EA034933B1 - Быстродействующие штаммы lactobacillus и их применение для улучшения аэробной стабильности силоса - Google Patents
Быстродействующие штаммы lactobacillus и их применение для улучшения аэробной стабильности силоса Download PDFInfo
- Publication number
- EA034933B1 EA034933B1 EA201691804A EA201691804A EA034933B1 EA 034933 B1 EA034933 B1 EA 034933B1 EA 201691804 A EA201691804 A EA 201691804A EA 201691804 A EA201691804 A EA 201691804A EA 034933 B1 EA034933 B1 EA 034933B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- silage
- strain
- silo
- aerobic
- lactobacillus
- Prior art date
Links
- 239000004460 silage Substances 0.000 title claims abstract description 99
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title description 17
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title description 8
- 241000186679 Lactobacillus buchneri Species 0.000 claims abstract description 69
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 46
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 44
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 claims abstract description 40
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 33
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 10
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 27
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 27
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 25
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 24
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 23
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 23
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 23
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 22
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 10
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 claims description 7
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 235000017587 Medicago sativa ssp. sativa Nutrition 0.000 claims description 5
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 claims description 5
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 3
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims 4
- 240000004658 Medicago sativa Species 0.000 claims 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 21
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 18
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 abstract description 7
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 abstract description 5
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 abstract description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 47
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 43
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 241001057636 Dracaena deremensis Species 0.000 description 14
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 12
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 10
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 6
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 5
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 5
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 239000004461 grass silage Substances 0.000 description 5
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 4
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 4
- 241000218492 Lactobacillus crispatus Species 0.000 description 4
- 241000219823 Medicago Species 0.000 description 4
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 4
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 235000021262 sour milk Nutrition 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 3
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 3
- 229940114123 ferulate Drugs 0.000 description 3
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N ferulic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N 0.000 description 3
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 238000010399 three-hybrid screening Methods 0.000 description 2
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 1
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 1
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 1
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 241000186715 Lactobacillus alimentarius Species 0.000 description 1
- 241001134659 Lactobacillus curvatus Species 0.000 description 1
- 241001468191 Lactobacillus kefiri Species 0.000 description 1
- 241001643453 Lactobacillus parabuchneri Species 0.000 description 1
- 241001643449 Lactobacillus parakefiri Species 0.000 description 1
- 241001647418 Lactobacillus paralimentarius Species 0.000 description 1
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 1
- 241000186612 Lactobacillus sakei Species 0.000 description 1
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241000202221 Weissella Species 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 239000002551 biofuel Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- -1 but not limited to Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002962 chemical mutagen Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000000816 effect on animals Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 239000004495 emulsifiable concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 230000004153 glucose metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
- A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
- A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
- A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/121—Brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/24—Lactobacillus brevis
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Раскрыт способ обработки силоса для повышения аэробной стабильности путем усиления брожения и стабилизации силоса посредством подавления роста микроорганизмов, выбранных из дрожжей, плесени и спорообразующих бактерий, который позволяет осуществлять аэробное воздействие на более ранних сроках. Способ включает обработку силоса или корма композицией, содержащей штамм LN7125 Lactobacillus buchneri, или штамм LB5328 Lactobacillus brevis, или штамм LB7123 Lactobacillus brevis и их смеси, или мутант, который сохраняет активность в отношении консервирования силоса, присущую LN7125, LB5328 или LB7123, или антимикробные компоненты, полученные таким образом. Было обнаружено, что штаммы Lactobacillus buchneri и Lactobacillus brevis, раскрываемые в данном изобретении, после их очистки и выделения улучшают аэробную стабильность силоса, что позволяет подвергать его аэробному воздействию на более ранних сроках после начала силосования, чем в существующей практике.
Description
Область изобретения
Изобретение относится к композициям и способам обработки животных кормов и консервирования силоса с целью повышения аэробной стабильности.
Предпосылки изобретения
Процесс силосования представляет собой способ консервирования влажных зеленых кормов, который используется во всем мире. На силос приходится более чем 200 млн т сухого вещества, заготавливаемого ежегодно только в Западной Европе и Соединенных Штатах. В этом процессе используется естественное брожение, при котором молочнокислые бактерии сбраживают водорастворимые углеводы с образованием органических кислот в анаэробных условиях. Это вызывает снижение pH, при котором затем подавляется развитие вредных микробов так, чтобы сохранять влажный зеленый корм.
Аэробная нестабильность является основной проблемой в производстве силоса. Традиционно рекомендуется подвергать силос брожению в течение не менее 30 дней перед использованием в корм, чтобы повысить усвояемость силоса. Даже до раскрывания хранилищ под выемку силос может подвергаться воздействию кислорода вследствие проблем, связанных с ведением хозяйства (т.е. плохая утрамбовка или герметизация). В этих аэробных условиях быстрый рост дрожжей и плесени вызывает разогрев и порчу силоса, понижая его питательную ценность. Использование в корм сельскохозяйственной культуры, которая не прошла надлежащего брожения, может понижать потребление сухого вещества (ПСВ), снижать молочную продуктивность и вызывать проблемы с пищеварением. Если отвести достаточно времени на брожение, то получается более съедобный и усвояемый корм для оптимального ПСВ и молочной продуктивности.
Аэробная нестабильность может вызывать проблемы даже в силосе с внесенным микробным препаратом, который прошел то, что традиционно считается хорошим брожением, характеризующееся быстрым снижением pH и низким конечным значением pH. Однако дрожжевые организмы, которые способствуют нестабильности в этих условиях, могут быть не чувствительны к кислотным условиям и метаболизировать молочную кислоту, произведенную молочнокислыми бактериями в ходе брожения.
При производстве силоса можно применять как химические, так и биологические добавки, чтобы содействовать созданию адекватного характера брожения, особенно в менее благоприятных условиях. Типичными химическими добавками чаше всего бывают органические кислоты, а биологические добавки включают бактериальные препараты и ферменты. Бактериальные препараты более предпочтительны, чем химические добавки, поскольку они безопаснее, легче в использовании, не вызывают коррозии сельскохозяйственной техники, не загрязняют окружающую среду и считаются натуральными продуктами.
Производство штаммов микробных препаратов для силоса и процесса силосования сложно и требует взаимодействия многих химических и микробиологических процессов. Различные штаммы даже одних и тех же видов не обладают одинаковыми свойствами и отличаются в отношении их ферментативных характеристик и получения. Кроме того, разные типы силоса и разные способы силосования выдвигают различные требования. В этой области техники существует постоянная потребность в усовершенствовании композиций и способов, направленных на улучшение аэробной стабильности силоса и повышение эффективности производства силосованных животных кормов.
Настоящее изобретение предлагает новые штаммы L. buchneri и L. brevis и их отличные комбинации для применения в качестве микробных препаратов для силоса.
Краткое описание изобретения
Варианты осуществления данного изобретения включают композиции для применения в качестве микробных препаратов для силоса, включающие сохраняющие качество силоса количества видов гетероферментативных молочнокислых бактерий и их смесей или их мутант и подходящий носитель. Композиции гетероферментативных молочнокислых бактерий, выделенные и очищенные, улучшают аэробную стабильность силосованных зеленых кормов, повышая брожение и стабилизацию силоса, что позволяет подвергать его более раннему аэробному воздействию. Такие композиции могут включать, но не ограничиваются этим, штамм LN7125 Lactobacillus buchneri (далее обозначаемый LN7125), имеющий патентное депонирование № NRRL В-50733, или штамм LB5328 Lactobacillus brevis (далее обозначаемый LB5328), имеющий патентное депонирование № NRRL B-50731, или штамм LB7123 Lactobacillus brevis (далее обозначаемый LB7123), имеющий патентное депонирование № NRRL B-50732 и их смеси, или мутант, который сохраняет активность в отношении консервирования силоса, присущую LN7125, LB5328 или LB7123, и носитель. Такие композиции могут содержать от примерно 101 до примерно 1011 жизнеспособных организмов на грамм сырого веса силоса, необязательно от примерно 102 до примерно 107 жизнеспособных организмов на грамм сырого веса силоса, например от примерно 103 до примерно 106 жизнеспособных организмов на грамм сырого веса силоса. Носителем в композициях вариантов осуществления может быть жидкость или твердое вещество, такие как карбонат кальция, крахмал или целлюлоза, но не ограничивается ими.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение теперь будет более подробно описано ниже в данном документе со ссылкой на прилагаемые таблицы, в которых приведены некоторые, но не все варианты осуществления настоящего изобретения. В самом деле это изобретение может быть осуществлено в различных модификациях, и
- 1 034933 другие варианты осуществления данного изобретения, изложенные в данном документе, могут прийти на ум специалисту в данной области, к которой относится настоящее изобретение, при использовании идей, представленных в вышеприведенном описании и сопутствующих графических материалах. Таким образом, следует понимать, что настоящее изобретение не должно ограничиваться конкретными раскрытыми вариантами осуществления, и подразумевается, что в объем прилагаемой формулы изобретения включены модификации и другие варианты осуществления. Хотя в данном документе используются специальные выражения, они используются только в общем и описательном смысле, а не в целях ограничения.
Если не указано иное, все технические и научные термины, применяемые в данном документе, имеют такое же значение, которое обычно понимается средним специалистом в области техники, к которой принадлежат варианты осуществления настоящего изобретения. Многие способы и материалы, подобные, измененные или эквивалентные описанным в данном документе, можно применять на практике в вариантах осуществления настоящего изобретения без дополнительного экспериментирования, в данном документе описаны предпочтительные материалы и способы. При описании и заявлении вариантов осуществления настоящего изобретения будет применяться приведенная далее терминология в соответствии с изложенными ниже определениями.
Единицы измерения, приставки и обозначения могут быть обозначены в форме, принятой в системе СИ. Числовые диапазоны, перечисляемые в описании, охватывают числа, определяющие диапазон, и включают каждое целое число в определенном диапазоне.
Форма единственного числа применяется в данном документе для обозначения одного или нескольких (т.е. по меньшей мере одного) грамматического объекта. Например, элемент означает один или несколько элементов.
В данном контексте продуктивность животных обозначает выход мяса, молока, яиц, потомства или работы.
В данном контексте силосование или силосуемый относится к способу анаэробной ферментации, используемому для сохранения зеленых кормов, незрелых зерновых культур и других культур биомассы для кормов и биотоплива. В некоторых вариантах осуществления способ силосования включает стадии приведения зеленых кормов в контакт с микробным препаратом и хранение смеси в анаэробных условиях. В некоторых вариантах осуществления способ силосования включает стадии хранения зеленых кормов в анаэробных условиях так, чтобы исключить попадание воздуха. Кормовые растения с внесенным микробным препаратом, описанным в других разделах данного документа, также утрамбовывают и хранят так, чтобы исключить попадание воздуха. Содержание влаги в зеленых кормах может составлять от примерно 50% до примерно 80% в зависимости от хранения, степени сжатия и ожидаемой потери влаги во время хранения. Силосование может происходить в силосных бункерах, силосных кучах, силосных ямах, силосных рулонах или любым другим методом, пригодным для силосования выбранного растительного материала. Растительный материал с микробным препаратом, описанные в других разделах данного документа, силосуемый в течение любого периода времени, соответствующего приготовлению силоса с требуемым уровнем созревания. В некоторых вариантах осуществления силосование продолжается примерно 7, примерно 15, примерно 20, примерно 25, примерно 30, примерно 35, примерно 40, примерно 41, примерно 42, примерно 43, примерно 44, примерно 45, примерно 46, примерно 47, примерно 48, примерно 49, примерно 50, примерно 55, примерно 60, примерно 65, примерно 70 дней, примерно 4 месяца, примерно 8, примерно 12, примерно 18 или примерно 24 месяца или в течение любого периода времени, который специалист считает пригодным. Способ силосования может происходить при любой температуре окружающей среды, например при температуре окружающей среды, например 045°С. Температура силосуемого растительного материала может, однако, превышать 45°С. Созревший силос можно использовать в корм скоту, замораживать и хранить для последующего использования или вносить в генератор биогаза для производства биогаза.
В данном контексте функциональный мутант означает штамм бактерий непосредственно или опосредованно, полученный путем генетической модификации или использованием эталонного(ых) штамма(ов) и сохраняющий не менее 50% активности эталонного штамма. Генетическую модификацию можно получить любым путем, таким как, но не ограничиваясь этим, химические мутагены, ионизирующее излучение, мутагенез на основе транспозонов или конъюгацией, трансдукцией или трансформацией с использованием эталонных штаммов в качестве либо получателя, либо донора генетического материала.
В данном контексте следует понимать, что термин виды гетероферментативных молочнокислых бактерий включает виды leuconostoc, некоторые lactobacilli, oenococci и weissella, но не ограничивается ими. Гетероферменты производят молочную кислоту, этанол, уксусную кислоту и диоксид углерода в соотношениях, зависящих от природы субстрата.
В данном контексте следует понимать, что термин виды гомоферментативных молочнокислых бактерий включает некоторые lactobacilli и большинство видов enterococci, lactococci, pediococci, streptococci, tetragenococci и vagococci, но не ограничивается ими, которые сбраживают гексозы по пути Эмбдена-Мейергофа (Е-М). Гомоферментативный означает, что молочная кислота является основным метаболитом без образования диоксида углерода. Из каждой молекулы сахара с шестью атомами углерода гомоферментативные молочнокислые бактерии производят две молекулы молочной кислоты.
- 2 034933
В данном контексте изолированный означает выделенный из естественного источника, включая, но не ограничиваясь этим, силос или другой растительный материал без внесенных в них бактерий.
В данном контексте микробный препарат относится к композиции, содержащей не менее одной бактериальной культуры и подходящий носитель. Комбинированный микробный препарат содержит не менее 2, не менее 3, не менее 4, не менее 5, не менее 6, не менее 7 или более бактериальных культур и подходящий носитель. Бактериальные культуры включают не менее одного бактериального штамма, включая, например, не менее 2, не менее 3, не менее 4, не менее 5, не менее 6, не менее 7 или более. Бактериальные культуры, полезные для способов и композиций, раскрываемых в данном документе, включают LN7125, LB5328 или LB7123, но не ограничиваются ими.
В данном контексте предварительно засилосованный растительный материал включает, но не ограничивается этим, травы, кукурузу, люцерну, пшеницу, плевел, зерновые, семена масличных культур, сорго, подсолнечник, ячмень и их смеси перед сбраживанием. Каждый из них можно успешно обрабатывать микробными препаратами вариантов осуществления настоящего изобретения. Микробные препараты вариантов осуществления настоящего изобретения также полезны для обработки кукурузы с высоким содержанием влаги (high moisture corn - HMC).
В данном контексте семена масличных культур включают подсолнечник, канолу, сою и их смеси, но не ограничиваются этим.
В данном контексте очищенный означает то, что виды или штаммы бактерий в значительной степени отделены от дрожжей, плесени и/или других видов или штаммов бактерий, находящихся в источнике, из которого они были выделены, и их состав обогащен по сравнению с этим источником.
Термин силос в данном контексте предназначен включать все типы сброженных сельскохозяйственных продуктов, включая, но не ограничиваясь этим, травяной силос, люцерновый силос, пшеничный силос, бобовый силос, подсолнечниковый силос, ячменный силос, силос из целого растения кукурузы (whole plant corn silage -WPCS), сорговый силос, сброженные злаки и смеси трав, и т.п.
Следует понимать, что в данном контексте термин штамм или штамм(ы) включает любой мутант или производное различных бактериальных штаммов, раскрываемых в данном документе, но не ограничивается этим, например штамм LN7125 L. buchneri (патентное депонирование № NRRL В-50733), или штамм LB5328 L. brevis (патентное депонирование № NRRL B-50731), или штамм LB7123 L. brevis (патентное депонирование № NRRL B-50732), которые сохраняют функциональную активность в отношении улучшения аэробной стабильности зеленых кормов, как описано и определено в способах и примерах, раскрываемых в данном документе.
Несколько выделенных и очищенных микроорганизмов улучшают аэробную стабильность силосованных зеленых кормов, повышая брожение и стабилизацию силоса, что позволяет подвергать его более раннему аэробному воздействию. Быдо показано, что определенные штамм(ы) видов L. buchneri или L. brevis повышают аэробную стабильность силоса не только тем, что снижают уровни молочной кислоты, но и тем, что производят вещество, которое подавляет микроорганизмы, способствующие аэробной нестабильности силоса. Не желая быть связанными какой-либо теорией, предполагают, что к такому результату приводит действие комбинации метаболитов. Кроме того, считается, что при метаболизме L. buchneri или L. brevis образуется как уксусная кислота, так и пропионовая кислота, о которых известно, что они подавляют рост дрожжей и плесени.
Основной целью силосования зеленых кормов является сохранение максимального количества исходного сухого вещества, питательных веществ и энергетической ценности сельскохозяйственной культуры для скармливания впоследствии. Способ может характеризоваться четырьмя основными фазами брожения силоса.
После герметизации хранилища первая фаза является аэробной, когда кислород по-прежнему присутствует между частями растения и значение pH равно 6,0-6,5. Эти условия позволяют продолжаться дыханию растений, активности протеазы и активности аэробных и факультативных аэробных микроорганизмов.
Вторая фаза представляет собой брожение, которое продолжается от нескольких дней до нескольких недель после того, как силос стал анаэробным. Происходит рост молочнокислых бактерий, которые становятся основной микробной популяцией, тем самым производя молочную и другие органические кислоты, снижая значение pH до 3,8-5,0.
Третья фаза - стабильная, в ходе которой происходит незначительное количество изменений в характеристиках зеленого корма, при условии, что воздух не проникает в хранилище.
Последней фазой является выемка и скармливание, когда силос в конечном счете разгружают и подвергают воздействию воздуха. Это приводит к повторной активации аэробных микроорганизмов, прежде всего дрожжей, плесени, бацилл и уксуснокислых бактерий, которые вызывают порчу.
Манера ведения хозяйства, которую можно использовать для предотвращения этого состояния, включает, но не ограничивается этим, соблюдение мер, улучшающих утрамбовку силоса в ходе процесса силосования, сжатие, герметичность, быстрое заполнение, уход за передней границей, а также соблюдение осторожности при выемке силоса на скармливание с тем, чтобы минимизировать аэрацию оставшегося силоса.
- 3 034933
Подверженность силоса аэробной порче обуславливается физическими, химическими и микробиологическими факторами. Ведение хозяйства (сжатие, скорость разгрузки) значительно влияет на проникновение кислорода в силос. В ходе выемки воздух может проникать на расстояние вплоть до 1 м вглубь за переднюю границу силоса, и таким образом воздействие кислорода продлевается. Образующиеся при ферментации кислоты и pH задерживают скорость микробного роста, но на скорость порчи также влияют количество бактерий и скорость аэробного микробного роста на доступных субстратах.
Кисломолочные бактерии (LAB) являются частью нормальной микрофлоры растущих растений. LAB можно классифицировать как один или два типа в зависимости от основных конечных продуктов их метаболизма; гомоферментативными являются те, которые при метаболизме глюкозы образуют только молочную кислоту, а гетероферментативные - это те, которые производят молочную кислоту, этанол, ацетат и CO2. Наличие этих типов весьма изменчиво как с точки зрения типа, как и количества, и меняется в зависимости от сельскохозяйственной культуры и местоположения.
Микробные препараты для силоса, содержащие, главным образом, гомоферментативные кисломолочные бактерии, стали преобладающими добавками во многих частях мира. Их действие заключается в ускорении быстрого и эффективного преобразования водорастворимых углеводов сельскохозяйственной культуры, приводящем к усиленному образованию молочной кислоты и быстрому снижению pH, и, таким образом, минимизации потери сухой массы. Микробные препараты могут также улучшать продуктивность животных. Однако гомоферментативные микробные препараты часто оказывают отрицательное действие на аэробную стабильность вследствие консервирования субстратов, которые легкодоступны вызывающим порчу организмам.
Концепция гетероферментативных молочнокислых бактерий в микробном препарате стала популярной в последнее время. Идея заключается в том, что повышенные уровни недиссоциированных летучих жирных кислот, таких как уксусная, могут ингибировать другие микробы, которые стимулируют аэробную порчу.
Гетероферментативные бактерии производят молочную кислоту, этанол, уксусную кислоту и диоксид углерода в соотношениях, зависящих от природы субстрата. Образующиеся ацетаты могут подавлять развитие пагубных организмов в силосе. Кроме того, гетероферментативные бактерии, такие как Lactobacillus buchneri, способны метаболизировать молочную кислоту до ацетата и 1,2-пропандиола в анаэробных условиях. При таких механизмах одна шестая часть углерода теряется на образование диоксида углерода в ходе брожения глюкозы и одна третья часть углерода молочной кислоты теряется в ходе анаэробного преобразования в уксусную кислоту. Однако малая потеря 1% или вплоть до 2% сухого вещества незначительна по сравнению с гораздо более значительными потерями вследствие портящего действия аэробных микроорганизмов. Проблемы, связанные с гетероферментативными молочнокислыми бактериями, включают, но не ограничиваются ими, их действие на продуктивность животных, а также выявление подходящих штаммов, пригодных для процесса. Различные штаммы даже одних и тех же видов не обладают одинаковыми свойствами и отличаются в отношении их ферментативных характеристик.
Nilson (Arch Microbiol. (1956) 24: 396-411) обнаружили, что преобладающими LAB в силосе являются Streptococci и Lactobacilli, причем наиболее распространенным видом является L. plantarum. В работе Gibson et al. (J. Gen. Micro. (1958) 24:60-70) сообщается, что L. plantarum и L. acidophilus являлись доминирующими компонентами гомоферментативной флоры. Beck {Landwirtschaftliche Forschung. (1972) 27:55-63) показали, что даже в травяном силосе, где над популяцией эпифитов доминировали гетероферментативные LAB, на четвертый день процесса силосования 85% присутствующих организмов были гомоферментативными. Langston et al. (USDA Technical Bulletin № 1187 (1958)) показали, что 69% изолятов из зрелого силоса были гомоферментативными. Иногда в зрелом силосе отмечается сдвиг в сторону гетероферментативных LAB, что обусловлено их способностью переносить низкие pH и высокие концентрации ацетатов. Szigeti (Acta Almentaria. (1979) 8:25-40) обнаружил, что флора LAB при особо низких pH состояла в основном из L. plantarum и L. brevis. Grazia и Suzzi (J. Appl. Bacteriol. (1984) 56:373-379) показали, что у гетероферментативных LAB наблюдалась сильная чувствительность к pH 3,6.
Обзор способов силосования и применения микробных препаратов можно найти у Weinberg, ZNG. и Muck, R.E. (1996) FMS Microbiology Rev. 19:53-68, Wilkinson, J.M. и Davies, D.R. (2012) Grass and Forage Science 68:1-19, и Muck, Richard E. (2013) Agricultural and Food Science 22:3-15, раскрытие которых включено в данный документ ссылкой.
В вариантах осуществления настоящего изобретения подавление роста организмов, являющихся причиной порчи, выполняют путем обработки силоса организмами видов L. buchneri или L. brevis, особенно штаммом(ми) LN7125, LB5328 или LB7123, или композициями, содержащими LN7125, LB5328 или LB7123 или родственные им организмы, а также путем обработки эффективными мутантами или эквивалентами LN7125, LB5328 или LB7123 и содержащими их композициями.
Вариант осуществления данного изобретения представляет собой микробный препарат, содержащий виды Lactobacillus, которые изменят брожение и повысят стабильность силоса, чтобы позволить подвергать его аэробному воздействию на более ранних сроках после начала силосования, чем в существующей практике. В настоящее время в этой индустрии согласно стандартной практике рекомендуется для обработанного микробными препаратами силоса поддерживать анаэробные условия в течение не
- 4 034933 менее 30 дней, а предпочтительно 60 дней, чтобы получить максимальную выгоду от микробного препарата с точки зрения сохранения и повышения аэробной стабильности заложенного на хранение зеленого корма. Часто производители не имеют возможности держать свой силос в закрытом состоянии в течение рекомендованного периода(ов) времени из-за индивидуальных ограничений доступного для корма силоса. Вариантом осуществления данного изобретения является обеспечение продолжительности анаэробного брожения в герметично закрытой силосной конструкции, которое составляет менее 30 дней, с использованием штамма Lactobacillus в комбинации с кисломолочными бактериями (LAB) или без них. Герметично закрытая силосная конструкция может быть предназначена для проведения анаэробного брожения в течение не менее 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 или 7 дней.
Вариантом осуществления данного изобретения является биологически чистая культура штамма LN7125 L. buchneri, имеющего патентное депонирование № NRRL В-50733, или штамма LB5328 L. brevis, имеющего патентное депонирование № NRRL B-50731, или штамма LB7123 L. brevis, имеющего патентное депонирование № NRRL В-50732.
Способом вариантов осуществления является способ обработки животного корма или силоса, включающий внесение микробного препарата для силоса, включающий LN7125, LB5328 или LB7123, в корм или силос в количестве от примерно 1х103 до 1х106 КОЕ/г корма или силоса. Дополнительно другой способ вариантов осуществления представляет собой способ улучшения продуктивности животных, включающий скармливание животному животного корма, в который внесен микробный препарат, как описано в других вариантах осуществления.
Дополнительный вариант осуществления представляет собой микробный препарат для силоса, содержащий жизнеспособные культуры гомоферментативных молочнокислых бактерий и гетероферментативных молочнокислых бактерий, см. пример в патенте США № 6403084. Дополнительные варианты осуществления включают животный корм или силос, содержащий этот микробный препарат для силоса.
Варианты осуществления данного изобретения включают способы обработки силоса путем подавления роста на нем вызывающих порчу организмов, выбранных из дрожжей, плесени и спорообразующих бактерий, которые включают внесение в силос подавляющего рост вызывающих порчу организмов количества композиций вариантов осуществления. Силос, предназначенный для обработки способами данных вариантов осуществления, может быть изготовлен из растений различной природы, включая, но не ограничиваясь этим, травы, кукурузу, люцерну, пшеницу, плевел, зерновые, семена масличных культур, сорго, подсолнечник и ячмень. Композиции вариантов осуществления можно также вносить в силос в ходе хранения. Силос может быть заложен различными путями, включая в виде тюка, мешка, бункера, сборной силосной башни панельной конструкции или штабеля. Способы обработки силоса с использованием композиций данных вариантов осуществления включают внесение в силос сохраняющего качество силоса количества препаратов LN7125, LB5328 или LB7123.
Варианты осуществления данного изобретения дополнительно включают силос, содержащий сохраняющее качество силоса количество LN7125, LB5328 или LB7123 или сохраняющее качество силоса количество его мутанта.
Силос, включенный в варианты осуществления, обеспечивает способы обработки силоса для животного корма с микробным препаратом для силоса по настоящему изобретению, а также обработанный животный корм или сам силос. Часто животный корм или силос будет представлять собой силос из целого растения кукурузы (WPCS) или кукурузы с высоким содержанием влаги (НМС). Варианты осуществления также предоставляют способы улучшения продуктивности животных путем скармливания силоса с внесенным микробным препаратом. Контейнеры, содержащие микробный препарат для силоса по настоящему изобретению, и носитель также включены.
Вариант осуществления изобретения представляет собой способ повышения аэробной стабильности силоса при улучшении усвояемости растительных волокон животными путем скармливания эффективного количества силоса, в который внесен микробный препарат с LN7125, LB5328 или LB7123 в комбинации с производящим ферулат эстеразы бактериальным штаммом или его функциональным мутантом и подходящим носителем. Способы применения таких производящих ферулат эстеразы штаммов раскрыты в патенте США 7799551, включенном в данный документ ссылкой. Штамм ферулата эстеразы может представлять собой, например, штамм Lactobacillus или его функциональный мутант, такой как штамм Lactobacillus, выбранный из группы, состоящей из L. buchneri, L. plantarum, L. brevis, L. reuteri, L. alimentarius, L. crispatus и L. paralimentarius. Такие штаммы могут включать, например, выбранные из группы, состоящей из L. buchneri, штамм LN4017 (патентное депонирование № PTA-6138), L. plantarum, штамм LP678 (патентное депонирование № PTA-6134), L. plantarum, штамм LP3710 (патентное депонирование № PTA-6136), L. plantarum, штамм LP3779 (патентное депонирование № PTA-6137), L. plantarum, штамм LP7109 (патентное депонирование № PTA-6139), L. brevis, штамм LB1154 (патентное депонирование № NRRL B-30865), L. buchneri, штамм LN4888 (патентное депонирование № NRRL B-30866), L. reuteri, штамм LR4933 (патентное депонирование № NRRL B-30867), L. crispatus LI2127 (патентное депонирование № NRRL B-30868), L. crispatus, штамм LI2350 (патентное депонирование № NRRL B-30869), L. crispatus, штамм LI2366 (патентное депонирование № NRRL B-30870), неизвестный вид Lactobacillus, штамм
- 5 034933
UL3050 (патентное депонирование № NRRL B-30871), и их смеси (см. патент США 7799551). Такая композиция может содержать от примерно 101 до примерно 1010 жизнеспособных организмов бактериальных штаммов или их функциональных мутантов на грамм засилосованного растительного материала. Необязательно они могут содержать от примерно 102 до примерно 107 жизнеспособных организмов бактериальных штаммов или их функциональных мутантов, например от примерно 103 до примерно 106 жизнеспособных организмов бактериальных штаммов или их функциональных мутантов на грамм засилосованного растительного материала.
Композицию, скармливаемую животным, можно обрабатывать эффективным каталитическим количеством бактериального штамма или его функционального мутанта, производящего ферулат эстеразы, как легко может определить специалист в области животноводства. Животные, для которых полезны варианты осуществления настоящего изобретения, представляют собой млекопитающих и птиц, включая, но не ограничиваясь ими, жвачных, лошадей, крупный рогатый скот, свиней, коз, овец и виды птиц, например домашнюю птицу.
Используемые в вариантах осуществления данного изобретения композиции могут быть как жидкой форме, так и в твердой форме, и могут включать дополнительные бактериальные штаммы. В твердых формах для обработки композиция может включать смешанную бактериальную культуру, содержащую LN7125, LB5328 или LB7123 вместе с носителем.
Природа носителя может быть водного или неводного жидкого или твердого происхождения. В твердых формах композиция может включать твердые носители, твердые разбавители или физические наполнители. Примеры таких твердых носителей, твердых разбавителей или физических наполнителей включают мальтодекстрин, крахмалы, карбонат кальция, целлюлозу, молочную сыворотку, перемолотые сердцевины кукурузных початков и диоксид кремния. Жидкие носители могут представлять собой растворы без ограничения в виде эмульгируемых концентратов, суспензии, эмульсии, в том числе микроэмульсии и/или суспоэмульсии, и т.п., которые необязательно можно сгущать в гели. Короче, носитель может быть органическим или неорганическим физическим наполнителем. Твердую композицию можно наносить непосредственно на зеленый корм в виде легкого напыления порошка, или, если он расходуется в жидком носителе, то им можно с успехом опрыскивать зеленый корм.
Специалистам в данной области известны другие подходящие носители и дозируемые формы, или они смогут установить их, используя обычное экспериментирование. Кроме того, введение различных композиций можно выполнять, используя стандартные методики, известные специалистам в данной области.
Другим вариантом осуществления изобретения является комбинация LN7125, LB5328 или LB7123 с другими определенными видами бактерий в соответствующем соотношении, чтобы обеспечить как усиленное брожение, так и улучшить стабилизацию силоса или животного корма, а также улучшенную аэробную стабильность при воздействии воздуха на силос или корм при аэробном воздействии на более ранних сроках. Микробный препарат для силоса может представлять собой выделенную и очищенную комбинацию не менее одного жизнеспособного штамма гомоферментативных молочнокислых бактерий Lactobacillus plantarum в сочетании с гетероферментативными бактериями LN7125, LB5328 или LB7123. В некоторых вариантах осуществления микробный препарат для силоса будет включать не менее 2-10 штаммов гомоферментативных и/или гетероферментативных бактерий. Иллюстративные штаммы L. plantarum включают не менее одного из LP286, LP287, LP329, LP346, LP347 или их функциональных мутантов (см., например, патент США № 6403084). Иллюстративные штаммы L. Buchnerir, которые можно комбинировать с LN7125, LB5328 или LB7123, включают LN1391, LN4637, LN4750 или их функциональные мутанты. Микробный препарат для силоса необязательно содержит не менее одного жизнеспособного штамма Enterococcus faecium, таких как, но не ограничиваясь ими, штаммы EF301, EF202 или их функциональные мутанты. Число жизнеспособных гомоферментативных бактерий и гетероферментативных бактерий в микробном препарате присутствует в соотношении от примерно 1:5 до примерно 1:15. В некоторых вариантах осуществления соотношение составляет примерно: от 1:6 до 1:14, от 1:7 до 1:13, от 1:8 до 1:12, от 1:9 до 1:11 или 1:10.
Способы применения смешанных культур для улучшения либо брожения, либо аэробной стабильности силоса раскрыты в патенте США № 6403084, который включен в данный документ ссылкой.
Вариантом осуществления данного изобретения является композиция для применения в качестве микробного препарата для силоса, содержащая LN7125, LB5328 или LB7123 или их функциональный мутант и подходящий носитель. В варианте осуществления данного изобретения композиция содержит от примерно 101 до примерно 1010 жизнеспособных организмов бактериального штамма или его функционального мутанта на грамм засилосованного растительного материала. В дополнительных вариантах осуществления данного изобретения композиция содержит от примерно 102 до примерно 107 жизнеспособных организмов бактериального штамма или его функционального мутанта на грамм засилосованного растительного материала. В дополнительных вариантах осуществления композиция содержит от примерно 103 до примерно 106 жизнеспособных организмов бактериального штамма или его функционального мутанта на грамм засилосованного растительного материала.
Материалами, пригодными для силосования или хранения согласно способам данного изобретения,
- 6 034933 являются любые материалы, подверженные аэробной порче. Весовая доля сухого вещества в материале обычно составляет не менее 25%. Такие материалы включают, но не ограничиваются этим перечнем, плевел или обычную траву, кукурузу, включая кукурузу с высоким содержанием влаги, целое растение кукурузы, люцерну, пшеницу, бобовые, злаки, семечки масличных культур, сорго, подсолнечник, ячмень или другие злаковые сельскохозяйственные культуры. Ведение хозяйства при хранении силоса включает, но не ограничивается этим, в тюках (эта форма особенно подвержена аэробной порче), мешки с ограниченным притоком кислорода, бункеры, вертикальные сборные силосные башни панельной конструкции, силосные башни с ограниченным притоком кислорода, мешки, штабели или любые другие формы хранения, которые могут быть подвержены аэробной порче.
Активность, представляющую интерес в связи с данным изобретением, можно обнаружить в других штаммах L. buchneri, или других видах Lactobacillus, например L. kefir, L. parakefir и L. parabuchneri, L. brevis, L. sake, L. curvatus, других видах гомоферментативных кисломолочных бактерий и даже, возможно, что и в других родах. Это можно установить обычным экспериментированием на основе предоставляемой в данном документе информации.
Следует понимать, что в данном контексте термин штамм или штамм(ы) включает любой мутант или производное различных бактериальных штаммов, раскрываемых в данном документе, например штамм LN7125 L. buchneri (патентное депонирование № NRRL В-50733), или штамм LB5328 L. brevis (патентное депонирование № NRRL B-50731), или штамм LB7123 L. brevis (патентное депонирование № NRRL B-50732), которые сохраняют функциональную активность в отношении улучшения аэробной стабильности зеленых кормов, как описано и определено в способах и примерах, раскрываемых в данном документе.
Микроорганизмы LN7125, LB5328 или LB7123 вариантов осуществления очищали и выделяли из кукурузы или фекалий откармливаемых кукурузой овец. После многих экспериментов путем испытаний была открыта коллекция изолятов.
После очистки и выделения определенного штамма были проведены таксономические исследования с целью идентификации штамма. Он был идентифицирован как L. buchneri or L. brevis и опытным образцам были присвоены номера LN7125, LB5328 или LB7123. Согласно изобретению этот(и) штамм(ы), композиции, содержащие этот(и) штамм(ы) или факторы, производимые этим(и) штаммом(ми), используются для обработки материалов зеленого корма.
Варианты осуществления настоящего изобретения дополнительно определены в следующих примерах. Следует понимать, что эти примеры, несмотря на то, что они показывают определенные варианты осуществления данного изобретения, приведены только для наглядности. Из вышеприведенного описания и данных примеров специалист в данной области может установить необходимые характеристики этого изобретения и без отступления от его сути и объема может выполнить различные изменения и модификации вариантов осуществления данного изобретения для адаптации его к различным способам применения и условиям. Таким образом, различные модификации вариантов осуществления данного изобретения в дополнение к представленным и описанным в данном документе будут очевидны для специалистов в данной области из вышеизложенного описания. Такие модификации также, как предполагается, находятся в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
Раскрытие каждой ссылки, изложенной в данном документе, включено в данный документ посредством ссылки во всей полноте.
Депонирование
Штамм LN7125 Lactobacillus buchneri, штамм LB5328 Lactobacillus brevis и штамм LB7123 Lactobacillus brevis были депонированы 14 марта 2012г. в коллекции культур the Agricultural Research Service (ARS), размещенной в Microbial Genomics and Bioprocessing Research Unit Национального центра сельскохозяйственного использования исследований (National Center for Agricultural Utilization Research NCAUR) в соответствии с условиями Будапештского договора. Штамму(ам) был присвоено патентное депонирование № NRRL В-50733, патентное депонирование № NRRL B-50731 и патентное депонирование № NRRL B-50732 соответственно. Адрес NCAUR: 1815 N. University Street, Peoria, IL, 61604. Это(и) депонирование(ия) безоговорочно и без ограничения или других условий будет(ут) общедоступно(ы) после выдачи патента. Однако следует понимать, что доступность депонирования не является разрешением для осуществления заявленного изобретения на практике с ограничением патентных прав, предоставляемых государством.
Заявитель(и) будет(ут) действовать в соответствии со всеми требованиями 1.801-1.809 статьи 37 Кодекса федеральных правил (C.F.R.), в том числе предоставлять отчет о жизнеспособности образца при депонировании. Каждое депонирование будет сохранено без ограничений в депозитарии NRRL, который является общедоступным депозитарием, сроком на 30 лет, или 5 лет после самого последнего запроса, или в течение имеющего законную силу времени действия патента в зависимости от того, какой срок является более длинным, и будет замещено, если когда-либо в течение данного периода оно станет нежизнеспособным. Эти депонирования безоговорочно и без ограничения или условий будут общедоступны после выдачи патента. Однако следует понимать, что доступность депонирования не является разрешением для осуществления заявленного изобретения на практике с ограничением патентных прав, пре
- 7 034933 доставляемых государственным регулированием.
Все публикации и заявки на патенты, упомянутые в описании, ориентированы на уровень специалиста в области техники, к которой принадлежит настоящее раскрытие. Все публикации и заявки на патент включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация или заявка на патент конкретно и отдельно была включена посредством ссылки.
Хотя в целях ясности понимания вышеприведенное изобретение было довольно подробно описано посредством иллюстрации и примера, очевидно, что на практике можно осуществлять определенные изменения и модификации в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
Примеры
Пример 1. Быстродействующие штаммы Lactobacillus для улучшения аэробной стабильности кукурузного силоса.
Были выполнены исследования с целью разработки микробных препаратов, содержащих виды Lactobacillus, которые могут улучшать брожение и стабилизацию силоса из целого растения кукурузы, чтобы позволить раннее раскрывание (аэробное воздействие) менее чем через 30 дней после начала силосования.
Выбор штамма.
Гетероферментативные молочнокислые бактериальные культуры (252 изолятов), отобранные из коллекции микробных культур Pioneer Hi-Bred, выращивали в бульоне De Man Rogosa Sharpe (бульон MRS; Difco™ Lactobacilli MRS; Becton Dickinson and Company, Sparks, MD 21152 USA), приготовленном согласно инструкции производителя, в течение периода от 24 до 48 ч. Аликвоту клеточной суспензии переносили в бульон из экстракта из зеленого корма на основе целого растения кукурузы (смесь 1:10 сухого перемолотого кукурузного корма в воде, обработанная в автоклаве, стерилизованная фильтрованием через 0,2 микронный фильтр, затем добавляли 0,5% глюкозы) и выращивали 40 ч при 37°С.
После первоначального скрининга было отобрано пять изолятов для исследования в полевых условиях в 2011 г., чтобы установить их способность к усилению аэробной стабильности силосованного зеленого корма из целого растения кукурузы. Штаммы обнаружили и идентифицировали из образцов кукурузы или из фекалий откармливаемых кукурузой овец, взятых в Соединенных Штатах. В 2012 г. эксперимент с тремя из этих изолятов повторяли на целом растении кукурузы и на комбинации с коммерческими гомоферментативными штаммами LP286 и LP329.
Характеристики исследуемых штаммов:______________________________________
| Штамм | ID вида по 16S рДНК | Источник | Образование газа в MRS |
| LB7123 | Lactobacillus brevis | Фекалии овец, откормленных на WPCS, Полк Сити, Айова, 2008г. | газ положителен |
| LB4616 | Lactobacillus brevis | НМС, Центр Далласа, 1997г. | газ положителен |
| LB5328 | Lactobacillus brevis | WPCS, Айова, 1995г. | газ положителен |
| LB31 | Lactobacillus brevis | WPCS, Керси, Колорадо, 1993г. | газ положителен |
| LN7125 | Lactobacillus buchneri | WPCS, Полк Сити, Айова, 2008г. | газ положителен |
Полевые испытания.
Кукуруза урожая 2011г. Три гибрида (Р1162, 33М16, DeKalb 61669vt3) зеленого корма из целого растения кукурузы выращивали и убирали отдельно 1 сентября 2011г. в Центре питания домашнего скота в Шелдале, Айова, с содержанием сухого вещества 33-37%.
Кукуруза урожая 2012г. Три гибрида (P90115XR, P1162XR, P1395XR) зеленого корма из целого растения кукурузы выращивали и убирали отдельно 21 сентября 2011г. в Центре питания домашнего скота в Шелдале, Айова, с содержанием сухого вещества 33-37%.
- 8 034933
Обработки кукурузного силоса 2011г.
Внесение микробного препарата.
В 2011г. индивидуальные экспериментальные штаммы для испытаний выращивали и поставляли в виде свежевыращенной культуры. В 2012г. индивидуальные экспериментальные штаммы для испытаний выращивали, лиофилизировали на месте и поставляли в виде сухой порошкообразной культуры. Коммерческие и экспериментальные лиофилизированные продукты суспендировали в воде, затем все обработки приводили к стандартной концентрации, равной 4,54х107. Суспензии для обработки применяли, используя 10 см3 шприц с расходом 1,0 мл/фунт зеленого корма. Внесенная доза для всех обработок составляла 1 х 105 КОЕ/г зеленого корма.
Силос.
Силосные хранилища из PVC заполняли 160 кг СВ/м3 зеленого корма из целого растения кукурузы и насыщали воздухом 24 ч, как описано ниже в зависимости от дней раскрывания.
| День раскрывания хранилища силоса | 24 ч насыщения воздухом День |
| 7 | 0 |
| 14 | 7 |
| 28 | 14 |
| 60 | 45 |
Аэробная стабильность.
Способ по Honig (Proc. Of the Eurobac. Conf., P. Lingvall и S. Lindgren (ed.) (12-16 Август 1986) Swed. Univ. of Agric. Sci. Grass and Forage Report No. 3-1990. Pp. 76-81. Uppsala, Sweden.) использовали для измерения аэробной стабильности. Аэробные потери сухого вещества (ПСВ) оценивали по повышению температуры после воздействия воздуха, как описано у Honig.
Результаты и обсуждение.
Аэробная стабильность.
Обработки гетероферментативными лактобактериями снижают потери сухого вещества и увеличивают время до разогрева. Наблюдали различия между штаммами, возникающие с течением времени.
2011 г. Кукурузный силос (табл. 1).
Раскрывание в день 7 и 14 приводит к статистически значимым различиям между обработками с использованием LB5328, LB7123 и LN7125 и необработанным препаратом контрольным силосом, которые продержались до дня 60, когда наблюдались многочисленные эффекты.
Обработки с использованием LB5328, LB7123 и LN7125 также приводили к статистически значимому улучшению по сравнению с имеющимися коммерческими микробными препаратами (11А44, 11С33 и 11CFT) при оценке их действия в ходе ранних раскрываний. Эти три штамма демонстрируют
- 9 034933 значительное улучшение по сравнению с другими отобранными гетероферментативными штаммами (LB31 и LB4616).
Два Lactobacillus brevis (LB7123 & LB5328) и один Lactobacillus buchneri (LN7125), отобранные в этих испытаниях, эффективно улучшали аэробную стабильность силоса из целого растения кукурузы, если его раскрывали до наступления 30 дня (на 7 и 14 день). Были отмечены очевидные отличия от контрольных и менее эффективных штаммов. Три штамма включили в последующие испытания на силосе из целого растения кукурузы 2012г. при индивидуальном применении и применении в комбинации с существующими коммерческими гомоферментативными штаммами LP286 и LP329.
2012 г. Кукурузный силос (табл. 2).
Раскрывание на 7 и 14 день обработк приводило к биологическим и статистически значимым различиям между одним штаммом LB7123 и контрольным силосом без микробного препарата. Различия на 28 и 60 день были лучше численно, но не статистически, для LB7123 по сравнению с контролем.
Наблюдали продолжающуюся тенденцию в случае комбинированных обработок с использованием LB5328+, LB7123+ и LN7125+ с положительным ответом на 7 и 14 день. Открывание на 7 день привело к численному улучшению в отношении аэробных ПСВ по сравнению с контролем, в то время как комбинированные обработки были значительно лучше, чем контрольные на 14 день. Все три комбинированные обработки устойчиво демонстрировали улучшение (на 30-40%) по сравнению с контрольными. Сходное снижение аэробных потерь сухого вещества наблюдали с 11А44 и 11CFT.
Активного улучшения ПСВ на 7, 14 или 28 день при использовании коммерческих продуктов отмечено не было, однако 11А44 и 11CFT оказали положительное действие на аэробную стабильность на 60 день, как наблюдалось в предыдущих исследовательских испытаниях.
2011 и 2012 гг. Комбинированные исследования на кукурузном силосе (табл. 3).
В общем случае эффективность обработок одним штаммом LB5328, LB7123 и LN7125 в течение двух лет испытаний на силосе из целого растения кукурузы (6 исследований, 24 силос/tmt (tmt - время до достижения максимальной температуры)) была устойчивой в отношении снижения аэробной потери сухого вещества по сравнению с контрольным силосом без микробного препарата и существующими коммерческими продуктами при открываниях до наступления 28 дня.
Обработки LB7123 и LN7125 были статистически лучше контрольных и коммерческих обработок на 7 и 14 день. LN7123, LN7125 и LN7125 также продемонстрировали статистически значимые различия от контрольных к 14 дню. На 28 и 60 дни эти три одиночных штамма были численно лучше контрольных и продемонстрировали аэробную стабильность, эквивалентную коммерческим продуктам 11А44, 11C33 и 11CFT.
Вывод.
Благодаря снижению аэробных потерь сухого вещества, обеспечиваемого этими штаммами и комбинациями с гомоферментативными бактериями, наблюдали устойчивые повторяющиеся улучшения в отношении потерь сухого вещества при ранних раскрываниях засилосованных зеленых кормов из целого растения, предоставляя экономическое преимущество производителю при использовании специально отобранных микробных препаратов L. buchneri или L. brevis.
Таблица 1. Влияние Lactobacillus buchneri и Lactobacillus brevis на потери сухого вещества под воздействием воздуха в силосе из целого растения кукурузы, силосованного в течение различных периодов времени
| 2011 | ПСВ - дни после начала силосования | |||
| 7 | 14 | 28 | 60 | |
| Контроль | 3,3 6а | 5, 73а | 4,93а | 4,37аЬ |
| 1132 | 2,74а | 5, 22а | 2,91Ьс | 5, 77а |
| 11А44 | 3,71а | 5, 76а | 3, 19аЬс | 5, 39аЬ |
| 11СЗЗ | 2,99а | 5, 39а | 4,2 6аЬ | 4,57аЬ |
| 11CFT | 2,2 9аЬ | 4,7 5аЬ | 3, 14аЬс | 4,39аЬ |
| LB31 | 2,0 9аЬс | 5, 41а | 3,52аЬс | 5, 09аЬ |
| LB4616 | 2 12аЬс | 4 41аЬс | 3, 17аЬс | 5, 04аЬ |
| LB5328 | 1,95аЬс | 3,23Ьс | 2,40е | 3, 8 8аЬ |
| LB7123 | 0, 94Ьс | 3,32Ьс | 2, 67Ьс | 3, 95ь |
| LN7125 | 0,51Ьс | 2,99е | 2,14е | 3, 95ь |
- 10 034933
Таблица 2. Влияние Lactobacillus buchneri, Lactobacillus brevis и комбинаций с гомоферментативными бактериями на потери сухого вещества под воздействием воздуха в силосе из целого растения кукурузы, силосованного в течение различных периодов времени
| 2012 | ПСВ - дни после начала силосования | |||
| 7 | 14 | 28 | 60 | |
| Контроль | 2,91аЬ | 4, 66а | 2, 90ь | 2, 95а |
| 1132 | 2,94аЬ | 4, 17аЬ | 2, 97b | 2,35аЬ |
| 11А44 | 3, 60 | 3, 60abcd | 2, 95ь | 1, 03ь |
| 11СЗЗ | 2,99аЬ | 3, 8 9аЬс | 4, 0 9аЬ | 2,70а |
| 11CFT | 3,4 6а | 4,45а | 4,72а | 1,55аЬ |
| LB5328 | 2,91аЬ | 3 37 abed | 3, 8 9аЬ | 2,3 9аЬ |
| LB7123 | 0, 95е | 2,54de | 2,77ь | 2,52а |
| LN7125 | 2,2 0ь | 3 3gabcd | 3, 32аЬ | 2,2 8аЬ |
| LB532 8+LP2 8 6+LP32 9 | 2,7 6аЬ | 2, 8 0bcde | 2,82ь | 2, 02аЬ |
| LB7123+LP2 8 6+LP32 9 | 2,2 0ь | 1, 85е | 3, 31аЬ | 1, 8 6аЬ |
| LN7125+LP2 8 6+LP32 9 | 2,03Ьс | 2,7 0cde | 2,50ь | 1, 7 4аЬ |
Таблица 3. Влияние Lactobacillus buchneri и Lactobacillus brevis на потери сухого вещества под воздействием воздуха в силосе из целого растения кукурузы, силосованного в течение различных периодов времени
| Объединенные 2011 и 2012 гг. | ПСВ - | дни после начала силосования | ||
| 7 | 14 | 28 | 60 | |
| Контроль | 3, 10аЬ | 5, 02а | 3,7 7аЬ | 3, 66а |
| 11А44 | 3,7 6а | 4,72а | 2,98аЬ | 3,31а |
| 11СЗЗ | 2,99аЬ | 4, 67а | 4, 17а | 3, 63а |
| 11CFT | 2,87аЬ | 4 4^аЬ | 3,77аЬ | 3, 03а |
| LB5328 | 2,43ь | 3,5 6Ьс | 3, 00аЬ | 3, 66а |
| LB7123 | 0, 94е | 2,82е | 2,72ь | 3,20а |
| LN7125 | 1,35е | 3, 08е | 2, 64ь | 3,33а |
Пример 2. Быстродействующие штаммы Lactobacillus для улучшения аэробной стабильности травяного силоса.
Выбор штамма.
Гетероферментативные молочнокислые бактериальные культуры (252 изолятов), отобранные из коллекции микробных культур Pioneer Hi-Bred's, выращивали в бульоне De Man Rogosa Sharpe (бульон MRS; Difco™ Lactobacilli MRS; Becton Dickinson and Company, Sparks, MD 21152 USA), приготовленном согласно инструкции производителя, в течение периода от 24 до 48 ч.
Аликвоту клеточной суспензии переносили в бульон из экстракта из зеленого корма на основе целого растения кукурузы (смесь 1:10 сухого перемолотого кукурузного корма в воде, обработанная в автоклаве, стерилизованная фильтрованием через 0,2 микронный фильтр, затем добавляли 0,5% глюкозы) и выращивали 40 ч при 37°С.
Штаммы обнаружили и идентифицировали из образцов кукурузы или из фекалий откармливаемых кукурузой овец, взятых в Соединенных Штатах. В 2012г. на европейском плевеле были испытаны три изолята, а в 2013г. были испытаны только два изолята в виде одного штамма и в комбинации с существующими коммерческими гомоферментативными штаммами LP286 и LP329.
- 11 034933
Характеристики экспериментальных штаммов для испытаний.
| Штамм | ID вида по 16S РДНК | Источник | Образование газа в MRS |
| LB7123 | Lactobacillus brevis | Фекалии овец, откормленных на WPCS, Полк Сити, Айова, 2008г. | газ положителен |
| LB5328 | Lactobacillus brevis | WPCS, Айова, 1995г. | газ положителен |
| LN7125 | Lactobacillus buchneri | WPCS, Полк Сити, Айова, 2008г. | газ положителен |
Полевые испытания:
Травы урожая 2012г.. Европейский плевел, собранный в районе Букстехуде, Германия, 22, 23 и 24 мая 2012 г. и имеющий содержание сухого вещества 33-49%.
Травы урожая 2013 г.. Европейский плевел, собранный в районе Букстехуде, Германия, 3, 4 и 6 июня 2013г. и имеющий содержание сухого вещества 36-46%.
Обработки силоса из европейского плевела 2012г.
Внесение микробного препарата.
В 2012 и 2013гг. индивидуальные экспериментальные штаммы для испытаний выращивали, лиофилизировали на месте и поставляли в виде сухой порошкообразной культуры. Коммерческие и экспериментальные лиофилизированные продукты суспендировали в воде, затем все обработки приводили к стандартной концентрации, равной 4,54х107. Суспензии для обработки применяли, используя 10 см3 шприц с расходом 1,0 мл/фунт зеленого корма. Внесенная доза для всех обработок составляла 1 х 105 КОЕ/г зеленого корма.
Силос.
Силосные хранилища из PVC заполняли 100 кг СВ/м3 травы и насыщали воздухом 24 ч, как описано ниже в зависимости от дней раскрывания.___________________________
| День раскрывания хранилища силоса | 24 ч насыщения воздухом День |
| 7 | 0 |
| 14 | 7 |
| 28 | 14 |
| 60 | 45 |
Аэробная стабильность.
- 12 034933
Способ по Honig (Proc. Of the Eurobac. Conf., P. Lingvall и S. Lindgren (ed.) (12-16 Август 1986) Swed. Univ. of Agric. Sci. Grass and Forage Report No. 3-1990. Pp. 76-81. Uppsala, Sweden.) использовали для измерения аэробной стабильности. Аэробные потери сухого вещества (ПСВ) оценивали по повышению температуры после воздействия воздуха, как описано у Honig.
Результаты и обсуждение.
Аэробная стабильность.
Обработки гетероферментативными лактобактериями снижали потери сухого вещества и увеличивали время до разогрева. Наблюдали различия между штаммами, возникающие с течением времени.
2012 г. Травяной силос (табл. 1).
Раскрывание травяного силоса на 14, 28 и 60 день приводило к различиям между обработками одним штаммом LB5328, LB7123 и LN7125 и контрольным силосом без микробного препарата. Эти три обработки на 7, 14 и 28 день были численно лучше, чем контрольные и коммерческие продукты.
Улучшения аэробного ПСВ на 7 или 14 день при использовании коммерческих продуктов отмечено не было, однако к 28 дню 11А44 и 11С22 показали значительное улучшение по сравнению с контролем. К 60 дню все обработки за исключением 11GFT показали значительное улучшение по сравнению с контролем.
2013 г. Травяной силос (табл. 2).
Обработки одним штаммом LN7125 и LB7123 привели к значительному снижению аэробной потери сухого вещества по сравнению с контрольной без микробного препарата по всем исследованным дням раскрывания. Комбинация штаммов LB7123 и L plantarum эффективно снижала аэробные потери сухого вещества по всем дням, в то время как комбинация L. plantarum с LN7125 не показала статистического различия с контролем без микробного препарата.
Коммерческие продукты незначительно влияли на аэробную потерю сухого вещества вплоть до 90 дня после начала силосования. Обработка 11А44 была более эффективной в отношении снижения потерь сухого вещества, чем комбинированный продукт 11G22.
Вывод.
Благодаря снижению аэробных потерь сухого вещества, обеспечиваемого этими штаммами и комбинациями с гомоферментативными бактериями, наблюдали устойчивые повторяющиеся улучшения в отношении потерь сухого вещества при ранних раскрываниях засилосованных травяных зеленых кормов, предоставляя экономическое преимущество производителю при использовании специально отобранных микробных препаратов L. buchneri или L. brevis.
Таблица 1. 2012 г. Влияние Lactobacillus buchneri и Lactobacillus brevis на потери сухого вещества под воздействием воздуха в силосе из европейских трав, силосованного в течение различных периодов времени
| 2012 г. - Е вропейские травы | ПСВ - дни после начала силосования | |||
| 7 | 14 | 28 | 60 | |
| Контроль | 2,7 6аЬ | 7, 10а | 6, 5а | 3,30а |
| 11А44 | 2,2 7аЬс | 4, ЗаЬ | 2,72ь | 1, 18ь |
| 11G22 | 3,25а | 6, 35а | 2,31ь | 0, 00ь |
| 11GFT | 2,5аЬ | 6, 05а | 6, 07а | 3,42а |
| LB5328 | 1, 68аЬс | 2,41ь | 2,72ь | 0,77ь |
| LB7123 | 0,29е | 2,47ь | 1,58ь | 0, 01ь |
| LN7125 | 0,7 5Ьс | 2,34ь | 2,02ь | 0, 11ь |
abc в пределах дня, значения с различными приставками различаются с р<0,05
Таблица 2. 2013 г. Влияние одних Lactobacillus buchneri и Lactobacillus brevis и в комбинации с Lactobacillus plantarum на потери сухого вещества под воздействием воздуха в силосе из европейских трав, силосованного в течение различных периодов времени ПСВ дни после начала
2013 г. - Европейские силосования
| травы | 7 | 14 | 28 | 90 |
| Контроль | 7,11а | 6, 4 6аЬ | 6, 08ab | 1,77а |
| 11А44 | 3,54аЬс | 2, 63bcd | 0,22е | 0, 10а |
- 13 034933
| 11GFT | 5, 7 7аЬ | 7,56а | 7,44а | 1, | 4 6- |
| LB7123 | 0, 00е | 0,23d | 0, 00е | 0, | 00’ |
| LN7125 | 1,2 5аЬ | 1,35cd | 0, 11е | 0, | 00’ |
| LN7125+LP286+LP329 | 6, 18а | 5, 2 4аЬс | 3,52Ьс | 0, | 17’ |
| LB7123+LP286+LP329 | 0,44е | 1, 08cd | 2,58Ьс | 0, | 4 6’ |
abcd в пределах дня, значения с различными приставками различаются с p<0,05
После демонстрации и описания принципов вариантов осуществления настоящего изобретения специалисту в данной области должно быть понятно, что варианты осуществления данного изобретения могут быть изменены в отношении из проведения и деталей, выходя за рамки указанных принципов. Так, данное изобретение включает все альтернативные варианты осуществления, которые охвачены, непосредственно или эквивалентно, объемом этой формулы изобретения.
Следует понимать, что различные предпочтительные варианты осуществления показаны и описаны выше для иллюстрирования различных возможных признаков изобретения и разнообразных путей комбинирования этих признаков. Кроме разнообразных путей комбинирования различных признаков приведенных выше вариантов осуществления, объемом данного изобретения также предусмотрены другие модификации.
Все публикации и опубликованные патентные документы, цитированные в данном описании, включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы было специально и отдельно указано, что каждая отдельная публикация или публикация патентного документа включена посредством ссылки.
Claims (12)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Композиция, используемая в качестве инокулянта для силосования, содержащая штамм LN7125 Lactobacillus buchneri № NRRL В-50733, или штамм LB5328 Lactobacillus brevis № NRRL B-50731, или штамм LB7123 Lactobacillus brevis № NRRL B50732, или их смеси и подходящий носитель.
- 2. Композиция по п.1, где композиция содержит:(a) от примерно 101 до примерно 1011 жизнеспособных микроорганизмов на грамм влажного веса силоса;(b) от примерно 102 до примерно 107 жизнеспособных микроорганизмов на грамм влажного веса силоса; или (c) от примерно 103 до примерно 106 жизнеспособных микроорганизмов на грамм влажного веса силоса.
- 3. Композиция по п. 1, где носитель представляет собой жидкость или твердое вещество.
- 4. Композиция по п.1, где носитель представляет собой:(a) карбонат кальция, или (b) крахмал, или (c) целлюлозу.
- 5. Штамм LN7125 Lactobacillus buchneri № NRRL В-50733, используемый в качестве инокулянта для силосования.
- 6. Штамм LB5328 Lactobacillus brevis, имеющий патентное депонирование № NRRL B-50731, используемый в качестве инокулянта для силосования.
- 7. Штамм LB7123 Lactobacillus brevis № NRRL B50732, используемый в качестве инокулянта для силосования.
- 8. Способ силосования растительного материала, включающий внесение в указанный материал композиции по п.1.
- 9. Способ по п.8, где растительный материал выбран из травы, кукурузы, люцерны, пшеницы, бобовых, семечек масличных культур или сорго.
- 10. Способ по п.8, который включает хранение растительного материала в течение:(a) двадцати девяти (29) дней;(b) двадцати восьми (28) дней;(c) четырнадцати (14) дней или (d) семи (7) дней после внесения композиции по п.1 в указанный растительный материал.
- 11. Способ по п.8, выбранный из:a) силосования в рулонах;b) силосования в тюках;c) силосования в бункере;d) силосования в штабеле;e) силосования в сборной силосной башне панельной конструкции иf) силосования в силосной башне.- 14 034933
- 12. Способ по п.8, который дополнительно включает внесение в растительный материал гомоферментативных молочнокислых бактерий.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14/200,231 US9822334B2 (en) | 2014-03-07 | 2014-03-07 | Rapid acting lactobacillus strains and their use to improve aerobic stability of silage |
| PCT/US2015/017516 WO2015134254A1 (en) | 2014-03-07 | 2015-02-25 | Rapid acting lactobacillus strains and their use to improve aerobic stability of silage |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201691804A1 EA201691804A1 (ru) | 2017-02-28 |
| EA034933B1 true EA034933B1 (ru) | 2020-04-08 |
Family
ID=52693041
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201691804A EA034933B1 (ru) | 2014-03-07 | 2015-02-25 | Быстродействующие штаммы lactobacillus и их применение для улучшения аэробной стабильности силоса |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9822334B2 (ru) |
| EP (1) | EP3137635B1 (ru) |
| CN (1) | CN106103697B (ru) |
| CA (1) | CA2938052C (ru) |
| EA (1) | EA034933B1 (ru) |
| ES (1) | ES2771857T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20200388T1 (ru) |
| PL (1) | PL3137635T3 (ru) |
| PT (1) | PT3137635T (ru) |
| RS (1) | RS59936B1 (ru) |
| WO (1) | WO2015134254A1 (ru) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105941872A (zh) * | 2016-05-16 | 2016-09-21 | 中国农业大学 | 一种布氏乳杆菌菌剂及其制备方法和应用 |
| CN109306327A (zh) * | 2017-07-27 | 2019-02-05 | 内蒙古蒙正牧康实业有限公司 | 玉米粒鲜贮发酵菌剂及鲜贮发酵工艺 |
| CN111601879A (zh) * | 2017-09-28 | 2020-08-28 | 生物技术中心有限公司 | 微生物菌株布氏乳杆菌biocc 203 dsm 32650和布氏乳杆菌biocc 228 dsm 32651及其用途 |
| CN108935973A (zh) * | 2018-08-03 | 2018-12-07 | 内蒙古农业大学 | 一种全株藜麦打捆裹包青贮方法 |
| CN110184256B (zh) * | 2019-05-09 | 2021-05-28 | 齐鲁工业大学 | 耐热耐碱阿魏酸酯酶的制备方法及其应用 |
| CN110973052A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-04-10 | 任锦帅 | 一种环保育肥猪养殖方法 |
| KR102272415B1 (ko) * | 2019-12-12 | 2021-07-02 | 대한민국 | 락토바실러스 브레비스 kcc-44 및 이를 포함하는 조성물 |
| EP4395560A1 (en) * | 2021-08-30 | 2024-07-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Silage inoculants for inhibition of acetobacter |
| WO2023122704A1 (en) * | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Kansas State University Research Foundation | Eco-friendly additives for hay and silage inoculants minimizing greenhouse gas emissions |
| CN114908011B (zh) * | 2022-05-09 | 2023-09-05 | 江苏省农业科学院 | 一种香肠乳杆菌及其应用 |
| CN114908018B (zh) * | 2022-05-31 | 2023-03-10 | 四川农业大学 | 一种短乳杆菌及其在青贮中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6326037B1 (en) * | 1996-02-15 | 2001-12-04 | Stichting Institut Voor | Microorganisms and their use in treating animal feed and silage |
| US6337068B1 (en) * | 1998-06-26 | 2002-01-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Lactorbacillus buchneri compositions for improving aerobic stability of silage |
Family Cites Families (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4842871A (en) | 1985-08-01 | 1989-06-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Method and inoculant for preserving agricultural products for animal feed |
| US4820531A (en) | 1987-10-22 | 1989-04-11 | Pioneer Hi-Bred International | Bacterial treatment to preserve hay quality by addition of microorganisms of the genus bacillus |
| US4863747A (en) | 1987-10-22 | 1989-09-05 | Pioneer Hi-Bred International | Bacterial treatment to preserve hay quality by addition of microorganisms of the genus Bacillus |
| US4981705A (en) | 1989-11-06 | 1991-01-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacterial treatment to preserve silage |
| US5026647A (en) | 1990-05-03 | 1991-06-25 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Selective medium for propionibacterium growth |
| GB9027303D0 (en) | 1990-12-17 | 1991-02-06 | Enzymatix Ltd | Enzyme formulation |
| US5292657A (en) | 1990-12-31 | 1994-03-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Process for preparing rotary disc fatty acid microspheres of microorganisms |
| GB9200891D0 (en) | 1992-01-16 | 1992-03-11 | Mann Stephen P | Formulation of microorganisms |
| US5725853A (en) | 1994-10-18 | 1998-03-10 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | 4 strain direct-fed microbial |
| GB9424661D0 (en) | 1994-12-07 | 1995-02-01 | Biotal Ltd | Enzymes, microorganisms and their use |
| US5747020A (en) | 1995-05-15 | 1998-05-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Bacterial treatment for silage |
| GB2301103B (en) | 1995-05-23 | 1999-12-22 | Danisco | An enzyme system comprising ferulic acid esterase |
| US6699514B2 (en) | 1996-02-15 | 2004-03-02 | Biotal Ltd. | Microorganisms and their use in animal feed |
| US6054148A (en) | 1997-12-19 | 2000-04-25 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Method and compositions for ensiling silage |
| US6602700B1 (en) | 1998-09-04 | 2003-08-05 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Phenolic acid esterases, coding sequences and methods |
| US6489158B1 (en) | 1999-07-09 | 2002-12-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Non-lactate-assimilating yeast for improving aerobic stability of silage |
| US6403084B1 (en) * | 2000-11-03 | 2002-06-11 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage |
| EP2088200B1 (en) | 2000-11-17 | 2012-01-04 | Danisco US Inc. | Manipulation of the phenolic acid content and digestibility of plant cell walls by targeted expression of genes encoding cell wall degrading enzymes |
| US6750051B2 (en) | 2001-04-10 | 2004-06-15 | University Of Kentucky Research Foundation | Compositions and methods for enhancing fiber digestion |
| WO2003043411A2 (en) | 2001-11-16 | 2003-05-30 | Genencor International, Inc. | Manipulation of the phenolic acid content and digestibility of plant cell walls |
| CA2523711A1 (en) * | 2003-04-28 | 2004-11-11 | Alpharma, Inc. | Method for formulation of microbial feed additives with feed |
| WO2006007395A1 (en) | 2004-06-16 | 2006-01-19 | Lallemand Animal Nutrition North America | Treatment of silage with lactobacillus diolivorans |
| NZ553503A (en) | 2004-09-01 | 2010-08-27 | Pioneer Hi Bred Int | Ferulate esterase producing Lactobacillus buchneri strain LN4017 and methods of using same in silage production |
| US7919683B2 (en) | 2006-11-13 | 2011-04-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Cloning and sequencing of the ferulate esterase gene from Lactobacillus buchneri LN4017 |
| US20080138462A1 (en) | 2006-12-11 | 2008-06-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Lactobacillus buchneri strain LN5665 and its use to improve aerobic stability of silage |
| US20080138461A1 (en) | 2006-12-11 | 2008-06-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Lactobacillus buchneri strain LN1297 and its use to improve aerobic stability of silage |
| US20090028993A1 (en) | 2006-12-11 | 2009-01-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Lactobacillus buchneri strain LN1326 and its use to improve aerobic stability of silage |
| US20080138463A1 (en) | 2006-12-11 | 2008-06-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Lactobacillus buchneri strain LN5689 and its use to improve aerobic stability of silage |
| US20090028992A1 (en) | 2006-12-11 | 2009-01-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Lactobacillus buchneri strain LN1286 and its use to improve aerobic stability of silage |
| US20090028991A1 (en) | 2006-12-11 | 2009-01-29 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Lactobacillus buchneri strain LN1284 and its use to improve aerobic stability of silage |
-
2014
- 2014-03-07 US US14/200,231 patent/US9822334B2/en active Active
-
2015
- 2015-02-25 PT PT157109836T patent/PT3137635T/pt unknown
- 2015-02-25 RS RS20200148A patent/RS59936B1/sr unknown
- 2015-02-25 WO PCT/US2015/017516 patent/WO2015134254A1/en active Application Filing
- 2015-02-25 EP EP15710983.6A patent/EP3137635B1/en active Active
- 2015-02-25 EA EA201691804A patent/EA034933B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-02-25 PL PL15710983T patent/PL3137635T3/pl unknown
- 2015-02-25 ES ES15710983T patent/ES2771857T3/es active Active
- 2015-02-25 CA CA2938052A patent/CA2938052C/en active Active
- 2015-02-25 CN CN201580012344.7A patent/CN106103697B/zh active Active
-
2017
- 2017-04-07 US US15/482,366 patent/US20170208836A1/en not_active Abandoned
-
2020
- 2020-03-10 HR HRP20200388TT patent/HRP20200388T1/hr unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6326037B1 (en) * | 1996-02-15 | 2001-12-04 | Stichting Institut Voor | Microorganisms and their use in treating animal feed and silage |
| US6337068B1 (en) * | 1998-06-26 | 2002-01-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Lactorbacillus buchneri compositions for improving aerobic stability of silage |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| WEINBERG Z. G., MUCK R. E.: "NEW TRENDS AND OPPOTUNITIES IN THE DEVELOPMENT AND USE OF INOCULANTS FOR SILAGE.", FEMS MICROBIOLOGY REVIEWS, ELSEVIER, AMSTERDAM; NL, vol. 19., no. 01., 1 January 1996 (1996-01-01), AMSTERDAM; NL, pages 53 - 68., XP000960647, ISSN: 0168-6445, DOI: 10.1016/0168-6445(96)00025-3 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RS59936B1 (sr) | 2020-03-31 |
| ES2771857T3 (es) | 2020-07-07 |
| CA2938052A1 (en) | 2015-09-11 |
| CA2938052C (en) | 2024-04-16 |
| US20170208836A1 (en) | 2017-07-27 |
| PT3137635T (pt) | 2020-01-21 |
| PL3137635T3 (pl) | 2020-06-01 |
| HRP20200388T1 (hr) | 2020-06-12 |
| US20150250207A1 (en) | 2015-09-10 |
| EP3137635A1 (en) | 2017-03-08 |
| US9822334B2 (en) | 2017-11-21 |
| CN106103697B (zh) | 2020-06-05 |
| EA201691804A1 (ru) | 2017-02-28 |
| WO2015134254A1 (en) | 2015-09-11 |
| CN106103697A (zh) | 2016-11-09 |
| EP3137635B1 (en) | 2019-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA034933B1 (ru) | Быстродействующие штаммы lactobacillus и их применение для улучшения аэробной стабильности силоса | |
| AU2002239449B2 (en) | Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage | |
| US20080138461A1 (en) | Lactobacillus buchneri strain LN1297 and its use to improve aerobic stability of silage | |
| US20080138462A1 (en) | Lactobacillus buchneri strain LN5665 and its use to improve aerobic stability of silage | |
| US20080138463A1 (en) | Lactobacillus buchneri strain LN5689 and its use to improve aerobic stability of silage | |
| US20090028991A1 (en) | Lactobacillus buchneri strain LN1284 and its use to improve aerobic stability of silage | |
| US20090028992A1 (en) | Lactobacillus buchneri strain LN1286 and its use to improve aerobic stability of silage | |
| US20090028993A1 (en) | Lactobacillus buchneri strain LN1326 and its use to improve aerobic stability of silage | |
| NZ586384A (en) | Ferulate esterase producing Lactobacillus buchneri strain LN4888 and methods of using same in silage production | |
| AU2002239449A1 (en) | Mixed cultures for improved fermentation and aerobic stability of silage | |
| US20230189846A1 (en) | Novel Silage Additive Compositions | |
| US9370199B2 (en) | Strain of Lactobacillus buchneri A, composition, a multi-component preparation for starch-rich plant preservation, their use and a method for plant preservation | |
| EP4395560A1 (en) | Silage inoculants for inhibition of acetobacter | |
| CN116849299A (zh) | 布氏乳杆菌的表型和基因型变体 | |
| Adesoji et al. | Physicochemical Screening of Lactobatillus plantarum and its Effects on the Fermentation of Panicum maximum Grass for Silage Production | |
| Solórzano et al. | Characterization of triticale silage inoculated with homolactic bacteria and exposed to aerobic stress during storage12 | |
| Ogunjobi et al. | Effect of combined starters culture of Lactobacillus plantarum on fermentation quality, aerobic stability and acceptability by ruminant of Panicum maximum silage | |
| RU2351155C2 (ru) | Способ приготовления закваски для консервирования растительных субстратов | |
| RIBEIRO et al. | Effects of Streptococcus bovis Isolated from Bovine Rumen on the Fermentation Characteristics and Nutritive Value of Tanzania Grass Silage |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KG TJ TM |