ES2288861T3 - Antagonistas de los receptores de las integrinas alfa v. - Google Patents

Antagonistas de los receptores de las integrinas alfa v. Download PDF

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George D. Hartman
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Michael A. Patane
James J. Perkins
Jiabing Wang
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Abstract

Un compuesto que tiene la fórmula (IV): o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que X es R2 se selecciona del grupo constituido por halógeno, alquilo C1-8, cicloalquilo C3-8, cicloheteroalquilo C3-8, (cicloalquil C3-8)alquilo C1-6, (cicloheteroalquil C3-8)-alquilo C1-6, arilo, arilalquilo C1-6, amino, aminoalquilo C1-6, acilamino C1-3, (acilamino C1-3)alquilo C1-6, (alquil C1-6)1-2 amino, (cicloalquil C3-6)amino C0-2, (alquil C1-6)1-2 aminoalquilo C1-6, alcoxi C1-6, (alcoxi C1-4)alquilo C1-6, hidroxicarbonilo, hidoxicarbonilalquilo C1-6, (alcoxi C1-3)carbonilo, (alcoxi C1-3)carbonilalquilo C1-6, hidroxi, hidroxialquilo C1-6, nitro, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, (alquil C1-8)-S(O)0-2, (alquil C1-8)0-2 aminocarbonilo, {0>C1-8 alquiloxycarbonilamino, (C1-8 alquilh-2 aminocarboniloxy, (aril C1-3 alquil)1-2 amino, (arilh-2 amino, <}0{>(alquiloxi C1-8)carbonilamino, (alquil C1-8)1-2aminocarboniloxi, (arilalquil C1-3)1-2 amino, (aril)1-2amino, aril(alquilC1-3)sulfonilamino y (alquil C1-8)sulfonilamino; R7 es arilo, en el que el grupo arilo se selecciona del grupo constituido por (1) fenilo, (2) naftilo, (3) piridilo, (4) furilo, (5) tienilo, (6) pirrolilo, (7) oxazolilo, (8) tiazolilo, (9) imidazolilo, (10) pirazolilo, (11) isoxazolilo, (12) isotiazolilo, (13) pirimidinilo, (14) pirazinilo, (15) piridazinilo, (16) tetrazolilo, (17) quinolilo, (18) isoquinolilo, (19) bencimidazolilo, (20) benzofurilo, (21) benzotienilo, (22) indolilo, (23) benzotiazolilo, (24) benzoxazolilo, (25) dihidrobenzofurilo, (26) benzo(1, 3)dioxolanilo, (27) benzo(1, 4)dioxanilo, (28) quinazolilo, (29) quinoxalilo, y (30) 3, 4-dihidro-2H-1, 4-dioxa-5-aza-naftalenilo: en el que el grupo arilo tal como se define anteriormente en los puntos (1) a (30) no está sustituido o está sustituido con de uno a tres sustituyentes que se seleccionan independientemente a partir del grupo constituido por hidroxi, hidroxialquilo C1-6, halógeno, alquilo C1-8, cicloalquilo C3-8, arilo,arilalquilo C1-3, amino, aminoalquilo C1-6, acilamino C1-3, (acilamino C1-3)-alquilo C1-6, (alquil C1-6)amino, di(alquil C1-6)amino, (alquil C1-6)aminoalquilo C1-6, di(alquil C1-6)aminoalquilo C1-6, alcoxi C1-4, (alquil C1-4)tio, (alquil C1-4)sulfinilo, (alquil C1-4)sulfonilo, (alcoxi C1-4)alquilo C1-6, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C1-6, (alcoxi C1-5)carbonilo, (alcoxi C1-3)carbonilalquilo C1-6, (alquil C1-5)carboniloxi, ciano, trifluorometilo, 1, 1, 1-trifluoroetilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, y nitro; o dos sustituyentes adyacentes junto con los átomos de carbono a los que están enlazados para formar un anillo saturado o insaturado de cinco o seis miembros que contiene 1 ó 2 heteroátomos que se seleccionan del grupo constituido por N, O, y S, cuyos átomos de carbono del anillo pueden estar sustituidos con oxo o alquilo C1-3; y R8 es hidrógeno o alquilo C1-3.

Description

Antagonistas de los receptores de las integrinas \alphav.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a derivados del ácido nonanoico, su síntesis y su uso como antagonistas de los receptores de las integrinas \alphav. De forma más particular, los compuestos de la presente invención son antagonistas de los receptores de las integrinas \alphav\beta3, \alphav\beta5, y de los receptores de las integrinas \alphav asociados a otras subunidades \beta, y son de utilidad para inhibir resorción ósea, tratar y prevenir osteoporosis, e inhibir restenosis vascular, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad vírica, cáncer, y crecimiento tumoral metastático.
Antecedentes de la invención
Se cree que una amplia variedad de estados de enfermedad y afecciones pueden mediarse actuando sobre los receptores de las integrinas y que los antagonistas de los receptores de las integrinas representan una clase de fármacos de utilidad. Los receptores de las integrinas son receptores trasmembrana heterodiméricos a través de los cuales las células se unen y comunican con las matrices extracelulares y otras células. (Véase S.B. Rodan y G.A. Rodan, "Integrin Function In Osteoclasts", Journal of Endocrinology, 154: S47-S56 (1997), que se incorpora a la presente memoria por referencia en su totalidad).
En un aspecto de la presente invención, los compuestos de la presente memoria son de utilidad para inhibir la resorción ósea. La resorción ósea es mediada por la acción de células denominadas osteoclastos. Los osteoclastos son grandes células multinucleadas de hasta aproximadamente 400 mm de diámetro que reabsorben el tejido mineralizado, principalmente carbonato cálcico y fosfato cálcico en los vertebrados. Los osteoclastos son células activamente móviles que migran por la superficie ósea y se pueden unir al hueso, segregar los ácidos necesarios y provocar así la resorción final de tejido mineralizado del hueso. De forma más específica, se cree que los osteoclastos existen en al menos dos estados fisiológicos, en concreto, el estado secretor y el estado migrador o móvil. En el estado secretor, los osteoclastos son planos, se unen a la matriz ósea mediante una zona de unión hermética (zona de sellado), se vuelven muy polarizados, forman un borde rizado y segregan enzimas lisosómicas y protones para reabsorber el hueso. La adhesión de los osteoclastos a las superficies óseas es una etapa inicial importante en la resorción ósea. En el estado migrador o móvil, los osteoclastos migran a través de la matriz ósea y no toman parte en la resorción hasta que de nuevo se unen al hueso.
Las integrinas están implicadas en la unión, activación y migración de los osteoclastos. La integrina más abundante en los osteoclastos, por ejemplo, en los osteoclastos de rata, pollo, ratón y humanas, es un receptor de la integrina conocida como \alphav\beta3, que se cree que interactúa en el hueso con las proteínas de la matriz que contienen la secuencia RGD. Los anticuerpos contra \alphav\beta3 bloquean la resorción ósea in vitro lo que indica que esta integrina desempeña un papel fundamental en el proceso de resorción. Existen indicios cada vez mayores que sugieren que los ligandos de \alphav\beta3 pueden usarse de forma eficaz para inhibir la resorción ósea mediada por osteoclastos in vivo en los
mamíferos.
Las principales enfermedades óseas actuales de interés público son la osteoporosis, hipercalcemia del cáncer, osteopenia debida a metástasis ósea, enfermedad periodontal, hiperparatiroidismo, erosiones periarticulares en la artritis reumatoide, enfermedad de Paget, osteopenia inducida por la inmovilización y osteoporosis inducida por glucocorticoides. Todas estas afecciones se caracterizan por la pérdida de hueso, provocada por un desequilibrio entre la resorción ósea, es decir la descomposición, y la formación de hueso, que continúa durante toda la vida a una velocidad de aproximadamente 14% al año de media. Sin embargo, la tasa de recambio óseo difiere de una zona a otra; por ejemplo es mayor en el hueso trabecular de las vértebras y el hueso alveolar de las mandíbulas que en el córtex de los huesos largos. La potencial pérdida de hueso está directamente relacionada con el recambio y puede suponer más del 5% al año en las vértebras justo después de la menopausia, una afección que provoca un riesgo mayor de
fracturas.
En los Estados Unidos, actualmente hay aproximadamente 20 millones de personas con fracturas detectables en las vértebras debidas a la osteoporosis. Además, se producen aproximadamente 250.000 fracturas de cadera al año atribuidas a la osteoporosis. Esta situación clínica está asociada a una tasa de mortalidad del 12% durante los primeros 2 años, mientras que el 30% de los pacientes necesita atención médica en casa tras la fractura.
Las personas que padecen todas las afecciones que se enumeran anteriormente se beneficiarían del tratamiento con agentes que inhiben la resorción ósea.
Además, se ha encontrado que los ligandos de \alphav\beta3 son de utilidad para tratar y/o inhibir la restenosis (es decir la reaparición de estenosis después de la cirugía correctora de la válvula cardíaca) aterosclerosis, retinopatía diabética, degeneración macular, y angiogénesis (es decir formación de nuevos vasos sanguíneos), y inhibir enfermedad vírica. Además, se ha postulado que el crecimiento de los tumores depende de un aporte de sangre adecuado, que a su vez depende del crecimiento de nuevos vasos en el tumor; así la inhibición de la angiogénesis puede provocar la regresión tumoral en modelos animales (Véase Harrison's Principles of Internal Medicine, 12ª ed., 1991, que se incorpora a la presente memoria por referencia en su totalidad). Por lo tanto, los antagonistas de \alphav\beta3 que inhiben la angiogénesis pueden ser de utilidad en el tratamiento de cáncer inhibiendo el crecimiento tumoral (Véase, por ejemplo, Brooks y cols., Cell, 79:1157-1164 (1994), que se incorpora a la presente memoria por referencia en su
totalidad).
También se han presentado indicios que sugieren que la angiogénesis es un factor central de la iniciación y persistencia de la enfermedad artrítica y de que la integrina vascular \alphav\beta3 puede ser una diana preferida en la artritis inflamatoria. Por lo tanto, los antagonistas de \alphav\beta3 que inhiben la angiogénesis pueden representar una estrategia terapéutica novedosa para el tratamiento de enfermedad artrítica, por ejemplo artritis reumatoide (véase C. M. Storgard, y cols., "Decreased angiogenesis and arthritic disease in rabbits treated with an \alphav\beta3 antagonist", J. Clin. Invest., 103: 47-54 (1999), que se incorpora a la presente memoria por referencia en su totalidad).
Además, los compuestos de esta invención también pueden inhibir la neovascularización actuando como antagonistas del receptor de integrina, \alphav\beta5. Se ha demostrado que un anticuerpo monoclonal contra \alphav\beta5 inhibe la angiogénesis inducida por VEGF en el modelo de cornea de conejo y de membrana corioalantoica del pollo (Véase M.C. Friedlander, y cols., Science 270: 1500-1502 (1995), que se incorpora a la presente memoria por referencia en su totalidad). Así, los compuestos que antagonizan \alphav\beta5 son de utilidad para tratar y prevenir degeneración macular, retinopatía diabética, enfermedad vírica, cáncer, y crecimiento tumoral metastático.
Además, los compuestos de la presente invención pueden inhibir la angiogénesis e inflamación actuando como antagonistas de receptores de las integrinas \alphav asociados a otras subunidades \beta, por ejemplo \alphav\beta6 y \alphav\beta8. (véase, por ejemplo, Melpo Christofidou-Solomidou, y cols., "Expression and Function of Endothelial Cell \alphav integrin receptors in Wound-Induced Human Angiogenesis in Human Skin/SCID Mice Chimeras", American Journal of Pathology, 151: 975-83 (1997) y Xiao-Zhu Huang, y cols., "Inactivation of the integrin \beta6 Subunit Gene Reveals a Role de Epithelial lntegrins in Regulating Inflammation in the Lungs and Skin, Journal of Cell Biology", 133: 921-28 (1996), que se incorporan a la presente memoria por referencia en su totalidad).
Además, ciertos compuestos de esta invención antagonizan tanto los receptores \alphav\beta3 como \alphav\beta5. Estos compuestos, denominados "antagonistas duales de \alphav\beta3 y \alphav\beta5" son de utilidad para inhibir resorción ósea, tratar y prevenir osteoporosis e inhibir restenosis vascular, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, aterosclerosis, inflamación, cáncer y crecimiento tumoral metastático.
En la bibliografía científica y de patentes se han descritos antagonistas peptidílicos así como peptidomiméticos del receptor de integrina \alphav\beta3. Por ejemplo, se hace referencia a W.J. Hoekstra y B.L. Poulter, Curr. Med. Chem. 5: 195-204 (1998) y las referencias que se citan en él; los documentos WO 95/3271 0; WO 95/37655; WO 97/01540; WO 97/37655; WO 98/08840; WO 98/18460; WO 98/18461; WO 98/25892; WO 98/31359; WO 98/30542; WO 99/15506; WO 99/15507; WO 99/31061; WO 00/06169; EP 853084; EP 854140; EP 854145; la patente de Estados Unidos n.º 5.780.426; y la patente de Estados Unidos n.º 6.048.861. Se han presentado indicios de la capacidad de los antagonistas del receptor de integrina \alphav\beta3 de prevenir la resorción ósea in vitro e in vivo (véase V.W. Engleman y cols., "A Peptidomimetic Antagonist of the \alphav\beta3 Integrin Inhibits Bone Resorption in Vitro and Prevents Osteoporosis in Vivo", J. Clin. Invest. 99: 2284-2292 (1997); S.B. Rodan y cols., "A High Affinity Non-Peptide \alphav\beta3 Ligand Inhibits Osteoclast Activity In Vitro and In Vivo", J. Bone Miner. Res. 11: S289 (1996); J.F. Gourvest y cols., "Prevention of OVX-Induced Bone Loss With a Non-peptidic Ligand of the \alphav\beta3 Vitronectin Receptor", Bone 23: S612 (1998); MW. Lark y cols., "An Orally Active Vitronectin Receptor \alphav\beta3 Antagonist Prevents Bone Resorption In Vitro and In Vivo in the Ovariectomized Rat", Bone 23: S219 (1998)).
El receptor de integrina \alphav\beta3 reconoce la secuencia tripeptreptídica Arg-Gly-Asp (RGD) en su matriz cognada y las glicoproteínas de la superficie celular (véase J. Samanen, y cols., "Vascular Indications for Integrin \alphav Antagonists", Curr. Pharmaceut. Design 3: 545-584 (1997)). Entre otros Genentech y SmithKline Beecham han empleado un núcleo de benzazepina como mimético de Gly-Asp con constreñimiento conformacional para elaborar antagonistas del receptor de integrina \alphav\beta3 sustituidos en el extremo N con el mimético de arginina heterocíclico (véase A.M. Keenan y cols., "Discovery of Potent Nonpeptide Vitronectin Receptor (\alphav\beta3) Antagonists", J. Med. Chem. 40: 2289-2292 (1997); R.M. Keenan y cols., "Bencimidazole Derivatives As Arginine Mimetics in 1,4-Benzodiazepine Nonpeptide Vitronectin Receptor (\alphav\beta3) Antagonists", Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 3165-3170 (1998); y A.M. Keenan y cols., "Discovery of an Imidazopiridine-Containing 1,4-Benzodiazepine Nonpeptide Vitronectin Receptor (\alphav\beta3) Antagonist With Efficacy in a Restenosis Model", Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 3171-3176 (1998). Las patentes cedidas a SmithKline Beecham que describen dicha benzazepina, así como antagonistas del receptor de integrina \alphav\beta3 de benzodiazepina y benzociclohepteno relacionados incluyen WO 96/00574, WO 96/00730, WO 96/06087, WO 96/26190, WO 97/24119, WO 97/24122, WO 97/24124, WO 98/15278, WO 99/05107, WO 99/06049, WO 99/15170 y WO 99/15178, y a Genentech incluye WO 97/34865. También se ha empleado el núcleo de dibenzociclohepteno, así como el de dibenzoxazepina como un Gly-Asp mimético para lograr antagonistas de \alphav\beta3 (véanse los documentos WO 97/01540, WO 98/30542, WO 99/11626 y WO 99/15508 todos cedidos a SmithKline Beecham).
Otros antagonistas del receptor de integrina con constreñimiento conformacional del anillo se han descrito en los documentos WO 98/08840; WO 99/30709; WO 99/30713; WO 99/31099; WO 00/09503; la patente de Estados Unidos n.º 5.919.792; la patente de Estados Unidos n.º 5.925.655; la patente de Estados Unidos n.º 5.981.546; y la patente de Estados Unidos n.º 6.017.926.
Sin embargo, todavía sigue existiendo la necesidad de antagonistas de los receptores de las integrinas \alphav selectivos, no peptídicos de molécula pequeña que presenten mejores propiedades de potencia, farmacodinámicas y farmacocinéticas, tales como biodisponibilidad oral y duración de la acción, que los compuestos ya descritos. Dichos compuestos serían de utilidad para el tratamiento, prevención, o supresión de diversas patologías enumeradas anteriormente y que son mediadas por la unión al receptor de las integrinas \alphav y la adhesión y activación celulares.
En la patente de Estados Unidos n.º 6.048.861 (11 de abril de 2000), los presentes inventores describieron, entre otros, una serie de derivados del ácido nonanoico sustituidos en 3 que son antagonistas potentes del receptor de integrina \alphav\beta3. En la presente invención, los presentes inventores describen derivados de ácidos alcanoicos análogos que están sustituidos en la posición C-5 de la cadena alifática con una función con oxígeno, en concreto ceto; y en C-3 con un grupo arilo opcionalmente sustituido. Cuando se comparan con los compuestos progenitores, los compuestos de la presente invención de cadena oxigenada son menos hidrófobos, muestran una menor unión a las proteínas plasmáticas y muestran mejores propiedades farmacocinéticas y/o farmacodinámicas in vivo.
Por lo tanto es un objeto de la presente invención proporcionar derivados del ácido nonanoico novedosos oxigenados en la posición C-5 de la cadena alifática que son de utilidad como antagonistas de los receptores de las integrinas \alphav.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar derivados del ácido nonanoico novedosos oxigenados en la posición C-5 de la cadena alifática que son de utilidad como antagonistas del receptor \alphav\beta3.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar derivados del ácido nonanoico novedosos oxigenados en la posición C-5 de la cadena alifática que son de utilidad como antagonistas del receptor \alphav\beta5.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar derivados del ácido nonanoico novedosos oxigenados en la posición C-5 de la cadena alifática que son de utilidad como antagonistas duales de los receptores \alphav\beta3/\alphav\beta5.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar composiciones farmacéuticas que comprenden antagonistas de los receptores de integrinas.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar procedimientos para preparar las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar procedimientos para provocar un efecto de antagonismo de un receptor de integrina en un mamífero que lo necesite administrando los compuestos y composiciones farmacéuticas de la presente invención.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos y composiciones farmacéuticas de utilidad para inhibir resorción ósea, restenosis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad vírica, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, cáncer, y crecimiento tumoral metastático.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos y composiciones farmacéuticas de utilidad para tratar osteoporosis.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar procedimientos de utilidad para inhibir resorción ósea, restenosis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad vírica, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, cáncer, y crecimiento tumoral metastático.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar procedimientos para tratar osteoporosis.
Estos y otros objetivos serán obvios a partir de la descripción detallada siguiente.
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Sumario de la invención
La presente invención se refiere a compuestos novedosos tal como se describen en la reivindicación 1.
Los compuestos de la presente invención son de utilidad como antagonistas de los receptores de las integrinas \alphav.
La presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente invención también se refiere a procedimientos para preparar las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
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Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere a derivados del ácido nonanoico novedosos que se describen mediante la formula estructural (IV)
1
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la que X es
2
R^{2} se selecciona del grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloheteroalquilo C_{3-8}, (cicloalquil C_{3-8})alquilo C_{1-6}, (cicloheteroalquil C_{3-8})-alquilo C_{1-6}, arilo, arilalquilo C_{1-6}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acilamino C_{1-3}, (acilamino C_{1-3})alquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-6})_{1-2} amino, (cicloalquil C_{3-6})amino C_{0-2}, (alquil C_{1-6})_{1-2} aminoalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, (alcoxi C_{1-4})alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidoxicarbonilalquilo C_{1-6}, (alcoxi C_{1-3})carbonilo, (alcoxi C_{1-3})carbonilalquilo C_{1-6}, hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, nitro, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, (alquil C_{1-8})-S(O)_{0-2}, (alquil C_{1-8})_{0-2} aminocarbonilo, (alquiloxi C_{1-8})carbonilamino, (alquil C_{1-8})_{1-2}
aminocarboniloxi, (arilalquil C_{1-3})_{1-2}amino, (aril)_{1-2}amino, aril(alquil C_{1-3})sulfonilamino y (alquil C_{1-8})sulfonilamino;
R^{7} es arilo, en el que el grupo arilo se selecciona del grupo constituido por
(1) fenilo,
(2) naftilo,
(3) piridilo,
(4) furilo,
(5) tienilo,
(6) pirrolilo,
(7) oxazolilo,
(8) tiazolilo,
(9) imidazolilo,
(10) pirazolilo,
(11) isoxazolilo,
(12) isotiazolilo,
(13) pirimidinilo,
(14) pirazinilo,
(15) piridazinilo,
(16) tetrazolilo,
(17) quinolilo,
(18) isoquinolilo,
(19) bencimidazolilo,
(20) benzofurilo,
(21) benzotienilo,
(22) indolilo,
(23) benzotiazolilo,
(24) benzoxazolilo,
(25) dihidrobenzofurilo,
(26) benzo(1,3)dioxolanilo,
(27) benzo(1,4)dioxanilo,
(28) quinazolilo,
(29) quinoxalilo, y
(30) 3,4-dihidro-2H-1,4-dioxa-5-aza-naftalenilo:
en el que el grupo arilo tal como se define anteriormente en los puntos (1) a (30) no está sustituido o está sustituido con de uno a tres sustituyentes que se seleccionan independientemente a partir de hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acilamino C_{1-3}, (acilamino C_{1-3})-alquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino, (alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, di(alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, (alquil C_{1-4})tio, (alquil C_{1-4})sulfinilo, (alquil C_{1-4})sulfonilo, (alcoxi C_{1-4})alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, (alcoxi C_{1-5})carbonilo, (alcoxi C_{1-3})carbonilalquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-5})carboniloxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, y nitro; o dos sustituyentes adyacentes junto con los átomos de carbono a los que están enlazados para formar un anillo saturado o insaturado de cinco o seis miembros que contiene 1 ó 2 heteroátomos que se seleccionan del grupo constituido por N, O, y S, cuyos átomos de carbono del anillo pueden estar sustituidos con oxo o alquilo C_{1-3}; con la condición de que si X es 5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-ilo, R^{2} es hidrógeno, y arilo es 6-sustituido-piridin-3-ilo, entonces el sustituyente 6 del anillo piridin-3-ilo es distinto de metoxi; y
R^{8} es hidrógeno o alquilo C_{1-3}.
En una realización, R^{7} es arilo en el que el grupo arilo se selecciona del grupo constituido por fenilo, piridilo, quinolilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, pirazolilo, benzofurilo, dihidrobenzofurilo, y 3,4-dihidro-2H-1,4-dioxa-5-aza-naftalenilo, en el que el grupo arilo no está sustituido o está sustituido con uno o dos sustituyentes tal como se define anteriormente.
En otra clase de esta realización, R^{7} es quinolilo, piridilo, o pirimidinilo, no sustituido o sustituido con uno a dos sustituyentes que se seleccionan independientemente a partir de halógeno, fenilo, alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, alcoxi C_{1-3}, amino, (alquil C_{1-3})amino, di(alquil C_{1-3})amino, hidroxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi y trifluoroetoxi.
En una subclase de esta clase, R^{2} se selecciona del grupo constituido por
hidrógeno,
halógeno,
amino,
(alquil C_{1-4})amino,
(cicloalquil C_{3-6})(alquil C_{0-2})amino,
ciano,
alquilo C_{1-4},
ciclopropilo,
arilalquilo C_{1-3},
acilamino C_{1-4},
alcoxi C_{1-4},
alquiltio C_{1-4},
aminocarbonilo,
(alquil C_{1-6})_{1-2} aminocarbonilo,
(alcoxi C_{1-4})carbonilo,
trifluorometilo, y
trifluorometoxi.
En una subclase adicional de esta clase, R^{2} se selecciona del grupo constituido por
hidrógeno,
halógeno,
amino,
alquilamino C_{1-3},
(cicloalquil C_{3-6})metilamino,
alquilo C_{1-4},
ciclopropilo,
trifluorometilo, y
trifluorometoxi.
Otra realización se refiere a compuestos de la fórmula estructural (IV):
3 
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o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en la que X es:
4
R^{2} es hidrógeno, alquilo C_{1-4} o ciclopropilo;
R^{7} es quinolilo, piridilo, o pirimidinilo, no sustituido o sustituido con un sustituyente que se selecciona a partir de alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, alcoxi C_{1-3}, amino, (alquil C_{1-3})amino, di(alquil C_{1-3})amino, ciano, trifluorometilo, o trifluorometoxi, y
R^{8} es hidrógeno o alquilo C_{1-3}.
Realizaciones adicionales de la presente invención se refieren a compuestos de la formula IV en los que R^{8} es hidrógeno.
Ejemplos ilustrativos pero no limitantes de los compuestos de la presente invención que son de utilidad como antagonistas de los receptores de las integrinas \alphav son los siguientes:
Ácido 3-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(R)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(S)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3-(2-metoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(R)-(2-metoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(S)-(2-metoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(R)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(S)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(R)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(S)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
Para usar en medicina, las sales de los compuestos de esta invención se refieren a "sales farmacéuticamente aceptables" no tóxicas. Sin embargo otras sales pueden ser de utilidad en la preparación de los compuestos de acuerdo con la invención o de sus sales farmacéuticamente aceptables. Las sales englobadas dentro del término "sales farmacéuticamente aceptables" se refieren a las sales no tóxicas de los compuestos de esta invención que generalmente se preparan haciendo reaccionar la base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado. Las sales representativas incluyen las siguientes: acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsinalato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactilato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de N-metilglucamina amonio, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfate/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietilyoduro y valerato. Además, cuando los compuestos de la invención portan un resto ácido, sus sales farmacéuticamente aceptables adecuadas pueden incluir sales de metales alcalinos, por ejemplo, sales de sodio o potasio; sales de metales alcalinotérreos, por ejemplo, sales de calcio o magnesio; y sales formadas con ligandos orgánicos adecuados, por ejemplo, sales de amonio cuaternario.
Los compuestos de la presente invención pueden tener centros quirales y por lo tanto pueden aparecer en forma de racematos, mezclas racémicas, enantiómeros únicos, mezclas diastereoisoméricas y diastereoisómeros individuales, estando todas las formas isoméricas incluidas en la presente invención. Por lo tanto, cuando un compuesto es quiral, los enantiómeros o diastereómeros individuales, sustancialmente libres del otro, están incluidos en el alcance de la invención; además están incluidas todas las mezclas de los dos enantiómeros.
Algunos de los compuestos que se describen en la presente memoria contienen enlaces dobles olefínicos y, a no ser que se indique lo contrario, se pretende que incluyan ambos isómeros geométricos E y Z.
Algunos de los compuestos descritos en la presente memoria pueden existir con diferentes puntos de unión del hidrógeno, denominados tautómeros. Uno de dichos ejemplos puede ser una cetona y su forma enol, conocidos como tautómeros ceto-enol. Los tautómeros individuales, así como sus mezclas están incluidos dentro de los compuestos de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención pueden separarse en los pares diastereoisoméricos de enantiómeros, por ejemplo, mediante cristalización fraccionada en un disolvente adecuado, por ejemplo, metanol o acetato de etilo o una mezcla de los mismos. El par de enantiómeros así obtenidos puede separarse en los estereoisómeros individuales por medios convencionales, por ejemplo, usando un ácido ópticamente activo como agente de resolución o mediante HPLC usando una fase estacionaria quiral. De forma alternativa, puede usarse cualquier enantiómero de un compuesto de la presente invención mediante síntesis estereoespecífica usando materiales iniciales ópticamente puros de configuración conocida.
También están incluidos dentro del alcance de la invención los polimorfos e hidratos de los compuestos de la presente invención.
La presente invención incluye en su alcance los profármacos de los compuestos de esta invención. En general, dichos profármacos serán derivados funcionales de los compuestos de esta invención que pueden convertirse fácilmente in vivo en el compuesto necesario. Así, en los procedimientos de tratamiento de la presente invención, el término "administración" englobará el tratamiento de las diversas afecciones descritas con el compuesto descrito específicamente o con un compuesto que puede no describirse específicamente, pero que se convierte en el compuesto especificado in vivo tras la administración al paciente. Procedimientos convencionales para la selección y preparación de derivados profármacos adecuados se describen, por ejemplo, en "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985, que se incorpora a la presente memoria por referencia en su totalidad. Los metabolitos de estos compuestos incluyen especies activas producidas tras la introducción de los compuestos de esta invención en el entorno biológico.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" querrá decir aquella cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que busca el investigador o clínico.
El término "antagonista del receptor de integrina", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un compuesto que se une y antagoniza el receptor \alphav\beta3 o el receptor \alphav\beta5, o un compuesto que se une y antagoniza una combinación de estos receptores (por ejemplo, un agonista dual de los receptores \alphav\beta3/\alphav\beta5). El término "resorción ósea", tal como se usa en la presente memoria, se refiere al proceso por el cual los osteoclastos degradan el hueso.
El término "alquilo" querrá decir alcanos de cadena lineal o ramificada de uno a diez átomos de carbono en total o cualquier número dentro de este intervalo (es decir, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, etc.).
El término "alquenilo" querrá decir alquenos de cadena lineal o ramificada de dos a diez átomos de carbono en total, o cualquier número dentro de este intervalo.
El término "alquinilo" querrá decir alquinos de cadena lineal o ramificada de dos a diez átomos de carbono en total, o cualquier número dentro de este intervalo.
El término "cicloalquilo" querrá decir anillos cíclicos de alcanos de tres a ocho átomos de carbono en total, o cualquier número dentro de este intervalo (es decir, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo o ciclooctilo).
El término "cicloheteroalquilo", tal como se usa en la presente memoria, querrá decir un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros completamente saturado que contiene uno o dos heteroátomos que se eligen de entre N, O, o S. Ejemplos de grupos cicloheteroalquilo incluyen, pero sin limitación piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo, morfolinilo, piperazinilo.
El término "alcoxi", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a alcóxidos de cadena lineal o ramificada del número de átomos de carbono especificados (por ejemplo, alcoxi C_{1-5}), o cualquier número dentro de este intervalo (es decir, metoxi, etoxi, etc.).
El término "arilo", tal como se usa en la presente memoria, se refiere a un sistema monocíclico o bicíclico que comprende al menos un anillo aromático, en el que el sistema monocíclico o bicíclico contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 heteroátomos que se eligen a partir de N, O, o S, y en el que el sistema monocíclico o bicíclico o no está sustituido o está sustituido con uno o más grupos que se seleccionan independientemente a partir de halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acilamino C_{1-3}, (acilamino C_{1-3})-alquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-6})amino, (alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, di(alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, (alquil C_{1-4})tio, (alquil C_{1-4})sulfinilo, (alquil C_{1-4})sulfonilo, (alcoxi C_{1-4})alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, (alcoxi C_{1-5})carbonilo, (alcoxi C_{1-3})carbonilalquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, alquiloxi C_{1-6}, hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, oxo, y (alquil C_{1-5})carboniloxi. Ejemplos de arilo incluyen, pero sin limitación, fenilo, naftilo, piridilo, pirrolilo, pirazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, imidazolilo, bencimidazolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinolilo, isoquinolilo, quinazolilo, quinoxalilo, indolilo, tienilo, furilo, benzofurilo, dihidrobenzofurilo, benzotienilo, benzo(1,3)dioxolanilo, benzo(1,4)dioxanilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, y tetrazolilo, que o no están sustituidos o están sustituidos con uno o más grupos que se seleccionan independientemente a partir de halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acilamino C_{1-3}, (acilamino C_{1-3})-alquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-6})amino, (alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, di(alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, (alquil C_{1-4})tio, (alquil C_{1-4})sulfinilo, (alquil C_{1-4})sulfonilo, (alcoxi C_{1-4})alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, (alcoxi C_{1-5})carbonilo, (alcoxi C_{1-3})carbonilalquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, alquiloxi C_{1-6}, hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, oxo, y (alquil C_{1-5})carboniloxi. Preferiblemente, el grupo arilo no está sustituido, o está monosustituido, disustituido o trisustituido con de uno a tres de los sustituyentes nombrados anteriormente; más preferiblemente, el grupo arilo no está sustituido, está monosustituido o disustituido con de uno a dos de los sustituyentes nombrados anteriormente.
Cuando aparece el término "alquilo" o "arilo" o cualquiera de sus raíces como prefijo en el nombre de un sustituyente (por ejemplo, arilalquilo C_{0-8}), deberá interpretarse como que incluye las limitaciones que se especifican anteriormente para "alquilo" y "arilo". Los números de átomos de carbono que se especifican (por ejemplo, C_{1-8}) se referirán independientemente al número de átomos de carbono en un resto alquilo o alquilo cíclico o a la porción alquilo de un sustituyente más grande en el que alquilo aparece como su raíz en forma de prefijo.
Los términos "arilalquilo" y "alquilarilo" incluyen una porción alquilo en la que alquilo se define anteriormente e incluye una porción arilo en la que arilo se define anteriormente. Ejemplos de arilalquilo incluyen, pero sin limitación, bencilo, fluorobencilo, clorobencilo, feniletilo, fenilpropilo, fluorofeniletilo, clorofeniletilo, tienilmetilo, tieniletilo y tienilpropilo. Ejemplos de alquilarilo incluyen, pero sin limitación, tolueno, etilbenceno, propilbenceno, metilpiridina, etilpiridina, propilpiridina y butilpiridina.
En los compuestos de la presente invención, dos sustituyentes R^{2} cuando están en el mismo átomo de carbono pueden tomarse conjuntamente con el átomo de carbono al que están enlazados para formar un grupo carbonilo.
El término "halógeno" incluirá yodo, bromo, cloro y flúor.
El término "oxi" quiere decir un átomo de oxígeno (O). El término "tio" quiere decir un átomo de azufre (S). El término "oxo" quiere decir " =O". El término "carbonilo" quiere decir "C = O".
El término "sustituido" se considerará que incluye grados múltiples de sustitución por el sustituyente nombrado. Cuando se describen o reivindican múltiples restos sustituyentes, el compuesto sustituido puede estar sustituido independientemente por uno o más de los restos sustituyentes descritos o reivindicados, de forma singular o plural. Por sustituidos independientemente, se quiere decir que los (dos o más) sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
En la nomenclatura estándar que se usa en toda esta descripción, la porción terminal de la cadena lateral designada se describe primero, seguida de la función adyacente hacia el punto de unión. Por ejemplo, un sustituyente (alquil C_{1-5})carbonilaminoalquilo C_{1-6} es equivalente a
5
Para elegir los compuestos de la presente invención, una persona de experiencia ordinaria en la técnica reconocerá que los diversos sustituyentes, es decir X, R^{7}, y R^{8}, deben elegirse conforme a los notorios principios de la conectividad de las estructuras químicas.
Los compuestos representativos de la presente invención habitualmente presentan una afinidad submicromolar por los receptores de las integrinas \alphav, en particular por los receptores \alphav\beta3 y \alphav\beta5. Los compuestos de esta invención por lo tanto son de utilidad para tratar a mamíferos que padecen una afección ósea provocada o mediada por una mayor resorción ósea, que necesiten dicho tratamiento. Al mamífero se le administran cantidades farmacológicamente eficaces de los compuestos, que incluyen sus sales farmacéuticamente aceptables, para inhibir la actividad de los osteoclastos mamíferos.
Los compuestos de la presente invención se administran en dosis eficaces para antagonizar el receptor \alphav\beta3 cuando se necesite dicho tratamiento como por ejemplo, en la prevención o tratamiento de osteoporosis.
Ilustrativo de la invención es el procedimiento en el que el efecto de antagonismo de los receptores de las integrinas \alphav es un efecto de antagonismo de \alphav\beta3. De forma más particular, el efecto de antagonismo de \alphav\beta3 se selecciona a partir de inhibición de: resorción ósea, restenosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad vírica, cáncer, y crecimiento tumoral metastático. In una realización del procedimiento, el efecto de antagonismo de \alphav\beta3 es la inhibición de resorción ósea.
Otro ejemplo de la invención es el procedimiento en el que el efecto de antagonismo de los receptores de las integrinas \alphav es un efecto de antagonismo de \alphav\beta5. De forma más específica, el efecto de antagonismo de \alphav\beta5se selecciona a partir de inhibición de restenosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, cáncer, y crecimiento tumoral metastático.
Además, ilustrativo de la invención es el procedimiento en el que el efecto de antagonismo de los receptores de las integrinas \alphav es un efecto de antagonismo dual de \alphav\beta3/\alphav\beta5. De forma más particular, el efecto de antagonismo dual de \alphav\beta3/\alphav\beta3 se selecciona a partir de inhibición de: resorción ósea, restenosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad vírica, cáncer, y crecimiento tumoral
metastático.
Más particularmente ilustrativo de la invención es una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Otro ejemplo de la invención es una composición farmacéutica que se prepara combinando cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Otra ilustración de la invención es un procedimiento para preparar una composición farmacéutica que comprende combinar cualquiera de los compuestos descritos anteriormente y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Además, ilustrativo de la utilidad de la invención es un procedimiento de tratar y/o prevenir una afección mediada por el antagonismo de un receptor de una integrina \alphav en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos descritos anteriormente. Preferiblemente, la afección se selecciona a partir de resorción ósea, osteoporosis, restenosis, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad vírica, cáncer, crecimiento tumoral y metástasis. Más preferiblemente, la afección se selecciona a partir de osteoporosis y cáncer. Lo más preferiblemente, la afección es osteoporosis.
Más específicamente ejemplar de la utilidad de la invención es un procedimiento de provocar el antagonismo de un receptor de integrina en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritos anteriormente. Preferiblemente, el efecto de antagonismo de integrina es un efecto de antagonismo de \alphav\beta3; de forma más específica, el efecto de antagonismo de \alphav\beta3 se selecciona a partir de inhibición de resorción ósea, inhibición de restenosis, inhibición de aterosclerosis, inhibición de angiogénesis, inhibición de retinopatía diabética, inhibición de degeneración macular, inhibición de inflamación, inhibición de enfermedad vírica, e inhibición de cáncer o crecimiento tumoral metastático. Lo más preferiblemente, el efecto de antagonismo de \alphav\beta3 es inhibición de resorción ósea. De forma alternativa, el efecto de antagonismo de integrina es un efecto de antagonismo de \alphav\beta5 o un efecto de antagonismo dual de \alphav\beta3/\alphav\beta5. Ejemplos de efectos de antagonismo de \alphav\beta5 son inhibición de restenosis, aterosclerosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, enfermedad vírica, y crecimiento tumoral metastático.
Ejemplos adicionales de la utilidad de la invención son procedimientos de inhibir la resorción ósea y de tratar y/o prevenir la osteoporosis en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritos anteriormente.
Ilustraciones adicionales de la utilidad de la invención son procedimientos de tratar hipercalcemia del cáncer, osteopenia debida a metástasis ósea, enfermedad periodontal, hiperparatiroidismo, erosiones periarticulares en la artritis reumatoide, enfermedad de Paget, osteopenia inducida por la inmovilización y osteoporosis inducida por glucocorticoides en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritos anteriormente.
Más particularmente ejemplar de la invención es el uso de cualquiera de los compuestos descritos anteriormente en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de osteoporosis en un mamífero que lo necesite. Todavía más ejemplar de la invención es el uso de cualquiera de los compuestos descritos anteriormente en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de resorción ósea, crecimiento tumoral, cáncer, restenosis, aterosclerosis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad vírica, y/o angiogénesis.
También ejemplares de la invención son composiciones que comprenden además un principio activo que se selecciona a partir del grupo constituido por
a)
un bisfosfonato orgánico o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo,
b)
un modulador de los receptores de estrógenos,
c)
un modulador de los receptores de andrógenos,
d)
un agente citotóxico/antiproliferativo,
e)
un inhibidor de las metaloproteinasas de la matriz,
f)
un inhibidor de factores de crecimiento derivados de la epidermis, derivados de fibroblastos o derivados de plaquetas,
g)
un inhibidor de VEGF,
h)
un anticuerpo contra un factor de crecimiento o contra un receptor de un factor de crecimiento,
i)
un inhibidor de Flk-1/KDR, Flt-1, Tck/Tie-2, o Tie-1,
j)
un inhibidor de catepsina K,
k)
un segretagogo de hormona del crecimiento,
l)
un inhibidor de la protón ATPasa de los osteoclastos,
m)
un inhibidor del activador de plasminógeno de uroquinasa (u-PA),
n)
una proteína de fusión de un anticuerpo específico de tumor e interleucina-2,
o)
un inhibidor de HMG-CoA reductasa, y
p)
un inhibidor de la prenilación, por ejemplo un inhibidor de farnesilo transferasa o un inhibidor de geranilgeranilo transferasa o un inhibidor dual de farnesilo/geranilgeranilo transferasa;
y sus mezclas.
(Véase. B. Millauer y cols., "Dominant-Negative Inhibition of Flk-1 Suppresses the Growth of Many Tumor Types in Vivo", Cancer Research, 56,1615-1620 (1996), que se incorpora a la presente memoria por referencia en su totalidad).
Preferiblemente, el principio activo se selecciona del grupo constituido por:
a)
un bisfosfonato orgánico o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo,
b)
un modulador de los receptores de estrógenos,
c)
un modulador de los receptores de andrógenos,
d)
un inhibidor de la protón ATPasa de los osteoclastos,
e)
un inhibidor de HMG-CoA reductasa, y
f)
un inhibidor de catepsina K,
y sus mezclas.
Ejemplos no limitantes de dichos bisfosfonatos incluyen alendronato, etidronato, pamidronato, risedronato, ibandronato, y sus sales y ésteres farmacéuticamente aceptables. Un bisfosfonato particularmente preferido es alendronato, especialmente alendronato monosódico trihidratado.
Ejemplos no limitantes de moduladores de los receptores de estrógenos estrogeno, progesterina, estradiol, droloxífeno, raloxífeno, y tamoxífeno.
Ejemplos no limitantes de agentes citotóxicos/antiproliferativos son taxol, vincristina, vinblastina y doxorrubicina.
Catepsina K, anteriormente conocida como catepsina 02, es una cisteína proteasa y se describe en la publicación de solicitud de patente internacional PCT n.º WO 96/13523, publicada el 9 de mayo de 1996; la patente de Estados Unidos n.º 5.501.969, expedida el 3 de marzo de 1996; y la patente de Estados Unidos n.º 5.736.357, expedida el 7 de abril de 1998, todas las cuales se incorporan a la presente memoria por referencia en su totalidad. Las cisteína proteasas, específicamente las catepsinas, están ligadas a numerosas afecciones de enfermedades, tales como metástasis tumoral, inflamación, artritis, y remodelación ósea. A pH ácido, las catepsinas pueden degradar el colágeno de tipo I. Los inhibidores de la proteasa catepsina pueden inhibir la resorción ósea osteoclástica inhibiendo la degradación de las fibras de colágeno y así son de utilidad en el tratamiento de enfermedades con resorción ósea, tales como osteoporosis.
Se ha encontrado que miembros de la clase de inhibidores de HMG-CoA reductasa, conocidos como "estatinas", desencadenan el crecimiento de hueso nuevo, que sustituye la masa de hueso perdida por la osteoporosis (véase The Wall Street Journal, viernes, 3 de diciembre de 1999, página B1). Por lo tanto, las estatinas son prometedoras para el tratamiento de la resorción ósea. Ejemplos no limitantes de estatinas son lovastatina, simvastatina, atorvastatina y pravastatina.
Se han presentado indicios de un papel crucial del receptor de uroquinasa-uroquinasa (u-PA-u-PAR) en la angiogénesis, la invasión tumoral, inflamación y remodelación matricial durante la cicatrización de heridas y el desarrollo [véase Y. Koshelnick y cols., "Mechanisms of signaling through Urokinase Receptor and the Celular Response", Thrombosis and Haemostasis 82: 305-311 (1999) y F. Blasi, "Proteolysis, Cell Adhesion, Chemotaxis, and Invasiveness Are Regulated by the uPA-u-PAR-PAI-1 System", Thrombosis and Haemostasis 82: 298-304 (1999)]. Así, se ha encontrado que los antagonistas específicos de la unión de u-PA a u-PAR inhiben la activación del plasminógeno en la superficie celular, el crecimiento tumoral y la angiogénesis tanto en modelos in vitro como in vivo.
H.N. Lode y colaboradores en PNAS USA 96: 1591-1596 (1999) han observado efectos sinérgicos entre una proteína de fusión de un antagonista de integrina \alphav angiógeno y una citoquina específica de tumor (interleuquina-2) en la erradicación de las metástasis tumorales espontáneas. Sus resultados sugieren que esta combinación tiene potencial para el tratamiento de cáncer y crecimiento tumoral metastático.
Se ha reseñado que la protón ATPasa que se encuentra en la membrana apical del osteoclasto desempeña un papel significativo en el proceso de resorción ósea. Por lo tanto, esta bomba de protones representa una diana atractiva para el diseño de inhibidores de la resorción ósea que potencialmente son de utilidad para el tratamiento y prevención de la osteoporosis y enfermedades metabólicas relacionadas (véase C. Farina y cols., "Selective inhibidors of the osteoclast vacuolar proton ATPase as novel bone antiresorptive agents", DDT, 4 163-172 (1999)).
Se han presentado indicios de que los esteroides andrógenos desempeñan un papel fisiológico en el desarrollo de la masa ósea en hombres y mujeres y de que los andrógenos actúan directamente sobre el hueso. Se ha demostrado que los receptores de andrógenos, que se ha comprobado que existen en las estirpes celulares tipo osteoblasto, estimulan directamente la proliferación y diferenciación de las células óseas. Para una descripción, refiérase a S.R. Davis, "The therapeutic use of androgens in women", J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 69: 177-184 (1999) y K.A. Hansen y S.P.T. Tho, "Androgens and Bone Health", "Seminars in Reproductive Endocrinology", 16: 129-134 (1998). Así, los moduladores de los receptores de andrógenos pueden ser útiles en el tratamiento y la prevención de la pérdida ósea en mujeres.
Los activadores del receptor-\gamma activado por los proliferadores de los peroxisomas (PPAR\gamma), tales como las tiazolidindionas (TZD), inhiben la formación de células de tipo osteoclasto y la resorción ósea in vitro. Los resultados que refieren R. Okazaki y cols. en Endocrinology, 140: 5060-5065 (1999) apuntan a un mecanismo local de las células de medula ósea así como a uno sistémico del metabolismo de la glucosa. Ejemplos no limitantes de activadores de PPAR\gamma incluyen troglitazona, pioglitazona, rosiglitazona y BRL 49653.
La presente invención se refiere también a combinaciones de los compuestos de la presente invención con uno o más agentes de utilidad en la prevención o tratamiento de osteoporosis. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención pueden administrarse de forma eficaz combinados con cantidades eficaces de otros agentes tales como un bisfosfonato orgánico, un modulador de los receptores de estrógenos, un modulador de los receptores de andrógenos, un segretatogo de la hormona del crecimiento, un inhibidor de catepsina K, un inhibidor de HMG-CoA reductasa, un activador de PPAR\gamma o un inhibidor de la protón ATPasa de los osteoclastos.
Ilustraciones adicionales de la invención son procedimientos de tratar el crecimiento o la metástasis tumoral en un mamífero que lo necesite, que comprenden administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito anteriormente y uno o más agentes que se sabe que son citotóxicos/antiproliferativos. También, los compuestos de la presente invención pueden administrarse combinados con radioterapia para el tratamiento del cáncer y del crecimiento tumoral metastático.
Además, los compuestos antagonistas del receptor de integrina \alphav\beta3 de la presente invención pueden administrarse de forma eficaz combinados con un segretagogo de la hormona del crecimiento en el tratamiento terapéutico o profiláctico de trastornos del metabolismo del calcio o fosfato y enfermedades asociadas. Estas enfermedades incluyen afecciones que pueden beneficiarse de una reducción de la resorción ósea. Una reducción de la resorción ósea debería mejorar el equilibrio entre la resorción y la formación, reducir la pérdida ósea o provocar el aumento de hueso. Una reducción de la resorción ósea puede aliviar el dolor asociado a las lesiones osteolíticas y reducir la incidencia y/o el crecimiento de dichas lesiones. Estas enfermedades incluyen: osteoporosis (que incluye la provocada por déficit de estrógenos, inmovilización, inducida por glucocorticoides y senil), osteodistrofia, enfermedad de Paget, miositis, enfermedad de Bechterew, hipercalcemia del cáncer, enfermedad ósea metastática, enfermedad periodontal, colelitiasis, nefrolitiasis, urolitiasis, cálculo urinario, endurecimiento de las arterias (esclerosis), artritis, bursitis, neuritis y contracciones tónicas. La resorción ósea aumentada puede ir acompañada de concentraciones patológicamente elevadas de calcio y fosfato en plasma, que serían aliviadas mediante este tratamiento. De forma similar, la presente invención sería de utilidad para aumentar la masa ósea en pacientes con déficit de hormona del crecimiento. Así, las combinaciones preferidas son los tratamientos simultáneos o alternantes de un antagonista del receptor de \alphav\beta3 de la presente invención y un segretagogo de la hormona del crecimiento, que opcionalmente incluye un tercer componente que comprende un bisfosfonato orgánico, preferiblemente alendronato monosódico
trihidratado.
De acuerdo con el procedimiento de la presente invención, los componentes individuales de la combinación pueden administrarse por separado en momentos diferentes durante el transcurso del tratamiento o de forma concurrente en formas separadas o únicas combinadas. Por lo tanto, la presente invención debe entenderse que engloba todas dichas pautas de tratamiento simultáneo o alternante y el término "administración" debe interpretarse en consecuencia. Se entenderá que el alcance de las combinaciones de los compuestos de esta invención con otros agentes de utilidad para tratar las afecciones mediadas por integrinas incluye, en principio, cualquier combinación con cualquier composición farmacéutica de utilidad para tratar la osteoporosis.
Tal como se usa en la presente memoria, el término "composición" se pretende que englobe un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que sea el resultado directo o indirecto de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse en formas farmacéuticas orales tales como comprimidos, cápsulas (cada una de las cuales incluye las formulaciones de liberación mantenida o programada), píldoras, polvos, gránulos, elixires, tinturas, suspensiones, jarabes y emulsiones. Del mismo modo, pueden administrarse también de forma intravenosa (embolada o en infusión), intraperitoneal, tópica (por ejemplo, gotas oculares), subcutánea, intramuscular o transdérmica (por ejemplo, parche), todas usando formas notorias para las personas de experiencia ordinaria en la técnica farmacéutica. Puede emplearse una cantidad eficaz pero no tóxica del compuesto que se desee como antagonista de \alphav\beta3.
La posología en el uso de los compuestos de la presente invención se selecciona de acuerdo con una variedad de factores que incluyen tipo, especie, edad, peso, sexo y afección médica del paciente; la gravedad de la afección a tratar; la vía de administración; la función renal y hepática del paciente; y el compuesto particular o su sal que se emplee. Un médico, veterinario o clínico de experiencia ordinaria puede determinar y prescribir fácilmente la cantidad eficaz del fármaco necesaria para prevenir, contrarrestar o detener la progresión de la afección.
Las dosis orales de la presente invención, cuando se usan para los efectos que se indican, variarán entre aproximadamente 0,01 mg por kg de peso corporal al día (mg/kg/día) a aproximadamente 100 mg/kg/día, preferiblemente de 0,01 a 10 mg/kg/día, y lo más preferiblemente de 0,1 a 5,0 mg/kg/día. Para la administración oral, las composiciones preferiblemente se proporcionan en forma de comprimidos que contienen 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100 y 500 miligramos del principio activo para el ajuste sintomático de la dosis al paciente a tratar. Un medicamento habitualmente contiene de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 500 mg del principio activo, preferiblemente, de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg de principio activo. Por vía intravenosa, las dosis más preferidas variarán desde aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg/minuto durante una infusión a velocidad constante. De forma ventajosa, los compuestos de la presente invención pueden administrarse en una única dosis diaria o la dosis diaria total puede administrarse en tomas separadas dos, tres o cuatro veces al día. Además, los compuestos preferidos para la presente invención pueden administrarse en forma intranasal mediante el uso tópico de vehículos intranasales adecuados o por vía transdérmica, usando las formas de parches cutáneos notorias para las personas de experiencia ordinaria en la técnica. Para administrar en forma de un sistema de administración transdérmica, la administración de la dosis, por supuesto, será continua en lugar de intermitente durante toda la pauta de administración.
En los procedimientos de la presente invención, los compuestos que se describen en la presente memoria en detalle pueden formar el principio activo, y habitualmente se administran mezclados con diluyentes, excipientes o vehículos farmacéuticos adecuados (denominados de forma colectiva materiales de "vehículo" en la presente memoria) que se seleccionan adecuadamente con respecto a la forma de administración que se pretenda, es decir comprimidos, cápsulas, elixires, jarabes y similares orales y de forma coherente con la práctica farmacéutica convencio-
nal.
Por ejemplo, para la administración oral en forma de un comprimido o cápsula, el componente activo del fármaco puede combinarse con un vehículo oral, no tóxico, farmacéuticamente aceptable, inerte tal como lactosa, almidón, sacarosa, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato cálcico, manitol, sorbitol y similares; para la administración oral en forma líquida, los componentes del fármaco oral pueden combinarse con cualquier vehículo oral, no tóxico, inerte, farmacéuticamente aceptable tal como etanol, glicerol, agua y similares. Además, cuando se desee o sea necesario, pueden incorporarse a la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes disgregantes y colorantes adecuados. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, tales como glucosa o \beta-lactosa, edulcorantes del maíz, gomas naturales y sintéticas tales como goma arábiga, tragacanto o alginato sódico, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes que se usan en estas formas farmacéuticas incluyen oleato sódico, estearato sódico, estearato magnésico, benzoato sódico, acetato sódico, cloruro sódico y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitación, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma xantana y
similares.
Los compuestos de la presente invención también pueden administrarse en forma de sistemas de administración en liposomas, tales como vesículas unilaminares, vesículas unilaminares grandes y vesículas multilaminares. Los liposomas pueden formarse a partir de una variedad de fosfolípidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidil-
colinas.
\newpage
Los compuestos de la presente invención también pueden administrarse mediante el uso de anticuerpos monoclonales que actúan como vehículos individuales a los que se acoplan las moléculas del compuesto. Los compuestos de la presente invención también pueden acoplarse a polímeros solubles que actúan de vehículos dirigibles para el fármaco. Dichos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenol, polihidroxietilaspartamida-fenol o poli(óxido de etileno)-polilisina sustituida con residuos de palmitoilo. Además, los compuestos de la presente invención pueden acoplarse a una clase de polímeros biodegradables de utilidad para lograr la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, ácido poliglucólico, copolímeros de ácido poliláctico y poliglucólico, poliepsilon caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloque anfipáticos de hidrogeles.
En los Esquemas y Ejemplos siguientes, los diversos símbolos y abreviaturas de los reactivos tienen los siguientes significados:
AcOH: ácido acético
BH_{3}\cdotDMS: Borano\cdotsulfóxido dimetílico
BOC(Boc): t-butoxicarbonilo
BOP: hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio
CBZ(Cbz): carbobenciloxi o benciloxicarbonilo
CDI: carbonildiimidazol
CH_{2}Cl_{2}: cloruro de metileno
CH_{3}CN: acetonitrilo
CHCl_{3}: cloroformo
DEAD: azodicarboxilato de dietilo
DIAD: azodicarboxilato de diisopropilo
DiBAH o DIBAL-H: hidruro de diisobutilaluminio
DIPEA: diisopropiletilamina
DMAP: 4-dimetilaminopiridina
DME: 1,2-dimetoxietano
DMF: N,N-dimetilformamida
DMSO: sulfóxido de dimetilo
DPFN: nitrato de 3,5-dimetil-1-pirazolilformamidina
EDC: 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida \cdot HCl
EtOAc: acetato de etilo
EtOH: etanol
HOAc: ácido acético
HOAT: 1-hidroxi-7-azabenzotriazol
HOBT: 1-hidroxibenzotriazol
HPLC: cromatografía de líquidos de alta resolución
IBCF: cloroformiato isobutílico
LDA: diisopropilamida de litio
MeOH: metanol
MNNG: 1,1,1-metil-3-nitro-1-nitrosoguanidina
NEt_{3}: Trietilamina
NMM: N-metilmorfolina
PCA-HCl: clorhidrato de pirazol carboxamida
Pd/C: catalizador de paladio sobre carbono activado
Ph: fenilo
pTSA: ácido p-toluenosulfónico
TEA: trietilamina
TFA: ácido trifluoroacético
THF: tetrahidrofurano
TLC: cromatografía en capa fina
TMEDA: N,N,N',N'-tetrametiletilendiamina
TMS: trimetilsililo
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Los compuestos novedosos de la presente invención pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos de los siguientes Esquemas de reacción y Ejemplos, o modificaciones de los mismos, usando materiales iniciales y reactivos fácilmente disponibles y, cuando sea apropiado procedimientos de síntesis convencionales. En estos procedimientos, también es posible usar variantes que ya son conocidas por las personas de experiencia ordinaria en la técnica de la síntesis orgánica, pero que no se mencionan en mayor detalle. Por ejemplo, la sustitución de 5-formil-2-metilpirimidina (1-6a) en el Esquema 1 por el aril-CHO sustituido de forma apropiada proporciona el compuesto correspondiente en el que el grupo arilo R^{7} es distinto de 2-metil-pirimidin-5-ilo. La resolución de la mezcla racémica de los ceto diésteres (R) y (S) 1-8 puede lograrse mediante cromatografía HPLC sobre un soporte sólido quiral, como columnas Chiralcel AD o Chiralcel OD. De este modo se aíslan los enantiómeros (R) y (S) individuales, tales como 1-8a y 1-8b, sustancialmente libres del otro enantiómero. Los productos resueltos finales 3(R) y 3(S), tales como 1-11 a y 1-11 b, se derivan de los precursores ceto diéster mediante una secuencia en tres pasos de hidrólisis, descarboxilación e hidrólisis.
Los siguientes Ejemplos son ilustrativos de los compuestos más preferidos de la presente invención. Sin embargo, no debe interpretarse como que forman el único género que se considera la invención. Los Ejemplos además ilustran los detalles de la preparación de los compuestos de la presente invención. Los expertos en la técnica fácilmente comprenderán que pueden usarse variaciones conocidas de las condiciones y procesos de los siguientes procedimientos de preparación para sintetizar estos compuestos. A no ser que se indique lo contrario, todas las operaciones se realizaron a temperatura ambiente y todas las temperaturas están en grados centígrados.
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(Esquema pasa a página siguiente)
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Esquema 1
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Esquema 1 (continuación)
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7 
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Ejemplo 1
(Referencia)
Ácido 3(S o R)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)nonanoico (1-11a)
Etapa A
Éster metílico del ácido 6-oxo-heptanoico (1-2)
A una mezcla en agitación rápida de éter dietílico (175 ml) y KOH al 40% (52 ml) a 0ºC se añadió MNNG (15,4 g, 105 mmol). La mezcla se agitó durante 10 minutos. La fase de éter se transfirió a una solución de ácido 6-oxo-heptanoico 1-1 (5,0 g, 34,68 mmol) y CH_{2}Cl_{2} a 0ºC. La solución se purgó con argón durante 130 minutos y después se concentró. La cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc al 30% a 50%/hexanos) proporcionó el éster 1-2 en forma de un aceite transparente.
Rf en la TLC = 0,88 (gel de sílice, EtOAc).
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,67 (s, 3H), 2,46 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,62 (m, 4H).
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Etapa B
Éster metílico del ácido 5-[1,8]-naftiridin-2-il-pentanoico (1-4)
Una mezcla de 1-2 (1,4 g, 9,04 mmol), 1-3, 2-amino-3-formilpiridina (552 mg, 4,52 mmol) (para la preparación, véase: J. Org. Chem., 1983, 48, 3401), y prolina (260 mg, 2,26 mmol) en etanol absoluto (23 ml) se calentó a reflujo durante 18 h. Tras la eliminación por evaporación del disolvente, el residuo se sometió a cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo al 80%/hexano, después acetato de etilo) proporcionando el éster 1-4 en forma de un sólido blanco.
Rf en la TLC = 0,38 (gel de sílice, EtOAc).
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,08 (m, 1H), 8,16 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,39 (d, J = 8,3 Hz, 1 H), 3,66 (s, 3H), 3,08 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,39 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,78 (m, 2H).
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Etapa C
Éster metílico del ácido 5-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)pentanoico (1-5)
Una mezcla de 1-4 (630 mg, 2,58 mmol) y Pd al 10%/carbono (95 mg) en EtOH (25 ml) se agitó con un balón de hidrógeno durante 72 h. Tras la filtración y eliminación por evaporación del disolvente, el residuo se sometió a cromatografía (gel de sílice, acetato de etilo al 70%/hexanos) proporcionando 1-5 en forma de un aceite incoloro.
Rf en la TLC = 0,58 (gel de sílice, EtOAc).
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,05 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,72 (s, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,40 (m, 2H), 2,69 (t, J = 6,3 Hz, 2H), 2,53 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,66 (m, 4H).
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Etapa D
Éster dimetílico del ácido 2-oxo-6-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)hexilfosfónico (1-6)
Una solución de metilfosfonato dimetílico (13,20 g, 106,5 mmol) en THF anhidro (165 ml) se enfrió a -78º y se trató gota a gota con n-BuLi 2,5 M (42,3 ml). Después de agitar a -78º durante 45 minutos, se añadió una solución del éster 1-5 (6,6 g, 26,6 mmol) en THF (35 ml) gota a gota y la solución resultante se agitó durante 30 minutos a -78º, se inactivó con NH_{4}Cl saturado (100 ml), después se extrajo con acetato de etilo (3 X 150 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron, y se concentraron proporcionando un aceite amarillo. La cromatografía en gel de sílice (MeOH al 5%/CH_{2}Cl_{2}) proporcionó 1-6 en forma de un aceite amarillo.
Rf = (gel de sílice, MeOH al 5%/CH_{2}Cl_{2}) = 0,20.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,05 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,34 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 4,80 (br, s, 1H), 3,81 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,4 (m, 2H), 3,08 (d, J = 22,7 Hz), 2,7-2,5 (m, 6 H), 1,91 (m, 2H), 1,68 (m, 4H).
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Etapa E
1-(2-Metilpirimidin-5-il)-7-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-hept-1-en-3-ona (1-7)
A una solución de 1-6 (5,5 g, 16,2 mmol), 5-formil-2-metilpirimidina (1-6a, 1,8 g, 14,7 mmol; para la preparación, véase J. Heterociclic Chem., 28, 1281 (1991)) en 40 ml de DMF se añadió K_{2}CO_{5} (4,07 g, 32 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 horas, y se concentró dando una pasta. El residuo se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo, y se secó sobre sulfato de magnesio. Tras la concentración, el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (70 cloroformo/25 acetato de etilo/5 metanol) proporcionando 1-7 en forma de un sólido blanco.
Rf = 0,20 (gel de sílice, 70 cloroformo/20 acetato de etilo/10 metanol).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,80 (s, 2H), 7,44 (d, 1 H, J = 16 Hz), 7,05 (d, 1 H, J = 7 Hz), 6,81 (d, 1 H, J = 16 Hz), 6,35 (d, 1 H, J = 7 Hz), 4,72 (br s, 1H), 3,39 (m, 2H), 2,69 (s, 3H), 2,64 (m, 4H), 2,58 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,74 (m, 4H).
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Etapa F
Éster dietílico del ácido 2-[1(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-3-oxo-7-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)heptil]malónico (1-8a)
A una solución de 1-7 (1,0 g, 2,97 mmol) y malonato dietílico (0,717 ml, 4,5 mmol) en etanol (20 ml) y THF (20 ml) se añadió etóxido sódico (0,1 ml de una solución al 30% p/pen etanol). Después de 4 horas, la mezcla (1-8) se concentró, y el residuo se purificó en una columna Chiralcel AD de 5 x 50 cm (caudal = 80 ml/minuto, A:B = 30:70) (A = dietilamina al 0,1%/hexano, B = 2-propanol). El producto 1-8a eluyó a los 15 minutos; su enantiómero, 1-8b, eluyó a los 26 minutos.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl3) \delta 8,53 (s, 2H), 7,02 (d, 1 H, J = 7 Hz), 6,28 (d, 1 H, J = 7 Hz), 4,07 (br s, 1 H), 4,18 (m, 2H), 4,02 (m, 2H), 3,92 (m, 1 H), 3,72 (m, 2H), 3,39 (m, 2H), 2,94 (m, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,42 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,89 (m, 2H), 1,60 (m, 4H), 1,26 (m. 4H), 1,19 (t, 3H, J = 3 Hz).
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Etapa G
Éster etílico del ácido 3(S o R)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)nonanoico (1-10a)
A una solución de 1-8a (0,530 g, 1,07 mmol) en etanol (5 ml) se añadió NaOH (1,12 ml de una solución 1 N en agua, 1,12 mmol). Después de agitar a 40ºC durante 30 minutos, la mezcla se trató con HCl (1,12 ml de una solución 1 N en agua, 1,12 mmol) y se concentró. El residuo se suspendió en tolueno (20 ml) y se calentó a reflujo. Después de 1 h, la evaporación de los disolventes proporcionó 1-10a en forma de un aceite amarillo.
Rf = 0,32 (gel de sílice, 70 cloroformo/20 acetato de etilo/10 metanol).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,54 (s, 2H), 7,04 (d, 1 H, J = 7 Hz), 6,31 (d, 1 H, J = 7 Hz), 4,86 (br s, 1 H), 4,04 (q, 2H, J = 3 Hz), 3,63 (m, 1 H), 3,40 (m, 2H), 2,94-2,48 (m, 9H), 2,37 (m, 4H), 1,89 (m, 2H), 1,57 (m, 4H), 1,19 (t, 3H, J = 3 Hz).
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Etapa H
Ácido 3(S o R)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)nonanoico (1-11a)
A una solución de 1-10a (0,15 g, 0,353 mmol) en etanol (1 ml) se añadió NaOH (0,39 ml de una solución 1 N en agua, 0,39 mmol). Después de 30 minutos, la mezcla se concentró, y el residuo se cromatografió en gel de sílice (20:10:1:1 a 10:10:1:1 acetato de etilo/etanol/NH_{4}OH/agua) proporcionando 1-11a en forma de un sólido blanco.
Rf = 0,21 (gel de sílice, 10:10:1:1 acetato de etilo/etanol/NH_{4}OH/agua).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CH_{3}OD) \delta 8,62 (s, 2H), 7,43 (d, 1 H, J = 7 Hz), 3,68 (m, 1 H), 3,43 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 2,80 (m, 3H), 2,59 (m, 10H), 1,91 (m, 2H), 1,60 (m, 3H).
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Esquema 11
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8
9
Ejemplo 16
Ácido 3(R) y 3(S)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico (11-11a y 11-11b)
Etapa A
Éster etílico del ácido 5-(5-bromopiridin-2-il)pentanoico (11-2)
A una solución en agitación de ácido etil-1-pentenoico (10 g, 78 mmol) en THF desgasificado (80 ml) a 0ºC se añadió gota a gota una solución de 9-BBN (187 ml de 0,5 M en THF, 94 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente produciendo 11-1. Se añadieron K_{2}CO_{3} (18,4 g, 133 mmol) y 2,5-dibromopiridina (18,5 g, 78 mmol) seguidos de una suspensión de Pd(OAc)_{2} (2,0 g, 8,9 mmol) premezclada y madurada (70ºC durante 30 minutos), y DPPF (5,4 g, 9,8 mmol) en DMF desgasificado (80 ml). La mezcla resultante se agitó durante 18 horas a 70ºC, se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró. Al residuo en agitación disuelto en THF (400 ml) se añadió agua (150 ml) y NaHCO_{3} (33 g) y después de 10 minutos, NaBO_{3}\cdotH_{2}O (48 g). Después de agitar vigorosamente durante 30 minutos, la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró a un aceite. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 10-20%/hexano) proporcionando 11-2 en forma de un aceite incoloro.
Rf en la TLC = 0,75 (gel de sílice, EtOAc al 40%/hexano).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,57 (s, 1H), 7,70 (m, 1H), 7,05 (d, 1H, J = 8 Hz), 4,15 (q, 2H, J = 6 Hz), 2,77 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,34 (t, 2H, J = 7 Hz), 1,7 (m, 4H), 1,26 (t, 3H, J = 6 Hz).
Etapa B
2-But-3-enilisoindol-1,3-diona (11-5)
A una solución en agitación de 4-bromo-1-buteno (11-3, 20 g, 148 mmol) en DMF (150 ml) se añadió ftalimida potásica (11-4, 25 g, 133 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 horas a 70ºC. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con éter, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró proporcionando 11-5 en forma de un sólido blanco.
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,85 (m, 2H), 7,72 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,08 (m, 2H), 3,77 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,44 (m, 2H).
Etapa C
Éster etílico del ácido 5-{5-[4-(1,3-dioxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)butil]piridin-2-il}pentanoico (11-6)
A una solución en agitación de 11-5 (4,23 g, 21 mmol) en THF desgasificado (20 ml) a 0ºC se añadió gota a gota una solución de 9-BBN (50,4 ml de 0,5 M en THF, 25,2 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. Se añadieron K_{2}CO_{3} (5,0 g, 35,8 mmol) y 11-2 (5,0 g, 17,4 mmol) seguido de una suspensión de Pd(OAc)_{2} (0,54 g, 2,4 mmol) premezclada y madurada (70ºC durante 30 minutos) y DPPF (1,45 g, 2,6 mmol) en DMF desgasificada (20 ml). La mezcla resultante se agitó durante 18 horas a 70ºC, se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró. Al residuo en agitación disuelto en THF (200 ml) se añadió agua (75 ml) y NaHCO_{3} (16,5 g) y después de 10 minutos, NaBO_{3}\cdotH_{2}O (24 g). Después de agitar vigorosamente durante 30 minutos, la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró a un aceite. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (EtOAc al 20-40%/hexano) proporcionando 11-6 en forma de un aceite amarillo.
Rf en la TLC = 0,31 (gel de sílice, EtOAc al 50%/hexano).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,37 (s, 1H), 7,84 (m, 2H), 7,75 (m, 2H), 7,40 (m, 1 H), 7,05 (m, 1 H), 4,12 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,71 (m, 2H), 2,78 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,61 (t, 2H, J = 7 Hz), 2,33 (t, 2H,J = 7 Hz), 1,64 (m, 8H), 1,23 (t, 3H, J = 6 Hz).
Etapa D
Metilamida del ácido 5-[5-(4-aminobutil)piridin-2-il]pentanoico (11-7)
Una mezcla de 11-6 (45 g, 110 mmol) y una solución saturada de metilamina en metanol (300 ml) en un tubo sellado se calentó a 70ºC durante 12 horas. La mezcla se enfrió y se concentró a un aceite. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) proporcionando 11-7 en forma de un aceite amarillo.
Rf en la TLC = 0,16 (gel de sílice, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,32 (s, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 2,74 (m, 7H), 2,59 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,21 (t, 2H, J = 6 Hz), 1,69 (m, 6H), 1,48 (m, 2H).
Etapa E
Metilamida del ácido 5-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)pentanoico (11-8)
Una mezcla de 11-7 (24 g, 91,2 mmol) y NaH (10,9 g de una dispersión al 60% en peso en aceite mineral, 273 mmol) en xilenos (500 ml) se purgó con argón durante 30 minutos y después se calentó a reflujo durante 72 horas. La mezcla se enfrió, se inactivó con etanol, se diluyó con carbonato potásico acuoso al 10% y se extrajo con acetato de etilo. Las fases orgánicas se secaron sobre MgSO_{4}, y se concentraron a un aceite El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH/H_{2}O) proporcionando 11-8 en forma de un sólido blanco.
Rf en la TLC = 0,15 (gel de sílice, 70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,24 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,53 (d, 1H, J = 7 Hz), 5,43 (br s, 1H), 4,62 (br s, 1H), 3,12 (m, 2H), 2,79 (d, 3H, J = 5 Hz), 2,63 (m, 4H), 2,18 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 1,68 (m, 6 Hz).
Etapa F
Éster etílico del ácido 5-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)pentanoico (11-9)
Una mezcla de 11-8 (3 g, 11,5 mmol) y HCl 6 M (100 ml) en un tubo sellado se calentó a 70ºC durante 12 horas. La mezcla se enfrió y se concentró a un aceite. El residuo se azeotropizó de etanol (50 ml) dos veces, después se disolvió en HCl 4 M en etanol (100 ml) y se calentó a 70ºC durante 1 hora. La mezcla se enfrió y se concentró a un aceite. El residuo se diluyó con acetato de etilo, se lavó con carbonato potásico acuoso al 10% y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró proporcionando 11-9 en forma de un aceite marrón.
Rf en la TLC = 0,44 (gel de sílice, 70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,22 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,53 (d, 1H, J = 7 Hz), 4,63 (br s, 1H), 4,11 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,12 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,62 (t, 2H, J = 6 Hz), 2,33 (t, 2H, J = 6 HZ), 1,70 (m, 2H), 1,63 (m, 6H), 1,27 (t, 3H, J = 7 Hz).
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Etapa G
Ácido 3(R) y 3(S)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico (11-11a y 11-11b)
Utilizando los procedimientos para la conversión de 1-5 en 1-11a y 1-11b, 11-9 se convirtió en 11-11a y 11-11b mediante 11-10. La resolución de los enantiómeros se realize mediante cromatografía quiral del intermedio ceto diéster que corresponde a 1-8 en una columna Chiralcel AD (10 cm x 50 cm) usando 70% de A/30% de B (A = 2-propanol; B = dietilamina al 0,1% en hexanos) a un caudal de 250 ml/minuto.
Rf en la TLC = 0,21 (gel de sílice, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,63 (s, 2H), 7,42 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,55 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,64 (m, 1H), 3,31 (m, 2H), 3,05 (m, 1 H), 2,87 (m, 1 H), 2,77 (m, 2H), 2,58 (m, 9H), 1,84 (m, 4H), 1,57 (m, 4H).
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Esquema 12
10 
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Ejemplo 17
Ácido 3(R) y 3(S)-(2-metoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico (12-2a y 12-2b)
Utilizando los procedimientos para la conversión de 1-5 en 1-11a y 1-11b, 11-9 y 2-metoxi-pirimidin-5-carbaldehído (12-1, para la preparación, véase J. Heterocicl. Chem. (1991), 28, 1281) se convirtieron en 12-2a y 12-2b. La resolución de los enantiómeros se realizó mediante cromatografía quiral del intermedio ceto diéster que correspondía a 1-8 en una columna Chiralcel AD (10 cm x 50 cm) usando 70% de A/30% de B (A = 2-propanol; B = dietilamina al 0,1% en hexanos) a un caudal de 250 ml/minuto.
Rf en la TLC = 0,21 (gel de sílice, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,48 (s, 2H), 7,42 (d, 1H; J = 7 Hz), 6,56 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,94 (s, 3H), 3,62 (m, 1H), 3,29 (m, 2H), 2,98 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 2,79 (m, 2H), 2,58 (m, 2H), 1,84 (m, 4H), 1,57 (m, 4H).
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Esquema 17
11 
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Ejemplo 23
Ácido 3(R) y 3(S)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico (17-2a y 17-2b)
Utilizando los procedimientos para la conversión de 1-6 en 1-11a y 1-11b, 11-10 y 2-etoxi-pirimidin-5-carbaldehído se convirtieron en 17-2a y 17-2b. La resolución de los enantiómeros se realizó mediante cromatografía quiral del intermedio ceto diéster que correspondía a 1-8.
Rf en la TLC = 0,24 (gel de sílice, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
RMN de ^{1}H (400 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,48 (s, 2H), 7,43 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,55 (d, 1 H, J = 7 Hz), 4,38 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,63 (m, 1 H), 2,98 (m, 1 H), 2,79 (m, 3H), 2,55 (m, 6H), 1,84 (m, 4H), 1,57 (m, 4H), 1,38 (t, 3H, J = 7 Hz).
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Esquema A
Síntesis de Radioligando para el ensayo de SPAV3 
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Esquema A (continuación)
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Esquema A (continuación)
14
15
N-(4-Yodofenilsulfonilamino)-L-asparragina (A-2)
A una solución en agitación del ácido A-1 (4,39 g, 33,2 mmol), NaOH (1,49 g, 37,2 mmol), dioxano (30 ml) y H_{2}O (30 ml) a 0ºC se añadió cloruro de pipsilo (10,34 g, 34,2 mmol). Después de \sim5 minutos, se añadió NaOH (1,49, 37,2 mmol) disuelto en 15 ml H_{2}O, y después se retiró el baño refrigerante. Después de 2,0 horas, la mezcla de reacción se concentró. El residuo se disolvió en H_{2}O (300 ml) y después se lavó con EtOAc. La porción acuosa se enfrió a 0ºC y después se acidificó con HCl concentrado. Se recolectó el sólido y después se lavó con Et_{2}O proporcionando el ácido A-2 en forma de un sólido blanco. RMN de ^{1}H (300 MHz, D_{2}0) \delta 7,86 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8 Hz) 3,70 (m, 1H), 2,39 (m, 2H).
2(S)-(4-Yodofenilsulfonilamino)-\beta-alanina (A-3)
A una solución en agitación de NaOH (7,14 g, 181,8 mmol) y H_{2}O (40 ml) a 0ºC se añadió BR_{2} (1,30 ml, 24,9 mmol) gota a gota durante un periodo de diez minutos. Después de \sim5 minutos, el ácido A-2 (9,9 g, 24,9 mmol), NaOH (2,00 g, 49,8 mmol) y H_{2}O (35 ml) se combinaron, se enfriaron a 0ºC y después se añadieron en una única porción a la reacción. Después de agitar durante 20 minutos a 0ºC, la reacción se calentó a 90ºC durante 30 minutos y después se volvió a enfriar a 0ºC. El pH se ajustó a \sim7 mediante la adición gota a gota de HCl concentrado. Se recolectó el sólido, se lavó con EtOAc y después se secó a vacío proporcionando el ácido A-3 en forma de un sólido blanco.
RMN de ^{1}H (300 MHz, D_{2}0) \delta 8,02 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8 Hz), 4,36 (m, 1H), 3,51 (dd, 1 H,J = 5 Hz, 13 Hz), 3,21 (m, 1 H).
Etil-2-(5)-(4-yodofenilsulfonilamino)-\beta-alanina-clorhidrato (A-4)
Se burbujeó gas HCl rápidamente a través de una suspensión del ácido A-3 (4,0 g, 10,81 mmol) en EtOH (50 ml) a 0ºC durante 10 minutos. Se retiró el baño refrigerante y la reacción se calentó a 60ºC. Después de 18 h, la reacción se concentró proporcionando el éster A-4 en forma de un sólido blanco.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,98 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8 Hz), 4,25 (q, 1H, J = 5 Hz), 3,92 (m, 2H), 3,33 (m, 1H), 3,06 (m, 1H), 1,01 (t, 3H, J = 7 Hz).
Etil 4-[2-(2-aminopiridin-6-il)etil]benzoato (A-5a)
Una mezcla del éster A-5 (700 mg, 2,63 mmol), (para la preparación, véase: Esquema 29 de la publicación de la solicitud de patente internacional PCT n.º WO 95/32710, publicada el 7 de diciembre de 1995) Pd al 10%/C (350 mg) y EtOH se agitaron a 101,33 KPa (1 atm) de H_{2}. Después de 20 h, la reacción se filtró a través de una capa de celite y después se concentró proporcionando el éster A-5a en forma de un aceite marrón. Rf en la TLC = 0,23 (gel de sílice, EtOAc al 40%/hexanos).
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,95 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,26 (m, 3H), 6,43 (d, 1 H, J = 7 Hz), 6,35 (d, 1 H, J = 8 Hz), 4,37 (m, 4H), 3,05 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 1,39 (t, 3H, J = 7 Hz).
Clorhidrato del ácido 4-[2-(2-aminopiridin-6-il)etil]benzoico (A-6)
Una suspensión del éster A-5a (625 mg, 2,31 mmol) en HCl 6 N (12 ml) se calentó a 60ºC. Después de \sim 20 h, la reacción se concentró proporcionando el ácido A-6 en forma de un sólido tostado.
RMN de ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,96 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,80 (m, 1 H), 7,33 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,84 (d, 1 H, J = 9 Hz), 6,69 (d, 1 H, J = 7 Hz), 3,09 (m, 4H).
Etil 4-[2-(2-Aminopiridin-6-il)etil]benzoil-2(S)-(4-yodofenilsulfonilamino)-\beta-alanina (A-7)
Una solución del ácido 15-6 (400 mg, 1,43 mmol), la amina A-4 (686 mg, 1,57 mmol), EDC (358 mg, 1,86 mmol), HOBT (252 mg, 1,86 mmol), NMM (632 \mul, 5,72 mmol) en DMF (10 ml) se agitó durante \sim20 horas. La reacción se diluyó con EtOAc y después se lavó con NaHCO_{3} saturado, salmuera, se secó (MgSO_{4}) y se concentró. La cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, EtOAc después isopropanol al 5%/EtOAc) proporcionó la amida A-7 en forma de un sólido blanco.
Rf en la TLC = 0,4 (gel de sílice, isopropanol al 10%/EtOAc)
RMN de ^{1}H (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 7,79 (d, 2H, J = 9 Hz) 7,61 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,52 (d, 2H,J = 9 Hz), 7,29 (m, 1H), 7,27 (d, 2H, J = 8 Hz), 4,20 (m, 1 H), 3,95 (q, 2H, J = 7 Hz), 3,66 (dd, 1 H. J = 6 Hz, 14 Hz), 3,49 (dd, 1 H, J = 8 Hz, 13 Hz), 3,01 (m, 2H), 2,86 (m, 2H), 1,08 (t, 3H, J = 7 Hz).
4-[2-(2-Aminopiridin-6-il)etil]benzoil-2(S)-(4-yodofenilsulfonilamino)-\beta-alanina (A-8)
Una solución del éster A-7 (200 mg, 0,3213 mmol) y HCl 6 N (30 ml) se calentó a 60ºC. Después de \sim20 h, la mezcla de reacción se concentró. La cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, 20:20:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) proporcionó el ácido A-8 en forma de un sólido blanco.
Rf en la TLC = 0,45 (gel de sílice, 20:20:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O)
RMN de ^{1}H (400 MHz, DMSO) \delta 8,40 (m, 1H), 8,14 (bs, 1H), 7,81 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,62 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,48 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,27 (m, 3H), 6,34 (d, 1 H, J = 7 Hz), 6,25 (d, 1H, J = 8 Hz), 5,85 (bs, 2H), 3,89 (bs, 1 H), 3,35 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,79 (m, 2H).
4-[2-(2-Aminopiridin-6-il)etil)benzoil-2(S)-(4-trimetilestannilfenilsulfonil-amino-\beta-alanina (A-9)
Una solución del yoduro A-8 (70 mg, 0,1178 mmol), [(CH_{3})_{3}Sn]_{2} (49 \mul, 0,2356 mmol), Pd(PPh_{3})_{4} (5 mg) y dioxano (7 ml) se calentó a 90ºC. Después de 2 h, la reacción se concentró y después se purificó mediante HPLC preparativa (Delta-Pak C_{18} 15 \muM 100 A^{-}, 40 x 100 mm; H_{2}O/CH_{3}CN 95:5 después 5:95) proporcionando la sal trifluoroacetato. La sal se suspendió en H_{2}O (10 ml), se trató con NH_{4}OH (5 gotas) y después se liofilizó proporcionando la amida A-9 en forma de un sólido blanco.
RMN de ^{1}H (400 MHz, DMSO) \delta 8,40 (m, 1 H), 8,18 (d, 1 H, J = 8 Hz), 7,67 (m, 5H), 7,56 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,29 (d, 2H, J = 8 Hz), 6,95-7,52 (m, 2H), 6,45 (bs, 2H), 4,00 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,33 (m, 1H), 2,97 (m, 2H), 2,86 (m, 2H).
4-[2-(2-Aminopiridin-6-il)etil]benzoil-2(S)-4-^{125}yodo-fenilsulfonilamino-B-alanina (A-10)
Una Iodobead (Pierce) se añadió a un vial de embalaje de 5 mCi de Na^{125}I (Amersham, IMS30) y se agitó durante cinco minutos a temperatura ambiente. Se preparó una solución de 0,1 mg de A-9 en 0,05 ml de H_{2}SO al 10%/MeOH y se añadió inmediatamente al vial de ^{125}I/Iodobead. Después de agitar durante tres minutos a temperatura ambiente, se añadió aproximadamente 0,04-0,05 ml de NH_{4}OH de forma que la mezcla de reacción estaba a pH 6-7. Toda la mezcla de reacción se inyectó en la HPLC para su purificación [columna Vydac de péptido-proteína C-18, 4,6 x 250 mm, gradiente lineal de acetonitrilo al 10% (TFA al 0,1%:H_{2}O (TFA al 0,1%) a acetonitrilo al 90% (TFA al 0,1%):H_{2}O (TFA al 0,1%) durante 30 minutos, 1 ml/minuto]. El tiempo de retención de A-10 es 17 minutos en estas condiciones. Las fracciones que contenían la mayoría de la radiactividad se juntaron, se liofilizaron y se diluyeron con etanol proporcionando aproximadamente 1 mCi de A-10, que coeluyó durante el análisis por HPLC con una muestra auténtica de A-8.
Esquema B
Síntesis de radioligando para el ensayo de SPA V5
16
Éster etílico del ácido 2(S)-(4-yodobencenosulfonilamino)-3-[4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-etil]benzolamino}propiónico (B-2)
Una mezcla de B-1 (0,23 g, 0,72 mmol; para la preparación véase la patente de Estados Unidos n.º 5741.796), A-4 (0,343 g, 0,792 mmol), EDC (0,179 g; 0,93 mmol), HOBT (0,126 g, 0,93 mmol), NMM (0,316 ml, 2,86 mmol) en acetonitrilo (3 ml) y (3 ml) se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente después se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua, NaHCO_{3} acuoso saturado y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (70:25:5 CHCl:/EtOAc/MeOH) proporcionando B-2 en forma de un sólido blanco:
Rf en la TLC = 0,22 (gel de sílice, 70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
RMN de ^{1}H (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,79 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,54 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,27 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,04 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,60 (m, 1H), 6,29 (d, 1H, J = 7 Hz), 4,83 (br s, 1H), 4,09 (m, 3H), 3,84 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,42 (m, 2H), 3,01 (m, 4H), 2,86 (m, 4H), 2,69 (t, 2H, J = 6 Hz), 1,88 (m, 2H).
Ácido 2(S)-(4-Yodobencenosulfonilamino)-3-{4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)etil]benzoilamino}propio- nico (B-3)
Una mezcla de B-2 (0,38 g, 0,573 mmol) y HCl 6 N (50 ml) se agitó durante 14 horas a 60ºC. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió en gel de sílice (25:10:1:1 a 15:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) proporcionando B-3 en forma de un sólido blanco.
Rf en la TLC = 0,43 (gel de sílice, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
RMN de ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,42 (m, 1H), 7,79 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,63 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,44 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,27 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,10 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,58 (brs, 1H), 6,32 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,96 (m, 1H), 3,51 (m, 1H), 3,30 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 2,78 (m, 2H), 2,62 (m, 2H), 1,77 (m, 2H).
EMAR: Para C_{26}H_{27}IN_{4}O_{5}S, esperada 635,0818, hallada 635,0831.
Ácido 3-{4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)etil]benzoilamino}-2(S)-(4-trimetilestannanil-bencenosulfonilamino)propionico (B-4)
Una mezcla de B-3 (0,10 g, 0,16 mmol), hexametildiestannano (0,065 ml, 0,32 mmol), Pd(PPh_{3})4, y dioxano (10 ml) se agitó durante una hora a 90ºC. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró y el residuo se cromatografió en gel de sílice (50:10:1:1 a 25:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) proporcionando B-4 en forma de un sólido blanco. TLC Rt = 0,48 (gel de sílice, 15:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
RMN de ^{1}H (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,38 (m, 1H), 8,14 (m, 1H), 7,63 (m, 4H), 7,28 (d, 2H, J = 8 Hz), 7,08 (d, 1H, J = 7 Hz), 6,50 (br s, 1H), 6,28 (d, 1H, J = 7 Hz), 3,96 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,31 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 2,78 (m, 2H), 2,62 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 0,28 (s, 9H).
Espectro de masas de alta resolución: para C_{29}H_{36}N_{4}O_{5}SSn, esperada 665,1533 (^{112}Sn) y 673,1507 (^{120}Sn), hallada 665,1510 y 673,1505.
Ácido 2(S)-4-^{125}Yodobencenosulfonilamino)-3-14-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)etil]benzoilamino}pro- pionico (B-5)
Se añadió una barra de agitación, metanol (0,05 ml) y una Iodobead (Pierce) a un vial de transporte de Na^{125}I (10 mCi, Amersham, IMS300) y se agitó durante cinco minutos a temperatura ambiente. Se preparó una solución de B-4 (\sim0,1 mg) en metanol (0,04 ml) y se añadió una porción (0,02 ml) a una mezcla de H_{2}SO_{4} (0,005 ml) en metanol (0,025 ml), y esta solución se añadió inmediatamente al vial de Na^{12S}I/Iodobead. Después de agitar durante dos minutos a temperatura ambiente, la reacción se inactivó con NH_{4}OH (0,04-0,05 ml) y toda la mezcla de reacción se inyecto en la HPLC para su purificación [columna Vydac de péptido-proteína C-18, 4,6 x 250 mm, gradiente lineal de acetonitrilo al 10% (TFA al 0,1%:H_{2}O (TFA al 0,1%) a acetonitrilo al 90% (TFA al 0,1%):H_{2}O (TFA al 0,1%) durante 20 minutos, 1 ml/minuto]. El tiempo de retención de B-16 es 16 minutos en estas condiciones. Las fracciones que contenían la mayoría de la radiactividad se juntaron, se liofilizaron y se diluyeron con etanol proporcionando aproximadamente 1 mCi de B-5, que coeluyó durante el análisis por HPLC con una muestra auténtica de B-3.
Instrumental: Las HPLC analíticas y preparativas se realizaron usando un sistema de administración de disolventes múltiples Waters 600E Powerline con cabezales de 0,1 ml con un inyector Rheodyne 7125 y un detector de fotodiodos en serie Waters 990 con un colector de microfracciones Gilson FC203. Para las HPLC analíticas y preparativas, se usó una columna Vydac de péptido-proteína C-18, 4,6 x 250 mm con una columna de protección modular C-18 Brownlee. El acetonitrilo que se usó para los análisis por HPLC fue Fisher de calidad Optima. El radiodetector de HPLC utilizado fue un detector Beckman 170 Rc/dioisótopo. Para las HPLC analíticas y preparativas se usó una columna Vydac de péptido-proteína C-18, 3,9 x 250 mm. Las soluciones con radioactividad se concentraron usando una centrifugadora Speedvac a vacío. Las curvas de calibrado y las concentraciones químicas se determinaron usando un espectrofotómetro de diodos UV/Vis en serie Hewlett Packard Modelo 8452A. Las radioactividades de las muestras se determinaron en un contador \gamma Packard A5530.
A continuación se describen los procedimientos de las pruebas que se emplearon para medir la unión de \alphav\beta3 y \alphav\beta5 y la actividad de inhibición de la resorción ósea de los compuestos de la presente invención.
Ensayo de resorción ósea-fositas
Cuando los osteoclastos se aplican en la resorción ósea, pueden provocar la formación de fositas en la superficie del hueso sobre la que actúan. Por lo tanto, cuando se analizan los compuestos para determinar su capacidad de inhibir los osteoclastos, es de utilidad medir la capacidad de los osteoclastos de excavar estas fositas de resorción cuando está presente el compuesto inhibidor.
Se cortan secciones consecutivas de 200 micrómetros de grueso de un cilindro de 6 mm de diáfisis de fémur bovino con una sierra de diamante a baja velocidad (Isomet, Beuler, Ltd., Lake Bluff, IL). Los cortes de hueso se juntan, se introducen en una solución de etanol al 10% y se refrigeran hasta que se vayan a utilizar.
Antes del experimento, los cortes de hueso bovino se someten a ultrasonidos dos veces, 20 minutos cada una en H_{2}O. Los cortes limpios se introducen en placas de 96 pocillos de tal forma que haya disponibles dos carriles de control y un carril para cada dosis de fármaco. Cada carril representa o cultivos por triplicado o por cuadruplicado. Los cortes de hueso en placas de 96 pocillos se esterilizan mediante radiación UV. Antes de incubar con osteoclastos, los cortes de hueso se hidratan mediante la adición de 0,1 ml de \alphaMEM, a pH 6,9 que contiene suero bovino fetal al 5% y penicilina/estreptomicina al 1%. Los huesos largos de conejos de 7-14 días de edad (conejo blanco de Nueva Zelanda) se diseccionan, se limpian de tejidos blandos y se introducen en \alphaMEM que contiene HEPES 20 mM. Los huesos se cortan usando tijeras hasta que los trozos son < 1 mm y se transfieren a un tubo de 50 ml en un volumen de 25 ml. El tubo se agita lentamente a mano durante 60 ciclos, el tejido se sedimenta durante 1 minuto y el sobrenadante se desecha. Se añaden otros 25 ml de medio al tejido y se vuelve a agitar. El segundo sobrenadante se combina con el primero. Se cuenta el número de células excluyendo los eritrocitos (habitualmente - 2 x 10^{7} células/ml). Se prepara una suspensión celular formada por 5 x 10^{6}/ml en \alphaMEM que contiene suero bovino fetal al 5%, 1,25 (OH)_{2}D_{3} 10 nM y penicilina-estreptomicina. Se añaden alícuotas de 200 ml a los cortes de hueso bovino (200 mm x 6 mm) y se incuban durante 2 horas a 37ºC en una atmósfera humidificada con CO_{2} al 5%. El medio se elimina suavemente con una micropipeta y se añade medio reciente que contiene los compuestos de prueba. Los cultivos se incuban durante 48 horas y se ensayan para determinar la cantidad de c-telopéptido (fragmentos de la cadena al del colágeno de tipo I) mediante Crosslaps para el medio de cultivo (Herlev, Dinamarca).
Los cortes de hueso bovino se exponen a los osteoclastos durante 20-24 horas y se procesan para su tinción. El medio de cultivo de los tejidos se elimina de cada corte de hueso. Cada pocillo se lava con 200 ml de H_{2}O, y los cortes de hueso después se fijan durante 20 minutos en glutaraldehído al 2,5%, cacodilato 0,1 M, a pH 7,4. Después de la fijación, se eliminan todos los restos celulares sobrantes sometiendo a ultrasonidos durante 2 minutos en presencia de NH_{4}OH 0,25 M seguido de ultrasonidos 2 veces durante 15 minutos en H_{2}O. Los cortes de hueso se tiñen inmediatamente durante 6-8 minutos con toluidina azul filtrada al 1% y borax al 1%.
Después de que se han secado los cortes de hueso, se cuentan las fositas de resorción en los cortes de prueba y de control. Las fositas de resorción se observan en un microscopio de fluorescencia Microphot Fx (Nikon) usando filtros polarizantes Nikon IGS. Los resultados de las dosis de prueba se comparan con los controles y se determinan los valores de CI_{50} resultantes para cada compuesto analizado.
La idoneidad de la extrapolación de datos de este ensayo a estados de enfermedad en mamíferos (incluido el ser humano) viene refrendada por las enseñanzas que se encuentran en Sato, M., y cols., Journal of Bone and Mineral Research, Vol. 5, n.º 1, páginas 31-54 (1990), que se incorpora a la presente memoria por referencia en su totalidad). Este artículo enseña que se han utilizado ciertos bisfosfonatos clínicamente y parecen ser eficaces en el tratamiento de la enfermedad de Paget, hipercalcemia del cáncer, lesiones osteolíticas producidas por metástasis óseas y pérdida ósea debida a la inmovilización o al déficit de hormonas sexuales. Estos mismos bisfosfonatos se analizan después en el ensayo de fositas de resorción descrito anteriormente para confirmar la correlación entre su utilidad conocida y un resultado positivo en el ensayo.
Ensayo de EIB
Duong y cols., J. Bone Miner. Res., 8: S378 (1993), describe un sistema para la expresión de integrina \alphav\beta3 humana. Se ha sugerido que la integrina estimula la unión de los osteoclastos a la matriz ósea, dado que los anticuerpos contra la integrina o las moléculas que contienen RGD, tales como equistatina (patente europea 382.451), pueden bloquear la resorción ósea de forma eficaz.
Mezcla de reacción:
1. 175 \mul de tampón TBS (Tris-HCl 50 mM a pH 7,2, NaCl 150 mM, BSA al 1%, CaCl_{2} 1 mM, MgCl_{2} 1 mM).
2. 25 ml de extracto celular (diluido con tampón de octilglucósido 100 mM proporcionando 2000 cpm/25 \mul).
3. ^{125}I-Equistatina (25 \mul/50.000 cpm) (véase el documento EP 382 451).
4. 25 \mul de tampón (unión total) o equistatina sin marcar (unión no específica).
La mezcla de reacción después se incubó durante 1 h a temperatura ambiente. El \alphav\beta3 unido y no unido se separó mediante filtración usando un recolector de células Skatron. Los filtros (previamente humedecidos en polietilenimina al 1,5% durante 10 minutos) se lavaron después con el tampón de lavado (Tris HCl 50 mM, CaCl_{2} 1 mM/MgCl_{2}, a pH 7,2). El filtro después se contó en un contador gamma.
Ensayo de SPAV3 Materiales
1.
Perlas de centelleo por proximidad (SPA) de aglutinina de germen de trigo: Amersham
2.
Octilglucopiranósido: Calbiochem
3.
HEPES: Calbiochem
4.
NaCl: Fisher
5.
CaCl_{2}: Fisher
6.
MgCl_{2}: SIGMA
7.
Fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF): SIGMA
8.
Optiplate: PACKARD
9.
Compuesto A-10 (actividad específica 500-1000 Ci/mmol)
10.
Compuesto de prueba
11.
Receptor de integrina purificado: \alphav\beta3 purificado a partir de células 293 que sobreexpresaban \alphav\beta3 (Duong y cols., J. Bone Min. Res., 8: S378, 1993) de acuerdo con Pytela (Methods in Enzymology, 144; 475, 1987)
12.
Tampón de unión; HEPES 50 mM, a pH 7,8, NaCl 100 mM, Ca^{2+}/Mg^{2+} 1 mM, PMSF 0,5 Mm
13.
Octilglucósido 50 mM en tampón de unión: tampón 50-OG.
Procedimiento 1. Pretratamiento de las perlas de SPA
Primero se lavaron 500 mg de perlas de SPA liofilizadas cuatro veces con 200 ml de tampón 50-OG y una vez con 100 ml de tampón de unión y después se volvieron a suspender en 12,5 ml de tampón de unión.
2. Preparación de perlas de SPA y mezcla de receptores
En cada tubo de ensayo, se suspendieron 2,5 \mul (40 mg/ml) de perlas previamente tratadas en 97,5 \mul de tampón de unión y 20 ml de tampón 50-OG. Se añadieron 5 ml (\sim30 ng/\mul) de receptor purificado a las perlas en suspensión agitando a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla después se centrifugó a 2.500 rpm en una centrifugadora de banco Beckman GPR durante 10 minutos a 4ºC. Los sedimentos después se resuspendieron en 50 \mul de tampón de unión y 25 \mul de tampón 50-OG.
3. Reacción
Los siguientes se añadieron por orden a los pocillos correspondientes de una placa Optiplate:
(i)
Mezcla de receptor/perlas (75 \mul)
(ii)
25 \mul de cada uno de los siguientes: compuesto a analizar, tampón de unión para la unión total o A-8 para la unión no específica (concentración final 1 \muM)
(iii)
A-10 en tampón de unión (25 \mul, concentración final 40 pM)
(iv)
Tampón de unión (125 \mul)
(v)
Cada placa se selló con un sellador de placas de PACKARD y se incubó toda la noche agitando a 4ºC
4. Las placas se contaron usando PACKARD TOPCOUNT
5. El % de inhibición se calculó de la forma siguiente:
\quad
A = recuento total
\quad
B = recuento no específico
\quad
C = recuento de las muestras
% \ de \ inhibición = [\{(A-B)-(C-B)\}/(A-B)]/(A-B) \ x \ 100
Se analizaron compuestos representativos de la presente invención y se encontró que se unían a integrina \alphav\beta3 humana. Se encontró que estos compuestos generalmente tenían valores de CI_{50} inferiores a aproximadamente 100 nM en el ensayo de SPAV3.
Ensayo de OCFORM
Se plaquearon células tipo osteoblasto (1,8 células), derivadas originariamente de la bóveda craneal de ratón, en placas de cultivo tisular de 24 pocillos CORNING en un medio \alphaMEM que contenía ribonucleósidos y desoxiribonucleósidos, suero bovino fetal al 10% y penicilina-estreptomicina. Las células se sembraron a 40.000/pocillo por la mañana. Por la tarde, se prepararon células de médula ósea de ratones Balb/C macho de seis semanas de edad de la forma siguiente:
Se sacrificaron los ratones, se extrajeron las tibias y se introdujeron en el medio anterior. Se extirparon los extremos y la médula se extrajo de la cavidad a un tubo con una jeringuilla de 1 ml con una aguja de calibre 27,5. La médula se suspendió pipeteando arriba y abajo. La suspensión se pasó a través de un colador de células de nylon de > 100 mm. La suspensión resultante se centrifugó a 350 x g durante siete minutos. Se resuspendió el sedimento y una muestra se diluyó en ácido acético al 2% para lisar los glóbulos rojos. Las células que quedaban se contaron en un hemacitómetro. Las células se sedimentaron y se resuspendieron a 1 x 10^{6} células/ml. Se añadieron 50 \mul a cada pocillo de 1,8 células proporcionando 50.000 células/pocillo y se añadió 1,25-dihidroxi-vitamina D_{3} (D_{3}) a cada pocillo a una concentración final de 10 nM. Los cultivos se incubaron a 37ºC en una atmósfera humidificada de CO_{2} al 5%. Después de 48 h, se cambió el medio. 72 h después de la adición de médula ósea, se añadieron los compuestos de prueba con medio fresco que contenía D_{3} a los pocillos por cuadruplicado. Los compuestos se añadieron de nuevo después de 48 h con medio reciente que contenía D_{3}. Después de otras 48 h., se eliminó el medio, las células se fijaron con formaldehído al 10% en solución salina tamponada con fosfato durante 10 minutos a temperatura ambiente, seguido de un tratamiento de 1-2 minutos con etanol:acetona (1:1) y se secó al aire. Después las células se tiñeron para determinar la fosfatasa ácida resistente a tartrato de la forma siguiente:
Las células se tiñeron durante 10-15 minutos a temperatura ambiente con tampón de acetato 50 mM, a pH 5,0 que contenían tartrato sódico 30 mM, 0,3 mg/ml de sal Fast Red Violet LB y 0,1 mg/ml de Naphthol AS-MX fosfato. Después de teñir, las placas se lavaron abundantemente con agua desionizada y se secaron al aire. Se contó el número de células multinucleadas con tinción positiva en cada pocillo.
Ensayo de SPAV5 Materiales
1.
Perlas de centelleo por proximidad (SPA) de aglutinina de germen de trigo: Amersham
2.
Octilglucopiranósido y Forbo-12-miristato-13-acetato (PMA): Calbiochem
3.
Tris-HCl, NaCl y CaCl_{2}: Fisher
4.
Medio mínimo esencial (MEM): Gibco/BRL
5.
Suero bovino fetal (FBS): Hyclone
6.
MgCl_{2}, MnCl_{2}, y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF): SIGMA
7.
Comprimidos de cóctel inhibidor de proteasas: Boehringer Mannheim.
8.
Optiplate de 96 pocillos: PACKARD
\newpage
9.
Se usó B-5 como ligando radiomarcado (actividad específica 500-1000 Ci/mmol) y se usó B-3 (2,5 \muM) para lograr una inhibición del 100%.
10.
Compuesto de prueba.
11.
Se cultivan células HEK293 que sobreexpresaban la integrina \alphav\beta5 (Simon y cols., J. Biol. Chem. 272, 29380-29389, 1997) en placas de 150 mm en medio de FBS al 10%/MEM (Gibco/BRL).
12.
Tampón de lisado: octilglucopiranósido 100 mM, Tris 50 mM, a pH 7,5, NaCl 100 mM, CaCl_{2} 1 mM, MgCl_{2} 1 mM, PMSF 0,5 mM e inhibidores de proteasas (1 comprimido/50 ml de tampón).
13.
Tampón de unión: Tris 50 mM, a pH 7,5, NaCl 100 mM, CaCl_{2} 1 mM, MgCl_{2} 1 mM y MnCl_{2} 1 mM.
14.
Octilglucósida 50 mM en tampón de unión: Tampón 50-OG
Procedimiento
1. Lisados de células con \alphav\beta5: Se cultivaron a confluencia células HEK 293 que expresaban integrinas \alphav\beta5. Después las células se privaron de alimento hasta la mañana siguiente en medio que contenía FBS al 0,5%, seguido de tratamiento con PMA 100 nM durante 20 minutos. Las células se lavaron 2 veces con solución salina tamponada con fosfato (4ºC) y se solubilizaron en tampón de lisado durante 30 minutos sobre hielo. Los lisados se aclararon usando una Beckman JA-20 a 20.000 x g. Se determinó la concentración proteínica de los lisados aclarados usando un kit micro BCA (Pierce) y se almacenaron en alícuotas a -80ºC.
2. Pretratamiento de las perlas de SPA
Primero se lavaron 500 mg de perlas de SPA liofilizadas cuatro veces con 200 ml de tampón 50-OG y una vez con 100 ml de tampón de unión y después se volvieron a suspender en 12,5 ml de tampón de unión.
3. Preparación de la reacción de unión de SPAV5
A cada pocillo de ensayo, se le añadió lo siguiente por orden en placas Optiplate:
(i)
Tampón de unión hasta un volumen final de 125 \mul por pocillo.
(ii)
3 \mul (120 \mug/pocillo) de perlas pretratadas diluidas con 22 \mul de tampón 50-OG
(iii)
15 \mug de proteínas de lisado de células con \alphav\beta5.
(iv)
B-5 a 50.000 cpm.
(v)
25 \mul de concentraciones escaladas de compuesto de prueba.
(v)
Cada placa se selló con un sellador de placas de PACKARD y se incubó toda la noche agitando a 4ºC
4. Las placas se contaron usando un contador de centelleo de microplacas PACKARD TOPCOUNT.
5. El % de inhibición se calculó de la forma siguiente:
\quad
A = recuento total (unión del receptor a B-5)
\quad
B = recuento no específico (unión del receptor a B-5 en presencia de 2,5 \muM de ligando frío)
\quad
C = recuento de la unión del receptor al compuesto de prueba
% \ de \ inhibición = [\{(A-B)-(C-B)\}/(A-B)]/(A-B) \ x \ 100
La CI_{50} del compuesto de prueba se calculó como el 50% de la inhibición.
Se analizaron los compuestos representativos de la presente invención y generalmente se encontró que tenían valores de CI_{50} inferiores a 1 \muM en el ensayo de SPAV5.
Ejemplo de una formulación farmacéutica
Como realización específica de una composición oral se formulan 100 mg de cualquiera de los compuestos de la presente invención con lactosa molida lo suficientemente fina para proporcionar una cantidad total de 580 a 590 mg para llenar una cápsula de gelatina dura de tamaño 0.
Aunque la invención ha sido descrita e ilustrada haciendo referencia a ciertas realizaciones preferidas de la misma, los expertos en la técnica apreciarán que pueden realizarse diversos cambios, modificaciones y sustituciones en la misma. Por ejemplo, pueden ser aplicables dosis eficaces diferentes de las dosis preferidas descritas anteriormente debido a variaciones de la capacidad de respuesta del mamífero que se esté tratando, para la gravedad de los trastornos óseos provocados por la resorción, o para otras indicaciones para los compuestos de la invención que se indican anteriormente. Del mismo modo, las respuestas farmacológicas específicas que se observen pueden variar de acuerdo y dependiendo del compuesto activo particular que se seleccione o dependiendo de si hay vehículos farmacéuticos, así como del tipo de formulación y modo de administración que se emplee, y dichas variaciones o diferencias esperadas en los resultados se contemplan de acuerdo con los objetos y prácticas de la presente invención.

Claims (18)

1. Un compuesto que tiene la fórmula (IV):
17
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que X es
18
R^{2} se selecciona del grupo constituido por halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, cicloheteroalquilo C_{3-8}, (cicloalquil C_{3-8})alquilo C_{1-6}, (cicloheteroalquil C_{3-8})-alquilo C_{1-6}, arilo, arilalquilo C_{1-6}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acilamino C_{1-3}, (acilamino C_{1-3})alquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-6})_{1-2} amino, (cicloalquil C_{3-6})amino C_{0-2}, (alquil C_{1-6})_{1-2} aminoalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, (alcoxi C_{1-4})alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidoxicarbonilalquilo C_{1-6}, (alcoxi C_{1-3})carbonilo, (alcoxi C_{1-3})carbonilalquilo C_{1-6}, hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, nitro, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, (alquil C_{1-8})-S(O)_{0-2}, (alquil C_{1-8})_{0-2} aminocarbonilo, (alquiloxi C_{1-8})carbonilamino, (alquil C_{1-8})_{1-2}
aminocarboniloxi, (arilalquil C_{1-3})_{1-2}amino, (aril)_{1-2}amino, aril(alquil C_{1-3})sulfonilamino y (alquil C_{1-8})sulfonilamino;
R^{7} es arilo, en el que el grupo arilo se selecciona del grupo constituido por
(1) fenilo,
(2) naftilo,
(3) piridilo,
(4) furilo,
(5) tienilo,
(6) pirrolilo,
(7) oxazolilo,
(8) tiazolilo,
(9) imidazolilo,
(10) pirazolilo,
(11) isoxazolilo,
(12) isotiazolilo,
(13) pirimidinilo,
(14) pirazinilo,
(15) piridazinilo,
(16) tetrazolilo,
(17) quinolilo,
(18) isoquinolilo,
(19) bencimidazolilo,
(20) benzofurilo,
(21) benzotienilo,
(22) indolilo,
(23) benzotiazolilo,
(24) benzoxazolilo,
(25) dihidrobenzofurilo,
(26) benzo(1,3)dioxolanilo,
(27) benzo(1,4)dioxanilo,
(28) quinazolilo,
(29) quinoxalilo, y
(30) 3,4-dihidro-2H-1,4-dioxa-5-aza-naftalenilo:
en el que el grupo arilo tal como se define anteriormente en los puntos (1) a (30) no está sustituido o está sustituido con de uno a tres sustituyentes que se seleccionan independientemente a partir del grupo constituido por hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acilamino C_{1-3}, (acilamino C_{1-3})-alquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino, (alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, di(alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, (alquil C_{1-4})tio, (alquil C_{1-4})sulfinilo, (alquil C_{1-4})sulfonilo, (alcoxi C_{1-4})alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, (alcoxi C_{1-5})carbonilo, (alcoxi C_{1-3})carbonilalquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-5})carboniloxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, y nitro; o dos sustituyentes adyacentes junto con los átomos de carbono a los que están enlazados para formar un anillo saturado o insaturado de cinco o seis miembros que contiene 1 ó 2 heteroátomos que se seleccionan del grupo constituido por N, O, y S, cuyos átomos de carbono del anillo pueden estar sustituidos con oxo o alquilo C_{1-3}; y R^{8} es hidrógeno o alquilo C_{1-3}.
2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que R^{7} es arilo, en el que el grupo arilo se selecciona del grupo constituido por
fenilo,
piridilo,
quinolilo,
pirimidinilo,
pirazinilo,
piridazinilo,
benzofurilo,
dihidrobenzofurilo, y
3,4-dihidro-2H-1,4-dioxa-5-azanaftalenilo;
en el que el grupo arilo no está sustituido o está sustituido con de uno a tres sustituyentes que se seleccionan independientemente a partir de hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acilamino C_{1-3}, (acilamino C_{1-3})-alquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-6})amino, di(alquil C_{1-6})amino, (alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, di(alquil C_{1-6})aminoalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, (alquil C_{1-4})tio, (alquil C_{1-4})sulfinilo, (alquil C_{1-4})sulfonilo, (alcoxi C_{1-4})alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, (alcoxi C_{1-5})carbonilo, (alcoxi C_{1-3})carbonilalquilo C_{1-6}, (alquil C_{1-5})carboniloxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi, y nitro; o dos sustituyentes adyacentes junto con los átomos de carbono a los que están enlazados para formar un anillo saturado o insaturado de cinco o seis miembros que contiene 1 ó 2 heteroátomos que se seleccionan del grupo constituido por N, O, y S, cuyos átomos de carbono del anillo pueden estar sustituidos con oxo o alquilo C_{1-3}.
3. El compuesto de la reivindicación 2, en el que R^{7} es
quinolilo,
piridilo, o
pirimidinilo;
no sustituido o sustituido con uno o dos sustituyentes que se seleccionan independientemente a partir del grupo constituido por halógeno, fenilo, alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, alcoxi C_{1-3}, amino, (alquil C_{1-3})amino, di(alquil C_{1-3})amino, hidroxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi y trifluoroetoxi.
4. El compuesto de la reivindicación 3, en el que R^{2} se selecciona del grupo constituido por
hidrógeno,
halógeno,
amino,
(alquil C_{1-4})amino,
(cicloalquil C_{3-6})(alquil C_{0-2})amino,
ciano,
alquilo C_{1-4},
ciclopropilo,
arilalquilo C_{1-3},
acilamino C_{1-4},
alcoxi C_{1-4},
alquiltio C_{1-4},
aminocarbonilo,
(alquil C_{1-6})_{1-2} aminocarbonilo,
(alcoxi C_{1-4})carbonilo,
trifluorometilo, y
trifluorometoxi.
5. El compuesto de la reivindicación 4, en el que R^{2} se selecciona del grupo constituido por
hidrógeno,
halógeno,
amino,
alquilamino C_{1-3},
(cicloalquil C_{3-6})metilamino,
alquilo C_{1-4},
ciclopropilo,
trifluorometilo, y
trifluorometoxi.
6. El compuesto de la reivindicación 1, en el que
R^{2} es hidrógeno, alquilo C_{1-4} o ciclopropilo;
R^{7} es quinolilo, piridilo, o pirimidinilo, no sustituido o sustituido con un sustituyente que se selecciona a partir de alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, alcoxi C_{1-3}, amino, (alquil C_{1-3})amino, di(alquil C_{1-3})amino, ciano, trifluorometilo, o trifluorometoxi, y R^{8} es hidrógeno o alquilo C_{1-3}.
7. El compuesto de la reivindicación 1 que se selecciona a partir del grupo constituido por:
Ácido 3-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(R)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(S)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3-(2-metoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(R)-(2-metoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(S)-(2-metoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(R)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(S)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(R)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
Ácido 3(S)-(2-etoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. El compuesto de la reivindicación 7 que es:
Ácido 3(S)-(2-metoxipirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)nonanoico;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con cualquier reivindicación anterior y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
10. La composición de la reivindicación 9 que además comprende un principio activo que se selecciona a partir del grupo constituido por
a)
un bisfosfonato orgánico o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo,
b)
un modulador de los receptores de estrógenos,
c)
un modulador de los receptores de andrógenos,
d)
un agente citotóxico/antiproliferativo,
e)
un inhibidor de las metaloproteinasas de la matriz,
\newpage
f)
un inhibidor de factores de crecimiento derivados de la epidermis, derivados de fibroblastos o derivados de plaquetas,
g)
un inhibidor de VEGF,
h)
un anticuerpo contra un factor de crecimiento o contra un receptor de un factor de crecimiento,
i)
un inhibidor de Flk-1/KDR, Flt-1, Tck/Tie-2, o Tie-1,
j)
un inhibidor de catepsina K,
k)
un segretagogo de hormona del crecimiento,
l)
un inhibidor de la protón ATPasa de los osteoclastos,
m)
un inhibidor del activador de plasminógeno de uroquinasa (u-PA),
n)
una proteína de fusión de un anticuerpo específico de tumor e interleucina-2,
o)
un inhibidor de HMG-CoA reductasa, y
p)
un inhibidor de farnesilo transferasa o un inhibidor de geranilgeranilo transferasa o un inhibidor dual de farnesilo/geranilgeranilo transferasa;
y sus mezclas.
11. La composición de la reivindicación 10, en la que dicho principio activo se selecciona del grupo constituido por
a)
un bisfosfonato orgánico o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo,
b)
un modulador de los receptores de estrógenos,
c)
un modulador de los receptores de andrógenos,
d)
un inhibidor de catepsina K,
e)
un inhibidor de HMG-CoA reductasa, y
f)
un inhibidor de la protón ATPasa de los osteoclastos,
y sus mezclas.
12. La composición de la reivindicación 11, en la que dicho bisfosfonato orgánico o sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo es alendronato monosódico trihidratado.
13. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para la fabricación de un medicamento para provocar un efecto de antagonismo de los receptores de las integrinas \alphav.
14. El uso tal como se reivindica en la reivindicación 13, en el que el efecto de antagonismo de los receptores de las integrinas \alphav es un efecto de antagonismo de \alphav\beta3.
15. El uso tal como se reivindica en la reivindicación 14, en el que el efecto de antagonismo de \alphav\beta3 se selecciona del grupo constituido por inhibición de resorción ósea, restenosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad vírica, cáncer, y crecimiento tumoral metastático.
16. El uso tal como se reivindica en la reivindicación 15, en el que el efecto de antagonismo de \alphav\beta3 es la inhibición de la resorción ósea.
17. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir la osteoporosis.
18. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-8 para la fabricación de un medicamento para tratar crecimiento tumoral combinación con radioterapia.
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