EA031376B1 - Спироциклические ингибиторы катепсина с - Google Patents

Спироциклические ингибиторы катепсина с Download PDF

Info

Publication number
EA031376B1
EA031376B1 EA201790576A EA201790576A EA031376B1 EA 031376 B1 EA031376 B1 EA 031376B1 EA 201790576 A EA201790576 A EA 201790576A EA 201790576 A EA201790576 A EA 201790576A EA 031376 B1 EA031376 B1 EA 031376B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
formula
compound
acceptable salt
pharmaceutically acceptable
mmol
Prior art date
Application number
EA201790576A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201790576A1 (ru
Inventor
Виктор Винтоняк
Маттиас Грауэрт
Марк Грундль
Александер Пауч
Original Assignee
Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх filed Critical Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх
Publication of EA201790576A1 publication Critical patent/EA201790576A1/ru
Publication of EA031376B1 publication Critical patent/EA031376B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4355—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/438—The ring being spiro-condensed with carbocyclic or heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D491/20—Spiro-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Abstract

Изобретение относится к соединению формулы Iгде A и Cy имеют одно из значений, указанных в описании, и к их применению в качестве ингибиторов катепсина C, к содержащим его фармацевтическим композициям и к способам его применения в качестве средств для лечения и/или предупреждения заболеваний, связанных с активностью дипептидилпептидазы I, например респираторных заболеваний.

Description

Изобретение относится к соединению формулы I о
031376 Bl
где А и Су имеют одно из значений, указанных в описании, и к их применению в качестве ингибиторов катепсина С, к содержащим его фармацевтическим композициям и к способам его применения в качестве средств для лечения и/или предупреждения заболеваний, связанных с активностью дипептидилпептидазы I, например респираторных заболеваний.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к соединению формулы I
в которой А и Су имеют одно из значений, указанных в описании, и к их применению в качестве ингибиторов катепсина С, к содержащим его фармацевтическим композициям и к способам его применения в качестве средств для лечения и/или предупреждения заболеваний, связанных с активностью дипептидилпептидазы I, например, респираторных заболеваний.
Предпосылки создания
В WO 2004110988 раскрыты пептидилнитрильные ингибиторы в качестве ингибиторов дипептидилпептидазы I (DPPI) для лечения ряда заболеваний.
В WO 2009074829 и WO 2010142985 также раскрыты пептидилнитрильные ингибиторы в качестве ингибиторов дипептидилпептидазы I (DPPI) для лечения астмы, ХОЗЛ или аллергического ринита.
В WO 2013041497 раскрыты замещенные Ы-[1-циано-2-(фенил)этил]-2-азабицикло[2.2.1]гептан-3карбоксамиды в качестве ингибиторов дипептидилпептидазы I (DPPI) для лечения, например, респираторных заболеваний.
Краткое изложение сущности изобретения
Дипептидиламинопептидаза I (DPPI или катепсин С; ЕС3.4.141) является лизосомальной цистеинпротеазой, которая способна удалять дипептиды из амино-конца белковых субстратов. DPPI впервые была открыта Гутманом и Фрутоном в 1948 г. (J. Biol. Chem 174: 851-858, 1948). кДНК фермента человека была описана в 1995 году (Paris и др.; FEBS Lett 369: 326-330, 1995). Белок DPPI перерабатывается в зрелый протеолитически активный фермент, состоящий из тяжелой цепи, легкой цепи и пропептида, который остается связанным с активным ферментом (Wolters и др.; J. Biol. Chem. 273: 15514-15520, 1998). В то время как другие цистеинкатепсины (например, В, Н, K, L и S) являются мономерами, DPPI представляет собой 200-кДа тетрамер с 4 идентичными субъединицами, каждая из которых состоит из 3 различных полипептидных цепей. DPPI конститутивно экспрессируется во многих тканях, причем наиболее высокие уровни наблюдаются в легких, почках, печени и селезенке (Kominami и др.; Biol. Chem. Hoppe Seyler 373: 367-373, 1992). В соответствии со своей ролью в активации серинпротеаз из гемопоэтических клеток, DPPI также относительно сильно экспрессируется в нейтрофилах, цитотоксических лимфоцитах, естественных клетках-киллерах, альвеолярных макрофагах и тучных клетках. Недавно полученные данные исследований DPPI-дефицитных мышей наводят на мысль о том, что, помимо того, что DPPI является важным ферментом в деградации лизосомального белка, DPPI также функционирует в качестве ключевого фермента в активации серинпротеаз в гранулах в цитотоксических Т-лимфоцитах и естественных клетках-киллерах (гранзимы А и В; Pham и др.; Proc. Nat. Acad. Sci 96: 8627-8632, 1999), тучных клетках (химаза и триптаза; Wolter и др.; J Biol. Chem. 276: 18551-18556, 2001) и нейтрофилах (катепсин G, эластаза и протеиназа 3; Adkison и др.; J Clin. Invest. 109: 363.371, 2002). После активации, эти протеазы способны разлагать различные компоненты внеклеточного матрикса, что может привести к повреждению тканей и хроническому воспалению.
Таким образом, ингибиторы катепсина С потенциально могут быть пригодными лекарственными средствами для лечения воспалительных заболеваний, при которых главную роль играют нейтрофилы, таких как хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), эмфизема легких, астма, рассеянный склероз и муковисцидоз (Guay и др.; Curr. Topics Med. Chem. 10: 708-716, 2010; Laine and Busch-Petersen; Expert Opin. Ther. Patents 20: 497-506, 2010). Ревматоидный артрит также является еще одним хроническим воспалительным заболеванием, при котором, по всей видимости, DPPI имеют значение. Нейтрофилы привлекаются к месту воспаления сустава и высвобождают катепсин G, эластазу и протеиназу 3, протеазы, которые, как полагают, ответственны за разрушение хряща, связанное с ревматоидным артритом. Действительно, DPPI-дефицитные мыши были защищены от острого артрита, вызванного пассивным переносом моноклональных антител против коллагена II типа (Adkison и др.; J Clin. Invest. 109: 363.371, 2002).
Учитывая роль, которую DPPI играет в активации определенных провоспалительных серинпротеаз, представляется целесообразным получить соединения, которые ингибируют ее активность, задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы получить соединения, ингибирующие ее активность, тем самым ингибирующие активность нижерасположенной серинпротеазы.
Неожиданным образом было обнаружено, что спироциклические соединения в соответствии с настоящим изобретением обладают сильной активностью в отношении катепсина С (DPPI), предпочтительно проявляющей ингибирование DPPI IC50 [мкМ] < 0.0050, особенно предпочтительно < 0.0030.
Кроме того, соединения в соответствии с настоящим изобретением обнаруживают нижеследующие
- 1 031376 способности, благоприятные для их фармакологической эффективности:
высокая клеточная активность, например, ингибирование процессинга эластазы нейтрофилов в клеточной линии U937, предпочтительно показывающая IC5o [мкМ] <0.5, особенно предпочтительно <0.003;
высокая селективность в отношении других катепсинов, например катепсина K; и в целом оптимальные фармакокинетические свойства, например метаболическая стабильность, предпочтительно демонстрирующая стабильность in vitro при микросомальных инкубированиях печени человека в 11/2 [мин] >110, особенно предпочтительно >120.
Также неожиданно было обнаружено, что соединения в соответствии с настоящим изобретением проявляют высокое ингибирование активности эластазы нейтрофилов в BALF (жидкость бронхоальвеолярного лаважа) лизате клеток в мышиной модели захвата цели.
Помимо этого удивительным образом было обнаружено, что спироциклические соединения в соответствии с настоящим изобретением образуют дополнительный солевой мостик к Glu275 катепсина С, который приводит к высокой ферментативной и клеточной активности этого класса соединений. Это дополнительное взаимодействие спироциклического амина (например, спиро-азетидина в примере 11 и спиро-пирролидина в примере 16) было подтверждено при помощи экспериментов совместной кристаллизации белка катепсин С с примерами 11 и 16. В обоих случаях основной атом азота образует солевой мостик к Glu275.
Подробное описание изобретения
Неожиданно было обнаружено, что указанная выше задача решается при помощи соединений формулы I в соответствии с настоящим изобретением.
Поэтому настоящее изобретение относится к соединению формулы I или к его фармацевтически приемлемой соли
в которой Су означает
А означает
где W выбран из группы, включающей СН и N;
X выбран из группы, включающей СН и N;
Y выбран из группы, включающей СН и N;
при условии, что максимум один из W, X и Y может быть N;
D-E выбран из группы, включающей N(R2)-C(O), CH2CH2, С(0)-0 и СН2-О;
R2 выбран из группы, включающей Н и С1-3алкил;
R1 выбран из группы, включающей Н, С!-3алкил, СН3ОСН2СН2-, оксетанил, тетрагидрофуранил, 4тетрагидропиранил и 3-тетрагидропиранил;
i означает 1, 2 или 3;
j означает 1, 2 или 3;
при условии, что сумма i+j равна 2, 3 или 4.
Предпочтительные варианты осуществления
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем Су означает
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их приемлемая соль, причем Су означает
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их приемлемая соль, причем R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их приемлемая соль, причем R2 выбран из группы, включающей Н и СН3.
фармацевтически фармацевтически фармацевтически
- 2 031376
Предпочтительными являются указанные приемлемая соль, причем R2 означает Н.
Предпочтительными являются указанные приемлемая соль, причем R2 означает СН3.
Предпочтительными являются указанные приемлемая соль, причем D-E означает СН2-О.
Предпочтительными являются указанные выше соединения выше соединения выше соединения выше соединения формулы I или их формулы I или их формулы I или их формулы I или их фармацевтически фармацевтически фармацевтически фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3 и оксетанил;
R2 означает СН3;
W выбран из группы, включающей СН и N;
X выбран из группы, включающей СН и N;
Y означает СН;
при условии, что максимум один из W и X может быть N;
D-E выбран из группы, включающей N(R2)-C(O), CH2CH2, С(0)-0 и СН2-О;
i означает 1 или 2;
j означает 1 или 2;
при условии, что сумма i+j равна 2, 3 или 4.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их приемлемая соль, причем А выбирают из группы, включающей формулы А1-А14:
фармацевтически
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их приемлемая соль, причем А выбран из группы, включающей А2-А7, А10, А13 и А14:
фармацевтически
- 3 031376
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы приемлемая соль, причем А выбран из группы, включающей А2 и А13 или их фармацевтически
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы приемлемая соль, причем А означает группу формулы А2.1 или их фармацевтически
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы приемлемая соль, причем А означает группу формулы А13.1 или их фармацевтически
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I, выбранные из группы, включающей примеры 1, 5, 8, 10, 12, 13, 14, 19, 22-25 и 27.
- 4 031376
н ° (γ nXC° 0 Пр. 22 ° ч ) F >ССО Пр.23
н 0 ρΛΛγΝγΧ ° Πρ.24 Ο Πρ. 25
Πρ. 27
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем R1 выбран из группы, включающей Н и СН3.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацев- 5 031376 тически приемлемая соль, причем R1 означает оксетанил.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3 и оксетанил;
R2 выбран из группы, включающей Н и СН3-.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н и СН3;
R2 выбран из группы, включающей Н и СН3.
Предпочтительными являются указанные выше соединения приемлемая соль, причем D-E выбран из группы, включающей СН2-О, С(0)-0 и N(R2)-C(O).
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем D-E выбран из группы, включающей СН2-0 и С(О)-О.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически формулы или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3 и оксетанил;
R2 выбран из группы, включающей Н и СН3.
D-E выбран из группы, включающей СН2-О, С(0)-0 и N(R2)-C(O).
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3, оксетанил;
D-E выбран из группы, включающей СН2-0 и С(О)-О.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей оксетанил;
D-E выбран из группы, включающей СН2-0 и С(О)-О.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем W означает СН;
X означает СН;
Y означает СН.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем W означает СН; X означает N; Y означает СН.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем W означает N; X означает СН; Y означает СН.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем W означает СН; X означает СН; Y означает N.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил;
R2 выбран из группы, включающей Н и СН3-;
D-E выбран из группы, включающей СН2-О, С(0)-0 и N(R2)-C(0);
W означает СН;
X означает СН;
Y означает СН.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацев тически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил;
D-E выбран из группы, включающей СН2-О и С(О)-О;
W означает СН;
X означает СН;
Y означает СН.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически
- 6 031376 приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил;
R2 выбран из группы, включающей Н и СН3-;
D-E выбран из группы, включающей СН2-О, С(0)-0 и N(R2)-C(O);
W означает N;
X означает СН;
Y означает СН.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил;
D-E выбран из группы, включающей СН2-0 и С(О)-О;
W означает N;
X означает СН;
Y означает СН.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил;
R2 выбран из группы, включающей Н и СН3-;
D-E выбран из группы, включающей СН2-О, С(0)-0 и N(R2)-C(O);
W означает СН;
X означает N;
Y означает СН.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил;
D-E выбран из группы, включающей СН2-0 и С(О)-О;
W означает СН;
X означает N;
Y означает СН.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил;
R2 выбран из группы, включающей Н и СН3-;
D-E выбран из группы, включающей СН2-О, С(0)-0 и N(R2)-C(0);
W означает СН;
X означает СН;
Y означает N.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем
R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил;
D-E выбран из группы, включающей СН2-0 и С(О)-О;
W означает СН;
X означает СН;
Y означает N.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем А выбран из группы, включающей А2, A3, А4, А5, А6, А7, А8, А9, А10, A11, A12, А13 и А14.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем А выбран из группы, включающей А1, А2, A3, А4, А6, А7, А9, А10, А13 и А14.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем А выбран из А4, А5, А6, А7 А8, А9 и А14.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем А выбран из группы, включающей А10, A11 и А12.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем А выбран из группы, включающей А2, A3, А9, А13 и А14.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем А выбран из группы, включающей А2, A3 и А13.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем А означает А2.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем А означает А13.
- 7 031376
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем i означает 2 и j означает 1.
Предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем i означает 1 и j означает 1.
Особенно предпочтительными являются указанные выше соединения формулы I или их фармацевтически приемлемая соль, причем i означает 2 и j означает 2.
Предпочтительными являются соединения формулы I, где соединения выбирают из группы, включающей примеры 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 26 и 27.
Любое и каждое из определений R1, R2, Су, A, D, E, W, X, Y, i и j могут быть объединены друг с другом.
Другим вариантом настоящего изобретения является соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства.
Другим вариантом настоящего изобретения является соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства для лечения астмы и аллергических заболеваний, желудочно-кишечных воспалительных заболеваний, гломерулонефрита, эозинофильных заболеваний, хронического обструктивного заболевания легких, инфицирования патогенными микробами, ревматоидного артрита, нейтрофильных заболеваний, муковисцидоза (CF), некистозного фиброза, идиопатического легочного фиброза, бронхоэктаза, ANCA-ассоциированного васкулита, рака легких, эмфиземы, хронического бронхита, острого повреждения лёгких (ALI), острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), лёгочной гипертензии, лёгочной артериальной гипертензии (РАН) и дефицита альфа-1-антитрипсина (AATD), ожирения и связанного воспаления, резистентности к инсулину, диабетов, жировой дистрофии печени и стеатоза печени.
Предпочтительным является соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства для лечения астмы и аллергических заболеваний, желудочно-кишечных воспалительных заболеваний, эозинофильных заболеваний, хронического обструктивного заболевания легких, эмфиземы, инфицирования патогенными микробами, ревматоидного артрита и атеросклероза.
Особенно предпочтительным является соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства для лечения хронического обструктивного заболевания легких и эмфиземы.
Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что она содержит одно или несколько соединений формулы или его фармацевтически активную соль.
Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является способ лечения или предупреждения заболеваний, в которых терапевтическое преимущество имеют ингибиторы активности DPPI, причем способ включает введение терапевтически или профилактически эффективного количества соединений формулы 1 нуждающемуся в этом пациенту.
Другим вариантом осуществления настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая дополнительно к соединению формулы I, фармацевтически активное соединение, выбранное из группы, включающей бетамиметики, антихолинергические средства, кортикостероиды, Ингибиторы PDE4, антагонисты LTD4, ингибиторы EGFR, ингибиторы CRTH2, ингибиторы 5 LO, антагонисты гистаминовых рецепторов, антагонисты CCR9 и ингибиторы SYK, ингибиторы NE, ингибиторы ММР9 и ингибиторы ММР12, а также комбинации из двух или трех активных веществ.
Используемые термины и определения
Терминам, которые не определены в данном изобретении особым образом, следует придавать значения, которые бы придал им специалист в данной области техники с учетом описания и контекста. Однако если не указано иное, то при использовании в описании, приведенные ниже термины имеют указанные значения и используются следующие условные обозначения.
В группах, радикалах или фрагментах, определенных ниже, число атомов углерода часто указано перед группой, например, С!-6алкил означает алкильную группу или алкильный радикал, который содержит от 1 до 6 атомов углерода.
Как правило, в простых группах, таких как НО, H2N, S(O), S(O)2, NC (циано), НООС, F3C или подобных, специалист в данной области техники может определить место (места) присоединения радикала к молекуле с учетом свободных валентностей самой группы. В сложных группах, содержащих две или несколько подгрупп, последняя названная подгруппа является местом присоединения радикала, например, заместитель арил-С1-4алкил- означает арильную группу, которая присоединена к С1-4алкильной группе, последняя из которых присоединена к ядру или к группе, к которой присоединен заместитель.
Альтернативно * в рамках химического структурного элемента указывает место связывания, т.е. место присоединения.
В случае если соединение в соответствии с настоящим изобретением описано с помощью химического названия и в виде формулы, то в случае каких-либо различий определяющей является формула. Знак звездочки можно использовать в субформулах для обозначения связи, которая соединена с ядром
- 8 031376 молекулы, как это определено.
Многие из следующих терминов могут быть неоднократно использованы в определении формулы или группы и в каждом случае имеют одно из значений, указанных выше, независимо друг от друга.
Используемый в данном изобретении термин замещенный означает, что любой один или несколько атомов водорода на обозначенном атоме заменены на представитель, выбранный из указанной группы, при условии, что нормальная валентность обозначенного атома не превышена, и что замещение приводит к стабильному соединению.
Используемые в данном изобретении выражения предотвращение, профилактика, профилактическое лечение или предупредительное лечение следует понимать как синонимы и в том смысле, что риск развития патологического состояния, указанного выше в настоящем изобретении, снижается, особенно у пациента, для которого существует повышенная опасность возникновения указанных состояний или соответствующего анамнеза, например, повышенная опасность развития метаболического нарушения, такого как диабет или ожирение, или другого нарушения, указанного в настоящем изобретении. Таким образом, выражение предотвращение заболевания, используемое в настоящем изобретении, означает лечение и уход за индивидуумом, для которого существует опасность развития заболевания, до появления клинических симптомов заболевания. Целью предотвращения является борьба с развитием заболевания, патологического состояния или нарушения, и оно включает введение активных соединений для предотвращения или задержки появления симптомов или осложнений, и для предотвращения или задержки развития связанных с ними заболеваний, состояний или расстройств. Успех указанного предупредительного лечения отражен статистически в уменьшении частоты возникновения указанного патологического состояния в группе пациентов, для которых существует опасность возникновения этого патологического состояния, по сравнению с аналогичной группой пациентов, не подвергающихся предупредительному лечению.
Выражение лечение или терапия означает терапевтическое лечение пациентов, у которых уже развилось одно или большее количество указанных патологических состояний в явной, острой или хронической форме, включая симптоматическое лечение, предназначенное для облегчения симптомов при конкретном показании, или этиотропное лечение, предназначенное для обращения или частичного обращения патологического состояния или для замедления прогрессирования заболевания настолько, насколько это возможно в зависимости от патологического состояния и его тяжести. Таким образом, используемое в данном изобретении выражение лечение заболевания означает лечение и уход за пациентом, у которого развилось заболевание, патологическое состояние или нарушение. Целью лечения является борьба с заболеванием, патологическим состоянием или нарушением. Лечение включает введение активных соединений для устранения заболевания, патологического состояния или нарушения или борьбы с ними, а также облегчение симптомов или осложнений, связанных с заболеванием, состоянием или нарушением.
Если особым образом не указано иначе, то указанная в описании или в формуле изобретения структурная формула или химическое название соединения включает его таутомеры и все стереоизомеры, оптические и геометрические изомеры (например, энантиомеры, диастереоизомеры, E/Z-изомеры и т.п.) и рацематы, а также смеси отдельных энантиомеров в разных соотношениях, смеси диастереоизомеров, или смеси любых описанных выше форм, в которых существуют такие изомеры и энантиомеры, а также его соли, включая его фармацевтически приемлемые соли и его сольваты, такие как, например, гидраты, включая сольваты свободных соединений или сольваты соли соединения.
Используемое в данном изобретении выражение фармацевтически приемлемый относится к соединениям, веществам, композициям и/или лекарственным формам, которые в соответствии с основными положениями медицины являются пригодными для применения при соприкосновении с тканями людей и животных без проявления какой-либо чрезмерной токсичности, раздражающего воздействия, аллергической реакции, или других затруднений или осложнений, и соответствуют приемлемому соотношению польза/риск.
Используемое в данном изобретении выражение фармацевтически приемлемые соли относится к производным раскрытых соединений, где исходное соединение модифицировано путем образования его солей с кислотой или основанием. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются только ними, соли неорганических или органических кислот, образованные с помощью основных остатков, таких как аминогруппы; соли щелочных металлов или органических соединений, образованные с помощью кислотных остатков, таких как остатки карбоновых кислот; и т.п. Например, такие соли включают соли, образованные с аммиаком, L-аргинином, бетаином, бенетамином, бензатином, гидроксидом кальция, холином, динолом, диэтаноламином (2,2'-имино-бис-(этанолом)), диэтиламином, 2(диэтиламино)этанолом, 2-аминоэтанолом, этилендиамином, N-этилглюкамином, гидрабамином, 1Нимидазолом, лизином, гидроксидом магния, 4-(2-гидроксиэтил)морфолином, пиперазином, гидроксидом калия, 1-(2-гидроксиэтил)пирролидином, гидроксидом натрия, триэтаноламином (2,2',2-нитрило-трис(этанолом)), трометамином, гидроксидом цинка, уксусной кислотой, 2,2-дихлоруксусной кислотой, адипиновой кислотой, альгиновой кислотой, аскорбиновой кислотой, L-аспарагиновой кислотой, бензолсульфоновой кислотой, бензойной кислотой, 2,5-дигидроксибензойной кислотой, 4-ацетамидобензойной
- 9 031376 кислотой, (+)-камфорной кислотой, (+)-камфор-10-сульфоновой кислотой, угольной кислотой, коричной кислотой, лимонной кислотой, цикламовой кислотой, декановой кислотой, додецилсерной кислотой, этан-1,2-дисульфоновой кислотой, этансульфоновой кислотой, 2-гидроксиэтансульфоновой кислотой, этилендиаминтетрауксусной кислотой, муравьиной кислотой, фумаровой кислотой, галактаровой кислотой, гентизиновой кислотой, D-глюкогептоновой кислотой, D-глюконовой кислотой, D-глюкуроновой кислотой, глутаминовой кислотой, глутаровой кислотой, 2-оксоглутаровой кислотой, глицерофосфорной кислотой, глицином, гликолевой кислотой, капроновой кислотой, гиппуровой кислотой, бромистоводородной кислотой, хлористоводородной кислотой, изомасляной кислотой, DL-молочной кислотой, лактобионовой кислотой, лауриновой кислотой, лизином, малеиновой кислотой, (-)Ш-яблочной кислотой, малоновой кислотой, DL-миндальной кислотой, метансульфоновой кислотой, галактаровой кислотой, нафталин-1,5-дисульфоновой кислотой, нафталин-2-сульфоновой кислотой, 1-гидрокси-2-нафтойной кислотой, никотиновой кислотой, азотной кислотой, октановой кислотой, олеиновой кислотой, оротовой кислотой, щавелевой кислотой, пальмитиновой кислотой, памоевой кислотой (эмбоновой кислотой), фосфорной кислотой, пропионовой кислотой, (-)Ш-проглутаминовой кислотой, салициловой кислотой, 4аминосалициловой кислотой, себациновой кислотой, стеариновой кислотой, янтарной кислотой, серной кислотой, дубильной кислотой, (+)Ш-винной кислотой, тиоциановой кислотой, n-толуолсульфоновой кислотой и ундециленовой кислотой. Дальнейшие фармацевтически приемлемые соли могут быть образованы с катионами металлов, таких как алюминий, кальций, литий, магний, калий, натрий, цинк и т.п. (также см. Pharmaceutical salts, Berge, S.M. и др., J. Pharm. Sci. (1977), 66, 1-19).
Фармацевтически приемлемые соли в соответствии с настоящим изобретением можно синтезировать из исходного соединения, которое содержит основный или кислотный фрагмент, с помощью обычных химических методов. Как правило, такие соли можно получить по реакции этих соединений в форме свободной кислоты или основания с достаточным количеством пригодного основания или кислоты в воде или в органическом разбавителе, таком как простой эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил или их смеси.
Соли кислот, отличающихся от упомянутых выше, которые, например, применимы для очистки или выделения соединений в соответствии с настоящим изобретением (например, трифторацетаты) также являются частью изобретения.
Термин галоген, как правило, означает фтор, хлор, бром и йод.
Термин С1-п-алкил, где n означает целое число, выбранное из 2, 3, 4, 5 или 6, или отдельно, или в комбинации с другим радикалом, означает ациклический, насыщенный, разветвленный или линейный углеводородный радикал, содержащий от 1 до n атомов С. Например, термин С1-5алкил охватывает радикалы Н3С-, Н3С-СН2-, Н3С-СН2-СН2-, НзС-СН(СНз)-, Н3С-СН2-СН2-СН2-, НзС-СН2-СН(СНз)-, Н3ССН(СНз)-СН2-, НзС-С(СНз)2-, Н3С-СН2-СН2-СН2-СН2-, Н3С-СН2-СН2-СЩСН3)-, НзС-СН2-СН(СНз)-СН2-, НзС-СН(СНз)-СН2-СН2-, НзС-СН2-С(СНз)2-, НзС-С(СНз)2-СН2-, НзС-СН(СНз)-СН(СНз)- и Н3С-СН2СЩСН2СН3)-.
Термин оксетанил означает 4-членное циклическое, насыщенное кольцо, содержащее атом кислорода в 3-положении относительно точки присоединения.
Получение
Общие методы синтеза
Изобретение также обеспечивает способы получения соединения формулы I.
Оптимальные условия реакций и время протекания реакций могут варьироваться в зависимости от конкретно используемых реагентов. Если не указано иное, то растворители, температуры, давления и другие условия реакций могут быть легко выбраны специалистом в данной области техники. Конкретные методики приведены в разделе Примеры синтеза. Обычно, протекание реакций при необходимости можно контролировать с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) или ЖХ-МС, а промежуточные соединения и продукты можно очищать с помощью хроматографии на силикагеле, ВЭЖХ и/или с помощью перекристаллизации. Изложенные ниже примеры являются иллюстративными и, как понятно специалисту в данной области техники, конкретные реагенты или условия могут быть изменены по необходимости для отдельных соединений без излишнего экспериментирования. Применяемые в приведенных ниже методах исходные вещества и промежуточные соединения или доступны для приобретения, или могут быть легко получены специалистом в данной области техники из коммерчески доступных веществ.
Соединение формулы I может быть получено способом, приведенным на схемах 1-3 или 4.
- 10 031376
Как проиллюстрировано на схеме 1 защита и снятие защиты с функциональных групп описано в Protective Groups in Organic Synthesis, TW. Greene and P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience. Например, для снятия защиты с трет-бутоксикарбонильной группы, может быть использована кислота, такая как муравьиная кислота, трифторуксусная кислота, n-толуолсульфоновая кислота или HCl в пригодном растворителе, таком как вода, ДХМ или диоксан, чтобы получить соединение формулы III.
Взаимодействие формулы IV, где PGi представляет собой защитную группу (например, третбутоксикарбонил), используя стандартные методики из литературных источников для образования амида, например, в присутствии основания, такого как Х,Ы-диизопропилэтиламин (DIPEA) и активирующего реагента, такого как HATU или TBTU, с амином формулы III в пригодном растворителе, обеспечивает соединение формулы V. В этих синтезах могут быть использованы стандартные реакции пептидного сочетания, известные из уровня техники (см., например М. Bodanszky, 1984, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag).
Дегидратация амида, такого как в соединении формулы V до соответствующего нитрила формулы VI может быть осуществлена при использовании дегидратирующего агента, такого как гидроксид (метоксикарбонилсульфамоил)триэтиламмония, в пригодном растворителе, таком как дихлорметан (ДХМ).
Соединения формулы VI (X1=I, Br) могут быть превращены в соответствующие производные бороновой кислоты VII, причем R может представлять собой Н или низший алкил независимо и остатки R могут образовывать кольцо. Например, VI может вступать в реакцию с бис(неопентилгликолато)дибороном в присутствии пригодного катализатора, такого как [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), и пригодного основания, такого как ацетат калия или натрия, калия или цезия карбонат или фосфат, в пригодном растворителе, таком как диоксан, диметилформамид (ДМФА), или дихлорметан (ДХМ) с получением производных бороновой кислоты VII.
Они могут подвергаться взаимодействию в катализированной (переходным) металлом реакции соединения формулы VIII (Х2=О, Br). Сочетание этих галогенидов VIII обеспечивает соединение формулы IX. Например, взаимодействие этих галогенидов с бороновой кислотой или соответствующим сложным эфиром бороновой кислоты VII, в пригодном растворителе, таком как диоксан, в присутствии пригодного катализатора, такого как 1,1'-бис-(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия дихлорид и пригодного основания, такого как натрия, карбонат калия или цезия, обеспечивает соединение формулы IX.
Защита и снятие защиты с функциональных групп описано в Protective Groups in Organic
Synthesis, TW. Greene and P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience. Например, для снятия защиты с третбутоксикарбонильной группы, кислота, такая как n-толуолсульфоновой кислоты моногидрат, может быть использована в пригодном растворителе, таком как ацетонитрил, с получением соединения формулы I.
- 11 031376
Как представлено на схеме 2 взаимодействие кислоты формулы IV, где PG1 представляет собой защитную группу (например, трет-бутоксикарбонил), используя стандартные методики из литературных источников для образования амида, например, в присутствии основания, такого как N,Nдиизопропилэтиламин (DIPEA) и активирующего реагента, такого как HATU или TBTU, с амином формулы III в пригодном растворителе, обеспечивает соединение формулы V. В этих синтезах могут быть применены стандартные реакции пептидного сочетания, известные в уровне техники (см., например М. Bodanszky, 1984, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag).
Соединения формулы V могут быть превращены в соответствующие производные бороновой кислоты X аналогично реакционной методике, описанной в схеме 1.
Они могут подвергаться взаимодействию в катализированной (переходным) металлом реакции соединения формулы VIII (Х2=С1, Br) с получением соединения формулы XI аналогично реакционной методике, описанной в схеме 1.
Соединение формулы XI может быть преобразовано в соединение формулы XII, используя восстанавливающий реагент, такой как борогидрид лития или натрия в пригодном растворителе, таком как тетрагидрофуран.
Соединение формулы XII может быть преобразовано в соединение формулы XIII, используя реагенты, такие как ангидрид n-толуолсульфоновой кислоты или метансульфонилхлорид в присутствии основания, такого как триэтиламин или N.N-диизопропилэтиламин (DIPEA) в пригодном растворителе, таком как тетрагидрофуран.
Дегидратация амида, такого как в соединении формулы XIII с получением соответствующего нитрила формулы XIV, может быть осуществлена с применением дегидратирующего реагента, такого как гидроксид (метоксикарбонилсульфамоил)триэтиламмония, в пригодном растворителе, таком как дихлорметан (ДХМ).
Защита и снятие защиты с функциональных групп описано в Protective Groups in Organic
Synthesis, T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience. Например, для снятия защиты с третбутоксикарбонильной группы, кислота, такая как моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты, может быть использована в пригодном растворителе, таком как ацетонитрил, с получением соединения формулы I.
- 12 031376
Как представлено на схеме 3 взаимодействие кислоты формулы XV, где PG1 представляет собой защитную группу (например, трет-бутоксикарбонил), используя стандартные методики из литературных источников для образования амида, например, в присутствии основания, такого как N-метилморфолин и активирующего реагента, такого как циклический ангидрид 1-пропансульфоновой кислоты (РРА) с амином формулы III в пригодном растворителе, обеспечивает соединение формулы XVI. В этих синтезах могут быть применены стандартные реакции пептидного сочетания, известные в уровне техники (см., например М. Bodanszky, 1984, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag).
Защита и снятие защиты с функциональных групп описано в Protective Groups in Organic Synthesis, TW. Greene and P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience.
Например, для защиты амина формулы XVI, может быть использован ди-трет-бутилдикарбонат в пригодном растворителе, таком как дихлорметан с получением соединения формулы XVII.
Дегидратация амида, такого как в соединении формулы XVII с получением соответствующего нитрила формулы XVIII может быть осуществлена с применением дегидратирующего реагента, такого как гидроксид (метоксикарбонилсульфамоил)триэтиламмония, в пригодном растворителе, таком как дихлорметан (ДХМ).
Соединения формулы XVIII (X1=I, Br) могут быть превращены в соответствующие производные бороновой кислоты XIX, где R независимо может представлять собой Н или низший алкил и остатки R могут образовывать кольцо. Например, XVIII может вступать в реакцию с бис-(пинаколато)дибороном в присутствии пригодного катализатора, такого как [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), и пригодного основания, такого как ацетат калия или карбонат или фосфат натрия, калия или цезия, в пригодном растворителе, таком как диоксан, диметилформамид (ДМФА), или дихлорметан (ДХМ) с получением производных бороновой кислоты XIX.
Они могут подвергаться взаимодействию в катализированной (переходным) металлом реакции соединения формулы VIII (Х2=а, Br). Сочетание этих галогенидов VIII обеспечивает соединение формулы XX. Например, взаимодействие этих галогенидов с бороновой кислотой или соответствующим сложным эфиром бороновой кислоты XIX, в пригодном растворителе, таком как диоксан, в присутствии пригодного катализатора, такого как 1,1'-бис-(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия дихлорид и пригодного основания, такого как карбонат натрия, калия или цезия, обеспечивает соединение формулы XX.
Защита и снятие защиты с функциональных групп описано в Protective Groups in Organic
Synthesis, TW. Greene и P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience. Например, для снятия защиты с третбутоксикарбонильной группы, кислота, такая как моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты, может быть использована в пригодном растворителе, таком как ацетонитрил, с получением соединения формулы I.
- 13 031376
R1
Схема 4
X, = Br. I
XXIII XXIV
Как представлено на схеме 4 соединение формулы II могут быть превращены в соответствующие производные бороновой кислоты XXI, где R независимо может представлять собой Н или низший алкил, и остатки R могут образовывать кольцо. Например, II может вступать в реакцию с бис(неопентилгликолато)дибороном в присутствии пригодного катализатора, такого как [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), и пригодного основания, такого как ацетат калия или карбонат или фосфат натрия, калия или цезия, в пригодном растворителе, таком как диоксан, диметилформамид (ДМФА), или дихлорметан (ДХМ) с получением производных бороновой кислоты XXI.
Они могут подвергаться взаимодействию в катализированной (переходным) металлом реакции соединения формулы VIII аналогично реакционной методике, описанной в схеме 1 с получением соединения формулы XXII.
Дегидратация амида, такого как соединение формулы XXII с получением соответствующего нитрила формулы XXIII может быть осуществлена с применением дегидратирующего реагента, такого как гидроксид (метоксикарбонилсульфамоил)триэтиламмония, в пригодном растворителе, таком как дихлорметан (ДХМ).
Защита и снятие защиты с функциональных групп описано в Protective Groups in Organic Synthesis, T.W. Greene и P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience. Например, для снятия защиты с третбутоксикарбонила, может быть использована кислота, такая как моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты, в пригодном растворителе, таком как ацетонитрил, с получением соединения формулы XXIV.
Взаимодействие кислоты формулы XV, где PG1 представляет собой защитную группу (например, трет-бутоксикарбонил), используя стандартные методики из литературных источников для образования амида, например, в присутствии основания, такого как N-метилморфолин и активирующего реагента, такого как циклический ангидрид 1-пропансульфоновой кислоты (РРА), с амином формулы XXIV в пригодном растворителе, обеспечивает соединение формулы XXV. В этих синтезах могут быть применены стандартные реакции пептидного сочетания, известные в уровне техники (см., например М. Bodanszky, 1984, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag).
Защита и снятие защиты с функциональных групп описано в Protective Groups in Organic Synthesis, T.W. Greene и P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience. Например, для снятия защиты с третбутоксикарбонила, может быть использована кислота, такая как моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты, в пригодном растворителе, таком как ацетонитрил, с получением соединения формулы I.
Другие модификации соединений формулы I способами, известными из уровня техники и представленными в примерах ниже, могут быть использованы для получения дополнительных соединений в соответствии с изобретением.
- 14 031376
Примеры синтеза
В дальнейшем приведены репрезентативные соединения в соответствии с изобретением, которые можно получить в соответствии с общими схемами синтеза, примерами и известными в данной области техники способами.
Исходные вещества и промежуточные соединения были или коммерчески доступными, или были приобретены по каталогам от ABCR, ACROS, ABLOCK PHARMATECH, ACTIVATE, ALDRICH, APOLLO SCIENTIFIC, ARK PHARM INC, ATLANTIC SCIENTIFIC TECHNOLOGY, BETAPHARM, BEFARM, CHEMBRIDGE CORPORATION, CNH-TECH, ENAMHH LTD, GOLDENBRIDGE PHARMA INC, GVK BIO, MERCACHEM, MOLBRIDGE, WUXI APPTEC, ZERENEX или были синтезированы согласно методикам из литературных источников, или как описано ниже в разделе Синтез исходных веществ/эдуктов.
Значения времени удержания и экспериментальные данные m/z жидкостной хроматографии - массспектроскопии (ЖХ-МС) получали для приведенных ниже соединений с помощью одного из следующих методов:
Метод ЖХ-МС V001 007.
Устройство-описание Waters Alliance с DAD и MSD
Колонка Waters XBridge Cl8
Размер колонки 4.6 x 30 мм
Размер частиц 3.5 мкм
Г радиент/Растворитель Время [мин] % Раств [Н2О,0.1% ГФУ1 % Раств. [Метанол] Поток [мл/мин] Темп [°C]
0.0 95 5 4 60
16 0 100 4 60
1 85 0 100 4 60
1.9 95 5 4 60
Метод ЖХ-МС V003 003.
Устройство-описание Waters Alliance с DAD и MSD
Колонка Waters XBridge Cl8
Размер колонки 4.6 x 30 мм
Размер частиц 3 5 мкм
Г радиент/Растворитель Время [мин] % Раств. [Н2О, 0.1%NH3] % Раств. [Метанол] Поток [мл/мин] Темп -С]
0.0 95 5 4 50
0.2 95 5 4 50
1.5 0 100 4 50
1.75 0 100 4 50
Метод ЖХ-MC V011 S01.
Устройство-описание Waters Alliance с DAD и MSD
Колонка Waters XBridge С18
Размер колонки 4.6 x 30 мм
Размер частиц 3.5 мкм
Растворитель градиент время [мин1 % Раств [Н2О, 0.1% NH3] % Раств. [Ацетонитрил! Поток [мл/мин] Темп [°C]
0.0 97 3 5 60
0 2 97 3 5 60
16 0 100 5 60
1.7 0 100 5 60
Метод ЖХ-МС V012 S01.
Устройство-описание Waters Alliance с DAD и MSD
Колонка Waters XBridge Cl8
Размер колонки 4.6 x 30 мм
Размер частиц 3,5 мкм
Растворитель Градиент время [мин] Уо Раств. Н2О,0.1% ГФУ] % Раств. [Ацетонитрил] Поток [мл/мин] Темп EC]
0.0 97 3 5 60
0.2 97 3 5 60
16 3 100 5 60
1.7 3 100 5 60
- 15 031376
Метод ЖХ-МС Х001 004.
Устройство-описание Waters Acquity с DAD и MSD
Колонка Waters XBridge С18
Размер колонки 2.1 x 20 мм
Размер частиц 2.5 мкм
Г радиент/Растворитель Время [мин] Уо Раств, Н2О,0.Ю% гфу1 Уо Раств. [Метанол] Поток [мл/мин] Темп [°C]
0.0 95 5 1,4 60
0.05 95 5 1,4 60
1.00 3 100 1.4 60
1.1 3 100 1.4 60
Метод ЖХ-МС X011 S03.
Устройство-описание Waters Acquity с DAD и MSD
Колонка Waters Xbridge ВЕН С18
Размер колонки 2,1 х 30 мм
Размер частиц 1.7 мкм
Растворитель Градиент время [мин] % Раств. [H2O,0.1%NH3] Vo Раств. [Ацетонитрил] Поток [мл/мин] Темп [°C]
0,00 95 5 1,3 60
0,02 95 5 1,3 60
1,00 0 100 1,3 60
1,10 0 100 1,3 60
Метод ЖХ-МС X012 S02.
Устройство-описание Waters Acquity с DAD и MSD
Колонка Waters XBridge ВЕН CIS
Размер колонки 2.1 x 30 мм
Размер частиц 1.7 мкм
Растворитель Градиент время [мин] % Раств. [Н2О, 0.1% ТФУ] % Раств. [Ацетонитрил] Поток [мл/мин] Темп [°C]
3.0 99 1 1.3 60
3.02 99 1 1.3 60
1.00 0 100 1.3 60
1 10 0 100 1.3 60
Метод ЖХ-MC Z011 S03.
Устройство-описание Agilent 1200 с DAD и MSD
Колонка Waters XBridge С18
Размер колонки 3 х 30 мм
Размер частиц 2.5 мкм
Г радиент/Растворитель Время [мин] % Раств. [Н2О,0 1%NH3] % Раств. [Ацетонитрил] Поток [мл/мин] Темп [°C]
0.00 97 3 2.2 60
0 20 97 3 2.2 60
1.20 0 100 2.2 60
1 25 0 100 3 60
1.40 0 100 3 60
Метод ЖХ-МС Z012 S04.
У стройство-описание Agilent 1200 с DAD и MSD
Колонка Waters XBridge Cl8
Размер колонки 3 х 30 мм
Размер частиц 2.5 мкм
Градиент/Растворитель Время[мин] Уо Раств. [Н2О,0 1%NH3] У> Раств. [Ацетонитрил] Поток [мл/мин] Темп [°C]
0.00 97 3 2.2 60
0.20 97 3 2.2 60
1.20 0 100 2.2 60
1.25 0 100 3 60
1.40 0 100 3 60
- 16 031376
Метод ЖХ-МС Z018 S04.
Устройство-описание Agilent 1200 с DAD и MSD
Колонка Waters Sunfire С18
Размер колонки 3 х 30 мм
Размер частиц 2.5 мкм
Растворитель Градиент время [мин] Н Раств. [Н2О,0.1% тфу1 % Раств. [ А цетон итр ил] Поток [мл/мин] Темп [°C]
0.00 97 3 2.2 60
0.20 97 3 2.2 60
1.20 0 100 2 2 60
1.25 0 100 3 60
1.40 0 100 3 60
Метод ЖХ-МС Z020 S01.
Устройство-описание Agilent 1200 с DAD и MSD
Колонка Waters Sunfire Cl8
Размер колонки 3 х 30 мм
Размер частиц 2.5 мкм
Растворитель Градиент время [мин] % Раств. [Н2О,0 1%FA] % Раств. [Ацетонитрил] Поток [мл/мин] Темп -С]
0.00 97 3 2.2 50
0.20 97 3 2.2 50
1.20 0 100 2.2 50
1.25 0 100 3 50
1.40 0 100 3 50
Метод ЖХ-МС Z021 S01.
Устройство-описание Agilent 1200 с DAD и MSD
Колонка XBridge С18
Размер колонки 3 х 30 мм
Размер частиц 2 5 мкм
Растворитель Градиент время [мин] % Раств [H2O,0.1%FA] % Раств [Ацетонитрил] Поток [мл/мин] Темп [°C]
0.00 97 3 2.2 60
0.20 97 3 2.2 60
1.20 0 100 2.2 60
1.25 0 100 3 50
1.40 0 100 3 60
Способы синтеза
Способ А.
Синтез (Ш^,4К)-Ы-[(Ш)-1-циано-2-[2-фтор-4-[Г-(оксетан-3-ил)спиро[1Н-изобензофуран-3,4'пиперидин]-5-ил]фенил]этил]-3-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксамида (пример 1) о ιΤΑοη о ^ΝΥ° Η=ΝγΆ2 F 9 R2 °Y
ДТ ’
1-1.1
Вг
- 17 031376
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-1.1.
К R1 (20.00 г, 55.37 ммоль) в дихлорметане (50 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (17.09 мл, 221.48 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь концентрируют, остаток растворяют в дихлорметане (15 мл) и простом диизопропиловом эфире (140 мл). Осадок отфильтровывают, промывают простым диизопропиловым эфиром и сушат с получением I-1.1 в виде соли ТФУ.
Выход 99%, m/z 261 [М+Н]+, ву 0.50 мин, метод ЖХ-МС Z018 S04.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-1.2.
К R2 (13.86 г, 55.72 ммоль) в ДМФА (65 мл) добавляют DIPEA (9.02 мл, 50.67 ммоль) и охлаждают до 5°С. добавляют TBTU (17.89 г, 55.72 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин. После этого добавляют I-1.1 (соль ТФУ) (19.0 г, 50.65 ммоль), ДМФА (65 мл) и DIPEA (13.52 мл, 75.98 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь разбавляют с этилацетатом и экстрагируют водой. Водный слой экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические слои промывают водой, 1 моль/л водным раствором хлористоводородной кислоты, водой, водным раствором гидрокарбоната натрия (5%) и снова водой. Органический слой сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают колоночной хроматографией (элюент: дихлорметан/ метанол 95:5).
Выход 82%, m/z 484 [М+Н]+, ву 0.91 мин, метод ЖХ-МС Z018 S04.
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-1.3.
К I-1.2 (20.0 г, 41.29 ммоль) в дихлорметане (200 мл) добавляют R3 (19.68 г, 82.58 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, остаток растворяют в этилацетате и экстрагируют водой, 1 моль/л водного раствора уксусной кислоты, и водой. Органический слой сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из ацетонитрила и отфильтровывают.
Выход 71%, m/z 466 [М+Н]+, ву 0.98 мин, метод ЖХ-МС Z018 S04.
Стадия 4. Синтез промежуточного соединения I-1.4.
К I-1.3 (1.5 г, 3.22 ммоль) в диоксане (20 мл) добавляют R4 (799.22 мг, 3.54 ммоль), ацетат калия (0.947 г, 9.65 ммоль) и [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), комплекс с дихлорметаном (1:1) (52.54 мг, 0.064 ммоль). Реакционную смесь продувают азотом и нагревают до 70°С в течение 1,5 ч. Реакционную смесь разбавляют с дихлорметаном и водой. Органический слой отделяют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 94%, m/z 332 [М+Н-Вос]+, ву 0.96 мин, метод ЖХ-МС Z020 S01.
Стадия 5. Синтез промежуточного соединения I-1.5.
К I-1.4 (400.0 мг, 0.93 ммоль) в ацетонитриле (18 мл) добавляют R5 (301.0 мг, 0.93 ммоль) и смесь продувают аргоном. Добавляют водный раствор карбоната натрия 2 моль/л (928 мкл, 1.86 ммоль) и 1,1'бис-(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия дихлорид (60.5 мг, 0.09 ммоль), реакционную смесь вновь продувают аргоном и перемешивают при 80°С в микроволновом реакторе в течение 45 мин. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (ДХМ:МеОН=98:2-92:8) с получением I-1.5.
Выход 79%, m/z 631 [М+Н]+, ву 1.09 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Альтернативный синтез промежуточного соединения I-1.5
Синтез промежуточного соединения I-1.4.1.
К I-1.3 (20 г, 42.89 ммоль) в диоксане (255 мл) добавляют бис-(пинаколато)диборон (13.07 г, 51.46 ммоль), ацетат калия (12.63 г, 128.66 ммоль) и [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), комплекс с дихлорметаном (1:1) (1.75 г, 2.14 ммоль). Смесь продувают азотом в течение 5 мин, нагревают до 70°С и перемешивают в течение ночи при этой температуре. Реакционную смесь разбавляют с дихлорметаном и водой. Органический слой отделяют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (петролейный эфир:EtOAc=92:8-34:66).
Выход 64%, m/z 332 [М+Н-Boc-((СНз)2СН)2]+, ву 0.73 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Синтез промежуточного соединения I-1.5.
К I-1.4.1 (3.96 г, 7.71 ммоль) в ацетонитриле (60 мл) добавляют R5 (2.50 г, 7.71 ммоль) и смесь про
- 18 031376 дувают аргоном. Добавляют водный раствор карбоната натрия 2 моль/л (7.71 мл, 15.42 ммоль) и дихлорид 1,1'-бис-(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия (502.6 мг, 0.77 ммоль), реакционную смесь вновь продувают аргоном и перемешивают при 80°С в течение 90 мин. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (ДХМ:МеОН=99:1-94:6) с получением I-1.5.
Выход 75%, m/z 631 [М+Н]+, ву 1.09 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Нижеследующие промежуточные соединения, представленные в табл. 1 синтезируют подобным образом из промежуточного соединения I-1.4 и соответствующих эдуктов.
Таблица 1
Промежуточное соединение Эдукт Структура промежуточного соединения m/z [M+HJ+ ву (мин) Метод ЖХ-МС
1-1.5.1 R6 ©Μ 517 [MВос-м.бут +H]+ J 1.29 Z012S04
I-1.5.2 R8 О V° Υ-ΜγΟ *1 --Ν УЧаУ н 532 [MBoc-m.5vT +HJ+ ’ 1.14 Z012_S04
I-1.5.3 R9 y-N ογ0γΥ \ 546 [MВос-ги.бут +H]+ ‘ 1.19 Z012_S04
- 19 031376
[-1.5.4 RIO / Υγ0 y-Ν Y 616 0.95 Z012_S04
[-1.5.5 RIO 1 AM, д VO IJL M H 602 0.91 Z012_S04
1-1.5.6 1-7 2 AM У” О 589 [MВос +HJ+ 1.19 Z012_S04
[-1.5.7 RI0.2 гг/м; , ^ΝΆ чЭА rN γΧΥγ о 603 0.94 Z012S04
1-1.5.8 1-7 2 .1 Υ ζζ \ /“ Π ζ γγ °αΟ yУ° о 575 [МВос +Н]+ 1.15 Z011_S03
Г-1.5.9 RI0.3 o% ° \A r-® M Цм о 589 0.95 Z012S04
- 20 031376
1-1.5.10 1-7.2 2 фА Υ·» yUY о 561 [ΜBoc +Η]+ 1.17 Z012S04
I-L5J1 RI0.4 ХМ , οΧ>0 ySi <4 ж υγ 0 575 1.04 ZO1I_SO3
1-1.5.12 1-7.4 Ал; Υ Ύγ° kX. rN γΧγν 575 [ΜВос +Η]+ 1.24 ZO1I_SO3
1-15 13 R.10.5 Мм / ΆζΝγ° kX <N γΟγΥ 589 1 12 Z011S03
1-1,5,14 R7 Мм ' ^Νγ° kX /Ύ 587 119 Z011S03
1-1.5.15 R12 ΧΥ A ‘Χ’Χ Υ» W* Η 574 [ΜВос +Η]+ 1.10 ZO1I_SO3
- 21 031376
1-1.5.16 R.10.6 гт/М! ЧА. Υν 615 0.80 Z020_S01
1-1.5.17 R14 ^°0 ο 590 [ΜBoc +Η]+ 1.16 Z011S03
1-1.5.18 R10.7 ΦγΜί , ο-Μ SA ΤΝ, Ж Υ·,> 1 Ιι [ ο ο 604 1.04 Z011_S03
1-1.5.19 I11 1.1 οΑ) ° г ж ДД Ο 590 1.02 Z011_S03
1-1 5 20 R15 ΟγΑ* ι ο 604 1 03 Z011_S03
1-1.5.21 R16 οΛο» V'l Λ> Ж ДА ΝΑί 0 546 [ΜВос +Η]+ 1.00 Z011_S03
1-1 5 22 R17 Χ°° XX,0 632 1.03 Z011S03
1-1 5.23 R18 Α'Υ' й о V ys Υ ο 646 0.90 Z011S03
1-1 5 24 R19 ϊ °° Υ1 0 632 1.04 Z011S03
Стадия 6. Синтез примера 1.
К I-1.5 (3.64 г, 5.78 ммоль) в ацетонитриле (60 мл) добавляют моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты (5.49 г, 28.88 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
- 22 031376
Выход 84%, m/z 531 [М+Н]+, ву 1.00 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Синтез (Ш^,4К)-№[(Ш)-1-циано-2-[2-фтор-4-[1'-(оксетан-3-ил)спиро[3Н-фуро[3,4-с]пиридин-1,4'пиперидин]-6-ил]фенил]этил]-3-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксамида (пример 23)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-1.5.22.
К I-1.4 (92.2 мг, 0.17 ммоль) в ацетонитриле (3 мл) добавляют R17 (48.0 мг, 0.17 ммоль) и смесь продувают аргоном. Добавляют водный раствор карбоната цезия 2 моль/л (171 мкл, 0.34 ммоль) и дихлорид 1,1'-бис-(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия (11.1 мг, 0.02 ммоль), реакционную смесь вновь продувают аргоном и перемешивают при 80°С в микроволновом реакторе в течение 45 мин. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением I-1.5.22.
Выход 52%, m/z 632 [М+Н]+, ву 1.04 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 2. Синтез пример 23.
К I-1.5.22 (56.0 мг, 0.09 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) добавляют моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты (84.3 мг, 0.44 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь подщелачивают при помощи TEA, фильтруют через мембранный фильтр и очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 83%, m/z 532 [М+Н]+, ву 0.96 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Синтез (Ш^^)-№[(Ш)-1-циано-2-[2-фтор-4-[Г-(оксетан-3-ил)спиро[5Н-фуро[3,4-Ъ]пиридин-7,4'пиперидин]-2-ил]фенил]этил]-3-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксамида (пример 25)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-1.5.24.
К I-1.4 (2.304 г, 5.34 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляют R19 (1.50 г, 5.34 ммоль), и смесь продувают аргоном. Добавляют водный раствор карбоната натрия 2 моль/л (5.343 мл, 10.69 ммоль) и дихлорид 1,1'-бис-(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия (348.2 мг, 0.53 ммоль), реакционную смесь вновь продувают аргоном и перемешивают при 70°С в микроволновом реакторе в течение 45 мин. Добавляют дополнительное количество I-1.4 (150 мг, 0.35 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при 70°С в течение 25 мин. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (ДХМ:МеОН=99:1 к 9:1) с получением I-1.5.24.
Выход 55%, m/z 632 [М+Н]+, ву 1.05 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 2. Синтез примера 25.
К I-1.5.24 (1.85 г, 2.93 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) добавляют моногидрат n-толуолсульфоновой
- 23 031376 кислоты (2.78 г, 14.64 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 88%, m/z 532 [М+Н]+, ву 0.97 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Способ В.
Синтез (^^^)-Ы-(^)-1-циано-2-[2-фтор-4-(Г-метилспиро[3Н-фуро[3,4-с]пиридин-1,4'пиперидин]-6-ил)фенил]этил]-3-азабицикло[2.2.1]гептан-2-карбоксамида (пример 26)
1-2-5 Пример 26
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-2.1.
К I-1.2 (1.0 г, 2.07 ммоль) в диоксане (10 мл) добавляют R4 (512.99 мг, 2.27 ммоль), ацетат калия (607.92 мг, 9.65 ммоль) и [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), комплекс с дихлорметаном (1:1) (33.72 мг, 0.041 ммоль). Реакционную смесь продувают азотом и нагревают до 70°С в течение ночи. Вновь добавляют R4 (100 мг, 0.44 ммоль) и [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), комплекс с дихлорметаном (1:1) (10 мг, 0.01 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при 70°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 50%, m/z 450 [М+Н]+.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-2.2.
К I-2.1 (204.46 мг, 0.46 ммоль) в ацетонитриле (4 мл) добавляют R10.7 (115 мг, 0.46 ммоль) и смесь продувают аргоном. Добавляют раствор карбоната цезия 2 моль/л (455.09 мкл, 0.91 ммоль) и дихлорид 1,1'-бис-(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия (29.66 мг, 0.046 ммоль), реакционную смесь вновь продувают аргоном и перемешивают при 80°С в микроволновом реакторе в течение 45 мин. Реакционную смесь разбавляют с водой и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 75%.
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-2.3.
К I-2.2 (212 мг, 0.34 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляют борогидрид лития (2 моль/л, 0.26 мл, 0.51 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при КТ. Реакционную смесь гасят метанолом, разбавляют с водой и этилацетатом. Органический слой промывают раствором гидрокарбоната натрия и рассолом, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме.
Выход: 91%.
Стадия 4. Синтез промежуточного соединения I-2.4.
К I-2.3 (194 мг, 0.31 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляют TEA (0.22 мл, 1.55 ммоль) и ангидрид nтолуолсульфоновой кислоты (121.43 мг, 0.37 ммоль) при 0°С. Реакционной смеси дают достичь КТ и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь гасят водой и концентрируют в вакууме. Остаток разбавляют раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промы
- 24 031376 вают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 34%, m/z 608 [М+Н]+.
Стадия 5. Синтез промежуточного соединения I-2.5.
К I-2.4 (65 мг, 0.11 ммоль) в дихлорметане (2.5 мл) добавляют R3 (63.72 мг, 0.27 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь разбавляют с этилацетатом и экстрагируют водой. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме.
Выход >95%.
Стадия 6. Синтез пример 26.
К I-2.5 (68 мг, 0.10 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) добавляют моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты (98.70 мг, 0.52 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ. Реакционную смесь подщелачивают при помощи TEA и очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 28%, m/z 490 [М+Н]+, ву 0.96 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Способ С.
Синтез №[(Ш)-1-циано-2-[2-фтор-4-[Г-(оксетан-3-ил)спиро[1Н-изобензофуран-3,4'-пиперидин]-5ил]фенил]этил]-3-азабицикло[2.2.2]октан-4-карбоксамида (пример 27)
1-3.5 Пример 27
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-3.1.
К охлажденному до 0°С раствору I-1.1 (5.80 г, 22.2 ммоль), 3-трет-бутоксикарбонил-3азабицикло[2.2.2]октан-4-карбоновой кислоте, полученной в соответствии с Radchenko et al. J. Org. Chem. 2009, 5541-5544 (5.67 г, 22.2 ммоль) и N-метилморфолину (12.2 мл, 111.0 ммоль) в сухом дихлорметане (67 мл) добавляют РРА (13.08 мл (50% в этилацетате), 22.2 ммоль). Реакционной смеси дают достичь КТ и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют дихлорметаном несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением I3.1, которое применяют в следующей стадии без дополнительной очистки.
Выход 73%, m/z 398/400 [М+Н]+, ву 0.87 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-3.2.
К охлажденному до 0°С раствору I-3.1 (8.625 г, 21.66 ммоль) в 300 мл сухого дихлорметана добавляют по каплям раствор ди-трет-бутилдикарбоната (6.26 г, 28.70 ммоль) в 20 мл сухого дихлорметана. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 0°С, оставляют достичь КТ и перемешивают в течение 2 дней. Реакционную смесь концентрируют в вакууме с получением I-3.2, которое применяют в следующей стадии без дополнительной очистки.
Выход 98%, m/z 398/400 [М+Н-Вос]+, ву 1.04 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-3.3.
К суспензии из I-3.2 (5.52 г, 11.07 ммоль) в сухом дихлорметане (70 мл) добавляют R3 (3.96 г, 16.60 ммоль) в виде четырех порций, и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Добавляют дополнительное количество R3 (791.0 мг, 3.32 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при КТ. Реакционную смесь разбавляют с дихлорметаном, промывают 10% водным раствором винной кислоты, насыщенным раствор гидрокарбоната натрия, рассолом, сушат над MgSO4, фильтруют и кон
- 25 031376 центрируют в вакууме. Полученный остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (петролейный эфир:EtOAc=94:6 к 69:31) с получением I-3.3.
Выход 77%, m/z 380/382 [М+Н-Вос]+, ву 1.10 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 4. Синтез промежуточного соединения I-3.4.
К I-3.3 (3.61 г, 7.52 ммоль) в диоксане (45 мл) добавляют бис-(пинаколато)диборон (3.24 г, 12.78 ммоль), ацетат калия (2.21 г, 22.55 ммоль) и [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), комплекс с дихлорметаном (1:1) (61.4 мг, 0.08 ммоль). Смесь продувают азотом в течение 5 мин и нагревают при 70°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляют с водой и экстрагируют дихлорметаном. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (петролейный эфир:EtOAc=100:0 к 91:9) с получением I-3.4.
Выход 68%, m/z 346 [М+Н-Вос-((СН3)2СН)2]+, ву 0.77 мин, метод ЖХ-MC Z011 S03.
Стадия 5. Синтез промежуточного соединения I-3.5.
К I-3.4 (1.14 г, 2.16 ммоль) в ацетонитриле (30 мл) добавляют R5 (0.70 г, 2.16 ммоль), и смесь продувают аргоном. Добавляют водный раствор карбоната натрия 2 моль/л (2.16 мл, 4.32 ммоль) и дихлорид 1,1'-бис-(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия (141.0 мг, 0.22 ммоль), реакционную смесь вновь продувают аргоном в течение 5 мин и перемешивают при 80°С в течение 70 мин в микроволновом реакторе. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (ДХМ:МеОН=99:1 к 9:1) с получением I-3.5.
Выход 81%, m/z 645 [М+Н]+, ву 1.11 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 6. Синтез примера 27.
К I-3.5 (923.0 мг, 1.43 ммоль) в ацетонитриле (40 мл) добавляют моногидрат n-толуолсульфоновой кислоты (681.0 мг, 3.58 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 3 дней при КТ. Реакционную смесь нейтрализуют посредством TEA и концентрируют в вакууме. Добавляют воду, и реакционную смесь экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 61%, m/z 545 [М+Н]+, ву 1.02 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Способ D.
Альтернативный синтез №[(т)-1-циано-2-[2-фтор-4-[1'-(оксетан-3-ил)спиро[1Н-изобензофуран3,4'-пиперидин] -5 -ил] фенил] этил] -3 -азабицикло [2.2.2] октан-4-карбоксамида (пример 27)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-4.1.
К R1 (340 мг, 0.94 ммоль) в диоксане (7 мл) R4 (288 мг, 1.28 ммоль), добавляют ацетат калия (277 мг, 2.82 ммоль) и [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(П), комплекс с дихлорметаном (1:1) (15.3 мг, 0.02 ммоль). Смесь продувают азотом и нагревают до 70°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют
- 26 031376 в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением I-4.1.
Выход 90%, m/z 325 [М-Н]-, ву 0.94 мин, метод ЖХ-МС Z020 S01.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-4.2.
К I-4.1 (228 мг, 0.70 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) добавляют R5 (239 мг, 0.70 ммоль), и смесь продувают аргоном. Добавляют водный раствор карбоната калия 2 моль/л (700 мкл, 1.4 ммоль) и 1,1-бис(ди-трет-бутилфосфино)ферроценпалладия дихлорид (46 мг, 0.07 ммоль), реакционную смесь вновь продувают аргоном и перемешивают при 80°С в течение 45 мин в микроволновом реакторе. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением I-4.2.
Выход 80%, m/z 526 [М+Н]+, ву 0.83 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-4.3.
К I-4.2 (294 мг, 0.56 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляют R3 (333 мг, 1.4 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 40 мин при КТ. ДХМ удаляют в вакууме, полученный остаток распределяют между этилацетатом и 10% водным раствором винной кислоты, фазы разделяют и водную фазу экстрагируют этилацетатом. Объединенный органический слой промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, рассолом, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением I-4.3.
Выход 95%, m/z 508 [М+Н]+, ву 1.06 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 4. Синтез промежуточного соединения I-4.4.
К I-4.3 (320 мг, 0.63 ммоль) в ацетонитриле (8 мл) добавляют моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (600 мг, 3.15 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом три раза. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и кон центрируют в вакууме.
Выход 80%, m/z 408 [М+Н]+, ву 0.90 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 5. Синтез пример 27.
К I-4.4 (30 мг, 0.07 ммоль) в ДМФА (1 мл) добавляют 3-трет-бутоксикарбонил-3азабицикло[2.2.2]октан-4-карбоновую кислоту, полученную в соответствии с Radchenko et al. J. Org. Chem. 2009, 5541-5544 (19 мг, 0.07 ммоль), N-метил-морфолин (16 мкл, 0.15 ммоль) и РРА (43 мкл, 50% в ДМФА) при КТ. Реакционную смесь перемешивают в течение 2.5 ч при КТ, разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением примера 27 (во время обработки и/или очистки происходит снятие защиты Boc группы).
Выход 32%, m/z 545 [М+Н]+, ву 1.02 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Синтез исходных веществ/эдуктов
Синтез трет-бутил-№[(Ш)-2-амино-1-[(4-бром-2-фтор-фенил)метил]-2-оксоэтил]карбамата (R1)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-5.1.
(2R)-(-)-2,5-Дигидро-3,6-диметокси-2-изопропилпиразин (212 г, 1151 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (600 мл) охлаждают до -78°С. Затем добавляют по каплям н-бутиллитий (2.5 М в гексанах, 552 мл, 1381 ммоль), поддерживая температуру ниже -78°С. Через 30 мин добавляют по каплям 4-бром-2фторбензилбромид (324 г, 1209 ммоль) в сухом тетрагидрофуране (120 мл). Реакционную смесь перемешивают при -78°С в течение 1 ч. Смесь гасят насыщенным раствором NH4Cl и экстрагируют три раза этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и выпаривают в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией (гептан/ этилацетат=80/20). Выход 60%.
- 27 031376
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-5.2.
К I-5.1 (104 г, 265 ммоль) в ацетонитриле (600 мл) добавляют водн. 0.2 М HCl (2788 мл, 558 ммоль). Смесь перемешивают при КТ в течение 12 ч. Смесь экстрагируют простым диэтиловым эфиром и рН водного слоя устанавливают до ~8 насыщенным раствором NaHCO3. Затем его экстрагируют три раза этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют. Выход 80%.
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-5.3.
I-5.2 (62.4 г, 211 ммоль) перемешивают в водной 3 М HCl (3 моль/л, 1000 мл) при 60°С в течение 16 ч. Смесь охлаждают и рН устанавливают до ~7 водным 6 М NaOH. Затем реакционную смесь фильтруют, промывают три раза водой и сушат в вакуумной печи при 40°С в течение 12 ч. Выход 74%.
Стадия 4. Синтез промежуточного соединения I-5.4.
К I-5.3 (151g, 546 ммоль) в 1,4-диоксане (2.2 L) добавляют водный 2 М карбонат натрия (301 мл, 602 ммоль) и ди-трет-бутилдикарбонат (138 г, 632 ммоль). Смесь перемешивают в течение 4 ч. Затем добавляют воду и рН устанавливают до ~4-5 при помощи лимонной кислоты. Смесь экстрагируют три раза этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют. Остаток перемешивают в гептане в течение 15 мин. и продукт отфильтровывают. Выход 87%.
Стадия 5. Синтез R1.
К I-5.4 (181 г, 476 ммоль) в сухом ДМФА (1200 мл) добавляют N-метилморфолин (72 г, 713 ммоль) и TBTU (153 г, 476 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин. Затем реакционную смесь охлаждают до 0°С и добавляют водный 35% раствор хлорида аммония (47 мл, 856 ммоль), и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Добавляют воду и образованный продукт отфильтровывают и промывают три раза водой. Продукт сушат в вакуумной печи при 40°С в течение 72 ч. Выход 64%.
Синтез (1S,2S,4R)-3-[(трет-бутокси)карбонил]-3-азабицикло [2.2.1] гептан-2-карбоксилата (R2).
Соединение является коммерчески доступным или может быть синтезировано по аналогии с Tararov et al, Tetrahedron Asymmetry 13 (2002), 25-28.
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-6.1.
Раствор этилоксоацетата (44.9 г, 0.44 моль), свежеперегнанный из коммерчески доступного раствора в толуоле (при 50 мбар, 55°С) в простом диэтиловом эфире (300 мл) охлаждают при -10°С, после чего по каплям добавляют Щ)-(+)-1-фенилэтанамин (53 г, 440 ммоль), поддерживая температуру ниже 0°С. После полного добавления добавляют MgSO4*H2O (91 г, 660 ммоль) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь фильтруют, маточный раствор концентрируют в вакууме, и остаток перегоняют при пониженном давлении с получением I-6.1 (47 г, m/z 206 [М+Н]+, ву 1.29 мин, метод ЖХ-МС V003 003). Продукт применяют без дополнительной очистки.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-6.2.
Раствор I-6.1 (47 г, 229 ммоль) и 1,3-циклопентадиен (30 г, 458 ммоль) (свежеперегнанный из дициклопентадиена) в ДМФА (150 мл) и 120 мкл воды охлаждают до 0°С, прежде чем добавляют по каплям ТФУ (18 мл, 234 ммоль). Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, затем добавляют к раствору из 40 г NaHCO3 в 1200 мл воды и экстрагируют простым диэтиловым эфиром. Органический слой отделяют, затем промывают водным NaHCO3 и водой, сушат над MgSO4 и концентрируют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (циклогексан/этилацетат=9:1) с получением I-6.2 (выход 52%, m/z 272 [М+Н]+, ву 0.42 мин, метод ЖХ-МС Х001 004).
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-6.3.
К раствору I-6.2 (24.8 г, 91 ммоль) в этаноле (250 мл), добавляют никель Ренея (2.5 г) и подвергают
- 28 031376 взаимодействию при 50 фунтах на квадратный дюйм под атмосферой водорода при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывают, раствор концентрируют в вакууме, и остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле (циклогексан/этилацетат 9:1). После выпаривания органического растворителя, полученный продукт повторно растворяют в простом диэтиловом эфире и растирают с раствором HCl в диоксане, концентрируют в вакууме, повторно растворяют в 200 мл этанола и концентрируют в вакууме с получением I-6.3 (выход 78%, m/z 214 [М+Н]+, ву 0.42 мин, метод ЖХ-МС Х001 004).
Стадия 4. Синтез промежуточного соединения I-6.4.
К раствору I-6.3 (22 г, 71 ммоль) в этаноле (250 мл), 10% Pd/C добавляют (2.5 г) и подвергают взаимодействию при 15 бар под атмосферой водорода при комнатной температуре. Катализатор отфильтровывают, раствор концентрируют в вакууме. Остаток промывают простым диизопропиловым эфиром с получением I-6.4 (выход 98%, m/z 170 [М+Н]+, ву 0.48 мин, метод ЖХ-МС V001 007).
Стадия 5. Синтез промежуточного соединения I-6.5.
К I-6.4 (14.3 г, 69.3 ммоль) в растворе триэтиламина (24.6 мл, 175.3 ммоль), ТГФ (150 мл) и воды (2 мл), добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (15.9 г, 73 ммоль) и полученную смесь перемешивают в течение 40 ч при комнатной температуре, затем концентрируют в вакууме. Этилацетат добавляют к остатку, впоследствии экстрагируют водой, 1N водным раствором уксусной кислоты и водой, прежде чем органический слой сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением I-6.5 (выход 95%, m/z 270 [М+Н]+, ву 1.33 мин, метод ЖХ-МС V003 003).
Стадия 6. Синтез R2.
Смесь I-6.5 (16.9 г; 63 ммоль) в ацетоне (152 мл), воде (50 мл) и гидроксид лития (3 г, 126 ммоль) перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Добавляют воду (100 мл), объем уменьшают в вакууме до охлаждения до 0°С с последующим добавлением 1N водной HCl, чтобы подкислить до рН в 2-3, сразу с последующей экстракцией этилацетатом. Органический слой промывают водой, сушат (MgSO4) и концентрируют. К остатку добавляют дихлорметан (100 мл) и циклогексан (100 мл), объем уменьшают в вакууме наполовину и смесь темперируют при 15°С. Осадок отфильтровывают, промывают циклогексаном с получением R2 (выход 66%, m/z 242 [М+Н]+).
Синтез 5-бром-1 '-(оксетан-3 -ил)спиро [1Н-изобензофуран-3,4'-пиперидина] (R5)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-7.1.
Метил 2-амино-4-бромбензоат (10 г, 43.47 ммоль) суспендируют в серной кислоте 20% (200 мл), и полученный раствор охлаждают до 0°С. Добавляют по каплям между 0-5°С нитрит натрия (3.60 г, 52.16 ммоль), растворенный в воде (40 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение еще 40 мин при этой температуре. После этого добавляют по каплям охлажденный раствор (прибл. 0°С) йодида калия (14.43 г, 86.93 ммоль) в воде (40 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 5°С. Реакционную смесь выливают в ледяную воду и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой, 10% водн. раствором тиосульфата натрия, рассолом, сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. Выход 94%.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-7.2.
I-7.1 (9.42 г, 27.63 ммоль) и трет-бутил 4-оксопиперидин-1-карбоксилат (6.24 г, 30.40 ммоль) в сухом ТГФ (200 мл) охлаждают до -70°С. Комплекс хлорид изопропилмагния-хлорид лития (1.3 моль/л в ТГФ, 23.38 мл, 30.40 ммоль) добавляют по каплям, и реакционную смесь перемешивают при этой температуре в течение еще 20 мин, дают достичь КТ и перемешивают в течение 45 мин. Реакционную смесь гасят водой и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают колоночной флешхроматографией (петролейный эфир:EtOAc=95:5 к 40:60) с получением I-7.2.
Выход 74%, m/z 326,328 [М+Н-трет-Bu]/ ву 1.09 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Нижеследующие промежуточные соединения, представленные в табл. 2, синтезируют подобным образом из соответствующих промежуточных соединений:
- 29 031376
Таблица 2
Промежуточное соединение Структура m/z [М+Н]+ By (мин) Метод ЖХ-МС
1-7.2.1 О 312; 314 [МтретBut+H]+ 1 06 Z011_S03
1-7.2.2 0 У 8x^-0 % о 298; 300 [МтретBut+H]+ 1.07 Z012_S04
Альтернативный синтез промежуточного соединения I-7.1.
1-7.1
К 4-бром-2-йодбензойной кислоте (9.0 г, 27.53 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляют концентрированную серную кислоту (10 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 90 мин при 80°С. Реакционную смесь выливают в ледяную воду, добавляют гидрокарбонат натрия до достижения значения рН 7 и реакционную смесь экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Выход 95%.
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-7.3.
К I-7.2 (8.11 г, 21.22 ммоль) в ТГФ (100 мл) добавляют борогидрид лития (2 моль/л в ТГФ, 21.22 мл, 42.44 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Анализ ВЭЖХ-МС показывал 20% превращение. Добавляют по каплям дополнительный борогидрид лития (2 моль/л в ТГФ, 27.0 мл, 54.0 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 6 дней при КТ. Реакционную смесь осторожно гасят водой, охлаждая до приблизительно 0°С ледяной баней. К реакционной смеси добавляют насыщенный раствор гидрокарбоната натрия, полученный осадок отфильтровывают, и маточный раствор экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме.
Выход >95%, m/z 312/314 [М+Н-трет-Бутил-Н2О]+, ву 1.01 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 4. Синтез промежуточного соединения I-7.4.
I-7.3 (605 мг, 1.57 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (20 мл), и охлаждают до 0°С, TEA (1.09 мл, 7.83 ммоль) и добавляют ангидрид n-толуолсульфоновой кислоты (613.44 мг, 1.88 ммоль). Реакционной смеси дают достичь КТ и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют с водой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой.
Выход 72%, m/z 368; 370 [М+Н]+.
Стадия 5. Синтез промежуточного соединения I-7.5.
I-7.4 (240 мг, 1.57 ммоль) растворяют в сухом ДХМ (2 мл) и добавляют ТФУ (500 мкл, 6.53 ммоль). Реакционную смесь оставляют на 70 мин при КТ. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, остаток снова растворяют в метаноле, фильтруют через твердофазный картридж (StratoSpheres™ PL-HCO3 МР Resin) и метанол удаляют в вакууме.
Выход 97%, m/z 268; 270 [М+Н]+, ву 0.93 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Альтернативный синтез промежуточного соединения I-7.5
он
1-7.3 1-7-5
I-7.3 (8.39 г, 21.71 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (25 мл), добавляют 5N водную HCl (25 мл) и реакционную смесь перемешивают при 90°С в течение 30 ч. Реакционную смесь охлаждают до КТ, подщелачивают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом несколько раз.
- 30 031376
Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме.
Выход 76%, m/z 268; 270 [М+Н]+, ву 0.93 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 6. Синтез R5.
I-7.5 (5.0 г, 18.49 ммоль) растворяют в сухом тетрагидрофуране (20 мл), добавляют 3-оксетанон (1.78 мл, 27.73 ммоль) и уксусную кислоту (1.06 мл, 18.49 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 25 мин при КТ. Добавляют триацетоксиборогидрид натрия (6.82 г, 30.57 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение еще 30 мин при КТ. Реакционную смесь гасят при помощи МеОН, разбавляют насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4 и концентрируют в вакууме с получением R5.
Выход 89%, m/z 324, 326 [М+Н]+, ву 0.93 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Синтез 6-бром-1'-метилспиро[индан-1,4'-пиперидин] (R7)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-8.1.
К R6, приобретенному у WUXI АРРТЕС (200 мг, 0.55 ммоль), в дихлорметане (3 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (0.25 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, остаток повторно растворяют в метаноле, фильтруют через твердофазный картридж (StratoSpheres™ PL-HCO3 МР Resin), и метанол удаляют в вакууме. Выход >95%.
Стадия 2. Синтез R7.
К I-8.1 (152 мг, 0.57 ммоль) в метаноле (4 мл) добавляют формальдегид (37% в воде, 0.21 мл, 2.86 ммоль) и уксусную кислоту (0.05 мл, 0.86 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 2 ч при КТ. Добавляют триацетоксиборогидрид натрия (302.6 мг, 1.43 ммоль) и реакционную смесь перемешивают 80 мин при КТ. Реакционную смесь концентрируют, растирают с водой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и рассолом. Осадок отфильтровывают, и фильтрат сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением R7.
Выход 89%.
Синтез 5 -бром-1,1 '-диметилспиро [индолин-3,4'-пиперидин] -2-он (R10)
R8 R9 1-9.1 R10
Стадия 1. Синтез R9.
К R8, приобретенному у ACTIVATE (200 мг, 0.53 ммоль) в ДМФА (4 мл) добавляют гидрид натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 31.5 мг, 0.79 ммоль) под охлаждением до 0°С, и реакционную смесь перемешивают в течение еще 30 мин при КТ. Добавляют метилйодид (36 мкл, 0.58 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 40 мин при КТ. Реакционную смесь разбавляют с водой и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают водой и рассолом, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме с получением R9. Выход 98%.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-9.1.
К R9 (191 мг, 0.48 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (0.5 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 20 мин при КТ. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, остаток повторно растворяют в метаноле, фильтруют через твердофазный картридж (StratoSpheres™ PL-HCO3 МР Resin) и метанол удаляют в вакууме.
Выход >95%.
Нижеследующие промежуточные соединения, представленные в табл. 3, синтезируют подобным образом из соответствующих промежуточных продуктов:
- 31 031376
Таблица 3
Промежуточное соединение Структура m/z [М+Н]+ Ву (мин) Метод ЖХМС
1-9.1.1 н О 282; 284 0.69 Z012_S04
1-9.1.2 /-NH О 268; 270 0.57 Z021_S01
1-9.1.3 А О 254;256 0.62 Z012_S04
Стадия 3. Синтез R10.
К I-9.1 (152 мг, 0.52 ммоль) в метаноле (5 мл) добавляют формальдегид (37% в воде, 0.19 мл, 2.58 ммоль) и уксусную кислоту (0.044 мл, 0.77 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при КТ, добавляют триацетоксиборогидрид натрия (273.0 мг, 1.29 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 40 мин при КТ. Реакционную смесь концентрируют, разбавляют с водой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Выход >95%, 309; 311 [М+Н]+, ву 0.75 мин, метод ЖХ-МС Z012 S04.
Нижеследующие промежуточные соединения, представленные в табл. 4, синтезируют подобным образом из соответствующих промежуточных продуктов:
Таблица 4
Промежуточное соединение Структура m/z Гм+нГ ву (мин) Метод ЖХМС
R10 1 / н 295;297 0.69 Z012S04
R10.2 / W О 296; 298 0 70 Z012S04
R10.3 О 282;284 0.68 Z012_S04
R10 4 •4 о 268;270 0.62 Z012_S04
R10 5 / Γ”Ν ’СО 282; 284 0.77 Z012S04
- 32 031376
R10 6 \ 309, 311 0.59 Z020_S01
R10.7 / ΛΝ II о о 253 0.24 Z021S01
Синтез соли ТФУ 5-бромспиро[индолин-3,4'-пиперидин]-2-она (R11)
R8 R11
К R8, приобретенному у ACTIVATE (150 мг, 0.39 ммоль) в дихлорметане (3 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (0.5 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 45 мин при КТ. Реакционную смесь концентрируют. Выход 100%.
Синтез трет-бутил 5-бром-2-оксоспиро[индолин-3,3'-пирролидин]-1'-карбоксилата (R12)
R12
К трет-бутил 2-оксоспиро[индолин-3,3'-пирролидин]-1'-карбоксилату, приобретенному у Zerenex (50.0 мг, 0.17 ммоль) в ацетонитриле (1.5 мл) добавляют N-бромсукцинимид (30.5 мг, 0.17 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 5 ч при КТ. Реакционную смесь разбавляют с водой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме. Выход 80%, m/z 367; 369 [М+Н]+.
Синтез 5-бром-1-метилспиро[индолин-3,3'-пиперидин]-2-она (R13)
1-10.1 1-10.2 R13
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-10.1.
К 1-метилспиро[индол-3,3'-пиперидин]-2(1Н)-ону, приобретенному у ChemBridge Corporation (1.0 г, 4.62 ммоль), в дихлорметане (20 мл) добавляют TEA (0.64 мл, 4.62 ммоль) и ди-трет-бутилдикарбонат (958.6 мг, 4.39 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин при КТ, разбавляют с водой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют дихлорметаном. Фазы разделяют, и водный слой экстрагируют посредством ДХМ. Объединенные органические слои сушат над MgSO4 и концентрируют в вакууме.
Выход >95%, m/z 261 [М+Н-трет-бутил]+, ву 1.06 мин, метод ЖХ-МС Z020 S01.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-10.2.
К I-10.1 (1.54 г, 4.87 ммоль) в ацетонитриле (35 мл) добавляют N-бромсукцинимид (856.7 мг, 5 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь разбавляют с водой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и рассолом, сушат над Na2SO4, фильтруют и концентрируют в вакууме.
Выход 93%, m/z 340 [М+Н-трет-бутил]+, ву 1.13 мин, метод ЖХ-МС Z020 S01.
Стадия 3. Синтез R13.
К I-10.2 (200 мг, 0.51 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (5 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин при КТ. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и лиофилизуют. Остаток растворяют в дихлорметане и экстрагируют посредством 1 моль/л водно
- 33 031376 го гидроксида натрия и рассолом. Органический слой сушат и концентрируют в вакууме.
Выход 88%, m/z 295; 297 [М+Н]+, ву 0.59 мин, метод ЖХ-МС Z020 S01.
Синтез трет-бутил-6-хлор-3-оксоспиро[фуро[3,4-с] пиридин-1,4'-пиперидин]-1'-карбоксилата (R14)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-11.1.
Синтез промежуточного соединения I-11.1 описан в ЕР 2072519 А1, с. 36.
При -78°С гексановый раствор (94 мл, 150.81 ммоль) 1.6 М н-бутиллития добавляют по каплям к ТГФ раствору (110 мл) 2,2,6,6-тетраметилпиперидина (16.14 г, 113.10 ммоль) и полученный раствор перемешивают в течение 1 ч. После этого ТГФ раствор (50 мл) 6-хлорникотиновой кислоты (6.0 г, 37.70 ммоль) добавляют по каплям в течение 1 ч и реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч. ТГФ раствор (50 мл) 1-бензил-4-пиперидона (21.6 г, 113.10 ммоль) добавляют по каплям при -78°С. Затем перемешивают в течение 2 ч, добавляют воду (70 мл) и реакционную смесь нагревают до комнатной температуры.
Водный слой отделяют и органический слой экстрагируют водным 1 N раствором натрия гидроксид (2x75 мл). Полученный водный слой экстрагируют простым диэтиловым эфиром (100 мл), и водный слой подкисляют (рН ~1) путем добавления концентрированной хлористоводородной кислоты.
После перемешивания в течение 1 ч, осадок отфильтровывают, промывают водой и растворяют в этилацетате.
Органический слой промывают водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. Остаток промывают простым диэтиловым эфиром.
Выход 66%, m/z 329 [М+Н]+, ву 0.72 мин, метод ЖХ-МС Z012 S04.
Нижеследующее промежуточное соединение, как показано в табл. 5, синтезируют подобным образом из соответствующего промежуточного соединения.
Таблица 5
Промежуточное соединение Структура m/z [м+нГ ву (мин) Метод ЖХ-МС
1-11.11 Tl о о 239 0 75 Z011S03
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-11.2.
I-11.1 (2.0 г, 6.08 ммоль) в дихлорэтане (15 мл) охлаждают до 0°С. Медленно добавляют раствор 1хлорэтил-хлорформиата (1.98 мл, 18.25 ммоль) в дихлорэтане (5 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение еще 15 мин при 0°С. После этого реакционную смесь нагревают с обратным холодильником и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в метаноле и нагревают с обратным холодильником в течение 30 мин, за это время образуется осадок. Реакционную смесь разбавляют с дихлорметаном и осадок отфильтровывают с получением I-11.2 (гидрохлорид).
Выход 61%.
Стадия 3. Синтез R14.
К I-11.2 (500 мг, 1.82 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляют TEA (0.51 мл, 3.64 ммоль) и дитрет-бутилдикарбонат (396.6 мг, 1.82 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 20 мин при КТ, разбавляют с водой и насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют дихлорметаном. Органический слой сушат и концентрируют в вакууме. Выход 91%.
Синтез 3 -хлор-1'-метилспиро [фуро [3,4-Ъ]пиридин-5,4'-пиперидин] -7-она (R15)
При -78°С гексановый раствор (2.38 мл, 3.81 ммоль) 1.6 М н-бутиллития добавляют по каплям к
ТГФ раствору (5 мл) 2,2,6,6-тетраметилпиперидина (0.76 мл, 4.43 ммоль) и полученный раствор переме
- 34 031376 шивают в течение 1 ч при этой температуре. После этого ТГФ раствор (1 мл) 5-хлор-2пиридинкарбоновой кислоты (0.2 г, 1.27 ммоль) добавляют по каплям в течение 5 мин и реакционную смесь перемешивают в течение 45 мин. ТГФ раствор (1 мл) 1-метил-4-пиперидона (0.44 мл, 3.81 ммоль) добавляют по каплям при -78°С. Через 1 ч добавляют воду (10 мл), и реакционную смесь нагревают до комнатной температуры.
Этилацетат (15 мл) и водный насыщенный NaHCO3 раствор (15 мл) добавляют к реакционной смеси, и водный слой отделяют. Органический слой экстрагируют водным насыщенным раствором NaHCO3 (2x10 мл). Объединенную водную фазу подкисляют (рН ~1) путем добавления концентрированной хлористоводородной кислоты.
После перемешивания в течение 1 ч реакционную смесь подщелачивают путем добавления водного насыщенного раствора NaHCO3 и экстрагируют этилацетатом (4x 25 мл). Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме с получением R15. Выход 21%, m/z 253, 255 [М+Н]+, ву 0.41 мин, метод ЖХ-МС Z012 S04.
Синтез 6-хлор-1'-(оксетан-3 -ил)спиро [фуро [3,4-с]пиридин-1,4'-пиперидин] -3 -она (R16)
о
1-11.2 R16
а) Образование свободного основания.
I-11.2 (200 мг, 0.73 ммоль) частично растворяли в сухом метаноле, добавляли полимерсвязанный карбонат тетраалкил-аммония (Aldrich, 540293), и смесь перемешивают в течение 2 ч при КТ. Полимерсвязанный тетраалкил-аммония карбонат отфильтровывают, и метанол удаляют в вакууме с получением свободного основания I-11.2.
б) Свободное основание I-11.2 растворяют в смеси сухой дихлорметан (3 мл)/сухой тетрагидрофуран (1 мл), добавляют 3-оксетанон (0.23 мл, 3.64 ммоль) и уксусную кислоту (0.06 мл, 1.1 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 75 мин при КТ, затем добавляют триацетоксиборогидрид натрия, и реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин при КТ. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. Выход 80%, m/z 295 [М+Н]+, ву 0.75 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Синтез 6-хлор-1'-(оксетан-3-ил)спиро[3Н-фуро[3,4-с]пиридин-1,4'-пиперидина] (R17)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-11.3.
К I-11.1 (1.00 г, 3.04 ммоль) в метаноле (15 мл) добавляют борогидрид натрия (345 мг, 9.12 ммоль) малыми порциями, и реакционную смесь перемешивают в течение 20 ч при КТ. Дополнительный борогидрид натрия (750 мг, 19.82 ммоль) добавляют к реакционной смеси 3-мя порциями (каждая по 250 мг) в течение 5 ч. Реакционную смесь гасят водой и разбавляют этилацетатом. Органический слой отделяют, и водный слой экстрагируют этилацетатом. Объединенный органический слой промывают насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, рассолом, сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением I-11.3. Выход 40%, m/z 333 [М+Н]+, ву 0.91 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-11.4.
К I-11.3 (378 мг, 1.14 ммоль) в сухом ТГФ (5 мл) добавляют TEA (0.95 мл, 6.81 ммоль) и метансульфониллорид (0.26 мл, 3.5 ммоль) при 0°С. Реакционной смеси дают достичь КТ и перемешивают в
- 35 031376 течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Na2SO4 и концентрируют в вакууме с получением сырого продукта, который применяют в следующей стадии без дальнейшей очистки.
Выход 95%, m/z 315 [М+Н]+, ву 1.06 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-11.5.
К раствору I-11.4 (246 мг, 0.78 ммоль) в дихлорэтане (4 мл) добавляют 1-хлорэтилхлорформиат (0.42 мл, 3.91 ммоль), и реакционную смесь нагревают с обратным холодильником и перемешивают в течение 3 ч. Дихлорэтан удаляли в вакууме, полученный остаток повторно растворяют в метаноле (3 мл) и полученный раствор кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Реакционную смесь охлаждают до КТ и очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением I-11.5. Выход 72%, m/z 225 [М+Н]+, ву 0.71 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 4. Синтез R17.
I-11.5 (114 мг, 0.51 ммоль) растворяют в сухом тетрагидрофуране (2 мл), добавляют 3-оксетанон (0.05 мл, 0.76 ммоль) и уксусную кислоту (0.044 мл, 0.76 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ. Добавляют триацетоксиборогидрид натрия (269 мг, 1.27 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение еще 15 мин при КТ. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4 и концентрируют в вакууме с получением R17. Выход 62%, m/z 281 [М+Н]+, ву 0.76 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Синтез 2-хлор-1'-(оксетан-3 -ил)спиро [фуро [3,4-Ь]пиридин-7,4'-пиперидин] -5 -она (R18)
2-Амино-6-хлориноникотинонитрил, приобретенный у ABLOCK PHARMATECH (2.0 г, 13.02 ммоль), растворяют в сухом тетрагидрофуране (40 мл), добавляют йодид медиф (3.72 г, 19.54 ммоль), дийодметан (8.39 мл, 104.2 ммоль) и трет-бутилнитрит (6.20 мл, 52.1 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 ч., охлаждают до КТ и все летучие компоненты удаляют в вакууме. Полученный остаток растворяют в этилацетате (100 мл) и промывают с 10% водным раствором тиосульфата натрия (25 мл), насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (25 мл), сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают колоночной флэш-хроматографией с получением I-12.1 (элюент: петролейный эфир/этилацетат).
Выход 74%, m/z 265 [М+Н]+, ву 0.90 мин, метод ЖХ-МС Z012 S04.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-12.2.
I-12.1 (1.0 г, 3.78 ммоль) и трет-бутил 4-оксопиперидин-1-карбоксилат (753 мг, 3.78 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (10 мл), и реакционную смесь охлаждают до -65°С. Добавляют по каплям комплекс хлорид изопропилмагния-хлорид лития (1.3 моль/л в ТГФ, 3.78 мл, 4.92 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при этой температуре в течение еще 10 мин. После этого реакционной смеси дают достичь КТ, перемешивают в течение 20 мин и добавляют метанол (0.8 мл, 19.7 ммоль). Реакционную смесь охлаждают до 0°С и добавляют по каплям 50% водный раствор серной кислоты раствор (2.0 мл). Реакционную смесь нагревают до КТ и перемешивают в течение ночи. Образованный белый осадок отфильтровывают, промывают при помощи ТГФ и сушат в вакууме с получением сырого I-12.2 (соль серной кислоты) в виде белого твердого вещества. Сырой продукт применяли в следующей стадии без дополнительной очистки.
Выход 94%, m/z 239 [М+Н]+, ву 0.69 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 3. Синтез R18.
а) Образование свободного основания.
I-12.2 (150 мг, 0.45 ммоль) растворяли в смеси метанол (2 мл)/вода (2 мл), добавляют полимерсвязанный карбонат тетраалкиламмония (Aldrich, 540293) и эту смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ. Полимерсвязанный карбонат тетраалкиламмония отфильтровывают, метанол и воду удаляют в вакууме с получением свободного основания I-12.2.
б) Полученный остаток повторно растворяют в смеси ТГФ (2 мл)/вода (0.1 мл), добавляют 3оксетанон (0.04 мл, 0.67 ммоль) и уксусную кислоту (0.038 мл, 0.67 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при КТ. Добавляют триацетоксиборогидрид натрия, и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором
- 36 031376 соли, сушат над MgSO4 и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают колоночной флэшхроматографией с получением R18 (элюент: ДХМ/МеОН).
Выход 18%, m/z 295 [М+Н]+, ву 0.74 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Синтез 2-хлор-1'-(оксетан-3 -ил)спиро [5Н-фуро [3,4-Ъ]пиридин-7,4'-пиперидина] (R19)
Стадия 1. Синтез промежуточного соединения I-12.3
К I-12.2 (3.25 г, 9.65 ммоль) в дихлорметане (50 мл) добавляют TEA (4.04 мл, 28.95 ммоль), реакционную смесь перемешивают в течение 20 мин при КТ, и добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (2.11 г, 9.65 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 90 мин при КТ, разбавляют насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и несколько раз экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, концентрируют в вакууме и полученный остаток очищают колоночной флэш-хроматографией (петролейный эфир:ЕЮАс=95:5 к 60:40) с получением I-12.3.
Выход 49%, m/z 239 [М-Вос+Н]+, ву 1.03 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 2. Синтез промежуточного соединения I-12.4.
К I-12.3 (10.0 г, 29.52 ммоль) в этаноле (500 мл) добавляют борогидрид натрия (2.23 г г, 59.03 ммоль) и хлорид кальция (6.55 г, 59.03 ммоль) двумя порциями, и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при КТ. ВЭЖХ-МС показала 85% превращение в целевой продукт. Добавляют дополнительное количество борогидрида натрия (350 мг, 9.25 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 6 ч при КТ. Реакционную смесь гасят насыщенным раствором гидрокарбоната натрия, этанол удаляют в вакууме, и полученный остаток растирают с этилацетатом. Образованный осадок отфильтровывают, и маточный раствор экстрагируют этилацетатом несколько раз. Объединенный органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растирают с ацетонитрилом, образованный осадок отфильтровывают, маточный раствор концентрируют в вакууме и эту процедуру повторяют еще два раза. Осадки объединяют и сушат в вакууме с получением I-12.4.
Выход 54%, m/z 243 [М+Н-Вос]+, ву 0.97 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 3. Синтез промежуточного соединения I-12.5.
К I-12.4 (6.77 г, 17.77 ммоль) в сухом ТГФ (75 мл) добавляют TEA (14.84 мл, 106.64 ммоль) и метансульфониллорид (5.50 мл, 71.09 ммоль) при 0°С. Реакционной смеси дают достичь КТ и перемешивают в течение 1 ч. Реакционную смесь разбавляют с насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и экстрагируют дихлорметаном несколько раз. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4, концентрируют в вакууме и полученный остаток очищают колоночной флэшхроматографией (петролейный эфир:EtOAc=95:5 к 72:28) с получением I-12.5.
Выход 65%, m/z 225 [М+Н-Вос]+, ву 1.07 мин, метод ЖХ-МС Z011S03.
Стадия 4. Синтез промежуточного соединения I-12.6.
К I-12.5 (4.13 г, 12.07 ммоль) в дихлорметане (15 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (5 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при КТ. Реакционную смесь концентрируют в вакууме, полученный остаток повторно растворяют в метаноле (50 мл), добавляют полимерсвязанный карбонат тетраалкиламмония (Aldrich, 540293) и эту смесь перемешивают в течение 30 мин при КТ. Полимерсвязанный карбонат тетраалкиламмония отфильтровывают и метанол удаляют в вакууме с получением I12.6.
Выход 99%, m/z 225 [М+Н]+, ву 0.74 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Стадия 5. Синтез R19.
I-12.6 (3.62 г, 12.08 ммоль) растворяли в сухом тетрагидрофуране (40 мл), добавляют 3-оксетанон (1.16 мл, 18.13 ммоль) и уксусную кислоту (691 мкл, 12.08 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 20 мин при КТ. Добавляют триацетоксиборогидрид натрия (6.74 г, 30.21 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 25 мин при КТ. Реакционную смесь гасят метанолом, разбавляют насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и несколько раз экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над MgSO4 и концентрируют в вакууме. Получен
- 37 031376 ный остаток растирают соединения смесью ацетонитрил/метанол (9:1), образованный осадок отфильтровывают, маточный раствор концентрируют в вакууме и эту процедуру повторяют еще два раза. Осадки объединяют и сушат в вакууме с получением 2.47 г соединения R19. Маточный раствор концентрируют в вакууме, полученный остаток повторно растворяют в ацетонитриле и очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой с получением дополнительного количества (0.32 г) соединения R19.
Выход 78%, m/z 281 [М+Н]+, ву 0.78 мин, метод ЖХ-МС Z011 S03.
Примеры
Способы снятия защиты: TSA (толуолсульфоновая кислота см. пример 1). Стереохимию определяют по атому углерода, смежному с нитрильной группой: стереосвязь означает S-изомер.
Таблица 6
№ Структура Эдукт Способ синтеза / СНЯТИЯ зашиты Выход [%]
1 1-1.5 A/TSA 84
2 1-1.5 1 A/TSA >95
3 Х’Х 0 н 1-1.5 2 A/TSA 35
4 xXn ° \ 1-1.5 3 A/TSA 48
- 38 031376
5 Ά-МН ° \ I-1.5.4 A/TSA 48
6 rTr^Mi / Anh 0 Η I-1.5.5 A/TSA 7
7 Υίγ о 1-1.5.6 A/TSA 43
8 ггЛМ^ / ^ΝΗ О 1-1.5.7 A/TSA 41
9 QyVy н A < i _ ° X^0^X[Xx^jNH о 1-1.5.8 A/TSA 90
- 39 031376
10 ° 0 1-1,5.9 A/TSA 16
11 kVNH ο 1-1,5.10 A/TSA 20
12 η Д =. 1 / ° ο 1-1.5.11 A/TSA 54
13 Xrjy [-1,5.12 A/TSA 9
14 [-1,5.13 A/TSA 43
15 χΑ-Ύρ / ^ΝΗ [-1.5.14 A/TSA 49
- 40 031376
16 Ο Η 1-1.5 15 A/TSA 58
17 ί7?Μ ^ΝΗ Υι Ст 1Д^>О 1-1.5.16 A/TSA 46
18 ^Vv-^F Η Η ° UL 0 Ο 1-1.5 17 A/TSA 35
19 ΦγΜ? / Η θ Ψχ 0 N^JC0 0 1-1.5 18 A/TSA 73
20 Ογ«.ΧΝ Η α 1 Λ / ° Yll <f~J Ν·^χί о 1-15 19 A/TSA 47
21 Η ° 5cLqO о 1-1.5 .20 A/TSA 36
- 41 031376
22 н ° ZiZZl о 1-15 21 A/TSA 35
23 н о Ч^#\ /\ 1-1.5.22 A/TSA 83
24 ?vBmN й н ° Л > дл^м о 1-1.5.23 A/TSA >95
25 1-1.5.24 A/TSA 88
26 /ум1 , н ° V1 0 1-2.5 B/TSA 28
27 θνΜ f Η ° 1-3 5 C/TSA 61
- 42 031376
Аналитические данные примеров
Таблица 7
Пр. m/z [M+HJ+ By [мин] Способ ЖХ-МС
1 531 1.00 Z011 S03
2 473 1.19 Z011 S03
3 488 0.89 Z012_S04
4 502 0.73 Z012 S04
5 516 0.74 Z012 S04
6 502 0.70 Z012 S04
7 489 0.72 Z012S04
8 503 0.72 Z012S04
9 475 0.91 Z011 S03
10 489 0.96 Z011 S03
11 461 0.91 Z01l_S03
12 475 0.97 Z011 S03
13 475 0.76 Z012 S04
14 489 1.05 Z01l_S03
Пр. m/z [M+H]+ By [мин] Способ ЖХ-МС
15 487 117 Z011_S03
16 474 0.89 Z011-S03
17 516 0 60 Z020 S01
18 490 0.90 Z011 S03
19 504 0.95 Z011-S03
20 490 0 92 Z011_S03
21 504 0.92 Z011-S03
22 546 0.94 Z011 S03
23 532 0 96 Z011_S03
24 546 0.93 Z011-S03
25 532 0 97 Z011 S03
26 490 0.96 Z011 S03
27 545 1.02 Z011-S03
Ву=время удержания.
Таблица 8
Список сокращений
ACN ацетонитрил
водн. водный
ВОС, boc mpem-бутилоксикарбонил
d день
DBU 1,8-диазабицикло[5 4.0]ундец-7-ен
ДХМ дихлорметан
DEA диэтиламин
DIPEA Ν,Ν-диизопропилэтиламин
DIPE простой диизопропиловый эфир
DMAP 4-диметиламинопиридин
ДМФА Ν,Ν-диметилформамид
DMSO диметилсульфоксид
EA, EtOAc этилацетат
FA муравьиная кислота
4 час
HATU гексафторфосфат о-(7-азабензотриазол1-ил)-К,М,К',М'-тетраметилурония
Li OH гидроксид лития
MeOH метанол
MeTHF метилтетрагидрофуран
МИН минута
NaH гидрид натрия
PE петролейный эфир
PPA циклический ангидрид 1пропансульфоновой кислоты
KT, k t. комнатная температура, например, 15 - 25 °C
ву время удержания
ТВ ME mpciw-бутилметиловый эфир
TBTU тетрафторборан о-(1Н-бензо-1,2,3триазол-1 -ηα)-Ν,Ν,Ν',Ν'тетраметилурония
TEA триэтиламин
ТФУ трифторуксусная кислота
ТГФ тетрагидрофуран
TSA моногидрат н-толуолсульфоновой кислоты
Фармакологические данные
Другие признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из нижеследующих более подробных примеров, которые в качестве примера иллюстрируют принципы изобретения.
Ингибирование DPPI (катепсин С) человека
Материалы. Микротитрационные планшеты (Optiplate-384 F) были приобретены у PerkinElmer (сер. № 10 6007270). Субстрат Gly-Arg-AMC приобретали у Biotrend (сер. № 808756 Custom peptide).
Бычий сывороточный альбумин (BSA; сер. № А3059) и дитиотреитол (DTT; сер. № D0632) приоб
- 43 031376 ретали у Sigma. Буфер TagZyme приобретали у Riedel-de-Haen (сер. № 04269), NaCl приобретали у Merck (сер. № 1.06404.1000) и морфолиноэтансульфоновую кислоту (MES), приобретали у Serva (сер. № 29834). Ингибитор DPPI Gly-Phe-DMK приобретали у МР Biomedicals (сер. № 03DK00625). Рекомбинантную DPPI человека приобретали у Prozymex. Все другие материалы представляли собой материалы наивысшего класса из коммерчески доступных.
Использовали следующие буферы. Буфер MES: 25 мМ MES, 50 мМ NaCl, 5 мМ DTT, со значением рН, доведенным до 6.0, содержащий 0.1% BSA; Буфер TAGZyme: 20 мМ NaH2PO4, 150 мМ NaCl, со значением рН, доведенным до 6.0 с помощью HCl.
Условия проведения анализов: Рекомбинантную DPPI человека разбавляли буфером TAGZyme до концентрации 1 Ед/мл (38.1 мкг/мл, соответственно), и затем активировали путем смешивания в соотношении 1:2 с водным раствором цистеамина (2 мМ) и инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре.
мкл исследуемого соединения (конечная концентрация 0.1 нМ-100 мкМ) в бидистиллированной воде (содержащей 4% ДМСО, конечная концентрация ДМСО 1%) смешивали с 10 мкл DPPI в буфере MES (конечная концентрация 0.0125 нг/мкл) и инкубировали в течение 10 мин. Затем добавляли 5 мкл субстрата в буфере MES (конечная концентрация 50 мкМ). После этого микротитрационные планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин. Затем реакцию останавливали добавлением 10 мкл Gly-Phe-DMK в буфере MES (конечная концентрация 1 мкМ). Флуоресценцию в лунках определяли, используя устройство для считывания флуоресценции Molecular Devices SpectraMax M5 (длина волны возбуждения 360 нм, длина волны испускания 460 нм) или устройства для считывания флуоресценции Envision (длина волны возбуждения 355 нм, длина волны испускания 460 нм).
Каждый аналитический микротитрационный планшет содержал лунки с наполнителем в качестве контролей (1% ДМСО в бидистиллированной воде + 0.075% BSA) в качестве эталона для неингибированной активности фермента (100% контроль; высокие значения), и лунки с ингибитором (Gly-Phe-DMK, в бидистиллированной воде + 1% ДМСО + 0.075% BSA, конечная концентрация 1 мкМ) в качестве контролей для определения фоновой флуоресценции (0% контроль; низкие значения).
Анализ данных выполняли путем расчета процентного содержания флуоресценции в присутствии исследуемого соединения по сравнению с флуоресценцией контроля с наполнителем после 20 вычитания фоновой флуоресценции, используя следующую формулу:
(RFU (образец)-RFU (фон)) х 100/(RFU (контроль) -RFU (фон))
Соответственно данные из этих расчетов использовали для определения значений IC50 для ингибирования DPPI.
Таблица 9
Пример Ингибирование DPPI IC50 [мкм]
1 0.0011
2 0.0006
3 0.0003
4 0.0004
5 0.0006
6 0 0002
7 0.0005
8 0.0007
9 0.0005
10 0.0006
11 0.0007
12 0.0005
13 0.0006
14 0.0010
15 0.0005
16 0.0005
17 0.0016
18 0.0016
19 0.0010
20 0.0016
21 0.0014
22 0.0048
23 0.0050
24 0.0027
25 0.0018
26 0.0020
27 0.0029
- 44 031376
Определение активности эластазы нейтрофилов в препарате цитозолевого лизата U937 после инкубирования с исследуемым соединением
Материалы.
Планшеты Optiplate 384F приобретали у PerkinElmer (сер. № #6007270). 24-луночные планшеты для клеточных культур Nunclon (№ 142475) и 96-луночные планшеты (№ 267245) приобретали у Nunc. Диметилсульфоксид (ДМСО) приобретали у Sigma (сер. № D8418). Nonidet-P40 (NP40) приобретали у USBiological (сер. № N3500).
Субстрат, специфический для эластазы нейтрофилов, приобретали у фирмы Bachem (MeOSuc-AlaAla-Pro-Val-AMC; сер. № I-1270).
Эластазу нейтрофилов человека приобретали у Calbiochem (сер. № 324681).
Буферы.
Tris-буфер (100 мМ Tris; 1M NaCl; pH 7.5).
Tris-буфер + HSA 0.1%; альбумин человеческой сыворотки от Calbiochem (Cat#. 126658).
Буфер серинпротеазы (20 мМ Tris; 100 мМ NaCL; pH 7.5) + 0.1% HSA.
Лизирующий буфер серинпротеазы: 20 мМ Tris-HCL; 100 мМ NaCl pH 7.5; + 0.2% Nonidet-P40.
PBS: забуференный фосфатом физиологический раствор, без Са и Mg, от Gibco.
Клеточная культура.
U937 от ЕСАСС (кат. № 85011440), культивированная в суспензии при 37°С и 5% СО2.
Плотность клеток: 0.2-1 млн. клеток/мл.
Среда: RPMI1640 GlutaMAX (№ 61870) с 10% FCS от Gibco.
Посев клеток и обработка.
Соединения в 100% ДМСО разбавляли в среде (-FCS) с 10% ДМСО и дополнительно разбавляли согласно спланированному эксперименту.
мкл раствора соединения переносили в соответствующие лунки 24-луночного планшета и разбавляли 2 мл суспензии клеток/лунку, содержащей 1х105 клеток/мл (конечная концентрация ДМСО=0.1%). Коэффициент разбавления соединения=100.
Соединения (до 7 концентраций) исследовали в трех повторах с 3 лунками для 0.1% ДМСО в качестве контроля, осуществляя инкубирование в течение 48 ч без замены среды при 37°С, 5% СО2 и относительной влажности 95%.
Сбор клеток и получение клеточного лизата.
Суспензию клеток переносили в 2 мл 96-луночный блок для анализа. Клетки отделяли от среды путем центрифугирования (500 X g; 10 мин; КТ); супернатант отбрасывали. Ресуспендировали в 1 мл PBS; центрифугировали (500 X g; 10 мин; КТ); клетки дважды промывали посредством PBS. К сгустку клеток добавляли 80 мкл лизирующего буфера серинпротеазы (охлажденного льдом); сгусток клеток ресуспендировали и выдерживали на льду в течение 10 мин.
Сгусток клеток отделяли путем центрифугирования при 1000 X g в течение 10 мин при 4°С. 80-100 мкл лизатного супернатанта переносили в 96-луночный планшет и хранили сразу при -80°С.
Анализ активности эластазы нейтрофилов.
Замороженные лизаты оттаивали при 37°С в течение 10 мин и хранили на льду. Содержание белка определяли методом Бредфорда. Лизаты разбавляли до концентрации белка 0.2-0.5 мг/мл в буфере серинпротеазы + HSA.
Стандарт: NE (100 мкг/мл основного раствора в буфере Tris; хранили при -80°С) разбавляли буфером Tris + HSA до концентрации 750 нг/мл, и далее серийно разбавляли 1:2 для построения стандартной кривой.
Буфер, образцы холостой пробы, стандарта и лизата переносили в 384-луночный планшет.
План пипетирования.
Холостая проба: 5 мкл буфера Tris + 10 мкл буфера серинпротеазы + 5 мкл субстрата;
Стандарт: 5 мкл буфера Tris + 10 мкл NE (различ. конц.) + 5 мкл субстрата;
Лизат: 5 мкл буфера Tris + 10 мкл лизата + 5 мкл субстрата.
Увеличение флуоресценции (длина волны возбуждения 360 нм/длина волны испускания 460 нм) определяют через 30 мин с помощью Molecular Device Spectramax M5 Fluorescence Reader. Результат интерполировали к значению нг/мг белка в лизате, используя формулы в приложении excel. Рассчитывали выраженное в процентах отношение значения ингибирования в образцах обработанных соединением лизатов к значению в обработанном ДМСО контрольном образце (100-(соединениеобразецх 100)/контроль-образец).
Исследуемое соединение даст значения ингибирования эластазы нейтрофилов в диапазоне между 0% и 100%. IC50 рассчитывают с использованием Graphpad Prism; нелинейная подгонка (зависимость log(ингибитор) против ответа - изменяемый наклон). Значение IC50 интерполируют как концентрацию исследуемого соединения, которая приводит к снижению активности эластазы нейтрофилов на 50% (относительно обработанного ДМСО контроля).
- 45 031376
Таблица 10
Материалы. Микротитрационные планшеты (Optiplate-384 F приобретали у PerkinElmer (сер. № 6007270). Субстрат Z-Gly-Pro-Arg-AMC приобретали у Biomol (сер. № P-142). L-цистеин (сер. № 168149) приобретали у Sigma. Ацетат натрия приобретали у Merck (сер. № 6268.0250), EDTA приобретали у Fluka (сер. № 03680). Ингибитор Е-64 приобретали у Sigma (сер. № Е3132). Профермент рекомбинантного катепсина К человека приобретали у Biomol (сер. № SE-367). Все другие материалы представляли собой материалы наивысшего класса из коммерчески доступных.
Использовали следующие буферы: активирующий буфер: 32.5 мМ ацетат натрия, со значением рН, доведенным до 3.5 с помощью HCl; буфер для анализа: 150 мМ ацетата натрия, 4 мМ EDTA, 20 мМ Lцистеин, со значением рН, доведенным до 5.5 с помощью HCl.
Условия проведения анализов.
Для активации профермента 5 мкл прокатепсина К смешивали с 1 мкл активирующего буфера, и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин.
мкл исследуемого соединения (конечная концентрация 0.1 нМ-100 мкМ) в бидистиллированной воде (содержащей 4% ДМСО, конечная концентрация ДМСО 1%) смешивали с 10 мкл катепсина К в буфере для анализа (конечная концентрация 2 нг/мкл) и инкубировали в течение 10 мин. Затем добавляли 5 мкл субстрата в буфере для анализа (конечная концентрация 12.5 мкМ). После этого планшеты инкубировали при комнатной температуре в течение 60 мин. Затем реакцию останавливали добавлением 10 мкл Е64 в буфере для анализа (конечная концентрация 1 мкМ). Флуоресценцию в лунках определяли, используя устройство для считывания флуоресценции Molecular Devices SpectraMax M5 (длина волны возбуждения 360 нм, длина волны испускания 460 нм).
Каждый аналитический микротитрационный планшет содержит лунки с наполнителем в качестве контролей (1% ДМСО в бидистиллированной воде) в качестве эталона для неингибированной активности фермента (100% контроль; высокие значения) и лунки с ингибитором (Е64 в бидистиллированной воде + 1% ДМСО, конечная концентрация 1 мкМ) в качестве контролей для определения фоновой флуо
- 46 031376 ресценции (0% контроль; низкие значения). Анализ данных выполняли путем расчета, выраженного в процентах отношения флуоресценции в присутствии исследуемого соединения к флуоресценции контроля с наполнителем после вычитания фоновой флуоресценции:
(RFU (образец)-RFU (фон)) x 100/(RFU (контроль) -RFU (фон))
Соответственно данные из этих расчетов использовали для определения значений IC50 для ингибирования катепсина K.
Определение метаболической стабильности с использованием микросом печени человека
Метаболический распад исследуемого соединения анализировали при 37°С с использованием объединенных микросом печени человека. Конечный инкубируемый объем 100 мкл на данный момент времени содержал буфер TRIS со значением рН 7.6 (0.1 М), хлорид магния (5 мМ), микросомный белок (1 мг/мл) и исследуемое соединение в конечной концентрации 1 мкМ. После короткого периода предварительной инкубации при 37°С, реакции инициировали путем добавления восстановленной формы бетаникотинамидадениндинуклеотидфосфата (NADPH, 1 мМ), и завершали путем переноса аликвоты в ацетонитрил в разные моменты времени. Дополнительно, NADPH-независимый распад отслеживали в инкубированных смесях без NADPH, завершая наблюдения в последний момент времени. Оставшееся исследуемое соединение [%] после NADPH независимого инкубирования отображали с помощью параметра к(контроль) (метаболическая стабильность). Гашенные инкубированные смеси осаждали путем центрифугирования (10'000 g, 5 мин). Аликвоту супернатанта анализировали с помощью ЖХ-МС/МС на количество исходного соединения.
Период полураспада (t1/2 INVITRO) определяли с помощью наклона графика профиля концентрация-время в полулогарифмическом масштабе. Собственный клиренс (CLINTRINSIC) рассчитывали, учитывая количество белка в инкубируемой смеси:
CL INTRINSIC [мкл/мин/мг белка]=(Ш 2/(период полураспада [мин] x содержание белка [мг/мл])) x 1'000.
Значения периода полураспада (t1/2 INVITRO) выбранных соединений, полученные в вышеописанном анализе метаболической стабильности, приведены в следующей таблице.
Таблица 11
- 47 031376
Захват цели в мышиной модели
Обработка соединением.
Чтобы проверить эффект исследуемого соединения на активность эластазы нейтрофилов в периферических нейтрофилах, самок мышей Crl:NMRI обрабатывали следующим образом.
Группа 1 (6 животных): 0.5 мг/кг исследуемого соединения в 0.5% Natrosol (РН 2-3).
Группа 2 (6 животных): 0.5% Natrosol (pH 2-3).
Группа 3 (2 животных): 0.5% Natrosol (pH 2-3).
Исследуемые соединения или раствор Natrosol применяли с понедельника по пятницу в 7:00 утра и 4:00 вечера каждый день первой недели исследования и в понедельник и вторник (7:00 утра и 4:00 вечера) второй недели. Исследуемые соединения или Natrosol применяли перорально.
Провокация ЛИС и получение бронхоальвеолярного лаважа.
В среду второй недели животных обрабатывали исследуемым соединением или раствором Natrosol, как описано выше (7:00 утра), за которым следовала ингаляционная провокация ЛПС (липополисахарид):
Группа 1 и 2: 20 мин ингаляции ЛПС (E.coli Serotype 055:B5; 1 мг/мл в фосфатно-солевом буферном растворе), с применением небулайзера для непрерывной ингаляции MiniHeart Hi-Flo (Westmed).
Группа 3: без провокации ЛПС.
Через 4 ч после провокации ЛПС, из всех животных получали бронхоальвеолярный лаваж, используя 2x1 мл солевой раствор Хенкса на животное, и определяли количества клеток в жидкости лаважа, используя Sysmex XT-1800i. Клетки в жидкости лаважа отделяли центрифугированием и лизировали в лизисном буфере (100 мм TRIS рН 7.5, 1 М NaCl, 0.2% NP40).
Измерение эластазы нейтрофилов (NE).
Активность NE в лизате клеток BALF (жидкость бронхоальвеолярного лаважа) измеряли, используя флуоресцентный субстрат NE MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC (Bachem): 10 мкл лизата клеток смешивали с 5 мкл буфера для анализа (20 мм Tris pH 7.5, 100 мм NaCl, 0.1% сывороточный альбумин человека) и 5 мкл субстрата (1 мм в буфере для анализа) в 384-луночном планшете (Optiplate 384f, PerkinElmer). Реакционную смесь инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре и измеряли флуоресценцию (360 нм возбуждение, 460 нм испускание). Полученные значения флуоресценции были нормализованы до количеств нейтрофилов BALF для каждого животного. Для подсчета ингибирования активности NE исследуемыми соединениями, среднее значение флуоресценции группы 3 вычитали из значений флуоресценции группы 1 и 2 и % ингибирования активности NE в группе 1 сравнивали со средним значением флуоресценции, подсчитанным в группе 2.
Активность эластазы нейтрофилов в лизате BALF после предварительной обработки ингибиторами катепсина С (введение 7 дн. два раза в сутки) приведена в нижеследующей таблице.
Таблица 12
Пример Ингибирование активности эластазы нейтрофилов в лизате BALF после предварительной обработки ингибитором катепсина С (дозировка 0 5 мг/кг два раза в сутки в течение 7 дней)
1 96
25 94
Кристаллические структуры комплексов лиганда катепсина С
Белок.
Рекомбинантный человеческий катепсин С (Cat С) был получен в соответствии со стандартными молекулярно-биологическими протоколами (Литературные источники: 1-3).
Кристаллизация и замачивание.
Перед кристаллизацией белковый буфер заменяли на 20 мм Бис-Tris рН 7.0, 150 мм NaCl, 2 мм EDTA, 2 мм DTT с NAP 10 колонкой (GE Healthcare). Образец белка концентрировали до 9-10 мг/мл. Кристаллы выращивали при 20 °С в висячих каплях, используя 1.0 мкл белка и 1.0 мкл раствора на лунку (0.1 М Бис-Tris-Propane рН 6.0-6.5, 18-20% (w/v) PEG 3350, 200 мм NaF, 1 мм DDT). В течение ночи появились кристаллы и росли до максимального размера в течение 2-3 дней. Соструктуры лиганда были получены путем замачивания в течение ночи апо-кристаллов в луночном растворе, дополненном посредством 1 мм соответствующего лиганда (путем разбавления из 100 мм маточного раствора в ДМСО). Затем кристаллы замораживали в жидкий азот до сбора данных, используя 20% глицерин и луночный раствор в качестве криопротектора.
Сбор данных, структурный раствор и рафинирование.
Все данные дифракции были собраны при 100 K на вращающемся анодном генераторе (Rigaku), с использованием излучения CuKa и обработаны при помощи XDS (литературный источник: 4). Соструктуры лиганда растворяли при помощи разностного способа Фурье и рафинировали при помощи программы autoBuster (Global Phasing Ltd.), итерированной ручным восстановлением, с использованием программы coot (литературный источник: 5). Окончательные данные обработки и статистика уточнения
- 48 031376 приведены в табл. 13. Для подготовки фигуры использовали программу (DeLano Scientific LLC).
Результаты
Структура лигандных комплексов катепсина С.
Структура человеческого катепсина С (Cat С) описана в литературных источниках (источник 2) в виде тетрамера, содержащего четыре идентичные субъединицы. Каждая субъединица состоит из трех цепей: легкие и тяжелые цепи образуют каталитический домен, в то время как так называемый домен исключения блокирует расщепление активного сайта за пределами кармана S2 и отвечает за экзопептидазную активность Cat С. Структуры Cat С в комплексе с примерами 11 и 16 (табл. 14, фигура) были определены для выяснения механизма связывания этого класса соединений. Примеры 11 и 16 связываются через ковалентное взаимодействие нитрильной группы с Cys234. Пример 11 представляет собой отдельный энантиомер с атомом углерода, смежным с нитрильной группой в (S) конфигурации, в то время как пример 16 (спироциклический атом углерода имеет RS стереохимию) представляет собой смесь диастереомеров. Бициклическая аминокислота достигает кармана фермента S1, где она закрепляется через водородные связи с атомами скелета Gly277 и Asn380, а также с боковой цепью Asp1. Бис-арильная система направлена на карман S2, где она участвует в ван-дер-ваальсовых взаимодействиях с остатками Asp1 и Pro3 домена исключения. Неожиданным образом изобретатели наблюдали дополнительное взаимодействие спиро-циклического амина: спиро-азетидин в примере 11 и спиро-пирролидин в примере 16. В обоих случаях основной атом азота образует солевой мостик к Glu275, указывающий на высокую активность фермента этого класса соединения.
Список процитированной литературы:
(1) Soren W. Dahl, Torben Halkier, Conni Lauritzen, Iztok Dolenc, John Pedersen, Vito Turk и Boris Turk. (2001), Human Recombinant Pro-dipeptidyl Peptidase I (Cathepsin C) Can Be Activated by Cathepsins L and S but Not by Autocatalytic Processing. Biochemistry 40, 1671-1678.
(2) Dusan Turk, Vojko Janjic, Igor Stern, Marjetka Podobnik, Doriano Lamba, Suren Weis Dahl, Connie Lauritzen, John Pedersen, Vito Turk and Boris Turk (2001), Structure of human dipeptidyl peptidase I (cathepsin C): exclusion domain added to an endopeptidase framework creates the machine for activation of granular serine proteases. The EMBO Journal 20, 6570-6582.
(3) Furber, M. et al. (2014), Cathepsin С Inhibitors: Property Optimization и Identification of a Clinical Candidate. J. Med. Chem., 51, 2351-2361.
(4) Kabsch, W. (2010), XDS. Acta Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 66, 125-132.
(5) Emsley, P. & Cowtan, K. (2004) Coot: model-building tools for molecular graphics. Acta Crystallogr.
D. Biol. Crystallogr. 60, 2126-2132.
Таблица 13
Сбор данных и статистические данные уточнения
Сбор данных '
Набор данных Пример 11 Пример 16
Детектор Saturn 944 Маг345
Пространственная группа 1222 1222
Размеры ячеек а, Ь, с (А) 86.0, 89.3, 114 6 86.5, 88.7, 114 5
Разрешение (А) 1.7 1.5
Завершенность (%) 81.0 (9.1) 93.3 (43.5)
Rsvni (%) 4.2 (31.6) 3.5 (28.0)
< Ι/σ(Ι) > 32.1 (2.9) 32.5 (4.7)
Уточнение 2
R-фактор / R-свободный (%) 17.8/19.2 21.3/21.7
Rmsd длина связи (А) 0.008 0.008
Rmsd углы связи (°) 0. 90 0.93
1 Значения в круглых скобках относятся к оболочке с самым высоким разрешением;
Rsyin Shkl^i I Ιι-<1> I /ΣΐιΚΐΣ1Ιι 2 R-фактор = Zhkl | | Fobs I -k I Fcalc | | /Zhkl | Fobs I, R-свободный был подсчитан, используя 5% данных, исключенных из уточнения; Rmsd, среднее квадратичное отклонение.
- 49 031376
Таблица 14
Соединения, исследованные в рентгеновской кристаллографии
Соединение Пример 11 Пример 16
Структура *И1~ □ : хиральное /Щ
1 >;=0
Стереоизомер отдельный смесь
диастереомер диастереомеров
CatC IC50 (пМ) 0.7 0.5
Фармацевтические композиции
Пригодные препараты для введения соединений формулы I будут очевидны специалистам в данной области и включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, суппозитории, лепешки, пастилки, растворы, сиропы, эликсиры, саше, препараты для инъекций, ингаляций и порошки и т.д., предпочтительно таблетки.
Пригодные таблетки могут быть получены, например, путем смешивания одного или нескольких соединений формулы I с известными инертными наполнителями, например, инертными разбавителями, носителями, разрыхлителями, адъювантами, поверхностно-активными веществами, связующими веществами и/или смазывающими веществами. Таблетки могут также состоять из нескольких слоев.
Комбинации
Соединения общей формулы I можно применять отдельно или в сочетании с другими активными веществами формулы I в соответствии с изобретением. Соединения общей формулы I также необязательно можно комбинировать с другими фармакологически активными веществами. К ним относят: агонисты в2-адренорецептора (кратковременного и длительного действия), антихолинергические средства (кратковременного и длительного действия), противовоспалительные стероиды (кортикостероиды для перорального и местного введения), кромогликат, метилксантин, диссоциированные глюкокортикоидные миметики, ингибиторы PDE3, ингибиторы PDE4, ингибиторы PDE7, антагонисты LTD4, ингибиторы EGFR, агонисты дофамина, антагонисты PAF, производные липоксина А4, модуляторы FPRL1, антагонисты рецептора LTB4 (BLT1, BLT2), антагонисты гистаминового рецептора H1, антагонисты гистаминового рецептора Н4, двойные антагонисты гистаминовых рецепторов Н1/НЗ, ингибиторы киназы PI3, ингибиторы нерецепторных тирозинкиназ, как например, LYN, LCK, SYK, ZAP-70, FYN, ВТК или ITK, ингибиторы киназ MAP, как например, р38, ERK1, ERK2, JNK1, JNK2, JNK3 или SAP, ингибиторы сигнального пути NF-кВ, как например, ингибиторы киназы IKK2, ингибиторы iNOS, ингибиторы MRP4, ингибиторы биосинтеза лейкотриена, как например, ингибиторы 5-липоксигеназы (5-LO), ингибиторы cPLA2, ингибиторы лейкотриен-А4-гидролазы или ингибиторы FLAP, нестероидные противовоспалительные средства (NSAID), антагонисты CRTH2, модуляторы рецептора DPI, антагонисты тромбоксанового рецептора, антагонисты CCR3, антагонисты CCR4, антагонисты CCR1, антагонисты CCR5, антагонисты CCR6, антагонисты CCR7, антагонисты CCR8, антагонисты CCR9, антагонисты CCR30, антагонисты CXCR3, антагонисты CXCR4, антагонисты CXCR2, антагонисты CXCR1, антагонисты CXCR5, антагонисты CXCR6, антагонисты CX3CR3, антагонисты нейрокининов (NK1, NK2), модуляторы сфингозин1-фосфатного рецептора, ингибиторы сфингозин-1-фосфатлиазы, модуляторы аденозинового рецептора, как, например, агонисты А2а, модуляторы пуринергических рецепторов, как, например, ингибиторы Р2Х7, активаторы гистондеацетилазы (HDAC), антагонисты брадикинина (BK1, BK2), ингибиторы ТАСЕ, модуляторы PPAR-гамма, ингибиторы киназы Rho, ингибиторы интерлейкин 1-бета конвертирующего фермента (ICE), модуляторы толл-подобного рецептора (TLR), ингибиторы HMG-CoA редуктазы, антагонисты VLA-4, ингибиторы ICAM-1, агонисты SHIP, антагонист рецептора GABAa, ингибиторы ENaC, ингибиторы простазина, ингибиторы матриптазы, модуляторы меланокортинового рецептора (MC1R, MC2R, MC3R, MC4R, MC5R), антагонисты CGRP, антагонисты эндотелина, антагонисты TNFa, антитела анти-TNF, антитела анти-GM-CSF, антитела анти-CD46, антитела анти-ГЕ-1, антитела анти-IL2, антитела анти-ГЕ-4, антитела анти-ГЕ-5, антитела анти-ГЕ-13, антитела анти-ГЕ^/ГЕ-И, антитела антиTSLP, антитела анти-ОХ40, мукорегуляторы, иммунотерапевтические средства, соединения, препятствующие отеку дыхательных путей, противокашлевые соединения, ингибиторы VEGF, ингибиторы NE, ингибиторы ММР9, ингибиторы ММР12, а также комбинации из двух или трех активных веществ.
Предпочтительными являются бетамиметики, антихолинергические средства, кортикостероиды, ингибиторы PDE4, антагонисты LTD4, ингибиторы EGFR, ингибиторы CRTH2, ингибиторы 5-LO, антагонисты гистаминового рецептора и ингибиторы SYK, ингибиторы NE, ингибиторы ММР9, ингибиторы ММР12, а также комбинации из двух или трех активных веществ, т.е.
- 50 031376 бетамиметики с кортикостероидами, ингибиторами PDE4, ингибиторами CRTH2 или антагонистами LTD4;
антихолинергические средства с бетамиметиками, кортикостероидами, ингибиторами PDE4, ингибиторами CRTH2 или антагонистами LTD4;
кортикостероиды с ингибиторами PDE4, ингибиторами CRTH2 или антагонистами LTD4; ингибиторы PDE4 с ингибиторами CRTH2 или антагонистами LTD4;
ингибиторы CRTH2 с антагонистами LTD4.
Показания
Соединения в соответствии с изобретением и их фармацевтически приемлемые соли обладают активностью лекарственных препаратов, в частности, ингибиторов активности дипептидилпептидазы I, и таким образом, их можно применять для лечения:
1) заболеваний дыхательных путей: обструктивных заболеваний дыхательных путей, включая: астму, включая бронхиальную, аллергическую, наследственную, приобретенную, астму физического напряжения, вызванную лекарственным средством (включая вызванную аспирном и NSAID) и вызванную пылью астму, перемежающуюся и стойкую и всех степеней тяжести, и другие случаи гиперчувствительности дыхательных путей; хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ); бронхита, включая инфекционный и эозинофильный бронхит; эмфиземы; альфа-1-антитрипсиновой недостаточности, бронхоэктаза; муковисцидоза; саркоидоза; аллергического альвеолита у сельскохозяйственных рабочих и родственных заболеваний; пневмонита гиперчувствительности; фиброза легких, включая криптогенный фиброзирующий альвеолит, идиопатические интерстициальные пневмонии, фиброзные осложнения при противоопухолевой терапии и хронические инфекции, включая туберкулез и аспергиллез, и другие грибковые инфекции; осложнений при трансплантации легких; васкулитных и тромбозных нарушений сосудистой системы легких, ангиопатии (гранулематоза Вегенера) и легочной гипертензии; кашля, включая лечение хронического кашля, связанного с воспалительными и секреторными патологическими состояниями дыхательных путей, и ятрогенного кашля; острого и хронического ринита, включая лекарственный ринит и вазомоторный ринит; круглогодичного и сезонного аллергического ринита, включая нервный ринит (сенная лихорадка); назального полипоза; острой вирусной инфекции, включая простуду и инфицирование респираторно-синцитиальным вирусом, грипп, инфицирование коронавирусом (включая SARS (тяжелый острый респираторный синдром)) и аденовирусом;
2) заболеваний кожи: псориаза, атопического дерматита, контактного дерматита или других экзематозных дерматозов и аллергических реакций замедленного типа; фито- и фотодерматита; себорейного дерматита, герпетиформного дерматита, красного плоского лишая, склерозирующего и атрофического лишая, гангренозной приодермии, саркоидоза кожи, дискоидной красной волчанки, пузырчатки, пемфигоида, буллезного эпидермолиза, крапивницы, ангионевротического отека, васкулитов, токсических эритем, кожных эозинофилий, гнездной алопеции, облысения по мужскому типу, синдрома Свита, синдрома Вебера-Крисчена, полиморфной эритемы; инфекционного и неинфекционного целлюлита; панникулита; кожных лимфом, немеланомного рака кожи и других диспластических патологических изменений; вызванных лекарственным средством нарушений, включая сегментарную медикаментозную сыпь;
3) заболеваний глаз: блефарита; конъюнктивита, включая круглогодичный и весенний аллергический конъюнктивит; ирита; переднего и заднего увеита; хориоидита; аутоиммунных, дегенеративных или воспалительных нарушений, влияющих на сетчатку; офтальмита, включая симпатический офтальмит; саркоидоза; инфекций, включая вирусные, грибковые и бактериальные;
4) заболеваний мочеполовой системы: нефрита, включая интерстициальный нефрит и гломерулонефрит; нефротического синдрома; цистита, включая острый и хронический (интерстициальный) цистит и хроническую язву мочевого пузыря; острого и хронического уретрита, простатита, эпидидимита, оофорита и сальпингита; вульвовагинита; болезни Пейрони; эректильной дисфункции (мужчин и женщин);
5) отторжения аллотрансплантата: острого и хронического, возникающего, например, после трансплантации почки, сердца, печени, легкого, костного мозга, кожи или роговицы, или возникающего после переливания крови; или хронической реакции трансплантат против хозяина;
6) других аутоиммунных и аллергических нарушений, включая ревматоидный артрит, синдром раздраженной толстой кишки, системную красную волчанку, рассеянный склероз, тиреоидит Хашимото, болезнь Грейвса, болезнь Аддисона, сахарный диабет, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, атонический фасциит, гипер-IgE-синдром, антифосфолипидный синдром и синдром Сезари;
7) онкологических заболеваний: лечения обычных типов рака, включая рак предстательной железы, молочной железы, легких, яичников, поджелудочной железы, кишечника и толстой кишки, желудка, кожи, и опухолей головного мозга, и злокачественных опухолей, поражающих костный мозг (включая лейкозы) и лимфопролиферативные системы, таких как ходжкинская и неходжкинская лимфома; включая предотвращение и лечение метастатического заболевания и рецидивов опухолей, и паранеопластических синдромов;
8) инфекционных заболеваний: вирусных заболеваний, таких как остроконечные бородавки, обычные бородавки, роговые бородавки, гепатит В, гепатит С, инфицирование вирусом простого герпеса, контагиозным моллюском, оспой, инфицирование вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), вирусом
- 51 031376 папилломы человека (ВПЧ), цитомегаловирусом (ЦМВ), вирусом ветряной оспы (ВВО), риновирусом, аденовирусом, коронавирусом, грипп, пара-грипп; бактериальных заболеваний, таких как туберкулез и инфицирование микобактериями Avium, проказа; других инфекционных заболеваний, таких как грибковые заболевания, вызванные Chlamydia, Candida, Aspergillus, криптококковый менингит, пневмоцистная пневмония, криптоспоридиоз, гистоплазмоз, токсоплазмоз, трипаносомная инфекция и лейшманиоз; и
9) боли: последние данные литературных источников, касающиеся катепсин С-дефицитных мышей указывают на модулирующую роль катепсина С при болевых ощущениях. Соответственно ингибиторы катепсина С также могут быть пригодны в клинической ситуации при различных формах хронической боли, например, воспалительной или невропатической боли.
Для лечения описанных выше заболеваний и состояний терапевтически эффективная доза, как правило, будет находиться в диапазоне от примерно 0.01 до примерно 100 мг/кг массы тела на единицу дозы соединения в соответствии с изобретением; предпочтительно от примерно 0.1 до примерно 20 мг/кг массы тела на единицу дозы. Например, для введения индивиду, обладающему массой в 70 кг, диапазон дозировки будет составлять от примерно 0.7 до примерно 7000 мг на единицу дозы соединения в соответствии с изобретением, предпочтительно от примерно 7.0 до примерно 1400 мг на единицу дозы. Для определения оптимальной дозировки и режима может потребоваться определенная степень оптимизации дозы. Активный ингредиент можно вводить от 1 до 6 раз в сутки.
Разумеется, фактические фармацевтически эффективные количества или терапевтические дозы будут зависеть от факторов, известных специалисту в данной области техники, таких как возраст и масса тела пациента, способ введения и тяжесть заболевания. В любом случае активный ингредиент вводят в таких дозах и такими методами, которые позволяют, исходя из индивидуального состояния пациента, осуществить доставку фармацевтически эффективного количества.

Claims (28)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль о
    I где Су означает
    А означает где W выбран из группы, включающей СН и N;
    X выбран из группы, включающей СН и N;
    Y выбран из группы, включающей СН и N;
    при условии, что максимум один из W, X и Y может быть N;
    D-E выбран из группы, включающей N(R2)-C(O), CH2CH2, G(O)-O и СН2-О;
    R2 выбран из группы, включающей Н и С1-3алкил;
    R1 выбран из группы, включающей Н, С1-3алкил, СН3ОСН2СН2-, оксетанил, тетрагидрофуранил, 4тетрагидропиранил и 3-тетрагидропиранил;
    i означает 1, 2 или 3;
    j означает 1, 2 или 3;
    при условии, что сумма i+j равна 2, 3 или 4.
  2. 2. Соединение формулы I по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где Су означает
  3. 3. Соединение формулы I по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где Су означает
  4. 4. Соединение формулы I по пп.1, 2 или 3 или его фармацевтически приемлемая соль, причем R1 выбран из группы, включающей Н, СН3- и оксетанил.
    - 52 031376
  5. 5. Соединение формулы I по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, причем R2 выбран из группы, включающей Н и СН3.
  6. 6. Соединение формулы I по любому из пп.1-5 или его фармацевтически приемлемая соль, причем D-E означает СН2-О.
  7. 7. Соединение формулы I по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, причем
    R1 выбран из группы, включающей Н, СН3 и оксетанил;
    R2 означает СН3;
    W выбран из группы, включающей СН и N;
    X выбран из группы, включающей СН и N;
    Y означает СН;
    при условии, что максимум один из W и X может быть N;
    D-E выбран из группы, включающей N(R2)-C(O), CH2CH2, G(O)-O и СН2-О;
    i означает 1 или 2;
    j означает 1 или 2;
    при условии, что сумма i+j равна 2, 3 или 4.
  8. 8. Соединение формулы I по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемая соль, причем
    А выбирают из группы, включающей формулы А1-А14:
  9. 9. Соединение формулы I по п.8 или его фармацевтически приемлемая соль, причем А выбран из группы, включающей А2-А7, А10, А13 и А14:
    - 53 031376
  10. 10. Соединение формулы I по п.8 или 9 или его фармацевтически приемлемая соль, причем А вы-
  11. 11. Соединение формулы I по п.1, выбранное из группы, включающей примеры 1, 5, 8, 10, 12, 13,
    14, 19, 22-25 и 27:
    - 54 031376
  12. 12. Соединение формулы I по пп.1 и 11 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
    - 55 031376
  13. 13. Соединение формулы I по ставляет собой пп.1 и 11 или его фармацевтически приемлемая соль, которое пред-
  14. 14. Соединение формулы I ставляет собой по пп.1 и 11 или его фармацевтически приемлемая соль, которое пред-
  15. 15. Соединение формулы I по пп.1 и 11 или его ставляет собой фармацевтически приемлемая соль, которое пред-
  16. 16. Соединение формулы I по пп.1 и 11 или его ставляет собой фармацевтически приемлемая соль, которое пред
  17. 17. Соединение формулы I ставляет собой по пп.1 и 11 или фармацевтически приемлемая соль, которое предего
  18. 18. Соединение формулы I по пп.1 и 11 или его ставляет собой фармацевтически приемлемая соль, которое пред-
  19. 19. Соединение формулы I по пп.1 и 11 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
    - 56 031376
  20. 20. Соединение формулы I ставляет собой
  21. 21. Соединение формулы I ставляет собой
  22. 22. Соединение формулы I ставляет собой пп.1 и 11 или его по по фармацевтически приемлемая соль, которое пред- пп.1 и 11 или его фармацевтически приемлемая соль, которое пред- пп.1 и 11 или по фармацевтически приемлемая соль, которое предего
  23. 23. Соединение формулы I по пп.1 и 11 или его фармацевтически приемлемая соль, которое представляет собой
  24. 24. Соединение формулы I по пп.1 и 11 или его ставляет собой фармацевтически приемлемая соль, которое пред-
  25. 25. Применение соединения формулы I по любому из пп.1-24 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного средства, обладающего активностью дипептидилпептидазы I.
  26. 26. Применение соединения формулы I по любому из пп.1-24 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве лекарственного средства для лечения астмы и аллергических заболеваний, желудочнокишечных воспалительных заболеваний, гломерулонефрита, эозинофильных заболеваний, хронического обструктивного заболевания легких, инфицирования патогенными микробами, ревматоидного артрита, нейтрофильных заболеваний, муковисцидоза (CF), некистозного фиброза, идиопатического легочного фиброза, бронхоэктаза, ANCA-ассоциированного васкулита, рака легких, эмфиземы, хронического бронхита, острого повреждения лёгких (ALI), острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), лёгочной гипертензии, лёгочной артериальной гипертензии (РАН) и дефицита альфа-1-антитрипсина (AATD), ожирения и связанного воспаления, резистентности к инсулину, диабетов, жировой дистрофии печени и стеатоза печени.
  27. 27. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью дипептидилпептидазы I, отличаю
    - 57 031376 щаяся тем, что она содержит одно или несколько соединений формулы I по любому из пп.1-24 или его фармацевтически активную соль.
  28. 28. Способ лечения или предупреждения заболеваний, в которых терапевтическое преимущество имеют ингибиторы активности DPPI, причем способ включает введение терапевтически или профилактически эффективного количества соединений формулы I по любому из пп.1-24 нуждающемуся в этом пациенту.
    Белок показан в виде ленточного представления, с выбранными остатками, показанными как палочки. Лиганды показаны как представление палочек, водородные связи - как пунктирные линии.
EA201790576A 2014-09-12 2015-09-08 Спироциклические ингибиторы катепсина с EA031376B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14184613 2014-09-12
PCT/EP2015/070449 WO2016038007A1 (en) 2014-09-12 2015-09-08 Spirocyclic inhibitors of cathepsin c

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201790576A1 EA201790576A1 (ru) 2017-08-31
EA031376B1 true EA031376B1 (ru) 2018-12-28

Family

ID=51535355

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790576A EA031376B1 (ru) 2014-09-12 2015-09-08 Спироциклические ингибиторы катепсина с

Country Status (34)

Country Link
US (3) US9540373B2 (ru)
EP (2) EP3511331A1 (ru)
JP (2) JP2017526716A (ru)
KR (1) KR102510588B1 (ru)
CN (2) CN107074870B (ru)
AP (1) AP2017009733A0 (ru)
AU (1) AU2015314355B2 (ru)
BR (1) BR112017003433B1 (ru)
CA (1) CA2960916C (ru)
CL (1) CL2017000432A1 (ru)
CO (1) CO2017002268A2 (ru)
CY (1) CY1123033T1 (ru)
DK (1) DK3191487T3 (ru)
EA (1) EA031376B1 (ru)
ES (1) ES2749009T3 (ru)
HK (1) HK1255362A1 (ru)
HR (1) HRP20191756T1 (ru)
HU (1) HUE047208T2 (ru)
IL (1) IL250262B (ru)
LT (1) LT3191487T (ru)
MX (2) MX367316B (ru)
MY (1) MY188382A (ru)
NZ (1) NZ728684A (ru)
PE (1) PE20170438A1 (ru)
PH (1) PH12017500453B1 (ru)
PL (1) PL3191487T3 (ru)
PT (1) PT3191487T (ru)
RS (1) RS59444B1 (ru)
SA (1) SA517381064B1 (ru)
SG (1) SG11201701633SA (ru)
SI (1) SI3191487T1 (ru)
TW (1) TWI687424B (ru)
UA (1) UA118610C2 (ru)
WO (1) WO2016038007A1 (ru)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9018227B2 (en) 2010-03-19 2015-04-28 Indiana State University Nicotinic acetylcholine receptor agonists
NO2699580T3 (ru) 2014-01-24 2018-02-24
JP6529575B2 (ja) * 2014-08-01 2019-06-12 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 置換オキセタンおよびそれらのカテプシンｃの阻害薬としての使用
RS59444B1 (sr) * 2014-09-12 2019-11-29 Boehringer Ingelheim Int Spirociklični inhibitori katepsina c
WO2018162312A1 (en) * 2017-03-10 2018-09-13 Basf Se Spirocyclic derivatives
JP2021512904A (ja) * 2018-02-07 2021-05-20 インスメッド インコーポレイテッド Ａｎｃａ関連血管炎の治療のためのある種の（２ｓ）−ｎ−［（１ｓ）−１−シアノ−２−フェニル］−１，４−オキサゼパン−２−カルボキサミド
CN110256429B (zh) * 2019-06-17 2021-06-22 广东药科大学 一种具有螺环结构的氨基嘧啶类化合物及其制备方法和应用
CN110257504A (zh) * 2019-06-30 2019-09-20 中南大学 一种难治性哮喘检测标记物的筛选方法及其应用
WO2022117059A1 (zh) * 2020-12-04 2022-06-09 瑞石生物医药有限公司 组织蛋白酶c小分子抑制剂及其医药用途
WO2023243601A1 (ja) * 2022-06-13 2023-12-21 モジュラス株式会社 アザシクロアルキルカルボニル環状アミン化合物
WO2024008680A1 (en) 2022-07-06 2024-01-11 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Azetidine derivatives and use thereof as dipeptidyl peptidase 1 inhibitors

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013041497A1 (en) * 2011-09-19 2013-03-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted n- [1-cyano-2- (phenyl) ethyl] -2-azabicyclo [2.2.1] heptane-3-carboxamide inhibitors of cathepsin c

Family Cites Families (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4125727A (en) 1976-10-18 1978-11-14 American Cyanamid Company Method of preparing imidazoisoindolediones
GB8922355D0 (en) 1989-10-04 1989-11-22 British Telecomm Sealing gland
GEP20012487B (en) 1998-09-16 2001-07-25 Merab Lomia Use of Chemical Agent 5-carbarnoyl-5H-Dibenz (b,f) azepin, its Derivatives and Analogues by New Purpose
US6960597B2 (en) 2000-06-30 2005-11-01 Orth-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Aza-bridged-bicyclic amino acid derivatives as α4 integrin antagonists
US7012075B2 (en) 2001-03-02 2006-03-14 Merck & Co., Inc. Cathepsin cysteine protease inhibitors
TW200306189A (en) 2002-03-21 2003-11-16 Merz Pharma Gmbh & Co Kgaa Azabicyclic, azatricyclic and azaspirocyclic derivatives of aminocyclohexane NMDA, 5HT3, and neuronal nicotinic receptor antagonists
US20070099958A1 (en) 2003-06-18 2007-05-03 Prozymex A/S Protease inhibitors
TW200528440A (en) 2003-10-31 2005-09-01 Fujisawa Pharmaceutical Co 2-cyanopyrrolidinecarboxamide compound
WO2006096807A1 (en) 2005-03-08 2006-09-14 Janssen Pharmaceutica N.V. Aza-bridged-bicyclic amino acid derivatives as alpha 4 integrin antagonists
WO2007137738A1 (de) * 2006-06-01 2007-12-06 Sanofi-Aventis Spiro-cyclische nitrile als protease-inhibitoren
EP2072519A4 (en) 2006-09-28 2009-10-21 Banyu Pharma Co Ltd DIARYLKETIMINDERIVAT
WO2009047829A1 (ja) 2007-10-12 2009-04-16 Fujitsu Limited Ｉｐ電話自動試験システム及び方法
CA2706679A1 (en) 2007-12-12 2009-06-18 Astrazeneca Ab Novel compounds 010
AU2010244218B2 (en) 2009-05-07 2012-07-19 Astrazeneca Ab Substituted 1-cyanoethylheterocyclylcarboxamide compounds 750
WO2010142985A1 (en) 2009-06-10 2010-12-16 Astrazeneca Ab Substituted n-[1-cyano-2-(phenyl)ethyl]piperidin-2-ylcarboxmide compounds 761
WO2012119941A1 (en) 2011-03-04 2012-09-13 Prozymex A/S Peptidyl nitrilcompounds as peptidase inhibitors
JP6182594B2 (ja) 2012-04-27 2017-08-16 グラクソ グループ リミテッドＧｌａｘｏ Ｇｒｏｕｐ Ｌｉｍｉｔｅｄ 新規化合物
US9056874B2 (en) 2012-05-04 2015-06-16 Novartis Ag Complement pathway modulators and uses thereof
AU2013266398A1 (en) 2012-05-22 2015-01-22 Genentech, Inc. N-substituted benzamides and their use in the treatment of pain
US8859774B2 (en) 2012-05-25 2014-10-14 Corcept Therapeutics, Inc. Heteroaryl-ketone fused azadecalin glucocorticoid receptor modulators
JO3459B1 (ar) 2012-09-09 2020-07-05 H Lundbeck As تركيبات صيدلانية لعلاج مرض الزهايمر
TWI608013B (zh) 2012-09-17 2017-12-11 西蘭製藥公司 升糖素類似物
TWI663165B (zh) 2012-09-28 2019-06-21 美商伊格尼塔公司 非典型蛋白質激酶ｃ之氮雜喹唑啉抑制劑
US20140100236A1 (en) * 2012-10-09 2014-04-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Use of selectively moisture-adjusted tabletting material in the production of mechanically stable tablets which contain at least one hydrate-forming active substance and/or adjuvant relevant to the mechanical stability of the tablets, particularly arginine-containing tablets
KR102057365B1 (ko) 2012-10-15 2019-12-18 에피자임, 인코포레이티드 치환된 벤젠 화합물
AU2013331496B2 (en) 2012-10-16 2017-07-27 Janssen Pharmaceutica Nv Methylene linked quinolinyl modulators of ROR-gamma-t
WO2014071031A1 (en) 2012-11-01 2014-05-08 Incyte Corporation Tricyclic fused thiophene derivatives as jak inhibitors
US9233974B2 (en) 2012-12-21 2016-01-12 Gilead Sciences, Inc. Antiviral compounds
EA028774B1 (ru) 2012-12-21 2017-12-29 Квонтисел Фармасьютикалс, Инк. Ингибиторы гистондеметилазы
WO2014100620A2 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
CN105188371A (zh) 2013-02-08 2015-12-23 西建阿维拉米斯研究公司 Erk抑制剂及其用途
SG10201707545XA (en) 2013-03-14 2017-10-30 Newlink Genetics Corp Tricyclic compounds as inhibitors of immunosuppression mediated by tryptophan metabolization
US8877775B2 (en) * 2013-03-14 2014-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted 2-aza-bicyclo[2.2.2]octane-3-carboxylic acid (benzyl-cyano-methyl)-amides inhibitors of cathepsin C
EP2970240B1 (en) 2013-03-14 2018-01-10 Novartis AG 3-pyrimidin-4-yl-oxazolidin-2-ones as inhibitors of mutant idh
ES2845473T3 (es) 2013-03-14 2021-07-26 Boehringer Ingelheim Int (Bencil-ciano-metil)-amidas sustituidas de ácido 2-aza-biciclo[2.2.1]heptano-3-carboxílico inhibidores de la catepsina- C
AR095426A1 (es) 2013-03-14 2015-10-14 Onyx Therapeutics Inc Inhibidores tripeptídicos de la epoxicetona proteasa
US20140275082A1 (en) 2013-03-14 2014-09-18 Abbvie Inc. Apoptosis-inducing agents for the treatment of cancer and immune and autoimmune diseases
JO3383B1 (ar) 2013-03-14 2019-03-13 Lilly Co Eli مثبطات cdc7
US9242969B2 (en) 2013-03-14 2016-01-26 Novartis Ag Biaryl amide compounds as kinase inhibitors
TWI644671B (zh) 2013-03-14 2018-12-21 比利時商健生藥品公司 Ｐ２ｘ７調節劑
KR101886550B1 (ko) * 2014-04-29 2018-08-07 케어베이 유럽 리미티드 바늘 삽입 깊이를 조정하기 위한 장치
JP2017521308A (ja) 2014-07-03 2017-08-03 ブリヂストン アメリカズ タイヤ オペレーションズ、 エルエルシー リムガード上のサイドウォールの装飾
AR101696A1 (es) 2014-09-12 2017-01-04 Lilly Co Eli Compuestos de azetidiniloxifenilpirrolidina
UY36294A (es) 2014-09-12 2016-04-29 Novartis Ag Compuestos y composiciones como inhibidores de quinasa
RS59444B1 (sr) * 2014-09-12 2019-11-29 Boehringer Ingelheim Int Spirociklični inhibitori katepsina c
AU2015314184B2 (en) 2014-09-12 2018-09-13 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Tetrahydroquinoline derivatives as bromodomain inhibitors

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013041497A1 (en) * 2011-09-19 2013-03-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Substituted n- [1-cyano-2- (phenyl) ethyl] -2-azabicyclo [2.2.1] heptane-3-carboxamide inhibitors of cathepsin c

Also Published As

Publication number Publication date
CL2017000432A1 (es) 2017-10-20
JP2018044011A (ja) 2018-03-22
JP6360961B2 (ja) 2018-07-18
JP2017526716A (ja) 2017-09-14
AU2015314355B2 (en) 2019-06-20
ES2749009T3 (es) 2020-03-18
CN107074870B (zh) 2019-07-12
HK1255362A1 (zh) 2019-08-16
US20160075704A1 (en) 2016-03-17
US20170073352A1 (en) 2017-03-16
PL3191487T3 (pl) 2020-03-31
MX367316B (es) 2019-08-15
USRE47636E1 (en) 2019-10-08
NZ728684A (en) 2022-09-30
CY1123033T1 (el) 2021-10-29
CA2960916C (en) 2023-03-07
AU2015314355A1 (en) 2017-02-16
IL250262B (en) 2020-03-31
PT3191487T (pt) 2019-11-18
EP3191487B1 (en) 2019-08-07
EA201790576A1 (ru) 2017-08-31
MX2017003156A (es) 2017-05-23
WO2016038007A1 (en) 2016-03-17
SG11201701633SA (en) 2017-03-30
US9879026B2 (en) 2018-01-30
SA517381064B1 (ar) 2021-02-07
CN107074870A (zh) 2017-08-18
LT3191487T (lt) 2019-10-10
EP3191487A1 (en) 2017-07-19
TW201625647A (zh) 2016-07-16
US9540373B2 (en) 2017-01-10
RS59444B1 (sr) 2019-11-29
PE20170438A1 (es) 2017-04-28
MY188382A (en) 2021-12-07
PH12017500453A1 (en) 2017-07-31
KR102510588B1 (ko) 2023-03-17
MX2019009695A (es) 2019-10-07
HRP20191756T1 (hr) 2019-12-27
BR112017003433A2 (pt) 2017-11-28
BR112017003433B1 (pt) 2023-11-14
DK3191487T3 (da) 2019-10-28
CA2960916A1 (en) 2016-03-17
IL250262A0 (en) 2017-03-30
CO2017002268A2 (es) 2017-06-20
HUE047208T2 (hu) 2020-04-28
UA118610C2 (uk) 2019-02-11
KR20170054489A (ko) 2017-05-17
CN108047240A (zh) 2018-05-18
SI3191487T1 (sl) 2019-12-31
EP3511331A1 (en) 2019-07-17
CN108047240B (zh) 2020-08-04
PH12017500453B1 (en) 2017-07-31
AP2017009733A0 (en) 2017-02-28
TWI687424B (zh) 2020-03-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA031376B1 (ru) Спироциклические ингибиторы катепсина с
JP6689805B2 (ja) カテプシンｃの置換２−アザ−ビシクロ［２．２．１］ヘプタン−３−カルボン酸（ベンジル−シアノ−メチル）−アミド阻害剤
AU2020256220A1 (en) CDK2/5 degraders and uses thereof
US9440960B2 (en) Substituted oxetanes and their use as inhibitors of cathepsin C
EP2970228B1 (en) Substituted 2-aza-bicyclo[2.2.1]heptane-3-carboxylic acid (cyano-methyl)-amides inhibitors of cathepsin c

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KG TJ TM