EP2097076A1 - Utilisation d'adapalène pour moduler l'expression de l'il-1ra. - Google Patents

Utilisation d'adapalène pour moduler l'expression de l'il-1ra.

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Publication number
EP2097076A1
EP2097076A1 EP07858720A EP07858720A EP2097076A1 EP 2097076 A1 EP2097076 A1 EP 2097076A1 EP 07858720 A EP07858720 A EP 07858720A EP 07858720 A EP07858720 A EP 07858720A EP 2097076 A1 EP2097076 A1 EP 2097076A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
acne
adapalene
expression
cells
epidermis
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP07858720A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Brigitte Dreno
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Galderma Research and Development SNC
Original Assignee
Galderma Research and Development SNC
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Filing date
Publication date
Application filed by Galderma Research and Development SNC filed Critical Galderma Research and Development SNC
Publication of EP2097076A1 publication Critical patent/EP2097076A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/192—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having aromatic groups, e.g. sulindac, 2-aryl-propionic acids, ethacrynic acid 
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents

Definitions

  • the invention relates to the use of adapalene for modulating the expression of IL-1 ⁇ (intraplein-1 receptor accesory protein), particularly in patients with acne.
  • Acne is a chronic disease related to the hormonally dependent inflammation of the pilosebaceous follicle, which involves three well-defined steps (Cunliffe WJ et al., Br J Dermatol 2000: 142: 1084-1091, Gollnick HP et al. J Dermatol 1991: 18: 489-499).
  • the first stage which usually begins at puberty, corresponds to the stimulation of the production of the sebaceous glands, inducing hyper seborrhea.
  • the second stage corresponds to the formation of micro comedones considered as the first elementary lesion of acne caused by abnormalities of the proliferation, adhesion and differentiation of keratinocytes in the lower part of the sebaceous duct of the hair follicle.
  • the third stage corresponds to the formation of inflammatory lesions in which Propionibacterium acnes (P. acnes), an anaerobic bacterium, plays an essential role.
  • P. acnes Propionibacterium acnes
  • the treatments used against acne are intended to curb the development of bacteria with antiseptics such as benzoyl peroxide or antibiotics, or to reduce the secretion of sebum (retinoids).
  • antiseptics such as benzoyl peroxide or antibiotics
  • sebum retinoids
  • the oral treatments break down into three categories: antibiotics (tetracycline and erythromycin), retinoids (especially represented by isotretinoin) and hormonal treatments combining estrogen and progestin.
  • adapalene has a comedolytic action and behaves as a stimulator of the expression of IL-1ra in the skin and makes it possible in particular to increase the expression thereof. in keratinocytes.
  • An object of the present invention thus relates to the use of Adapalene, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for preparing a medicament for increasing the expression of NL-I ra and / or inducing increased expression of NL-I ra by the cells of the epidermis and in particular by the keratinocytes.
  • Another object of the invention is the use of Adapalene, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, to prepare a medicament for increasing the expression of IL-1ra and / or inducing increased expression of NL-1 ra by epidermal acne cells.
  • adapalene or a pharmaceutically acceptable salt thereof is also intended to prevent the formation of comedones in patients whose acne epidermal cells under-express NL-1 ra.
  • the drug is preferably applied topically.
  • it can be in the form of a gel, a lotion or a cream.
  • the present invention also relates to a method for inducing an increase in the expression of NL-1 ra by the epidermal cells of a patient in need of treatment, characterized in that it is administered to said patient of Adapalene or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • salts of adapalene means salts formed with a pharmaceutically acceptable base, in particular mineral bases such as sodium hydroxide, potassium hydroxide and aqueous ammonia or organic bases such as lysine, arginine, N-methyl glucamine. Also meant by salts of adapalene salts formed with fatty amines such as dioctylamine and stearylamine.
  • Adapalene is a chemically stable derivative of naphthoic acid.
  • the chemical formula of this derivative is 6 [3- (1-adamantyl) -4-methoxyphenyl] -2-naphthoic acid.
  • Adapalene is a second-generation topical retinoid (such as tazarotene) that selectively binds to RAR ⁇ subtypes (found mainly in the epidermis) and RAR ⁇ (found mainly in dermal fibroblasts) of the nuclear acid receptor.
  • retinoic acid (RAR) activating the genes responsible for cell differentiation. On the other hand, it does not bind to the binding proteins of cellular retinoic acid.
  • adapalene also has activity on superficial inflammatory lesions (Millikan LE, lnt J Dermatol 2000: 39: 784-788).
  • the mechanisms of anti-inflammatory activity seem in particular related to the modulation of non-specific immunity.
  • adapalene inhibits the oxidative metabolism of arachidonic acid via the lipoxygenase pathway, the chemotaxis of neutrophils and the production of free radicals. It also inhibits the production of leukotrienes by the lipoxygenase pathway.
  • Adapalene has been described by the Applicant in patent EP 0 199 636, the latter has also proposed a method for synthesizing this compound in patent EP 0 358 574.
  • the Applicant markets the adapalene formulated at a concentration of 0.1% by weight in the form of an alcoholic lotion, an aqueous gel and a cream. These compositions are intended for the treatment of acne.
  • the inventors identify in the context of the present invention, a molecule, expressed by keratinocytes, playing an essential role in the development of cutaneous inflammation: IL-1 ra.
  • IL-1 is a highly active proinflammatory cytokine produced by monocytes and macrophages, but also by endothelial cells and lymphocytes. It will stimulate the production of prostaglandins, NO and chemokines.
  • IL-1 is transcribed from three genes carried by chromosome 2 and that exhibit numerous homologies: IL-1 alpha, IL-I 1 1 beta and IL-1ra. These 3 proteins bind to the IL-1 receptor that includes two types:
  • the receptor I is composed of two subunits I * IL-I R1 and I * IL-I R AcP
  • IL-1 RII the type II receptor
  • the IL-1 molecule binds to both parts of the type I receptor and thus induces activation of its TIR cytoplasmic domain (ToII receptor-like).
  • IL-1 ra binds only to the IL-1 R1 portion and then prevents activation of the intracellular signal. The effects of IL-I are blocked.
  • Type II receptor binding does not result in intracellular signaling.
  • the type I receptor is found on very many cells while the type II receptor is expressed mainly on neutrophils, monocytes and B cells.
  • IL-1 Ra is secreted by the liver as a protein of the acute phase and therefore plays a role of modulator of the inflammatory response.
  • adapalene induces an increase in the expression of IL-1 ra by the cells of the epidermis, in particular the keratinocytes of inflammatory acne lesions.
  • increase it is meant an increase, an overexpression, a rise in the expression level of the IL-10 gene or an overproduction of its expression product (mRNA, protein).
  • IL-1ra is a cytokine receptor antagonist with I 1 IL-1 alpha, it exerts anti-inflammatory effects on the skin.
  • the inventors have demonstrated that blocking the receptor I 'LI I alpha, IL-1ra prevents the formation of comedones which would otherwise be induced by I 1 IL-1 alpha.
  • the invention thus relates to the use of a modulator compound for the expression of IL-1ra, such as adapalene or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for preparing a medicament for increasing the expression of IL-1 ra by the cells of the epidermis, and more particularly by the keratinocytes.
  • a particular object of the invention is the use of a modulator compound for the expression of IL-1 ⁇ , such as adapalene or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for preparing a medicament for increasing expression of IL-1 ra by acne epidermal cells, in particular by keratinocytes of a cutaneous lesion, in particular of an inflammatory acne lesion.
  • Another particular subject of the invention relates to the use of a modulator compound, more particularly stimulating, of the expression of IL-1ra, such as adapalene or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for to prepare a drug intended to prevent the formation of comedones in patients whose acne epidermis cells, in particular keratinocytes, under-express NL1 RA.
  • a modulator compound more particularly stimulating, of the expression of IL-1ra, such as adapalene or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for to prepare a drug intended to prevent the formation of comedones in patients whose acne epidermis cells, in particular keratinocytes, under-express NL1 RA.
  • the drugs used herein are intended to be used, for treating acne, optimally, in patients whose acne epidermis cells, especially keratinocytes, under-express NL1 RA.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition.
  • the pharmaceutical composition comprises a compound modulating the expression of IL-1ra, such as adapalene or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in a physiologically acceptable medium.
  • One skilled in the art can easily determine and prescribe the required amount of therapeutically active agent. For example, it may start with doses of therapeutically active agent at levels lower than those required to achieve the desired therapeutic effect and gradually increase the dosage until the desired effect is achieved.
  • the composition according to the invention comprises between 0.001 and 5% and advantageously between 0.01 and 1% by weight of adapalene relative to the total weight of the composition, preferably between 0.03 and 0.5%, preferably between 0.1 and 0.4% by weight of adapalene, more preferably 0.3% by weight of adapalene.
  • the composition may furthermore comprise any additive usually used in the cosmetic or pharmaceutical field, such as penetrating agents, wetting liquid surfactants, sequestering agents, antioxidants, sunscreens, preservatives, fillers, electrolytes, humectants , dyes, bases or usual acids, mineral or organic, perfumes, essential oils, cosmetic active ingredients, moisturizers, vitamins, essential fatty acids, sphingolipids, self-tanning compounds such as DHA , soothing and protective agents for the skin such as allantoin.
  • any additive usually used in the cosmetic or pharmaceutical field such as penetrating agents, wetting liquid surfactants, sequestering agents, antioxidants, sunscreens, preservatives, fillers, electrolytes, humectants , dyes, bases or usual acids, mineral or organic, perfumes, essential oils, cosmetic active ingredients, moisturizers, vitamins, essential fatty acids, sphingolipids, self-tanning compounds such as DHA , soothing and protective agents for the skin such as allantoin
  • additives can be present in the composition in a proportion of 0 to 20% by weight relative to the total weight of the composition.
  • compositions may be administered by any known route, conventionally associated with the treatment (using adapalene) of a dermatological disorder, Le., Topically, enterally, parenterally or ocularly.
  • the treatment is administered topically.
  • the pharmaceutical composition is preferably in the form of a gel, lotion or cream.
  • the composition is in the form of an aqueous gel.
  • aqueous gel is meant a composition containing, in an aqueous phase, a viscoelastic mass formed from colloidal suspensions (gelling agent).
  • gelling agents of the family of polyacrylamides such as the mixture Sodiumacryloyldimethyltaurate copolymer / isohexadecane / polysorbate 80 sold under the name Simulgel 600 by the company Seppic, the polyacrylamide / isoparaffin mixture C13-14 / laureth- 7, for example, that sold under the name Sepigel 305 by the company Seppic, the family of acrylic polymers coupled to hydrophobic chains such as the PEG-150 / decyl / SMDI copolymer sold under the name Aculyn 44 (polycondensate comprising at least as elements, a polyethylene glycol with 150 or 180 moles of ethylene oxide, decyl alcohol and methylene bis (4-cyclohexyl isocyanate)) (SMDI), 35% by weight in a mixture of propylene glycol (39%) and water (26%)), the family of modified starches such as modified potato starch sold under the name
  • the gelling agent as described above may be used at preferential concentrations ranging from 0.1 to 15% and, more preferably, from 0.5 to 5%.
  • the medicaments and compositions as described above are suitable for the treatment of inflammatory lesions of any type of acne, namely in particular vulgar, comedonal, polymorphic, rosacea acne, nodulocystic acnes, conglobata acnes, senile acnes, secondary acnes. such as solar acne, medicated, professional or occupational acne.
  • the invention was carried out on the basis of biopsies taken from acne patients in order to find themselves in the conditions closest to the studies carried out in vivo.
  • a skin biopsy (1 x 1.5 cm) was obtained from inflammatory papules of back injuries of 8 acne patients (under no local treatment for 15 days or general for 1 month, or 3 months for isotretinoin). The collected fragments were immediately cultured.
  • the fragments of healthy skin and acne skin were incubated at 37 ° C in a humid atmosphere and in the presence of 5% CO 2 for 24 hours in KGM culture medium without hydrocortisone (PromoCell, Heidelberg, Germany).
  • the culture medium was supplemented with 2 different concentrations of Adapalene (Galderma, Sophia Antipolis): 10 -7 M and 10 -6 M.
  • the culture medium alone served as a control medium.
  • the explants were removed from the culture medium and then frozen in liquid nitrogen for immunohistochemical study.
  • the culture supernatants were frozen at -80 ° C. in order to evaluate the protein secretion by an ELISA assay technique.
  • IL-1 ⁇ was evaluated by immunoperoxidase technique in healthy skin explants of 8 healthy donors and acne skin of 8 patients.
  • cryostat sections 5 ⁇ m thick were made from the skin explants and then fixed with acetone at 4 ° C. for 10 minutes. After saturation of the nonspecific sites with bovine albumin (BSA) for 30 minutes at room temperature, the slides were incubated for 30 minutes at room temperature and in a humid atmosphere in the presence of the corresponding primary antibody [anti-IL monoclonal antibody.
  • BSA bovine albumin
  • the slides were read under a Leitz microscope by 2 investigators.
  • IL-1 ra Protein secretion of IL-1 ra (patients only) in culture supernatants of acne skin and healthy skin explants, incubated with or without Adapalene, was assessed by ELISA using IL-1ra Cytoscreen kit detection (Biosource Europe SA, Nivelles, Belgium) and following the supplier's instructions.
  • the paired Wilcoxon test was used for statistical analysis and p ⁇ 0.05 (compared to control medium) was considered significant.
  • - IL-1 ra is very weakly to weakly expressed in the epidermis of healthy donors, its expression intensity being on average 0.8 (+/- 0.7).
  • the average performed on 8 healthy donors does not demonstrate a modulatory effect of Adapalene on the expression of NL-I ra in the epidermis of healthy donors.
  • the intensity of expression of this cytokine is indeed 0.9 (+/- 0.5) with 10 '7 M Adapalene and 0.8 (+/- 0.4) with 10 ' 6 M Adapalene.
  • the intensity of expression of IL-1 ra is therefore similar in the skin of healthy donors and in acne skin.
  • Adapalene increases the expression of this cytokine in the epidermis of acne patients. This effect is dose-dependent and maximal at the concentration of 10 ⁇ 6 M.
  • the intensity of expression is indeed 0.8 (+/- 0.8) with 10 '7 M Adapalene and 0.9 (+/- 0.7) with 10 ⁇ 6 M Adapalene.
  • the amount of IL-1ra secreted into the culture supernatants was in average of 600 pg (+/- 362), an increase of 2.6% compared to the control medium and of 564pg (+/- 255) in the presence of Adapalene 10 '6 M, a decrease of 3.5% compared to the control medium.
  • the amount of IL-1R secreted in the culture supernatants of the acne skin explants incubated with the control medium is, on average, 1145 ⁇ g (+/- 404).
  • the secretion of IL-1 ra is therefore on average higher in acne patients compared to healthy donors.
  • the secreted amount of IL-1 ra is on average 1,196 pg (+/- 422), an increase of 4.4% relative to the control medium and 1,161 pg (+/- 409) in the presence of Adapalene 10 '6 M, an increase of 1.4% relative to the control medium.
  • IL-1ra is a cytokine antagonist receptor I IL-1 alpha and 1 which exerts anti-inflammatory effects on the skin (D Suh et al, 2002). By blocking the receptor I IL-1 alpha 1, IL-1ra prevents the formation of comedones which would otherwise be induced by I 1 IL-1 alpha.

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Abstract

L'invention concerne l'utilisation d'adapalène pour moduler l'expression de IL-1 ra par les cellules de l'épiderme acnéique.

Description

Utilisation d'adapalène pour moduler l'expression de l' IL-1 ra.
L'invention concerne l'utilisation d'adapalène pour moduler l'expression de IL-1 ra (lnterleuline-1 receptor accesory protein), en particulier chez des patients atteints d'acné.
L'acné est une maladie chronique liée à l'inflammation du follicule pilosébacé, sous dépendance hormonale, et qui implique trois étapes bien définies (Cunliffe WJ et al., Br J Dermatol 2000: 142: 1084-1091 ; Gollnick HP et al., J Dermatol 1991 : 18: 489- 499.).
La première étape, qui commence généralement à la puberté, correspond à la stimulation de la production des glandes sébacées, induisant une hyper séborrhée. La seconde étape correspond à la formation de micro comédons considérés comme la première lésion élémentaire de l'acné provoquée par des anomalies de la prolifération, de l'adhésion et de la différentiation de kératinocytes dans la partie basse du canal sébacé du follicule pileux.
La troisième étape correspond à la formation de lésions inflammatoires dans lesquelles Propionibacterium acnés (P. acnés), une bactérie anaérobie, joue un rôle essentiel.
Les traitements employés contre l'acné sont destinés à freiner le développement des bactéries avec des antiseptiques comme le peroxyde de benzoyle ou des antibiotiques, ou à réduire la sécrétion de sébum (rétinoïdes). Utilisés seulement en cas d'acné sévère, les traitements par voie orale se décomposent en trois catégories : les antibiotiques (tétracycline et érythromycine), les rétinoïdes (surtout représentés par l'isotrétinoïne) et les traitements hormonaux associant un oestrogène et un progestatif.
Les inventeurs ont mis en évidence de façon surprenante que l'adapalène à une action comédolytique et se comporte comme un stimulateur de l'expression d'IL-1 ra dans la peau et permet en particulier d'augmenter l'expression de celle-ci dans les kératinocytes. Un objet de la présente invention concerne ainsi l'utilisation de l'Adapalène, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour préparer un médicament destiné à augmenter l'expression de NL-I ra et/ou à induire l'augmentation de l'expression de NL-I ra par les cellules de l'épiderme et en particulier par les kératinocytes.
Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation de l'Adapalène, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour préparer un médicament destiné à augmenter l'expression de l'IL-1 ra et/ou à induire l'augmentation de l'expression de NL-1 ra par les cellules de l'épiderme acnéiques.
L'utilisation de l'adapalène ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci vise également à prévenir la formation de comédons chez les patients dont les cellules de l'épiderme acnéique sous-expriment NL-1 ra. Le médicament est de préférence appliqué de manière topique. Ainsi, il peut se présenter sous la forme d'un gel, d'une lotion ou d'une crème.
La présente invention vise également une méthode pour induire une augmentation de l'expression de NL-1 ra par les cellules de l'épiderme d'un patient nécessitant un traitement, caractérisé en ce qu'il est administré audit patient de l'Adapalène ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
Les détails de l'invention vont être exposés dans la description détaillée qui suit.
On entend par sels de l'adapalène, les sels formés avec une base pharmaceutiquement acceptable, notamment des bases minérales telles que la soude, la potasse et l'ammoniaque ou des bases organiques telles que la lysine, l'arginine, la N-méthyl-glucamine. On entend également par sels de l'adapalène les sels formés avec des aminés grasses telles que la dioctylamine et la stéarylamine.
L'adapalène est un dérivé stable sur le plan chimique de l'acide naphtoïque. La formule chimique de ce dérivé est la suivante : acide 6[3-(1 -adamantyl)-4- métoxyphényl]-2-naphtoïque. L'adapalène est un rétinoïde topique de seconde génération (comme le tazarotène) qui se lie sélectivement aux sous-types RARγ (trouvé principalement dans l'épiderme) et RARβ (trouvé principalement dans les fibroblastes du derme) du récepteur nucléaire de l'acide rétinoïque (RAR), activant les gènes responsables de la différentiation cellulaire. Il ne se lie en revanche pas aux protéines de liaison de l'acide rétinoïque cellulaire. Cependant, au niveau clinique, l'adapalène présente également une activité sur les lésions inflammatoires superficielles (Millikan LE, lnt J Dermatol 2000: 39: 784-788). Les mécanismes de l'activité anti-inflammatoire semblent en particulier liés à la modulation de l'immunité non spécifique. Ainsi, l'adapalène inhibe le métabolisme oxydatif de l'acide arachidonique via la voie de la lipoxygénase, le chimiotactisme de polynucléaires neutrophiles et la production de radicaux libres. Il inhibe également la production de leucotriènes par la voie de la lipoxygénase.
L'adapalène a été décrit par la Demanderesse dans le brevet EP 0 199 636, cette dernière a également proposé un procédé de synthèse de ce composé dans le brevet EP 0 358 574.
La Demanderesse commercialise l'adapalène formulé à une concentration pondérale de 0,1 % sous forme d'une lotion alcoolique, d'un gel aqueux et d'une crème. Ces compositions sont destinées au traitement de l'acné.
Les inventeurs identifient dans le cadre de la présente invention, une molécule, exprimée par les kératinocytes, jouant un rôle essentiel dans le développement de l'inflammation cutanée : l'IL-1 ra.
L'IL-1 est une cytokine proinflammatoire, très active, produite par les monocytes et les macrophages, mais aussi par les cellules endothéliales et les lymphocytes. Elle va stimuler la production de prostaglandines, de NO et de chemokines. L'IL-1 est transcrite à partir de trois gènes portés par le chromosome 2 et qui présentent de nombreuses homologies : l'IL-1 alpha, I1IL- 1 béta et l'IL-1 ra. Ces 3 protéines se fixent sur le récepteur de l'IL-1 qui comprend deux types :
• le récepteur I est composé de deux sous-unités I* IL-I Rl et I* IL-I R AcP
• le récepteur de type II, IL-1 RII, La molécule d'IL-1 se fixe sur les deux parties du récepteur de type I et entraîne ainsi une activation de son domaine cytoplasmique TIR (analogue au récepteur ToII). L'IL-1 ra ne se fixe que sur la partie IL-1 Rl et empêche alors l'activation du signal intra-cellulaire. Les effets de I' IL-I sont bloqués. La fixation sur le récepteur de type II n'entraîne aucun signal intra-cellulaire. Le récepteur de type I est retrouvé sur de très nombreuses cellules tandis que le récepteur de type II est exprimé principalement sur les neutrophiles, les monocytes et les lymphocytes B.
L'IL-1 Ra est sécrété par le foie comme une protéine de la phase aiguë et joue donc un rôle de modulateur de la réponse inflammatoire.
Rien n'encourageait donc l'homme du métier à soupçonner un mécanisme d'action de l'Adapalène passant par des Récepteurs membranaires des cytokines proinflammatoires.
Or, les inventeurs ont montré, dans le cadre de la présente invention, que l'adapalène induit une augmentation de l'expression de l'IL-1 ra par les cellules de l'épiderme, en particulier les kératinocytes de lésions acnéiques inflammatoires. Par augmentation, il faut entendre une hausse, une sur-expression, une élévation du niveau d'expression du gène de l'IL-10 ou une surproduction de son produit d'expression (ARNm, protéine).
L'augmentation de l'expression de l'IL-1 ra avec l'Adapalène intervient dans l'action comédolytique de l'Adapalène. En effet, l'IL-1 ra étant une cytokine antagoniste du récepteur à I1IL- 1 alpha, elle exerce des effets anti-inflammatoires au niveau de la peau. Les inventeurs ont mis en évidence qu'en bloquant le récepteur de I' I L-I alpha, l'IL-1 ra prévient la formation des comédons qui sinon serait induite par I1IL- 1 alpha.
L'invention concerne donc l'utilisation d'un composé modulateur de l'expression de l'IL-1 ra, tel que l'adapalène ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour préparer un médicament destiné à augmenter l'expression de l'IL-1 ra par par les cellules de l'épiderme, et plus particulièrement par les kératinocytes. Un objet particulier de l'invention concerne l'utilisation d'un composé modulateur de l'expression de l'IL-1 ra, tel que l'adapalène ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour préparer un médicament destiné augmenter l'expression de l'IL-1 ra par les cellules de l'épiderme acnéique, en particulier par les kératinocytes d'une lésion cutanée, en particulier d'une lésion acnéique inflammatoire.
Un autre objet particulier de l'invention concerne l'utilisation d'un composé modulateur, plus particulièrement stimulant, de l'expression de l'IL-1 ra, tel que l'adapalène ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour préparer un médicament destiné à prévenir la formation de comédons chez les patients dont les cellules de l'épiderme acnéique, en particulier les kératinocytes, sous-expriment NL1 RA.
De préférence, les médicaments utilisés ici ont vocation à être utilisées, pour traiter l'acné, de manière optimale, chez les patients dont les cellules de l'épiderme acnéique, en particulier les kératinocytes, sous-expriment NL1 RA.
La présente invention vise également une composition pharmaceutique. La composition pharmaceutique comprend un composé modulateur de l'expression de l'IL-1 ra, tel que l'adapalène ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, dans un milieu physiologiquement acceptable.
L'homme du métier peut facilement déterminer et prescrire la quantité requise d'agent thérapeutiquement actif. Par exemple, il peut démarrer avec des doses d'agent thérapeutiquement actif à des niveaux inférieurs que ceux requis pour obtenir l'effet thérapeutique désiré et accroître progressivement le dosage jusqu'à ce que l'effet désiré soit obtenu.
Dans le cas de l'adapalène, pour donner un ordre de grandeur, la composition selon l'invention comprend entre 0.001 et 5% et avantageusement entre 0.01 et 1 % en poids d'adapalène par rapport au poids total de la composition, préférentiellement entre 0.03 et 0.5%, de préférence, entre 0.1 et 0.4 % en poids d'adapalène, encore plus préférentiellement 0.3 % en poids d'adapalène. La composition peut comprendre en outre tout additif usuellement utilisé dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, tel que des agents propénétrants, des agents tensioactifs liquides mouillants, des séquestrants, des antioxydants, des filtres solaires, des conservateurs, des charges, des électrolytes, des humectants, des colorants, de bases ou d'acides usuels, minéraux ou organiques, des parfums, des huiles essentielles, des actifs cosmétiques, des hydratants, des vitamines, des acides gras essentiels, des sphingolipides, des composés auto-bronzants tels que la DHA, des agents apaisants et protecteurs de la peau tels que l'allantoïne. Bien entendu l'homme du métier veillera à choisir ce ou ces éventuels composés complémentaires, et/ou leur quantité, de manière telle que les propriétés avantageuses de la composition selon l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées.
Ces additifs peuvent être présents dans la composition à raison de 0 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Une telle composition peut être administrée par toute voie connue, classiquement associée au traitement (utilisant l'adapalène) d'un désordre dermatologique, Le., par voie topique, entérale, parentérale ou oculaire.
De préférence, le traitement est administré par voie topique.
La composition pharmaceutique se présente de préférence sous la forme d'un gel, d'une lotion ou d'une crème. Classiquement la composition se présente sous la forme d'un gel aqueux. On entend par gel aqueux, une composition contenant, dans une phase aqueuse, une masse visco-élastique formée à partir de suspensions colloïdales (gélifiant).
A titre d'exemple non limitatif, on peut citer les gélifiants de la famille des polyacrylamides tels que le mélange Sodiumacryloyldimethyltaurate copolymer/isohexadecane/ polysorbate 80 vendu sous le nom Simulgel 600 par la société Seppic, le mélangepolyacrylamide/isoparaffine C13-14/laureth-7 comme, par exemple, celui vendu sous le nom de Sepigel 305 par la société Seppic, la famille des polymères acryliques couplés à des chaînes hydrophobes tel que le PEG-150/decyl/SMDI copolymer vendu sous le nom de Aculyn 44 (polycondensat comprenant au moins comme éléments, unpolyéthylèneglycol à 150 ou 180 moles d'oxyde d'éthylène, de l'alcool décylique et du méthylène bis (4- cyclohexylisocyanate)(SMDI), à 35% en poids dans un mélange de propylèneglycol (39%) et d'eau(26%)), la famille des amidons modifiés tels que l'amidon de pomme de terre modifié vendu sous le nom de Structure Solanace ou bien leurs mélanges. Les gélifiants préférés sont issus de la famille des polyacrylamides tel que le Simulgel 600 ou le Sepigel 305 ou leurs mélanges.
Le gélifiant tel que décrit ci-dessus peut être utilisé aux concentrations préférentielles allant de 0,1 à 15 % et, plus préférentiellement, allant de 0,5 à 5 %.
Les médicaments et compositions tels que décrits précédemment, conviennent au traitement des lésions inflammatoires de tout type d'acné, à savoir notamment les acnés vulgaires, comédoniennes, polymorphes, rosacées, les acnés nodulocystiques, les acnés conglobata, les acnés séniles, les acnés secondaires telles que l'acné solaire, médicamenteuse, professionnelle ou l'acné occupationnelle.
LEGENDE DES FIGURES
Figure 1 . Evaluation de l'expression de I1IL- 1 ra dans des explants de peau humaine saine, après 24 heures d'incubation avec 10~7 M et 10~6 M d'adapalène ou de milieu contrôle (n= 8 dans chaque groupe). Barres et barres d'erreur représentent moyenne et SEM. * p < 0.05 [Test de Wilcoxon apparié adapalène vs. témoin].
Figure 2. Evaluation de l'expression de l'IL-1 ra dans des explants de peau humaine saine provenant de deux groupes de donneurs sains, après 24 heures d'incubation avec 10'7 M et 10'6 M d'adapalène ou de milieu contrôle (n= 4 dans chaque groupe). Barres et barres d'erreur représentent moyenne et SEM. * p < 0.05 [Test de Wilcoxon apparié adapalène vs. témoin]. Figure 3. Evaluation de l'expression de NL-I ra dans des explants de peau acnéique, après 24 heures d'incubation avec 10~7 M et 10~6 M d'adapalène ou de milieu contrôle (n= 8 dans chaque groupe).
Barres et barres d'erreur représentent moyenne et SEM. * p < 0.05 [Test de Wilcoxon apparié adapalène vs. témoin].
Figure 4. Evaluation de la quantité d'IL-1 ra sécrétée dans les surnageants de culture d'expiants de peau humaine saine (a) et d'expiants de peau acnéique (b), après 24 heures d'incubation avec 10'7 M et 10'6 M d'adapalène ou de milieu contrôle (n= 8 dans chaque groupe).
Barres et barres d'erreur représentent moyenne et SEM. * p < 0.05 [Test de Wilcoxon apparié adapalène vs. témoin].
MATERIELS AND METHODES
Matériel
L'invention a été réalisée à partir de biopsies prélevées chez des sujets acnéiques afin de se retrouver dans des conditions les plus proches des études réalisées in vivo.
1 ) Biopsies cutanées
a) Peau acnéiαue
Une biopsie de peau (1 x 1.5 cm) a été obtenue à partir de papules inflammatoires de lésions du dos de 8 patients acnéiques (sous aucun traitement local depuis 15 jours ou général depuis 1 mois, ou 3 mois pour l'isotrétinoïne). Les fragments prélevés ont été immédiatement mis en culture.
b) Peau saine
Des fragments de peau saine de 8 donneurs sains ont été obtenus à partir de plasties mammaires (chirurgie plastique) ou de prépuce (chirurgie infantile). B. Méthodes
2) Explants de peau saine ou de peau acnéique
Les fragments de peau saine et de peau acnéique ont été incubés à 37°C en atmosphère humide et en présence de 5 % de CO2 pendant 24 heures dans du milieu de culture KGM sans hydrocortisone (PromoCell, Heidelberg, Allemagne). Le milieu de culture a été additionné de 2 concentrations différentes d'Adapalène (Galderma, Sophia Antipolis) : 10"7 M et 10"6 M. Le milieu de culture seul a servi de milieu contrôle. Après l'incubation, les explants ont été retirés du milieu de culture puis ont été congelés en azote liquide pour l'étude immunohistochimique. Les surnageants de culture ont été congelés à -800C afin d'évaluer la sécrétion protéique par une technique de dosage ELISA.
3) Immunohistochimie
L'expression de I'1L-1 ra a été évaluée par une technique d'immunoperoxydase au niveau des explants de peau saine de 8 donneurs sains et de la peau acnéique de 8 patients. Pour cela, des coupes au cryostat de 5 μm d'épaisseur ont été réalisées à partir des explants de peau, puis ont été fixées à l'acétone à 4°C pendant 10 minutes. Après saturation des sites non spécifiques par l'albumine bovine (BSA) pendant 30 minutes à température ambiante, les lames ont été incubées pendant 30 minutes à température ambiante et en atmosphère humide en présence de l'anticorps primaire correspondant [anticorps monoclonal anti-IL-1ra à 10 μg/ml (R&D Systems)] ou d'un anticorps isotype irrelevant pour le témoin négatif (normal goat IgG à (R&D Systems), anticorps monoclonal lgG2a (DAKO, Trappes, France), anticorps monoclonal IgGI (DAKO)). Après un lavage de 15 minutes dans du TBS / BSA 0.1 % / Tween 20 0.05 %, les lames ont été incubées avec un anticorps secondaire biotinylé (DAKO) pendant 30 minutes à température ambiante et en atmosphère humide. Après une nouvelle étape de lavage, les lames ont été incubées 30 minutes en présence de streptavidine/peroxydase (DAKO) pendant 30 minutes à température ambiante et en atmosphère humide. Après un dernier lavage, les lames ont été incubées 5 minutes en présence de l'AEC (DAKO), substrat de la peroxydase, puis contre-colorées par l'hémalun de Mayer. Les lames ont été lues au microscope.
Les lames ont été lues au microscope Leitz par 2 investigateurs.
Une échelle semi-quantitative a été utilisée pour définir l'intensité du marquage : 0 = nulle, 1 = faible, 2 = moyenne, 3 = forte.
Une moyenne a été établie sur 8 donneurs sains ou 8 patients acnéiques dans chacun des groupes « contrôle », « Adapalène 10"7 M » et « Adapalène 10"6 M.
4) DOSAGE ELISA
La sécrétion protéique de l'IL-1 ra (patients uniquement) dans les surnageants de culture des explants de peau acnéique et de peau saine, incubés en présence ou non d'Adapalène, a été évaluée par un dosage ELISA en utilisant le kit de détection IL-1ra Cytoscreen kit (Biosource Europe S. A., Nivelles, Belgique) et en suivant les instructions du fournisseur.
Une moyenne a été établie sur 8 donneurs sains ou 8 patients acnéiques dans chacun des groupes « contrôle », « Adapalène 10~7 M » et « Adapalène 10"6 M.
5) ANALYSE STATISTIQUE
Le test de Wilcoxon apparié a été utilisé pour l'analyse statistique et p < 0.05 (par comparaison au milieu contrôle) a été considéré significatif.
Exemple 1 : Mesure de l'expression de I Lira sur peau saine et sur peau acnéique par Immunohistochimie
Immunohistochimie : Peau saine (Figure 1)
- L'IL-1 ra est très faiblement à faiblement exprimée dans l'épiderme des donneurs sains, son intensité d'expression étant en moyenne de 0.8 (+/- 0.7). - La moyenne effectuée sur 8 donneurs sains ne met pas en évidence un effet modulateur de l'Adapalène sur l'expression de NL-I ra dans l'épiderme des donneurs sains. L'intensité d'expression de cette cytokine est en effet de 0.9 (+/- 0.5) avec 10'7 M d'Adapalène et 0.8 (+/- 0.4) avec 10'6 M d'Adapalène.
L'effet modulateur de l'Adapalène s'exerce de 2 manières [cf. figure 2 (a) et
(b)] :
- un effet inducteur lorsque l'expression dans le milieu contrôle est faible [figure 2(a)]. Dans le 1er sous-groupe de donneurs sains, l'intensité d'expression de l'IL-1 ra passe en effet de 0.4 (+/- 0.6) dans le milieu contrôle à 1 .1 (+/- 0.4) avec 10'7 M d'Adapalène puis à 1.2 (+/- 0.4) avec 10~6 M d'Adapalène. un effet inhibiteur lorsque l'expression dans le milieu contrôle est plus importante [figure 2(b)]. Dans le 2eme sous-groupe de donneurs sains, l'intensité d'expression de I1IL- 1 ra passe en effet de 1.1 (+/- 0.6) dans le milieu contrôle à 0.5 (+/- 0.0) avec 10'7M et 10"6 M d'Adapalène.
Immunohistochimie : Peau acnéique (Figure 3) - L1ILI ra est très faiblement exprimée dans l'épiderme des patients acnéiques : l'intensité d'expression est en moyenne de 0.5 (+/- 0.5).
L'intensité d'expression de l'IL-1 ra est donc similaire dans la peau des donneurs sains et dans la peau acnéique.
- L'Adapalène augmente l'expression de cette cytokine dans l'épiderme des patients acnéiques. Cet effet est dose-dépendant et maximal à la concentration de 10~6 M.
L'intensité d'expression est en effet de 0.8 (+/- 0.8) avec 10'7 M d'Adapalène et de 0.9 (+/- 0.7) avec 10~6 M d'Adapalène.
Exemple 2 : Mesure de l'expression de IL1 ra sur peau saine et sur peau acnéiαue par Dosage ELISA
Dosage ELISA : surnageants de culture des explants de peau saine [Figure 4(a)] - La quantité d'IL-1 ra sécrétée dans les surnageants de culture par les explants de peau saine incubés avec le milieu contrôle est en moyenne de 585 pg (+/- 337) (moyenne établie sur 8 donneurs sains).
- En présence d'Adapalène 10~7 M, la quantité d'IL-1 ra sécrétée dans les surnageants de culture est en moyenne de 600 pg (+/- 362), soit une augmentation de 2.6 % par rapport au milieu contrôle et de 564pg (+/- 255) en présence d'Adapalène 10'6 M, soit une diminution de 3.5 % par rapport au milieu contrôle.
Dosage ELISA : surnageants de culture des explants de peau acnéique [Figure 4(b)]
- La quantité d'IL-1 ra sécrétée dans les surnageants de culture des explants de peau acnéique incubés avec le milieu contrôle est en moyenne de 1 145 pg (+/- 404).
La sécrétion d'IL-1 ra est donc en moyenne plus forte chez les patients acnéiques par comparaison aux donneurs sains.
- En présence d'Adapalène 10'7 M, la quantité sécrétée d'IL-1 ra est en moyenne de 1 196 pg (+/- 422), soit une augmentation de 4.4 % par rapport au milieu contrôle et de 1 161 pg (+/- 409) en présence d'Adapalène 10'6 M, soit une augmentation de 1.4 % par rapport au milieu contrôle.
Les résultats des exemples montrent que l'Adapalène (aux 2 concentrations utilisées) augmente, l'expression de l'IL-1 ra dans l'épiderme des patients acnéiques. Aucune modulation significative n'est observée chez les donneurs sains mais deux sous populations se dégagent.
L'augmentation de l'expression de l'IL-1 ra avec l'Adapalène intervient dans l'action comédolytique de l'Adapalène. En effet, l'IL-1 ra est une cytokine antagoniste du récepteur de I1IL- 1 alpha et qui exerce des effets anti-inflammatoires au niveau de la peau (Suh D et al, 2002). En bloquant le récepteur de I1IL- 1 alpha, l'IL-1 ra prévient la formation des comédons qui sinon serait induite par I1IL- 1 alpha.

Claims

REVENDICATIONS
1 . Utilisation de l'Adapalène ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, pour préparer un médicament destiné à augmenter l'expression de NL-1 ra par les cellules de l'épiderme.
2. Utilisation selon la revendication 1 , caractérisé en ce que les cellules de l'épiderme sont les kératinocytes.
3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il induit l'augmentation de l'expression de NL-I ra par les cellules de l'épiderme acnéique.
4. Utilisation selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'acné traitée est choisie parmi l'acné vulgaire, l'acné polymorphe, l'acné nodulocystique, l'acné conglobata, l'acné secondaire telle que l'acné provoquée par le soleil, l'acné provoquée par un médicament et l'acné occupationnelle.
5. Utilisation selon la revendication 4, pour préparer un médicament destiné à prévenir la formation de comédons chez les patients dont les cellules de l'épiderme acnéique sous-expriment l'IL-1 ra.
6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que le médicament est appliqué de manière topique.
7. Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que le médicament se présente sous la forme d'un gel, d'une lotion ou d'une crème.
8. Méthode pour induire une augmentation de l'expression de NL-I ra par les cellules de l'épiderme d'un patient nécessitant un traitement, caractérisé en ce qu'il est administré audit patient de l'Adapalène ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci.
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