背景技术:
疱疹病毒感染对于公众健康具有严重而持续的威胁,尤其是最常见的单纯疱疹病毒(包括HSV-1和HSV-2型)引发的口面部、生殖器疱疹,此外还有水痘带状疱疹病毒(VZV)感染引发的带状疱疹等,以及大量的动物疱疹病毒感染。
单纯疱疹病毒在初次感染后,将在患者的余生中都保持潜伏于感觉神经细胞内,并可在多种条件下被重新激活,使病毒经神经转运到皮肤,随后再次造成损伤,引起疱疹疼痛、麻刺等症状的复发。在复发感染的情况下,临床症状将持续一周。
现有技术中使用以下药物治疗疱疹病毒感染:甾体抗炎物质、膦甲酸或核苷类似物。
如澳大利亚专利AU636255公开了采用抗炎物质(甾体或非甾体)与抗病毒物质的药物组合物,其所采用的抗炎物质有非甾体抗炎物质如各种水杨酸或丁苯羟酸,各类可外用的甾体类抗炎药,抗病毒物质是膦甲酸或核苷类似物等。
美国专利US3317384公开了用于眼部给药的局部药物应用的甾体类抗炎物质与抗病毒核苷阿糖腺苷或阿糖胞苷或其类似物的联合,但该抗病毒化合物的全身毒性太高以致无法应用于皮肤或粘膜。
美国专利US6337324公开了局部用甾体类药物氢化可的松与抗病毒药物膦甲酸的组合物。
核苷类似物虽能阻断病毒DNA的延伸,但同时可能影响到正常人体细胞的DNA代谢,有明显的毒副作用,尤其是这类药物具有致畸、致突变作用。因此应该尽量避免使用对DNA直接造成损伤的药物。
使用膦甲酸可能造成生殖器溃疡,这会对患者造成极大的痛苦。
由于甾体类抗炎物质对疱疹病毒有激发作用,过高剂量的甾体类物质会激发病毒复制以致达到抗病毒物质无法抑制的程度,剂量太低又无法达到减弱炎症的目的,另外,长期应用甾体类抗炎物质会引发激素性皮炎。故使用甾体类抗炎物质来治疗病毒感染的风险太大。除非是危重病患,否则不应该直接对病毒感染使用甾体类抗炎物质。
Katz等人的专利US5534554公开了一个特殊的长链脂肪醇“正二十二烷醇”,对各种病毒,包括单纯疱疹病毒(体外和体内)、HIV(体外)、呼吸道合胞体病毒(体外)和弗林德氏病毒(体外和体内)所具有的强大的全身和局部抗病毒活性。
但仅仅使用正二十二烷醇,对缓解单纯疱疹病毒感染的症状仍不能令人满意。加拿大专利CA2364251公开了正二十二烷醇与核苷类抗病毒物质组成的药物组合物。
日本已经上市的布洛芬吡啶甲醇外用制剂中有一个商品名为Vesicum,其含有布洛芬吡啶甲醇作为主药,并含有一定量的正二十二烷醇作为辅料,但是该制剂说明书仅表明布洛芬吡啶甲醇可以治疗带状疱疹,却未提到任何治疗单纯疱疹感染的相关应用及临床数据,以及任何正二十二烷醇的治疗用活性数据,这意味着日本的该产品不适用于单纯疱疹病毒感染。
综上,目前已有的治疗单纯疱疹病毒感染的方案中,有甾体类药物与抗病毒药物的组合,以及正二十二烷醇与核苷类药物的组合,但也同时带来了外用甾体类药物与核苷类药物的毒副作用。
发明内容:
本发明的目的是提供一种治疗疱疹病毒感染的药物组合物,包括治疗皮肤或粘膜复发性单纯疱疹病毒感染的药物组合物。
本发明者意外地发现,通过局部联合施用局部可接受的非甾体抗炎物质和非核苷类抗病毒物质,可安全有效的治疗单纯疱疹病毒感染。因此,本发明提供了一种抗疱疹病毒感染的药物组合物,包括含有5%~15%(W/W)的C21~C28脂肪族醇和0.1%~10%(W/W)的非甾体抗炎药物。
所述C21~C28脂肪族醇选自瓢儿菜醇、巴西烯醇、二十二烷醇中的一种或多种;所述非甾体抗炎药物选自布洛芬及其衍生物、舒洛芬、丁苯羟酸、苄达酸、氟芬那酸丁酯、氟芬那酸、盐酸多塞平、右酮洛芬、右布洛芬、吲哚美辛、依托度酸、酮洛芬、酮咯酸氨丁三醇、双氯芬酸、舒林酸、塞来昔布、尼美舒利、萘普生、萘丁美酮、美洛昔康、氯诺昔康、氟比洛芬、芬布芬、非普拉宗、醋氯芬酸、吡罗昔康、奥沙普秦、阿西美辛、β-环糊精吡罗昔康、b-环糊精吡罗昔康。
所述C21~C28脂肪族醇优选是正二十二烷醇。
正二十二烷醇的含量优选为7%-12%(W/W)。
所述非甾体抗炎药物应具有良好局部抗炎活性,并对皮肤或粘膜的刺激性非常小的,局部可接受并且药学上可局部给药的,如布洛芬的衍生物“布洛芬吡啶甲醇”。
在发明的药物组合物中优选的非甾体抗炎药物及其用量选自:布洛芬吡啶甲醇1%~10%(W/W)、丁苯羟酸1%~10%(W/W)、氟芬那酸丁酯1%~10%(W/W)、盐酸多塞平1%~10%(W/W)或吲哚美辛0.1%~5%(W/W),所述用量为药物在组合物中的含量。
更优选的非甾体抗炎药物及其在组合物中的含量分别为:布洛芬吡啶甲醇5%(W/W)、丁苯羟酸5%(W/W)、氟芬那酸丁酯5%(W/W)、盐酸多塞平5%(W/W)、吲哚美辛1%(W/W)。
本发明优选的实施方案是含布洛芬吡啶甲醇和正二十二烷醇的药物组合物,另外的实施方案是含丁苯羟酸和正二十二烷醇的药物组合物。
本发明的其它优选实施方案是含盐酸多塞平和正二十二烷醇的药物组合物,载体***应是稳定的以及药学和化妆学上可接受的,它还能够结合足够量的活性成分以具有适当的渗透性。
本发明的药物组合物中可以含有药物可接受并且可用于人体皮肤或粘膜的各种药物载体、辅剂,如渗透增强剂等。
优选的药物组合物,是局部、粘膜或跨膜途径给药的药物,如可制成霜剂、洗剂、凝胶剂、乳(软)膏、洗剂、凝胶剂、溶液剂、硬膏、贴剂、棒剂或笔剂。可将药物组合物制成硬膏或应用于待治疗疱疹感染的患者皮肤上,或者装入笔或棒中应用于皮肤或粘膜。
通过豚鼠皮肤感染HSV-1试验及小鼠***感染HSV-2试验证实,本发明复方药物对豚鼠皮肤疱疹和小鼠生殖器疱疹具有可靠的治疗作用,能够显著降低HSV-1感染豚鼠皮肤疱疹及HSV-2感染小鼠生殖器疱疹的病变程度、抑制病程发展、缩短痊愈时间,治疗作用明显优于各自单方。
通过家兔皮肤刺激性试验证实,三种外用复方重复给药对家兔完整皮肤及破损皮肤均无明显刺激性。
单纯疱疹病毒HSV-1和HSV-2可以引起机体的炎症反应如红肿、瘙痒、疼痛、灼烧、损伤等。C21~C28脂肪族醇有效地抑制病毒包膜与宿主细胞膜的溶合,切断病毒进入宿主细胞的途径,对有包膜疱疹病毒具有广谱抗病毒作用。而非甾体抗炎药物具有消炎镇痛作用。两者组成复方则可一方面增强机体的抗病毒能力,另一方面可减轻病毒作用机体后引起的炎症反应,从而发挥治疗单纯疱疹的作用,缩短治愈时间。
本发明的药物组合物可用于预防和/或治疗包括人的哺乳动物的疱疹病毒感染,尤其是可用于治疗单纯疱疹病毒感染,所述病毒的实例有HSV-1,HSV-2。本发明的药物组合物并可用于皮肤或粘膜的复发性单纯疱疹病毒感染。复发性感染的有效治疗应在病毒复制期间进行,优选在前驱症状一出现开始治疗并将治疗持续至少3~4天。在整个发病期间每两小时或任意应用药剂也是有益的,应以相同方式治疗损伤。施用频率为每天1至10次,优选每天用药5次直至完全康复。对经常发病的患者可选择预防性治疗。在此情况下,应在最初症状出现之前,将药剂应用于预期的疾病复发的患面。
本文中所述的局部给药是指对皮肤或粘膜经皮或粘膜给药。
另一方面,本发明还涉及组合局部可接受的非核苷类抗病毒物质和抗炎的非甾体物质制备局部治疗哺乳动物包括人的复发性疱疹病毒感染的药物的用途。
另一方面,本发明涉及一种预防和/或有效治疗哺乳动物包括人的皮肤或粘膜疱疹病毒感染的方法,包括联合或序贯局部施用治疗有效量的局部可接受的非核苷类抗病毒物质和非甾体抗炎物质。
另一方面,本发明的药物组合物还可用作美容组合物,通过向损伤或皮疹处应用有效量的所述组合物改善口面部HSV感染患者的外表。
本发明的药物组合物用于局部给药,适于预防和治疗疱疹病毒感染,尤其适用于治疗复发性单纯疱疹病毒感染。
具体实施方式
实施例1二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏
配方
活性成分:二十二烷醇100g,布洛芬吡啶甲醇50g
其它成分:液状石蜡20g,单硬脂酸甘油酯15g,平平加O 35g,对羟基苯甲酸甲酯1g,对羟基苯甲酸丙酯0.1g,甘油30g,水加至1000g。
制备方法:将处方量二十二烷醇、布洛芬吡啶甲醇、液状石蜡、单硬脂酸甘油酯、平平加O、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯加热溶解澄清,得油相,保温至80℃左右;甘油和水混合加热至80℃左右,得水相;水油相混合在80℃左右快速搅拌乳化10分钟,降至室温即得二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏。
实施例2二十二烷醇丁苯羟酸乳膏
活性成分:二十二烷醇100g,丁苯羟酸50g,其它成分和制备方法同实施例1。
实施例3二十二烷醇盐酸多塞平乳膏
活性成分:二十二烷醇100g,盐酸多塞平50g,其它成分和制备方法同实施例1。
实施例4二十二烷醇吲哚美辛乳膏
活性成分:二十二烷醇100g,吲哚美辛1g,其它成分和制备方法同实施例1。
实施例5二十二烷醇盐酸多塞平洗剂
活性成分:二十二烷醇75g,盐酸多塞平75g
其它成分:丙二醇150g,聚烃氧(40)硬脂酸酯20g,对羟基苯甲酸甲酯1g,对羟基苯甲酸丙酯0.1g,水加至1000g。
制备方法:将处方量二十二烷醇、盐酸多塞平、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、丙二醇、聚烃氧(40)硬脂酸酯加热溶解澄清,保温至80℃左右,得丙二醇溶液相;纯化水加热至80℃左右加入前述丙二醇溶液相,在80℃左右快速搅拌混合10分钟,降至室温即得二十二烷醇盐酸多塞平洗剂。
实施例6二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇凝胶
活性成分:二十二烷醇125g,布洛芬吡啶甲醇25g
其它成分:卡波姆93410g,丙二醇80g,氢氧化钠,适量水加至1000g。
制备方法:快速搅拌下将处方量卡波姆934 10g分散溶胀于适量纯化水中,用氢氧化钠条件pH至7.0左右,得凝胶基质。将处方量二十二烷醇、布洛芬吡啶甲醇溶解于丙二醇中得丙二醇药物溶液,将该溶液加入至前述凝胶基质中,搅拌混合均匀,得二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇凝胶。
实施例7二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇软膏
配方
活性成分:二十二烷醇50g,布洛芬吡啶甲醇80g
其它成分:PEG400100g,PEG6000600g,水加至1000g。
制备方法:将处方量二十二烷醇、布洛芬吡啶甲醇溶解于PEG400中得PEG400药物溶液,加入熔融的PEG6000中,搅拌混合均匀,加水至1000g,得二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇软膏。
实施例8二十二烷醇丁苯羟酸溶液剂
活性成分:二十二烷醇130g,丁苯羟酸50g
其它成分:丙二醇150g,吐温801g,对羟基苯甲酸甲酯1g,对羟基苯甲酸丙酯0.1g,水加至1000g。
制备方法:将处方量二十二烷醇、丁苯羟酸、吐温80、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯溶解于丙二醇中,加水至1000g,搅拌混合均匀,得二十二烷醇丁苯羟酸溶液剂。
对照药物1盐酸多塞平乳膏
活性成分:盐酸多塞平50g,其它成分和制备方法同实施例1。
对照药物2二十二烷醇乳膏
活性成分:二十二烷醇100g,其它成分和制备方法同实施例1。
对照药物3丁苯羟酸乳膏
丁苯羟酸50g,天然脂肪醇(C16~18)70g(购自无锡市东泰精细化工有限公司),
其它成分和制备方法同实施例1。
对照药物4布洛芬吡啶甲醇乳膏
布洛芬吡啶甲醇50g,其它成分和制备方法同对照药物3。
对照药物5空白乳膏
无活性成分,其它成分和制备方法同实施例1。
实施例9抗疱疹病毒感染试验——豚鼠皮肤感染HSV-1试验
1试验材料
动物:普通级白色豚鼠30只,体重250-300g,雌雄各半,购自重庆医科大学试验动物中心,生产许可证号SCXK(渝)2007-0001。
病毒:HSV-1病毒引自中国药品生物制品检定所。
试验药物:二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏(实施例1)、二十二烷醇丁苯羟酸乳膏(实施例2)、二十二烷醇盐酸多赛平乳膏(实施例3)
对照药物:阿昔洛韦软膏(ACV),为武汉爱民制药有限公司产品。盐酸多赛平乳膏、二十二烷醇乳膏、丁苯羟酸乳膏、布洛芬吡啶甲醇乳膏及空白乳膏见前述对照药物1~5。
2试验方法
30只豚鼠,按性别体重随机分为3组,分别为二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇软膏组、二十二烷醇丁苯羟酸软膏组、二十二烷醇多赛平软膏组,每组10只。
豚鼠背部脱毛,脱毛区皮肤等分为5块。用75%酒精消毒后,用无菌7针梅花针深刺每个脱毛区中心,停针2-3min,即刻用30μl病毒原液滴于刺伤皮肤上,用无菌玻棒摩擦感染。感染2h后,二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇软膏组豚鼠背部5个脱毛区分别均匀外涂空白软膏、二十二烷醇、布洛芬吡啶甲醇、二十二烷醇加布洛芬吡啶甲醇复方及阿昔洛韦。二十二烷醇丁苯羟酸软膏组豚鼠背部5个脱毛区分别均匀外涂空白软膏、二十二烷醇、丁苯羟酸、二十二烷醇丁苯羟酸软膏及阿昔洛韦。二十二烷醇多赛平软膏组豚鼠背部5个脱毛区分别均匀外涂空白软膏、二十二烷醇、多赛平、二十二烷醇多赛平软膏及阿昔洛韦。每天涂药5次,共5天。
每天观察每个脱毛区的症状,按表1对染皮肤症状评分。疱疹发生时的积分以***数字显示,当疱疹始干并结痂时,计分改为罗马数字。所有计分均双盲进行,将感染过程中所有的***及罗马计分数字加在一起得到累积的计分。并记录HSV-2感染皮肤无痂,无水疱即痊愈的时间。
表1豚鼠HSV-1感染皮肤症状评分规则
症状 |
分值 |
症状 |
分值 |
发红及轻度水肿 |
0.5 |
水疱变干及大痂 |
III |
发红及1-3个小水疱 |
1 |
50%-90%痂脱落 |
II |
发红及多个小水疱 |
2 |
少于10%痂 |
I |
多个大水疱及融合疱 |
3 |
无痂,无水疱 |
0 |
3试验结果
表2二十二烷醇加布洛芬吡啶甲醇软膏对豚鼠HSV-1皮肤感染的作用(n=10,x±SD)
组别 |
皮损分值(分) |
痊愈天数(天) |
阴性对照组(空白软膏) |
19.90±1.84 |
12.70±0.82 |
阳性对照组(ACV) |
7.00±1.78** |
9.60±0.97** |
二十二烷醇组 |
17.35±2.32* |
12.00±0.94 |
布洛芬吡啶甲醇组 |
18.10±2.28 |
12.50±0.85 |
二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇组 |
9.00±3.67**△△## |
10.40±0.97**△△## |
采用SPSS16.0进行方差分析,与阴性对照组相比,*:P<0.05,**:P<0.01;与二十二烷醇组相比,△△:P<0.01;与布洛芬吡啶甲醇相比,##:P<0.01。
表2结果显示,与空白软膏相比,阳性对照ACV则可显著降低感染皮肤症状累积评分,明显缩短痊愈时间,统计学差异显著(P<0.01)。与空白软膏相比,二十二烷醇可降低HSV-1感染皮肤症状累积评分(P<0.05),但痊愈时间未见明显缩短。布洛芬吡啶甲醇对皮肤症状累积评分和痊愈时间均无明显影响。外涂二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇软膏后,HSV-1感染皮肤症状累积评分明显降低,痊愈时间显著缩短,与空白软膏相比,具有显著的统计学差异(P<0.01)。且二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇软膏降低感染皮肤症状和加快痊愈的作用明显优于二十二烷醇单方和布洛芬吡啶甲醇单方,统计学差异显著(P<0.01)。
表3二十二烷醇丁苯羟酸软膏对豚鼠HSV皮肤感染的作用(n=10,x±SD)
组别 |
皮损分值(分) |
痊愈天数(天) |
阴性对照组(空白软膏) |
19.35±2.81 |
12.80±0.63 |
阳性对照组(ACV) |
8.00±2.51** |
10.00±0.94** |
二十二烷醇组 |
16.95±1.88* |
12.10±0.88 |
丁苯羟酸组 |
18.95±2.91 |
12.50±0.85 |
二十二烷醇加丁苯羟酸组 |
13.70±2.75**△△## |
11.10±0.88**△## |
采用SPSS16.0进行方差分析,与阴性对照组相比,*:P<0.05,**:P<0.01;与二十二烷醇组相比,△:P<0.05,△△:P<0.01;与丁苯羟酸相比,##:P<0.01。
表3结果显示,阳性对照ACV与空白软膏比较,可显著降低感染皮肤症状累积评分,明显缩短痊愈时间,统计学差异显著(P<0.01)。与空白软膏相比,二十二烷醇可降低HSV-1感染皮肤症状累积评分(P<0.05),但痊愈时间未见明显缩短。丁苯羟酸对皮肤症状累积评分和痊愈时间均无明显影响。与空白软膏相比,外涂二十二烷醇丁苯羟酸软膏后,HSV-1感染皮肤症状累积评分明显降低,痊愈时间显著缩短(P<0.01),且与二十二烷醇单方和丁苯羟酸单方相比,具有显著的统计学差异(P<0.05,P<0.01)。
表4二十二烷醇多赛平软膏对豚鼠HSV-1皮肤感染的作用(n=10,x±SD)
组别 |
皮损分值(分) |
痊愈天数(天) |
阴性对照组(空白软膏) |
20.75±1.53 |
12.90±0.57 |
阳性对照组(ACV) |
7.45±2.18** |
9.90±0.99** |
二十二烷醇组 |
18.75±2.31* |
12.30±0.82 |
多赛平组 |
19.35±1.96 |
12.20±0.92 |
二十二烷醇多赛平 |
12.25±2.87**△△## |
10.90±0.99**△△## |
采用SPSS16.0进行方差分析,与阴性对照组相比,*:P<0.05,**:P<0.01;与二十二烷醇组相比,△△:P<0.01;与多赛平相比,##:P<0.01。
表4结果显示,与空白乳膏比较,二十二烷醇可降低HSV-1感染皮肤症状累积评分(P<0.05),但痊愈时间未见明显缩短。而多赛平对皮肤症状累积评分和痊愈时间均无明显影响。外涂二十二烷醇多赛平乳膏后,与空白乳膏比较,皮肤症状明显改善,痊愈时间显著缩短(P<0.01)。且与二十二烷醇单方和多赛平单方比较,二十二烷醇多赛平乳膏能够显著改善感染皮肤症状并缩短痊愈时间,作用明显优于二十二烷醇单方和多赛平单方,具有统计学差异(P<0.01)。
4试验结论
与空白乳膏相比,豚鼠HSV-1感染皮肤外涂二十二烷醇后可降低HSV-1感染皮肤症状累积评分,但痊愈时间未见明显缩短。外涂布洛芬吡啶甲醇、丁苯羟酸或多赛平,对皮肤症状累积评分和痊愈时间均无明显影响。而外涂二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏、二十二烷醇丁苯羟酸乳膏、二十二烷醇多赛平乳膏后,可以显著降低皮肤症状累积评分(P<0.01),明显缩短痊愈时间(P<0.05,P<0.01),对豚鼠HSV-1感染的治疗作用明显优于单方。
实施例10抗疱疹病毒感染试验——小鼠***感染HSV-2试验
1试验材料
动物:SPF级雌性小鼠100只,体重18-22g,购自重庆医科大学试验动物中心,,生产许可证号SCXK(渝)2007-0001。
病毒:HSV-2病毒引自中国药品生物制品检定所。
药物:阿昔洛韦软膏为武汉爱民制药有限公司产品。二十二烷醇乳膏、布洛芬吡啶甲醇乳膏、丁苯羟酸乳膏、盐酸多赛平乳膏、二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏、二十二烷醇丁苯羟酸乳膏、二十二烷醇盐酸多赛平乳膏及空白乳膏均为本公司制备。
2试验方法
100只雌性小鼠,按体重随机分为10组,分别为正常对照组、阴性对照组(空白乳膏)、阳性对照组(ACV)、二十二烷醇组、布洛芬吡啶甲醇组、丁苯羟酸组、多赛平组、二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏组、二十二烷醇丁苯羟酸乳膏组、二十二烷醇多赛平乳膏组,每组10只。
用眼科镊子将吸附有无菌PBS溶液0.03ml的明胶海绵小块送入正常组小鼠***,其余各组小鼠用眼科镊子将吸附有病毒液0.03ml的明胶海绵小块送入小鼠***。除正常对照组外,其余各组均在感染病毒2h后外涂给药,5次/天,连续给药5天。每日观察小鼠***病变,进行记录,观察2周。小鼠病变程度记4级,正常为“0”;外阴发红、肿胀为“1”;外阴红肿伴疱疹甚至糜烂为“2”;死亡为“3”。2周观察期结束后,统计各组小鼠发病数和死亡数,计算发病率和死亡率。
3试验结果
3.1药物对小鼠***感染HSV-2发病率及死亡率的影响
表53种二十二烷醇复方对小鼠***感染HSV-2发病率及死亡率的影响
组别 |
死亡率(%) |
发病率(%) |
阴性对照组(空白乳膏) |
91.7% |
100% |
阳性对照组(ACV) |
16.7%** |
33.3%** |
二十二烷醇组 |
66.7% |
83.3% |
布洛芬吡啶甲醇组 |
75% |
100% |
丁苯羟酸组 |
91.6% |
100% |
多赛平组 |
83.3% |
100% |
二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇组 |
16.7%**△# |
25%**△## |
二十二烷醇丁苯羟酸组 |
33.3%**## |
50%*## |
二十二烷醇多赛平组 |
16.7%**△△## |
41.6%**△## |
采用Fisher’s确切概率法进行统计分析,与阴性对照组相比,*:P<0.05,**:P<0.01;与二十二烷醇组相比,△:P<0.05,△△:P<0.01;与布洛芬吡啶甲醇或丁苯羟酸或多赛平相比,#:P<0.05,##:P<0.01。
表5结果显示,外涂阴性对照空白乳膏,***感染HSV-2小鼠的发病率及死亡率分别为100%和91.7%。阳性对照ACV则可显著降低小鼠***感染HSV-2的发病率及死亡率,分别为33.3%和16.7%,统计学差异显著(P<0.05、P<0.01)。与空白基质相比,二十二烷醇有降低小鼠***感染HSV-2的发病率及死亡率的趋势,分别为83.3%和66.7%,但统计学意义不显著。布洛芬吡啶甲醇组发病率及死亡率分别为100%和75%,丁苯羟酸组发病率及死亡率分别为100%和91.6%,多赛平组发病率及死亡率分别为100%和83.3%,与空白乳膏相比,均无统计学差异。外涂二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏后发病率及死亡率分别为25%和16.7%,与两单方比较,可显著抑制发病率及死亡率,统计学差异显著(P<0.05,P<0.01)。外涂二十二烷醇丁苯羟酸乳膏后,与空白乳膏相比,可显著抑制发病率及死亡率(P<0.01);抑制发病率和死亡率的作用明显优于丁苯羟酸,统计学差异显著(P<0.01),而与二十二烷醇单方比较,有抑制的趋势但统计学差异不显著。二十二烷醇多赛平乳膏后发病率及死亡率分别为41.6%和16.7%,均明显低于两单方,具有显著的统计学差异(P<0.05,P<0.01)。
3.2药物对小鼠***感染HSV-2病变发展速度和程度的影响
各组小鼠***感染HSV-2病变发展曲线见附图1。
逐日计算各组小鼠平均病变程度计分,做病变发展曲线。图1结果显示,布洛芬吡啶甲醇、丁苯羟酸、多赛平三组小鼠曲线走势与阴性对照组小鼠的病变发展曲线比较接近,表明布洛芬吡啶甲醇、丁苯羟酸、多赛平对HSV-2病毒无明显抑制作用。二十二烷醇曲线走势稍有平缓,感染病变程度轻于阴性对照组。而阳性对照阿昔洛韦组、二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏组、二十二烷醇丁苯羟酸乳膏组、二十二烷醇多赛平乳膏组四组曲线峰值较低,走势比较平缓,显示HSV感染病变发展速度和程度均受到了明显抑制,三种复方对小鼠***感染HSV-2的疗效明显优于各自单方。
4试验结论
与阴性对照空白乳膏相比,***感染HSV-2小鼠***给二十二烷醇,可降低小鼠***感染HSV-2的发病率及死亡率,但统计学意义不显著。布洛芬吡啶甲醇、丁苯羟酸、多赛平组小鼠的病变发展过程未见明显抑制,发病率和死亡率与阴性对照组相似,无明显差异。外涂二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏、二十二烷醇丁苯羟酸乳膏、二十二烷醇多赛平乳膏后,小鼠***感染HSV-2的病变发展速度和程度都受到了明显抑制,且发病率及死亡率明显低于各自单方,具有显著的统计学差异(P<0.05、P<0.01)。
实施例11本发明药物对家兔皮肤刺激性试验
1试验材料
药物:二十二烷醇乳膏、布洛芬吡啶甲醇乳膏、丁苯羟酸乳膏、盐酸多赛平乳膏、二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏、二十二烷醇丁苯羟酸乳膏、二十二烷醇盐酸多赛平乳膏及空白乳膏均为本公司制备。
动物:16只普通级家兔,雌雄各半,体重1.8~2.2kg,由重庆市中药研究院实验动物研究室提供,实验动物生产许可证号SCXK(渝)2007-0006。常规饲养于重庆华邦制药股份有限公司普通级动物房,温度18~27℃,相对湿度40~70%,实验动物使用许可证号SYXK(渝)2007-0018。家兔自由摄食饮水,兔全价颗粒饲料购自重庆医科大学实验动物中心。
2试验方法
16只家兔按性别体重随机分为4组,每组4只,雌雄各半。4组分别为:二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏完整皮肤组、二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏破损皮肤组、二十二烷醇丁苯羟酸乳膏/二十二烷醇多赛平乳膏完整皮肤组和二十二烷醇丁苯羟酸乳膏/二十二烷醇多赛平乳膏破损皮肤组。试验前24小时用电动剪毛器将家兔背部两侧毛剪去,然后用新配制的脱毛剂将毛脱净,脱毛面积左、右各约3×3cm2。破损皮肤组用砂纸对家兔两侧脱毛处皮肤进行砂磨,以轻微渗血为度。
二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏完整皮肤组和二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏破损皮肤组家兔背部左侧脱毛区给予二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏0.5g/只,右侧脱毛区给予空白乳膏0.5g/只;二十二烷醇丁苯羟酸乳膏/二十二烷醇多赛平乳膏完整皮肤组和二十二烷醇丁苯羟酸乳膏/二十二烷醇多赛平乳膏破损皮肤组家兔背部左侧脱毛区给予二十二烷醇丁苯羟酸乳膏0.5g/只,右侧脱毛区给予二十二烷醇多赛平乳膏。每只家兔给药后用特制的兔包扎带进行包扎,以使药物与兔皮肤保持良好接触,6小时后除去药物并用温水清洗给药部位。连续用药7天。
每次于去除药物后1小时以及再次涂药前观察记录红斑及水肿、涂药部位是否有色素沉着、出血点,皮肤粗糙或菲薄情况及其发生时间、消退时间,并对红斑及水肿进行评分;在末次贴敷去除药物后1、24、48和72小时肉眼观察并记录涂药部位有无红斑及水肿等情况并评分,评分标准参见表6。
表6皮肤刺激反应评分标准
首先计算每一观察时间点各组积分均值,然后计算观察期限内每天每只动物刺激积分均值,按表7行刺激强度评价。
表7皮肤刺激强度评价标准
平均分值 |
刺激强度 |
0~0.49 |
无刺激性 |
0.5~2.99 |
轻度刺激性 |
3.0~5.99 |
中度刺激性 |
6.0~8.0 |
强刺激性 |
3试验结果
二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏;二十二烷醇丁苯羟酸乳膏;二十二烷醇多赛平乳膏及空白乳膏连续7天对家兔完整皮肤及破损皮肤用药,停药后观察72小时。二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏;二十二烷醇丁苯羟酸乳膏;二十二烷醇多赛平乳膏对兔完整皮肤多次给药均未引起刺激性红斑、水肿及其它皮肤症状,对兔破损皮肤在第2天及第3天除药后偶见刺激性红斑,但未见水肿及其它皮肤症状,刺激均分值<0.5;按皮肤刺激强度评价标准,各药对兔完整皮肤及破损皮肤均为无刺激性。
4试验结论
二十二烷醇布洛芬吡啶甲醇乳膏;二十二烷醇丁苯羟酸乳膏;二十二烷醇多赛平乳膏重复给药对家兔完整皮肤及破损皮肤均无明显刺激性。
实施例9~11小结
通过以上试验证实二十二烷醇和布洛芬吡啶甲醇或丁苯羟酸或盐酸多赛平组成复方制剂能够显著降低HSV-1感染豚鼠皮肤疱疹及HSV-2感染小鼠生殖器疱疹的病变程度、抑制病程发展、缩短痊愈时间,治疗作用明显优于各自单方。三种外用复方重复给药对家兔完整皮肤及破损皮肤均无明显刺激性。
单纯疱疹病毒HSV-1和HSV-2可以引起机体的炎症反应如红肿、瘙痒、疼痛、灼烧、损伤等。二十二烷醇有效地抑制病毒包膜与宿主细胞膜的溶合,切断病毒进入宿主细胞的途径,对有包膜疱疹病毒具有广谱抗病毒作用。而布洛芬吡啶甲醇、丁苯羟酸、盐酸多赛平具有消炎镇痛作用。两者组成复方则可一方面增强机体的抗病毒能力,另一方面可减轻病毒作用机体后引起的炎症反应,从而发挥治疗单纯疱疹的作用,缩短治愈时间。