ES2282647T3

ES2282647T3 - Inhibidores de cinesina mitotica.

Info

Publication number: ES2282647T3
Application number: ES03741969T
Authority: ES
Inventors: Kenneth L. Arrington; Mark E. Fraley
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 2002-06-14
Filing date: 2003-06-12
Publication date: 2007-10-16
Anticipated expiration: 2023-06-12
Also published as: DE60312516D1; CA2486215A1; JP4463679B2; DE60312516T2; JP2005533063A; WO2003106417A1; ATE356804T1; EP1515949B1; AU2003276005B2; EP1515949A4; US7301028B2; AU2003276005A1; EP1515949A1; US20060063942A1

Abstract

Un compuesto de **fórmula** o una sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que a es 0 ó 1; b es 0 ó 1; m es 0, 1, ó 2; r es 0 ó 1; s es 0 ó 1; y u es 2, 3, 4 ó 5; una línea discontinua representa un doble enlace opcional, con la condición de que sólo esté presente uno y sólo un doble enlace en el anillo; R1 se selecciona de: 1) (C=O)O-alquilo C1-C10, 2) (C=O)O-arilo, 3) (C=O)O-alquenilo C2-C10, 4) (C=O)O-alquinilo C2-C10, 5) (C=O)O-cicloalquilo C3-C8, y 6) (C=O)O-heterociclilo, dichos alquilo, arilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R10.

Description

Inhibidores de cinesina mitótica.

Antecedentes de la invención

Esta invención se refiere a derivados de hidropirrol que son inhibidores de cinesinas mitóticas, en particular la cinesina mitótica KSP, y son útiles en el tratamiento de enfermedades celulares proliferativas, por ejemplo cáncer, hiperplasias, restenosis, hipertrofia cardiaca, trastornos inmunitarios e inflamación.

Entre los agentes terapéuticos usados para tratar el cáncer están los taxanos y alcaloides de la vinca. Los taxanos y alcaloides de la vinca actúan sobre microtúbulos, que están presentes en una variedad de estructuras celulares. Los microtúbulos son el elemento estructural principal del huso mitótico. El huso mitótico es responsable de la distribución de múltiples copias del genoma a cada una de las dos células hijas que resultan de la división celular. Se supone que el trastorno del huso mitótico mediante estos fármacos da como resultado la inhibición de la división celular de cáncer, y la inducción de muerte celular de cáncer. Sin embargo, los microtúbulos de otros tipos de estructuras celulares, incluyendo vías para el transporte intracelular en procesos nerviosos. Debido a que estos agentes no seleccionan como diana los husos mitóticos de forma específica, tienen efectos secundarios que limitan su
utilidad.

Las mejoras en la especificidad de los agentes usados para tratar cáncer tienen un interés considerable debido a los beneficios terapéuticos que se producirían si pudieran reducirse los efectos secundarios asociados con la administración de estos agentes. Tradicionalmente, se asocian las mejoras importantes en el tratamiento del cáncer con la identificación de agentes terapéuticos que actúan a través de mecanismos novedosos. Ejemplos de esto incluyen no sólo los taxanos, sino también la clase camptotecina de inhibidores de topoisomerasa I. Desde estas dos perspectivas, las cinesinas mitóticas son dianas atractivas para nuevos agentes anticancerígenos.

Las cinesinas mitóticas son enzimas esenciales para la unión y función del huso mitótico, pero no son generalmente parte de otras estructuras microtubulares, tales como procesos nerviosos. Las cinesinas mitóticas desempeñan papeles esenciales durante todas las fases de la mitosis. Estos enzimas son "motores moleculares" que transforman la energía liberada mediante la hidrólisis de ATP en una fuerza mecánica que acciona el movimiento direccional de carga celular a lo largo de microtúbulos. El dominio catalítico suficiente para esta tarea es una estructura compacta de aproximadamente 340 aminoácidos. Durante la mitosis, las cinesinas organizan microtúbulos dentro de la estructura bipolar que es el huso mitótico. Las cinesinas median el movimiento de los cromosomas a lo largo de los microtúbulos del huso, así como cambios estructurales en el huso mitótico asociados con las fases específicas de la mitosis. La perturbación experimental de la función cinesina mitótica provoca malformación o disfunción del huso mitótico, dando como resultado frecuentemente un paro de ciclo celular y muerte
celular.

Entre las cinesinas mitóticas que se han identificado está la KSP. La KSP pertenece a una subfamilia de cinesinas conservadas de forma evolutiva de motores microtubulares dirigidos hacia el extremo más que se unen para dar homotetrámeros bipolares constituidos por homodímeros antiparalelos. Durante la mitosis, se asocia la KSP con microtúbulos del huso mitótico. La microinyección de anticuerpos dirigidos frente a la KSP dentro de células humanas impide la separación de polos del huso durante la prometafase, dando lugar a husos monopolares y provocando el paro mitótico e inducción de la muerte celular programada. La KSP y cinesinas relacionadas en otros organismos no humanos, conecta microtúbulos antiparalelos y los desliza uno con respecto a otro, forzando así a que se separen los dos polos del huso. La KSP puede también mediar un alargamiento del huso de anafase B y centrar los microtúbulos en el polo del huso.

Se ha descrito la KSP humana (también denominada HsEg5) [Blangy, et al., Cell, 83:1159-69 (1995); Whitehead, et al., Arthritis Rheum., 39:1635-42 (1996); Galgio et al., J. Cell Biol., 135:339-414 (1996); Blangy, et al., J Biol. Chem., 272:19418-24 (1997); Blangy, et al., Cell Motil Cytoskeleton, 40:174-82 (1998); Whitehead y Rattner, J. Cell Sci., 111:2551-61 (1998); Kaiser, et al., JBC 274:18925-31 (1999); números de acceso de GenBank: X85137, NM004523 y U37426], y se ha descrito un fragmento del gen de la KSP (TRIP5) [Lee, et al., Mol Endocrinol., 9:243-54 (1995); número de acceso de GenBank L40372]. Se han notificado homólogos de KSP Xenopus (Eg5), así como drosofila K-LP61 F/KRP 130.

Se han descrito recientemente ciertas quinazolinonas como inhibidores de la KSP (publicación PCT WO 01/30768, 3 de mayo de 2001).

Las cinesinas mitóticas son dianas atractivas para el descubrimiento y desarrollo de quimioterapéuticos mitóticos novedosos. Por consiguiente, es un objeto de la presente invención proporcionar compuestos, procedimientos y composiciones útiles en la inhibición de la KSP, una cinesina mitótica.

\newpage

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a derivados de dihidropirazol, que son útiles para tratar enfermedades proliferativas celulares, para tratar trastornos asociados con la actividad de la cinesina KSP, y para inhibir la cinesina KSP. Los compuestos de la invención pueden ilustrarse mediante la fórmula I:

1

Descripción detallada de la invención

Los compuestos de esta invención son útiles en la inhibición de cinesinas mitóticas que se ilustran mediante un compuesto de fórmula I:

2

o una sal farmacéuticamente aceptable o esteroisómero del mismo, en la que

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

m es 0, 1, ó 2;

r es 0 ó 1;

s es 0 ó 1;

u es 2, 3, 4 ó 5;

una línea discontinua representa un doble enlace opcional, con la condición de que sólo esté presente uno y sólo un doble enlace en el anillo:

R^{1} se selecciona de:

1): (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)O-arilo,

3): (C=O)O-alquenilo C_{2}-C_{10},

4): (C=O)O-alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)O-cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

6): (C=O)O-heterociclilo,

dichos alquilo, arilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10};

R^{2} y R^{6} se seleccionan independientemente de:

1): arilo,

2): aralquilo C_{1}-C_{6},

3): cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

4): heterociclilo,

dichos arilo, cicloalquilo, aralquilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10};

con la condición de que R^{2} y R^{6} no sean ambos un arilo no sustituido seleccionado de fenilo y naftilo;

R^{3}, R^{4}, R^{5}, R^{7}, R^{8}, y R^{9} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): alquilo C_{1}-C_{10},

3): arilo,

4): alquenilo C_{2}-C_{10},

5): alquinilo C_{2}-C_{10},

6): perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

7): aralquilo C_{1}-C_{6},

8): cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

9): heterociclilo,

dichos alquilo, arilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, aralquilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10};o

R^{4} y R^{5}, o R^{8} y R^{9}, unidos al mismo átomo de carbono se combinan para formar -(CH_{2})_{u}- en el que se reemplaza opcionalmente uno de los átomos de carbono por un resto seleccionado de O, S(O)_{m}, -N(R^{a})C(O)-, -N(R^{b})- y -N(COR^{a})-;

R^{10} se selecciona independientemente de:

1): (C=O)_{a}O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)_{a}O_{b}-arilo,

3): alquenilo C_{2}-C_{10},

4): alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)_{a}O_{b}-heterociclilo,

6): CO_{2}H,

7): halo,

8): CN,

9): OH,

10): O_{b}-perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

11): O_{a}(C=O)_{b}NR^{12}R^{13},

12): S(O)_{m}R^{a},

13): S(O)_{2}NR^{12}R^{13},

14): oxo,

15): CHO,

16): (N=O)R^{12}R^{13}, y

17): (C=O)_{a}O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

dichos alquilo, arilo, alquenilo, alquinilo, heterociclilo y cicloalquilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{11};

R^{11} se selecciona de:

1): (C=O)_{r}O_{s}-alquilo (C_{1}-C_{10}),

2): O_{r}-perfluoroalquilo (C_{1}-C_{3}),

3): alquileno (C_{0}-C_{6})-S(O)^{m}R^{a},

4): oxo,

5): OH,

6): halo,

7): CN,

8): (C=O)_{r}O_{s}-alquenilo (C_{2}-C_{10}),

9): (C=O)_{r}O_{s}-alquinilo (C_{2}-C_{10}),

10): (C=O)_{r}O_{s}-cicloalquilo (C_{3}-C_{6}),

11): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-arilo,

12): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-heterociclilo,

13): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-N(Rb)_{2},

14): C(O)R^{a},

15): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}R^{a},

16): C(O)H,

17): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}H,

18): C(O)N(R^{b})_{2},

19): S(O)_{m}R^{a}, y

20): S(O)_{2}N(R^{b})_{2},

dichos alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, alquileno y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con hasta tres sustituyentes seleccionados de R^{b}, OH, alcoxilo (C_{1}-C_{6}), halógeno, CO_{2}H, CN, O(C=O)-alquilo C_{1}-C_{6}, oxo, y N(R^{b})_{2};

R^{12} y R^{13} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): (C=O)O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

3): (C=O)O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

4): (C=O)O_{b}-arilo,

5): (C=O)O_{b}-heterociclilo,

6): alquilo C_{1}-C_{10},

7): arilo,

8): alquenilo C_{2}-C_{10},

9): alquinilo C_{2}-C_{10},

10): heterociclilo,

11): cicloalquilo C_{3}-C_{8},

12): SO_{2}R^{a}, y

13): (C=O)NRb_{2},

dichos alquilo, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, alquenilo y alquinilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{11}, o

R^{12} y R^{13} pueden tomarse junto con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo monocíclico o bicíclico con 5-7 miembros en cada anillo y

que contiene opcionalmente, además del nitrógeno, uno o dos heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S, sustituyéndose opcionalmente dicho heterociclo monocíclico o bicíclico con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{11};

R^{a} es alquilo (C_{1}-C_{6}), cicloalquilo (C_{3}-C_{6}), arilo, o heterociclilo; y

R^{b} es H, alquilo (C_{1}-C_{6}), arilo, heterociclilo, cicloalquilo (C_{3}-C_{6}), (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{6}, (C=O)-alquilo C_{1}-C_{6}, o S(O)_{2}R^{a}.

Una realización adicional de la presente invención se ilustra mediante un compuesto de fórmula II:

3

o una sal farmacéuticamente aceptable o esteroisómero del mismo, en la que

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

m es 0, 1, ó 2;

r es 0 ó 1; y

s es 0 ó 1;

una línea discontinua representa un doble enlace opcional, siempre que sólo esté presente uno y sólo un doble enlace en el anillo:

R^{1} se selecciona de:

1): (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)O-arilo,

3): (C=O)O-alquenilo C_{2}-C_{10},

4): (C=O)O-alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)O-cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

6): (C=O)O-heterociclilo,

R^{2} y R^{6} se seleccionan independientemente de:

1): arilo,

2): aralquilo C_{1}-C_{6},

3): cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

4): heterociclilo,

R^{3}, R^{4}, y R^{8} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): alquilo C_{1}-C_{10},

3): arilo,

4): alquenilo C_{2}-C_{10},

5): alquinilo C_{2}-C_{10},

6): perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

7): aralquilo C_{1}-C_{6},

8): cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

9): heterociclilo,

dichos alquilo, arilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, aralquilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10};

R^{10} se selecciona independientemente de:

1): (C=O)_{a}O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)_{a}O_{b}-arilo,

3): alquenilo C_{2}-C_{10},

4): alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)_{a}O_{b}-heterociclilo,

6): CO_{2}H,

7): halo,

8): CN,

9): OH,

10): O_{b}-perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

11): O_{a}(C=O)_{b}NR^{12}R^{13},

12): S(O)_{m}R^{a},

13): S(O)_{2}NR^{12}R^{13},

14): oxo,

15): CHO,

16): (N=O)R^{12}R^{13}, y

17): (C=O)_{a}O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

dichos alquilo, arilo, alquenilo, alquinilo, heterociclilo y cicloalquilo están sustituidos opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de R^{11};

R^{11} se selecciona de:

1): (C=O)_{r}O_{s}-alquilo (C_{1}-C_{10}),

2): O_{r}-perfluoroalquilo (C_{1}-C_{3}),

3): oxo,

4): OH,

5): halo,

6): CN,

7): alquenilo (C_{2}-C_{10}),

8): alquinilo (C_{2}-C_{10}),

9): (C=O)_{r}O_{s}-cicloalquilo (C_{3}-C_{6}),

10): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-arilo,

11): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-heterociclilo,

12): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-N(R^{b})_{2},

13): C(O)R^{a},

14): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}R^{a},

15): C(O)H,

16): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}H,

17): C(O)N(R^{b})_{2},

18): S(O)_{m}R^{a}, y

19): S(O)2N(R^{b})_{2};

R^{12} y R^{13} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): (C=O)O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

3): (C=O)O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

4): (C=O)O_{b}-arilo,

5): (C=O)O_{b}-heterociclilo,

6): alquilo C_{1}-C_{10},

7): arilo,

8): alquenilo C_{2}-C_{10},

9): alquinilo C_{2}-C_{10},

10): heterociclilo,

11): cicloalquilo C_{3}-C_{8},

12): SO_{2}R^{a}, y

13): (C=O)NRb_{2},

dichos alquilo, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, alquenilo y alquinilo están sustituidos opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de R^{11}, o

R^{12} y R^{13} pueden tomarse junto con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo monocíclico o bicíclico con 5-7 miembros en cada anillo y que contiene opcionalmente, además del nitrógeno, uno o dos heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S, sustituyéndose opcionalmente dicho heterociclo monocíclico o bicíclico con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de R^{11};

Una realización adicional de la presente invención se ilustra mediante un compuesto de fórmula III, o una sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable;

4

en la que

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

m es 0, 1, ó 2;

r es 0 ó 1; y

s es 0 ó 1;

R^{1} se selecciona de:

1): (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)O-arilo,

3): (C=O)O-cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

4): (C=O)O-heterociclilo,

dichos alquilo, arilo, cicloalquilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10};

R^{3}, R^{4}, y R^{8} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): alquilo C_{1}-C_{10}, y

3): perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

dicho alquilo está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10};

R^{10} se selecciona independientemente de:

1): (C=O)_{a}O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)_{a}O_{b}-arilo,

3): alquenilo C_{2}-C_{10},

4): alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)_{a}O_{b}-heterociclilo,

6): CO_{2}H,

7): halo,

8): CN,

9): OH,

10): O_{b}-perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

11): O_{a}(C=O)_{b}NR^{12}R^{13},

12): S(O)_{m}R^{a},

13): S(O)_{2}NR^{12}R^{13},

14): oxo,

15): CHO,

16): (N=O)R^{12}R^{13}, y

17): (C=O)_{a}O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

R^{10} es halógeno;

R^{11} se selecciona de:

1): (C=O)_{r}O_{s}-alquilo (C_{1}-C_{10}),

2): O_{r}perfluoroalquilo (C_{1}-C_{3}),

3): oxo,

4): OH,

5): halo,

6): CN,

7): alquenilo (C_{2}-C_{10}),

8): alquinilo (C_{2}-C_{10}),

9): (C=O)_{r}O_{s}-cicloalquilo (C_{3}-C_{6}),

10): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-arilo,

11): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-heterociclilo,

12): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-N(R^{b})_{2},

13): C(O)R^{a},

14): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}R^{a},

15): C(O)H,

16): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}H,

17): C(O)N(R^{b})_{2},

18): S(O)_{m}R^{a}, y

19): S(O)_{2}N(R^{b})_{2};

R^{12} y R^{13} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): (C=O)O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

3): (C=O)O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

4): (C=O)O_{b}-arilo,

5): (C=O)O_{b}-heterociclilo,

6): alquilo C_{1}-C_{10},

7): arilo,

8): alquenilo C_{2}-C_{10},

9): alquinilo C_{2}-C_{10},

10): heterociclilo,

11): cicloalquilo C_{3}-C_{8},

12): SO_{2}R^{a}, y

13): (C=O)NRb_{2},

R^{a} se selecciona independientemente de: alquilo (C_{1}-C_{6}), cicloalquilo (C_{3}-C_{6}), arilo, y heterociclilo; y

R^{b} se selecciona independientemente de: H, alquilo (C_{1}-C_{6}), arilo, heterociclilo, cicloalquilo (C_{3}-C_{6}), (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{6}, (C=O)-alquilo C_{1}-C_{6}, o S(O)_{2}R^{a}.

Otra realización es el compuesto de fórmula III descrito justo anteriormente, o una sal farmacéuticamente aceptable o esteroisómero del mismo, en la que:

R^{1} es (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{10},

dicho alquilo está sustituido opcionalmente con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de R^{10};

R^{3}, R^{4} y R^{8} se seleccionan independientemente de:

1): H, y

2): alquilo C_{1}-C_{10}, dicho alquilo está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10}; y

R^{10}, R^{10'}, R^{11}, R^{12}, R^{13}, R^{a} y R^{b} son tal como se describió justo anteriormente

Ejemplos específicos de los compuestos de la presente invención son:

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de metilo;

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de alilo;

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de etilo;

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de fenilo;

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de isopropilo;

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de 2-(dimetilamino)-2-metilpropilo.

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de 2-aminoetilo;

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de 3-aminopropilo;

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de pirrolidin-3-il;

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-fenol-1-carboxilato de piperidin-4-il;

o una sal o eteroisómero farmacéuticamente aceptable de los mismos.

En otra realización de la presente invención, los ejemplos específicos de los compuestos de la invención incluyen las sales de TFA de los compuestos.

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de 2-(dimetilamino)-2-metilpropilo;

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de pirrolidin-3-ilo; y

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de piperidin-4-ilo.

Los compuestos de la presente invención pueden tener centros asimétricos, ejes quirales, y planos quirales (tal como se describe en: E.L. Eliel y S.H. Wilen, Stereochemistry of Carbon Compounds, John Wiley & Sons, Nueva York, 1994, páginas 1119-1190), y se producen como racematos, mezclas racémicas y como diastereómeros individuales, con todos los posibles isómeros y mezclas de los mismos, incluyendo isómeros ópticos, estando incluidos todos los isómeros de este tipo en la presente invención. Además, los compuestos descritos en el presente documento pueden existir como tautómeros y se propone que ambas formas tautómeras estén abarcadas por el alcance de la invención, incluso aunque sólo se describe una forma tautómera

Cuando cualquier variable (por ejemplo, R^{10}, R^{11}, R^{12}, etc.) se produce más de una vez en cualquier constituyente, su definición en cada caso es independiente de cada otro caso. También, se permiten combinaciones de sustituyentes y variables sólo si tales combinaciones dan como resultado compuestos estables. Las líneas dibujadas dentro de los sistemas anulares desde los sustituyentes representan que el enlace indicado puede estar unido a cualquiera de los átomos del anillo sustituibles. Si el sistema anular es policíclico, se pretende que el enlace esté unido a cualquiera de los átomos de carbono adecuados en el anillo próximo sólo.

Se entiende que los sustituyentes y modelos de sustitución en los compuestos de la presente invención pueden seleccionarse por un experto en la técnica para proporcionar compuestos que son químicamente estables y que pueden sintetizarse fácilmente mediante técnicas conocidas en la técnica, así como aquellos procedimientos expuestos a continuación, desde materiales de partida disponibles fácilmente. Si un sustituyente está sustituido por sí mismo con más de un grupo, se entiende que estos grupos múltiples pueden estar sobre el mismo carbono o sobre diferentes carbonos, siempre que dé como resultado una estructura estable. La frase "sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes" debe tomarse como que es equivalente a la frase "sustituido opcionalmente con al menos un sustituyente" y en tales casos la realización preferida tendrá de cero a tres sustituyentes.

Tal como se usa en el presente documento, se pretende que "alquilo" incluya grupos de hidrocarburos alifáticos saturados de cadena tanto lineal como ramificada que tiene el número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, C_{1}-C_{10}, como en "alquilo C_{1}-C_{10}" se define para incluir grupos que tienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 carbonos con una disposición lineal o ramificada. Por ejemplo, "alquilo C_{1}-C_{10}" incluye específicamente metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, t-butilo, i-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, y así sucesivamente. El término "cicloalquilo" quiere decir un grupo hidrocarburo alifático saturado monocíclico que tiene el número específico de átomos de carbono. Por ejemplo, "cicloalquilo" incluye ciclopropilo, metilciclopropilo, 2,2-dimetil-ciclobutilo, 2-etilciclopentilo, ciclohexilo, y así sucesivamente. El término "alquileno" quiere decir un grupo hidrocarburo de dos radicales que tiene el número especificado de átomos de carbono. Por ejemplo, "alquileno" incluye -CH_{2}-, -CH_{2}CH_{2}- y similares.

Cuando se usa en las frases "aralquilo C_{1}-C_{6}" y "heteroaralquilo C_{1}-C_{6}" el término "C_{1}-C_{6}" se refiere a la porción alquilo del radical y no describe el número de átomos en la porción arilo y heteroarilo del radical.

"Alcoxilo" representa o bien un grupo alquilo cíclico o bien no cíclico del número indicado de átomos de carbono unidos a través de un puente de oxígeno. Por tanto, "alcoxilo" abarca las definiciones de alquilo y cicloalquilo anteriores.

Si no se especifica el número de átomos de carbono, el término "alquenilo" se refiere a un radical hidrocarburo no aromático, lineal, ramificado o cíclico, que contiene desde 2 a 10 átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono. Preferiblemente está presente un doble enlace carbono-carbono y pueden estar presentes hasta cuatro dobles enlaces carbono-carbono no aromáticos. Por tanto, "alquenilo C_{2}-C_{6}" quiere decir un radical alquenilo que tiene desde 2 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquenilo incluyen etenilo, propenilo, butenilo, 2-metilbutenilo y ciclohexenilo. La porción lineal, ramificada o cíclica del grupo alquenilo puede contener dobles enlaces y puede estar sustituida si se indica un grupo alquenilo sustituido.

El término "alquinilo" se refiere a un radical hidrocarburo lineal, ramificado o cíclico, que contiene desde 2 a 10 átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono a carbono. Pueden estar presentes hasta tres enlaces triples carbono-carbono. Por tanto, "alquinilo C_{2}-C_{6}" quiere decir un radical alquinilo que tiene desde 2 a 6 átomos de carbono. Los grupos alquinilo incluyen etinilo, propinilo, butinilo, 2-metilbutinilo y así sucesivamente. La porción lineal, ramificada o cíclica del grupo alquinilo puede contener triples enlaces y puede estar sustituida si se indica un grupo alquinilo sustituido.

En ciertos casos, los sustituyentes pueden definirse con un intervalo de carbonos que incluye cero, tales como alquileno (C_{0}-C_{6})-arilo. Si se toma el arilo para ser fenilo, esta definición incluiría el propio fenilo así como -CH_{2}Ph, -CH_{2}CH_{2}Ph, CH(CH_{3})CH_{2}CH(CH_{3})Ph, y así sucesivamente.

Tal como se usa en el presente documento, se pretende que "arilo" signifique cualquier anillo de carbono monocíclico o bicíclico de hasta 7 átomos de carbono en cada anillo, en el que al menos un anillo es aromático. Ejemplos de elementos arilo de este tipo incluyen fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, indanilo y bifenilo. En los casos en los que el sustituyente arilo es bicíclico y un anillo es no aromático, se entiende que la unión es a través del anillo aromático.

El término heteroarilo, tal como se usa en el presente documento, representa un anillo monocíclico o bicíclico estable de hasta 7 átomos en cada anillo, en el que al menos un anillo es aromático y contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por O, N y S. Los grupos heteroarilo dentro del alcance de esta definición incluyen pero no se limitan a: acridinilo, carbazolilo, cinnolinilo, quinoxalinilo, pirrazolilo, indolilo, benzotriazolilo, furanilo, tienilo, benzotienilo, benzofuranilo, quinolinilo, isoquinolinilo, oxazolilo, isoxazolilo, indolilo, pirazinilo, piridazinilo, pirinidilo, pirimidinilo, pirrolilo, tetrahidroquinolina. Tal como con la definición de heterociclo a continuación, se entiende también que "heteroalilo" incluye el derivado N-óxido de cualquier heteroalilo que contiene nitrógeno. En casos en los que el sustituyente heteroalilo es bicíclico y un anillo es no aromático o no contiene heteroátomos, se entiende que la unión es a través del anillo aromático o a través del anillo que contiene el heteroátomo, respectivamente.

Se pretende que el término "heterociclo" o "heterociclilo" tal como se usa en el presente documento signifique un heterociclo no aromático o aromático de 5 a 10 miembros, que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo constituido por O, N y S, e incluye grupos bicíclicos. Por tanto, "heterociclilo" incluye los heteroarilos mencionados anteriormente, así como análogos dihidro y tetrahidro de los mismos. Ejemplos adicionales de "heterociclilo" incluyen, pero no se limitan a los siguientes: benzoimidazolilo, benzofuranilo, benzofurazanilo, benzopirazolilo, benzotriazolilo, benzotiofenilo, benzoxazolilo, carbazolilo, carbolinilo, cinnolinilo, furanilo, imidazolilo, indolinilo, indolilo, indolazinilo, indazolilo, isobenzofuranilo, isoindolilo, isoquinolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, naftpiridinilo, oxadiazolilo, oxazolilo, oxazolina, isoxazolina, oxetanilo, piranilo, pirazinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridopiridinilo, piridazinilo, piridilo, pirimidilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolilo, quinoxalinilo, tetrahidropiranilo, tetrazolilo, tetrazolopiridilo, tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo, triazolilo, azetidinilo, 1,4-dioxanilo, hexahidroazepinilo, piperazinilo, piperidinilo, piridin-2-onilo, pirrolidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, dihidrobenzoimidazolilo, dihidrobenzofuranilo, dihidrobenzotiofenilo, dihidrobenzoxazolilo, dihidrofuranilo, dihidroimidazolilo, dihidroindolilo, dihidroisooxazolilo, dihidroisotiazolilo, dihidrooxadiazolilo, dihidrooxazolilo, dihidropirazinilo, dihidropirazolilo, dihidropiridinilo, dihidropirimidinilo, dihidropirrolilo, dihidroquinolinilo, dihidrotetrazolilo, dihidrotiadiazolilo, dihidrotiazolilo, dihidrotienilo, dihidrotriazolilo, dihidroazetidinilo, metilenodioxibenzoilo, tetrahidrofuranilo, y tetrahidrotienilo, y N-óxidos de los mismos. La unión de un sustituyente heterociclilo puede producirse a través de un átomo de carbono o a través de un heteroátomo.

Preferiblemente, se selecciona el heterociclo de 2-azepinona, benzimidazolilo, 2-diazapinona, imidazolilo, 2-imidazolidinona, indolilo, isoquinolinilo, morfolinilo, piperidilo, piperazinilo, piridilo, pirrolidinilo, 2-piperidinona, 2-pirimidinona, 2-pirolidinona, quinolinilo, tetrahidrofurilo, tetrahidroisoquinolinilo, y tienilo.

Tal como es evidente por los expertos en la técnica, se pretende que "halo" o "halógeno" tal como se usa en el presente documento incluya cloro, flúor, bromo y yodo.

Los sustituyentes alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, heteroarilo y heterociclilo pueden estar sustituidos o no sustituidos, a menos que se defina específicamente lo contrario. Por ejemplo, un alquilo (C_{1}-C_{6}) puede estar sustituido con uno, dos o tres sustituyentes seleccionados de OH, oxo, halógeno, alcoxilo, dialquiloamino, o heterociclilo, tales como morfolinilo, piperidinilo, y así sucesivamente. En este caso, si un sustituyente es oxo y el otro es OH, se incluyen los siguientes en la definición: -C=O)CH_{2}CH(OH)CH_{3}, -(C=O)OH, -CH_{2}(OH)CH_{2}CH(O), y así sucesivamente.

El radical formado cuando, en la definición de R^{4} y R^{5} y R^{8} y R^{9} sobre el mismo átomo de carbono se combinan para formar -(CH_{2})_{u}- se ilustra mediante lo siguiente:

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Además, tales radicales cíclicos pueden incluir opcionalmente un(os) heteroátomo(s). Ejemplos de tales radicales cíclicos que contienen heteroátomos incluyen pero no se limitan a:

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En algunos casos, se definen R^{12} y R^{13} y R^{c} y R^{c'} de tal manera que puedan tomarse junto con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo monocíclico o bicíclico con 5-7 miembros en cada anillo y que contiene opcionalmente, además del nitrógeno, uno o dos heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S, sustituyéndose dicho heterociclo opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{11}. Ejemplos de los heterociclos que pueden formarse así incluyen, pero no se limitan a los siguientes, teniendo en cuenta que el heterociclo está sustituido opcionalmente con uno o más (y preferiblemente uno, dos o tres) sustituyentes elegidos de
R^{11}.

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Preferiblemente, R^{1} se selecciona de (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{6} y (C=O)O-arilo C_{1}-C_{6}, sustituido opcionalmente con de uno a tres sustituyentes seleccionados de R^{10}. Más preferiblemente, R^{1} es metoxicarbonilo o fenoxicarbonilo.

Preferiblemente R^{2} se selecciona de arilo, sustituido opcionalmente con de uno a tres sustituyentes seleccionados de R^{10}. Más preferiblemente, R^{2} es fenilo, opcionalmente sustituido con de uno a tres sustituyentes seleccionados de halo.

También se prefiere la definición de R^{4}, R^{5}, R^{7}, R^{8} y R^{9} como H.

Preferiblemente R^{3} se selecciona de H y alquilo C_{1}-C_{6}, opcionalmente sustituido con de uno a dos sustituyentes seleccionados de R^{10}.

Preferiblemente R^{6} se selecciona de arilo, sustituido opcionalmente con de uno a tres sustituyentes seleccionados de R^{10}. Más preferiblemente, R^{6} es fenilo, sustituido opcionalmente con de uno a tres sustituyentes seleccionados de halo.

Preferiblemente R^{10'} es flúor.

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Incluida en la presente invención está la forma libre de compuestos de fórmula I, así como las sales farmacéuticamente aceptables y estereoisómeros de la misma. Algunos de los compuestos específicos mostrados a modo de ejemplo en el presente documento son las sales protonadas de compuestos de amina. El término "forma libre" se refiere a los compuestos de amina que no están en forma de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables abarcadas no sólo incluyen las sales mostradas a modo de ejemplo para los compuestos específicos descritos en el presente documento, sino también todas las sales farmacéuticamente aceptables típicas de la forma libre de los compuestos de fórmula I. La forma libre de los compuestos de sales específicas descritos pueden aislarse usando técnicas conocidas en la técnica. Por ejemplo, la forma libre puede regenerarse tratando la sal con una disolución básica acuosa diluida adecuada tal como NaOH acuoso diluido, carbonato de potasio, amonio y bicarbonato de sodio. Las formas libres pueden diferir de sus respectivas formas salinas de alguna manera en ciertas propiedades físicas, tales como solubilidad en disolventes polares, pero por lo demás, las sales de ácidos y bases son farmacéuticamente equivalentes a sus respectivas formas libres para fines de la invención.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los presentes compuestos pueden sintetizarse a partir de los compuestos de esta invención que contienen un radical básico o ácido mediante procedimientos químicos convencionales. Generalmente, se preparan las sales de los compuestos básicos o bien mediante cromatografía de intercambio iónico o bien mediante la reacción de la base libre con cantidades estequiométricas o con un exceso del ácido orgánico o inorgánico que forma la sal deseada en un disolvente adecuado o diversas combinaciones de disolventes. De forma similar, se forman las sales de los compuestos ácidos mediante reacciones con la base orgánica o inorgánica
apropiada.

Por tanto, las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen las sales no tóxicas convencionales de los compuestos de esta invención tal como se forman mediante la reacción de un compuesto básico con un ácido orgánico o inorgánico. Por ejemplo, las sales no tóxicas convencionales incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico, nítrico y similares, así como las sales preparadas a partir de ácidos orgánicos tales como acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacetico, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluenosulfónico, metanosulfónico, etanodisulfónico, oxálico, isetiónico, trifluoroacético y similares.

Cuando el compuesto de la presente invención es ácido, las "sales farmacéuticamente aceptables" se refieren a sales preparadas a partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables que incluyen bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales derivadas a partir de bases inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre, férricas, ferrosas, de litio, magnesio, sales mangánicas, manganosas, de potasio, sodio, zinc y similares. Se prefieren particularmente las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio. Las sales derivadas de bases no tóxicas orgánicas farmacéuticamente aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas que se producen de forma natural, aminas cíclicas y resinas de intercambio de iones básicos, tales como arginina, betaína, cafeína, colina, N,N^{1}-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanoamina, etilendiamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperidina, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas de poliamina, procaína, purinas, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares.

La preparación de las sales farmacéuticamente aceptables descritas anteriormente y otras sales farmacéuticamente aceptables típicas se describe más completamente por Berg et al., "Farmaceutical Salts," J. Farm. Sci., 1977:66:
1-19.

También debe observarse que los compuestos de la presente invención son sales potencialmente internas o zwitteriones, puesto que en condiciones fisiológicas un radical ácido desprotonado en el compuesto, tal como un grupo carboxilo, puede ser aniónico, y este cambio electrónico puede entonces equilibrarse internamente frente al cambio catiónico de un radical básico protonado o alquilado, tal como un átomo de nitrógeno cuaternario.

Los compuestos de esta invención pueden prepararse empleando reacciones tal como se muestran en los siguientes esquemas, además de otras manipulaciones habituales que se conocen en la bibliografía o se muestran a modo de ejemplo en los procedimientos experimentales. Los esquemas ilustrativos siguientes, por tanto, no se limitan a los compuestos enumerados o a ningún sustituyente particular empleado para fines ilustrativos. La numeración de los sustituyentes, tal como se muestra en los esquemas no se correlaciona necesariamente a la usada en las reivindicaciones y a menudo, por claridad, se muestra un único sustituyente unido al compuesto en lugar de múltiples sustituyentes que se permiten en las definiciones de la formula I anteriormente en el presente documento.

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Esquemas

Tal como se muestra en el esquema A, el producto intermedio clave dihidropirrol A-4 puede obtenerse a partir de anilinas y dihidropirrol N-protegido sustituidos de forma adecuada disponibles fácilmente. La posterior desprotección del nitrógeno del anillo permite la funcionalización con electrófilos sustituidos de forma apropiada, tales como cloruro de dialquilcarbamoílo para dar el presente compuestos A-6. El esquema A-1 muestra una síntesis alternativa del producto intermedio A-4.

Tal como se muestra en el esquema B, el uso de un único enantiómero de fenilpirrol que tiene un radical hidroxilo ubicado apropiadamente permite la preparación del producto intermedio B-5 enantioméricamente puro, que puede desprotegerse a continuación y funcionalizarse en un procedimiento análogo al mostrado en el esquema A.

El esquema C ilustra una preparación alternativa para el producto intermedio de triflato C-2.

Otros sustituyentes R^{6} pueden incorporarse al presente compuesto tal como se muestra en el esquema D. Por tanto, un reactivo de Grignard adecuado puede reemplazar el ácido arilborónico que se utiliza en el esquema B. El esquema D también ilustra un procedimiento alternativo que puede utilizarse para incorporar el radical alcoxi (o ariloxi)carbonilo en el nitrógeno del dihidropirrol.

Un acoplamiento de Suzuki puede emplearse también para incorporar un sustituyente heteroarilo R^{6}, tal como se ilustra en el esquema E.

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Esquema A

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Esquema A-1

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Esquema B

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Esquema C

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Esquema D

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Esquema E

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Utilidades

Los compuestos de la invención se usan en una variedad de aplicaciones. Tal como resultará evidente por los expertos en la técnica, la mitosis puede modificarse de diversas maneras: es decir, uno puede afectar la mitosis o bien aumentando o bien disminuyendo la actividad de un componente en la ruta mitótica. Expuesto de forma diferente, la mitosis puede afectarse (por ejemplo, deteriorarse) alterando el equilibrio, o bien inhibiendo o bien activando ciertos componentes. Enfoques similares pueden usarse para alterar la meiosis.

En una realización preferida, se usan los compuestos de la invención para modular la formación del huso mitótico, provocando así el paro prolongado del ciclo celular en la mitosis. Por "modular" en el presente documento quiere decirse alterar la formación del huso mitótico, incluyendo el aumento y disminución de la formación del huso. Por "formación del huso mitótico" en el presente documento quiere decirse organización de microtúbulos dentro de estructuras bipolares mediante cinesinas mitóticas. Por "disfunción del huso mitótico" en el presente documento quiere decirse paro mitótico y formación del huso monopolar.

Los compuestos de la invención son útiles para unirse a y/o modular la actividad de una cinesina mitótica. En una realización preferida, la cinesina mitótica es un miembro de la subfamilia bimC de las cinesinas mitóticas (tal como se describe en la patente de los EE.UU. número 6.284.480, columna 5). En una realización preferida adicional, la cinesina mitótica es KSP humana, aunque la actividad de las cinesinas mitóticas de otros organismos también puede modularse mediante los compuestos de la presente invención. En este contexto, modular quiere decir o bien aumentar o bien disminuir la separación de los polos del huso, provocando malformación, es decir, separación de los polos mitóticos, o a parte de eso provocando una perturbación morfológica del huso mitótico. También se incluyen dentro de la definición de KSP para estos fines, variantes y/o fragmentos de KSP. Véase la publicación PCT del documento WO 01/31335: "Methods of Screening for Modulators of Cell Proliferation and Methods of Diagnosing Cell Proliferation States", presentado el 27 de octubre de 1999. Además, otras cinesinas mitóticas pueden inhibirse mediante los compuestos de la presente invención.

Los compuestos de la invención se usan para tratar enfermedades de proliferación celular. Las condiciones patológicas que pueden tratarse mediante los procedimientos y composiciones proporcionados en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, cáncer (que se trata además a continuación), enfermedad autoinmunutaria, artritis, rechazo de injertos, enfermedad inflamatoria intestinal, proliferación inducida tras procedimientos médicos, que incluyen, pero no se limitan a cirugía, angioplástia, y similares. Es evidente que en algunos casos las células pueden no estar en una condición de hiper o hipoproliferación (condición anómala) y requieren todavía tratamiento. Por ejemplo, durante la cicatrización de heridas, las células pueden estar proliferando "normalmente", pero puede desearse la intensificación de la proliferación. De forma similar, tal como se trató anteriormente, en la arena de cultivo, las células pueden estar en una condición "normal", pero puede desearse la modulación de la proliferación para intensificar una cosecha, intensificando directamente el crecimiento de una cosecha, o inhibiendo el crecimiento de una planta u organismo que afecta negativamente a la cosecha. Por tanto, en una realización, la invención en el presente documento incluye la aplicación a células o individuos aquejados o aquejados de forma inminente con uno cualquiera de estos trastornos o condiciones.

Se consideran particularmente útiles los componentes, composiciones y procedimientos proporcionados en el presente documento, para el tratamiento de cáncer, incluyendo tumores sólidos tales como carcinomas de piel, pecho, cervicales, carcinomas testiculares, etc. Más particularmente, los cánceres que pueden tratarse mediante los compuestos, composiciones y procedimientos de la invención incluyen, pero no se limitan a: cardíacos: sarcoma (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma y teratoma; pulmón: carcinoma broncogénico (células escamosas, células pequeñas no diferenciadas, células grandes no diferenciadas, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; gastrointestinal: esófago (carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), estómago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), páncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, leiomioma); tracto genitourinario: riñón (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), vejiga y uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células de transición, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículo (seminoma, teratoma, carcinoma embrionario, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiales, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); hígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; hueso: sarcoma osteogénico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células reticulares), mieloma múltiple, tumor de células gigantes maligno, cordoma, osteocondroma (exostosis osteocartilaginosas), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide y tumor de células gigantes; sistema nervioso: cráneo (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteítis deformante), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), cerebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congénitos), neurofibroma de la médula espinal, meningioma, glioma, sarcoma); ginecológicos: útero (carcinoma endometrial), cuello del útero (carcinoma cervicouterino, displasia del cuello uterino pretumoral), ovarios (carcinoma ovárico) [cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma no clasificado], tumores de células tecales y granulosas, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiosarcoma embrional), trompas de falopio (carcinoma); hematológicos: sangre (leucemia mieloide [aguda y crónica], leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfoblástica crónica, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico, enfermedad de Hodgkin, linfoma de no Hodgkin [linfoma maligno]; piel: melanoma maligno, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Karposi, nevus displásico de lunares, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoriasis; y glándulas suprarrenales: neuroblastoma. Por tanto, el término "célula cancerosa" tal como se proporciona en el presente documento, incluye una célula aquejada por una cualquiera de las condiciones identificadas anteriormente.

Los compuestos de la presente invención pueden ser útiles como agentes antifúngicos, modulando la actividad de los miembros fúngicos del subgrupo de la cinesina bimC, tal como se describe en la patente de los EE.UU. número 6.284.480.

Los compuestos de esta invención pueden administrarse a mamíferos, preferiblemente seres humanos, o bien solos o bien, preferiblemente, en combinación con vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables, en una composición farmacéutica, según la práctica farmacéutica habitual. Los compuestos pueden administrarse por vía oral o vía parenteral, incluyendo las vías de administración intravenosas, intramusculares, intraperitoneales, subcutáneas, rectales o tópicas.

Tal como se usa en el presente documento, se pretende que el término "composición" englobe un producto que comprende los componentes especificados en las cantidades específicas, así como cualquier producto que resulta, directa o indirectamente, de la combinación de los componentes específicos en las cantidades especificadas.

Las composiciones farmacéuticas que contienen el principio activo pueden estar en una forma adecuada para su uso oral, por ejemplo, como comprimidos, tabletas, pastillas, suspensiones acuosas o aceitosas, polvos o gránulos que pueden dispersarse, emulsiones, cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires. Las composiciones propuestas para uso oral pueden prepararse según cualquier procedimiento conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener uno o varios agentes seleccionados del grupo constituido por agentes endulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, con el fin de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y agradables. Los comprimidos contienen el principio activo mezclado con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio, agentes de granulación y desintegración, por ejemplo, celulosa microcristalina, croscarmelosa de sodio, almidón de maíz, o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina, polivinilpirrolidona o acacia, y agentes lubricantes, por ejemplo, estereato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar no recubiertos o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas para enmascarar el gusto desagradable del fármaco o retrasar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal y por tanto proporcionar una acción sostenida durante un periodo más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de enmascaramiento del sabor soluble en agua, tal como hidroxipropilmetilcelulosa o hidroxipropilcelulosa, o un material de retraso de tiempo tal como etilcelulosa, butirato acetato de celulosa.

Las formulaciones para su uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatinas duras en las que se mezcla el principio activo con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolina, o tales como cápsulas de gelatina blandas en las que se mezcla el principio activo con un vehículo soluble en agua tal como polietilenglicol o un medio de aceite, por ejemplo, aceite de cacahuete, parafina líquida, o aceite de oliva.

Las suspensiones acuosas contienen el principio activo mezclado con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma acacia, los agentes de dispersión o humectantes pueden ser un fosfátido que se produce naturalmente, por ejemplo, lecitina o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo, estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como monooleato de polioxietilensorbitol polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polietilensorbitano. Las suspensiones acuosas también pueden contener uno o varios conservantes, por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o varios agentes colorantes, uno o varios agentes saborizantes, y uno o varios agentes endulcorantes, tales como sacarosa, sacarina o aspartamo.

Las suspensiones aceitosas pueden formularse suspendiendo el principio activo en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de coco, o en un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones aceitosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo, cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Los agentes edulcorantes tales como los expuestos anteriormente, y los agentes saborizantes pueden añadirse para proporcionar una preparación oral agradable. Estas composiciones pueden conservarse para la adición de un antioxidante tales como hidroxianisol butilado o alfa-tocoferol.

Los gránulos y polvos que pueden dispersarse adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el principio activo mezclado con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o varios conservantes. Se dan a modo de ejemplo los agentes de dispersión o humectantes y los agentes de suspensión adecuados, mediante los mencionados anteriormente. Excipientes adicionales, por ejemplo agentes endulcorantes, saborizantes o colorantes, también pueden estar presentes. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.

Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua. La fase aceitosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo, parafina líquida o mezclas de estos. Los agentes de emulsión adecuados pueden ser fosfátidos que se producen naturalmente, por ejemplo, lecitina de semilla de soja, y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de sorbitano, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monoleato de polioxietilensorbitano. Las emulsiones también pueden contener agentes endulcorantes, agentes saborizantes, conservantes y antioxidantes.

Los jarabes y elixires pueden formularse con agentes endulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Las formulaciones de este tipo también pueden contener un demulcente, un conservante, agentes saborizantes y colorantes y antioxidantes.

Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de disoluciones acuosas inyectables estériles. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse son agua, disolución de Ringer y disolución de cloruro de sodio isotónica.

La preparación inyectable estéril puede ser también una microemulsión de aceite en agua inyectable estéril en la que se disuelve el principio activo en la fase aceitosa. Por ejemplo, el principio activo puede disolverse en primer lugar en una mezcla de aceite de semilla de soja y lecitina. La disolución de aceite se introduce a continuación dentro de una mezcla de agua y glicerol y se trata para formar una microemulsión.

Las disoluciones o microemulsiones inyectables pueden introducirse dentro del torrente sanguíneo de un paciente mediante inyección en bolo local. Alternativamente, puede ser ventajoso administrar la disolución o microemulsión de tal forma como para mantener una concentración de circulación constante del presente compuesto. Con el fin de mantener tal concentración constante, puede utilizarse un dispositivo de administración intravenoso continuo. Un ejemplo de un dispositivo de este tipo es la bomba intravenosa Deltec CADD-PLUS™ modelo 5400.

Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión acuosa o oleaginosa inyectable estéril para la administración intramuscular y subcutánea. Esta suspensión puede formularse según la técnica conocida usando los agentes humectantes o de dispersión y agentes de suspensión adecuados que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril puede ser también una disolución o una suspensión inyectable estéril en un disolvente o diluyente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, tal como una disolución en 1,3-butanodiol. Además, se emplea de forma convencional los aceites fijos, estériles como un medio de suspensión o disolvente. Para este fin, cualquier aceite fijo insípido puede emplearse incluyendo mono o diglicéridos. Además, los ácidos grasos tales como ácido oleico se usan en la preparación de inyectables.

Los compuestos de fórmula I pueden administrarse también en forma de supositorios para administración rectal del fármaco. Estas composiciones pueden prepararse mezclando el fármaco con un excipiente no irritante que es sólido a temperaturas normales pero líquido a la temperatura rectal y se disolverá por tanto en el recto para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen mantequilla de coco, gelatina glicerinada, aceites vegetales hidrogenados, mezclas de polietilenglicoles de diversos pesos moleculares y ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol.

Para uso tópico, se emplean cremas, ungüentos, gelatinas, disoluciones o suspensiones, etc., que contienen el compuesto de fórmula I. (Para fines de esta aplicación, la aplicación tópica incluirá colutorios y productos para hacer gárgaras)

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse en forma intranasal por medio del uso tópico de vehículos intranasales adecuados y dispositivos de administración o por medio de vías transdérmicas, usando las formas de parches cutáneos transdérmicos bien conocidos por los expertos en la técnica. Para administrarse en forma de un sistema de administración transdérmico, la administración de la dosificación será, por supuesto, continua en vez de intermitente a lo largo del régimen de dosificación. Los compuestos de la presente invención pueden administrarse también como un supositorio que emplea bases tales como mantequilla de coco, gelatina glicerinada, aceites vegetales hidrogenados, mezclas de polietilenglicoles de diversos pesos moleculares y ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol.

Cuando se administra un compuesto según está invención a un sujeto humano, normalmente el doctor que prescribe determinará la dosificación diaria variando la dosificación generalmente según la edad, peso, sexo y respuesta del paciente individual, así como la gravedad de los síntomas del paciente.

En una aplicación a modo de ejemplo, se administra una cantidad adecuada de compuesto a un mamífero sometido a tratamiento para el cáncer. La administración se produce en una cantidad de entre aproximadamente 0,1 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 60 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente de entre 0,5 mg/kg de peso corporal a aproximadamente 40 mg/kg de peso corporal por día.

Los presentes compuestos son útiles también en combinación con agentes terapéuticos y agentes anticancerígenos conocidos. Por ejemplo, los presentes compuestos son útiles en combinación con agentes anticancerígenos conocidos. Las combinaciones de los compuestos descritos en el presente documento con otros agentes quimioterapéuticos o anticancerígenos están dentro del alcance de la invención. Ejemplos de agentes de este tipo pueden encontrarse en Cancer Principles and Practice of Oncology by V.T. Devita y S. Hellman (editors), 6ª Edición (15 de febrero de 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers. Un experto en la técnica podrá distinguir que combinaciones de agentes serían útiles basándose en las características particulares de los fármacos y el cáncer implicado. Tales agentes anticancerígenos incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: moduladores del receptor de estrógenos, moduladores del receptor de andrógenos, moduladores del receptor de retinoides, agentes citotóxicos/citostáticos, agentes antiproliferativos, inhibidores de la proteína preniltransferasa, inhibidores de la HMG-CoA reductasa y otros inhibidores de la angiogénesis, inhibidores de la proliferación celular y la señalización de supervivencia, y agentes que interfieren con controles del ciclo celular. Los presentes compuestos son particularmente útiles cuando se administran conjuntamente con tratamiento de radiación.

En una realización, los presentes compuestos también son útiles en combinación con agentes anticancerígenos conocidos que incluyen los siguientes: moduladores del receptor de estrógenos, moduladores del receptor de andrógenos, moduladores del receptor de retinoides, agentes citotóxicos, agentes antiproliferativos, inhibidores de la proteína preniltransferasa, inhibidores de la HMG-CoA reductasa, inhibidores de la proteasa del VIH, inhibidores de la transcriptasa inversa, y otros inhibidores de la angiogénesis.

Los "moduladores del receptor de estrógenos" se refieren a compuestos que interfieren con o inhiben la unión de estrógenos al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos de moduladores del receptor de estrógenos incluyen, pero no se limitan a, tamoxifeno, raloxifeno, idoxifeno, LY353381, LY117081, toremifeno, fulvestrant, 2,2-dimetilpropanoato de 4-[7-(2,2-dimetil-1-oxopropoxi-4-metil-2-[4-[2-(1-piperidinil)etoxi]fenil]-2H-1-benzopiran-3-il]-fenilo, 4,4'-dihidroxibenzofenona-2,4-dinitrofenil-hidrazona, y SH646.

Los "moduladores del receptor de andrógenos" se refieren a compuestos que interfieren con o inhiben la unión de andrógenos al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos de moduladores del receptor de andrógenos incluyen finasterida y otros inhibidores de la 5\alpha-reductasa, nilutamida, flutamida, bicalutamida, liarozol, y acetato de abiraterona.

Los "moduladores del receptor de retinoides" se refieren a compuestos que interfieren con o inhiben la unión de retinoides al receptor, independientemente del mecanismo. Ejemplos de tales moduladores del receptor de retinoides incluyen bexaroteno, tretinoína, ácido 13-cis-retinoico, acido 9-cis-retinoico, \alpha-difluorometilomitina, ILX23-7553, trans-N-(4'-hidroxifenil)-retinamida, y N-4-carboxifenil retinamida.

Los "agentes citotóxicos/citostáticos" se refieren a compuestos que producen muerte celular o inhiben la proliferación celular principalmente mediante interferencia directa con el funcionamiento de la célula o inhiben o interfieren con la meiosis celular, incluyendo agentes de alquilación, factores de necrosis tumoral, intercaladores, compuestos inducibles por hipóxia, agentes de estabilización de microtúbulos/inhibidores de microtúbulos, inhibidores de cinesinas mitóticas, inhibidores de cinasas implicadas en la progresión mitótica, antimetabolitos; modificadores de la respuesta biológica; agentes terapéuticos antihormonales/hormonales, factores de crecimiento hematopoyético, agentes terapéuticos seleccionados como diana de anticuerpos monoclonales, inhibidores de la topoisomerasa, inhibidores de proteosomas e inhibidores de la ubiquitina ligasa.

Ejemplos de agentes citotóxicos incluyen, pero no se limitan a, sertenef, caquectina, ifosfamida, tasonermina, lonidamina, carboplatino, altretamina, prednimustina, dibromodulcitol, ranimustina, fotemustina, nedaplatino, oxaliplatino, temozolomida, heptaplatino, estramustina, tosilato de improsulfano, trofosfamida, nimustina, cloruro de dibrospidio, pumitepa, lobaplatino, satraplatino, porfiromicina, cisplatino, irofulveno, dexifosfamida, cis-aminodicloro (2-metil-piridina)platino, bencilguanina, glufosfamida, GPX100, tetracloruro de (trans, trans, trans)-bis-mu-(hexano-1,6-diamino)-mu-[diamino-platinum(II)]bis[diamino(cloro)platino(II)], diaricidinilespermina, trióxido de arsénico, 1-(11-dodecilamino-10-hidroxiundecil)-3,7-dimetilxantina, zorubicina, idarubicina, daunorubicina, bisantreno, mitoxantrona, pirarubicina, pinafida, valrubicina, amrubicina, antineoplaston, 3'-desamino-3'-morfolino-13-desoxo-10-hidroxicarminomicina, anamicina, galarubicina, elinafida, MEN10755, y 4-desmetoxi-3-desamino-3-aciridinil-4-metilsulfonil-daunorubicina (véase el documento WO 00/50032).

Un ejemplo de un compuesto inducible por hipóxia es tirapazamina.

Ejemplos de inhibidores de proteosomas incluyen pero no se limitan a lactacistina y MLN-341 (Velcade).

Ejemplos de inhibidores de microtúbulos/agentes de estabilización de microtúbulos incluyen paclitaxel, sulfato de vindesina, 3',4'-dideshidro-4'-desoxi-8'-norvincaleucoblastina, docetaxol, rizoxina, dolastatina, isotionato de mivobulina, auristatina, cemadotina, RPR109881, BMS184476, vinflunina, criptoficina, 2,3,4,5,6-pentafluoro-N-(3-fluoro-4-metoxifenil)benceno, sulfonamida, anhidrovinblastina, N,N-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-L-prolina-t-butilamida, TDX258, las epotilonas (véase por ejemplo las patentes de los EE.UU. números 6.284.781 y 6.288.237) y BMS188797. En una realización, las epotilonas no se incluyen en los agentes de estabilización de microtúbulos/inhibidores de microtúbulos.

Algunos ejemplos de inhibidores de la topoisomerasa son topotecan, hicapatamina, irinotecan, rubitecan, 6-
etoxipropionil-3',4'-O-exo-benciliden-chartreusina, 9-metoxi-N,N-dimetil-5-nitropirazolo-[3,4,5-kl]acridina-2-(6H)
propanoamina, 1-amino-9-etil-5-fluoro-2,3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-1H,12H-benzo[des]pirano[3',4':b,7]-indolizi-
no [1,2b]-quinolina-10,13(9H,15H)diona, lurtotecan, 7-[2-(N-isopropilamino)etil]-(20S) camptotecina, BNP1350,
BNPI1100, BN80915, BN80942, fosfato de etopósido, tenipósido, sobuzoxano, 2'-dimetilamino-2'-desoxi-etopósido, GL331, N-[2-(dimetilamino)etil]-9-hidroxi-5,6-dimetil-6H-pirido[4,3-b]carbazol-1-carboxamida, asulacrina, (5a, 5aB, 8aa, 9b)- 9-[2-[N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilamino]etil]-5-[4-hidroxi-3,5-dimetoxifenil]-5,5a,6,8,8a,9-hexohidrofuro(3',4':6,7)nafto(2,3-d)-1,3-dioxol-6-ona, 2,3-(metilendioxi)-5-metil-7-hidroxi-8-metoxibenzo[c]-fenantridinio, 6,9-bis[(2-aminoetil)amino]benzo[g]isoquinolin-5,10-diona, 5-(3-aminopropilamino)-7,10-dihidroxi-2-(2-hidroxietilaminometil)-6H-pirazolo[4,5,1-de]acridin-6-ona, N-[1-[2(dietilamino)etilamino]-7-metoxi-9-oxo-9H-tioxanten-4-ilmetil]formamida, N-(2-(dimetilamino)etil)acridina-4-carboxamida, 6-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-3-hidroxi-
7H-indeno[2,1-c]quinolin-7-ona, y dimesna.

Ejemplos de inhibidores de cinesinas mitóticas, y en particular la cinesina mitótica humana KSP, se describen en las publicaciones PCT de los documentos WO 01/30768 y WO 01/98278, y los documentos de los EE.UU. en tramitación números de serie 60/338.779 (presentada el 6 de diciembre de 2001), 60/338.344 (presentada el 6 de diciembre de 2001), 60/338.383 (presentada el 6 de diciembre de 2001), 60/338.380 (presentada el 6 de diciembre de 2001), 60/338.379 (presentada el 6 de diciembre de 2001) y 60/344.453 (presentada el 7 de noviembre de 2001). En una realización los inhibidores de las cinesinas mitóticas incluyen, pero no se limitan a inhibidores de KSP, inhibidores de MKLP1, inhibidores de CENP-E, inhibidores de MCAK e inhibidores de Rab6-KIFL.

Los "inhibidores de cinasas implicados en la progresión mitótica" incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de la aurora cinasa, inhibidores de cinasas de tipo polo (PLK) (en particular inhibidores de PLK-1), inhibidores de bub-1 e inhibidores de bub-R1.

Los "agentes antiproliferativos" incluyen oligonucleótidos de ADN y ARN antisentido, tales como G3139,
ODN698, RVASKRAS, GEM231, e INX3001, y antimetabolitos tales como enocitabina, carmofur, tegafur, pentostatina, doxifluridina, trimetrexato, fludarabina, capecitabina, galocitabina, citarabina ocfosfato, hidrato de sodio de fosteabina, raltitrexed, paltitrexid, emitefur, tiazofurina, decitabina, nolatrexed, pemetrexed, nelzarabina, 2'-desoxi-2'-metilidencitidina, 2'-fluorometilen-2'-desoxicitidina, N-[5-(2,3-dihidro-benzofuril)sulfonil]-N'-(3,4-diclorofenil)urea, N6-[4-desoxi-4-[N2-[2(E),4(E)-tetradecadienoil]glicilamino]-L-glicero-B-L-manno-heptopiranosil]adenina, aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido 4-[2-amino-4-oxo-4,6,7,8-tetrahidro-3H-pirimidino[5,4-b][1,4]tiazin-6-il-(S)-etil]-2,5-tienoil-L-glutámico, aminopterina, acetato de 5-fluorouracilo, alanosina, éster del ácido 11-acetil-8-(carbamoiloximetil)-4-formil-6-metoxi-14-oxa-1,11-diazatetraciclo(7.4.1.0.0)tetradeca-2,4,6-trien-9-ilacético, swainsonina, iometrexol, dexrazoxana, metioninasa, 2'-ciano-2'-desoxi-N4-palmitoil-1-B-D-arabinofuranosilcitosina, tiosemicarbazona de 3-aminopiridina-2-carboxaldehído y trastuzumab.

Ejemplos de agentes terapéuticos seleccionados como diana de anticuerpos monoclonales incluyen los agentes terapéuticos que tienen agentes citotóxicos o radioisótopos unidos a anticuerpos monoclonales específicos frente a células diana o células cancerígenas específicas. Los ejemplos incluyen Bexxar. Los "inhibidores de la HMG-CoA reductasa" se refieren a inhibidores de la 3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA reductasa. Los compuestos que tienen actividad inhibidora para la HMG-CoA reductasa pueden identificarse fácilmente usando ensayos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, véase los ensayos descritos o citados en la patente de los EE.UU. número 4.231.938 en la columna 6, y el documento WO 84/02131 en las páginas 30-33. Los términos "inhibidor de la HMG-CoA reductasa" e "inhibidor de la HMG-CoA reductasa" tienen el mismo significado cuando se usan en el presente documento.

Ejemplos de inhibidores de la HMG-CoA reductasa que pueden usarse incluyen pero no se limitan a lovastatina (MEVACOR®; véase las patentes de los EE.UU. números 4.231.938, 4.294.926 y 4.319.039), simvastatina (ZOCOR®; véase las patentes de los EE.UU. números 4.444.784, 4.820.850 y 4.916.239), pravastatina (PRAVACHOL®; véase las patentes de los EE.UU. números 4.346.227, 4.537.859, 4.410.629, 5.030.447 y 5.180.589), fluvastatina (LESCOL®; véase las patentes de los EE.UU. números 5.354.772, 4.911.165, 4.929.437, 5.189.164, 5.118.853, 5.290.946 y
5.356.896), atorvastatina (LIPITOR®; véase las patentes de los EE.UU. números 5.273.995, 4.681.893, 5.489.691 y 5.342.952) y cerivastatina (también conocido como rivastatina y BAYCHOL®; véase la patente de los EE.UU. número 5.177.080). Las fórmulas estructurales de estos y de los inhibidores de la HMG-CoA reductasa adicionales que pueden usarse en los presentes procedimientos se describen en la página 87 de M. Yalpani, "Cholesterol Lowering Drugs", Chemistry & Industry, pág. 85-89 (5 de febrero de 1996) y las patentes de los EE.UU. números 4.782.084 y 4.885.314. El término inhibidor de la HMG-CoA reductasa tal como se usa en el presente documento incluye todas las formas de ácidos abiertos y lactonas farmacéuticamente aceptables (es decir, en las que el anillo de lactona se abre para formar el ácido libre) así como las formas de sal y éster de compuestos que tienen actividad inhibidora de la HMG-CoA reductasa, y por tanto, el uso de tales sales, ésteres, ácidos abiertos y formas de lactona están incluidos dentro del alcance de esta invención. Se muestra a continuación una ilustración de la parte de lactona y su correspondiente forma de ácido abierto como estructuras I y II.

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En inhibidores de la HMG-CoA reductasa en los que puede existir una forma de ácido abierto, pueden formarse formas de ésteres y sales a partir del ácido abierto, y tales formas están incluidas dentro del significado del término "inhibidor de la HMG-CoA reductasa" tal como se usa en el presente documento. En una realización, el inhibidor de la HMG-CoA reductasa se selecciona de lovastatina y simvastatina, y en una realización adicional, simvastatina. En el presente documento, el término "sales farmacéuticamente aceptables" con respecto al inhibidor de la HMG-CoA reductasa querrá decir sales no tóxicas de los compuestos empleados en esta invención que se preparan generalmente haciendo reaccionar el ácido libre con una base orgánica o inorgánica adecuada, en particular las formadas a partir de cationes tales como sodio, potasio, aluminio, calcio, litio, magnesio, zinc y tetrametilamonio, así como las sales formadas a partir de aminas tales como amonio, etilendiamina, N-metilglucamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaina, dietanolamina, procaina, N-bencilfenetilamina, 1-p-clorobencil-2-pirrolidina-1'-il-metilbenzo-imidazol, dietilamina, piperazina, y tris(hidroximetil)aminometano. Ejemplos adicionales de formas de sales de inhibidor de la HMG-CoA reductasa pueden incluir, pero no se limitan a, acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, oleato, oxalato, pamoato, palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietioduro, y valerato.

Los derivados de ésteres de los compuestos inhibidores de la HMG-CoA reductasa descritos, pueden actuar como profármacos que, cuando se absorben en el torrente sanguíneo de un animal de sangre caliente, pueden escindirse de tal manera que liberan la forma farmacéutica y permiten que el fármaco alcance una eficacia terapéutica
mejorada.

El "Inhibidor de la proteína preniltransferasa" se refiere a un compuesto que inhibe una cualquiera o cualquier combinación de las enzimas de la proteína preniltransferasa, incluyendo la proteína farnesiltransferasa (FTPasa), la proteína geranilgeraniltransferasa de tipo I (GGPTasa-I), y la proteína geranilgeranil transferasa de tipo II (GGPTasa-II, también denominada Rab GGPTasa). Ejemplos de compuestos que inhiben la proteína preniltransferasa incluyen (\pm)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H) quinolinona, (-)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)-quinolinona, (+)-6-[amino(4-clorofenil)(1-metil-1H-imidazol-5-il)metil]-4-(3-clorofenil)-1-metil-2(1H)-quinolinona, 5(S)-n-butil-1-(2,3-dimetilfenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolilmetil]-2-piperazinona, (S)-1-(3-clorofenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolil-
metil]-5-[2-(etanosulfonil)metil)-2-piperazinona, 5(S)-n-butil-1-(2-metilfenil)-4-[1-(4-cianobencil)-5-imidazolilme-
til]-2-piperazinone, 1-(3-clorofenil)-4-[1-(4-cianobencil)-2-metil-5-imidazolilmetil]-2-piperazinone, 1-(2,2-difeniletil)-3-[N-(1-(4-cianobencil)-1H-imidazol-5-iletil)carbamoil]piperidina, 4-{5-[4-hidroximetil-4-(4-cloropiridin-2-il-
metil)-piperidina- 1-ilmetil]-2-metilimidazol-1-ilmetil}benzonitrilo, 4-{5-[4-hidroximetil-4-(3-clorobencil)-piperidina-1-ilmetil]-2-metilimidazol-1-ilmetil}benzonitrilo, 4-{3-[4-(2-oxo-2H-piridin-1-il)bencil]-3H-imidazol-4-ilmetil}
benzonitrilo, 4-{3-[4-(5-cloro-2-oxo-2H-[1,2']bipiridin-5'-ilmetil]-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo, 4-{3-[4-(2-
oxo-2H-[1,2']bipiridin-5'-ilmetil]-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo, 4-[3-(2-oxo-1-fenil-1,2-dihidropiridin-4-ilmetil)-3H-imidazol-4-ilmetil}benzonitrilo, 18,19-dihidro-19-oxo-5H,17H-6,10:12,16-dimeten-1H-imidazo[4,3-c] [1,11,
4]dioxaazaciclo-nonadecin-9-carbonitrilo, (6)-19,20-dihidro-19-oxo-5H-18,21-etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H-benzo[d]imidazo[4,3-k][1,6,9,12]oxatriaza-ciclooctadecin-9-carbonitrilo, 19,20-dihidro-19-oxo-5H,7H-18,21-etano-6,10:12,16-dimeteno-22H-imidazo[3,4-h][1,8,11,14]oxatriazacicloeicosina-carbonitrilo y (\pm)-19,20-dihidro-3-metil-19-oxo-5H-18,21-etano-12,14-eteno-6,10-meteno-22H-benzo[d]imidazo[4,3-k]1,6,9,12]oxa-triazaciclooctadecin-9-
carbonitrilo.

Otros ejemplos de inhibidores de la proteína preniltransferasa pueden encontrarse en las siguientes publicaciones y patentes: WO 96/30343, WO 97/18813, WO 97/21701, WO 97/23478, WO 97/38665, WO 98/28980, WO 98/29119, WO 95/32987, patente de los EE.UU. número 5.420.245, patente de los EE.UU. número 5.523.430, patente de los EE.UU. número 5.532.359, patente de los EE.UU. número 5.510.510, patente de los EE.UU. número 5.589.485, patente de los EE.UU. número 5.602.098, publicación de patente europea número 0 618 221, publicación de patente europea número 0 675 112, publicación de patente europea número 0 604 181, publicación de patente europea número 0 696 593, WO 94/19357, WO 95/08542, WO 95/11917, WO 95/12612, WO 95/12572, WO 95/10514, patente de los EE.UU. número 5.661.152, WO 95/10515, WO 95/10516, WO 95/24612, WO 95/34535, WO 95/25086, WO 96/05529, WO 96/06138, WO 96/06193, WO 96/16443, WO 96/21701, WO 96/21456, WO 96/22278, WO 96/24611, WO 96/24612, WO 96/05168, WO 96/05169, WO 96/00736, patente de los EE.UU. número 5.571.792, WO 96/17861, WO 96/33159, WO 96/34850, WO 96/34851, WO 96/30017, WO 96/30018, WO96/30362, WO96/30363, WO96/31111, WO 96/31477, WO 96/31478, WO 96/31501, WO 97/00252, WO 97/03047, WO 97/03050,
WO97/04785, WO 97/02920, WO 97/17070, WO 97/23478, WO 97/26246, WO 97/30053, WO 97/44350, WO 98/02436, patente de los EE.UU. número 5.532.359. Como ejemplo del papel de un inhibidor de la proteína preniltransferasa en la angiogénesis, véase European J. of Cancer, Vol. 35, No. 9, pág. 1394-1401 (1999).

Los "inhibidores de la angiogénesis" se refieren a compuestos que inhiben la formación de nuevos vasos sanguíneos, independientemente del mecanismo. Ejemplos de inhibidores de la angiogénesis incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de la tirosina cinasa, tales como inhibidores de los receptores de la tirosina cinasa Flt-1 (VEGFR1) y Flk-1/KDR (VEGFR2), inhibidores de derivados epidérmicos, derivados de fibroblastos, o factores de crecimiento derivados de plaquetas, inhibidores de MMP (metaloproteasa de matriz), bloqueadores de integrina, interferon-\alpha, interleucina-12, polisulfato de pentosan, inhibidores de la ciclooxigenasa, incluyendo antiinflamatorios no esteroideos (NSAID "nonsteroidal anti-inflamatories") tales como aspirina e ibuprofeno así como inhibidores de la ciclooxigenasa-2 como celecoxib y rofecoxib (PNAS, volumen 89, pág. 7384 (1992); JNCI, volumen 69, pág. 475 (1982); Arch. Opthalmol., volumen 108, pág. 573 (1990); Anat. Rec., volumen 238, pág. 68 (1994); FEBS Letters, volumen 372, pág. 83 (1995); Clin, Orthop. volumen 313, pág. 76 (1995); J. Mol. Endocrinol., volumen 16, pág.107 (1996); Jpn. J. Pharmacol., volumen 75, pág. 105 (1997); Cancer Res., volumen 57, pág. 1625 (1997); Cell, volumen 93, pág. 705 (1998); Intl. J. Mol. Med., volumen 2, pág. 715 (1998); J. Biol. Chem., volumen 274, pág. 9116 (1999)), antiinflamatorios esteroideos (tales como corticosteroides, mineralocorticoides, dexametasona, prednisona, prednisolona, metilpred, betametasona), carboxiamidotriazol, combrestastasina A-4, escualamina, 6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagilol, talidomida, angiostatina, troponina-1, antagonistas de angiotensina II (véase Fernandez et al., J. Lab. Clin. Med. 105:141-145 (1985)), y anticuerpos frente a VEGF (véase, Nature Biotechnology, volumen 17, pág. 963-968 (October 1999); Kim et al., Nature, 362, 841-844 (1993); los documentos WO00/44777; y WO 00/61186).

Otros agentes terapéuticos que modulan o inhiben la angiogénesis y también pueden usarse en combinación con los compuestos de la presente invención incluyen agentes que modulan o inhiben los sistemas de la fibrinolisis y la coagulación (véase revisión en Clin. Chem. La. Med. 38:679-692 (2000)). Ejemplos de tales agentes que modulan o inhiben las rutas de la fibrinolisis y la coagulación incluyen, pero no se limitan a, heparina (véase Thromb. Haemost. 80:10-23 (1998)), heparinas de bajo peso molecular, antagonistas de GPIIb/IIIa (tales como tirofibán), warfarina, inhibidores de trombina e inhibidores de carboxipeptidasa U (también conocidos como inhibidores del inhibidor de la fibrinolisis activado por trombina activa [TAFIa]) (véase Thrombosis Res. 101:329-354 (2001)). Se han descrito inhibidores de TAFIa en los documentos de los EE.UU. de números de serie 60/310.927 (presentado el 8 de agosto de 2001) y 60/349.925 (presentado el 18 de Enero de 2002).

Los "agentes que interfieren con controles del ciclo celular" se refieren a compuestos que inhiben proteínas cinasas que transducen señales de control del ciclo celular, sensibilizando así la célula cancerígena frente a agentes que dañan el ADN. Tales agentes incluyen inhibidores de cinasas Chk1 y Chk2, ATM, ATR, e inhibidores de cinasas cdk y cdc y que se dan a modo de ejemplo específicamente mediante 7-hidroxiestaurosporina, flavopiridol, CYC202 (Cyclacel) y BMS-387032.

Los "inhibidores de la proliferación celular y ruta de señalización de supervivencia" se refieren a compuestos que inhiben cascadas de transducción de señales en sentido 3' de los receptores de la superficie de la célula. Tales agentes incluyen inhibidores de serina/treonina cinasas (incluyendo, pero no limitados a inhibidores de Akt tal como se describe en los documentos WO 02/083064, WO 02/083139, WO 02/083140 y WO 02/083138), inhibidores de cinasa Raf (por ejemplo BAY-43-9006), inhibidores de MEK (por ejemplo CI-1040 y PD-098059), inhibidores de mTOR (por ejemplo Wyeth CCI-779), e inhibidores de PI3K (por ejemplo LY294002).

Las combinaciones con NSAID están dirigidas al uso de NSAID que son agentes de inhibición de COX-2 potentes. Para los fines de esta memoria descriptiva un NSAID es potente si posee una CI_{50} para la inhibición de COX-2 de 1 \muM o inferior tal como se mide mediante ensayos celulares o microsomales.

La invención también abarca combinaciones con NSAID que son inhibidores de COX-2 selectivos. Para los fines de esta memoria descriptiva los NSAID que son inhibidores de COX-2 selectivos se definen como los que poseen una especificidad para inhibir COX-2 con respecto a COX-1 de al menos 100 veces tal como se mide mediante la razón de CI_{50} para COX-2 con respecto a CI_{50} para COX-1 evaluada mediante ensayos celulares o microsomales. Tales compuestos incluyen, pero no se limitan a los descritos en la patente de los EE.UU. número 5.474.995, expedida el 12 de diciembre de 1995, patente de los EE.UU. número 5.861.419, expedida el 19 de enero de 1999, patente de los EE.UU. número 6.001.843, expedida el 14 de diciembre de 1999, patente de los EE.UU. número 6.020.343, expedida el 1 de febrero de 2000, patente de los EE.UU. número 5.409.944, expedida el 25 de abril de 1995, patente de los EE.UU. número 5.436.265, expedida el 25 de julio de 1995, patente de los EE.UU. número 5.536.752, expedida 16 de julio de 1996, patente de los EE.UU. número 5.550.142, expedida el 27 de agosto de 1996, patente de los EE.UU. número 5.604.260, expedida el 18 de febrero de 1997, patente de los EE.UU. número 5.698.584, expedida el 16 de diciembre de 1997, patente de los EE.UU. número 5.710.140, expedida el 20 de enero de 1998, documento WO 94/15932, publicado el 21 de julio de 1994, patente de los EE.UU. número 5.344.991, expedida el 6 de junio de 1994, patente de los EE.UU. número 5.134.142, expedida el 28 de julio de 1992, patente de los EE.UU. número 5.380.738, expedida el 10 de enero de 1995, patente de los EE.UU. número 5.393.790, expedida el 20 de febrero de 1995, patente de los EE.UU. número 5.466.823, expedida el 14 de noviembre de 1995, patente de los EE.UU. número 5.633.272, expedida el 27 de mayo de 1997, y patente de los EE.UU. número 5.932.598, expedida el 3 de agosto de 1999.

Los inhibidores de COX-2 que son particularmente útiles en el presente procedimiento de tratamiento son:

3-fenil-4-(4-(metilsulfonil)fenil)-2-(5H)-furanona; y

19

5-cloro-3-(4-metilsulfonil)fenil-2-(2-metil-5-piridinil)piridina;

20

o una sal farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Los procedimientos sintéticos específicos y generales para la preparación de los compuestos inhibidores de COX-2 descritos anteriormente se encuentran en la patente de los EE.UU. número 5.474.995, expedida el 12 de diciembre de 1995, la patente de los EE.UU. número 5.861.419, expedida el 19 de enero de 1999, y la patente de los EE.UU. número 6.001.843, expedida el 14 de diciembre de 1999.

Los compuestos que se han descrito como inhibidores específicos de COX-2 y que por tanto son útiles en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, los siguientes:

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o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Los compuestos que se describen como inhibidores específicos de COX-2 y que por tanto son útiles en la presente invención, y los procedimientos de síntesis de los mismos, pueden encontrarse en las siguientes patentes, solicitud de patente en trámite y publicaciones: documento WO 94/15932, publicado el 21 de julio de 1994, patente de los EE.UU. número 5.344.991, expedida el 6 de junio de 1994, patente de los EE.UU. número 5.134.142, expedida el 28 de julio de 1992, patente de los EE.UU. número 5.380.738, expedida el 10 de enero de 1995, patente de los EE.UU. número 5.393.790, expedida el 20 de febrero de 1995, patente de los EE.UU. número 5.466.823, expedida el 14 de noviembre de 1995, patente de los EE.UU. número 5.633.272, expedida el 27 de mayo de 1997, y patente de los EE.UU. número 5.932.598, expedida el 3 de agosto de 1999.

Los compuestos que son inhibidores específicos de COX-2 y que por tanto son útiles en la presente invención, y los procedimientos de síntesis de los mismos, pueden encontrarse en las siguientes patentes, solicitud de patente en trámite y publicaciones: patente de los EE.UU. número 5.474.995, expedida el 12 de diciembre de 1995, patente de los EE.UU. número 5.861.419, expedida el 19 de enero de 1999, la patente de los EE.UU. número 6.001.843, expedida el 14 de diciembre de 1999, patente de los EE.UU. número 6.020.343, expedida el 1 de febrero de 2000, patente de los EE.UU. número 5.409.944, expedida el 25 de abril de 1995, patente de los EE.UU. número 5.436.265, expedida el 25 de julio de 1995, patente de los EE.UU. número 5.536.752, expedida el 16 de julio de 1996, patente de los EE.UU. número 5.550.142, expedida el 27 de agosto de 1996, patente de los EE.UU. número 5.604.260, expedida el 18 de febrero de 1997, patente de los EE.UU. número 5.698.584, expedida el 16 de diciembre de 1997, y patente de los EE.UU. número 5.710.140, expedida el 20 de Enero de 1998.

Otros ejemplos de inhibidores de la angiogénesis incluyen, pero no se limitan a, endostatina, ucraina, ranpirnasa, IM862, carbamato de 5-metoxi-4-[2-metil-3-(3-metil-2-butenil)oxiranil]-1-oxaspiro[2,5]oct-6-il(cloroacetil), acetildinanalina, 5-amino-1-[[3,5-dicloro-4-(4-clorobenzoil)fenil]metil]-1H-1,2,3-triazol-4-carboxamida, CM101, escualamina, combretastatina, RPI4610, NX31838, fosfato de manopentaosa sulfatada, bis-(1,3-naftalendisulfonato) de 7,7-(carbonil-bis[imino-N-metil-4,2-pirrolocarbonilimino[N-metil-4,2-pirrol]-carbonilimino], y 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilen]-2-indolinona (SU5416).

Tal como se usan anteriormente, los "bloqueadores de integrina" se refieren a compuestos que contrarrestan, inhiben o antagonizan selectivamente la unión de un ligando fisiológico a la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, a compuestos que contrarrestan, inhiben o antagonizan selectivamente la unión de un ligando fisiológico a la integrina \alpha_{v}\beta_{5}, a compuestos que contrarrestan, inhiben o antagonizan selectivamente la unión de un ligando fisiológico tanto a la integrina \alpha_{v}\beta_{3} como a la integrina \alpha_{v}\beta_{5}, y a compuestos que contrarrestan, inhiben o antagonizan la actividad de la(s) integrina(s) particular(es) expresadas en células endoteliales capilares. El término también se refiere a antagonistas de las integrinas \alpha_{v}\beta_{6}, \alpha_{v}\beta_{8}, \alpha_{1}\beta_{1}, \alpha_{2}\beta_{1}, \alpha_{5}\beta_{1}, \alpha_{6}\beta_{1}, y \alpha_{6}\beta_{4}. El término también se refiere a antagonistas de cualquier combinación de las integrinas \alpha_{v}\beta_{3,} \alpha_{v}\beta_{5}, \alpha_{v}\beta_{6}, \alpha_{v}\beta_{8}, \alpha_{1}\beta_{1}, \alpha_{2}\beta_{1}, \alpha_{5}\beta_{1}, \alpha_{6}\beta_{1}, y \alpha_{6}\beta_{4}.

Algunos ejemplos específicos de inhibidores de la tirosina cinasa incluyen N-(trifluorometilfenil)-5-metilisoxazol-4-carboxamida, 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il) metilidenil)indolin-2-ona, 17-(alilamino)-17-desmetoxigeldanamicina, 4-(3-cloro-4-fluorofenilamino)-7-metoxi-6-[3-(4-morfolinil)propoxil]quinazolina, N-(3-etinilfenil)-6,7-bis(2-metoxietoxi)-4-quinazolinamina, BIBX1382, 2,3,9,10,11,12-hexahidro-10-(hidroximetil)-10-hidroxi-9-metil-9,12-epoxi-1H-
diindolo[1,2,3-fg:3',2',1'kl]pirrolo[3,4-i][1,6]benzodiazocin-1-ona, SH268, genisteína, STI571, CEP2563, sulfonato de 4-(3-clorofenilamino)-5,6-dimetil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidinmetano, 4-(3-bromo-4-hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina, 4-(4'-hidroxifenil)amino-6,7-dimetoxiquinazolina, SU6668, STI571A, N-4-clorofenil-4-(4-piridilmetil)-1-ftalazinamina, y EMD121974.

Se abarcan también combinaciones con compuestos distintos de los compuestos anticancerígenos en los presentes procedimientos. Por ejemplo, combinaciones de los compuestos reivindicados actualmente con agonistas de PPAR-\gamma (es decir, PPAR-gamma), agonistas de PPAR-\delta (es decir, PPAR-delta) son útiles en el tratamiento de ciertas enfermedades. PPAR-\gamma y PPAR-\delta son los receptores \gamma y \delta activados por proliferadores de peroxisomas nucleares. Se ha informado de la expresión de PPAR-\gamma en células endoteliales y su implicación en la angiogénesis en la bibliografía (véase J. Cardiovasc. Pharmacol. 1998; 31:909-913; J. Biol. Chem. 1999; 274:9116-9121; Invest. Ophthalmol Vis. Sci. 2000; 41:2309-2317). Más recientemente, se ha mostrado que los agonistas de PPAR-\gamma inhiben la respuesta angiogénica frente a VEGF in vitro; tanto el maleato de rosiglitazona como de troglitazona inhiben el desarrollo de la neovascularización retinal en ratones (Arch. Ophthamol. 2001; 119:709-717). Ejemplos de agonistas PPAR-\gamma y agonistas de PPAR-\gamma/\delta incluyen, pero no se limitan a, tiazolidindionas (tales como DRF2725, CS-011, troglitazona, rosiglitazona, y pioglitazona), fenofibrato, gemfibrozil, clofibrato, GW2570, SB219994, AR-H039242, JTT-501, MCC-555, GW2331, GW409544, NN2344, KRP297, NP0110, DRF4158, NN622, GI262570, PNU182716, DRF552926, ácido 2-[(5,7-dipropil-3-trifluorometil-1,2-benzoisoxazol-6-il)oxi]-2-metilpropiónico (descrito en el documento USSN 09/782.856), y ácido 2(R)-7-(3-(2-cloro-4-(4-fluorofenoxi)fenoxi)propoxi)-2-etilcromano-2-carboxílico (descrito en el documento USSN 60/235.708 y 60/244.697).

Otra realización de la presente invención es el uso de los compuestos descritos en el presente documento en combinación con terapia génica para el tratamiento del cáncer. Para una visión general de las estrategias genéticas para tratar cáncer véase Hall et al. (Am J Hum Genet 61:785-789, 1997) y Kufe et al. (Cancer Medicine, 5th Ed, páginas 876-889, BC Decker, Hamilton 2000). La terapia génica puede usarse para administrar cualquier gen supresor de tumores. Ejemplos de tales genes incluyen, pero no se limitan a p53, que pueden administrarse por medio de transferencia génica mediada por virus recombinantes (véase la patente de los EE.UU. número 6.069.134, por ejemplo), un antagonista de uPA/uPAR ("Adenovirus-Mediated Delivery of a uPA/uPAR Antagonist Suppresses Angiogenesis-Dependent Tumor Growth and Dissemination in Mice," Gene Therapy, August 1998;5(8):1105-13), y gamma interferón (J Immunol 2000;164:217-222).

Los compuestos de la presente invención pueden también administrarse en combinación con un inhibidor de resistencia a múltiples fármacos inherente (MDR "multidrug resistance"), en particular MDR asociado con altos niveles de expresión de proteínas transportadoras. Tales inhibidores de MDR incluyen inhibidores de p-glucoproteína (P-gp), tales como LY335979, XR9576, OC144-093, R101922, VX853 y PSC833 (valspodar).

Un compuesto de la presente invención puede emplearse junto con agentes antieméticos para tratar náuseas o emesis, incluyendo emesis anticipatoria, de fase tardía, retardada y aguda, que puede resultar del uso de un compuesto de la presente invención, sólo o con tratamiento de radiación. Para evitar o tratar la emesis, un compuesto de la presente invención puede usarse junto con otros agentes antieméticos, especialmente antagonistas de receptores de neurocinina-1, 5HT3, tales como ondansetrona, granisetrona, tropisetrona y zatisetrona, agonistas de receptores GABAB, tales como baclofen, un corticosteroide tal como Decadron (dexametasona), Kenalog, Aristocort, Nasalide, Preferid, Benecorten u otros tal como se describen en las patentes de los EE.UU. números 2.789.118, 2.990.401, 3.048.581, 3.126.375, 3.929.768, 3.996.359, 3.928.326 y 3.749.712, un antidopaminérgico, tales como las fenotiazinas (por ejemplo, procloroperazina, flufenazina, tioridazina y mesoridazina), metoclopramida o dronabinol. Para el tratamiento o prevención de la emesis que puede resultar tras la administración de los presentes compuestos, se prefiere una terapia conjunta con un agente antiemesis seleccionado de un antagonista de receptores de neurocinina-1, un antagonista de receptores 5HT3 y un corticosteroide.

Se describen totalmente los antagonistas de receptores de neurocinina-1 para usarse junto con los compuestos de la presente invención, por ejemplo, en las patentes de los EE.UU. números 5.162.339, 5.232.929, 5.242.930, 5.373.003, 5.387.595, 5.459.270, 5.494.926, 5.496.833, 5.637.699, 5.719.147; publicaciones de patentes europeas números EP 0 360 390, 0 394 989, 0 428 434, 0 429 366, 0 430 771, 0 436 334, 0 443 132, 0 482 539, 0 498 069, 0 499 313, 0 512 901, 0 512 902, 0 514 273, 0 514 274, 0 514 275, 0 514 276, 0 515 681, 0 517 589, 0 520 555, 0 522 808, 0 528 495, 0 532 456, 0 533 280, 0 536 817, 0 545 478, 0 558 156, 0 577 394, 0 585 913, 0 590 152, 0 599 538, 0 610 793, 0 634 402, 0 686 629, 0 693 489, 0 694 535, 0 699 655, 0 699 674, 0 707 006, 0 708 101, 0 709 375, 0 709 376, 0 714 891, 0 723 959, 0 733 632 y 0 776 893; publicaciones de patentes internacionales PCT números WO 90/05525, 90/05729, 91/09844, 91/18899, 92/01688, 92/06079, 92/12151, 92/15585, 92/17449, 92/20661, 92/20676, 92/21677, 92/22569, 93/00330, 93/00331, 93/01159, 93/01165, 93/01169, 93/01170, 93/06099, 93/09116, 93/10073, 93/14084, 93/14113, 93/18023, 93/19064, 93/21155, 93/21181, 93/23380, 93/24465, 94/00440, 94/01402, 94/02461, 94/02595, 94/03429, 94/03445, 94/04494, 94/04496, 94/05625, 94/07843, 94/08997, 94/10165, 94/10167, 94/10168, 94/10170, 94/11368, 94/13639, 94/13663, 94/14767, 94/15903, 94/19320, 94/19323, 94/20500, 94/26735, 94/26740, 94/29309, 95/02595, 95/04040, 95/04042, 95/06645, 95/07886, 95/07908, 95/08549, 95/11880, 95/14017, 95/15311, 95/16679, 95/17382, 95/18124, 95/18129, 95/19344, 95/20575, 95/21819, 95/22525, 95/23798, 95/26338, 95/28418, 95/30674, 95/30687, 95/33744, 96/05181, 96/05193, 96/05203, 96/06094, 96/07649, 96/10562, 96/16939, 96/18643, 96/20197, 96/21661, 96/29304, 96/29317, 96/29326, 96/29328, 96/31214, 96/32385, 96/37489, 97/01553, 97/01554, 97/03066, 97/08144, 97/14671, 97/17362, 97/18206, 97/19084, 97/19942 y 97/21702; y en las publicaciones de patentes británicas números 2 266 529, 2 268 931, 2 269 170, 2 269 590, 2 271 774, 2 292 144, 2 293 168, 2 293 169, y 2 302 689. La preparación de tales compuestos se describe completamente en las patentes y publicaciones mencionadas anteriormente.

En una realización, el antagonista de receptores de neurocinina-1 para su uso junto con otros compuestos de la presente invención se seleccionan de: 2-(R)-(1-(R)-(3,5-bis(trifluorometil)fenil)etoxi)-3-(S)-(4-fluorofenil)-4-(3-(5-oxo-1H,4H-1,2,4-triazolo)metil)morfolina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, que se describe en la patente de los EE.UU. número 5.719.147.

Un compuesto de la presente invención también puede administrarse con un agente útil para el tratamiento de anemia. Un agente de tratamiento de anemia de este tipo es, por ejemplo, un activador de receptores de eritropoyesis (tal como epoetina alfa).

Un compuesto de la presente invención también puede administrarse con un agente útil en el tratamiento de neutropenia. Un agente de tratamiento de neutropenia de este tipo es, por ejemplo, un factor de crecimiento hematopoyético que regula la producción y la función de neutrófilos tales como el factor estimulante de colonias de granulocitos humanos (G-CSF "granulocyte colony stimulating factor"). Ejemplos de un GCSF incluyen filgrastim.

Un compuesto de la presente invención puede administrarse también con un fármaco potenciador inmunológico, tal como levamisol, isoprinosina y Zadaxin.

Por tanto, el alcance de la presente invención abarca el uso de los compuestos reivindicados en el presente documento en combinación con un segundo compuesto seleccionado de:

1): un modulador de receptores de estrógenos,

2): un modulador de receptores de andrógenos,

3): un modulador de receptores de retinoides,

4): un agente citotóxico/citostático,

5): un agente antiproliferativo,

6): un inhibidor de la proteína preniltransferasa,

7): un inhibidor de la HMG-CoA reductasa,

8): un inhibidor de la VIH proteasa,

9): un inhibidor de la transcriptasa inversa,

10): un inhibidor de la angiogénesis,

11): agonistas de PPAR-\gamma,

12): agonistas de PPAR-\delta,

13): un inhibidor de la resistencia a múltiples fármacos inherente,

14): un agente antiemético,

15): un agente útil en el tratamiento de anemia,

16): un agente útil en el tratamiento de neutropenia,

17): un fármaco potenciador inmunológico,

18): un inhibidor de la proliferación y señalización de supervivencia celulares, y

19): un agente que interfiere con un control del ciclo celular.

En una realización, el inhibidor de la angiogénesis que va a usarse como el segundo compuesto se selecciona de un inhibidor de la tirosina quinasa, un inhibidor del factor de crecimiento derivado del epidérmico, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de fibroblastos, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, un inhibidor de MMP (metaloproteasa de matriz), un bloqueador de integrina, interferón-\alpha, interleucina-12, polisulfato de pentosan, un inhibidor de ciclooxigenasa, carboxiamidotriazol, combrestastatina A-4, escualamina, 6-O-cloroacetil-carbonil)-fumagillol, talidomida, angiostatina, troponina-1, o un anticuerpo frente a VEGF. En una realización, el modulador de receptores de estrógenos es tamoxifeno o raloxifeno.

También se incluye en el alcance de las reivindicaciones un procedimiento para tratar cáncer que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I junto con radioterapia y/o en combinación con un compuesto seleccionado de:

1): un modulador de receptores de estrógenos,

2): un modulador de receptores de andrógenos,

3): un modulador de receptores de retinoides,

4): un agente citotóxico/citostático,

5): un agente antiproliferativo,

6): un inhibidor de la proteína preniltransferasa,

7): un inhibidor de la HMG-CoA reductasa,

8): un inhibidor de la VIH proteasa,

9): un inhibidor de la transcriptasa inversa,

10): un inhibidor de la angiogénesis,

11): agonistas de PPAR-\gamma,

12): agonistas de PPAR-\delta,

13): un inhibidor de resistencia a múltiples fármacos inherente,

14): un agente antiemético,

15): un agente útil en el tratamiento de anemia,

16): un agente útil en el tratamiento de neutropenia,

17): un fármaco potenciador inmunológico,

19): un agente que interfiere con un control de ciclo celular.

Y aún otra realización de la invención es un procedimiento para tratar cáncer que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I en combinación con paclitaxel o trastuzumab.

La invención abarca además un procedimiento para tratar o prevenir el cáncer que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I en combinación con un inhibidor de COX-2.

La presente invención también incluye una composición farmacéutica útil para tratar o prevenir el cáncer que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula I y un compuesto seleccionado de:

1): un modulador de receptores de estrógenos,

2): un modulador de receptores de andrógenos,

3): un modulador de receptores de retinoides,

4): un agente citotóxico/citostático,

5): un agente antiproliferativo,

6): un inhibidor de la proteína preniltransferasa,

7): un inhibidor de la HMG-CoA reductasa,

8): un inhibidor de la VIH proteasa,

9): un inhibidor de la transcriptasa inversa,

10): un inhibidor de la angiogénesis,

11): agonistas de PPAR-\gamma,

12): agonistas de PPAR-\delta,

13): un inhibidor de la proliferación y señalización de supervivencia celulares, y

14): un agente que interfiere con un control de ciclo celular.

El término "administración" y variantes del mismo (por ejemplo, "administrar" un compuesto) en referencia a un compuesto de la invención quiere decir introducir el compuesto o un profármaco del compuesto dentro del sistema del animal que necesita tratamiento. Cuando se proporciona un compuesto de la invención o profármaco del mismo en combinación con uno o más de otros agentes activos (por ejemplo, un agente citotóxico, etc.), se entiende que cada "administración" y sus variantes incluyen la introducción simultánea y secuencial del compuesto o profármaco del mismo y otros agentes.

Tal como se usa en el presente documento, el término "composición" pretende abarcar un producto que comprende los componentes especificados en las cantidades especificadas, así como cualquier producto que resulta, directa o indirectamente, de la combinación de los componentes especificados en las cantidades especificadas.

El término "cantidad terapéuticamente eficaz" tal como se usa en el presente documento significa la cantidad de compuesto activo o agente farmacéutico que provoca la respuesta biológica o médica en un tejido, sistema, animal o ser humano que está estudiando el investigador, veterinario, doctor u otro médico.

El término "tratar cáncer" o "tratamiento de cáncer" se refiere a la administración a un mamífero aquejado de un estado canceroso y se refiere a un efecto que alivia la condición cancerosa destruyendo las células cancerosas, pero también a un efecto que da como resultado la inhibición del crecimiento y/o metástasis del cáncer.

La invención comprende además el uso de los presentes compuestos en un procedimiento para seleccionar otros compuestos que se unen a KSP. Para emplear los compuestos de la invención en un procedimiento para seleccionar los compuestos que se unen a la cinesina KSP, se une la KSP a un soporte, y se añade un compuesto de la invención (que es un agente mitótico) al ensayo. Alternativamente, se une el compuesto de la invención al soporte y se añade KSP. Clases de compuestos entre los que pueden encontrarse los agentes de unión novedosos incluyen anticuerpos específicos, agentes de unión no naturales identificados en selecciones de bibliotecas químicas, análogos peptídicos, etc. Tienen particular interés los ensayos de selección para agentes candidatos que tienen baja toxicidad para las células humanas. Una amplia variedad de ensayos pueden usarse con este fin, incluyendo ensayos de unión proteína-proteína marcadas in vitro, ensayos de desplazamiento de movilidad electroforética, inmunoensayos para la unión de proteínas, ensayos funcionales (ensayos de fosforilación, etc.) y similares.

La determinación de la unión del agente mitótico a KSP puede realizarse de varias maneras. En una realización preferida, el agente mitótico (el compuesto de la invención) se marca, por ejemplo, con un radical fluorescente o radiactivo y se determina la unión directamente. Por ejemplo, esto puede hacerse uniendo toda o una porción de la KSP a un soporte sólido, añadiendo un agente mitótico marcado (por ejemplo, un compuesto de la invención en el que al menos se ha reemplazado un átomo mediante un isótopo que puede detectarse), lavando el exceso de reactivo, y determinando si la cantidad del marcador es la que está presente en el soporte sólido. Pueden utilizarse diversas etapas de bloqueo y lavado tal como se conoce en la técnica.

Por "etiquetado" en el presente documento quiere decirse que el compuesto está marcado o bien directamente o bien indirectamente con un marcador que proporciona una señal que puede detectarse, por ejemplo, un radioisótopo, etiqueta fluorescente, enzima, anticuerpos, partículas tales como partículas magnéticas, etiqueta quimioluminiscente, o moléculas de unión específicas, etc. Las moléculas de unión específicas incluyen pares, tales como biotina y estreptavidina, digoxina y antidigoxina, etc. Para los elementos de unión específicos, normalmente se marcaría el elemento complementario con una molécula que proporciona la detección, según procedimientos conocidos, tal como se explicó anteriormente. El marcador puede proporcionar una señal que puede detectarse directa o indirectamente.

En algunas realizaciones, sólo se marca uno de los componentes. Por ejemplo, las proteínas cinesina pueden marcarse en las posiciones tirosina usando 125 I, o con fluoróforos. Alternativamente, puede marcarse más de un componente con diferentes marcadores; usando ^{125}I para las proteínas, por ejemplo, y un fluoróforo para los agentes mitóticos.

Los compuestos de la invención también pueden usarse como competidores para seleccionar candidatos a fármacos adicionales. "Agente bioactivo candidato" o "candidato a fármaco" o equivalentes gramaticales tal como se usan en el presente documento describen cualquier molécula, por ejemplo, proteína, oligopéptido, molécula orgánica pequeña, polisacárido, polinucleótido, etc., que va a someterse a prueba para detectar bioactividad. Éstas pueden alterar directa o indirectamente el fenotipo de proliferación celular o la expresión de una secuencia de proliferación celular, incluyendo secuencias tanto de ácido nucleico como de proteínas. En otros casos, se selecciona la alteración de unión y/o actividad de la proteína de proliferación celular. Las selecciones de este tipo pueden realizarse o bien en presencia o bien en ausencia de microtúbulos. En el caso en el que se selecciona la unión o actividad de las proteínas, las realizaciones preferidas excluyen las moléculas que ya se conoce que se unen a la proteína particular, por ejemplo, estructuras de polímero tales como microtúbulos, y fuentes de energía tales como ATP. Las realizaciones preferidas de ensayos en el presente documento incluyen agentes candidatos que no se unen a la proteína de proliferación celular en su estado nativo endógeno denominados como agentes "exógenos" en el presente documento. En otra realización preferida, los agentes exógenos excluyen además los anticuerpos frente a KSP.

Los agentes candidatos pueden abarcar numerosas clases químicas, aunque normalmente son moléculas orgánicas, preferiblemente compuestos orgánicos pequeños que tienen un peso molecular superior a 100 e inferior a aproximadamente 2.500 daltons. Los agentes candidatos comprenden grupos funcionales necesarios para la interacción estructural con proteínas, particularmente enlaces de hidrógeno y unión lipofílica, y normalmente incluyen al menos un grupo amino, carbonilo, hidroxilo, éter o carboxilo, preferiblemente al menos dos de los grupos químicos funcionales. Los agentes candidatos comprenden a menudo estructuras de carbonos cíclicos o heterocíclicas y/o estructuras aromáticas o poliaromáticas sustituidas con uno o más de los grupos funcionales anteriores. Los agentes candidatos también se encuentran entre las biomoléculas incluyendo péptidos, sacáridos, ácidos grasos, esteroides, purinas, pirimidinas, derivados, análogos estructurales o combinaciones de los mismos. Los péptidos son particularmente
preferidos.

Los agentes candidatos se obtienen de una amplia variedad de fuentes que incluyen bibliotecas de compuestos sintéticos o naturales. Por ejemplo, numerosos medios están disponibles para la síntesis aleatoria y directa de una amplia variedad de compuestos orgánicos y biomoléculas, incluyendo la expresión de oligonucleótidos aleatorizados. Alternativamente, las bibliotecas de compuestos naturales en la forma de extractos bacterianos, fúngicos, vegetales y animales están disponibles o pueden producirse fácilmente. Adicionalmente, las bibliotecas y compuestos producidos de forma natural o sintética pueden modificarse fácilmente mediante medios bioquímicos, físicos y químicos convencionales. Los agentes farmacológicos conocidos pueden someterse a modificaciones químicas aleatorias o directas tales como acilación, alquilación, esterificación, amidificación para producir análogos estructurales.

Los ensayos de selección competitiva pueden hacerse combinando KSP y un candidato a fármaco en una primera muestra. Una segunda muestra comprende un agente mitótico, KSP y un candidato a fármaco. Esto puede realizarse o bien en presencia o bien en ausencia de microtúbulos. Se determina la unión del candidato a fármaco para ambas muestras, y un cambio, o diferencia en la unión entre las dos muestras indica la presencia de un agente que puede unirse a KSP, y que modula potencialmente su actividad. Es decir, si la unión del candidato a fármaco es diferente en la segunda muestra con respecto a la primera muestra, el candidato a fármaco puede unirse a KSP.

En una realización preferida, se determina la unión del agente candidato a través del uso de ensayos de unión competitivos. En esta realización, el competidor es un radical de unión que se sabe que se une a KSP, tal como un anticuerpo, péptido, compañero de unión, ligando, etc. En determinadas circunstancias, puede haber unión competitiva tal como entre el agente candidato y el radical de unión, con el radical de unión desplazando al agente candidato.

En una realización, se marca el agente candidato. Se añade o bien el agente candidato, o bien el competidor, o ambos, en primer lugar a KSP durante un tiempo suficiente para permitir la unión, si existe. Pueden realizarse incubaciones a cualquier temperatura que facilita la actividad óptima, normalmente entre aproximadamente 4 y aproximadamente 40ºC.

Se seleccionan los periodos de incubación para la actividad óptima, pero también pueden optimizarse para facilitar la selección rápida de alta velocidad. Normalmente será suficiente entre 0,1 y 1 hora. Generalmente el reactivo en exceso se lava o se retira. Se añade a continuación el segundo componente, y se sigue la presencia o ausencia del componente marcado, para indicar la unión.

En una realización preferida, se añade en primer lugar el competidor, seguido del agente candidato. El desplazamiento del competidor es una indicación de que el agente candidato se está uniendo a KSP y por tanto puede unirse a, y potencialmente modular, la actividad de KSP. En esta realización, puede marcarse cualquier componente. Así, por ejemplo, si se marca el competidor, la presencia de marcador en la disolución de lavado indica el desplazamiento por el agente. Alternativamente, si se marca el agente candidato, la presencia del marcador en el soporte indica desplazamiento.

En una realización alternativa, se añade en primer lugar el agente candidato, con incubación y lavado, seguido del competidor. La ausencia de unión por el competidor puede indicar que el agente candidato está unido a la KSP con una mayor afinidad. Por tanto, si se marca el agente candidato, la presencia del marcador en el soporte, junto con una carencia de unión del competidor, pueden indicar que el agente candidato puede unirse a la KSP.

Puede ser valioso identificar el sitio de unión de la KSP. Esto puede realizarse de varias maneras. En una realización, una vez que se ha identificado la KSP como que se une al agente mitótico, se fragmenta o modifica la KSP y se repiten los ensayos para identificar los componentes necesarios para la unión.

Se somete a prueba la modulación mediante la selección de agentes candidatos que pueden modular la actividad de la KSP que comprende las etapas de combinar un agente candidato con KSP, tal como anteriormente, y determinar una alteración en la actividad biológica de la KSP. Por tanto, en esta realización, el agente candidato debe tanto unirse a KSP (aunque esto puede no ser necesario), como alterar su actividad biológica o bioquímica tal como se define en el presente documento. Los procedimientos incluyen tanto procedimientos de selección in vitro como in vivo de células para detectar alteraciones en la distribución del ciclo celular, viabilidad celular, o la presencia, morfología, actividad, distribución, o la cantidad de husos mitóticos, tal como se explicó de forma general anteriormente.

Alternativamente, puede usarse selección diferencial para identificar candidatos a fármaco que se unen a la KSP nativa, pero no pueden unirse a KSP modificada.

En los ensayos pueden usarse controles positivos y negativos. Preferiblemente, se realizan todas las muestras control y de prueba al menos por triplicado para obtener resultados significativos estadísticamente. La incubación de todas las muestras se hace durante un tiempo suficiente para que se una el agente a la proteína. Tras la incubación, todas las muestras se lavan para eliminar material unido no específicamente y se determina la cantidad de agente unido, generalmente marcado. Por ejemplo, cuando se emplea un radiomarcador, las muestras pueden contarse en un contador de escintilación para determinar la cantidad de compuesto unido.

Pueden incluirse una variedad de otros reactivos en los ensayos de selección. Estos incluyen reactivos tales como sales, proteínas neutras, por ejemplo, albúmina, detergentes, etc. que pueden usarse para facilitar la unión proteína-proteína óptima y/o reducir las interacciones previas o no específicas. También pueden usarse reactivos que mejoran de otra forma la eficacia del ensayo, tales como inhibidores de proteasas, inhibidores de nucleasas, agentes antimicrobianos, etc. La mezcla de componentes puede añadirse en cualquier orden que proporciona la unión que se
necesita.

Estos y otros aspectos de la invención serán evidentes a partir de las enseñanzas contenidas en el presente documento.

Ensayos

Se sometieron a prueba los compuestos de la presente invención descritos en los ejemplos mediante los ensayos descritos a continuación y se encontró que tenían actividad inhibidora de quinasa. Se conocen otros ensayos en la bibliografía y podrían realizarse fácilmente por los expertos en la técnica (véase, por ejemplo, la publicación PCT WO O1/30768, 3 de mayo de 2001, páginas 18-22).

I. Ensayo in vitro de cinesina ATPasa Clonación y expresión del dominio motor de KSP etiquetado con polihistidina humano (KSP(367H))

Se clonaron plásmidos para la expresión del constructo del dominio motor de KSP humano mediante PCR usando un constructo de KSP humano de longitud completa pBluescript (Blangy et al., Cell, vol. 83, págs. 1159-1169, 1995) como molde. Se usaron el cebador N-terminal 5'-GCAACGA TTAATATGGCGTCGCAGCCAAATTCGTCTGC
GAAG (SEQ.ID.NO.: 1) y el cebador C-terminal 5'-GCAACGCTCGAGTCAGTGATGATGGTGGTGATGCTGATT
CA CTTCAGGCTTATTCAATAT (SEQ.ID.NO.: 2) para amplificar el dominio motor y la región ligadora cervical. Se digirieron los productos de PCR con AseI y XhoI, se ligaron dentro del producto de digestión NdeI/XhoI de pRSETa (Invitrogen) y se transformó en BL21 (DE3) de E. Coli.

Se crecieron las células a 37ºC a una DO_{600} de 0,5. Tras enfriar el cultivo hasta temperatura ambiente, se indujo la expresión de la KSP con IPTG 100 \muM y se continuó la incubación durante la noche. Se sedimentaron las células mediante centrifugación y se lavaron una vez con PBS congelado. Se congelaron ultrarrápidamente los sedimentos y se almacenaron a -80ºC.

Purificación de proteínas

Se descongelaron los sedimentos celulares sobre hielo y se resuspendieron en tampón de lisis (K-HEPES 50 mM, pH 8,0, KCl 250 mM, Tween al 0,1%, imidazol 10 mM, Mg-ATP 0,5 mM, PMSF 1 mM, benzimidina 2 mM, 1x mezcla inhibidora de proteasas completa (Roche)). Se incubaron las suspensiones celulares con lisozima 1 mg/ml y \beta-mercaptoetanol 5 mM sobre hielo durante 10 minutos, seguido de sonicación (3x 30 s). Se realizaron todos los procedimientos siguientes a 4ºC. Se centrifugaron los lisados a 40.000x g durante 40 minutos. Se diluyeron los sobrenadantes y se cargaron en una columna de sepharose SP (Pharmacia, cartucho de 5 ml) en un tampón A (K-HEPES 50 mM, pH 6,8, MgCl_{2} 1 mM, EGTA 1 mM, Mg-ATP 10 \muM, DTT 1 mM) y se eluyó con un gradiente de KCl de 0 a 750 mM en tampón A. Se combinaron e incubaron las fracciones que contenían KSP con resina Ni-NTA (Qiagen) durante 1 hora. Se lavó la resina tres veces con tampón B (tampón de lisis menos PMSF y mezcla inhibidora de proteasas), seguido de tres incubaciones de 15 minutos y lavados con tampón B. Finalmente, se incubó la resina y se lavó durante 15 minutos tres veces con tampón C (el mismo que el tampón B excepto por el pH 6,0) y se vertió dentro de una columna. Se eluyó la KSP con un tampón de elución (idéntico al tampón B excepto por KCl 150 mM e imidazol 250 mM). Se combinaron las fracciones que contenían KSP, preparadas al 10% en sacarosa, y almacenadas a
-80ºC.

Se prepararon microtúbulos a partir de tubulina aislada de cerebro bovino. Se polimerizó la tubulina purificada (>97% libre de MAP) a 1 mg/ml a 37ºC en presencia de paclitaxel 10 \muM, DTT 1 mM, GTP 1 mM en tampón BRB80 (K-PIPES 80 mM, EGTA 1 mM, MgCl_{2} 1 mM a pH 6,8). Se separan los microtúbulos resultantes de la tubulina no polimerizada mediante ultracentrifugación y se retira el sobrenadante. Se resuspende el sedimento, que contiene los microtúbulos, cuidadosamente en paclitaxel 10 \muM, DTT 1 mM, ampicilina 50 \mug/ml y cloramfenicol 5 \mug/ml en BRB80.

Se incuba el dominio motor de cinesina con microtúbulos, ATP 1 mM (1:1 MgCl_{2}: Na-ATP), y se forma el compuesto a 23ºC en tampón que contiene K-HEPES 80 mM (pH 7,0), EGTA 1 mM, DTT 1 mM, MgCl_{2} 1 mM, y KCI 50 mM. Se termina la reacción mediante una dilución de 2-10 veces con una composición de tampón final de HEPES 80 mM y EDTA 50 mM. Se mide el fosfato libre de la reacción de hidrólisis de ATP a través de un ensayo de rojo de quinaldina/molibdato de amonio añadiendo 150 \mul de tampón C extinguido que contiene una razón 2:1 de A extinguido con respecto a B extinguido. A extinguido contiene rojo de quinalina 0,1 mg/ml y poli(alcohol vinílico) al 0,14%; B extinguido contiene molibdato de amonio tetrahidratado 12,3 mM en ácido sulfúrico 1,15 M. Se incuba la reacción durante 10 minutos a 23ºC, y se mide la absorbancia del complejo fosfomolibdato a
540 nm.

Se sometieron a prueba los compuestos de 1-6 a 1-10 y de 2-7 a 2-11 en los ejemplos en el ensayo anterior y se encontró que tienen CI_{50} \leq 50 \muM

II. Ensayo de proliferación celular

Se sembraron células en placas de cultivo tisular de 96 pocillos a densidades que permiten el crecimiento logarítmico durante el transcurso de 24, 48 y 72 horas y se permite que se adhieran durante la noche. Al día siguiente, se añaden los compuestos en una valoración de la mitad del logaritmo de 10 puntos en todas las placas. Se realiza cada serie de valoración por triplicado y se mantiene una concentración constante de DMSO del 0,1% a lo largo de todo el ensayo. Se incluyen también controles de DMSO al 0,1% solo. Cada serie de disolución de compuestos se prepara en medio sin suero. La concentración final de suero en el ensayo es del 5% en un volumen de medio de 200 \mul. Se añadieron veinte microlitros de reactivo colorante azul alamar a cada pocillo de muestra y control sobre la placa de valoración a las 24, 48 o 72 horas tras la adición del fármaco y se volvió a la incubación a 37ºC. Se analizó la fluorescencia del azul alamar 6-12 horas más tarde sobre un lector de placas CytoFluor II usando una excitación de longitud de onda de 530-560 nanometros, emisión a 590 nanometros.

Se deriva una CE_{50} citotóxica mediante la representación gráfica de la concentración de compuestos en el eje x y la inhibición en porcentual promedio de crecimiento celular para cada punto de valoración en el eje y. El crecimiento de células en los pocillos control que se han tratado con vehículo solo se define como el crecimiento al 100% para el ensayo, y se compara el crecimiento de las células tratadas con compuestos a este valor. Se usa software propio para calcular valores porcentuales de citotoxicidad y puntos de inflexión usando ajuste logístico a curvas mediante 4 parámetros. La citotoxicidad porcentual se define como:

%\ de\ citotoxicidad: (fluorescencia_{control}) - (fluorescencia_{muestra})\ x\ 100\ x\ (fluorescencia_{control})^{-1}

Se notifica el punto de inflexión como la CE_{50} citotóxica.

III. Evaluación del paro mitótico y apóptosis mediante FACS

Se usa el análisis de FACS para evaluar la capacidad de un compuesto para parar células en mitosis y para inducir la apóptosis mediante la medición del contenido de ADN en una población de células tratada. Se siembran las células a una densidad de 1,4 x 10^{6} células por 6 cm^{2} de placa de cultivo tisular y se permiten que se adhieran durante la noche. Se tratan entonces las células con vehículo (DMSO al 0,1%) o una serie de valoración de compuesto durante 8-16 horas. Tras el tratamiento, se cultivan las células mediante tripsinización a los tiempos indicados y se sedimentan mediante centrifugación. Se aclaran los sedimentos celulares en PBS y se fijan en etanol al 70% y se almacenan a 4ºC durante la noche o más.

Para el análisis de FACS, se sedimentan al menos 500.000 células fijadas y se elimina el etanol al 70% mediante aspiración. Se incuban entonces las células durante 30 minutos a 4ºC con ARNasa A (50 unidades Kunitz/ml) y yoduro de propidio (50 \mug/ml), y se analizaron usando un FACSCaliber de Becton Dickinson. Se analizaron los datos (de 10.000 células) usando el software de modelización de análisis de ciclo celular Modfit (Verity
Inc.).

Se deriva una CE_{50} para el paro mitótico mediante la representación gráfica de la concentración del compuesto en el eje de las x y el porcentaje de células en la fase G2/M del ciclo celular para cada punto de valoración (tal como se mide mediante la fluorescencia de yoduro de propidio) en el eje y. Se realiza el análisis de datos usando el programa SigmaPlot para calcular un punto de inflexión usando ajuste logístico a curvas mediante 4 parámetros. Se notifica el punto de inflexión como la CE_{50} para el paro mitótico. Se usa un procedimiento similar para determinar la CE_{50} del compuesto para la apóptosis. En este caso, el porcentaje de células apoptóticas en cada punto de valoración (tal como se determina mediante la fluorescencia de yoduro de propidio) se representa gráficamente en el eje y, y se lleva a cabo un análisis similar tal como se describió anteriormente.

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VI. Microscopía de inmunofluorescencia para detectar husos monopolares

Los procedimientos para la tinción de inmunofluorescencia de ADN, tubulina, y pericentrina son esencialmente tal como se describen en Kapoor et al. (2000) J. Cell Biol. 150: 975-988. Para estudios de cultivos celulares, se siembran las células sobre portaobjetos de vidrio tratado de cultivos tisulares y se permite que se adhieran durante la noche. Se incuban entonces las células con el compuesto de interés durante de 4 a 16 horas. Tras completar la incubación, se aspiran el medio y el fármaco y se retiran la cámara y la junta del portaobjetos de vidrio. Entonces se permeabilizan, fijan, lavan, y bloquean las células para la unión a anticuerpos no específicos según el protocolo de referencia. Se desparafinan las secciones tumorales incrustadas en parafina con xileno y vuelven a hidratarse a través de una serie de etanol antes del bloqueo. Se incuban los portaobjetos en anticuerpos primarios (anticuerpo anti-\alpha-tubulina monoclonal de ratón, DM1A clon de Sigma diluido 1:500; anticuerpo antipericentrina policlonal de conejo de Covance, diluido 1:2000) durante la noche a 4ºC. Tras lavar, se incuban los portaobjetos con anticuerpos secundarios conjugados (IgG anti-ratón de burro conjugado con FITC para tubulina; IgG anti-conejo de burro conjugado con rojo texas para pericentrina) diluido hasta 15 \mug/ml durante una hora a temperatura ambiente. Se lavan a continuación los portaobjetos y se someten a contratinción con Hoechst 33342 para visualizar el ADN. Se visualizan las muestras sometidas a tinción inmunológica mediante un objetivo de inmersión en aceite de 100x en un microscopio de epifluorescencia Nikon usando un software de formación de imágenes y deconvolución
Metamorph.

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Ejemplos

Se proporcionan ejemplos que pretenden ayudar a un entendimiento adicional de la invención. Los materiales particulares empleados, especies y condiciones pretenden ser ilustrativos para la invención y no limitativos del alcance razonable de la misma.

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Esquema 1

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24

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Etapa 1

Tetrafluoroborato de 2,5-difluorobencenodiazonio (1-1)

Se añadió tetrafluoroborato de nitrosonio (905 mg, 7,75 mmol, 1,00 equiv) a una disolución de 2,5-difluoroanilina (0,780 ml, 7,75 mmol, 1 equiv) en acetonitrilo (50 ml) a 0°C. Se agitó la mezcla resultante durante 1 hora, se diluyó a continuación con etil éter (150 ml). Se filtró el precipitado y se secó al aire para dar tetrafluoroborato de 2,5-difluorobencenodiazonio (1-1) como un sólido oscuro. ^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,54 (m, 1H), 8,24 (m, 1H), 7,95 (m, 1H).

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Etapa 2

3-(2,5-difluorofenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (1-2)

Se añadió acetato de paladio (II) (67 mg, 0,30 mmol, 0,020 equiv) a una mezcla desoxigenada, agitada vigorosamente de 2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (2,59 ml, 15,0 mmol, 1 equiv) y tetrafluoroborato de 2,5-difluorobencenodiazonio (1-1, 3,42 g, 15,0 mmol, 1,00 equiv) en agua y tetracloruro de carbono (1:1, 150 ml) a 23°C, y se agitó la mezcla resultante durante 20 horas. Se concentró la mezcla de reacción, y se repartió el residuo entre acetato de etilo (300 ml) y una disolución de bicarbonato de sodio acuosa saturada (75 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera, se secó entonces sobre sulfato de sodio y se concentró. Se disolvió el residuo en tolueno (200 ml), y se concentró la disolución resultante a vacío para facilitar la eliminación azeotrópica de agua residual. Se añadieron secuencialmente a continuación 2,6-lutidina (3,50 ml, 30,0 mmol, 2,00 equiv) y anhídrido trifluoroacético (1,48 ml, 10,5 mmol, 0,700 equiv) a una disolución del residuo en tolueno (100 ml) a -10°C. Se permitió a continuación que la mezcla resultante se calentase hasta 10°C durante más de 16 horas, se calentó a continuación a reflujo durante 1 hora. Se permitió que la mezcla de reacción se enfriase hasta 23°C, y se concentró a continuación. Se repartió el residuo entre acetato de etilo (300 ml) y una disolución de bicarbonato de sodio acuosa saturada (150 ml). Se secó entonces la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de resolución rápida (inicialmente hexanos, gradualmente hasta el 20% de EtOAc en hexanos) para dar 3-(2,5-difluorofenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (1-2) como un aceite rojo. ^{1}H RMN (500 MHz, CDCl_{3}) rotámero principal: \delta 7,03-6,84 (m, 3H), 6,70 (sa, 1H), 5,01 (sa, 1H), 4,42 (m, 1H), 4,13 (m, 1H). 3,60 (m, 1H), 1,50
(s, 9H).

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Etapa 3

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (1-4)

Se añadió tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (59 mg, 064 mmol, 0,020 equiv) a una mezcla desoxigenada de 3-(2,5-difluorofenil)-2,3-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (1-2, 900 mg, 3,20 mmol, 1 equiv), tetrafluoroborato de becenodiazonio (1-3, preparado mediante el procedimiento descrito anteriormente para 1-1, 614 mg, 3,20 mmol, 1,00 equiv), y acetato de sodio trihidratado (1,32 g, 9,60 mmol, 3,00 equiv) en acetonitrilo (70 ml) a 23°C. Se agitó la mezcla resultante durante 16 horas, se repartió entonces entre una disolución de bicarbonato de sodio acuosa saturada y acetato de etilo (2 x 70 ml). Se secaron las fases orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio y se concentraron. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de resolución rápida (inicialmente hexanos, gradualmente hasta el 40% de hexanos en EtOAc) para proporcionar 4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (1-4) como un aceite naranja. EMBR m/z (M+H-CH_{3}) 343,0 encontrado, 343,1 requerido.

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Etapa 4

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol (1-5)

Se añadió ácido trifluoroacético (20 ml) a una disolución de 4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (1-4, 700 mg, 1,96 mmol, 1 equiv) en diclorometano (50 ml) a 23°C, y se agitó la mezcla resultante durante 30 minutos, se concentró a continuación para dar 4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol (1-5) como una sal de TFA (aceite marrón). EMBR m/z (M+H) 258,1 encontrado, 258,1 requerido.

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Etapa 5

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de metilo (1-6)

Se añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,19 ml, 1,1 mmol, 6,0 equiv) y cloroformato de metilo (0,014 \muL, 0,18 mmol, 1,0 equiv) a una disolución de 4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol (1-5, 0,18 mmol, 1 equiv) en diclorometano (10 ml) a 23°C, y se agitó la mezcla resultante durante 1 hora, y se concentró a continuación. Se repartió el residuo entre una disolución de bicarbonato de sodio acuosa saturada (40 ml) y acetato de etilo (2 x 35 ml). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró. Se purificó el residuo mediante CL de fase inversa (gradiente H_{2}O/CH_{3}CN p/TFA al 0,1% presente) para proporcionar 4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de metilo (1-6) como un sólido de color hueso. ^{1}H RMN (500 MHz, CD_{3}OD un rotámero: \delta 7,32 (m, 3H), 7,25 (m, 2H), 7,20 (m, 1H), 7,16 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 6,38 (sa, 1H), 5,67 (m, 1H), 4,74 (sa, 2H), 3,70 (s, 3H). EMBR m/z (M+H) 316,0 encontrado, 316,1 requerido. Se prepararon los siguientes compuestos mediante modificaciones sencillas del procedimiento anterior.

25

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Esquema 2

26

Etapa 1

(2S,4S)-4-hidroxi-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (2-2)

Se añadió (2S,4S)-4-{[terc-butil(dimetil)silil]oxi}-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (2-1, preparado a partir de (S)-(-)-4-cloro-3-hidroxibutironitrilo mediante el procedimiento de Maeda, et al. Synlett 2001, 1808-1810, 7,8 g, 20,7 mmol) y acetonitrilo anhidro (20.0 ml) a un matraz secado por llama equipado con una barra agitadora. Se trató la disolución resultante con trihidrofluoruro de trietilamina (10,1 ml, 62,0 mmol) mientras se agitaba bajo N_{2}. Se agitó la reacción durante 12 horas a 40°C. Se diluyó la reacción a continuación con EtOAc (100 ml) y se vertió dentro de NaHCO_{3} acuoso al 5%. Tras cesar el desprendimiento de gas, se lavó la fase orgánica tres veces adicionales con NaHCO_{3} acuoso al 5%. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se filtró y concentró para proporcionar el producto crudo. Se efectuó la recristalización en EtOAc/hexanos para proporcionar (2S,4S)-4-hidroxi-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (2-2) como un sólido cristalino blanco. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3} rotámeros \delta 7,38-7,18 (m, 5H), 4,90 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 3,56 (dd, J = 11,5, 4,0 Hz, 1H), 2,60 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,50 y 1,20 (sa, 9H); EM 208,0 encontrado, 208,1 (M - C(CH_{3})_{3}) requerido.

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Etapa 2

(2S)-4-oxo-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (2-3)

Se añadieron 150 ml de diclorometano anhidro a un matraz secado por llama equipado con una barra agitadora que se enfrió hasta -78ºC. Se añadieron secuencialmente cloruro de oxalilo (3,8 ml, 44 mmol) y DMSO (4,8 ml, 61 mmol) y se agitó la reacción durante 10 minutos. Se añadió gota a gota (2S,4S)-4-hidroxi-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (2-2, 2,28 g, 8,73 mmol) en 10 ml de diclorometano anhidro y se agitó 1 hora a -78°C. Se añadió trietilamina (12 ml, 87mmol) y se calentó la reacción hasta 0ºC durante más de 1 hora. Tras completarse, se lavó la reacción con NaHCO_{3} al 5%, salmuera y se secó sobre MgSO_{4}. Se concentró la fase orgánica para proporcionar (2S)-4-oxo-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato de terc-butilo (2-3) crudo. Se efectuó la recristalización con EtOAc/hexanos. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,35 (m, 3H), 7,17 (m, 2H), 5,38 (m, 1H), 4,08 (d, J = 19,5 Hz, 1H), 3,90 (d, J = 19,3 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 18,8, 9,8 Hz, 1H), 2,58 (dd, J = 18,6, 2,4 Hz, 1H), 1,40 (sa, 9H); EM 206,0 encontrado, 206,1 (M - C(CH_{3})_{3}) requerido.

Etapa 3

(2S)-2-fenil-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (2-4)

Se añadió (2S)-4-oxo-2-fenilpirrolidin-1-carboxilato de terc-butil cetona (2-3, 2,00 g, 7,65 mmol) y THF anhidro (100 ml) a un matraz secado por llama equipado con una barra agitadora. Se enfrió la disolución resultante hasta -78ºC, y se trató gota a gota con hexametildisililamida de sodio (NaHMDS, 8,42 ml, 1 M en THF, 8,42 mmol). Se agitó la reacción 1 hora a -78°C, y se añadió una disolución de 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-[(trifluorometil)sulfonil]metanosulfonamida (3,01 g, 8,42 mmol) en THF (30 ml) a través de una cánula. Se calentó la mezcla de reacción hasta 0ºC y se agitó 30 minutos. Se repartió a continuación la mezcla de reacción entre salmuera (200 ml) y una mezcla 1:1 de acetato de etilo y hexano (200 ml). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró para proporcionar (2S)-2-fenil-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (2-4) crudo como un aceite naranja. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) rotámero principal: \delta 7,30 (m, 5H), 5,72 (m, 1H), 5,48 (m, 1H), 4,42 (m, 2H), 1,18 (s, 9H); EM 379,0 encontrado 379,1 (M - CH_{3}) requerido.

Etapa 4

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (2-5)

Se calentó una mezcla desoxigenada de (2S)-2-fenil-4-{[(trifluorometil)sulfonil]oxi}-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo crudo (2-4, 7,65 mmol), ácido 2,5-difluorofenilborónico (1,81 g, 11,5 mmol), una disolución acuosa de Na_{2}CO_{3} (2 M, 11,5 ml, 23,0 mmol), y Pd(PPh_{3})_{4} (0,442 g, 0,383 mmol) en dioxano (100 ml) a 90°C durante 45 minutos. Se enfrió la mezcla de reacción, se repartió entre salmuera (200 ml) y una mezcla 1:1 de acetato de etilo y hexano (200 ml). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró. Se purificó el residuo mediante cromatografía en columna de resolución rápida (SiO_{2}, gradiente del 0-50% de EtOAc/hexanos) para proporcionar (2S)4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de terc-butilo (2-5)como un sólido blanco. EMBR m/z (M+H-CH_{3}) 358,0 encontrado, 358,2 requerido.

Etapa 5

1-{[(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il]carbonil}-3-metil-1H-imidazol-3-io (2-6)

Se cargó 2-5 (0,63 g, 1,75 mmol) y CH_{2}Cl_{2} (10 ml) anhidro a un matraz secado por llama equipado con una barra agitadora bajo nitrógeno. Se trató la disolución resultante con ácido trifluoroacético (5 ml) y se agitó durante 1,5 horas a 25ºC. Tras completarse, se concentró la reacción, se absorbió en CH_{2}Cl_{2} (50 ml) y se lavó con NaHCO_{3} al 5% (50 ml). Se secó la fase orgánica (MgSO_{4}), se filtró y se concentró a presión reducida. Se disolvió la amina libre resultante en THF anhidro (10 ml) y se trató con carbonildiimidazol (0,31 g, 1,93 mmol). Se sometió a reflujo la disolución resultante durante 4 horas hasta completarse. Se concentró la reacción, se absorbió en EtOAc (50 ml) y se lavó con H_{2}O y salmuera. Se secaron (MgSO_{4}) las fases orgánicas combinadas y se concentraron. Se disolvió el acilimidazol crudo en CH_{3}CN anhidro y se trató con MeI (2,2 ml, 36 mmol). Se agitó la disolución resultante a 25ºC durante la noche. Tras completarse, se concentró la reacción para dar 2-6 como un sólido de color naranja: EMBR m/z (M+H) 365,9 encontrado, 366,1 requerido.

Etapa 6

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de 2-(dimetilamino)-2-metilpropilo (2-7)

Se agitó una disolución de yoduro de 1-{[(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-il]carbonil}-3-metil-1H-imidazol-3-io (2-6, 14 mg, 0,038 mmol, 1 equiv), N,N-diisopropiletilamina (0,016 ml, 0,11 mmol, 3,0 equiv), y 2-dimetilamino-2-metil-1-propanol (0,015 ml, 0,11 mmol, 3,0 equiv) en diclorometano (1 ml) a 23°C durante 48 h. Se concentró la mezcla de reacción y se purificó el residuo mediante CL de fase inversa (gradiente H_{2}O/CH_{3}CN p/TFA al 0,1% presente) para dar (2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de 2-(dimetilamino)-2-metilpropilo (2-7) como una sal de TFA. ^{1}H RMN (300 MHz, CDCl_{3}) ^{1}H RMN (500 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,26-7,36 (m, 5H), 6,96-7,08 (m, 3H), 6,32 (sa, 1H). 5,85 (m, 1H), 4,83 (d, 2H, J = 2,0 Hz), 4,21 (d, 2H, J = 12,9 Hz), 4,17 (d, 2H, J = 12,9 Hz), 2,57 (sa, 3H), 2,42 (sa, 3H), 1,27 (s, 3H), 1,14 (s, 3H). EMBR m/z (M+H) 401,3 encontrado, 401,2 requerido. Se prepararon los siguientes compuestos mediante modificaciones sencillas del procedimiento anterior. Se usaron los aminoalcoholes N-Boc y se realizó una etapa de desprotección final (TFA/CH_{2}Cl_{2}). Se aislaron todos los compuestos como sales de TFA tras la purificación

\hbox{mediante CL de fase inversa (gradiente 
H _{2} O/CH _{3} CN p/TFA al 0,1% presente).}

27

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<110> Merck & Co., Inc.

\hskip1cm

Arrington, Kenneth L.

\hskip1cm

Fraley, Mark E.

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<120> INHIBIDORES DE CINESINA MITÓTICA

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<130> 21119Y

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<150> 60/388.828

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<151> 14-06-2002

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<160> 2

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<170> FastSEQ para la versión 4.0 de Windows

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<210> 1 -

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<211> 42

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<212> ADN

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<213> Secuencia artificial

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<220>

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<223> Oligonucleótido completamente sintético

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<400> 1

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\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

gcaacgatta atatggcgtc gcagccaaat tcgtctgcga ag

\hfill

42

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<210> 2

\vskip0.400000\baselineskip

<211> 60

\vskip0.400000\baselineskip

<212> ADN

\vskip0.400000\baselineskip

<213> Secuencia artificial

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<220>

\vskip0.400000\baselineskip

<223> Oligonucleótido completamente sintético

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

<400> 2

\vskip1.000000\baselineskip

\vskip0.400000\baselineskip

\hskip-.1em\dddseqskip

gcaacgctcg agtcagtgat gatggtggtg atgctgattc acttcaggct tattcaatat

\hfill

60

Claims

1. Un compuesto de fórmula I:

\vskip1.000000\baselineskip

28

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o una sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

m es 0, 1, ó 2;

r es 0 ó 1;

s es 0 ó 1; y

u es 2, 3, 4 ó 5;

una línea discontinua representa un doble enlace opcional, con la condición de que sólo esté presente uno y sólo un doble enlace en el anillo;

R^{1} se selecciona de:

1): (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)O-arilo,

3): (C=O)O-alquenilo C_{2}-C_{10},

4): (C=O)O-alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)O-cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

6): (C=O)O-heterociclilo,

R^{2} y R^{6} se seleccionan independientemente de:

1): arilo,

2): aralquilo C_{1}-C_{6},

3): cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

4): heterociclilo,

dichos arilo, cicloalquilo, aralquilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10}; con la condición de que R^{2} y R^{6} no sean ambos un arilo no sustituido seleccionado de fenilo y naftilo;

1): H,

2): alquilo C_{1}-C_{10},

3): arilo,

4): alquenilo C_{2}-C_{10},

5): alquinilo C_{2}-C_{10},

6): perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

7): aralquilo C_{1}-C_{6},

8): cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

9): heterociclilo,

dichos alquilo, arilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, aralquilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10}; o

R^{4} y R^{5}, o R^{8} y R^{9}, unidos al mismo átomo de carbono se combinan para formar -(CH_{2})_{u}- en el que se reemplaza opcionalmente uno de los átomos de carbono por un resto seleccionado de: O, S(O)_{m}, -N(R^{a})C(O)-, -N(R^{b})- y -N(COR^{a})-;

R^{10} se selecciona independientemente de:

1): (C=O)_{a}O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)_{a}O_{b}-arilo,

3): alquenilo C_{2}-C_{10},

4): alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)_{a}O_{b}-heterociclilo,

6): CO_{2}H,

7): halo,

8): CN,

9): OH,

10): O_{b}-perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

11): O_{a}(C=O)_{b}NR^{12}R^{13},

12): S(O)_{m}R^{a},

13): S(O)_{2}NR^{12}R^{13},

14): oxo,

15): CHO,

16): (N=O)R^{12}R^{13}, y

17): (C=O)_{a}O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

dichos alquilo, arilo, alquenilo, alquinilo, heterociclilo, y cicloalquilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{11};

R^{11} se selecciona de:

1): (C=O)rO_{s}-alquilo (C_{1}-C_{10}),

2): O_{r}-perfluoroalquilo (C_{1}-C_{3}),

3): alquileno (C_{0}-C_{6})-S(O)_{m}R^{a},

4): oxo,

5): OH,

6): halo,

7): CN,

8): (C=O)_{r}O_{s}-alquenilo (C_{2}-C_{10}),

9): (C=O)_{r}O_{s}-alquinilo (C_{2}-C_{10}),

10): (C=O)_{r}O_{s}-cicloalquilo (C_{3}-C_{6}),

11): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-arilo,

12): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-heterociclilo,

13): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-N(R^{b})_{2},

14): C(O)R^{a},

15): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}R^{a},

16): C(O)H,

17): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}H,

18): C(O)N(R^{b})_{2},

19): S(O)_{m}R^{a}, y

20): S(O)_{2}N(R^{b})_{2},

dichos alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, arilo, alquileno y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con hasta tres sustituyentes seleccionados de R^{b}, OH, alcoxilo (C_{1}-C_{6}), halógeno, CO_{2}H, CN, O(C=O) alquilo C_{1}-C_{6}, oxo, y N(R^{b})_{2};

R^{12} y R^{13} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): (C=O)O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

3): (C=O)O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

4): (C=O)O_{b}-arilo,

5): (C=O)O_{b}-heterociclilo,

6): alquilo C_{1}-C_{10},

7): arilo,

8): alquenilo C_{2}-C_{10},

9): alquinilo C_{2}-C_{10},

10): heterociclilo,

11): cicloalquilo C_{3}-C_{8},

12): SO_{2}R^{a}, y

13): (C=O)NR^{b}_{2},

dichos alquilo, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, alquenilo, y alquinilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{11}, o

R^{12} y R^{13} pueden tomarse junto con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo monocíclico o bicíclico con 5-7 miembros en cada anillo y que contiene opcionalmente, además del nitrógeno, uno o dos heteroátomos adicionales seleccionados de N, O y S, estando sustituido opcionalmente dicho heterociclo monocíclico o bicíclico con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{11};

R^{b} es H, alquilo (C_{1}-C_{6}), arilo, heterociclilo, cicloalquilo (C_{3}-C_{6}), (C=O)O alquilo C_{1}-C_{6}, (C=O) alquilo C_{1}-C_{6}, o S(O)_{2}R^{a}.

2. Un compuesto de fórmula II

29

o una sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

m es 0, 1, ó 2;

r es 0 ó 1; y

s es 0 ó 1;

R^{1} se selecciona de:

1): (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)O-arilo,

3): (C=O)O-alquenilo C_{2}-C_{10},

4): (C=O)O-alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)O-cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

6): (C=O)O-heterociclilo,

R^{2} y R^{6} se seleccionan independientemente de:

1): arilo,

2): aralquilo C_{1}-C_{6},

3): cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

4): heterociclilo,

R^{3}, R^{4}, y R^{8} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): alquilo C_{1}-C_{10},

3): arilo,

4): alquenilo C_{2}-C_{10},

5): alquinilo C_{2}-C_{10},

6): perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

7): aralquilo C_{1}-C_{6},

8): cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

9): heterociclilo,

R^{10} se selecciona independientemente de:

1): (C=O)_{a}O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)_{a}O_{b}-arilo,

3): alquenilo C_{2}-C_{10},

4): alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)_{a}O_{b}-heterociclilo,

6): CO_{2}H,

7): halo,

8): CN,

9): OH,

10): O_{b}-perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

11): O_{a}(C=O)_{b}NR^{12}R^{13},

12): S(O)_{m}R^{a},

13): S(O)_{2}NR^{12}R^{13},

14): oxo,

15): CHO,

16): (N=O)R^{12}R^{13}, y

17): (C=O)_{a}O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

R^{11} se selecciona de:

1): (C=O)_{r}O_{s}-alquilo (C_{1}-C_{10}),

2): O_{r}-perfluoroalquilo (C_{1}-C_{3}),

3): oxo,

4): OH,

5): halo,

6): CN,

7): alquenilo (C_{2}-C_{10}),

8): alquinilo (C_{2}-C_{10}),

9): (C=O)_{r}O_{s}-cicloalquilo (C_{3}-C_{6}),

10): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-arilo,

11): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-heterociclilo,

12): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno(C_{0}-C_{6})-N(R^{b})_{2},

13): C(O)R^{a},

14): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}R^{a},

15): C(O)H,

16): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}H,

17): C(O)N(R^{b})_{2},

18): S(O)_{m}R^{a}, y

19): S(O)_{2}N(R^{b})_{2};

R^{12} y R^{13} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): (C=O)O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

3): (C=O)O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

4): (C=O)O_{b}-arilo,

5): (C=O)O_{b}-heterociclilo,

6): alquilo C_{1}-C_{10},

7): arilo,

8): alquenilo C_{2}-C_{10},

9): alquinilo C_{2}-C_{10},

10): heterociclilo,

11): cicloalquilo C_{3}-C_{8},

12): SO_{2}R^{a}, y

13): (C=O)NRb_{2},

3. Compuesto según la reivindicación 2, de fórmula III:

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30

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o una sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

a es 0 ó 1;

b es 0 ó 1;

m es 0, 1, ó 2;

r es 0 ó 1; y

s es 0 ó 1;

R^{1} se selecciona de:

1): (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)O-arilo,

3): (C=O)O- cicloalquilo C_{3}-C_{8}, y

4): (C=O)O-heterociclilo,

dichos alquilo, arilo, cicloalquilo, heteroarilo y heterociclilo están sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10};

R^{3}, R^{4}, y R^{8} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): alquilo C_{1}-C_{10}, y

3): perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

R^{10} se selecciona independientemente de:

1): (C=O)_{a}O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

2): (C=O)_{a}O_{b}-arilo,

3): alquenilo C_{2}-C_{10},

4): alquinilo C_{2}-C_{10},

5): (C=O)_{a}O_{b}-heterociclilo,

6): CO_{2}H,

7): halo,

8): CN,

9): OH,

10): O_{b}-perfluoroalquilo C_{1}-C_{6},

11): O_{a}(C=O)_{b}NR^{12}R^{13},

12): S(O)_{m}R^{a},

13): S(O)_{2}NR^{12}R^{13},

14): oxo,

15): CHO,

16): (N=O)R^{12}R^{13}, y

17) (C=O)_{a}O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

R^{10} es halógeno;

R^{11} se selecciona de:

1): (C=O)_{r}O_{s}-alquilo (C_{1}-C_{10}),

2): O_{r}-perfluoroalquilo (C_{1}-C_{3}),

3): oxo,

4): OH,

5): halo,

6): CN,

7): alquenilo (C_{2}-C_{10}),

8): alquinilo (C_{2}-C_{10}),

9): (C=O)_{r}O_{s}-cicloalquilo (C_{3}-C_{6}),

10): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-arilo,

11): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-heterociclilo,

12): (C=O)_{r}O_{s}-alquileno (C_{0}-C_{6})-N(R^{b})_{2},

13): C(O)R^{a},

14): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}R^{a},

15): C(O)H,

16): alquileno (C_{0}-C_{6})-CO_{2}H,

17): C(O)N(R^{b})_{2},

18): S(O)_{m}R^{a}, y

19): S(O)_{2}N(R^{b})_{2};

R^{12} y R^{13} se seleccionan independientemente de:

1): H,

2): (C=O)O_{b}-alquilo C_{1}-C_{10},

3): (C=O)O_{b}-cicloalquilo C_{3}-C_{8},

4): (C=O)O_{b}-arilo,

5): (C=O)O_{b}-heterociclilo,

6): alquilo C_{1}-C_{10},

7): arilo,

8): alquenilo C_{2}-C_{10},

9): alquinilo C_{2}-C_{10},

10): heterociclilo,

11): cicloalquilo C_{3}-C_{8},

12): SO_{2}R^{a}, y

13): (C=O)NRb_{2},

4. Compuesto según la reivindicación 3, de fórmula III, o la sal o esteroisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, en el que:

R^{1} es (C=O)O-alquilo C_{1}-C_{10},

R^{3}, R^{4} y R^{8} se seleccionan independientemente de:

1): H, y

2): alquilo C_{1}-C_{10},

dicho alquilo está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de R^{10}; y

R^{10}, R^{11}, R^{12}, R^{13}, R^{a} y R^{b} son tal como se describen en la reivindicación 3.

5. Un compuesto seleccionado de:

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de metilo;

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de alilo;

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de etilo;

4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de fenilo;

(2S)-4-(2,5-difluorofenil)-2-fenil-2,5-dihidro-1H-pirrol-1-carboxilato de piperidin-4-il;

o una aceptable o eteroisómero sal farmacéuticamente de los mismos.

6. Compuesto según la reivindicación 5, que es la sal de TFA de un compuesto seleccionado de:

7. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su uso en terapia.

9. Un uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir el cáncer.

10. Uso según la reivindicación 9, en el que el cáncer se selecciona de cánceres de cerebro, tracto genitourinario, sistema linfático, estómago, laringe y pulmón, linfoma histiocítico, adenocarcinoma pulmonar, cánceres de pulmón de células pequeñas, cáncer pancreático, glioblastomas y carcinoma de mama.

11. Un procedimiento para fabricar una composición farmacéutica que comprende combinar un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

12. Composición según la reivindicación 7, que comprende además un segundo compuesto seleccionado de:

1): un modulador de receptores de estrógenos,

2): un modulador de receptores de andrógenos,

3): un modulador de receptores de retinoides,

4): un agente citotóxico/citostático,

5): un agente antiproliferativo,

6): un inhibidor de la proteína preniltransferasa,

7): un inhibidor de la HMG-CoA reductasa,

8): un inhibidor de la VIH proteasa,

9): un inhibidor de la transcriptasa inversa,

10): un inhibidor de la angiogénesis, y

11): agonistas de PPAR-\gamma,

12): agonistas de PPAR-\delta,

14): un agente que interfiere con un control de ciclo celular.

13. Composición según la reivindicación 12, en la que el segundo compuesto es un inhibidor de la angiogénesis seleccionado del grupo constituido por un inhibidor de la tirosina quinasa, un inhibidor del factor de crecimiento derivado del epidérmico, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de fibroblastos, un inhibidor del factor de crecimiento derivado de plaquetas, un inhibidor de MMP, un bloqueador de integrina, interferón-\alpha, interleucina-12, polisulfato de pentosan, un inhibidor de ciclooxigenasa, carboxiamidotriazol, combrestastatina A-4, escualamina, 6-O-(cloroacetil-carbonil)-fumagillol, talidomida, angiostatina, troponina-1, o un anticuerpo frente VEGF.

14. Composición según la reivindicación 7, que comprende además un inhibidor de proteosomas, un inhibidor de la aurora quinasa, un inhibidor de la Raf quinasa, un inhibidor de la serina/treonina quinasa, o un inhibidor de otra cinesina mitótica que no es KSP.

15. Composición según la reivindicación 12, en la que el segundo compuesto es un modulador de receptores de estrógenos seleccionado de tamoxifeno y raloxifeno.

16. Combinación de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, con radioterapia para tratar el cáncer.

17. Combinación de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, con un compuesto seleccionado de:

1): un modulador de receptores de estrógenos,

2): un modulador de receptores de andrógenos,

3): un modulador de receptores de retinoides,

4): un agente citotóxico/citostático,

5): un agente antiproliferativo,

6): un inhibidor de la proteína preniltransferasa,

7): un inhibidor de la HMG-CoA reductasa,

8): un inhibidor de la VIH proteasa,

9): un inhibidor de la transcriptasa inversa,

10): un inhibidor de la angiogénesis,

11): agonistas de PPAR-\gamma,

12): agonistas de PPAR-\delta,

13): un inhibidor de resistencia a múltiples fármacos inherente,

14): un agente antiemético,

15): un agente útil en el tratamiento de anemia,

16): un agente útil en el tratamiento de neutropenia,

17): un fármaco potenciador inmunológico,

19): un agente que interfiere con un control de ciclo celular.

para tratar o prevenir el cáncer.

18. Una combinación de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, con radioterapia y un compuesto seleccionado de

1): un modulador de receptores de estrógenos,

2): un modulador de receptores de andrógenos,

3): un modulador de receptores de retinoides,

4): un agente citotóxico/citostático,

5): un agente antiproliferativo,

6): un inhibidor de la proteína preniltransferasa,

7): un inhibidor de la HMG-CoA reductasa,

8): un inhibidor de la VIH proteasa,

9): un inhibidor de la transcriptasa inversa,

10): un inhibidor de la angiogénesis,

11): agonistas de PPAR-\gamma,

12): agonistas de PPAR-\delta,

13): un inhibidor de resistencia a múltiples fármacos inherente,

14): un agente antiemético,

15): un agente útil en el tratamiento de anemia,

16): un agente útil en el tratamiento de neutropenia,

17): un fármaco potenciador inmunológico,

19): un agente que interfiere con un control de ciclo celular.

para tratar el cáncer.

19. Una combinación de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, y paclitaxel, trastuzumab, un antagonista de GPIIb/IIIa, un inhibidor de COX-2, un inhibidor de proteosomas, un inhibidor de la aurora quinasa, un inhibidor de la Raf quinasa, un inhibidor de la serina/treonina quinasa o un inhibidor de una cinesina mitótica que no es KSP para tratar o prevenir el cáncer.