ES2280383T3 - Antagonistas de receptores de integrina alfa v. - Google Patents

Antagonistas de receptores de integrina alfa v. Download PDF

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Abstract

Un compuesto de la **fórmula** o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que: X es, en la que cada átomo de carbono de anillo no aromático no está sustituido o está sustituido independientemente con uno o dos sustituyentes R1 y cada átomo de carbono de anillo aromático no está sustituido o está sustituido independientemente con un sustituyente R1 seleccionado del grupo constituido por alquilo C1-8, cicloalquilo C3-8, cicloheteroalquilo C3-8, cicloalquil C3-8-alquilo C1-6.

Description

Antagonistas de receptores de integrina \alphav.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada, a su síntesis y a su uso como antagonistas de receptores de integrinas \alphav. Más particularmente, los compuestos de la presente invención son antagonistas de los receptores de integrinas \alphav\beta3, \alphav\beta5 y receptores de integrinas \alphav asociados con otras subunidades \beta, y son útiles para inhibir la reabsorción ósea, tratar y prevenir la osteoporosis e inhibir la reestenosis vascular, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad viral, cáncer y crecimiento de tumor metastático.
Antecedentes de la invención
Se cree que una amplia variedad de estados y afecciones puede ser mediada por la acción sobre los receptores de integrinas y que los antagonistas de receptores de integrinas representan una clase útil de fármacos. Los receptores de integrinas son receptores transmembrana heterodiméricos a través de los cuales las células se unen y se comunican con matrices extracelulares y otras células (véase S. B. Rodan y G. A. Rodan, "Integrin Function In Osteoclasts", Journal of Endocrinology, 154: S47-S56 (1997), que se incorpora en la presente en su totalidad como referencia).
En un aspecto de la presente invención, los compuestos de la presente son útiles para inhibir la reabsorción ósea. La reabsorción ósea es mediada por la acción de células denominadas osteoclastos. Los osteoclastos son grandes células multinucleadas de hasta aproximadamente 400 mm de diámetro, que reabsorben tejido mineralizado, sobre todo carbonato de calcio y fosfato de calcio, en vertebrados. Los osteoclastos son células con movilidad activa que migran a lo largo de la superficie del hueso y que se pueden fijar al hueso, segregando los ácidos y las proteasas necesarios, por lo que causan la reabsorción real del tejido mineralizado del hueso. Más específicamente, se cree que los osteoclastos existen en al menos dos estados fisiológicos, a saber, el estado secretor y el estado migratorio o móvil. En el estado secretor, los osteoclastos son planos, se adosan a la matriz ósea a través de una zona de unión estrecha (zona de sellado), aumentan en gran medida su polaridad, forman un borde ondulado y secretan enzimas lisosomales y protones para reabsorber el hueso. La adhesión de los osteoclastos a las superficies óseas es un importante paso inicial de la reabsorción ósea. En el estado migratorio o móvil, los osteoclastos migran a través de la matriz ósea y no participan de la reabsorción hasta que se vuelven a fijar al hueso.
Las integrinas intervienen en la unión, la activación y la migración de los osteoclastos. La integrina más abundante en los osteoclastos, por ejemplo, en osteoclastos de rata, pollo, ratón y humano, es un receptor de integrina conocido como \alphav\beta3 que, según se cree, interactúa en el hueso con proteínas de la matriz que contienen la secuencia RGD. Los anticuerpos contra \alphav\beta3 bloquean la reabsorción ósea in vitro, lo cual indica que esta integrina desempeña un papel clave en el proceso de reabsorción. Se dispone de crecientes evidencias que sugieren que los ligandos \alphav\beta3 se pueden usar eficazmente para inhibir la reabsorción ósea mediada por osteoclastos in vivo en mamíferos.
Las principales enfermedades óseas actuales de interés público son la osteoporosis, hipercalcemia de enfermedades malignas, osteopenia por metástasis óseas, enfermedad periodontal, hiperparatiroidismo, erosiones periarticulares en artritis reumatoide, enfermedad de Paget, osteopenia inducida por inmovilización y osteoporosis inducida por glucocorticoides. Todas estas afecciones se caracterizan por pérdida ósea, la cual da como resultado un desequilibrio entre reabsorción, es decir, degradación, y formación ósea que continúan durante la vida a una tasa de aproximadamente el 14% anual en promedio. Sin embargo, la tasa de recambio óseo difiere de un sitio a otro; por ejemplo, es más elevada en el hueso trabecular de las vértebras y el hueso alveolar de los maxilares que en las cortezas de los huesos largos. El potencial de pérdida ósea está relacionado directamente con el recambio y puede ascender a más del 5% por año en las vértebras inmediatamente después de la menopausia, una afección que conduce a riesgo de aumento de fracturas.
En los Estados Unidos, hay en la actualidad aproximadamente 20 millones de personas con fracturas detectables de las vértebras debidas a osteoporosis. Además, hay aproximadamente 250.000 fracturas de cadera por año atribuidas a la osteoporosis. Esta situación clínica se asocia con una tasa de mortalidad del 12% en los primeros dos años, mientras que el 30% de los pacientes requiere atención especializada en su hogar tras la fractura.
Los individuos que padecen todas las afecciones antes enumeradas se beneficiarían del tratamiento con agentes que inhiban la reabsorción ósea.
Además, se halló que los ligandos \alphav\beta3 son útiles para el tratamiento y/o la inhibición de la reestenosis (es decir, la recurrencia de estenosis tras la cirugía correctiva de la válvula cardiaca), aterosclerosis, retinopatía diabética, degeneración macular y angiogénesis (es decir, formación de nuevos vasos sanguíneos) y la inhibición de la enfermedad viral. Además, se ha propuesto que el crecimiento de los tumores depende de una adecuada irrigación sanguínea, la cual, a su vez, depende del desarrollo de nuevos vasos dentro del tumor; en consecuencia, la inhibición de la angiogénesis puede causar regresión tumoral en modelos animales (véase Harrison's Principles of Internal Medicine, 12.º ed. 1991, el cual se incorpora como referencia en la presente en su totalidad). En consecuencia, los antagonistas de \alphav\beta3 que inhiben la angiogénesis pueden ser útiles para el tratamiento de cáncer al inhibir el crecimiento tumoral (véase, por ejemplo, Brooks et al., Cell, 79:1157-1164 (1994), el cual se incorpora como referencia en la presente en su totalidad).
También se presentaron evidencias que sugieren que la angiogénesis es un factor central en la iniciación y la persistencia de la enfermedad artrítica, y que la integrina vascular \alphav\beta3 puede ser una diana de preferencia en la artritis inflamatoria. En consecuencia, los antagonistas de \alphav\beta3 que inhiben la angiogénesis pueden representar un nuevo enfoque terapéutico para el tratamiento de la enfermedad artrítica, por ejemplo artritis reumatoide (véase C. M. Storgard, et al., "Decreased angiogenesis and arthritic disease in rabbits treated with an \alphav\beta3 antagonist", J. Clin. Invest., 103: 47-54 (1999), la cual se incorpora como referencia en la presente en su totalidad).
Además, los compuestos de la presente invención también pueden inhibir la neovascularización al actuar como antagonistas del receptor de integrina, \alphav\beta5. Se demostró que un anticuerpo monoclonal para \alphav\beta5 inhibe la angiogénesis inducida por VEGF en córnea de conejo y el modelo de membrana corioalantoidea de pollo (véase M. C. Friedlander, et al., Science 270:1500-1502 (1995), la cual se incorpora como referencia en la presente en su totalidad). En consecuencia, los compuestos que antagonizan \alphav\beta5 son útiles para tratar y prevenir la degeneración macular, la retinopatía diabética, la enfermedad viral, el cáncer y el crecimiento de tumor metastático.
Además, los compuestos de la presente invención pueden inhibir la angiogénesis y la inflamación al actuar como antagonistas de los receptores de integrina \alphav asociados con otras subunidades \beta, por ejemplo \alphav\beta6 y \alphav\beta8 (véase, por ejemplo, Melpo Christofidou-Solomidou, et al., "Expression and Function of Endothelial Cell \alphav Integrin Receptors in Wound-Induced Human Angiogenesis in Human Skin/SCID Mice Chimeras", American Journal of Pathology, 151:975-983 (1997) y Xiao-Zhu Huang, et al., "Inactivation of the Integrin \beta6 Subunit Gene Reveals a Role of Epithelial Integrins in Regulating Inflammation in the Lungs and Skin", Journal of Cell Biology, 133:921-928 (1996), el cual se incorpora como referencia en la presente en su totalidad).
Además, ciertos compuestos de la presente invención antagonizan ambos receptores \alphav\beta3 y \alphav\beta5. Estos compuestos, denominados "antagonistas duales \alphav\beta3/\alphav\beta5", son útiles para inhibir la reabsorción ósea, tratar y prevenir la osteoporosis e inhibir la reestenosis vascular, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, aterosclerosis, inflamación, cáncer y crecimiento de tumor metastático.
Se han descrito antagonistas peptídicos y peptidomiméticos del receptor de integrina \alphav\beta3 en la bibliografía científica y de patentes. Por ejemplo, se hace referencia a W. J. Hoekstra y B. L. Poulter, Curr. Med. Chem. 5:195-204 (1998) y las referencias allí citadas; WO 95/32710; WO 95/37655; WO 97/01540; WO 97/37655; WO 98/08840; WO 98/18460; WO 98/18461; WO 98/25892; WO 98/31359; WO 98/30542; WO 99/15506; WO 99/15507; WO 00/03973; EP 853084; EP 854140; EP 854145; las patentes de EE. UU. N.^{os} 5.204.350; 5.217.994; 5.639.754; 5.741.796; 5.780.426; 5.929.120; 5.952.341; 6.017.925 y 6.048.861. Se han presentado evidencias de la capacidad de los antagonistas de receptor de integrinas \alphav\beta3 para impedir la reabsorción ósea in vitro e in vivo (véase V. W. Engleman et al., "A Peptidomimetic Antagonist of the \alphav\beta3 Integrin Inhibits Bone Resorption In Vitro and Prevents Osteoporosis In Vivo", J. Clin. Invest. 99: 2284-2292 (1997); S. B. Rodan et al., "A High Affinity Non-Peptide \alphav\beta3 Ligand Inhibits Osteoclast Activity In Vitro and In Vivo", J. Bone Miner. Res. 11: S289 (1996); J. F. Gourvest et al., "Prevention of OVX-Induced Bone Loss With a Non-peptidic Ligand of the \alphav\beta3 Vitronectin Receptor", Bone 23: S612 (1998); M. W. Lark et al., "An Orally Active Vitronectin Receptor \alphav\beta3 Antagonist Prevents Bone Resorption In Vitro and In Vivo in the Ovariectomized Rat", Bone 23: S219 (1998)).
El receptor de integrina \alphav\beta3 reconoce la secuencia de tripéptido Arg-Gly-Asp (RGD) en su matriz cognada y las glucoproteínas de la superficie celular (véase J. Samanen, et al., "Vascular Indications for Integrin \alphav Antagonists", Curr. Pharmaceut. Design 3: 545-584 (1997)). Entre otros, Genentech y SmithKline Beecham utilizaron un núcleo de benzazepina como mimético de Gly-Asp con restricción de conformación, a fin de elaborar antagonistas no peptídicos de receptores de integrinas \alphav\beta3 sustituidas en el N terminal con miméticos de arginina heterocíclicos (véase R. M. Keenan et al., "Discovery of Potent Non-peptide Vitronectin Receptor (\alphav\beta3) Antagonists", J. Med. Chem. 40: 2289-2292 (1997); R. M. Keenan et al., "Benzimidazole Derivatives As Arginine Mimetics in 1,4-Benzodiazepine Nonpeptide Vitronectin Receptor (\alphav\beta3) Antagonists", Bioorg. Med. Chem. Lett. 8: 3165-3170 (1998); y R. M. Keenan et al., "Discovery of an Imidazopiridine-Containing 1,4-Benzodiazepine Nonpeptide Vitronectin Receptor (\alphav\beta3) Antagonist con Efficacy in a Restenosis Model", Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:3171-3176 (1998). Las patentes otorgadas a SmithKline Beecham que describen dicha benzazepina, además de benzodiazepinas y benzocicloheptenos, antagonistas de receptor de integrinas \alphav\beta3 relacionados incluyen WO 96/00574, WO 96/00730, WO 96/06087, WO 96/26190, WO 97/24119, WO 97/24122, WO 97/24124, WO 98/14192, WO 98/15278, WO 99/05107, WO 99/06049, WO 99/15170, WO 99/15178 y WO 99/15506 y a Genentech incluyen WO 97/34865. También se empleó el núcleo de dibenzociclohepteno, además de dibenzoxazepina como mimético de Gly-Asp para obtener antagonistas de \alphav\beta3 (véanse documentos WO 97/01540, WO 98/30542, WO 99/11626, WO 99/15508, patentes de los Estados Unidos Nros. 6.008.213 y 6.069.158, todas otorgadas a SmithKline Beecham).
Otros antagonistas de receptores de integrinas que incorporan las restricciones de conformación de anillo del esqueleto han sido descritos en la bibliografía de patentes. Las solicitudes de patente publicadas o las patentes emitidas que describen antagonistas con restricción fenilo incluyen WO 98/00395, WO 99/32457, WO 99/37621, WO 99/44994, WO 99/45927, WO 99/52872, WO 99/52879, WO 99/52896, WO 00/06169, EP 0 820.988, EP 0 820.991, las patentes de los Estados Unidos Nros. 5.741.796; 5.773.644; 5.773.646; 5.843.906; 5.852.210; 5.929.120; 5.952.381; 6.028.223 y 6.040.311. Las solicitudes de patente publicadas o las patentes emitidas que describen antagonistas con restricción monocíclica en el anillo incluyen WO 99/26945, WO 99/30709, WO 99/30713, WO 99/31099, WO 99/59992, WO 00/00486, WO 00/09503, EP 0 796.855, EP 0 928.790, EP 0 928.793, las patentes de los Estados Unidos Nros. 5.710.159; 5.723.480; 5.981.546; 6.017.926 y 6.066.648. Las solicitudes de patente publicadas o las patentes emitidas que describen antagonistas con restricción bicíclica en los anillos incluyen WO 98/23608, WO 98/35949, WO 99/33798, EP 0 853.084, las patentes de los Estados Unidos Nros. 5.760.028; 5.919.792 y 5.925.655.
Sin embargo, aún resta una necesidad de antagonistas de receptores de integrinas \alphav selectivos no peptídicos de moléculas pequeñas que muestren mejores propiedades de potencia, farmacodinamia y farmacocinética, tales como biodisponibilidad oral y duración de acción, respecto de los compuestos ya descritos. Dichos compuestos podrían proveer mejores tratamiento, prevención o supresión de diversas patologías enumeradas con anterioridad, que están mediadas por la unión al receptor de integrina \alphav, y la adhesión y activación celular.
En la patente de los Estados Unidos N.º 6.048.861, se describe un grupo de derivados de ácido alcanoico de cadena lineal 3-sustituidos que son potentes antagonistas de receptor de integrina \alphav\beta3. En la presente invención, se describen nuevos derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada, que están sustituidos en el N terminal con un heterociclo opcionalmente sustituido y en C-3 con un grupo arilo opcionalmente sustituido. Los compuestos de la presente invención exhiben mejores propiedades farmacocinéticas y/o farmacodinámicas in vivo que los compuestos de la técnica anterior.
En consecuencia, es un objeto de la presente invención proveer nuevos derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada de utilidad como antagonistas de receptores de integrinas \alphav.
Es otro objeto de la presente invención proveer nuevos derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada de utilidad como antagonistas de receptor de integrina \alphav\beta3.
Es otro objeto de la presente invención proveer nuevos derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada de utilidad como antagonistas de receptor de integrina \alphav\beta5.
Es otro objeto de la presente invención proveer nuevos derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada de utilidad como antagonistas duales de receptores de integrinas \alphav\beta3/\alphav\beta5.
Es otro objeto de la presente invención para proveer composiciones farmacéuticas que comprenden antagonistas de receptores de integrinas \alphav.
Es otro objeto de la presente invención proveer procedimientos para preparar las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
Es otro objeto de la presente invención proveer el uso de derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada para la fabricación de un medicamento para producir un efecto antagonista del receptor de integrina \alphav en un mamífero que lo necesite, al administrar los compuestos y composiciones farmacéuticas de la presente invención.
Es otro objeto de la presente invención proveer compuestos y composiciones farmacéuticas de utilidad para inhibir la reabsorción ósea, reestenosis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad viral, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, cáncer y crecimiento de tumor metastáticos.
Es otro objeto de la presente invención proveer compuestos y composiciones farmacéuticas de utilidad para tratar la osteoporosis.
Es otro objeto de la presente invención proveer el uso de derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada para la fabricación de un medicamento para inhibir la reabsorción ósea, reestenosis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad viral, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, cáncer y crecimiento de tumor metastático.
Es otro objeto de la presente invención proveer el uso de derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada para la fabricación de un medicamento para tratar la osteoporosis.
Éstos y otros objetos serán fácilmente aparentes a partir de la descripción detallada siguiente.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a nuevos derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada representados por la fórmula estructural (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, que son útiles como antagonistas de receptores de integrinas \alphav.
1
La presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la presente invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente invención también se refiere a procedimientos para preparar las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
La presente invención también se refiere a los usos para la preparación de un medicamento para producir un efecto antagonista del receptor de integrina \alphav en un mamífero que lo necesite, al administrar los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
La presente invención también se refiere a usos para la preparación de un medicamento para inhibir la reabsorción ósea, reestenosis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad viral, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, cáncer y crecimiento de tumor metastático, al administrar los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
La presente invención también se refiere a los usos para la preparación de un medicamento para tratar la osteoporosis al administrar los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención.
Descripción detallada de la invención
La presente invención se refiere a derivados de ácido alcanoico con cadena fluorada de utilidad como antagonistas de receptores de integrinas \alphav. Los compuestos de la presente invención se describen mediante la siguiente fórmula estructural (I):
2
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que
X es
3
4
en la que cada átomo de carbono de anillo no aromático no está sustituido o está sustituido independientemente con uno o dos sustituyentes R^{1} y cada átomo de carbono de anillo aromático no está sustituido o está sustituido independientemente con un sustituyente R^{1} seleccionado del grupo constituido por
alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8},
cicloheteroalquilo C_{3-8}, cicloalquil C_{3-8}-alquilo C_{1-6},
cicloheteroalquil C_{3-8}-alquilo C_{1-6}, arilo, arilalquilo C_{1-6}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acil C_{1-3} amino, acil C_{1-3} amino-alquilo C_{1-6},
(alquil C_{1-6})_{1-2} amino, cicloalquil C_{3-6}-amino C_{0-2},
(alquil C_{1-6})_{1-2} amino-alquil C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonil-alquilo C_{1-6},
alcoxi C_{1-3} carbonilo,
alcoxi C_{1-3} carbonil-alquilo C_{1-6}, hidroxi, hidroxi-alquilo C_{1-6},
nitro, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi,
alquil C_{1-8}-S(O)_{0-2}, (alquil C_{1-8})_{0-2}-aminocarbonilo,
alquil C_{1-8}-oxicarbonilamino, (alquil C_{1-6})_{1-2} aminocarboniloxi,
(arilalquil C_{1-3})_{1-2}-amino, (aril)_{1-2}-amino,
arilalquil C_{1-3}-sulfonilamino y alquil C_{1-8}-sulfonilamino;
o dos sustituyentes R^{1}, cuando están en el mismo átomo de carbono no aromático, se toman junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar un grupo carbonilo, o dos sustituyentes R^{1}, junto con los átomos de carbono no aromáticos a los que están unidos, se unen para formar un anillo carbocíclico de 4 a 6 miembros saturado o insaturado;
R^{2} es hidrógeno o alquilo C_{1-4};
R^{3} es flúor y R^{4} es hidrógeno o R^{3} es hidrógeno y R^{4} es flúor;
R^{5} es arilo, en el que el grupo arilo se selecciona del grupo constituido por
(1)
fenilo,
(2)
naftilo,
(3)
piridinilo,
(4)
furilo,
(5)
tienilo,
(6)
pirrolilo,
(7)
oxazolilo,
(8)
tiazolilo,
(9)
imidazolilo,
(10)
pirazolilo,
(11)
isoxazolilo,
(12)
isotiazolilo,
(13)
pirimidinilo,
(14)
pirazinilo,
(15)
piridazinilo,
(16)
quinolilo,
(17)
isoquinolilo,
(18)
bencimidazolilo,
(19)
benzofurilo,
(20)
benzotienilo,
(21)
indolilo,
(22)
benztiazolilo,
(23)
benzoxazolilo,
(24)
dihidrobenzofurilo,
(25)
benzo(1,3)dioxolanilo y
(26)
benzo(1,4)dioxanilo;
y arilo mono-, di- y trisustituido, en el que arilo es tal como se definió con anterioridad y los sustituyentes son independientemente hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acil C_{1-3} amino, acil C_{1-3} amino-alquilo C_{1-6}, alquil C_{1-6} amino, dialquil (C_{1-6})amino, alquil C_{1-6} amino-alquilo C_{1-6}, dialquil (C_{1-6}) amino-alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, alquil C_{1-4}-tio, alquil C_{1-4}-sulfinilo, alquil C_{1-4}-sulfonilo, alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonil-alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-5}-carbonilo, alcoxi C_{1-3}-carbonil-alquilo C_{1-6}, alquil C_{1-5}-carboniloxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi o nitro; o dos sustituyentes adyacentes, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, se unen para formar un anillo de 5 ó 6 miembros saturado o insaturado que contiene 1 ó 2 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por N, O y S, cuyos átomos de carbono del anillo pueden estar sustituidos con oxo o alquilo C_{1-3}; y
R^{6} es hidrógeno o alquilo C_{1-3}.
En una forma de realización de los compuestos de la presente invención, R^{5} es
fenilo,
piridinilo,
quinolilo,
pirimidinilo,
pirazinilo,
pirazolilo o
dihidrobenzofurilo mono- o disustituido;
en el que los sustituyentes son independientemente hidrógeno, hidroxi, hidroxi-alquilo C_{1-6}, halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acil C_{1-3} amino, acil C_{1-3} amino-alquilo C_{1-6}, alquil C_{1-6} amino, di(alquil C_{1-6})amino, alquil C_{1-6} aminoalquilo C_{1-6}, di(alquil C_{1-6})amino-alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, alquil C_{1-4} tio, alquil C_{1-4} sulfinilo, alquil C_{1-4} sulfonilo, alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-5} carbonilo, alcoxi C_{1-3} carbonilalquilo C_{1-6}, alquil C_{1-5} carboniloxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi o nitro; o dos sustituyentes adyacentes, junto con los átomos de carbonos a los que están unidos, se unen para formar un anillo de 5 ó 6 miembros saturado o insaturado que contiene 1 ó 2 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por N, O y S, en el que los átomos de carbono del anillo pueden estar sustituidos con oxo o alquilo C_{1-3}.
En una clase de esta forma de realización de la presente invención, R^{5} es
quinolilo,
piridinilo, o
pirimidinilo mono- o disustituido;
en el que los sustituyentes son independientemente hidrógeno, halógeno, fenilo, alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, alcoxi C_{1-3}, amino, alquil C_{1-3} amino, di(alquil C_{1-3})amino, hidroxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi o trifluoroetoxi.
En una segunda forma de realización de los compuestos de la presente invención, R^{1} está seleccionado del grupo constituido por
hidrógeno,
amino,
alquil C_{1-4} amino,
cicloalquil C_{3-6} -alquil C_{0-2} amino,
ciano,
alquilo C_{1-4},
ciclopropilo,
arilalquilo C_{1-3},
acil C_{1-4} amino,
alcoxi C_{1-4},
alquil C_{1-4}tio,
aminocarbonilo,
(alquil C_{1-6})_{1-2} aminocarbonilo,
alcoxi C_{1-4}carbonilo,
trifluorometilo y
trifluorometoxi.
En una clase de esta segunda forma de realización de la presente invención, R^{1} está seleccionado del grupo constituido por
hidrógeno,
amino,
alquil C_{1-3}amino,
cicloalquil C_{3-6} metilamino,
alquilo C_{1-4},
ciclopropilo,
trifluorometilo y
trifluorometoxi.
En una tercera forma de realización de los compuestos de la presente invención, X es
5 
\vskip1.000000\baselineskip
En una clase de esta forma de realización, R^{3} es hidrógeno y R^{4} es flúor.
En una subclase de esta clase de esta forma de realización, R^{1} es alquilo C_{1-4} o ciclopropilo y R^{5} es
quinolilo,
piridinilo o
pirimidinilo mono- o disustituido;
en el que los sustituyentes son independientemente hidrógeno, halógeno, fenilo, alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, alcoxi C_{1-3}, amino, alquil C_{1-3} amino, di(alquil C_{1-3})amino, hidroxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi o trifluoroetoxi.
En una cuarta forma de realización de los compuestos de la presente invención, R^{6} es hidrógeno.
Son ejemplos ilustrativos, pero no limitantes, de los compuestos de la presente invención, de utilidad como antagonistas de receptores de integrinas \alphav, los siguientes:
ácido 5,5-difluoro-3-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico y
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
También son ilustrativos de los compuestos de la presente invención los siguientes:
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico y
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
Para los usos en medicina, las sales de los compuestos de la presente invención se refieren a "sales farmacéuticamente aceptables" no tóxicas. Sin embargo, otras sales pueden ser útiles en la preparación de los compuestos de acuerdo con la invención o de sus sales farmacéuticamente aceptables. Las sales de los compuestos básicos comprendidas en la expresión "sales farmacéuticamente aceptables" se refieren a sales no tóxicas de los compuestos de la presente invención, que generalmente se preparan al hacer reaccionar la base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado. Las sales representativas de los compuestos básicos de la presente invención incluyen, sin limitaciones, las siguientes: acetato, bencensulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, dihidrocloruro, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glucolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabramina, hidrobromuro, hidrocloruro, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de amonio de N-metilglucamina, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, sulfato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietyoduro y valerato. Además, cuando los compuestos de la invención contienen un resto ácido, sus sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen, sin limitaciones, sales derivadas de bases inorgánicas que incluyen aluminio, amonio, calcio, cobre, hierro férrico, hierro ferroso, litio, magnesio, mangánico, manganoso, potasio, sodio, cinc, y similares. Particularmente se prefieren las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. Las sales derivadas de bases orgánicas no tóxicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas cíclicas y resinas de intercambio iónicas básicas, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina, y similares.
Los compuestos de la presente invención pueden tener centros quirales y, en consecuencia, pueden aparecer como racematos, mezclas racémicas, enantiómeros simples, mezclas diastereoisoméricas y diastereoisómeros individuales, en los que todas las formas isoméricas se incluyen en la presente invención. En consecuencia, cuando un compuesto es quiral, cada uno de los enantiómeros o diastereoisómeros, sustancialmente libre del otro, se incluyen en el alcance de la invención; también se incluyen todas las mezclas de los dos enantiómeros.
Algunos de los compuestos descritos en la presente contienen dobles enlaces olefínicos y, a menos que se especifique otra cosa, se entiende que incluyen ambos isómeros geométricos E y Z.
Algunos de los compuestos descritos en la presente pueden existir con diferentes puntos de unión de hidrógeno, denominados tautómeros. Un ejemplo de ello puede ser una cetona y su forma enólica, denominados tautómeros ceto-enol. Cada uno de los tautómeros, además de sus mezclas, está incluido en los compuestos de la presente invención.
Los compuestos de la presente invención se pueden dividir en pares diastereoisoméricos de enantiómeros, por ejemplo, por cristalización fraccionada a partir de un disolvente adecuado, por ejemplo, metanol o acetato de etilo, o una de sus mezclas. El par de enantiómeros así obtenido se puede separar en cada uno de los estereoisómeros por medios convencionales, por ejemplo mediante el uso de un ácido ópticamente activo como agente de resolución, o por HPLC mediante fase estacionaria quiral. Como alternativa, se puede obtener cualquier enantiómero de un compuesto de la presente invención por síntesis estereoespecífica, mediante materiales de partida ópticamente puros o reactivos de configuración conocida.
También se incluyen en el alcance de la investigación los polimorfos e hidratos de los compuestos de la presente invención.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" debe significar la cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que producirá la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o humano buscada por un investigador o médico.
La expresión "antagonista de receptores de integrinas \alphav", tal como se usa en la presente, se refiere a un compuesto que se une y antagoniza el receptor \alphav\beta3 o el receptor \alphav\beta5, o un compuesto que se une o antagoniza una combinación de estos receptores (por ejemplo, un antagonista dual de receptores \alphav\beta3/\alphav\beta5).
La expresión "reabsorción ósea", tal como se usa en la presente, se refiere al proceso por el cual los osteoclastos degradan el hueso.
El término "alquilo" debe significar alcanos de cadena lineal o ramificada de un total de uno a diez átomos de carbono, o cualquier cantidad dentro de ese intervalo (es decir, metilo, etilo, 1-propilo, 2-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, etc.).
El término "alquenilo" debe significar alquenos de cadena lineal o ramificada de un total de dos a diez átomos de carbono, o cualquier cantidad dentro de ese intervalo.
El término "alquinilo" debe significar alquinos de cadena lineal o ramificada de un total de dos a diez átomos de carbono, o cualquier cantidad dentro de ese intervalo.
El término "cicloalquilo" debe significar anillos cíclicos de alcanos de un total de tres a ocho átomos de carbono, o cualquier cantidad dentro de ese intervalo (es decir, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo o ciclooctilo).
El término "cicloheteroalquilo", tal como se usa en la presente, debe significar un anillo heterocíclico de 3 a 8 miembros totalmente saturado que contiene uno o dos heteroátomos elegidos de N, O o S. Los ejemplos de grupos cicloheteroalquilo incluyen, sin limitaciones, piperidinilo, pirrolidinilo, azetidinilo, morfolinilo, piperazinilo.
El término "alcoxi", tal como se usa en la presente, se refiere a alcóxidos de cadena lineal o ramificada de la cantidad de átomos de carbono especificada (por ejemplo, alcoxi C_{1-5}), o cualquier cantidad dentro de este intervalo (es decir, metoxi, etoxi, etc.).
El término "arilo", tal como se usa en la presente, se refiere a un sistema monocíclico o bicíclico que comprende al menos un anillo aromático, en el que el sistema monocíclico o bicíclico contiene 0, 1, 2, 3 ó 4 heteroátomos elegidos de N, O o S, y en el que el sistema monocíclico o bicíclico no está sustituido o está sustituido con uno o más grupos independientemente seleccionados de halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acil C_{1-3} amino, acil C_{1-3} amino-alquilo C_{1-6}, alquil C_{1-6} amino, alquil C_{1-6} amino-alquilo C_{1-6}, dialquil (C_{1-6})amino, dialquil (C_{1-6}) amino-alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, alquil C_{1-4} tio, alquil C_{1-4} sulfinilo, alquil C_{1-4} sulfonilo, alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-5} carbonilo, alcoxi C_{1-3} carbonil-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilalquil C_{1-6} oxi, hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, oxo y alquil C_{1-5}carboniloxi. Los ejemplos de arilo incluyen, sin limitaciones, fenilo, naftilo, piridinilo, pirrolilo, pirazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, imidazolilo, bencimidazolilo, benztiazolilo, benzoxazolilo, indolilo, tienilo, furilo, dihidrobenzofurilo, benzo(1,3)dioxalanilo, benzo(1,4)dioxanilo, oxazolilo, tiazolilo e isotiazolilo, los cuales no están sustituidos o están sustituidos con uno o más grupos independientemente seleccionados de halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acil C_{1-3} amino, acil C_{1-3} amino-alquilo C_{1-6}, alquil C_{1-6} amino, alquil C_{1-6} amino-alquilo C_{1-6}, dialquil (C_{1-6})amino, dialquil (C_{1-6}) amino-alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, alquil C_{1-4} tio, alquil C_{1-4} sulfinilo, alquil C_{1-4} sulfonilo, alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-5} carbonilo, alcoxi C_{1-3} carbonil-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilalquil C_{1-6} oxi, hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, oxo y alquil C_{1-5} carboniloxi. De preferencia, el grupo arilo no está sustituido, está mono-, di- o trisustituido con uno a tres de los sustituyentes nombrados con anterioridad; con mayor preferencia, el grupo
arilo no está sustituido, o está mono- o disustituido con uno a dos de los sustituyentes nombrados con anterioridad.
Siempre que el término "alquilo" o "arilo", o cualquiera de sus raíces de prefijo aparecen en el nombre de un sustituyente (por ejemplo arilalquilo C_{0-8}), se debe interpretar como incluyente de las limitaciones presentadas con anterioridad para "alquilo" y "arilo". Los números designados de átomos de carbono (por ejemplo, C_{1-8}) se refieren independientemente a la cantidad de átomos de carbono en un resto alquilo o alquilo cíclico, o a la porción alquilo de un sustituyente mayor, en el que alquilo aparece como la raíz del prefijo.
Los términos "arilalquilo" y "alquilarilo" incluyen una porción alquilo en la que alquilo es tal como se definió con anterioridad, y que incluyen una porción arilo en la que arilo es tal como se definió con anterioridad. Los ejemplos de arilaquilo incluyen, sin limitaciones, bencilo, fluorobencilo, clorobencilo, feniletilo, fenilpropilo, fluorofeniletilo, clorofeniletilo, tienilmetilo, tieniletilo y tienilpropilo. Los ejemplos de alquilarilo incluyen, sin limitaciones, tolueno, etilbenceno, propilbenceno, metilpiridina, etilpiridina, propilpiridina y butilpiridina.
En los compuestos de la presente invención, se pueden tomar dos sustituyentes R^{1}, cuando están en el mismo átomo de carbono, junto con el átomo de carbono al que están unidos, para formar un grupo carbonilo.
El término "halógeno" debe incluir yodo, bromo, cloro y flúor.
El término "oxi" significa un átomo de oxígeno (O). El término "tio" significa un átomo de azufre (S). El término "oxo" significa "=O". El término "carbonilo" significa "C=O".
En el término "sustituido", se deben considerar incluidos múltiples grados de sustitución con un sustituyente denominado. Cuando se describen o reivindican múltiples restos sustituyentes, el compuesto sustituido se puede sustituir independientemente con uno o más de los restos sustituyentes descritos o reivindicados, aislados o en conjunto. Por independientemente sustituido se entiende que los (dos o más) sustituyentes pueden ser iguales o diferentes.
Según la nomenclatura convencional usada en toda esta descripción, la porción terminal de la cadena lateral designada se describe primero, seguida de la función adyacente hacia el punto de unión. Por ejemplo, un sustituyente alquil C_{1-5} carbonilaminoalquilo C_{1-6} es equivalente a
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Al elegir los compuestos de la presente invención, un experto en la técnica reconocerá que los diversos sustituyentes, es decir X, R^{1}, R^{2}, R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} se deben elegir de conformidad con los principios bien conocidos de conectividad de estructuras químicas.
Los compuestos representativos de la presente invención generalmente muestran afinidad submicromolar por los receptores de integrina \alphav, particularmente los \alphav\beta3 y \alphav\beta5. En consecuencia, los compuestos de la presente invención son útiles para tratar mamíferos que padecen una afección ósea causada o mediada por el aumento de la reabsorción ósea, que necesiten de dicha terapéutica. Se administran cantidades farmacológicamente eficaces de los compuestos, incluso sus sales farmacéuticamente aceptables, al mamífero, a fin inhibir la actividad de los osteoclastos de mamíferos.
Los compuestos de la presente invención se administran en dosis eficaces para antagonizar el receptor \alphav\beta3 cuando se requiere de dicho tratamiento, por ejemplo, en la prevención o tratamiento de la osteoporosis.
Ilustra la invención el procedimiento en el que el efecto antagonizante del receptor de integrina \alphav es un efecto antagonizante de \alphav\beta3. Más particularmente, el efecto antagonizante de \alphav\beta3 se selecciona de la inhibición de: reabsorción ósea, reestenosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad viral, cáncer y crecimiento de tumor metastático. En una forma de realización del procedimiento, el efecto antagonizante de \alphav\beta3 es la inhibición de la reabsorción ósea.
Otro ejemplo de la invención es el procedimiento en el que el efecto antagonizante del receptor de integrina \alphav es un efecto antagonizante de \alphav\beta5. Más específicamente, el efecto antagonizante de \alphav\beta5 se selecciona de inhibición de la reestenosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, cáncer y crecimiento de tumor metastático.
También ilustra la invención el procedimiento en el que el efecto antagonizante del receptor de integrina \alphav es un efecto antagonizante dual de \alphav\beta3/\alphav\beta5. Más particularmente, el efecto antagonizante dual de \alphav\beta3/\alphav\beta5 se selecciona de inhibición de: reabsorción ósea, reestenosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, enfermedad viral, cáncer y crecimiento de tumor metastático.
Más particularmente, ilustra la invención una composición farmacéutica que comprende cualquiera de los compuestos descritos con anterioridad y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Otro ejemplo de la invención es una composición farmacéutica preparada al combinar cualquiera de los compuestos descritos con anterioridad y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Otra ilustración de la invención es un proceso para preparar una composición farmacéutica que comprende combinar cualquiera de los compuestos descritos con anterioridad y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
También ilustra la invención el uso de nuevos compuestos para la preparación de un medicamento para tratar y/o prevenir una afección mediada por el antagonismo de un receptor de integrina \alphav en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos antes descritos. De preferencia, la afección se selecciona de reabsorción ósea, osteoporosis, reestenosis, retinopatía diabética, degeneración macular, angiogénesis, aterosclerosis, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad viral, cáncer, crecimiento de tumor y metástasis. Con mayor preferencia, la afección se selecciona de osteoporosis y cáncer. Con mayor preferencia aún, la afección es la osteoporosis.
Un ejemplo más específico de la invención es el uso de los nuevos compuestos para la preparación de un medicamento para producir un efecto antagonizante de integrina \alphav en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas con anterioridad. De preferencia, el efecto antagonizante de integrina \alphav es un efecto antagonizante de \alphav\beta3; más específicamente, el efecto antagonizante de \alphav\beta3 se selecciona de inhibición de la reabsorción ósea, inhibición de la reestenosis, inhibición de la aterosclerosis, inhibición de la angiogénesis, inhibición de la retinopatía diabética, inhibición de la degeneración macular, inhibición de la inflamación, inhibición de la enfermedad viral e inhibición del cáncer o del crecimiento de tumor metastático. Con mayor preferencia, el efecto antagonizante de \alphav\beta3 es la inhibición de la reabsorción ósea. Como alternativa, el efecto antagonizante de integrina \alphav es un efecto antagonizante de \alphav\beta5 o un efecto antagonizante dual de \alphav\beta3/\alphav\beta5. Los ejemplos de efectos antagonizantes de \alphav\beta5 son la inhibición de la reestenosis, aterosclerosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, enfermedad viral, cáncer y crecimiento de tumor metastático.
Son ejemplos adicionales de la invención el uso de los nuevos novel compuestos para la preparación de un medicamento para inhibir la reabsorción ósea y para tratar y/o prevenir la osteoporosis en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas con anterioridad.
Ilustraciones adicionales de la invención son el uso de los nuevos compuestos para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la hipercalcemia de enfermedades malignas, osteopenia debida a metástasis óseas, enfermedad periodontal, hiperparatiroidismo, erosiones periarticulares en artritis reumatoide, enfermedad de Paget, osteopenia inducida por inmovilización, y tratamiento con glucocorticoides en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de cualquiera de los compuestos o cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas con anterioridad.
Ejemplos más particulares de la invención son el uso de cualquiera de los compuestos descritos con anterioridad en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de la osteoporosis en un mamífero que lo necesite. Aún otros ejemplos de la invención son el uso de los compuestos descritos con anterioridad en la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o prevención de la reabsorción ósea, crecimiento de metástasis de tumor, cáncer, reestenosis, aterosclerosis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad viral y/o angiogénesis.
También son ejemplos de la invención las composiciones que además comprenden un ingrediente activo seleccionado del grupo constituido por
a) un bisfosfonato orgánico o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables,
b) un modulador del receptor de estrógenos,
c) un modulador del receptor de andrógenos,
d) un agente citotóxico/antiproliferativo,
e) un inhibidor de la metaloproteinasa de matriz,
f) un inhibidor de factores de crecimiento derivados de la epidermis, derivados de fibroblastos o derivados de plaquetas,
g) un antagonista de receptores VEGF,
h) un anticuerpo de un factor de crecimiento o un receptor del factor de crecimiento,
i) un inhibidor de Flk-1/KDR, Flt-1, Tck/Tie-2 o Tie-1,
j) un inhibidor de catepsina K,
k) un secretagogo de la hormona de crecimiento,
l) un inhibidor de ATPasa de protón de osteoclastos,
m) un inhibidor del activador de plasminógeno de uroquinasa (u-PA)
n) una proteína de fusión de interleuquina 2 de anticuerpos específicos de tumores,
o) un inhibidor de HMG-CoA reductasa, y
p) un inhibidor de la farnesil transferasa o un inhibidor de la geranilgeranil transferasa o un inhibidor dual de farnesil/geranilgeranil transferasa, y
q) un análogo de la hormona paratiroidea (PTH);
y sus mezclas.
(véase B. Millauer et al., "Dominant-Negative Inhibition of Flk-1 Supresses the Growth of Many Tumor Types In Vivo", Cancer Research, 56, 1615-1620 (1996), que se incorpora en la presente en su totalidad como referencia).
Con preferencia, el ingrediente activo se selecciona del grupo constituido por:
a) un bisfosfonato orgánico o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables,
b) un modulador del receptor de estrógenos,
c) un modulador del receptor de andrógenos,
d) un inhibidor de ATPasa de protón de osteoclastos,
e) un análogo de la hormona paratiroidea (PTH) y
f) un inhibidor de catepsina K;
y sus mezclas.
Los ejemplos no limitantes de dichos bisfosfonatos incluyen alendronato, etidronato, pamidronato, risedronato, ibandronato y sus sales y ésteres farmacéuticamente aceptables. Un bisfosfonato particularmente preferido es alendronato, especialmente alendronato monosódico trihidratado.
Los ejemplos no limitantes de moduladores de receptores de estrógeno incluyen estrógeno, progesterona, estradiol, droloxifeno, raloxifeno y tamoxifeno.
Los ejemplos no limitantes de agentes citotóxicos/antiproliferativos son taxol, vincristina, vinblastina y doxorrubicina.
La catepsina K, antes denominada catepsina 02, es una cisteína proteasa descrita en la publicación de solicitud internacional PCT N.º WO 96/13523, publicada el 9 de mayo de 1996; la patente de los Estados Unidos N.º 5.501.969, otorgada el 3 de marzo de 1996; y la patente de los Estados Unidos N.º 5.736.357, otorgada el 7 de abril de 1998, todas las cuales se incorporan como referencia en la presente en su totalidad. Las cisteína proteasas, específicamente las catepsinas, están relacionadas con numerosas afecciones, tales como metástasis de tumores, inflamación, artritis y remodelado óseo. Con pH ácido, las catepsinas pueden degradar el colágeno de tipo I. Los inhibidores de catepsina proteasas pueden inhibir la reabsorción ósea osteoclástica por inhibición de la degradación de fibras de colágeno, y en consecuencia son útiles para el tratamiento de enfermedades con reabsorción ósea, por ejemplo osteoporosis.
Se descubrió que los miembros de la clase de inhibidores de HMG-CoA-reductasa denominados "estatinas" inducen el crecimiento de hueso nuevo, en reemplazo de la masa ósea perdida como consecuencia de osteoporosis (véase The Wall Street Journal, viernes 3 de diciembre de 1999, p. B1). En consecuencia, las estatinas son promisorias para el tratamiento de la reabsorción ósea. Los ejemplos no limitantes de estatinas son lovastatina, simvastatina, atorvastatina y pravastatina.
Se han presentado evidencias sobre un papel esencial del receptor de uroquinasa-uroquinasa (u-PA-u-PAR) en la angiogénesis, invasión tumoral, inflamación y remodelado de la matriz durante la cicatrización de heridas y el desarrollo [véase Y. Koshelnick et al., "Mechanisms of signaling through Urokinase Receptor and the Cellular Response", Thrombosis and Haemostasis 82: 305-311 (1999) y F. Blasi, "Proteolysis, Cell Adhesion, Chemotaxis, and Invasiveness Are Regulated by the u-PA-u-PAR-PAI-1 System", Thrombosis and Haemostasis 82: 298-304 (1999)). En consecuencia, los antagonistas específicos de la unión de u-PA a u-PAR inhiben la activación de plasminógeno en la superficie celular, el crecimiento tumoral y la angiogénesis en modelos in vitro e in vivo.
H. N. Lode y colaboradores observaron en PNAS USA 96: 1591-1596 (1999) efectos sinérgicos entre un antagonista antiangiogénico de integrina \alphav y una proteína de fusión de citoquina (interleuquina-2) de anticuerpo específico de tumor en la erradicación de metástasis de tumor espontáneas. Sus resultados sugirieron que esta combinación podría ser útil para el tratamiento del cáncer y del crecimiento de tumor metastático.
Se ha informado que la ATPasa protónica que se encuentra en la membrana apical del osteoclasto desempeña un papel significativo en el proceso de reabsorción ósea. En consecuencia, esta bomba de protones representa una diana atractiva para el diseño de inhibidores de la reabsorción ósea que son potencialmente útiles para el tratamiento y la prevención de la osteoporosis y enfermedades metabólicas relacionadas (véase C. Farina et al., "Selective inhibitors of the osteoclast vacuolar proton ATPase as novel bone antiresorptive agents", DDT, 4: 163-172 (1999)).
Se han presentado evidencias de que los esteroides androgénicos desempeñan un papel fisiológico en el desarrollo de la masa ósea en hombres y mujeres, y que los andrógenos actúan directamente sobre el hueso. Se demostró que existen receptores de andrógeno en líneas celulares del tipo de los osteoblastos humanos y que los andrógenos estimulan directamente la proliferación y la diferenciación de células óseas. Para el análisis, se refiere a S. R. Davis, "The therapeutic use of androgens in women", J. Steroid Biochem. Mol. Biol., 69: 177-184 (1999) y K. A. Hansen y S.P.T. Tho, "Androgens and Bone Health", Seminars in Reproductive Endocrinology, 16: 129-134 (1998). En consecuencia, los moduladores de receptores de andrógenos pueden ser útiles para el tratamiento y la prevención de la pérdida ósea en mujeres.
Se ha demostrado que el factor angiogénico VEGF estimula la actividad de reabsorción ósea de osteoclastos aislados maduros de conejo a través de la unión a sus receptores en los osteoclastos (véase M. Nakagawa et al., "Vascular endothelial growth factor (VEGF) directly enhances osteoclastic bone resorption and survival of mature osteoclasts", FEBS Letters, 473: 161-164 (2000)). En consecuencia, el desarrollo de antagonistas de VEGF que se unen a los receptores de osteoclastos, por ejemplo KDR/Flk-1 y Flt-1, puede proporcionar otro enfoque para el tratamiento o la prevención de la reabsorción ósea.
Los activadores del receptor \gamma activado por el proliferador de peroxisomas (PPAR\gamma), por ejemplo las tiazolidindionas (TZD), inhiben la formación de células del tipo de los osteoclastos y la reabsorción ósea in vitro. Los resultados informados por R. Okazaki et al. en Endocrinology, 140, p. 5060-5065, (1999) indican un mecanismo local en las células de la médula ósea, además de uno sistémico sobre el metabolismo de la glucosa. Los ejemplos no limitantes de activadores de PPAR\gamma incluyen troglitazona, pioglitazona, rosiglitazona y BRL 49653.
Se ha sugerido en la técnica el uso de hormona paratiroidea (PTH) para el tratamiento de la osteoporosis. Se descubrió que PTH aumenta la actividad de los osteoblastos, las células que forman el hueso, por lo que promueven la síntesis de hueso nuevo (Modern Drug Discovery, Vol. 3, No. 8, 2000). En estudios informados en el Primer Congreso Mundial de Osteoporosis celebrado en Chicago en junio de 2000, las mujeres con terapia combinada de PTH-estrógeno exhibieron un 12,8% de aumento de la masa ósea espinal y un 4,4% de aumento en la masa total de cadera. Otro estudio presentado en el mismo congreso demostró que PTH podía incrementar el tamaño óseo, además de su densidad. Un estudio clínico sobre el efecto del fragmento 1-34 de la hormona paratiroidea humana [hPTH(1-34)) en mujeres osteoporósicas posmenopáusicas dio como resultado \geq65% de reducción de fracturas espinales y un 54% de reducción de fracturas no vertebrales, tras una mediana de 22 meses de tratamiento [véase J. M. Hock, Bone, 27: 467-469 (2000) y S. Mohan, et al., Bone, 27: 471-478 (2000), y las referencias allí citadas]. En consecuencia, PTH y sus fragmentos, por ejemplo hPTH (1-34), pueden demostrar ser eficaces en el tratamiento de la osteoporosis solos o en combinación con otros agentes, por ejemplo los antagonistas de integrina \alphav\beta3 de la presente invención.
La presente invención también está dirigida a combinaciones de los compuestos de la presente invención con uno o más agentes de utilidad en la prevención o tratamiento de la osteoporosis. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención se pueden administrar eficazmente en combinación con cantidades eficaces de otros agentes tales como bisfosfonato orgánico, un modulador del receptor de estrógeno, un modulador del receptor de andrógeno, un inhibidor de catepsina K, un inhibidor de la HMG-CoA-reductasa, un activador de PPAR\gamma, un antagonista del receptor de VEGF, un inhibidor de la ATPasa de protón de osteoclastos o un análogo de PTH.
Ilustraciones adicionales de la invención son el uso de los nuevos compuestos para la preparación de un medicamento para tratar el cáncer o crecimiento de tumor metastático en un mamífero que lo necesite, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito con anterioridad y uno o más agentes conocidos por ser citotóxicos/antiproliferativos. Además, los compuestos de la presente invención se pueden administrar en combinación con radioterapia para tratar el cáncer y crecimiento de tumor metastático.
Además, los compuestos antagonistas de integrina \alphav\beta3 de la presente invención se pueden administrar eficazmente en combinación con un secretagogo de la hormona de crecimiento para el tratamiento terapéutico o preventivo de trastornos del metabolismo de calcio o fosfato y enfermedades asociadas. Estas enfermedades incluyen afecciones que se pueden beneficiar de una reducción de la reabsorción ósea. La reducción de la reabsorción ósea debería mejorar el equilibrio entre reabsorción y formación, reducir la pérdida ósea o dar como resultado aumento del hueso. La reducción de la reabsorción ósea puede aliviar el dolor asociado con lesiones osteolíticas y reducir la incidencia y/o el crecimiento de dichas lesiones. Estas enfermedades incluyen: osteoporosis (incluso deficiencia de estrógeno, inmovilización, inducida por glucocorticoides y senil), osteodistrofia, enfermedad de Paget, miositis osificante, enfermedad de Bechterew, hipercalcemia maligna, enfermedad metastática del hueso, enfermedad periodontal, colelitiasis, nefrolitiasis, urolitiasis, cálculo urinario, endurecimiento de las arterias (esclerosis), artritis, bursitis, neuritis y tetania. El aumento de la reabsorción ósea puede estar acompañado de concentraciones patológicamente elevadas de calcio y fosfato en plasma, que se podrían aliviar con este tratamiento. De modo similar, la presente invención sería útil para aumentar la masa ósea en pacientes con deficiencia de hormona de crecimiento. En consecuencia, las combinaciones preferidas son tratamientos simultáneos o alternantes con un antagonista del receptor \alphav\beta3 de la presente invención y un secretagogo de la hormona de crecimiento, que opcionalmente incluye un tercer componente que comprende un bisfosfonato orgánico, de preferencia alendronato monosódico trihidratado.
De acuerdo con el procedimiento de la presente invención, los componentes individuales de la combinación se pueden administrar por separado en distintos momentos durante el curso de la terapéutica o al mismo tiempo en formas combinadas divididas o únicas. En consecuencia, se debe comprender que la presente invención abarca todos estos regímenes de tratamiento simultáneo o alternante, y el término "administrar" se debe interpretar en consecuencia. Se debe entender que el alcance de las combinaciones de los compuestos de la presente invención con otros agentes útiles para tratar afecciones mediadas por integrinas incluye en principio cualquier combinación con cualquier composición farmacéutica de utilidad para tratar la osteoporosis.
Tal como se usa en la presente, el término "composición" pretende abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas, además de cualquier producto que sea el resultado, directo o indirecto, de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas.
Los compuestos de la presente invención se pueden administrar en formas de dosificación oral tales como comprimidos, cápsulas (cada una de las cuales incluye formulaciones de liberación sostenida o de liberación controlada), píldoras, polvos, gránulos, elixires, tinturas, suspensiones, jarabes y emulsiones. De modo similar, también se pueden administrar en forma intravenosa (bolo o infusión), intraperitoneal, tópica (por ejemplo, gotas oculares), subcutánea, intramuscular o transdérmica (por ejemplo, parche), todas formas de utilización bien conocidas por los expertos en la técnica farmacéutica. Una cantidad eficaz pero no tóxica del compuesto deseado puede ser empleada como antagonista de \alphav\beta3.
El régimen de dosificación que utiliza los compuestos de la presente invención se selecciona de acuerdo con diversos factores que incluyen tipo, especie, edad, peso, sexo y condición médica del paciente; la gravedad de la afección por tratar; la vía de administración; la función renal y hepática del paciente y el compuesto particular o su sal empleados. Un médico, veterinario o clínico con experiencia médica podrá determinar con facilidad y prescribir la cantidad eficaz del fármaco requerido para prevenir, oponerse o detener el progreso de la afección.
Las dosificaciones orales de la presente invención, usadas para los efectos indicados, variarán entre aproximadamente 0,01 mg por kg de peso corporal por día (mg/kg/día) hasta aproximadamente 100 mg/kg/día, de preferencia 0,01 a 10 mg/kg/día y con mayor preferencia 0,1 a 5,0 mg/kg/día. Para la administración oral, de preferencia se proveen composiciones en la forma de comprimidos que contienen 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100 y 500 miligramos del ingrediente activo para el ajuste sintomático de la dosificación según el paciente a tratar. Generalmente, un medicamento contiene de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 500 mg del ingrediente activo, de preferencia de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg de ingrediente activo. Por vía intravenosa, las dosis de mayor preferencia varían de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg/kg/minuto en una infusión de velocidad constante. Ventajosamente, los compuestos de la presente invención se pueden administrar en una única dosis diaria, o la dosificación diaria total se puede administrar en dosis divididas de dos, tres o cuatro veces por día. Además, los compuestos de preferencia para la presente invención se pueden administrar en forma intranasal mediante el uso tópico de vehículos intranasales adecuados, o mediante vías transdérmicas, que usan las formas de parches cutáneos transdérmicos bien conocidas por los expertos en la técnica. Para ser administrada en la forma de un sistema de distribución transdérmico, la forma de dosificación de la administración obviamente será continua en lugar de intermitente, durante el régimen de dosificación.
En los procedimientos de la presente invención, los compuestos de la presente descritos en detalle pueden formar el ingrediente activo, y generalmente se administran mezclados con diluyentes, excipientes o vehículos farmacéuticos adecuados (referidos en conjunto en la presente como materiales "vehículo") seleccionados de manera adecuada respecto de la forma de administración prevista, es decir, comprimidos, cápsulas, elixires, jarabes orales y similares, y concordante con las prácticas farmacéuticas convencionales.
Por ejemplo, para la administración oral en la forma de un comprimido o cápsula, el componente de fármaco activo se puede combinar con un vehículo inerte oral, no tóxico, farmacéuticamente aceptable, tales como lactosa, almidón, sacarosa, glucosa, metilcelulosa, estearato de magnesio, difosfato dicálcico, sulfato de calcio, manitol, sorbitol, y similares; para la administración oral en forma líquida, los componentes de fármaco oral se pueden combinar con cualquier vehículo inerte oral, no tóxico, farmacéuticamente aceptable tales como etanol, glicerol, agua, y similares. Además, cuando se desee o sea necesario, también se pueden incorporar ligantes, lubricantes, disgregantes y colorantes adecuados a la mezcla. Los ligantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales tales como glucosa o beta-lactosa, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como goma arábiga, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol, ceras, y similares. Los lubricantes usados en estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, estearato de sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, y similares. Los disgregantes incluyen, sin limitación, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de xantano, y similares.
Los compuestos de la presente invención también se pueden administrar en la forma de sistemas de distribución de liposomas, por ejemplo, pequeñas vesículas unilaminares, grandes vesículas unilaminares y vesículas multilaminares. Los liposomas se pueden formar a partir de diversos fosfolípidos, por ejemplo colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.
Los compuestos de la presente invención también se pueden proveer mediante el uso de anticuerpos monoclonales como vehículos individuales a los que se acoplan las moléculas del compuesto. Los compuestos de la presente invención también se pueden acoplar con polímeros solubles como vehículos de fármacos dirigidos. Dichos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamida-fenol, polihidroxi-etilaspartamida-fenol o poli(óxido de etileno)-polilisina sustituidos con restos de palmitoílo. Además, los compuestos de la presente invención se pueden acoplar a una clase de polímeros biodegradables de utilidad para obtener la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, poli(ácido láctico), poli (ácido glicólico), copolímeros de poli(ácido láctico) y poli (ácido glicólico), poliepsilon-caprolactona, poli (ácido hidroxibutírico), poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros en bloque de hidrogeles anfipáticos o reticulados.
En los Esquemas y Ejemplos siguientes, diversos símbolos de reactivos y abreviaturas tienen los siguientes significados:
AcOH: ácido acético
Ar: argón
BOC(Boc): t-butiloxicarbonilo
CBZ(Cbz): carbobenciloxi o benciloxicarbonilo
CH_{2}Cl_{2}: cloruro de metileno
CH_{3}CN: acetonitrilo
CHCl_{3}: cloroformo
DAST: trifluoruro de (dietilamino)azufre
DIPEA: diisopropiletilamina
DMAP: 4-dimetilaminopiridina
DME: 1,2-dimetiloxietano
DMF: N,N-dimetilformamida
DMSO: dimetilsulfóxido
EtOAc: acetato de etilo
EtOH: etanol
HOAc: ácido acético
HPLC: cromatografía líquida de alta resolución
IBCF: isobutilcloroformiato
K_{2}CO_{3}: carbonato de potasio
LDA: diisopropilamida de litio
MeOH: metanol
MgSO_{4}: sulfato de magnesio
MNNG: 1,1-metil-3-nitro-1-nitrosoguanidina
NEt_{3}: trietilamina
NMM: N-metilmorfolina
Pd(PPh_{3})_{2}Cl_{2}: diclorobis(trifenilfosfina)paladio (II)
Pd/C: paladio sobre catalizador de carbono activado
Ph: fenilo
POCl_{3}: oxicloruro de fósforo
PtO_{2}: óxido de platino
pTSA: ácido p-toluensulfónico
TEA: trietilamina
TFA: ácido trifluoroacético
THF: tetrahidrofurano
TLC: cromatografía en capa fina
TMS: trimetilsililo.
Los compuestos gem-difluorometileno de la presente invención se pueden preparar por fluoración nucleofílica de sus precursores cetonas (para una revisión, véase Tozer, M. J.; Herpin, T. F., Tetrahedron, 52 (1996); 8619-8683). Entre los agentes fluorantes que se pueden usar para obtener la conversión deseada, se cuentan tetrafluoruro de azufre, tetrafluoruro de selenio, tetrafluoruro de fenilazufre, hexafluoruro de molibdeno y trifluoruro de (dietilamino)azufre (DAST). El reactivo más comúnmente usado de los anteriores es DAST (Boulton, K. y Coss, B. E., J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, (1979); 1354), y la reacción se realiza en un disolvente adecuado, por ejemplo diclorometano, cloroformo, tetracloruro de carbono, éter dietílico, THF, benceno y tolueno. Los sustitutos más térmicamente estables de DAST incluyen morfo-DAST (Messina, P. A.; Mange, K. C.; Middleton, W. J., J. Fluorine Chem., 42 (1989), 137-143) y trifluoruro de bis(2-metoxietil)aminoazufre (Lal, G. S.; et al., Chem. Commun. (1999), 215-216. Como alternativa, los compuestos gem-difluoro se pueden preparar a partir de la cetona por formación del correspondiente 1,3-ditiolano, seguido de reacción con 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoína y poli(fluoruro de hidrógeno) de piridinio (HF-piridina) en un disolvente tal como diclorometano (Sondej, S. C. y Katzenellenbogen, J. A., J. Org. Chem., 51 (1986), 3508-3513). Un procedimiento adicional para efectuar la transformación de ceto a difluorometileno incluye la conversión de la cetona en su derivado cetoxima y la posterior reacción con tetrafluoroborato de nitrosonio y HF-piridina, tal como describen G. Olah y colaboradores en Synlett., 1994, 425-426.
Los cetosustratos para la reacción de fluoración se preparan de acuerdo con los procedimientos mostrados en los Esquemas y detallados en los Ejemplos acompañantes. Las vías de síntesis de las cetonas también han sido descritas en una publicación de patente internacional.
Los siguientes Ejemplos son ilustrativos de los compuestos de mayor preferencia de la presente invención. Sin embargo, no se deben interpretar como formadores del único género que se considera de la invención. Los Ejemplos también ilustran detalles para la preparación de los compuestos de la presente invención. Los expertos en la técnica comprenderán con facilidad que se pueden usar variaciones conocidas de las condiciones y procesos de los siguientes procedimientos para preparar estos compuestos. A menos que se establezca otra cosa, todas las operaciones se realizaron a temperatura ambiente, y todas las temperaturas están en grados Celsius.
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Esquema 1
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Esquema 1 (continuación)
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Esquema 1 (continuación)
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Ejemplo 1 Ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (1-12a)
Etapa A
Éster metílico del ácido 6-oxo-heptanoico (1-2)
A una mezcla rápidamente agitada de éter dietílico (175 mL) y 40% de KOH (52 mL) a 0ºC se añadió MNNG (15,4 g, 105 mmol). La mezcla se agitó durante 10 minutos. La capa etérea se transfirió a una solución de ácido 6-oxo-heptanoico 1-1 (5,0 g, 34,68 mmol) y CH_{2}Cl_{2} a 0ºC. La solución se purgó con argón durante 30 minutos y luego se concentró. Por cromatografía de resolución rápida (sílice, 30-50% EtOAc/hexanos) se obtuvo éster 1-2 como un aceite transparente.
TLC R_{f} = 0,88 (sílice, EtOAc).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 3,67 (s, 3H), 2,46 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 2,14 (s, 3H), 1,62 (m, 4H).
Etapa B
Éster metílico del ácido 5-[1,8]-naftiridin-2-il-pentanoico (1-4)
Una mezcla de 1-2 (1,4 g, 9,04 mmol, 1-3, 2-amino-3-formilpiridina (552 mg, 4,52 mmol) (para la preparación, véase: J. Org. Chem., 1983, 48, 3401), y prolina (260 mg, 2,26 mmol) en etanol absoluto (23 mL) se calentó a reflujo durante 18 h. Tras la extracción por evaporación del disolvente, el residuo se sometió a cromatografía (gel de sílice, 80% de acetato de etilo/hexano, luego acetato de etilo) para obtener éster 1-4 como un sólido blanco.
TLC R_{f}= 0,38 (sílice, EtOAc).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,08 (m, 1H), 8,16 (d, J=8,0 Hz, 1H), 8,10 (d, J=8,3 Hz, 1H), 7,45 (m, 1H), 7,39 (d, J=8,3 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,08 (t, J=7,6 Hz, 2H), 2,39 (t, J=7,6 Hz, 2H), 1,94 (m, 2H), 1,78 (m, 2H).
Etapa C
Éster metílico del ácido 5-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-pentanoico (1-5)
Una mezcla de 1-4 (630 mg, 2,58 mmol) y 10% de Pd/carbono (95 mg) en EtOH (25 mL) se agitó bajo una campana de hidrógeno durante 72 h. Después de la filtración y la extracción por evaporación del disolvente, se sometió el residuo a cromatografía (gel de sílice, 70% de acetato de etilo/hexano) para obtener 1-5 como un aceite incoloro.
TLC R_{f} = 0,58 (sílice, acetato de etilo).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,05 (d, J=7,3 Hz, 1H), 6,34 (d, J=7,3 Hz, 1H), 4,72 (s, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,40 (m, 2H), 2,69 (t, J=6,3 Hz, 2H), 2,53 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,66 (m, 4H).
Etapa D
Éster dimetílico del ácido 2-oxo-6-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-hexilfosfónico (1-6)
Una solución de metilfosfonato de dimetilo (13,20 g, 106,5 mmol) en THF anhidro (165 ml) se enfrió a -78ºC y se trató gota a gota con 2,5 M de n-BuLi (42,3 mL). Después de agitar a -78ºC durante 45 min, se agregó una solución del éster 1-5 (6,6 g, 26,6 mmol) en THF (35 mL) gota a gota y la solución obtenida se agitó durante 30 min a -78ºC, se extinguió con NH_{4}Cl sat. (100 ml), luego se extrajo con acetato de etilo (3 X 150 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se concentraron para dar un aceite amarillo. Por cromatografía en gel de sílice (5% MeOH/CH_{2}Cl_{2}) se obtuvo 1-6 como un aceite amarillo.
R_{f} (sílice, 5% MeOH/CH_{2}Cl_{2})= 0,20.
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,05 (d, J=7,3 Hz, 1 H), 6,34 (d, J=7,32 Hz, 1 H), 4,80 (a, s, 1 H), 3,81 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,4 (m, 2H), 3,08 (d, J=22,7 Hz), 2,7-2,5 (m, 6 H), 1,91 (m, 2H), 1,68 (m, 4H).
Etapa E
1-(2-metil-pirimidin-5-il)-7-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-hept-1-en-3-ona (1-7)
A una solución de 1-6 (5,5 g, 16,2 mmol), 5-formil-2-metilpirimidina (1-6a, 1,8 g, 14,7 mmol; para la preparación, véase J. Heterocyclic Chem., 28, 1281 (1991)) en 40 mL de DMF se añadió K_{2}CO_{3} (4,07 g, 32 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 h, y se concentró hasta obtener una pasta. El residuo se diluyó con agua, se extrajo con acetato de etilo y se secó sobre sulfato de magnesio. Después de la concentración, el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (70 cloroformo/25 acetato de etilo/5 metanol) para obtener 1-7 como un sólido
blanco.
R_{f} = 0,20 (sílice, 70 cloroformo /20 acetato de etilo /10 metanol).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,80 (s, 2H), 7,44 (d, 1H, J=16 Hz), 7,05 (d, 1 H, J=7 Hz), 6,81 (d, 1 H, J=16 Hz), 6,35 (d, 1 H, J=7 Hz), 4,72 (s a, 1H), 3,39 (m, 2H), 2,69 (s, 3H), 2,64 (m, 4H), 2,58 (m, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,74 (m, 4H).
Etapa F
Éster dietílico del ácido 2-[1(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-3-oxo-7-(5,6,7,8-tetrahidro[1,8]naftiridin-2-il)-heptil]-malónico(1-8a)
A una solución de 1-7 (1,0 g, 2,97 mmol) y malonato de dietilo (0,717 mL, 4,5 mmol) en etanol (20 mL) y THF (20 mL) se añadió etóxido de sodio (0,1 mL de una solución al 30% p/p en etanol). Después de 4 h, la mezcla (1.8) se concentró y el residuo se purificó en una columna de 5 x 50 cm de Chiralcel AD (flujo = 80 mL/min, A:B = 30:70)
(A = 0,1% dietilamina/hexano, B =2-propanol). El producto 1-8a eluyó a los 15 minutos; su enantiómero, 1-8b, eluyó a los 26 minutos.
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,53 (s, 2H), 7,02 (d, 1H, J=7 Hz), 6,28 (d, 1H, J=7 Hz), 4,07 (s a, 1H), 4,18 (m, 2H), 4,02 (m, 2H), 3,92 (m, 1 H), 3,72 (m, 2H), 3,39 (m, 2H), 2,94 (m, 2H), 2,64 (s, 3H), 2,42 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 1,89 (m, 2H), 1,60 (m, 4H), 1,26 (m, 4H), 1,19 (1, 3H, J= 3 Hz).
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Etapa G
Éster etílico del ácido 3(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (1-10a)
A una solución de 1-8a (0,530 g, 1,07 mmol) en etanol (5 mL) se añadió NaOH (1,12 mL de solución 1N en agua, 1,12 mmol). Después de agitar 40ºC durante 30 minutos, la mezcla se trató con HCl (1,12 mL de solución 1N en agua, 1,12 mmol) y se concentro. El residuo se suspendió en tolueno (20 mL) y se calentó a reflujo. Después de 1 h, por evaporación de los disolventes se obtuvo 1-10a como un aceite amarillo.
R_{f} = 0,32 (sílice, 70 cloroformo /20 acetato de etilo /10 metanol).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,54 (s, 2H), 7,04 (d, 1H, J=7 Hz), 6,31 (d, 1H, J=7 Hz), 4,86 (s a, 1H), 4,04 (q, 2H, J=3 Hz), 3,63 (m, 1 H), 3,40 (m, 2H), 2,94-2,48 (m, 9H), 2,37 (m, 4H), 1,89 (m, 2H), 1,57 (m, 4H), 1,19 (t, 3H, J= 3 Hz).
Etapa H
Éster etílico del ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (1-11a)
A una solución de la cetona 1-10a (0,7 4 g, 1,8 mmol) en diclorometano anhidro (5 mL) bajo N_{2} se añadió ZnF_{2} (0,72 g, 7,0 mmol) seguido de DAST (1,4 g, 8,7 mmol). La suspensión amarillenta se calentó a 50ºC durante la noche. Luego se añadió DAST adicional (2,0 g, 12,4 mmol) a la suspensión marrón y se continuó el calentamiento durante 24 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC y se añadieron lentamente 30 mL de solución saturada de NaHCO_{3} con agitación. El baño de hielo se retiró después de 5 minutos y la mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 30 min. Esta solución se dividió entre CHCl_{3} y solución saturada de NaHCO_{3}. La fase acuosa se volvió a extraer con CHCl_{3}. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO_{4}, luego se concentraron hasta obtener un aceite marrón. Por cromatografía de resolución rápida (sílice; 100% EtOAc hasta 85% EtOAc/15% MeOH durante 20 min.) y concentración se obtuvo 1-11a como un aceite marrón.
R_{f} (sílice, EtOAc/MeOH 10:1) = 0,3
Etapa I
Ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (1-12a)
A una solución del éster etílico 1-11a (0,13 g, 0,29 mmol) en EtOH (1,5 mL) bajo N_{2} se añadió una solución 1,0 N de NaOH (0,44 mL). La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Después de añadir una solución 1,0 N de HCl (0,44 mL) se concentró la mezcla de reacción. Por cromatografía de resolución rápida (sílice; 100% a 20% de EtOAc-0 a 80% 20:1:1 EtOAc/N_{4}OH/H_{2}O) y concentración se obtuvo 1-12a como un sólido marrón.
^{1}H RMN (d_{6}-DMSO) \delta 8,62 (s, 2H), \delta 7,01 (d, J=7,3 Hz, 1H), \delta 6,31 (s, 1H), \delta 6,23 (d, J=7,3 Hz, 1H), \delta 3,27 (m), \delta 3,22 (t a, J=5,3 Hz, 2H), \delta 2,70-2,49 (m), \delta 2,41-2,26 (m, 4H), \delta 1,82-1,71 (m, 4H), \delta 1,54 (m, 2H), \delta 1,33 (m, 2H).
MS (M^{+} + H) 419,2224.
Ejemplo 2 Ácido 5,5-difluoro-3(R o S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (1-12b)
Se obtiene el enantiómero 1-12b a partir de 1-10b por el mismo procedimiento descrito para la preparación de 1-12a en el Ejemplo 1 anterior. El espectro de 400 MHz RMN en d_{6}-DMSO es idéntico al de su enantiómero
1-12a.
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Esquema 2
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Ejemplo 3 Ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico (2-10a)
Etapa A
N-(3-formil-piridin-2-il)-2,2-dimetil-propionamida (2-2)
A una solución enfriada (0ºC) de 2-amino-3-formilpiridina 2-1 (50 g, 409 mmol) en 700 mL de CH_{2}Cl_{2} anhidro se añadió Et_{3}N (80 mL, 532 mmol) en una porción y una solución de cloruro de trimetilacetilo (pivaloílo) (65 mL, 491 mmol) en 50 mL de CH_{2}Cl_{2} gradualmente durante 40 min. La mezcla de reacción se agitó 30 min y se concentró hasta obtener un jarabe, luego se añadieron 200 mL de agua. La mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera y se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron para obtener el producto deseado 2-2 como un sólido.
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 10,85 (s, 1H), 8,70 (s, 1 H), 8,0 (s, 1 H), 7,20 (q, 1 H), 1,30 (s, 9H).
Etapa B
3-ciclopropil-[1,8]naftiridin-2-ol (2-4)
A una solución enfriada (-78ºC) de LDA (2,0 M, 251 mmol) en 600 mL de THF se añadió éster 2-3 (preparado a partir de ácido ciclopropilacético y solución metanólica de HCl, 15 g, 131 mmol) gradualmente durante 30 min. La mezcla de reacción se agitó durante 30 min a -78ºC. Se añadió aldehído 2-2 (22,5 g, 109 mmol) en 40 mL de THF. La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 1 h, luego se calentó a temperatura ambiente durante 1 h y se extinguió la reacción con 200 mL de NH_{4}Cl (sat.). La mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera y se secaron sobre MgSO_{4} y se concentraron para obtener un residuo viscoso que luego se disolvió en 200 mL de HCl 3N. La mezcla se sometió a reflujo a 105ºC durante 24 h. Después de concentrar, el residuo se volcó en 500 mL de agua helada y se detuvo la reacción con K_{2}CO_{3} gradualmente (pH=9) para dar un sólido como producto deseado 2-4, que se filtró y se secó en vacío.
^{1}H RMN (400 MHz, CD_{3}DO): \delta 8,45 (q, 1 H), 7,99 (q, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,23 (q, 1H), 2,14 (m, 1H), 1,01 (m, 2H), 0,78 (m, 2H).
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Etapa C
2-cloro-3-ciclopropil-[1,8]naftiridina(2-5)
Una mezcla de naftiridina 2-4 (14 g, 77 mmol) y 100 mL POCl_{3} y 0,1 mL de DMF se sometió a reflujo a 120ºC durante 3 h y se concentró. El residuo se trató con 300 ml de agua helada y K_{2}CO_{3} sólido hasta pH=9. La mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO_{4}. Después de extraer el disolvente, se obtuvo el compuesto deseado 2-5 como un sólido amarillento.
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 9,00 (q, 1H), 8,10 (q, 1 H), 7,78 (s, 1H), 7,50 (q, 1H), 2,34 (m, 1H), 1,00 (m, 2H), 0,82 (m, 2H).
Etapa D
Éster metílico del ácido 5-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro[1,8]naftiridin-2-il)-pentanoico (2-7)
Una mezcla de naftiridina 2-5 (15,8 g, 77,2 mmol), éster 2-6 (preparado a partir de ácido 4-pentinoico y solución metanólica de HCl, 11,3 g, 100,4 mmol), Cul (0,7 g, 3,9 mmol), 100 ml de Et_{3}N y 100 ml de DMF se desgasificó con cuidado con argón durante 10 min. Luego se añadió Pd(PPh_{3})_{2}Cl_{2} en una porción. La mezcla de reacción se calentó a 53ºC durante 20 h, se enfrió a temperatura ambiente y se detuvo con 500 ml de agua y 100 ml de NaHCO_{3} (sat.). La mezcla acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO_{4}. Después de extraer el disolvente, el residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida en gel de sílice (EtOAc/hexano=1/4 a 100% EtOAc durante 30 min) para dar un aceite, que luego se disolvió en 150 ml de THF y 50 ml de EtOH. Se añadió Et_{3}N (15 ml, 104 mmol) y PtO_{2} (0,7 g). La mezcla se desgasificó con vacío moderado y se sometió a condiciones de campana de hidrógeno durante 6 h. Luego se filtró y se concentró para dar el producto deseado 2-7 como un aceite.
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 6,80 (s, 1H), 4,75 (s, 1H), 3,62 (s, 3H), 3,36 (m, 2H), 2,76 (t, 2H), 2,64 (t, 2H), 2,36 (t, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,78 (m, 5H), 0,86 (m, 2H), 0,50 (m, 2H).
Etapa E
Éster etílico del ácido 3(S o R)-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (2-8a)
Según los procedimientos descritos en el Esquema 1 para la conversión de 1-5 en 1-11a y 1-11b, se prepararon 2-8a y 2-8b a partir de 2-7, ambos como un sólidos. Se realizó la resolución de los enantiómeros por cromatografía quiral del intermedio cetodiéster correspondiente a 1-8.
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}DO): \delta\delta 8,65 (s, 2H), 7,22 (s, 1H), 3,74 (m, 1H), 3,40 (t, 2H), 3,10 (m, 1H), 2,90-2,40 (m, 14 H), 1,95-1,60 (m, 5H), 0,94 (m, 2H), 0,60 (m, 2 H).
Etapa F
Éster etílico del ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico (2-9a)
Una solución de la cetona 2-8a (0,20 g, 0,43 mmol) y DAST (1,0 ml) en un tubo sellado bajo Ar se calentó a 60ºC durante la noche. La solución marrón se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con 10 ml de CH_{2}Cl_{2} y se añadió lentamente a una mezcla en agitación de 80 ml de CH_{2}Cl_{2} y 20 ml de NaHCO saturado y luego se separó. La capa orgánica se lavó con agua y salmuera, luego se secó con MgSO_{4} y se concentró hasta un aceite marrón oscuro. Por cromatografía de resolución rápida (sílice; 90% EtOAc-10% 20:1:1 EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) y concentración se obtuvo 2-9a como un aceite marrón.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}) \delta 8,53 (s, 2 H), 6,84 (s, 1 H), \delta 5,11 (s a, 1 H), 4,05 (q, J = 7,0 Hz, 2 H), 3,51 (m, 1 H), 3,38 (m, 2 H), 2,99 (m, 1 H), \delta 2,72 (m), 2,25 (m, 2 H), 1,63-1,93 (m, 6 H), 1,53 (m, 2 H), 1,16 (t, J = 7,2 Hz, 3 H), 0,85 (m, 2 H), 0,50 (m, 2 H).
MS (M^{+} + H) 487,0.
Etapa G
Ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico (2-1 a)
A una solución del éster etílico 2-9a (0,047 g, 0,097 mmol) en EtOH (1,0 ml) bajo argón se añadió una solución 1,0 N de NaOH (0,15 ml). La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Después de añadir una solución 1,0 N de HCl (0,15 ml), la mezcla de reacción se concentró. Por cromatografía de resolución rápida (sílice; 45% EtOAc-55% 20:1:1 EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) y concentración se obtuvo 2-10a como un sólido tostado.
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO) \delta 8,64 (s,2 H), 6,82 (s, 1 H), 6,45 (s a, 1 H), 3,48-3,17 (m), 2,78-2,56 (m), 2,33 (m, 2 H), 1,91-1,69 (m, 4 H), 1,59 (m, 2 H), 1) 1,41 (m, 2 H), 0,79 (m, 2 H), 0,47 (m, 2 H).
MS (M^{+} + H) 459,2590.
Ejemplo 4 Ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(R o S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico (2-10b)
Se obtiene el enantiómero 2-10b a partir de 2-8b mediante los mismos procedimientos descritos para la preparación de 2-10a en el Ejemplo 3 anterior. Su espectro 400 MHz RMN en d_{6}-DMSO es idéntico al de su enantiómero 2-10a.
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Esquema 3
12 
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13
Ejemplo 5 Ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-5a)
Etapa A
Éster etílico del ácido 3(S o R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-3a)
2-metoxi-pirimidin-5-carboxaldehído (3-1) (Gupton, J.T.; Gall, J.E.; Riesinger, S.W.; Smith, S.A.; Bevirt, K.M.; Sikorski, J.A.; Dahl, M.L.; Arnold, Z., J. Heterocyclic Chem. 1991, 28, 1281) se convirtió en los ceto-diésteres 3-2 según el Esquema 1. Se logró la separación de los enantiómeros de los ceto-diéteres racémicos 3-2 por HPLC (Chiralcel AD; columna de 50x500 mm; 70/20 isopropanol/hexanos/0,1% de dietilamina durante 60 minutos con un caudal de 80,0 mL/min) para obtener dos enantiómeros (R_{T}: 20-29 min y 32-40 min). Por monohidrólisis y descarboxilación de los diésteres 3-2a y 3-2b según el Esquema 1 se obtuvieron los ésteres etílicos 3-3a y 3-3b.
TLC R_{f}: 0,1 (15:15:0,5 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH ac.).
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}DO): \delta 8,50 (s, 2H), 7,41 (d, J=7,2 Hz, 1H), 6,47 (d, J=7,2 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,67 (m, 1H), 3,43 (m, 2H), 3,01 (m, 1 H), 2,76 (m, 3H), 2,50 (m, 6H), 1,96 (m, 2H), 1,62 (m, 4H) ppm.
Etapa B
Éster etílico del ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-4a)
A una solución de la cetona 3-3a (50,1 g, 113,7 mmol) en diclorometano anhidro (50 ml) bajo N_{2} se añadió reactivo DAST (110,0 g, 682,4 mmol). La solución oscura se calentó a 50ºC durante la noche. Con agitación, la mezcla de reacción se agregó lentamente a un matraz de 2 L lleno con hielo. Después de agregar EtOAc (100 mL), la mezcla se basificó a pH 4-5 con 50% de solución de NaOH, luego a pH 8 con NaHCO_{3}. La fase acuosa se extrajo tres veces con éter dietílico. Las fases orgánicas se combinaron, se secaron con MgSO_{4}, y se concentraron hasta un aceite marrón. Por cromatografía de resolución rápida en gel de sílice (100 a 95% de EtOAc-0 a 5% 20:1:1 EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O durante 20 min.) y concentración se obtuvo 3-4a como un aceite amarillento.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}): \delta 8,39 (s, 2 H), \delta 7,06 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), \delta 6,32 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), \delta 4,75 (s a, 1 H), \delta 4,06 (m, 2 H), \delta 3,99 (s, S H), \delta 3,47 (m, 1 H), \delta 3,39 (m, 2 H), \delta 2,78 (dd, J = 16,1, 6,0 Hz, 1 H), \delta 2,69 (t, J = 6,3 Hz, 2 H), \delta 2,59 (dd, J = 15,9, 9,0 Hz, 1 H), \delta 2,52 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), \delta 2,20 (m, 2 H), \delta 1,90 (m, 2 H), \delta 1,79 (m), \delta 1,66 (m, 2 H), \delta 1,48 (m, 2 H), \delta 1,17 (t, J = 7,2 Hz, 3 H).
MS (M^{+} + H) 463,1.
Etapa C
Ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-5a)
A una solución del éster 3-4a (0,11 g, 0,26 mmol) en MeOH (2,0 ml) bajo N_{2} se añadió una solución 1,0 N de NaOH (0,385 mL). La mezcla de reacción se preparó en 6-7 h. Después de añadir una solución 1,0 N de HCl (0,385 ml), la mezcla de reacción se concentró. Por cromatografía de resolución rápida en gel de sílice (100 a 20% EtOAc-0 a 80% 20:1:1 EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O durante 15 min.) y concentración se obtuvo 3-5a como un sólido tostado.
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO): \delta 8,55 (s, 2 H), 7,02 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,31 (s a, 1 H), 6,23 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 3,87 (s, 3 H), 3,31-3,21 (m), 2,73-2,50 (m, 6H), 2,40 (t, J=7,5 Hz, 2 H), 2,35-2,25 (m, 2 H), 1,91-1,74 (m, 4H), 1,55 (m, 2H), 1,33(m, 2H), MS (M^{+} + H) 435,2186.
Ejemplo 6 Ácido 5,5-difluoro-3(R o S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-5b)
El enantiómero 3-5b se obtiene de 3-3b según los mismos procedimientos descritos para la preparación de 3-5a en el Ejemplo 5 anterior. Su espectro 400 MHz RMN en d_{6}-DMSO es idéntico al de su enantiómero 3-5a.
Esquema 4
14
Ejemplo 7 Preparación alternativa de ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-5a)
Etapa A
Éster etílico del ácido 3-(S o R)(2-metoxi-pirimidin-5-il)-4-{2-[4-(5,6,7,8-tetrahidro-1,8-naftiridin-2-il)butil]-1,3-ditiolan-2-il}butanoico (4-1a)
A una mezcla de 3-3a (7,6 g, 17,4 mmol) y 1,2-etanoditiol (17,5 mL, 208,6 mmol) en 25 mL de AcOH se añadió BF_{3}.OEt_{2} (17,5 mL, 138,1 mmol) gota a gota a 0ºC bajo nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 0,5 h, luego a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción se volcó lentamente sobre 300 mL de NaHCO_{3} (sat.) helado y se extrajo con éter dietílico (2 x 200 mL). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. Después de extraer el disolvente, el residuo se purificó por cromatografía de resolución rápida en gel de sílice (100% EtOAc) para dar el producto deseado 4-1a como un aceite.
LC/MS (M + 1) calculado = 517,71; observado = 517,2.
Etapa B
Éster etílico del ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(3-bromo-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (4-2a)
A una suspensión de 1,3-dibromo-5,5-dimetilhidantoína (DBH) (12,9 g, 45,3 mmol) en 50 mL de cloruro de metileno anhidro a -78ºC bajo nitrógeno se añadió HF-piridina (70% HF, 11,3 mL, 49,8 mmol) y 4-1a (10,5 g, 20,4 mmol) en 15 mL de cloruro de metileno anhidro. La mezcla de reacción se agitó a -78ºC durante 15 min, luego se volcó en 350 mL de NaHCO_{3} acuoso saturado helado. La mezcla se agitó a 0ºC durante 0,5 h, luego se extrajo con éter dietílico (2 x 200 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera y se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. Tras extraer el disolvente, el residuo se purificó con cromatografía de resolución rápida en gel de sílice (5% EtOAc/95% Hexanos a 100% EtOAc) para dar el producto deseado 4-2a como un aceite.
LC/MS (M + 1) calculado = 543,4; observado = 543,1.
Etapa C
Éster etílico del ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-4a)
Una mezcla de 4-2a (2,6 g, 4,9 mmol) y níquel Raney (50% en agua, 30 mL) en 50 mL de etanol se agitó a temperatura ambiente durante 48 h y se filtró. Las fases orgánicas se combinaron y se secaron con MgSO_{4}, luego se concentraron hasta obtener un aceite marrón. Por cromatografía de resolución rápida en gel de sílice (100 a 95% EtOAc-0 a 5% 20:1:1 EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O durante 20 min.) y por concentración se obtuvo 3-4a como un aceite amarillento.
^{1}H-RMN (CDCl_{3}): \delta 8,39 (s, 2 H), \delta 7,06 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), \delta 6,32 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), \delta 4,75 (s a, 1 H), \delta 4,06 (m, 2 H), \delta 3,99 (s, 3 H), \delta 3,47 (m, 1 H), \delta 3,39 (m, 2 H), \delta 2,78 (dd, J = 16,1, 6,0 Hz, 1 H), \delta 2,69 (t, J = 6,3 Hz, 2 H), \delta 2,59 (dd, J = 15,9, 9,0 Hz, 1 H), \delta 2,52 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), \delta 2,20 (m, 2 H), \delta 1,90 (m, 2 H), \delta 1,79 (m), \delta 1,66 (m, 2 H), \delta 1,48 (m, 2 H), \delta 1,17 (t, J = 7,2 Hz, 3 H).
MS (M^{+} + H) 463,1.
Etapa D
Ácido 5,5-difluoro-3(S o R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-5a)
A una solución del éster 3-4a (0,11 g, 0,26 mmol) en MeOH (2,0 mL) bajo N_{2} se añadió una solución 1,0 N de NaOH (0,385 mL). La reacción se completó en 6-7 h. Después de añadir una solución 1,0 N de HCl (0,385 mL), la mezcla de reacción se concentró. Por cromatografía de resolución rápida en gel de sílice (100 a 20% EtOAc-0 a 80% 20:1:1 EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O durante 15 min.) y concentración se obtuvo 3-5a como un sólido.
^{1}H-RMN (d_{6}-DMSO): \delta 8,55 (s, 2 H), 7,02 (d, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,31 (s a, 1 H), 6,23 (d, J = 7,1 Hz, 1 H), 3,87 (s, 3 H), 3,31-3,21 (m), 2,73-2,50 (m, 6H), 2,40 (t, J=7,5 Hz, 2H), 2,35-2,25 (m, 2H), 1,91-1,74 (m, 4H), 1,55 (m, 2H), 1,33 (m, 2H).
MS (M^{+} + H) 435,2186.
Ejemplo 8 Preparación alternativa de ácido 5,5-difluoro-3(R o S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (3-5b)
Se obtiene el enantiómero 3-5b de 3-3b a partir del intermedio 1,3-ditiolano 4-1b mediante el mismo procedimiento descrito para la preparación de 3-5a en el Ejemplo 7 anterior.
El espectro ^{1}H 400 MHz RMN en d_{6}-DMSO es idéntico al de su enantiómero 3-5a.
Los siguientes compuestos de cadena fluorada de la presente invención también se preparan de acuerdo con los Esquemas y Ejemplos mostrados con anterioridad por fluoración nucleofílica de los correspondientes intermedios 5 ó 7 ceto e hidrólisis de los ésteres obtenidos:
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(S)-(2-ciclopropil-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(R)-(2-ciclopropil-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 7,7-difluoro-3(S)-(2-metil-piromidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 7,7-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(quinolin-3-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(quinolin-3-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(S)-(6-etoxi-piridin-3-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(R)-(6-etoxi-piridin-3-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(6-metoxi-piridin-3-il)-9-(3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(6-metoxi-piridin-3-il)-9-(3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nona-
noico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-isopropil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-isopropil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8])-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(S)-(2-terc-butil-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(R)-(2-terc-butil-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(S)-(2-etoxi-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(R)-(2-etoxi-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-[quinoxalin-2-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(quinoxalin-2-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido(2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2,3-dihidro-benzofuran-6-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-9-(6-metilamino-piridin-2-il)-3-(pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-9-(6-metilamino-piridin-2-il)-3-(pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 3(S)-(2-etoxi-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(R)-(2-etoxi-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirazin-2-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirazin-2-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirazin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirazin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(6-metoxi-piridazin-3-il)-9-(5,6,7,8]-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(6-metoxi-piridazin-3-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metilamino-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)(2-metilamino-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(3,4-dihidro-2H-1,4-dioxa-5-aza-naftalen-7-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(3,4-dihidro-2H-1,4-dioxa-5-aza-naftalen-7-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(6-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(6-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(S)-(benzofuran-6-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(R)-(benzofuran-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(5-metoxi-piridin-3-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(5-metoxi-piridin-3-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(S)-(2-etoxi-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(R)-(2-etoxi-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(quinolin-3-il)-9-(3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(quinolin-3-il)-9-(3-metil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(S)-(2-etoxi-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 3(R)-(2-etoxi-pirimidin-5-il)-5,5-difluoro-9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(6-metoxi-piridin-3-il)-9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(6-metoxi-piridin-3-il)-9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-dimetilamino-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico y
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-dimetilamino-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico.
Los sustratos 7-ceto para la reacción de fluoración se pueden preparar según el procedimiento mostrado en el Esquema 4 y descrito más adelante para el éster etílico del ácido 3-(2-metilpirimidin-5-il)-7-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (4-12)
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Esquema 4
15
16
Éster etílico del ácido 3-(2-metilpirimidin-5-il)-7-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (4-12)
Etapa A
3-(2-metil-pirimidin-5-il)-propenal(4-2)
A una solución de 4-formil-2-metilpirimidina 4-1, 2 g, 16,4 mmol; para la preparación, véase Smith, S. Q. et al, J. Heterocyclic Chem. 28: 1281 (1991)] en cloruro de metileno (15 mL) se añadió (formilmetileno)trifenilfosforano (5,98 g, 19,6 mmol). La solución se calentó a reflujo durante 4 h, se enfrió a temperatura ambiente y se evaporaron los disolventes. El residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (30% EtOAc/cloroformo a 50 EtOAc/50 cloroformo/5 metanol) para obtener el aldehído 4-2 como un sólido amarillo.
TLC R_{f}=0,39 (70 cloroformo/25 EtOAc / 5 MeOH).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,74 (d, 1H, J=7 Hz), 8,83 (s, 2H), 7,41 (d, 1H, J= 17 Hz), 6,81 (dd, 1H, J= 6 Hz, 15 Hz), 2,77 (s, 3H).
Etapa B
3-(2-metil-pirimidin-5-il)-prop-2-en-1-ol (4-3)
A una suspensión de 4-2 (0,5 g, 3,7 mmol) en MeOH (5 mL) y THF (15 mL) a -78ºC se añadió borohidruro de sodio (0,042 g, 1,11 mmol) en una porción. Después de 5 minutos se eliminó el baño de enfriado y la mezcla se dejó calentar y agitar durante 10 minutos. HCl concentrado (0,3 mL) se añadió gota a gota y el volumen de la mezcla se redujo a 2 mL por evaporación. Tras añadir NaHCO_{3} saturado (10 mL), la mezcla se extrajo con cloroformo, la capa orgánica se secó sobre MgSO_{4}, y los disolventes se evaporaron para obtener alcohol 4-3 como un sólido
blanco.
TLC R_{f}= 0,16 (70 cloroformo / 25 EtOAc / 5 MeOH).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,64 (s, 2H), 6,48 (m, 2H), 4,38 (d, 2H, J= 4 Hz), 2,73 (s, 3H).
Etapa C
Éster etílico del ácido 3-(2-metil-pirimidin-5-il)-pent-4-enoico (4-4)
Una solución de 4-3 (0,49 g, 3,6 mmol), ácido propiónico (10 mL) y trimetilortoformiato (5 mL) se calentó a reflujo durante 18 horas. Por extracción del disolvente por evaporación y una evaporación en tolueno se obtuvo 4-4 como un aceite marrón.
TLC R_{f}=0,725 (sílice, 70/25/5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH)
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,50 (s, 2H), 5,98 (m, 1H), 5,16 (m, 2H), 4,10 (m, 2H), 3,86 (q, J=7 Hz, 1H), 2,7 (m, 5H), 1,29 (m, 3H).
Etapa D
Éster etílico del ácido 5-hidroxi-3-(2-metil-pirimidin-5-il)-pentanoico (4-5)
A una solución con agitación de 4-4 (422 mg, 1,92 mmol) en THF se añadió 5,75 mL de 9-BBN (0,5 M/THF). Después de 18 horas, se añadió una suspensión de NaBO_{3} (2,35 g) y NaHCO_{3} (2,42 g) en H_{2}O (10 mL) y la mezcla se agitó vigorosamente durante 1 hora. La mezcla se extrajo con CHCl_{3}, se lavó con salmuera y se secó sobre MgSO_{4}. Después de extraer el disolvente por evaporación se sometió el residuo a cromatografía (gel de sílice, 3% EtOH/EtOAc) para obtener 4-5 como un aceite transparente.
TLC R_{f} = 0,42 (sílice, 10% EtOH/EtOAc).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,52 (s, 2H), 4,07 (m, 2H), 3,62 (m, 1H), 3,50 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 2,65 (m, 5H), 2,01 (m, 1H), 1,88 (m, 1H), 1,17 (t, J=7 Hz, 3H).
Etapa E
Éster etílico del ácido 3-(2-metil-pirimidin-5-il)-5-oxo-pentanoico (4-6)
A una solución de cloruro de oxalilo (73 \muL, 0,84 mmol) en CH_{2}Cl_{2} a -78ºC se añadió DMSO (80 \muL, 1,0 mmol) gota a gota. Después de cesar la evolución de gas, se añadió 4-5 (100 mg, 0,42 mmol) en CH_{2}Cl_{2}. Después de 30 minutos se retiró el baño enfriador y se añadió NEt_{3} (290 \muL, 2,1 mmol) se añadió. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción se diluyó con CH_{2}Cl_{2} y se lavó con NaHCO_{3} sat. y salmuera, se secó (MgSO_{4}) y se concentró para obtener 4-6 como un aceite amarillo.
TLC R_{f}=0,24 (sílice, 70/20/10 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 9,71 (s, 1 H), 8,55 (s, 2H), 4,06 (m, 2H), 3,71 (m, 1 H), 2,95 (m, 2H), 2,88 a 2,50 (m, 5H), 1,18 (t, J=7 Hz, 3H).
\newpage
Etapa F
Éster etílico del ácido 3-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-acrílico (4-8)
Una solución de 5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-carbaldehído (4-7, 2 g, 12,34 mmol) y (carbetoximetilen)trifenilfosforano (4,3 g, 12,34 mmol) en tolueno (60 mL) se calentó a reflujo durante 4 horas y se agitó a temperatura ambiente durante 12 horas. Después de la extracción del disolvente por evaporación, el residuo se sometió a cromatografía (gel de sílice, 50% EtOAc/hexanos) para dar 4-8 como un sólido amarillo.
TLC R_{f}= 0,75 (sílice, 70% EtOAc/hexanos).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,46 (d, J=15 Hz, 1H), 7,14 (d, J=8 Hz, 1H), 6,75 (d, J=15 Hz, 1H), 6,62 (d, J=8 Hz, 1H), 4,97 (s, 1H), 4,24 (q, J=7 Hz, 2H), 3,42 (m, 2H), 2,74 (t, J=7 Hz, 2H), 1,91 (m, 2H), 1,30 (m, 3H).
Etapa G
Éster etílico del ácido 3-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-propiónico (4-9)
Una mezcla de 4-8 (1,4 g, 6,03 mmol) y 10% Pd/carbono (1 g) en EtOH (30 mL) se agitó bajo una campana de hidrógeno durante 18 h. Por filtración y extracción por evaporación del disolvente se obtuvo 4-9 como un sólido blanco.
TLC R_{f} = 0,39 (sílice, 70% EtOAc/hexanos)
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,07 (d, J=7 Hz, 1H), 6,37 (d, J=7 Hz, 1H), 4,12 (m, 2H), 3,40 (m, 2H), 2,87 (m, 2H), 2,67 (m, 4H), 1,91 (t, J=6 Hz, 2H), 1,24 (m, 3H).
Etapa H
Éster dimetílico del ácido [2-oxo-4-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-butil]-fosfónico (4-10)
A una solución con agitación de metilfosfonato de dimetilo (1,9 mL, 17,08 mmol) en THF (20 mL) a -78ºC se añadió n-BuLi (10,94 mL, 17,5 mmol). Después de 30 minutos, se añadió 4-9 (1 g, 4,27 mmol) en THF (5 mL). Después de 1 hora, se detuvo la reacción con NH_{4}Cl saturado (10 mL) y se calentó a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con NaHCO_{3} saturado y salmuera, y se secó sobre MgSO_{4}. Después de la extracción del disolvente por evaporación, el residuo fue sometido a cromatografía (gel de sílice, 70/25/5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH) para obtener 4-10 como un aceite amarillo.
TLC R_{f} = 0,33 (sílice, 70/20/10 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,03 (d, J=7 Hz, 1H), 6,34 (d, J=7 Hz, 1H), 4,93 (s, 1H), 3,77 (d, J=12, 6H), 3,38 (m, 2H), 3,15 (d, J=23, 2H), 2,96 (m, 2H), 2,86 (m, 2H), 2,67 (t, J=6 Hz, 2H), 1,88 (m, 2H).
Etapa I
Éster etílico del ácido 3-(2-metil-pirimidin-5-il)-7-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-non-5-enoico (4-11)
A una mezcla de 4-10 (100 mg, 0,42 mmol) y 4-6 (160 mg, 0,54 mmol) en DMF (3 ml) se añadió K_{2}CO_{3} (87 mg, 0,63 mmol) seguido de calentamiento a 50ºC durante 18 horas. Después de la extracción del disolvente por evaporación, el residuo fue sometido a cromatografía (gel de sílice, 70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH) para obtener 4-11 como un aceite transparente.
TLC R_{f} = 0,38 (70:20:10 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,49 (s, 1H), 7,03 (d, J=7 Hz, 2H), 6,65 (m, 1H), 6,34 (d, J=7 Hz, 1H), 6,07 (d, J=15 Hz, 1H), 4,85 (m, 1H), 4,05 (m, 2H), 3,80 (m, 1H), 3,41 (m, 3H), 2,90-2,54 (m, 13H), 1,88 (m, 4H), 1,18 (m, 3H).
Etapa J
Éster etílico del ácido 3-(2-metil-pirimidin-5-il)-7-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-nonanoico (4-12)
Una mezcla de 4-11 (95 mg, 0,22 mmol) y 10% Pd/carbono (50 mg) en EtOH (3 mL) se agitó bajo una campana de hidrógeno durante 2 h. Después de la filtración, se extrajo el disolvente por evaporación y se obtuvo 4-12 como un aceite transparente.
TLC R_{f} = 0,40 (70:20:10 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 8,47 (s, 2H),7,04 (d, J=7 Hz, 1H), 6,33 (d, J=7 Hz, 1H), 4,03 (m, 2H), 3,78 (m, 1H), 3,38 (m, 2H), 3,01 (m, 1 H) 2,74 (m, 10 H), 2,54 (m, 1 H), 2,40 (t, J=7 HZ,2H), 1,89 (m, 2H), 1,57 (m, 4H), 1,15 (t, J=7 Hz, 3H).
Los sustratos de éster etílico del ácido 5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico para la reacción de fluoración se preparan según el procedimiento mostrado en el Esquema 5 y ejemplificado a continuación para el éster etílico del ácido 3-(2-metilpirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico (5-11).
Esquema 5
17
18
Éster etílico del ácido 3(R) y 3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-5-oxo-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico (5-11)
Etapa A
Éster etílico del ácido 5-(5-Bromo-piridin-2-il)-pentanoico (5-2)
A una solución con agitación de ácido etil-1-pentenoico (10 g, 78 mmol) en THF desgasificado (80 mL) a 0ºC se añadió gota a gota una solución de 9-BBN (187 mL de 0,5 M en THF, 94 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente para producir 5-1. Se añadió K_{2}CO_{3} (18,4 g, 133 mmol) y 2,5-dibromopiridina (18,5 g, 78 mmol), seguido de una suspensión premezclada y dejada en reposo (70ºC durante 30 min) de Pd(OAc)_{2} (2,0 g, 8,9 mmol) y DPPF (5,4 g, 9,8 mmol) en DMF desgasificado (80 mL). La mezcla obtenida se agitó durante 18 horas a 70ºC, se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró. Al residuo con agitación disuelto en THF (400 mL) se añadió agua (150 mL) y NaHCO_{3} (33 g) y después de 10 minutos, NaBO_{3}\cdotH_{2}O (48 g). Después de agitar vigorosamente durante 30 minutos, la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró hasta obtener un aceite. El residuo fue sometido a cromatografía en gel de sílice (10-20% EtOAc/hexano) para obtener 5-2 como un aceite incoloro.
TLC R_{f} = 0,75 (sílice, 40% EtOAc/hexano).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,57 (s, 1 H), 7,70 (m, 1H), 7,05 (d, 1 H, J= 8 Hz), 4,15 (q, 2H, J=6 Hz), 2,77 (t, 2H, J=7 Hz), 2,34 (t, 2H, J= 7 Hz), 1,7 (m, 4H), 1,26 (t, 3H, J=6 Hz).
Etapa B
2-but-3-enil-isoindol-1,3-diona(5-5)
A una solución con agitación de 4-bromo-1-buteno (5-3, 20 g, 148 mmol) en DMF (150 mL) se añadió ftalimida de potasio (5-4, 25 g, 133 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 horas a 70ºC. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se diluyó con éter, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para obtener 5-5 como un sólido blanco.
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,85 (m, 2H), 7,72 (m, 2H), 5,82 (m, 1H), 5,08 (m, 2H), 3,77 (t, 2H, J=7 Hz), 2,44 (m, 2H).
Etapa C
Éster etílico del ácido 5-{5-[4-(1,3-dioxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-butil]-piridin-2-il}-pentanoico (5-6)
A una solución con agitación de 5-5 (4,23 g, 21 mmol) en THF desgasificado (20 mL) a 0ºC se añadió gota a gota una solución de 9-BBN (50,4 mL de 0,5 M en THF, 25,2 mmol) y la mezcla se agitó durante 18 horas temperatura ambiente. Se añadió K_{2}PO_{3} (5,0 g, 35,8 mmol) y 5-2 (5,0 g, 17,4 mmol, seguido de una suspensión premezclada y dejada en reposo (70ºC durante 30 min) de Pd(OAc)_{2} (0,54 g, 2,4 mmol) y DPPF (1,45 g, 2,6 mmol) en DMF desgasificado (20 ml). La mezcla obtenida se agitó durante 18 horas a 70ºC, se enfrió, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. Al residuo con agitación disuelto en THF (200 ml) se añadió agua (75 ml) y NaHCO_{3} (16,5 g) y después de 10 minutos, NaBO_{3}\cdotH_{2}O (24 g). Después de agitación vigorosa durante 30 minutos, la mezcla se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró hasta obtener un aceite. El residuo fue sometido a cromatografía en gel de sílice (20-40% EtOAc/hexano) para obtener 5-6 como un sólido amarillo.
TLC R_{f}= 0,31 (sílice, 50% EtOAc/hexano).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,37 (s, 1H), 7,84 (m, 2H), 7,75 (m, 2H), 7,40 (m, 1H), 7,05 (m, 1H), 4,12 (q, 2H, J=7 Hz), 3,71 (m, 2H), 2,78 (t, 2H, J= 7 Hz), 2,61 (t, 2H, J=7 Hz), 2,33 (t, 2H,J=7 Hz), 1,64 (m, 8H), 1,23 (t, 3H, J=6 Hz).
Etapa D
Metilamida del ácido 5-[5-(4-amino-butil)-piridin-2-il]-pentanoico (5-7)
Una mezcla de 5-6 (45 g, 110 mmol) y una solución saturada de metilamina en metanol (300 mL) en un tubo sellado se calentó a 70ºC durante 12 horas. La mezcla se enfrió y se concentró hasta obtener un aceite. El residuo fue sometido a cromatografía en gel de sílice (10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) para obtener 5-7 como un aceite amarillo.
TLC R_{f}= 0,16 (sílice, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}: \delta 8,32 (s, 1H), 7,41 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 2,74 (m, 7H), 2,59 (t, 2H, J=6 Hz), 2,21 (t, 2H, J= 6 Hz), 1,69 (m, 6H), 1,48 (m, 2H).
Etapa E
Metilamina del ácido 5-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-pentanoico (5-8)
Una mezcla de 5-7 (24 g, 91,2 mmol) y NaH (10,9 g de una dispersión al 60% en peso en aceite mineral, 273 mmol) en xilenos (500 ml) se purgó con argón durante 30 min, y luego se calentó a reflujo durante 72 horas. La mezcla se enfrió, se detuvo la reacción con etanol, se diluyó con 10% de carbonato de potasio acuoso y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se secó sobre MgSO_{4} y se concentró para obtener un aceite. El residuo fue sometido a cromatografía en gel de sílice (70:25:5 CHCl_{3}/ EtOAc/MeOH/H_{2}O) para obtener 5-8 como un sólido blanco.
TLC R_{f}= 0,15 (sílice, 70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,24 (d, 1H, J= 7 Hz), 6,53 (d, 1H, J=7 Hz), 5,43 (s a, 1H), 4,62 (s a, 1H), 3,12 (m, 2H), 2,79 (d, 3H, J=5 Hz), 2,63 (m, 4H), 2,18 (m, 2H), 1,81 (m, 2H). 1,68 (m, 6 Hz).
Etapa F
Éster etílico del ácido 5-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-pentanoico (5-9)
Una mezcla de 5-8 (3 g, 11,5 mmol) y 6 M de HCl (100 ml) en un tubo sellado se calentó a 70ºC durante 12 horas. La mezcla se enfrió y se concentró hasta obtener un aceite. Se evaporó azeotrópicamente dos veces el residuo en etanol (50 ml), luego se disolvió en HCl 4 M en etanol (100 ml) y se calentó a 70ºC durante 1 hora. La mezcla se enfrió y se concentró hasta obtener un aceite. El residuo se diluyó con acetato de etilo, se lavó con 10% de carbonato de potasio acuoso y salmuera, se secó sobre MgSO_{4}, y se concentró para obtener 5-9 como un aceite marrón.
TLC R_{f}= 0,44 (sílice, 70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,22 (d, 1 H, J=7 Hz), 6,53 (d, 1 H, J=7 Hz), 4,63 (s a, 1 H), 4,11 (q, 2H, J=7 Hz), 3,12 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 2,62 (t, 2H, J=6 Hz), 2,33 (t, 2H, J=6 Hz), 1,70 (m, 2H), 1,63 (m, 6H), 1,27 (t, 3H, J=7 Hz).
\newpage
Etapa G
Éster etílico del ácido 3(R) y 3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-5-oxo-9-(6,7,8,9-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico (5-11)
Mediante los procedimientos para la conversión de 1-5 en 1-10, se convirtió 5-9 en 5-11 a través de 5-10. La resolución de los enantiómeros se realizó por cromatografía quiral del intermedio cetodiéster correspondiente a 1-8 en una columna Chiralcel AD (10 cm x 50 cm) mediante 70% A/30% B (A = 2-propanol; B = 0,1% dietilamina en hexanos) con un caudal de 250 mL/min.
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Esquema A
Síntesis del radioligando para el ensayo SPAV3 
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19 
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Esquema A (continuación)
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20 
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Esquema A (continuación)
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21 
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Esquema A (continuación)
22
N-(4-yodo-fenilsulfonilamino)-L-asparagina (A-2)
A una solución con agitación de ácido A-1 (4,39 g, 33,2 mmol), NaOH (1,49 g, 37,2 mmol), dioxano (30 mL) y H_{2}O (30 mL) a 0ºC se añadió cloruro de pipsilo (10,34 g, 34,2 mmol). Después de aproximadamente 5 minutos, se añadió NaOH (1,49, 37,2 mmol) disuelto en 15 mL de H_{2}O, seguido de la eliminación del baño enfriador. Después de 2,0 h, se concentró la mezcla de reacción. El residuo se disolvió en H_{2}O (300 mL) y luego se lavó con EtOAc. La porción acuosa se enfrió a 0ºC y luego se acidificó con HCl concentrado. Se juntó el sólido y luego se lavó con Et_{2}O para dar el ácido A-2 como un sólido blanco.
^{1}H RMN (300 MHz, D_{2}O) \delta 7,86 (d, 2H, J=8 Hz), 7,48 (d, 2H, J=8 Hz) 3,70 (m, 1 H), 2,39 (m, 2H).
2(S)-(4-yodo-fenilsulfonilamino)-\beta-alanina (A-3)
A una solución con agitación de NaOH (7,14 g, 181,8 mmol) y H_{2}O (40 mL) a 0ºC se añadió Br_{2} (1,30 mL, 24,9 mmol) gota a gota durante un periodo de diez minutos. Después de aproximadamente 5 minutos, se combinaron ácido A-2 (9,9 g, 24,9 mmol), NaOH (2,00 g, 49,8 mmol) y H_{2}O (35 mL), se enfrió a 0ºC y luego se agregó en una única porción a la mezcla de reacción. Después de agitar durante 20 minutos a 0ºC, la mezcla de reacción se calentó a 90ºC durante 30 minutos y luego se volvió a enfriar a 0ºC. El pH se ajustó a aproximadamente 7 por adición gota a gota de HCl concentrado. Se juntó el sólido, se lavó con EtOAc y luego se secó en vacío para dar el ácido A-3 como un sólido blanco.
^{1}H RMN(300 MHz, D_{2}O) \delta 8,02 (d, 2H, J=8 Hz), 7,63 (d, 2H, J=8 Hz), 4,36 (m, 1H), 3 51 (dd, 1H, J=5 Hz, 13 Hz), 3 21 (m, 1H).
Hidrocloruro de etil-2(S)-(4-yodo-fenilsulfonilamin)-\beta-alanina (A-4)
Se burbujeó rápidamente gas HCl a través de una suspensión del ácido A-3 (4,0 g, 10,81 mmol) en EtOH (50 mL) a 0ºC durante 10 minutos. Se retiró el baño de enfriado y la mezcla de reacción se calentó a 60ºC. Después de 18 h, se concentró la mezcla de reacción para dar el éster A-4 como un sólido blanco.
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}DO) \delta 7,98 (d, 2H, J=8 Hz), 7,63 (d, 2H, J=8 Hz), 4,25 (q, 1H, J=5 Hz), 3,92 (m, 2H), 3,33 (m, 1 H), 3,06 (m, 1 H), 1,01 (t, 3H, J=7 Hz).
4-[2-(2-aminopiridin-6-il)etil]benzoato de etilo (A-5a)
Una mezcla del éster A-5 (700 mg, 2,63 mmol), (para la preparación, véase: Esquema 29 (intermedio 29-3) de la patente de los Estados Unidos N.º 5.741.796 (21 de abril de 1998)), 10% de Pd/C (350 mg) y EtOH se agitaron con 1 atmósfera de H_{2}. Después de 20 h, se filtró la mezcla de reacción a través de una almohadilla de celite y luego se concentró para dar el éster A-5a como un aceite marrón.
TLC R_{f} = 0,23 (sílice, 40% EtOAc/hexanos)
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,95 (d, 2H, J=8 Hz), 7,26 (m, 3H), 6,43 (d, 1 H, J=7 Hz), 6,35 (d, 1 H, J=8 Hz), 4,37 (m, 4H), 3,05 (m, 2H), 2,91 (m, 2H), 1,39 (t, 3H, J=7 Hz).
Hidrocloruro de ácido 4-[2-(2-aminopiridin-6-il)etil]benzoico (A-6)
Una suspensión del éster A-5a (625 mg, 2,31 mmol) en HCl 6 N (12 mL) se calentó a 60ºC. Después de aproximadamente 20 h, la mezcla de reacción se concentró para obtener el ácido A-6 como un sólido tostado.
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}DO) \delta 7,96 (d, 2H, J=8 Hz), 7,80 (m, 1 H), 7,33 (d, 2H, J=8 Hz), 6,84 (d, 1H, J=9 Hz), 6,69 (d, 1 H, J=7 Hz), 3,09 (m, 4H).
Etil 4-[2-(2-aminopiridin-6-il)etil]benzoil-2(S)-(4-yodo-fenilsulfonilamino)-\beta-alanina (A-7)
Una solución del ácido 15-6 (400 mg, 1,43 mmol), amina A-4 (686 mg, 1,57 mmol), EDC (358 mg, 1,86 mmol), HOBT (252 mg, 1,86 mmol), NMM (632 \muL, 5,72 mmol) en DMF (10 mL) se agitó durante aproximadamente 20 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y luego se lavó con NaHCO_{3} sat., salmuera, se secó (MgSO_{4}) y se concentró. Por cromatografía de resolución rápida (sílice, EtOAc luego 5% isopropanol/EtOAc) se obtuvo la amida A-7 como un sólido blanco.
TLC R_{f}= 0,4 (sílice, 10% isopropanol/EtOAc)
^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}DO) \delta 7,79 (d, 2H, J=9 Hz), 7,61 (d, 2H, J=8 Hz), 7,52 (d, 2H, J=9 Hz), 7,29 (m, 1 H), 7,27 (d, 2H, J=8 Hz), 4,20 (m, 1 H), 3,95 (q, 2H, J=7 Hz), 3,66 (dd, 1 H, J=6 Hz, 14 Hz), 3,49 (dd, 1 H, J=8 Hz, 13 Hz), 3,01 (m, 2H), 2,86 (m, 2H), 1,08 (t, 3H, J=7 Hz).
4-[2-(2-aminopiridin-6-il)etil]benzoil-2(S)-(4-yodofenil-sulfonilamino)-\beta-alanina (A-8)
Una solución del éster A-7 (200 mg, 0,3213 mmol) y HCl de 6N (30 mL) se calentó a 60ºC. Después de aproximadamente 20 h, se concentró la mezcla de reacción. Por cromatografía de resolución rápida (sílice, 20:20:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) se obtuvo el ácido A-8 como un sólido blanco.
TLC R_{f} = 0,45 (sílice, 20:20:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O)
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,40 (m, 1H), 8,14 (bs, 1H), 7,81 (d, 2H, J=8 Hz), 7,62 (d, 2H, J=8 Hz), 7,48 (d, 2H, J=8 Hz), 7,27 (m, 3H), 6,34 (d, 1H, J=7 Hz), 6,25 (d, 1H, J=8 Hz), 5,85 (bs, 2H), 3,89 (bs, 1H), 3,35 (m, 2H), 2,97 (m, 2H), 2,79 (m, 2H).
4-[2-(2-aminopiridin-6-il)etil)benzoil-2(S)-(4-trimetilestannilfenilsulfonilamino-\beta-alanina (A-9)
Una solución del yoduro A-8 (70 mg, 0,1178 mmol), [(CH_{3})_{3}Sn]_{2} (49 \muL, 0,2356 mmol), Pd(PPh_{3})_{4} (5 mg) y dioxano (7 mL) se calentó a 90ºC. Después de 2 h, la mezcla de reacción se concentró y luego se purificó por HPLC preparativa (Delta-Pak C_{18} 15 \muM 100 Aº, 40 x 100 mm; 95:5 y luego 5:95 H_{2}O/CH_{3}CN) para dar la sal trifluoroacetato. La sal se suspendió en H_{2}O (10 mL), se trató con NH_{4}OH (5 gotas) y luego se liofilizó para dar la amida A-9 como un sólido blanco.
^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,40 (m, 1H), 8,18 (d, 1H, J=8 Hz), 7,67 (m, 5H), 7,56 (d, 2H, J=8 Hz), 7,29 (d, 2H, J=8 Hz), 6,95-7,52 (m, 2H), 6,45 (sa, 2H), 4,00 (m, 1 H), 3,50 (m, 1 H), 3,33 (m, 1 H), 2,97 (m, 2H), 2,86 (m, 2H).
4-[2-(2-aminopiridin-6-il)etil]etil)benzoil-2-(S)-4-^{125}yodo-fenilsulfonilamino-\beta-alanina (A-10)
Se añadió una perla de yodo (Pierce) a un vial de transporte de 5 mCi de Na^{125}I (Amersham, IMS30) y se agitó durante cinco minutos a temperatura ambiente. Se preparó una solución de 0,1 mg de A-9 en 0,05 mL de 10% de H_{2}SO/MeOH e inmediatamente se agregó al vial de Na^{125}I/perla de yodo. Después de agitar durante tres minutos a temperatura ambiente, se añadió aproximadamente 0,04-0,05 mL de NH_{4}OH para que mezcla de reacción tenga pH 6-7. Toda la mezcla de reacción se inyectó en HPLC para purificación [columna Vydac de péptido-proteína C-18, 4,6 x 250 mm, gradiente lineal de 10% de acetonitrilo (0,1% (TFA):H_{2}O (0,1% de TFA) a 90% de acetonitrilo (0,1% de TFA):H_{2}O (0,1% TFA) durante 30 minutos, 1 mL/min). El tiempo de retención de A-10 es de 17 minutos en estas condiciones. Se juntaron las fracciones que contienen la mayoría de la radiactividad, se liofilizaron y se diluyeron con etanol para obtener aproximadamente 1 mCi de A-10, que se coeluyó en un análisis de HPLC con una muestra auténtica de A-8.
Esquema B
Síntesis del radioligando para el ensayo SPAV5
23
24
Éster etílico del ácido 2(S)-(4-yodo-bencenosulfonilamino)-3-{4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-etil]-ben- zoilamino}-propiónico (B-2)
Una mezcla de B-1 (0,23 g, 0,72 mmol; para la preparación véase la patente de los Estados Unidos N.º 5.741.796), A-4 (0,343 g, 0,792 mmol), EDC (0,179 g, 0,93 mmol), HOBT (0,126 g, 0,93 mmol), NMM (0,316 mL, 2,86 mmol) en acetonitrilo (3 mL) y DMF (3 mL) se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente, luego se diluyó con acetato de etilo, se lavó con agua, NaHCO_{3} acuoso saturado y salmuera, se secó sobre MgSO_{4} y se concentró. El residuo fue sometido a cromatografía en gel de sílice (70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH) para obtener B-2 como un sólido blanco.
TLC R_{f}: 0,22 (sílice, 70:25:5 CHCl_{3}/EtOAc/MeOH).
^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,79 (d. 2H, J=8 Hz), 7,63 (d, 2H, J=8 Hz), 7,54 (d, 2H, J=8 Hz), 7,27 (d, 2H, J=8 Hz), 7,04 (d, 1H, J=7 Hz), 6,60 (m, 1H), 6,29 (d, 1H, J=7 Hz), 4,83 (s a, 1H), 4,09 (m, 3H), 3,84 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,42 (m, 2H), 3,01 (m, 4H), 2,86 (m, 4H), 2,69 (t, 2H, J=6 Hz), 1,88 (m, 2H).
Ácido 2(S)-(4-yodo-bencenosulfonilamino)-3-{4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-etil]-benzoilamino]-propiónico (B-3)
Una mezcla de B-2 (0,38 g, 0,573 mmol) y HCl 6 N (50 mL) se agitó durante 14 horas a 60ºC. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (25:10:1:1 a 15:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) para dar B-3 como un sólido blanco.
TLC R_{f}: 0,43 (sílice, 10:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,42 (m, 1H), 7,79 (d, 2H, J=8 Hz), 7,63 (d, 2H, J=8 Hz), 7,44 (d, 2H, J=8 Hz), 7,27 (d, 2H, J=8 Hz), 7,10 (d, 1H, J=7 Hz), 6,58 (brs, 1 H), 6,32 (d, 1H, J=7 Hz), 3,96 (m, 1 H), 3,51 (m, 1H), 3,30 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 2,78 (m, 2H), 2,62 (m, 2H), 1,77 (m, 2H).
HRMS: para C_{26}H_{27}IN_{4}O_{5}S, esperado 635,0818, hallado 635,0831.
Ácido 3-{4-[2-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-etil]-benzoilamino}-2(S)-(4-trimetilestannanil-bencenosulfonilamino)-propiónico (B-4)
Una mezcla de B-3 (0,10 g, 0,16 mmol), hexametildiestannano (0,065 mL, 0,32 mmol), Pd(PPh_{3})_{4} y dioxano (10 ml) se agitó durante una hora a 90ºC. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se concentró y el residuo se sometió a cromatografía en gel de sílice (50:10:1:1 a 25:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O) para obtener B-4 como un sólido blanco.
TLC R_{f}= 0,48 (sílice, 15:10:1:1 EtOAc/EtOH/NH_{4}OH/H_{2}O).
^{1}H RMN (300 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,38 (m, 1H), 8,14 (m, 1H), 7,63 (m, 4H), 7,28 (d, 2H, J=8 Hz), 7,08 (d, 1H, J=7 Hz), 6,50 (s a, 1H), 6,28 (d, 1H, J=7 Hz), 3,96 (m, 1H), 3,48 (m, 1H), 3,31 (m, 5H), 2,96 (m, 2H), 2,78 (m, 2H), 2,62 (m, 2H), 1,77 (m, 2H), 0,28 (s, 9H).
Espectro de masa de alta resolución: para C_{29}H_{36}N_{4}O_{5}SSn, esperado 665,1533 (^{112}Sn) y 673,1507 (^{120}Sn), hallado 665,1510 y 673,1505.
Ácido 2(S)-(4-^{125}yodo-bencenosulfonilamino)-3-{4-{2-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-etil]-benzoilamino}- propiónico (B-5)
Una barra de agitación, metanol (0,05 mL) y una perla de yodo (Pierce) se agregaron a un vial de transporte de Na^{125}I (10 mCi, Amersham, IMS300) y se agitó durante 5 minutos a temperatura ambiente. Se preparó una solución de B-4 (aproximadamente 0,1 mg) en metanol (0,04 ml) y una porción (0,02 mL) se añadió a una mezcla de H_{2}SO_{4} (0,005 mL) en metanol (0,025 mL) y esta solución se añadió inmediatamente al vial de Na^{125}I/perla de yodo. Después de agitar durante dos minutos a temperatura ambiente, se detuvo la reacción con NH_{4}OH (0,04-0,05 mL) y toda la mezcla de reacción se inyectó en el HPLC para la purificación [columna Vydac de péptido-proteína C-18, 4,6 x 250 mm, gradiente lineal de 10% de acetonitrilo:H_{2}O (0,1% de TFA) a 90% de acetonitrilo:H_{2}O (0,1% de TFA) durante 20 minutos, 1 mL/min]. El tiempo de retención de B-5 es de 16 minutos en estas condiciones. Se juntaron las fracciones que contienen la mayoría de la radiactividad, se liofilizaron y se diluyeron con etanol para obtener aproximadamente 1 mCi de B-5, que se coeluyó en análisis de HPLC con una muestra auténtica de B-3.
Instrumentación: se realizó la HPLC analítica y preparativa mediante un Waters 600E Powerline Multi Solvent Delivery System con 0,1 mL de perlas con un inyector Rheodyne 7125 y un Waters 990 Fotodiode Array Detector con un colector Gilson FC203 Microfraction. Para la HPLC analítica y preparativa se usó una columna Vydac de péptido-proteína C-18, 4,6 x 250 mm con una columna de guardia modular C-18 Brownlee. El acetonitrilo usado para los análisis HPLC era de calidad analítica Fisher Optima. El radiodetector de HPLC usado era un detector de radioisótopos Beckman 170. Se usó una columna Vydac de proteína-y péptido C-18, 3,9 x 250 mm para la HPLC analítica y preparativa. Las soluciones de radiactividad se concentraron mediante una centrífuga de vacío Speedvac. Las curvas de calibración y las concentraciones químicas se determinaron mediante un espectrofotómetro Hewlett Packard Model 8452A UV/Vis Diode Array. Las radiactividades de las muestras se determinaron en un contador gamma Packard A5530.
Los procedimientos de prueba empleados para medir la actividad de unión \alphav\beta3 y \alphav\beta5 y de inhibición de la reabsorción ósea de los compuestos de la presente invención se describen a continuación.
Ensayo de depresiones de reabsorción ósea
Cuando los osteoclastos inician la reabsorción ósea, pueden causar la formación de depresiones en la superficie del hueso sobre el cual actúan. En consecuencia, cuando se estudian compuestos por su capacidad para inhibir a los osteoclastos, es útil medir la capacidad de los osteoclastos para excavar estas depresiones de reabsorción, en presencia del compuesto inhibidor.
Se cortan secciones transversales consecutivas de 200 micrones de espesor de un cilindro de 6 mm de diáfisis de fémur bovino con un serrucho de diamante de baja velocidad (Isomet, Beuler, Ltd., Lake Bluff, II). Las secciones de hueso se juntan, se colocan en una solución al 10% de etanol y se refrigeran hasta su uso posterior.
Antes de la experimentación, las secciones de hueso bovino se someten dos veces a ultrasonido, 20 minutos cada vez en H_{2}O. Las secciones limpias se colocan en placas de 96 pocillos de manera tal que se dispone de dos carriles de control y un carril para cada dosificación de fármaco. Cada carril representa cultivos por triplicado o cuadruplicado. Las secciones de hueso de las placas de 96 cavidades se esterilizan por irradiación UV. Antes de la incubación con osteoclastos, las secciones de huso se hidratan por adición de 0,1 mL de \alphaMEM, pH 6,9 que contiene 5% de suero fetal bovino y 1% de penicilina/estreptomicina.
Los huesos largos de conejos de 7-14 días de edad (New Zealand White Hare) se diseccionan, se limpian de tejido blando y se colocan en \alphaMEM que contiene 20 mM de HEPES. Los huesos se cortan con tijeras hasta que los trozos miden <1 mm y son transferidas a un tubo de 50 mL en un volumen de 25 mL. El tubo se mezcla suavemente con la mano durante 60 ciclos, el tejido se deja sedimentar durante 1 min y se extrae el sobrenadante. Se añaden otros 25 mL de medio asl tejido y se vuelve a mezclar. El segundo sobrenadante se combina con el primero. Se cuenta la cantidad de células, salvo los eritrocitos (en general, aproximadamente 2 x 10^{7} células/mL). Se prepara una suspensión celular constituida por 5 x 10^{6}/mL en \alphaMEM que contiene 5% de suero fetal bovino, 10 nM de 1,25(OH)_{2}D_{3} y penicilina-estreptomicina. Se añaden alícuotas de 200 mL a las secciones de hueso bovino (200 mm x 6 mm) y se incuban durante 2 h a 37ºC en atmósfera humedecida de 5% de CO_{2}. Se extrae el medio con cuidado con una micropipeta y se añade medio fresco que contiene los compuestos de prueba. Los cultivos se incuban durante 48 h y se analiza el c-telopéptido (fragmentos de la cadena a1 de colágeno de tipo I) mediante Crosslaps para medios de cultivo (Herlev,
Dinamarca).
Las secciones de hueso bovino se exponen a osteoclastos durante 20-24 h y se procesan para tinción. Se extrae el medio de cultivo de tejidos de cada sección de hueso. Cada pocillo se lava con 200 mL de H_{2}O y luego se fijan las secciones de hueso durante 20 minutos en 2,5% de glutaraldehído, 0,1 M de cacodilato, pH 7,4. Después de la unión, se extrae cualquier resto celular por ultrasonicación durante 2 min en presencia de 0,25 M NH_{4}OH seguido de 2 X 15 min ultrasonicación en H_{2}O. Las secciones de hueso se tiñen inmediatamente durante 6-8 min con 1% de azul de toluidina filtrado y 1% de bórax.
Después de secar las secciones de hueso se cuentan las depresiones de reabsorción en las secciones de prueba y de control. Las depresiones de reabsorción se visualizan en un microscopio de fluorescencia Microfot Fx (Nikon) con un cubo filtro polarizante Nikon IG8. Los resultados de las dosificaciones de prueba se comparan con los controles y se determinan los valores IC_{50} obtenidos para cada compuesto.
La adecuación de los datos extrapolados de este ensayo a estados patológicos de mamíferos (incluso humanos) es avalada por las enseñanzas halladas en Sato, M. et al. Journal of Bone and Mineral Research, Vol. 5, No. 1, p. 31-40, 1990, el cual se incorpora como referencia a la presente en su totalidad. Este artículo enseña que se han usado ciertos bisfosfonatos clínicamente y parecen ser eficaces para el tratamiento de enfermedad de Paget, hipercalcemia de enfermedad maligna, lesiones osteolíticas producidas por metástasis óseas y pérdida ósea debida a inmovilización o deficiencia de hormonas sexuales. Estos mismos bisfosfonatos luego se analizan con el ensayo de depresiones de reabsorción descrito con anterioridad para confirmar la correlación entre su utilidad conocida y los resultados positivos de la prueba.
Ensayo EIB
Duong et al., J. Bone Miner. Res., 8:S378 (1993), describe un sistema para expresar la integrina \alphav\beta3 humana. Se ha sugerido que la integrina estimula la unión de osteoclastos a la matriz ósea, dado que los anticuerpos contra la integrina, o las moléculas que contienen RGD, por ejemplo equistatina (Publicación Europea 382 451), pueden bloquear eficazmente la reabsorción ósea.
\newpage
Mezcla de reacción:
1.
175 \muL de tampón TBS (50 mM Tris\cdotHCl pH 7,2, 150 mM de NaCl, 1% de BSA, 1 mM de CaCl_{2},_{ }1 mM MgCl_{2}).
2.
25 mmL de extracto celular (diluido con 100 mM de tampón octilglucósido para obtener 2000 cpm/25 \muL).
3.
^{125}I-equistatina (25 \muL/50.000 cpm) (véase EP 382 451).
4.
25 \muL de tampón (de unión total) o equistatina no marcada (unión no específica).
La mezcla de reacción luego se incubó durante 1 h a temperatura ambiente. Las \alphav\beta3 unidas y no unidas se separaron por filtración mediante un Skatron Cell Harvester. Los filtros (prehumedecidos en 1,5% de polietilenimina durante 10 min) luego se lavaron con el tampón de lavado (50 mM de Tris HCl, 1 mM de CaCl_{2}/MgCl_{2}, pH 7,2). El filtro luego se contó en un contador gamma.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo SPAV3 Materiales
1.
Perlas de centelleo de proximidad (SPA) de aglutinina de germen de trigo: Amersham
2.
Octilglucopiranósido: Calbiochem
3.
HEPES: Calbiochem
4.
NaCl: Fisher
5.
CaCl_{2}: Fisher
6.
MgCl_{2}: SIGMA
7.
Fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF): SIGMA
8.
Optiplate: PACKARD
9.
Compuesto A-10 (actividad específica 500-1000 Ci/mmol)
10.
Compuesto de prueba
11.
Receptor de integrina purificado: se purificó \alphav\beta3 a partir de células 293 con sobreexpresión de \alphav\beta3 (Duong et al., J. Bone Min. Res., 8:S378, 1993) de acuerdo con Pytela (Methods in Enzymology, 144:475, 1987)
12.
Tapón de unión: 50 mM de HEPES, pH 7,8, 100 mM NaCl, 1 mM Ca^{2+}/Mg^{2+}, 0,5 mM de PMSF
13.
50 mM de octilglucósido en tampón de unión: tampón 50-OG
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimiento 1. Pretratamiento de perlas SPA
500 mg de perlas SPA liofilizadas se lavaron primero cuatro veces con 200 mL de tampón 50-OG y una vez con 100 mL de tampón de unión y luego se resuspendieron en 12,5 mL de tampón de unión.
2. Preparación de perlas SPA y mezcla de receptor
En cada tubo de ensayo, 2,5 \muL (40 mg/mL) de perlas pretratadas se suspendieron en 97,5 \muL de tampón de unión y 20 mL de tampón 50-OG. 5 mL (aproximadamente 30 ng/\muL) de receptor purificado se añadió a las perlas en suspensión con agitación a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla luego se centrifugó a 2.500 rpm en una centrífuga Beckman GPR Benchtop durante 10 minutos a 4ºC. Los sedimentos luego se resuspendieron en 50 \muL de tampón de unión y 25 \muL de tampón 50-OG.
\newpage
3. Reacción
Los siguientes se agregaron secuencialmente en el Optiplate, en los correspondientes pocillos:
(i)
mezcla de receptor/perlas (75 \muL)
(ii)
25 \muL de cada uno de los siguientes: compuesto de prueba, tampón de unión para la unión total o A-8 para la unión no específica (concentración final 1 \muM)
(iii)
A-10 en tampón de unión (25 \muL, concentración final 40 pM)
(iv)
tampón de unión (125 \muL)
(v)
Cada placa se selló con un sellador de placa de PACKARD y se incubó durante la noche con agitación suave a 4ºC
4. Las placas se cuentan con PACKARD TOPCOUNT
5. Se calculó el porcentaje de inhibición como sigue:
A:
cuentas totales
B:
cuentas no específicas
C:
cuentas de la muestra
%
de inhibición: [{(A-B)-(C-B)}/(A-B)]/(A-B) x 100
Ensayo OCFORM
Células del tipo de los osteoblastos (1,8 células), derivadas originalmente de calavera de ratón, se colocaron en placas de cultivo de tejido CORNING 24 en medio \alphaMEM que contiene ribonucleótidos y desoxirribonucleósidos, 10% de suero fetal bovino y penicilina/estreptomicina. Las células se sembraron a 40.000/pocillo en la mañana. En la tarde, se prepararon células de médula ósea de ratones Balb/C machos de seis semanas de edad como sigue:
Se sacrificaron los ratones, se extrajeron las tibias y se colocaron en placed en el medio anterior. Se cortaron los extremos y se extrajo la médula ósea por lavado de la pocillo hacia un tubo con una jeringa de 1 mL con una aguja calibre 27,5. Se suspendió la médula por pipeteado. La suspensión se pasó por un restrictor de células de nailon > 100 mm. La suspensión obtenida se centrifugó a 350 x g durante siete minutos. El sedimento se resuspendió y se diluyó una muestra en ácido acético al 2% para lisar los glóbulos rojos. El resto de las células se contó en un hemocitómetro. Las células se sedimentaron y se resuspendieron a 1 x 10^{6} células/mL. Se añadieron 50 \muL a cada pocillo de 1,8 células para obtener 50.000 células/pocillo y se añadió 1,25-dihidroxi-vitamina D_{3} (D_{3}) a cada pocillo hasta una concentración final de 10 nM. Los cultivos se incubaron a 37ºC en atmósfera humidificada de 5% de CO_{2}. Después de 48 h se modificó el medio: 72 h después de la adición de la médula ósea se agregaron los compuestos de prueba con medio fresco que contiene D_{3} a pocillos por cuadruplicado. Los compuestos se agregaron nuevamente después de 48 h con medio fresco que contiene D_{3}. Después de otras 48 h se extrajo el medio, las células se fijaron con 10% de formaldehído en solución fisiológica con tampón fosfato durante 10 minutos a temperatura ambiente, seguido de tratamiento durante 1-2 minutos con etanol:acetona (1:1) y se secó al aire. Las células luego se tiñeron para fosfatasa ácida resistente a tartrato, tal como sigue:
Las células se tiñeron durante 10-15 minutos a temperatura ambiente con 50 mM de tampón acetato, pH 5,0 que contiene 30 mM de tartrato de sodio, 0,3 mg/mL Fast Red Violet LB Salt y 0,1 mg/mL de fosfato Naphthol AS-MX. Después de la tinción, las placas se lavaron a fondo con agua desionizada y se secaron al aire. Se contó la cantidad de células multinucleadas con tinción positiva en cada pocillo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ensayo SPAV5 Materiales
1.
Perlas de centelleo de proximidad (SPA) de aglutinina de germen de trigo: Amersham
2.
Octilglucopiranósido y Forbo-12-miristato-13-acetato (PMA): Calbiochem
3.
Tris-HCl, NaCl y CaCl_{2}: Fisher
4.
Medio esencial mínimo (MEM): Gibco/BRL
5.
Suero fetal bovino (FBS): Hyclone
6.
MgCl_{2}, MnCl_{2} y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF): SIGMA
7.
Cóctel de comprimidos de inhibidor de proteasa: Boehringer Mannheim.
8.
Optiplate-96 pocillos: PACKARD
9.
Se usó B-5 como ligando con marca radiactiva (actividad específica 500-1000 Ci/mmol) y B-3 (2,5 \muM) para obtener 100% de inhibición.
10.
Compuesto de prueba.
11.
Células HEK293 con sobreexpresión de integrinas \alphav\beta3 (Simon et al., J. Biol. Chem. 272, 29380-29389, 1997) se cultivaron en placas de 150 mm en medio 10% de FBS/MEM (Gibco/BRL).
12.
Tampón de lisis: 100 mM de octilglucopiranósido, 50 mM de Tris, pH 7,5, 100 mM de NaCl, 1 mM de CaCl_{2}, 1 mM de MgCl_{2}, 0,5 mM de PMSF e inhibidores de proteasa (1 comprimido/50 mL de tampón).
13.
Tampón de unión: 50 mM de Tris, pH 7,5,100 mM de NaCl, 1 mM de CaCl_{2}, 1 mM de MgCl_{2} y 1 mM de MnCl_{2}
14.
50 mM de octilglucopiranósido en tampón de unión: tampón 50-OG
Procedimiento
1. Lisados que expresan células \alphav\beta5: se cultivaron células HEK 293 que expresan integrinas \alphav\beta3 hasta la confluencia. Las células luego se dejaron en ayunas durante la noche en medio que contenía 0,5% de FBS, seguido de tratamiento con 100 nM de PMA durante 20 min. Las células se lavaron 2 veces con solución fisiológica con tampón fosfato (4ºC) y se solubilizaron en tampón de lisis durante 30 min sobre hielo. Los lisados se aclararon con Beckman JA-20 a 20.000 xg. Se determinó la concentración de proteínas de los lisados aclarados mediante un microkit BCA (Pierce) y se guardaron en alícuotas a 80ºC.
2. Pretratamiento de perlas SPA:
500 mg de perlas SPA liofilizadas se lavaron primero cuatro veces con 200 mL de tampón 50-OG y una vez con 100 mL de tampón de unión, y luego se resuspendieron en 12,5 mL de tampón de unión.
3. Preparación de reacción de unión de SPAV5
En cada pocillo de ensayo, se agregó lo siguiente en secuencia en placas Optiplate:
(i)
tampón de unión para completar el volumen final de 125 \mul por cavidad.
(ii)
3 \muL (120 \mug/cavidad) de perlas pretratadas diluidas con 22 \muL de tampón 50-OG
(iii)
15 \mug de proteínas de lisados de células \alphav\beta3.
(iv)
B-5 a 50.000 cpm.
(v)
25 \muL de concentraciones graduadas de compuesto de prueba.
(vi)
Cada placa se selló con sellador de placa de PACKARD y se incubó durante la noche con agitación suave a 4ºC
4. Las placas se contaron con un contador de centelleo de microplaca PACKARD TOPCOUNT.
5. se calculó el porcentaje de inhibición como sigue:
A = cuentas totales (unión del receptor a B-5)
B = cuentas no específicas (unión del receptor a B-5 en presencia de 2,5 \muM de ligando frío)
C = cuentas de la unión al receptor del compuesto de prueba
% de inhibición = [{(A-B)-(C-B)}/(A-B)]/(A-B) x 100
IC_{50} de compuesto de prueba se calculó como el 50% de la inhibición.
Se analizaron compuestos representativos de la presente invención y se halló que se fijaban a integrinas humanas \alphav\beta3. Generalmente se descubrió que estos compuestos tenían valores de IC_{50} inferiores a 10 nM en el ensayo SPAV3.
Los compuestos representativos de la presente invención también se estudiaron en el ensayo de SPAV5 para determinar la afinidad por el receptor \alphav\beta3. Generalmente se descubrió que estos compuestos tenían valores de IC_{50} inferiores a 100 nM.
Ejemplo de una formulación farmacéutica
Como forma de realización específica de una composición oral, 100 mg de cualquiera de los compuestos de la presente invención se formulan con suficiente lactosa finamente dividida para proveer una cantidad total de 580 a 590 mg para llenar una cápsula de gelatina dura de tamaño O.
Si bien la invención se describió e ilustró en referencia con ciertas de sus formas de realización de preferencia, los expertos en la técnica apreciarán que se pueden hacer diversos cambios, modificaciones y sustituciones en ellas sin apartarse del espíritu y el alcance de la invención. Por ejemplo, pueden ser aplicables dosificaciones eficaces distintas de las dosis de preferencia tal como se estableció en la presente con anterioridad como consecuencia de variaciones en la respuesta del mamífero tratado por la gravedad de trastornos óseos causados por reabsorción, o por otras indicaciones para los compuestos de la invención indicados con anterioridad. De modo similar, las respuestas farmacológicas específicas observadas pueden variar de acuerdo y según el particular compuesto activo seleccionado o si hay presencia de vehículos farmacéuticos, además del tipo de formulación y el modo de administración empleado, y dichas variaciones o diferencias previstas en los resultados se contemplan de acuerdo con los objetivos y las prácticas de la presente invención. En consecuencia, se pretende que la invención solo esté limitada por el alcance de las siguientes reivindicaciones y que dichas reivindicaciones se interpreten en forma tan amplia como sea razonable.

Claims (18)

1. Un compuesto de la fórmula (I)
25
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables, en la que:
X es
26 
\vskip1.000000\baselineskip
27
en la que cada átomo de carbono de anillo no aromático no está sustituido o está sustituido independientemente con uno o dos sustituyentes R^{1} y cada átomo de carbono de anillo aromático no está sustituido o está sustituido independientemente con un sustituyente R^{1} seleccionado del grupo constituido por
alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8},
cicloheteroalquilo C_{3-8}, cicloalquil C_{3-8}-alquilo C_{1-6},
cicloheteroalquil C_{3-8}-alquilo C_{1-6}, arilo, arilalquilo C_{1-6}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acil C_{1-3} amino, acil C_{1-3} amino-alquilo C_{1-6},
(alquil C_{1-6})_{1-2} amino, cicloalquil C_{3-6}-amino C_{0-2},
(alquil C_{1-6})_{1-2} amino-alquil C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonil-alquilo C_{1-6},
alcoxi C_{1-3} carbonilo,
alcoxi C_{1-3} carbonil-alquilo C_{1-6}, hidroxi, hidroxi-alquilo C_{1-6},
nitro, ciano, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi,
alquil C_{1-8}-S(O)_{0-2}, (alquil C_{1-8})_{0-2}-aminocarbonilo,
alquil C_{1-8}-oxicarbonilamino, (alquil C_{1-6})_{1-2} aminocarboniloxi,
(arilalquil C_{1-3})_{1-2}-amino, (aril)_{1-2}-amino,
arilalquil C_{1-3}-sulfonilamino y alquil C_{1-8}-sulfonilamino;
o dos sustituyentes R^{1}, cuando están en el mismo átomo de carbono no aromático, se toman junto con el átomo de carbono al que están unidos para formar un grupo carbonilo, o dos sustituyentes R^{1}, junto con los átomos de carbono no aromáticos a los que están unidos, se unen para formar un anillo carbocíclico de 4 a 6 miembros saturado o insaturado;
R^{2} es hidrógeno o alquilo C_{1-4};
R^{3} es flúor y R^{4} es hidrógeno o R^{3} es hidrógeno y R^{4} es flúor;
R^{5} es arilo, en el que el grupo arilo se selecciona del grupo constituido por
(1)
fenilo,
(2)
naftilo,
(3)
piridinilo,
(4)
furilo,
(5)
tienilo,
(6)
pirrolilo,
(7)
oxazolilo,
(8)
tiazolilo,
(9)
imidazolilo,
(10)
pirazolilo,
(11)
isoxazolilo,
(12)
isotiazolilo,
(13)
pirimidinilo,
(14)
pirazinilo,
(15)
piridazinilo,
(16)
quinolilo,
(17)
isoquinolilo,
(18)
bencimidazolilo,
(19)
benzofurilo,
(20)
benzotienilo,
(21)
indolilo,
(22)
benztiazolilo,
(23)
benzoxazolilo,
(24)
dihidrobenzofurilo,
(25)
benzo(1,3)dioxolanilo y
(26)
benzo(1,4)dioxanilo;
y arilo mono-, di- y trisustituido, en el que arilo es tal como se definió con anterioridad y los sustituyentes son independientemente hidroxi, hidroxialquilo C_{1-6}, halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acil C_{1-3} amino, acil C_{1-3} amino-alquilo C_{1-6}, alquil C_{1-6} amino, dialquil (C_{1-6})amino, alquil C_{1-6} amino-alquilo C_{1-6}, dialquil (C_{1-6}) amino-alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, alquil C_{1-4}-tio, alquil C_{1-4}-sulfinilo, alquil C_{1-4}-sulfonilo, alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonil-alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-5}-carbonilo, alcoxi C_{1-3}-carbonil-alquilo C_{1-6}, alquil C_{1-5}-carboniloxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi o nitro; o dos sustituyentes adyacentes, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, se unen para formar un anillo de 5 ó 6 miembros saturado o insaturado que contiene 1 ó 2 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por N, O y S, cuyos átomos de carbono del anillo pueden estar sustituidos con oxo o alquilo C_{1-3}; y
R^{6} es hidrógeno o alquilo C_{1-3}.
2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en la que R^{5} es
fenilo,
piridinilo,
quinolilo,
pirimidinilo,
pirazinilo,
pirazolilo, o
dihidrobenzofurilo mono- o disustituido;
en el que los sustituyentes son independientemente hidrógeno, hidroxi, hidroxi-alquilo C_{1-6}, halógeno, alquilo C_{1-8}, cicloalquilo C_{3-8}, arilo, arilalquilo C_{1-3}, amino, aminoalquilo C_{1-6}, acil C_{1-3} amino, acil C_{1-3} amino-alquilo C_{1-6}, alquil C_{1-6} amino, di(alquil C_{1-6})amino, alquil C_{1-6} aminoalquilo C_{1-6}, di(alquil C_{1-6})amino-alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-4}, alquil C_{1-4} tio, alquil C_{1-4} sulfinilo, alquil C_{1-4} sulfonilo, alcoxi C_{1-4}-alquilo C_{1-6}, hidroxicarbonilo, hidroxicarbonilalquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-5} carbonilo, alcoxi C_{1-3} carbonilalquilo C_{1-6}, alquil C_{1-5} carboniloxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi, trifluoroetoxi o nitro; o dos sustituyentes adyacentes, junto con los átomos de carbonos a los que están unidos, se unen para formar un anillo de 5 ó 6 miembros saturado o insaturado que contiene 1 ó 2 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por N, O y S, en el que los átomos de carbono del anillo pueden estar sustituidos con oxo o alquilo C_{1-3}.
3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 2, en la que R^{5} es
quinolilo,
piridinilo o
pirimidinilo mono- o disustituido;
en el que los sustituyentes son independientemente hidrógeno, halógeno, fenilo, alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, alcoxi C_{1-3}, amino, alquil C_{1-3} amino, di(alquil C_{1-3}) amino, hidroxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi o trifluoroetoxi.
4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en la que R^{1} es seleccionado del grupo constituido por
hidrógeno,
amino,
alquil C_{1-4} amino,
cicloalquil C_{3-6} -alquil C_{0-2} amino,
ciano,
alquilo C_{1-4},
ciclopropilo,
arilalquilo C_{1-3},
acil C_{1-4} amino,
alcoxi C_{1-4},
alquil C_{1-4}tio,
aminocarbonilo,
(alquil C_{1-6})_{1-2} aminocarbonilo,
alcoxi C_{1-4}carbonilo,
trifluorometilo y
trifluorometoxi.
5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 4, en la que R^{1} se selecciona del grupo constituido por
hidrógeno,
amino,
alquil C_{1-3}amino,
cicloalquil C_{3-6} metilamino,
alquilo C_{1-4},
ciclopropilo,
trifluorometilo y
trifluorometoxi.
6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en la que X es
28
7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 6, en la que R^{3} es hidrógeno y R^{4} es flúor.
8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 7, en la que R^{1} es alquilo C_{1-4} o ciclopropilo y R^{5} es quinolilo, piridinilo o pirimidinilo mono- o disustituido, en el que los sustituyentes son independientemente hidrógeno, halógeno, fenilo, alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-6}, alcoxi C_{1-3}, amino, alquil C_{1-3} amino, di(alquil C_{1-3}) amino, hidroxi, ciano, trifluorometilo, 1,1,1-trifluoroetilo, trifluorometoxi o trifluoroetoxi.
9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 8, seleccionado del grupo constituido por
ácido 5,5-difluoro-3-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico y
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
\vskip1.000000\baselineskip
10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 9 seleccionado del grupo constituido por
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirimidin-S-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]-naftiridin-2-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 9-(3-ciclopropil-5,6,7,8-tetrahidro-[1,8]naftiridin-2-il)-5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metil-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
ácido 5,5-difluoro-3(S)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico; y
ácido 5,5-difluoro-3(R)-(2-metoxi-pirimidin-5-il)-9-(5,6,7,8-tetrahidro-5H-pirido[2,3-b]azepin-2-il)-nonanoico;
o una de sus sales farmacéuticamente aceptables.
11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
12. La composición de acuerdo con la reivindicación 11 que también comprende un ingrediente activo seleccionado del grupo constituido por
a) un bisfosfonato orgánico o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables,
b) un modulador del receptor de estrógenos,
c) un modulador del receptor de andrógenos,
d) un agente citotóxico/antiproliferativo,
e) un inhibidor de la metaloproteinasa de matriz,
f) un inhibidor de factores de crecimiento derivados de epidermis, derivados de fibroblastos o derivados de plaquetas,
g) un antagonista del receptor VEGF,
h) un anticuerpo de un factor de crecimiento o un receptor de factor de crecimiento,
i) un inhibidor de Flk-1/KDR, Flt-1, Tck/Tie-2 o Tie-1,
j) un inhibidor de catepsina K,
k) un secretagogo de la hormona de crecimiento,
l) un inhibidor de ATPasa de protón de osteoclastos,
m) un inhibidor del activador de plasminógeno de uroquinasa (u-PA)
n) una proteína de fusión de interleuquina 2 de anticuerpos específicos de tumores,
o) un inhibidor de HMG-CoA reductasa, y
p) un inhibidor de la farnesil transferasa o un inhibidor de la geranilgeranil transferasa o un inhibidor dual de farnesil/geranilgeranil transferasa, y
q) un análogo de la hormona paratiroidea (PTH);
y sus mezclas.
\vskip1.000000\baselineskip
13. La composición de acuerdo con la reivindicación 12, en la que dicho ingrediente activo está seleccionado del grupo constituido por
a) un bisfosfonato orgánico o una de sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables,
b) un modulador del receptor de estrógenos,
c) un modulador del receptor de andrógenos,
d) un inhibidor de catepsina K;
e) un análogo de la hormona paratiroidea (PTH) y
f) un inhibidor de ATPasa de protón de osteoclasto;
y sus mezclas.
14. La composición de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho bisfosfonato orgánico o sus sales o ésteres farmacéuticamente aceptables son alendronato monosódico trihidratado.
15. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para la fabricación de un medicamento para producir un efecto antagonizante del receptor de integrina \alphav\beta3 en un mamífero.
16. Un uso de acuerdo con la reivindicación 15, en la que el efecto antagonizante de \alphav\beta3 está seleccionado del grupo constituido por inhibición de la reabsorción ósea, reestenosis, angiogénesis, retinopatía diabética, degeneración macular, inflamación, artritis inflamatoria, enfermedad viral, cáncer y crecimiento de tumor metastático.
17. Un uso de acuerdo con la reivindicación 16, en la que el efecto antagonizante de \alphav\beta3 es la inhibición de la reabsorción ósea.
18. El uso de un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-10 para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir la osteoporosis en un mamífero.
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