EP0657529B1 - Entfärbung von Fermentationslösungen - Google Patents

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EP0657529B1
EP0657529B1 EP94119369A EP94119369A EP0657529B1 EP 0657529 B1 EP0657529 B1 EP 0657529B1 EP 94119369 A EP94119369 A EP 94119369A EP 94119369 A EP94119369 A EP 94119369A EP 0657529 B1 EP0657529 B1 EP 0657529B1
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dalton
molecular weight
fermentation
compounds
process according
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Hans Leonhard Ohrem
Lutz Dr. Büttgenbach
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Merck Patent GmbH
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Merck Patent GmbH
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    • C12P19/02—Monosaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
    • C12M29/04—Filters; Permeable or porous membranes or plates, e.g. dialysis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
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    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
    • C12P7/26—Ketones

Definitions

  • the invention relates to a method for simple separation of the colored components of a fermentation solution during purification of microbially produced compounds that are in solution in the Fermentation solution.
  • Microbial fermentation processes have become on an industrial scale has been tried and tested for many years because it makes it relatively easy Sort of has access to larger amounts of substances by means of chemical synthesis not, only with difficulty or only in small quantities are accessible.
  • the compounds produced by means of microbial fermentation are in the Fermentation medium usually in dissolved form and must be This is isolated and cleaned. On a laboratory and research scale this is usually not a major problem since it is sufficient standard chromatographic methods are known, impurities cut off. On the technical scale, however, one is on simple, quick and inexpensive procedures instruct the desired product without further, major losses in yield in purified form isolate, if possible without the general continuous To disturb process process significantly.
  • the fermentation medium is usually colored.
  • the coloring partly stems from the fermentative components of the cultivation medium yourself, on the other hand it can also be opened (unwanted) formed intermediates, metabolites or aggregates of Return end product. In most cases, the coloring can not included together by separating the coarser components the cells and cell debris of the microorganism from the medium completed fermentation.
  • Activated carbon is mostly used today to remove unwanted color to remove.
  • the color-bearing fabrics are usually on the Activated carbon adsorbed.
  • this method is only suitable if the desired product is not also adsorbed.
  • the use of activated carbon leads to more or less significant losses in yield.
  • the activated carbon is mostly in slurried form must be supplied and usually after adsorption must be washed out several times in order to reduce the yield losses to minimize. This usually has an undesirable effect Dilution effect.
  • the US 4,758,347 describes a method for cleaning / decolorization of dye-containing Waste water in a pretreatment stage by adding acid or alkali to a pH in the range of 4 to 9 are set using a two-stage Membrane separation process.
  • WO 91/04342 discloses a process for producing a mixture of fructose, glucose and compounds of the general formula GF n , where G is glucose, F is fructose and n is an integer, the mixture consisting of the tubers of Jerusalem artichoke or of roots the chicory is obtained by a process which does not involve any chemical modification of the components of the mixture.
  • the membranes must have a separation limit of 150 to have a maximum of 500 u (150-500 daltons), that is, substances with a molecular weight from well below the separation limit are able to the membrane area to permeate, whereas substances with a molecular weight retained above the separation limit (nanofiltration).
  • the Nanofiltration can, as with the known use of activated carbon also, precede a filtration step that causes the coarse Components in the medium are removed from it beforehand (microfiltration).
  • the present invention accordingly relates to a method for Purification of low molecular weight produced by microorganisms Compounds in colored fermentation solutions, characterized in that is that the clear colored, freed from coarse constituents Fermentation broth containing the microbially produced products dissolved form contains, through a membrane with a separation limit of 150 to 500 u (150-500 daltons), especially 200 to 300 u (200-300 daltons), filtered and the Compounds isolated from the undyed eluate.
  • the subject of the invention is a corresponding one Process, which is characterized in that nanofiltration membranes with a cut-off of about 200 u (200 daltons) for purification of microbially produced compounds with a molecular weight of less than 100 u (100 daltons).
  • the invention is a corresponding method for Purification of microbially produced dihydroxyacetone.
  • separation membranes required for these purposes with the mentioned Properties are state of the art and commercially available. Separating membranes with a cut-off of about 150 to 500 u (150-500 daltons), the partly unknown yellow and brown dissolved components an otherwise clear fermentation solution almost quantitatively withhold while synthetic products with a molecular weight from well below the respective separation limit in good yields permeate through the membrane.
  • more yield based on the crystallization step in Connection to the filtration or the coal adsorption
  • nanofiltration step according to the invention can be achieved in comparison for cleaning with activated carbon under otherwise the same initial and Aftercare.
  • the appropriate substances should preferably have no or only small charges, since hydration shells become one lead to greater effective molecular weight.
  • connections like Dihydroxyacetone, sorbose (ascorbic acid production), or also biotin there are also fermentatively produced amino acids and peptides nearby their isolelectric point by means of the membranes mentioned colored components separable.
  • Another advantage of the method according to the invention is that in addition to the increased yield the product resulting from the fermentation solution can crystallize out after nanofiltration, a better one Has more quality than the treatment with activated carbon. So are for example, the so-called yellow values, which differ from solutions let crystallized product (2nd crystallization) be determined, clearly lower than with the coal adsorption method.
  • Nanofiltration is suitable for all common technical fermentation processes, regardless of which microorganisms and which Media compositions are available. Ultimately, the decisive factor is effective size of the product formed. The further the size of the Product is below the exclusion limit, with the higher Yields of a particularly pure compound can be expected.
  • the nanofiltration can also be carried out without an upstream microfiltration be so that a purification step can be saved.
  • the process is particularly beneficial for the purification of microbial prepared dihydroxyacetone suitable. But also for example with the Process for the microbial production of sorbose (ascorbic acid extraction) good results can be achieved.
  • the solution was sterilized (20 min, 120 ° C) and after cooling with Inoculated 5 - 10 l of a densely overgrown pre-culture of the bacterium.
  • the fermenter was allowed to grow the bacterial culture for about a day and implement. The duration was based either on the measured Residual amount of glycerin or after oxygen uptake, measured according to Standard methods. The reaction was stopped as no glycerin there was more in the approach.
  • the fermentation broth obtained according to Example 1 is by microfiltration (Pore size 0.2 ⁇ m) according to standard methods of solids free of any kind.
  • the clear filtrate was then fed to a nanofiltration system: Release material Dow NF 45, separation limit 200 u (200 Da), Membrane area 50 sqm (winding modules), print 20 bar, Permeate flow with filtrate from Example 1 7 l / sqm h.
  • the fermenter solution was filtered on the membrane surface.
  • the coloring components were retained while Water and the product permeated the membrane.
  • the clear, undyed DHA solution was evaporated to the viscosity.
  • the product was crystallized from concentrate with cooling from acetone. Yield 76% white crystals. Some crystals were dissolved in water (25% solution) and the yellowing as a measure for those still present Impurities measured (according to Hazen A., 1892, Am. Chem. J. 14, 300). A relative yellowness index of 4.6 was determined.
  • the pH of the Solution was 5.6.
  • the fermentation broth obtained according to Example 1 became as in Example 2 described, first subjected to microfiltration.
  • L-Sorbose was produced by fermentation using Acetobacter suboxydans using standard methods. The fermentation broth was treated and cleaned as in Example 2. A membrane material with a separation limit of approx. 300 u (300 Da) was used for nanofiltration. High-quality crystals of L-sorbose (yellow value: 5.0) were obtained in good yield.

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Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum einfachen Abtrennen der gefärbten Bestandteile einer Fermentationslösung bei der Aufreinigung von mikrobiell hergestellten Verbindungen, die in gelöster Form in der Fermentationslösung vorliegen.
Mikrobielle Fermentationsverfahren haben sich im technischen Maßstab schon seit vielen Jahren bewährt, da man hierdurch auf relativ einfache Art Zugang zu größeren Mengen an Substanzen hat, die mittels chemischer Synthese nicht, nur schwer oder nur in geringen Mengen zugänglich sind.
Die mittels mikrobieller Fermentation hergestellten Verbindungen liegen im Fermentationsmedium in der Regel in gelöster Form vor und müssen aus diesem isoliert aund aufgereinigt werden. Im Labor- und Forschungsmaßstab stellt dies in der Regel kein größeres Problem dar, da genügend chromatographische Standardmethoden bekannt sind, Verunreinigungen abzutrennen. Im technischen Maßstab ist man jedoch auf einfache, schnelle und preiswerte Verfahren angewiesen, das gewünschte Produkt ohne weitere, größere Ausbeuteverluste in aufgereinigter Form zu isolieren, nach Möglichkeit auch ohne den allgemeinen kontinuierlichen Verfahrensprozeß wesentlich zu stören.
Ein besonderes Problem bei diesen Aufreinigungen ergibt sich aus der Tatsache, daß das Fermentationsmedium meist gefärbt ist. Die Färbung rührt einmal zum Teil von den fermentativen Bestandteilen des Kultivierungsmediums selbst her, andererseits läßt sie sich aber auch auf (unerwünscht) gebildete Zwischprodukte, Metaboliten oder Aggregate des Endproduktes zurückführen. In den aller meisten Fällen, kann die Färbung nicht zusammen durch das Abtrennen der gröberen Bestandteile inklusive der Zellen und Zelltrümmer des Mikroorganismus aus dem Medium nach abgeschlossener Fermentation beseitigt werden. Im technischen Maßstab wird heute zumeist Aktivkohle verwendet, um die unerwünschte Färbung zu entfernen. Die farbtragenden Stoffe werden dabei in der Regel an der Aktivkohle adsorbiert. Dieses Verfahren ist allerdings nur dann geeignet, wenn das gewünschte Produkt nicht ebenfalls adsorbiert wird. In vielen Fällen führt der Einsatz von Aktivkohle dennoch zu mehr oder weniger deutlichen Ausbeuteverlusten. Hinzukommt, daß die Aktivkohle meist in aufgeschlämmter Form zugeführt werden muß und in der Regel nach erfolgter Adsorption mehrfach ausgewaschen werden muß, um die Ausbeuteverluste zu minimieren. Dies hat einen in der Regel unerwünschten Verdünnungseffekt zur Folge.
Chemical Abstracts, vol. 112, no. 13, 26.3.1990, Columbus, Ohio, US "Separation and recovery of fermented meso-erythritol with ultrafiltration membranes" beschreibt ein Verfahren zur Trennung und Isolierung von fermentiertem Mesoerythritol mittels Ultrafiltration mit Membranen, die eine Trenngrenze von 1000- 100.000 Molekulargewicht aufweisen, getrennt und isoliert. Das Filtrat wird anschließend mit Aktivkohle behandelt.
Die US 4,758,347 beschreibt ein Verfahren zur Reinigung/Entfärbung von farbstoffhaltigen Abwässern, die in einer Vorbehandlungsstufe durch Zugabe von Säure oder Alkali auf einen pH-Wert im Bereich von 4 bis 9 eingestellt sind, mit Hilfe eines zweistufigen Membrantrennverfahrens.
Die WO 91/04342 offenbart ein Verfahren zur Herstellung einer Mischung aus Fructose, Glucose und Verbindungen der allgemeinen Formel GFn, wobei G Glucose ist, F Fructose ist und n eine ganze Zahl ist, wobei die Mischung aus den Knollen des Topinambur oder aus Wurzeln der Zichorie durch ein Verfahren, das keinerlei chemische Modifizierung der Komponenten der Mischung beinhaltet, gewonnen wird.
Es bestand so die Aufgabe, die Nachteile, die bei der Entfärbung von Fermentationslösungen mit Aktivkohle im Zuge der Aufreinigung eines mikrobiell hergestellten Produktes auftreten, zu beseitigen.
Es wurde nun gefunden, daß die Verwendung von Aktivkohle zur Beseitigung von färbenden Begleitsubstanzen aus dem Medium vermieden werden kann, wenn sie durch eine Filtration durch geeignete Membranen ersetzt wird. Die Membranen müssen eine Trenngrenze von 150 bis maximal 500 u (150-500 Dalton) haben, daß heißt, Stoffe mit einem Molekulargewicht von deutlich unterhalb der Trenngrenze sind in der Lage, die Membranfläche zu permeieren, wohingegen Stoffe mit einem Molekulargewicht oberhalb der Trenngrenze zurückgehalten werden (Nanofiltration). Der Nanofiltration kann, wie bei der bekannten Verwendung von Aktivkohle auch, ein Filtrationsschritt vorausgehen, der bewirkt, daß die groben Bestandteile im Medium zuvor aus diesem entfernt werden (Mikrofiltration).
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist demnach ein Verfahren zur Aufreingung von durch Mikroorganismen produzierten niedermolekularen Verbindungen in gefärbten Fermentationslösungen, daß dadurch gekennzeichnet ist, daß man die von groben Bestandteilen befreite klare gefärbte Fermentationsbrühe, welche die mikrobiell hergestellten Produkte in gelöster Form enthält, durch eine Membrane mit einer Trenngrenze von 150 bis 500 u (150-500 Dalton), insbesondere 200 bis 300 u (200-300 Dalton), filtriert und die Verbindungen aus dem ungefärbten Eluat isoliert.
Insbesondere ist Gegenstand der Erfindung ein entsprechendes Verfahren, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man Nanofiltrationsmembranen mit einer Trenngrenze von etwa 200 u (200 Dalton) zur Aufreinigung von mikrobiell hergestellten Verbindungen mit einem Molekulargewicht von unter 100 u (100 Dalton) einsetzt.
Femer ist Gegensatnd der Erfindung ein entsprechendes Verfahren zur Aufreinigung von mikrobiell hergestelltem Dihydroxyaceton.
Die für diese Zwecke erforderlichen Trennmembranen mit den genannten Eigenschaften sind Stand der Technik und kommerziell erwerbbar. Trennmembranen mit einer Trenngrenze von etwa 150 bis 500 u (150-500 Dalton) vermögen, die zum Teil unbekannten gelben und braunen gelösten Bestandteile einer ansonsten klaren Fermentationslösung nahezu quantitativ zurückzuhalten, während Syntheseprodukte mit einem Molekulargewicht von deutlich unterhalb der jeweiligen Trenngrenze in guten Ausbeuten durch die Membran permeieren. Insbesondere sind Trennmembranen geeignet mit einer Trenngrenze von 200 bis 300 u (200-300 Dalton). Je nach Größe des Molekulargewichts innerhalb des angegebenen Bereiches können 10 bis 30 % mehr Ausbeute (bezogen auf den Kristallisationsschritt im Anschluß an die Filtration bzw. die Kohleadsorption) mittels des erfindungsgemäßen Nanofiltrationsschrittes erreicht werden im Vergleich zur Aufreinigung mittels Aktivkohle unter ansonsten gleichen Vor- und Nachbehandlungen. Die entsprechenden Stoffe sollten vorzugsweise keine oder nur geringe Ladungen aufweisen, da Hydrathüllen zu einem größeren effektiven Molekulargewicht führen. Neben Verbindungen wie Dihydroxyaceton, Sorbose (Ascorbinsäureherstellung), oder auch Biotin sind auch fermentativ hergestellte Aminosäuren und Peptide in der Nähe ihres isolelektrischen Punktes mittels der genannten Membranen von den gefärbten Bestandteilen abtrennbar.
Auch wenn bei dem genannten Filtrationsschritt eine effektive Mindestmembranfläche vorhanden sein muß (bei z.B. für 5.000 I :100 - 140 qm) und Drucke (5 - 40 bar) erforderlich sind, die einen erhöhten apparativen und anfangs auch zeitlichen Aufwand zur Folge haben, ist ein Filtrationsschritt dem Einsatz von Aktivkohle nicht nur aus Gründen der genannten höheren Ausbeute vorzuziehen. So wird das Medium nicht mehr unnötig durch Wasch- und Aufschwämmlösung verdünnt, was sich störend auf die in der Regel sich noch anschließenden Chromatographieschritte, beispielsweise lonenaustauscherchromatographie, auswirkt. Auch die relativ langen Filtrierzeiten (5-10 h, je nachdem, welche Bedingungen vorliegen) sind letztlich kein eigentlicher Nachteil, da die Nanofiltration in ein kontinuierliches Verfahren zwischen Mikrofiltration (Entfernung von Zellen, groben Bestandteilen) und z.B lonenaustauscherchromatographie (zur weiteren Aufreinigung) eingebunden werden kann. Überdies werden Entsorgungsprobleme, die bei Verwendung von Aktivkohle massiv entstehen, umgangen.
Ein weiterer Vorteil des erfindungsgemäßen Vefahrens ist, daß neben der erhöhten Ausbeute das Produkt, welches sich aus der Fermentationslösung nach der Nanofiltration auskristallisieren läßt, eine besserer Qualität aufweist als bei der Behandlung mit Aktivkohle. So sind beispielsweise die sogenannten Gelbwerte, die sich von Lösungen auskristallisierten Produktes (2. Kristallisation) ermitteln lassen, deutlich niedriger als bei der Kohleadsorptionsmethode.
Weiterhin wurde festgestellt, daß entsprechende Lösungen (Filtermethode) einen wesentlich günstigerem pH-Wert (5.2 bis 6.0) aufweisen, als die nach der bekannten Methode (Kohleadsorption) aufgereinigten Produkte (<< 5.0). Dies wirkt sich überraschend und in vorteilhafter Weise auf eine verbesserte Lagerfähigkeit der endgültig aufgereinigten Produkte (zumeist ein Chromatographieschritt nach der Nanofiltration) aus.
Die Nanofiltration eignet sich bei allen gängigen technischen Fermentationsverfahren, unabhängig, welche Mikroorganismen und welche Medienzusammensetzungen vorliegen. Entscheidend ist letztlich die effektive Größe des gebildeten Produktes. Je weiter die Größe des Produktes unterhalb der Ausschlußgrenze liegt, mit um so höherern Ausbeuten eines besonders reiner Verbindung kann gerechnet werden. Die Nanofiltration kann auch ohne vorgeschaltete Mikrofiltration durchgeführt werden, so daß ein Aufreinigungsschritt eingespart werden kann.
Allerdings muß in diesem Fall eine größerer Membranfläche eingesetzt werden, und die Filtrationszeiten verängern sich entsprechend. Das Verfahren ist im besonderen Maße für die Aufreinigung von mikrobiell hergestelltem Dihydroxyaceton geeignet. Aber auch zum Beispiel bei dem Verfahren der mikrobiellen Herstellung von Sorbose (Ascorbinsäuregewinnung) können gute Ergebnisse erzielt werden.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung.
Beispiel 1:
Zur Umsetzung von Glycerin zu Dihydroxyaceton (DHA) mit Hilfe des Bakterienstammes Gluconobacter oxydans (ATCC 621) wurden 100 I eines Mediums mit folgender Zusammensetzung angesetzt:
Glycerin 150 g / l
Hefeextrakt 5 g / l
Ammoniumsulfat 2 g / l
Die Lösung wurde sterilisiert (20 min, 120 °C) und nach dem Abkühlen mit 5 - 10 I einer dicht bewachsenen Vorkultur des Bakteriums beimpft.
Bei guter Belüftung (50 I/ min) und starker Durchmischung (500 Upm) im Fermenter ließ man die Bakterienkultur für ca. einen Tag wachsen und umsetzen. Die Dauer richtete sich dabei entweder nach der gemessenen Restglycerinmenge oder nach der Sauerstoffaufnahme, gemessen nach Standardmethoden. Die Umsetzung wurde abgebrochen, als kein Glycerin mehr im Ansatz vorhanden war.
Beispiel 2:
Die nach Beispiel 1 erhaltene Fermentationsbrühe wird durch Mikrofiltration (Porengröße 0.2 µm) nach Standardmethoden von Feststoffen jeglicher Art befreit.
Das klare Filtrat wurde anschließend einer Nanofiltrationsanlage zugeführt:
Trennmaterial Dow NF 45, Trenngrenze 200 u (200 Da),
Membranfläche 50 qm (Wickelmodule),
Druck 20 bar,
Permeatfluß mit Filtrat von Beispiel 1 7 l / qm h.
Bei 20 bar und turbulenter Querströmung (zur Vermeidung von Sedimentablagerungen) der Membranfläche wurde die Fermenterlösung filtriert. Dabei wurden die färbenden Bestandteile zurückgehalten, während Wasser und das Produkt die Membran permeierten. Die klare, ungefärbte DHA-Lösung wurde bis zur Zähflüssigkeit eingedampft. Aus diesem Konzentrat wurde das Produkt unter Kühlung aus Aceton auskristallisiert. Ausbeute 76 % weiße Kristalle. Einige Kristalle wurden in Wasser gelöst (25%ige Lösung) und die Gelbfärbung als Maß für noch vorhandene Verunreinigungen gemessen (nach Hazen A., 1892, Am. Chem. J. 14, 300). Es wurde ein relativer Gelbwert von 4.6 bestimmt. Der pH-Wert der Lösung betrug 5.6.
Beispiel 3:
Die nach Beispiel 1 erhaltene Fermentationsbrühe wurde wie in Beispiel 2 beschrieben, zunächst der Mikrofiltration unterworfen.
Anschließend wurde das klare Filtrat mit ca. 2.5 kg Aktivkohle (aufgeschlämmt in 10 l Wasser) für 1 h in einem Behälter gerührt. Durch Filtration wurde die Kohle wieder entfernt. Die Kohle wurde 2mal mit wenig Wasser nachgewaschen. Aus der verbliebenen klaren ungefärbten DHA-Lösung wurde wie in Beispiel 2 beschrieben, DHA auskristallisiert. Ausbeute 61 %. Es wurde eine Gelbwertbestimmung der Lösung von Kristallen analog Beispiel 2 durchgeführt. Es wurde ein relativer Gelbwert von 15 ermittelt. Der pH-Wert der Lösung betrug 4.5.
Beispiel 4:
Es wurde L-Sorbose fermentativ mittels Acetobacter suboxydans nach Standardmethoden hergestellt. Die Fermentationsbrühe wurde analog Beispiel 2 behandelt und aufgereinigt. Zur Nanofiltration wurde ein Membranmaterial mit einer Trenngrenze von ca. 300 u (300 Da) verwendet. Man erhielt qualitativ saubere Kristalle L-Sorbose (Gelbwert: 5.0) in guter Ausbeute.

Claims (6)

  1. Verfahren zur Aufreingung von durch Mikroorganismen produzierten niedermolekularen Verbindungen in gefärbten Fermentationslösungen, dadurch gekennzeichnet, daß man die von groben Bestandteilen befreite klare gefärbte Fermentationsbrühe, welche die mikrobiell hergestellten Produkte in gelöster Form enthält, durch eine Membrane mit einer Trenngrenze von 150 bis 500 u (150-500 Dalton) filtriert und die Verbindungen aus dem ungefärbten Eluat isoliert.
  2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Nanofiltermembranen mit einer Trenngrenze von 200 bis 300 u (200-300 Da) einsetzt.
  3. Verfahren nach Anspruch 1 zur Aufreinigung von mikrobiell hergestellten Verbindungen mit einem Molekulargewicht von unter 200 u (200 Dalton)
  4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Nanofiltermembranen mit einer Trenngrenze von etwa 200 u (200 Dalton) einsetzt zur Aufreinigung von mikrobiell hergestellten Verbindungen mit einem Molekulargewicht von unter 150 Dalton.
  5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß man Nanofiltermembranen mit einer Trenngrenze von etwa 200 u (200 Dalton) einsetzt zur Aufreinigung von mikrobiell hergestellten Verbindungen mit einem Molekulargewicht von unter 100 u (100 Dalton).
  6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Aufreinigung von mikrobiell hergestelltem Dihydroxyaceton.
EP94119369A 1993-12-11 1994-12-08 Entfärbung von Fermentationslösungen Expired - Lifetime EP0657529B2 (de)

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