EA034834B1 - Антагонисты il-33 и их применение - Google Patents
Антагонисты il-33 и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA034834B1 EA034834B1 EA201591331A EA201591331A EA034834B1 EA 034834 B1 EA034834 B1 EA 034834B1 EA 201591331 A EA201591331 A EA 201591331A EA 201591331 A EA201591331 A EA 201591331A EA 034834 B1 EA034834 B1 EA 034834B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antagonist
- human
- measured
- seq
- binding
- Prior art date
Links
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 title claims abstract description 226
- 102000017761 Interleukin-33 Human genes 0.000 claims abstract description 385
- 108010067003 Interleukin-33 Proteins 0.000 claims abstract description 385
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 108
- 101000852968 Homo sapiens Interleukin-1 receptor-like 1 Proteins 0.000 claims abstract description 64
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 31
- 102000055002 human IL1RL1 Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 25
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 16
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 101000960952 Homo sapiens Interleukin-1 receptor accessory protein Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000046828 human IL1RAP Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims abstract description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 64
- 101000998137 Homo sapiens Interleukin-33 Proteins 0.000 claims description 46
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 43
- 102000045906 human IL33 Human genes 0.000 claims description 41
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 claims description 41
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 39
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 27
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 27
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 21
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 20
- 101000998136 Mus musculus Interleukin-33 Proteins 0.000 claims description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 18
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 18
- -1 bronchial dilator Substances 0.000 claims description 9
- 102100031294 Thymic stromal lymphopoietin Human genes 0.000 claims description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 claims description 7
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 7
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 6
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 6
- 108010029307 thymic stromal lymphopoietin Proteins 0.000 claims description 6
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 5
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 5
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 5
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 229940123932 Phosphodiesterase 4 inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N adrenaline Chemical compound CNCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000002587 phosphodiesterase IV inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 101000853002 Homo sapiens Interleukin-25 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001128431 Homo sapiens Myeloid-derived growth factor Proteins 0.000 claims description 3
- 102100036680 Interleukin-25 Human genes 0.000 claims description 3
- 101710181613 Interleukin-31 Proteins 0.000 claims description 3
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 claims description 3
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 3
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 claims description 3
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 claims description 3
- 239000000850 decongestant Substances 0.000 claims description 3
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 claims description 3
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 claims description 2
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 claims description 2
- 101000845170 Homo sapiens Thymic stromal lymphopoietin Proteins 0.000 claims 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 claims 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 claims 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 42
- 102100036706 Interleukin-1 receptor-like 1 Human genes 0.000 description 38
- 101000585365 Homo sapiens Sulfotransferase 2A1 Proteins 0.000 description 37
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 19
- 102000044594 Interleukin-1 Receptor Accessory Human genes 0.000 description 18
- 101710180389 Interleukin-1 receptor accessory protein Proteins 0.000 description 18
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 17
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 16
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 14
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 12
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 7
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 238000012552 review Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 5
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 101100395863 Caenorhabditis elegans hst-2 gene Proteins 0.000 description 4
- 206010064212 Eosinophilic oesophagitis Diseases 0.000 description 4
- 101100018717 Mus musculus Il1rl1 gene Proteins 0.000 description 4
- 102000010168 Myeloid Differentiation Factor 88 Human genes 0.000 description 4
- 108010077432 Myeloid Differentiation Factor 88 Proteins 0.000 description 4
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 201000000708 eosinophilic esophagitis Diseases 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N methyl cyclopropanecarboxylate Chemical compound COC(=O)C1CC1 PKAHQJNJPDVTDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 3
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 101000960950 Mus musculus Interleukin-1 receptor accessory protein Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 3
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- ORMNNUPLFAPCFD-DVLYDCSHSA-M phenethicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)C(C)OC1=CC=CC=C1 ORMNNUPLFAPCFD-DVLYDCSHSA-M 0.000 description 3
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 102220117530 rs112626848 Human genes 0.000 description 3
- 102220238658 rs1468529365 Human genes 0.000 description 3
- 102220268018 rs201210997 Human genes 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 239000001741 Ammonium adipate Substances 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- AIRYAONNMGRCGJ-FHFVDXKLSA-N CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc3c[nH]cn3)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc3ccccc3)C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc3c[nH]cn3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc3ccc(O)cc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)NC1=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@@H]2NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](Cc3c[nH]cn3)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc3ccccc3)C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc3c[nH]cn3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc3ccc(O)cc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc3ccc(O)cc3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccccc2)C(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2CCC[C@H]2C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)NC1=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC AIRYAONNMGRCGJ-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 101100454807 Caenorhabditis elegans lgg-1 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 2
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 2
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 2
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 2
- 206010023421 Kidney fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 2
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 2
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000242678 Schistosoma Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003714 TNF receptor-associated factor 6 Human genes 0.000 description 2
- 108090000009 TNF receptor-associated factor 6 Proteins 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 2
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 2
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 2
- 238000000670 ligand binding assay Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 description 2
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000001525 receptor binding assay Methods 0.000 description 2
- 102200148758 rs116840795 Human genes 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000033399 Anaphylactic responses Diseases 0.000 description 1
- 240000000850 Astartea fascicularis Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010003827 Autoimmune hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 201000001178 Bacterial Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000008439 Biliary Liver Cirrhosis Diseases 0.000 description 1
- 208000033222 Biliary cirrhosis primary Diseases 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 206010051728 Bone erosion Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 206010014950 Eosinophilia Diseases 0.000 description 1
- 241000855538 Gallacea scleroderma Species 0.000 description 1
- 208000007465 Giant cell arteritis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010051539 HLA-DR2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000853000 Homo sapiens Interleukin-26 Proteins 0.000 description 1
- 101000960969 Homo sapiens Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000897042 Homo sapiens Nucleotide pyrophosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100030704 Interleukin-21 Human genes 0.000 description 1
- 102220506361 Interleukin-21_R69K_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021969 Nucleotide pyrophosphatase Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010035737 Pneumonia viral Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000012654 Primary biliary cholangitis Diseases 0.000 description 1
- 201000001263 Psoriatic Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036824 Psoriatic arthropathy Diseases 0.000 description 1
- 206010037549 Purpura Diseases 0.000 description 1
- 241001672981 Purpura Species 0.000 description 1
- 208000032056 Radiation Fibrosis Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 201000010001 Silicosis Diseases 0.000 description 1
- 206010050207 Skin fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241001489151 Trichuris Species 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 206010069351 acute lung injury Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000001919 adrenal effect Effects 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 108091006004 biotinylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 102220349284 c.287A>T Human genes 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000009787 cardiac fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000023819 chronic asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940015979 epipen Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 229940038661 humalog Drugs 0.000 description 1
- 102000055228 human IL5 Human genes 0.000 description 1
- 229940048921 humira Drugs 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 201000010659 intrinsic asthma Diseases 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 206010028537 myelofibrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- QHGVXILFMXYDRS-UHFFFAOYSA-N pyraclofos Chemical compound C1=C(OP(=O)(OCC)SCCC)C=NN1C1=CC=C(Cl)C=C1 QHGVXILFMXYDRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 102220210869 rs1057524586 Human genes 0.000 description 1
- 102220220520 rs1060503090 Human genes 0.000 description 1
- 102220206698 rs142514490 Human genes 0.000 description 1
- 102220325921 rs1555376589 Human genes 0.000 description 1
- 102220142694 rs192332456 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 201000004595 synovitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 206010043207 temporal arteritis Diseases 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 208000009421 viral pneumonia Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
- C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/735—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a domain for self-assembly, e.g. a viral coat protein (includes phage display)
Abstract
В настоящем изобретении предлагаются антагонисты интерлейкина-33 (IL-33), содержащие первый IL-33-связывающий домен (D1), второй IL-33-связывающий домен (D2) и мультимеризующийся домен (М), где D1 присоединен к N-концу D2 и D2 присоединен к N-концу М, причем D1 содержит IL-33-связывающий участок аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, соответствующей ST2 человека, D2 содержит IL-33-связывающий участок аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7, соответствующей IL-1RAcP человека, и М содержит Fc-домен иммуноглобулина. Антагонисты IL-33 по данному изобретению могут применяться в фармацевтической композиции для лечения воспалительного заболевания или расстройства, опосредованных IL-33, а также в способе лечения воспалительного заболевания или расстройства, опосредованных IL-33, или по меньшей мере одного симптома, связанного с воспалительным заболеванием или расстройством, таких как астма, аллергия, атопический дерматит, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), воспалительное заболевание кишечника, рассеянный склероз, артрит и аллергический ринит.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к антигенсвязывающим молекулам, которые способны противодействовать IL-33, и способам их применения.
Уровень техники
Интерлейкин-33 (IL-33) является лигандом для ST2, представителя суперсемейства Толлподобных/интерлейкин-1 рецепторов, который ассоциируется с акцессорным белком IL-1RAcP (для обзора, см., например, Kakkar and Lee, Nature Reviews - Drug Discovery 7(10):827-840 (2008), Schmitz et al., Immunity 23:479-490 (2005); Liew et al., Nature Reviews - Immunology 70:103-110 (2010); US 2010/0260770; US 2009/0041718). После активации ST2/IL-1RAcP интерлейкином-33 сигнальный каскад стимулируется молекулами, находящимися на более низком уровне, такими как MyD88 (миелоидный фактор дифференциации 88) и TRAF6 (связывающий фактор 6 рецептора ФНО), что приводит, среди прочего, к активации NFkB (ядерного фактора-кБ). Сигнальная система IL-33 вовлечена в патогенез различных заболеваний и патологий (Liew et al., Nature Reviews - Immunology 70:103-110 (2010)).
Сущность изобретения
В настоящем изобретении предлагаются антагонисты интерлейкина-33 (IL-33). В одном аспекте в настоящем изобретении предлагается антагонист IL-33, содержащий первый IL-33-связывающий домен (D1) и мультимеризующий домен (М). В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 содержит первый IL-33-связывающий домен (D1), прикрепленный к мультимеризующему домену (М), причем D1 содержит IL-33-связывающий участок белка ST2.
В некоторых вариантах реализации изобретения антагонист IL-33 дополнительно содержит один или более дополнительных IL-33-связывающих доменов (например, D2, D3, D4 и т.д.).
В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения IL-33-связывающий домен (D1, D2, D3, D4 и т.д.) содержит IL-33-связывающий участок белка ST2, внеклеточный домен белка IL-1RAcP или другой IL-33-связывающий домен. В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 дополнительно содержит второй IL-33-связывающий домен (D2), прикрепленный к D1 и/или М, причем D2 содержит внеклеточную часть белка IL-1RAcP. В одном варианте реализации изобретения D1 прикреплен к N-концу М. В одном варианте реализации изобретения D1 прикреплен к С-концу М. В одном из вариантов реализации изобретения D2 прикреплен к N-концу М. В одном варианте реализации изобретения D2 прикреплен к С-концу М. В одном варианте реализации изобретения D1 прикреплен к N-концу D2, a D2 прикреплен к N-концу М. Мультимеризующий домен (М) может представлять собой пептид или полипептид, имеющий N-конец и С-конец. Компоненты IL-33 связывающего домена могут быть прикреплены к N-концу или С-концу М. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения компоненты D1, D2 и М соединены в тандеме так, что D1 прикреплен к N-концу D2, a D2 прикреплен к N-концу М. Множество механизмов и конфигураций компонентов D1, D2 и М рассматриваются в рамках настоящего изобретения, примеры которых описаны в этом документе. В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает человеческий интерлейкин-33 (IL-33) со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, менее чем около 80 пМ, и/или со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, менее чем около 400 пМ. В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает человеческий интерлейкин-33 (IL-33) со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, менее чем около 60 пМ, и/или со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, менее чем около 1,0 пМ.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает интерлейкин-33 (IL-33) обезьяны со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, менее чем около 60 пМ, и/или со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, менее чем около 200 пМ.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает интерлейкин-33 (IL-33) обезьяны со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, менее чем около 1,0 пМ, и/или со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, менее чем около 1,0 пМ.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает интерлейкин-33 (IL-33) мыши со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, менее чем около 110 пМ, и/или со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, менее чем около 100 пМ.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает интерлейкин-33 (IL-33) мыши со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном
- 1 034834 плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, менее чем около 10 пМ, и/или со значением связывающей константы равновесия диссоциации (KD), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, менее чем около 5 пМ.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает человеческий интерлейкин33 (IL-33) со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, равным около 9 мин или больше, и/или со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, равным около 4 мин или больше.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает человеческий интерлейкин33 (IL-33) со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, равным около 30 мин или больше, и/или со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, равным около 1000 мин или больше.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает интерлейкин-33 (IL-33) обезьяны со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, равным около 40 мин или больше, и/или со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, равным около 10 мин или больше.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает интерлейкин-33 (IL-33) обезьяны со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, равным около 1000 мин или больше, и/или со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, равным около 1000 мин или больше.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает интерлейкин-33 (IL-33) мыши со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, равным около 25 мин или больше, и/или со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, равным около 30 мин или больше.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 связывает интерлейкин-33 (IL-33) мыши со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25°C, равным около 500 мин или больше, и/или со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 37°C, равным около 1000 мин или больше.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 блокирует взаимодействие IL-33 и ST2.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 блокирует взаимодействие IL-33 и ST2 со значением IC50 менее чем около 115 пМ, измеренным в анализе связывания рецептор/лиганд при температуре 25°C in vitro.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 блокирует взаимодействие IL-33 и ST2 со значением IC50 менее чем около 20 пМ, измеренным в анализе связывания рецептор/лиганд при температуре 25°C in vitro.
В одном варианте реализации изобретения D1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 или 6, или аминокислотную последовательность, имеющую идентичность с ней по меньшей мере на 90%.
В одном варианте реализации изобретения D2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 или 8, или аминокислотную последовательность, имеющую идентичность с ней по меньшей мере на 90%.
В одном варианте реализации изобретения мультимеризующий компонент включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 или 10, или аминокислотную последовательность, имеющую идентичность с ней по меньшей мере на 90%.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 содержит первый IL-33-связывающий домен (D1), прикрепленный к первому мультимеризующему домену (М1), и второй IL-33-связывающий домен (D2), прикрепленный ко второму мультимеризующему домену (М2), отличающийся тем, что домены D1 и/или D2 содержат IL-33-связывающий участок рецептора, выбранного из группы, состоящей из ST2 и IL-IRAcP.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 содержит третий IL-33-связывающий домен (D3), который прикреплен к D1 или М1, и при этом D3 содержит IL-33-связывающий участок рецептора, выбранный из группы, состоящей из ST2 и IL-1RAcP.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 содержит четвертый IL-33связывающий домен (D4), который прикреплен к D2 или М2, и при этом D4 содержит IL-33связывающий участок рецептора, выбранный из группы, состоящей из ST2 и IL-1RAcP.
В одном варианте реализации изобретения D1 прикреплен к N-концу М1, a D2 прикреплен к Nконцу М2.
- 2 034834
В одном варианте реализации изобретения D3 прикреплен к N-концу D1.
В одном варианте реализации изобретения D3 прикреплен к С-концу М1. В одном варианте реализации изобретения D4 прикреплен к N-концу D2. В одном варианте реализации изобретения D4 прикреплен к С-концу М2. В одном варианте реализации изобретения D3 прикреплен к N-концу D1, D1 прикреплен к N-концу М1; D4 прикреплен к N-концу D2, a D2 прикреплен к N-концу М2. В одном варианте реализации изобретения D3 является идентичным или по существу идентичным D4, a D1 является идентичным или по существу идентичным D2. В одном варианте реализации изобретения D3 и D4 каждый содержит IL -33-связывающий участок белка ST2; D1 и D2 каждый содержит внеклеточный участок белка IL-1RAcP.
В одном варианте реализации изобретения антагонист IL-33 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4 и 13.
Второй аспект настоящего изобретения предлагает способы применения описанных в настоящем документе антагонистов IL-33 при лечении воспалительного заболевания или патологии, или по меньшей мере одного симптома, связанного с воспалительным заболеванием или патологией, включающие введение одного или более антагонистов IL-33 по изобретению или фармацевтической композиции, содержащей один или более антагонистов IL-33 по изобретению, пациенту, нуждающемуся в этом, причем воспалительное заболевание или патология облегчается или уменьшается его степень тяжести, продолжительность или частота возникновения, или по меньшей мере один симптом, связанный с воспалительным заболеванием или патологией, облегчается или уменьшается степень его тяжести, продолжительность или частота возникновения. В одном варианте реализации изобретения, воспалительное заболевание или патология, которые можно лечить с помощью любого одного или нескольких антагонистов IL-33 по изобретению, могут быть выбраны из группы, состоящей из астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), воспалительного заболевания кишечника, рассеянного склероза, артрита, аллергического ринита, эозинофильного эзофагита и псориаза.
В одном варианте реализации изобретения воспалительное заболевание или патология, которые можно лечить с помощью любого одного или нескольких антагонистов IL-33 по данному изобретению, представляет собой астму. Астма может быть эозинофильная или неэозинофильная. Астма может быть резистентная к стероидам или чувствительная к стероидам.
В одном варианте реализации изобретения воспалительное заболевание или патология, которые можно лечить с помощью любого одного или нескольких антагонистов IL-33 по данному изобретению, представляет собой атопический дерматит. В одном варианте реализации изобретения воспалительное заболевание или патология, которые можно лечить с помощью любого одного или нескольких антагонистов IL-33 по данному изобретению, представляет собой хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ). В одном варианте реализации изобретения хроническое обструктивное заболевание легких может быть следствием или частично вызвано вдыханием сигаретного дыма.
В родственном варианте реализации настоящего изобретения предлагается способ лечения пациента, демонстрирующего чувствительность к аллергену, который включает введение эффективного количества одного или более антагонистов IL-33 по данному изобретению или фармацевтической композиции, включающей один или несколько антагонистов IL-33 по данному изобретению, пациенту, нуждающемуся в этом; причем пациент демонстрирует пониженную чувствительность или сниженную аллергическую реакцию на аллерген, или не проявляет чувствительности или аллергической реакции, или анафилактического ответа на аллерген после введения антитела или композиции, содержащей антитело.
В родственном варианте реализации настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая один или больше антагонистов IL-33 по изобретению для применения в лечении воспалительного заболевания или патологии, причем воспалительное заболевание или патология выбирается из группы, состоящей из астмы, аллергии, анафилаксии, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), воспалительного заболевания кишечника, рассеянного склероза, артрита, аллергического ринита, эозинофильного эзофагита и псориаза. В одном варианте реализации настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая один или больше антагонистов IL-33 по данному изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания или патологии, причем воспалительное заболевание или патология выбирается из группы, состоящей из астмы, аллергии, анафилаксии, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), воспалительного заболевание кишечника, рассеянного склероза, артрита, аллергического ринита, эозинофильного эзофагита и псориаза.
В некоторых вариантах реализации изобретения предлагается способ лечения воспалительного заболевания или патологии путем введения одного или более антагонистов IL-33 по данному изобретению в комбинации с эффективным количеством второго терапевтического агента, пригодного для уменьшения проявлений воспалительного заболевания или патологии, или по меньшей мере одного симптома воспалительного заболевания или патологии, или уменьшения аллергической реакции на аллерген.
В одном варианте реализации изобретения второй терапевтический агент может быть выбран из группы, состоящей из нестероидного противовоспалительного препарата (НПВП), кортикостероида, бронхиального дилятатора, антигистаминного средства, адреналина, противоотечного средства, антаго- 3 034834 ниста тимусного стромального лимфопоэтина (ТСЛП, TSLP), антагониста IL-13, антагониста IL-4, двойного антагониста IL-4/IL-13, антагониста IL-5, антагониста IL-6, антагониста IL-12/23, антагониста IL-22, антагониста IL-25, антагониста IL-17, антагониста IL-31, ингибитора PDE4 и другого антагониста IL-33 или другого антитела к IL-33.
Третий аспект настоящего изобретения предлагает фармацевтическую композицию, содержащую любой один или более антагонистов IL-33, описанных в настоящем документе, фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель и терапевтические способы, включающих введение таких фармацевтических композиций субъектам, нуждающимся в этом. В некоторых вариантах реализации изобретения дополнительный терапевтически активный компонент может создаваться или вводиться в комбинации с антагонистом IL-33 из настоящего изобретения.
Другие варианты реализации настоящего изобретения станут очевидными после рассмотрения последующего подробного описания.
Краткое описание графических материалов
На фигуре представлены четыре типовые конфигурации отдельных компонентов антагонистов IL33 по отношению друг к другу. На панели А показана конфигурация, в которой первый IL-33связывающий домен (D1) прикреплен к N-концу первого мультимеризующего домена (М1), а второй IL33-связывающий домен (D2) прикреплен к N-концу второго мультимеризующего домена (М2). D1 представлен в виде белой ячейки, D2 - в виде черной ячейки, для иллюстрации того, что D1 и D2 являются производными от различных IL-33-связывающих белков. На панели В показана конфигурация, в которой первый IL-33-связывающий домен (D1) прикреплен к N-концу первого мультимеризующего домена (М1), а второй IL-33-связывающий домен (D2) прикреплен к С-концу второго мультимеризующего домена (М2). D1 представлен в виде белой ячейки, D2 - в виде черной ячейки, для иллюстрации того, что D1 и D2 являются производными от различных IL-33-связывающих белков. На панелях С и D показаны конфигурации, включающие четыре IL-33-связывающие домены: D1, D2, D3 и D4. В этих конфигурациях D3-D1-M1 и D4-D2-M2 прикреплены в тандеме, в котором D3 прикреплен к N-концу D1, a D1 прикреплен к N-концу М1; D4 прикреплен к N-концу D2, a D2 прикреплен к N-концу М2. На панели С D3 и D4 являются идентичными или по существу идентичными друг к другу, и D1 и D2 являются идентичными или по существу идентичными друг к другу. На панели D D1 и D4 являются идентичными или по существу идентичными друг к другу, и D3 и D2 являются идентичными или по существу идентичными друг к другу.
Подробное описание
Прежде чем настоящее изобретение будет описано, следует понимать, что это изобретение не ограничено описанными конкретными способами и экспериментальными условиями, поскольку способы и условия могут изменяться. Также следует понимать, что терминология, используемая в данном документе в целях описания конкретных вариантов реализации изобретения, не предназначена для ограничения, поскольку объем настоящего изобретения будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном описании, имеют то же значение, которое обычно понимается специалистом, имеющим средний уровень квалификации в области техники, к которой относится это изобретение. В данном контексте термин около в отношении конкретного численного значения означает, что значение может изменяться от указанного значения не более чем на 1%. Например, в данном контексте термин около 100 включает в себя 99 и 101, а также все значения между ними (например, 99,1; 99,2; 99,3; 99,4 и т.д.). Несмотря на то что в практике или тестировании настоящего изобретения могут использоваться любые способы и материалы, аналогичные или эквивалентные тем, которые описаны в настоящем документе, предпочтительные способы и материалы приведены ниже.
Антагонисты IL-33
Определения интерлейкин-33, IL-33 и т.п., которые используются в настоящем описании, относятся к человеческому белку IL-33, имеющему аминокислотную последовательность, как изложено в списке учетных номеров Национального центра биотехнологической информации (NCBI) № NP_254274.1 (человеческая изоформа 1), NP_001186569.1 (человеческая изоформа 2) или NP_001186570.1 (человеческая изоформа 3). Все упоминания белков, полипептидов и фрагментов белков в настоящем описании обозначают человеческую версию соответствующего белка, полипептида или фрагмента белка, если четко не обозначен нечеловеческий вид (например, IL-33 мыши, IL-33 обезьяны и т.д.).
В данном контексте определение антагонист IL-33 означает любую антигенсвязывающую молекулу, которая способна связываться с IL-33, блокировать, ослаблять или другим путем препятствовать передаче сигнала IL-33 и/или взаимодействию между IL-33 и рецептором клеточной поверхности (например, ST2). Антагонисты IL-33 из настоящего изобретения содержат первый IL-33-связывающий домен (D1), прикрепленный к мультимеризующему домену (М). В некоторых вариантах реализации изобретения антагонисты IL-33 по данному изобретению содержат второй IL-33-связывающий домен (D2), прикрепленный к D1 и/или М. В соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения D1 содержит IL-33-связывающий участок белка ST2. Согласно некоторым вариантам реализации изобрете- 4 034834 ния D2 содержит внеклеточный участок белка IL-1RAcP.
Отдельные компоненты антагонистов IL-33 могут быть расположены относительно друг друга разнообразно, что приводит к формированию функционально антагонистических молекул, способных связывать IL-33. Например, D1 и/или D2 прикреплены к N-концу М. В других вариантах реализации изобретения D1 и/или D2 прикреплены к С-концу М. В других вариантах реализации изобретения D1 прикреплен к N-концу D2, a D2 прикреплен к N-концу М, в результате чего происходит линейное слияние молекулы антагониста, от N-конца к С-концу, представленной формулой D1-D2-M. Другие ориентации отдельных компонентов описаны в настоящем документе. Неограничивающие примеры антагонистов IL-33 по данному изобретению представлены в рабочих вариантах реализации изобретения в настоящем описании, и включают антагонисты, обозначенные hST2-hFc, hST2-mFc, hST2-hIL1RAcP-mFc, hST2hIL1RAcP-hFc и mST2-mIL1RAcP-mFc. hST2-hFc и hST2-mFc также могут упоминаться как рецепторные белки ST2. hST2-hIL1RAcP-mFc, hST2-hIL1RAcP-hFc и mST2-mIL1RAcP-mFc также могут упоминаться в настоящем описании как белки-ловушки IL-33.
В данном контексте прикрепленный относительно первого полипептидного компонента, который прикреплен ко второму полипептидному компоненту (например, D1 прикреплен к М, D2 прикреплен к М, D1 прикреплен к D2 и т.д.), означает, что первый компонент физически связан со вторым компонентом, непосредственно или опосредовано. В качестве примера непосредственного прикрепления двух полипептидных компонентов, С-концевая аминокислота первого компонента может быть присоединена через пептидную связь к N-концевой аминокислоте второго компонента, или N-терминальная аминокислота первого компонента может быть присоединена через пептидную связь к С-концевой аминокислоте второго компонента. Опосредованное прикрепление, с другой стороны, означает, что и первый, и второй компоненты соединены физически с разными частями промежуточной структуры, которая представляет собой связующее звено между первым и вторым компонентами. Промежуточной структурой может быть, например, единичная аминокислота, пептидный линкер или другой полипептидный компонент (например, другой IL-33-связывающий белок и т.д.). Например, в конфигурации D1-D2-M (в которой первый IL-33-связывающий домен [D1] прикреплен ко второму IL-33-связывающему домену [D2], который в свою очередь соединен с мультимеризующим доменом [М]), D1 рассматривается как прикрепленный к М, хотя прикрепление является опосредованным D2, служащему в качестве промежуточной структуры.
Стандартные молекулярно-биологические технологии (например, технологии рекомбинантной ДНК) могут быть использованы для создания любого из антагонистов IL-33 по данному изобретению или их вариантов.
IL-33-связывающие домены.
Антагонисты IL-33 по настоящему изобретению содержат по меньшей мере один IL-33связывающий домен (иногда обозначаемый в настоящем документе как D или D1, D2 и т.д.). В некоторых вариантах реализации изобретения IL-33-связывающий домен содержит IL-33-связывающий участок белка ST2. IL-33-связывающий участок белка ST2 может содержать или состоять из всех или части внеклеточного домена белка ST2. В некоторых вариантах реализации изобретения белок ST2 является белком человеческого ST2. Термин человеческий белок ST2 в данном контексте относится к белку ST2, имеющему аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12. В некоторых вариантах реализации изобретения белок ST2 представляет собой белок ST2 из нечеловеческих видов (например, ST2 мыши, ST2 обезьяны и т.д.). Типовой IL-33-связывающий участок белка ST2, упоминаемый в настоящем документе, имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 (соответствующую внеклеточному домену человеческого ST2 [K19-S328 по NCBI, учетный номер: NP_057316.3]). Другой пример IL-33связывающего участка белка ST2, упоминаемого в настоящем документе, имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 (соответствующую внеклеточному домену мыши ST2 [S27-R332 по NCBI, учетный номер: Р14719]). В некоторых вариантах реализации изобретения IL-33-связывающий домен содержит внеклеточную часть белка IL-1RAcP. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-1RAcP представляет собой человеческий белок IL-1RAcP. Термин человеческий белок IL-1RAcP в данном контексте относится к белку IL-1RAcP, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13. В некоторых вариантах реализации изобретения белок IL-1RAcP представляет собой белок IL1RAcP из нечеловеческих видов (например, IL-1RAcP мыши, IL-1RAcP обезьяны и т.д.). Типовый внеклеточный участок белка IL-1RAcP, упоминаемый в настоящем документе, имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 (соответствующую внеклеточному домену человеческого IL-1RAcP [S21-E359 по NCBI, учетный номер: Q9NPH3]). Другой пример внеклеточного участка белка IL-1RAcP, упоминаемый в настоящем документе, имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 (соответствующую внеклеточному домену IL-1RAcP мыши [S21-E359 по NCBI, учетный номер: Q61730]). Настоящее изобретение включает в себя антагонисты IL-33, содержащие компоненты D1 и/или D2, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична любой типовой аминокислотной последовательности компонента IL-33связывающего домена, упоминаемого в настоящем документе (например, SEQ ID NO: 5-8).
- 5 034834
Мультимеризующий домен.
Антагонисты IL-33 по настоящему изобретению также содержат по меньшей мере один мультимеризующий домен (иногда обозначаемый в настоящем документе аббревиатурой М, М1, М2 и т.д.). В общих чертах, мультимеризующий домен (домены) по настоящему изобретению функционируют для соединения различных компонентов антагонистов IL-33 (например, IL-33-связывающий домен (домены)) друг с другом. В данном контексте термин мультимеризующий домен относится к любой макромолекуле, которая имеет возможность ассоциировать (ковалентно или нековалентно) со второй макромолекулой с такой же или аналогичной структурой или составом. Например, мультимеризующий домен может быть полипептидом, содержащим домен иммуноглобулина CH3. Неограничивающим примером мультимеризующего домена является Fc-часть иммуноглобулина, например, домен Fc IgG, выбранного из изотипов IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, а также любой аллотип в каждой группе изотипа. В некоторых вариантах реализации изобретения мультимеризующий домен представляет собой фрагмент Fc или аминокислотную последовательность от 1 до около 200 аминокислот в длину, содержащую по меньшей мере один остаток цистеина. В других вариантах реализации изобретения мультимеризующий домен представляет собой остаток цистеина или короткий цистеинсодержащий пептид. Другие мультимеризующие домены включают пептиды или полипептиды, содержащие или состоящие из лейциновой молнии, мотива спираль-петля или биспирального мотива.
Неограничивающие изобретение примеры мультимеризующих доменов, которые могут быть использованы в антагонистах IL-33 из настоящего изобретения, включают человеческий IgG1 Fc (SEQ ID NO: 9) или Fc IgG2a мыши (SEQ ID NO: 10). Настоящее изобретение включает в себя антагонисты IL-33, содержащие компоненты М, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична любой из типовых аминокислотных последовательностей компонентов М, упоминаемой в настоящем документе (например, SEQ ID NO: 9 или 10).
В некоторых вариантах реализации изобретения антагонисты IL-33 по настоящему изобретению содержат два мультимеризующих домена, М1 и М2, при этом М1 и М2 идентичны друг другу. Например, М1 может быть доменом Fc, имеющим определенную аминокислотную последовательность, а М2 представляет собой домен Fc с такой же аминокислотной последовательностью, что и М1.
В некоторых альтернативных вариантах реализации изобретения антагонисты IL-33 по данному изобретению содержат два мультимеризующих домена, М1 и М2, которые отличаются друг от друга в одном или более положении аминокислоты. Например, М1 может содержать первый иммуноглобулиновый (Ig) домен СН3, а М2 может содержать второй домен Ig СН3, при этом первый и второй домены Ig СН3 отличаются друг от друга по меньшей мере одной аминокислотой, и причем по меньшей мере одно аминокислотное отличие уменьшает связывание целевой конструкции с белком А по сравнению с эталонной конструкцией, имеющей идентичные последовательности М1 и М2. В одном варианте реализации изобретения домен Ig CH3 M1 связывает белок А, а домен Ig CH3 M2 содержит мутацию, которая уменьшает или блокирует связывания белка А, такую как модификация H95R (по нумерации экзона IMGT; H435R по нумерации ЕС). СН3 М2 может дополнительно содержать модификацию Y96F (по IMGT; Y436F по ЕС). Дальнейшие модификации, которые могут быть обнаружены в СН3 М2 включают: D16E, L18M, N44S, K52N, V57M и V82I (по IMGT; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M и V422I по ЕС) в случае домена IgG1 Fc; N44S, K52N и V82I (IMGT; N384S, K392N и V422I по ЕС) в случае домена IgG2 Fc; и Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q и V82I (по IMGT; Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q и V422I по ЕС) в случае домена IgG4 Fc.
Ориентация и расположение компонентов антагонистов IL-33.
Отдельные компоненты антагонистов IL-33 по настоящему изобретению (например, D1, D2, М и т.д.) могут быть расположены относительно друг друга различными способами, примеры которых подробно описаны в других разделах настоящего документа. Мультимеризующие домены (М1 и/или М2) могут представлять собой пептид или полипептид, имеющий N-конец и С-конец. Таким образом, компоненты D1 и D2 могут быть прикреплены к компоненту М либо на N- или С-конце компонента М. например, D1 может быть прикреплен к N-концу М (представлено как D1-M). Как вариант, D1 может быть прикреплен к С-концу М (представлено как M-D1). В некоторых вариантах реализации изобретения D2 прикреплен к N-концу М (представлено как D2-M), или D2 прикреплен к С-концу М (представлено как M-D2). В других вариантах реализации изобретения D1 прикреплен к N-концу D2, a D2 прикреплен к N-концу М (представлено как D1-D2-M). Другие типовые расположения отдельных компонентов, от Nк С-концу, могут, таким образом, быть представлены как; D2-D1-M; M-D1; M-D2; M-D1-D2; M-D2-D1; D1-M-D2; D2-M-D1 и т.д.
В вариантах реализации изобретения, включающих два различных мультимеризующих домена (М1 и М2), один или несколько IL-33-связывающих доменов могут быть прикреплены к мультимеризующим доменам в различных расположениях. Неограничивающие примеры таких расположений схематически изображены на фигуре. Например, настоящее изобретение включает в себя антагонисты IL-33, содержащие первый IL-33-связывающий домен (D1), который прикреплен к первому мультимеризующему домену (М1), и второй IL-33-связывающий домен (D2), который прикреплен ко второму мультимеризующему домену (М2). Антагонисты IL-33 по изобретению могут также включать один или более дополнительных
- 6 034834
IL-33-связывающих доменов (например, D3, D4 и т.д.). Например, если третий IL-33-связывающий домен (D3) включен, компонент D3 может быть прикреплен к D1 или М1; аналогично, если четвертый IL33-связывающий домен (D4) включен, компонент D4 может быть прикреплен к D2 или М2.
В вариантах реализации изобретения, включающих несколько IL-33-связывающих доменов, два или более IL-33-связывающих доменов могут быть идентичными или по существу идентичными друг с другом. Например, в одном варианте реализации изобретения, включающем четыре IL-33-связывающих домена (D1, D2, D3 и D4), D1 и D2 могут быть идентичными или по существу идентичными друг другу; и D3 и D4 могут быть идентичными или по существу идентичными друг другу и т.д.
Неограничивающие иллюстративные примеры антагонистов IL-33 по изобретению, содержащих два мультимеризующих домена (М1 и М2) и четыре IL-33-связывающих домена (D1, D2, D3 и D4), показаны на фигуре, расположения С и D). В типовых расположениях такого рода, D1 прикреплен к N-концу М1, D2 прикреплен к N-концу М2, D3 прикреплен к N-концу D1, и D4 прикреплен к N-концу D2. На панели С представлена ситуация, когда D1 и D2 идентичны друг другу (например, каждый содержит внеклеточный домен IL-1RAcP), и D3 и D4 идентичны друг другу (например, каждый содержит внеклеточный домен ST2). На панели С представлена ситуация, когда D1 и D2 не идентичны, и D3 и D4 не идентичны. Многочисленные другие расположения будут очевидны для обычного специалиста в данной области техники после рассмотрения данного документа и включены в объем настоящего изобретения.
Линкеры.
Отдельные компоненты антагонистов IL-33 из настоящего изобретения (например, D1, D2, М1, М2 и т.д.) могут быть прикреплены друг к другу непосредственно (например, D1 и/или D2 может быть непосредственно прикреплен к М и т.д.); в альтернативном варианте отдельные компоненты могут быть прикреплены друг к другу с помощью линкерного компонента (например, D1 и/или D2 может быть прикреплен к М посредством линкера, ориентированного между отдельными компонентами; D1 может быть прикреплен к D2 посредством линкера; и т.д.). В любом расположении, описанном в настоящем документе, при котором один компонент описан как прикрепленный к другому компоненту, прикрепление может осуществляться посредством линкера (даже если он специально не обозначен как таковой). В данном контексте линкер означает любую молекулу, которая соединяет два полипептидных компонента вместе. Например, линкер может быть пептидом, содержащим от 1 до 20 аминокислот, соединенных вместе пептидными связями. (Пептидная связь, сама по себе, однако, не рассматривается как линкер для целей настоящего изобретения). В некоторых вариантах реализации изобретения линкер содержит стерически незатрудненные аминокислоты, такие как глицин и аланин. В некоторых вариантах реализации изобретения линкер представляет собой гибкую цепь аминокислот, устойчивую к протеолитической деградации. Линкер может содержать две молекулярных структуры, которые взаимодействуют друг с другом. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения линкер может содержать компонент стрептавидин и компонент биотин; связь между стрептавидином (прикрепленным к одному компоненту) и биотином (прикрепленным к другому компоненту) служит в качестве прикрепления между отдельными компонентами антагонистов IL-33. Типовые примеры антагонистов IL-33, описанные в настоящем документе, такие как hST2-hIL1RAcP-mFc и mST2-mIL1RAcP-mFc включают серин-глициновый (SG) линкер между компонентом IL-1RAcP и мультимеризующим доменом Fc. Другие аналогичные расположения линкера и конфигурации, включающие линкеры, находятся в пределах объема настоящего изобретения.
Биологические характеристики антагонистов IL-33.
Настоящее изобретение включает в себя антагонистов IL-33, которые связывают растворимые молекулы IL-33 с высокой аффинностью. Например, настоящее изобретение включает в себя антагонисты IL-33 (как описано в настоящем документе в другом месте), которые связывают IL-33 (например, при 25°C или 37°C) со значением KD менее чем около 400 пМ, измеренным с помощью поверхностного плазмонного резонансного анализа, например, с использованием формата анализа, определенного в примере 2 настоящего документа. В некоторых вариантах реализации изобретения антагонисты IL-33 по настоящему изобретению связывают IL-33 со значением KD менее чем около 200 пМ, менее чем около 100 пМ, менее чем около 90 мкМ, менее чем около 80 пМ, менее чем около 70 пМ, менее чем около 60 пМ, менее чем около 50 пМ, менее чем около 40 пМ, менее чем около 30 пМ, менее чем около 20 пМ, менее чем около 10 пМ, менее чем около 9 пМ, менее чем около 8 пМ, менее чем около 6 пМ или менее чем около 1 пМ, измеренным с помощью поверхностного плазмонного резонансного анализа, например, с использованием формата анализа, определенного в примере 2 настоящего документа, или по существу, аналогичного анализа.
Настоящее изобретение также включает в себя антагонистов IL-33, которые специфически связывают IL-33 со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), равным около 4 мин или больше, измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25 или 37°C, например, с использованием формата анализа, определенного в примере 2 настоящего документа, или по существу аналогичного анализа. В некоторых вариантах реализации изобретения антагонисты IL-33 из настоящего изобретения связывают IL-33 со значением t1/2, более чем около 10 мин, более чем около 20 мин, более чем около 30 мин, более чем около 40 мин, более чем около 50 мин, более чем около 60 мин или более
- 7 034834 чем около 70 мин, или более чем около 500 мин, или более чем около 1000 мин, измеренным в поверхностном плазмонном резонансном анализе при температуре 25 или 37°C, например, с использованием формата анализа, определенного в примере 2 настоящего документа, или по существу аналогичного анализа.
Настоящее изобретение также включает в себя антагонистов IL-33, которые блокируют связывание IL-33 с IL-33-рецептором (например, ST2). Например, настоящее изобретение включает в себя антагонистов IL-33, которые блокируют связывание IL-33 с ST2 in vitro, со значением IC50 менее чем около 115 пМ, измеренным с помощью иммуноанализа на основе ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ), например, с использованием формата анализа, определенного в примере 3 настоящего документа, или по существу аналогичного анализа. В некоторых вариантах реализации изобретения антагонисты IL33 из настоящего изобретения блокируют связывание IL-33 с ST2 in vitro, со значением IC50 менее чем около 120 пМ, менее чем около 90 пМ, менее чем около 80 пМ, менее чем около 70 пМ, менее чем около 60 пМ, менее чем около 50 пМ, менее чем около 40 пМ, менее чем около 30 пМ, менее чем около 20 пМ, менее чем около 18 пМ, менее чем около 16 пМ, менее чем около 14 пМ, менее чем около 12 пМ, менее чем около 10 пМ, менее чем около 9 пМ, менее чем около 8 пМ или менее чем около 7 пМ, измеренным с помощью иммуноанализа на основе ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ), например, с использованием формата анализа, определенного в примере 3 настоящего документа, или по существу аналогичного анализа.
Настоящее изобретение также включает в себя антагонисты IL-33, которые ингибируют IL-33опосредованную клеточную передачу сигнала. Например, настоящее изобретение включает в себя антагонисты IL-33, которые ингибируют IL-33-опосредованную передачу сигнала в клетках, экспрессирующих человеческий ST2, со значением IC50 менее чем около 500 пМ, измеренным в блокирующем биоанализе на основе клеток, например, с использованием формата анализа, определенного в примере 4 настоящего документа, или по существу аналогичного анализа. В некоторых вариантах реализации изобретения антагонисты IL-33 из настоящего изобретения блокируют IL-33-опосредованную передачу сигналов в клетках, экспрессирующих человеческий ST2, со значением IC50 менее чем около 400 пМ, менее чем около 300 пМ, менее чем около 200 пМ, менее чем около 100 пМ, менее чем около 80 пМ, менее чем около 60 пМ, менее чем около 40 пМ, менее чем около 30 пМ, менее чем около 20 пМ, менее чем около 18 пМ, менее чем около 16 пМ, менее чем около 14 пМ, менее чем около 12 пМ, менее чем около 10 пМ, менее чем около 8 пМ, менее чем около 7 пМ, менее чем около 6 пМ, менее чем около 5 пМ, менее чем около 4 пМ, менее чем около 3 пМ, менее чем около 2 пМ или менее чем около 1,5 пМ, измеренным в блокирующем биоанализе на основе клеток, например, с использованием формата анализа, определенного в примере 4 настоящего документа, или по существу аналогичного анализа.
Антагонисты IL-33, которые ингибируют IL-33-индуцированную активацию базофилов, и антагонисты IL-33, которые ингибируют IL-33-индуцированное высвобождение IFN-гамма из человеческих МКПК. Базофильная активация может быть определена как дегрануляция, экспрессия маркера поверхности клетки, высвобождение цитокинов и других иммунных медиаторов, таких как гистамин и лейкотриены. Антагонисты IL-33 из настоящего изобретения могут обладать одной или несколькими из указанных выше биологических характеристик, или какими-либо их комбинациями. Другие биологические характеристики антител настоящего изобретения будут очевидны для обычного специалиста в данной области техники при рассмотрении настоящего описания с его рабочими примерами.
Терапевтический состав и введение.
В настоящем изобретении предлагается фармацевтическая композиция, содержащая антагонисты IL-33 из настоящего изобретения. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть составлены с подходящими носителями, вспомогательными веществами и другими агентами, которые обеспечивают улучшенную передачу, доставку, переносимость и тому подобное. Множество подходящих составов можно найти в фармакологическом справочнике, известном всем фармацевтам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Эти составы включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, жиры, липид (катионный или анионный), содержащий везикулы (например, LIPOFECTIN®, Life Technologies, Карлсбад, Калифорния), конъюгаты ДНК, безводные впитываемые пасты, эмульсии масло-в-воде и вода-в-масле, карбовакс (полиэтиленгликоли с различными молекулярными массами), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. См. также Powell et al. Compendium of excipients for parenteral formulations PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.
Доза антагониста IL-33, вводимая пациенту, может варьироваться в зависимости от возраста и площади поверхности тела пациента, установленной болезни, состояния, пути введения и тому подобное. Предпочтительная доза, как правило, рассчитывается согласно массе тела или площади поверхности тела. Если антагонист IL-33 из настоящего изобретения применяют для лечения состояния или заболевания, связанного с активностью IL-33 у взрослого пациента, может быть предпочтительным внутривенное введение антагониста из настоящего изобретения, как правило, в разовой дозе от около 0,01 до около 20 мг/кг массы тела, более предпочтительно от около 0,02 до около 7, от около 0,03 до около 5 или от около 0,05 до около 3 мг/кг массы тела. В зависимости от тяжести состояния, частота и длительность лечения могут быть скорректированы. Эффективные дозы и режимы введения антагониста IL-33 можно
- 8 034834 определить эмпирически. Например, улучшение состояния пациента можно контролировать при периодической оценке, и соответствующим образом корректировать дозу. Кроме того, можно выполнить межвидовое масштабирование дозировок с помощью хорошо известных способов в данной области техники (например, Mordenti et al., 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351). Известны различные системы доставки, которые могут быть использованы для введения фармацевтической композиции по данному изобретению, например, инкапсуляция в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать мутантные вирусы, эндоцитоз, опосредованный рецептором (см., например, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432). Способы введения включают, без ограничения, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшинное, внутривенное, подкожное, интраназальное, эпидуральное и оральное введение. Композицию можно вводить любым удобным способом, например путем инфузии или болюсной инъекции, путем абсорбции через эпителиальные или кожно-слизистые накладки (например, на слизистую оболочку полости рта, прямой кишки, кишечника и т.д.) и вместе с другими биологически активными агентами. Введение может быть системным или местным. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть введена подкожно или внутривенно с использованием стандартной иглы и шприца. Кроме того, для подкожного введения фармацевтической композиции по настоящему изобретению находит широкое применение приспособление шприц-ручка. Такое приспособление может быть многоразового или одноразового использования. В многоразовых приспособлениях для введения типа шприц-ручка, как правило, используется сменный картридж, содержащий фармацевтическую композицию. Когда вся фармацевтическая композиция из картриджа введена и картридж пуст, его можно легко снять и заменить на новый, который содержит фармацевтическую композицию. Приспособление для введения типа шприц-ручка может быть использовано повторно. В одноразовом приспособлении для введения типа шприц-ручка сменные картриджи не предусмотрены. Чаще одноразовые приспособления для введения типа шприц-ручка поставляются уже с предварительно заполненным фармацевтической композицией резервуаром внутри устройства. После того, как фармацевтическая композиция в резервуаре заканчивается, все устройство утилизируется.
Для подкожного введения фармацевтической композиции из настоящего изобретения используются многочисленные многоразовые устройства типа шприц-ручка и автоинжекторы. Примеры включают, но не ограничиваются ими, AUTOPEN® (Owen Mumford, Inc., Вудсток, Великобритания), шприц-ручку DISETRONIC® (Disetronic Medical Systems, Бергдорф, Швейцария), шприц-ручку HUMALOG MIX 75/25®, шприц-ручку HUMALOG®, шприц-ручку HUMALIN 70/30® (Eli Lilly and Co., Индианаполис, Индиана), NOVOPEN® I, II и III (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), NOVOPEN JUNIOR® (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), шприц-ручку BD® (Becton Dickinson, Франклин Лейкс, Нью-Джерси), OPTIPEN®, OPTIPEN PRO®, OPTIPEN STARLET® и OPTICLIK® (sanofi-aventis, Франкфурт, Германия), называя только некоторые из них. Примеры одноразовых приспособлений, имеющих применение для подкожного введения фармацевтической композиции из настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются ими: шприц-ручку SOLOSTAR® (sanofi-aventis), FLEXPEN® (Novo Nordisk), KWIKPEN® (Eli Lilly), автоинжектор SURECLICK® (Amgen, Таузенд-Оукс, Калифорния), PENLET® (Haselmeier, Штутгарт, Германия), EPIPEN (Dey, L.P.), шприц-ручку HUMIRA® (Abbott Labs, Эбботт Парк, Иллинойс), называя только некоторые из них.
В определенных ситуациях фармацевтическая композиция может быть введена с помощью системы с контролируемым высвобождением. В одном варианте реализации изобретения может использоваться насос (см. Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201). В другом варианте реализации изобретения могут использоваться полимерные материалы; см., Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Бока-Ратон, Флорида. В еще одном варианте реализации изобретения система с регулируемым высвобождением может быть размещена в непосредственной близости от цели композиции, таким образом, требуется только часть системной дозы (см., например, Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, p. 115-138). Другие системы с контролируемым высвобождением обсуждаются в обзоре Langer, 1990, Science 249:1527-1533.
Инъекционные препараты могут включать лекарственные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных и внутримышечных инъекций, капельных инфузий и т.д. Эти препараты для инъекций могут быть получены широко известными способами. Например, препараты для инъекций могут быть получены путем растворения, суспендирования или эмульгирования антагониста или его соли, описанного выше, в стерильной водной среде или масляной среде, обычно используемых для инъекций. В качестве водной среды для инъекций применяют, например, физиологический раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу, и другие вспомогательные агенты и т.п., которые могут быть использованы в комбинации с соответствующим солюбилизирующим агентом, таким как спирт (например, этанол), многоатомный спирт (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, НСО-50 (полиоксиэтилен (50 моль) аддукт гидрогенизированного касторового масла)] и т.д. Для масляной среды применяются, например, кунжутное масло, соевое масло и т.д., которые могут быть использованы в сочетании с солюбилизирующим агентом, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т.п. Веществом для инъекции, полученным таким образом, предпочтитель
- 9 034834 но наполняют соответствующую ампулу.
Фармацевтические композиции для перорального или парентерального применения, описанные выше, успешно готовят в лекарственных формах в виде унифицированной дозы, приспособленной для соответствия дозе активных ингредиентов. Такие лекарственные формы в виде унифицированной дозы включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекции (ампулы), суппозитории и т.д. Количество вышеупомянутой содержащейся молекулы антагониста обычно составляет от около 5 до около 500 мг на лекарственную форму в виде унифицированной дозы, особенно в виде инъекции; предпочтительно, чтобы количество вышеупомянутой содержащейся молекулы антагониста составляло от около 5 до около 100 мг, и от около 10 до около 250 мг для других лекарственных форм.
Терапевтическое применение антагонистов IL-33.
Эксперименты, проведенные авторами настоящего изобретения, способствовали выявлению различных заболеваний и состояний, которые можно лечить, предотвращать и/или улучшать путем антагонизма IL-33. Например, гидродинамическая доставка мышиной ДНК IL-33 была причиной индукции накопления слизи в легких и увеличения уровня общего сывороточного IgE у мышей. Кроме того, доставка ДНК mIL-33 приводила к положительной регуляции ST2 и различных последующих цитокинов, что измерялось с помощью микроматричного анализа. Эксперименты, проведенные авторами настоящего изобретения с использованием нокаут-мышей с IL-33, также выявили различные потенциальные терапевтические преимущества антагонизма IL-33. Например, макроскопические царапины и кожные инфильтраты оказались сопоставимы между мышами дикого типа и мышами IL-33 в модели IMQ (имиквимод)индуцированного псориаза. Кроме того, у мышей с IL-33 наблюдалось снижение эозинофилии и накопления остаточной слизи в модели аллерген-индуцированного воспаления легких. Антагонисты IL-33 по изобретению применимы, в частности, для лечения, профилактики и/или улучшения любого заболевания или патологии, связанных или опосредованных экспрессией IL-33, передачей сигнала или поддающимися лечению с помощью блокирования взаимодействия между IL-33 и IL-33-лигандом (например, ST2) или ингибирования активности IL-33 и/или передачи сигнала иным образом. Например, настоящее изобретение предлагает способы лечения инфекционных заболеваний (например, инфекции, вызванной лейшманией (Leishmania); инфекции, вызванной власоглавом (Trichuris); инфекции, вызванной микобактерией (Mycobacterium); инфекции, вызванной листерией (Listeria); инфекции, вызванной токсоплазмой (Toxoplasma); инфекции, вызванной шистосомой (Schistosoma); инфекции, вызванной респираторносинцитиальным вирусом; инфекции, вызванной вирусом гриппа и т.д.); астмы (например, эозинофильной или неэозинофильной астмы; астмы, резистентной к стероидам; астмы, чувствительной к стероидам; аллергической астмы; неаллергической астмы; тяжелой не поддающейся лечению астмы; приступов астмы [например, вирус- или аллерген-индуцированных] и т.д.); атопического дерматита, псориаза, других воспалительных заболеваний; аллергии; анафилаксии; сердечно-сосудистых заболеваний; заболеваний центральной нервной системы; боли иартрита (например, ревматоидного артрита, остеоартрита, псориатического артрита и т.д.); гигантоклеточного артериита; воспалительных заболеваний кишечника (например, болезни Крона или язвенного колита); рассеянного склероза; аллергического ринита; эозинофильного эзофагита; васкулита и пурпуры Геноха-Шенлейна. Антагонисты IL-33 по настоящему изобретению также применимы для лечения, профилактики и/или улучшения одного или более фиброзных заболеваний. Примеры фиброзных заболеваний, которые поддаются лечению путем введения антагонистов IL-33 по данному изобретению, включают фиброз легких (например, идиопатический фиброз легких, блеомицин-индуцированный фиброз легких, асбест-индуцированный фиброз легких, бронхиолитический облитерирующий синдром), хроническую астму, фиброз, связанный с острым повреждением легких и острым респираторным дистресс-синдромом (например, аллерген-индуцированный фиброз, фиброз, индуцированный бактериальной пневмонией, фиброз, индуцированный травмой, фиброз, индуцированный вирусной пневмонией, вентилятор-индуцированный фиброз, фиброз, индуцированный нелегочным сепсисом, и фиброз, индуцированный аспирацией), силикоз, радиационно-индуцированный фиброз, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ, включая обострения ХОЗЛ или ХОЗЛ, которое возникло вследствие активного или пассивного курения или частично им вызвано), глазной фиброз, фиброз кожи (например, склеродермия), фиброз печени (например, цирроз печени, алкоголь-индуцированный фиброз печени, неалкогольный стеатогепатит (НАСГ, NASH), патологию желчных протоков, первичный билиарный цирроз, фиброз печени, индуцированный инфекциями или вирусами [например, хроническая ВГС-инфекция], аутоиммунный гепатит, фиброз почки (почечный фиброз), фиброз сердца, атеросклероз, стент-рестеноз и миелофиброз.
В контексте способов лечения, описанных в настоящем документе, антагонисты IL-33 можно вводить в виде монотерапии (т.е. в качестве единственного терапевтического агента) или в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами (примеры которых описаны в других разделах настоящего документа).
Комбинированные методы лечения и составы.
Настоящее изобретение включает композиции и терапевтические составы, содержащие любой из антагонистов IL-33, описанных в настоящем документе, в комбинации с одним или более дополнительных терапевтически активных компонентов, и способы лечения, включающие введение таких комбина
- 10 034834 ций пациентам, которые нуждаются в этом. Антагонисты IL-33 по настоящему изобретению также могут быть скомбинированы и/или вводиться в сочетании, например, с ингибиторами цитокинов или антагонистами, в том числе низкомолекулярными ингибиторами цитокинов и антителами, которые связываются с цитокинами, такими как IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-26, IL-31, двойным антагонистом IL-4/IL-13, антагонистом IL-12/IL-23, ингибитором PDE4 (в одном из вариантов реализации изобретения, пероральным ингибитором PDE4), и другим антагонистом IL-33 или антителом к другому IL-33, тимусным стромальным лимфопоэтином (TSLP) или антагонистами соответствующих рецепторов.
Антагонисты IL-33 по данному изобретению могут быть также введены и/или скомбинированы в сочетании с противовирусными препаратами, антибиотиками, анальгетиками, кортикостероидами, стероидами, кислородом, антиоксидантами, металлохелатами, IFN-гамма и/или НПВП, бронхиальным дилататором, антигистаминным средством, адреналином или противоотечным средством.
Дополнительный терапевтически активный компонент (компоненты) можно вводить непосредственно перед, одновременно или вскоре после введения антагониста IL-33 из настоящего изобретения; (для целей настоящего изобретения, такие режимы введения подразумевают введение антагониста IL-33 в сочетании с дополнительным терапевтически активным компонентом). Настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, в которых антагонист IL-33 по данному изобретению скомбинирован с одним или более дополнительным терапевтически активным компонентом (компонентами), как описано в других разделах настоящего документа.
Схемы введения.
Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения многократные дозы антагониста IL-33 (или фармацевтической композиции, содержащей комбинацию антагониста IL-33 и любого из дополнительных терапевтически активных агентов, упомянутых в настоящем описании) могут вводить субъекту курсом в течение определенного времени. Способы соответственно данному аспекту изобретения включают последовательное введение субъекту многократных доз антагониста IL-33 по изобретению. В данном контексте последовательное введение означает, что каждую дозу антагониста IL-33 вводят субъекту в другой момент времени, например, в разные дни, разделенные заданным интервалом (например, часы, дни, недели или месяцы). Настоящее изобретение включает способы, которые содержат последовательное введение пациенту одной начальной дозы антагониста IL-33, за которой следует одна или более вторичных доз антагониста IL-33, и в некоторых случаях следуют одна или более третичных доз антагониста IL-33.
Термины начальная доза, вторичные дозы и третичные дозы относятся к временной последовательности введения антагониста IL-33 по данному изобретению. Таким образом, начальная доза представляет собой дозу, которая вводится в начале схемы лечения (также называемая базовой дозой); вторичные дозы представляют собой дозы, которые вводятся после начальной дозы; и третичные дозы представляют собой дозы, которые вводятся после вторичных доз. Начальная, вторичные и третичные дозы могут содержать одинаковое количество антагониста IL-33, но, как правило, могут отличаться друг от друга по частоте введения. В некоторых вариантах реализации изобретения, однако, количество антагониста IL-33, содержащееся в начальной, вторичных и/или третичных дозах, в ходе лечения варьируется относительно друг друга (например, коррекция в сторону увеличения или уменьшения по мере необходимости). В некоторых вариантах реализации изобретения две или более (например, 2, 3, 4 или 5) дозы вводят в начале курса лечения в качестве дозы насыщения с последующими дозами, которые вводят не так часто (например, поддерживающие дозы). В некоторых типовых вариантах реализации настоящего изобретения, каждую вторичную и/или третичную дозу вводят от 1 до 26 (например, 1, 11/2, 2, Э1/ Q Q1/ /1 Л1/ < 51/ А Α1/ Ί Ί11 2 Q1 / Q Q1 / щ 1 А1 / 11 ι 11 / 1 о IO1/ 1Q 1Q1/ 1/1 1Л1 / /2, 3, 3 /2, 4, 4 /2, 5, 5 /2, 6, 6 /2, 7, 7 /2, 8, 8 /2, 9, 9 /2, 10, 10 /2, 11, 11 /2, 12, 12 /2, 13, 13 /2, 14, 14 /2, 15,
111111111111 /2, 16, 16 /2, 17, 17 /2, 18, 18 /2, 19, 19 /2, 20, 20 /2, 21, 21 /2, 22, 22 /2, 23, 23 /2, 24, 24 /2, 25, 25 /2, 26, 26 /2 или более) недель после непосредственно предшествующей дозы. Фраза непосредственно предшествующая доза в данном контексте относится к последовательности многократного введения и означает дозу антагониста IL-33, которую вводят пациенту перед введением следующей же дозы в последовательности без промежуточных доз.
Способы в соответствии с данным аспектом настоящего изобретения могут включать введение пациенту любого количества вторичных и/или третичных доз антагониста IL-33. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения, пациенту вводят только одну вторичную дозу. В других вариантах реализации изобретения пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) вторичных дозы. Кроме того, в некоторых вариантах реализации изобретения пациенту вводят только одну третичную дозу. В других вариантах реализации изобретения пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) третичных доз.
В вариантах реализации изобретения, включающих многократные вторичные дозы, каждая вторичная доза может быть введена с той же частотой, что и другие вторичные дозы. Например, каждая вторичная доза может быть введена пациенту от 1 до 2 недель или от 1 до 2 месяцев после непосредственно предшествующей дозы. Подобным образом, в вариантах реализации изобретения, включающих несколько третичных доз, каждая третичная доза может быть введена с той же частотой, что и другие третичные
- 11 034834 дозы. Например, каждая третичная доза может быть введена пациенту от 2 до 12 недель после непосредственно предшествующей дозы. В некоторых вариантах реализации изобретения частота, с которой вторичные и/или третичные дозы вводят пациенту, может изменяться согласно схеме курса лечения. Частота введения также может быть скорректирована врачом в ходе лечения в зависимости от показаний у конкретного пациента после проведения клинического обследования.
Настоящее изобретение включает схемы введения, в которых от 2 до 6 доз насыщения вводят пациенту с первой частотой (например, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз каждые три недели, один раз в месяц, один раз в два месяца и т.д.), с последующим введением пациенту двух или более поддерживающих доз не так часто. Например, в соответствии с этим аспектом настоящего изобретения, если дозы насыщения вводят с частотой один раз в месяц, то поддерживающие дозы можно вводить пациенту один раз в шесть недель, один раз в два месяца, один раз в три месяца и т.д.).
Примеры
Следующие примеры представлены таким образом, чтобы обеспечить специалистам в данной области техники полное понимание и описание того, как создавать и использовать способы и композиции по данному изобретению, и не предназначены для ограничения объема того, что авторы считают своим изобретением. Были предприняты усилия, чтобы обеспечить точность в отношении используемых чисел (например, количества, температуры и т.д.), но следует учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, части являются массовыми частями, молекулярная масса является средней молекулярной массой, температура в градусах Цельсия, а давление равно или близко к атмосферному.
Пример 1. Конструкция антагонистов IL-33.
Пять различных типовых антагонистов IL-33 по данному изобретению были сконструированы с использованием стандартных методов молекулярной биологии. Первый антагонист IL-33 (hST2-hFc, SEQ ID NO: 1) состоит из растворимой внеклеточной области человеческого ST2 (SEQ ID NO: 5), слитого на своем С-конце с N-концом Fc-области человеческого IgG1 (SEQ ID NO: 9). Второй антагонист IL-33 (hST2-mFc, SEQ ID NO: 2) состоит из растворимой внеклеточной области человеческого ST2 (SEQ ID NO: 5), слитого на своем С-конце с N-концом Fc-области IgG2a мыши (SEQ ID NO: 10). Третий антагонист IL-33 (hST2-hIL1RAcP-mFc, SEQ ID NO: 3) состоит из линейного слияния, имеющего человеческий ST2 (SEQ ID NO: 5) на своем N-конце, с последующей внеклеточной областью человеческого IL-1RAcP (SEQ ID NO: 7), за которой следует IgG2a Fc мыши (SEQ ID NO: 10) на своем С-конце. Четвертый антагонист IL-33 (mST2-mIL1RAcP-mFc, SEQ ID NO: 4) состоит из линейного слияния, имеющего ST2 мыши (SEQ ID NO: 6) на своем N-конце, с последующей внеклеточной областью IL-1RAcP мыши (SEQ ID NO: 8), за которой следует IgG2a Fc мыши (SEQ ID NO: 10) на своем С-конце. Пятый антагонист IL-33 (hST2hIL1RAcP-hFc, SEQ ID NO: 13) состоит из линейного слияния, имеющего человеческий ST2 из SEQ ID NO: 5 на своем N-конце, с последующей внеклеточной областью человеческого IL-1RAcP (SEQ ID NO: 7), за которой следует человеческий IgG1 Fc (SEQ ID NO: 9) на своем С-конце. В табл. 1а изложено краткое описание различных антагонистов IL-33 и их составных частей. В табл. 1b приведены аминокислотные последовательности антагонистов IL-33 и их составных частей.
Таблица 1а
Краткое описание антагонистов IL-33
| Антагонист IL-33 | Аминокислотная последовательность полной молекулы антагониста | Компонент D1 | Компонент D2 | Компонент M |
| hST2-hFc | SEQ ID N0:1 | Человеческий ST2 внеклеточный (SEQ ID N0:5) | Отсутствует | Человеческий lgG1 Fc (SEQ ID N0:9) |
| hST2-mFc | SEQ ID N0:2 | Человеческий ST2 внеклеточный (SEQ ID N0:5) | Отсутствует | Мышиный lgG2a Fc (SEQ ID N0:10) |
| hST2-hlL1RA cP-mFc | SEQ ID N0:3 | Человеческий ST2 внеклеточный (SEQ ID N0:5) | Человеческий IL-IRAcP внеклеточный (SEQ ID N0:7) | Мышиный lgG2a Fc (SEQ ID N0:10) |
| mST2-mlL1R AcP-mFc | SEQ ID N0:4 | Мышиный ST2 внеклеточный (SEQ ID N0:6) | Мышиный IL-IRAcP внеклеточный (SEQ ID N0:8) | Мышиный lgG2a Fc (SEQ ID N0:10) |
| hST2-hlL1RA cP-hFc | SEQIDNO: 13 | Человеческий ST2 внеклеточный (SEQ ID N0:5) | Человеческий IL-1RAcP внеклеточный (SEQ ID N0:7) | Человеческий lgG1 Fc (SEQ ID N0:9) |
- 12 034834
Аминокислотные последовательности
Таблица 1b
| Идентификат ор | Последовательность |
| SEQ ID N0:1 (hST2-hFc) | KFSKQSWGLENEALIVRCPRQGKPSYTVDWYYSQTNKSIPTQERNRVFASGQL LKFLPAAVADSGIYTCIVRSPTFNRTGYANVTIYKKQSDCNVPDYLMYSTVSGSE KNSKIYCPTIDLYNWTAPLEWFKNCQALQGSRYRAHKSFLVIDNVMTEDAGDYT CKFIHNENGANYSVTATRSFTVKDEQGFSLFPVIGAPAQNEIKEVEIGKNANLTC SACFGKGTQFLAAVLWQLNGTKITDFGEPRIQQEEGQNQSFSNGLACLDMVLRI ADVKEEDLLLQYDCLALNLHGLRRHTVRLSRKNPIDHHSDKTHTCPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAK TKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPP VLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| SEQ ID N0:2 (hST2-mFc) | KFSKQSWGLENEALIVRCPRQGKPSYTVDWYYSQTNKSIPTQERNRVFASGQL LKFLPAAVADSGIYTCIVRSPTFNRTGYANVTIYKKQSDCNVPDYLMYSTVSGSE KNSKIYCPTIDLYNWTAPLEWFKNCQALQGSRYRAHKSFLVIDNVMTEDAGDYT CKFIHNENGANYSVTATRSFTVKDEQGFSLFPVIGAPAQNEIKEVEIGKNANLTC SACFGKGTQFLAAVLWQLNGTKITDFGEPRIQQEEGQNQSFSNGLACLDMVLRI ADVKEEDLLLQYDCLALNLHGLRRHTVRLSRKNPIDHHSEPRGPTIKPCPPCKCP APNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVWDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHT AQTQTHREDYNSTLRWSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPK GSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKN TEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSWHEGLHNHHTTKSFSRTPG К |
| SEQ ID N0:3 (hST2-hlL1RA cP-mFc) | KFSKQSWGLENEALIVRCPRQGKPSYTVDWYYSQTNKSIPTQERNRVFASGQL LKFLPAAVADSGIYTCIVRSPTFNRTGYANVTIYKKQSDCNVPDYLMYSTVSGSE KNSKIYCPTIDLYNWTAPLEWFKNCQALQGSRYRAHKSFLVIDNVMTEDAGDYT CKFIHNENGANYSVTATRSFTVKDEQGFSLFPVIGAPAQNEIKEVEIGKNANLTC SACFGKGTQFLAAVLWQLNGTKITDFGEPRIQQEEGQNQSFSNGLACLDMVLRI ADVKEEDLLLQYDCLALNLHGLRRHTVRLSRKNPIDHHSSERCDDWGLDTMRQI QVFEDEPARIKCPLFEHFLKFNYSTAHSAGLTLIWYWTRQDRDLEEPINFRLPEN RISKEKDVLWFRPTLLNDTGNYTCMLRNTTYCSKVAFPLEVVQKDSCFNSPMKL PVHKLYIEYGIQRITCPNVDGYFPSSVKPTITWYMGCYKIQNFNNVIPEGMNLSFL IALISNNGNYTCVVTYPENGRTFHLTRTLTVKVVGSPKNAVPPVIHSPNDHVVYE KEPGEELLIPCTVYFSFLMDSRNEVWWTIDGKKPDDITIDVTINESISHSRTEDET RTQILSIKKVTSEDLKRSYVCHARSAKGEVAKAAKVKQKVPAPRYTVESGEPRG PTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVWDVSEDDPDVQI SWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRWSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKD LPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWT NNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHN HHTTKSFSRTPGK |
| SEQ ID N0:4 (mST2-mlL1R AcP-mFc) | SKSSWGLENEALIVRCPQRGRSTYPVEWYYSDTNESIPTQKRNRIFVSRDRLKF LPARVEDSGIYACVIRSPNLNKTGYLNVTIHKKPPSCNIPDYLMYSTVRGSDKNF KITCPTIDLYNWTAPVQWFKNCKALQEPRFRAHRSYLFIDNVTHDDEGDYTCQF THAENGTNYIVTATRSFTVEEKGFSMFPVITNPPYNHTMEVEIGKPASIACSACF GKGSHFLADVLWQINKTWGNFGEARIQEEEGRNESSSNDMDCLTSVLRITGVT EKDLSLEYDCLALNLHGMIRHTIRLRRKQPIDHRSERCDDWGLDTMRQIQVFED EPARIKCPLFEHFLKYNYSTAHSSGLTLIWYWTRQDRDLEEPINFRLPENRISKEK DVLWFRPTLLNDTGNYTCMLRNTTYCSKVAFPLEVVQKDSCFNSAMRFPVHKM YIEHGIHKITCPNVDGYFPSSVKPSVTWYKGCTEIVDFHNVLPEGMNLSFFIPLVS NNGNYTCVVTYPENGRLFHLTRTVTVKVVGSPKDALPPQIYSPNDRVVYEKEPG |
- 13 034834
| EELVIPCKVYFSFIMDSHNEVWWTIDGKKPDDVTVDITINESVSYSSTEDETRTQI LSIKKVTPEDLRRNYVCHARNTKGEAEQAAKVKQKVIPPRYTVESGEPRGPTIKP CPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVWDVSEDDPDVQISWFV NNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPI ERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGK TELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTK SFSRTPGK | |
| SEQ ID N0:5 (человеческий ST2 внеклеточный домен) | KFSKQSWGLENEALIVRCPRQGKPSYTVDWYYSQTNKSIPTQERNRVFASGQL LKFLPAAVADSGIYTCIVRSPTFNRTGYANVTIYKKQSDCNVPDYLMYSTVSGSE KNSKIYCPTIDLYNWTAPLEWFKNCQALQGSRYRAHKSFLVIDNVMTEDAGDYT CKFIHNENGANYSVTATRSFTVKDEQGFSLFPVIGAPAQNEIKEVEIGKNANLTC SACFGKGTQFLAAVLWQLNGTKITDFGEPRIQQEEGQNQSFSNGLACLDMVLRI ADVKEEDLLLQYDCLALNLHGLRRHTVRLSRKNPIDHHS |
| SEQ ID N0:6 (мышиный ST2 внеклеточный домен) | SKSSWGLENEALIVRCPQRGRSTYPVEWYYSDTNESIPTQKRNRIFVSRDRLKF LPARVEDSGIYACVIRSPNLNKTGYLNVTIHKKPPSCNIPDYLMYSTVRGSDKNF KITCPTIDLYNWTAPVQWFKNCKALQEPRFRAHRSYLFIDNVTHDDEGDYTCQF THAENGTNYIVTATRSFTVEEKGFSMFPVITNPPYNHTMEVEIGKPASIACSACF GKGSHFLADVLWQINKTWGNFGEARIQEEEGRNESSSNDMDCLTSVLRITGVT EKDLSLEYDCLALNLHGMIRHTIRLRRKQPIDHR |
| SEQ ID N0:7 (человеческий ILIRAcP внеклеточный домен) | SERCDDWGLDTMRQIQVFEDEPARIKCPLFEHFLKFNYSTAHSAGLTLIWYWTR QDRDLEEPINFRLPENRISKEKDVLWFRPTLLNDTGNYTCMLRNTTYCSKVAFPL EVVQKDSCFNSPMKLPVHKLYIEYGIQRITCPNVDGYFPSSVKPTITWYMGCYKI QNFNNVIPEGMNLSFLIALISNNGNYTCVVTYPENGRTFHLTRTLTVKVVGSPKN AVPPVIHSPNDHVVYEKEPGEELLIPCTVYFSFLMDSRNEVWWTIDGKKPDDITI DVTINESISHSRTEDETRTQILSIKKVTSEDLKRSYVCHARSAKGEVAKAAKVKQK VPAPRYTVE |
| SEQ ID N0:8 (мышиный ILIRAcP внеклеточный домен) | SERCDDWGLDTMRQIQVFEDEPARIKCPLFEHFLKYNYSTAHSSGLTLIWYWTR QDRDLEEPINFRLPENRISKEKDVLWFRPTLLNDTGNYTCMLRNTTYCSKVAFPL EVVQKDSCFNSAMRFPVHKMYIEHGIHKITCPNVDGYFPSSVKPSVTWYKGCTE IVDFHNVLPEGMNLSFFIPLVSNNGNYTCVVTYPENGRLFHLTRTVTVKVVGSPK DALPPQIYSPNDRWYEKEPGEELVIPCKVYFSFIMDSHNEVWWTIDGKKPDDV TVDITINESVSYSSTEDETRTQILSIKKVTPEDLRRNYVCHARNTKGEAEQAAKVK QKVIPPRYTVE |
| SEQ ID N0:9 (человеческий lgG1 Fc) | DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNK ALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSPGK |
| SEQ ID N0:10 (мышиный lgG2a Fc) | EPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCWVDVSEDD PDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRWSALPIQHQDWMSGKEFKCKV NNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIY VEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHE GLHNHHTTKSFSRTPGK |
| SEQ ID N0:11 (M. fascicularis IL-33-6HIS) | SITGISPITESLASLSTYNDQSITFALEDESYEIYVEDLKKDKKKDKVLLSYYESQH PSSESGDGVDGKMLMVTLSPTKDFWLQANNKEHSVELHKCEKPLPDQAFFVLH NRSFNCVSFECKTDPGVFIGVKDNHLALIKVDYSENLGSENILFKLSEILEHHHHH H |
| SEQ ID N0:13 (hST2-hlL1RA cP-hFc) | KF S KQ S WG LE N E AL IVRC P RQ G KP S YTVD WYYS QTN KSIPTQ E RN RVF A SGQLLKFLPAAVADSGIYTCIVRSPTFNRTGYANVTIYKKQSDCNVPDYL MYSTVSGSEKNSKIYCPTIDLYNWTAPLEWFKNCQALQGSRYRAHKSFL VIDNVMTEDAGDYTCKFIHNENGANYSVTATRSFTVKDEQGFSLFPVIGA PAQNEIKEVEIGKNANLTCSACFGKGTQFLAAVLWQLNGTKITDFGEPRI QQEEGQNQSFSNGLACLDMVLRIADVKEEDLLLQYDCLALNLHGLRRHT VRLSRKNPIDHHSSERCDDWGLDTMRQIQVFEDEPARIKCPLFEHFLKFN |
| YSTAHSAGLTLIWYWTRQDRDLEEPINFRLPENRISKEKDVLWFRPTLLN DTGNYTCMLRNTTYCSKVAFPLEWQKDSCFNSPMKLPVHKLYIEYGIQR ITCPNVDGYFPSSVKPTITWYMGCYKIQNFNNVIPEGMNLSFLIALISNNG NYTCWTYPENGRTFHLTRTLTVKWGSPKNAVPPVIHSPNDHWYEKEP GEELLIPCTVYFSFLMDSRNEVWWTIDGKKPDDITIDVTINESISHSRTEDE TRTQILSIKKVTS E D L KRS YVC H ARSAKG EVAKAAKVKQ KVP AP RYTVE D KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEY KCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVK GFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
Некоторые биологические свойства типовых антагонистов IL-33, получаемых в соответствии с этим Примером, подробно описаны в примерах, приведенных ниже.
Пример 2. Связывание антагонистов IL-33 с IL-33 человека, мыши и обезьяны, определяемое с помощью поверхностного плазмонного резонанса.
Значения равновесных констант диссоциации (величины KD) связывания человеческого IL-33 (R&D Systems, #3625-IL-010/CF), мышиного IL-33 (R&D Systems, #3626-ML-010/CF) и IL-33 обезьяны, экспрессированных С-концевым гексагистидиновым маркером (MflL-33-6His; SEQ ID NO: 12) с очищенными белками-ловушками IL-33 и рецепторными белками ST2, определяли, используя биосенсор поверхностного плазмонного резонанса аппарата Biacore T-200 в режиме реального времени при 25°C и/или при 37°C. Поверхность сенсора Biacore вначале была дериватизирована аминным соединением с поликлональным анти-мышиным антителом кролика (GE, #BR-1008-38) или моноклональным античеловеческим антителом Fc мыши (GE, #BR-1008-39) с целью иммобилизации белков-ловушек IL-33 и рецепторных белков с С-концевым маркером Fc мышиного IgG2a или С-концевым маркером Fc человеческого IgG1 соответственно. Кинетические эксперименты проводились в 0,01 М HEPES, рН 7,4, 0,15 М NaCl, 3 мМ ЭДТА и 0,005% v/v Сурфактанта Твин-20 (подвижный буфер HBST). Различные концентра
- 14 034834 ции человеческого IL-33, мышиного IL-33 или MflL-33-6His, приготовленные в подвижном буфере HBST (в пределах от 60 нМ до 27,4 пМ, в 3-кратных разбавлениях - для белков-ловушек, и в пределах от 60 нМ до 0,25 нМ, в 3-кратных разбавлениях - для рецепторных белков ST2), вводили через поверхность иммобилизированных белков-ловушек IL-33 и рецепторных белков при скорости потока 50 мкл/мин. Ассоциативную связь различных белков IL-33 с различными иммобилизированными поверхностями контролировали в течение 7 мин для белков-ловушек или в течение 4 мин для рецепторных белков ST2, а их диссоциацию в подвижном буфере HBST - в течение 14 мин для белков-ловушек или 8 мин для рецепторных белков ST2. Параметры кинетических констант ассоциации (ka) и диссоциации (kd) определяли путем построения сенсограмм связывания в режиме реального времени в модели связывания 1:1 с использованием Скруббера 2.0с с программным обеспечением для обработки кривых. Равновесные константы связывания при диссоциации (KD) и диссоциативный период полужизни (t1/2) рассчитывались из кинетических констант скоростей, как
KD (М) = kd/ka и t1/2 (мин) = ln(2)/(60*kd)
Кинетические параметры связывания белков-ловушек IL-33 с IL-33 человека, обезьяны и мыши при 25 и 37°C приведены в табл. 2-7, вместе с тем кинетические параметры связывания рецепторных белков ST2 с IL-33 человека и мыши при 25°C приведены в табл. 2 и 6. Как показано в табл. 2, белки-ловушки и рецепторные белки IL-33 связывают человеческий IL-33 со значениями KD в пределах от около 0,53 до 54 пМ при 25°C. Как показано в табл. 3, белки-ловушки IL-33 связывают человеческий IL-33 со значениями KD в пределах от около 0,569 до 353 пМ при 37°C. Как показано в табл. 4, белки-ловушки IL-33 связывают MflL-33-6His со значениями KD в пределах от около 0,596 до 53,5 пМ при 25°C. Как показано в табл. 5, белки-ловушки IL-33 связывают MflL-33-6His со значениями KD в пределах от около 0,551 до 190 пМ при 37°C. Как показано в табл. 6, белки-ловушки и рецепторные белки IL-33 связывают мышиный IL-33 со значениями KD в пределах от около 6,1 до 102 пМ при 25°C. Как показано в табл. 7, белкиловушки IL-33 связывают мышиный IL-33 со значениями KD в пределах от около 2,78 до 93,3 пМ при 37°C.
Таблица 2
Кинетические параметры связывания человеческого IL-33 с белками-ловушками IL-33 человека, белками-ловушками IL-33 мыши и рецепторными белками ST2 человека при 25°C
| Иммобилизированный аналит | Количество иммобилизированного аналита (RU) | 60 нМ Связывание человеческого IL-33 (RU) | ка (1/Mc) | ка (1/с) | Kd (Μ) | ty2 (мин) |
| hST2-hlL1RAc P-hFc | 276 10,7 | 19 | 1.89E+07 | 1,00Е-05* | 5,30Ε-13* | 1155* |
| hST2-hlL1RAc P-mFc | 256 ±2,9 | 28 | 1.92E+07 | 6.32Ε-05 | 3.29Ε-12 | 183 |
| mST2-mlL1RAc P-mFc | 233 13,0 | 22 | 1.82E+07 | 1,29Ε-03 | 7.09Ε-11 | 9 |
| hST2-hFc | 230 17,7 | 25 | 5.90E+06 | 3.20Ε-04 | 5.40Ε-11 | 36 |
| hST2-mFc | 255 ±6,6 | 24 | 5.72E+06 | 3.07Ε-04 | 5.36Ε-11 | 38 |
* В экспериментальных условиях диссоциации IL-33 из иммобилизированного моноклонального антитела не наблюдалось, поэтому значение kd зафиксировано 1.00Е-05, а производные значения t1/2 и KD представляют нижний и верхний пределы соответственно.
- 15 034834
Таблица 3
Кинетические параметры связывания человеческого IL-33 с белками-ловушками IL-33 человека и мыши при 37°C
| Иммобилизированный аналит | Количество иммобилизированного аналита (RU) | 60 hM связывание человеческого IL-33 (RU) | ka (1/Mc) | kd (1/c) | Kd (M) | 1½ (мин) |
| hST2-hlL1RAc P-hFc | 339 ± 10,7 | 26 | 1.76E+07 | 1.00E-05* | 5.69E-13* | 1155* |
| hST2-hlL1 RAc P-mFc | 258 ±4,3 | 28 | 1.82E+07 | 2.02E-05 | 1.11E-12 | 573 |
| mST2-mll_1RAc P-mFc | 222 ± 5,2 | 20 | 9,11 E+06 | 3.22E-03 | 3.53E-10 | 4 |
* В экспериментальных условиях диссоциации IL-33 из иммобилизированного моноклонального антитела не наблюдалось, поэтому значение kd зафиксировано 1,00Е-05, а производные значения t1/2 и KD представляют нижний и верхний пределы соответственно.
Таблица 4
Кинетические параметры связывания IL-33 обезьяны с белками-ловушками IL-33 человека и мыши при 25°C
| Иммобилизированный аналит | Количество иммобилизированного аналита (RU) | 60 hM связывание IL-33 обезьяны (RU) | ka (1/Mc) | ka (1/c) | Kd (M) | ty2 (мин) |
| hST2-hlL1R AcP-hFc | 274 ± 0,9 | 20 | 1,68E+07 | 1,00E-05* | 5,96E-13* | 1155* |
| hST2-hlL1R AcP-mFc | 247 ±4,1 | 28 | 1,31 E+07 | 4.09E-05 | ЗДЗЕ-12 | 282 |
| mST2-mlL1 RAcP-mFc | 225 ± 3,6 | 23 | 4.55E+06 | 2.44E-04 | 5.35E-11 | 47 |
* В экспериментальных условиях диссоциации IL-33 из иммобилизированного моноклонального антитела не наблюдалось, поэтому значение kd зафиксировано 1,00Е-05, а производные значения t1/2 и KD представляют нижний и верхний пределы соответственно.
Таблица 5 Кинетические параметры связывания IL-33 обезьяны с белками-ловушками IL-33 человека и мыши при 37°C
| Иммобилизированный аналит | Количество иммобилизированного аналита (RU) | 60 hM связывание IL-33 обезьяны (RU) | ka (1/Mc) | ka (1/c) | Kd (M) | ty2 (мин) |
| hST2-hlL1R AcP-hFc | 308 ± 8,2 | 25 | ГП + | 1.00E-05* | 5,51 E-13* | 1155* |
| hST2-hlL1R AcP-mFc | 247 ±3 | 27 | 1,45E+ 07 | 4.79E-05 | 3.29E-12 | 241 |
| mST2-mlL1 RAcP-mFc | 209 ±3,1 | 21 | 6.16E+ 06 | 1.17E-03 | 1.90E-10 | 10 |
* В экспериментальных условиях диссоциации IL-33 из иммобилизированного моноклонального антитела не наблюдалось, поэтому значение kd зафиксировано 1,00Е-05, а производные значения t1/2 и KD представляют нижний и верхний пределы соответственно.
- 16 034834
Таблица 6
Кинетические параметры связывания мышиного IL-33 с белками-ловушками IL-33 человека, мыши и рецепторными белками ST2 человека при 25°C
| Иммобилизированный аналит | Количество иммобилизированного аналита (RU) | 60 hM связывание IL-33 мыши (RU) | ka (1/Mc) | ka (1/c) | Kd (M) | t/2 (мин) |
| hST2-hlL1R AcP-hFc | 272 ± 0,9 | 17 | 3,66E+ 06 | 2.23E-05 | 6.10E-12 | 517 |
| hST2-hlL1R AcP-mFc | 237 ±2,7 | 22 | 4,67E+ 06 | 8.97E-05 | 1.92E-11 | 129 |
| mST2-mlL1 RAcP-mFc | 217± 1,9 | 22 | 4,73E+ 06 | 4.94E-05 | 1.05E-11 | 234 |
| hST2-hFc | 211 ±4,4 | 18 | 4,10E +06 | 4,23E-04 | 1,02E-10 | 27 |
| hST2-mFc | 238 ±4,1 | 18 | 3,97E +06 | 3,50E-04 | 8.82E-11 | 33 |
Таблица 7
Кинетические параметры связывания мышиного IL-33 с белками-ловушками IL-33 человека и мыши при 37°C
| Иммобилизированный аналит | Количество иммобилизированного аналита (RU) | 60 нМ Связывание IL-33 мыши (RU) | ka (1/Mc) | ко (1/c) | KD (M) | t/2 (мин) |
| hST2-hlL1R AcP-hFc | 280 ±7,7 | 18 | 3,60E+ 06 | 1.00E-05* | 2.78E-12* | 1155* |
| hST2-hlL1R AcP-mFc | 236 ± 3,2 | 21 | 3,39E+ 06 | 3.17E-04 | 9.33E-11 | 36 |
| mST2-mlL1 RAcP-mFc | 199 ±2,8 | 20 | 6,00E+ 06 | 1.28E-04 | 2.13E-11 | 90 |
* В экспериментальных условиях диссоциации IL-33 из иммобилизированного моноклонального антитела не наблюдалось, поэтому значение kd зафиксировано 1,00Е-05, а производные значения t1/2 и KD представляют нижний и верхний пределы соответственно.
Пример 3. Антагонисты IL-33 блокируют связывание IL-33 с человеческим рецептором ST2.
Способность типовых антагонистов IL-33 по настоящему изобретению блокировать связывание человеческого IL-33 (hIL-33) с рецептором ST2 человека измеряли с использованием конкурентного твердофазного иммуноферментного сэндвич-анализа (сэндвич- ELISA). Часть внешнего домена человеческого белка ST2, который экспрессировался С-концевым мышиным маркером Fc (SEQ ID NO: 2), была нанесена в концентрации 1 мкг/мл в буфер ФСБ на 96-луночный микротитрационный планшет на ночь при 4°C. Неспецифические участки связывания были затем блокированы с использованием 0,5% (w/v) раствора БСА в ФСБ. Биотинилированный белок hIL-33 (R&D Systems, #3625-IL/CF) (biot-hIL-33) добавляли в серийные разбавления антагонистов IL-33 в диапазоне от 0 до 100 нМ для получения устойчивой конечной концентрации 20 пМ. Смесь инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре (КТ), прежде чем перенести на микротитрационные планшеты с нанесенным hST2-hFc. После инкубации в течение 1 ч при КТ лунки промывали и выявляли связанный на планшете biot-hIL-33 с помощью стрептавидина, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP) (Thermo Scientific, # N200). Все образцы обрабатывали раствором ТМВ (BD biosciences, # 51-2607KC) для получения колориметрической реакции, а затем гасили путем подкисления с помощью 1М серной кислоты перед измерением поглощения при 450 нм на планшете-ридере Victor X5 (PerkinElmer). Анализ данных проводили с использованием сигмовидной дозозависимой модели в программном обеспечении Prism®. Полученное значение IC50, определяемое как концентрация молекулы антагониста, необходимая для блокирования связывания biot-hIL-33 с hST2 mFc на 50%, использовали в качестве индикатора блокирования активности. Максимальные значения блокирования отображают способность антагонистов блокировать связывание IL-33 по сравнению с исходным уровнем. Поглощение, измеряемое при постоянной концентрации hIL-33 на кривой зависимости от дозы, определяли как 0% блокирование, а поглощение, измеряемое без добавления IL-33, определяли как 100% блокирование. Значения поглощающей способности лунок, содержащих высокую концентрацию каждого антагониста, использовались для определения процента максимального блокирования.
- 17 034834
Таблица 8
Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) блокирования связывания биотина-11П.-33 с hST2-hFc антагонистами IL-33
| Антагонист IL-33 | Блокирование 20 пМ 5иотина-п11_-33 на hST2-hFc, IC50 (М) | % максимального блокирования |
| hST2-hFc | 1.92Е-11 | 99 |
| hST2-mFc | 1.69Е-11 | 100 |
| hST2-hlL1RAcP-mFc | 6.34Е-12 | 97 |
| mST2-mlL1RAcP-mFc | 1.12Е-10 | 97 |
Четыре протестированных антагониста IL-33 блокировали связывание биотина-11П.-33 с hST2-mFc со значением IC50 в пределах от 112 до 6,34 пМ с максимальным процентом блокирования в пределах от 97% до 100%, как показано в табл. 8.
Пример 4. Ингибирование IL-33-опосредованной передачи сигнала рецептора антагонистами IL-33.
Интерлейкин-33 (IL-33) является лигандом для ST2, представителя суперсемейства Толлподобных/интерлейкин-1 рецепторов, который ассоциируется с акцессорным белком IL-1RAcP (для обзора, см. Kakkar and Lee (2008), Nat Rev Drug Discovery, Oct; 7(10): 827-840). После активации ST2/IL1RAcP интерлейкином-33, сигнальный каскад стимулируется молекулами, находящимися на более низком уровне, такими как MyD88 (миелоидный фактор дифференциации 88) и TRAF6 (связывающий фактор 6 рецептора ФНО), что приводит, среди прочего, к активации NFkB (ядерного фактора-кВ). С целью разработки биологически релевантных систем биоисследований для изучения антагонистов IL-33, эмбриональные клетки почки человека (HEK293) были стабильно трансфицированы для экспрессии человеческого ST2 (аминокислоты 1-556 из учетного номера NP_057316) вместе с репортером люциферазы [элемент ответа NFkB (5X)-люцифераза-IRES-GFP] (HEK293/hST2/NFκB-люциферазная клеточная линия). Клеточная линия HEK293 эндогенно экспрессирует IL-1RAcP, a NFkB активируется интерлейкином-33 в клетках HEK293, как было показано ранее (Schmitz et al. (2005), Immunity 23:479-490)). Стабильная клеточная линия была изолирована и поддерживается в 10% FBS, DMEM, NEAA, пенициллин/стрептомицин и G418.
Для биоисследований HEK293/hST2/NFκB-люциферазные клетки высевали на 96-луночные планшеты для анализа в расчете 10000 клеток на лунку в низких сывороточных средах, содержащих 0,1% w/v FBS и OPTIMEM (Invitrogen, # 31985-070) и затем инкубировали при 37°C в 5% СО2 в течение ночи. На следующий день для определения дозозависимомого ответа от IL-33: человеческого IL-33 (hIL-33; R&D Systems, #3625-IL) или IL-33 обезьяны-макака, экспрессированного С-терминальным гексагистидиновым маркером (MfIL-33-6His; SEQ ID NO: 11), или IL33 мыши (mIL-33; R&D Systems, #3626-IL) серийно разбавляли в отношении 1:3 (hIL33: 15 нМ-0,3 пМ или 10 нМ-0,2 пМ, mfIL33: 1,5 нМ-0,03 пМ или 1 нМ0,05пМ, mIL33: 15 нМ-0,3 пМ или 10 нМ-0,2 пМ) и добавляли к клеткам. Контроль, содержащий буфер для разведения, но не IL-33, также добавляли к одному образцу клеток. Для измерения ингибирования белки-ловушки IL-33 и растворимые рецепторные белки серийно разбавляли и добавляли к клеткам с последующим добавлением постоянных концентраций IL-33 (5 или 20 пМ для hIL-33, 5 или 3 пМ для MfIL-33-6His и 30 пМ для mIL-33). Серии разбавлений растворимого рецептора и белков-ловушек перед добавлением к клеткам составляли 1:3, начиная с ~ 15, 150, 100 или 200 нМ, и в пределах до ~ 0,3, 3 или 2 пМ, плюс контрольный образец, не содержащий белка-ловушки или контроль растворимого рецепторного белка. Человеческий белок Fc (контрольный белок) также серийно разбавляли в соотношении 1: 3 в пределах от 798 до 0,01 нМ или от 100 до 0,002 нМ и протестировали с hIL-33, MfIL-33-6His и mIL-33 таким же образом, как и белки-ловушки и рецепторные белки. Активность люциферазы измеряли через 5,5 ч инкубации при 37°C в 5% СО2 с использованием планшета-ридера Victor X (Perkin Elmer), а результаты анализировали нелинейной регрессией (четырехпараметрическая регрессионная логистическая модель) с помощью программного обеспечения Prism 5. Результаты показаны в табл. 9.
- 18 034834
Таблица 9
Ингибирование активированных человеческим IL-33, IL-33 обезьяны и IL-33 мыши HEK293/hST2/NFKBлюциферазных клеток с помощью белков-ловушек IL-33 и растворимых рецепторов ST2
| IL-33 | Человек | Обезьяна | Мышь | Человек | Обезьяна | Мышь |
| ЕС5о(М) | 1.9E-12 | 1.7Е-12 | 1.0Е-11 | 2.5Е-11 | 1,ЗЕ-12 | 8.8Е-11 |
| Постоянный IL33 | 5pM | 5рМ | ЗОрМ | 20рМ | ЗрМ | ЗОрМ |
| Описание | ICso(M) | 1С5о(М) | 1С5о(М) | 1С5о(М) | 1С5о(М) | 1С5о(М) |
| mST2-mlL1 RAcP-mF с | 4.8Е-10 | 6.4Е-11 | 8.7Е-12 | Анализ не проводил ся | Анализ не проводился | Анализ не проводил ся |
| hST2-hlL1 RAcP-mFc | 1,ЗЕ-12 | 1,ЗЕ-12 | 1,ЗЕ-11 | 1,ЗЕ-11 | 4.7Е-11 | 1.9Е-10 |
| hST2-hlL1 RAcP-hFc | Анализ не проводил ся | Анализ не проводило я | Анализ не проводил ся | З.ОЕ-11 | 1.0Е-10 | 3.7Е-10 |
| hST2-mFc | 1.2Е-11 | 5.5Е-12 | 1.4Е-10 | Анализ не проводил ся | Анализ не проводился | Анализ не проводил ся |
| hST2-hFc | 1.0Е-11 | 4.6Е-12 | 1.1Е-10 | Анализ не проводил ся | Анализ не проводился | Анализ не проводил ся |
| Контрольный белок | НБ | НБ | НБ | НБ | НБ | НБ |
НБ=не блокатор.
Как показано в табл. 9, все проанализированные IL-33 антагонисты потенциально блокировали (IC50 <1 нМ) стимулирование IL-33 человека, макака и мыши в этом анализе на основе клеток.
Пример 5. Антагонист IL-33 ингибирует IL-33-опосредованную активацию базофилов.
Для дальнейшей оценки характеристик in vitro антагонистов IL-33 hST2-hIL1RAcP-mFc и hST2hIL1RAcP-hFc, была измерена их способность блокировать IL-33-индуцированную активацию базофилов.
Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) очищали из свежей цельной крови четырех разных доноров-людей с помощью центрифугирования в градиенте плотности. Цельную кровь К2 ЭДТА разбавляли в среде RPMI 1640 в соотношении 1:1, тщательно разделяли на слои с помощью FicollPaque (GE Healthcare, #17-1440-03) и центрифугировали для отделения МКПК. Межфазный слой, содержащий МКПК, отсасывали, переносили в новую пробирку и дважды промывали буфером MACS, который состоял из разбавленного раствора MACS BSA (Militenyi Biotec, #130-091-376) в смачивающей жидкости MACS (Militenyi Biotec, # 130-091-222) в соотношении 1:20. Очищенные МКПК затем помещали (100 мкл на лунку) на 96-луночный полипропиленовый планшет с V-образным дном лунок в конечной концентрации ~ 3,0х106 клеток/мл в буфер MACS. Чтобы подготовить базофилы, содержащиеся в популяции МКПК, 1 нг IL-3 (Sigma, # H7166-10UG) в 50 мкл физиологического раствора, забуференного фосфатом Дульбекко без Са++ или Mg ++ (DPBS), добавляли к суспензии клеток, а затем инкубировали при 37°C в течение 10 мин. Серийные разбавления (1:3 для доноров 655675 и 655676 и 1:4 для доноров 655685, 655686, 698846 и 698847) антагонистов человеческого IL-33 (hST2-hIL1RAcP-mFc или hST2hIL1RAcP-hFc) или нерелевантного контрольного белка произведены в пределах от 10 нМ до 4,6 пМ для доноров 655675 и 655676 и от 5 нМ до 0,3 пМ для доноров 655685, 655686, 698846 и 698847. Кроме того, был включен контроль без какого-либо антагониста IL-33 или нерелевантного контрольного белка. Растворы смешивали с фиксированной концентрацией человеческого IL-33 (R&D Systems, # 6325-IL/CF), которая составляла 100 пМ (конечная концентрация), или без отрицательного контроля IL-33 перед добавлением к МКПК. Все образцы были проанализированы в двух параллельных испытаниях.
После добавления к клеткам человеческого IL-33 и антагониста человеческого IL-33, клетки инкубировали при 37°C в течение 20 мин для обеспечения активации базофилов. После этого активацию останавливали охлаждением аналитических планшетов на льду в течение 5 мин. Чтобы была возможность проанализировать популяцию базофилов, используемую для измерения активации, 20 мкл каждого (в соответствии с инструкциями изготовителя) анти-HLA-DR-FITC (Beckman Coulter, # IM0463U), анти(''[)123-АРС (BD, # 560087) и анти-CD203с-РЕ (Beckman Coulter, # IM3575) добавляли к каждому образцу, а образцы выдерживали при 4°C в течение 20 мин в темноте. Затем клетки центрифугировали, промывали DPBS, и после этого ресуспендировали в 2% формальдегиде (фиксационный буфер) при 4°C. На следующий день фиксированные клетки анализировали в аппарате BD FACSCanto II для определения уровней активации базофилов. Базофилы идентифицировали в соответствии со следующими параметрами потоковой цитометрии: лимфоцитарные BopoTa/CD123+/HLA-DR2-. Базофильную активацию определяли как увеличение экспрессии на маркере клеточной поверхности, CD203c на стимулированных базофилах. Активацию определяли как частоту CD203C положительных базофилов (%). Результаты приведены в табл. 10 и 11 (ББ = без блокирования; НО = не определяется в отдельных экспериментах). Данные представлены в виде среднего значения 3 биологических повторов для каждого донора.
- 19 034834
Таблица 10
Процент активации человеческих базофилов, индуцированной влиянием человеческого IL-33
| Донор | 100 пМ IL-33 | Без IL-33 | ||
| Среднее | СО | Среднее | СО | |
| 655675 | 39,00 | 0,28 | 9,43 | 0,02 |
| 655676 | 29,75 | 0,21 | 9,36 | 2,18 |
| 655685 | 42,30 | 3,39 | 10,9 | 0,42 |
| 655686 | 52,60 | 2,69 | 10,59 | 0,86 |
| 698846 | 26,25 | 0,78 | 9,79 | 0,18 |
| 698847 | 22,10 | 1,98 | 8,83 | 0,44 |
Таблица 11
Блокирование IL-33-индуцированной активации базофилов антагонистом человеческого IL-33
| Донор 655675 | Донор 655676 | Донор 655685 | Донор 655686 | Донор 698846 | Донор 698847 | |
| Антагонист | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) |
| hST2-hlL1RAcPmFc | 1.90Е-11 | 1.51Е-11 | 2,ЗОЕ-11 | 2.09Е-11 | 3.60Е-11 | 1.11Е-11 |
| hST2-hlL1RAcPhFc | НО | НО | НО | НО | 1.97Е-11 | 9.79Е-12 |
| Нерелевантный контрольный белок | ББ | ББ | ББ | ББ | ББ | ББ |
Как показано в табл. 10, при 100 пМ, средний процент IL-33-индуцированной активации базофилов человека в шести различных доноров находится в пределах от 22,1% до 52,60%.
Как показано в табл. 11, антагонист IL-33 hST2-hIL1RAcP-mFc блокировал активацию базофилов, индуцированную влиянием 100 пМ человеческого IL-33 со значением IC50 19 пМ для донора 655675, значением IC50 15,1 пМ для донора 655676, значением IC50 23 пМ для донора 655685, значением IC50 20,9 пМ для донора 655686, значением IC50 36 пМ для донора 698846 и значением IC50 11,1 пМ для донора 698847. Антагониста IL-33 hST2-hIL1RAcP-hFc блокировал активацию базофилов, индуцированную влиянием 100 пМ человеческого IL-33 со значением IC50 19,7 пМ для донора 698846 и значением IC50 9,79 пМ для донора 698847. Нерелевантный контрольный белок не блокировал активацию базофилов ни от одного из тестируемых доноров.
Пример 6. Антагонист IL-33 ингибирует IL-33-опосредованную активацию клеток.
Для дальнейшего тестирования блокирующих свойств антагонистов человеческого IL-33 hST2hIL1RAcP-mFc и hST2-hIL1RAcP-hFc, проводили анализ на основе эмбриональных клеток с использованием мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) (см., например, Smithgall et al., International Immunology, 2008, vol. 20 (8), p. 1019-1030).
МКПК выделяли из свежей цельной человеческой крови шести разных доноров с помощью центрифугирования в градиенте плотности. В общих чертах, цельную кровь К2 ЭДТА разбавляли в два раза в RPMI 1640, тщательно разделяли на слои с помощью Ficoll-Paque (GE Healthcare, #17-1440-03) и центрифугировали в течение 20 мин. Межфазный слой, содержащий МКПК, отсасывали, переносили в новую пробирку и дважды промывали PBS. Выделенные МКПК помещали (200 мкл на лунку) в 96луночные планшеты с круглым дном лунок при конечной концентрации 5х105 клеток/мл в среде RPMI 1640, дополненной 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Затем клетки инкубировали с 50 нг/мл человеческого IL-12 (hIL-12; R&D Systems, #219-IL-025/CF) и серийным разбавлением только одного человеческого IL-33 (hIL-33; R&D Systems, #3625-IL-010/CF) от 10 нм до 0,64 пМ, или 260 пМ hIL-33 в сочетании с серийными разбавлениями от 20 нМ до 0,43 пМ антагониста человеческого IL-33 или нерелевантного mIgG, содержащего контрольный белок. Конечный объем составлял 200 мкл на лунку. Каждый образец был проанализирован в трех параллельных испытаниях. Если присутствовал антагонист IL-33 или нерелевантный mIgG, содержащий контрольный белок, его сначала предварительно инкубировали с hIL-33 в течение 30 мин, а затем добавляли к клеткам.
Клетки инкубировали в течение ночи при 37°C во влажной камере с 5% CO2, а затем измеряли уровни IFNy в культуральном супернатанте с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) (R&D Systems, # DY285). Для проведения твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) в 96-луночные планшеты с плоским дном лунок вносили иммобилизованное антитело согласно инструкциям изготовителя. После промывания и блокирования в планшеты добавляли 100 мкл неразбавленного культурального супернатанта и инкубировали в течение 2 ч. Последующая отмывка и детекция производились согласно инструкциям изготовителя. Результаты приведены в табл. 12 и 13 (ББ = без блокирования; НО = не определяется).
- 20 034834
Таблица 12
IL-33-индуцированное высвобождение IFNy из человеческих МКПК от четырех доноров
| [IL-33] | Донор 698843 | Донор 698842 | Донор 655684 | Донор 634966 | Донор 655681 | Донор 655682 | Донор 727054 | Донор 727055 |
| ЕС50 (М) | НО | НО | 2Д1Е-1 0 | 3.15Е-1 0 | 2.04Е-1 0 | 3.04Е-1 0 | НО | НО |
Таблица 13
Блокирование IL-33-индуцированного высвобождения IFNy из человеческих МКПК антагонистом IL-33
| Донор 698843 | Донор 698842 | Донор 655684 | Донор 634966 | Донор 655681 | Донор 655682 | Донор 727054 | Донор 727055 | |
| Антагонист | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) | IC50 (М) |
| hST2-hlL1 RAcP-mFc | 1.73Е-1 1 | 7.39Е-1 1 | 6.79Е-1 1 | 2.13Е-1 2 | 4.59Е-1 1 | 3.97Е-1 2 | 3.34Е-1 0 | 1.23Е-1 0 |
| hST2-hlL1 RAcP-hFc | НО | НО | НО | НО | НО | НО | 1.52Е-1 0 | 4.07Е-1 0 |
| Нерелеван тный mlgG, содер-жащ ИЙ контроль-н ый белок | ББ | ББ | ББ | ББ | ББ | ББ | ББ | ББ |
Как показано в этом примере, человеческий IL-33 в присутствии hIL-12 индуцировал высвобождение IFNy из общих МКПК человека от четырех разных протестированных доноров, со значением EC50 от 204 до 315 пМ, как показано в табл. 12. Антагонист человеческого IL-33 hST2-hIL1RAcP-mFc блокировал высвобождение IFNy из МКПК человека, индуцированное IL-33 в концентрации 260 пМ, со значением IC50 в пределах от 2,13 до 334 пМ, как показано в табл. 13. Нерелевантный mIgG, содержащий контрольный белок, не демонстрировал какого-либо измеримого блокирования высвобождения IFNy от всех протестированных доноров.
Пример 7. Эффективность mST2-mIL1RacP-mFc в модели воспалительной суставной боли.
Для определения влияния mST2-mIL1RacP-mFc на одностороннюю воспалительную модель in vivo боли в суставах исследовали 12 недельных самцов мышей C57BL/6, полученных из The Jackson Laboratory (Бар-Харбор, Мэн). В день 0 эксперимента отдельным когортам мышей вводили подкожно 50 мг/кг mST2-mIL1RacP-mFc (n = 15-16) или 50 мг/кг изотипического контроля антитела (n = 15-16). Спустя 24 ч после введения начальной дозы половина мышей получили инъекцию полного адъюванта Фрейнда (IACFA; Sigma, # F5881) (n=7-8): 30 мкл интраартикулярно и 50 мкл периартикулярно, а другая половина мышей в те же места получили инъекции контрольного раствора натрия хлорида (n = 7-8). Спустя неделю после развития воспаления суставов и в течение следующих четырех недель все мыши получали подкожные бустер-инъекции mST2-mIL1RacP-mFc по 50 мг/кг или 50 мг/кг изотипического контроля антитела за 24 ч до проведения анализа с динамической опорной нагрузкой (BioSeb, Витроль, Франция). Процент выдерживаемого веса на пораженной конечности и процент времени, затрачиваемого на пораженную конечность, записывали для всех мышей. Результаты этого эксперимента, выраженные средним процентом общей массы тела или средним процентом времени, затрачиваемого на пораженную конечность, в течение всего испытательного периода в 5 мин, приведены в табл. 14 и 15 (все данные представлены в виде среднегруппового показателя ± стандартная ошибка среднего (СОС). Все когорты мышей, которые получали IA-CFA, выдерживали в значительной степени меньшую (р <0,05 по ANOVA) опорною нагрузку на пораженную конечность. Мыши, которые получали mST2-mIL1RacP-mFc после введения IA-CFA, показали более высокий процент выдерживаемого веса и времени, затрачиваемого на пораженную конечность во всех временных точках, по сравнению с мышами, получавшими изотипический контроль после введения IA-CFA, как показано в табл. 14 и 15. По истечению четвертой недели все животные были умерщвлены, а пораженные суставы были вскрыты, залиты в парафин. Из препарата были приготовлены срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином для гистологического анализа. Срезы были оцифрованы и оценены слепым методом с использованием субъективной оценки степени воспалительной активности (в том числе деструкции сустава, синовиального утолщения, эрозии кости и иммунноклеточного инфильтрата) с градацией от 0 до 5 (0 = норма, 1 = минимальная, 2 = легкая 3 = умеренная, 4 = выраженная, 5 = тяжелая) по способу, аналогичному тому, что указан в Choe et al. (Choe, JY et al. (2003), J. Exp. Med. Feb 17; 197(4):537-542). Как показано в табл. 16, у мышей, получавших mST2mIL1RacP-mFc после введения IA-CFA, чаще наблюдались умеренные и реже тяжелые степени поражения коленных суставов по сравнению с мышами, получавшими изотипический контроль после введения IA-CFA. Таким образом, этот пример показывает, что антагонисты IL-33 по данному изобретению применимы для облегчения воспалительной боли в суставах.
- 21 034834
Таблица 14 Процент выдерживаемого веса тела на пораженной конечности
| Лечение | Неделя 1 | Неделя 2 | Неделя 3 | Неделя 4 |
| Контрольный раствор натрия хлорида + изотипический контроль | 43,1 ± 1,6 | 42,2 ± 1,0 | 41,1 ± 1,7 | 41,1 ±0,9 |
| Контрольный раствор натрия хлорида + mST2-mlL1 RacP-mFc | 41,5 ± 1,9 | 43,3 ±0,6 | 42,2 ± 1,2 | 38,7 ± 1,4 |
| IA-CFA + изотипический контроль | 24,9 ± 1,4 | 24,2 ± 1,5 | 23,8 ± 1,0 | 23,6 ±2,0 |
| IA-CFA + | 30,1 ±2,1 | 24,4 ± 1,0 | 28,3 ±2,6 | 29,8 ±2,9 |
| mST2-mlL1RacP-mFc |
Таблица 15
Процент времени, затраченного на пораженную конечность
| Лечение | Неделя 1 | Неделя 2 | Неделя 3 | Неделя 4 |
| Контрольный раствор натрия хлорида + изотипический контроль | 96,6 ± 1,0 | 96,6 ±0,6 | 96,2 ± 0,9 | 96,4 ±0,6 |
| Контрольный раствор натрия хлорида + mST2-mlL1 RacP-mFc | 95,5 ±0,8 | 97,2 ±0,3 | 94,3 ± 1,7 | 97,0 ±0,5 |
| IA-CFA + изотипический контроль | 68,4 ± 1,6 | 64,8 ±2,1 | 72,8 ±3,5 | 80,9 ±2,7 |
| IA-CFA + mST2-mlL1 RacP-mFc | 78,9 ±3,6 | 68,5 ±3,1 | 80,9 ±4,2 | 88,0 ±2,7 |
Таблица 16
Балльная оценка гистологической степени тяжести пораженных коленных суставов (% животных)
| Лечение | Минимальная | Легкая | Умеренная | Тяжелая |
| IA-CFA + изотипический контроль | 0 | 0 | 12% | 88% |
| IA-CFA + mST2-mlL1 RacP-mFc | 0 | 0 | 38% | 62% |
Настоящее изобретение не должно быть ограничено в объеме конкретными вариантами его реализации, описанными в настоящем документе. Действительно, различные модификации изобретения в дополнение к описанным в настоящем документе, станут очевидными специалистам в данной области техники из вышеприведенного описания и прилагаемых фигур. Такие модификации претендуют на то, чтобы попадать в объем прилагаемой формулы изобретения.
Claims (38)
1. Антагонист интерлейкина-33 (IL-33), содержащий первый IL-33-связывающий домен (D1), второй IL-33-связывающий домен (D2) и мультимеризующийся домен (М), где
D1 присоединен к N-концу D2 и
D2 присоединен к N-концу М, причем D1 содержит IL-33-связывающий участок аминокислотной последовательности SEQ ID NO:
5, соответствующей ST2 человека,
D2 содержит IL-33-связывающий участок аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7, соответствующей IL-1RAcP человека, и
М содержит Fc-домен иммуноглобулина.
- 22 034834
2. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) человека со значением константы равновесия диссоциации связывания (KD), равной меньше 50 пМ, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 25°C.
3. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) человека со значением константы равновесия диссоциации связывания (KD), равной меньшей 10 пМ, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 37°C.
4. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) обезьяны со значением константы равновесия диссоциации связывания (KD), равным менее 50 пМ, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 25°C.
5. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) обезьяны со значением константы равновесия диссоциации связывания (KD), равным менее 10 пМ, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 37°C.
6. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается интерлейкином 33 (IL-33) мыши со значением константы равновесия диссоциации связывания (KD), равным менее 50 пМ, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 25°C.
7. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывает с интерлейкином 33 (IL-33) мыши со значением константы равновесия диссоциации связывания (KD), равным менее 100 пМ, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 37°C.
8. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) человека со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), равным 40 мин или больше, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 25°C.
9. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) человека со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), равным 500 мин или больше, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 37°C.
10. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) обезьяны со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), равным 50 мин или больше, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 25°C.
11. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) обезьяны со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), равным 60 мин или больше, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 37°C.
12. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) мыши со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), равным 40 мин или больше, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 25°C.
13. Антагонист IL-33 по п.1, отличающийся тем, что антагонист IL-33 связывается с интерлейкином 33 (IL-33) мыши со значением диссоциативного периода полураспада (t1/2), равным 30 мин или больше, как измерено в анализе на основе поверхностного плазмонного резонанса при температуре 37°C.
14. Антагонист IL-33 по любому из пп.1-13, отличающийся тем, что антагонист IL-33 ингибирует IL-33-опосредованную передачу сигнала в клетке, экспрессирующей белок супрессии опухолегенности 2 человека (ST2), с IC50 менее 10 пМ, как измерено в блокирующем биоанализе на основе клеток.
15. Антагонист IL-33 по п.14, отличающийся тем, что антагонист IL-33 ингибирует IL-33опосредованную передачу сигнала в клетке, экспрессирующей ST2 человека с IC50 менее 5 пМ, как измерено в блокирующем биоанализе на основе клеток.
16. Антагонист IL-33 по п.15, отличающийся тем, что антагонист IL-33 ингибирует IL-33опосредованную передачу сигнала в клетке, экспрессирующей ST2 человека с IC50 менее 1,5 пМ, как измерено в блокирующем биоанализе на основе клеток.
17. Антагонист IL-33 по любому из пп.1-16, отличающийся тем, что D1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5.
18. Антагонист IL-33 по любому из пп.1-17, отличающийся тем, что D2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7.
19. Антагонист IL-33 по любому из пп.1-18, отличающийся тем, что М содержит Fc-домен IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
20. Антагонист IL-33 по любому из пп.1-18, отличающийся тем, что М содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9.
21. Антагонист IL-33 по любому из пп.1-18, отличающийся тем, что М содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.
22. Антагонист IL-33 по п.1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3.
23. Антагонист IL-33 по п.22, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3.
24. Антагонист IL-33 по п.1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13.
25. Антагонист IL-33 по п.24, состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 13.
26. Фармацевтическая композиция для лечения воспалительного заболевания или расстройства, опосредованных IL-33, содержащая антагонист IL-33 по любому из пп.1-25, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
- 23 034834
27. Способ лечения воспалительного заболевания или расстройства, опосредованных IL-33, или по меньшей мере одного симптома, связанного с воспалительным заболеванием или расстройством, включающий введение фармацевтической композиции по п.26 пациенту, причем воспалительное заболевание или расстройство облегчается или уменьшается степень его тяжести, продолжительность или частота возникновения либо же облегчается или уменьшается степень тяжести, продолжительность или частота возникновения по меньшей мере одного симптома, связанного с воспалительным заболеванием или расстройством.
28. Способ по п.27, отличающийся тем, что воспалительное заболевание или расстройство выбрано из группы, состоящей из астмы, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), воспалительного заболевания кишечника, рассеянного склероза, артрита и аллергического ринита.
29. Способ по п.28, отличающийся тем, что воспалительным заболеванием или расстройством является астма.
30. Способ по п.29, отличающийся тем, что астма является эозинофильной или неэозинофильной.
31. Способ по любому из пп.28-30, отличающийся тем, что астма является резистентной к стероидам или чувствительной к стероидам.
32. Способ по п.27, отличающийся тем, что воспалительным заболеванием или патологией является атопический дерматит.
33. Способ по п.27, отличающийся тем, что воспалительным заболеванием или расстройством является хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ).
34. Способ по п.33, отличающийся тем, что хроническое обструктивное заболевание легких обусловлено или в некоторой степени вызвано курением сигарет.
35. Способ по любому из пп.27-34, дополнительно включающий введение эффективного количества второго терапевтического агента, подходящего для уменьшения проявлений воспалительного заболевания или расстройства или по меньшей мере одного симптома воспалительного заболевания или расстройства.
36. Способ по п.35, отличающийся тем, что второй терапевтический агент выбран из группы, состоящей из нестероидного противовоспалительного препарата (НПВП), кортикостероида, бронхиального дилятатора, антигистаминного средства, адреналина, противоотечного средства, антагониста тимусного стромального лимфопоэтина (ТСЛП, TSLP), антагониста IL-13, антагониста IL-4, двойного антагониста IL-4/IL-13, антагониста IL-5, антагониста IL-6, антагониста IL-12/23, антагониста IL-22, антагониста IL25, антагониста IL-17, антагониста IL-31, орального ингибитора PDE4 и другого антагониста IL-33 или другого антитела к IL-33.
37. Применение антагониста IL-33 по любому из пп.1-25 для изготовления лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания или расстройства, опосредованных IL-33.
38. Применение по п.37, отличающееся тем, что воспалительное заболевание или расстройство выбрано из группы, состоящей из астмы, аллергии, атопического дерматита, хронического обструктивного заболевания легких (ХОЗЛ), воспалительного заболевания кишечника, рассеянного склероза, артрита и аллергического ринита.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361787121P | 2013-03-15 | 2013-03-15 | |
| US201361819029P | 2013-05-03 | 2013-05-03 | |
| US201361913417P | 2013-12-09 | 2013-12-09 | |
| PCT/US2014/027058 WO2014152195A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-03-14 | Il-33 antagonists and uses thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201591331A1 EA201591331A1 (ru) | 2016-01-29 |
| EA034834B1 true EA034834B1 (ru) | 2020-03-26 |
Family
ID=50513479
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201591331A EA034834B1 (ru) | 2013-03-15 | 2014-03-14 | Антагонисты il-33 и их применение |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US9637535B2 (ru) |
| EP (1) | EP2968454B1 (ru) |
| JP (1) | JP6404314B2 (ru) |
| KR (1) | KR20150127591A (ru) |
| CN (1) | CN105007929B (ru) |
| AU (1) | AU2014240101B2 (ru) |
| CA (1) | CA2904377C (ru) |
| EA (1) | EA034834B1 (ru) |
| HK (1) | HK1220373A1 (ru) |
| IL (1) | IL240393B (ru) |
| MX (1) | MX364591B (ru) |
| WO (1) | WO2014152195A1 (ru) |
Families Citing this family (65)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JO3532B1 (ar) | 2013-03-13 | 2020-07-05 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها |
| AR095196A1 (es) | 2013-03-15 | 2015-09-30 | Regeneron Pharma | Medio de cultivo celular libre de suero |
| WO2014152195A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Il-33 antagonists and uses thereof |
| AU2013400609B9 (en) | 2013-09-13 | 2020-03-05 | Beigene Switzerland Gmbh | Anti-PD1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics |
| WO2015099175A1 (ja) | 2013-12-26 | 2015-07-02 | 田辺三菱製薬株式会社 | ヒト抗ｉｌ－３３中和モノクローナル抗体 |
| RU2019118984A (ru) | 2014-01-10 | 2019-08-06 | Анаптисбайо, Инк. | Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33) |
| US10040859B2 (en) | 2014-04-21 | 2018-08-07 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Methods of treating hemophagocytic lymphohistiocytosis with an IL-33 receptor antibody |
| WO2016000619A1 (en) | 2014-07-03 | 2016-01-07 | Beigene, Ltd. | Anti-pd-l1 antibodies and their use as therapeutics and diagnostics |
| NZ728688A (en) | 2014-07-22 | 2023-06-30 | Cb Therapeutics Inc | Anti-pd-1 antibodies |
| RU2722212C9 (ru) | 2014-08-05 | 2020-07-23 | СиБи ТЕРЕПЬЮТИКС, ИНК. | Анти-pd-l1 антитела |
| EP3218403B1 (en) | 2014-11-10 | 2020-05-13 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
| US20160168640A1 (en) | 2014-11-10 | 2016-06-16 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for il-33-mediated disorders |
| EP3265493B1 (en) | 2015-03-02 | 2024-01-10 | 180 Therapeutics LP | Method of treating a localized fibrotic disorder using an il-33 antagonist |
| TW202340452A (zh) | 2015-08-04 | 2023-10-16 | 美商再生元醫藥公司 | 補充牛磺酸之細胞培養基及用法 |
| US10005834B2 (en) * | 2015-10-06 | 2018-06-26 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Biomarkers related to interleukin-33 (IL-33)-mediated diseases and uses thereof |
| WO2017087838A2 (en) * | 2015-11-19 | 2017-05-26 | George Mason University | Dual inhibitory action peptidomimetic inhibitor for il-33 and il-1beta |
| BR112018014247A2 (pt) * | 2016-01-14 | 2018-12-18 | Anaptysbio Inc | inibição de reação alérgica usando um inibidor il-33 |
| SG11201808693WA (en) | 2016-04-27 | 2018-11-29 | Pfizer | Anti-il-33 antibodies, compositions, methods and uses thereof |
| CN109475536B (zh) | 2016-07-05 | 2022-05-27 | 百济神州有限公司 | 用于治疗癌症的PD-l拮抗剂和RAF抑制剂的组合 |
| CN106198953B (zh) * | 2016-07-19 | 2018-06-29 | 重庆医科大学 | 白介素-33在制备诊断肺源性急性肺损伤试剂盒中的用途 |
| EP4353747A2 (en) | 2016-08-19 | 2024-04-17 | BeiGene Switzerland GmbH | Combination of zanubrutinib with an anti-cd20 or an anti-pd-1 antibody for use in treating cancer |
| WO2018039499A1 (en) | 2016-08-24 | 2018-03-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Host cell protein modification |
| TWI784988B (zh) | 2016-12-01 | 2022-12-01 | 美商再生元醫藥公司 | 治療發炎症狀的方法 |
| WO2018137681A1 (en) | 2017-01-25 | 2018-08-02 | Beigene, Ltd. | Crystalline forms of (s) -7- (1- (but-2-ynoyl) piperidin-4-yl) -2- (4-phenoxyphenyl) -4, 5, 6, 7-tetrahy dropyrazolo [1, 5-a] pyrimidine-3-carboxamide, preparation, and uses thereof |
| RU2771485C2 (ru) | 2017-02-10 | 2022-05-04 | Дженентек, Инк. | Антитела против триптазы, их композиции и применения |
| US10093731B2 (en) | 2017-02-24 | 2018-10-09 | Kindred Biosciences, Inc. | Anti-IL31 antibodies for veterinary use |
| EP3957752A3 (en) * | 2017-04-13 | 2022-06-15 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Treatment and inhibition of inflammatory lung diseases in patients having risk alleles in the genes encoding il33 and il1rl1 |
| US11248054B2 (en) | 2017-06-12 | 2022-02-15 | Bluefin Biomedicine, Inc. | Anti-IL1RAP antibodies and antibody drug conjugates |
| US11597768B2 (en) | 2017-06-26 | 2023-03-07 | Beigene, Ltd. | Immunotherapy for hepatocellular carcinoma |
| TW201934570A (zh) | 2017-07-06 | 2019-09-01 | 美商雷傑納榮製藥公司 | 供製備糖蛋白之細胞培養方法 |
| MX2020002086A (es) | 2017-08-31 | 2020-10-28 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Agente terapeutico que contiene antagonista de il-33 para endometriosis. |
| CN111801334B (zh) | 2017-11-29 | 2023-06-09 | 百济神州瑞士有限责任公司 | 使用包含btk抑制剂的组合治疗惰性或侵袭性b-细胞淋巴瘤 |
| MX2020006639A (es) | 2017-12-22 | 2020-09-14 | Regeneron Pharma | Sistema y metodo para caracterizar las impurezas de un producto farmaceutico. |
| EP3746471A1 (en) | 2018-01-31 | 2020-12-09 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | System and method for characterizing size and charge variant drug product impurities |
| TW202311746A (zh) | 2018-02-02 | 2023-03-16 | 美商再生元醫藥公司 | 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法 |
| CA3088557C (en) | 2018-02-09 | 2024-02-27 | Genentech, Inc. | Therapeutic and diagnostic methods for mast cell-mediated inflammatory diseases |
| MX2020008988A (es) | 2018-02-28 | 2020-09-28 | Regeneron Pharma | Sistemas y metodos para la identificacion de contaminantes virales. |
| EP4317959A3 (en) | 2018-03-19 | 2024-03-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Microchip capillary electrophoresis assays and reagents |
| IL307286A (en) | 2018-04-11 | 2023-11-01 | Regeneron Pharma | Methods and preparations for quantification of IL-33 |
| TW202016125A (zh) | 2018-05-10 | 2020-05-01 | 美商再生元醫藥公司 | 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法 |
| MX2021002279A (es) | 2018-08-27 | 2021-05-27 | Regeneron Pharma | Uso de espectroscopia raman en la purificacion corriente abajo. |
| CN112601963A (zh) | 2018-08-30 | 2021-04-02 | 瑞泽恩制药公司 | 用于表征蛋白质复合物的方法 |
| MX2021008589A (es) | 2019-01-16 | 2021-08-11 | Regeneron Pharma | Metodos para identificar tioles libres en proteinas. |
| CN113785203A (zh) | 2019-05-13 | 2021-12-10 | 里珍纳龙药品有限公司 | 改进的竞争性配体结合测定 |
| MX2022003438A (es) | 2019-09-24 | 2022-04-19 | Regeneron Pharma | Sistemas y metodos para uso y regeneracion de cromatografia. |
| BR112022009974A2 (pt) | 2019-11-25 | 2022-08-16 | Regeneron Pharma | Métodos de produção de um polímero ou micropartículas revestidas com polímero, para produzir microesferas poliméricas ou revestidas com polímero e para produzir micropartículas, composição de liberação sustentada, micropartículas, e, composição farmacêutica |
| US11835527B2 (en) | 2020-01-21 | 2023-12-05 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Deglycosylation methods for electrophoresis of glycosylated proteins |
| AU2021236306A1 (en) | 2020-03-13 | 2022-09-15 | Genentech, Inc. | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
| WO2021180858A1 (en) | 2020-03-13 | 2021-09-16 | Medimmune Limited | Therapeutic methods for the treatment of subjects with risk alelles in il33 |
| AU2021253117A1 (en) | 2020-04-06 | 2022-12-01 | Medimmune Limited | Treating acute respiratory distress syndrome with IL-33 axis binding antagonists |
| IL300828A (en) | 2020-08-31 | 2023-04-01 | Regeneron Pharma | Asparagine feeding strategies to improve cell culture performance and reduce asparagine sequence variants |
| EP4251128A1 (en) | 2020-11-25 | 2023-10-04 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Sustained release formulations using non-aqueous membrane emulsification |
| US20220257707A1 (en) | 2020-12-17 | 2022-08-18 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Fabrication of protein-encapsulating microgels |
| CN116761880A (zh) | 2021-01-20 | 2023-09-15 | 瑞泽恩制药公司 | 改进细胞培养物中的蛋白质滴度的方法 |
| EP4302098A1 (en) | 2021-03-03 | 2024-01-10 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Systems and methods for quantifying and modifying protein viscosity |
| CA3211302A1 (en) | 2021-03-26 | 2022-09-29 | Ross Kenyon | Methods and systems for developing mixing protocols |
| TW202314240A (zh) | 2021-06-01 | 2023-04-01 | 美商再生元醫藥公司 | 微晶片毛細管電泳分析及試劑 |
| WO2023009975A2 (en) * | 2021-07-24 | 2023-02-02 | Anwita Biosciences, Inc. | Fusion proteins comprising suppression of tumorigenicity 2 or interleukin-33, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications |
| TW202326138A (zh) | 2021-09-08 | 2023-07-01 | 美商再生元醫藥公司 | 用於定量抗體及其他含Ｆｃ蛋白之高通量及基於質譜之方法 |
| WO2023044139A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-23 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of controlling antibody heterogeneity |
| US20230116199A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Systems and methods of ph modeling and control |
| CA3230985A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Ross BROWNE | Ph meter calibration and correction |
| US20230129265A1 (en) | 2021-10-26 | 2023-04-27 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Systems and methods for generating laboratory water and distributing laboratory water at different temperatures |
| WO2023086807A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | Genentech, Inc. | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
| US20230296559A1 (en) | 2022-03-18 | 2023-09-21 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods and systems for analyzing polypeptide variants |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5576191A (en) * | 1994-06-17 | 1996-11-19 | Immunex Corporation | Cytokine that binds ST2 |
| US20070087411A1 (en) * | 2005-10-19 | 2007-04-19 | Prerna Sharma | Monomeric self-associating fusion polypeptides and therapeutic uses thereof |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US1000056A (en) | 1910-11-03 | 1911-08-08 | Carlos Van Bergh | Threshing-machine. |
| US1001164A (en) | 1911-06-09 | 1911-08-22 | Arthur W Porter | Cotton-sweep. |
| IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
| JP4124480B2 (ja) | 1991-06-14 | 2008-07-23 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 免疫グロブリン変異体 |
| AU2003299441A1 (en) | 2002-12-19 | 2004-07-14 | Centre National De La Recherche Scientifique - Cnrs | Nf-hev compositions and methods of use |
| NZ549040A (en) * | 2004-02-17 | 2009-07-31 | Schering Corp | Use for interleukin-33 (IL33) and the IL-33 receptor complex |
| US8865645B2 (en) * | 2006-05-24 | 2014-10-21 | Biogen Idec Ma Inc. | Method of treating lung fibrosis using ST2 polypeptide |
| AT502353B1 (de) | 2006-06-29 | 2007-07-15 | Avl List Gmbh | Verfahren und vorrichtung zur konditionierung eines o2-hältigen gases |
| US7560530B1 (en) | 2006-07-20 | 2009-07-14 | Schering Corporation | IL-33 receptor |
| US8119771B2 (en) * | 2007-04-26 | 2012-02-21 | The Provost, Fellow and Scholars of the College of the Holy and Undivided Trinity of Queen Elizabeth, Near Dublin | Products for altering IL-33 activity and methods thereof |
| WO2008144610A1 (en) | 2007-05-18 | 2008-11-27 | Medimmune, Llc | Il-33 in inflammatory disease |
| EP2211905A1 (en) | 2007-10-26 | 2010-08-04 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Inhibitors of caspase i-dependent cytokines in the treatment of neurodegenerative disorders |
| AU2009231733B2 (en) * | 2008-03-31 | 2015-12-24 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for treating and diagnosing asthma |
| WO2011031600A1 (en) | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Schering Corporation | Use of il-33 antagonists to treat fibrotic disease |
| US9090694B2 (en) | 2012-04-30 | 2015-07-28 | Janssen Biotech, Inc. | ST2L antibody antagonists |
| AR091069A1 (es) | 2012-05-18 | 2014-12-30 | Amgen Inc | Proteinas de union a antigeno dirigidas contra el receptor st2 |
| JO3532B1 (ar) | 2013-03-13 | 2020-07-05 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها |
| WO2014152195A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Il-33 antagonists and uses thereof |
| WO2015099175A1 (ja) | 2013-12-26 | 2015-07-02 | 田辺三菱製薬株式会社 | ヒト抗ｉｌ－３３中和モノクローナル抗体 |
| RU2019118984A (ru) | 2014-01-10 | 2019-08-06 | Анаптисбайо, Инк. | Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33) |
-
2014
- 2014-03-14 WO PCT/US2014/027058 patent/WO2014152195A1/en active Application Filing
- 2014-03-14 US US14/210,599 patent/US9637535B2/en active Active
- 2014-03-14 JP JP2016502323A patent/JP6404314B2/ja active Active
- 2014-03-14 CN CN201480013599.0A patent/CN105007929B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2014-03-14 KR KR1020157022680A patent/KR20150127591A/ko active IP Right Grant
- 2014-03-14 EA EA201591331A patent/EA034834B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-03-14 AU AU2014240101A patent/AU2014240101B2/en active Active
- 2014-03-14 CA CA2904377A patent/CA2904377C/en active Active
- 2014-03-14 MX MX2015011408A patent/MX364591B/es active IP Right Grant
- 2014-03-14 EP EP14718264.6A patent/EP2968454B1/en active Active
-
2015
- 2015-08-06 IL IL240393A patent/IL240393B/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-07-18 HK HK16108449.2A patent/HK1220373A1/zh unknown
-
2017
- 2017-03-20 US US15/463,910 patent/US10011647B2/en active Active
-
2018
- 2018-05-29 US US15/991,763 patent/US10774128B2/en active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5576191A (en) * | 1994-06-17 | 1996-11-19 | Immunex Corporation | Cytokine that binds ST2 |
| US20070087411A1 (en) * | 2005-10-19 | 2007-04-19 | Prerna Sharma | Monomeric self-associating fusion polypeptides and therapeutic uses thereof |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| ALI, S. ; NGUYEN, D.Q. ; FALK, W. ; MARTIN, M.U.: "Caspase 3 inactivates biologically active full length interleukin-33 as a classical cytokine but does not prohibit nuclear translocation", BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 391, no. 3, 15 January 2010 (2010-01-15), AMSTERDAM, NL, pages 1512 - 1516, XP026854479, ISSN: 0006-291X, DOI: 10.1016/j.bbrc.2009.12.107 * |
| FOO Y LIEW, NICK I PITMAN & IAIN B MCINNES: "Disease-associated functions of IL-33: the new kid in the IL-1 family.", NATURE REVIEWS. IMMUNOLOGY, NATURE PUBLISHING GROUP, UNITED KINGDOM, vol. 10, no. 2, 1 February 2010 (2010-02-01), United Kingdom, pages 103 - 110, XP002658775, ISSN: 1474-1741, DOI: 10.1038/nri2692 * |
| H. HAYAKAWA, M. HAYAKAWA, A. KUME, S.-I. TOMINAGA: "Soluble ST2 Blocks Interleukin-33 Signaling in Allergic Airway Inflammation", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, AMERICAN SOCIETY FOR BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, vol. 282, no. 36, 1 January 2007 (2007-01-01), pages 26369 - 26380, XP055030354, ISSN: 00219258, DOI: 10.1074/jbc.M704916200 * |
| KWANGWON HONG, YOUNGMIN LEE, SIYOUNG LEE, SUNGNOH HONG, SUYOUNG BAE, JAEWOO HONG, JIDA CHOI, HYUNJHUNG JHUN, AREUM KWAK, EUNSOM KI: "The inhibitory function of Fc-ST2 depends on cell type; IL-1RAcP and ST2 are necessary but insufficient for IL-33 activity", IMMUNOLOGIC RESEARCH, HUMANA PRESS, vol. 56, no. 1, 1 May 2013 (2013-05-01), pages 122 - 130, XP055123041, ISSN: 0257277X, DOI: 10.1007/s12026-013-8388-9 * |
| L�HNING M. ET AL.: "T1/ST2 is preferentially expressed on murine Th2 cells, independent of IL-4, IL-5, and IL-10, and important for Th2 effector function.", PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES, NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES, vol. 95., no. 12., 1 June 1998 (1998-06-01), pages 6930 - 6935., XP002101454, ISSN: 0027-8424, DOI: 10.1073/pnas.95.12.6930 * |
| PALMER GABY; GABAY CEM: "Interleukin-33 biology with potential insights into human diseases", NATURE REVIEWS. RHEUMATOLOGY, NATURE PUBL. GROUP, USA, vol. 7, no. 6, 1 June 2011 (2011-06-01), USA, pages 321 - 329, XP009178467, ISSN: 1759-4804, DOI: 10.1038/nrrheum.2011.53 * |
| PALMER, G. ; LIPSKY, B.P. ; SMITHGALL, M.D. ; MEININGER, D. ; SIU, S. ; TALABOT-AYER, D. ; GABAY, C. ; SMITH, D.E.: "The IL-1 receptor accessory protein (AcP) is required for IL-33 signaling and soluble AcP enhances the ability of soluble ST2 to inhibit IL-33", CYTOKINE, ACADEMIC PRESS LTD, PHILADELPHIA, PA, US, vol. 42, no. 3, 1 June 2008 (2008-06-01), US, pages 358 - 364, XP022696634, ISSN: 1043-4666, DOI: 10.1016/j.cyto.2008.03.008 * |
| SHAFAQAT ALI: "Characterization of Interleukin-33 and IL-33 Receptor Complex", DISSERTATION, 1 July 2009 (2009-07-01), pages 1 - 126, XP009169477 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2904377A1 (en) | 2014-09-25 |
| CA2904377C (en) | 2021-07-13 |
| JP6404314B2 (ja) | 2018-10-10 |
| AU2014240101B2 (en) | 2018-05-17 |
| NZ712651A (en) | 2021-04-30 |
| CN105007929A (zh) | 2015-10-28 |
| US20180265567A1 (en) | 2018-09-20 |
| EA201591331A1 (ru) | 2016-01-29 |
| HK1220373A1 (zh) | 2017-05-05 |
| EP2968454B1 (en) | 2019-02-13 |
| IL240393A0 (en) | 2015-09-24 |
| US10011647B2 (en) | 2018-07-03 |
| AU2014240101A1 (en) | 2015-10-15 |
| IL240393B (en) | 2019-03-31 |
| US20170204158A1 (en) | 2017-07-20 |
| MX364591B (es) | 2019-05-02 |
| US10774128B2 (en) | 2020-09-15 |
| WO2014152195A1 (en) | 2014-09-25 |
| KR20150127591A (ko) | 2015-11-17 |
| JP2016515130A (ja) | 2016-05-26 |
| EP2968454A1 (en) | 2016-01-20 |
| US20140271642A1 (en) | 2014-09-18 |
| MX2015011408A (es) | 2016-04-27 |
| US9637535B2 (en) | 2017-05-02 |
| CN105007929B (zh) | 2019-05-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10774128B2 (en) | IL-33 antagonists and uses thereof | |
| US20210079105A1 (en) | Methods of Treating Inflammatory Conditions | |
| US20180251542A1 (en) | Anti-IL-33 Antibodies and Uses Thereof | |
| JP6916319B2 (ja) | 抗ｉｌ−２５抗体およびその使用 | |
| NZ712651B2 (en) | Il-33 antagonists and uses thereof | |
| Yin | Pathogenicity of functional autoantibodies against angiotensin II receptor type 1 (AT1R) in experimental systemic sclerosis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU |