ES2309441T3 - Formulaciones de alcohol de c20 a c28 y ester de sacarosa. - Google Patents

Abstract

Crema terapéutica destinada a aplicarse a la piel y a las membranas constituida por un tensioactivo de éster de sacarosa, superior al 5% en peso de por lo menos un alcohol alifático de C20 a C28, aceite mineral, un codisolvente emoliente y agua, para el tratamiento de enfermedades víricas e inflamatorias, en la que dicha crema es estable a temperaturas de por lo menos 40ºC durante un periodo de por lo menos tres meses y tras ciclos de congelación-descongelación repetidos.

Description

Formulaciones de alcohol de C20 a C28 y éster de sacarosa.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a preparaciones terapéuticas tópicas y a procedimientos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y víricas y para reducir el dolor de la inflamación tópica de la piel y de las membranas mucosas. Ejemplos de las preparaciones de estas invenciones son las cremas que contienen alcoholes alifáticos de 20 a 28 carbonos, de los que es ejemplificativo el n-docosanol.

Antecedentes de la invención

La mayoría de los compuestos terapéuticos antivíricos bloquean varios mecanismos replicadores genéticos víricos específicos en el interior de las células diana infectadas. Estos métodos adolecen de inconvenientes que incluyen la toxicidad a las células hospedadoras, la producción de subcepas víricas resistentes al fármaco y el potencial para actuar como mutágenos y/o teratógenos de las células hospedadoras. En consecuencia, la búsqueda de nuevos compuestos antivíricos que proporcionan terapia eficaz, sin dichas consecuencias perjudiciales para el hospedador, es de importancia suprema. Esto es particularmente cierto ya que parece que entramos en un nuevo periodo de vulnerabilidad a los virus desconocidos hasta el momento de la familia retrovírica.

Se han identificado compuestos que ejercen actividades antivíricas sin ser potencialmente perjudiciales para el hospedador infectado y se han demostrado algunos resultados prometedores. Al final de los años 70, por ejemplo, Snipes et al. (W. Snipes, S. Person, G. Keller, W. Taylor, A. Keith, Antimicrob. Agents Chemother. 11, 98-104 (1977); J. Sands, D. Auperin, W. Snipes, Antimicrob. Agents Chemother. 15, 67-73 (1979)) describieron una serie de estudios que demuestran dichas actividades tanto para los alcoholes saturados como para los insaturados de longitudes de cadena moderadas. Se observó actividad antivírica óptima con alcoholes saturados de 10 a 12 carbonos de longitud, se observó menos actividad antivírica con los alcoholes de 14 a 18 carbonos de longitud y no se probaron los alcoholes de longitudes de cadena mayores. Aunque se observó actividad antivírica significativa con alcoholes C-10 y C-12, estos compuestos también presentaban efectos citotóxicos y hemolíticos. Similares observaciones se hicieron con los alcoholes insaturados y los monoglicéridos, produciéndose la actividad pico con el alcohol C-18 que contiene tres dobles enlaces. Posteriormente, Clark et al (L. L. Clark, Treatment for inflammatory skin disease. Patente US nº 4.670.471 (1987); P. T. McBride, L. L. Clark; G. G. Krueger, J. Invest. Dermatol. 89, 380-383 (1987)) llegaron a la conclusión que el alcohol saturado de 30 carbonos de longitud, triacontanol, era activo como agente contra el herpes. Sin embargo, dado que los estudios en cultivo tisular demostraron que triacontanol carecía de actividad antivírica directa, se especuló que la actividad contra el herpes aparente observada en estudios animales puede reflejar un supuesto efecto inmunomodulador de este compuesto.

A principios de 1974, se informó que n-docosanol presenta valor terapéutico generalizado. Por ejemplo, Debat, patente US nº 4.186.211, describió que l-docosanol cuando se toma por vía oral era terapéuticamente eficaz en el tratamiento del alargamiento de la glándula prostática. Similar trabajo fue informado una década más tarde por Yamamoto, et al., p. ej. patente US nº 4.624.966, quien, incorrectamente en cuanto a nomenclatura química, listó el n-docosanol como un compuesto de poliprenilo y describió la administración perbucal o parenteral de n-docosanol en terapia. Ni Debat ni Yamamoto, et al., ni ningún otro investigador, han sugerido, que el conocimiento de los presentes inventores, incluso remotamente, la posibilidad de que n-docosanol pueda ser un agente activo en terapia tópica.

Después de examinar los resultados de Snipes y sus colaboradores, y pensando que los compuestos mayores de 18 carbonos no habían sido examinados para determinar si pueden presentar actividad antivírica o inflamatoria tópica, los investigadores razonaron que una molécula el doble de larga de C-10 o C-12 (que había presentado pico antivírico, pero también actividad citotóxica y hemolítica) puede conservar actividad biológica frente a los virus, pero (quizás debido al sobreplegamiento de la molécula) carece de la propiedad hemolítica y citotóxica de la molécula más corta. Los estudios en el laboratorio de los investigadores experimentando las propiedades antivíricas de n-docosanol fueron favorables (Katz, D. H., patente US nº 4.874.794).

La preparación de formulaciones tópicas, estables y eficaces que contienen n-docosanol, sin embargo, presentaban un reto. Aunque las cremas y pomadas de determinadas formulaciones convencionales fueron inicialmente adecuadas para las evaluaciones preliminares, los investigadores descubrieron que determinados excipientes eran perjudiciales para la actividad de n-docosanol. Era obvio, por consiguiente, que había necesidad de formulaciones eficaces reproducibles de n-docosanol que eran estables durante periodos prolongados de tiempo, fisiológicamente aceptables y adecuadas para la aplicación tópica a la piel y a las membranas. La preparación de composiciones estables, que contienen n-docosanol eficaces, presentaban un reto inesperadamente difícil. Las formulaciones de cremas convencionales que son completamente adecuadas para preparar cremas con vehículo para la mayoría de los productos farmacéuticos no eran satisfactorias. Aunque los compuestos que aumentan la penetración se consideraron como posiblemente deseables, el aumento de la mejora de la penetración no fue un problema específico. Muchos potenciadores de penetración están disponibles pero no existe ninguna razón para considerar tales materiales frente a la mejora de penetración y ciertamente ninguna razón para esperar que ninguno de estos materiales dé como resultado una crema que produzca un aumento de la eficacia farmacéutica y fuese estable a todas las temperaturas, dicho producto encontraría durante el almacenamiento y la manipulación, y durante todos los periodos de tiempo que sería de esperar en el almacenamiento y manipulación normal y, además, sería estable en todos los cambios de fase y/o exponiéndose a temperaturas muy por debajo del punto de congelación del constituyente acuoso de la crema y en el que los alcoholes muy hidrófobos de cadena larga de la presente invención conservarían la actividad farmacológica. Azona, descrita por Rajadhyaksha, por ejemplo, es un excelente mejorador de penetración pero no ha sido conocido como constituyente estabilizante en las formulaciones de cremas. Los ésteres de sacarosa de los ácidos grasos de coco han sido formulados como mejoradores de penetración, Cheng et al., patente US nº 4.865.848 y otras patentes. Cheng, et al., no sugieren, sin embargo, ninguna estabilización de la crema resultante de estos materiales, ni existe ninguna razón para deducir dicha estabilización de las patentes de Cheng et al. La bibliografía en dichos compuestos no sugiere que estos materiales sean particularmente eficaces para estabilizar las cremas que contienen alcohol alifático de C-20 a C-28. La presente invención se refiere a la solución de estos problemas. Específicamente, la presente invención se refiere a una crema eficaz, estable, fisiológicamente aceptable para la aplicación tópica de alcoholes alifáticos de C-20 a C-28, por ejemplo n-docosanol, para terapia.

Una variedad de composiciones de fórmulas se probaron experimentalmente en cuanto a la estabilidad y que proporcionan una crema en la que los alcoholes de cadena larga presentaban elevada actividad fisiológica en una crema tópica. Algunas formulaciones presentan poca estabilidad y algunas presentaban poca actividad fisiológica. Solamente las formulaciones que son objeto de la presente invención se encontraron que eran satisfactorias en cuanto a estabilidad y actividad.

Un resultado significativo llegó como sorpresa completa, la reducción inmediata y a veces el alivio completo del dolor de la inflamación de la piel y de las membranas mucosas.

Sumario de la invención

La presente invención se materializa en una crema terapéutica en la que la composición terapéutica principal fisiológicamente activa es un alcohol alifático de cadena larga que presenta de 20 a 28 átomos de carbono, es decir, n-icosanol, n-henicosanol, n-docosanol, n-tricosanol, n-tetracosanol, n-pentacosanol, n-hexacosanol, n-heptacosanol, y n-octacosanol, o mezclas de los mismos, para el alivio del dolor de la inflamación dérmica y de las membranas. El n-docosanol es el de más fácil adquisición de entre esta familia de alcoholes saturados de cadena lineal y es el compuesto ejemplificativo en muchos experimentos.

La presente invención se materializa también en la preparación de cremas terapéuticas que utilizan ésteres a base de sacarosa y de azúcar equivalentes que se ha descubierto que presentan una capacidad única para estabilizar las cremas que contienen por lo menos un alcohol alifático de cadena larga que presenta de 20 a 28 átomos de carbono, a saber, n-icosanol, n-henicosanol, n-docosanol, n-tricosanol, n-tetracosanol, n-pentacosanol, n-hexacosanol, n-heptacosanol, y n-octacosanol, o mezclas de los mismos, resultando ejemplificativo el n-docosanol solo o en mezcla con los otros dichos alcoholes ejemplificativos.

La presente invención se materializa en una formulación de crema tópica adecuada para utilizar en el tratamiento de enfermedades producidas por virus e inflamatorias de la piel o de las membranas de un animal, incluyendo el tratamiento de seres humanos. El ingrediente esencial de la crema es por lo menos un alcohol alifático de cadena larga que tiene de 20 a 28 átomos de carbono, es decir, n-icosanol, n-henicosanol, n-docosanol, n-tricosanol, n-tetracosanol, n-pentacosanol, n-hexacosanol, n-heptacosanol y n-octacosanol o mezclas de los mismos, resultando ejemplificativo el n-docosanol solo o en mezcla con los otros dichos alcoholes, el ingrediente fisiológicamente activo, agua, aceite, un éster de un azúcar y un ácido graso, siendo el éster fisiológicamente inerte o capaz de metabolizarse en el cuerpo, y un emoliente para ayudar a la penetración del n-docosanol en el área afectada de la piel o membrana. Como equivalentes indicados pero mucho menos disponibles y mucho más costosos que n-docosanol pueden utilizarse los alcoholes alifáticos, que tienen una longitud de cadena desde aproximadamente 20 a 28 junto con n-docosanol. Los ésteres a base de azúcar comprenden un resto de azúcar con un peso molecular superior a aproximadamente 150 y preferentemente superior a 250 y un resto de éster de ácido graso con un peso molecular de aproximadamente 150 o superior, y preferentemente superior a 250; teniendo el éster un peso molecular de aproximadamente 400 o superior. Los azúcares, tal como se utiliza el término en la presente memoria, son carbohidratos dulces o dulzones, que son derivados cetónicos o aldehídicos de los polialcoholes superiores, e incluyen tanto los sacáridos como los disacáridos, siendo preferidos los ésteres a base de disacáridos. Los alcoholes polihídricos de alto peso molecular pueden ser sustituidos con resultados satisfactorios pero menos que óptimos y, en esta medida, son equivalentes a los azúcar más tradicionales. Ejemplo de dichos tensioactivos a base de dichos azúcares esterificados pueden encontrarse en la bibliografía química generalmente y en varios catálogos, p. ej. McCutcheon's directories, Volumen 1-EMULSIFIERS & DETERGENTS, and Volume 2- FUNCTIONAL MATERIALS, (McCutcheon's Division, The Manufacturing Confectioner Publishing Co., Glen Rock, NJ, USA, 1993). Resultan preferidos los ésteres de ácido graso-sacarosa y son utilizados en los ejemplos proporcionados a continuación.

Una formulación de crema generalmente óptima comprende, en porcentaje en peso:

n-Docosanol*

5-25% o más, aunque cantidades superiores no resultarían más beneficiosas que cantidades menores, óptimamente aproximadamente 10% \pm 5%;

estearatos de sacarosa

0-15%, óptimamente aproximadamente 3 a 10% (en peso);

cocoato de sacarosa

0-15%, óptimamente alrededor del 3 al 10%;

diestearato de sacarosa

0-15%, óptimamente alrededor del 3 al 10%; con la condición de que por lo menos un éster de sacarosa o un éster basado en azúcar equivalente esté presente y que el/los éster(es) a base de azúcar comprendan aproximadamente 3 por ciento en peso o más, preferentemente alrededor de 10 \pm 5 por ciento en peso de la composición total;

aceite mineral NF

3 - 15%, óptimamente alrededor de 8% \pm 4%;

propilenglicol USP

2-10%, o emoliente funcionalmente equivalente, óptimamente alrededor de 5% \pm 2%;

éter polioxipropilen-15-estearílico

0-5%, óptimamente alrededor de 2-3%;

alcohol bencílico NF

0-5%, óptimamente alrededor de 2-3%, con la condición de que el éter polioxipropilen-15-estearílico o el alcohol bencílico o un equivalente funcional del mismo, esté presente en una cantidad de por lo menos 1%; y

agua

40-70%, óptimamente alrededor del 45 al 65%.

* O por lo menos un alcohol alifático de cadena larga que presenta de 20 a 28 átomos de carbono, a saber, n-icosanol, n-henicosanol, n-docosanol, n-tricosanol, n-tetracosanol, n-pentacosanol, n-hexacosanol, n-heptacosanol y n-octacosanol o mezclas de los mismos, resultando ejemplificativo el n-docosanol solo o mezclado con dichos alcoholes.

La invención se materializa en los procedimientos para el tratamiento de las infecciones por virus tópicas utilizando las cremas de la invención.

En un sentido más general, la invención se materializa en el tratamiento tópico de tejidos inflamados generalmente.

Breve descripción de los dibujos

Las Figuras 1 a 3 y las Figuras 6A, 6B son experimentos que implican al virus del herpes simple de tipo 1 (VHS-1), mientras que las Figuras 4 y 5 y las Figuras 7 a 9 implican al virus del herpes simple de tipo 2 (VHS-2).

La Figura 1 presenta las actividades comparativas de la Formulación I (n-docosanol 10,0%; estearatos de sacarosa 11,0%; cocoato de sacarosa 5,0%; aceite mineral 8,0%; propilenglicol 5,0%; 2-etil-1,3-hexanodiol 2,7% y agua purificada 58,3%), tres preparaciones diferentes de la Formulación II (igual que la Formulación I excepto que los estearatos de sacarosa al 5% se sustituyeron con diestearato de sacarosa y el etil hexanodiol se sustituyó por una cantidad equivalente de éter polioxipropilen-15 estearílico) y ZOVIRAX (aciclovir; Burroughs Wellcome Co., Research Triangle Park, NC; el agente actual de elección para el tratamiento de las infecciones por VHS que presenta actividad de ADN vírico polimerasa) en la inhibición de las lesiones cutáneas provocadas por VHS-1 en cobayas lampiños.

La Figura 2 presenta las actividades comparativas de la Formulación I, Formulación II y Formulación IA (n-docosanol 10,0%; estearatos de sacarosa 11,0%; cocoato de sacarosa 5,0%; aceite mineral 8,0%; propilenglicol 5,0%; alcohol bencílico 2,7% y agua purificada 58,3%).

La Figura 3A presenta una comparación de actividades de la Formulación I frente a la Formulación III (n-docosanol 10,0%; estearatos de sacarosa 5,0%; aceite mineral 8,0%; propilenglicol 5,0%; alcohol bencílico 2,7%; y agua purificada 58,3%).

La Figura 3B representa los datos que comparan las actividades de determinadas modificaciones de estas formulaciones en las que las concentraciones de tensioactivo relativas se han modificado a partir de la de la Formulación I. Se observó que las modificaciones de las concentraciones de tensioactivo presentaban efectos perjudiciales apreciables sobre el alcance de la actividad farmacéutica.

La Figura 4 representa los datos que presentan la relación de la respuesta a la dosis de la Formulación III para la inhibición de las lesiones cutáneas provocadas por VHS-2 en cobayas lampiños.

La Figura 5 representa gráficamente los datos que muestran que la crema que contiene n-docosanol a base de un sistema de tensioactivo de éster de sacarosa (Formulación III) inhibe también las lesiones cutáneas provocadas por VHS-2 en cobayas lampiños.

La Figura 6A representa gráficamente los datos que demuestran que n-docosanol formulado como una suspensión que utiliza el tensioactivo Pluronic F-68, inhibe también las vesículas provocadas por VHS-1 cuando se aplican antes de que estén presentes las vesículas. La formulación de la suspensión no contenía ninguno de los excipientes de la crema que contiene n-docosanol incluyendo el alcohol bencílico.

La Figura 6B representa gráficamente los datos que demuestran que n-docosanol formulado como una suspensión en tensioactivo Pluronic F-68, inhibe también las vesículas provocadas por VHS-1 cuando se aplican antes de que estén presentes las vesículas. La formulación de la suspensión no contenía ninguno de los excipientes de la crema que contiene n-docosanol incluyendo el alcohol bencílico.

Las Figuras 7 a 13 representan los datos que aclaran la farmacología de n-docosanol.

La Figura 7 representa los datos que demuestran que n-docosanol inhibe VHS-2 resistente a Aciclovir. Las células Vero se cultivaron en pocillos de 35 mm (6 \times 10^{5} células por pocillo) en medio solo (= ninguno) o en presencia de la concentración de acyclovir indicada, suspensión de n-docosanol-Pluronic F-68 o suspensión de referencia (Pluronic F-68 solamente). Los cultivos se inocularon 24 horas después con 150 PFU o VHS-2 natural o una cepa de laboratorio resistente a acyclovir del VHS-2 natural que estaba purificada en placa y atenuada en 20 mg/ml de acyclovir 44 horas después, las placas se incubaron, se fijaron, se tiñeron y se puntuaron por números de placas. Los datos presentados son las medias de las placas puntuadas de los cultivos por duplicado. La inhibición en porcentaje observada en los cultivos tratados con acyclovir o n-docosanol en comparación con los cultivos de referencia sin tratar se indica entre paréntesis.

La Figura 8 representa los datos que muestran la respuesta a la dosis de la formulación de la emulsión tópica de n-docosanol en VHS cutáneo en cobayas. Se limpiaron los lomos de los cobayas lampiños y se inocularon con VHS-2 mediante punción de la piel con un instrumento de tatuaje. Dos horas después de la inoculación del virus, los puntos de inoculación no se trataron o se trataron con 100 \mul de crema que contiene n-docosanol o vehículo de referencia; los puntos 24, 30, 48, 52 y 56 horas después de la inoculación del virus se trataron de igual manera. El número de vesículas por punto se determinó en los puntos de tiempo indicado. Los datos se expresan como medias y como errores estándar del número de vesículas procedente de los puntos por duplicado por determinación. Los números entre paréntesis representan el porcentaje de inhibición del número de vesículas en los puntos tratados en comparación con los puntos sin tratar.

La Figura 9 representa los datos que demuestran que VHS-2 permanece en la superficie de las células Vero tratadas con n-docosanol durante periodos prolongados. Se cultivaron células Vero como se describe en la leyenda de la Figura 7 y se incubaron durante la noche. Los cultivos se enfriaron a continuación a 4ºC, se inocularon con 100 PFU de VHS-2 y se incubaron 3 horas a 4ºC. En el tiempo cero se lavaron los cultivos con medio, se inocularon con medio reciente (que contiene el inhibidor indicado) y se incubaron a 37ºC. En cada periodo de tiempo indicado, se lavaron los cultivos con tampón de citrato (pH 2,5) y se volvieron a inocular con medio reciente (carente de inhibidor). Después de un total de 44 horas de incubación se tiñeron los cultivos y se puntuaron las placas inducidas por VHS-2. Los datos se expresan como medias geométricas y errores estándar procedentes de los cultivos por triplicado por grupo.

La Figura 10 representa los datos que demuestran que los metabolitos radioactivos de n-[^{14}C]-docosanol presenta las propiedades de fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina. Una parte (0,5 ml) del eluido de metanol del fraccionamiento lipídico de sílice se evaporó en nitrógeno, se volvió a poner en suspensión en 20 ml de cloroformo:metanol (3:2; v:v) y se salpicó en una hoja de cromatografía en capa fina de sílice (TLC). Después del revelado con cloroformo:metanol:ácido acético:agua (60:50:1:4; v:v:v:v), se determinaron las posiciones de los patrones por tinción con vapores de yodo y se determinó la cpm por fracción por espectrometría de centelleo después de cortar la hoja con dorso de plástico en tiras de 5 mm.

La Figura 11 representa los datos que demuestran que n-[^{14}C]-docosanol es metabolizado más por las células Vero que por las células MDBK. Se colocaron en placas células Vero o MDBK como se describe en la memoria. Se añadió n-[^{14}C]-docosanol hasta 6 mM (Tetronic 908 0,24 mM) y los cultivos se incubaron 72 horas a 37ºC/CO_{2}. Se extrajeron las células y se analizaron en TLC con hexano:éter dietílico:ácido acético (20:30:1; v:v:v) como disolvente de revelado. Con este sistema disolvente los fosfolípidos polares permanecen en el origen. Se indica la posición de la migración de n-docosanol. Se trataron placas por duplicado con una suspensión idéntica que carece de marcador radioactivo, y se determinaron por duplicado los números de células en estas placas haciendo el recuento de las células excluyendo el azul de tripano con un hemocitómetro.

La Figura 12 representa los datos que demuestran que n-docosanol inhibe la leucemia y la viremia provocada por el virus de Friend in vivo. Se inyectaron ratones BALB/c adultos por vía intravenosa con 75 unidades de FV formadoras de foco en el bazo. Los grupos tratados se inyectaron por vía intravenosa con las dosis indicadas de n-docosanol o vehículo Pluronic solo el mismo día de la inoculación del virus y una vez al día durante los siguientes 3 días. Después de 10 días, se sacrificaron la mitad de los animales en cada grupo y se examinaron los focos leucémicos en sus bazos (panel A). Los ratones restantes se conservaron 10 días más y se extrajo sangre para las determinaciones de viremia (panel B). Se midió la viremia utilizando el análisis en placa X-C. En resumen, se derivaron cultivos de fibroblastos primarios por digestión de embriones de BALB/c de 14 días con tripsina y se cultivaron en DMEM más suero de ternero fetal al 10%. Después de 72 horas, se transfirieron las células a placas de 16 mm (10^{5}/pocillo), se pretrataron con 5 \mug/ml de polibreno y a continuación se infectaron con unidades formadoras de placa 75 X-C de solución madre del virus de Friend o dilución del plasma de prueba. Tras la incubación durante 7 días, se irradiaron los cultivos y se sobrepusieron en células X-C (3 \times 10^{5}/pocillo). Tres días después, se lavaron los cultivos, se tiñeron y se puntuaron por placas de células gigantes multinucleadas. Los datos presentados son las medias geométricas y los errores estándar de los focos esplénicos o de unidades formadoras de placa X-C procedentes de tres animales por grupo.

La Figura 13 representa los datos que demuestran que n-docosanol inhibe la replicación in vitro de VIH-1 en cultivos de células mononucleares de la sangre periférica humana estimuladas con PHA/IL-2. Se cultivaron células mononucleares de sangre periférica humana en un medio que contiene 1 \mug/ml de PHA más 5 unidades/ml de IL-2 solo o que contiene también 100 \mug/ml de PFA, la dosis indicada de n-docosanol/Pluronic, o la cantidad de vehículo de referencia Pluronic F-68 contenida en la dosis alta de n-docosanol/Pluronic. Después de incubación toda la noche, se inocularon los cultivos con VIH-1 a una multiplicidad de infección de 1 virión/célula. Después de 24 horas de incubación a 37ºC, se lavaron los cultivos y se inocularon con medio reciente que contiene PHA e IL-2, pero que carece de inhibidor. La replicación de VIH-1 se determinó 4 días después por cuantificación de los antígenos víricos por un ELISA específico de p24 para VIH-1.

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Descripción de las formas de realización preferidas

Para preparar una crema, se mezcla a 80ºC n-docosanol (\geq 98% puro; M. Michel and Co., Nueva York, NY), compuesto insoluble en agua, con cocoato de sacarosa, estearatos de sacarosa, diestearato de sacarosa, aceite mineral, propilenglicol y éter polioxipropilen-15-estearílico. Se añadió agua y se mezcló para acabar la crema. Se puede formar también una crema añadiendo todos los materiales excepto n-docosanol al agua para formar la base de la crema y mezclar el n-docosanol en la base de la crema.

Se observó que las proporciones siguientes eran generalmente óptimas:

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1

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con la condición de que por lo menos un éster de sacarosa esté presente y que el/los éster(es) de sacarosa comprenda(n)
aproximadamente 3 por ciento en peso o más, preferentemente de aproximadamente 10 \pm 5 por ciento en peso de la composición total;

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2

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con la condición de que el éter polioxipropilen estearílico o el alcohol bencílico estén presentes en una cantidad del 2%;

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3

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* O por lo menos un alcohol alifático de cadena larga que presenta de 20 a 28 átomos de carbono, a saber, n-icosanol, n-henicosanol, n-docosanol, n-tricosanol, n-tetracosanol, n-pentacosanol, n-hexacosanol, n-heptacosanol y n-octacosanol o mezclas de los mismos, resultando ejemplificativo el n-docosanol solo o en mezcla con los otros dichos alcoholes.

Se observó también que una formulación que contiene 2-etil-1,3-hexanodiol en lugar de éter polioxipropilen-estearílico o alcohol bencílico y ésteres de sacarosa era eficaz pero se pensó que algunos pueden considerarlo indeseable que se incluya el compuesto 2-etil-1,3-hexanodiol en una composición que se pretendía para la aplicación tópica repetitiva.

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La primera formulación del LIDAKOL (marca registrada) n-docosanol que se mostró prometedora se describe en la Tabla 1 a continuación:

TABLA 1 Formulación I de n-docosanol

4

Esta fue la primera crema de n-docosanol que fue suficientemente estable durante más de un corto periodo de tiempo que permite la realización de una serie comprensiva de pruebas de terapia animal y en la que se encontró que n-docosanol era regularmente activo en el modelo de herpes animal (Figuras 1 a 3) y se utilizó para los estudios clínicos humanos iniciales en Fase I que se demuestra que son seguros y tolerables. Sin embargo, debido a que el 2-etil-1,3-hexanodiol es potencialmente inaceptable para la utilización repetitiva en determinados países fuera de los Estados Unidos, el éter polioxipropilen-15-estearílico se sustituyó por el 2-etil-1,3-hexanodiol, en cantidades equivalentes (2,7%) y 5% de los estearatos de sacarosa se sustituyó por el diestearato de sacarosa al 5%. La composición de la Formulación II de n-docosanol resultante se describe en la Tabla 2, a continuación:

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TABLA 2 Formulación II de n-docosanol

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Esta Formulación II modificada logró sustituir el etil-hexanodiol y proporcionar estabilidad física al producto farmacéutico final y se llevó a cabo bien en el modelo animal del herpes de cobaya (véanse las Figuras 1 y 2). Sin embargo, esta formulación fracasó en la prueba de eficacia de conservación de la USP y, por consiguiente, se consideró inadecuada para la aplicación clínica humana. La inestabilidad microbiológica se solucionó sustituyendo el éter polioxipropilen-15-estearílico por alcohol bencílico como excipiente co-disolvente, como se describe a continuación.

Se observó que la utilización de solo uno o dos tensioactivos de las clases descritas y que la utilización de tensioactivos en cantidades de aproximadamente 5% producía una composición estable. La capacidad de utilizar solamente uno o dos tipos de tensioactivos y la utilización de cantidades inferiores de tensioactivo para producir cremas estables fue un resultado inesperado y deseable del trabajo de laboratorio de los investigadores. El tensioactivo excesivo no es deseable porque el exceso de tensioactivo aumenta el potencial de irritación a concentraciones de tensioactivos superiores al 5%. Además, las formulaciones con cantidades excesivas de tensioactivos no iónicos frecuentemente presentan problemas con efectividad conservadora (lo que puede haber contribuido a los problemas de inestabilidad microbiológica de la Formulación II).

Utilizando varias mezclas de tensioactivo, con valores de equilibrio hidrófilo-lipófilo (HLB) que oscilan entre 9,0 y 13,0, se formularon una variedad de cremas con n-docosanol y a continuación se identificó la calidad de la emulsión óptima, las características físicas, la eficacia farmacéutica y la estabilidad física acelerada. Aunque la mayoría de las emulsiones farmacéuticas están basadas en mezclas binarias de tensioactivo para optimizar el HLB, este programa puso de manifiesto que los estearatos de sacarosa solos rinden tan bien o mejor que cualquiera de las mezclas de tensioactivos en la fórmula mejorada de n-docosanol. La composición de esta fórmula de n-docosanol mejorada (Formulación III) es la siguiente:

TABLA 3 n-docosanol (formulación III)

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Los cambios en la Formulación III mejorada en comparación con la formulación original (Formulación I) incluyen la sustitución de 2-etil-1,3-hexanodiol por alcohol bencílico, un conservante muy conocido y codisolvente con una larga historia de utilización segura y estado resumido. La naturaleza del líquido y las funciones similares del alcohol bencílico le hacen una sustitución racional y de bajo riesgo para etil hexanodiol. La concentración de tensioactivo total se redujo al 5% activo sin cambio en las características farmacéuticas del producto, sin efecto negativo sobre la calidad de la emulsión basada en el examen microscópico y sin pérdida de estabilidad física en la experimentación acelerada. Se observó que el cocoato de sacarosa era innecesario y se omitió.

La crema puede prepararse en el orden original de calefacción y adición de ingredientes, o por un procedimiento preferido de combinación de los ingredientes solubles en aceite y calentándoles por separado de los componentes solubles en agua. Los componentes solubles en aceite caliente se añaden a continuación a la fase acuosa caliente mezclándolos intensamente.

La Tabla 4 resume lo más significativo de las formulaciones evaluadas.

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TABLA 4 Formulaciones (% composición)

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La Formulación III de n-docosanol mejorada pasó la identificación de estabilidad física acelerada (almacenaje a 42ºC; ciclos de congelación-descongelación) y también pasó la prueba de efectividad de conservante USP. La eficacia farmacéutica en el modelo de herpes de cobaya se verificó en ocasiones repetidas.

Para controlar la estabilidad, las formulaciones de crema con n-docosanol se almacenaron de varias maneras, a temperatura ambiente (30ºC) a temperatura elevada (42ºC) y en condiciones de congelación-descongelación en vasos de polipropileno. Las muestras de congelación-descongelación se sometieron a 48 horas de ciclos de congelación-descongelación, es decir, 24 horas a la temperatura de congelación (-15ºC) y 24 horas a temperatura ambiente. Las muestras de crema, se almacenaron en las condiciones respectivas, se inspeccionaron visualmente la estabilidad física en varios puntos de tiempo. Después de 12 meses a 30ºC o de 3 meses a 42ºC o 24 ciclos de congelación-descongelación todas las muestras permanecieron como cremas de color blanco desvaído. No existió ninguna prueba de sinéresis o separación de fases. Basándose en la inspección visual anterior, la Formulación III de la crema de n-docosanol al 10% se consideró que era físicamente estable cuando se almacenaba en cualquiera de las condiciones indicadas.

La vida media exacta de la Formulación III no se ha determinado pero la experiencia sugiere que la vida media es más que adecuada para una crema comercial que contiene n-docosanol.

Para confirmar en un modelo animal experimental la eficacia de la crema con n-docosanol en lesiones provocadas por VHS, y para comparar su actividad con la de ZOVIRAX, se inocularon cobayas lampiños con 1 \times 10^{6} PFU de VHS-1, y a continuación se trataron con crema que contiene n-docosanol o de referencia, o pomada ZOVIRAX. Las cremas de n-docosanol se prepararon como se describe. La crema de referencia se elaboró de una manera similar excepto que el ácido esteárico se sustituyó por n-docosanol. Se comenzó el tratamiento bien 2 ó 48 horas después de la inoculación del virus. Se evaluaron los puntos de formación de vesículas, definidos como una ampolla rellena de pus, en los puntos de tiempo indicados.

La Figura 1 presenta las actividades comparativas de la Formulación I y tres preparaciones diferentes de la Formulación II así como ZOVIRAX. La Formulación I y la Formulación II de las cremas de n-docosanol presentaron ambas mayor poder inhibidor que la pomada ZOVIRAX.

La Figura 2 presenta las actividades comparativas de la Formulación I, la Formulación IA y la Formulación II. La inhibición significativa de las lesiones provocadas por VHS-1 se demostró para las tres formulaciones.

La Figura 3 presenta una comparación de actividades de la Formulación III frente a la Formulación I y también presenta determinadas modificaciones de estas formulaciones en las que las concentraciones de tensioactivo relativas han sido modificadas a partir de la Formulación I. Las modificaciones de las concentraciones de tensioactivo se observó que presentan efectos perjudiciales apreciables sobre la propagación de la actividad farmacéutica. La Formulación III se demuestra que tiene potente poder inhibidor para las lesiones provocadas por VHS-1.

Pacientes voluntarios con infecciones por VHS-1 I o II orales o genitales recurrentes se han tratado también con la crema que contiene n-docosanol tópica en varias fases de una erupción aguda del herpes. Cuando se inicia el tratamiento durante la fase prodrómica, la crema de n-docosanol generalmente interrumpe más la evolución posterior de la infección (es decir, impide la formación de vesículas). Cuando se comienza el tratamiento después que la formación de vesículas ha tenido ya lugar, la crema con n-docosanol acorta sustancialmente (p. ej., el 50% o más) el tiempo de cicatrización (es decir, la reepitelización completa) de dichas lesiones de herpes. En más de 100 episodios de pacientes orales y genitales que han sido tratados de este modo hasta ahora, se observó la eficacia terapéutica superior al 95%.

Por lo tanto, aunque la mayoría de las formulaciones de n-docosanol son inestables, las formulaciones específicas, siendo preferida la Formulación III, se ha observado que ambas son estables y eficaces.

La selección de n-docosanol al 10% en la formulación se justificó mediante un estudio de respuesta a la dosis en cobayas lampiños. Se inocularon con VHS-2 puntos en los lomos de los cobayas lampiños como se describió anteriormente. Se trataron los puntos con 1%, 5%, 10% y 20% de formulaciones con n-docosanol. Se incluyó también en el estudio un vehículo de referencia que no contiene n-docosanol. Los resultados, ilustrados en la Figura 4, demuestran que después de 72 horas de inoculación del virus los puntos sin tratar presentaban una media de 41 vesículas. El tratamiento con 20% y 10% de crema que contiene n-docosanol inhibió el número de vesículas en el 50% y 60%, respectivamente. Las cremas que contienen 1% y 5% de n-docosanol fueron menos eficaces que la preparación al 10%. El vehículo de referencia no presentó efecto inhibidor apreciable.

Los expertos en la materia de formulación de cremas de compuestos hidrófobos e hidrófilos reconocerán que determinadas sustituciones están disponibles. Puede utilizarse glicerol u otro glicol, con algunos ajustes en las proporciones, en lugar de propilenglicol, por ejemplo. Otros éteres a base de polioxialquileno puede observarse también que son sustituibles por éter de polioxipropilen-15-estearílico. Las proporciones relativas de los ésteres a base de azúcar pueden variarse considerablemente, siempre que la cantidad total de éster a base de azúcar presente sea suficiente para estabilizar el n-docosanol. Esta cantidad se cree que oscila desde aproximadamente el 5% hasta aproximadamente el 25% en peso, aunque las cantidades mínima y máxima no han sido determinadas con precisión.

La fórmula actual preferida de la crema con n-docosanol es la Formulación III que contiene 10% de n-docosanol, 5% de estearatos de sacarosa, 8% de aceite mineral NF, 5% de propilenglicol USP, 2,7% de alcohol bencílico NF y 69,3% de agua purificada.

Dado que se describió que el alcohol bencílico presentaba alguna actividad antivírica en determinadas circunstancias (Farah, A. E. et al., patente US nº 4.200.655) la formulación de la presente invención se probó para determinar si el alcohol bencílico actúa como un reactivo antivírico en la formulación. La crema que contiene alcohol bencílico y n-docosanol (crema con 10% de n-docosanol) y la crema que contiene alcohol bencílico solo (placebo) se probaron en lesiones cutáneas provocadas por VHS-2 en cobayas lampiños. Se inocularon puntos en los lomos de cobayas con VHS-2. Los puntos se trataron como se indica en la figura 5 y se evaluó la formación de vesículas 48, 56, 72 y 78 horas después de la inoculación del virus. Hubo un promedio de 44 vesículas en los puntos no tratados en el punto de tiempo de 48 horas, con una constante mantenida relativamente hasta 72 horas después de la infección. En el punto de tiempo de 78 horas, la resolución de las lesiones fue evidente y durante 96 horas después de la inoculación las vesículas no fueron ya más visibles. El tratamiento con la crema con n-docosanol inhibió el número de vesículas en el 50 al 60% en los puntos de tiempo de 48 a 56 horas y por una cantidad ligeramente mayor en los puntos de 72 a 78 horas de análisis. El tratamiento con el vehículo de referencia resultó sin efecto apreciable en el número de vesículas en cualquier punto de tiempo. Los puntos sin tratar y tratados se separaron y procesaron para cultivo vírico. La presencia de vesículas se correlacionó directamente con la presencia de virus infecciosos independientemente del tratamiento o del tiempo de análisis (no mostrado). Por lo tanto, el número de vesículas es un indicador apropiado del estado patológico en los estudios descritos en la presente memoria. Además, la crema y el placebo se analizaron en un estudio piloto en fase II que comprende 68 pacientes con herpes labiales. El resultado de la prueba doble a ciegas demostró que la aplicación al principio de la crema con n-docosanol acorta la duración de los episodios casi a la mitad. El periodo de erupción medio de los grupos tratados fue de 3,4 días, mientras que el grupo del placebo presentó erupciones de 6,6 días de promedio. Los resultados anteriores demuestran que la presencia de n-docosanol en la formulación es necesaria para la acción antivírica significativa.

La actividad antivírica de n-docosanol se ha demostrado también en una formulación en suspensión de n-docosanol en el tensioactivo no iónico Pluronic F-68 que no contenía ninguno de los excipientes de la formulación de la crema con n-docosanol al 10% que incluye alcohol bencílico. Los resultados, resumidos en la Figura 6 demuestran dos puntos importantes. En primer lugar, como se presenta en el panel A, una formulación en suspensión de n-docosanol en Pluronic F-68 también inhibe las vesículas producidas por VHS-1 cuando se aplica 2 horas después de la infección del virus, como se observa con la formulación de la crema. De este modo, los puntos sin tratar presentaban una media de 74 vesículas a las 48 horas después del virus, pero solamente se observaron 28 vesículas en los puntos tratados con n-docosanol/F-68 (63% de inhibición). El tratamiento con ZOVIRAX, el tratamiento actual de elección para las infecciones por VHS en seres humanos, se asoció también a la disminución del número de vesículas, pero menos que con n-docosanol. El tratamiento continuado con n-docosanol produjo muy pocas vesículas en el punto de 72 horas también. El control del vehículo para la preparación de n-docosanol quedó sin efecto en cualquier punto de
tiempo.

El segundo punto principal procedente de la Figura 6 es que n-docosanol activa la resolución provocada por VHS-1 aun cuando se administre después que las vesículas hayan aparecido (Panel B). Los diversos puntos presentaban un número aproximadamente equivalente de vesículas en el punto de tiempo de 48 horas, lo que sería de esperar ya que ninguno había sido tratado en este periodo. Los números de vesículas disminuyeron en los puntos no tratados desde una media de 73 vesículas a las 48 horas a 43 vesículas a las 72 horas. El tratamiento con ZOVIRAX se asoció a una resolución de la enfermedad someramente activada a las 72 horas (27 vesículas, una disminución del 37% frente a los puntos no tratados), que es coherente con otros experimentos de un diseño similar. Es de importancia, la aplicación de la resolución de vesículas significativamente acelerada por n-docosanol/F-68 como se muestra por la inhibición del 77% del número de vesículas en comparación con el grupo no tratado. Las mismas conclusiones se obtuvieron utilizando la formulación de la crema en experimentos de un diseño similar. Esto demuestra que n-docosanol no necesita administrarse profilácticamente para alterar el curso de la enfermedad provocado por VHS.

Se realizaron tres estudios de seguridad y tolerancia en voluntarios masculinos y femeninos caucásicos sanos. Se expusieron al fármaco un total de 78 voluntarios sanos. Los estudios de seguridad indicaron que la formulación de la crema con 10% de n-docosanol no parece producir fototoxicidad, pero es un irritante primario suave que también tiene potencial, aunque de baja incidencia, para producir sensibilización alérgica (1 paciente de los 78 expuestos experimentó dermatitis por contacto).

Se han completado dos estudios de eficacia clínica. El estudio A fue un estudio de Fase 2 al azar, doble a ciegas, controlado por placebo en 63 pacientes (masculinos y femeninos) con herpes labial recurrente. Los 31 pacientes tratados con crema con 10% de n-docosanol en el estudio de herpes labial, Estudio A, completaron su tratamiento; 2 de estos 31 pacientes describían una sensación de ardor o de picazón después de la aplicación de la crema. Ningún cambios clínicamente significativo en los valores de laboratorio clínico (análisis de sangre, hematología y análisis de orina) se puso de manifiesto en ambos estudios. El Estudio B fue una prueba al azar, doble a ciegas, controlada por placebo en 44 pacientes femeninas con herpes genital recurrente. Los 22 pacientes tratados con crema con 10% de n-docosanol en el estudio genital, Estudio B, completaron su tratamiento sin describir ningún episodio adverso relacionado con el fármaco.

Estudio A

Sesenta y cinco pacientes (de 18 a 60 años de edad) tomaron parte en el Estudio A, 32 pacientes se seleccionaron al azar inicialmente para recibir crema con 10% de n-docosanol y 33 se seleccionaron inicialmente al azar para recibir crema con placebo. El tratamiento fue iniciado por el paciente, y la iniciación del tratamiento era definido como "precoz" si el tratamiento comenzaba en la fase prodrómica o de eritema y como "tardío" si se iniciaba en la fase de pápula o después. Se excluyeron dos pacientes del análisis. De los 63 pacientes evaluables, 22 se incluyeron en la fase del estudio cruzado. Además, 13 pacientes se trataron más de un episodio con la misma modificación del estudio. Por consiguiente, se analizaron un total de 98 episodios de herpes (48 tratados con crema con 10% de n-docosanol y 50 tratados con crema con placebo).

Los resultados del Estudio A se resumen según los primeros episodios del tratamiento, los tratamientos de cruce y todos los episodios del tratamiento se combinan en la Tabla 5.

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TABLA 5 Estudio A: Tiempo de cicatrización (días) de episodios recurrentes de herpes labial

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Se trataron treinta y un (31) pacientes con primer episodio de herpes labial con 10% de n-docosanol y 32 con placebo (Parte A). Diez pacientes del grupo de n-docosanol y 4 del grupo del placebo se clasificaron como tratamientos precoces. El tiempo medio de cicatrización en el grupo de n-docosanol del tratamiento precoz fue de 2,5 días, una reducción en el tiempo medio de cicatrización de 4,3 a 4,8 días en comparación con las demás modalidades de tratamiento. Esta diferencia fue estadísticamente muy significativa (P=0,0001) a favor de n-docosanol. En la cohorte del tratamiento tardío, n-docosanol redujo el tiempo medio de cicatrización en los primeros episodios en 0,5 días, lo que no es estadísticamente significativo.

De los 22 pacientes introducidos en el estudio cruzado, el número que había tratado sus lesiones inicialmente en ambas partes del estudio (7 que utilizan n-docosanol en la fase de cruce y 1 que utiliza placebo) fue demasiado pequeño para el análisis estadístico significativo (Parte B). Sin embargo, un número sustancial (15 que utilizan n-docosanol en la fase de cruce y 21 que utilizan placebo) habían tratado sus lesiones tarde, permitiendo de este modo la comparación entre pacientes a este respecto. El análisis de varianza de los resultados del tratamiento tardío puso de manifiesto una diferencia significativa a favor de n-docosanol (P = 0,03).

Evaluando los datos de los 98 episodios del tratamiento del Estudio A conjuntamente (episodios individuales, episodios cruzados y episodios adicionales con la misma medicación) se pone de manifiesto una reducción estadísticamente significativa (P = 0,02) en el tiempo de cicatrización total medio de 1,6 días en pacientes tratados con n-docosanol (5,7 días) frente a pacientes tratados con placebo (7,3 días) (Parte C). En los 20 episodios totales clasificados como tratamientos precoces, el n-docosanol tópico redujo el tiempo medio de cicatrización en 3,3 días (P = 0,05). Por último, cuando la eficacia del tratamiento precoz con n-docosanol se comparó con las demás modalidades de tratamiento, el tiempo de cicatrización medio en el grupo de n-docosanol de tratamiento precoz (3,4 días) difiere completamente de manera significativa del intervalo de 6,5 a 7,4 días en los demás grupos; esta diferencia fue muy significativa a favor de n-docosanol (P = 0,0002). Las diferencias entre el tratamiento tardío con 10% de n-docosanol y el tratamiento precoz y tratamiento con placebo precoz y tardío no fueron significativas.

Como se demuestra por los datos detallados en la Tabla 5, el tratamiento precoz con crema con 10% de n-docosanol (en la fase prodrómica o de eritema) produjo un acortamiento muy significativo del tiempo de cicatrización en comparación con el obtenido en los demás tratamientos. Además, el tratamiento tardío, comenzó una vez que las lesiones habían aparecido, dando como resultado una reducción estadísticamente significativa del tiempo de cicatrización en el grupo tratado con n-docosanol en la parte de cruce del estudio, aunque no en los demás análisis.

Estudio B

En el primer estudio clínico, sesenta pacientes femeninos con herpes genital recurrente se incluyeron en el estudio aunque sin síntomas y no en fase prodrómica. Treinta sujetos se eligieron al azar inicialmente para recibir crema con 10% de n-docosanol y 30 para recibir crema con placebo en esta prueba iniciada por el paciente para el tratamiento de recurrencias de herpes genital en fase precoz. Cuarenta y cuatro pacientes iniciaron el tratamiento y volvieron a la clínica con un episodio herpético, 22 de estos pacientes recibieron n-docosanol y 22 recibieron placebo.

El tiempo medio de cicatrización en los 16 pacientes evaluables de n-docosanol fue de 4,7 días \pm 1,9, variando de 1,8 a 8,6 días; para los 18 pacientes de placebo evaluables, la cicatrización fue completa dentro de una media de 5,1 días \pm 2,3, oscilando entre 1,7 y 10,4 días. La diferencia no fue estadísticamente significativa (p = 0,5827, prueba de la t). Los pacientes sin lesiones genitales, que no fueron observantes y tenían interrupciones de dosificación, quienes presentaban pródromo con episodio no observable, o quienes presentaban infección por levadura simultánea, se consideraron no evaluables. Cuando se incluyen todos los pacientes, el tiempo medio de cicatrización del grupo de n-docosanol fue de 5,5 días \pm 2,5, oscilando entre 1,8 y 9,8 días. Para el grupo del placebo, la cicatrización se consiguió en una media de 4,7 días \pm 2,3. El tiempo de cicatrización en este grupo osciló entre 1,7 y 10,4 días. No existe ninguna diferencia estadísticamente significativa en el tiempo medio de cicatrización entre los 2 grupos de tratamiento (p = 0,2703, prueba de la t). Tampoco existió ninguna diferencia estadísticamente significativa entre los grupos de tratamiento cuando los pacientes se estratificaron según la fase de las lesiones (pródromo, eritema o pápula) cuando se inició el tratamiento. El tiempo de cicatrización medio basado en las valoraciones del paciente fue similar al de los médicos (5,6 días para todos los pacientes de n-docosanol frente a 4,5 para todos los pacientes de
placebo).

Se realizaron tres análisis de dolor, basados en la autoevaluación del dolor de los pacientes: tiempo hasta "sin dolor" mantenido; tiempo hasta el primer "sin dolor"; y tiempo hasta la primera reducción de dolor. El tiempo hasta "sin dolor" mantenido se midió desde el periodo del primer dolor en la aplicación hasta el tiempo cuando 1) el dolor se clasificó como "sin dolor" durante un mínimo de 2 registros consecutivos; y 2) durante el resto del episodio, los registros de dolor adicionales no fueron más frecuentes y graves que 2 episodios separados de 2 registros consecutivos de dolor "leve". El tiempo hasta el primer "sin dolor" se definió como el intervalo entre el primer dolor en la aplicación al primer registro "sin dolor". El tiempo hasta la primera reducción de dolor se midió desde el tiempo del primer dolor en la aplicación hasta el primer tiempo cuando se notó una disminución del nivel de dolor, en comparación con la evaluación anterior. Se excluyeron varios pacientes de estos análisis debido a su falta de dolor en las primeras 24 horas, o a la no observancia en la descripción del dolor.

Los 15 pacientes evaluables tratados con n-docosanol consiguieron una respuesta mantenida "sin dolor" antes que los 14 pacientes de placebo evaluables: una media de 3,2 días \pm 1,9 para los pacientes de n-docosanol en comparación con 4,1 días \pm 2,5 para los pacientes de placebo. Los pacientes de n-docosanol también alcanzaron "sin dolor" antes que los pacientes de placebo. Los pacientes de n-docosanol registraron en primer lugar "sin dolor" una media de 2,6 días \pm 2,1 después del comienzo del dolor, mientras que los pacientes de placebo en primer lugar describieron "sin dolor" una media de 3,4 días \pm 2,1 después del comienzo del dolor. Entre los pacientes de n-docosanol evaluables, la primera reducción de dolor, en comparación con el dolor en la aplicación anterior, se produjo a una media de 1,2 días \pm 1,0 después del comienzo del dolor. La primera reducción de dolor se produjo en los pacientes de placebo a una media de 1,8 días \pm 1,4. Estas diferencias no fueron estadísticamente significativas (p = 0,2775, 0,325 y 0,1757, respectivamente, prueba de la t). Los pacientes con lesiones no genitales, que no fueron observantes o que presentaban interrupciones de dosificación, pródromo en los episodios no observables y la infección con levadura simultánea, se consideraron no evaluables.

La invención, según el descubrimiento sorprendente que consiste en que es un agente de alivio del dolor tópico eficaz, comprende un procedimiento para reducir el dolor de una inflamación superficial de la piel o membrana que comprende aplicar a la superficie inflamada una composición de por lo menos un alcohol alifático de cadena larga que presenta de 20 a 28 átomos de carbono seleccionado de entre el grupo constituido por n-icosanol, n-henicosanol, n-docosanol, n-tricosanol, n-tetracosanol, n-pentacosanol, n-hexacosanol, n-heptacosanol y n-octacosanol o mezclas de los mismos, en un portador fisiológicamente compatible, comprendiendo dicho alcohol desde aproximadamente 5% a aproximadamente 25% en peso de dicha composición. Preferentemente, el vehículo fisiológicamente compatible es una base de crema que comprende uno o más compuestos seleccionados de entre el grupo constituido por cocoato de sacarosa, estearatos de sacarosa y diestearato de sacarosa y uno o más compuestos seleccionados del grupo constituido por éter de polioxipropilen estearílico, etil hexanodiol y alcohol bencílico.

Aunque no se observaron diferencias estadísticamente significativas en el Estudio B en el tiempo para cicatrización entre los pacientes que recibieron crema con 10% de n-docosanol y los que recibieron crema con placebo, aunque existía una tendencia hacia un tiempo para la cicatrización entre los pacientes evaluables tratados con n-docosanol. Los tres análisis de dolor diferentes presentaban una resolución más rápida del dolor en los sujetos que recibieron crema con 10% de n-docosanol, aunque ninguna de las diferencias fue estadísticamente significativa. La incapacidad para detectar la significancia estadística en este estudio puede reflejar, en parte, (1) la pequeña población del estudio; (2) diferencias en la introducción al estudio entre los dos grupos de estudio con respecto a los antecedentes naturales de las lesiones de herpes genital; y (3) una distribución desigual entre los dos grupos de la fase de lesión en el episodio y en el inicio del tratamiento.

Además de los estudios clínicos, se realizaron varios estudios para aclarar la farmacología del n-docosanol. Estos estudios produjeron los datos representados en las Figuras 7 a 13, y se exponen a continuación.

Uno de los obstáculos más difíciles de superar con el fin de estudiar la actividad biológica de n-docosanol fue el desarrollo de una formulación apropiada que permita la administración aceptable del compuesto a los sistemas biológicos. Inicialmente, esto se llevó a cabo formulando una suspensión de la molécula hidrófoba en el tensioactivo inerte y no iónico no tóxico, Pluronic F-68. Dichas suspensiones demostraron ser homogéneas en calidad, consistentes en partículas que contienen n-docosanol de 0,10 micras de tamaño medio. Suspendida de esta manera en n-docosanol ejerce una actividad inhibidora excelente in vitro contra la infección de ambos tipos 1 y 2 del virus del Herpes simple (VHS) tanto de la línea celular del simio como la humana. De manera significativa, las suspensiones de n-docosanol/Pluronic son igualmente eficaces tanto contra los mutantes naturales como resistentes a acyclovir de VHS. Por lo tanto, como se muestra en la Figura 7, Panel A, tanto acyclovir como n-docosanol inhibe la formación de placas por VHS-2 natural igualmente. La Figura 7, Panel B ilustra que un mutante de VHS-2 resistente a acyclovir no puede responder a acyclovir, como sería de esperar, pero es muy claramente susceptible a la actividad inhibidora de n-docosanol. La última barra en ambos paneles ilustra que el tensioactivo Pluronic solo carece de cualquier actividad antivírica. La toxicidad de la célula hospedadora no se observó incluso con n-docosanol 300 mM.

Las dosis aparentemente muy altas de n-docosanol utilizadas en estos estudios de cultivo tisular merecen especial comentario. Esto es realmente una herramienta del sistema in vitro, y se debe a la administración limitada de la molécula de la suspensión en partículas a las células adherentes. La transferencia puede estar limitada por varias razones. En primer lugar, la densidad de este tipo de suspensión produce la mayoría de las partículas que flotan hacia arriba. Por consiguiente, existe una herramienta fisicoquímica creada en el pocillo de cultivo tisular que requiere grandes cantidades periféricas del fármaco en suspensión con objeto de obtener el gradiente dinámico del fluido requerido para administrar una dosis bioactiva a la monocapa de la célula diana unida. En segundo lugar, la transferencia de las moléculas de n-docosanol desde las partículas termodinámicamente estables hasta las células cultivadas no es de esperar que sea un proceso eficaz. Como se demuestra por los estudios de absorción, la dosis bioactiva existente de n-docosanol en estos cultivos es 1/1.000 de la dosis mostrada en las Figuras 7 y 9; en efecto uno puede simplemente traducir el número mostrado en mM a \muM.

La actividad antivírica en un sistema de cultivo tisular no siempre se traduce en eficacia farmacéutica en todos los estudios animales o en el hombre. Por consiguiente, los investigadores examinaron la actividad de la emulsión tópica para su utilización humana (lo que se diseñó específicamente para maximizar la penetración en la piel y minimizar las reacciones de irritación local potenciales) en el tratamiento de lesiones cutáneas provocadas por VHS en cobayas. Se inoculó VHS-1 o -2 con un instrumento de tatuaje en la piel de los lomos de los cobayas lampiños. Se dejaron puntos sin tratar o se trataron con concentraciones variables de crema que contiene n-docosanol o el vehículo de referencia. El tratamiento se aplicó 2 horas después de la inoculación y de nuevo a las 24, 36 y 48 horas. La formación de vesículas se enumeró en los puntos de inoculación en los puntos de tiempo de 56 y 72 horas tras la inoculación, que representan las fases de pico y de resolución respectivamente, de la enfermedad. Los datos presentados en la Figura 8 ilustran concentraciones de experimentación del estudio de respuesta a la dosis de cremas con 1%, 5%, 10% y 20% de n-docosanol para la inhibición de las lesiones provocadas por VHS-2 en la piel de cobaya hirsuto. El placebo correspondiente a la preparación que contiene 10% de n-docosanol se incluyó en este experimento y los datos obtenidos con el placebo se ilustran en la parte superior del gráfico de líneas en la columna horizontal con el punto de datos indicados por la flecha. Únicamente se presentan los datos del punto de tiempo a las 72 horas, pero un modelo similar de inhibición se observó en los periodos iniciales. Como se muestra, esta formulación tópica de n-docosanol ejerce buena actividad antivírica; se obtuvo actividad inhibidora óptima con 10% de crema (60% de inhibición) y esencialmente se observó actividad comparable con el 20% de la preparación. La actividad inhibidora algo inferior de la crema del 20% es una observación coherente y lo más probable se refiere a la saturación de los tensioactivos por la molécula de n-docosanol hidrófoba como se prueba por el mayor tiempo necesario para conseguir la desaparición de la crema en la piel (no mostrado). Las cremas que contienen 5% y 1% de n-docosanol fueron claramente menos eficaces que la preparación del 10%, y el placebo correspondiente a la crema con 10% no tenía absolutamente ninguna actividad. Aunque no se muestra, se han obtenido resultados comparables con lesiones cutáneas provocadas por VHS-1 en este modelo de cerdo de guinea lampiño. Por lo tanto, la crema con 10% de n-docosanol es eficaz para reducir las lesiones cutáneas provocadas por VHS en cobayas.

Se realizaron estudios extensos diseñados para delinear el mecanismo mediante el que el n-docosanol ejerce su actividad antivírica. Las implicaciones colectivas de los resultados de los estudios son que el compuesto parece que interfiere con uno o más de las vías comunes de entrada vírica en la célula y la migración al núcleo de las células diana infectadas. Los puntos clave de la prueba que soportan esta idea pueden resumirse de la manera siguiente: (a) el compuesto no tiene actividad viricida directa, ya que el virus puede mezclarse con una suspensión de n-docosanol, recuperarse a continuación de la suspensión y se demuestra que mantiene la capacidad de infección normal; (b) aunque el compuesto no interfiere con la unión del virus del herpes a los receptores específicos de VHS en las células diana, los viriones de VHS que se han unido a los receptores de la célula diana en presencia de n-docosanol permanecen en la superficie de la célula durante un periodo de tiempo prolongado; y (c) la migración ulterior al núcleo de la célula del virus que ha sido interiorizado se inhibe de manera significativa, según se mide por el núcleo VHS detectable y la proteína de la envol-
tura, los números de células que expresan la proteína inmediata precoz, ICP-4, y los análisis de la placa secundaria.

El retraso en la interiorización del virus descrito anteriormente se ilustra en el experimento resumido en la Figura 9. En este experimento, se incubó VHS-2 con células Vero en ausencia o presencia de n-docosanol a 4ºC para permitir la unión del receptor del virus. Al cabo de 3 horas, todos los cultivos se lavaron y a continuación se volvieron a colocar en placas a 37ºC con objeto de iniciar el proceso de introducción vírica. A intervalos de 20 minutos a continuación, se expusieron varios cultivos a tampón de citrato de pH 3,0 en las condiciones que eliminan e inactivan la unión a la superficie, pero no internalizadas, los viriones de VHS y a continuación se volvieron a cultivar el periodo de 44 horas completo requerido para desarrollar las placas óptimas de VHS. Todos los cultivos expuestos a tampón citrato en el tiempo 0 no pudieron desarrollar placas, como era de esperar. Como se demuestra por las líneas superiores del gráfico, la interiorización de VHS-2 es prácticamente completa en 20 minutos después del cambio a 37ºC en los cultivos sin tratar y tratados con la referencia de Pluronic. En cambio, la interiorización de VHS en los cultivos tratados con n-docosanol fue inferior al 40% completa en 20 minutos y requirió más de 1 hora para alcanzar la terminación. Estos resultados indican claramente que la cinética de la fusión vírica y/o la migración a través de la membrana son retardadas de alguna manera por n-docosanol.

Aún después de la interiorización se alcanza la terminación en las células tratadas con n-docosanol, la migración vírica ulterior al núcleo celular se inhibe de manera significativa. Por lo tanto, las cantidades tanto de núcleo de VHS como de los antígenos de la proteína de la envoltura detectables por ELISA, así como las numerosas células infectadas que expresan la proteína inmediata precoz específica para VHS, ICP-4, por inmunofluorescencia, se reducen en más del 80%. Por último, la replicación de los viriones infecciosos medidos en los cultivos del análisis de la placa secundaria disminuyen notablemente en el 99% o más en las células tratadas con n-docosanol.

Para resumir, la presencia de n-docosanol no tiene ningún efecto en las etapas iniciales de la unión vírica, pero retarda considerablemente la entrada del virus en el citoplasma de la célula diana mediante algún mecanismo todavía por determinar. Además, el proceso de migración al núcleo, y la localización en el mismo está sustancialmente bloqueado, lo que tiene el efecto último de una disminución notable en la replicación vírica productiva.

Con el fin de definir mejor el mecanismo exacto por el que el n-docosanol ejerce su acción antivírica, los investigadores han estudiado recientemente la absorción, distribución y metabolismo celular de n-docosanol a partir de suspensiones estabilizadas con tensioactivo. Los resultados de dichos estudios han proporcionado alguna comprensión en las bases metabólicas de la acción antivírica del compuesto. En primer lugar, los investigadores han podido demostrar que el n-docosanol marcado con radioactividad se incorpora progresivamente en las células Vero cultivadas, alcanzando una absorción en el pico por célula entre 6 y 12 horas después de la exposición. El proceso es irreversible, ya que una vez el compuesto está asociado a la célula no puede separarse incluso con lavado intenso con bromuro de cesio, que elimina eficazmente las partículas unidas a la célula asociada de manera no específica.

En segundo lugar, a las concentraciones de saturación, menos del 1% del n-docosanol total añadido a los cultivos llega a estar asociado a la célula a las 24 horas. No obstante, esto corresponde a casi 8 \times 10^{9} moléculas por célula, una cantidad sorprendente, que se aproxima al número de moléculas de lípido que se encuentran típicamente en las membranas plasmáticas. El hecho de que dicha pequeña fracción de n-docosanol en la suspensión añadida a los cultivos llega a estar asociada a las células indica que la dosis bioactiva existente es órdenes de magnitud menor que la cantidad de fármaco añadido a los cultivos.

Los estudios de distribución celular que examinan fracciones subcelulares recuperadas por centrifugación diferencial de las células disgregadas por tratamiento con ultrasonidos demostraron que después de 12 horas de exposición el 75% del compuesto radioactivo está contenido en las membranas celulares, y menos de 1% está asociado a fracciones nucleares; el balance de radioactividad se encontró asociado a la fracción citoplasmática soluble.

Los análisis de las conversiones metabólicas de n-docosanol han demostrado que el compuesto se metaboliza progresivamente en compuestos polares, que se demostraron por cromatografía en capa fina que eran fosfolípidos, generados ya sea por reacciones anabólicas (enlaces éter) o catabólicas (oxidativas). La Figura 10 demuestra que un análisis cromatográfico en capa fina de una fracción eluida de metanol (que contiene fosfolípidos) de una columna de gel de sílice de un extracto de células Vero tratadas con n-docosanol. Se eluyó previamente n-docosanol no metabolizado procedente de sílice con cloroformo. Como se muestra, aproximadamente el 62% de los recuentos migrados en la zona de la fosfatidilcolina y el 38% migrados en la zona de la fosfatidiletanolamina. Los estudios de los investigadores han documentado también que dichas conversiones metabólicas pueden ser bloqueadas por inhibidores metabólicos apropiados. Por lo tanto, la energía eficaz envenena la azida sódica y 2-desoxiglucosa reducen tanto la absorción de n-docosanol por las células Vero en el 90% y la conversión metabólica en metabolitos polares en el 80%. Es probable que la combinación de azida sódica y 2-desoxiglucosa inhiba principalmente la absorción celular de n-docosanol inhibiendo la endocitosis; sin embargo otros mecanismos de absorción, incluyendo un mecanismo de fusión dependiente de la energía, o un mecanismo de difusión pasivo facilitado por el metabolismo dependiente de la energía ulterior de n-docosanol, podría ser también inhibido por estos venenos energéticos.

Un aspecto interesante de estos estudios es la indicación de una posible función de los metabolitos polares de n-docosanol en la actividad antivírica del compuesto. Se ha demostrado recientemente que la resistencia de los fibroblastos de ratón a la fusión provocada por polietilenglicol se correlaciona con un aumento tanto en los alcoholes grasos libres como una elevación en los glicéridos, incluyendo un compuesto con enlace éter que sería análogo a los productos obtenidos mediante conversión metabólica de n-docosanol como se describió anteriormente. Los investigadores realizaron, por consiguiente, experimentos para investigar la posibilidad de que la conversión enzimática de n-docosanol sea un prerrequisito necesario para su actividad antivírica. Los resultados de dichos estudios han demostrado, en primer lugar, que la velocidad y el alcance de la conversión metabólica, pero no de la absorción celular, de n-docosanol en sus metabolitos polares se determina por la naturaleza del tensioactivo utilizado para poner en suspensión el compuesto y, de hecho, que la eficacia de la conversión metabólica se correlaciona directamente con la magnitud de la actividad antivírica de n-docosanol.

Una etapa inicial en la realización de dichos estudios implicaba la conexión con un tensioactivo diferente para poner en suspensión n-docosanol. El Tetronic 908 está íntimamente relacionado con Pluronic F-68; ambos son copolímeros de bloque de óxido de etileno y óxido de propileno. Sin embargo, mientras que el Pluronic es un polímero bifuncional con un peso molecular de 8.400, Tetronic 908 es un copolímero tetrafuncional, producido al añadir óxido de propileno y óxido de etileno a etilendiamina y que da como resultado una molécula con un peso molecular medio de 25.000. Entre otras cosas, cuando las células Vero se exponen a dosis equivalentes de n-docosanol suspendidas en Tetronic frente a Pluronic, la velocidad y alcance del metabolismo del compuesto a metabolitos polares es significativamente superior con la suspensión de Tetronic que con la de Pluronic. La absorción total de n-docosanol radioactivo fue equivalente en las dos formulaciones de suspensión diferentes; únicamente la conversión metabólica difirió de manera significativa. En relación con esta conversión metabólica mayor de las suspensiones de Tetronic a Pluronic está el descubrimiento de que ED_{50} para inhibición de la replicación de VHS por n-docosanol es 5 a 10 mM en Tetronic y aproximadamente 3 veces mayor en Pluronic. Esto parece tener relación con las concentraciones 3 veces mayores de la conversión metabólica en las células tratadas con n-docosanol en Tetronic.

Para eliminar la posibilidad de que estos descubrimientos sean peculiares para el sistema de cultivo de células Vero, los descubridores hicieron un análisis recíproco tomando ventaja del hecho de que, en relación con las células Vero, la línea celular de riñón bovino de tipo epitelial, MDBK, presenta una resistencia interesante aparente a la actividad anti-VHS del n-docosanol. Esta diferencia es significativa en que n-docosanol es 3 a 4 veces más eficaz para inhibir las placas producidas por VHS en las células Vero que en las células MDBK. Cuando los investigadores compararon la absorción celular total y el metabolismo relativo, los resultados fueron sorprendentemente claros. En primer lugar, tanto las cantidades totales de absorción de n-docosanol como las cantidades relativas de la conversión metabólica fueron 3 a 4 veces mayores en células Vero que en células MDBK. El efecto combinado de la disminución de absorción y de la disminución de metabolismo en células MDBK frente a células Vero se ilustra gráficamente en la Figura 11, que presenta de manera muy clara que después de 72 horas, las células Vero contienen casi 4 veces cantidades mayores del metabolito fosfolípido, que continúa en el origen en su sistema disolvente. No obstante, de los recuentos que se metabolizan en dos estirpes celulares, las cantidades relativas en las clases principales de fosfátidos que se forman, fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina, no son diferentes en las dos estirpes celulares. Además, los experimentos de pulsación-búsqueda demuestran que ambas líneas ocasionalmente convierten todos los recuentos incorporados en la forma más polar. Dichos resultados sugieren que las células MDBK pueden regular la absorción de manera eficaz y/o el metabolismo del n-docosanol en todo un mecanismo de tipo retroalimentación que es menos eficaz o no operativo en las células Vero.

De acuerdo con las observaciones mecanísticas resumidas anteriormente, los autores pronosticaron que n-docosanol tendría potencial para interferir con una variedad de diferentes virus, específicamente aquellos que contienen lípido en sus envolturas externas y que utilizan mecanismos de fusión para introducir células diana sensibles. La Tabla 5 resume los virus humanos y murinos de la envoltura lipídica que, hasta la fecha, se ha demostrado que son sensibles a la actividad antivírica de n-docosanol.

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TABLA 6 Espectro de actividad antivírica de n-docosanol* frente a los virus con envoltura lipídica

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10

*

O por lo menos un alcohol alifático de cadena larga que tiene 20 a 28 átomos de carbono, es decir, n-icosanol, n-henicosanol, n-docosanol, n-tricosanol, n-tetracosanol, n-pentacosanol, n-hexacosanol, n-heptacosanol y n-octacosanol o mezclas de los mismos, n-docosanol solo o en mezcla con otros de dichos alcoholes que son a título de ejemplo.

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Cada virus de la envoltura lipídica probado puede ser bloqueado eficazmente por este fármaco. En contraste con su falta de eficacia uniforme contra los virus de la envoltura lipídica, el fármaco no ejerció ninguna actividad detectable contra poliovirus o reovirus, el virus no desarrollado que los investigadores han examinado por sensibilidad al compuesto.

El n-docosanol tiene actividad antirretrovírica tanto in vitro como in vivo. Una formulación que posee actividad antirretrovírica y que carece de toxicidad tendría falta de utilidad sustancial para tratar una variedad de enfermedades retrovíricas en seres humanos y animales domésticos. No obstante las implicaciones para el tratamiento del SIDA, la disponibilidad de un régimen de tratamiento para las enfermedades producidas por retrovirus similares al virus de la leucemia felina, el virus de la leucemia bovina, así como HTLV-1 y -2 tendrían utilidades sustanciales en términos humanitarios. Los estudios de los investigadores han demostrado que n-docosanol no inhibe la replicación de los retrovirus murinos in vitro e in vivo.

Los estudios iniciales se refirieron al virus de la leucemia murina de Friend (FV; 8). La inoculación de ratones adultos con FV produce la inducción de una leucemia de progenitores eritroides, específicamente el eritroblasto basófilo. Esta eritroleucemia se caracteriza por la proliferación rápida de las células eritroides infectadas con virus, viremia, inmunodeficiencia y finalmente la muerte del animal. El FV inyectado por vía intravenosa circulará a través de los órganos hematopoyéticos, tales como el bazo, e infecta las células eritroides. Si dichos bazos infectados se fijan el día 10 después de la infección del virus, pueden observarse nódulos macroscópicos discretos en la superficie del órgano; éstos representan clones de células leucémicas y forman las bases del ensayo del foco del bazo.

El experimento resumido en la Figura 12 ilustra que n-docosanol inhibe la leucemia producida por el virus de Friend y la viremia en ratones adultos inyectados por vía intravenosa con 75 unidades formadoras de foco del virus de Friend. Los grupos tratados se inyectaron por vía intravenosa con dosis variables de n-docosanol o vehículo Pluronic solo por vía intravenosa el mismo día como inoculación de virus y una vez al día durante los próximos 3 días. Después de 10 días, se sacrificaron la mitad de los animales de cada grupo y se examinó la presencia de focos leucémicos en sus bazos, mientras que los animales restantes se conservaron durante 10 días adicionales para controlar la viremia. El tratamiento con n-docosanol ejerció un efecto inhibidor muy claro relacionado con la dosis tanto en el desarrollo de los focos leucémicos, mostrados en el panel A, como en el desarrollo de la viremia, mostrados en el Panel B. En cambio, el tratamiento con cantidades comparables del vehículo Pluronic solo como referencia no ejerció ningún efecto discernible. Los investigadores creen que estos resultados reflejan la actividad inhibidora de n-docosanol sobre la replicación vírica, ya que los estudios in vitro resultantes han documentado una actividad muy potente de este fármaco contra la replicación del virus de Friend en cultivos de fibroblasto de embriones primarios.

El n-docosanol inhibe la replicación in vitro de VIH-1 y del virus 6 del herpes humano. Los estudios iniciales de los investigadores en VIH fueron realizados en colaboración con un laboratorio de los US National Institutes of Health y uno de varios experimentos de este tipo se resume en la Figura 13. Se activaron células mononucleares de la sangre periférica humana normales con 1 mg/ml de PHA más 5 unidades/ml de IL-2 en medio solo o en presencia de n-docosanol, vehículo de referencia Pluronic F-68 o ácido fosfonofórmico (PFA). Al día siguiente, los cultivos se inocularon con VIH-1 y se examinaron 4 días después para la prueba de la replicación vírica mediante la detección del antígeno vírico p24. Niveles considerables de replicación de VIH-1 se produjeron en los cultivos tratados de referencia, comparables a los observados en el grupo no tratado. Como se demuestra, n-docosanol presentó una actividad inhibidora relacionada con la dosis contra VIH-1 en los cultivos de células mononucleares de sangre periférica humana estimuladas por PHA/IL-2. La actividad a la dosis mayor era comparable a la observada con el compuesto antivírico muy potente, ácido fosfonofórmico (PFA). Desde que estos experimentos iniciales se realizaron, los investigadores han reproducido estas observaciones en su propio laboratorio, demostrando incluso concentraciones mayores de actividad antivírica de VIH utilizando la formulación más potente de n-docosanol en suspensión en Tetronic. La respuesta a la dosis de VIH-1 a n-docosanol indica una ED_{50} de aproximadamente 6 a 9 mM.

En resumen, se han superado las dificultades iniciales experimentadas en la preparación de preparaciones de crema estables a largo plazo que contienen cantidades eficaces de alcoholes alifáticos normales de C-20 a C-28, que están más preferentemente constituidas esencialmente por n-docosanol solo o en mezcla con los otros dichos alcoholes, y se ha aclarado la farmacología de estos compuestos. Como composición, la invención se materializa en una formulación de crema tópica estable a largo plazo que presenta un periodo de conservación mayor de un año en las condiciones de manipulación normales, es decir, es estable durante un año o más a temperaturas ambiente y resistirá ciclos repetidos de congelación-descongelación, es adecuada para su utilización en el tratamiento de enfermedades provocadas por virus e inflamatorias de la piel o de las membranas de un animal, incluyendo el tratamiento de seres humanos. Los ingredientes esenciales de la crema son n-docosanol, solo o en mezcla con otros alcoholes alifáticos normales de cadena larga (C-20 a C-28), el ingrediente fisiológicamente activo, agua, aceite, un éster de un azúcar y un ácido graso, siendo el éster fisiológicamente inerte o capaz de ser metabolizado por el cuerpo, y un emoliente para ayudar a la penetración del n-docosanol en el área afectada de la piel o de la membrana y actuar conjuntamente con el éster formando un vehículo estable para el/los alcohol(es) fisiológicamente activo(s). Los ésteres a base de azúcar comprenden un resto de azúcar con un peso molecular superior a aproximadamente 150 y preferentemente superior a 250 y un resto de éster de ácido graso con un peso molecular de aproximadamente 150 o superior, y preferentemente superior a 250. El éster tiene un peso molecular de aproximadamente 400 o superior. Los azúcares, tal como se utiliza el término en la presente memoria, son carbohidratos dulces o dulzones que son derivados cetónicos o aldehídicos de polialcoholes superiores, e incluyen tanto sacáridos como disacáridos, siendo preferidos los ésteres a base de disacárido. Los alcoholes polihídricos
de peso molecular alto pueden ser sustituidos como equivalentes menos deseables por azúcares más tradicionales.

Aunque probablemente resulta evidente para el lector, los estudios farmacológicos fueron realizados utilizando suspensiones que son más compatibles con las células utilizadas en estos estudios pero que no son adecuadas como preparaciones farmacéuticas tópicas, careciendo del cuerpo y de la estabilidad requerida para el tratamiento tópico eficaz.

Una formulación de crema generalmente óptima comprende, en peso referido al peso total de la formulación de crema final, n-docosanol, 5 a 25% o más óptimamente aproximadamente 10% \pm 5%, estearatos de sacarosa 0 a 15%, óptimamente alrededor del 3 al 10%, y/o cocoato de sacarosa, 0 a 15%, óptimamente alrededor del 3 al 10%, y/o diestearato de sacarosa 0 a 15%, óptimamente alrededor del 3 al 10%, por lo menos un éster de sacarosa o un éster basado en azúcar equivalente que comprende por lo menos alrededor del 3% en peso, preferentemente alrededor del 10 \pm 5% en peso de la composición total, aceite, p. ej., aceite mineral NF 3 a 15%, óptimamente alrededor del 8% \pm 4%, un glicol, p. ej. propilenglicol USP o equivalente, 2 a 10%, óptimamente alrededor del 5% \pm 2%, un emoliente éter de glicol, p. ej. éter polioxipropilen-15 estearílico, o alcohol bencílico, 0 a 5%, óptimamente alrededor del 2 al 3%, y agua 40 a 70%, óptimamente alrededor del 45 al 65%. Dentro de esta formulación general, pueden prepararse muchas formulaciones específicas que serán estables y que presentarán el efecto terapéutico indicado, basado en los datos presentados anteriormente, las enseñanzas de la memoria y las directrices proporcionadas en la memoria. En la presente memoria se relacionan las bases para la primera composición terapéutica tópica eficaz en la que el material terapéuticamente activo está constituido esencialmente por n-docosanol, solo o en mezcla con alcoholes alifáticos normales de cadena larga (C-20 a C-28).

Aplicabilidad industrial

La presente invención resulta útil para la preparación de productos farmacéuticos, y asimismo en el tratamiento de pacientes humanos y animales.

Claims (16)

1. Crema terapéutica destinada a aplicarse a la piel y a las membranas constituida por un tensioactivo de éster de sacarosa, superior al 5% en peso de por lo menos un alcohol alifático de C20 a C28, aceite mineral, un codisolvente emoliente y agua, para el tratamiento de enfermedades víricas e inflamatorias, en la que dicha crema es estable a temperaturas de por lo menos 40ºC durante un periodo de por lo menos tres meses y tras ciclos de congelación-descongelación repetidos.

2. Crema terapéutica según la reivindicación 1, en la que el tensioactivo de éster a base de sacarosa comprende por lo menos un compuesto seleccionado de entre el grupo constituido por cocoato de sacarosa, estearatos de sacarosa y diestearato de sacarosa.

3. Crema terapéutica según la reivindicación 1, en la que por lo menos un alcohol alifático de C20 a C28 es seleccionado de entre el grupo constituido por n-icosanol, n-henicosanol, n-docosanol, n-tricosanol, n-tetracosanol, n-pentacosanol, n-hexacosanol, n-heptacosanol y n-octacosanol, o las combinaciones de los mismos.

4. Crema terapéutica según la reivindicación 2, en la que el tensioactivo de éster a base de sacarosa comprende entre el 5% y el 15% en peso de la crema.

5. Crema terapéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el codisolvente emoliente se selecciona de entre el grupo constituido por éter polioxipropilen estearílico, etil hexanodiol y alcohol bencílico o combinaciones de los mismos.

6. Crema terapéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el alcohol alifático de cadena larga comprende por lo menos el 10% en peso de la crema.

7. Crema terapéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1, 5 y 6, que comprende además una base de crema, en la que la composición terapéutica está constituida por por lo menos un alcohol alifático de C20 a C28, y en la que dicha base de crema comprende uno o más compuestos seleccionados de entre el grupo constituido por cocoato de sacarosa, estearatos de sacarosa y diestearato de sacarosa y uno o más compuestos seleccionados de entre el grupo constituido por éter polioxipropilen estearílico, etil hexanodiol y alcohol bencílico.

8. Crema terapéutica según la reivindicación 7, para la reducción del dolor de una inflamación superficial de la piel o una membrana.

9. Crema terapéutica según la reivindicación 7 u 8, en la que por lo menos un elemento del grupo constituido por cocoato de sacarosa, estearatos de sacarosa y diestearato de sacarosa es de entre 5% y 15% en peso de la crema.

10. Crema terapéutica según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en la que los alcoholes alifáticos de C20 a C28 comprenden de 5% a 15% en peso de la crema; comprendiendo los estearatos de sacarosa de 0% a 15% en peso de la crema; comprendiendo el cocoato de sacarosa de 0% a 10% en peso de la crema; comprendiendo el diestearato de sacarosa de 0% a 10% en peso de la crema; con la condición de que por lo menos un éster de sacarosa esté presente y comprenda por lo menos 3% en peso de la crema; comprendiendo el aceite mineral de 3% a 15% en peso de la crema, comprendiendo el alcohol bencílico de 0,5% a 10% en peso de la crema; y comprendiendo el agua de 45% a 70% en peso de la crema.

11. Crema terapéutica según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que presenta la formulación:

11

con la condición de que por lo menos un éster de sacarosa esté presente y en la que el/los éster(es) de sacarosa comprenda(n) por lo menos 3% en peso de la crema,

12

con la condición de que el éter polioxipropilen-estearílico o el alcohol bencílico estén presentes en una cantidad de 1%; y

13

para la prevención o el tratamiento de una inflamación o una infección vírica.

12. Utilización de una composición constituida por por lo menos un alcohol alifático de C20 a C28 y una base de crema constituida por por lo menos un tensioactivo de éster basado en sacarosa, aceite mineral, un codisolvente emoliente y agua, en la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de las infecciones víricas y de la inflamación de la piel y de las membranas mucosas.

13. Utilización según la reivindicación 12, en la que la composición presenta la formulación:

14

con la condición de que por lo menos un éster de sacarosa esté presente y en la que el/los éster(es) de sacarosa comprenda(n) por lo menos 3% en peso de la crema,

15

con la condición de que el éter polioxipropilen-estearílico o el alcohol bencílico estén presentes en una cantidad de 1%; y

16

y pueda suministrarse tópicamente.

14. Utilización según la reivindicación 13, en la que el/los éster(es) de sacarosa comprende(n) entre el 5% y el 10% en peso de la crema.

15. Utilización de una composición que comprende por lo menos un alcohol alifático de C20 a C28, un tensioactivo de éster de sacarosa, aceite mineral, un codisolvente emoliente, y agua en la preparación de un medicamento para reducir el dolor de una inflamación superficial de la piel o de una membrana mucosa aplicando el medicamento a la superficie inflamada.

16. Utilización según la reivindicación 15, que comprende además una base de crema, en la que la base de crema es un portador fisiológicamente compatible que comprende uno o más compuestos seleccionados de entre el grupo constituido por cocoato de sacarosa, estearatos de sacarosa y diestearato de sacarosa, y uno o más compuestos seleccionados de entre el grupo constituido por éter polioxipropilen estearílico, etil hexanodiol y alcohol bencílico.