EA029661B1

EA029661B1 - Производные 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4-тиадиазола в качестве иммуномодуляторов

Info

Publication number: EA029661B1
Application number: EA201600234A
Authority: EA
Inventors: Потайил Говиндан Наир Сасикумар; Муралидхара Рамачандра; Сизарамайах Сетти Сударшан Наремаддепалли
Original assignee: Ауриген Дискавери Текнолоджиз Лимитед
Priority date: 2013-09-06
Filing date: 2014-09-05
Publication date: 2018-04-30
Also published as: CU24345B1; US20170101387A1; WO2015033301A1; AU2014316684A1; EP3041828A4; HUE039014T2; PL3041828T3; JP2016532711A; MX2016002971A; TR201811077T4; SI3041828T1; HRP20181251T1; EP3385257A1; RS57559B1; KR20160081898A; ES2682040T3; EA201600234A1; US20160194295A1; LT3041828T; PT3041828T

Abstract

Изобретение относится к соединениям 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4-тиадиазола в качестве терапевтических средств, способных ингибировать сигнальный путь программируемой смерти клеток - 1 (PD1). Изобретение также относится к производным этих терапевтических средств. Изобретение также относится к применению указанных терапевтических средств и их производных для лечения расстройств посредством иммуностимуляции, включающей ингибирование иммуносупрессивного сигнала, индуцированного вследствие PD-1, PD-L1 или PD-L2, а также к терапии или лечению с их помощью.

Description

Изобретение относится к соединениям 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4-тиадиазола в качестве терапевтических средств, способных ингибировать сигнальный путь программируемой смерти клеток - 1 (РИ1). Изобретение также относится к производным этих терапевтических средств. Изобретение также относится к применению указанных терапевтических средств и их производных для лечения расстройств посредством иммуностимуляции, включающей ингибирование иммуносупрессивного сигнала, индуцированного вследствие РИ-1, РИ-Ь1 или РИЬ2, а также к терапии или лечению с их помощью.

029661

В настоящей заявке испрашивается приоритет по индийской предварительной заявке 4012/СНЕ/2013, поданной 06 сентября 2013 г.; которая включена данной ссылкой полностью.

Область техники

Изобретение относится к соединениям 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4-тиадиазола, терапевтически пригодным в качестве иммуномодуляторов. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4-тиадиазола в качестве терапевтических средств.

Предпосылки создания изобретения

Белок программируемой смерти клеток - 1 (ΡΏ-1) является членом суперсемейства СИ28, который обеспечивает отрицательный сигнал при взаимодействии с его двумя лигандами, ΡΏ-Ы или ΡΏ-Τ2. ΡΏ-1 и его лиганды широко экспрессируются и демонстрируют более широкий диапазон иммунорегуляторных влияний в активации Т-клеток и толерантность по сравнению с другими членами С1)28. ΡΌ-1 и его лиганды участвуют в ослаблении инфекционного иммунитета или иммунитета к подверженности инфекциям и опухолевого иммунитета или иммунитета к образованию опухоли и облегчении хронической инфекции и прогрессирования опухоли. Биологическая значимость ΡΏ-1 и его лигандов предполагает терапевтический потенциал манипулирования пути ΡΏ-1 против различных заболеваний человека (Апе1 1’ейоеет е! а1., Сигг. Тор ΜΐετοΒΐοΙ. 1ттипо1. (2011); 350:17-37).

Активация и дисфункция Т-клеток зависят от прямых и модулированных рецепторов. На основе их функционального результата совместно сигнальные молекулы могут быть разделены как со-стимуляторы и со-ингибиторы, которые положительно и отрицательно контролируют примирование, рост, дифференцировку и функциональное созревание Т-клеточного ответа (1л 5Ы е! а1., 1оигиа1 о£ Нета!о1оду & Опсо1оду 2013, 6:74).

Терапевтические антитела, которые блокируют иммунный контрольный путь программируемой смерти клеток - 1 (ΡΏ-1), предотвращают снижение регуляции Т-клеток и стимулируют иммунные реакции против раковых заболеваний. Несколько ингибиторов пути ΡΏ-1 показывают устойчивую активность на различных фазах продолжающихся клинических испытаний (ΚΏ Нагуеу, Сйшса1 ΡЬа^тасο1οду & Тйегареийсз (2014); 96 2, 214-223).

Белок программируемой смерти клеток - 1 (ΡΏ-1) представляет собой со-рецептор, который экспрессируется преимущественно Т-клетками. Связывание ΡΏ-1 с его лигандами, ΡΏ-Ы или ΡΏ-Τ2, имеет жизненно важное значение для физиологической регуляции иммунной системы. Основная функциональная роль сигнального пути ΡΏ-1 состоит в ингибировании самореактивных Т-клеток, которые служат для защиты от аутоиммунных заболеваний. По этой причине элиминация пути ΡΏ-1 может привести к нарушению иммунологической толерантности, что в конечном итоге может привести к развитию патогенного аутоиммунитета. С другой стороны, раковые клетки могут временами кооптировать путь ΡΏ-1 для ухода от иммунологических механизмов. Таким образом, блокада пути ΡΏ-1 становится привлекательной целью в лечении раковых заболеваний. Современные подходы включают в себя шесть средств, которые являются или ΡΏ-1 или ΡΏ-Ы ориентированными нейтрализующими антителами или слитыми белками. Более сорока клинических испытаний продолжают реализовываться с целью лучше определить роль блокады ΡΏ-1 в различных типах раковых заболеваний (Нуип-Так 3ίη е! а1., Сйшса1 1ттипо1оду (Атс!егйат, №1йег1апй§) (2014), 153(1), 145-152).

Международные заявки АО 01/14557, АО 02/079499, АО 2002/086083, АО 03/042402, АО 2004/004771, АО 2004/056875, АО 2006121168, АО 2008156712, АО 2010077634, АО 2011066389, АО 2014055897, АО 2014059173, АО 2014100079 и патент США ϋδ 08735553 описывают ингибирующие ΡΏ-1 или ΡΏ-Б1 антитела или слитые белки.

Кроме того, международные заявки АО 2011161699, АО 2012/168944, АО 2013144704 и АО 2013132317 содержат сведения о пептидных или пептидомиметических соединениях, которые способны подавлять и/или ингибировать сигнальный путь программируемой смерти клеток - 1 (ΡΟ1).

Тем не менее существует потребность в более мощных, лучших и/или селективных иммунных модуляторах пути ΡΏ-1. Настоящее изобретение относится к соединениям 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4тиадиазола, которые способны подавлять и/или ингибировать сигнальный путь программируемой смерти клеток - 1 (ΡΏ1).

Краткое изложение сущности изобретения

В соответствии с изобретением представлены соединения 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4-тиадиазола или их фармацевтически приемлемые соли или стереоизомеры, которые способны подавлять и/или ингибировать сигнальный путь или путь передачи сигнала программируемой смерти клеток - 1 (ΡΟ1).

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к соединениям 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4тиадиазола формулы (I)

- 1 029661

в которой К! означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Вег, ТЬг, РЬе, А1а или Азп;

X означает δ или О;

К₂ означает водород или -СО-Ааа;

Ааа означает аминокислотный остаток, выбранный из Вег, Азп или ТЬг; в котором С-конец является свободным, амидированным или этерифицированным концом;

К₃ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Вег, А1а, О1и, О1п, Азп или Азр;

-----является при необходимости связью;

К4 и К₅ независимо друг от друга означают водород или отсутствуют; или их фармацевтически приемлемым солям или стереоизомерам.

В еще одном аспекте настоящее изобретения относится к фармацевтической композиции, включающей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер, а также к способам ее получения.

В еще одном аспекте настоящего изобретения предложено применение соединений 1,3,4оксадиазола и 1,3,4-тиадиазола или их фармацевтически приемлемых солей или стереоизомеров, которые способны подавлять и/или ингибировать сигнальный путь программируемой смерти клеток - 1 (РО1).

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям 1,3,4-оксадиазола и 1,3,4-тиадиазола в качестве терапевтических средств, пригодных для лечения расстройств посредством иммуностимуляции, включающей ингибирование иммуносупрессивного сигнала, индуцированного благодаря РС-1, РО-1,1 или РО-Ь2, и способам лечения с их помощью.

Каждый из вариантов осуществления изобретения раскрывается ниже с целью объяснения сущности настоящего изобретения, а не для ограничения его указанными вариантами. По сути, как это очевидно для специалистов в данной области техники, различные модификации и вариации могут быть выполнены в настоящем изобретении, не отклоняясь от объема или сущности настоящего изобретения. Например, признаки, показанные или описанные как часть одного варианта, могут быть использованы в другом варианте осуществления для получения в итоге еще одного варианта. Таким образом, предполагается, что настоящее изобретение охватывает такие модификации и вариации, которые входят в объем прилагаемой формулы изобретения, и их эквиваленты. Другие объекты, признаки и аспекты настоящего изобретения раскрыты в или очевидны из следующего ниже подробного описания. Должно быть понятно любому специалисту в данной области техники, что изложенное ниже является описанием только иллюстративных вариантов осуществления изобретения и не должно рассматриваться как ограничение более широких аспектов настоящего изобретения.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)

в которой К₁ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Вег, ТЬг, РЬе, А1а или Азп;

X означает δ или О;

К₂ означает водород или -СО-Ааа;

-----является при необходимости связью;

К₄ и К₅ независимо друг от друга означают водород или отсутствуют; В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (1А)

Βι К₃

^Η^^Ν Т^ХТ'

N-N ^М

(ΙΑ)

или их фармацевтически приемлемым солям или стереоизомерам; в которой К₁ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Вег, ТЬг, РЬе, А1а или Азп; X означает В или О; К₂ означает водород или -СО-Ааа;

Ааа означает аминокислотный остаток, выбранный из Вег, Азп или: ТЬг; в котором С-конец является свободным, амидированным или этерифицированным концом.

В еще одном дополнительном варианте осуществления настояние изобретение относится к соединениям формулы (ΙΒ)

- 2 029661

(ΙΒ)

или их фармацевтически приемлемым солям или стереоизомерам; в которой Κι означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Зег, ТЬг, РЬе, А1а или Άδη;

К₃ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Зег, А1а, О1и, Θ1η, Άδη или Άδρ;

Ааа означает аминокислотный остаток, выбранный из Зег, Άδη или ТЬт; в котором С-конец является

свободным, амидированным или этерифицированным концом.

В еще одном дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (1С)

(1С)

или их фармацевтически приемлемым солям или стереоизомерам; в которой

Κι означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Зег, ТЬг, РЬе, А1а или Άδη;

Κ₃ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Зег, Л1а, О1и, Θ1η, Άδη или Άδρ;

Ааа означает аминокислотный остаток, выбранный из Зег, Άδη или ТЬг; в котором С-конец является свободным, амидированным или этерифицированным концом.

В еще одном дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), в которой

К₁ означает боковую цепь Зег или ТЬг;

К₂ означает -СО-Ааа;

Ааа означает остаток аминокислоты Зег или ТЬг; где С-конец является свободным;

К₃ означает боковую цепь Άδη, Θ1η, О1и или Άδρ.

Описанные ниже варианты осуществления приводятся с целью раскрытия сущности настоящего изобретения и не предназначаются для его ограничения конкретными приведенными ниже примерами осуществления.

Согласно одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I) и (ΙΆ), в которых X означает О.

В соответствии с другим вариантом осуществления, в частности, представлены соединения формул (I) и (ΙΆ), в которых X означает З.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I) и (ΙΆ), в которых К₂ означает водород.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формулы (I), в которой Кд и К₅ означают водород.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формулы (I), в которой Кд и К₅ отсутствуют.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формулы (I), в которой К₂ означает -СО-Зег.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формулы (I), в которой К₂ означает -СО-ТЬг.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), (ΊΆ), (ТВ) и ^С), в которых К1 означает боковую цепь Зег.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), (ΊΆ), (ГВ) и ^С), в которых К₁ означает боковую цепь ТЬг.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), ^Ά) и ^С), в которых К₁ означает боковую цепь РЬе, Аа или Άδη.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), ^Άχ (ΣΒ) и ^С), в которых К₃ означает боковую цепь Άδη.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), ^Ά) и (ΣΒ), в которых К₃ означает боковую цепь Зег.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), ^Ά) и ^С), в которых К₃ означает боковую цепь Θ1η.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), ^Ά) и ^С), в которых К₃ означает боковую цепь О1и.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), ^Ά) и ^С), в которых К₃ означает боковую цепь Аа или Άδρ.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул ^В) и ^С), в которых Ааа означает Зег.

- 3 029661

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формулы (1С), в которой Ааа означает ТИг.

Согласно еще одному варианту осуществления, в частности, представлены соединения формул (I), (ΙΑ) и (ΙΒ), в которых одна, несколько или все аминокислоты являются Ό аминокислотами.

В одном варианте осуществления конкретные соединения формулы (I) без каких-либо ограничений перечислены в табл. 1.

Таблица 1

Номер соединения	Структурная формула
1.	^Н° _{Ξ о} уэн ^н^Аг°А[\|^лй т^он
2.	νη₂ ^но , 0А о ν^0Ηнгн\°Т^Лй^Лй^ЛГ°^Н N-N О
3.	Н<У ,^ΝΗ* -АЙ Ν-ν ΝΗ₂
4.	νη₂ ^н% оА о γ^0Η "/А/йА N-N О
5.	νη₂ ^нV °А ° Т°^н^Айг/а_¥°^н N-N ^М О
6.	νη₂ ^ноу оА о _г ^он н₂нАг⁸¥А^ЛйАг^он
7	νη₂ ^Η(ν оА о Г^0Н «ТАг/йй N-N О

- 4 029661

8.	νη₂ ^Η(ν- сА Η₂Ν^γ°γ 'νη₂ Ν-Ν
9.		νη₂
	ΗΟ_Χ	Ρ 0Α ο "	ОН
	η₂ν^χ		Α^0Η
		Ν-Ν	0
10.		νη₂
	ΗΟ_Χ	у ο	^ΟΗ
	η₂ν^χ	ύΥΆ	Α^ΟΗ
		Ν-Ν	0
11.		νη₂
	η<α	Ζ οΑ ο	Ε°^Η
	η₂ν"	ύ°ίΑΛ	-Υ^Η
			0
12.	ΗΟ_Χ	ο^νη₂ У А 0	.ΟΗ
	η₂ν"	ΥιαΛ	Α^ΟΗ
		Ν-Ν ^{И И}	0
13.	ΗΟ_Χ	Ο^ΝΗ₂ Υ ζ ο	ΟΗ
	η₂ν"	υϋΛ	Α^ΟΗ
		Ν-Ν ^Μ	0
14.		νη₂
	ΗΟ_Χ	\| 0^- 0	.ΟΗ
	η₂Α	ΎΫΛ	Α^0Η
		Ν-Ν	0
15.	НСЕ	Ο^ΟΗ 1 - ° ^	ΟΗ
	η₂ν^χ	Ύ°ΫΛ	Α^0Η
			0
16.	ηο_χ	ο^νη₂	^ΟΗ
	η₂ν^χ	ύ°ίΑΛ	Α^0Η
		Ν-Ν ^{Π Μ}	0

- 5 029661

17.	НО_Х Η₂Ν""	0^νη₂ ЧА Ν-Ν ^π	V Η	ο
18.		ОН
	^но	θΑ	ο Υ	_ΧΟΗ
	Η₂ΙΨ	'•Ύ/τ	Ύ^0Η
		Ν-Ν		о И
19.		ОН
	нс%	οΑ	ο	^0Η
	η₂ιΥ	Т°А'й	Ά'' Η	А
		Ν-Ν ^π		ο
20.		νη₂
	^Η°Ί	Υ οΑ	0	^0Η
	η₂ιΎ	ύΑ	γ	А
		Ν-Ν ^Μ		0

или их фармацевтически приемлемые соли или стереоизомеры.

Соединения, раскрытые в изобретении, формулируются для фармацевтического введения.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение, как раскрыто в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

В другом варианте осуществления изобретения указанная фармацевтическая композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно из веществ, выбранных из противоракового средства, химиотерапевтического средства или антипролиферативного вещества.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, как описано в настоящем изобретении, для применения в качестве лекарственного средства.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, как описано в настоящем изобретении, для применения в качестве лекарственного средства для лечения раковых заболеваний или инфекционных заболеваний.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, как описано в настоящем изобретении, для применения в качестве лекарственного средства для лечения костного рака, рака головы или шеи, рака поджелудочной железы, рака кожи, кожной или внутриглазной злокачественной меланомы, рака матки, рака яичников, рака прямой кишки, рака анальной области, рака желудка, рака яичек, рак матки, карциномы фаллопиевых труб, карциномы эндометрия, карциномы шейки матки, карциномы влагалища, карциномы вульвы, болезни Ходжкина, неходжкинской лимфомы, рака пищевода, рака тонкой кишки, рака эндокринной системы, рака щитовидной железы, рака паращитовидной железы, рака надпочечников, саркомы мягких тканей, рака уретры, рака полового члена, хронического или острого лейкоза, включая острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, солидных опухолей детского возраста, лимфоцитарной лимфомы, рака мочевого пузыря, рака почки или мочеточника, карциномы почечной лоханки, опухоли центральной нервной системы (ЦНС), первичной лимфомы ЦНС, ангиогенеза опухоли, опухоли спинного мозга, глиомы ствола головного мозга, аденомы гипофиза, саркомы Капоши, эпидермоидного рака, плоскоклеточного рака, Т-клеточной лимфомы, рака, обусловленного факторами окружающей среды, включающими спровоцированный асбестом, а также комбинаций указанных видов раковых заболеваний.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, как описано в настоящем изобретении, для применения при лечении раковых заболеваний.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, как описано в настоящем изобретении, для использования при лечении инфекционных заболеваний.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям, как описано в настоящем изобретении, для применения в качестве лекарственного средства для лечения бактериальных инфекционных заболеваний, вирусных инфекционных заболеваний или грибковых инфекционных заболеваний.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения раковых заболеваний, который включает введение эффективного количества соединения по настоящему изобретению субъекту, нуждающемуся в лечении.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу модуляции иммун- 6 029661

ного ответа, опосредованного сигнальным путем ΡΌ-1 у субъекта, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению, таким образом, чтобы модулировать иммунный ответ у субъекта.

В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования роста опухолевых клеток и/или метастаз у субъекта, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению, способного ингибировать сигнальный путь программируемой смерти клеток - 1 (ΡΌ1).

Указанные клетки опухоли включают раковые заболевания, такие как, но не ограничиваясь ими, костный рак, рак головы или шеи, рак поджелудочной железы, рак кожи, кожная или внугриглазная злокачественная меланома, рак матки, рак яичников, рак прямой кишки, рак анальной области, рак желудка, рак яичек, рак матки, карцинома фаллопиевых труб, карцинома эндометрия, карцинома шейки матки, карцинома влагалища, карцинома вульвы, болезнь Ходжкина, неходжкинская лимфома, рак пищевода, рак тонкой кишки, рак эндокринной системы, рак щитовидной железы, рак паращитовидной железы, рак надпочечников, саркома мягких тканей, рак уретры, рак полового члена, хронический или острый лейкоз, включающий острый миелоидный лейкоз, хронический миелоидный лейкоз, острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфолейкоз, солидные опухоли детского возраста, лимфоцитарная лимфома, рак мочевого пузыря, рак почки или мочеточника, карцинома почечной лоханки, опухоль центральной нервной системы (ЦНС), первичная лимфома ЦНС, ангиогенез опухоли, опухоль спинного оси, глиомы ствола головного мозга, аденома гипофиза, саркома Капоши, эпидермоидный рак, плоскоклеточный рак, Тклеточная лимфома, рак, обусловленный факторами окружающей среды, включающими спровоцированный асбестом, а также комбинации указанных видов раковых заболеваний.

В еще одном дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения инфекционного заболевания у субъекта, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению, способного ингибировать сигнальный путь программируемой смерти клеток - 1 (ΡΌ1) таким образом, что субъекта лечат от инфекционного заболевания.

Тем не менее еще один вариант осуществления настоящего изобретения относится к способу лечения бактериальных, вирусных и грибковых инфекций у субъекта, который включает введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению, способного ингибировать сигнальный путь программируемой смерти клеток - 1 (ΡΌ1) таким образом, что субъекта лечат от бактериальных, вирусных и грибковых инфекций.

Инфекционные заболевания включают в себя, но не ограничиваясь ими, ВИЧ, грипп, герпес, лямблии, малярию, лейшманию, патогенные инфекции, вызванные вирусом гепатита (А, В и С), вирус герпеса (например, νζν, Н8У-1, НАУ-б, Н8У-П и СМУ, вирус Эпштейна-Барра), аденовирус, вирус гриппа, флавивирусы, ЕСНО-вирус, риновирус, вирус Коксаки, короновирус, респираторно-синцитиальный вирус, вирус эпидемического паротита, ротавирус, вирус кори, вирус краснухи, парвовирус, вирус коровьей оспы, вирус Т-клеточного лейкоза человека (НТЬУ), вирус денге, вирус папилломы, вирус моллюсков, вирус полиомиелита, вирус бешенства, полиомавирус человека 2 (вирус ЭС) и вирус арбовирусного энцефалита, патогенные инфекции, вызванные хламидии бактериями, риккетсиозные бактерии, микобактерии, стафилококки, стрептококки, пневмококки, менингококки и конококки, К1еЬ81е11а, ΡΐΌίοιίδ. 8сгга11а. Ρ8еиάοтοηа8, Е.сой, Еедюпейа, дифтерия, сальмонеллез, бациллы, холера, столбняк, ботулизм, сибирская язва, чума, лептоспироз и бактерии болезни Лайма (Ьуте), патогенные инфекции, вызванные грибами СапбИа (А1Ысап8, Кгщек С1аЬтака, Тторюайз и т.д.), Стуркососсиз пеокоттапз, АзретдШиз (Рцт1даки8, Νίдег и т.д.), рода Мисога1е8 (Мисог, АЬ81Фа, К1йхор1ш8), Бротокййх зсйеикй, В1азкотусе8 беттакШФз, БагасоссМюМез Ьта8Шеп818, СоссМюМез ίιηιηίΐί8 и Н18кор1азта сар8и1акит и патогенные инфекции, вызванные паразитами ЕпкатоеЬа Й18ко1уйса, Ва1апйбшт сой, №-1ед1епако\у1егк АсапкИатоеЬа 8р., С1агФа 1атЫа, Сгурко8рогМшт 8р., Ρпеитосу8к^8 сагиик Ρ1а8тоάшт У1уах, ВаЬе81а тюгой, Тгурапо8ота Ьгисек Тгурапо8ота сги/к Бе18Йташа йопоуапк Тохор1а8та допйк №рро8кгопду1и8 Ьта81Йеп818.

Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы отдельно или в виде фармацевтической композиции, в которой соединение смешивают с различными фармакологически приемлемыми веществами.

Фармацевтическая композиция, как правило, вводится перорально или путем ингаляции, но может быть введена парентеральным путем. В практике настоящего изобретения композиции могут быть введены, например, перорально, внутривенным вливанием, местно, внутрибрюшинно, внутрь мочевого пузыря или интратекально. Примеры парентерального введения включают, но не ограничиваясь ими, внутрисуставный (в суставы), внутривенный, внутримышечный, внутрикожный, внутрибрюшинный и подкожный пути введения; включают водные и неводные изотонические стерильные инъекционные растворы, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатические факторы и растворенные вещества, которые придают композиции изотоничность с кровью предполагаемого реципиента, а также водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие средства, солюбилизаторы, загустители, стабилизаторы и консерванты. Предпочтительными способами введения являются пероральный, парентеральный, подкожный и внутривенный пути введения.

- 7 029661

Дозировка соединений по изобретению варьируется в зависимости от возраста, веса, симптомов, терапевтического эффекта, режима дозирования и/или времени лечения. Как правило, соединения могут быть введены перорально или путем ингаляции, в количестве от 1 до 100 мг в течение времени, от одного до двух дней, один раз в течение 3 дней, один раз в течение 2 дней, один-два раза в день, в случае взрослого субъекта, или непрерывно вводят перорально или путем ингаляции от 1 до 24 ч в сутки. Поскольку дозировка зависит от различных условий, иногда может потребоваться количество, которое будет меньше указанной выше дозы, или в некоторых случаях могут потребоваться более высокие дозы.

Соединения по изобретению могут быть введены в комбинации с другими лекарственными средствами для: (1) комплементации и/или усиления профилактической и/или терапевтической эффективности профилактического и/или терапевтического лекарственного средства по настоящему изобретению, (2) динамики, улучшения абсорбции, уменьшения дозировки профилактического и/или терапевтического лекарственного средства по настоящему изобретению, и/или (3) снижения побочных эффектов профилактического и/или терапевтического лекарственного средства по настоящему изобретению.

Совместное лечение препаратом, содержащим соединения по настоящему изобретению и другое лекарственное средство, может включать введение его в виде комбинированного препарата, в котором оба компонента содержатся в одной дозировке, или в виде отдельных составов. Введение путем отдельных составов включает в себя одновременное введение и введение с некоторыми временными интервалами. В случае введения с некоторыми интервалами времени, соединение по настоящему изобретению можно быть введено первым с последующим введением другого лекарственного средства или первым может быть введено другое лекарственное средство с последующим введением соединения по настоящему изобретению. Способы введения соответствующих препаратов и лекарственных средств могут быть одинаковыми или различными.

Дозировка другого лекарственного средства может быть подобрана на основе клинически ранее использованной дозы. Соотношение компонентов в составе, соединения по настоящему изобретению и другого лекарственного средства, может быть соответствующим образом выбрано в зависимости от возраста и веса субъекта, подлежащего лечению, способа введения, времени введения, подлежащего лечению заболевания, его симптомов и сочетания всего перечисленного. Например, другое лекарственное средство может быть использовано в количестве от 0,01 до 100 мас.ч. в расчете на 1 мас.ч. соединения по настоящему изобретению. Другое лекарственное средство может быть комбинацией двух или более видов произвольных лекарственных средств в требуемой пропорции. Другое лекарственное средство, которое дополняет и/или усиливает профилактическую и/или терапевтическую эффективность соединения по настоящему изобретению, включает в себя не только известные, но те, которые будут обнаружены в будущем лекарственные средства на основе приведенного выше механизма сочетания.

Болезни, на которые это совместное использование оказывает профилактический и/или терапевтический эффект, конкретно не ограничены. Совместное применение лекарственных средств может быть использовано для любых заболеваний до тех пор, пока оно дополняет и/или усиливает профилактическую и/или терапевтическую эффективность соединения по настоящему изобретению.

Соединение по настоящему изобретению может быть использовано с существующими химиотерапевтическими средствами одновременно или в виде смеси. Примеры химиотерапевтических средств включают алкилирующие, нитрозомочевинные средства, антиметаболиты, противоопухолевые антибиотики, растительные алкалоиды, ингибиторы топоизомеразы, гормональные препараты, гормональные антагонисты, ингибиторы ароматазы, ингибиторы Р-гликопротеина, платиновые комплексные производные, другие иммунотерапевтические препараты и другие противораковые препараты. Кроме того, оно может быть использовано с дополнительными средствами лечения раковых заболеваний, такими как средство лечения лейкопении (нейтропении), средство лечения тромбоцитопении, противорвотное и обезболивающее средство при раке, совместно или в виде смеси.

В одном варианте осуществления соединение(я) по настоящему изобретению могут быть использованы с другими иммуномодуляторами и/или усиливающими агентами совместно или в виде смеси. Примеры иммуномодуляторов включают различные цитокины, вакцины и вспомогательные вещества. Примеры таких цитокинов, вакцин и вспомогательных веществ, стимулирующих иммунные реакции, включают, но не ограничиваются ими, СМ-С8Р (гранулоцито-макрофаго-колониестимулирующий фактор), М-САР (колониестимулирующий фактор макрофагов), С-С8Р (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), α, β или γ интерферон, 1Ь-1 (интерлейкин 1), 1Ь-2 (интерлейкин 2), 1Ь-3 (интерлейкин 3), 1Ь-12 (интерлейкин 12), поли (1:С) (полиинозиновая кислота : полицитидиловая кислота) и С_РС (цитозинфосфат-гуанин).

В другом варианте осуществления потенциальные агенты включают циклофосфамид и аналоги циклофосфамида, анти-ΤΟΡβ (трансформирующий ростовой фактор бета) и иматиииб (С1ееуас), ингибиторы митоза, такие как паклитаксел, сунитиниб (8и1еи1) или другие антиангиогенные средства, ингибиторы ароматазы, такие как летрозол, антагонист А2а аденозинового рецептора (Л2ЛК), ингибиторы ангиогенеза, антрациклины, оксалиплатин, доксорубицин, антагонисты ΤΡΚ.4 (толл-подобного рецептора 4) и антагонисты 1Ь-18 (интерлейкин 18).

- 8 029661

Если не указано иное, все используемые в данном описании технические и научные термины имеют те значения, которые обычно используются специалистами в области техники, к которой принадлежит предмет настоящей заявки. Следующие используемые в данном описании определения приводятся ниже для того, чтобы облегчить понимание настоящего изобретения.

Используемый в данном описании термин "соединение(я)" относится к соединениям, раскрытым в настоящем изобретении.

Используемый в описании термин "содержать" или "содержащий", как правило, используется в смысле содержания, т.е. допускающего наличие одного или нескольких признаков или компонентов.

Используемый в данном описании термин "включающий", а также другие формы, такие как "включают", "включает" и "включенный", не является ограничивающим.

Используемый в данном описании термин "амино" относится к группе -ΝΗ₂. Если не указано иное, все описанные или заявленные аминогруппы могут быть замещенными или незамещенными.

Используемый в данном описании термин "аминокислота" относится к аминокислотам, имеющим Ь- или Ό-стереохимию на альфа-углероде.

Термин "фармацевтически приемлемая соль" в данном описании означает активный ингредиент, который содержит соединение формулы (I) в форме одной из его солей, в частности, если указанная форма соли обеспечивает улучшенные фармакокинетические свойства активного ингредиента по сравнению с свободной формой активного ингредиента, или в форме любой другой соли активного ингредиента, используемой ранее. Форма фармацевтически приемлемой соли активного ингредиента может также обеспечить этот активный ингредиент впервые желаемым фармакокинетическим свойством, которым оно не обладало ранее, и может даже оказывать положительное влияние на фармакодинамику этого активного ингредиента в отношении его терапевтической эффективности в организме.

Термин "фармацевтически приемлемый" означает то, что приемлемо при приготовлении фармацевтической композиции, которая, как правило, является безопасной, нетоксичной и ни биологически, ни иным образом нежелательной, и включает в себя то, что является приемлемым для ветеринарии, а также фармацевтического применения у человека.

Термин "стереоизомер" относится к любым энантиомерам, диастереоизомерам или геометрическим изомерам соединений формулы (I), где бы они не являлись хиральными, или, когда они несут одну или более двойных связей. Когда соединения формулы (I) и соответствующие формулы являются хиральными, они могут существовать в рацемической или оптически активной форме. Так как фармацевтическая активность рацематов или стереоизомеров соединений в соответствии с изобретением может отличаться, желательным может быть использование энантиомеров. В этих случаях конечный продукт или даже промежуточные продукты могут быть разделены на энантиомерные соединения химическими или физическими способами, известными специалистам в данной области техники, или даже использоваться как таковые в синтезе. В случае рацемических аминов диастереомеры образуются из смеси путем реакции с оптически активным разделяющим веществом. Примерами подходящих разделяющих веществ являются оптически активные кислоты, такие как К- и δ-формы винной кислоты, диацетилвинной кислоты, дибензоилвинной кислоты, миндальной кислоты, яблочной кислоты, молочной кислоты, подходящих Νзащищенных аминокислот (например, Ν-бензоилпролина или Ν-бензолсульфонилпролина) или различные оптически активные камфосульфоновые кислоты. Также предпочтительным является хроматографическое разделение энантиомера с помощью оптически активного разделяющего вещества (например, динитробензоилфенилглицина, триацетата целлюлозы или других производных углеводов или хирально модифицированных полимеров метакрилата, иммобилизованных на силикагеле).

Термин "субъект" включает млекопитающих (в частности, человека) и других животных, таких как домашние животные (например, домашние прирученные животные, включая кошек и собак) и внедомашние животные (такие как дикие животные).

Фраза "терапевтически эффективное количество" или "эффективное количество" относится к количеству соединения(ий) по настоящему изобретению, достаточному для: (I) лечения или профилактики конкретного заболевания, расстройства или синдрома; (II) ослабления, облегчения или устранения одного или более симптомов конкретного заболевания, расстройства или синдрома; или (III) предотвращения или задерживания начала одного или более симптомов конкретного из описанных выше заболевания, расстройства или синдрома. В случае ракового заболевания терапевтически эффективное количество лекарственного средства может уменьшать число раковых клеток; уменьшать размер опухоли; ингибировать (т.е. замедлить до некоторой степени и в качестве альтернативы остановить) инфильтрацию раковых клеток в окружающие соседние органы; подавлять (т.е. замедлить до некоторой степени и в качестве альтернативы остановить) метастазирование опухоли; ингибировать, до некоторой степени, рост опухоли; и/или облегчить, в некоторой степени, один или более симптомов, связанных с раковым заболеванием. В случае инфекционных болезненных состояний терапевтическое эффективное количество означает количество, достаточное для уменьшения или ослабления инфекционных заболеваний, симптомов, вызванных бактериальной, вирусной и грибковой инфекциями.

Встречающиеся в природе аминокислоты обозначены в данном описании, с помощью традиционных трехбуквенных сокращений, указанных в приведенной ниже табл. 2.

- 9 029661

Таблица 2

(коды аминокислот)

Наименование	3-буквенный код	Наименование	3-буквенный код
Аспарагин	Αδη	Глутамин	О1п
Аспарагиновая кислота	Αδρ	Фенилаланин	РЬе
Аланин	А1а	Серин	8ег
Глутаминовая кислота	О1и	Треонин	ТЬг

Сокращения, используемые по всему описанию, кратко подытожены ниже с расшифровкой их значений.

°С (градус по Цельсию); 5 (дельта); % (процент); соляной раствор (раствор \аС1); СН₂С1₂/ДХМ (дихлорметан); Ьг§ (широкий синглет); С§₂СО₃ (карбонат цезия); ά (дуплет); ДМФ (диметилформамид); ДМСО (диметилсульфоксид); ДМСО-б₆ (дейтерированный ДМСО); ЕПС.НС1/ЕЭС1 (гидрохлорид 1-(3диметиламинопропил)-3-карбодиимида); Εί₂ΝΗ (диэтиламин); Тшос (хлорид флуоренилметилоксикарбонила); г или гр (грамм); Н или Н₂ (водород); Н₂О (вода); НОВ1/НОВТ (1-гидроксибензотриазол); НС1 (соляная кислота); ч или час (часы); Гц (герц); ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография); 1₂(йод); К₂СО₃ (карбонат калия); ЖХ-МС ((жидкостная хроматография-масс-спектроскопия); МеОН (метанол); ммоль (миллимоль); М (молярность); мкл (микролитр); мл (миллилитр); мг (миллиграмм); т (мультиплет); МГц (мегагерц); МС (ЭС) (масс-спектроскопия-электро спрей); мин (минуты); Να (натрия); ΝαНСО₃ (бикарбонат натрия); ΝΗ₂ΝΗ₂·Η₂Ο (гидрат гидразина); ΝΜΜ (Ν-метилморфолин); Ж₂8О₄ (сульфат натрия); Ν₂ (азот); ЯМР (спектроскопия ядерного магнитного резонанса); ΡΌ-Π (лиганд 1 программируемой смерти); ΡΌ-Γ2 (лиганд 2 программируемой смерти); преп-ВЭЖХ/препаративная ВЭЖХ (препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография), § (синглет); ¹Ви (третичный бутил); ТЭА/Ε^Ν (триэтиламин); ТСХ (тонкослойной хроматографии); ТГФ (тетрагидрофуран); ТИПС (тригоопропилсилан); ТФК/СГ₃СООН (трифторуксусная кислота); ί (триплет); ί_κ = (время удерживания); ТФФ (трифенилфосфин); и т.п.

Экспериментальная часть.

Вариант осуществления настоящего изобретения обеспечивает получение соединений формулы (I) в соответствии с процедурами следующих примеров при использовании соответствующих веществ. Специалисты в данной области техники согласятся, что для получения этих соединений могут быть использованы известные вариации условий и процессов следующих препаративных процедур. Кроме того, с помощью описанных подробно процедур средний специалист в данной области может подготовить дополнительные соединения по настоящему изобретению.

Исходные материалы, как правило, доступны из коммерческих источников, таких как фирма 8щтаАЫпсЬ, США или Германии; фирма СЬет-1трех, США; фирма О.Б. ВюсЬет, Китай и фирма 8рес1тосЬет, Индия.

Очистка и характеристика соединений.

Метод аналитической ВЭЖХ. Аналитическую ВЭЖХ проводят с использованием колонки /1С НШС 200 А° (4,6 мм х 250 мм, 5 мкм) при скорости потока: 1,0 мл/мин. Используемые условия элюирования: буфер А: 5 ммоль ацетата аммония, буфер Б: ацетонитрил, уравновешивание колонки выполняют с помощью 90% буфера Б и элюирование - градиентом от 90% до 40% буфера Б в течение 30 мин.

Метод препаративной ВЭЖХ. Препаративную ВЭЖХ проводят с использованием колонки 5еОнап1 /1С Н1Б1С 200 А° (10 мм х 250 мм, 5 мкм) при скорости потока: 5,0 мл/мин. Используемые условия элюирования: буфер А: 5 ммоль ацетата аммония (доведение до рН-4 с помощью уксусной кислоты), буфер Б: ацетонитрил, уравновешивание колонки выполняют с помощью 90% буфера Б и элюирование градиентом от 90 до 40% буфера Б в течение 20 мин.

ЖХ-МС проводят на ΑΡΙ 2000 БС/МС/МС (метод; жидкостной хроматографии/тандемной массспектрометрии или метод ЖХ/МС/МС) три четверти (приложенных биосистем) с ВЭЖХ серии Лщ1еп1 1100 с 01315 В ΌΑΌ с использованием колонки Мегсигу МС или с помощью Ащ1еп1 БС/МСЭ УБ одной четверти с ВЭЖХ серии А§йеп1 1100 с 01315 В ΌΑΌ с использованием колонки Мегсигу МС или с помощью 51нтас1/н ЖХ-МС 2020 одной четверти с системой Рготшепсе иББС с 8ΡΌ-20 Α ΌΑΌ.

Пример 1. Синтез соединения 1.

Стадия 1а

Карбонат калия (7,9 г, 57,39 ммоль) и метилиодид (1,3 мл, 21,04 ммоль) добавляют к раствору со- 10 029661

единения 1а (5,0 г, 19,13 ммоль) в ДМФ (35 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакционную смесь разделяют между водой и этилацетатом. Органический слой промывают водой, соляным раствором, сушат над №₂δΟ₄ и выпаривают при пониженном давлении с получением 5,0 г соединения 1Ь (выход: 96,1%). ЖХ-МС: 176,1 (М-Вос)+.

Стадия 1Ь

Гидразин гидрат (7,2 мл) добавляют к раствору соединения 1Ь (5,0 г, 18,16 ммоль) в метаноле (30 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакционную смесь выпаривают при пониженном давлении, полученный остаток разделяют между водой и этилацетатом. Органический слой промывают водой, соляным раствором, сушат над \аХО и₄ выпаривают при пониженном давлении с получением 4,0 г соединения 1с (выход: 80,0%). ЖХ-МС: 276,3 (М+Н)+.

Стадия 1с

ΝΜΜ (0,67 мл, 6,52 ммоль) медленно добавляют к перемешиваемому раствору 1с (1,2 г, 4,35 ммоль), 1ά (1,43 г, 4,35 ммоль), ΗΟΒί (0,7 г, 5,22 ммоль) и ΕΏΟ-ΗΟΙ (0,99 г, 5,22 ммоль) в ДМФ (15 мл) при температуре 0°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакцию гасят льдом и осажденное твердое вещество фильтруют и сушат под вакуумом с получением 2,0 г чистого продукта 1е (выход: 83,3%)ЖХ-МС: 591,5 (Μ+Να)+.

Стадия 1ά

К перемешиваемому раствору 1е (1,5 г, 2,63 ммоль) в сухом ТГФ (15,0 мл) и ДМФ (5,0 мл) добавляют трифенилфосфин (1,38 г, 5,27 ммоль) и йод (1,33 г, 5,27 ммоль) при температуре 0°С. После полного растворения йода, к реакционной смеси при температуре льда добавляют Εί₃Ν (1,52 мл, 10,54 ммоль). Реакционную смесь оставляют достичь комнатной температуры и перемешивают в течение 4 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакционную смесь гасят водой со льдом и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором тиосульфата натрия и соляным раствором. Отделенный органический слой сушат над Να₂δΟ₄ и выпаривают при пониженном давлении с получением остатка, который затем очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 30% этилацетата в гексане) с получением 0,8 г соединения 1£ (выход: 55%). ЖХ-МС: 551,3 (М+Н)+.

Стадия 1е

Защитную Ешое-группу снимают путем добавления диэтиламина (20,0 мл) к раствору соединения 1£ (0,8 г, 1,45 ммоль) в СН₂С1₂ (20,0 мл) при температуре 0°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Полученный раствор концентрируют в вакууме с получением густого смолистого остатка. Сырое вещество очищают с помощью колоночной хроматографии на нейтральном оксиде алюминия (элюент: 2% метанола в хлороформе) с получением 0,38 г соединения 1д (выход: 80,0%): ЖХ-МС: 329,4 (М+Н)+.

- 11 029661

Стадия 1ί

Соединение 1д (0,38 г, 1,16 ммоль), ТЭА (0,33 мл, 2,32 ммоль), растворенный в ДМФ (10 мл), добавляют по каплям к раствору 11ι (0,55 г, 1,39 ммоль) при температуре 0°С для образования связи мочевины, смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакционную смесь гасят водой со льдом, осажденное твердое вещество фильтруют и сушат в вакууме, получают сырое вещество, которое дополнительно очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 0-35% этилацетата в гексане) с получением 0,4 г продукта 1ΐ (Выход: 59,7%). ЖХ-МС: 586,4 (М+Н)+.

Стадия 1д

К раствору соединения 1ΐ (0,4 г, 0,68 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (5 мл) и каталитическое количество триизопропилсилана и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, чтобы удалить кислотно-чувствительные защитные группы. Полученный раствор концентрируют в атмосфере азота и твердый продукт очищают с помощью метода препаративной ВЭЖХ, как описано в экспериментальной части (выход 0,05 г). ЖХ-МС: 318,0 (М+Н)+; ВЭЖХ: 1_К = 10,96 мин.

Синтез соединения 11ι (ХО₂-С₆Н₄-ОСО-ТЬг(1Ви)- О¹Ви)

К раствору 4-нитрофенилхлорформиата (4,79 г, 23,77 ммоль) в ДХМ (25,0 мл) добавляют раствор Н-ТЬг(!Ви)-О!Ви (5,0 г, 21,61 ммоль), ТЭА (6,2 мл, 43,22 ммоль) в СН₂С1₂ (25 мл) медленно при температуре 0°С и оставляют перемешиваться в течение 30 мин. Завершение реакции подтверждается анализом ТСХ. После завершения реакции смесь разбавляют с использованием ДХМ и промывают 1,0М лимонной кислотой, а затем 1,0М раствором карбоната натрия. Органический слой сушат над №₂5О₄ и выпаривают при пониженном давлении с получением сырого соединения 11т которое дополнительно очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 0-5% этилацетата в гексане) с получением 3,0 г продукта 1Ь. ³Н-ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц): δ 1,17 (§, 9Н), 1,28 (ά, 3Н), 1,50 (§, 9Н), 4,11 (т, 1Н), 4,28 (т, 1н), 5,89 (ά, 1Н ), 7,37 (ά, 2Н), 8,26 (ά, 2н).

Пример 2. Синтез соединения 2.

Стадия 2а

ΝΜΜ (1,8 мл, 18,15 ммоль) медленно добавляют к перемешиваемому раствору 1с (2,0 г, 7,26 ммоль), 2ά (4,3 г, 7,26 ммоль), НОВ! (1,17 г, 8,7 ммоль) и ЕОС.НС1 (1,66 г, 8,7 ммоль) в ДМФ (15 мл) при температуре 0°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакцию гасят льдом, осажденное твердое вещество фильтруют и сушат под вакуумом с получением 3,7 г чистого продукта 2е (выход: 59,6%). ЖХМС: 854,4 (М+Н)⁺.

Стадия 2Ъ

- 12 029661

К перемешиваемому раствору соединения 2е (3,7 г, 4,33 ммоль), растворенного в сухом ТГФ (25,0 мл) и ДМФ (10,0 мл), добавляют трифенилфосфин (2,28 г, 8,66 ммоль) и йод (2,2 г, 8,66 ммоль) при температуре 0°С. После полного растворения йода добавляют Εί₃Ν (2,5 мл, 17,32 ммоль) при той же температуре. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакционную смесь гасят водой со льдом и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором тиосульфата натрия и соляным раствором. Отделенный органический слой сушат над Ν₂3Ο₄ и выпаривают при пониженном давлении, затем дополнительно очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 30% этилацетата в гексане) с получением 2,0 г соединения 21 (выход: 55%). ЖХ-МС: 858,4 (ΜΓΝ;Γ)'.

Стадия 2с

Диэтиламин (30,0 мл) добавляют к раствору соединения 21 (2,0 г, 1,17 ммоль) в СН₂С1₂ (30,0 мл) при температуре 0°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученный раствор концентрируют в вакууме с получением густого смолистого остатка. Сырое вещество очищают с помощью колоночной хроматографии на нейтральном оксиде алюминия (элюент: 2% метанола в хлороформе) с получением 1,0 г соединения 2д (выход: 71,4%). ЖХ-МС: 614,5 (М+Н)+.

Стадия 2ά

ЫНСРЩ

^Β«ΗΝ%Γ >-<

Ν-/ Μ

ВиО.

ο Ύ°^ίθϋ

11»^Η ο

ΝΗ0ΡΚ₃

'ВиО^ % ο у°^!Ви

Е1₃№ДМв>

Воснм

Μ-Ν ^Η Η

Соединение 2д (1,0 г, 1,63 ммоль) и ТЭА (0,47 мл, 3,2 ммоль), растворенный в ДМФ (10 мл), добавляют по каплям к раствору 11ι (0,7 г, 1,79 ммоль) при температуре 0°С. Реакционную смесь затем оставляют нагреваться до комнатной температуры и продолжают перемешивать в течение 2 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакционную смесь гасят водой со льдом, осажденное твердое вещество фильтруют и сушат под вакуумом. Полученное сырое вещество дополнительно очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 0-30% этилацетата в гексане) с получением 0,8 г продукта 2ΐ (выход 57,1%). ЖХ-МС: 871,6 (М+Н)+.

Стадия 2е

К раствору соединения 2ΐ (0,8 г, 0,92 ммоль) в СН₂С1₂ (6 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (6 мл) и каталитическое количество триизопропилсилана и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Полученный раствор концентрируют в атмосфере азота и твердый продукт очищают с помощью метода препаративной ВЭЖХ, описанного в экспериментальной части (выход: 0,065 г). ВЭЖХ: ί_κ = 12,01 мин.; ЖХ-МС: 361,34 (М+Н)+.

Пример 3. Синтез соединения 3.

Стадия 3 а

Реагент Лавессона (2,85 г, 7,03 ммоль) добавляют к раствору соединения 2е (4 г, 4,68 ммоль) в ТГФ (40 мл) и перемешивают при температуре 75°С в течение 4 ч. Завершение реакции подтверждается с помощью ТСХ-анализа. Реакционную смесь выпаривают при пониженном давлении и полученный остаток разделяют между ледяной водой и этилацетатом. Органический слой промывают раствором №НСО₃ и затем соляным раствором. Органический слой сушат над Ν₂3Ο₄, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении с получением остатка, который затем очищают с помощью колоночной хроматографии

- 13 029661

на силикагеле (элюент: 0-5% этилацетата в гексане) с получением 2,7 г соединения 3а (выход: 67,66%). ЖХ-МС: 852,3 (М+Н)+.

Стадия 3Ь

Защитную Ршос-группу на соединении 3а снимают путем добавления диэтиламина (3,8 мл) к раствору соединения 3а (1 г, 1,17 ммоль) в СН₂С1₂ (3,8 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. Полученный раствор концентрируют в вакууме с получением густого смолистого остатка. Сырое вещество очищают с помощью колоночной хроматографии на нейтральном оксиде алюминия (элюент: 0-50% этилацетата в гексане, а затем 0-5% метанола в хлороформе) с получением 0,62 г соединения 3Ь. ЖХ-МС: 630,5 (М+Н)+.

Стадия 3с

К раствору соединения 3Ь (0,6 г) в СН₂С1₂ (7,5 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (2,5 мл) и каталитическое количество триизопропилсилана и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Полученный раствор концентрируют в вакууме с получением 0,13 г соединения 3, которое очищают с помощью метода препаративной ВЭЖХ, описанного в экспериментальной части. ЖХ-МС: 232,3 (М+Н)⁺.

Пример 4. Синтез соединения 4.

Стадия 4 а

Связывание мочевины осуществляют путем взаимодействия соединения 3Ь (0,5 г, 7,9 ммоль) в ТГФ (10 мл) при комнатной температуре с соединением 4е (0,34 г, 7,9 ммоль). Взаимодействие инициируют добавлением ТЭА (0,16 г, 15,8 ммоль) в ТГФ (10 мл) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре. Через 12 ч ТГФ выпаривают из реакционной массы и массу разделяют между водой и этилацетатом. Органический слой промывают водой, соляным раствором, сушат над Ха₂ЗО₄ и выпаривают при пониженном давлении с получением соединения 4а, которое дополнительно очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 0-50% этилацетата в гексане) с получением 0,45 г соединения 4а (выход: 61,64%). ЖХ-МС: 921,8 (М+Н)⁺.

Стадия 4Ь

К раствору соединения 4а (0,55 г) в метаноле (20 мл) добавляют 10% Рб-С (0,15 г) в атмосфере инертного газа. Смесь перемешивают в течение 1 ч в атмосфере Н₂. Завершение реакции подтверждается анализом ТСХ. Катализатор Рб-С затем удаляют фильтрованием через слой целита и промывают 20 мл метанола. Объединенный органический фильтрат выпаривают при пониженном давлении с получением соединения 4Ь (выход: 0,42 г, 85,71%). ЖХ-МС: 831,5 (М+Н)+.

- 14 029661

Стадия 4с

К раствору соединения 4Ъ (0,2 г, 0,3 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) добавляют трифторуксусную кислоту (5 мл) и каталитическое количество триизопропилсилана и перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч. Полученный раствор концентрируют в вакууме и твердый продукт очищают с помощью метода препаративной ВЭЖХ, описанного в экспериментальной части (выход: 0,065 г). ВЭЖХ: 1_К = 14,1 мин.; ЖХ-МС: 377,3 (М+Н)+.

Синтез соединения 4е (ХО₂-С₆Н₄-ОСО-ТЬт(О¹Ви)-В71)

-х^О'Ви ^.О'Ви

РЬ'дг Т Диэтиламин ΊΓ

............................. ~ Ртоснм^х^у°'^^РЬ _СНгС1з НгнА'ц"⁰'

О

РтосНМ

СЗгСОз

„РН

Ртос-ТНг(1ВиуОН

4С 44

К раствору соединения Ртос-ТЬт(¹Ви)-ОН (15 г, 37,73 ммоль) в 100 мл ДМФ, добавляют С§₂СО₃(14,75 г, 45,2 ммоль) и полученную смесь охлаждают до температуры 0°С. К охлажденной реакционной смеси добавляют бензилбромид (7,74 г, 45,2 ммоль) и раствор перемешивают при температуре льда в течение 30 мин, а затем при комнатной температуре в течение 12 ч. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и разбавляют этилацетатом. Органический слой промывают водой, а затем соляным раствором и сушат над №₂8О₄. Отфильтрованный раствор концентрируют и очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 0-30% этилацетата в гексане) с получением 18 г соединения 4с в виде белого твердого вещества. ЖХ-МС: 433,1 (М-О¹Ви)⁺, 397,2 (М-ОВ/1)+.

Защитную Ртос-группу на соединении 4с (25 г, 51,3 ммоль) снимают путем добавления диэтиламина (100 мл) в соединение 4ά (25 г, 51,3 ммоль) в СН₂С1₂ (100 мл) в течение 1 ч при перемешивании при комнатной температуре. Полученный раствор концентрируют в вакууме и густой остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на нетральном оксиде алюминия (элюент: 0-50% этилацетата в гексане, а затем 0-5% метанола в хлороформе) с получением 10,6 г соединения 4ά. ЖХ-МС: 266,5 (М+Н)+.

К раствору соединения 4ά (1,5 г, 5,65 ммоль) в СН₂С1₂ (25 мл) добавляют ТЭА (1,14 г, 11,3 ммоль), и раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 5-10 мин. К этой смеси добавляют раствор 4-нитрофенилхлорформиата (1,4 г, 6,78 ммоль) в СН₂С1₂ (10 мл) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Завершение реакции подтверждается анализом ТСХ. После завершения реакции смесь разбавляют ДХМ и промывают 1,0М раствора бисульфата натрия, а затем 1,0М раствором карбоната натрия. Органический слой сушат над №₂8О₄, фильтруют и выпаривают при пониженном давлении с получением сырого соединения 4е, которое дополнительно очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюент: 0-20% этилацетата в гексане) с получением 0,7 г соединения 4е. ¹Н-ЯМР (ДМСО-б₆, 300 МГц): δ 1,04 (§, 9Н), 1,16 (ά, 3Н), 4,11 (т, 1Н), 5,11 (т, 3Н), 6,91 (ά,

2Н), 7,40 (т, 5Н), 8,10 (ά, 2Н), 8,26 (§, 1Н).

Соединения, приведенные в табл. 3 ниже, готовят на основе экспериментальных методик, описанных выше.

- 15 029661

Таблица 3

Номер соединения	Структурная формула	ЖХ-МС (Μ+Η)⁺	ВЭЖХ Ικ в мин.
5.		391,1	12,43
6.		377,1
7.		361,1	12,21
8.	νη₂ ^НОЛ сА> Η₂Ν^γ°γ^χΛ^ΝΗ₂ N-N	230,1	12,95
9.	νη₂ Н°у ₀А о у°Н N-N ^п О	375,4	11,55
10.	νη₂ Н°у ₀А _{0 г}°н ΛΑάν N-N ^М О	361,2	11,91
11.	νη₂ ^НО Ц (А, о <^он Αγ⁰'////*¹ N-N " О	361,1	12,08
12.	о^мн₂ ИОу к. ₀ /ОН нА°Ай^лЛ^он	375,2	11,5
13.	о<_мн₂ ^нсу к„ о γΟΗ нЛ°Л^ЛЛ^он N-N О	389,1	11,10
14.	νη₂ ^н0', оА о _г ^он ΛΑΛύ" N-N ^{и и} О	347,1	12,58
15.	ΟγΟΗ ^ноч к о "γ^ΟΗ нл^Лг°Г'й^ЛИ^ЛГ°^н N-N ^{п п} О	376,1	12,20
16.	ο<_νη₂ ^ноч к_ о γ^ΟΗη₂ν\^οΥ^ΛΜ^ΛΜ^ΛΤ^ΟΗ Ν-Ν ^{π π} О	375,2	11,91

- 16 029661

17.	ο^νη₂ по Ц θ ОН N-N ^М О	361,2	12,34
18.	ОН ^ноч ₀А о 'γ^0Η N-N ^М О	362,1	12,50
19.	ОН ^н<\ оА о Г^оннЛаг/а¥^он N-N ^п О	348,1	12,83
20.	νη₂ Н°у ₀А θ ·γΟΗ Ν-Ν О	391,1

Соединения, представленные в приведенной ниже табл. 4, которые могут быть получены с помощью следующей методики, как описано выше, с соответствующей модификацией, известной для среднего специалиста в данной области, также включены в объем настоящей заявки.

Таблица 4

Номер соединения	Структурная формула	Номер соединения	Структурная формула
21.	ΝΗ₂ НО^ °^² ΗΝ-ΝΗ	26.	ΝΗ; СА ₀А о у" н^ЧгАйА⁰"
22.	νη₂ но^ о "γ^0Η ^ΗζΝ ΗΝ-ΝΗ ^н Η V	27.	. 7 о γ^0Η .Уг+А"
23.	νη₂ но^ Н₂г>\|^ ν^^ΧΝΗ₂ Ν-Ν	28.	η₂ν Л°А оу н^°>ААА-°н ^Μ2^Ν _ν^ν ^н η Π о И
24.	νη₂ ηοнЛ^₂ ² ΗΝ-ΝΗ	29.	□ η ^ΝΗ2 он но_х 7 ² нТ-чМАХу η₂ν Η Η γ
25.	ΝΗ₂ ΗΟ^ ο Α-^0Η Η Ν^νν^Ν^ΝΛ<^0Η ^Η2^Ν ΗΝ-ΝΗ Η η 4Γ		-

Восстановление пролиферации спленоцитов мыши в присутствии рекомбинантного ΡΏ-Ε1/ΡΏ-Ε2.

Рекомбинантный ΡΏ-Ы (гт-РЭШ, са! по: 1019-В7-100, Η&Ι) 8у81етз) мыши используют в качестве источника ΡΏ-Ы.

Условия.

Спленоциты мышей, заготовленные от 6-8 недельных мышей С57 ВЬ6; ΚΡΜΙ 1640 (О1ВСО, Са1 # 11875); ΏΜΕΜ (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) с высоким содержанием глюкозы (О1ВСО, Са1 # Ώ6429); фетальная бычья сыворотка [Нус1опе, Са1 # 8Н30071.03]; жидкость пенициллин (10000 ед./мл)-стрептомицин (10000 мкг/мл) (О1ВСО, Са1 # 15140-122); 100 мМ ΜΕΜ (минимальная поддерживающая среда) раствор пирувата натрия (100х), жидкий (О1ВСО, Са1 # 11360); заменимая аминокислота (О1ВСО, Са1 # 11140); Б-глутамин (О1ВСО, Са1 # 25030); анти-СИ3 антитела (еВюзшепсез - 160032); анти-СИ28 антитела (еВюзшепсез - 16-0281); буфер для АСК лизиса (1 мл) (О1ВСО, Са1 # А10492); I РАорацие (плотность 1,083 г/мл) (8ΙΘΜΑ 10831); трипановый синий раствор (8ΙΘΜΑ-Τ8154); 2 мл Иогт Лес! Биег Боек зуппде - (§1§та 2014-12); 40 мкм сетчатый фильтр из нейлона (ВИ РАЕСОИ 35230); гематоцитометр (Вг1§Ы ΙιικΆΙΟΜΑ Ζ359629); буфер для клеточного сортера с возбуждением

- 17 029661

флуоресценции (РАС8) (РВ8/0,1% В8А): фосфатно-солевой буферный раствор (РВ8), рН 7,2 (Н1Меб1а Т81006) с 0,1% бычьим сывороточным альбумином (В8А) (8ЮМА А7050) и азид натрия (8ЮМА 08591); 5 мМ исходный раствор СР8Е: СР8Е маточный раствор готовят разбавлением лиофилизированного СР8Е 180 мкл диметилсульфоксида (ДМСО С₂Н₆8О, 8ЮМА-И-5879) и разливают аликвотные части в пробирки для дальнейшего использования. Рабочие концентрации титруют от 10 до 1 мкМ (еВю8С1епсе-650850-85); 0,05% трипсина и 0,02% ЭДТА (8ЮМА 59417С); 96-луночного формата ЕЬ18А планшеты (Согтпд СЬ83390); ВО РАС8 калибр (Е6016); рекомбинантный мышиный В7-Н1/РИЬ1 Рс химера, (гт-РИ-Ы са! по: 1019-В7-100).

Протокол.

Подготовка и культивирование спленоцитов.

Спленоциты, заготовленные в 50 мл трубке Ра1соп путем затирания селезенки мышей в 40 мкм сетчатом фильтре, дополнительно обрабатывают 1 мл буфера для АСК лизиса в течение 5 мин при комнатной температуре. После промывания 9 мл полной среды КРМ1 клетки ресуспендируют в 3 мл 1хРВ8 в 15 мл трубке. 3 мл Н|51орацие осторожно добавляют в нижнюю часть трубки, не нарушая покрывающей спленоциты суспензии. После центрифугирования при 800х г в течение 20 мин при комнатной температуре, непрозрачный слой спленоцитов тщательно собирают, не нарушая/не смешивая слои. Спленоциты дважды промывают холодным 1хРВ8 с последующим полным подсчетом клеток с использованием метода исключения трипановым синим и используют в дальнейшем для основанных на клетках анализах.

Спленоциты культивируют в полной среде КРМ1 (КРМ1 + 10% фетальной бычьей сыворотки + 1 мМ пирувата натрия + 10000 ед./мл пенициллина и 10000 мкг/мл стрептомицина) и выдерживают в СО₂инкубаторе с 5% СО₂ при температуре 37°С.

Анализ пролиферации СР8Е.

СР8Е (Карбоксифлуоресцирующий сукцинимидильный эфир) представляет собой краситель, который пассивно диффундирует в клетки и связывается с внутриклеточными белками. 1х 10⁶ клеток/мл заготовленных спленоцитов обрабатывают 5 мкМ СР8Е в предварительно подогретой 1хРВ8/0,1% раствора В8А в течение 10 мин при температуре 37°С. Избыток СР8Е гасят добавлением 5 объемов ледяной культуральной среды на клетки и инкубируют на льду в течение 5 мин. СР8Е помеченные спленоциты дополнительно промывают три раза ледяной полной средой КРМР СР8Е меченые 1х 10⁵ спленоциты добавляют в лунки, содержащие клетки МИА-МВ231 (1х10⁵ клеток, культивируемых в среде ИМЕМ с высоким содержанием глюкозы) или рекомбинантный человеческий РИЬ-1 (100 нг/мл) и тестируемые соединения. Спленоциты стимулируют посредством антител анти-мышиного СИ3 и анти-мышиного СИ28 (1 мкг/мл каждый), после чего культуру дополнительно инкубируют в течение 72 ч при температуре 37°С с использованием 5% СО₂. Клетки собирают и промывают трижды ледяным РАС8-буфером и % пролиферации анализируют с помощью проточной цитометрии с фильтрами возбуждения при 488 нм и эмиссии при 521 нм.

Сбор, обработка и вывод данных.

Процент пролиферации спленоцитов анализируют с помощью программы РАС8 поиска клеток и процент восстановления пролиферации спленоцитов соединением оценивают после вычета % значения фоновой пролиферации и нормализации в % пролиферации стимулированных спленоцитов (положительный контроль), принятый за 100%.

Стимулированные спленоциты: спленоциты + анти-СИ3/СИ28-стимуляция.

Предпосылки пролиферации: спленоциты + анти-СИ3/СИ28-+ РИ-ЬЕ

Пролиферация соединения: спленоциты + анти-СИ3/СИ28-+ РИ-Ь1 + соединение.

Действие соединения исследуется путем добавления требуемой концентрации соединения к антиСИ3/ССИ28-стимулированным спленоцитам в присутствии лиганда (РИЬ-1).

- 18 029661

Таблица 5

Номер соединения	Процент восстановления пролиферации спленоцитов (@ 100 нМ концентрация соединения)	Номер соединения	Процент восстановления пролиферации спленоцитов (@ 100 нМ концентрация соединения)
1	61,2	13	75
2	80,3	14	53
3	48,4	15	69
4	60	16	56
9	74	17	53
10	58	18	68
12	92	-	-

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I)

в которой К₁ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Зег, ТЬг, РЬе, ΆΕι или Άδη;

X означает 8 или О;

К₂ означает водород или -СО-Ааа;

Ааа означает аминокислотный остаток, выбранный из Зег, Άδη или ТЬг; в котором С-конец является свободным, амидированным или этерифицированным концом;

К₃ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Зег, ΆΕι, О1и, Ο1η, Άδη или Άδρ; тттт. является одинарной и двойной связью;

если ™ представляет собой одинарную связь, то К4 и К₅, каждый, являются водородом; и если тттА представляет собой двойную связь, то К₄ и К₅ отсутствуют; или его фармацевтически приемлемая соль или стереоизомер.

2. Соединение по п.1, которое представляет собой соединение формулы (!Ά)

или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер; в которой К₁ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Зег, ТЬг, РЬе, ΆΕι или Άδη;

X означает З или О;

К2 означает водород или -СО-Ааа;

К₃ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из Зег, ΆΕι, О1и, Ο1η, Άδη или Άδρ; и

Ааа означает аминокислотный остаток, выбранный из Зег, Άδη или ТЬг; в котором С-конец является

3. Соединение по любому из пп.1 или 2, которое представляет собой соединение формулы (1В)

(ΙΒ)

Άаа означает аминокислотный остаток, выбранный из Зег, Άδη или ТЬг; в котором С-конец является

4. Соединение по любому из пп.1 или 2, которое представляет собой соединение формулы ^С)

- 19 029661

(1С)

или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер; в которой Κι означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из 8ег, Тйг, Рйе, А1а или Азп;

К₃ означает боковую цепь аминокислоты, выбранной из 8ег, А1а, О1и, О1п, Азп или Азр; и

Ааа означает аминокислотный остаток, выбранный из 8ег, Азп или ТЬг; в котором С-конец является

5. Соединение по любому из пп.1 или 2, в котором X означает О.

6. Соединение по любому из пп.1 или 2, в котором X означает 8.

7. Соединение по п.1, в котором

Κ₁ означает боковую цепь 8ег или Тйг;

К₂ означает -СО-Ааа;

Ааа означает остаток аминокислоты 8ег или Тйг; в котором С-конец является свободным; и К₃ означает боковую цепь Азп, О1п, О1и или Азр.

8. Соединение по любому из пп. 1 или 2, в котором К₂ означает водород.

9. Соединение по п.1, которое представляет собой

Номер соединения Структурная формула 1. ^ноч = о γ^0Η ЛУДУ Ν-Ν О 2. νη₂ ^Η% οΑ ο ν^0Η Ν-Ν ^{π π} Ο 3. нет ,^ΝΗ* ,Λΰ Ν-ν νη₂ 4. νη₂ ^ноч οΑ ο γ^0Η Ν-Ν Ο 5. νη₂ ^ΗΟγ οΑ ο -γ^ΟΗ "ЛУЛУ Ν-Ν ^{И Μ} Ο 6. νη₂ ^ΗΟγ- οΑ ο τ^ΟΗ Ν-Ν ^{π π} Ο 7. νη₂ ^Ηίν οΑ о Г°^Н Η3Ν⁴Υ°Υ^Λν^Λν^ΛΥ°^Η Ν-Ν ^{π π} 0 8. νη₂ ^Η(ν οΑ Η₂Ν Ν Η₂ Ν-Ν 9. νη₂ ^ΗΟγ- οΑ ο 'γ^ΟΗ ААуЛУ Ν-Ν ^{π π} Ο

- 20 029661

10. но η₂ν ΖΖ γ .ОН Υ^0Η ο 11. νη₂ но < оА о /ОН Η₂ΙΨ Υα/αΥ N-N 0 12. ^но О^МН₂ А ’ ⁰ он Н₂кГ ΥΥΑ' V^м N-N ^{П П} 0 13. О^МН₂ но. Υ к η - .ОН \ - ? Υ η₂ν^ аа/а V^м N-N о 14. νη₂ но. .ОН ι ο г Н₂1\Г ΥαΆ' Υ^θΗ Ν-Ν ^{Π Π} о 15. но. ΟγΟΗ он η₂ν^ ί - ° ΥΥΛ' Υ^0Η Ν-Ν о 16. ο^νη₂ но. к , - . .ОН ί - ? Υ Н₂1\Г Ύ°υΥϊ Υ^θΗ о 17. но. ο^νη₂ 1 = ο .он Н₂Гч аа4 •V Ν-Ν ^{Π Π} О 18. ОН но I θΑ ο " он Н₂1\Г Υα/τ Υ^ΟΗ Ν-Ν о

- 21 029661

19. ОН ^ноч <А о _г ^он н_2М\°^й^ЛЛ^0Н 20. νη₂ ^ΗΟγ" оА о "у^он Ν-Ν ^{Μ Μ} О 21. νη₂ но^ °А ² ΗΝ-ΝΗ 22. νη₂ но_л °А о А-^Он Η ν^³Αν^νΛ<οη ^Η2^Ν ΗΝ-ΝΗ Η Η Υ 23. νη₂ ΗΟ^ °^\ _Η?Ν^^°'^^ΝΗ2 ^Η2^Ν Ν-Ν 24. νη₂ НО-Д °Ά Η Ν^Αν^ΝΗ₂ ^Η2^Ν ΗΝ-ΝΗ 25. νη₂ ΗΟ^ ₀ ,ΟΗ ηΧΧΓ Ε τ υ^οη 26. νη₂ Ечу-ду- 27. . ? ο ύ^οη н>£пЛ^лг^он 28. η₂ν λ°Α Ο_ΥΟ" нЛСгк^лА^он θ или 29. он но_х 7

или его фармацевтически приемлемую соль или стереоизомер.