ES2199784T3 - Procedimiento y dispositivo para elevar y / o disminuir la concentracion de sustancias inmunomoduladoras activas en mezclas de sustancias. - Google Patents
Procedimiento y dispositivo para elevar y / o disminuir la concentracion de sustancias inmunomoduladoras activas en mezclas de sustancias.Info
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Abstract
Procedimiento para elevar y/o disminuir la concentración de sustancias activas inmunomoduladoras en mezclas de sustancias o soluciones, que contienen sustancias inmunomoduladoras potencialmente activas, en el que se introduce la mezcla de sustancias en un biorreactor y ahí se pone en contacto con células, eligiéndose las células de manera que ellas tengan receptores para al menos un tipo de un grupo G1 de sustancias inmunomoduladoras activas, cuya concentración debe ser disminuida en la mezcla de sustancias, y que están en condiciones de adsorber este tipo, y/o que las células producen al menos un tipo de otro grupo G2 de sustancias inmunomoduladoras, cuya concentración se debe elevar en la mezcla de sustancias, y que están en condiciones de liberar este tipo en la mezcla de sustancias, a continuación se separa la mezcla de sustancias de las células y se retira del biorreactor.
Description
Procedimiento y dispositivo para elevar y/o
disminuir la concentración de sustancias inmunomoduladoras activas
en mezclas de sustancias.
La invención se refiere a un procedimiento para
elevar y/o disminuir la concentración de sustancias
inmunomoduladoras activas en mezclas de sustancias, que contienen
sustancias inmunomoduladoras potencialmente activas, así como un
correspondiente dispositivo para llevar a cabo el procedimiento.
El sistema inmune y su modulación han entrado de
manera creciente en los últimos años dentro del alcance de la
investigación básica y aplicada en el campo de la biotecnología,
cosmética y medicina, pero también en la tecnología de alimentos y
ambiental. Las causas de ello están por un lado en la aparición de
nuevas infecciones y en la extensión de las conocidas, pero
también sobre todo por la aparición creciente de sustancias con
potencial inmunomodulador, como p. ej. sustancias en los alimentos,
cosméticos o del ambiente, que alteran de forma inadecuada en su
función al sistema inmune y por ello originan p. ej. alergias o
enfermedades autoinmunes.
La forma más grave de una infección, por la cual
los causantes de la enfermedad se han extendido por todo el
cuerpo, se denomina sepsis. En el transcurso de una sepsis
aparecen una pluralidad de alteraciones en la actividad de los
componentes del sistema inmune, lo que termina, en el caso de
sobrepasar límites críticos, con la muerte del organismo.
El conocimiento actual sobre el desarrollo y la
patogénesis de una sepsis procede principalmente de
investigaciones sobre las interacciones entre bacterias Gram
negativas y el organismo humano (Chest 1992; 101;
1644-1655). Los agentes principales de la
introducción de un desencadenamiento de la sepsis son primeramente
las endotoxinas bacterianas, un grupo de polisacáridos de la pared
celular de las bacterias Gram negativas (Reviews Infect Dis. 1983;
5; 733-747). Las endotoxinas, que son probablemente
las principales sustancias causantes de fiebre (pirógenos), activan
sobre todo los monocitos y las células endoteliales. Mediante la
liberación de mediadores o formación de moléculas de adhesión se
activa el sistema inmune, se prepara una adhesión de leucocitos. Se
llega a la migración de los leucocitos en el tejido con elevado
contenido en quimiotaxina (lugares de la inflamación local). Si se
puede eliminar el origen local, entonces se suspende el proceso de
inflamación. Si se llega después de largo tiempo de manera
intermitente o continua a una entrada excesiva de bacterias,
endotoxinas o de otros productos celulares que actúan como
antígeno en la sangre, cambia la reacción de defensa llena de
sentido de monocitos y células endoteliales a un proceso
autoagresivo con las más graves alteraciones de la circulación,
fallos de órganos secundarios, alteraciones de la coagulación (DIC)
etc.: se desarrolla una sepsis (con detección positiva del
patógeno) o un Systemic Inflammatory Response Síndrome (SIRS, no
se detecta ningún causante) y llevan a la muerte hasta al 30% de
los casos en una sepsis sencilla y en el shock séptico incluso
hasta al 90% de los pacientes (Sepsis. An interdisciplinary
challenge. Berlin, Heidelberg, Nueva York; Editorial Springer,
1989).
Ha aumentado mucho en los últimos años las
bacterias Gram positivas como causa de la sepsis en el campo
visual de la investigación. Numerosos trabajos en la última década
se ocupan de la incidencia creciente de la sepsis por las Gram
positivas. Las estadísticas muestran, que actualmente 30 a 40% de
todos los casos de sepsis se deben a bacterias Gram positivas (Am
J Med. 1991; 91 (supl. 3B): 72-89). El tratamiento
de la sepsis bacteriana se ha dificultado adicionalmente en los
centros de medicina intensiva a causa de la creciente resistencia
a los antibióticos. Actualmente, se considera la sepsis como cuadro
patológico de varias fases, a la cual a la fase de entrada de los
gérmenes se une una llamada fase de hiperinflamación con una
liberación aumentada de citoquinas
pro-inflamatorias, como p. ej. en el factor de
necrosis tumoral alfa (TNF alfa) o a algunas interleucinas (p. ej.
interleucina-1 e interleucina-6).
Con el transcurso del proceso se llega a causa de mecanismos
negativos de retroalimentación a un cambio en exceso a favor de las
citoquinas antiinflamatorias (factor de crecimiento transformante
beta = TGF beta, interleucina-4,
interleucina-10, interleucina-13) y
con ello a la llamada fase de inmunoparálisis, que lleva
finalmente a la muerte del paciente (Internist 1997; 38;
541-552). Sin embargo hasta ahora no se ha
conseguido una definición clara de las diferentes fases a base de
valores concretos paraclínicos.
El tratamiento primario de la sepsis bacteriana
es actualmente sólo posible con medicamentos. Las esperanzas se
basan, además de en la terapia con antibióticos, en la utilización
de sustancias antiinflamatorias, que hoy actualmente se prueban sus
efectos en la sepsis de las Gram negativas (Nature, 1990; 348:
550-552, FASEB J. 1991; 5:
338-343). Ya se han terminado algunos estudios sobre
esto y han dado hasta ahora sólo resultados decepcionantes. Así,
ni los anticuerpos dirigidos contra el lípido A de las endotoxinas
(N. Engl. J. Med. 1991; 324: 429-436, JAMA 1991;
266: 1097-1102) ni las terapias anticitoquina
contra el factor de necrosis tumoral alfa (Crit Care Med. 1993; 21;
318-327, JAMA 1995; 273; 934-941) o
contra la interleucina-1 (JAMA 1994; 271;
1836-1842) pudieron contribuir a una disminución de
la mortalidad total. Sin embargo, parece que mejoran los pacientes
con elevados niveles de citoquina, al menos parcialmente (Crit Care
Med. 1993; 21; 318-327, Crit. Care Med. 1996; 24;
733-742). Pero los estudios se caracterizan por una
elevada heterogeneidad de los grupos de pacientes, así como de la
hasta ahora insuficiente división en estadios clínicos del
desarrollo de la sepsis.
Un nuevo medicamento es la utilización de
citoquinas pro-inflamatorias (interferón gamma) en
la fase de la inmunoparálisis, que parece prometedora en los
primeros estudios no aleatorios, pero que hasta ahora mostraba una
mortalidad de por encima de 30% (Nature Medicine 1997; 3;
678-681). Medicamentos inmunomoduladores solicitados
según el derecho de patentes son en particular la consecuencia de
sustancias inmunomoduladoras especiales, como p. ej. algunos
antagonistas de citoquinas antes descritos (documentos de patente
WO 94/06431 A1, EE.UU. 5.585.486, EE.UU.5.585.357, EE.UU. 5.565.430,
EE.UU. 5.552.400), lectinas de muérdago (DE 4221836), fosfomicina
(JP 09183730 A), sustancias macrocíclicas (documentos de patente
EE.UU. 5.527.907, EE.UU. 5.541.189, EE.UU. 5.541.193, EE.UU.
5.561.139, EE.UU. 5.561.140) o extractos bacterianos (documento de
patente WO 89/09607, EP 0 363 491). Ninguno de estos medicamentos
pudieron mostrar mejoras terapéuticas decisivas en la terapia de la
sepsis.
Un medicamento interesante es la utilización de
factores estimuladores de granulocitos o macrófagos
(G-CSF, GM-CSF). Se puede influir de
manera favorable en el desarrollo de graves septicemias mediante
el suministro de tales factores (Blood 1999; 93;
425-439; Curr Opin Hematol 1999; 6;
176-183; J Infect Dis 1999; 179: páginas
342-352; Arch Pediatr Adolesc Med 1999; 153;
984-988). Se alcanza el efecto clínico favorable lo
más pronto posible mediante un aumento del grado de diferenciación
y de la funcionalidad específica de glóbulos blancos sanguíneos
(granulocitos y macrófagos).
Las alergias designan las reacciones provocadas
por una sensibilización anterior del sistema inmune con respecto a
una sustancia que normalmente no es del cuerpo. Se provocan por lo
general mediante grupos químicos pequeños (haptenos), que están
unidos a una estructura química mayor (el soporte del hapteno, el
complejo total se denomina alergeno completo). Se diferencian por
los diferentes tipos de reacciones alérgicas. En particular el
tipo I está causada por una formación aumentada de anticuerpos del
tipo de inmunoglobulina E, que se dirigen contra el
hapteno/alergeno. La unión y reticulación de las moléculas de
inmunoglobulina E unidas a receptores de la superficie mediante los
alergenos lleva a la activación de las inmunocélulas
(principalmente células cebadas y granulocitos basófilos) con la
subsiguiente formación y liberación de una serie de moléculas
inmunomoduladoras (p. e. histamina, prostaglandinas, leucotrienos y
citoquinas como TNF alfa o diferentes interleucinas) (Bundschuh, G.
Enciclopedia de la Inmunología, 2. edición, Medical Service,
Munich 1992). Las terapias inmunomoduladoras actuales en el
tratamiento de alergias se concentran sobre todo en el bloqueo de la
liberación de las sustancias inmunomoduladoras mediante
inmunosupresores (p. ej. glucocorticoides) o en la inhibición de
la unión de las sustancias a las células diana (p. ej. antagonistas
de receptores de histamina o leucotrieno). Otra forma de terapia es
la administración de pequeñas cantidades de alergeno y elevación
lenta de la dosis con el fin de una desensibilización (Bundschuh,
G. Enciclopedia de la Inmunología, 2. edición, Medical Service,
Munich 1992).
Los medicamentos extracorporales con el fin de un
lavado de la sangre contenían hasta ahora el uso de adsorbentes
químicos para disminuir los componentes de los gérmenes (p. ej.
celulosa DEAE, polietilenimina o fibras PMX como adsorbentes de
endotoxinas) (Mitzner et al. Artificial Organs 1992, 17,
775-781, Samtleben et al. Artificial Organs 1998,
22, 43-46; Tani et al. Artificial Organs 1998, 22,
1038-1044).
Los medicamentos inmunomoduladores hasta ahora
conocidos se llevaban a cabo principalmente mediante la
administración in-vivo de sustancias. En el
caso de estas sustancias se trata p. ej. de los antibióticos, que
impiden la reproducción de los gérmenes y eliminan con ello a los
gérmenes como agente inmunomodulador. Se realizaron nuevos
medicamentos de la inmunomodulación mediante anticuerpos dirigidos
contra citoquinas u otros preparados de proteínas que se unen a
las citoquinas y que no tienen ninguno o sólo un pequeño uso
terapéutico (Internist 1997; 38: 541-552). Hasta
ahora los adsorbentes de endotoxinas han mostrado buenas
disminuciones in-vitro. En la terapia
extracorporal de graves infecciones no se han utilizado hasta ahora
adsorbentes de endotoxinas en estudios controlados aleatorios. Sin
embargo, un estudio no aleatorio con fibras PMX mostró
in-vivo una disminución de la tasa de
mortalidad de sólo 46%, lo que sigue siendo todavía una cifra
elevada no satisfactoria. (Tani et al. Artificial Organs 1998, 22,
1038- 1044).
En estados de hiperinflamación o de
inmunoparálisis, se llega a una elevación de las concentraciones
en plasma sanguíneo de un gran número de sustancias
inmunomoduladoras, como p. ej. citoquinas, componentes de gérmenes y
productos de gérmenes, que alteran, en parte bastante, los
procesos de defensa de infecciones. La disminución o
administración de un única citoquina no ha traído hasta ahora
ningún éxito terapéutico convincente. Mucho más se ha cuestionado
simultáneamente sobre la eliminación racional de concentraciones
muy elevadas de diferentes sustancias, así como la sustitución de
otras sustancias, las cuales están presentes en una concentración
demasiado baja, para estabilizar el sistema inmune alterado. La
complejidad del problema de las concentraciones variables de las
sustancias inmunomoduladoras, necesita por un lado la medida
sensible, pero por otro lado también la capacidad de la sustitución
rápida de cada sustancia. Sólo mediante el retraso del tiempo en la
determinación de la concentración de citoquina, podrán contribuir
en el futuro a la solución las terapias de sustitución en forma de
inyecciones/infusiones solamente de forma relativa.
Por tanto, la misión de la presente invención
consiste en proporcionar un procedimiento mejorado con respecto al
estado de la técnica y un dispositivo para variar la concentración
de sustancias inmunomoduladoras activas en una mezcla de sustancias
o en una solución.
Según la invención, se soluciona esta misión
mediante un procedimiento de la técnica citada al principio, en el
que se introduce la mezcla de sustancias o la solución en un
biorreactor y se pone ahí en contacto con células, eligiéndose de
tal manera las células, que ellas tienen receptores para al menos
un tipo de un grupo G1 de sustancias activas inmunomoduladoras,
cuya concentración debe disminuir en la mezcla de sustancias, y que
están en la situación de adsorber este tipo, y/o que las células
fabrican al menos un tipo de otro grupo G2 de sustancias
inmunomoduladoras, cuya concentración se debe elevar en la mezcla
de sustancias, y que están en la situación de liberar este tipo en
la mezcla de sustancias, y que a continuación la mezcla de
sustancias se separa de las células y se retira del
biorreactor.
Se soluciona también la misión según la invención
mediante un dispositivo para elevar y/o disminuir la concentración
de sustancias activas inmunomoduladoras en una mezcla de
sustancias con un biorreactor con una entrada para introducir la
mezcla de sustancias y una salida para retirar la mezcla de
sustancias, estando presentes en el biorreactor células vivas en
una forma, que se pueda poner en contacto la mezcla de sustancias
con las células, y con un dispositivo de retención celular, que está
de tal manera, que la mezcla de sustancias es separable de las
células y se puede retirar del biorreactor sin células, teniendo
las células receptores para al menos un tipo de un grupo G1 de
sustancias inmunomoduladoras activas, cuya concentración en la
mezcla de sustancias debe disminuir, y que están en la situación,
de adsorber este tipo, y/o que las células fabrican al menos un
tipo de otro grupo G2 de sustancias inmunomoduladoras, cuya
concentración se debe elevar en la mezcla de sustancias, y que
están en la situación, de liberar este tipo en la mezcla de
sustancias.
Preferiblemente, la mezcla de sustancias
utilizada en el procedimiento según la invención es sangre, plasma
sanguíneo, componentes del plasma sanguíneo y/o agua, solas o en
combinación. Contiene opcionalmente además proteínas, péptidos,
hidratos de carbono, lípidos, ácidos nucleicos, sales y/o
microorganismos, solos o en combinación.
La utilización de células, que adsorben de forma
selectiva con sus receptores superficiales específicos las
sustancias inmunomoduladoras y las retiran de esta manera la
mezcla de sustancias, pero que por otro lado también pueden ellas
mismas formar o liberar las moléculas inmunomoduladoras activas
poco representadas en la mezcla de sustancias, como p. ej.
citoquinas, representa un nuevo medicamento, al retirar o añadir a
mezclas de sustancias, como sangre o plasma sanguíneo de un
paciente, extracorporalmente sustancias activas inmunológicas de
manera positiva o negativa en condiciones controladas. La mezcla
de sustancias puede ser la sangre o un componente sanguíneo de un
paciente con una infección, una alergia u otra enfermedad, que va
acompañada de una alteración de las concentraciones de sustancias
inmunomoduladoras activas con respecto al estado sano. Al paciente
se le puede suministrar de nuevo la mezcla de sustancias después de
la realización del procedimiento según la invención. Sin embargo,
la mezcla de sustancias no tiene por qué proceder del mismo
paciente, sino que puede ser por ejemplo de la sangre de otro
individuo, como una vial de sangre, o puede ser una solución
preparada de forma sintética, que está enriquecida mediante el
procedimiento según la invención con sustancias inmunomoduladoras
activas y se administran seguidamente a un paciente. Mediante la
presente invención se hace por primera vez posible proceder a una
modificación compleja, biológica "inteligente", de procesos
inmunológicos y controlarla de manera cuidadosa.
El procedimiento según la invención permite el
trabajo en condiciones fisiológicas (temperatura, valores de pH,
concentraciones de iones, tampones etc.), lo que hace posible
grandes ventajas en el procesado de mezclas de sustancias
termolábiles y otras fisiológicamente sensibles. El sistema celular
según la invención se puede controlar bien con respecto a la
estabilidad de las propiedades morfológicas y funcionales. Esto es
de particular importancia con vistas a una pretendida seguridad lo
más grande posible y selectividad de los procesos que ocurren. Es
también justamente de gran importancia para una aplicación
industrial la capacidad de descripción exacta de las operaciones
que ocurren y es p. ej. imprescindible en cuestiones normalizadas
de permiso y calidad.
Los grupos aquí descritos de sustancias activas
inmunomoduladoras, G1 para sustancias adsorbidas y G2 para
sustancias liberadas o segregadas, no se deben entender de tal
manera, que tengan que ser diferentes unas de otras o al menos no
puedan contener sustancias iguales. Más bien ocurre, que
frecuentemente cada concentración de una sustancia es decisiva, si
esa sustancia actúa desde el punto de vista inmunológico positiva
o negativamente, es decir, si en la correspondiente mezcla de
sustancias se debe liberar o adsorber. En el procedimiento según
la invención, sustancias iguales pueden estar en los dos grupos G1
y G2, si las células utilizadas pueden tanto adsorberlas como
también liberarlas y forman de esta manera un equilibrio de
concentración. Bajo el concepto "sustancias", tal como se
utiliza en el sentido de esta invención, se deben entender entre
otras cosas, también organismos vivos, tal como bacterias, hongos,
levaduras etc., que son activas de manera inmunomodular.
Según la invención, es ventajoso, si los grupos
G1 y/o G2 comprenden sustancias inmunomoduladoras de citoquinas,
preferiblemente citoquinas pro-inflamatorias o
anti-inflamatorias, receptores solubles de
citoquina, antagonistas de receptores de citoquina, factores de
crecimiento, moléculas solubles de adhesión, componentes o productos
de desprendimiento del sistema de coagulación, de fibrinolisis o
de complemento y tipos de oxígeno reactivo.
De manera particularmente preferida los grupos G1
y/o G2 comprenden las sustancias activas inmunomoduladoras
conocidas en general interferón alfa, interferón beta, interferón
gamma, interleucina 1, interleucina 2, interleucina 3, interleucina
4, interleucina 5, interleucina 6, interleucina 7, interleucina 8,
interleucina 9, interleucina 10, interleucina 11, interleucina 12,
interleucina 13, interleucina 14, interleucina 15, interleucina 16,
interleucina 17, interleucina 18, factor de necrosis tumoral alfa
(TNF-alfa), factor de necrosis tumoral beta
(TNF-beta), factor beta de crecimiento transformante
(TGF-beta), quimiocinas y quimiotaxinas. Además,
son particularmente apropiadas endotoxinas, preferiblemente
lipopolisacáridos, exotoxinas, preferiblemente hemolisina A, B, C,
D o E, ácido lipoteicoico y cimosano. Son también apropiados
inmunocomplejos, que se componen de al menos un anticuerpo,
preferiblemente una inmunoglobina, o una parte de anticuerpo y al
menos un antígeno o sustancia que actúa como antígeno, como un
hapteno.
Según la invención, también los grupos G1 y/o G2
comprenden componentes o productos de microorganismos,
preferiblemente bacterias, virus, hongos o parásitos, o
microorganismos completos o sustancias que actúan como
alergenos.
Se ha visto que es particularmente ventajoso para
el procedimiento según la invención, si las células del
biorreactor son leucocitos, células madre hematopoyéticas, células
obtenidas mediante diferenciación de células madre hematopoyéticas,
hepatocitos, células endoteliales, células nerviosas, células de la
mucosa, células epiteliales u otras células procedentes del
ectodermo, mesodermo o endodermo, o una combinación de ellas.
Particularmente apropiadas son las células primarias, inmortalizadas
o células tumorales. Aunque en el procedimiento según la invención
se puede utilizar células de todos los orígenes, son
particularmente apropiadas las células de origen humano, animal,
vegetal o microbiano.
En una forma de realización particularmente
preferida de la invención, se estimulan las células del
biorreactor antes o durante la introducción y puesta en contacto
con la mezcla de sustancias. Mediante la utilización de
inmunocélulas específicamente pre-estimuladas
("entrenadas"), se puede reconocer una alteración en el
equilibrio inmunológico, por un lado mediante la célula que
funciona como biosensor multiparamétrico, y simultáneamente se
puede equilibrar esta alteración completa o parcialmente.
Para conseguir una vitalidad lo más elevada
posible de las células utilizadas y para influir en la
selectividad del metabolismo, es conveniente, si se regula de forma
conocida la temperatura, gasificación y adición de nutrientes de
las células en el biorreactor. Como dispositivo de retención
celular, con la que se separa la mezcla de sustancias en el
biorreactor después de la puesta en contacto con las células, es
apropiado un filtro celular o una centrifugadora.
Otras ventajas, características y formas de
realización de la presente invención serán aparentes en base al
siguiente ejemplo y a las figuras 1 y 2 pertenecientes a él.
Se separó sangre de ratas CD, que habían sido
tratadas con bacterias de Escherichia coli, mediante filtración o
centrifugación diferencial, en componentes corpusculares, tal
como, entre otros, células sanguíneas, y el plasma sanguíneo
(plasmaféresis), y a continuación el plasma sanguíneo o
componentes del plasma sanguíneo se condujeron a través del
biorreactor según la invención. Como células se utilizaron en el
biorreactor las células HL60, que se habían estimulado y
diferenciado previamente con vitamina D. Las células HL60 se unen,
como ya se sabe, mediante receptores específicos a citoquinas, como
interferón gamma, y a factores de crecimiento, como el factor
estimulador de la colonia de granulocitos. así como a otras
sustancias inmunomoduladoras. Mediante la adsorción de estas
sustancias a los correspondientes receptores disminuye la
concentración de las células en el plasma que se ha introducido en
el biorreactor y ellas mismas por otra parte liberan sustancias
inmunomoduladoras, tal como interleucina 6 y factor de necrosis
tumoral alfa (TNF-alfa). Se determinó la
concentración de TNF alfa liberado en el plasma sanguíneo en el
momento de la introducción en el biorreactor y se tomó como valor
control la cantidad del TNF alfa liberado por las células
estimuladas. Después de 2, 6, 12 y 20 horas en el biorreactor se
separó el plasma de las células y se retiró del biorreactor y se
determinó en cada caso la concentración en TNF alfa en el plasma.
Se utilizaron como controles células HL60 indiferenciadas. Los
resultados de este experimento se representan gráficamente en la
Figura 1. La concentración en TNF alfa aumentó abruptamente en el
plasma en las primeras 6 horas después de la estimulación de las
células HL60 y a continuación más plano, pero continuamente.
El eluído del biorreactor inmunomodulado con las
células HL60 estimuladas (20 horas en el biorreactor) se unió a
continuación de nuevo con los componentes corpusculares de la
sangre, se reinfundió en las ratas y se determinó la tasa de
supervivencia de las ratas. Se determinó como controles la tasa de
supervivencia de las ratas infectadas, a las que se les reinfundió
plasma o sangre no tratados, así como la tasa de supervivencia de
ratas no infectadas, a las que se les reinfundió el eluído. Los
resultados de este experimento se representan gráficamente en la
Figura 2.
Las ratas infectadas con bacterias de Escherichia
coli sobrevivieron claramente más tiempo, si el plasma había sido
tratado de la manera según la invención antes descrita, y en
verdad casi tanto tiempo, como las ratas control no infectadas.
Claims (25)
1. Procedimiento para elevar y/o disminuir la
concentración de sustancias activas inmunomoduladoras en mezclas
de sustancias o soluciones, que contienen sustancias
inmunomoduladoras potencialmente activas, en el que
se introduce la mezcla de sustancias en un
biorreactor y ahí se pone en contacto con células,
eligiéndose las células de manera que ellas
tengan receptores para al menos un tipo de un grupo G1 de
sustancias inmunomoduladoras activas, cuya concentración debe ser
disminuida en la mezcla de sustancias, y que están en condiciones de
adsorber este tipo, y/o que las células producen al menos un tipo
de otro grupo G2 de sustancias inmunomoduladoras, cuya
concentración se debe elevar en la mezcla de sustancias, y que
están en condiciones de liberar este tipo en la mezcla de
sustancias,
a continuación se separa la mezcla de sustancias
de las células y se retira del biorreactor.
2. Procedimiento según la reivindicación 1,
caracterizado porque la mezcla de sustancias contiene
sangre, plasma sanguíneo, componentes del plasma sanguíneo y/o
agua solos o en combinación y opcionalmente, además, proteínas,
péptidos, hidratos de carbono, lípidos, ácidos nucleicos, sales
y/o microorganismos, solos o en combinación.
3. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 ó 2, caracterizado porque los grupos G1
y/o G2 comprenden sustancias inmunomoduladoras citoquinas,
preferiblemente citoquinas pro-inflamatorias o
anti-inflamatorias, receptores solubles de
citoquina, antagonistas de receptores de citoquina, factores de
crecimiento, moléculas solubles de adhesión, componentes o
productos de disociación del sistema de coagulación, de
fibrinolisis o del complemento y tipos de oxígeno reactivo.
4. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque los grupos G1
y/o G2 comprenden las sustancias inmunomoduladoras activas
interferón alfa, interferón beta, interferón gamma, interleucina
1, interleucina 2, interleucina 3, interleucina 4, interleucina 5,
interleucina 6, interleucina 7, interleucina 8, interleucina 9,
interleucina 10, interleucina 11, interleucina 12, interleucina 13,
interleucina 14, interleucina 15, interleucina 16, interleucina
17, interleucina 18, factor de necrosis tumoral alfa
(TNF-alfa), factor de necrosis tumoral beta
(TNF-beta), factor transformante beta de
crecimiento (TGF-beta), quimiocinas y
quimiotaxinas.
5. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque los grupos G1
y/o G2 comprenden componentes o productos de microorganismos,
preferiblemente bacterias, virus, hongos o parásitos, o
microorganismos completos o sustancias que actúan como
alergenos.
6. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque los grupos G1
y/o G2 comprenden endotoxinas, preferiblemente lipopolisacáridos,
exotoxinas, preferiblemente hemolisina A, B, C, D o E, ácido
lipoteicoico y cimosano.
7. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque los grupos G1
y/o G2 comprenden inmunocomplejos, que se componen de al menos un
anticuerpo, preferiblemente una inmunoglobulina, o una parte de un
anticuerpo y al menos un antígeno o sustancia que actúa como
antígeno, preferiblemente un hapteno.
8. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque las células en
el biorreactor son leucocitos, células madre hematopoyéticas,
células obtenidas mediante diferenciación de células madre
hematopoyéticas, hepatocitos, células endoteliales, células
nerviosas, células de la mucosa, células epiteliales u otras
células procedentes del ectodermo, mesodermo o endodermo o su
combinación.
9. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque las células en
el biorreactor son células primarias, inmortalizadas o células
tumorales.
10. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque las células
del biorreactor son células de origen humano, animal, vegetal o
microbiano.
11. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque las células
del biorreactor se estimulan antes o durante la introducción y
puesta en contacto con la mezcla de sustancias.
12. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque se regula la
temperatura, gasificación y adición de nutrientes a las células en
el biorreactor.
13. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque se separa la
mezcla de sustancias de las células después de la puesta en contacto
con las células mediante un dispositivo de retención celular,
preferiblemente un filtro celular o una centrífuga.
14. Dispositivo para elevar y/o disminuir la
concentración de sustancias inmunomoduladoras activas en una mezcla
de sustancias con un biorreactor con una entrada para introducir la
mezcla de sustancias y una salida para la retirada de la mezcla de
sustancias, estando presentes en el biorreactor células vivas en una
forma tal que la mezcla de sustancias se puede poner en contacto
con las células, y con un dispositivo de retención celular, que
está colocado de tal manera que la mezcla de sustancias es
separable de las células y se puede retirar del biorreactor libre
de células, caracterizado porque las células tienen
receptores para al menos un tipo de un grupo G1 de sustancias
inmunomoduladoras activas, cuya concentración debe disminuir en la
mezcla de sustancias, y que están en condiciones de adsorber este
tipo, y/o porque las células producen al menos un tipo de otro
grupo G2 de sustancias inmunomoduladoras, cuya concentración se debe
elevar en la mezcla de sustancias, y que están en condiciones de
liberar este tipo en la mezcla de sustancias.
15. Dispositivo según la reivindicación 14,
caracterizado porque la mezcla de sustancias contiene
sangre, plasma sanguíneo, componentes del plasma sanguíneo y/o agua
solos o en combinación y opcionalmente, además, proteínas,
péptidos, hidratos de carbono, lípidos, ácidos nucleicos, sales
y/o microorganismos, solos o en combinación.
16. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 ó 15, caracterizado porque los grupos G1 y/o G2
comprenden sustancias inmunomoduladoras citoquinas, preferiblemente
citoquinas pro-inflamatorias o
anti-inflamatorias, receptores solubles de
citoquina, antagonistas de receptores de citoquina, factores de
crecimiento, moléculas solubles de adhesión, componentes o
productos de disociación del sistema de coagulación, de
fibrinolisis o de complemento y tipos de oxígeno reactivo.
17. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 16, caracterizado porque los grupos G1 y/o G2
comprenden las sustancias activas inmunomoduladoras interferón
alfa, interferón beta, interferón gamma, interleucina 1,
interleucina 2, interleucina 3, interleucina 4, interleucina 5,
interleucina 6, interleucina 7, interleucina 8, interleucina 9,
interleucina 10, interleucina 11, interleucina 12, interleucina 13,
interleucina 14, interleucina 15, interleucina 16, interleucina
17, interleucina 18, factor de necrosis tumoral alfa
(TNF-alfa), factor de necrosis tumoral beta
(TNF-beta), factor transformante beta de
crecimiento (TGF-beta), quimiocinas y
quimiotaxinas.
18. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 17, caracterizado porque los grupos G1 y/o G2
comprenden componentes o productos de microorganismos,
preferiblemente bacterias, virus, hongos o parásitos, o
microorganismos completos o sustancias que actúan como
alergenos.
19. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 18, caracterizado porque los grupos G1 y/o G2
comprenden endotoxinas, preferiblemente lipopolisacáridos,
exotoxinas, preferiblemente hemolisina A, B, C, D o E, ácido
lipoteicoico y cimosano.
20. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 19, caracterizado porque los grupos G1 y/o G2
comprenden inmunocomplejos, que se componen de al menos un
anticuerpo, preferiblemente una inmunoglobulina, o una parte de un
anticuerpo y al menos un antígeno o sustancia que actúa como
antígeno, preferiblemente un hapteno.
21. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 20, caracterizado porque las células en el biorreactor
son leucocitos, células madre hematopoyéticas, células obtenidas
mediante diferenciación de células madre hematopoyéticas,
hepatocitos, células endoteliales, células nerviosas, células de la
mucosa, células epiteliales u otras células procedentes del
ectodermo, mesodermo o endodermo o su combinación.
22 Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 21, caracterizado porque las células del biorreactor
son células primarias, inmortalizadas o células tumorales.
23. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 22, caracterizado porque las células del biorreactor
son células de origen humano, animal, vegetal o microbiano.
24. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 23, caracterizado porque las células del biorreactor
se estimulan antes o durante la introducción y puesta en contacto
con la mezcla de sustancias.
25. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 24, caracterizado porque el biorreactor está formado
de tal manera, que son regulables la temperatura, gasificación y
aportación de nutrientes a las células.
26. Dispositivo según una de las reivindicaciones
14 a 25, caracterizado porque el dispositivo de retención
celular es un filtro celular o una centrífuga.
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