EA018653B1

EA018653B1 - Лечение инфекций, вызванных антибиотикоустойчивыми бактериями

Info

Publication number: EA018653B1
Application number: EA201170121A
Authority: EA
Inventors: Мин-чу Хсу; Чи-Син Ричард Кинг; Шу-Цзэнь Чэнь; Люк Линь
Original assignee: Тайджен Байотекнолоджи Ко., Лтд.
Priority date: 2008-07-01
Filing date: 2008-09-08
Publication date: 2013-09-30
Also published as: CN101618038B; HK1139049A1; KR20150006080A; EA201170121A1; CA2728328A1; KR20110044168A; ZA201100616B; JP2011526887A; EP2303271A1; AU2008358909B2; CN101618038A; AU2008358909A1; EP2303271A4; TR201820964T4; TW201002322A; US20100004282A1; TWI375558B; WO2010002415A1; NZ588898A; CA2728328C

Abstract

Изобретение относится к способу лечения инфекции, вызванной внебольничными метициллин-устойчивыми Staphylococcus aureus, путем введения субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества хинолонового соединения следующей формулы:

Description

Настоящая заявка испрашивает приоритет в отношении предварительной заявки США № 61/077293, поданной 1 июля 2008 года, содержание которой включено в данный текст ссылкой.

Уровень техники изобретения

Устойчивость бактерий к антибиотику может быть наследственным признаком либо приобретена путем мутации. Бактерии, устойчивые к антибиотику, становятся серьезной угрозой общественному здравоохранению.

Например, приблизительно 1% популяции в мире несут метициллин-устойчивый золотистый стафилококк (81арйу1ососси8 аигеиз) (МРЗС), бактериальный штамм, который устойчив к широко применяемым антибиотикам. Большинство инфекций, связанных с МРЗС, имеют место в больницах и здравоохранительных учреждениях, таких как дома престарелых и центры гемодиализа. Эти инфекции известны как госпитальные инфекции МРЗС (госпитальные МРЗС). Пожилые люди или люди с ослабленной иммунной системой имеют высокий риск приобретения инфекций госпитального МРЗС. Другой тип МРЗС, внебольничный МРЗС, был обнаружен в последнее время у группы здоровых людей в более широком сообществе. Внебольничный МРЗС вызывает серьезные инфекции кожи и мягкий тканей и тяжелую форму пневмонии.

Инфекции, вызываемые бактериями, устойчивыми к антибиотикам, зачастую не поддаются лечению существующими антибиотиками. Следовательно, необходима разработка новых препаратов антибиотиков.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к способу лечения инфекции, вызванной внебольничными метициллин-устойчивыми §1арйу1ососси8 аигеиз. Способ включает введение пациенту эффективного количества одного из соединений хинолона, описываемого формулой (I)

Формула (I)

Эти соединения хинолона содержит центры асимметрии. Соединения включают все формы стереоизомеров. Приведены два примера изомерных соединений (38,58)-7-[3 -амино-5-метилпиперидинил] -1 -циклопропил-1,4-дигидро-8-метокси-4-оксо-3 -хинолинкарбоновая кислота

(3 8,5К)-7-[3 -амино-5 -метилпиперидинил]-1-циклопропил-1,4-дигидро-8-метокси-4-оксо-3 хинолинкарбоновая кислота

Хинолоновые соединения могут представлять сами соединения, а также являться их солями, пролекарствами или сольватами. Соль может быть образована анионом и положительно заряженной группой (например, аминогруппой) соединения. Подходящие анионы включают хлорид, бромид, йодид, сульфат, нитрат, фосфат, цитрат, метансульфонат, трифторацетат, ацетат, малат, тозилат, тартрат, фумарат, глутамат, глюкуронат, лактат, глутарат и малеат. Подобным образом, соль также может быть образована катионом и отрицательно заряженной группой (например, карбоксилат) соединения. Подходящие катионы включают ион натрия, ион калия, ион магния, ион кальция и катионы аммония, такие как ион тетраметиламмоний. Пролекарство может являться сложным эфиром и другим приемлемым с фармацевтической точки зрения производным, которое при приеме пациентом способно давать соединение формулы (I). Термин сольват относится к комплексу, образованному соединением формулы (I) и приемлемым с фармацевтической точки зрения растворителем. Приемлемым с фармацевтической точки зрения растворителем может быть вода, этиловый спирт, изопропанол, этилацетат, уксусная кислота и этаноламин. Следовательно, хинолоновые соединения, годные для практического применения настоящего изобретения, могут представлять собой, например, соли малата (соли яблочной кислоты) указанного соединения и полугидраты солей.

Детали некоторых вариантов осуществления изобретения изложены в описании ниже. Другие ха

- 1 018653 рактеристики, цели и преимущества изобретения будут очевидны из описания, а также формулы изобретения.

Подробное описание изобретения

Хинолоновые соединения, применяемые для осуществления настоящего изобретения, могут быть синтезированы традиционными способами. Пример 1, приведенный ниже, иллюстрирует синтетические методы получения двух изомерных соединений. Специалист в данной области сможет получить другие изомеры или другие формы путем модификации процедуры синтеза. Преобразования синтетической химии и методики блокирующих групп (защита и снятие защитных групп), целесообразные в синтезе, известны в данной области и включают, например, таковые, описанные в Я. Ьагоск, Сотргейеизгуе Огдашс ТгаизГогтабоиз, УСН РиЬНзйегз (1989); Т.^. Сгееие аиб Р.С.М. ХУиК РгоГесбуе Сгоирз ίη Огдашс 8уиГйе818, 3^гб Еб., Ιοίιη ХУПеу аиб 8оиз (1999); Ь. Иезег аиб М. Иезег, Иезег аиб Иезег'з ЯеадеиГз Гог Огдашс 8уиГйез1з, 1ойи ХУПеу аиб 8оиз (1994) и Ь. Расщепе, еб., Еисус1ореб1а оГ ЯеадеиГз Гог Огдашс 8уиГйез1з, 1ойи ХУПеу аиб 8оиз (1995), и их последующие редакции.

Соединения, синтезированные таким образом, далее могут быть очищены с помощью флэшхроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии, кристаллизации или других подходящих методик.

Вышеописанные хинолоновые соединения подавляют рост метициллин-устойчивых бактерий, ванкомицин-устойчивых бактерий, пенициллин-устойчивых бактерий, кларитромицин-устойчивых бактерий и метронидазол-устойчивых бактерий. Следовательно, аспект настоящего изобретения относится к способу лечения инфекций, вызванных одним из видов бактерий, путем введения нуждающемуся пациенту эффективного количества одного из хинолоновых соединений. Примером осуществления этого способа является применение хинолонового соединения для лечения инфекции, вызванной мультиустойчивыми 8ГгерГососсиз рηеитοи^ае, в котором бактерии устойчивы не менее чем к одному из антибиотиков метициллин, ванкомицин и пенициллин.

Термин устойчивый, используемый в данном тексте, относится к устойчивости к препарату от промежуточного уровня до максимального уровня. Метициллин-устойчивые бактерии включают, но не ограничены, метициллин-устойчивые 8Гарйу1ососсиз аигеиз; 8Гарйу1ососсиз аигеиз, обладающие устойчивостью к метициллину, связанной с эффлюксом; внебольничные метициллин-устойчивые 8Гарйу1ососсиз аигеиз и метициллин-устойчивые 8Гарйу1ососсиз ер1бегт1б1з. Ванкомицин-устойчивые бактерии включают, но не ограничены, 8Гарйу1ососсиз аигеиз с промежуточной устойчивостью к гетеро-ванкомицину; 8Гарйу1ососсиз аигеиз с промежуточной устойчивостью к ванкомицину и ванкомицин-устойчивые 8Гарйу1ососсиз аигеиз. Пенициллин-устойчивые бактерии включают, но не ограничены, пенициллинустойчивые 8ГгерГососсиз риеитошае. Кларитромицин-устойчивые бактерии включают, но не ограничены, кларитромицин-устойчивые НейсоЬасГег ру1огг Метронидазол-устойчивые бактерии включают, но не ограничены, метронидазол-устойчивые НейсоЬасГег ру1огг

Термин эффективное количество относится к количеству активного вещества, которое требуется для достижения у пациента планируемого терапевтического эффекта. Эффективные количества могут варьировать, как признано специалистами в данной области, в зависимости от способа приема, применения вспомогательного средства и возможности совместного применения с другими агентами. Термин лечение относится к назначению одного из вышеуказанных хинолоновых соединений к приему пациентом с одной из вышеуказанных инфекций, либо с симптомом такой инфекции, либо с предрасположенностью к такой инфекции, с целью излечения, заживления, облегчения, ослабления, преобразования, восстановления, улучшения, корректирования или воздействия на инфекцию, симптомы инфекции или предрасположенность к инфекции.

Для осуществления настоящего способа хинолоновые соединения могут назначаться к приему орально, парентерально, с помощью ингаляции или имплантированного резервуара. Термин парентерально при использовании в данном тексте включает подкожное, внутрикожное, внутривенное, внутримышечное, внутрисуставное, внутриартериальное, надчревное, спинальное введение внутрь пораженных тканей и внутричерепные инъекции или инфузионное введение.

Оральная композиция может быть представлена любой приемлемой для орального применения лекарственной формой, включая, но не ограничиваясь, таблетки, капсулы, эмульсии и водные суспензии, дисперсии и растворы. Широко применяемые носители для таблеток включают лактозу и кукурузный крахмал.

Также обычно в таблетки добавляются смазывающие вещества, такие как стеарат магния. Подходящие растворители инкапсулированной лекарственной формы для орального приема включают лактозу и сухой кукурузный крахмал. При оральном приеме водных суспензий или эмульсий активный ингредиент может быть ресуспендирован или растворен в масляной фазе, скомбинированной с эмульгирующими или суспендирующими веществами. По желанию могут быть добавлены некоторые подсластители, ароматизаторы или красители.

Стерильная инъецируемая композиция (например, водная или масляная суспензия) может быть разработана согласно методикам, известным в данной области техники, с применением подходящих диспергирующих или увлажняющих компонентов (таких, например, как Твин 80) и суспендирующих средств.

- 2 018653

Стерильный инъецируемый препарат также может являться стерильным инъецируемым раствором или суспензией в нетоксичном приемлемом для парентерального введения разбавителе или растворителе, например раствором в 1,3-бутандиоле. Подходящими носителями и растворителями, которые могут использоваться, являются маннитол, вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды широко применяются стерильные нелетучие масла (например, синтетические моно- или диглицериды). Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота и ее глицеридные производные, подходят для изготовления инъецируемых препаратов, как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое и касторовое масло, особенно в полиоксиэтилированном виде. Эти масляные растворы или суспензии также могут содержать длинноцепочечный спиртовой разбавитель или диспергатор либо карбоксиметилцеллюлозу или схожие диспергирующие компоненты.

Ингаляционная композиция может быть приготовлена согласно методикам, хорошо известным в области фармацевтических рецептурных разработок, и может быть получена в виде растворов в солевом растворе, применяемом бензиловом спирте или других пригодных консервантах, стимуляторах абсорбции для повышения биологической доступности, фторуглеродах и/или других растворяющих или диспергирующих веществах, известных в данной области техники.

Лекарственная форма для наружного применения может быть разработана в форме масла, крема, лосьона, мази и подобных. Подходящие носители для такой композиции включают растительные и минеральные масла, белый вазелин (белый мягкий парафин), жиры с разветвленной цепью или масла, животные жиры и спирты с высокой молекулярной массой (больше С12). Предпочтительны те носители, в которых растворим активный ингредиент. Также по желанию в состав могут быть включены эмульгаторы, стабилизаторы, увлажнители и антиоксиданты, равно как и компоненты, придающие окраску или аромат. Дополнительно в этих лекарственных формах для наружного применения могут использоваться стимуляторы проникновения через кожу. Примеры подобных стимуляторов могут быть найдены в патентных заявках США 3989816 и 4444762. Рецептура кремов предпочтительно основана на смеси минерального масла, самоэмульгирующемся воске и воде, при этом активный ингредиент, растворенный в малом количестве масла, таком как миндальное масло, подмешивается в смесь. Примером подобного крема является крем, включающий около 40 ч. воды, около 20 ч. воска, около 40 ч. минерального масла и около 1 ч. миндального масла. Для составления мазей смешивается раствор активного ингредиента в растительном масле, таком как миндальное масло, с теплым мягким парафином, и смесь оставляется для охлаждения. Примером подобной мази является мазь, которая включает около 30 вес.% миндального масла и около 70% белого мягкого парафина.

Носитель в фармацевтической композиции должен быть приемлемым в том смысле, что он совместим с активными ингредиентами композиции (и предпочтительно способствует ее стабилизации) и не вреден для проходящего лечение пациента. Например, растворители, такие как циклодекстрины (которые образуют специфические, более растворимые комплексы с одним или более активным веществом экстракта), могут применяться в качестве вспомогательных веществ для доставки активных ингредиентов. Примеры других носителей включают коллоидный диоксид кремния, стеарат магния, целлюлозу, лаурилсульфат натрия и Э&С Ус11о\у № 10.

Для предварительной оценки эффективности какого-либо из вышеописанных соединений в подавлении роста бактерий могут использоваться соответствующие анализы ίη νίίτο. Далее, эффективность соединения в лечении бактериальной инфекции может быть протестирована с помощью анализов ίη νίνο. Например, соединение может приниматься животными (например, мышиная модель), имеющими инфекцию, и затем достигнуты его терапевтические эффекты. На основе полученных результатов могут быть определены адекватный интервал доз и способ введения лекарства.

Считается, что изложенное выше описание без дальнейших разработок адекватно раскрывает настоящее изобретение. Следовательно, следующие конкретные примеры интерпретируются только как иллюстративные и никоим образом не ограничивают остальные. Все публикации, включая патенты, процитированные в данном тексте, настоящим введены ссылкой во всей их полноте.

Пример 1.

Малаты (яблочно-кислые соли) (38,58)-7-[3-амино-5-метилпиперидинил]-1-циклопропил-1,4дигидро-8-метокси-4-оксо-3-хинолинкарбоновой кислоты (соединение 1) и (38,5Е)-7-[3-амино-5метилпиперидинил]-1-циклопропил-1,4-дигидро-8-метокси-4-оксо-3-хинолинкарбоновой кислоты (соединение 1') были синтезированы следующим образом.

А. Синтез трет-бутилового эфира (38,58)-(5-метилпиперидин-3-ил)карбаминовой кислоты (соединение 9) и трет-бутилового эфира (38,5Е)-(5-метилпиперидин-3-ил)карбаминовой кислоты (соединение 9').

- 3 018653

Соединение 9' было синтезировано, как показано ниже на схеме 1. Схема 1

В реактор объемом 50 л загрузили соединение 2 (5,50 кг, 42,60 моль), метанол (27 л) и охладили до 10-15°С. Тионилхлорид (10,11 кг, 2,0 экв.) добавляли с помощью капельной воронки на протяжении 65 мин, для поддержания температуры ниже 30°С использовалось наружное охлаждение. Полученный раствор перемешивали при 25°С в течение 1,0 ч, после чего под отрицательным давлением удаляли метанол. Масляный остаток очищали от остаточного метанола азеотропным способом с этилацетатом (3x2,5 л), растворяли в этилацетате (27,4 л), загружали в 50-литровый реактор и нейтрализовали при медленном добавлении триэтиламина (3,6 кг) при температуре ниже 30°С. Полученную суспензию фильтровали для удаления триэтиламин гидрохлорида.

Фильтрат загружали в 50-литровый реактор вместе с диметиламинопиридином (ΌΜΛΡ, 0,53 кг). Ди-трет-бутил бикарбонат (8,43 кг) добавляли через подогреваемую горячей водой капельную воронку на протяжении 30 мин при температуре 20-30°С. Реакцию завершали через 1 ч, что определяли анализом результатов тонкослойной хроматографии. Органическую фазу промывали ледяной 1 N НС1 (2x7,5 л), насыщенным раствором бикарбоната натрия (1x7,5 л), сушили с помощью сульфата магния и фильтровали. После удаления этилацетата под пониженным давлением получали кристаллический шлам, который тритурировали с МТБЭ (метилтретбутиловый эфир) (10,0 л), и фильтровали для получения соединения 3 в виде белого твердого вещества (5,45 кг, 52,4%).

Аналитический расчет для СцН^О₅: С, 54,3; Н, 7,04; Ν, 5,76. Получено: С, 54,5; Н, 6,96; Ν, 5,80. Масс-спектрометрия высокого разрешения (Е81⁺): ожидаемо для СцН1^О5, [Μ+Н] 244,1185. Получено 244,1174; ^!Н ЯМР (СОС13, 500 МГц): δ=4,54 (дд, 1=3,1, 9,5 Гц, 1Н), 3,7 (с, 3Н), 2,58-2,50 (м, 1Н), 2,41 (ддд, 1Н, 1=17,6, 9,5, 3,7), 2,30-2,23 (м, 1Н), 1,98-1,93 (м, 1Н), 1,40 (с, 9Н); ¹³С ЯМР (СОС1₃, 125,70 МГц): δ 173,3, 171,9, 149,2, 83,5, 58,8, 52,5, 31,1, 27,9, 21,5. Температура плавления 70,2°С.

В 50-литровый реактор загружали соединение 3 (7,25 кг, 28,8 моль), диметилэтаноламин (6,31 кг) и реагент Бредерика (7,7 кг, 44,2 моль). Раствор перемешивали и нагревали до 75±5°С в течение 3 ч. Реакцию охлаждали до 0°С более 1 ч, в течение этого времени образовывался осадок. Смесь выдерживали при 0°С в течение 1 ч, фильтровали и высушивали в вакуумной печи не менее 30 ч при 30±5°С для получения соединения 4 в виде белого кристаллического твердого вещества (6,93 кг, 77,9%).

Аналитический расчет для С1₄Н₂₂^О₅: С, 56,4; Н, 7,43; Ν, 9,39. Получено: С, 56,4; Н, 7,32; Ν, 9,48; Масс-спектрометрия высокого разрешения (Е81⁺): ожидаемо для С14Н22^О5, [Μ+Н] 299,1607. Получено: 299,1613; ^!Н ЯМР (СОС13, 499,8 МГц) δ=7,11 (с, 1Н), 4,54 (дд, 1Н, 1=10,8, 3,6), 3,74 (с, 3Н), 3,28-3,19 (м, 1Н), 3,00 (с, 6Н), 2,97-2,85 (м, 1Н), 1,48 (с, 9Н); ¹³С ЯМР (СОС1₃, 125,7 МГц) δ=172,6, 169,5, 150,5, 146,5, 90,8, 82,2, 56,0, 52,3, 42,0, 28,1, 26,3. Температура плавления 127,9°С.

В реактор РГаиШег на 10 галлон загружали Е8САТ 142 (Еиде1йагб Согр. Ν.1, И8) 5% палладиевый катализатор на углеродном носителе (50% влажность, 0,58 кг мокрого веса), соединение 4 (1,89 кг, 6,33 моль) и изопропанол (22,4 кг). После перемешивания под давлением 45 фунт/кв.дюйм водородных атмосфер и при 45°С в течение 18 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целита (0,51 кг). Фильтрат сгущали выпариванием под отрицательным давлением для получения густого масла, которое затвердевало отстаиванием до соединения 5 (1,69 кг, 100%) в виде диастереоизомерной смеси с соотношением 93:7.

Образец смеси продукта очищали методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для получения материала для аналитических данных. Аналитический расчет для С|₂Н_ИХО₅: С, 56,0; Н, 7,44; Ν, 5,44. Получено: С, 55,8; Н, 7,31; Ν, 5,44; масс-спектрометрия (Е81⁺): ожидаемо для С-ΙΙΝΌ,. [Μ+Н] 258,1342. Получено 258,1321; Ή ЯМР (ΟϋΟ13, 499,8 МГц) δ=4,44 (м, 1Н), 3,72 (с, 3Н), 2,60-2,48 (м, 2Н), 1,59-1,54 (м, 1Н), 1,43 (с, 9Н), 1,20 (д, 1=6,8 Гц, 3Н); ¹³С ЯМР (СОС13, 125,7 МГц) δ=175,7, 172,1, 149,5, 83,6, 57,4, 52,5, 37,5, 29,8, 27,9, 16,2. Температура плавления 89,9°С.

В 50-литровый реактор загружали соединение 5 (3,02 кг, 11,7 моль), абсолютный этанол (8,22 кг) и метил-трет-бутиловый эфир (14,81 кг). Борогидрат натрия (1,36 кг, 35,9 моль) добавляли малыми порциями при 0±5°С. Наблюдали выделение небольшого количества пузырьков. Реакционную смесь нагревали до 10±5°С и порционно добавляли дигидрат хлорида кальция (2,65 кг) при 10±5°С более 1 ч. Допус

- 4 018653 кали нагревание реакции до 20±5°С более 1 ч и реакцию перемешивали еще 12 ч при 20±5°С. После охлаждения реакции до -5°С±5°С, медленно добавляли ледяную 2 N кислоту НС1 (26,9 кг) при температуре 0±5°С. Перемешивание прекращали. Удаляли нижнюю водную фазу. В реактор в течение более 5 мин при перемешивании загружали насыщенный водой бикарбонат натрия (15,6 кг). Перемешивание вновь останавливали и удаляли нижнюю водную фазу. В реактор загружали сульфат магния (2,5 кг) и перемешивали не менее 10 мин. Смесь фильтровали через нутч-фильтр и концентрировали под отрицательным давлением для получения соединения 6 (1,80 кг, 66%).

Аналитический расчет для СцН₂^О₄: С, 56,6 Н, 9,94; Ν, 6,00. Получено: С, 56,0; Н, 9,68; Ν, 5,96; масс-спектрометрия высокого разрешения (Е§1⁺): ожидаемо для ^1Η24ΝΟ4, [М+Н] 234,1705. Получено: 234,1703; '11 ЯМР (СОС13, 500 МГц) δ=6,34 (д, 1=8,9 Гц, 1Н, ΝΗ), 4,51 (т, 1=5,8, 5,3 Гц, 1Н, ΝΗ^^2ΟΗ), 4,34 (т, 1=5,3, 5,3 Гц, 1Н, СН3СНСН2ОН), 3,46-3,45, (м, 1Н, ΝΗΟ1), 3,28 (дд, 1=10,6, 5,3 Гц, 1МНСНСННОН), 3,21 (дд, 1=10,2, 5,8 Гц, 1Н, СН3СНСННОН), 3,16 (дд, 1=10,2, 6,2 Гц, 1Н, 1МНСНСННОН), 3,12 (дд, 1=10,6, 7,1 Гц, 1Н, СН3СНСННОН), 1,53-1,50 (м, 1Н, СН3СНСННОН), 1,35 (с, 9Н, О(СН3)3, 1,30 (ддд, 1=13,9, 10,2, 3,7 Гц, 1Н, NΗСΗСΗΗСΗ), 1,14 (ддд, 1=13,6, 10,2, 3,4 Гц, 1Н, 1МНСНСННСН), 0,80 (д, 1=6,6 Гц, 3Н, СН3); ¹³С ЯМР (СПС13, 125,7 МГц) δ 156,1, 77,9, 50,8, 65,1, 67,6, 65,1, 35,6, 32,8, 29,0, 17,1. Температура плавления 92,1°С.

В 50-литровый реактор загружали раствор соединения 6 (5,1 кг) в изопропил ацетате (19,7 кг). Реакцию охлаждали до 15±5°С и при этой температуре добавляли триэтиламин (7,8 кг). Далее реактор охлаждали до 0±5°С и добавляли метансульфохлорид (М§С1) (6,6 кг). Реакцию перемешивали в течение нескольких часов, а завершение отслеживали с помощью ВЭЖХ или тонкослойной хроматографии. Реакцию подавляли добавлением насыщенного водного раствора бикарбоната. Органическую фазу выделяли и последовательно промывали с помощью холодного 10% водного раствора триэтиламина, холодного водного раствора НС1, холодного насыщенного водного раствора бикарбоната и, наконец, насыщенного водного солевого раствора. Органическую фазу высушивали, фильтровали и концентрировали под вакуумом при температуре ниже 55±5°С для получения соединения 7 в виде жидко-твердого шлама, который без дополнительной очистки использовали в последующей реакции.

После загрузки 9,1 кг чистого бензиламина 50-литровый реактор нагревали до 55°С, при этой температуре добавляли раствор соединения 7 (8,2 кг) в 1,2-диметоксиэтане (14,1 кг). После добавления реакцию перемешивали при 60±5°С в течение нескольких часов, а завершение отслеживали с помощью ВЭЖХ или тонкослойной хроматографии. Реакцию охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли под вакуумом. Остаток разводили 11,7 кг 15% (вес./вес.) раствором этилацетат/гексана и обрабатывали при перемешивании 18,7 кг 20 вес.% водным раствором карбоната калия. Трехфазную смесь получали отстаиванием. Собирали верхний органический слой. Выделенный средний слой дважды подвергали экстракции 15% (вес./вес.) раствором этилацетат/гексан порциями по 11,7 кг. Объединенные органические фракции концентрировали под вакуумом для получения масляного остатка. Затем остаток очищали методом хроматографии для получения соединения 8 в виде масла.

Резервуар высокого давления объемом 40 л заполняли 0,6 кг 50% (мокрый вес) палладиевым катализатором на углеродном носителе (Е101, 10 вес.%) под током азота. Затем под током азота добавляли раствор соединения 8 (3,2 кг) в 13,7 кг абсолютного этанола. Реактор продували азотом и затем накачивали азотом при давлении 45 фунт/кв.дюйм. Затем реакцию нагревали до 45°С. Прохождение реакции отслеживали с помощью ВЭЖХ или тонкослойной хроматографии. По завершении реакцию охлаждали до комнатной температуры, снижали давление и проводили продувку азотом. Смесь фильтровали через слой целлита и твердое вещество промывали 2,8 кг абсолютного этанола. Фильтрат сконцентрировали под вакуумом для получения соединения 9 в виде воскообразного твердого вещества.

Хроматография в тонком слое (силикагель Г₂₅₄ 70:30 вес./вес. этилацетат-гексан, окраска КМпО₄)=0,12; '11 ЯМР (300 МГц, СПС1₃) δ 5,31 (ушир.с, 1Н), 3,80-3,68 (м, 1Н), 2,92 (д, 1=11,4 Гц, 1Н), 2,77 (АВ кв, 1дв=12,0 Гц, ν=50,2 Гц, 2Н), 2,19 (т, 1=10,7 Гц, 1Н), 1,82-1,68 (м, 2Н), 1,54 (ушир.с, 1Н), 1,43 (с, 9Н), 1,25-1,15 (м, 1Н), 0,83 (д, 1=6,6 Гц, 3Н); ¹³С ЯМР (75 МГц, СПС1₃) δ: 155,3, 78,9, 54,3, 50,8, 45,3, 37,9, 28,4, 27,1, 19,2; масс-спектрометрия (Е§1⁺) масса/заряд 215 (М+Н), 429 (2М+Н).

Подобно этому трет-бутиловый эфир (3§,5Я)-(5-метилпиперидин-3-ил)карбаминовой кислоты (соединение 9') синтезировали, как показано на схеме 2.

Схема 2

- 5 018653

B. Синтез 1-циклопропил-7-фтор-8-метокси-4-оксо-1,4-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты (соединение 10).

Соединение 10 получали способом, описанным в патенте США 6329391.

C. Синтез хелата борного эфира 1-циклопропил-7-фтор-8-метокси-4-оксо-1,4-дигидрохинолин-3карбоновой кислоты (соединение 11).

В реактор загружали оксид бора (2,0 кг, 29 моль), ледяную уксусную кислоту (8,1 л, 142 моль) и уксусный ангидрид (16,2 л, 171 моль). Полученную смесь дефлегмировали не менее 2 ч и затем охлаждали до 40°С, при этой температуре добавляли 7-фторхинолоновую кислоту соединения 10 (14,2 кг, 51 моль). Смесь дефлегмировали в течение не менее 6 ч и затем охлаждали до примерно 90°С. В реакцию добавляли толуол (45 л). При 50°С добавляли трет-бутилметиловый эфир (19 л) для индукции выпадения осадка. Затем смесь охлаждали до 20°С и фильтровали для выделения осадка. Затем выделенное твердое вещество промывали трет-бутилметиловым эфиром (26 л) перед высушиванием в вакуумной печи при 40°С (50 тор) для получения соединения 11 с выходом 86,4%.

Раман (см^-1): 3084,7, 3022,3, 2930,8, 1709,2, 1620,8, 1548,5, 1468,0, 1397,7, 1368,3, 1338,5, 1201,5, 955,3, 653,9, 580,7, 552,8, 384,0, 305,8. ЯМР (СОС1₃, 300 МГц) δ (м.д.): 9,22 (с, 1Н), 8,38-8,33 (м, 1Н), 7,54 (т, 1=9,8 Гц, 1Н), 4,38-4,35 (м, 1Н), 4,13 (с, 3Н), 2,04 (с, 6Н), 1,42-1,38 (м, 2Н), 1,34-1,2 9 (м, 2Н). Хроматография в тонком слое (Ватман МКС18Г силикагель, 60 А, 200 мкм), подвижная фаза: 1:1 (вес./вес.) СН₃СЫ: 0,5 N ЫаС1 (водный), визуализация УФ (254/366 нм); К(=0,4-0,5.

Ό. Синтез яблочно-кислой соли (38,58)-7-[3-амино-5-метилпиперидинил]-1-циклопропил-1,4дигидро-8-метокси-4-оксо-3-хинолинкарбоновой кислоты (соединение 1) и яблочно-кислой соли (38,5Я)7-[3-амино-5-метилпиперидинил]-1-циклопропил-1,4-дигидро-8-метокси-4-оксо-3-хинолинкарбоновой кислоты (соединение 1').

Соединение 1 получали из соединения 9, как показано ниже на схеме 4.

Схема 4

В реактор загружали соединение 11 (4,4 кг, 10,9 моль), соединение 9 (2,1 кг, 9,8 моль), триэтиламин (ТЭА) (2,1 л, 14,8 моль) и ацетонитрил (33,5 л, 15,7 л/кг). Полученную смесь перемешивали при приблизительно 50°С до окончания реакции, что отслеживали с помощью ВЭЖХ или обратнофазной хроматографии в тонком слое. Смесь охлаждали до приблизительно 35°С и объем реакции уменьшали примерно вполовину путем дистилляции ацетонитрила под вакуумом в интервале 0-400 тор. После добавления 28,2 кг 3,0 N водного раствора ΝαΟΗ реакционную смесь нагревали до приблизительно 40°С, подвергали дистилляции под вакуумом до тех пор, пока не перестал образовываться дистиллят, и гидролизовали при комнатной температуре. По окончании гидролиза, что отслеживалось с помощью ВЭЖХ или обратнофазной хроматографии в тонком слое, для нейтрализации реакционной смеси добавляли 4-5 кг ледяной уксусной кислоты.

Полученный раствор трижды экстрагировали 12,7 кг (9,6 л) дихлорметана. Органические фракции объединяли и переносили в другой реактор. Объем реакции уменьшали примерно вполовину выпариванием при 40°С. Затем добавляли 20,2 кг 6,0 N водного раствора НС1, реакционную смесь перемешивали в течение не менее 12 ч при 35°С. По окончании реакции, что отслеживали с помощью ВЭЖХ или обрат

- 6 018653 нофазной хроматографии в тонком слое, перемешивание прерывали и допускали разделение фаз. Органическую фазу удаляли, а водный слой экстрагировали 12,7 кг (9,6 л) дихлорметана. Водную фракцию разбавляли 18,3 кг дистиллированной воды и нагревали до приблизительно 50°С. Затем дихлорметан удаляли дистилляцией под вакуумом (100-400 тор).

Затем рН водного раствора доводили до 7,8-8,1 добавлением примерно 9,42 кг 3,0 N водного раствора ΝαΟΗ при температуре ниже 65°С. Реакционную смесь перемешивали при 50°С не менее 1 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. Осадок выделяли фильтрованием с отсасыванием, дважды промывали 5,2 кг дистиллированной воды и сушили адсорбцией не менее 12 ч, а затем еще 12 ч в конвекционной печи при 55°С. Соединение 12 (3,2 кг, 79%) получали в твердом виде.

В реактор загружали 3,2 кг соединения 12 и 25,6 кг 95% этанола. В реактор добавляли 1,1 кг твердой И,Ь-яблочной кислоты. Смесь дефлегмировали при температуре ~80°С. Для растворения осадка добавляли дистиллированную воду (~5,7 л) и добавляли 0,2 кг активированного угля. Реакционную смесь пропускали через фильтр. Чистый фильтрат остужали до 45°С и оставляли на не менее чем 2 ч для осуществления кристаллизации. После дальнейшего охлаждения реакционной смеси до 5°С осадок выделяли фильтрованием с отсасыванием, промывали 6,6 кг 95% этанола и сушили абсорбцией не менее 4 ч. Далее твердое вещество высушивали в конвекционной печи при 45°С не менее 12 ч для получения 3,1 кг соединения 1 (выход 70%).

ЯМР (Ό₂Ο, 300 МГц) δ (м.д.): 8,54 (с, 1Н), 7,37 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 7,05 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 4,23-4,18 (м, 1Н), 4,10-3,89 (м, 1Н), 3,66 (ушир.с, 1Н), 3,58 (с, 3Н), 3,45 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 3,34 (д, 1=9,3 Гц, 1Н), 3,16 (д, 1=12,9 Гц, 1Н), 2,65 (дд, 1=16,1, 4,1 Гц, 1Н), 2,64-2,53 (м, 1Н), 2,46 (дд, 1=16,1, 8,0 Гц, 1Н), 2,06 (ушир.с, 1Н), 1,87 (д, 1=14,4 Гц, 1Н), 1,58-1,45 (м, 1Н), 1,15-0,95 (м, 2Н), 0,91 (д, 1=6,3 Гц, 3Н), 0,85-0,78 (м, 2Н).

Подобным образом соединение 1' синтезировали из соединения 9', как показано ниже на схеме 5.

Схема 5

Пример 2.

Ингибирование метициллин-устойчивых §!арйу1ососси8 аигеик (МРЗС) соединением 1.

Изоляты (культуры микроорганизмов) МРЗС (п=193) получали в рамках Исследований Канадского Национального Отделения Интенсивной Терапии (СЛ№1СИ). 19 медицинских центров со всех районов Канады с активными отделениями реанимации и интенсивной терапии участвовали в исследованиях САК-ЮТ. От них было запрошено получение только клинически значимых образцов от пациентов с предполагаемым инфекционным заболеванием. Были исключены контрольные мазки глаза, уха, носа и мазки из зева. Анаэробные организмы и грибы также были исключены.

С сентября 2005 г. по июнь 2006 г. (включительно) каждый центр накопил максимум 300 произвольно отобранных патогенов, выделенных из крови, мочи, ткани/ран и респираторных образцов (один патоген от одного места культивирования от одного пациента) от пациентов отделения реанимации и интенсивной терапии. Эти изоляты были доставлены в эталонную лабораторию (Медицинский Центр, Виннипег, Канада) с помощью транспортной системы с тампоном со средой Амиеса с активированным углем, субкультивировались в соответствующей среде и запасались в обезжиренном молоке при -80°С.

Устойчивость изолятов к метициллину подтверждали с помощью диско-диффузионного метода, описанного Институтом Клинических и Лабораторных Стандартов. Все изоляты были исследованы методом ПЦР (на ген тесА), равно как и охарактеризованы с молекулярной точки зрения (включая тест на РУ-лейкоцидин (стафилококковый лейкоцидин) и метод фингерпринтов), как описано ранее, для определения того, являются ли они госпитальными или внебольничными формами (СЫЦйапкоп е! а1., 1 Сйп М1сгоЫо1., 2007, 45 (6): 1904-11; Ми1уеу е! а1., 1 С1ш. МюгоЫоЦ 2001, 39(10): 3481-5; Ми1уеу е! а1., Етегд 1Ыес! ИЦ, 2005, 11(6): 844-50; Ойуепа е! а1., АпБтюгоЬ Адеп!§ СНетоЫег.. 2002, 46(7): 2155-61). Также изоляты были подразделены на подтипы с применением метода гель-электрофореза в пульсирующем поле (РЕОЕ) согласно стандартизованному для Канады протоколу, описанному ранее (Ми1уеу е! а1., 1 С1ш МюгоЫоЦ 2001, 39(10): 3481-5). Полученные, таким образом, РЕОЕ фингерпринты (отпечатки пальцев) изолятов были проанализированы с помощью программного обеспечения Вю№тегю8 версии

- 7 018653

3.5 (Аррйеб Ма1Й8 81. Маг1сп-Ьа1сш. Ве1дшт) с использованием допуска на точность позиционирования 1,0 и оптимизации 1,0. Родство штаммов определялось, как описано ранее (Тепоуег е1 а1., 1995). Фингерпринты изолятов сравнивались с таковыми в Национальной базе данных фингерпринтов МРЗС и группировались в одну из 10 групп Канадских эпидемных МРЗС (КМРЗС-1, КМРЗС-2 и т.д.), как описано ранее (Ми1уеу е1 а1., Етегд 1пГес1 Όίκ., 2005, 11(6):844-50). Изоляты МРЗС относятся к генотипам: КМРЗС-1 (И8Л 600), КМРЗС-2 (И8Л 100), КМРЗС-4 (И8Л 200), КМРЗС-7 (И8Л 400, \1\\'2) и КМРЗС-10 (И8Л 300).

Соединение 1 и другие антибиотики были протестированы на проявление ингибирующей активности в отношении изолятов МРЗС с применением рекомендованных микроразведений среды, как предусмотрено Институтом Клинических и Лабораторных Стандартов. В таблице ниже приведены минимальные ингибирующие концентрации (МИК) соединения 1 и различных фторхиноновых антибиотиков, ингибирующие 193 изолята МРЗС.

МРЗС (п-193)	МИК (мкг/мл)
МИК50	МИКдо	Интервал, мин.	Интервал, макс.
Соединение 1	4	>4	0,03	>4
цефазолин	128	>128	2	>128
цефтриаксон	>64	>64	8	>64
ципрофлоксацин	>16	>16	0,5	>16
Кларитромицин	>32	>32	0.25	>32
клиндамицин	>8	>8	<0, 12	>8
даптомицин	0,25	0, 5	0,25	0,5
левофлоксацин	>32	>32	0,25	>32
линезолид	2	2	0,5	4
меропенем	16	>32	0,25	>32
моксифлоксацин	8	>16	<0, 06	>16

тигециклин	0,25	0,5	0,12	0,5
Тримето πримсульфа	<0,12	4	<0, 12	8
Ванкомицин	1	1	0,5	1

В таблице ниже приведены МИК соединения 1 и фторхиноновых антибиотиков для ингибирования внебольничных штаммов МРЗС И8Л 300 и И8Л 400 и госпитальных штаммов МРЗС И8Л 200, И8Л 600 и И8Л 100/800.

Пекарство	МРЗС МИК50/МИК9О (мкг/мл)
□БА 200 (госпитальный МРЗС)	□ 5А 300 (внебольничный МРЗС)	□ЗА 400 (внебольничный МРЗС)	иЗА 600 (госпитальный МРЗС)	изд 100/800 (госпитальный МРЗС)
Соединение 1	2/2	0,5/0,5	0,06/0,Об	2/2	4/>4
дипрофлОкСаНИн	>16/>1б	>16/>16	1/1	>16/>1б	> 16 / > 16
певофлоксацин	32/>32	8/8	0,25/0,25	32/>32	>32/>32
моксифлоксацин	8/8	2/2	0,06/0,06	8/8	16/>1δ
Ванкомицин	0,5/0,5	0,5/0,5	1/1	1/1	1/1
пинезолид	2/2	1/2	2/2	2/2	2/2
гигециклин	0,5/0,5	0,25/0,5	0,25/0,25	0,25/0,5	0,25/0,25

Соединение 1 эффективно ингибировало МРЗС. Также было установлено, что это соединение было более активно против внебольничных штаммов МРЗС, чем против госпитальных штаммов МРЗС.

Ингибирование мультирезистентных метициллин-устойчивых 81арйу1ососсик аигеик, Еп1егососс1 Гаесшт и Еп1егососс1 Гаесайк соединением 1.

Исследовался ингибирующий эффект соединения 1 на мультирезистентные метициллинустойчивые 81арйу1ососсик аигеик и Еп1егососс1, полученные 10 медицинскими центрами во всех районах Тайваня. МИК были определены с применением методов разведений в агаре, рекомендованными Институтом Клинических и Лабораторных Стандартов (СЬ81-М100-818). Результаты приведены в таблице ниже

- 8 018653

Тип устойчивости (количество изолятов)	Соединение 1: МИК (мкг/мл)
интервал	МИК 50	МИК 90
Ципрофлоксацин-чувствительные МРЗС (п=20)	<0,03- 0, 06	ίο, 03	ίο, 03
Ципрофлоксацин-устойчивые МРЗС (п=20)	0,5-1	0, 5	1
Промежуточно устойчивые к ванкомицину МРЗС (п=50)	0,03-8	0,5	2
Даптомицин- устойчивые МРЗС (п=5)	0,5-1	0,5	1
Ванкомицин-устойчивые Е. £аес1ит (п=78)	0,06-16	4	16
Ванкомицин-устойчивые Е. (п=34)	0,12-8	4	4

Как показано в таблице, соединение 1 оказалось эффективно в ингибировании ципрофлоксацинустойчивых, промежуточно-устойчивых к ванкомицину и даптомицин-устойчивых изолятов МРЗС. Также оно было эффективно в ингибировании ванкомицин-устойчивых Еп1егососси8 Гаесшт и ванкомицинустойчивых Еп1егососси8 Гаесайй

Ингибирование стафилококковых бактерий соединением 1.

Исследовался ингибирующий эффект соединения 1 против 26 метициллин-устойчивых штаммов 81арйу1ососси5 аигеик (МРЗС), 2 штаммов 81ар11у1ососси5 аигеик (11У18А) с промежуточной устойчивостью к гетеро-ванкомицину, 24 штаммов 81ар11у1ососси5 аигеик (У18А) с промежуточной устойчивостью к ванкомицину, 5 ванкомицин-устойчивых штаммов 81ар11у1ососси5 аигеик (УК.8А) и 31 хинолонустойчивых ванкомицин-чувствительных штаммов МРЗС с определенными мутациями ОЕЭЕ. Эти мутации были определены анализом последовательностей ОЕЭЕ (гены дигА, дугВ, дг1А и дг1В). Исследование эффлюкса проводилось методикой с применением резерпина (ВгепетаИ, е1 а1., АпШшсгоЬ. Адеп1§ СйетоШег.. 1998, 42: 2032-2035). Значения МИК были определены с использованием методов разведений в агаре, рекомендованных Институтом Клинических и Лабораторных Стандартов (СЬ81-М100-818), и приведены в таблице ниже

лекарство	МРЗС (26)	НУ13А(2)+У15А(24)+ УЯ5А(5)	Хинолон-устойчивые
МРЗС	(31)
интервал	мик₅₀	МИК₉₀	интервал	МИК₅₀	мик₉₀	интервал	мик_5й	мик₉₀
Соединение1	0,016- 0,06	0, 03	0, Об	0,06-2	1	2	0,5-4		2
С1рго£1ох	0,25-2	1	1	0,05->128	64	>128	16->128	64	>128
Τενοίΐοχ	0,25-1	0,25	0,5	0,5->32	15	32	4->32	15	32
ΜοχχΓίοχ	0,03-0,25	0, Об	0,06	0,06-6	4	8	1-8		8
Уапсо	0, 5-1	1	1	1->32	4	32	0,5-2		1
Техсо	0, 5-1	0,5	1	1-32	8	16	0,25-2	0,5	1
ВарЬо	0,5-1	1	1	0,12-4	1	2	0,12-1	0,25	0,25
линезолид	2-4	4	4	0, 5-2	1	1	0,25-1		1
	0,12-0,5	0, 25	0,5	0,06-0,5	0,25	0,5	0,12-0,5	0, 12	0,25
Зи1пи/с1а1£о	0,25-1	0,5	0,5	0,12-0,5	0, 5	0, 5	0,25-0,5	0, 5	0,5

С1ргоГ1ох - ципрофлоксацин ЬеуоНох - левофлоксацин МохШох - моксифлоксацин Уапсо - ванкомицин

Те1со - тейкопланин

I )ар1о - даптомицин Т1де - тигециклин Олпи/йаЦю - хинупристин/дальфопристин

Соединение 1 эффективно ингибировало метициллин-устойчивые, промежуточно-устойчивые к гетеро-ванкомицину, промежуточно-устойчивые к ванкомицину и ванкомицин-устойчивые изоляты 81ар11у1ососси5 аигеик. Также оно эффективно ингибировало хинолон-устойчивые ванкомицинчувствительные МРЗС. Соединение демонстрировало очень низкие значения МИК (0,0 6-4 мкг/мл) про тив этих штаммов.

Среди 31 хинолон-устойчивого штамма МРЗС 5 штаммов несут мутации в ОВЭВ [СугА (884Ь), Сг1А (880Ρ/Υ), Сг1В (Ь4138, Ε422Κ/Ν, Ό432Ν, Е471К); СугА (884Ь), Сг1А (880Ρ/Υ), СугВ (Н404Р); СугА (884Ь), Сг1А (880Ρ/Υ); СугА (884Ь), Сг1А (880Ρ/Υ, Е84У), Сг1В (Ε422Ό) и СугА (884Ь), Сг1А (880Ρ/Υ, Е84У/К/С или 8108Ν)]. Ассоциированный с соединением 1 эффлюкс был обнаружен среди генотипов, известных как ассоциированных с устойчивым развитием.

Ингибирование грамм-положительных кокки соединением 1.

В период с января по декабрь 2007 г. 12 госпиталей по всей Канаде представили изоляты из пациентов, обслуживаемых в клинических больницах, отделениях экстренной помощи, терапевтических и хи

- 9 018653 рургических отделениях и отделениях интенсивной терапии. Было собрано 7881 изолятов (ΟΛΝ^ΆΚΌ 2007), включая 3473 изолята грамм-положительных кокки. Анализ чувствительности к соединению 1 и левофлоксацину проводили на основе метода микроразведений среды, рекомендованного Институтом Клинических и Лабораторных Стандартов. МИК₅₀ и МИК₉₀ показаны ниже

Организм (количество изолятов)	Соединение 1 МИК_5О/МИК₉о	Левофлоксацин мик₅₀/мик_?0
ΞΡΝ-Α11 (656)	0,015/0,015	0, 5/1
-РепЗ (519)	0,015/0,015	0, 5/1
-Реп! (103)	0,015/0,015	0,5/1
-РепЕ (34)	0,015/0,03	0,5/2
-С1рЕ (29)	0,03/0,12	2/16
ΜΞ3Α (372)	0,03/0,12	0,25/4
В- МРЗС (23)	0,25/0,5	4/8
Г- МРЗС (91)	4/>4	>32/>32
М55Е (32)	0,03/0,5	4/>32
МЕЗЕ (9)	2/2	>32/>32
Е. £~аесаИз (81)	0,12/1	2/>32
*νΐ3Α (12)	1/2	32/>32
*λ/Ε3Α (7)	2	32

8ΡΝ - 8. рпеишошае,

Μ88Ά - метициллин-чувствительные 8. аигеиз,

В-МРЗС - внебольничные,

Г-МРЗС - госпитальные МРЗС,

ΥΙ8Α- 8. аигеиз с промежуточной устойчивостью к ванкомицину, ΥΚ8Α - ванкомицин-устойчивые 8. аигеиз.+средние МИК, Μ88Ε - метициллин-чувствительные 81ар11у1ососсиз ер1йегш1й18, ΜΚ8Ε- метициллин-устойчивые 81ар11у1ососсиз ер1йегш1й18. *Изоляты, полученные по программе Информационного Сообщества по Антбиотикоустойчивости в 81арйу1ососсиз аигеиз (ΝΑΚ8Α), поддерживаемой Национальным Институтом Аллергии и Инфекционных Заболеваний (ΝΙΑΙΏ), контракт Национального Института Здоровья (ΝΙΗ) № Ν01-ΑΙ-95359.

Соединение 1 оказалось более активным, чем левофлоксацин, по параметру ингибирования граммположительных кокки, включая МРЗС, νΐ8Α, νΚ8Α, ΜΚ8Ε, Реп1-8РН ΡеηΚ-8ΡN и ΟίρΚ-8ΡΝ.

Ингибирование НеНсоЬас1ег ру1оп соединением 1.

Тестировали ингибирующий эффект соединения 1, ципрофлоксацина, левофлоксацина, моксифлоксацина и гемифлоксацина на 200 изолятов Η. ру1оп. полученных 10 медицинскими центрами во всех районах Тайваня (2000-2007 гг.). МИК были определены с применением методов разведений в агаре, рекомендованных Институтом Клинических и Лабораторных Стандартов (СБ81-М100-818).

Среди 200 изолятов Η. ру1оп, 2, 6, 29, 2 и 2% оказались устойчивы к амоксициллину (значения МИК >0,5 мкг/мл), кларитромицину (значения МИК >1 мкг/мл, Институт Клинических и Лабораторных Стандартов), метронидазолу (значения МИК >8 мкг/мл), ципрофлоксацину (значения МИК >1 мкг/мл) и левофлоксацину (значения МИК >1 мкг/мл) соответственно. Приведены интервалы МИК, МИК₅₀ и МИК₉₀ для пяти протестированных лекарственных средств на основе хинолона

препарат	МИК (мг/мл)
интервал	МИК₅о	МИК_$0
Ципрофлоксацин	0,12-2	0,25	0,5
Левофлоксацин	0,12-1	0,25	0,5
Моксифлоксацин	0, 12-4	0,25	0,5
Гемифлоксацин	<0,03-0,5	0,06	0,12
Соединение 1	0,06-1	0,06	0,25

Соединение 1 эффективно ингибировало изоляты Η. ру1огг Таблица выше демонстрирует, что соединение 1 оказалось более эффективным ингибитором изолятов Η. ру1огк чем ципрофлоксацин, левофлоксацин и моксифлоксацин, и сравнимо с гемифлоксацином.

Ингибирование антибиотикоустойчивых бактерий соединением 1'.

Тестировали ингибирующий эффект соединения 1', ципрофлоксацина и левофлоксацина на метициллин-устойчивых 81арйу1ососсиз аигеиз и метициллин-устойчивых 81гер1ососснз рпеишошае, при различных концентрациях в интервале от 0,008 до 8 мкг/мл, в различные 10 дней. Изоляты 81арйу1ососсиз аигеиз и 81гер1ососсиз рпеишошае были получены 10 медицинскими центрами во всех районах Тайваня. Значения МИК были определены методом микроразведений в среде. Как показано в таблице ниже, соединение 1' также очень эффективно ингибировало 81арйу1ососсиз аигеиз и 81герЮсосснз рпеишошае.

- 10 018653

Организм	ΜΗΚίο/ΜΜΚ,ο (мкг/мл)
Соединение 1^т	Ципрофлокса цин	Левофлоксацин
МР5А-С1р (К}	ι,ο/ι,ο	€4	-
МКЗА-С1р (3)	о,оз/о,об	0, 5	-
МВЗР-Ьеуо (К)	0,25/1,0	-	>128
ΜΚ5Ρ-Εβνο (5)	0,03/0,06	-	16

МК8Л-С1р (К) - клинический изолят ципрофлоксацин-устойчивого штамма МРЗС. МК8А-С1р (8) - клинический изолят ципрофлоксацин-чувствительного штамма МРЗС. МК8Р-Ьеуо (К) - клинический изолят метициллин-устойчивого левофлоксацин-устойчивого штамма 5. рпетошае.

МК8Р-Реуо (8) - клинический изолят метициллин-устойчивого левофлоксацин-чувствительного штамма 8. рпешошае.

Как показано в таблице выше, соединение 1' эффективно ингибировало метициллин-устойчивые 81ар11у1ососеи5 аитеик и 81гер1ососси5 рпеишошае.

Фармакокинетический анализ.

У каждого пациента, принимавшего соединение 1, отбирались образцы крови на 10 день в час 0 (до введения препарата) и 0,5, 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, 12, 16 и 24 ч (после введения препарата). 5 мл каждого образца переносили в пробирки с гепарином натрия и немедленно помещали в лед. Плазма отделялась центрифугированием при примерно 4°С, переносилась в соответственно обозначенные полипропиленовые контейнеры для образцов (две пробирки по 1-1,5 мл плазмы/на пробирку) и замораживалась при примерно -70°С перед использованием.

До тестирования образцов крови фармакокинетический анализ был валидирован. Данные валидации анализа перечислены в таблице ниже.

Исследуемое вещество	Тип анализа	ъъоо	Точность (% систематического отклонения)	Погрешность (% СТ)
Соединение	в плазме	5,0	-1,8-2,2%	4,3-7,5%

1.1.0(,) - нижний предел количественного анализа.

СУ - коэффициент изменчивости.

Фармакокинетические тесты образцов крови были проведены компанией Сйат1е8 К1ует БаЬога1ог1е5 (\Уогсе51ег. МА). С_тах (пик концентрации соединения 1 в плазме) и АИС_{0-24 ч} (площадь под кривой зависимости концентрация в крови - время от 0 до 24 ч после приема препарата, подсчитанная линейнологарифмическим методом трапеций) были определены, исходя из данных концентрации в плазме, зависимых от времени, с применением не-компартментного подхода (\Ут№п1т версии 4.1, РйагзщЫ СогрогаПоп, СА).

Связывание белков измерялось следующим образом: ультрафильтрованные образцы (УФ) были получены центрифугированием вышеописанной гепаринизированной плазмы человека, содержащей соединение 1, в ультрафильтрационных аппаратах с пороговым значением молекулярного веса 30000 Да при ~3000 об/мин (30 мин, ~37°С). УФ-образцы (0,025 мл) смешивались с 0¹³С.П3-соединением 1 (ОСН3 группа в соединении 1 была замещена на группу 0¹³СО3 для получения 0¹³СП₃-соединения 1) в качестве раствора внутреннего стандарта (~800 нг/мл, 0,050 мл), разводились в 20 раз и анализировались обратнофазной ВЭЖХ на колонке С-18 3,5 мкм. Количественный анализ был получен методом ММР (мониторинг множественных реакций) через определение положительных ионов при ионизации электрораспылением с помощью газового потока высокой скорости. Для количественного определения несвязанного препарата в контрольных образцах плазмы и исследуемых образцах использовались стандарты ультрафильтратов. Было измерено неспецифическое связывание с белками (НСБ=0,0415) и использовалось как поправочный коэффициент для определения конечной % доли связывания с белками. Номинальный диапазон количественного определения анализируемого вещества составил от 50 до 10000 нг/мл. В анализе использовалась аликвота человеческой плазмы объемом 0,400 мл. Концентрации в образцах были определены путем обратного расчисления с применением взвешенной линейной (1/х²) регрессии калибровочной кривой, полученной по добавленным УФ-стандартам. В пределах линейной области % СУ (коэффициент изменчивости) для одной группы образцов для соединения 1 составил от 4,9 до 11,8%.

В таблице ниже показаны значения АИС_0-24, С_тах и связывания с белками при приеме пациентами 500, 750 и 1000 мг соединения 1 в день. Приведенные в таблице значения свободных С_тах и АИС_0-24скорректированы с учетом связывания белков плазмы. Также в таблице приведены отношения свободной С_тах/МИК и свободной АИС/МИК, которые удобны для прогнозирования клинического и микробиологического исхода, равно как и развития бактериальной устойчивости. Соотношение свободной С_тах/МИК выше примерно 8 и соотношение свободной АИС/МИК выше примерно 100 являются предпочтительными для лекарственных препаратов антибиотиков.

- 11 018653

Анти-	Схема	Аис₀.2₄	Связывание	Свободная	Соотношения свободной
Оиотик	лечения	(час	с белками	АиСо-24	АиС₀.₂«/КИК_?о в стационарном
	(прием	мкг/мл)	(¾)	(час*	СОСТОЯНИИ
	орально 1			мкг/мл)	МР1К₉₀ 0,125 0,25 0, 5 0, 75 1
	раз в 24				(мкг/
	часа)				мл)

500 мг

	(ς(24 р.о.)	зе, 6	16	32,4	259	130	65	43	32
Соединение 1	750 мг (ц24 р.о.)	56,4	16	49, 1	393	19$	98	65	49
	1000 мг	74,8	16	62, 9	503	251	126	84	63

(ς24 р.о.)

Анти-	Схема	дис₀._2и	Связывание	Свободная	Соотношения	свободной
биотик	лечения	(час*	с белками	диСо.24	Аис_е.₁₄/мик„ в	стационарном
	(прием	мкг/мл)	(%)	(час*	СОСТОЯНИИ
	орально 1			мкг/мл)	МИКэо 0,125 0,25	0,5	0,75	1
	раз в 24				(мкг/
	часа)				мл)
	500 мг* (д24 р.о.)	5,56	16	4.7	37 19	9	6	5
Соеди- нение 1	750 мг (я24 р.о.)	6, В2	16	5,7	46 23	11	8	6
	1000 мг (ς24 р.о.)	8,20	16	6,9	55 28	14	9	7

Другие примеры осуществления изобретения

Все признаки, раскрытые в данном описании, могут быть скомбинированы любым образом. Альтернативные признаки, служащие той же, эквивалентной или схожей цели, могут заменить каждый признак, раскрытый в данном описании. Следовательно, если прямо не предусмотрено иное, каждый раскрытый признак является только примером из видового ряда эквивалентных или схожих признаков.

Исходя из вышеизложенного описания специалист в данной области техники легко может выявить существенные признаки настоящего изобретения и не выходя за пределы его сущности и объема может внести различные изменения и модификации в изобретение с целью его адаптации к различным услови ям и практическим применениям.

Claims

1. Способ лечения инфекции, вызванной внебольничными метициллин-устойчивыми §1арйу1ососси8 аигеик, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения следующей формулы:

2. Способ по п.1, где соединение представлено

3. Способ по п.2, где соединение представлено

4. Способ по п.3, где соединение представлено

5. Способ по п.1, где соединение является форме соли.

форме соли яблочной кислоты.

форме полугидрата соли яблочной кислоты.

6. Способ по п.5, где соединение представлено

7. Способ по п.6, где соединение представлено

8. Способ по п.7, где соединение представлено

9. Способ по п.1, где соединение является форме соли.

форме соли яблочной кислоты.

форме полугидрата соли яблочной кислоты.

10. Способ по п.9, где соединение представлено в форме соли.

- 12 018653

11. Способ по п.10, где соединение представлено в форме соли яблочной кислоты.

12. Способ по п.11, где соединение представлено в форме полугидрата соли яблочной кислоты.