ES2244659T3 - Derivados de hexahidropirazino (1'2':1,6)-pirido(3,4-b)indol-1,4-diona para el tratamiento de trastornos cardiovasculares y disfuncion erectil. - Google Patents

Abstract

Los efectos bioquímicos, fisiológicos y clínicos de los inhibidores de PDE5 sugieren su utilidad en una variedad de estados patológicos, en los cuales es deseable la modulación de la musculatura lisa, la función renal, hemostática, inflamatoria, y/o endocrina. Los compuestos de fórmula (I) por consiguiente resultan útiles en el tratamiento de cierto número de trastornos, como por templo, angina de pecho estable, inestable, y variante, (Prinzmetal), hipertensión, hipertensión pulmonar, cardiopatía congestiva, síndrome disneico agudo, insuficiencia renal aguda, y crónica, aterosclerosis, cuadros clínicos de permeabilidad reducida de los vasos sanguíneos (por ejemplo, angioplastia de carótida o coronaria transluminal post-percutánea o estenosis de injerto en cirugía post-bypass), vasculopatía periférica, trastornos vasculares, tales como enfermedad de Raynaud, trombocitemia, enfermedades inflamatorias, ictus, bronquitis, asma crónica, asma alérgica, rinitis alérgica, glaucoma, osteoporosis, parto prematuro, hipertrofia prostática benigna, ulcera péptica, disfunción eréctil masculina, disfunción sexual femenina y enfermedades caracterizadas por trastornos de la motilidad intestinal (por ejemplo síndrome de intestino irritable). Una utilización especialmente importante es el tratamiento de la disfunción eréctil masculina, que es una forma de impotencia y constituye un problema médico habitual. La impotencia se puede definir como carencia de potencia, en el varón, para copular y puede suponer la incapacidad para lograr una erección o eyaculación o ambos. La incidencia de la disfunción eréctil aumenta con la edad, y un 50% aproximadamente de los hombres de más de 40 años padecen en cierta medida disfunción eréctil. Además, otra utilización importante es el tratamiento del trastorno femenino de la excitación. Los trastornos femeninos de la excitación se definen como una incapacidad recurrente para alcanzar o mantener una respuesta de lubricación/tumescencia adecuada de excitación sexual hasta finalizar la actividad sexual. La respuesta de la excitación consiste en vasocongestión en la pelvis, lubricación vaginal y expansión y tumescencia de los genitales externos.

Description

Derivados de hexahidropirazino [1'2':1,6]-pirido[3,4-b]indol-1,4-diona para el tratamiento de trastornos cardiovasculares y disfunción eréctil.

Las reivindicaciones de la presente solicitud se benefician de la solicitud provisional de patente US 60/237,477 depositada el 2 de octubre de 2000.

La presente invención se refiere a una serie de compuestos, a métodos de preparación de los compuestos, a composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos, y a su utilización como agentes terapéuticos. En particular, la invención se refiere a compuestos que son inhibidores potentes y selectivos de la guanosina cíclica 3', 5'-monofosfato específico fosfodiesterasa (PDE específico de cGMP), en particular PDE5, y resultan útiles en toda una serie de áreas terapéuticas en las que se considera beneficiosa dicha inhibición, incluso en el tratamiento de trastornos cardiovasculares y de la disfunción eréctil.

La presente invención presenta compuestos que tienen como fórmula:

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donde R^{0} es C_{1-6}alquilo;

R^{1} se elige dentro del grupo formado por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, C_{2-6}alquenilo, C_{2-6}alquinilo, C_{3-8}cicloalquilo o C_{3-8}cicloalquilC_{1-3}alquilo;

R^{2} se elige entre

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o

200

R^{3} se elige entre hidrógeno o C_{1-6}alquilo, o R^{1} o R^{3} juntos representan un componente de cadena de alquilo o alquenilo de 3 o 4 lados de in anillo de 5 o 6 lados;

R^{a} se elige entre hidrógeno o C_{1-6}alquilo;

R^{c} es cero o se elige entre hidrógeno o C_{1-6}alquilo;

W es O, S, o NR^{c}; X es O, S, o NR^{a}; Y es CR^{a} o N; Z es CR^{a}, C(R^{a})_{2} o NR^{a}; y q es 0, 1, 2, 3 o 4, y sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

De preferencia, el compuesto está representado por la fórmula

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y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Ventajosamente, R^{1} se elige entre hidrógeno, C_{1-4}alquilo o C_{3-6}cicloalquilmetilo.

Convenientemente, R^{3} es hidrógeno.

De preferencia, R^{1} y R^{3} juntos representan un componente de cadena alquilo de 3 o 4 lados.

Ventajosamente, R^{2} se elige entre

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o

400

Convenientemente, R^{a} se elige entre hidrógeno o C_{1-6}alquilo.

La presente invención presenta también un compuesto elegido entre

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También se describen compuestos de fórmula (I):

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donde R^{0}, independientemente, se elige dentro del grupo formado por halo y C_{1-6}alquilo;

R^{1} se elige dentro del grupo formado por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, C_{1-6}alquenilo, C_{1-6}alquinilo, haloC_{1-6}alquilo, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}cicloalquil C_{1-3}alquilo, aril C_{1-3}alquilo, y heteroaril C_{1-3} alquilo;

R^{2} se elige dentro del grupo formado por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilC_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquenilarilo, haloC_{1-6}alquilo, C_{1-4}alquilenoC (=O) OR^{a}, C_{1-4} alquilenoC (=O) NR^{a}R^{b}, C_{3-8}cicloalquilo, Het, C_{3-8} cicloalquenilo, C_{3-8} heterocicloalquenilo, C_{1-4}alquilenoHet, C_{1-4}alquilenoQR^{a}, C_{2-6}alquenilenoQR^{a}, C_{1-4}alquilenoQC_{1-4}alquilenoQR^{a},

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y un espiro sustituyente que tiene como estructura

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R^{3} se elige dentro del grupo formado por hidrógeno y C_{1-3}alquilo,

o R^{1} y R^{3} juntos representan un componente de cadena alquilo o alquenilo de 3 o 4 lados de un anillo de 5 o 6 lados;

R^{a} y R^{b}, independientemente, se eligen dentro del grupo formado por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, aril C_{1-3}alquilo, heteroarilC_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, C_{1-3}alquilenoheteroarilo, y Het;

R^{c} es cero, o se elige dentro del grupo formado por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, arilo, heteroarilo, arilC_{1-3}alquilo, heteroarilC_{1-3}alquilo, C_{1-3}alquilenoarilo, C_{1-3}alquilenoheteroarilo, y Het;

Het es un grupo heterocíclico de 5 o 6 lados, saturado o parcial insaturado, que contiene por lo menos un heteroátomo elegido entre los grupos formados por oxígeno, nitrógeno y azufre y opcionalmente sustituido por C_{1-4}alquilo o C(=O) OR^{a};

Q es O, S, o NR^{a};

W es O, S, o NR^{c};

X es O, S, o NR^{a};

Y es CR^{a} o N;

Z es CR^{a}, C (R^{a})^{2}, o NR^{c}; y

q es 0, 1, 2, 3 o 4

Tal como se utiliza aquí, el término "alquilo" incluye grupos hidrocarburos ramificados y de cadena recta, que contienen el número indicado de átomos de carbono, por lo general metilo, etilo y grupos propilo y butilo ramificados y de cadena recta. El término "alquilo" incluye "alquilo puenteado", es decir un grupo hidrocarburo bicíclico o policíclico C_{6}-C_{16}, por ejemplo norbornilo, adamantilo, biciclo[2.2.2]octilo, biciclo[2.2.1] heptilo, biciclo [3.2.1] octilo, o decahidronaftilo. El término "cicloalquilo" se define como un grupo hidrocarburo cíclico C_{3}-C_{8}, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexilo y ciclopentilo. El término "alquenilo" y "alquinilo" se definen de forma idéntica al término "alquilo", con la salvedad de que el grupo hidrocarburo contiene un enlace doble carbono-carbono o un enlace triple carbono-carbono, respectivamente. "Cicloalquenilo" se define de forma similar a cicloalquilo, con la salvedad de que se encuentra presente en el anillo un enlace doble carbono-carbono. El grupo hidrocarburo puede contener hasta 16 átomos de carbono.

El término "alquileno" se refiere a un grupo alquilo que tiene un sustituyente. Por ejemplo el término "C_{1-3} alquilenoarilo" se refiere a un grupo alquilo que contiene de uno a tres átomos de carbono, y sustituido por un grupo arilo. El término "alquenileno" tal como se utiliza aquí se define de forma similar y contiene el número indicado de átomos de carbono y un doble enlace carbono-carbono y comprende grupos alquenileno ramificados y de cadena recta, como etienileno.

El término "halo" o "halogeno" se define aquí como el grupo que incluye fluor, bromo, cloro y yodo.

El término "haloalquilo" se define aquí como un grupo alquilo sustituido por uno o más sustituyentes halo, o fluor, cloro, bromo, yodo o combinaciones de los mismos. De forma similar, "halocicloalquilo" se define con un grupo cicloalquilo que tiene uno o más sustituyentes halo.

El término "arilo" solo o en combinación, se define aquí como un grupo aromático monocíclico o policíclico, de preferencia un grupo aromático monocíclico o bicíclico, por ejemplo fenilo o naftilo, que puede ser insustituido o sustituido, por ejemplo, por uno o más, y en particular, de uno a tres hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo y alquilsulfonilo. Como ejemplos de grupos arilo se pueden mencionar el fenilo,naftilo, tetrahidronaftilo, 2-clorofenilo, 3-clorofenilo, 4-clorofenilo, 2-metilfenilo, 4-metoxifenilo, 3-trifluormetilfenilo, 4-nitrofenilo y similares. Los términos "arilC_{1-3}alquilo" y "heteroarilC_{1-3}alquilo" se definen como un grupo arilo o heteroarilo que tiene un sustituyente C_{1-3}alquilo.

El término "heteroarilo" se define aquí como un sistema anular monocíclico o bicíclico que contiene uno o dos anillos aromáticos y contiene por lo menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre en un anillo aromático y que puede ser insustituido o sustituido, por ejemplo por uno o más, y en particular de uno a tres, sustituyentes como halo, alquilo, hidroxi, hidroxialquilo, alcoxi, alcoxialquilo, haloalquilo, nitro, amino, alquilamino, acilamino, alquiltio, alquilsulfinilo, y alquisulfonilo. Como ejemplos de grupos heteroarilo se pueden mencionar el tienilo, furilo, piridilo, oxazolilo, quinolilo, isoquinolilo, indolilo, triazolilo, isotiazolilo, isoxazolilo, imidizolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, pirimidinilo, tiazolilo y tiadiazolilo.

El término "Het" comprende un grupo heterocicloalquilo de 5 o 6 lados, por ejemplo morfolinilo, piperidilo, pirrolidinilo o piperazinilo.

El término "alcoxi" se define como -OR, donde R es alquilo.

El término "alcoxialquilo" se define como un grupo alquilo en el que un hidrógeno ha sido sustituido por un grupo alcoxi. El término "(alquiltio)alquilo" se define de forma similar, con la salvedad de que se encuentra presente un átomo de azufre en lugar de un átomo de oxígeno.

El término "hidroxi" se define como -OH.

El término "hidroxialquilo" se define como un grupo hidroxi unido a un grupo alquilo.

El término "amino" se define como -NH_{2} y el término "alquilamino" se define como -NR_{2}, donde por lo menos un R es alquilo y el segundo R es alquilo o hidrógeno.

El término "acilamino" se define como RC(=O)N, donde R es alquilo o arilo.

El término "alquiltio" se define como -SR, donde R es alquilo.

El término "alquilsulfinilo" se define como R-SO_{2}, donde R es alquilo.

El término "alquilsulfonilo" se define como R-SO_{3}, donde R es alquilo.

El término "nitro" se define como -NO_{2}.

El término "trifluormetilo" se define como -CF_{3}.

El término "trifluormetoxi" se define como -OCF_{3}.

El término "ciano" se define como -CN.

El término "espiro" tal como se utiliza aquí, se refiere a un grupo que tiene dos átomos de carbono directamente unidos al átomo de carbono al que está ligado R^{2}.

En realizaciones preferidas, R^{2} es sustituido opcionalmente y se elige dentro del grupo formado por C_{1-4}al-
quilenoQR^{a}, C_{1-4}alquilenoQC_{1-4}alquilenoQR^{a}, C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}cicloalquenilo, C_{1-6}alquilo,

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En un grupo preferido de compuestos de fórmula (I), R^{2} se representa por

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C_{3-8}cicloalquilo, C_{3-8}cicloalquenilo, C_{1-6}alquilo, C_{1-4}alquilenoQR^{a} y C_{1-4}alquilenoQC_{1-4}alquilenoQR^{a}. Un Q preferido es oxígeno.

Como sustituyentes de R^{2} especialmente preferidos, se puede mencionar

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-CH_{2}OR^{a}, -CH_{2}OCH_{2}OR^{a},

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dentro de este grupo particular de compuestos, como sustituyentes preferidos de R^{a} se puede citar el hidrógeno, C_{1-6}alquilo y bencilo.

Una subclase especialmente preferida de compuestos dentro del ámbito general de la fórmula (I) está representada por compuestos de fórmula (II)

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Los compuestos de fórmula (I) pueden contener uno o más centros asimétricos y, por consiguiente, pueden existir como estéreo isómeros. La presente invención incluye mezclas y estéreo isómeros individuales separados de los compuestos de fórmula (I). Los compuestos de fórmula (I) también pueden existir en formas tautoméricas y la invención incluye las mezclas y los tautomeros individuales separados correspondientes.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) pueden ser sales de adición ácida, formadas con ácidos farmacéuticamente aceptables. Como ejemplos de sales adecuadas se pueden citar, sin que esto suponga limitación, el hidrocloruro, hidrobromuro, los sulfatos, bisulfatos, fosfatos, fosfatos de hidrógeno, acetatos, benzoatos, succinatos, fumaratos, maleatos, lactatos, citratos, tartratos, gluconatos, metasulfonatos, benceno sulfonatos y sales de p-tolueno sulfonatos. Los compuestos de fórmula (I) también pueden proporcionar sales metálicas farmacéuticamente aceptables, en particular sales de metales alcalinos y sales de metales alcalino térreos, con bases. Como ejemplo, se pueden citar sales de sodio, potasio, magnesio y calcio.

Los compuestos de la presente invención son inhibidores potentes y selectivos de PDE5 cGMP-específico. Por consiguiente, los compuestos de fórmula (I) son interesantes para utilizar en terapia, específicamente para el tratamiento de una serie de cuadros clínicos, en los que se considera beneficiosa la inhibición de PDE5.

Las fosfodiesterasas (PDEs) catalizan la hidrolisis de nucleotidos cíclicos, como el monofosfato de adenosina cíclico (cAMP) y monofosfato de guanosina cíclica (cGMP). Las PDEs han sido clasificadas en por lo menos siete familias de isoenzimas y se encuentran presentes en varios tejidos (J.A. Beavo, Physiol. Rev. 75, p. 725
(1995)).

La inhibición de PDE5 es un objetivo particularmente atractivo. Un inhibidor potente y selectivo de PDE5 proporciona efectos vasodilatadores, relajantes y diuréticos, todo lo cual resulta beneficioso en el tratamiento de varios estados patológicos. La investigación en esta área ha conducido a diversas clases de inhibidores basados en la estructura básica cGMP (E. Sybertz et al., Expert. Opin. Ther. Pat., 7, p. 631 (1997)).

Los efectos bioquímicos, fisiológicos y clínicos de los inhibidores de PDE5 sugieren por lo tanto su utilidad en una variedad de estados patológicos, en los cuales es deseable la modulación de la musculatura lisa, la función renal, hemostática, inflamatoria, y/o endocrina. Los compuestos de fórmula (I) por consiguiente resultan útiles en el tratamiento de cierto número de trastornos, como por templo, angina de pecho estable, inestable, y variante, (Prinzmetal), hipertensión, hipertensión pulmonar, cardiopatía congestiva, síndrome disneico agudo, insuficiencia renal aguda, y crónica, aterosclerosis, cuadros clínicos de permeabilidad reducida de los vasos sanguíneos (por ejemplo, angioplastia de carótida o coronaria transluminal post-percutánea o estenosis de injerto en cirugía post-bypass), vasculopatía periférica, trastornos vasculares, tales como enfermedad de Raynaud, trombocitemia, enfermedades inflamatorias, ictus, bronquitis, asma crónica, asma alérgica, rinitis alérgica, glaucoma, osteoporosis, parto prematuro, hipertrofia prostática benigna, ulcera péptica, disfunción eréctil masculina, disfunción sexual femenina y enfermedades caracterizadas por trastornos de la motilidad intestinal (por ejemplo síndrome de intestino irritable).

Una utilización especialmente importante es el tratamiento de la disfunción eréctil masculina, que es una forma de impotencia y constituye un problema médico habitual. La impotencia se puede definir como carencia de potencia, en el varón, para copular y puede suponer la incapacidad para lograr una erección o eyaculación o ambos. La incidencia de la disfunción eréctil aumenta con la edad, y un 50% aproximadamente de los hombres de más de 40 años padecen en cierta medida disfunción eréctil.

Además, otra utilización importante es el tratamiento del trastorno femenino de la excitación. Los trastornos femeninos de la excitación se definen como una incapacidad recurrente para alcanzar o mantener una respuesta de lubricación/tumescencia adecuada de excitación sexual hasta finalizar la actividad sexual. La respuesta de la excitación consiste en vasocongestión en la pelvis, lubricación vaginal y expansión y tumescencia de los genitales
externos.

Se considera por lo tanto que los compuestos de fórmula (I) resultan útiles en el tratamiento de la disfunción eréctil del varón y el trastorno de la excitación de la mujer. Por consiguiente, la presente invención se refiere a la utilización de compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, o una composición farmacéutica que comprende cualquier entidad para la fabricación de un medicamento para el tratamiento curativo o profiláctico de disfunción eréctil en un animal macho y trastorno de la excitación en un animal hembra, inclusive en
humanos.

El término "tratamiento" incluye la prevención, disminución, interrupción o la reversión de la progresión o gravedad del cuadro clínico o de los síntomas tratados. Como tal, el término "tratamiento" incluye la administración médica terapéutica y/o profiláctica, según corresponda.

También se entiende que "un compuesto de fórmula (I)" o una sal o solvato del mismo, fisiológicamente aceptable, se puede suministrar como compuesto puro o como composición farmacéutica que contiene cualquier entidad.

Aunque los compuestos de la invención están previstos principalmente para el tratamiento de la disfunción sexual en seres humanos, como la disfunción eréctil del varón y los trastornos de la excitación femenina, también se pueden utilizar para el tratamiento de otros estados patológicos.

Otro aspecto de la presente invención consiste por lo tanto en ofrecer un compuesto de fórmula (I), que se utiliza en el tratamiento de la angina de pecho estable, inestable y variante, (Prinzmetal), hipertensión, hipertensión pulmonar, neumopatia obstructiva crónica, insuficiencia cardiaca congestiva, síndrome disneico agudo, insuficiencia renal crónica y aguda, aterosclerosis, estados de permeabilidad reducida de los vasos sanguíneos (por ejemplo estenosis de injerto post-PTCA o post-bypass), vasculopatía periférica, trastornos vasculares como enfermedad de Raynaud, trombocitemia, cuadros clínicos inflamatorios, profilaxis del infarto de miocardio, profilaxis del ictus, ictus, bronquitis, asma crónica, asma alérgica, rinitis alérgica, glaucoma, osteoporosis, parto prematuro, hipertrofia prostática benigna, disfunción eréctil masculina, y disfunción sexual femenina o cuadros clínicos caracterizados por trastornos de la motilidad intestinal (por ejemplo síndrome de intestino irritable).

Según otro aspecto de la presente invención, se ofrece la utilización de un compuesto de fórmula (I) para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de los cuadros clínicos y trastornos antes citados.

En otro aspecto, la presente invención ofrece un método para el tratamiento de los cuadros clínicos y trastornos antes citados en cuerpos de animales no humanos y en humanos, que comprende la administración a dicho cuerpo de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I).

Los compuestos de la invención se pueden administrar por medio de cualquier vía adecuada, por ejemplo en administración oral, bucal, inhalación, sublingual, rectal, vaginal, transuretral, nasal, topica, percutánea, es decir, transdérmica o parenteral (inclusive intravenosa, intramuscular, subcutánea, e intracoronaria). La administración parenteral se puede realizar utilizando una aguja y una jeringa o utilizando una técnica de alta presión, como POWDERJECT™.

La vía preferida es la administración oral de un compuesto de la invención. La administración oral es la más adecuada y evita la desventaja asociada con otras vías de administración. Para los pacientes que tienen dificultades al tragar o que padecen una absorción alterada de fármacos después de la administración oral, el fármaco se puede administrar parenteralmente, por ejemplo sublingual o bucalmente.

Los compuestos y composiciones farmacéuticos, cuyo uso resulta adecuado en la presente invención, comprenden aquellos en los que el ingrediente activo se administra en una cantidad eficaz para lograr su objetivo previsto. Más específicamente, una "cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad eficaz para prevenir el desarrollo o aliviar los síntomas existentes al paciente tratado. La determinación de las cantidades eficaces es bien conocida de los especialistas, particularmente a la vista de la descripción que se da a continuación.

Una "dosis terapéuticamente eficaz" es aquella cantidad del compuesto que consigue lograr el efecto deseado. La toxicidad y la eficacia terapéutica de dichos compuestos se pueden determinar por procedimientos farmacéuticos normales en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, para determinar la LD_{50} (dosis letal para el 50% de la población) y la ED_{50} (la dosis terapéuticamente eficaz en el 50% de la población). La relación entre las dosis (efecto tóxico y terapéutico) es el índice terapéutico que se expresa como la relación entre LD_{50} y ED_{50}. Se prefieren aquellos compuestos que muestran elevados índices terapéuticos. - La información obtenida a partir de estos datos se puede utilizar para la formulación de una gama de dosificación que se utilice en seres humanos. La dosificación de dichos compuestos se sitúa de preferencia dentro de una gama de concentraciones que incluye la ED_{50} con poca o ninguna toxicidad. La dosificación puede variar dentro de esta gama según la forma de dosificación empleada y la vía de administración utilizada.

La formulación, la vía de administración y la dosificación exactas pueden ser elegidas por el médico a la vista del estado del paciente. La cantidad de dosificación y el intervalo se pueden ajustar individualmente para proporcionar niveles de plasma de la mitad activa, suficientes para mantener los efectos terapéuticos.

La cantidad de composición administrada depende del paciente tratado, de su peso, de la gravedad de la enfermedad, de la forma de administración y de la opinión del médico que prescribe dicha composición.

Específicamente, para la administración a un ser humano en tratamientos curativos o profiláctico de las enfermedades y trastornos identificados anteriormente, las dosificaciones orales de un compuesto de fórmula (I) suelen ser de aproximadamente 0,5 a 1000 mg aproximadamente al día para un paciente adulto medio (70 kg). Por consiguiente, para un paciente adulto típico, las cápsulas o comprimidos individuales contienen de 0,2 a 500 mg de compuesto activo, en un vehículo o portador adecuado farmacéuticamente aceptable, para la administración en dosis única o múltiples, una o varias veces al día. Las dosificaciones para la administración intravenosa, bucal o sublingual suelen ser de 0,1 a 500 mg por dosis, según lo requerido. En la práctica, el médico determina el régimen de dosificación más adecuado para un paciente y la dosificación varia con la edad, el peso y la respuesta del paciente en cuestión. Las dosificaciones antes citadas se dan a modo de ejemplo para el caso medio, pero puede haber casos particulares en los cuales conviene administrar dosificaciones más elevadas o más bajas, que caen dentro del ámbito de la presente
invención.

Para el uso humano, un compuesto de fórmula (I) se puede administrar solo, aunque por lo general se administra mezclado con un vehiculador farmacéutico elegido a la vista de la vía de administración prevista y de la práctica farmacéutica standard. Las composiciones farmacéuticas que se utilizan según la presente invención se pueden formular por lo tanto de forma convencional utilizando uno o más vehículos fisiológicamente aceptables como excipientes y sustancias auxiliares que facilitan el procesamiento de compuestos de fórmula (I) para obtener preparados que se pueden utilizar farmacéuticamente.

Estas composiciones farmacéuticas se pueden fabricar de forma convencional, por ejemplo mediante procesos convencionales de mezcla, disolución, granulación, formación de grageas, levigación, emulsión, encapsulado, inclusión o liofilización. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida. Si se administra oralmente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención, la composición se encuentra por lo general en forma de comprimido, cápsula, polvo, solución o elixir. Si se administra en forma de comprimido, la composición puede contener además un vehículo sólido como gelatina o un adyuvante. El comprimido, cápsula y polvo contiene aproximadamente de 5% a 95% del compuesto de la presente invención y, de preferencia, de 25% a 90% aproximadamente del compuesto de la presente invención. Si se administra en forma de líquido, se puede añadir un vehículo líquido como agua, petróleo o aceites de origen animal o vegetal. La forma líquida de la composición puede contener además solución salina fisiológica, dextrosa u otras soluciones de sacárido o glicoles. Si se administra en forma líquida, la composición contiene aproximadamente de 0,5% a 90% en peso de un compuesto de la presente invención y de preferencia en torno a 1% a 50% de un compuesto de la presente invención.

Si se administra por inyección intravenosa, cutánea o subcutánea, una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la presente invención, la composición se encuentra en forma de solución acuosa parenteralmente aceptable, libre de pirogeno. La preparación de dichas soluciones parenteralmente aceptables, teniendo en cuenta el pH, la isotonicidad, la estabilidad y similares, es conocida en el estado de la técnica. Una composición preferida para la inyección intravenosa, cutánea o subcutánea suele contener además de un compuesto de la presente invención, un vehículo isotónico.

Para la administración oral, los compuestos se pueden formular fácilmente combinando un compuesto de fórmula (I) con vehículos farmacéuticamente aceptables, bien conocidos en el estado de la técnica. Estos vehículos permiten formular los presentes compuestos en forma de comprimidos, píldoras, grageas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones acuosas espesas, y similares para la ingestión oral por un paciente en tratamiento. Las preparaciones farmacéuticas de uso oral se pueden obtener añadiendo un compuesto de fórmula (I) con un excipiente sólido, moliendo opcionalmente una mezcla resultante y procesando la mezcla de gránulos después de añadir a los agentes auxiliares adecuados, si se desea, para obtener núcleos de comprimidos o de grageas. Como excipientes adecuados, se puede mencionar por ejemplo productos de relleno y preparados de celulosa. Si se desea, se pueden añadir agentes desintegrantes. Para la administración por inhalación, los compuestos de la presente invención se suministran convenientemente en forma de presentación de spray aerosol de envases presurizados o nebulizador, en el que se utiliza un propulsor adecuado. En caso de aerosol presurizado, la unidad de dosificación se puede determinar mediante una válvula para administrar una cantidad determinada. Las cápsulas y cartuchos, por ejemplo gelatina, que se utilizan en inhaladores o insufladores se pueden formular con un contenido a base de una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuado como lactosa o almidón.

Los compuestos se pueden formular para la administración parenteral por inyección, por ejemplo por inyección intravenosa rápida o infusión continua. Las formulaciones para inyección se pueden presentar en forma de dosificación unitaria, por ejemplo en ampollas o en contenedores multidosis, con un conservante añadido. Las composiciones pueden adoptar la forma de suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos acuosos o aceitosos y pueden contener agentes de formulación como agentes de. suspensión, estabilización y/o dispersión.

Las composiciones farmacéuticas para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma soluble en agua. Además, se pueden preparar suspensiones de los compuestos activos como suspensiones de inyección ólea adecuadas. Como disolventes o vehículos lipofílicos adecuados, se pueden citar los aceites grasos o los ésteres de ácidos grasos sintéticos. Las suspensiones de inyección acuosa pueden contener sustancias que aumentan la viscosidad de la suspensión. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizadores adecuados o agentes que aumentan la solubilidad de los compuestos y permiten la preparación de soluciones de gran concentración. Alternativamente, una composición como la presente puede estar en forma de polvo para su constitución con un vehículo adecuado, por ejemplo agua estéril libre de pirógeno, antes de su
utilización.

Los compuestos de la presente invención también se pueden formular en composiciones rectales, como supositorios o enemas de retención que contienen por ejemplo bases convencionales para supositorios. Además de las formulaciones descritas anteriormente, los compuestos también se pueden formular como preparados de liberación lenta. Estas formulaciones de larga actuación pueden administrarse por implantación (por ejemplo subcutánea o intramuscularmente) o por medio de inyección intramuscular. Por lo tanto, los compuestos se pueden formular por ejemplo con materiales poliméricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo como emulsión en un aceite aceptable) o resinas intercambiadoras de iones, o como derivados poco solubles, por ejemplo, sal poco soluble.

Muchos de los compuestos de la presente invención se pueden presentar como sales con contra-iones farmacéuticamente compatibles. Estas sales de adición de base farmacéuticamente aceptables son aquellas sales que retienen la eficacia biológica y las propiedades de los ácidos libres y que se obtienen por reacción con bases inorgánicas u orgánicas adecuadas.

En particular, un compuesto de fórmula (I) se puede administrar oralmente, bucalmente o sublingualmente en forma de comprimidos que contienen excipientes, como almidón o lactosa, o en cápsulas u óvulos, solos o mezclados con excipientes, o en forma de elixires o suspensiones que contienen agentes aromatizantes o colorantes. Estas preparaciones líquidas se pueden preparar con aditivos farmacéuticamente aceptables como agentes de suspensión. Un compuesto también se puede inyectar parenteralmente, por ejemplo por vía intravenosa, intramuscular, subcutánea o intracoronaria. Para la administración parenteral, el compuesto se utiliza de preferencia en forma de solución acuosa estéril que puede contener otras sustancias, como por ejemplo sales o monosacáridos como mannitol o glucosa, para hacer que la solución sea isotónica con la sangre.

Para los usos veterinarios, se administra un compuesto de fórmula (I) o una sal no tóxica del mismo en forma de formulación convenientemente aceptable de acuerdo con la práctica veterinaria normal. El veterinario puede fácilmente determinar el régimen de dosificación y la vía de administración más adecuada para un animal particular.

Por consiguiente, la invención ofrece, en otro aspecto, una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable para la misma. Se ofrece además, con la presente invención, un proceso de preparación de una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de fórmula (I), proceso que comprende la mezcla de un compuesto de fórmula (I) junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una realización particular, la invención incluye una composición farmacéutica para el tratamiento curativo o profiláctico de la disfunción eréctil en un animal macho o el trastorno de la excitación en un animal hembra, incluso en seres humanos, que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos de fórmula (I) se pueden preparar con cualquier método adecuado o conocido en el estado de la técnica o siguiendo los procesos indicados a continuación, que forman parte de la presente invención. En los métodos indicados más adelante, R^{0}, R^{1}, R^{2} y R^{3} se hallan definidos en la fórmula estructural (I) anterior. En particular la patente US de Daugan 5,859,006, incorporada aquí a modo de referencia, describe la preparación de un compuesto de fórmula estructural (III).

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En suma, el compuesto de fórmula estructural (III), es decir el cis-isómero de los Intermedios 1 y 2 de la patente US de Daugan 5,859,006 se preparó según el siguiente esquema de reacción:

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Un compuesto de fórmula estructural (I) se prepara de forma similar haciendo reaccionar un éster de triptófano o un éster de triptófano sustituido por sustituyentes de R^{0} adecuados, con un aldehído adecuado para proporcionar el sustituyente R^{2} deseado. El producto resultante se cicliza entonces haciéndolo reaccionar con una amina adecuada para obtener un compuesto de fórmula estructural (I). La reacción de ciclización se describe en la patente US de Daugan nº 5,859,006.

En la síntesis de compuestos de fórmula estructural (I), se pueden utilizar compuestos protectores y grupos protectores como bencil cloroformato y tricloroetil cloroformato, bien conocidos por las personas expertas en la materia. Estos grupos protectores se describen por ejemplo en T.W. Greene et al. "Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition" (Grupos Protectores en Síntesis Orgánica, Tercera Edición) John Wiley and Sons, Inc., NY (1999). La estructura de un compuesto de fórmula estructural (I) puede variarse utilizando un aldehído adecuado para cambiar la identidad de R^{2}, o utilizando un éster de triptófano halo o alquil fenil sustituido.

Los compuestos de fórmula (I) se pueden convertir en otros compuestos de fórmula (I). Por lo tanto, por ejemplo, cuando un compuesto contiene un anillo aromático sustituido, es posible preparar otro compuesto adecuadamente sustituido de fórmula (I). Como ejemplos de interconversiones adecuadas se pueden citar, sin que esto suponga limitación alguna, OR^{a} en hidroxi utilizando medios adecuados (por ejemplo utilizando un agente como SnCl_{2} o un catalizador de paladio como paladio-sobre-carbono), o amino en amino sustituido, como aiquilamina, utilizando condiciones standard de acilación o de sulfonilación.

Los compuestos de fórmula (I) se pueden preparar con el método anterior como estereoisómeros individuales del estereoisómero adecuado de fórmula (III) o como mezcla racémica del compuesto racémico adecuado de fórmula (III). Los estereoisómeros individuales de los compuestos de la invención se pueden preparar a partir de racematos por resolución utilizando métodos conocidos en el estado de la técnica para la separación de mezclas racémicas en sus constituyentes estereoisómeros, utilizando por ejemplo HPLC o una columna quiral como Hipersil naftil urea, o utilizando la separación de sales de estereoisómeros. Los compuestos de la invención se pueden aislar en asociación con moléculas de disolvente por cristalización o evaporación de un disolvente adecuado.

Las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptable de los compuestos de fórmula (I) que contienen un centro básico se pueden preparar de forma convencional. Por ejemplo, una solución de la base libre se puede tratar con un ácido adecuado, puro o en solución adecuada y aislarse la sal resultante por filtración o por evaporación bajo vacío del disolvente de reacción. Se pueden obtener de forma análoga sales de adición básica farmacéuticamente aceptables tratando una solución de un compuesto de fórmula (I) con una base adecuada. Ambos tipos de sal se pueden formar o interconvertir utilizando técnicas de resina cambiadora de iones. Por consiguiente, según otro aspecto de la invención, se ofrece un método para preparar un compuesto de fórmula (I) o una sal o solvato (por ejemplo hidrato).

En los ejemplos siguientes se utilizarán las siguientes abreviaturas: rt (temperatura ambiente), min (minuto), h (hora), g (gramo), mmol (milimol) m.p. (punto de fusión), eq (equivalentes), L (litro) mL (mililitro) \muL (microlitro), DMSO (dimetil sulfóxido) CH_{2}Cl_{2} (dicloro metano), CHCl_{3} (cloroformo), TFA (ácido trifluoracético), EtOH (etanol), MeOH (metanol), Et_{3}N (trietilamina), MeNH_{2} (metilamina), DMF (dimetil formamida), EtOAc (etil acetato), S_{8} (azufre), DIPEA (diisopropil etilamina), MOM-Cl (clorometilo metil éter), TSOH (ácido p-tolueno-sulfónico), NaHCO_{3} (bicarbonato sódico), Na_{2}SO_{4} (sulfato sódico), AcOH (ácido acético), HCl (ácido clorhídrico), LiAH_{4} (hidruro de litioaluminio), Et_{2}O (dietil éter), PCC (piridinio clorocromato), Al_{2}O_{3} (óxido de aluminio), i-PrOH (isopropil alcohol) y THF (tetrahidrofurano).

Síntesis general de un compuesto de fórmula (I)

La siguiente secuencia ilustra una vía general para obtener compuestos de fórmula estructural (I) donde R^{2} es

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Se pueden utilizar vías sintéticas similares para sintetizar otros compuestos de fórmula estructural (I).

La vía sintética general es análoga a la vía descrita en la patente US nº 5,859,006, incorporada a modo de referencia. En particular, se somete un éster de triptófano (IV) a una reacción Pictet-Spengler con un aldehído adecuado, como (V) por ejemplo, en presencia de ácido trifluoracético (TFA) para obtener una \beta-carbolina (VI). La acilación con cloroacetil cloruro proporciona un compuesto derivado de N (VII), que se trata a su vez con una amina primaria deseada (RNH_{2}) para obtener un compuesto de dicetopiperacina (VIII) de fórmula estructural (I).

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A continuación se dan unos ejemplos específicos de compuestos de fórmula estructural (I) y vías sintéticas para lograr algunas de estas estructuras.

Preparación de los Ejemplos 1-14

Los ejemplos siguientes 1-14 se prepararon siguiendo el esquema general sintético antes descrito. Los detalles de cada etapa del esquema sintético anterior se describen en la patente US nº 5,849,006.

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Preparación del ejemplo 1

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El ejemplo 1 se preparó a partir del siguiente Intermedio 1. El Ejemplo 2 se preparó a partir del siguiente Intermedio 2.

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Preparación de metil éster del ácido (1R, 3S) - y (1S, 3S)-1-benzofurano-2-il-2,3,4,9-tetrahidro-1-H-\beta-carbolina-3-carboxílico

(Intermedios 1 y 2)

Utilizando benzofurano-2-carbaldehído como aldehído de partida, se prepararon los Intermedios 1 y 2 siguiendo el mismo método descrito a continuación para metil éster del ácido (1R, 3S)- y (1S,3S)-1-(3-metil-benzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico(Intermedios 3 y 4). La mezcla cruda de diasterómeros se separó por cromatografía (Chiralcel columna OD-H, 60% heptano, 40% etanol) para obtener 2,5 g (56%) de metil éster del ácido (1R, 3S)-1-benzofurano-2-il-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (Intermedio 1) y 920 mg (20%) de metil éster del ácido (1S,3S)-1-benzofurano-2-il-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (Intermedio 2) en forma de espumas.

Metil éster del ácido (1R, 3S)-1-benzofurano-2-il-2,3, 4,9-tetrahidro-1-H-\beta-carbolina-3-carboxílico(Intermedio 1): ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,9 (s, 1H), 7,6-6,95 (m, 8H), 6,56 (s, 1H), 5,52 (d, J=4 Hz, 1H), 3,93 (m, 1H), 3,7 (s, 3H), 3,06 (dd, J=5,15 Hz, 1H), 2,8 (dd, J=10,15 Hz, 1H); MS ES+m/e 347,2 (p+1), ES-m/e 345,2 (p-1).

Metil éster del ácido (1S, 3S)-1-benzofurano-2-il-2,3, 4,9-tetrahidro-1-H-\beta-carbolina-3-carboxílico(Intermedio 2): ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,66 (s, 1H), 7,7-6,95 (m, 8H), 6,9 (s, 1H), 5,5 (d, J=6 Hz, 1H), 3,9 (m, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,05 (m, 1H), 2,85 (dd, J=2,10 Hz, 1H); MS Es+m/e 347,2 (p+1), ES-m/e 345,2 (p-1).

Preparación de (6R,12aS)-6-benzofurano-2-il-2-metil-2,3,6,7,12,12a-hexahidro-pirazin[1',2':1,6]pirido[3,4-b]indol-1,4-diona (Ejemplo 1)

El ejemplo 1 se preparó a partir del Intermedio 1 (2,66 mmol), trietilamina (1 mL) y cloroacetil cloruro (2,7 mmol) en tetrahidrofurano (25 mL). La mezcla se agitó durante 18 horas sin enfriar. Se diluyó entonces la mezcla con etil acetato, se lavó una vez con agua, una vez con ácido clorhídrico 1 N, una vez con solución de cloruro sódico saturado, luego se secó (sulfato sódico), se filtró y se concentró en vacío. El material crudo se purificó por cromatografía (gel de sílice, 50% etil acetato, 50% hexanos, luego etil acetato) para obtener 852 mg (30%) del ejemplo 1, en forma de sólido: mp 195-198ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,6 (s, 1H), 7,65-7,0 (m, 9H), 4,4 (dd, J=4,13 Hz, 1H) 4,2 (ABq, J=18,65 Hz), 3,32 (dd, J=4,13 Hz, 1H), 3,05 (dd, J=13,5 Hz, 1H), 2, 82 (s, 3H), MS ES+m/e 386,3 (p+1), ES-m/e 384,3 (p-1); IR (KBr, cm^{-1}) 1729, 1663, 1462.

El Ejemplo 2 se preparó con el mismo método que el Ejemplo 1 a partir del Intermedio 2.

Preparación del Ejemplo 3

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El Ejemplo 3 (6S, 12aR)-6-benzofurano-2-il-2-metil-2, 3, 6, 7, 12, 12a-hexahidropirazino [1', 2': 1, 6]-pirido [3,4-b]indol-1,4-diona se preparó a partir del Intermedio 3 con el mismo método descrito anteriormente para el Ejemplo 1. El material crudo se purificó por cromatografía (gel de sílice, 30% de etil acetato, 70% hexanos) para obtener 540 mg (52%) del ejemplo 3 en forma de sólido blanco mate: mp 265-268ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,23 (s, 1H), 7,54 (m, 2H), 7,44 (d, J=8 Hz, 1H), 7,33 (d, J=8 Hz, 1H), 7,18 (m,2H)m, 7,05 (m, 2H), 6,73 (s, 1H), 6,51 (s, 1H), 4,39 (dd, J=4,11 Hz, 1H), 4,26 (d, J=17 Hz, 1H), 3,98 (d, J=17 Hz, 1H), 3,59 (dd, J=4,15 Hz, 1H), 3,02 (m, 4H). MS ES+m/e=386 (p+1) Anal. Calculado para C_{23}H_{19}N_{3}O_{3}: C, 71,67; H, 4,96; N, 10, 90. Hallado: C, 71,61; H, 4,28; N, 10,72.

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Preparación de metil éster del ácido (1R,3R)- y (1S, 3R)-1-benzofurano-2-il-2,3,4,9-tetrahidrofurano-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (Intermedios 3 y 4). La condensación de (R)-(+)-triptófano con benzofurano-2-carbaldehído produjo los Intermedios 3 y 4 utilizando el mismo método descrito anteriormente para los Intermedios 1 y 2. La mezcla cruda de diastereómeros se separó por cromatografía (Biotage 75M, 20% de etil acetato/80% hexanos) para obtener 2,85 g (44%) de metil éster del ácido (1R,3R)-1-benzofurano-2-il-2,3, 4,9-tetrahidrofurano-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico(Intermedio 4) y 950 mg (15%) de metil éster de ácido (1S,3R)-1-benzofurano-2-il-2,3,4,9-tetrahidrofurano-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (Intermedio 3) en forma de espumas.

Metil éster del ácido (1S,3R)-1-benzofurano-2-il-2,3,4,9-tetrahidrofurano-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico(Intermedio 3): ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,66 (s, 1H), 7,64 (m, 1H) 7,25 (m, 3H), 7,02 (m, 2H), 6,88 (s, 1H), 5,55 (s, 1H), 3,93 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,03 (m, 1H), 2,82 (m, 1H); TOF MS ES+ masa exacta calculada para C_{21}H_{19}N_{2}O_{3} (p+1): m/z-347.1396. Hallado: 347.1369.

Ejemplo 4

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El Ejemplo 4 se preparó de forma idéntica al Ejemplo 3 a partir del Intermedio 4

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Metil éster del ácido (1R,3R)-1-benzofurano-2-il-2,3, 4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (Intermedio 4): ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,87 (s, 1H), 7,55 (5,J=7 Hz, 1H), 7,47 (d, J=7 Hz, 1H), 7,26 (m, 3H), 7,01 (m, 2H), 6,56 (s, 1H)m, 5,43 (s, 1H), 3,90 (m, 1H), 3,66 (s, 3H), 3,07 (dd, J=4,15 Hz, 1H), 2,80 (m, 1H); TOF MS ES+ masa exacta calculada para C_{20}H_{19}N_{2}O_{3} (p+1): m/z-347.1382. Hallado: 347.1382

Preparación de los Ejemplos 5 y 6

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El Ejemplo 5 se preparó a partir del Intermedio 5 siguiente. El Ejemplo 6 se preparó a partir del Intermedio 6 siguiente.

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Preparación de metil éster de (1R,3S)- y (1S,3S)-1-(3-metilbenzo [b] tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico.

(Intermedios 5 y 6)

Una solución acuosa de hidrocloruro de (S)-(-)-triptófano (1,45 g, 5,7 mmol) se hizo alcalina con una solución de bicarbonato sódico saturado y se extrajo con etil acetato. El extracto se lavó una vez con una solución de cloruro sódico acuoso, se secó (sulfato sódico), se filtró y se concentró en vacío. La base libre se disolvió en cloroformó (50 mL) y se trató con 3-metilbenzo[b]tiofeno-2-carbaldehido (1,0 g, 5,7 mmol) y ácido trifluoracético (21,2 mmol, 1,32 g). La mezcla resultante se calentó entonces a reflujo durante 3 horas. La solución se enfrió a temperatura ambiente, se lavó una vez con una solución de bicarbonato sódico saturada, se secó, (sulfato sódico), se filtró y se concentró en vacío para obtener una mezcla de dos diastereómeros. Los isómeros se separaron por cromatografía (gel de sílice, 30% etil acetato:hexanos) para obtener 700 mg (38%) de metil éster del ácido (1R,3S)-1-(3-metilbenzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico(Intermedio 5) y 400 mg (19%) de metil éster del ácido (1S, 3S)-1-(3-metilbenzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (Intermedio 6).

Intermedio 5: ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,04 (s, 1H), 7,8-6,9 (m, 8H), 5,92 (d, J=2 Hz, 1H), 4,1 (dd, J=5,10 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,45 (t, J=2 Hz, 1H), 3,03 (dq, J=5,15 Hz, 2H), 2,5 (s, 3H); MS ES+m/e 377,1 (p+1), ES-m/e 375,2 (p-1).

Metil éster del ácido (1S,3S)-1-(3-metilbenzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (Intermedio 6): ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 10,4 (s, 1H), 7,9-6,9 (m, 8H), 5,85 (br s, 1H), 4,0 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,0 (br s, 1H), 2,95 (dd, J=6,10 Hz, 2H), 2,5 (s, 3H); ME ES+m/e 377,1 (p+1), ES-m/e 375,2 (p-1).

Ejemplo 5, se preparó (6R,12as)-2-metil-6-(e-metilbenzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,6,12,12a-hexahidropirazino[1',2':1, 6]pirido[3,4-b]indol-1,4-diona con el mismo método indicado anteriormente para el ejemplo 1. El residuo se disolvió en tetrahidrofurano (20 mL) y agua (5 mL). Se añadió una solución de 2M metilamina en tetrahidrofurano (5 mL, 20 mmol) y la reacción se calentó a reflujo durante 30 minutos. Después de enfriar a temperatura ambiente, el disolvente se evaporó y el residuo se diluyó con etil acetato. Se formó un sólido cristalino que se filtró para obtener 220 mg (20%) del Ejemplo 3 en forma de sólido incoloro: mp 230-234ºC. ^{1}H NMR (DMSO-d_{6}): \delta 11,07 (s, 1H), 7,9-7,0 (m, 9H), 4,5 (dd, J=4,13 Hz, 1H), 4,2 (ABq, J=18,63), 3,36 (dd, J=4,13 Hz, 1H), 3,06 (dd, J=13,4 Hz, 1H), 2,82 (s, 3H), 2,56 (s, 3H); MS ES+m/e 416,1 (p+1), ES-m/e 414,2 (p-1); IT (KBr, cm^{-1}) 1728, 1677, 1649.

El ejemplo 6 se preparó de forma idéntica al ejemplo 5 a partir del Intermedio 6.

Los Ejemplos 7 y 8 se prepararon de forma idéntica a los ejemplos 5 y 6 a partir los Intermedios 7 y 8.

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Ejemplo 7

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Ejemplo 8

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Preparación del metil éster del ácido (1S,3R)- y (1R,3R)-1-(3-metilbenzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico

(Intermedios 7 y 8)

Una solución acuosa de hidrocloruro de (R)-(+)-triptófano metil éster (5,5 g, 19,6 mmol) se hizo básica con una solución de bicarbonato sódico saturado y se extrajo con etil acetato. El extracto se lavó con agua, se secó (sulfato de magnesio), se filtró y se concentró en vacío para producir un aceite amarillo (3,72 g). La base libre se disolvió en cloroformo (75 ml) seguido de adición de 3-metilbenzo[b] tiofeno-2-carboxaldehído (3,0 g, 17,0 mmol) y ácido trifluoracético (3,0 mL). La solución se agitó a 25ºC durante 14 horas y a reflujo durante 1 hora. La solución se enfrió y se diluyó con etil acetato (200 mL). La solución se extrajo tres veces con etil acetato (100 mL), luego los extractos combinados se secaron (sulfato de magnesio), se filtraron y concentraron en vacío para obtener dos diastereómeros. Los isómeros se separaron por cromatografía (gel de sílice, 20% etil acetato/80% hexanos) para obtener 1,92 g (30%) de metil éster del ácido (1S,3R)-1-(3-metil benzo [b]tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico y 1,68 g (20%) de metil éster del ácido (1R, 3R)-1-(3-metilbenzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico.

Intermedio 7

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 10,51 (s, 1H), 7,82 (t, J=6,22 Hz, 2H), 7,37 (m, 3H), 7,21 (d, J=6,95 Hz, 1H), 6,99 (q, J=8,14 Hz, 2H), 5,90 (s, 1H), 3,98 (m, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,20 (m, 1H), 3,06 (m, 1H), 2,84 (m, 1H), 2,53 (s, 3H); MS ES+m/e 377,1 (p+1). Anal. Calculado para C_{22}H_{19}N_{2}O_{2}S: C, 70,18; H 5,35; N 7,44.

Intermedio 8

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 10,54 (s, 1H), 7,81 (d, J=8 Hz, 1H), 7,32 (m, 3H), 7,20 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,01 (m, 2H), 5,93 (s, 1H), 4,10 (m, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,43 (m, 1H), 3,07 (dd, J=4,15 Hz, 2H), 2,51 (s, 3H); MS ES+m/e 377,1 (p+1). Anal. calculado para C_{22}H_{19}N_{2}O_{2}S: C, 70,18; H 5,35; N 7,44. Hallado: C, 69.93; H, 5,31; N 7,33.

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Preparación del Ejemplo 7 (6R,12aR)-2-metil-6-(3-metilbenzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,6,7, 12,12a-hexahidropirazino [1'2':1,6]-pirido[3,4-b]indol-1,4-diona

Se trató metil éster del ácido (1R,3R)-1-(3-metil benzo[b]tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (1,75 g, 4,6 mmol) en la forma descrita a continuación en el Ejemplo 8 para obtener 540 mg (28%) del Ejemplo 7.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 11,21 (s, 1H), 7,82 (d, J=8,05 Hz, 2H), 7,54 (d, J=7,68 Hz, 1H),7,46 (m, 6H), 7,21 (m, 2H), 7,18 (m, 2H), 4,51 (dd, J=4,02, 11,7 Hz, 1H), 4,27 (d, J=17,9 Hz, 1H), 4,07 (d, J=17 Hz, 1H), 3,34 (m, 2H), 3,06 (dd, J=4,39, 19, 1H), 2,90 (s, 3H), 2,54 (s, 3H), TOF ME ES+ masa extracto calculada para C_{24}H_{22}N_{3}O_{2}S: (p+1): m/z=416. 1433. Hallado: 416.1558.

Preparación del Ejemplo 8

Se trató una solución de metil éster del ácido (1S, 3R)-1-(3-metilbenzo[b]-tiofeno-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-\beta-carbolina-3-carboxílico (1,50 g, 3,90 mmol) en tetrahidrofurano (25 mL) con trietilamina (25 mL-). Se añadió cloroacetil cloruro (0,50 g, 4,4, mmol) y la solución se calentó a reflujo durante 18 horas. Se añadieron unas cuantas gotas adiciónales de cloroacetil cloruro para que se completara la reacción. Después de enfriar, se añadió agua desionizada (10 mL) y etil acetato (200 mL), se separó la capa orgánica, se lavó una vez con ácido clorhídrico diluido, se secó (sulfato de magnesio), se filtró y se concentró en vacío. El residuo se disolvió en tetrahidrofurano (50 mL) y se trató con 2,5M de metilamina (1,0 mL) en tetrahidrofurano. La solución resultante se sometió a reflujo durante dos horas, se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con agua y se extrajo con etil acetato. La solución se secó (sulfato de magnesio) se filtró y concentró en vacío. La cromatografía (gel de sílice, 15% de etil acetato/85% de hexano a 40% etil acetato/60% hexano) del residuo dio como resultado 0,57 g (34%) del producto indicado en el título en forma de sólido amarillo.

^{1}H NMR (DMSO-d_{6}) \delta: 10,98 (s, 1H), 7,71 (m, 2H), 7,60 (d, J=6,95 Hz, 3H), 7,31 (m, 3H) (m, 3H), 7,05 (m, 2H), 6,68 (s, 1H), 4,45 (dd, J=4,39, 11,71 Hz, 1H), 4,17)d, J=18,66 Hz, 1H), 3,95 (d, J=17,56 Hz, 1H), 3,62 (dd, J=4,49, 15,73 Hz, 1H), 3,30 (d, J=7,31 Hz, 1H), 3,10 (m, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,65 (s, 3H).

Preparación del Ejemplo 9

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El Ejemplo 9 se preparó a partir de hidrocloruro de metil éster de D-triptófano y tieno [2,3-b] furano-5-carboxaldehído (Intermedio 9) en la forma descrita en el siguiente esquema sintético. Se sintetizó el Intermedio 9 en cinco etapas a partir de un acetal de partida según los procedimientos conocidos. Véase G.D. Hartman et al., J.Heterocyclic Chem. 27, 679 (1990).

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Preparación de metil 3-[2-(1,3-dioxolanil)]-furano-2-il mercapto acetato

Se añadió n-butillitio (126 mL, 201 mmol, solución 1,6M en hexanos) a una solución agitada mecánicamente de acetal de partida (27,6 g, 197 mmol) en THF anhidro (100 mL) bajo atmósfera de nitrógeno a -78ºC. El lodo resultante amarillo claro se agitó a -78ºC durante 45 minutos y después de esto se añadió azufre (6,7 g, 209 mmol) en tres porciones durante 5 minutos. El lodo naranja resultante se agitó a -78ºC durante 30 minutos, y luego a -50ºC durante 20 minutos para obtener una suspensión de color morado oscuro que se volvió a enfriar a -78ºC. Se añadió gota a gota durante 10 minutos una solución de metil bromo acetato (22, 4 g, 240 mmol) en THF (20 mL) para obtener una mezcla de color amarillo turbio. Después de agitar a -78ºC durante 30 minutos, se dejo calentar la mezcla de reacción gradualmente hasta -10ºC durante 1,5 horas y se agitó a -10ºC durante otros 20 minutos. La mezcla resultante marrón de dos bases se diluyó con dietil éter (500 mL), se lavó sucesivamente con salmuera (100 mL), agua, (2 x 75 mL), y salmuera (100 mL), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y el disolvente se quitó bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna flash, eluyendo con hexano/etil acetatos (3:1), para obtener el tioéter en forma de aceite amarillo (11,4 g, 28%): TLC R_{f}(4:1 hexanos/etil acetato) =0, 28; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta: 7,48 (d, J=2,0 Hz, 1H), 6,51 (d, J=2,0 Hz, 1H), 5,87 (s, 1H), 4,15-3,90 (m, 4H), 3,69 (s, 3H), 3,50 (s, 2H) ppm.

Preparación de (3-formilfurano-2-il))mercapto acetato

El tioéter anterior (11,4 g, 47,0 mmol) así como monohidrato de ácido p-tolueno sulfónico (450 mg, 2,4 mmol) se agitaron en una mezcla de acetona (80 mL) THF (20 mL), y HCl acuoso 2 N (12 mL) a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se neutralizó con una solución de NaHCO_{3} saturada y la suspensión resultante se concentró a 20 mL bajo presión reducida. La mezcla se diluyó con dietiléter (300 mL), se lavó sucesivamente con agua (30 mL) y salmuera (50 mL), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y el disolvente se quitó bajo presión reducida para obtener el aldehído en forma de aceite marrón que se utilizó sin purificación ulterior (9,24 g, 98%): TLC R_{f} (4:1 hexanos/etil acetato)= 0,30; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta: 10,0 (s, 1H), 7,51 (d, J=2,0 Hz, 1H), (d, J=2,0 Hz, 1H), (s, 5H) ppm.

Preparación de metil tieno [2,3-b]furano-5-carboxilato

Se añadió piperidina (5,60 mL, 57,3 mmol) a una solución de ácido acético (3,57 mL, 62,4 mmol) en benceno (200 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. A esta mezcla turbia se añadió una solución del aldehído anterior (9,24 g, 46,2 mmol) en benceno (50 mL). La solución roja resultante se sometió a reflujo eliminando el agua con un separador Dean-Stark durante 4 horas bajo atmósfera de nitrógeno. La solución parda resultante se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con éter (250 mL). La solución orgánica se lavó sucesivamente con agua (100 mL), HCl acuoso 2N (30 mL), una solución saturada de NaHCO_{3}, agua (30 mL) y salmuera (50 mL), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y el disolvente se quitó bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna de flash, se eluyó con hexanos/etil acetato (5:1) para obtener el tienofurano en forma de sólido rosa (4,6 g, 55%): TLC R_{f} (4:1 hexanos/etil acetato) = 0,79; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta: 7,72 (s, 1H), 7,66 (d, J=2,2 Hz, 1H), 6,74 (d, J=2,2 Hz, 1H), 3,90 (s, 3H) ppm.

Preparación de tieno[2,3-b]furano-5-carboxaldehído (Intermedio 9)

Se añadió a una suspensión de hidruro de aluminio litio (436 mg, 11,5 mmol) en éter (60 mL) a 0ºC bajo atmósfera de nitrógeno, una solución del tieno furano anterior (1,0 g, 5,49 mmol) en dietil éter (20 mL), gota a gota, tras lo cual la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 horas. La suspensión se enfrió a 0ºC y se trató sucesivamente con agua (0,5 mL), hidróxido sódico acuoso 6 N (1,3 mL) y agua (2,3 mL). La sal resultante se quitó por filtración bajo presión reducida, se lavó con éter (3 x 50 ml) y el filtrado se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y se concentró bajo presión reducida a un volumen de aprox. 2 mL. Esta solución concentrada de tieno [2,3-b]furano-5-carbinol se diluyó inmediatamente con cloruro de metileno (50 mL) y se utilizó directamente en la siguiente etapa TLC R_{f} (3:1 hexanos/etil acetato)= 0,20.

Se añadió a la solución de cloruro de metileno del carbinol anterior cloro cromato de piridinio (1,7 g, 8,63 mmol) y óxido de aluminio neutro (4,0 g). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno durante 1,5 horas. El lodo negro se filtró a través de un tapón corto de gel de sílice, se eluyó con dietiléter (100 mL), seguido de cloruro de metileno (100 mL). El filtrado se concentró para obtener el Intermedio 9 en forma de aceite, que se utilizó directamente en la siguiente etapa (674 mg, 81% en dos etapas): TLC R_{f} (3:1 hexanos/ etil acetato) =0, 33; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta: 9,90 (s, 1H), 7,70 (d, J=2,0 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,80 (d, J=2,0 Hz, 1H)
ppm.

Preparación de cis-\beta-carbolina (Intermedio 10)

Se sometió a reflujo una mezcla de Intermedio 1 (674 mg, 4,43 mmol) e hidrocloruro de metil éster de D-triptófano (1,18 g, 4,64 mmol) en isopropil alcohol (15 mL) bajo atmósfera de nitrógeno durante 2 horas. La solución amarilla resultante se enfrió a temperatura ambiente y se diluyó con etil acetato (100 mL). La mezcla se lavó sucesivamente con una solución saturada de NaHCO_{3} (15 mL), agua (10 mL) y salmuera (10 mL), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y el disolvente se quitó bajo presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía de columna flash, se eluyó con hexanos/etil acetato (2:1) para obtener el Intermedio 10 en forma de espuma blanca (285 mg, 18%): TLC R_{f} (2:1 hexanos/etil acetato)=0,33; ^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta: 7,70-7,50 (m, 3H), 7,30-7,09 (m, 3H), 7.08 (s, 1H), 6,67 (d, J=2,4 Hz, 1H), 5,55 (s, 1H), 3,92-4,00 (m, 1H), 3,83 (s, 3H), 327-3,17 (m, 1H), 3,08-2,93 (m, 1H) ppm. La trans-\beta-carbolina se obtuvo también en forma de sólido amarillo claro pero no se caracterizó (736 mg, 47%): TLC R_{f} (2:1 hexanos/etil acetato)=0,22.

Preparación de cis-2-cloroacetil-\beta-carbolina (Intermedio 11)

Se añadió gota a gota cloroacetil cloruro (0,079 mL, 1,03 mmol) a una mezcla de Intermedio 2 (280 mg, 0,80 mmol) y trietilamina (0,14 mL, 1,03 mmol) en cloruro e metileno (8 mL) a 0ºC bajo atmósfera de nitrógeno, y la mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 2 horas. La solución se diluyó con etil acetato (60 mL), se lavó con una solución saturada de NaHCO_{3} (10 mL) y salmuera (10 mL) y el disolvente se quitó bajo presión reducida para obtener el Intermedio 11 en forma de espuma rosa (405 mg), que se utilizó sin purificación ni caracterización ulterior.

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Preparación del Ejemplo 9

Una mezcla del Intermedio crudo 11 (405 mg) y metilamina (1,6 mL, 3,2 mmol, solución 2M en THF) en metanol (7 mL) se calentó a 45ºC bajo atmósfera de nitrógeno durante 15 horas. La solución resultante se concentró bajo presión reducida para obtener un sólido amarillo que se agitó en metanol (5 mL) durante 1 hora. El sólido se aisló por filtración bajo presión reducida, se lavó con metanol (5 x 1 mL) y se secó en horno de vacío a 60ºC durante 17 horas para obtener el Ejemplo 9 en forma de sólido blanco mate (189 mg, 61% a lo largo de dos etapas): mp 275-278ºC; TLC R_{f} (5:1 cloruro de metileno/etil acetato)=0,22; ^{1}H NMR (500 MHz, DMSO-d_{6}): \delta: 121,20 (s, 1H), 7,82 (d, J=2,0 HZ, 1H), 7,62 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,35 (d, J=7,8 Hz, 1H), 7,11 (t, J=7,8 Hz, 1H), 7,04 (t, J=7,8 Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,73 (d, J=2,0 Hz, 1H), 6,6 (s, 1H), 4,38 (dd, J=11,7, 4,2 Hz, 1H), 4,23 (d, J=17,1 Hz, 1H), 3,99 (d, J=17,1 Hz, 1H), 3,55 (dd, J=15,8, 4,6 Hz, 1H), 2,95-2,85 (m, 4H) ppm; ESI MS m/z 390 [C_{21}H_{17}N_{3}O_{3}S-H]^{+}; [\alpha]_{D}^{25^{o}C}= + 36, 4 (d=0, 25, DMSO). Anal. Calculado para C_{21}H_{17}N_{3}O_{3}S: C, 64,43; H, 438; N, 10,73. Hallado: C, 64,24; H, 4,39; N, 10,54. La estereoquímica del ejemplo 9 se confirmo como el cis isómero deseado mediante una serie de experimentos de diferencia NOE: una potenciación positiva NOE desde el protón C12a a 438 ppm al protón C6 a 6,60 ppm; una potenciación positiva NOE desde el protón C6 a 6,60 ppm al protón C12a a 4,48 ppm.

Ejemplo 10

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Ejemplo 11

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Ejemplo 12

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Ejemplo 13

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Ejemplo 14

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Preparación del Ejemplo Comparativo 15

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El ejemplo 15 se preparó a partir de un triptófano éster de fórmula estructural (IV), donde R^{0} es hidrógeno. El triptófano éster utilizado para preparar el Ejemplo 15 se puede obtener en el comercio en Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI.

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Intermedio comparativo 12

Preparación de una (+)-cis-\beta-carbolina

Se agitó a 60ºC bajo atmósfera de nitrógeno, durante 20 minutos, una mezcla de hidrocloruro de D-triptófano metil éster (1,27 g, 5,00 mmol), metoxi acetaldehído dimetil acetal (0,80 mL), 6,2 mmol) en isopropil alcohol (12 mL) y agua (2 mL). A la solución clara resultante se añadió HCl 2N (1 mL), y la solución amarilla resultante se agitó a 60ºC durante 1 hora. La solución se enfrió entonces a temperatura ambiente, se diluyó con etil acetato (100 mL), y se neutralizó con bicarbonato sódico acuoso saturado (NaHCO_{3}) (20 mL). La capa orgánica se lavó con salmuera (20 mL), se secó sobre sulfato sódico Na_{2}SO_{4}, se filtró y el disolvente se quitó bajo presión reducida para obtener un sólido amarillo. El residuo se purificó por cromatografía en columna, se eluyó con cloruro de metileno: etil acetato (4:1), obteniéndose el Intermedio 12 (+)-cis carbolina en forma de sólido blanco (435 mg, 32%): TLC R_{f} (4:1 cloruro de metileno/etil acetato)=0,28; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta: 8,48 (bs, 1H), 7,50 (d, J=8,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J=8,0 Hz, 1H)m, 7,20-7,03 (m, 2H), 4,42-4,34 (m, 1H), 3,87-3,54 (m, 6H), 3,50 (s, 3H), 3,20-3,10 (m, 1H), 2,90-2,76 (m, 1H). La trans carbolina se eluyó incompletamente de la columna: TLC R_{f} (4:1 cloruro de metileno/etil acetato) = 0,19.

Intermedio Comparativo 13

Preparación de una (+)-cis-2-cloroacetil-\beta-carbolina

Se añadió gota a gota cloroacetil cloruro (0,15 mL, 1,90 mmol) a una mezcla de Intermedio 12 (435 mg, 1,59 mmol) y trietilamina (0,27 mL, 1,90 mmol) en cloruro de metileno (18 mL) a 0ºC bajo atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante dos horas, tras lo cual se diluyó la mezcla con cloruro de metileno (50 mL) y se lavó sucesivamente con agua (15 mL) y salmuera (15 mL). La capa orgánica se concentró bajo presión reducida obteniéndose el Intermedio 13 en forma de espuma amarilla (590 mg), que se utilizó sin purificación. TLC R_{f} (4:1 cloruro de metileno/etil acetato)=0,89.

Preparación de los Ejemplos Comparativos 16-18

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Los ejemplos 16-18 se prepararon partiendo del D-triptófano metil éster idéntico (D-Trp-OMe.HCl) utilizado en la preparación del ejemplo 15, y con metoxi acetaldehído dimetil acetal en la secuencia sintética siguiente.

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Ejemplo Comparativo 14

Preparación de un dimetil acetal

Se enfrió a 0ºC una solución de metoxi acetaldehido dimetil acetal (4,11 g, 38 mmol) y bencil bromuro (4,6 mL, 38 mmol) en N,N-dimetil formamida (17 mL). Se añadió a esta mezcla comprimidos de hidróxido sódico (1,66 g, 42 mmol), y luego se calentó lentamente la mezcla resultante hasta la temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua y se extrajo con hexanos (2 x 200 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua, se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida, obteniéndose el Intermedio 15 en forma de aceite amarillo pálido (7,03 g, 93%): ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta: 7,28 (s, 5H), 4,52 (s, 2H), 4,49 (t, J=5,2 Hz, 2H), 3,44 (d, J=5,1 Hz, 1H), 3,32 (s, 6H).

Intermedio Comparativo 15

Preparación de una cis-\beta-carbolina

Se combinaron hidrocloruro de D-triptófano metil éster (4,07 g, 16 mmol) e Intermedio 14 (3,75 g, 19 mmol), agitando, en una solución de IPA (80 mL) y agua (20 mL). Se añadió a la mezcla resultante HCL 2N (2 mL) y la mezcla resultante se calentó a 70ºC durante 18 horas. La mezcla se neutralizó con NaHCO_{3} acuoso saturado y luego se extrajo con cloruro de metileno (2 x 400 mL). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre Na_{2}SO_{4}, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna flash, se eluyó con cloruro de metileno/acetona (98:2), obteniéndose el Intermedio 15 cis-carbolina en forma de aceite naranja (1,5 g, 27%): TLC R_{f} (6:1 cloruro de metileno/etil acetato)=0,49; ^{1}H NMR (300 MHz, CDCl_{3}): \delta: 8,46 (s, 1H), 7,50 (d, J=0,7 Hz, 1H), 7,16-7,25 (m, 6H), 7,18-7,06 (m, 2H), 4,65 (s, 2H), 4,44-4, 39 (m, 2H), 3,88-3,82 (m, 1H), 3,81 (s 3H), 3,66 (t, J=8,7 Hz, 1H), 3,18-3,11 (m, 1H), 2,88-2,78 (m, 1H), 1,87 (bs, 1H).

Intermedio comparativo 16

Preparación de una cis-2-cloroacetil-\beta-carbolina

Se añadió gota a gota cloroacetil cloruro (0,30 mL, 3,7 mmol) a una mezcla de Intermedio 15 (1,0 g, 2,9 mmol) y trietilamina (0,52 mL, 3,7 mmol) en cloruro de metileno (25 mL) a 0ºC bajo atmósfera de argón. La mezcla resultante se agitó a 0ºC durante 2 horas, después de lo cual se calentó lentamente la mezcla hasta temperatura ambiente a lo largo de la noche. La solución amarilla resultante se diluyó con cloruro de metileno, se lavó entonces sucesivamente con agua, NaHCO_{3} acuoso saturado y salmuera. La capa orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4}, se filtró y el disolvente se quitó bajo presión reducida obteniéndose el Intermedio 16 en forma de espuma pardo clara, que se utilizó sin purificación (1,2g): TLC R_{f} (6:1 cloruro de metileno/etil acetato)=0,94.

Ejemplo comparativo 16

Preparación de (6S,12aR)-6-bencil oximetil-2-metilo-2,3,6, 7,12,12a-hexa hidropirazino[1'2':1,6]pirido-[3,4-b]indol-1, 4-diona

Se calentó a 50ºC bajo atmósfera de argón durante la noche una mezcla de Intermedio 16 crudo (aprox. 1,2 g, 2,8 mmol), metilamina (7,0 mL, 2,0 M en THF, 135 mmol) y metanol (25 mL). La solución resultante se enfrió entonces a temperatura ambiente. Se quitó entonces el disolvente bajo presión reducida obteniéndose un residuo naranja, que se purificó por cromatografía en columna flash, se eluyó con cloruro de metileno/etil acetato (5:1-2:1), obteniéndose el ejemplo 11 en forma de aceite amarillo pálido, que cristalizo bajo vacío (0,83 g, 76%). Se recristalizó una pequeña muestra a partir de cloruro de metileno frío obteniéndose un sólido blanco. El compuesto era el cis-isómero según se confirmó mediante experimentos de diferencia NOE (potenciación positiva): mp 181-187ºC; TLC R_{f} (4:1 cloruro de metileno/etil acetato)=0,29; ^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta: 11,06 (s, 1H), 7,56 (d, J=7,6 Hz, 1H), 7,37 (d, J=7,7 Hz, 1H), 7,21-7,19 (m, 3H), 7,11-6,99 (m, 4H), 5,40 (t, J=3,9 Hz, 1H), 4,30 (s, 2H), 4,24-4,17 (m, 2H), 3,93 (d, J=17,0 Hz, 1H), 3,68 (d, J=4,0 Hz, 2H), 3,43-3,36 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 2,89-2,80 (m, 1H); ^{13}C NMR (75 MHz, DMSO-d_{6}) \delta: 167, 0, 166, 8, 138, 1, 135, 1, 132, 0, 127, 9, 127, 2, 126, 9, 125, 7, 120, 8, 118, 6, 117, 7, 111, 2, 106, 8, 71, 9, 71, 3, 54, 8, 51, 5, 51, 3, 32,8,22,3 ppm; CI MS (metano) m/z 268 (C_{16}H_{13}N_{3} O_{2}+H^{+}) [\alpha]_{D}^{25^{o}C}=+45ºC (c=0,5, CHCl_{3}). Anal. Calculado para C_{23}H_{23}N_{3}O_{3}: C, 70,93; H,5,95; N, 10, 79. Hallado: C,70, 54; H, 5,94; N, 10, 60.

Ejemplo comparativo 17

Preparación de (6S, 12aR)-6-Hidroximetil-2-metilo-2,3,6,7, 12,12a-hexa hidropirazino-[1'2':1,6]pirido[3,4-b-]indol-1, 4-diona

Se disolvió el ejemplo 16 (0,58 g, 1,5 mmol) en etanol (80 mL) y se trató con una cantidad catalítica de 10% de paladio sobre carbono (aproximadamente 10% húmedo). La mezcla se agitó bajo atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 2,5 horas, después de lo cual se quitó el catalizador de paladio por filtración en vacío a través de un tapón de Celite, eluyendo con metano. Los disolventes se quitaron bajo presión reducida obteniéndose un aceite amarillo que se trituró con metanol/dietil éter obteniéndose el ejemplo 17 en forma de sólido amarillo pálido (0,4 g, 91%). Se recristalizó una pequeña parte de la muestra a partir de metanol: mp 275-280ºC; TLC R_{f} (4:1:0,5 cloruro de metileno/etil acetato/metanol)=0,44; ^{1}H NMR (300 MHz, DMSO-d_{6}): \delta: 10, 98 (s, 1H), 7,52 (d, J=7, 6 Hz, 1H), 7,34 (d, 7,7 Hz, 1H), 7.08-6,97 (m, 2H), 5,20 (t, J=3,9 Hz, 1H), 4,86 (t, J=5,9 Hz, 2H), 4,21-4,14 (m, 2H), 3,95 (d, J=16,9 Hz, 1H), 3,65-3,62 (m, 2H), 3,39-3,32 (m, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,85-2,77 (m, 1H); ^{13}C NMR (75 MHz, DMSO-d_{6}). \delta: 167,0, 166,8, 135,9, 132,6, 125,8, 120,6, 118,5, 117,6, 111,2, 106,5, 63,2, 54,9, 53,8, 51,6, 432,8, 22,6 ppm; CI MS (metano) m/z 300 (C_{16}H_{17}N_{3}O_{3}+H)^{+}; [\alpha]_{D}^{25^{o}C}=+131,1 (c=0,5, metanol). Anal. calculado para C_{16}H_{17}N_{3}O_{3} 0,25 H_{2}O: C, 63,25; H, 5,81; N,13,83. Hallado: C,63,01; H, 5,73; N,13,69.

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Ejemplo comparativo 18

Preparación de (6S, 12aR)-metoxi metoximetil-2-metilo-2,3, 6,7,12,12a-hexa hidropirazino-[1',2':1, 6]pirido[3,4-b-] indol-1,4-diona

Se enfrió a 0ºC una solución del ejemplo 17 (0,2 g, 0,67 mmol) en N,N-dimetil formamida (10 mL). Se añadió sucesivamente a esta mezcla diisopropil etilamina (DIPEA) (0,3 mL, 1,7 mmol) y clorometil metil éter (MOM-Cl) (0,12 mL, 1,5 mmol). La mezcla resultante se calentó lentamente hasta temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en NaHCO_{3} acuoso saturado y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 100 mL). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con agua y cloruro de amonio acuoso saturado (NH_{4}Cl), se secaron sobre Na_{2}SO_{4} se filtraron y concentraron bajo presión reducida obteniéndose el ejemplo 18 en forma de aceite marrón claro, que se solidificó bajo vacío. Este residuo se purificó por cromatografía de columna flash, se eluyó con cloruro de metileno/ etil acetato/metanol (4:1:0,2), obteniéndose el ejemplo 18 en forma de sólido blanco (0,05 g, 22%). La recristalización a partir de cloruro de metileno frío/dietil éter produjo un sólido cristalino blanco que era el cis-isómero, según se confirmo mediante experimentos de diferencia NOE (potenciación positiva): mp 180-185ºC; TLC R_{f} (4:1:0,2) cloruro de metileno/etil acetato/metanol)=0,43. ^{1}H NMR (300 MHz, benceno-d_{6}): \delta: 7,53 (d, J=7, 4 Hz, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,24-7,12 (m, 3H), 5,39-5,36 (m, 1H), 4,27-4,22 (m, 2H), 4,00-3,95 (m, 1H), 3,78-3,71 (m, 1H), 3,64-3,59 (m, 1H), 3,38-3,08 (m, 4H), 2,86 (s, 2H), 2,38 (s, 3H); ^{13}C NMR (75 MHz, benceno-d_{6}): \delta: 167,1, 166,6, 136,9, 132,2, 122,7, 120,5, 119,7, 111,7, 108,5, 69,9, 56,1, 55,1, 52,7, 52,4, 33,1, 30,5,24,6 ppm; CI MS (metano) m/z 344 (C_{18}H_{21}N_{3}O_{4}+H)^{+}; [\alpha]_{D}^{25^{o}C}=+40,9 (c=0,32. benceno-d_{6}). Anal. calculado para C_{18} H_{21}N_{3}O_{4}: C, 62,96; H,616; N, 12,24. Hallado: C, 62,94; H, 6,12; N, 12, 14.

A continuación, se dan ejemplos adicionales de compuestos de fórmula estructural (I) que se pueden preparar mediante métodos análogos a los de la preparación de los ejemplos 1-18.

Ejemplo comparativo 19

(+-, cis)-6-isobutilo-2-metilo-2,3,6,7,12,12a-hexa hidropirazino[l',2':1,6]pirido [3,4-b]indol-1,4-diona

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Ejemplo Comparativo 20

(+-,cis)-6-ciclohexil-2-metilo-2,3,6,7,12,12a-hexa hidropirazino 1',2':1,6] pirido[3,4-b-]indol,1,4-diona

69

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Ejemplo Comparativo 21

(+-,cis)-6-ciclohex-3-enil-2-metilo-2,3,6,7,12,12a-hexa hidropirazino 1',2':1,6] pirido[3,4-b-]indol,1,4-diona

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Ejemplo comparativo 22

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Ejemplo comparativo 23

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Ejemplo 24

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Los compuestos de la presente invención pueden formularse en comprimidos para la administración oral. Por ejemplo, un compuesto de fórmula (I). puede formarse en una dispersión con un vehículo polimérico utilizando el método de coprecipitación indicado en WO 96/38131, que se incorpora aquí como referencia. La dispersión coprecipitada se puede mezclar entonces con excipientes y luego comprimir para obtener comprimidos que se pueden revestir opcionalmente.

Se comprobó la capacidad de inhibición de la PDE5 de los compuestos de fórmula estructural (I). La capacidad de un compuesto para inhibir la actividad de PDE5 está relacionada con el valor IC_{50} del compuesto, es decir la concentración de inhibidor requerida para la inhibición al 50% de la actividad enzimática. El valor de IC_{50} para compuestos de fórmula estructural (I) se determinó utilizando recombinante humano PDE5.

Los compuestos de la presente invención suelen presentar un valor IC_{50} frente al recombinante humano PDE5 de menos de aproximadamente 50 \mum, y de preferencia menos de aproximadamente 25 \mum, y todavía mejor, menos de aproximadamente 15 \mum. Los compuestos de la presente invención suelen presentar un valor IC_{50} respecto de recombinante humano PDE5 de menos de aproximadamente 1 \mum, y muchas veces menos de aproximadamente 0,05 \mum. Para obtener todas las ventajas de la presente invención, un inhibidor actual de PDE5 tiene un IC_{50} de aproximadamente 0,1 nM a aproximadamente 15 \mum.

La producción de recombinante humano PDEs y la determinación de IC_{50} se puede realizar utilizando métodos muy conocidos en el estado de la técnica. A continuación, se describen ciertos métodos a modo de ejemplo:

Expresión de PDEs humano Expresión en Saccharomyces cerevisiae (levadura)

La producción recombinante de PDE1B, PDE2, PDE4A, PDE4B, PDE4C, PDE4D, PDE5 y PDE7 humano se realizó de forma similar a la descrita en el ejemplo 7 de la patente US 5,702,936, que se incluye aquí a modo de referencia, con la salvedad de que el vector de transformación de levadura utilizado, que se deriva del plásmido ADH2 básico descrito en Price et al. Methods in Enzymology, 185, páginas. 308-318 (1990), incorporaba secuencias de terminador y promotor ADH2 de levadura y el huésped de Saccharomyces cerevisiae era la cepa BJ2-54 deficiente en proteasa, depositada el 11 de agosto de 1998 en la American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, con número de acceso ATCC 74465. Las células huéspedes transformadas se cultivaron en medio 2X SC-leu, pH 6,2 con oligometales y vitaminas. Después de 24 horas, se añadió YEP que contenía glicerol, hasta obtener una concentración final de 2X YET/3% glicerol. Aproximadamente 24 horas más tarde, se recogieron las células, se lavaron y se almacenaron a -70ºC.

Preparaciones de fosfodiesterasa humana Determinaciones de la actividad de la fosfodiesterasa

La actividad de la fosfodiesterasa de las preparaciones se determinó del siguiente modo. Se realizaron unos ensayos de PDE que utilizan una técnica de separación con carbón vegetal, prácticamente en la forma descrita en Loughney et al. (1996). En este ensayo, la actividad de PDE convierte [32P] cAMP o [32P] cGMP en [32P]5'-AMP o [32P]5'-GMP correspondiente en proporción a la cantidad de actividad PDE presente. El [32P] 5'-AMP o [32P]5'-GMP se convirtió cuantitativamente entonces en fosfato [32P] libre y adenosina o guanosina no rotulada por la acción del veneno de serpiente 5'-nucleotidasa. Por lo tanto, la cantidad de [32P] fosfato liberada es proporcional a la actividad enzimática. El ensayo se realizó a 30ºC en 100 \muL de mezcla de reacción que contenía (concentraciones finales) 40 mM Tris HCl (pH 8,0), 1 \muM ZnSO_{4}, 5 mM MgCl_{2} y 0,1 mg/mL de albúmina de suero bovino (BSA). La enzima PDE se encontraba presente en cantidades que producían <30% hidrólisis total del sustrato (condiciones de ensayo lineales). El ensayo se inició por adición de sustrato (1 mM [32P] cAMP o cGMP), y se incubó la mezcla durante 12 minutos. Se añadieron entonces setenta y cinco (75) \mug de veneno de Crotalus atrox y se prosiguió la incubación durante 3 minutos (15 minutos en total). La reacción se detuvo por adición de 200 \muL de carbón vegetal activado (25 mg/mL de suspensión en 0,1 M NaH_{2} PO_{4}. Después de centrifugación (750 X g durante 3 minutos) para sedimentar el carbón vegetal, se tomó una muestra del sobrenadante para determinar la radiactividad en un contador de centelleo y se calculó la actividad de PDE.

Purificación de PDE5 de S. cerevisiae

Se descongelaron gránulos celulares (29 g) sobre hielo con un volumen igual de tampon de Lisis (25 mM Tris HCl, pH 8, 5 mN MgCl_{2}, 0,25 mM DTT, 1 mM benzamidina y 10 \muM ZnSO_{4}. Las células se lisaron en Microfluidizador® (Microfluidics Corp.) utilizando nitrógeno a 20.000 psi. El lisato se centrifugó y filtró a través de filtros desechables de 0,45 \mum. El filtrado se aplicó a una columna de 150 mL de Q SEPHAROSE® Fast-Flow (Farmacia). La columna se lavó con 1,5 volúmenes de tampón A (20 mM Bis-Tris propano, pH 6,8, 1 mM MgCl_{2}, 0,25 mM DTT, 10 \muM ZnSO_{4}) y se eluyó con un gradiente escalonado de 125-1000 mM NaCl en tampón A seguido de un gradiente lineal de 125-1000 mM NaCl en tampón A. Se aplicaron fracciones activas del gradiente lineal a una columna de hidroxiapatita de 180 mL en tampón B (20 mM BisTris propano (pH 6,8), 1 mM MgCl_{2}, 0,25 mM DTT, 10 \muM ZnSO_{4}, y 250 mM KCl). Después de la carga, se lavó la columna con 2 volúmenes de tampón B y se eluyó con un gradiente lineal de 0-125 mM de fosfato potásico en tampón B. Se agruparon fracciones activas, se precipitaron con 60% de sulfato de amonio y se resuspendieron en tampón C (20 mM BisTris propano, pH 6, 8, 125 mM NaCl, 0,5 mM DTT, y 10 \muM ZnSO_{4}). La agrupación (pool) se aplicó a una columna de 140 mL de SEPHACRYL® S-300 HR y se eluyó con tampón C. Se diluyeron fracciones ácidas hasta 50% de glicerol y se almacenaron a -20ºC.

Las preparaciones resultantes eran puras en 85% aproximadamente con SDS-PAGE. Estas preparaciones tenían actividades específicas de aproximadamente 3 \mumol cGMP hidrolizado por minuto por miligramo de proteína.

Efecto inhibitorio en cGMP-PDE

La actividad cGMP-PDE de compuestos de la presente invención se midió utilizando un ensayo de una etapa adaptado del de Wells et al., Biochim. Biophys. Acta, 384, 430 (1975). El medio de reacción contenía 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 5 mM acetato de magnesio, 250 \mug/ml 5'-nucleotidasa, 1 mM EGTA, y 0,15 \muM 8-[H^{3}]-cGMP. A no ser que se indique otra cosa, la enzima utilizada era PDE5 recombinante humano (ICOS Corp., Bothell, Washington).

Se disolvieron compuestos de la invención en DMSO finalmente presente al 2% en el ensayo. El tiempo de incubación fue de 30 minutos, durante el cual la conversión total de substrato no excedió de 30%.

Los valores IC_{50} para los compuestos examinados se determinaron a partir de curvas de respuesta de concentración, utilizando habitualmente concentraciones que oscilan entre 10 nM y 10 \muM. Las pruebas con respecto a otras enzimas PDE utilizando metodología standard mostraron que los compuestos de la invención son selectivos para la enzima PDE cGMP específica.

Datos biológicos

Los compuestos según la presente invención mostraron, según se pudo ver, un valor IC_{50} de menos de 500 nM. En la siguiente tabla, se ofrecen los datos de la prueba in vitro para compuestos representativos de la invención:

TABLA 1 Resultados in vitro

Ejemplo	PDE5 IC_{50} (nM)
1	130
2	8726
3	16
4	880
5	25
6	40
7	1570
8	1

TABLA 1 (continuación)

Ejemplo	PDE5 IC_{50} (nM)
9	12
15	333*
16	1.500*
17	23.000*
18	195*
19	4.800*
20	230 (aorta bovino)*
21	560*
* Ejemplos comparativos

Como es natural, se pueden realizar muchas modificaciones y variaciones de la invención expuesta anteriormente y por consiguiente solo se imponen las limitaciones indicadas en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (19)

1. Un compuesto que tiene como fórmula:

74

donde R^{0} es C_{1-6}alquilo;

R^{1} se elige dentro del grupo formado por hidrógeno, C_{1-6}alquilo, C_{2-6}alquenilo, C_{2-6}alquinilo, C_{3-8}cicloalquilo o C_{3-8}cicloalquilC_{1-3}alquilo;

R^{2} se elige entre

75

o

76

R^{3} se elige entre hidrógeno o C_{1-6}alquilo, o R^{1} o R^{3} juntos representan un componente de cadena de alquilo o alquenilo de 3 o 4 lados de un anillo de 5 o 6 lados;

R^{a} se elige entre hidrógeno o C_{1-6}alquilo;

R^{c} es cero o se elige entre hidrógeno o C_{1-6}alquilo;

W es 0, S, o NR^{C}; X es O, S, o NR^{a}; Y es CR^{a} o N; Z es CR^{a}, C(R^{a})_{2} o NR^{c}; y q es 0, 1,2,3 o 4, y sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

2. Los compuestas de la reivindicación 1 representados por la fórmula

77

y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos.

3. El compuesto de la reivindicación 1, donde R^{1} se elige entre hidrógeno, C_{1-4}alquilo o C_{3-6}cicloalquilmetilo.

4. El compuesto de la reivindicación 1, donde R^{3} es hidrógeno.

5. El compuesto de la reivindicación 1, donde R^{1} y R^{3} juntos representan un componente de cadena alquilo de 3 o 4 lados.

6. El compuesto de la reivindicación 1, donde R^{2} se elige entre

78

o

79

7. El compuesto de la reivindicación 6, donde R^{a} se elige entre hidrógeno o C_{1-6}alquilo.

8. Un compuesto elegido entre

80

o

81

9. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o una composición farmacéutica según la reivindicación 9 que se utiliza como agente terapéutico.

11. Compuesto o composición según la reivindicación 10, que se utiliza en un método de tratamiento profiláctico o curativo de un animal, macho o hembra, para un cuadro patológico en el que la inhibición de la PDE cGMP-específica presenta un beneficio terapéutico.

12. Compuesto o composición según la reivindicación 10, que se utiliza en un método de tratamiento profiláctico o curativo de un cuadro patológico en el que la inhibición de la PDE cGMP-específica presenta un beneficio terapéutico, en un cuerpo de animal humano o no humano.

13. El compuesto o la composición de la reivindicación 11 o 12, en el que el cuadro patológico es la disfunción eréctil masculina.

14. El compuesto o la composición de la reivindicación 11 o 12, en el que el cuadro patológico es el trastorno femenino de la excitación.

15. Compuesto o composición según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 12 donde el cuadro patológico se elige entre angina de pecho estable, inestable y variante, hipertensión, hipertensión pulmonar, neumopatía obstructiva crónica, hipertensión maligna, feocromocitoma, síndrome disneico agudo, insuficiencia cardiaca congestiva, insuficiencia renal crónica y aguda, aterosclerosis, estados de permeabilidad reducida de los vasos sanguíneos, vasculopatía periférica, trastornos vasculares, trombocitemia, cuadros clínicos inflamatorios, infarto de miocardio, ictus, bronquitis, asma crónica, asma alérgica, rinitis alérgica, glaucoma, úlcera péptica, trastorno de la motilidad intestinal, angioplastia coronaria transluminal post-percutánea, angioplastia de carótida, estenosis de injerto en cirugía post-bypass, osteoporosis, parto prematuro, hipertrofia prostática benigna, o síndrome de intestino irritable.

16. Compuesto o composición según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, en las que el tratamiento es un tratamiento oral.

17. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o de una composición farmacéutica según la reivindicación 9, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento curativo o profiláctico de la disfunción eréctil masculina o del trastorno femenino de la excitación.

18. Utilización de un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o de una composición farmacéutica según la reivindicación 9, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento curativo o profiláctico de la angina de pecho estable, inestable y variante, la hipertensión, hipertensión pulmonar, neumopatia obstructiva crónica, hipertensión maligna, feocromocitoma, síndrome disneico agudo, insuficiencia cardiaca congestiva, insuficiencia renal crónica y aguda, aterosclerosis, estados de permeabilidad reducida de los vasos sanguíneos, vasculopatía periférica, trastornos vasculares, trombocitemia, cuadros clínicos inflamatorios, infarto de miocardio, ictus, bronquitis, asma crónica, asma alérgica, rinitis alérgica, glaucoma, úlcera péptica, trastorno de la motilidad intestinal, angioplastia coronaria transluminal post-percutánea, angioplastia de carótida, estenosis de injerto en cirugía post-bypass, osteoporosis, parto prematuro, hipertrofia prostática benigna, o síndrome de intestino irritable en un cuerpo animal humano o no humano.

19. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 17 a 18, en la que el tratamiento es un tratamiento oral.