595 (M+H)+.

10 Etapa 3: (1aR,5S,8S,10R,18E,22aR)-5-terc-butil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,20,21,22,22a-dodecahidro8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalin-8-carboxilato de metilo

Una solución (0,02 M) 3-metil-N-({[(1R,2R)-2-pent-4-en-1-ilciclopropil]oxi}carbonil)-L-valil-4R)4-[(7-metoxi-3vinilquinoxalin-2-il)oxi]-L-prolinato de metilo en DCE se calentó hasta 80 ºC y después se trató con catalizador

15 Zhan1 (0,15 eq). La mezcla resultante se agitó a 80 ºC durante 1 h y después se enfrió hasta la temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (eluyente 2050 % EtOAc/éter de petróleo para dar el compuesto del título (25 % para 2 etapas) como una espuma. EM (ES+, m/z) 567 (M+H)+.

Etapa 4: (1aR,5S,8S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a

20 tetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalin-8carboxilato de metilo

Una solución (0,05 M) de(1aR,5S,8S,10R,18E,22aR)-5-terc-butil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1 a, 3,4,5,6, 9,10,20,21,22,22a-dodecahidro-8H-7,10-metanocicloprona [18,19][1,10,3,6] dioxadiazaciclonona- decino [1,12

25 b]quinoxalin-8-carboxilato de metilo en MeOH/dioxao (proporción 1:1) se trató con Pd/C (8 % en peso). La mezcla resultante se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 4 horas. El catalizador se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida, para dar el compuesto del título (98 %) como un sólido. EM (ES+, m/z) 569 (M+H)+.

Etapa 5: Ácido (1aR,5S,8S,10R,22aR)-5-terc-butil-1,4-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22atetradecahidro-8H-7,10-metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalin-8carboxílico

Una solución (0,1 M) de (1aR,5S,8S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a, 3,4,5,6, 9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanocicloprona [18,19][1,10,3,6] dioxadiazaciclonona-decino [11,12-b]quinoxalin-8-carboxilato de metilo en una mezcla 1:1 de H2O/THF se trató con LiOH.H2O (3 eq). La mezcla resultante se agitó a 20 ºC durante 18 h, se acidificó con HCl acuoso (0,2 M) y se diluyó con EtOAc.. La fase orgánica se separó, se lavó con HCl acuoso (0,2 M) y salmuera, después se secó. La eliminación de los volátiles dio el compuesto del título (98 %) en forma de un sólido. EM (ES+, m/z) 555 (M+H)+.

Etapa 6: (1aR,5S,8S,10R22aR)-5-terc-butil-N-((1R,2S)-1-{[(ciclopropilsulfonil)amino] carboxyl}-2-vinylcyclopropyl)1,4-metoxi-3,6-dioxo-1,1a,3,4,5,6,9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10metanociclopropa[18,19][1,10,3,6]dioxadiazaciclononadecino[11,12-b]quinoxalin-8-carboxamida

Una solución (0,1 M) de ácido (1aR,5S,8S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a, 3,4,5,6, 9,10,18,19,20,21,2222a-tetradecahidro-8H-7,10-metanocicloprona [18,19][1,10,3,6] dioxadiazaciclonona-decino [11,12-b]quinoxalin-8-carboxílico en CH2Cl2 se trató con cloruro de (1R,2S)-1-{[(ciclopropilsulfonil)amino]carbonil}-2vinilciclo propanaminio (1,3 eq), DIEA (3 eq), DMAP (1,5 eq) y TBTU (1.45 eq). La mezcla resultante se agitó a 0-5 ºC durante 18 h y se diluyó con EtOAc.. Las solución se lavó HCl (0,2 M) acuoso, NaHCO3 saturado acuoso y salmuera. Las fases orgánicas se secaron y se concentraron hasta dar un residuo que se purificó mediante cromatografía ultrarrápida (eluyente 2,5 MeOH/CH2Cl2) para dar el compuesto del título (89 %) como sólido. RMN 13C (100 MHz, d6-DMSO-d6) 5 172.32, 170,63, 169.04, 159.86, 56.95, 54.74, 148.10, 140,41, 133.55 (2 señales), 128.94, 118.21, 117,58, 105,89, 74,88, 59,75, 58,71, 55,68, 54,13, 54,01, 40,13, 34,49, 34,04, 33,76, 32,68, 30,71, 30,43, 28,55, 27,69, 27,28, 26,38, 21,98, 18,49, 10,67, 5,69, 5,46; MS (ES+) m/z 767 (M+H)].

Etapa 7: {[(1R,2S)-1-({[(1aR,5S,8S,10R,22aR)-5-terc-butil-14-metoxi-3,6-dioxo-1,1a, 3,4,5,6, 9,10,18,19,20,21,22,22a-tetradecahidro-8H-7,10-metanocicloprona [18,19][1,10,3,6] dioxadiazaciclonona- decino [11,12-b]quinoxalin-8-il]carbonil}amino)-2-vinilciclopropil]carbonil}(ciclopropilsulfonil) azanida de potasio

El material anterior se suspendió en EtOH y la solución resultante (0,025 M) se enfrió hasta 0 ºC. Se añadió una solución (0,02 M) de terc-BuOK (1,5 eq) en EtOH´, dando la formación de un precipitado. La mezcla se agitó a 20 ºC durante 18 h y se recogió el sólido mediante filtración.. Este material se lavó con EtOH y se secó para dar el

5 compuesto del título (93 %) en forma de un sólido cristalino. EM (ES+, m/z) 767 (M+H)+.

Ejemplo 2: Comparación de diferentes compuestos

El compuesto del Ejemplo 1, se comparó con el compuesto de los Ejemplos 110 y 118 del documento WO 2008/057209. Los resultados se muestran en las Tablas 1 y 2 a continuación, Como se ilustra en las tablas y el debate de los resultados, el compuesto de fórmula (I) parece tener varias propiedades ventajosas en comparación

10 con el compuesto del Ejemplo 118 del documento WO 2008/057209 y el compuesto del Ejemplo 110 del documento WO 2008/057209.

Tabla 1

Ejemplo 118 del Documento WO 2008/057209

Ejemplo 1 Ejemplo 110 del Documento WO 2008/057209

Estructura

Actividad inhibidora de NS 3/4A 1 (Ki) 1b

< 0,016 nM < 0,016 nM < 0,016 nM

Actividad del replicóny2 CE50 gt 1 b

3 nM 2 nM 5 nM

AUC en plasma de rata a 25mpk per os3

38,5 μM.h 20,6 μM.h 5,8 μM.h

Concentración en hígado de rata a 24 h (25 mpk per os

18,4 μM 27,9 μM 8,5 μM

AUC en plasma de perro a 5mpk per os3

10,9 μM.h 48,6 μM.h 1,0 μM.h

(continuación)

Ejemplo 118 del Documento WO 2008/057209

Ejemplo 1 Ejemplo 110 del Documento WO 2008/057209

Concentración en hígado de perro a24h (5mpk per os

No disponible 120 mM 3,3 mM

Unión proteica covalente In Vivo4

Rat @ 6h plasma = BLQ, hígado=30±3 pmol/pm de proteína Rata @ 6h plasma = LOQ, hígado=LOQ Rata @ 6h plasma = BLQ hígado=BLQ

Propiedades físicas5

La sal de potasio no se desproporciona en solución. La sal de potasio no se desproporciona en solución. La sal de potasio se desproporciona en la forma neutra cristalina en solución.

Ki : Constante de inhibición, referencia a < 0,016 nM indica que la actividad observada es menor de 0,016 nM, la cantidad exacta menor de 0,016 nM no se determinó en el ensayo; CE50: Concentración Efectiva que alcanza un 50 % de supresión de la replicación viral; gt: Genotipo, AUC: Área bajo la curva de la concentración plasmática tiempo; LOQ: Límite de cuantificación 3 pmol/mg); BLQ: Por debajo del límite de cuantificación.

Compuesto de fórmula (I) comparado con el Ejemplo 110 del documento WO 2008/057209

Las propiedades ventajosas del compuesto de fórmula (I) frente al compuesto del Ejemplo 110 del documento WO 5 2008/057209 son las siguientes:

1) Propiedades físicas (no hay desproporción de sal para el compuesto de fórmula (I)); 2) Perfil farmacocinético en ratas tras la administración de la sal de potasio; y 3) Exposición del hígado (órgano diana).

Las diferencias en las propiedades son particularmente ventajosas para la formulación y administración del

10 compuesto de fórmula (I) frente al compuesto del Ejemplo 110 del documento WO 2008/057209. La falta de desproporción de la sal para del compuesto de fórmula (I) permite la disolución de 1,8 mg/ml de la forma de sal de K+ del compuesto del Ejemplo 1 en agua. Aunque la de sal de K+ del compuesto del Ejemplo 110 del documento WO 2008/057209 ha mejorado la solubilidad acuosa (9,7 mg/ml), el compuesto disuelto de este modo se desproporciona para dar la forma zwiteriónica cristalina que tiene una solubilidad acuosa baja (<0,009 mg/ml). La

15 ausencia de este comportamiento para el compuesto del Ejemplo 1 proporciona una ventaja inesperada en su formulación para la administración farmacéutica y tiene como resultado propiedades farmacocinéticas mejoradas como se indica en la Tabla 1 (AUC en plasma y exposición del hígado para ratas y perros). La elevada exposición en plasma e hígado en especies preclínicas es ventajosa para la selección de dosis seguras y eficaces para usar en el tratamiento de pacientes.

20 Compuesto de fórmula (I) comparado con el Ejemplo 118 del documento WO 2008/057209

Una ventaja observada del compuesto de fórmula (I) en comparación con el Ejemplo 118 del documento WO2008/057209 es su perfil de resistencia contra diferentes mutantes enzimáticos. Compatible con los datos de los estudios cínicos con agentes antivirales de clases relacionadas (p. ej., inhibidores de la proteasa del VH) y también de estudios con inhibidores de la proteasa NS3 de VHC (p. ej., VX-950, telaprevir), cabe esperar que se pueda 25 desarrollar resistencia viral en respuesta al tratamiento con estos compuestos. El compuesto del Ejemplo 1 mostró mejor afinidad enzimática (Ki ) contra diferentes mutantes enzimáticos conocidos que se sabe que confieren resistencia a los inhibidores de la proteasa NS3 de VHC. En la Tabla 2 se resume la actividad contra diferentes mutantes enzimáticos. Por tanto, una ventaja del compuesto 2 puede ser un incremento de la barrera al desarrollo de virus resistentes cuando se administra a pacientes. También proporciona la posible ventaja de tratar pacientes en

30 los que han fracasado otras terapias por el desarrollo de resistencia, ya que el compuesto 1 puede inhibir este virus resistente.

Tabla 2 Valores de Ki 1 vs. mutante enzimático 1b (nM)

1b SHIFT

D168T D168A D168E D168G D168V D168Y D168Q

Ejemplo 1

0,18 0,43 0,04 0,08 0,14 0,22 0,12

cmp 118

0,78 0,86 0,12 0,45 0,65 1,5 0,42

1b SHIFT

A156S A156T A156V R155K R155Q R155G R155N

Ejemplo 1

0,05 5,2 11 0,07 0,43 0,63 0,13

cmp 118

0,1 3,4 15 0,08 1,9 2,3 0,56

1Datos comparativos recogidos del mismo ciclo de los ensayos enzimáticos.

Otras propiedades ventajosas esperadas del compuesto de fórmula (I) frente al compuesto del Ejemplo 110 del documento WO 2008/057209 son las siguientes:

1) Baja unión covalente in vivo; y 5 2) Elevada exposición en plasma e hígado.

Se encontró que el compuesto de fórmula (I) tiene características de unión covalente y propiedades farmacocinéticas muy buenas En base a la unión covalente observada en vivo y a las propiedades farmacocinéticas del compuesto del ejemplo 1 y del compuesto del ejemplo 118 del documento WO 2008/057209, el compuesto de fórmula (I) tiene características de unión covalente y propiedades farmacocinéticas in vivo significativamente mejores

10 Los compuestos que se unen covalentemente a proteínas, o que forman metabolitos que después se unen covalentemente a proteínas, dan lugar a acontecimientos adversos en pacientes, tales como toxicidades inmunológicas mediadas por las respuestas de anticuerpos al conjugado fármaco-proteína, y otras toxicidades idiosincrásicas. (Véase Chem. Res. Toxicol. 2004, 17, 3-16.)

El compuesto del Ejemplo 1 mostró una unión indetectable a las proteínas en plasma tras la administración oral de

15 una única dosis de 20 mg/kg a ratas. (Véase la Tabla 1). En condiciones análogas, el compuesto del Ejemplo 118 del documento WO 2008/057209 demostró unión detectable a las proteínas del hígado de rata (véase la Tabla 1) y, por tanto, se puede considerar un compuesto menos ventajoso para la administración a sujetos humanos que el compuesto de fórmula (I).

La Tabla 3 proporciona algunos datos de unión covalente in vivo observados para compuestos relacionados del 20 documento WO 2008/057209 que contienen el resto (R,R)-trans-2-alquiciclopentanol incorporado en el Ejemplo 118.

Tabla 3

Ejemplo 108 del Documento WO 2008/057209

Ejemplo 103 del Documento WO 2008/057209 Ejemplo 96 del Documento WO 2008/057209

Estructura

Unión proteica covalente In Vivo4

Plasma de rata @ 6h = 15 pmol eq./mg hígado = 38 pmol eqJmg Plasma de rata @ 6h = 6 pmol eq./mg hígado= 24 pmol eqJmg Plasma de rata @ 6h = 6 pmol eq./mg hígado= 63 pmol eqJmg

Es ventajoso tener una elevada exposición en plasma e hígado en especies preclínicas para demostrar con eficacia que el potencial candidato a fármaco no provoca toxicidades indeseadas. También es más probable que un compuesto que tiene una elevada exposición en hígado y plasma en animales muestra el mismo comportamiento en 25 el ser humano que uno que no. Para dicho compuesto, la exposición eficaz requerida en el ser humano se puede alcanzar con una dosis menor, ambas ventajosas para los costes y la facilidad de fabricación del fármaco, pero que también disminuye potencialmente la probabilidad de efectos adversos. La exposición en el órgano diana en

múltiples especies preclínicas proporciona un fundamento de que la exposición elevada en el órgano diana se puede conseguir para el compuesto en pacientes y que una elevada exposición en hígado en perros y en ratas permite una evaluación fiable de la toxicidad preclínica. La elevada exposición en hígado es especialmente ventajosa para el VHC, ya que este es el órgano diana para el fármaco.

El compuesto del Ejemplo 1 tenía una muy buena exposición en hígado y en plasma de rata. La exposición en hígado de rata observada fue a un nivel mayor que el compuesto 118 y el compuesto 110 del documento WO 2008/057209 (véase la Tabla 1). En base a estos resultados y a los ensayos de diferentes compuestos del documento WO 2008/057209 mediante administración oral a ratas ((25mpk) y a perros (5mpk), también cabe esperar que el compuesto de fórmula (I) tenga exposiciones en hígado de perro superiores a las del compuesto 118 y el compuesto 110 del documento WO 2008/057209.

Procedimientos

Actividad inhibidora de NS 3/4A 1 (Ki) La actividad inhibidora de NS 3/4A se determinó como se describe en la Sección IV. Evaluación Del compuesto ant. y Mao el al., Anal Biochem 373:1-8, 2008.

Actividad del replicón2 CE50: La actividad del replicón se determinó usando los procedimientos descritos en Carroll et al., J. Biol. Chem. 278:11979-11984, 2003 and Olsen et al., Anti Microb. Agents 48:3944-3953, 2004.

AUC en plasma de rata a 25mpk per os3: Los compuestos de ensayo se disolvieron en un vehículo de dosificación adecuado para la administración iv (p. ej., 20 %:60 %:2 0% DMSO:PEG400: Agua) o administración por vía oral (p. ej., POLISORBATO 80 al 10 %: 90 % de agua o 100 % de PEG400). La administración en los animales (n = 3) se realizó usando un diseño de estudio cruzado para no roedores. Las muestras de plasma se recogieron en los puntos de tiempo entre 2 minutos y 24 horas y los niveles del compuesto se determinaron mediante RP-HPLC. Las muestras de hígado se recogieron post mortem en las ratas y tras anestesia (0,5 h antes de la biopsia) en perros. Las muestras de hígado se pesaron, homogeneizaron y diluyeron usando técnicas conocidas por los expertos y los niveles del compuesto se determinaron mediante RP-HPLC.

Los parámetros farmacocinéticas se calcularon en base a análisis no compartimentales (p. ej., usando WATSON®, WINNOLIN®). A las concentraciones predosis inferiores al límite de cuantificación (BLQ) se les asignó un valor de 0. Para la estimación de la AUC oral, al primer valor de BL1 en la fase terminar se le proporcionó un valor igual a ½ el límite menor de cuantificación, mientras que a los siguientes valores en la fase terminal se les asignó un valor de 0. Se calcularon los parámetros farmacocinéticas estándar, CLp, Vdss, semivida (solo para IV), % F, Cmáx, Tmáx, AUC0last, AUC0-infinio. Los valores de ACU se calcularon usando el procedimiento trapezoidal lineal para concentraciones ascendentes y el procedimiento trapezoidal log para las concentraciones descendentes.

Unión covalente in vivo4: Los compuestos de ensayo se radiomarcaron covalentemente (3H) y se preparó una dosis de 20 mg/kg que contiene 25 - 75 mCi/rat (pureza >98,5 %) mediante combinación del compuesto frío y solución madre de rastreo marcada evaporada. Esta mezcla se disolvió en un vehículo de dosificación adecuado para administración por vía oral (véase anteriormente), después administrar oralmente a las ratas (n = 3 por punto de tiempo, 2h, 6h, 24h). Se obtuvieron plasma e hígados y se ultracongelaron/almacenaron a -80 ºC antes del análisis.

Recuento de las muestras de plasma: Colocar un alícuota de 200 μl en un vial de centelleo de 20 ml. Añadir 500 μl en de SOLVABLE™ e incubar durante 1 h con agitación a 55 ºC. Eliminar, dejar enfriar antes de la adición a un cóctel de 15 ml de centelleo y contar. Las muestras de plasma (alícuota de 200 μl) se procesaron después como se describe a continuación para las proteínas hepáticas.

Homogeneización de los tejidos: Las muestras de hígado pesadas se diluyeron con 2 vol de tampón fosfato 100 mM (pH 7,4) y se homogeneizaron en hielo.

Recuento del homogeneizado hepático: Los alícuotas se colocaron en un vial de centelleo de 20 ml, se diluyó con 1 ml de SOLVABLE™ y se incubó durante 1 h con agitación a 55 ºC. Tras la extracción del incubador y enfriar se añadieron 1,5 ml de cóctel de centelleo y 20 % de H2O2 y se contó la radioactividad.

Precipitación de proteínas: Tomar un alícuota de 500 μl, añadir 1:8 de homogeneizado:acetonitrilo (si se sospecha que el compuesto tiene una solubilidad baja en acetonitrilo, se puede seleccionar otro disolvente), agitar en vórtex y centrifugar (3.500 rpm durante 29 minutos). Descartar el sobrenadante,

Resuspensión del precipitado proteico: Sonicación (intensidad mínima, < 5 s) y agitar en vórtex hasta triturar el sedimento en 80 % de MeOH:20 % de agua.

Lavado del sedimento proteico: 2-5 ml 80:20 MeOH: agua Si es necesario, retirar 1,0 ml del sobrenadante, añadir 15 ml de cóctel de centelleo y contar. Seguir lavando el sedimento proteico hasta que la radioactividad en el sobrenadante es < 200 DPM o DPM deja de disminuir en más de 200 en lavados consecutivos.

Disolución del sedimento final: 1 ml de NaOH 1 N o SOLVABLE™, se incubó a 50 ºC durante la noche o hasta que se disolvió por completo.

Recuento del sedimento final: 1 ml del sedimento final, 10 ml de cóctel de centelleo (si se usa otro cóctel de centelleo distinto a ULTIMA GOLD™, puede ser necesario neutralizar usando HCl 1N), y contar.

Concentración proteica del sedimento final: BCA o BIO-RAD Ki t usando BSA como patrón.

Recuento de muestras blanco: 15 ml de cóctel de centelleo por duplicado.

5 Recuento de la solución de dosificación: Contar un volumen conocido de la solución de dosificación por triplicado.

Análisis de Datos: Realizar la media de los recuentos de radioactividad (DPM) en la solución de dosificación y calcular la actividad específica de la solución de dosificación en μCi/mol. Realizar la media de los recuentos de radioactividad de las muestras blanco. Restar los recuentos de la muestra blanco promedio de los recuentos obtenidos de cada sedimento en hígado y plasma, Calcular la cantidad de radioactividad (μCi) por unidad de

10 volumen (l) para cada sedimento en hígado y plasma. Calcular la concentración de radioactividad en cada sedimento en hígado y plasma dividiendo el valor obtenido anteriormente ((μCi) por la actividad específica ((μCi/mol). Calcular la cantidad de radioactividad unida covalentemente a la proteína en pmol/mg de proteína.

Recuento de muestras blanco: 15 ml de cóctel de centelleo por duplicado.

Recuento de la solución de dosificación: Contar un volumen conocido de la solución de dosificación por triplicado.

15 Propiedades físicas5: Los compuestos de ensayo cristalinos (sal de potasio, aprox. 5 mg) se pesaron en un vial de vidrio y se añadió agua o tampón acuoso (100 μl). La pasta obtenida se agitó durante 24 horas a temperatura ambiente. Después de centrifugar, se analizó el sobrenadante mediante HPLC de fase inversa y se determinó la solubilidad en equilibrio mediante comparación con una curva de calibración. El material sólido se transfirió en parte a una placa XRPD, se secó y se analizó mediante difracción en polvo de rayos X. El patrón XRPD se comparó con

20 los controles positivos para la sal de K+ cristalina, formas zwiteriónicas (o ácidas) cristalinas y formas amorfas del compuesto de ensayo. Una demostración adicional de la forma en sal se obtuvo de una segunda porción del material sólido que se analizó mediante RMN de 400 MHz (Bruker) tras disolución en DMSOd6. Los espectros de RMN de 1H se compararon con los controles positivos descritos anteriormente.

Claims (6)

1. REIVINDICACIONES

   1.

   Un compuesto de fórmula (I), o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable:

2. 2.

   Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 que tiene la estructura:

3. 3.

   Una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz del compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

4. 4.

   Una combinación de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, o una sal del mismo

   farmacéuticamente aceptable, y un segundo agente terapéutico seleccionado de un inhibidor de la proteasa del 10 HCV, e inhibidores de la polimerasa NS5B del VHC.

5. 5.

   Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano mediante terapia.

6. 6.

   El compuesto para usar de acuerdo con la reivindicación 5, en el que la terapia es la prevención o el tratamiento de la infección por el VHC.

   15 7. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de la infección por el VHC.