ES2269156T3 - Compuestos de heteroarilidenil-3-indolinona para modular la actividad de proteina-quinasas y para el uso en quimioterapia del cancer. - Google Patents

Abstract

Uso de (a) cantidades terapéuticamente eficaces por lo menos de dos agentes elegidos entre el grupo formado por los inhibidores de la topoisomerasa I, los agentes quimioterapéuticos, la leucovorina y las combinaciones de los mismos, con la condición de que el agente quimioterapéutico no sea el paclitaxel; y (b) una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la siguiente estructura química: en la que: R1 es H o alquilo; R2 es O o S; R3 es hidrógeno; R4, R5, R6 y R7 con independencia entre sí se eligen entre el grupo formado por hidrógeno, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, alcarilo, alcariloxi, halógeno, trihalometilo, S(O)R, SO2NRR'', SO3R, SR, NO2, NRR'', OH, CN, C(O)R, OC(O)R, (CH2)nCO2R y CONRR''; A es un anillo heteroarilo de cinco eslabones, elegido entre el grupo formado por tiofeno, pirrol, pirazol, imidazol, 1, 2, 3-triazol, 1, 2, 4-triazol, oxazol, isoxazol, tiazol, iso- tiazol, 2-sulfinilfurano, 4-alquilfurano, 1, 2, 3-oxadiazol, 1, 2, 4-oxatriazol, 1, 2, 3-tiadiazol,1, 2, 4-tiadiazol, 1, 2, 5- tiadiazol, 1, 3, 4-tiadiazol, 1, 2, 3, 4-tiatriazol, 1, 2, 3, 5-tia- triazol y tetrazol, opcionalmente sustituidos en una o en varias posiciones por alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, alcarilo, alcariloxi, halógeno, trihalometilo, S(O)R, SO2NRR'', SO3R, SR, NO2, NRR'', OH, CN, C(O)R, OC(O)R, (CH2)nCO2R o CONRR''; n es un número de 0 a 3 y R y R'' con independencia entre sí se eligen entre el grupo formado por alquilo y arilo; o una sal o un profármaco fisiológicamente aceptable del mis- mo para la fabricación de un medicamento destinado al trata- miento del cáncer.

Description

Compuestos de heteroarilidenil-2-indolinona para modular la actividad de proteína-quinasas y para el uso en quimioterapia del cáncer.

La presente invención se refiere en general a la química, bioquímica, farmacología, medicina y tratamiento del cáncer. Se refiere más en particular a compuestos de 3-heteroarilidenil-2-indolinona que modulan la actividad de proteína-quinasas (PK) y a métodos para utilizarlos en el tratamiento de trastornos relacionados con una actividad anormal de las proteína-quinasas, incluido el cáncer, para lo cual se emplean combinaciones de estos compuestos con otros agentes quimioterapéuticos.

Antecedentes de la invención

Lo que sigue se facilita meramente a título de información de antecedentes y no pretende ser ni describir exhaustivamente la técnica anterior a la presente invención.

Las PK son enzimas que catalizan la fosforilación de los grupos hidroxi de los restos tirosina, serina y treonina de las proteínas. Las consecuencias de esta actividad aparentemente simple son el escalonamiento, el crecimiento, diferenciación y proliferación celulares, es decir, virtualmente todos los aspectos de la vida celular, de una forma u otra, dependen de la actividad de las PK. Además, la actividad anormal de las PK se ha relacionado con un gran número de trastornos, que van desde las enfermedades que no implican una amenaza para la vida, como es la psoriasis, hasta las enfermedades virulentas, como pueda ser el glioblastoma (cáncer cerebral).

Las PK pueden subdividirse de modo conveniente en dos grupos, las proteína-tirosina-quinasas (PTK) y las serina-treonina-quinasas (STK).

Uno de los principales aspectos de la actividad de las PK es su implicación en los receptores de factor de crecimiento. Los receptores de factor de crecimiento son proteínas de superficie celular. Cuando se fijan a un ligando de factor de crecimiento, los receptores de factor de crecimiento se convierten en la forma activa que interacciona con proteínas de la superficie interna de una membrana celular. Esto conduce a la fosforilación de los restos tirosina del receptor así como de otras proteínas y, dentro de la célula, a la formación de complejo con una gran variedad de moléculas de señalización citoplásmica. Estos complejos afectan, a su vez, a numerosas respuestas celulares, por ejemplo la división (proliferación) celular, la diferenciación celular, el crecimiento celular, la expresión de efectos metabólicos en el microentorno extracelular, etc. Para una descripción más completa, véase Schlessinger y Ullrich en Neuron 9, 303-391, 1992.

Los receptores de factor de crecimiento que tienen actividad en las PK se conocen como tirosina-quinasas de receptor (RTK). Forman un amplio grupo de receptores transmembrana con actividades biológicas diversas. Hasta el presente se han identificado por lo menos diecinueve (19) subgrupos distintos de RTK. Un ejemplo de ellos es el subgrupo llamado RTK "HER", que incluye al EGFR (receptor de factor de crecimiento epitelial), HER2, HER3 y HER4. Estos RTK constan de un dominio de fijación de ligando glucosilado extracelular, un dominio transmembrana y un dominio catalítico citoplásmico intracelular, que puede fosforilar restos tirosina de proteínas.

Otro subgrupo de RTK abarca al receptor de la insulina (IR), el receptor de factor de crecimiento I similar a la insulina (IGF-1R) y un receptor afín al receptor de la insulina (IRR). El IR y el IRR interaccionan con la insulina, el IGF-I y el IGF-II, para formar un heterotetrámero compuesto por dos subunidades \alpha glucosiladas totalmente extracelulares y dos subunidades \beta, que atraviesan la membrana celular y que contienen el dominio tirosina-quinasa.

Un tercer subgrupo de RTK se denomina grupo de receptor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFR) e incluye al PDGFR\alpha, PDGFR\beta, CSFIR, c-kit y c-fms. Estos receptores constan de bucles de tipo inmunoglobina y de un dominio intracelular, en el que el dominio tirosina-quinasa está interrumpido por secuencias de aminoácidos no afines.

Otro grupo, que por su afinidad con el subgrupo PDGFR, se incluye a veces en el último subgrupo, es el subgrupo de receptor de quinasa de hígado fetal (flk). Se cree que este grupo se compone de un receptor de dominio de inserción de quinasa y una quinasa de hígado fetal 1 (KDR/FLK-1 (VEGFR-2)), flk-1R, flk-4 y tirosina-quinasa similar a fms (flt-1).

Otro componente del grupo de receptores de factores de crecimiento de tirosina-quinasa es el grupo de receptores de factor de crecimiento de fibroblasto (FGF). Este grupo consta de cuatro receptores, FGFR1-FGFR4, y siete ligandos, FGF1-FGF7. Aunque todavía no se han caracterizado bien, parece que los receptores constan además de un dominio extracelular glucosilado que contiene un número variable de bucles de tipo inmunoglobulina y un dominio intracelular, en el que la secuencia PTK está interrumpida por regiones de secuencias de aminoácidos no afines.

Un listado más completo de los subgrupos RTK conocidos se describe en Plowman y col., DN&P 7(6), 334-339, 1994.

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Además de las RTK existe también un grupo de PTK completamente intracelulares, llamadas "tirosina-quinasas de no receptor" o "tirosina-quinasas celulares". Este último nombre, abreviado por CTK, es el que se empleará aquí. Las CTK no contienen dominios extracelulares ni transmembrana. Hasta el presente se han identificado más de 24 CTK en 11 subgrupos (Src, Frk, Btk, Csk, Abl, Zap70, Fes, Fps, Fak, Jak y Ack). El grupo Src parece ser el más amplio entre las CTK e incluye el Src, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr e Yrk. Para una descripción más detallada de las CTK véase Bolen, Oncogene 8, 2025-2031, 1993.

Al igual que las CTK, las serina-treonina-quinasas o STK son predominantemente intracelulares, a pesar de haber pocas quinasas receptoras del tipo STK. Las STK son las quinasas citosólicas más frecuentes; es decir, quinasas que realizan su función en aquella parte del citoplasma que es distinta de los orgánulos citoplasmáticos y del citoesqueleto. El citosol es la región dentro de la célula en la que tiene lugar la mayor parte de la actividad biosintética y metabólica intermedia de la célula; es decir, en el citosol tiene lugar la síntesis de proteínas de los ribosomas.

Las RTK, las CTK y las STK intervienen en una gran variedad de estados patogénicos, incluido un gran número de cánceres diversos. Otros estados patológicos, que se han asociados con las PTK incluyen pero no se limitan a ellas: la psoriasis, la cirrosis hepática, la diabetes, la aterosclerosis, la angiogénesis, la restenosis, las enfermedades oculares, la artritis reumatoide y otros trastornos inflamatorios, las enfermedades autoinmunes y una gran variedad de trastornos renales.

En lo que respecta al cáncer existen dos hipótesis principales, que se han propuesto para explicar la proliferación celular excesiva que conduce al desarrollo de tumores y se refieren a funciones conocidas como funciones reguladas por las PK. Es decir, se ha sugerido que el crecimiento celular maligno resulta del colapso del mecanismo que controla la división y/o diferenciación celular. Se ha constatado que los productos proteicos de un gran número de proto-oncogenes intervienen en los mecanismos de transducción de señales que regulan el crecimiento y la diferenciación celulares. Estos productos proteicos de los proto-oncogenes incluyen los factores de crecimiento extracelular, los receptores PTK de factor de crecimiento transmembrana (RTK), las PTK citoplasmáticas (CTK) y las STK citosólicas, ya aludidas antes.

El cáncer continúa siendo una de las principales causas de muerte de los seres humanos. La mayor parte de los cánceres son cánceres de tumores sólidos, por ejemplo pero sin limitarse a ellos: el cáncer de ovarios, el cáncer colorrectal, el cáncer de cerebro, el cáncer de hígado, el cáncer de riñón, el cáncer de estómago, el cáncer de próstata, el cáncer de pulmón, el cáncer de tiroides, el sarcoma de Kaposi y el cáncer de piel. Entre los cánceres de tumores sólidos, el cáncer colorrectal es un tumor maligno especialmente frecuente; el adenocarcinoma del intestino grueso afecta a una de cada 20 personas de Estados Unidos y de la mayor parte de naciones del mundo occidental. En Estados Unidos, el cáncer colorrectal supone aproximadamente el 15% de los cánceres de diagnóstico reciente. El cáncer colorrectal es la tercera causa principal de muerte relacionada con el cáncer, por lo cual el pronóstico y la superación dependen en gran manera del estadio en el que se encuentra la enfermedad en el momento del diagnóstico. Si el diagnóstico se realiza en un estadio temprano, el cáncer colorrectal será curable en buena medida si se aplica un régimen de tratamiento multidisciplinario. Sin embargo, del 20 al 25% de los pacientes diagnosticados de padecer tal enfermedad ya presentan metástasis o desarrollarán enfermedades localmente recurrentes o metastásicas; es probable que la mayoría de estos pacientes acaben muriendo por causa de esta
enfermedad.

Los modos primarios de tratamiento de cánceres de tumores sólidos, incluido el cáncer colorrectal, son la cirugía, la terapia radiológica y la quimioterapia, a título individual o combinadas.

Aunque la formación inicial y el crecimiento de los tumores no requiera una nueva formación de vasos sanguíneos, cualquier progreso ulterior requerirá una neovascularización. Es decir, para que los tumores puedan crecer hasta un volumen superior a los 3-4 mm^{3} tendrán que formarse nuevos vasos sanguíneos; es decir, tendrá que haber una angiogénesis, la ramificación de nuevos capilares a partir de los vasos sanguíneos existentes. De hecho, los análisis inmunohistoquímicos de las secciones de tumores desde los márgenes de tumores en crecimiento presentan una preponderancia de vasos sanguíneos, con independencia del tipo de tumor. Para llevar a cabo esta neovascularización, las células tumorales hipotóxicas liberan factores angiogénicos que migran a las células epiteliales del vaso sanguíneo continuo, activando estas células de modo que sufran cambios morfológicos, para que se desplacen y se dividan. Los tumores que carecen de riego sanguíneo adecuado se convierten en necróticos (Brem, S. y col., Cancer Res. 36, 2807-12, 1976) y/o apoptóticos (Holmgren, L. y col., Nature Med. 1, 149-53, 1995; Parangi, S. y col., Cancer Res. 55, 6071-6, 1995), mientras que los tumores, que han provocado una neovascularización, no solo pueden iniciar una etapa de franca expansión, sino que despliegan además un mayor potencial metastásico. Como confirmación de la importancia de la angiogénesis en tumores humanos, los estudios recientes sobre el fenotipo angiogénico y la supervivencia de las personas han puesto de manifiesto que el número de microvasos en el caso de un tumor primario tiene la importancia de un pronóstico para el carcinoma de mama (Gasparini, G. y Harris, A.L., J. Clin. Oncol. 13, 765-82, 1995; Toi, M. y col., Japan. J. Cancer Res. 85, 1045-9, 1994), carcinomas de vejiga (Dickinson, A.J. y col., Br. J. Urol. 74, 762-6, 1994), carcinomas de colon (Ellis, L.M. y col., Surgery 120(5), 871-8, 1996) y tumores de la cavidad bucal (Williams, J.K. y col., Am. J. Surg. 168, 373-80, 1994). La angiogénesis puede desempeñar también un papel en el crecimiento de los neoplasmas hematopoyéticos y el mieloma múltiple (Bellamy, W.T. y col., Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., resumen nº 2566, 1998).

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Actualmente se cree que el mediador central de la angiogénesis de tumores malignos es el mitógeno endotelial, el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). El VEGF es mitógeno para muchos tipos de células endoteliales de vasos pequeños y grandes. Induce la producción de factores tisulares (tissue factors), colagenasa y activadores e inhibidores de plasminógeno. Algunas veces se denomina al VEGF como "factor de permeabilidad vascular" en virtud de sus efectos que mejoran la permeabilidad (Landriscina, M. y col., Brit. J. Cancer 78(6), 765-770, 1998). De hecho, la potencia de factor de permeabilidad vascular del VEGF es unas 50.000 veces mayor que la de la histamina, que es una molécula bien conocida de permeabilización vascular (Dvorak, H.F. y col., Am. J. Path. 146, 1029-39, 1995). Esta mayor permeabilidad se traduce en un trasvase de moléculas al exterior, por ejemplo el fibrógeno de la circulación, lo cual proporciona una malla o sustrato de gel de fibrina para la migración y organización de las células endoteliales así como de células tumorales (Kurmar, H. y col., Clin. Cancer Res. 4, 1279-85, 1998). Se ha demostrado "in vitro" la expresión del VEGF en un gran número de líneas celulares cancerosas humanas y quirúrgicamente en tumores reseccionados del tracto gastrointestinal, ovarios, cerebro, mama y riñón (Thomas, K.A., J. Biol. Chem. 271, 603-6, 1996).

Se considera también el VEGF muy asociado con el desarrollo del cáncer colorrectal; es decir, se han encontrado niveles altos de VEGF en tejidos tumorales de pacientes afectados de cáncer colorrectal. De hecho se ha observado una gran correlación entre los aumentos de VEGF y el estadio y la profundidad alcanzada por la invasión en la célula intestinal (C. Barone y col., Brit. J. Cancer 78(6), 765-70, 1998). Es consistente con este resultado el hallazgo de que niveles de VEGF en suero guardan una relación significativa con el estadio de Duke y los niveles de antígeno carcinoembriótico y de que los pacientes con metástasis hepática y/o en nódulos linfáticos tienden a presentar niveles de VEGF más altos en suero que los pacientes que no han tenido tales metástasis (Fujisaki, K. y col., Am. J. Gastroenterology 93(2), 249-52, 1998).

Dada la necesidad de neovascularización para el crecimiento de tumores sólidos y el rol del VEGF como uno de los mediadores más importantes de la angiogénesis, en especial en el caso del cáncer colorrectal, los compuestos capaces de inhibir el efecto angiogénico del VEGF se espera que retarden el efecto rebote observado en el caso del tratamiento del cáncer colorrectal con fluoruracilo y por ello aumenten la eficacia quimioterapéutica del fluoruracilo, con o sin leucovorina. Otra ventaja adicional de tal método puede ser que el uso de un inhibidor angiogénico, que reduzca la capacidad de un tumor de desarrollar nuevos vasos sanguíneos y por tanto que sea más citostático que citotóxico, pueda satisfacer la demanda de la quimioterapia citotóxica estándar; es decir, que utilice diferentes mecanismos de acción para aumentar la eficacia del agente citotóxico, sin provocar toxicidad adicional.

Resumen de la invención

Nuestra búsqueda de moléculas orgánicas pequeñas, que modulen la transducción de señales mediada por la proteína-quinasa, ha desembocado en el descubrimiento de las 3-heteroarilidenil-2-indolinonas que modulan la actividad de las proteína-quinasas (PK), por ejemplo de las tirosina-quinasas de receptor (RTK), las tirosina-quinasas celulares (CTK) y las serina-treonina-tirosina-quinasas (STK). Las RTK incluyen, entre otras, a la Flk-1, Flt-1, Tie-1 y Tie-2, todas ellas tienen una expresión restringida a las células endoteliales. En lo que respecta a la presente invención es de una importancia particular el hecho de que se cree que la Flk-1 desempeña un papel muy importante en la angiogénesis y que este papel está mediado por el VEGF. Esto sugiere que las 3-heteroarilidenil-2-indolinonas serían capaces de inhibir la vascularización mediada por el VEGF y, de este modo, el crecimiento de tumores durante el período, en el que no se administra al paciente ningún agente quimioterapéutico, por ejemplo y sin limitación, una pirimidina fluorada, y por lo tanto aumentarían la eficacia del agente quimioterapéutico.

Por consiguiente, en un aspecto, la presente invención se refiere al uso de: (a) una cantidad o cantidades terapéuticamente eficaces de por lo menos dos agentes, elegidos entre el grupo formado por los inhibidores de la topoisomerasa 1, la leucovorina y combinaciones de los mismos, con la condición de que el agente quimioterapéutico no sea el paclitaxel; y (b) una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que se ajusta a la siguiente estructura
química:

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en la que

R_{1} es H o alquilo;

R_{2} es O o S;

R_{3} es hidrógeno;

R_{4}, R_{5}, R_{6} y R_{7} con independencia entre sí se eligen entre el grupo formado por hidrógeno, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, alcarilo, alcariloxi, halógeno, trihalometilo, S(O)R, SO_{2}NRR', SO_{3}R, SR, NO_{2}, NRR', OH, CN, C(O)R, OC(O)R, (CH_{2})_{n}CO_{2}R y CONRR';

A es un anillo heteroarilo de cinco eslabones, elegido entre el grupo formado por tiofeno, pirrol, pirazol, imidazol, 1,2,3-triazol, 1,2,4-triazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, 2-sulfinilfurano, 4-alquilfurano, 1,2,3-oxadiazol, 1,2,4-oxatriazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,4-tiadiazol, 1,2,5-tiadiazol, 1,3,4-tiadiazol, 1,2,3,4-tiatriazol, 1,2,3,5-tiatriazol y tetrazol, opcionalmente sustituidos en una o en varias posiciones por alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, alcarilo, alcariloxi, halógeno, trihalometilo, S(O)R, SO_{2}NRR', SO_{3}R, SR, NO_{2}, NRR', OH, CN, C(O)R, OC(O)R, (CH_{2})_{n}CO_{2}R o CONRR';

n es un número de 0 a 3 y

R y R' con independencia entre sí se eligen entre el grupo formado por alquilo y arilo;

o una sal o un profármaco fisiológicamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer.

"Alquilo" significa un hidrocarburo alifático saturado de cadena lineal, ramificada o cíclica. El grupo alquilo tiene con preferencia de 1 a 12 carbonos. Con mayor preferencia tiene de 1 a 7 carbonos y con preferencia especial es un alquilo inferior que tiene de 1 a 4 carbonos. Los grupos alquilo típicos incluyen al metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, tert-butilo, pentilo, hexilo y similares. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos por uno o varios sustituyentes, elegidos entre el grupo formado por hidroxilo, -C(O)OR, ciano, alcoxi sin sustituir, =O, =S, NO_{2}, halógeno, NRR' y SR.

"Alquenilo" significa un grupo alquilo que tiene por lo menos un doble enlace carbono-carbono.

"Alquinilo" indica un grupo alquilo que tiene por lo menos un triple enlace carbono-carbono.

"Alcoxi" indica un grupo "-O-alquilo", en el que el grupo alquilo puede estar opcionalmente sustituido por uno o varios átomos de halógeno.

"Arilo" indica un grupo que tiene por lo menos una estructura de anillo aromático; es decir, un anillo que tiene un sistema de electrones pi conjugados y que incluye al arilo carbocíclico, al arilo heterocíclico y a los grupos biarilo. El grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido por uno o varios sustituyentes elegidos entre el grupo formado por halógeno, trihalometilo, hidroxilo, SR, nitro, ciano, alcoxi, alquilo y NRR'.

"Alcarilo" indica un alquilo que está unido mediante enlace covalente con un grupo arilo. El alquilo es con preferencia un alquilo inferior sin sustituir.

"Arilo carbocíclico" indica un grupo arilo, en el que los átomos que forman el anillo son átomos de carbono.

"Arilo heterocíclico" significa un grupo arilo que tiene de 1 a 3 heteroátomos como átomos del anillo, los demás átomos del anillo son carbonos. Los heteroátomos incluyen al oxígeno, azufre y nitrógeno. Este anillo puede tener cinco eslabones o seis eslabones. Los ejemplos de arilo heterocíclico incluyen al furanilo, tienilo, piridilo, pirrolilo, N-alquilpirrolilo, pirimidilo, pirazinilo, imidazolilo y similares.

"Amida" significa un grupo -C(O)NHR^{a}, en el que R^{a} es alquilo, arilo, alquilarilo o hidrógeno.

"Tioamida" significa un resto -C(S)NHR^{a}.

"Amino" significa un resto NRR', en el que tanto R como R' son hidrógeno.

"Tioéter" significa un resto -SR^{b}, en el que -SR^{b}, en el que R^{b} es alquilo, arilo o alquilarilo.

"Halógeno" significa flúor, cloro, bromo o yodo.

"Sufonilo" indica un resto -S(O)_{3}R^{c}, en el que R^{c} es arilo, -C(CN)=C-arilo, -CH_{2}CN, alquilarilo, -SO_{2}NRR', -NH(alquilo), -NH(alquilarilo) o -NH(arilo).

Los ejemplos de compuestos indolinona representativos y la síntesis de los mismos se describen en las solicitudes siguientes: (1) solicitud PCT número US99/06468, depositada con fecha 26 de marzo de 1999 por Fong y col. y titulada MÉTODOS PARA MODULAR LA TIROSINA-PROTEÍNA-QUINASA (Lyon & Lyon, docket número 231/250 PCT), (2) solicitud provisional U.S. nº 60/131,192, depositada con fecha 26 de abril de 1999 por Tang y col. y titulada COMPUESTOS DE DIARIL-INDOLINONA COMO INHIBIDORES DE QUINASAS (Lyon & Lyon, docket número 239/205), (3) solicitud provisional U.S. nº 60/132,243, depositada con fecha 3 de mayo de 1999 por Tang y col. y titulada SÍNTESIS DE COMPUESTOS OXINDOLES SUSTITUIDOS EN POSICIÓN 4 Y DE COMPUESTOS INDOLINONA Y SU UTILIZACIÓN EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES (Lyon & Lyon, docket número 231/251), (4) solicitud provisional U.S. nº 09/283,657, depositada con fecha 1 de abril de 1999 por Tang y col. y titulada MÉTODOS DE MODULAR LA FUNCIÓN DE LA TIROSINA-PROTEÍNA-QUINASA CON COMPUESTOS INDOLINONA (Lyon & Lyon, docket número 241/180) y (5) patente U.S. nº 5 792 783, publicada con fecha 11 de agosto de 1998 por Tang y col. y titulada COMPUESTOS 3-HETEROARIL-2-INDOLINONA PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES.

Las sales y los profármacos fisiológicamente aceptables de las 3-heteroarilidenil-2-indolinonas están también dentro del alcance de esta invención.

Una "sal fisiológicamente aceptable" indica una sal que no es nociva para el bienestar físico de un paciente, al que se administra. Las sales fisiológicamente aceptables, que pueden formar los compuestos de esta invención, incluyen las especies cargadas negativamente y las cargadas positivamente. Los ejemplos de sales, en las que el compuesto forma un resto cargado positivamente, incluyen sin limitarse a ellos las sales de amonio cuaternario (definidas en esta descripción) del tipo clorhidrato, sulfato, carbonato, lactato, tartrato, maleato, succinato, en las que el átomo de nitrógeno del grupo amonio cuaternario es un átomo de nitrógeno del compuesto elegido de esta invención, que ha reaccionado con un ácido apropiado. Las sales, en las que un compuesto de esta invención forma un resto cargado negativamente, incluyen pero no se limitan a: las sales sódica, potásica, cálcica y magnésica formadas por reacción de un resto ácido carboxílico de un compuesto con una base apropiada (p.ej. hidróxido sódico (NaOH), hidróxido potásico (KOH), hidróxido cálcico (Ca(OH)_{2}), etc.).

Tal como se emplea aquí, el término "amina cuaternaria" incluye un nitrógeno cuaternizado (p.ej. -NRR'R'', en el que R, R' y R'' con independencia entre sí se eligen entre H, arilo, alquilo y similares), un nitrógeno cuaternizado contenido en un arilo heterocíclico y similares.

Un "profármaco" indica un agente que se convierte "in vivo" en el fármaco original. Los profármacos son útiles a menudo porque, en ciertas condiciones, pueden ser más fáciles de administrar que el fármaco original. Por ejemplo, pueden ser biodisponibles por administración oral, mientras que el fármaco original no lo es. Los profármacos pueden tener además una mejor solubilidad en las composiciones farmacéuticas que el fármaco original. Por ejemplo, pero sin limitación, un profármaco puede ser un compuesto de la presente invención que se administre en forma de éster (el "profármaco") para facilitar el traspaso de la membrana celular, cuando la solubilidad en agua es un obstáculo para la movilidad, pero después se hidroliza metabólicamente en el ácido carboxílico, el compuesto activo, una vez se halla en el interior de la célula, donde la solubilidad en agua es beneficiosa. Otro ejemplo de profármaco puede ser un polipéptido corto, unido a un grupo carboxi, en el que dicha eliminación metabólica del grupo polipéptido libera de nuevo el compuesto activo.

Los compuestos 3-heteroarilidenil-2-indolinona de esta invención pueden existir en forma de los isómeros E (trans) o Z (cis) de una combinación de ambos. En las formas preferidas de ejecución de esta invención las 3-heteroarilidenil-2-indolinonas adoptan de modo predominante (más del 90%) la forma del isómero Z.

Se entiende por "inhibir" eliminar, reducir, contener, impedir, prevenir, disminuir, retardar y/o restringir. En una forma actualmente preferida de ejecución de esta invención, inhibir significa la inhibición de la angiogénesis o vasculogénesis.

Se entiende por actividad de "angiogénesis" la formación de nuevos vasos sanguíneos en un tejido.

Se entiende por "vasculogénesis" la proliferación de nuevos vasos sanguíneos en un tejido para formar un sistema vascular.

En otro aspecto, el compuesto 3-heteroarilidenil-2-indolinona de esta invención es la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 1).

En otro aspecto de esta invención la 3-heteroarilidenil-2-indolinona es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2).

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Otro aspecto de la invención es una 3-heteroarilidenil-2-indolinona elegida entre el grupo formado por la 5-hidroxi-3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 3), el ácido 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxílico (estructura 4), el 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxilato de metilo (estructura 5), la 3-(5-hidroximetil-3-metil-1H-pirrol-2-ilmetileno)-1,3-dihidroindol-2-ona (estructura (6) y el 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carbaldehído (estructura 7). Las sales y los profármacos fisiológicamente aceptables de los compuestos anteriores están dentro del alcance de esta invención.

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El término "método" indica las maneras, medios, técnicas y procedimientos para llevar a cabo una operación determinada e incluyen, pero sin limitarse a ellos, aquellas maneras, medios, técnicas y procedimientos conocidos o que los expertos en las ciencias química, farmacológica, biológica, bioquímica y médica pueden desarrollar fácilmente a partir de maneras, medios, técnicas y procedimientos ya conocidos.

En lo que respecta al cáncer, el término "tratamiento" significa simplemente que se dilatará la esperanza de vida de un individuo afectado por el cáncer, que se reducirán uno o varios síntomas de la enfermedad y/o efectos secundarios no deseados del tratamiento de la enfermedad y/o que se mejorará la calidad de vida.

Los cánceres que pueden tratarse con arreglo a los métodos de la invención incluyen el cáncer de mama, el cáncer gástrico, el cáncer de ovarios, el cáncer renal, el cáncer hepático, el cáncer pancreático, el cáncer de vejiga, el cáncer de tiroides, el cáncer de próstata, el cáncer colorrectal, los cánceres de tumores sólidos (p.ej. cáncer de ovarios, cáncer colorrectal, cáncer de cerebro, cáncer de hígado, cáncer de riñón, cáncer de estómago, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de tiroides, sarcoma de Kaposi, cáncer de páncreas, cáncer de pulmón no de células pequeñas y similares), cáncer de pulmón no de células pequeñas y similares. En un aspecto, el cáncer es un cáncer de tumor sólido.

Tal como se emplea aquí, "administrar" o "administración" significa la entrega de un compuesto, sal o profármaco de la presente invención o de una composición farmacéutica que contiene dicho compuesto, sal o profármaco de esta invención a un paciente con el fin de tratar el cáncer o de prevenir o tratar un trastorno relacionado con las PK.

La expresión "consiste en" empleada en relación con "administrar" significa que los fármacos que se están administrando con arreglo a la presente invención pueden administrarse en forma de combinación simple de un compuesto de 3-heteroarilidenil-2-indolinona, un agente quimioterapéutico y un fármaco adicional (p.ej. otros agentes quimioterapéuticos, leucovorina, inhibidores de topoisomerasa I y similares y las combinaciones idóneas de dos o más de los mismos, con la condición de que se excluya el paclitaxel), por ejemplo cuando el agente quimioterapéutico es una pirimidina fluorada, la leucovorina, de los que se sabe o se espera que proporcionen características beneficiosas adicionales a la combinación.

Un "paciente" significa cualquier organismo superior que es susceptible de sufrir un trastorno relacionados con las PK, incluido en particular el cáncer. "Paciente" significa con preferencia un mamífero, en especial un ser humano.

En general, una "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un agente o de un metabolito del mismo, que es eficaz para prevenir, aliviar, reducir o mejorar los síntomas de la enfermedad y/o los efectos secundarios no deseados atribuibles al tratamiento de la enfermedad con otro agente o su metabolito, o para prolongar la supervivencia del paciente tratado. Más en concreto, en referencia al tratamiento del cáncer, una cantidad terapéuticamente eficaz indica que dicha cantidad tiene el efecto de (1) reducir el tamaño de (o con preferencia de eliminar) el tumor; (2) inhibir (es decir, disminuir de alguna manera, con preferencia detener) la metástasis del tumor; (3) inhibir de alguna manera (es decir, disminuir de alguna manera, con preferencia detener) el crecimiento tumoral; y/o (4) aliviar de alguna manera (o con preferencia eliminar) uno o varios síntomas asociados con el cáncer y/o uno o varios efectos secundarios no deseados, atribuibles al tratamiento del cáncer con otro agente o su metabolito. A continuación se describen ejemplos no limitantes de cantidades terapéuticamente eficaces de agentes y compuestos concretos para el uso en la presente invención.

Además de la anterior definición general, se entiende por "cantidad terapéuticamente eficaz" de un agente (p.ej. un agente quimioterapéutico, un inhibidor de topoisomerasa I, leucovorina y similares) cualquier cantidad administrada de un modo cualquiera y en un régimen de tratamiento cualquiera que pueda estar actualmente reconocido en las ciencias médicas o que pueda resultar de los futuros desarrollos relativos al uso de estos agentes. En una forma de ejecución actualmente preferida de esta invención, el agente es un agente quimioterapéutico (p.ej. una pirimidina fluorada, en concreto el fluoruracilo) y los regímenes de tratamiento son los ya conocidos en la ciencia quimioterapéutica para la administración del agente quimioterapéutico (p.ej. el fluoruracilo).

Un "régimen de tratamiento" indica cantidades específicas de agentes quimioterapéuticos seleccionados (y, opcionalmente, otros agentes, por ejemplo el compuesto 3-heteroarilidenil-2-indolinona de esta invención), administrados en tiempos preestablecidos de un modo fijado a lo largo de un período de tiempo determinado.

Por ejemplo, sin limitación, un régimen frecuente de tratamiento de cáncer colorrectal con fluoruracilo/leucovorina consiste en administrar 425 mg/m^{2} (miligramos por metro cuadrado de superficie corporal, un modo de medir la dosificación del agente quimioterapéutico que los expertos en la materia conocen bien) de fluoruracilo más 20 mg/m^{2} de leucovorina (cantidades específicas de los agentes seleccionados) al día durante 5 días (tiempo preestablecido) mediante inyección intravenosa (modo preestablecido), repetido a intervalos de 4 - 5 semanas (período de tiempo preestablecido).

Cuando se habla de "tiempo preestablecido" de administración dentro de un régimen de tratamiento, los "días consecutivos" indican los días consecutivos del calendario, es decir, lunes, martes, miércoles, etc. Días "escalonados" significa días del calendario, entre los que se intercalan otros días de calendario, p.ej. sin limitación: lunes, miércoles, sábado, etc.

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Además, en lo referente a una "cantidad terapéuticamente eficaz de una 3-heteroarilidenil-2-indolinona", la frase se refiere a una cantidad del compuesto que es suficiente para inhibir el crecimiento, el tamaño y la vascularización; es decir, la angiogénesis y/o la vasculogénesis de tumores durante los períodos de "recuperación", es decir, los períodos del régimen de tratamiento en los que no se administra al paciente ningún otro agente quimioterapéutico.

En un aspecto, el agente contemplado para el uso en la invención contiene un inhibidor de topoisomerasa I. Los inhibidores de topoisomerasa I idóneos incluyen al irinotecan (es decir, la (4s)-4-11-dietil-4-hidroxi-9-[(4-piperidino-piperidino)carboniloxi]-1H-piranol[3',4':6,7]indolizinol[1,2-b]quinolina-3,14(4H,12H)diona) y similares, a sus sales fisiológicamente aceptables (p.ej. en el caso del irinotecan: el clorhidrato de irinotecan hidratado, producto comercial que lleva el nombre de CAMPTOSAR® de Pharmacia (Peapack, NJ)), sus profármacos y similares y a las combinaciones idóneas de dos o más de dichos compuestos. Los términos "irinotecan", "CAMPTOSAR®" y "CPT11" se utilizan aquí indistintamente.

En otro aspecto, el agente contemplado para el uso en la invención contiene por lo menos un agente quimioterapéutico. En una forma preferida, en esta invención se emplea un agente quimioterapéutico. En otra forma preferida de ejecución de la invención se emplean varios agentes quimioterapéuticos (p.ej. 2, 3, 4 ó más).

Un "agente quimioterapéutico" significa una sustancia química o un fármaco empleado para tratar una enfermedad; el término se aplica con frecuencia a sustancias o fármacos que se emplean primariamente para el tratamiento del cáncer. Los agentes quimioterapéuticos idóneos incluyen a la gemcitabina, la capecitabina, los agentes quimioterapéuticos de pirimidina fluorada, el carboplatino, el cisplatino, el oxaliplatino, el docetaxel, los taxanos poliglutamados, las talidomidas, el tamoxifeno (también conocido como 2-[4-(1,2-difenil-1-butenil)-fenoxi]-N,N-dimetil-,(Z)-,2-hidroxi-1,2,3-propanotricarboxilato (1:19 (DCl), leuprolida, angiostatinas (es decir, un grupo de proteínas y sus fragmentos funcionales, que sirven para inhibir la angiogénesis y/o la vasculogénesis, un componente del grupo se comercializa con el nombre de ANGIOSTATINA™ por EntreMed (Rockville, MD)), las endostatinas (es decir, un grupo de proteínas y sus fragmentos funcionales que sirven para inhibir la angiogénesis y/o la vasculogénesis, un componente del grupo se comercializa con el nombre de ENDOSTATINA™ por EntreMed (Rockville, MD)), los inhibidores de metal-proteasas de matriz (MMP), las interferonas, la doxorrubicina, la doxorrubicina liposómica, la danorrubicina, la metoxantrona, la estramucina, un alcaloide de la vinca, el 2-metoxiestradiol y similares y combinaciones adecuadas de dos o más de dichos compuestos. Los agentes quimioterapéuticos preferidos incluyen a los agentes quimioterapéuticos de pirimidina fluorada, el cisplatino y una combinación de cisplatino y gemcitabina.

En una forma preferida de ejecución, el agente quimioterapéutico es del tipo pirimidina fluorada. Los "agentes quimioterapéuticos de pirimidina fluorada" son bien conocidos de los expertos en la técnica quimioterapéutica; los ejemplos de agentes quimioterapéuticos de pirimidina fluorada que pueden utilizarse con los compuestos de esta invención incluyen, sin limitación, el carmofur, la doxifluridina, el fluoruracilo, la floxuridina, el tegafur, la capecitabina y el uracil-ftorafur (UFT).

En una forma de ejecución actualmente preferida de esta invención el agente quimioterapéutico de pirimidina fluorada es el fluoruracilo. Es también una forma de ejecución actualmente preferida de esta invención que, cuando el agente quimioterapéutico de pirimidina fluorada es el fluoruracilo, el agente que se emplea según la invención incluya también a la leucovorina.

En otra forma preferida de ejecución, el agente quimioterapéutico es el cisplatino.

En otra forma preferida de ejecución, el agente quimioterapéutico es una combinación de cisplatino y gemcitabina.

En otro aspecto el agente contemplado para el uso en la presente invención incluye a la leucovorina.

En otro aspecto de esta invención, la 3-heteroarilidenil-2-indolinona empleada para tratar el cáncer en combinación con otros agentes quimioterapéuticos se elige con preferencia entre el grupo formado por la 5-hidroxi-3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 3), el ácido 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxílico (estructura 4), el 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxilato de metilo (estructura 5), la 3-(5-hidroximetil-3-metil-1H-pirrol-2-ilmetileno)-1,3-dihidroindol-2-ona (estructura (6) y el 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carbaldehído (estructura 7).

En otro aspecto de esta invención, el compuesto 3-heteroarilidenil-2-indolinona empleada para tratar el cáncer en combinación con agentes quimioterapéuticos es con preferencia la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 1).

En otro aspecto de esta invención, el compuesto 3-heteroarilidenil-2-indolinona empleada para tratar el cáncer en combinación con agentes quimioterapéuticos es con preferencia la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2).

Aunque dentro del alcance de la presente invención se contemplan todas las permutaciones de uno o varios componentes específicos para el uso en esta invención, en un aspecto de la invención son preferidas las siguientes combinaciones de agentes anticancerosos específicos y de compuestos específicos.

En un aspecto preferido, el cáncer a tratar con arreglo a esta invención es el cáncer colorrectal. En una forma de ejecución, el agente contemplado para el uso en la invención contiene un inhibidor de topoisomerasa I (p.ej. irinotecan y similares), un agente quimioterapéutico (p.ej. fluoruracilo y similares) y opcionalmente la leucovorina y el compuesto contemplado para el uso en la invención contiene a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

En otro aspecto, el cáncer a tratar con arreglo a esta invención es un tumor sólido. En una forma de ejecución, el agente contemplado para el uso en esta invención contiene un inhibidor de topoisomerasa I (p.ej. irinotecan y similares) y un agente quimioterapéutico (p.ej. cisplatino y similares) y el compuesto contemplado para el uso en esta invención es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

En otro aspecto preferido, el cáncer a tratar con arreglo a esta invención es un cáncer de tumor sólido y/o el cáncer colorrectal. En una forma de ejecución, el agente contemplado para el uso en esta invención incluye un inhibidor de topoisomerasa I (p.ej. el irinotecan y similares) y el compuesto contemplado para el uso en esta invención contiene a la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 1) y la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2).

En un aspecto adicional, el cáncer a tratar según la invención es un cáncer de pulmón de células no pequeñas. En una forma de ejecución, el agente contemplado para el uso en esta invención contiene cantidades terapéuticamente eficaces de un inhibidor de topoisomerasa I (p.ej. irinotecan y similares) y un agente quimioterapéutico (p.ej. cisplatino y similares) y un compuesto contemplado para el uso en esta invención incluye a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

En un aspecto adicional, el cáncer a tratar según la invención es un cáncer de pulmón de células no pequeñas. En una forma de ejecución, el agente contemplado para el uso en esta invención contiene cantidades terapéuticamente eficaces de un agente quimioterapéutico (p.ej. una combinación de carboplatino y paclitaxel y similares) y el compuesto contemplado para el uso en esta invención incluye a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

En un aspecto adicional, el cáncer a tratar según la invención es un cáncer de tumor sólido. En un aspecto, el cáncer de tumor sólido es un cáncer pancreático o un cáncer de pulmón de células no pequeñas. En una forma de ejecución, el agente contemplado para el uso en esta invención contiene cantidades terapéuticamente eficaces de un agente quimioterapéutico (p.ej. una combinación de cisplatino y gemcitabina y similares) y el compuesto contemplado para el uso en esta invención incluye a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

Otro aspecto de esta invención consiste en el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de fluoruracilo y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, elegido entre el grupo formado por la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona y la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer. En una forma preferida de ejecución, el cáncer es un cáncer colorrectal. En otro aspecto de esta invención, el uso recién mencionado incluye la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de la leucovorina.

Otro aspecto de la invención es el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona y una cantidad terapéuticamente eficaz de gemcitabina, otro compuesto de fluorpirimidina para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer. La gemcitabina ha mostrado una eficacia especialmente buena para el tratamiento del cáncer pancreático avanzado. Además, en combinación con otros agentes quimioterapéuticos, p.ej. el paclitaxel, el carboplatino, el cisplatino, la doxorrubicina (en particular la doxorrubicina liposómica) y el topotecan, la gemcitabina presenta una actividad sustancial contra otros cánceres refractarios de tumor sólido, incluidos el cáncer de ovarios avanzado, el cáncer de pulmón de células pequeñas y el cáncer de riñón. La combinación de la gemcitabina con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, sola o combinada a su vez con agentes quimioterapéuticos adicionales, como los recién mencionados, podría proporcionar la capacidad de inhibir tumores sólidos sin incrementar la toxicidad, por razones debatidas con ocasión de la fluorpirimidinas en general.

Las combinaciones de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con análogos de nucleósidos, distintos de la gemcitabina, se hallan también contempladas dentro de la presente invención.

Otro análogo de pirimidina que puede dar efectos beneficiosos, cuando se combina con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, es la capecitabina, que se ha mostrado eficaz contra el cáncer de mama metastásico, tal combinación es otro aspecto de esta invención.

Además es también un aspecto de esta invención la combinación quimioterapéutica de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona ya sea con agentes quimioterapéuticos de pirimidina, el 5-FU o el UFT o derivados, análogos o agentes afines a los mismos.

Otro aspecto de la invención es la combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con carboplatino, oxaliplatino, cisplatino o agentes quimioterapéuticos afines (p.ej. gemcitabina y similares). Actualmente, el carboplatino y el cisplatino son fármacos preeminentes para el tratamiento de cáncer avanzado de ovarios, mientras que el oxaliplatino es ante todo un agente quimioterapéutico para el cáncer colorrectal metastásico. El uso de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en combinación con el carboplatino o el cisplatino puede permitir una reducción de la cantidad de estos dos agentes quimioterapéuticos, muy tóxicos, necesarios para tratar el cáncer. Una combinación quimioterapéutica actualmente preferida consta de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, el cisplatino y la gemcitabina.

Otro aspecto de esta invención es la combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con el docetaxel o con taxanos poliglutamados. El docetaxel trabaja según un mecanismo de acción diferente al de los compuestos de esta invención, es decir, bloquea la capacidad de una célula de romper el huso mitótico durante la mitosis. Por lo tanto, este fármaco y su especial modo de acción, si se combina con la actividad anti-angiogénica de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, podría dar lugar a una potente combinación tumoricida/tumoristática.

Otro aspecto más de este invención es la combinación de la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 1) o de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) con el CPT11 (irinotecan), un derivado de la campotecina que es un inhibidor de la topoisomerasa I y que se ha mostrado eficaz contra el cáncer colorrectal. En una forma preferida de ejecución de la presente invención se combina la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 1) con el CPT11 (irinotecan). En otra forma preferida de ejecución de la presente invención se combina la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) con el CPT11 (irinotecan). Están también contempladas en esta invención las terapias de combinación con agentes quimioterapéuticos afines al CPT11. Una vez más, la combinación de los modos de acción puede proporcionar un beneficioso sustancial para el tratamiento de esta forma de cáncer.

Otro aspecto más de esta invención es la combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con la talidomida, que presenta un efecto quimioterapéutico sustancial, particularmente útil contra mielomas refractarios pero también contra el glioblastoma multiforme, un cáncer cerebral extremadamente virulento. Otro tipo de cáncer que puede responder a esta combinación es el cáncer de próstata, de mama y de piel (sarcoma de Kaposi).

Un aspecto de esta invención es una combinación quimioterapéutica de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con inhibidores de la ciclooxigenasa-2 (COX-2). La inhibición de la COX-2 impide la producción de factores que disparan la angiogénesis. La combinación podría proporcionar dos vías de ataque a la vascularización, que es esencial para la vitalidad de las células cancerosas.

Un aspecto de esta invención es una terapia de combinación que consta de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona y tamoxifeno o derivados del mismo. El tamoxifeno interfiere en la actividad del estrógeno que, según se ha constatado, favorece el crecimiento de las células del cáncer de mama. La combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona y un compuesto anti-angiogénico con este compuesto "anti-estrógeno" podría proporcionar un potente tratamiento adicional del cáncer de mama.

Otro aspecto de esta invención es la combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con leuprolida, un análogo de nonapéptido sintético, de origen natural, contra el cáncer testicular, pero también contra el cáncer de ovarios y el cáncer de mama. En esta invención se contempla también la terapia de combinación empleando agentes afines a la leuprolida. Una vez más se podría obtener un beneficioso sustancial combinando los dos compuestos de modos de acción diferentes.

Es igualmente un aspecto de la invención la combinación quimioterapéutica de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con angiostatinas, endostatinas o agentes quimioterapéuticos similares, que inhiben la angiogénesis por apóptosis. La apóptosis es la muerte celular programada. La combinación de la destrucción celular anti-angiogénesis con la estasis celular anti-angiogénesis podría ser una potente combinación terapéutica.

Se contempla además en la invención una combinación quimioterapéutica de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con un inhibidor de metal-proteasa de matriz (MMP). Se ha constatado que las MMP intervienen en muchos estados patológicos, incluido el cáncer. Los inhibidores de las MMP, por ejemplo pero sin limitación el AG3340, están mostrando eficacia tumoristática contra los cánceres de tumor sólido, por ejemplo el cáncer de pulmón de células no pequeñas y el cáncer de próstata refractario a las hormonas. La adición de un inhibidor de angiogénesis podría proporcionar una combinación sinergética.

Otro aspecto de la invención es la combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con una interferona. La interferona alfa y varios subtipos de la misma (p.ej. sin limitación, las interferonas alfa A/2a, alfa/2b, alfa B2/alfa 8) son agentes quimioterapéuticos bien establecidos contra cánceres de este tipo, por ejemplo la leucemia de células pilosas, la leucemia mieloide crónica, el cáncer de riñón, el melanoma, los linfomas de baja intensidad, el mieloma múltiple y el sarcoma de Kaposi.

Otro aspecto de esta invención es la combinación quimioterapéutica de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con la doxorrubicina y otros antibióticos antineoplásicos de antraciclina, así como derivados y formulaciones de los mismos, como es, sin limitación, la doxorrubicina liposómica. La doxorrubicina se emplea a menudo para el tratamiento de linfomas malignos, leucemias, cáncer de células escamosas de la cabeza y del cuello, cáncer de mama y cáncer de tiroides. La doxorrubicina liposómica se ha aprobado para el tratamiento del sarcoma de Kaposi. Las células tumorales debilitadas por la actividad anti-angiogénica de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona podrían ser mucho más sensibles a la doxorrubicina. En esta invención se contempla específicamente la terapia de combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con la metoxantrona, un agente quimioterapéutico afín.

Otra combinación quimioterapéutica que es otro aspecto de esta invención es la combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con estramustina y agentes quimioterapéuticos afines a la misma, que ha mostrado un utilidad particular para el tratamiento del cáncer refractario de próstata. La estramustina provoca la muerte celular interfiriendo en la síntesis del DNA. Una vez más, la combinación de diferentes modos de acción, el desbaratamiento de la síntesis del DNA y la anti-angiogénesis podría proporcionar una combinación quimioterapéutica útil.

Está también contemplada por la presente invención la terapia de combinación empleando la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona y alcaloides de la vinca, incluyendo pero sin limitarse a ellos: la vincristina y la vinblastina.

Un aspecto adicional de la invención proporciona combinaciones para el tratamiento del cáncer, dichas combinaciones constan de (a) cantidades terapéuticamente eficaces por lo menos de dos agentes seleccionados entre el grupo formado por los inhibidores de la topoisomerasa I, los agentes quimioterapéuticos, la leucovorina y las combinaciones de los mismos, con la condición de que el agente quimioterapéutico no sea el paclitaxel; y (b) una cantidad terapéuticamente eficaz de una 3-heteroarilidenil-2-indolinona, dicha 3-heteroarilidenil-2-indolinona tiene la siguiente estructura química:

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en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y A tienen los mismos significados que se han definido anteriormente.

Tal como se emplea aquí, el termino "combinación" incluye, entre otros significados, la formada poniendo en contacto uno o varios elementos nombrados ya sea espacialmente (p.ej. en un envase, en una forma de dosis unitaria y similares), ya sea temporalmente (p.ej. de forma cronológica (es decir, mediante la administración sucesiva y similares) y similares.

En otro aspecto, esta invención se refiere al uso de una combinación para tratar o prevenir un trastorno relacionado con las PK en un paciente que necesite dicho tratamiento, que consiste en administra al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una o varias de las combinaciones descritas anteriormente.

Tal como se emplea aquí, un "trastorno relacionado con las PK" o un "trastorno provocado por las PK" y una "actividad anormal de las PK" indica en todos los casos un estado patológico caracterizado por una actividad catalítica de las PK inadecuada, es decir inferior o, con mayor frecuencia, superior a la normal, pudiendo ser la PK en cuestión una RTK, una CTK o una STK. La actividad catalítica inadecuada puede surgir como resultado de: (1) la expresión de la PK en células, en las que normalmente no se expresan las PK; (2) una mayor expresión de la PK, que conduce a una proliferación, diferenciación y/o crecimiento celulares inesperados; o (3) una menor expresión de la PK, que conduce a una reducción inesperada de la proliferación, diferenciación y/o crecimiento celulares. Una sobreactividad de una PK indica ya sea la amplificación del gen que codifica a una PK particular, ya sea la producción de un nivel de actividad de PK, que puede guardar relación con un trastorno de proliferación, diferenciación y/o crecimiento celulares (es decir, a medida que aumenta el nivel de la PK, aumenta también la severidad de uno o varios síntomas del trastorno celular). Una subactividad es, obviamente, lo contrario, cuando aumenta la severidad de uno o varios síntomas de un trastorno celular a medida que disminuye la actividad de una PK.

"Tratar" o "tratamiento" en relación a un trastorno relacionado con una PK indica el alivio o la remisión de la causa y/o de los efectos de un trastorno relacionado con la PK o, como alternativa, la promoción o la interrupción de una interacción anormal causada por un trastorno relacionado con una PK.

Tal como se emplean aquí, los términos "prevenir" o "prevención" indican un método para salvaguardar un organismo, impidiendo ante todo que adquiera un trastorno relacionado con una PK o bien, como alternativa, para promover o interrumpir una interacción anormal causada por un trastorno relacionado con una PK.

La expresión "promover o interrumpir una interacción anormal" indica un método que puede ponerse en práctica administrando un compuesto de la invención a las células o tejidos de un organismo. Un compuesto puede promover una interacción entre una proteína-quinasa y un reactivo natural de fijación formando interacciones favorables con múltiples átomos en la interfase del complejo. Como alternativa, un compuesto puede inhibir una interacción entre una proteína-quinasa y un reactivo natural de fijación socavando las interacciones favorables formadas entre los átomos de la interfase del complejo. En las formas preferidas de ejecución, la promoción o la interrupción de una interacción anormal indican que un compuesto de esta invención favorece el cambio conformacional de una de las proteínas.

En otro aspecto de esta invención, el trastorno relacionado con la PK puede seleccionarse entre el grupo de los trastornos relacionados con las RTK, con las CTK y las STK.

En otro aspecto más de esta invención, el trastorno de una PK aludido antes puede seleccionarse entre el grupo formado por un trastorno relacionado con el EGFR, un trastorno relacionado con el PDGFR, un trastorno relacionado con el IGFR y un trastorno relacionado con el flk. En otro aspecto, los trastornos relacionados con PK recién aludidos pueden seleccionarse entre los trastornos relacionados con el PDGF, los trastornos relacionados con el flk y los trastornos relacionados con el FGF.

En otro aspecto de esta invención, el trastorno relacionado con proteína-quinasas recién aludido es un cáncer seleccionado entre el grupo formado por el carcinoma de células escamosas, el astrocitoma, el glioblastoma, el cáncer de pulmón, el cáncer de vejiga, el cáncer de cabeza y cuello, el melanoma, el cáncer de ovarios, el cáncer de próstata, el cáncer de mama, el cáncer de pulmón de células pequeñas, el cáncer colorrectal, el cáncer gastrointestinal, el cáncer de pulmón de células no pequeñas y el glioma.

En otro aspecto más de esta invención, el trastorno de una PK aludido antes puede seleccionarse entre la diabetes, un trastorno autoinmune, un trastorno de hiperproliferación, la restenosis, la fibrosis, la psoriasis, la osteoartritis, la artritis reumatoide, un trastorno inflamatorio, la angiogénesis y similares.

Otros trastornos que pueden tratarse con los compuestos de esta invención incluyen, sin limitación, a los trastornos inmunológicos y cardiovasculares, por ejemplo la aterosclerosis.

Las composiciones farmacéuticas de los compuestos anteriores y sus combinaciones son otro aspecto de esta invención.

Una "composición farmacéutica" indica una mezcla de uno o varios de los compuestos, agentes y/o fármacos descritos aquí, o de sales o profármacos fisiológicamente aceptables de los mismos, con otros componentes químicos, por ejemplo vehículos y excipientes fisiológicamente aceptables. La finalidad de una composición farmacéutica consiste en facilitar la administración de un compuesto a un organismo.

Tal como se emplea aquí, un "vehículo fisiológicamente aceptable" indica un vehículo o un diluyente que no merma la actividad biológica ni las propiedades del compuesto administrado, sino que facilita dicha administración, por ejemplo estabilizando o solubilizando el compuesto. Preferentemente, el vehículo no causa una irritación significativa en el organismo.

Un "excipiente" indica una sustancia añadida a una composición farmacéutica para facilitar todavía más la administración de un compuesto. Los ejemplos de excipientes incluyen, sin limitación, al carbonato cálcico, fosfato cálcico, varios azúcares y varios tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales, tensioactivos y polietilenglicoles.

Un "neoplasma" es un tejido anormal que, por proliferación celular, crece con mayor rapidez que el normal y continúa creciendo incluso después de haber cesado los estímulos que iniciaron el crecimiento. Un neoplasma carece total o parcialmente de organización estructural y de coordinación funcional con el tejido normal y por lo general forma una masa distinta a dicho tejido. Tales masas pueden ser benignas (tumores benignos) o malignas (cánceres de tumor sólido). Los neoplasmas malignos son localmente invasivos y destructivos y en muchos casos efectúan metástasis (penetran, invaden y destruyen tejidos en zonas del organismo afectado que son remotas del puesto de origen). El proceso de formación de un neoplasma se denomina por lo general "neoplasia"; es decir, la neoplasia es el proceso bioquímico, en virtud del cual se forma y crece un neoplasma.

Los términos "neoplasma maligno", "cáncer", "tumor" y "cáncer de tumor sólido" se utilizan indistintamente para indicar un estado patológico bien conocido de los expertos en la materia, que saben que constituye una amenaza para la vida del paciente y al que suelen llamar simplemente "cáncer".

En lo que respecta a la actividad tumorígena, "inhibir" significa eliminar, reducir, contener, impedir, prevenir, disminuir, retardar y/o restringir una neoplasia.

Descripción detallada de la invención 1. Indicaciones - enfermedades a tratar A. Generalidades

Las PK, cuya actividad catalítica se modula con los compuestos de esta invención, incluyen las proteína-tirosina-quinasas, que pueden ser de dos tipos: las tirosina-quinasas de receptor (RTK) y las tirosina-quinasas celulares (CTK), y las serina-treonina-quinasas (STK). La transducción de señales mediada por las RTK se inicia por la interacción extracelular con un factor específico de crecimiento (ligando) y posterior dimerización del receptor, estimulación transitoria de la actividad intrínseca de la proteína-tirosina-quinasa y fosforilación. Con ello se crean sitios de fijación para las moléculas de la transducción de señales intracelulares, que conducen a la formación de complejos con un amplio espectro de moléculas de señalización citoplásmica que facilitan la respuesta celular apropiada (p.ej. la división celular, los efectos metabólicos en el microentorno extracelular, etc.), véase Schlessinger y Ullrich, Neuron 9, 303-391, 1992.

Se ha constatado que los sitios de fosforilación de la tirosina de los receptores de factores de crecimiento funcionan como sitios de fijación de alta afinidad para los dominios SHR (homología src) de las moléculas de señalización, véase Fantl y col., Cell 69, 413-423, 1992; Songyang y col., Mol. Cell. Biol. 14, 2777-2785, 1994; Songyang y col., Cell 72, 767-778, 1993; y Koch y col., Science 252, 668-678, 1991. Se han identificado diversas proteínas de sustrato intracelular que se asocian con las RTK. Pueden dividirse en dos grupos principales: (1) sustratos que tienen un dominio catalítico; y (2) sustratos que carecen de tal dominio, pero que sirven como adaptadores y se asociación con moléculas catalíticamente activas, véase Songyang y col., Cell 72, 767-778, 1993. La especificidad de las interacciones entre los receptores y los dominios SH2 de sus sustratos viene determinada por los restos aminoácidos que rodean al resto tirosina fosforilada. Las diferencias de afinidades de fijación entre los dominios SH2 y las secuencias de aminoácidos que rodena los restos de fosfotirosina de receptores particulares son consistentes con las diferencias observadas en sus perfiles de fosforilación de sustrato, véase Songyang y col., Cell 72, 767-778, 1993. Estas observaciones sugieren que la función de cada RTK viene determinada no solo por su modelo de expresión y la disponibilidad de ligando, sino también por la serie de conductos de transducción de señales en sentido descendente (downstream) que se activan por acción de un receptor concreto. Por lo tanto, la fosforilación proporciona un importante paso regulador que determina la selectividad de los conductos de señalización reclutados por receptores específicos de factores de crecimiento así como los receptores de factores de diferenciación.

Las STK, por ser primariamente citosólicas, afectan la bioquímica interna de la célula, a menudo en forma de respuesta base a un acontecimiento PTK. Las STK intervienen en el proceso de señalización que inicia la síntesis de DNA y posterior mitosis que conduce a la proliferación celular.

Por tanto, la transducción de señales de las PK se convierte, entre otras respuestas, en proliferación, diferenciación, crecimiento celulares y metabolismo. La proliferación celular anormal puede derivar en una larga serie de trastornos y enfermedades, incluidos el desarrollo de neoplasia, por ejemplo en forma de carcinoma, sarcoma, glioblastoma y hemangioma, trastornos tales como la leucemia, la psoriasis, la arteriosclerosis, la artritis y la retinopatía diabética y otros trastornos relacionados con una angiogénesis y/o vasculogénesis descontroladas.

No se requiere una comprensión precisa del mecanismo por el que los compuestos de esta invención inhiben a las PK para poner en práctica la presente invención. Sin embargo, a pesar de no asumir ninguna teoría o mecanismo concretos, se cree que los compuestos interaccionan con los aminoácidos de la región catalítica de las PK. Las PK como se sabe poseen una estructura bilobada, en la que el ATP parece fijarse en la hendidura situada entre los dos lóbulos, en una región en la que los aminoácidos se conservan entre las PK. Se cree que los inhibidores de las PK se fijan mediante enlaces no covalentes, por ejemplo puentes de hidrógeno, fuerzas de van der Waals e interacciones iónicas, a la misma región general en la que el ATP recién mencionado se fija a las PK. Más concretamente, se cree que el componente 2-indolinona de los compuestos de esta invención se fija en el espacio general que normalmente ocupa el anillo adenina del ATP. La especificidad de una molécula concreta con una PK particular puede darse entonces como resultado de interacciones adicionales entre los diversos sustituyentes del núcleo de la 2-indolinona y los dominios de aminoácidos específicos de las PK concretas. Por ello, los diferentes sustituyentes de la indolinona pueden contribuir a la fijación preferencia sobre PK concretas. La capacidad de elegir compuestos activos en diferentes sitios de fijación del ATP (u otros nucleótidos) convierte a los compuestos de esta invención en útiles para impactar en cualquier proteína que posea sitios de este tipo. Los compuestos descritos aquí pueden tener utilidad en ensayos "in vitro" para estas proteínas y además desplegar efectos terapéuticos "in vivo" por interacción con dichas proteínas.

En otro aspecto, las proteína-quinasas, cuya actividad se modula por contacto con un compuesto de esta invención, es una proteína-tirosina-quinasa, más en particular, una proteína-tirosina-quinasa de receptor. Entre las proteína-tirosina-quinasas de receptor, cuya actividad catalítica puede modularse con un compuesto de esta invención o una sal del mismo, se encuentra sin limitación: la BGF, HER2, HER3, HER4, IR, IGF-1R, IRR, PDGFR\alpha, PDGFR\beta, CSFIR, C-Kit, C-fms, Flk-1R, Flk4, KDR/FLK-1 (VEGFR-2), Flt-1, FGFR-1R, FGFR-2R, FGFR-3R y FGF-4R.

La proteína-tirosina-quinasa, cuya actividad catalítica se modula por contacto con un compuesto de esta invención o una sal o un profármaco del mismo, puede ser también una proteína-tirosina-quinasa celular o de no receptor (CTK). Por lo tanto, la actividad catalítica de las CTK, por ejemplo pero sin limitación: la Src, Frk, Btk, Csk, Abl, ZAP7, Fes, Fps, Fak, Jak, Ack, Yes, Fyn, Lyn, Lck, Blk, Hck, Fgr e Yrk, puede modularse por contacto con un compuesto o una sal de esta invención.

Otro grupo más de PK, cuya actividad catalítica puede modularse por contacto con un compuesto de esta invención, el formado por las serina-treonina-quinasas, por ejemplo, pero sin limitación: la CDK2 y la Raf.

En otro aspecto, esta invención se refiere al uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de esta invención para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento o prevención de un trastorno relacionado con una PK mediante la administración del mismo a un organismo.

Es también un aspecto de esta invención que una composición farmacéutica que contiene un compuesto de esta invención o una sal o un profármaco del mismo se administre a un organismo con el fin de prevenir o de tratar un trastorno relacionado con las PK.

Esta invención se refiere, por tanto, a compuestos que modulan la transducción de señales de las PK, que afectan a la actividad enzimática de las RTK, las CTK y/o las STK, interfiriendo de este modo en las señales transducidas por dichas proteínas. Más en concreto, la presente invención se refiere a compuesto que modulan los conductos de transducción de señales mediados por las RTK, las CTK y/o las STK como estrategia terapéutica para curar muchos tipos de tumores sólidos, incluidos, pero sin limitarse a ellos: los carcinomas, los sarcomas, incluido el sarcoma de Kaposi, el eritroblastoma, el glioblastoma, el meningioma, el astrocitoma, el melanoma y el mioblastoma. En esta invención se contempla además el tratamiento o prevención de cánceres de tumores no sólidos, como es la leucemia. Las indicaciones pueden incluir, pero sin limitarse a ellos: el cáncer de cerebro, el cáncer de vejiga, el cáncer de ovarios, el cáncer gástrico, el cáncer pancreático, el cáncer de colon, el cáncer de la sangre, el cáncer del pulmón y el cáncer de los huesos.

Otros ejemplos no limitantes de tipos de trastornos relacionados con una actividad inapropiada de las PK, cuya prevención, tratamiento y estudio pueden abordarse con los compuestos descritos en esta solicitud, son los trastornos de proliferación celular, los trastornos fibróticos y los trastornos metabólicos.

Los trastornos de proliferación celular, que pueden prevenirse, tratarse o investigarse con la presente invención, incluyen el cáncer, los trastornos proliferativos de vasos sanguíneos y los trastornos proliferativos de células mesangiales.

Los trastornos proliferativos de vasos sanguíneos significan trastornos relacionados con una vasculogénesis (formación de vasos sanguíneos) y una angiogénesis (ramificación de nuevos vasos sanguíneos) anormales. La vasculogénesis y la angiogénesis desempeñan papeles importantes en una gran variedad de procesos fisiológicos normales, por ejemplo el desarrollo del embrión, la formación del cuerpo lúteo, la curación de las heridas y la regeneración de los órganos, pero desempeñan también un papel crucial en el desarrollo del cáncer, puesto que dan lugar a la formación de nuevos capilares, que se necesitan para mantener vivo el tumor. Otros ejemplos de trastornos de proliferación de vasos sanguíneos incluyen la artritis, en la que los nuevos vasos sanguíneos capilares invaden la articulación y destruyen el cartílago y las enfermedades oculares, por ejemplo la retinopatía diabética, en la que los nuevos capilares de la retina invaden el humor vítreo, sangran y provocan la ceguera.

A la inversa, los trastornos relacionados con la contracción, el cierre u obturación de vasos sanguíneos, por ejemplo la restenosis, pueden intervenir también y pueden tratarse o prevenirse con los métodos de esta invención.

Los trastornos fibróticos significan la formación anormal de matrices (estructuras) extracelulares. Los ejemplos de trastornos fibróticos incluyen la cirrosis hepática y los trastornos de proliferación de células mesangiales. La cirrosis hepática se caracteriza por el incremento de los constituyentes de matriz extracelular, dando lugar a la formación de una cicatriz hepática. La matriz extracelular aumentada que da lugar a una cicatriz hepática puede formarse también a raíz de una infección vírica, por ejemplo la hepatitis. Los lipocitos parecen desempeñar un papel importante en la cirrosis hepática. Otros trastornos fibróticos que pueden intervenir incluyen a la aterosclerosis.

Los trastornos de proliferación de células mesangiales indican trastornos provocados por una proliferación anormal de células mesangiales. Los trastornos proliferantes mesangiales incluyen varias enfermedades renales humanas, por ejemplo la glomerulonefritis, la nefropatía diabética y la nefrosclerosis maligna así como trastornos del tipo de los síndromes microangiopáticos trombóticos, el rechazo de trasplantes y las glomerulopatías. El RTK-PDGFR interviene en el mantenimiento de la proliferación de células mesangiales, véase Floege y col., Kidney International 43, 47S-45S, 1993.

Otro aspecto de la invención es también el uso de las indolinonas como agentes anti-infecciosos (p.ej. agentes antimicrobianos, agentes antifúngicos y similares) y se pueden tratar o prevenir dichas infecciones (p.ej. microbianas, fúngicas y similares) mediante el uso y las combinaciones de esta invención.

Muchos cánceres son trastornos de proliferación celular y, tal como se ha mencionado antes, las PK se han asociados con los trastornos de proliferación celular. No es sorprendente, pues, que las PK, por ejemplo los componentes del grupo RTK, se han asociado con el desarrollo del cáncer. Algunos de estos receptores, por ejemplo el EGFR (Tuzi y col., Br. J. Cancer 63, 227-233, 1992); Torp y col., APMIS 100, 713-719, 1992), el HER2/neu (Slamon y col., Science 244, 707-712, 1989) y el PDGFR (Kumabe y col., Oncogene 7, 627-633, 1992) se sobreexpresan en muchos tumores y/o están activados de modo persistente por bucles autocrinos. De hecho, en la mayor parte de los cánceres habituales y graves se han constatado las sobreexpresiones de estos receptores, véase Akbasak y Suner-Akbasak y col., J. Neurol. Sci. 111, 119-133, 1992; Dickson y col., Cancer Treatment Res. 61, 249-273, 1992; Korc y col., J. Clin. Invest. 90, 1352-1360, 1992; así como los bucles autocrinos (Lee y Donoghe, J. Cell. Biol. 118, 1057-1070, 1992; Korc y col., lugar citado; Akbasak y Suner-Akbasak y col., lugar citado). Por ejemplo, el EGFR se ha asociado con el carcinoma celular escamoso, el astrocitoma, el glioblastoma, el cáncer de cabeza y cuello, el cáncer de pulmón y el cáncer de vejiga. El HER2 se ha asociado con el cáncer de mama, de ovarios, de estómago, de pulmón, de páncreas y de vejiga. El PDGFR se ha asociado con el glioblastoma y el melanoma, el cáncer de pulmón, de ovarios y de próstata. La RTK c-met se ha asociado con la formación de tumores malignos. Más en concreto, la RTK c-met se ha asociado, entre otros cánceres, con el carcinoma colorrectal, de tiroides, de páncreas, gástrico y hepatocelular y los linfomas. Además la c-met se ha asociado con la leucemia. La sobreexpresión del gen c-met se ha detectado en pacientes que sufren la enfermedad de Hodgkin y la enfermedad de Burkitt.

La Flk se ha asociado igualmente con un amplio espectro de tumores, incluidos, pero sin limitarse a ellos: los tumores de mama, de ovarios y de pulmón, así como los gliomas, por ejemplo el glioblastoma.

El IGF-IR, además de estar implicado en el apoyo nutritivo y en la diabetes de tipo II, se ha asociado también con diversos tipos de cáncer. Por ejemplo, la IGF-I interviene, en calidad de estimulador autocrino de crecimiento, en diversos tipos de tumores, p.ej. en las células del carcinoma del cáncer de mama humano (Arteaga y col., J. Clin. Invest. 84, 1418-1423, 1989) y células tumorales pequeñas de pulmón (Macauley y col., Cancer Res. 50, 2511-2517, 1989). Además, la IGF-I, que interviene integralmente en el crecimiento normal y en la diferenciación del sistema nervioso, parece ser también un estimulador autocrino de los gliomas humanos, véase Sandberg-Nordqvist y col., Cancer Res. 53, 2475-2478, 1993. La importancia del IGF-IR y sus ligandos en la proliferación celular se basa además en el hecho de que el crecimiento de muchos tipos celulares en cultivo (fibroblastos, células epiteliales, células de músculo liso, linfocitos T, células mieloides, condrocitos y osteoblastos (células germinales de la médula ósea)) se estimula con la IGF-I, véase Goldring y Goldring, Eukaryotic Gene Expression 1, 301-326, 1991. En una serie de publicaciones recientes, Baserga sugiere incluso que el IGF-IR desempeña un papel central en los mecanismos de transformación y, como tal, puede ser una diana preferida de las intervenciones terapéuticas para un amplio espectro de enfermedades malignas humanas, véase Baserga, Cancer Res. 55, 249-252, 1995; Baserga, Cell 79, 927-930, 1994; Coppola y col., Mol. Cell. Biol. 14, 4588-4595, 1994.

Las STK están implicadas en muchos tipos de cáncer, incluido en especial el cáncer de mama, véase Cance y col., Int. J. Cancer 54, 571-77, 1993.

Sin embargo, la asociación entre la actividad anormal de las PK y la enfermedad no se limita al cáncer. Por ejemplo, las RTK se han asociado con enfermedades tales como la psoriasis, la diabetes mellitus, la endometriosis, la angiogénesis, el desarrollo de placa ateromatosa, la enfermedad de Alzheimer, la hiperproliferación epidérmica, las enfermedades neurodegerativas, la degeneración macular dependiente de la edad y los hemangiomas. Por ejemplo, el EGFR es indicado en la curación de heridas de córnea y cutáneas. Las deficiencias de insulina-R y de IGF-1R se han indicado en la diabetes mellitus de tipo II. Una correlación más completa entre las RTK específicas y sus indicaciones terapéuticas se describe en Plowman y col., DN&P 7, 334-339, 1994.

Tal como se ha indicado anteriormente, no solo las RTK, sino también las CTK, incluidas, pero sin limitarse a ellas: la src, abl, fps, yes, fyn, lyn, lck, blk, hck, fgr e yrk (revisión: ver Bolen y col., FASEB J. 6, 3403-3409, 1993) intervienen en la vía de transducción de señales proliferante y metabólica y, de este modo, se cree y de hecho se ha puesto de manifiesto, que intervienen en muchos trastornos mediados por las PTK, a los que se dirige la presente invención. Por ejemplo, la src mutada (v-src) se ha comprobado que es una oncoproteína (pp60^{v-src}) en los pollos. Además, su homólogo celular, el proto-oncogén pp60^{c-src}, transmite señales oncogénicas a muchos receptores. Por ejemplo, la sobreexpresión del EGFR o del HER2/neu en tumores conduce a la activación constitutiva del pp60^{c7src}, que es característica de las células malignas, pero está ausente de las células normales. Por otro lado, los ratones deficientes en la expresión del c-src presentan un fenotipo osteopetrótico, indicando una participación clave del c-src en función de osteoclasto y una posible participación en trastornos afines.

De igual manera, el Zap70 interviene en la señalización de las células T, que puede guardar relación con trastornos autoinmunes.

Las STK se han asociado con la inflamación, las enfermedades autoinmunes, las respuestas inmunes y los trastornos de hiperproliferación, como son la restenosis, la fibrosis, la psoriasis, la osteoartritis y la artritis reumatoide.

Las PK están implicadas además en la implantación del embrión. Por lo tanto, los compuestos de esta invención pueden proporcionar un método eficaz de prevenir la implantación del embrión.

Finalmente, en la actualidad se sospecha que tanto las RTK como las CTK intervienen en los trastornos hiperinmunes.

B. El VEGF y el Flk-1/KDR (conocido habitualmente como el VEGFR-2) en la angiogénesis y el cáncer colorrectal

Las células tumorales estimulante a las células endoteliales quiescentes para que se dividan y formen nuevos vasos sanguíneos, para ello liberan factores de crecimiento que se fijan sobre las células endoteliales contiguas (modo de acción paracrino). La fijación de un factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) sobre uno de sus receptores inicia la cascada de señalización que regula los acontecimientos celulares que participan en la formación de nuevos vasos sanguíneos.

Se cree que un gran número de tirosina-quinasas de receptor intervienen directa o indirectamente en la angiogénesis. La búsqueda del receptor, cuya inhibición selectiva impedirá el crecimiento de los nuevos sanguíneos que darán apoyo a los tumores en crecimiento, se ha convertido en enfoque que tomado la investigación básica de los últimos diez años. Aunque haya múltiples receptores, cuya expresión se restringe a las células endoteliales (incluidas la Flk-1, Flt-1, Tie-1 y Tie-2), se cree que el receptor de Flk-1 desempeña un papel crucial en la angiogénesis.

Los modelos temporales y espaciales de la expresión del VEGF y sus receptores apoya el rol que tienen estos en la angiogénesis normal durante el desarrollo del embrión. El VEGF, Flt-1 y Flk-1 se cree que participan también en la angiogénesis patológica que facilita el crecimiento de muchos tumores sólidos, incluidos los gliomas, el cáncer de mama, el cáncer de vejiga, el carcinoma de colon y otros cánceres del tracto gastrointestinal. Se ha observado una correlación entre la expresión del VEGF y la densidad vascular en los tumores de mama, en el carcinoma de células renales y en el cáncer de colon. En el glioblastoma muy vascularizado, se identifican mediante hibridación "in situ" los trascritos del VEGF y sus receptores; estos transcritos no se detectan en gliomas menos vascularizados, de intensidad baja ni en el tejido cerebral normal. En este planteamiento (que se basa en el modo de acción paracrino), los receptores de Flk-1 se detectan en las células endoteliales de los vasos, mientras que el VEGF se localiza en las células tumorales. La expresión del VEGF y sus receptores se ha observado en las líneas celulares tumorales hematopoyéticas, incluido el mieloma múltiple.

El VEGF es mitogénico para células endoteliales "in vitro". En este sistema, los anticuerpos neutralizadores contra la Flk-1 inhiben la mitogénesis. De igual manera, las ribozimas que destruyen los mRNA de la flk-1 o de la flt-1 reducen el crecimiento de las células endoteliales del sistema microvascular humano, presumiblemente disminuyendo el número de receptores existentes en las células.

Se ha empleado una gran variedad de técnicas "in vivo" para investigar el papel que desempeña la señalización del VEGF en la angiogénesis tumoral. Los receptores de la Flk-1 que carecen del dominio de quinasa intracelular bloquean la actividad del receptor de la Flk-1 endógena en células cultivadas, inhibiendo el crecimiento de los tumores implantados por vía subcutánea en ratones desnudos (= sin pelo). Muchos tumores que se forman en este modelo animal contienen una densidad vascular significativamente reducida. Además, la reducción de la expresión del VEGF con constructo antisentido inhibe el crecimiento de las células de glioma de rata C6 en ratones sin pelo con una densidad de vasos sanguíneos concomitante reducida en estos tumores e inhibe el crecimiento de las células de melanoma humano en ratones sin pelo/SCID. De igual manera, la reducción de los niveles de VEGF con anticuerpos neutralizadores inhibe el crecimiento del rabdomiosarcoma humano, del glioblastoma multiforme y del liomiosarcoma en ratones sin pelo y del fibrosarcoma en ratones BALBc/sin pelo.

En su conjunto, los resultados anteriores proporcionan una evidencia fuerte del papel crucial de la señalización del VEGF a través de la Flk-1 en la angiogénesis del crecimiento de tumores sólidos. Un inhibidor de la Flk-1 puede tener un uso terapéutico beneficioso para pacientes de cáncer.

2. Farmacología A. Estudios preclínicos con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona

En un ensayo de base celular se ha encontrado que la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona inhibe la fosforilación del receptor que habitualmente sigue a la interacción del VEGF con su receptor. Los estudios "in vitro" realizados con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona ponen de manifiesto su capacidad de inhibir la autofosforilación de la Flk-1 con valores IC_{50} aproximadamente de 1 \muM. Además, la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona inhibe la proliferación "in vitro" de las células endoteliales inducida por el VEGF, con valores IC_{50} aproximadamente de 0,07 \muM. En este ensayo, la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona despliega un aumento de potencia dependiente del tipo, con una actividad detectable que se observa por primera vez después de un tiempo de exposición al fármaco de 5 minutos. La exposición a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona durante una hora se traduce en una actividad antiproliferante "in vitro" durante los 3-4 días posteriores. La 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona no tiene efecto inhibidor directo en una gran variedad de líneas celulares tumorales en concentraciones inferiores a 50 \muM.

Los estudios realizados "in vivo" con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, en los que se implantan por vía subcutánea una gran variedad de líneas celulares tumorales a ratones de inmunidad comprometida, la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona produce una supresión significativa del crecimiento de un amplio espectro de tipos de tumores, cuyo crecimiento se ha inducido con varios factores de crecimiento, por ejemplo el PDGF, EGF y el Her-2. La dosis intraperitoneal diaria (situada entre 12,5 y 25 mg/kg/día durante 28 días) produce la inhibición del 30-80% del crecimiento tumoral. En los estudios iniciales se comenzaba la administración de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona el día 1 después de la implantación del tumor. Los estudios posteriores, en los que se retrasaba la administración de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona hasta que los tumores habían alcanzado un volumen de aproximadamente 50 mm^{3}, ponen de manifiesto una eficacia equivalente en la supresión del crecimiento tumoral.

Los estudios dosis-respuesta con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (en dosis comprendidas entre 6,25 y 25 mg/kg/día) se realizan con células de melanoma humano implantadas por vía subcutánea en ratones atímicos. La administración diaria de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en dosis bajas, del orden de 1 mg/kg/día, produce la inhibición dependiente de la dosis en estas células. Los estudios adicionales de dosificación intraperitoneal de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en ratones atímicos aplicando una administración menos frecuente (que incluye dos administraciones por semana durante cuatro semanas) produce también una inhibición equivalente del crecimiento tumoral, si se compara con la administración intraperitoneal diaria (77% en la dosificación dos veces por semana; frente al 68% en la dosificación diaria).

Se ha demostrado también que la administración diaria de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (25 mg/kg/día) inhibe de forma significativa el crecimiento de las células tumorales implantadas quirúrgicamente por debajo de la membrana serosa del colon. El tratamiento con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona conduce a una disminución del tamaño del tumor y a una menor vascularización, como se pone de manifiesto por el aspecto pálido de los tumores de los animales tratados con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

B. Farmacocinética de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona

Los ensayos de eliminación por lavado "in vitro" indican una vida media de la diana de 96 horas, lo cual sugiere una fijación competitiva muy reñida de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con el sitio de fijación ATP de la tirosina-quinasa de receptor. La farmacocinética intravenosa "in vivo" de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona se caracteriza por la eliminación rápida del compuesto original de la circulación en ratones, ratas y perros. La vida media de eliminación es ligeramente más larga cuando se determina en la rata por comparación con los ratones y los perros (estos datos no se presentan).

La farmacocinética de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en ratas es dependiente de la dosis cuando las dosis intravenosas son elevadas. En dosis comprendidas entre 29,5 y 97,9 mg/m^{2}, la vida media de eliminación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona aumenta de modo lineal a medida que aumenta la dosis. Los valores AUC aumentan 10 veces cuando la dosis ha aumentado solamente 3 veces.

Los estudios toxicocinéticos subcrónicos (estudios de toxicidad durante 28 días) realizados en ratas y perros indican que el fármaco no se acumula en el plasma después de una administración reiterada.

La autorradiografía de cuerpo completo empleando la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona-[C^{14}] pone de manifiesto una amplia distribución en los tejidos de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona y posterior eliminación rápida después de una inyección intravenosa, cuyos niveles más altos están presentes en los contenidos del intestino delgado y en la orina (con una cantidad adicional de 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona observada en el hígado, riñones, piel, testículos, grasa marrón, glándula de Harder y corchetes nasales). La dosis total recuperada al cabo de 24 horas equivale al 92% de la dosis total administrada; un 72% se excreta junto con las heces y un 16% se excreta con la orina. Se cree que la excreción biliar es la principal vía de eliminación.

Los estudios realizados con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona tal cual y la marcada con [C^{14}] demuestran que este compuesto se metaboliza rápidamente después de la administración intravenosa a las ratas. El seguimiento del radiometabolito indica que más del 90% de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona-[C^{14}] se ha metabolizado en el intervalo de 3 horas que sigue a la administración intravenosa. Los datos de identificación del metabolito sugieren que un metabolito ha ganado un grupo carboxilo en uno de sus grupos metilo del anillo pirrol y que un segundo metabolito ha ganado un metilo en el grupo carboxilo.

Los datos farmacocinéticos preliminares del estudio en fase 1 realizados en pacientes que tienen tumores en estado avanzado, que se tratan con dosis entre 4,4 y 190 mg/m^{2}, indican que el fármaco tiene una vida media en humanos de aproximadamente 60 minutos. La vida media de alfa es rápida, con un promedio de 5,8 \pm 1,9 minutos.

La vida media de beta o fase de eliminación tiene un valor medio de 43,4 \pm 21,9 minutos, con un intervalo de 10 a 111 minutos. La eliminación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona de la circulación sistémica es rápida, con un valor medio de 1857 \pm 1016 litros de plasma limpiados de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona por día. En estos niveles, la eliminación es independiente de la dosis. La eliminación individual, calculada en base a la BSA, equivale a 41,8 \pm 22,1 litros/hora/m^{2}. Después de ocho infusiones de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, la velocidad de eliminación aumenta en un 50 - 300% en todos los pacientes. El volumen total de distribución de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, calculado en un modelo de un compartimento, es de 53,6 \pm 11,3 litros, lo cual indica que el fármaco se distribuye en los líquidos de todo el cuerpo. En las dosis probadas en humanos hasta el presente, la AUC y la C_{MÁX} aumentan linealmente con la dosis.

La vía primaria del metabolismo de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona son las reacciones de oxidación sucesiva del grupo 5-metilo del anillo pirrol. En el suero se pueden determinar cuatro metabolitos, todos ellos implican oxidaciones en serie del grupo metilo del anillo pirrol. Los datos de los estudios de metabolismo "in vitro" indican que la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona se metaboliza mediante las enzimas P-450 del hígado, más en particular mediante la CYP1A2 y la CYP3A4, ambas son enzimas inducibles. En concreto, la CYP3A4 es inducible por muchos xenobióticos, incluida la dexametasona, que por ello se administra como premedicación, antes de cualquier inyección de 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

C. Fluoruracilo y fluoruracilo/leucovorina - Generalidades

El nombre químico del fluoruracilo es 5-fluor-2,4-(1H,3H)-pirimidinadiona. No está claro el modo preciso de acción del fluoruracilo, pero se cree que el fármaco funciona como antimetabolito por lo menos en tres modos. En un aspecto, al igual que su derivado desoxirribonucleótido, el 5-fluor-2'-desoxiuridina-5'-fosfato (F-dUMP), el fármaco inhibe la timidilato-sintetasa, lo cual produce la inhibición de la metilación del ácido desoxiuridílico en ácido timidílico. Este a su vez interfiere en la síntesis del DNA. En un segundo aspecto se ha encontrado que el fluoruracilo se incorpora el RNA en una medida que, aunque es pequeña, es suficiente para tener un efecto mayor tanto en el procesado como en las funciones del RNA. Finalmente, en un tercer aspecto, se ha constatado que el fluoruracilo bloquea la uracil-fosfatasa y, de este modo, inhibe la utilización del uracilo formado anteriormente en la síntesis del RNA (Goodman y Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 1985; páginas 1268-1271).

El fluoruracilo puede administrarse solo o en combinación con otros fármacos. La combinación más frecuente consiste en el uso de la leucovorina (ácido fólico). La leucovorina potencia el efecto citotóxico del fluoruracilo aumentando, según se cree, la concentración extracelular de folatos reducidos, que a su vez parecen estabilizar el complejo ternario covalente formado por el (F-dUMP), el 5,10-metilenotetrahidrofolato y la timidina-sintetasa. La estabilización de este complejo aumenta la inhibición de la sintetasa, con lo cual aumenta la eficacia del fluoruracilo.

Otras combinaciones quimioterapéuticas del fluoruracilo que se han aplicado para el tratamiento del cáncer colorrectal en estado avanzado incluyen, sin limitación, la combinación del fluoruracilo con: metotrexato solo (Blijham, G. y col., J. Clin. Oncol. 14(8), 2266-73, 1996) y en combinación con leucovorina (Romero, A.O. y col., Am. J. Clin. Oncol. 21(1), 94-8, 1998); interferona alfa-2a (Greco, G.A. y col., J. Clin. Oncol. 14(10), 2674-81, 1996); interferona alfa-2b más leucovorina (Kohne, C.H., Oncology 54(2), 96-101, 1997); compuestos de platino, por ejemplo el cisplatino y el oxiplatino, en combinación con leucovorina (Scheithauer, W. y col., Cancer 73(6), 1562-68, 1994); carboplatino más metotrexato (antes de la administración del fluoruracilo) (Pronzato, P., J. Chemother. 10(3), 254-57, 1998; y Bleiberg, H. y Gramont, A., Semin. Oncol. 25 (2 supl. 5), 32-39, 1998); lavamisol (Bandealy, M.T., Clin. Cancer Res. 4(4), 935-38, 1998); metil-lomustina y leucovorina (Jones, Jr., D.V., Cancer 76(10), 1709-14, 1995); e irinotecan, un inhibidor de la topoisomerasa I (después de un tratamiento previo con fluoruracilo/leucovorina) (Rougier, P. y col., J. Clin. Oncol. 15(1), 251-260, 1997).

El uso de las combinaciones anteriores va en aumento, pero actualmente no parece que ninguna de ellas tenga ventaja clara sobre el fluoruracilo solo o el fluoruracilo en combinación con la leucovorina; esta última continúa siendo el tratamiento inicial estándar para pacientes que sufren cáncer colorrectal metastásico. En forma de agente simple, produce porcentajes de respuesta en torno al 15%, con una supervivencia media de 6 meses. En combinación con la leucovorina, la actividad del fluoruracilo resulta aumentada, con lo cual el porcentaje de respuesta se sitúa en torno al 20% y se observa que el período de supervivencia media en caso de cáncer colorrectal avanzado (estadio D) se sitúa en 11-13 meses (Wolmark, N. y col., J. Clin. Oncol. 11, 1879-1887, 1993).

El fluoruracilo puede administrarse por inyección intravenosa de bolo o por infusión continua. El volumen de distribución es ligeramente mayor que el espacio extracelular. Las dosis intravenosas de bolo comprendidas entre 370 y 720 mg/m^{2} producen una vida media de eliminación de 8 a 14 minutos con niveles de plasma inferiores a 1 \muM en un período de 2 horas, un umbral aproximado de efectos citotóxicos. Menos del 10% del fármaco se excreta con la orina, mientras que el resto se elimina a través de conductos metabólicos.

Los programas de administración aplicados con frecuencia incluyen la inyección de bolo a corto plazo, en períodos de 3-5 días durante 3-4 semanas, la infusión i.v. continua durante 96-120 días cada 4 semanas y la infusión semanal durante 6 semanas dentro de un lapso total de 8 semanas. La incidencia de la toxicidad clínica seria tiende a aumentar cuando la exposición sistémica es elevada (por ejemplo cuando la concentración en plasma en estado constante es elevada durante las infusiones constante y la AUC con administración de bolo es elevada).

Como se sabe, cada uno de los regímenes anteriores de tratamiento incluye intervalos sustanciales en los que no se administra nada de fluoruracilo. Ello se debe a la toxicidad inherente del fluoruracilo, que se exacerba con la adición de la leucovorina. Por desgracia, este intervalo temporal reduce sustancialmente la eficacia del fluoruracilo. Es decir, el tratamiento inicial de un paciente con fluoruracilo o con fluoruracilo/leucovorina produce una reducción de 1000 unidades (tres logaritmos o tres órdenes de magnitud) en el número y tamaño del tumor. Sin embargo, durante el período de "recuperación" sin tratamiento, en tumor experimenta un rebote y se extiende de nuevo en un número y tamaño que puede cifrarse en 100 unidades (dos logaritmos). Por lo tanto, el efecto global de un curso de tratamiento con fluoruracilo es solamente de una reducción del número y tamaño en 10 unidades (un logaritmo) por la administración del fluoruracilo. El tratamiento prolongado con fluoruracilo provoca no solo un problema en cuanto al coste del tratamiento, la calidad de vida del paciente, etc., sino que puede provocar una resistencia secundaria al fármaco. Los métodos de esta invención se dirigen a mantener una porción más sustancial del efecto de cada administración del fluoruracilo durante el período de recuperación. Las administraciones posteriores del curso de tratamiento pleno tendrán que atacar, por tanto, tumores de tamaño y número reducido, con lo cual se mejorará la eficacia global del fluoruracilo.

D. Ensayos clínicos con fluoruracilo y fluoruracilo/ leucovorina en cáncer colorrectal avanzado

Los regímenes de infusión continua, que se emplea a menudo, incluyen las inyecciones de bolo a corto plazo durante un período de tres a cinco días cada 3-4 semanas, las infusiones intravenosas continuas de 96-120 horas durante 4 semanas y las infusiones semanales durante seis semanas dentro de un lapso de ocho semanas. La incidencia de la toxicidad clínica seria tiende a aumentar cuando la exposición sistémica es elevada (por ejemplo cuando la concentración en plasma en estado constante es elevada durante las infusiones constante y la AUC con administración de bolo es elevada).

En un estudio clínico aleatorio, realizado por la clínica Mayo y el grupo de Tramiento de cáncer norte-central (Mayo/NCCTG) en pacientes de cáncer colorrectal metastásico avanzado, se comparan tres regímenes de tratamiento: leucovorina 200 mg/m^{2} y fluoruracilo 370 mg/m^{2} frente a leucovorina 20 mg/m^{2} y fluoruracilo 425 mg/m^{2} frente a fluoruracilo 500 mg/m^{2}. Todos los fármacos se administran por infusión intravenosa lenta, cada día, durante 5 días, y se repite cada 28-35 días. Los porcentajes de respuesta se sitúan en el 26% (p = 0,04 frente al fluoruracilo solo), el 43% (p = 0,001 frente al fluoruracilo solo) y el 10% para los grupos de la dosis elevada de la leucovorina, dosis baja de la leucovorina y fluoruracilo solo, respectivamente. Los tiempos de supervivencia media correspondientes son de 12,2 meses (p = 0,037), 12 meses (p = 0,050) y 7,7 meses. El régimen de dosis baja de leucovorina da una mejora estadísticamente significativa de ganancia de peso de más del 5%, alivio de los síntomas y mejora del estado general. El régimen de dosis alta de leucovorina da una mejora estadísticamente significativa del estado general y tiende a una mejora de la ganancia de peso y del alivio de los síntomas, pero estas mejoras no son estadísticamente significativas.

En un segundo estudio clínico aleatorio del Mayo/NCCTG se sustituye el régimen del fluoruracilo solo por un régimen de administración sucesiva del metotrexato (MTX), fluoruracilo y leucovorina. Los porcentajes de respuesta al régimen de leucovorina 200 mg/m^{2} y fluoruracilo 370 mg/m^{2} frente a la leucovorina 20 mg/m^{2} y fluoruracilo 425 mg/m^{2} frente a la administración sucesiva de MTX y fluoruracilo y leucovorina se sitúan en el 31% (p = <0,01), el 42% (p = < 0,01) y el 14%, respectivamente. Los tiempos de supervivencia media correspondientes son de 12,7 meses (p = 0,04), 12,7 meses (p = 0,01) y 8,4 meses. No se observan diferencias estadísticamente significativas entre los regímenes de tratamiento en cuanto a una ganancia de peso de más del 5% o en mejora del estado general.

En un tercer estudio se comparan los resultados y las toxicidades de una dosis baja de leucovorina (20 mg/m^{2}) y una dosis alta de leucovorina (200 mg/m^{2}), los pacientes reciben una infusión de 1 hora de 400 mg/m^{2}/día de fluoruracilo además de la leucovorina cada 4 semanas. Los dos grupos no arrojan diferencias estadísticamente significativas en porcentajes según géneros, localización del tumor primario, estado general y extensión del tumor. La toxicidad de los dos regímenes es baja y no hay diferencias significativas entre los dos grupos. La supervivencia media global no es significativamente diferente entre los dos grupos: 346 días para los pacientes que toman la dosis baja de leucovorina y 323 días para los pacientes que toman la dosis alta de leucovorina. Al cabo de 1 año, el ensayo de equivalencia es significativo (p < 0,01), lo cual demuestra la ausencia de más del 20% de beneficio en la supervivencia de 1 año para el régimen de dosis elevada. La administración de una dosis elevada de leucovorina junto con el fluoruracilo en un régimen de 5 días no mejora significativamente la supervivencia global de los pacientes que tienen cáncer colorrectal metastásico.

Finalmente, en un cuarto estudio aleatorio se comparan dos regímenes muy frecuentes de fluoruracilo/leucovorina para el tratamiento de cáncer colorrectal avanzado, cada uno de estos regímenes de administración de dosis demuestra ser superior al bolo de agente único fluoruracilo de los ensayos controlados anteriormente. Se clasifican con arreglo al estado general y la presencia y localización de cualquier lesión de indicador medible trescientos setenta y dos pacientes de cáncer colorrectal metastásico y se distribuyen en grupos aleatorios a los que se somete a quimioterapia con uno de los dos regímenes siguientes: (1) programa intenso de fluoruracilo con dosis baja de leucovorina (fluoruracilo: 425 mg/m^{2} más leucovorina: 20 mg/m^{2} por vía intravenosa [i.v.] durante 5 días, con administración repetida a intervalos de 4-5 semanas); o (2) administración semanal de fluoruracilo más una dosis elevada de leucovorina (fluoruracilo: 600 mg/m^{2} i.v. más leucovorina 500 mg/m^{2} en una infusión de 2 horas, cada semana, durante 6 semanas, con régimen repetido cada 8 semanas). No hay diferencias significativas de eficacia terapéutica entre los dos regímenes de fluoruracilo/leucovorina ensayados en lo que respecta a los parámetros siguientes: respuesta tumoral objetiva (35% frente al 31%), supervivencia (media: 9,3 frente a 10,7 meses) y efectos paliativos (evaluados en forma de alivio de los síntomas, mejora del estado general y ganancia de peso). Hay diferencias significativas en toxicidad (p < 0,05) y se observa más leucopenia y estomatitis en el régimen de administración intensa (días 1-5) y más diarrea y mayor necesidad de hospitalización para tratar la toxicidad en el régimen semanal. La administración intensa de fluoruracilo más una dosis baja de leucovorina parece tener un mejor índice terapéutico si se compara con el fluoruracilo semanal más dosis alta de leucovorina aplicando programas de administración de dosis de este estudio, basándose en eficacias terapéuticas similares, pero con menor necesidad de hospitalización para controlar la toxicidad quimioterapéutica.

3. Composiciones farmacéuticas y usos

Se puede administrar tal cual un compuesto o una combinación de la presente invención, un profármaco del mismo o una sal fisiológicamente aceptable ya sea del compuesto, ya sea de su profármaco, a un paciente humano o puede administrarse en composiciones farmacéuticas, en las que se mezclan los materiales anteriores con vehículos o excipientes idóneos. Las técnicas para la formulación y administración de fármacos pueden encontrarse en el manual Remington: "Pharmacological Sciences", editorial Mack Publishing Co., Easton, PA, Estados Unidos, en su última edición.

A. Vías de administración Generalidades

Las vías idóneas de administración pueden incluir, sin limitación, la administración oral, rectal, transmucosal o intestinal o la inyección intramuscular, subcutánea, intramedular, intratecal, intraventricular directa, intravenosa, intraperitoneal, intranasal o intraocular. Las vías preferidas de administración son la oral y la parenteral.

Como alternativa se puede administrar el compuesto en un modo local con preferencia sobre el sistémico, por ejemplo mediante la inyección del compuesto directamente sobre el tumor sólido, a menudo en una formulación "depot" o de liberación sostenida.

Además, se puede administrar el fármaco mediante un sistema de liberación específico, por ejemplo en un liposoma recubierto con anticuerpo específico del tumor. Los liposomas se dirigirán y se absorberán selectivamente en el tumor.

En otro aspecto de esta invención, los agentes quimioterapéuticos (p.ej. fluoruracilo y similares), los inhibidores de toposiomerasa I (p.ej. irinotecan y similares) y la leucovorina pueden administrarse por ejemplo en forma de inyección intravenosa de bolo o en forma de infusión intravenosa continua.

En una forma preferida de ejecución, la administración del inhibidor de la topoisomerasa I (p.ej. irinotecan y similares) se realiza por vía oral. En otra forma preferida de ejecución, dicha administración se realiza por vía parenteral.

B. Composición/formulación Generalidades

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden fabricarse por procesos ya conocidos de la técnica; por ejemplo, mediante un proceso convencional de mezclado, disolución, granulación, prensado de grageas, levigación, emulsionado, encapsulado, oclusión o liofilización.

Las composiciones farmacéuticas para el uso según la presente invención pueden formularse, por tanto, de un modo convencional empleando uno o varios vehículos fisiológicamente aceptables, que comprenden excipientes y adyuvantes que facilitan el procesado de los compuestos activos en los preparados que pueden utilizarse farmacéuticamente. La formulación idónea dependerá de la vía de administración que se elija.

Para la inyección, los compuestos de la invención pueden formularse en soluciones acuosas, con preferencia en tampones fisiológicamente compatibles, por ejemplo la solución de Hank, la solución de Ringer o un tampón salino fisiológico. Para la administración transmucosa pueden emplearse en la formulación penetrantes apropiados para atravesar la barrera de la mucosa. Tales penetrantes son conocidos en general en la técnica.

Para la administración oral, los compuestos pueden formularse fácilmente combinando los compuestos activos con excipientes farmacéuticamente aceptables, bien conocidos en la técnica. Tales excipientes permiten la formulación de los compuestos de la invención en tabletas, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, emulsiones, suspensiones y similares, para que el paciente a tratar puede ingerirlos oralmente. Los preparados farmacológicos para el uso oral pueden fabricarse empleando un excipiente sólido, moliendo opcionalmente la mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos, después de añadir los adyuvantes idóneos, si se desea, para obtener tabletas o núcleos de gragea. Los excipientes idóneos son, en concreto, cargas de relleno, tales como azúcares, incluidas la lactosa, la sucrosa, la manita y la sorbita; los preparados de celulosa, por ejemplo el almidón de maíz, el almidón de trigo, el almidón de arroz, el almidón de patata, la gelatina, la goma tragacanto, la metilcelulosa, la hidroxipropilmetilcelulosa, la carboximetilcelulosa sódica y/o la polivinilpirrolidona (PVP). Si se desea pueden añadirse elementos desintegrantes, por ejemplo polivinilpirrolidona reticulada, goma agar o ácido algínico. Puede utilizarse una sal, por ejemplo el alginato sódico.

Los núcleos de grageas se dotan de las envolturas apropiadas. A tal efecto pueden utilizarse soluciones concentradas de azúcar, que pueden contener opcionalmente goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel Carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca o barniz y disolventes orgánicos o mezclas de disolventes apropiados. Pueden añadirse a las envolturas de las tabletas o grageas colorantes o pigmentos para identificar o caracterizar las diferentes combinaciones de dosis del principio activo.

Las composiciones farmacéuticas que pueden utilizarse por vía oral incluyen las cápsulas de tipo empuje-encaje (push-fit), fabricadas con gelatina, así como las cápsulas blandas selladas, fabricadas con gelatina y un plastificante, por ejemplo la glicerina o la sorbita. Las cápsulas empuje-encaje pueden contener los ingredientes activos mezclados con cargas de relleno, por ejemplo lactosa, aglutinantes, por ejemplo almidones y/o lubricantes, por ejemplo talco o estearato magnésico y, opcionalmente, estabilizantes. En las cápsulas blandas, los compuestos activos pueden disolverse o suspenderse en líquidos apropiados, por ejemplo aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. Pueden añadirse además estabilizantes.

Para la administración bucal, las composiciones pueden adoptar la forma de tabletas o pastillas, formuladas de manera convencional.

Para la administración por inhalación, los compuestos a utilizar según la presente invención se administran de modo conveniente en forma de nebulizador aerosol, a partir de un bote o nebulizador presurizado, empleando el propelente adecuado, p.ej. el diclorodifluormetano, el triclorofluormetano, el diclorotetrafluoretano, el dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse mediante una válvula que entregue una cantidad calibrada. Las cápsulas o cartuchos por ejemplo de gelatina para usar en un inhalador o insuflador pueden formularse para que contengan una mezcla pulverulenta del compuesto y una base polvo adecuada, por ejemplo lactosa o almidón.

Los compuestos pueden formularse para la administración parenteral por inyección, p.ej. por inyección de bolo o por infusión continua. Las formulaciones para la inyección pueden presentarse en forma de dosis unitaria, p.ej. en ampollas o en envases multidosis, que lleven incorporado un conservante. Las composiciones pueden adoptar la forma de suspensión, solución o emulsión en vehículos aceitosos o acuosos y pueden agentes auxiliares de formulación, por ejemplo agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes.

Las composiciones farmacéuticas para la administración parenteral incluyen las soluciones acuosas de los compuestos activos en una forma soluble en agua. Adicionalmente, las suspensiones de los compuestos activos pueden prepararse en forma de suspensiones inyectables aceitosas apropiadas. Los disolventes o vehículos lipófilos idóneos incluyen los aceites grasos, por ejemplo el aceite de sésamo, o los ésteres sintéticos de ácidos grasos, por ejemplo el oleato de etilo o los triglicéridos, o los liposomas. Las suspensiones inyectables acuosas pueden contener sustancias que aumenten la viscosidad de la suspensión, por ejemplo la carboximetilcelulosa sódica, la sorbita o el dextrano. Opcionalmente, la suspensión puede contener además estabilizantes idóneos o agentes que aumenten la solubilidad de los compuestos para permitir la fabricación de soluciones muy concentradas.

Como alternativa, el ingrediente activo puede adoptar la forma de polvo para reconstitución antes del uso con un vehículo idóneo, p.ej. agua estéril libre de pirógenos.

Los compuestos pueden formularse también en forma de composiciones rectales, tales como supositorios o enemas de retención, p.ej. que contienen bases de supositorio convencionales, por ejemplo manteca de cacao u otros glicéridos.

Además de las formulaciones descritas anteriormente, los compuestos pueden formularse también en forma de preparado "depot". Estas formulaciones de acción prolongada pueden administrarse por implantación (por ejemplo subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Los compuestos pueden formularse por ejemplo con materiales poliméricos o hidrófobos idóneos (por ejemplo en forma de emulsión en un aceite aceptable) o con resinas de intercambio iónico o en forma de derivados de solubilidad escasa, por ejemplo en forma de una sal de solubilidad escasa.

Un ejemplo no limitante de un vehículo farmacéutico para los compuestos hidrófobos de esta invención es un sistema de codisolvente que contenga alcohol bencílico, un tensioactivo no polar, un polímero orgánico miscible en agua y una fase acuosa, por ejemplo un sistema de codisolvente VPD. La VPD es una solución que contiene un 3% p/v de alcohol bencílico, un 8% p/v del tensioactivo no polar Polysorbate™ 80 y un 65% p/v de polietilenglicol 300, completando el volumen con etanol absoluto. El sistema codisolvente de VPD (el VPD:D5W) consta de la VPD diluida 1:1 con una solución de dextrosa al 5% en agua. Este sistema codisolvente disuelve bien los compuestos hidrófobos y por sí mismo produce una toxicidad baja cuando se administra sistémicamente. Naturalmente pueden variarse de modo considerable las proporciones de tal sistema de codisolventes sin destruir sus características de solubilidad ni de toxicidad. Además, la identidad de los componentes codisolventes pueden variar también: por ejemplo, en lugar del Polysorbate™ 80 pueden utilizarse otros tensioactivos no polares de baja toxicidad, puede variarse el tamaño de la fracción de polietilenglicol, el polietilenglicol puede reemplazarse por otros polímeros biocompatibles, p.ej. la polivinilpirrolidona, y en lugar de la dextrosa pueden utilizarse otros azúcares o polisacáridos.

Como alternativa pueden emplearse otros sistemas de entrega de los compuestos farmacéuticos hidrófobos. Los liposomas y las emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos o soportes para la entrega de fármacos hidrófobos. Además pueden emplearse también ciertos disolventes orgánicos, por ejemplo el sulfóxido de dimetilo, aunque a menudo con el inconveniente de que tienen una toxicidad mayor.

Los compuestos pueden entregarse adicionalmente empleando un sistema de liberación persistente, por ejemplo matrices semipermeables de polímeros hidrófobos sólidos que contienen el agente terapéutico. Se han consolidado diversos materiales de liberación sostenida y los expertos en la materia los conocen perfectamente. Las cápsulas de liberación persistente pueden liberar los compuestos, en función de su naturaleza química, durante un período comprendido entre unas pocas semanas y más de 100 días. En función de la naturaleza química y la estabilidad biológica del reactivo terapéutico pueden emplearse estrategias adicionales para estabilizar la proteína.

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Las composiciones farmacéuticas presentes pueden contener también vehículos o excipientes sólidos o en fase gel. Los ejemplos de tales vehículos y excipientes incluyen, pero no se limitan a: carbonato cálcico, fosfato cálcico, varios azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina y polímeros, por ejemplo polietilenglicoles.

Muchos de los compuestos moduladores de fosfatasa de la invención pueden suministrarse en forma de sales con contraiones farmacéuticamente compatibles. Tal como se ha mencionado anteriormente, las sales farmacéuticamente compatibles pueden formarse con muchos ácidos, incluidos, pero sin limitarse a ellos, el ácido clorhídrico, sulfúrico, acético, láctico, tartárico, málico, succínico, etc. Las sales tienden a ser más solubles en disolventes acuosos o próticos que las correspondientes formas de base libre.

Composición de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona

Este compuesto puede formularse en forma de una cualquiera de las formulaciones y composiciones recién descritas. Sin embargo, una formulación preferida en la actualidad contiene la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en forma de solución parenteral estéril suficiente para proporcionar una concentración final de 4,5 mg/ml. Los componentes adicionales de esta formulación incluyen al polietilenglicol 400; aceite de ricino Polyoxyl 35 (Cremophor®); alcohol bencílico y alcohol deshidratado. Hay que señalar que esta formulación, por contener Cremophor®, no es compatible con las jeringuillas, bolsas intravenosas ni conjuntos de administración estándar forrados con PCV.

Composición de fluoruracilo/leucovorina

El fluoruracilo es un producto disponible en composiciones y formulaciones conocidas por los expertos en la técnica quimioterapéutica y puede administrar por métodos de esta invención en forma de composiciones/formulaciones. Los ejemplos de tales composiciones/formulaciones se indican en el prospecto incluido en el envase, que acompaña al fluoruracilo comercial y que se incorporan como referencia, tal como se indica a continuación. Dentro del alcance de esta invención se contempla también el uso de cualquier otra composición/formulación diferente, que pueda desarrollarse o resultar disponible en el futuro.

De igual manera, la leucovorina es también un producto disponible en composiciones/formulaciones ya conocidas de los expertos en la técnica quimioterapéutica y que puede administrarse en los métodos de esta invención en forma de tales composiciones/formulaciones. Los ejemplos de tales composiciones/formulaciones se describen en el prospecto incluido dentro del envase, que acompaña a la leucovorina comercial y que se incorpora en su totalidad como referencia. De igual manera, dentro del alcance de esta invención se contempla también el uso de cualquier otra composición/formulación diferente, que pueda desarrollarse o resultar disponible en el futuro.

4. Dosificación A. Generalidades

Los compuestos, combinaciones y composiciones farmacéuticas idóneas para el uso en la presente invención incluyen composiciones en las que los ingredientes activos están contenidos en una cantidad eficaz para lograr el propósito buscado, a saber, la modulación de la actividad de las PK o el tratamiento o la prevención de un trastorno relacionado con las PK.

La cantidad terapéuticamente eficaz indica más en concreto la cantidad del compuesto administrado que será eficaz para prevenir, aliviar o mejorar los síntomas de la enfermedad o prolongar la supervivencia del sujeto tratado.

La determinación de una cantidad terapéuticamente eficaz está dentro de la incumbencia de los expertos en la materia, en especial a la luz de la descripción detallada que se facilita aquí.

Para cualquier compuesto empleado en los métodos de esta invención, la cantidad o dosis terapéuticamente eficaz puede estimarse inicialmente a partir de los ensayos con cultivos celulares. Entonces puede formularse una dosis para modelos animales, de modo que se logre un intervalo de concentraciones circulantes que incluya la IC_{50} ya determinada en el cultivo celular (es decir, la concentración del compuesto a ensayar que logra una inhibición semimáxima de la actividad de la PK). Tal información puede utilizarse después para determinar con mayor precisión las dosis útiles para los humanos.

La toxicidad y la eficacia terapéutica de los compuestos descritos en la presente pueden determinarse por procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o en animales experimentales, p.ej. para determinar la IC_{50} y la LD_{50} (ambas se describen a continuación) para un compuesto de interés. Los datos obtenidos a partir de estos ensayos en cultivos celulares y en estudios con animales pueden utilizarse para formular un intervalo de dosis para el uso en humanos. La dosificación puede variar dentro de amplios márgenes, en función de la forma de dosificación empleada y de la vía de administración utilizada. La formulación, la vía de administración y la dosificación exactas podrán elegirse por parte del médico concreto en vista del estado de salud del paciente (véase p.ej. Fingl y col., "The Pharmacological Basis of Therapeutics", 1975, cap. 1, p. 1).

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Los compuestos terapéuticos deberán ser más potentes en desplegar una actividad inhibidora de la tirosina-quinasa de receptor que en ejercer un efecto citotóxico. Una medición de la eficacia y de la toxicidad celular de un compuesto puede obtenerse determinando el índice terapéutico; es decir, el cociente IC_{50}/LD_{50}. La IC_{50} es la dosis requerida para lograr una inhibición del 50%. Puede determinarse aplicando técnicas estándar, por ejemplo las que se describen en esta solicitud. La LD_{50} es la dosis que produce una toxicidad del 50%. Puede determinarse también por técnicas estándar (Mossman, J. Immunol. Methods 65, 55-63, 1983), determinando la cantidad de LDH liberado (Korzeniewski y Callewaert, J. Immunol. Methods 64, 313, 1983; Decker y Lohmann-Matthes, J. Immunol. Methods 115, 61, 1988) o bien midiendo la dosis letal en modelos animales. Son preferidos los compuestos que tienen un índice terapéutico grande. Por lo tanto, en un aspecto de la invención, el uso preferido de compuestos, agentes, combinaciones y composiciones farmacéuticas contemplados para el uso en esta invención requiere un índice terapéutico de cada componente activo que sea mayor que 2, con preferencia por lo menos de 10, con preferencia especial por lo menos de 50.

La cantidad y el intervalo de dosificación pueden ajustarse de forma individual para proporcionar niveles en plasma del resto activo, que sean suficientes para mantener los efectos de modulación de la enzima, o bien una concentración eficaz mínima (MEC). La MEC variará para cada compuesto, pero puede estimarse a partir de los datos "in vitro"; p.ej. la concentración necesaria para lograr una inhibición del 50-90% de la enzima de tirosina utilizando los ensayos descritos en la presente. Las dosificaciones necesarias para lograr la MEC dependerán de las características individuales y de la vía de administración. Sin embargo pueden utilizarse ensayos HPLC o bioensayos para determinar las concentraciones en plasma.

Los intervalos de dosificación empleados pueden determinarse también empleando el valor de la MEC. Los compuestos deberían administrarse empleando un régimen que mantenga niveles en plasma por encima de la MEC durante un 10-90% del tiempo, con preferencia entre el 30 y el 90% y con preferencia especial entre el 50 y el 90%.

En los casos de administración local o toma selectiva, la concentración local eficaz del fármaco puede no guardar relación con la concentración en plasma y entonces tendrá que aplicarse otros procedimientos ya conocidos de la técnica para determinar la cantidad a dosificar y el intervalo correctos.

La cantidad de una composición concreta administrada dependerá, obviamente, del sujeto a tratar, de la severidad de la dolencia, de la manera de administración y del criterio del facultativo que firma la receta, etc.

Las cantidades terapéuticamente eficaces de agentes quimioterapéuticos, de inhibidores de topoisomerasa I y de leucovorina, contemplados para el uso en práctica de la invención, pueden determinarse fácilmente, véase por ejemplo DeVita, Jr., V. y col., Cancer: Principles and Practice of Oncology, 5ª edición, 1997.

B. Dosificación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona

En base a los datos farmacológicos obtenidos en relación a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (ver antes) puede administrarse el compuesto en dosis comprendidas entre aproximadamente 4 mg/m^{2} y aproximadamente 195 mg/m^{2}. En una forma de ejecución actualmente preferida, la dosificación se sitúa entre 72,5 mg/m^{2} y 145 mg/m^{2}. En otra forma preferida de ejecución se emplean cantidades terapéuticamente eficaces de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona comprendidas entre 4 y 190 mg/m^{2}, con preferencia entre 72 y 145 mg/m^{2} del compuesto por tratamiento.

La dilución descrita en la anterior sección de composiciones puede administrarse a un paciente en una cantidad comprendida entre 50 y 350 cc/hora. La cantidad se sitúa con preferencia entre aproximadamente 150 y aproximadamente 250 cc/hora. Con preferencia especial, se sitúa entre aproximadamente 175 y aproximadamente 225 cc/hora.

Se entiende por "aproximadamente", término empleado en esta descripción, una variación de \pm10%, es decir, aproximadamente 175 cc/hora indica un intervalo comprendido entre 157,5 cc/hora y 192,5 cc/hora, etc.

En una forma preferida de ejecución, la dosis de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona se administra durante períodos de reposo, en los que no se administra al paciente ni el fluoruracilo ni la combinación fluoruracilo/leucovorina. Tal como se ha puesto de manifiesto en los ejemplos de la anterior sección de farmacología, el fluoruracilo o el fluoruracilo/leucovorina pueden administrarse en numerosos regímenes de tratamiento, cuya elección dependerá de los conocimientos y de la experiencia del médico que atiende al enfermo.

C. Dosificación de fluoruracilo y de fluoruracilo/leucovorina

En general, las cantidades terapéuticamente eficaces de fluoruracilo se sitúan entre aproximadamente 300 y aproximadamente 800 mg/m^{2}, con preferencia entre 375 y 600 mg/m^{2} y con preferencia especial entre 400 y 500 mg/m^{2} de fluoruracilo por tratamiento. Otras cantidades preferidas, terapéuticamente eficaces para el tratamiento, de fluoruracilo incluyen los intervalos siguientes: (a) de 375 a 600 mg/m^{2}, (b) de 400 a 575 mg/m^{2}, (c) de 425 a 550 mg/m^{2}, (d) de 450 a 525 mg/m^{2} y (e) de 475 a 500 mg/m^{2}. En un aspecto, la administración del fluoruracilo se realiza una vez por semana.

Las cantidades terapéuticamente eficaces de la leucovorina se sitúan por ejemplo entre aproximadamente 20 y aproximadamente 500 mg/m^{2}, con preferencia entre 20 y 200 mg/m^{2} del compuesto por tratamiento. Otras cantidades preferidas, terapéuticamente eficaces para el tratamiento, de la leucovorina se sitúan en los intervalos siguientes: (a) de 40 a 180 mg/m^{2}, (b) de 60 a 160 mg/m^{2}, (c) de 80 a 140 mg/m^{2}, (d) de 100 a 120 mg/m^{2} y (e) de 105 a 115 mg/m^{2}. En un aspecto, la administración de la leucovorina se realiza una vez por semana.

Tal como se desprende de los estudios clínicos del fluoruracilo y del fluoruracilo/leucovorina descritos anteriormente, existen en la actualidad una gran variedad de programas para la administración del fluoruracilo o del fluoruracilo/leucovorina en el cáncer colorrectal avanzado. Sin embargo, llama la atención la falta de diferencias entre los resultados de las varias dosis administradas y regímenes de fluoruracilo y de fluoruracilo/leucovorina, la mayoría de dichos regímenes producen leucopenia, diarrea y mucositis en diversos grados. Por lo tanto, el fluoruracilo puede administrarse en dosis comprendidas entre 300 mg/m^{2} y 800 mg/m^{2}, mientras que en la actualidad los regímenes de fluoruracilo que proporcionan una intensidad de dosis comprendida entre 400 y 500 mg/m^{2}/semana se consideran terapéuticamente óptimos. Cuando se incluye la leucovorina en el tratamiento, las diferencias entre los resultados clínicos de una dosis baja y una dosis alta de leucovorina son mínimos, por lo cual, dada la toxicidad adicional del régimen de dosis elevada, en la actualidad se considera más apropiado el régimen de dosis baja.

Por lo tanto, dentro del alcance de la invención, el fluoruracilo o el fluoruracilo/leucovorina pueden administrarse en cualquier manera actualmente aprobada o en cualquier manera que en el futuro se considere eficaz, pero en vista de los datos anteriores, una forma actualmente preferida de ejecución de esta invención consiste en administrar el fluoruracilo en una dosis de 400 a 500 mg/m^{2} en forma de inyección intravenosa de bolo en 1-5 días dentro de un ciclo de 4 semanas. El ciclo de 4 semanas puede repetirse las veces que fuera necesario o hasta que el médico que dirige el tratamiento observe la aparición de efectos secundarios adversos.

La leucovorina puede administrarse con el fluoruracilo. La leucovorina puede administrarse en dosis comprendidas entre 20 y 500 mg/m^{2}, con preferencia entre 20 y 200 mg/m^{2} y en una forma de ejecución actualmente preferida de esta invención en forma de administración de dosis baja en torno a 20 mg/m^{2}, también en forma de inyección de bolo, junto con cada administración de fluoruracilo.

D. Fluoruracilo o fluoruracilo/leucovorina en combinación con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona

Es un aspecto de esta invención que, cuando se administra la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en combinación con el fluoruracilo o el fluoruracilo/ leucovorina, los compuestos puedan administrarse de forma simultánea, sucesiva, continua, intermitente, etc. con arreglo a un régimen de tratamiento calculado para sacar la máxima ventaja de las características de cada uno de los componentes.

Otro aspecto más de esta invención es un régimen de tratamiento que consiste en la administración de 400 a 500 mg/m^{2} de fluoruracilo durante uno o varios días, que puede ser consecutiva o escalonada, después de lo cual se administran de 72 a 145 mg/m^{2} de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en uno o en varios días, dichos días pueden ser igualmente consecutivos o escalonados.

En otro aspecto se pueden administrar también 20 mg/m^{2} de leucovorina en los días en los que se administra el fluoruracilo.

En una forma de ejecución actualmente preferida de esta invención, el anterior régimen de tratamiento es un régimen de tratamiento de cuatro semanas, administrándose el fluoruracilo (y opcionalmente la leucovorina) en una inyección intravenosa de bolo en los días 1, 2, 3, 4 y 5 de la primera semana del régimen de tratamiento, mientras que la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona se administraría en forma de inyección intravenosa de bolo dos veces por semana durante las semanas 2, 3 y 4 del régimen de tratamiento.

En una forma actualmente preferida de ejecución se administra la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en los días en los que no se administra el fluoruracilo ni el fluoruracilo/leucovorina. Por lo tanto, en una forma de ejecución de esta invención, se administra la dosis antes descrita de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en cualquier modelo que se desee; p.ej. y sin limitación, en cada día, en cada día alterno, en cada tercer día, etc. de un régimen de tratamiento seleccionado para el fluoruracilo o el fluoruracilo/leucovorina, en los que no se administre el fluoruracilo ni el fluoruracilo/leucovorina. Puede administrarse la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en forma de inyección intravenosa de bolo o en forma de infusión intravenosa continua. Sin embargo, en base a los datos obtenidos "in vitro", la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona puede administrarse a lo largo de un período de tiempo relativamente corto (de 5 a 30 minutos) y despliega una actividad antiproliferante en las células endoteliales durante los 3 ó 4 días posteriores. De igual manera, los datos "in vivo" demuestran que la dosificación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona a intervalos de 3 ó 4 días es suficiente para inhibir el crecimiento tumoral sin toxicidad. Además no se observa toxicidad acumulada en los estudios de escalonamiento de dosis de fase I en pacientes tratados durante un período de tiempo de hasta 52 semanas. Por lo tanto, en una forma actualmente preferida de ejecución de esta invención, la dosis indicada de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona se administra dos veces por semana en las semanas 2-4 de cada régimen de tratamiento que consta de cuatro semanas.

Se da por supuesto que, a pesar de que la descripción anterior se refiere al uso de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona en combinación con el fluoruracilo o el fluoruracilo/leucovorina, se puede utilizar también dentro del alcance y del espíritu de esta invención otros compuestos de la invención, en particular la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona, en combinación con el fluoruracilo o el fluoruracilo/leucovorina.

E. Otros agentes quimioterapéuticos y/o inhibidores de topoisomerasa I en combinación con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona

En base a la presente descripción cabe esperar que la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona funcione también en combinación con otros agentes quimioterapéuticos.

Por ejemplo, la combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con otros agentes alquilantes puede proporcionar una actividad sinergética sin un aumento concomitante de la toxicidad. Tales agentes alquilantes puede incluir, sin limitación, a los sulfonatos de alquilo; p.ej. el busulfan (empleado para el tratamiento de la leucemia granulocítica crónica), el improsulfan y el piposulfan; las aziridinas, p.ej. la benzodepa, la carboquona, la meturedepa y la uredepa; las etileniminas y las metilmelaminas, p.ej. la altretamina, la trietilenomelamina, la trietilenofosforamida, la trietilenotiofosforamida y la trimetilolmelamina y las mostazas nitrogenadas, p.ej. el clorambucilo (empleado para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica, de la macroglobulinemia primaria y del linfoma no de Hodgkin), las ciclofosfamidas (empleadas para el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin, del mieloma múltiple, del neuroblastoma, del cáncer de mama, del cáncer de ovarios, del cáncer de pulmón, del tumor de Wilm y del rabdomiosarcoma), la estramustina, la ifosfamida, la novembriquina, la prednimustina y la mostaza de uracilo (para la trombocitosis primaria, el linfoma no de Hodgkin, la enfermedad de Hodgkin y el cáncer de ovarios) y las triazinas, p.ej. dacarbazina (empleado para el sarcoma de tejidos blandos).

De igual manera, la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona podría tener un efecto beneficioso combinada con otros agentes quimioterapéuticos antimetabolitos, por ejemplo pero sin limitación: los análogos del ácido fólico (p.ej. el metotrexato (empleado para tratar la leucemia linfocítica aguda, el coriocarcinoma, la micosis fungoides, el cáncer de mama, de cuello, de cabeza y de pulmón, el sarcoma osteogénico) y la pteropterina), los análogos de purina, por ejemplo la mercaptopurina y la tioguanina, que se emplean para el tratamiento de las leucemias granulocítica aguda, linfocítica aguda y granulocítica crónica).

La 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona podría ser también eficaz en combinación con agentes quimioterapéuticos de origen natural, por ejemplo pero sin limitación: los alcaloides de la vinca (vinblastina (empleado para el cáncer de mama y de testículos), la vincristina, la vindesina), las epipodofilotoxinas (etopósidos, tenipósidos (empleados, ambos, para el tratamiento del cáncer testicular y del sarcoma de Kaposi)), los agentes quimioterapéuticos antibióticos (daunorrubicina, doxorrubicina, bleomicina, mitomicina (empleados para el cáncer de estómago, de cuello, de colon, de mama, de vejiga y de páncreas), dactiomicina, plicamicina, bleomicina (empleada para el cáncer de piel, de esófago y del tracto genitourinario) y los agentes quimioterapéuticos enzimáticos, por ejemplo la L-asparaginasa.

En base a la descripción de esta invención, la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona puede beneficiar también la actividad de agentes quimioterapéuticos del tipo complejos de coordinación de platino (cisplatino, etc.), ureas sustituidas (hidroxiurea), derivados de metilhidrazina (procarbazina), supresores adrenocorticoides (mitotano, aminoglutetimida), así como hormonas y antagonistas del tipo adrecorticosteroides (prednisona), progestinas (caproato de hidroxiprogesterona), estrógenos (dietilestilbestrol), antiestrógenos (tamoxifeno) y andrógenos (propionato de testosterona).

Finalmente, la combinación de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona con la mitoxantrona o el paclitaxel cabe esperar que reporte resultados especialmente beneficiosos para el tratamiento de tumores sólidos o de leucemias, por ejemplo pero sin limitación: la leucemia mielógena (no linfocítica) aguda.

Por lo tanto, las cantidades terapéuticamente activas de irinotecan, cisplatino, paclitaxel, gemcitabina y carboplatino constituyen otro aspecto de la invención que se describe seguidamente.

En general, las cantidades terapéuticamente eficaces de irinotecan se sitúan entre 75 y 400 mg/m^{2} de irinotecan por tratamiento. Para la administración preferida de una vez por semana, las cantidades terapéuticamente eficaces de irinotecan por tratamiento se sitúan entre 75 y 150 mg/m^{2} de irinotecan e incluyen las cantidades de los intervalos preferidos: (a) de 75 a 140 mg/m^{2}, (b) de 90 a 135 mg/m^{2}, (c) de 100 a 130 mg/m^{2} y (d) de 115 a 125 mg/m^{2}. Para la administración preferida una vez cada tres semanas, las cantidades terapéuticamente eficaces por tratamiento de irinotecan se sitúan entre 250 y 400 mg/m^{2} de irinotecan e incluye las cantidades comprendidas en los intervalos siguientes: (a) de 275 a 375 mg/m^{2}, (b) de 300 a 350 mg/m^{2} y (c) de 320 a 330 mg/m^{2}.

Las cantidades terapéuticamente eficaces de cisplatino se sitúan por ejemplo entre 40 y 175 mg/m^{2} de cisplatino por tratamiento. Para la administración preferida de una vez por semana, las cantidades de cisplatino terapéuticamente eficaces por tratamiento se sitúan entre 40 y 110 mg/m^{2} de cisplatino e incluyen las cantidades de los intervalos preferidos siguientes: (a) de 50 a 100 mg/m^{2}, (b) de 60 a 90 mg/m^{2}, (c) de 65 a 85 mg/m^{2} y (d) de 70 a 80 mg/m^{2}. Para la administración preferida una vez cada tres semanas, las cantidades terapéuticamente eficaces de cisplatino para el tratamiento se sitúan entre 75 y 175 mg/m^{2} de cisplatino, e incluyen las cantidades comprendidas dentro de los intervalos preferidos siguientes: de 90 a 160 mg/m^{2}, (b) de 100 a 150 mg/m^{2}, (c) de 110 a 140 mg/m^{2} y (d) de 70 a 80 mg/m^{2}.

En general, las cantidades terapéuticamente eficaces de paclitaxel se sitúan entre 80 y 225 mg/m^{2} de paclitaxel por tratamiento. Las cantidades preferidas, terapéuticamente eficaces, de paclitaxel por tratamiento se sitúan en los intervalos siguientes: (a) de 90 a 220 mg/m^{2}, (b) de 100 a 200 mg/m^{2}, (c) de 120 a 180 mg/m^{2} y (d) de 140 a 160 mg/m^{2}. En un aspecto, la administración de paclitaxel se realiza una vez por semana.

Las cantidades terapéuticamente eficaces de gemcitabina se sitúan, por ejemplo, entre 750 y 1250 mg/m^{2} de gemcitabina por tratamiento. Las cantidades preferidas, terapéuticamente eficaces de gemcitabina por tratamiento incluyen las cantidades comprendidas en los intervalos siguientes: (a) de 800 a 1200 mg/m^{2}, (b) de 850 a 1150 mg/m^{2}, (c) de 900 a 1100 mg/m^{2} y (d) de 950 a 1150 mg/m^{2}. En un aspecto, la administración de gemcitabina se realiza una vez por semana.

En general, las cantidades terapéuticamente eficaces de carboplatino contienen una dosis suficiente de tratamiento para producir una AUC (empleando la fórmula de Calvert) de 4 a 8 mg/min/ml, con una dosis preferida para producir una AUC (empleando la fórmula de Calvert) de 6 mg/min/ml. En un aspecto, la administración de gemcitabina se realiza una vez por semana.

5. Envase

Si se desea, las composiciones pueden presentarse en un envase o en dispositivo dispensador, por ejemplo un kit aprobado por la FDA, que puede contener una o varias formas de dosificación unitarias que contienen el ingrediente activo. El envase puede constar por ejemplo de una lámina metálica o plástica, por ejemplo un envase de tipo blíster. El envase o dispositivo dispensador puede ir acompañado de un prospecto adjunto al contenedor en una forma prescrita por un departamento gubernamental competente en regular la fabricación, uso o venta de productos farmacéuticos, dicho prospecto deberá reflejar la aprobación de dicho ministerio de la forma de las composiciones o de la administración humana o veterinaria. Tal prospecto debería ser por ejemplo el prospecto de etiquetado aprobado por la U.S. Food and Drug Administration para los fármacos de prescipción o el prospecto aprobado que se incluye en el envase. Las composiciones que contienen un compuesto de la invención formulado en un vehículo farmacéuticamente compatible pueden también fabricarse, colocarse en un envase apropiado y etiquetarse para el tratamiento del estado patológico indicado. Los estados patológicos apropiados indicados pueden incluir el tratamiento de un tumor, la inhibición de la angiogénesis, el tratamiento de la fibrosis, la diabetes y similares.

Los métodos adicionales de fabricación de formulaciones farmacéuticas de los compuestos, métodos de determinación de las cantidades de los compuestos a administrar a un paciente y los modos de administración de los compuestos a un organismo se han publicado en la solicitud U.S. que lleva el nº de serie 08/702 232, de Tang y col., titulada "Bibliotecas combinatorias de indolinona y productos afines y métodos para el tratamiento de enfermedades", depositada con fecha 23 de agosto de 1996, y la publicación de patente internacional número WO 96/22976, de Buzzetti y col. y titulada "Derivados hidrosolubles de 3-arilideno-2-oxindol como inhibidores de tirosina-quinasa", publicada con fecha 1 de agosto de 1996.

Ejemplos

Los ejemplos que siguen no son limitantes, sino meramente representativo de varios aspectos y características de la presente invención. Los ejemplos describen métodos representativos de la síntesis de compuestos de esta invención, métodos para determinar el efecto de un compuesto en la función de las proteína-quinasas, métodos para medir el efecto de un compuesto en un planteamiento "in vivo" y el modelo de aplicaciones de ensayo clínico humano para ciertas terapias de combinación que contienen compuestos de la invención y uno o varios agentes adicionales para varios cánceres.

Las células empleadas en los métodos son productos comerciales o que pueden adquirir a laboratorios universitarios o que son el resultado de la ingeniería genética aplicada a células comerciales. Los vectores de ácidos nucleicos albergados en las células son también productos comerciales y las secuencias de los genes de varias proteína-quinasas son fácilmente accesibles a partir de bancos de datos de secuencias. Por lo tanto, un experto en la materia podrá recrear fácilmente las líneas celulares en un modo temporal por combinación de células que son comercialmente accesibles, los vectores de ácidos nucleico que son comercialmente accesibles y los genes de proteína-quinasa empleando técnicas fácilmente disponibles para las personas que son expertas en la materia.

Ejemplo 1 Síntesis

Los compuestos de esta invención así como los 2-oxindoles y aldehídos, que son productos previos, pueden sintetizarse fácilmente aplicando técnicas bien conocidas de química orgánica. Los expertos en la materia comprenderán que se pueden aplicar otras técnicas de síntesis para obtener los compuestos de la invención y que las que siguen se presentan únicamente a título ilustrativo pero no limitante.

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A. 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxilato de metilo

Se añade por goteo a 0ºC el oxicloruro de fósforo (0,186 ml, 1,44 mmoles) a una solución de dimetilformamida (0,15 ml, 1,44 mmoles) en diclorometano (4 ml). Se calienta la mezcla a temperatura ambiente y se agita durante 30 minutos, después se enfría a 0ºC. Se añade en porciones el 4-metil-2-pirrolcarboxilato de metilo (100 mg, 0,72 mmoles) y entonces se agita la mezcla a 40-50ºC durante 4 horas. Se añade hidróxido sódico (solución acuosa al 10%, 2 ml) y se agita la mezcla reaccionante durante 30 minutos. Se extrae la solución básica con acetato de etilo (3X) y se lava la fase orgánica con salmuera a pH 6-7, se seca con sulfato sódico anhidro y se concentra con vacío, obteniéndose 115,9 mg (96%) del 4-metil-5-formil-2-pirrolcarboxilato de metilo en forma de aceite amarillo.

Se agita a 90ºC durante 3 horas una mezcla de oxindol (105 mg, 0,79 mmoles), 4-metil-5-formil-2-pirrolcarboxilato de metilo (110 mg, 0,67 mmoles) y piperidina (2 gotas) en etanol (2 ml). Se recoge el precipitado por filtración con vacío, se lava con etanol y se seca con vacío, obteniéndose 153,2 mg (81%) del 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxilato de metilo.

RMN-H^{1} (360 MHz, DMSO-d6), \delta = 13,98 (s, ancha, 1H; NH), 10,97 (s, ancha, 1H, NH), 7,82 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H, H-vinilo), 7,2 (dt, J = 1,2, 7,7 Hz, 1H), 7,01 (dt, J = 1,2, 7,7 Hz, 1H), 6,90 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2Hz, 1H).

EM (ES) = 283 [M+1] (100%).

B. ácido 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxílico

Se añade por goteo el oxicloruro de fósforo (0,66 ml, 7,2 mmoles) a una solución enfriada con hielo de dimetilformamida (0,6 ml, 7,2 mmoles) en diclorometano (30 ml). Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos y después se enfría en un baño de hielo. Se añade lentamente el 4-metil-2-pirrolcarboxilato de etilo (919 mg, 6 mmoles) a la mezcla reaccionante. Entonces se agita la mezcla reaccionante resultante a temperatura ambiente durante 2,4 horas. Se enfría la mezcla en un baño de hielo, se le añade una solución 2N de hidróxido sódico y se agita la mezcla durante 30 minutos. Se extrae la mezcla acuosa con acetato de etilo (2X), se reúnen las fases orgánicas, se lavan con salmuera, se secan con sulfato sódico anhidro y se concentran con vacío. Se seca con vacío a temperatura ambiente durante 3 días el sólido rosa resultante, obteniéndose 1,05 g (96%) del 4-metil-5-formil-2-pirrolcarboxilato de etilo. Se utiliza este producto sin más purificación.

EM (APCI) [M-1]^{+} = 180 (80%); [M-34]^{+} = 146 (100%).

Se mantiene en ebullición a reflujo durante 1/2 hora una mezcla del 4-metil-5-formil-2-pirrolcarboxilato de etilo (543,57 mg, 3 mmoles) en hidróxido sódico 2N (1,2 g en 15 ml de agua). Se enfría la mezcla reaccionante a temperatura ambiente y se vierte sobre agua-hielo. Después se acidifica a pH ~3,5 con ácido clorhídrico 2N y se extrae con acetato de etilo (2X). Se lava la fase orgánica con salmuera, se seca con sulfato sódico anhidro y se concentra con vacío. Se seca el sólido resultante a 40ºC con vacío durante 2 horas, obteniéndose 410 mg (89%) del ácido 4-metil-5-formil-2-pirrolcarboxílico en forma de sólido blanco.

Se mantiene en ebullición a reflujo durante 3 horas una mezcla de oxindol (133,15 mg, 1 mmol), ácido 4-metil-5-formil-2-pirrolcarboxílico (153,14 mg, 1 mmol), piperidina (2 gotas) y etanol (2 ml). Se recoge el precipitado por filtración con vacío, se lava con etanol, se neutraliza con ácido clorhídrico 2N, se lava con agua y se seca, obteniéndose 268,5 mg (100%) del ácido 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxílico en forma de sólido de color rojo anaranjado.

RMN-H^{1} (360 MHz, DMSO-d6) \delta = 13,84 (s, ancha, 1H, NH), 12,84 (s, ancha, 1H, COOH), 10,98 (s, ancha, 1H, NH), 7,82 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H, H-vinilo), 7,18 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,01 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,88 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 2,32 (s, 3H, CH_{3}).

EM (modo negativo) = 266,8 [M-1]^{+}.

C. 3-(5-hidroximetil-3-metil-1H-pirrol-2-ilmetileno)-1,3-dihidroindol-2-ona

y

D. 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidro-indol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxaldehído

A una suspensión del ácido 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxílico (4,02 g, 15 mmoles) en tetrahidrofurano (50 ml) se le añade lentamente a 0ºC el cloruro de oxalilo (3,80 g, 30 mmoles). Una vez finalizada la adición, se agita la suspensión resultante a temperatura ambiente durante 2 horas. Entonces se añade en porciones el borhidruro sódico (1,14 g, 30 mmoles) a la mezcla y se continúa la agitación de la suspensión a temperatura ambiente durante 1 día. Entonces se añade una segunda porción de 1,14 g de borhidruro sódico y 10 ml de dimetilformamida para disolver los sólidos y se agita la mezcla reaccionante a temperatura ambiente durante un día más. Se añade agua-hielo a la mezcla reaccionante enfriada con hielo hasta que cese el desprendimiento de gases. Se extrae la fase acuosa con acetato de etilo. Se filtra el precipitado formado entre la fase acuosa y la fase orgánica, se lava con agua y acetato de etilo y se seca, obteniéndose 2,5 g (60%) de un sólido rojo. Se lava la fase orgánica con salmuera, se seca con sulfato sódico anhidro, se concentra y se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con acetato de etilo-hexano, de este modo se obtienen 340 mg (9%) de la 3-(5-hidroximetil-3-metil-1H-pirrol-2-ilmetileno)-1,3-dihidroindol-2-ona en forma de sólido amarillo y 540 mg (14%) del 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carbaldehído en forma de sólido anaranjado.

3-(5-hidroximetil-3-metil-1H-pirrol-2-ilmetileno)-1,3-dihidroindol-2-ona

RMN-H^{1} (360 MHz, DMSO-d6) \delta = 13,39 (s, ancha, 1H, NH), 10-60 (s, ancha, 1H, NH), 7,70 (d, J =7,6 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H, H-vinilo), 7,09 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,96 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,06 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 5,33 (t, J = 5,6 Hz, 1H, OH), 4,51 (d, J = 5,6 Hz, 2H, CH2OH), 2,31 (s, 3H, CH_{3}).

EM = 251 [M-1]^{+} (100%).

p.f. = >350ºC.

4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carbaldehído

RMN-H^{1} (360 MHz, DMSO-d6) \delta = 13,87 (s, ancha, 1H, NH), 11,05 (s, ancha, 1H, NH), 9,61 (s, 1H, CHO), 7,85 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H, H-vinilo), 7,23 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,03 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 6,97 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,9 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 2,36 (s, 3H, CH ).

EM = 237,4 [M-OH]^{+} (100%).

p.f. = 267,3-268,4ºC.

Ejemplo 2 Medición del efecto del compuesto en la función de la PK

Se observará que, con cada serie de compuestos, se obtiene un espectro de actividades biológicas. En sus formas preferidas de ejecución, esta invención se refiere a nuevas 3-heteroarilidenil-2-indolinonas que poseen la capacidad de modular la actividad de las RTK, CTK y STK. Se realizan los ensayos siguientes para seleccionar aquellos compuestos que poseen un grado óptimo de la actividad deseada.

A. Procedimientos de ensayo

Pueden utilizarse los ensayos "in vitro" para determinar el nivel de actividad y el efecto de los diferentes compuestos de la presente invención en una o en varias de las PK. Pueden diseñarse ensayos similares en la misma línea para cualquier PK aplicando técnicas ya conocidas.

Los ensayos celulares/catalíticos que aquí se describen se realizan en un formato ELISA. El procedimiento general es el siguiente: se introduce un compuesto en células que expresan la quinasa a ensayar, ya sea de modo natural, ya sea de modo recombinante, durante un período de tiempo predeterminado, después de lo cual si la quinasa a ensayar es un receptor, se añade un ligando conocido para activar el receptor. Se lisan las células y se transfiere el lisado a los hoyos de una placa ELISA recubiertos previamente con un anticuerpo específico que reconozca el sustrato de la reacción de fosforilación enzimática. Se eliminan por lavado los componentes no sustrato del lisado celular y se determina la cantidad de fosforilación del sustrato con un anticuerpo que reconozca específicamente la fosfotirosina, se compara el resultado con el obtenido con células de control que no han tenido contacto con un compuesto de ensayo. Los ensayos celulares/biológicos aquí descritos miden la cantidad de DNA formado como respuesta a la activación de una quinasa a ensayar, que es un índice general de la respuesta proliferativa. El procedimiento general de este ensayo es el siguiente: se introduce un compuesto en las células que expresan la quinasa a ensayar, ya sea de modo natural, ya sea recombinante, durante un período predeterminado de tiempo, después del cual, si la quinasa a ensayar es un receptor, se añade un ligando conocido para activar dicho receptor. Después de la incubación por lo menos durante una noche, se añade un reactivo de marcado de DNA, por ejemplo la bromodesoxiuridina (BrdU) o la 3H-timidina. Se detecta la cantidad de DNA marcado ya sea con un anticuerpo anti-BrdU, ya sea midiendo la radiactividad y se compara con las células de control que no han tenido contacto con el compuesto de ensayo.

B. Ensayos celulares/catalíticos

Pueden utilizarse ensayos inmunosorbentes unidos a enzima (ELISA) para detectar y medir la presencia de actividad de PK. Los ensayos ELISA pueden realizarse con arreglo a métodos ya conocidos, que se describen por ejemplo en Voller y col., "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay", en: Manual of Clinical Immunology, 2ª ed., 1980, coordinado por Rose y Friedman, pp. 359-371, Am. Soc. of Microbiology, Washington, D.C.

El método publicado puede adaptarse para determinar la actividad con respecto a una PK específica. Es decir, a continuación se describen los métodos preferidos para realizar los ensayos ELISA para PK específicas. Sin embargo, la adaptación de estos protocolos a la determinación de la actividad de un compuesto para otros componentes del grupo de las RTK, así como del grupo de las CTK y de las STK, forma parte del alcance de los conocimientos de los expertos en la materia.

Ejemplo 3 Modelos animales "in vivo" A. Modelos animales de injerto ajeno (xenograft)

La capacidad de los tumores humanos de crecer como injertos ajenos en ratones atímicos (p.ej. ratones Balb/c, ratones nu/nu) proporciona un modelo "in vivo" útil para estudiar la respuesta biológica a las terapias de tumores humanos. Después del éxito del primer trasplante ajeno de tumores humanos en ratones atímicos (Rygaard y Povlsen, Acta Pathol. Microbial. Scand. 77, 758-760, 1969), se han trasplantado y cultivado con éxito muchas líneas celulares diferentes de tumores humanos (p.ej. de mama, pulmón, genitourinario, gastrointestinal, cuello y cabeza, glioblastoma, hueso y melanomas malignos) en ratones desnudos (sin pelo). Se utilizan los siguientes ensayos para determinar el nivel de actividad, la especificidad y el efecto de los diferentes compuestos de la presente invención. Son útiles tres tipos generales de ensayos para evaluar los compuestos: celular/ catalítico, celular/biológico e "in vivo". El objeto de los ensayos celulares/catalíticos es determinar el efecto de un compuesto en la capacidad de una TK de fosforilar tirosinas de un sustrato conocido de una célula. El objeto de los ensayos celulares/biológicos consiste en determinar el efecto de un compuesto en la respuesta biológica estimulada por una TK en una célula. El objeto de los ensayos "in vivo" es determinar el efecto de un compuesto en un modelo animal de un trastorno particular, por ejemplo el
cáncer.

Las líneas celulares idóneas para los ensayos de heterotrasplante subcutáneo incluyen las células C6 (glioma, ATCC nº CCL 107), las células A375 (melanoma, ATTC nº CRL 1619), las células A431 (carcinoma epidermoide, ATCC nº CRL 1555), células Calu 6 (pulmón, ATCC nº HTB 56), células PC3 (próstata, ATCC nº CRL 1435), células SKOV3TP5 y fibroblastos NIH 3T3 diseñados genéticamente para sobreexpresar el EGFR, el PDGFR, el EGF-1R o cualquier otra quinasa a estudiar. Puede utilizarse el protocolo siguiente para realizar los ensayos de heterotrasplante.

Se obtienen los ratones atímicos hembras (BALB/c, nu/nu) de los Simonsen Laboratories (Gilroy, CA). Se mantienen todos los animales en condiciones de recinto limpio en jaulas micro-aislantes con cama del tipo Alpha-dri. Reciben pienso estéril para roedores y agua a discreción.

Se cultivan las líneas celulares en un medio apropiado (por ejemplo: MEM, DMEM, Ham's F10 o Ham's F12 más 5% - 10% de suero fetal bovino (FBS) y glutamina 2 mM (GLN)). Todos los medios de cultivo celular, la glutamina y el suero fetal bovino se adquieren a Gibco Life Technologies (Grand Island, NY), a menos que se indique lo contrario. Se cultivan las células a 37ºC en atmósfera húmeda con un 90-95% de aire y un 5-10% de CO_{2}. Todas las líneas celulares se subcultivan de forma rutinaria dos veces por semana y son negativas en cuanto a micoplasma, según se determina por el método Mycotect (Gibco).

Se recolectan las células en o casi en confluencia con un 0,05% de tripsina-EDTA y se centrifugan a 450 rpm durante 10 min. Se suspenden de nuevo los culotes en PBS estéril o en medio (sin FBS) hasta una concentración concreta y se implantan las células en la ijada trasera de los ratones (8-10 ratones por grupo, 2-10 x 10^{6} células/animal). Se mide el crecimiento tumoral durante 3-6 semanas empleando un calibre Venier. Se calculan los volúmenes de los tumores como el producto de la longitud x la anchura x la altura, a menos que se diga lo contrario, Los valores P se calculan empleando el test t de Student. Los compuestos a ensayar en 50 - 100 \mul de excipiente (DMSO o VPD:D5W) pueden entregarse por inyección i.p. en diferentes concentraciones, empezando por lo general en el día uno después de la implantación.

Modelo de invasión tumoral

Se ha desarrollado el siguiente modelo de invasión tumoral, que puede utilizarse para evaluar el valor terapéutico y la eficacia de los compuestos identificados como inhibidores selectivos del receptor KDR-FLK-1 (VEGFR-2).

Procedimiento

Como animales experimentales se emplean ratones desnudos (= sin pelo) hembras de 8 semanas de edad (Simonsen Inc.). La implantación de células tumorales puede realizarse en una campana de flujo laminar. Para la anestesia se administra por vía intraperitoneal un cóctel de xilazina-cetamina (100 mg/kg de cetamina y 5 mg/kg de xilazina). Se realiza una incisión central para exponer la cavidad abdominal (longitud aproximada: 1,5 cm) para inyectar 10^{7} células tumorales en un volumen de 100 \mul de medio. Se inyectan las células en el lóbulo duodenal del páncreas o debajo de la serosa del colon. Se cierran el peritoneo y los músculos con sutura continua de seda 6-0 y se cierra la cicatriz de la piel empleando grapas. Se observan los animales a diario.

Análisis

Después de 2-6 semanas, en función de las observaciones a simple vista de los animales, se sacrifican los ratones y se extirpan las metástasis tumorales locales de varios órganos (pulmón, hígado, cerebro, estómago, bazo, corazón, músculos) y se analizan (medición del tamaño del tumor, grado de invasión, inmunoquímica, determinación de la hibridación "in situ", etc.).

Ejemplo 4 Aplicaciones clínicas modelo humanas

Los siguientes ejemplos constituyen formas de ejecución preferidas no limitantes de los regímenes de administración de agente(s) y componente(s) específico(s) para tratar o prevenir cánceres específicos con arreglo al método de la invención en aplicaciones clínicas modelo humanas. Las dosificaciones y los regímenes de dosificación de los diversos agentes pueden variarse si se considera necesario o deseable y las dosificaciones y regímenes de dosificación del compuesto indolinona mencionado a continuación (3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2)) pueden aplicarse a la administración de otros compuestos de 3-heteroarilidenil-2-indolinona empleados con arreglo a la presente invención. En concreto, la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 1) está contemplada para utilizarse en dosificaciones y regímenes de dosificación menores que los de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2).

A. Administración de una combinación de la estructura 2, CPT11, 5-FU y leucovorina para el tratamiento del cáncer colorrectal

Los pacientes de cáncer colorrectal pueden tratarse mediante la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) co-administrada con el clorhidrato de irinotecan (CPT11), el fluoruracilo (5-FU) y la leucovorina.

La administración del CPT11 puede realizarse en una dosis de 125 mg/m^{2} mediante infusión continua durante 90 minutos, seguida de la administración de 500 mg/m^{2} de 5-FU y 20 mg/m^{2} de leucovorina (ya sea mediante inyección i.v. de bolo, ya sea mediante infusión continua durante 30-90 minutos), una vez por semana durante cuatro semanas dentro de un marco temporal de seis semanas.

La administración de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) puede realizarse en una dosis de 4,4 a 190 mg/m^{2} y con preferencia en una dosis de 85 mg/m^{2} a 145 mg/m^{2}, dos veces por semana, por infusión intravenosa durante 30-60 minutos, empezando el día 1 de cada ciclo de seis semanas. Cuando se co-administra la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) el mismo día que el CPT11, el 5-FU y la leucovorina, la infusión de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) se realizará antes que la de los fármacos restantes.

Las medicaciones previas a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) pueden administrarse a los pacientes unos 30-60 minutos antes de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2), dicha medicaciones incluyen 25 mg de difenhidramina, 20 mg de famotidina y 2-10 mg de dexametasona.

La evaluación del progreso del tratamiento puede realizarse cada 6 semanas (después de 4 tratamientos de quimioterapia).

B. Administración de una combinación de la estructura 2, el CPT11 y el cisplatino para el tratamiento de tumores sólidos

Los pacientes de tumores sólidos pueden tratarse con la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) co-administrada con el clorhidrato de irinotecan (CPT11) y el cisplatino.

La administración del CPT11 puede realizarse en una dosis de 125 mg/m^{2} mediante infusión continua durante 90 minutos, seguida de la administración de 100 mg/m^{2} de cisplatino (ya sea mediante inyección i.v. de bolo, ya sea mediante infusión continua durante 30-90 minutos), una vez por semana durante cuatro semanas dentro de un marco temporal de seis semanas.

La administración de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) puede realizarse en una dosis de 4,4 a 190 mg/m^{2} y con preferencia en una dosis de 85 mg/m^{2} a 145 mg/m^{2}, dos veces por semana, por infusión intravenosa durante 30-60 minutos, empezando el día 1 de cada ciclo de seis semanas. Cuando se co-administra la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) el mismo día que el CPT11 y el cisplatino, la infusión de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) se realizará antes que la de los fármacos restantes.

Las medicaciones previas a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) pueden administrarse a los pacientes unos 30-60 minutos antes de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2), dicha medicaciones incluyen 25 mg de difenhidramina, 20 mg de famotidina y 2-10 mg de dexametasona.

La evaluación del progreso del tratamiento puede realizarse cada 6 semanas (después de 4 tratamientos de quimioterapia).

C. Administración de una combinación de la estructura 2 y CPT11 para tratar el cáncer colorrectal

Los pacientes de cáncer colorrectal pueden tratarse mediante la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) co-administrada con el clorhidrato de irinotecan (CPT11).

La administración del CPT11 puede realizarse en una dosis de 125 mg/m^{2} mediante infusión continua durante 90 minutos, una vez por semana durante cuatro semanas dentro de un marco temporal de seis semanas.

La administración de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) puede realizarse en una dosis de 4,4 a 190 mg/m^{2} y con preferencia en una dosis de 85 mg/m^{2} a 145 mg/m^{2}, dos veces por semana, por infusión intravenosa durante 30-60 minutos, empezando el día 1 de cada ciclo de seis semanas. Cuando se co-administra la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) el mismo día que el CPT11, la infusión de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) se realizará antes que la de los fármacos restantes.

Las medicaciones previas a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) pueden administrarse a los pacientes unos 30-60 minutos antes de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2), dicha medicaciones incluyen 25 mg de difenhidramina, 20 mg de famotidina y 2-10 mg de dexametasona.

La evaluación del progreso del tratamiento puede realizarse cada 6 semanas (después de 4 tratamientos de quimioterapia).

Este tipo de tratamiento es especialmente útil para pacientes de cáncer colorrectal, en los que haya fracasado la terapia con 5-FU.

D. Administración de una combinación de la estructura 2, CPT11 y cisplatino para el tratamiento de cáncer de pulmón de células no pequeñas

Los pacientes de cáncer de pulmón de células no pequeñas pueden tratarse mediante la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) co-administrada con el clorhidrato de irinotecan (CPT11) y cisplatino.

La administración del CPT11 puede realizarse en una dosis de 125 mg/m^{2} mediante infusión continua durante 90 minutos, seguida de la administración de 100 mg/m^{2} de cisplatino (ya sea mediante inyección i.v. de bolo, ya sea mediante infusión continua durante 30-90 minutos), una vez por semana durante cuatro semanas dentro de un marco temporal de seis semanas.

La administración de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) puede realizarse en una dosis de 4,4 a 190 mg/m^{2} y con preferencia en una dosis de 85 mg/m^{2} a 145 mg/m^{2}, dos veces por semana, por infusión intravenosa durante 30-60 minutos, empezando el día 1 de cada ciclo de seis semanas. Cuando se co-administra la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) el mismo día que el CPT11 y el cisplatino, la infusión de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) se realizará antes que la de los fármacos restantes.

Las medicaciones previas a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) pueden administrarse a los pacientes unos 30-60 minutos antes de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2), dicha medicaciones incluyen 25 mg de difenhidramina, 20 mg de famotidina y 2-10 mg de dexametasona.

La evaluación del progreso del tratamiento puede realizarse cada 6 semanas (después de 4 tratamientos de quimioterapia).

E. Administración de una combinación de la estructura 2, carboplatino y paclitaxel para el tratamiento de cáncer de pulmón de células no pequeñas

Los pacientes de cáncer de pulmón de células no pequeñas pueden tratarse mediante la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) co-administrada con el carboplatino y el paclitaxel.

La administración del CPT11 puede realizarse en una dosis de 125 mg/m^{2} mediante infusión continua durante 90 minutos, seguida de la administración de paclitaxel y carboplatino del modo siguiente: el paclitaxel en una dosis de 225 mg/m^{2} cada tres semanas en forma de infusión de tres horas, seguido por el carboplatino administrado hasta una AUC de 6 mg/min/ml según la fórmula de Calvert, cada tres semanas (mediante una infusión de 15 minutos).

La administración de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) puede realizarse en una dosis de 4,4 a 190 mg/m^{2} y con preferencia en una dosis de 85 mg/m^{2} a 145 mg/m^{2}, dos veces por semana, por infusión intravenosa durante 30-60 minutos, empezando el día 1 de cada ciclo de seis semanas. Cuando se co-administra la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) el mismo día que el CPT11, el carboplatino y el paclitaxel, la infusión de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) se realizará antes que la de los fármacos restantes.

\newpage

Las medicaciones previas a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) pueden administrarse a los pacientes unos 30-60 minutos antes de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2), dicha medicaciones incluyen 25 mg de difenhidramina, 20 mg de famotidina y 2-10 mg de dexametasona.

La evaluación del progreso del tratamiento puede realizarse cada 9 semanas (después de 3 tratamientos de quimioterapia).

F. Administración de una combinación de la estructura 2, cisplatino y gemcitabina para el tratamiento de cáncer de tumor sólido

Los pacientes de cáncer de tumor sólido pueden tratarse mediante la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) co-administrada con el cisplatino y la gemcitabina.

La administración del cisplatino y la gemcitabina puede realizarse una vez por semana del modo siguiente: el cisplatino en una dosis de 100 mg/m^{2}, seguido por la gemcitabina en una dosis de 1000 mg/m^{2}.

La administración de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) puede realizarse en una dosis de 4,4 a 190 mg/m^{2} y con preferencia en una dosis de 85 mg/m^{2} a 145 mg/m^{2}, dos veces por semana, por infusión intravenosa durante 30-60 minutos, empezando el día 1 de cada ciclo de seis semanas. Cuando se co-administra la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) el mismo día que el cisplatino y la gemcitabina, la infusión de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) se realizará antes que la de los fármacos restantes.

Las medicaciones previas a la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2) pueden administrarse a los pacientes unos 30-60 minutos antes de la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona (estructura 2), dicha medicaciones incluyen 25 mg de difenhidramina, 20 mg de famotidina y 2-10 mg de dexametasona.

La evaluación del progreso del tratamiento puede realizarse cada 6 semanas (después de 6 tratamientos de quimioterapia).

Conclusión

Se habrá apreciado, pues, que las 3-heteroarilidenil-2-indolinonas se espera que tengan un efecto beneficioso en la eficacia quimioterapéutica de diversos agentes quimioterapéuticos e inhibidores de topoisomerasa I, en particular el irinotecan (CPT11) y/o los compuestos de pirimidina fluorada. Además, se espera que la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona junto con el CPT11 o el fluoruracilo o el fluoruracilo/leucovorina formen una combinación quimioterapéutica eficaz para el tratamiento del cáncer colorrectal.

Se apreciará además que se espera que los compuestos, métodos y composiciones farmacológicas de la presente invención modulen la actividad de las RT y de las CTK y, de este modo, sean eficaces como agentes terapéuticos contra los trastornos mediados por las RTK y las CTK.

Claims (50)

1. Uso de (a) cantidades terapéuticamente eficaces por lo menos de dos agentes elegidos entre el grupo formado por los inhibidores de la topoisomerasa I, los agentes quimioterapéuticos, la leucovorina y las combinaciones de los mismos, con la condición de que el agente quimioterapéutico no sea el paclitaxel; y (b) una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la siguiente estructura química:

\vskip1.000000\baselineskip

7

\vskip1.000000\baselineskip

en la que:

R_{1} es H o alquilo;

R_{2} es O o S;

R_{3} es hidrógeno;

R_{4}, R_{5}, R_{6} y R_{7} con independencia entre sí se eligen entre el grupo formado por hidrógeno, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, alcarilo, alcariloxi, halógeno, trihalometilo, S(O)R, SO_{2}NRR', SO_{3}R, SR, NO_{2}, NRR', OH, CN, C(O)R, OC(O)R, (CH_{2})_{n}CO_{2}R y CONRR';

A es un anillo heteroarilo de cinco eslabones, elegido entre el grupo formado por tiofeno, pirrol, pirazol, imidazol, 1,2,3-triazol, 1,2,4-triazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, 2-sulfinilfurano, 4-alquilfurano, 1,2,3-oxadiazol, 1,2,4-oxatriazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,4-tiadiazol, 1,2,5-tiadiazol, 1,3,4-tiadiazol, 1,2,3,4-tiatriazol, 1,2,3,5-tiatriazol y tetrazol, opcionalmente sustituidos en una o en varias posiciones por alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, alcarilo, alcariloxi, halógeno, trihalometilo, S(O)R, SO_{2}NRR', SO_{3}R, SR, NO_{2}, NRR', OH, CN, C(O)R, OC(O)R, (CH_{2})_{n}CO_{2}R o CONRR';

n es un número de 0 a 3 y

R y R' con independencia entre sí se eligen entre el grupo formado por alquilo y arilo;

o una sal o un profármaco fisiológicamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho compuesto se elige entre el grupo formado por la 5-hidroxi-3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona, el ácido 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxílico, el 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carboxilato de metilo, la 3-(5-hidroximetil-3-metil-1H-pirrol-2-ilmetileno)-1,3-dihidroindol-2-ona y el 4-metil-5-(2-oxo-1,2-dihidroindol-3-ilidenometil)-1H-pirrol-2-carbaldehído y las sales o los profármacos fisiológicamente aceptables de los mismos.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho compuesto es la 3-[4-(2-carboxietil-3,5-dimetilpirrol-2-il)metilidenil]-2-indolinona o la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

4. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho agente contiene un inhibidor de topoisomerasa I.

5. El uso de la reivindicación 4, en el que dicho inhibidor de topoisomerasa I es el irinotecan.

6. El uso de la reivindicación 5, en el que dicho irinotecan se administra por vía oral o parenteral.

7. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho agente contiene un agente quimioterapéutico elegido entre el grupo formado por la capecitabina, los agentes quimioterapéuticos de pirimidina fluorada, el carboplatino, el cisplatino, el oxaliplatino, el docetaxel, los taxanos poliglutamados, las talidomidas, el tamoxifeno, la leuprolida, las angiostatinas, las endostatinas, los inhibidores de metal-proteasas de matriz, las interferonas, la doxorrubicina, la doxorrubicina liposómica, la danorrubicina, la metoxantrona, la estramucina, un alcaloide de la vinca, la gemcitabina, el 2-metoxiestradiol y combinaciones adecuadas de los mismos.

8. El uso de la reivindicación 7, en el que dicho agente quimioterapéutico se elige entre el grupo formado por el cisplatino, una combinación de carboplatino y un agente quimioterapéutico de pirimidina fluorada y una combinación de cisplatino y gemcitabina.

9. El uso de la reivindicación 8, en el que dicho agente quimioterapéutico de pirimidina fluorada se elige entre el grupo formado por el carmofur, la doxifluridina, el fluoruracilo, la floxuridina, el tegafur, la capecitabina y el uracil-ftorafur.

10. El uso de la reivindicación 8, en el que dicho agente quimioterapéutico de pirimidina fluorada es el fluoruracilo.

11. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer es un cáncer de tumor sólido.

12. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer se elige entre el grupo formado por el cáncer de mama, cáncer gástrico, cáncer de ovarios, cáncer renal, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer de vejiga, cáncer de próstata, cáncer colorrectal y cáncer de pulmón de células no pequeñas.

13. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer es un cáncer colorrectal, dicho agente contiene un inhibidor de topoisomerasa I, un agente quimioterapéutico y la leucovorina, y dicho compuesto es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

14. El uso de la reivindicación 13, en el que dicho inhibidor de topoisomerasa I es el irinotecan y dicho agente quimioterapéutico es el fluoruracilo.

15. El uso de la reivindicación 14, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz se sitúa entre aproximadamente 4 mg/m^{2} y aproximadamente 195 mg/m^{2} por tratamiento.

16. El uso de la reivindicación 15, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz del irinotecan se sitúa entre 75 mg/m^{2} y 400 mg/m^{2} por tratamiento, la cantidad terapéuticamente eficaz del fluoruracilo se sitúa entre 375 mg/m^{2} y 600 mg/m^{2} por tratamiento y la cantidad terapéuticamente eficaz de la leucovorina se sitúa entre 20 mg/m^{2} y 200 mg/m^{2} por tratamiento.

17. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer es un tumor sólido, dicho agente contiene un inhibidor de topoisomerasa I y un agente quimioterapéutico y dicho compuesto es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

18. El uso de la reivindicación 17, en el que dicho inhibidor de la topoisomerasa I es el irinotecan.

19. El uso de la reivindicación 18, en el que dicho agente quimioterapéutico es el cisplatino.

20. El uso de la reivindicación 19, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de dicho compuesto se sitúa entre 4 mg/m^{2} y 195 mg/m^{2} por tratamiento.

21. El uso de la reivindicación 20, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz del irinotecan se sitúa entre 75 mg/m^{2} y 400 mg/m^{2} por tratamiento y la cantidad terapéuticamente eficaz del cisplatino se sitúa entre 40 mg/m^{2} y 175 mg/m^{2} por tratamiento.

22. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer es un cáncer de tumor sólido, dicho agente contiene un inhibidor de topoisomerasa I y dicho compuesto es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

23. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer es un cáncer colorrectal, dicho agente contiene un inhibidor de topoisomerasa I y dicho compuesto es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

24. El uso de la reivindicación 23, en el que dicho inhibidor de topoisomerasa I es el irinotecan.

25. El uso de la reivindicación 24, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de dicho compuesto se sitúa entre 4 mg/m^{2} y 195 mg/m^{2} por tratamiento.

26. El uso de la reivindicación 25, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz del irinotecan se sitúa entre 75 mg/m^{2} y 400 mg/m^{2} por tratamiento.

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27. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer es un cáncer de pulmón de células no pequeñas, dicho agente contiene un inhibidor de topoisomerasa I y dicho compuesto es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

28. El uso de la reivindicación 27, en el que dicho agente contiene además un agente quimioterapéutico.

29. El uso de la reivindicación 28, en el que dicho inhibidor de topoisomerasa I es el irinotecan.

30. El uso de la reivindicación 29, en el que dicho agente quimioterapéutico es el cisplatino.

31. El uso de la reivindicación 30, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de dicho compuesto se sitúa entre 4 mg/m^{2} y 195 mg/m^{2} por tratamiento.

32. El uso de la reivindicación 31, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de irinotecan se sitúa entre 75 mg/m^{2} y 400 mg/m^{2} por tratamiento y la cantidad terapéuticamente eficaz del cisplatino se sitúa entre 40 mg/m^{2} y 175 mg/m^{2} por tratamiento.

33. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 16, 21, 26 y 32, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de irinotecan se sitúa entre 75 mg/m^{2} y 150 mg/m^{2} por tratamiento y en el que el tratamiento con irinotecan se realiza una vez por semana, o bien el que la cantidad terapéuticamente eficaz de irinotecan se sitúa entre 250 mg/m^{2} y 400 mg/m^{2} por tratamiento y en el que el tratamiento con irinotecan se realiza una vez cada tres semanas.

34. El uso de las reivindicaciones 21 ó 32, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de cisplatino se sitúa entre 40 mg/m^{2} y 110 mg/m^{2} por tratamiento y en el que el tratamiento con cisplatino se realiza una vez por semana, o bien en el que la cantidad terapéuticamente eficaz de cisplatino se sitúa entre 75 mg/m^{2} y 175 mg/m^{2} por tratamiento y en el que el tratamiento con cisplatino se realiza una vez cada tres semanas.

35. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 14, 19, 24 y 30, en el que dicho irinotecan se administra por vía oral o parenteral.

36. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer es un cáncer de pulmón de células no pequeñas, dicho agente contiene un agente quimioterapéutico y dicho compuesto es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

37. El uso de la reivindicación 1, en el que dicho cáncer es un cáncer de tumor sólido, dicho agente contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente quimioterapéutico y dicho compuesto es la 3-[(2,4-dimetilpirrol-5-il)metilidenil]-2-indolinona.

38. El uso de la reivindicación 37, en el que dicho cáncer de tumor sólido es un cáncer pancreático o un cáncer de pulmón de células no pequeñas.

39. El uso de la reivindicación 38, en el que dicho agente quimioterapéutico contiene una combinación de cisplatino y gemcitabina.

40. El uso de la reivindicación 39, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto se sitúa entre 4 mg/m^{2} y 195 mg/m^{2} por tratamiento.

41. El uso de la reivindicación 40, en el que la cantidad terapéuticamente eficaz del cisplatino se sitúa entre 40 mg/m^{2} y 175 mg/m^{2} por tratamiento y la cantidad terapéuticamente eficaz de la gemcitabina se sitúa entre 750 mg/m^{2} y 1250 mg/m^{2} por tratamiento.

42. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 13, 19, 24 y 39, en el que la administración se efectúa mediante infusión continua o mediante inyección i.v. de bolo.

43. Una combinación para el tratamiento del cáncer que consta de: (a) (a) cantidades terapéuticamente eficaces por lo menos de dos agentes elegidos entre el grupo formado por los inhibidores de la topoisomerasa I, los agentes quimioterapéuticos, la leucovorina y las combinaciones de los mismos, con la condición de que el agente quimioterapéutico no sea el paclitaxel; y (b) una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que tiene la siguiente estructura química:

8

en la que:

R_{1} es H o alquilo;

R_{2} es O o S;

R_{3} es hidrógeno;

R_{4}, R_{5}, R_{6} y R_{7} con independencia entre sí se eligen entre el grupo formado por hidrógeno, alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, alcarilo, alcariloxi, halógeno, trihalometilo, S(O)R, SO_{2}NRR', SO_{3}R, SR, NO_{2}, NRR', OH, CN, C(O)R, OC(O)R, (CH_{2})_{n}CO_{2}R y CONRR';

A es un anillo heteroarilo de cinco eslabones, elegido entre el grupo formado por tiofeno, pirrol, pirazol, imidazol, 1,2,3-triazol, 1,2,4-triazol, oxazol, isoxazol, tiazol, isotiazol, 2-sulfinilfurano, 4-alquilfurano, 1,2,3-oxadiazol, 1,2,4-oxatriazol, 1,2,3-tiadiazol, 1,2,4-tiadiazol, 1,2,5-tiadiazol, 1,3,4-tiadiazol, 1,2,3,4-tiatriazol, 1,2,3,5-tiatriazol y tetrazol, opcionalmente sustituidos en una o en varias posiciones por alquilo, alcoxi, arilo, ariloxi, alcarilo, alcariloxi, halógeno, trihalometilo, S(O)R, SO_{2}NRR', SO_{3}R, SR, NO_{2}, NRR', OH, CN, C(O)R, OC(O)R, (CH_{2})_{n}CO_{2}R o CONRR';

n es un número de 0 a 3 y

R y R' con independencia entre sí se eligen entre el grupo formado por alquilo y arilo;

o una sal o un profármaco fisiológicamente aceptable del mismo.

44. El uso de una combinación de la reivindicación 43 para la fabricación de un medicamento destinado a tratar o prevenir un trastorno relacionado con una proteína-quinasa en un paciente, que consiste en administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de dicha combinación a dicho paciente.

45. El uso de la reivindicación 44, en el que dicho trastorno relacionado con una proteína-quinasa se elige entre el grupo formado por los trastornos relacionados con proteína-tirosina-quinasas de receptor, los trastornos de tirosina-quinasa celular y los trastornos relacionados con la serina-treonina-quinasa, o en el que dicho trastorno relacionado con las proteína-quinasas es un cáncer elegido entre el grupo formado por el carcinoma de células escamosas, el astrocitoma, el glioblastoma, el cáncer de pulmón, el cáncer de vejiga, el cáncer de cabeza y cuello, el melanoma, el cáncer de ovarios, el cáncer de próstata, el cáncer de mama, el cáncer de pulmón de células pequeñas, el cáncer colorrectal, el cáncer de pulmón de células no pequeñas y el glioma, o en el que dicho trastorno relacionado con las proteína-quinasas se elige entre el grupo formado por la diabetes, un trastorno autoinmune, un trastorno de hiperproliferación, la restenosis, la fibrosis, la psoriasis, la osteoartritis, la artritis reumatoide, un trastorno inflamatorio y la angiogénesis.

46. El uso de una combinación de la reivindicación 43 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento del cáncer, que consiste en administrar a un paciente que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de dicha combinación.

47. El uso de la reivindicación 46, en el que dicho cáncer es un cáncer pancreático.

48. El uso de la reivindicación 43, en el que dicho agente contiene un agente quimioterapéutico elegido entre el grupo formado por el carboplatino, la doxorrubicina liposómica, el topotecan y las combinaciones de los mismos.

49. El uso de la reivindicación 48, en el que dicho cáncer se elige entre el grupo formado por el cáncer de ovarios, el cáncer de pulmón de células pequeñas y el cáncer de riñón.

50. Una composición farmacéutica que contiene una combinación de la reivindicación 43 y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.