EA018201B1 - Лиофилизированная антигенная композиция - Google Patents
Лиофилизированная антигенная композиция Download PDFInfo
- Publication number
- EA018201B1 EA018201B1 EA200901434A EA200901434A EA018201B1 EA 018201 B1 EA018201 B1 EA 018201B1 EA 200901434 A EA200901434 A EA 200901434A EA 200901434 A EA200901434 A EA 200901434A EA 018201 B1 EA018201 B1 EA 018201B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antigen
- protein
- specified
- lyophilized
- derivative
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 203
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 201
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 201
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 77
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 54
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 49
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 44
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 38
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 37
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 24
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 22
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 14
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 claims description 13
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 claims description 13
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 9
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 9
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 8
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 7
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 3
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 claims description 3
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 101100100087 Oryza sativa subsp. japonica TPP9 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 claims 1
- 101710127857 Wilms tumor protein Proteins 0.000 claims 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 claims 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 claims 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 abstract description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 abstract 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 abstract 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 92
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 87
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 86
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 53
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 50
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 50
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 49
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 44
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 40
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 28
- 101710147327 Calcineurin B homologous protein 1 Proteins 0.000 description 27
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 27
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 27
- 102100022563 Tubulin polymerization-promoting protein Human genes 0.000 description 27
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 27
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 26
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 25
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 25
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 24
- 101150010065 sad gene Proteins 0.000 description 23
- 102100029905 DNA polymerase epsilon subunit 3 Human genes 0.000 description 21
- 101100322242 Drosophila melanogaster nAChRalpha2 gene Proteins 0.000 description 21
- 101710104359 F protein Proteins 0.000 description 21
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 20
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 16
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 16
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 16
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 16
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 15
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 14
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 13
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 12
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 12
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 11
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 8
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 7
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 6
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- 235000009421 Myristica fragrans Nutrition 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 5
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 5
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 5
- 239000001115 mace Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 4
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 4
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 4
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- -1 phosphorothioate phosphodiesters Chemical class 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 238000002411 thermogravimetry Methods 0.000 description 4
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 3
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 3
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000007498 myristoylation Effects 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 3
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 2
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 102000007066 Prostate-Specific Antigen Human genes 0.000 description 2
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102100035703 Prostatic acid phosphatase Human genes 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 2
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 230000025308 nuclear transport Effects 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108010043671 prostatic acid phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- GYRQGNPJTRTENN-QYLPRCTNSA-N (8r,9s,10r,13s,14s)-10,13-dimethylspiro[2,6,7,8,9,11,12,14,15,16-decahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-17,2'-oxirane]-3-one Chemical compound C([C@H]1[C@H]2[C@@H]([C@]3(CCC(=O)C=C3CC2)C)CC[C@@]11C)CC11CO1 GYRQGNPJTRTENN-QYLPRCTNSA-N 0.000 description 1
- JRYMOPZHXMVHTA-DAGMQNCNSA-N 2-amino-7-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-1h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-one Chemical group C1=CC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O JRYMOPZHXMVHTA-DAGMQNCNSA-N 0.000 description 1
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032814 ATP-dependent zinc metalloprotease YME1L1 Human genes 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100021663 Baculoviral IAP repeat-containing protein 5 Human genes 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101100206103 Caenorhabditis elegans tbb-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100032219 Cathepsin D Human genes 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- 108010072220 Cyclophilin A Proteins 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102100033720 DNA replication licensing factor MCM6 Human genes 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 102100039578 ETS translocation variant 4 Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 240000004272 Eragrostis cilianensis Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 102000006481 HIV Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083930 HIV Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940033332 HIV-1 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 101000869010 Homo sapiens Cathepsin D Proteins 0.000 description 1
- 101001018484 Homo sapiens DNA replication licensing factor MCM6 Proteins 0.000 description 1
- 101000813747 Homo sapiens ETS translocation variant 4 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 238000003109 Karl Fischer titration Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 101800000378 Matrix protein p17 Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241001181114 Neta Species 0.000 description 1
- 241001522010 Nomeus Species 0.000 description 1
- 108010077850 Nuclear Localization Signals Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091081548 Palindromic sequence Proteins 0.000 description 1
- 102100034539 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A Human genes 0.000 description 1
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101800000795 Proadrenomedullin N-20 terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 101000980867 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) Curved DNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 241000555745 Sciuridae Species 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000982319 Shallot virus X Uncharacterized ORF4 protein Proteins 0.000 description 1
- 108010002687 Survivin Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N UNPD130147 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(OC4C(OC(O)C(O)C4O)CO)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N UNPD55895 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 108700025700 Wilms Tumor Genes Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N alpha-maltohexaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 1
- 101150030829 bcc gene Proteins 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 230000002130 immunocastration Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002614 leucines Chemical class 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000008531 maintenance mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940124735 malaria vaccine Drugs 0.000 description 1
- DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N malto-hexaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N malto-pentaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N malto-tetraose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N maltopentaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N maltotetraose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940047091 other immunostimulants in atc Drugs 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- PIRWNASAJNPKHT-SHZATDIYSA-N pamp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)N)C(C)C)C1=CC=CC=C1 PIRWNASAJNPKHT-SHZATDIYSA-N 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 description 1
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001152—Transcription factors, e.g. SOX or c-MYC
- A61K39/001153—Wilms tumor 1 [WT1]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/117—Nucleic acids having immunomodulatory properties, e.g. containing CpG-motifs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55544—Bacterial toxins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/17—Immunomodulatory nucleic acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
В настоящем изобретении предложены лиофилизированные композиции, содержащие антиген и агонист Толл-подобного рецептора (TLR) 9. Такие композиции можно разводить носителем, выбранным из группы носителей в форме частиц, состоящей из липосом, минеральных солей, эмульсий, полимеров и иммуностимулирующих комплексов (ISCOM), с получением иммуногенных композиций для применения в вакцинации. Здесь также предложены способы изготовления иммуногенных композиций из лиофилизированных композиций по изобретению и их применение в иммунизации.
Description
Настоящее изобретение относится к усовершенствованным антигенным композициям и способам их использования для изготовления иммуногенных композиций. В частности, настоящее изобретение относится к лиофилизированным композициям, содержащим антиген и агонист То11-подобного рецептора (ТЕК) 9. Такие композиции можно разводить носителем, выбранным из группы носителей в форме частиц, состоящей из липосом, минеральных солей, эмульсий, полимеров и иммуностимулирующих комплексов (18СОМ), с получением иммуногенных композиций для применения в вакцинации. Способы изготовления иммуногенных композиций из лиофилизированных композиций по изобретению и их применение в иммунизации также составляют часть настоящего изобретения.
Предшествующий уровень техники
Адъюванты иногда используют для улучшения иммунного ответа, вызванного на любой данный антиген. Однако включение адъювантов в вакцину или иммуногенную композицию увеличивает как сложность приготовления компонентов, так и сложность распределения и включения в препарат вакцинной композиции. Приготовление каждого из адъювантных компонентов, а также антигенного компонента должно быть учтено разработчиками. Это особенно верно, поскольку, например, значение рН адъювантных компонентов может сильно отличаться от оптимального значения рН для данного антигена, и эти отличия необходимо тщательно контролировать и уметь предотвратить, например осаждение или потерю желаемых свойств компонентов. Значение рН антигена в воде для инъекций может, например, составлять примерно рН 7 или несколько выше, и при добавлении адъюванта рН может быть столь низким, как рН 6,3. Антиген может, например, не быть стабильным при хранении в течение длительных периодов при таком значении рН.
Затем компоненты должны быть включены в препарат и распределены в форме, которая является настолько стабильной, насколько возможно, поскольку фармацевтические препараты для применения людьми должны быть хорошо охарактеризованы, стабильны и безопасны, прежде чем они могут быть одобрены для продажи. В связи с этим на конечном препарате должны быть проведены исследования долговременной стабильности, чтобы гарантировать, что он удовлетворяет соответствующим критериям. Информацию, полученную в таких длительных исследованиях, используют для подтверждения представления в нормативно-правовые органы, такие как ΡΌΑ (Федеральное управление по лекарственным средствам - орган, ответственный за одобрение лекарственных средств в США), чтобы показать, что препарат пригоден для применения людьми.
Сублимационную сушку или лиофилизацию используют, как правило, для повышения стабильности и, следовательно, срока хранения вещества, включая фармацевтические вещества, такие как антиген, применяемый в вакцинах.
Часто лиофилизированные антигенные композиции предлагаются специалистам в области здравоохранения для разведения разбавителем (например, водой для инъекций |\МР!| или в некоторых случаях жидким адъювантным препаратом) непосредственно перед введением пациенту. В таком случае период времени, в течение которого различные компоненты конечной вакцины поддерживаются в тесном контакте, сводят к минимуму.
Многие факторы должны быть учтены, когда антигены лиофилизируют с образованием лиофилизированных осадков (сухого продукта в результате лиофилизации). Например, антигенность/иммуногенность антигена должна сохраняться в лиофилизированной форме. Антиген не должен образовывать агрегаты или распадаться, когда он находится в лиофилизированной форме. Лиофилизированный осадок должен быть хорошо сформирован и не должен спадаться. Наконец, антиген должен, конечно, находиться в форме, которая быстро растворяется при разведении. Когда раствор для разведения не представляет собой просто ^Р1, например, когда антиген разводят жидким адъювантом, тогда необходимо учитывать влияние компонентов этого раствора на свойства разведенного продукта.
Как упомянуто, адъюванты применяли в течение многих лет для улучшения иммунного ответа на антигенный компонент вакцины. Особенно сильной адъювантной комбинацией является такая, которая содержит 3-деацилированный монофосфориллипид Α (3Э-МРБ) и сапонин, в частности 0821. где очищенная фракция сапонина экстрагирована из коры Ош11а)а каропайа Мопага. Данная комбинация может быть представлена, например, в виде эмульсии масло-в-воде, препарата липосом или т.п.
В предшествующих клинических испытаниях с антигенами, например с малярийными антигенами, такими как К.Т8,8, предложен лиофилизированный антиген, а также предложен отдельный флакон жидкого адъюванта, например препарата масло-в-воде МРЬ и 0821 или препарата липосом МРЬ и 0821, для разведения антигена. Индивидуальные компоненты объединяют с образованием конечной вакцинной композиции непосредственно перед введением.
Некоторые иммуностимулирующие олигонуклеотиды, содержащие неметилированные СрОдинуклеотиды (СрО), являются лигандами ТЬК.9 и идентифицированы как являющиеся адъювантами при введении как системным путем, так и путем введения в слизистую оболочку (\УО 96/02555, ЕР 468520, Эауй е! а1., 1. 1ттипо1., 1998, 160 (2):870-876; МсС1икк1е апй Пау1к, 1. 1ттипо1., 1998, 161 (9):4463-6). СрО представляет собой аббревиатуру для цитозин-гуанозин-динуклеотидных мотивов, присутствующих в ДНК. Исторически наблюдали, что ДНК-фракция вакцины БЦЖ (ВСО) может проявлять
- 1 018201 противоопухолевый эффект. При дальнейших исследованиях было показано, что синтетические олигонуклеотиды, имеющие происхождение от последовательностей гена ВСС, способны индуцировать иммуностимулирующие эффекты (как ίη νίίτο, так и ίη νίνο). Авторы этих исследований пришли к выводу, что некоторые палиндромные последовательности, включая центральный СС-мотив, являются носителями данной активности. Центральная роль СС-мотива в иммуностимуляции была объяснена позже в публикации Кпсд. №11игс 374, р. 546, 1995. Подробный анализ показал, что СС-мотив должен находиться в окружении определенной последовательности и что такие последовательности распространены в бактериальной ДНК, но редки в ДНК позвоночных. Иммуностимулирующая последовательность часто представляет собой пурин, пурин, С, С, пиримидин, пиримидин; где динуклеотидный СС-мотив не метилирован, но известно, что другие неметилированные СрС-последовательности являются иммуностимулирующими, и их можно применять в настоящем изобретении.
Также показано, что иммуностимулирующий олигонуклеотид может сохранять иммунологическую активность, когда гуанозин мутирован до 7-деазагуанозинового мотива (\νϋ 03057822).
Считают, что эти иммуностимулирующие олигонуклеотиды имеют кислый рН в растворе, например ниже рН 7, такой как 6,3, 6,1 или ниже. Это может затруднить их включение в жидкие вакцинные препараты, поскольку они не имеют сходства с другими компонентами препарата. Как обсуждалось, это может вызвать осаждение и/или проблемы долговременной стабильности.
Считают, что эти иммуностимулирующие олигонуклеотиды, вероятно, являются очень эффективными адъювантами, в частности, при использовании в комбинации с существующими адъювантными комбинациями, такими как 3Ь-МРЬ и 0821. Ожидают, что такие адъюванты применимы при заболеваниях, для которых до сих пор было трудно получить эффективные вакцины, таких как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), рак и, возможно, малярия.
Существует ряд различных путей, при которых адъюванты могут быть включены в вакцины, но они должны быть включены таким путем, который не влияет на стабильность ни их самих, ни антигенной композиции, а также таким путем, который не создаст ненужную нагрузку специалистам в области здравоохранения, разводящим вакцину. Простейшим путем для достижения этого должно быть помещение дополнительных компонентов в дополнительные флаконы, так чтобы держать их отдельно до момента непосредственного разведения, сводя, таким образом, к минимуму время, в течение которого компоненты могут влиять друг на друга. Это означает, что антиген и иммуностимулирующий олигонуклеотид каждый должен быть предложен в отдельном флаконе. Затем, если используют дополнительные адъювантные компоненты, такие как МРЬ и 0821, они могут быть представлены в виде жидкой смеси в третьем флаконе. Однако возрастающее число компонентов при возрастающем числе флаконов приводит к повышенным затратам, отходам и, что важно, к возрастанию возможности ошибок во время разведения.
Краткое изложение сущности изобретения
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что, когда лиганд ТЬК9, такой как иммуностимулирующий олигонуклеотид СрС, составляет часть иммуногенной композиции в качестве адъюванта, указанный лиганд ТЬК9 может быть лиофилизирован вместе с антигеном, так что предложен один флакон, содержащий антиген и лиганд ТЬК9 в качестве адъюванта вместе в виде одного лиофилизированного осадка.
Таким образом, в настоящем изобретении предложена лиофилизированная композиция, содержащая антиген и агонист ТЬК9. Указанный агонист ТЬК9 в одном воплощении представляет собой иммуностимулирующий олигонуклеотид, возможно СрС-содержащий олигонуклеотид. В одном аспекте указанный СрС-содержащий олигонуклеотид включает последовательность пурин, пурин, С, С, пиримидин, пиримидин. В другом аспекте указанный иммуностимулирующий олигонуклеотид выбран из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 1; 8ЕО ГО N0: 2; 8ЕО ГО N0: 3; 8ЕО ГО N0: 4 и 8ЕО ГО N0: 5.
Не желая быть связанными с теорией, считают, что предоставление антигена и агониста ТЬК9 вместе дает компонент, который является более стабильным, чем просто добавление ТЬК9 к жидкому препарату МРЬ и 0821.
Настоящее изобретение обеспечивает преимущество в том, что, когда антиген и агонист ТЬК9 разводят νΡΙ, есть возможность предложения только одного флакона с лиофилизированным препаратом в нем. Кроме того, когда антиген и агонист ТКЬ9 должен быть разведен жидким препаратом, таким как жидкий адъювантный препарат, преимущество состоит в возможности предложения только двух флаконов компонентов (а не трех). Это, в свою очередь, экономически эффективно, обеспечивая при этом препарат, подходящий для применения однократно разведенной вакцины.
Кроме того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что совместная лиофилизация СрС с антигенами, которые не будут иметь общий положительный заряд в буфере для разведения, может повысить растворимость этих антигенов при разведении либо водой для инъекций, либо жидким адъювантом. Таким образом, в настоящем изобретении также предложен способ повышения растворимости лиофилизированного антигена при разведении, где антиген не будет иметь суммарный положительный заряд в буфере для разведения, включающий стадию совместной лиофилизации агониста ТЬК9, предпочтительно иммуностимулирующего олигонуклеотида и более предпочтительно СрС-олигонуклеотида, с антигеном. В настоящем изобретении также предложено применение агониста ТЬК9, предпочтительно имму
- 2 018201 ностимулирующего олигонуклеотида и более предпочтительно СрО-олигонуклеотида, для повышения растворимости лиофилизированного, не имеющего положительного заряда антигена при разведении. Под не имеющим положительного заряда подразумевают, что общий заряд белка не является положительным. Белок может содержать как положительные, так и отрицательные заряды, но общий заряд белка является либо нейтральным, либо отрицательным.
В настоящем изобретении также предложен способ изготовления иммуногенной композиции, включающий стадии разведения лиофилизированной композиции, как описано здесь, подходящим носителем. В одном воплощении указанный носитель представляет собой раствор липосом или эмульсию масло-в-воде. Указанный носитель возможно может содержать один или более чем один иммуностимулятор, который может быть выбран из группы, состоящей из агонистов ТЬК.4, антагонистов ТЬК4, сапонинов, агонистов ТЬК7, агонистов ТЬК8, агонистов ТЬК9. В одном воплощении указанный носитель содержит два или более чем два иммуностимулятора, и в одном аспекте они могут представлять собой 3деацилированный МРЬ и 0821.
В настоящем изобретении также предложен способ изготовления лиофилизированной композиции по изобретению, включающий объединение одного или более чем одного желательного антигена, лиганда ТЬК.9 и подходящих эксципиентов и сублимационную сушку полученной смеси.
Подробное описание изобретения
Авторы настоящего изобретения обнаружили, что лиганды ТЬК9, такие как СрО-олигонуклеотиды, могут быть лиофилизированы с интересующим антигеном, не оказывая влияние на антигенность или стабильность этого антигена. Под лигандом ТЬК9 подразумевают соединение, которое взаимодействует с рецептором ТЬК9.
Показано, что члены семейства То11-подобных рецепторов (ТЬК), впервые открытых у дрозофилы, являются образраспознающими рецепторами, где каждый представитель распознает и отвечает на различные компоненты микроорганизмов, чтобы ограничить/ликвидировать инвазивные микроорганизмы. Связывание ассоциированных с патогенами характерных участков молекулы (РАМР) с ТЬК индуцирует продуцирование реакционноспособных промежуточных соединений кислорода и азота, инициацию сети провоспалительных цитокинов и позитивную регуляцию костимулирующих молекул, связывая быстрый характерный ответ с адаптивным иммунитетом. Известно, что многие лиганды ТЬК полезны в качестве адъювантов. Показано, что ТЬК9 отвечает на олигонуклеотидные агонисты. Следовательно, лиганды ТЬК9 по изобретению являются иммуностимулирующими олигонуклеотидами. В одном воплощении изобретения такие лиганды ТЬК9 содержат СрО-мотив. Альтернативные иммуностимулирующие олигонуклеотиды могут содержать модификации нуклеотидов. Например, в \УО 0226757 и \УО 03057822 раскрыты модификации С- и О-части СрО-содержащих иммуностимулирующих олигонуклеотидов.
В одном воплощении лиганды ТЬК9 представляют собой СрО-олигонуклеотиды. В одном аспекте данного воплощения СрО-олигонуклеотид содержит два или более чем два динуклеотидных СрОмотива, разделенных по меньшей мере тремя, возможно по меньшей мере шестью или более нуклеотидами. Олигонуклеотиды по настоящему изобретению обычно представляют собой дезоксинуклеотиды. В одном воплощении межнуклеотидная связь в олигонуклеотиде представляет собой фосфородитиоатную или, возможно, фосфоротиоатную связь, хотя фосфодиэфирные и другие межнуклеотидные связи также могут быть использованы, включая олигонуклеотиды со смешанными межнуклеотидными связями. Способы получения фосфоротиоатных или фосфородитиоатных олигонуклеотидов описаны в И8 5666153, и8 5278302 и \УО 95/26204. Рассмотрен олигонуклеотид, содержащий различные межнуклеотидные связи, например смешанные фосфоротиоатные фосфодиэфиры. Могут быть использованы другие межнуклеотидные связи, которые стабилизируют олигонуклеотид.
Примеры СрО-олигонуклеотидов имеют приведенные ниже последовательности. В одном воплощении эти последовательности содержат модифицированные фосфоротиоатом межнуклеотидные связи.
ОЬЮО 1 (8ЕО ГО N0: 1): ТСС АТО АСО ТТС СТО АСО ТТ (СрО 1826).
ОЬЮО 2 (8ЕО ГО 2): ТСТ ССС АОС ОТО СОС САТ (СрО 1758).
ОЬЮО 3 (81Т) ГО 3): АСС ОАТ ОАС ОТС ОСС ООТ ОАС ООС АСС АСО.
ОЬЮО 4 (8ЕО ГО 4): ТСО ТСО ТТТ ТОТ СОТ ТТТ ОТС ОТТ (СрО 2006).
ОЬЮО 5 (8ЕО ГО 5): ТСС АТО АСО ТТС СТО АТО СТ (СрО 1668).
Альтернативные СрО-олигонуклеотиды могут содержать приведенные выше последовательности, в которых они имеют несущественные делеции или добавления к ним.
СрО-олигонуклеотиды, используемые в настоящем изобретении, могут быть синтезированы любым способом, известным в данной области техники (например, ЕР 468520). Для удобства такие олигонуклеотиды могут быть синтезированы с использованием автоматизированного синтезатора.
В контексте настоящего описания термин антиген предназначен для обозначения иммуногенного компонента, подходящего для индуцирования специфического иммунного ответа и подходящего для включения в вакцину или иммуногенную композицию, например антиген для включения в вакцину против ВИЧ-1, вакцину против рака, малярийную вакцину, ТВ-вакцину или т.п. Подробности о специфичных антигенах приведены ниже.
В одном воплощении антиген имеет изоэлектрическую точку 9,6 или менее. В одном воплощении
- 3 018201 антиген имеет изоэлектрическую точку 9 или менее. В одном воплощении антиген имеет изоэлектрическую точку 8,5 или менее. В одном воплощении антиген имеет изоэлектрическую точку 8,0 или менее. В одном воплощении антиген имеет изоэлектрическую точку 7,5. В одном воплощении антиген имеет изоэлектрическую точку в интервале от 7 до 8.
Суммарный заряд белка при разведении в буфере зависит от количества положительных зарядов против количества отрицательных зарядов в белке, где этот заряд, конечно, будет варьировать в зависимости от рН буфера для разведения. Изоэлектрическая точка представляет собой значение рН, при котором суммарный заряд белка является нейтральным. Если рН буфера для разведения ниже изоэлектрической точки антигена, белок склонен нести суммарный положительный заряд. Если рН буфера для разведения выше изоэлектрической точки антигена, белок склонен нести суммарный отрицательный заряд. Настоящее изобретение особенно полезно при лиофилизации и разведении антигенов, которые имеют такую изоэлектрическую точку, что в предназначенном буфере для разведения белок будет нести суммарный отрицательный заряд. При таких условиях (см. пример 3) присутствие СрС в лиофилизированной композиции может усилить растворимость антигена в буфере для разведения.
В одном воплощении лиофилизированный антиген и агонист ТЬК9 представлены в виде одной дозы, например в одном флаконе.
В одном воплощении лиофилизированный антиген присутствует в количестве, которое обеспечивает концентрацию антигена в интервале от 10 до 250 мкг при разведении.
В одном воплощении агонист ТКЬ9 присутствует в количестве, которое обеспечивает концентрацию в интервале от 10 до 1000 мкг, как, например, 500 мкг, при разведении.
В одном воплощении изобретения антиген, который объединяют в лиофилизированной композиции с лигандом ТЬК.9, может представлять собой противоопухолевый антиген. Следовательно, иммуногенные композиции, изготовленные с использованием лиофилизированной антигенной композиции по изобретению, полезны для иммунотерапевтического лечения злокачественных новообразований. Например, лиофилизированная композиция может быть изготовлена с раковыми антигенами, опухолевыми антигенами или антигенами отторжения опухоли, как описано здесь, такими как белки, экспрессирующиеся, среди прочего, при раке простаты, раке молочной железы, раке прямой и ободочной кишки, раке легкого, раке почки, раке яичника, раке печени и раке головы и шеи.
Антигены рака семенников, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, включают семейство антигенов МАСЕ А: МАСЕ-А1, А2, А3, А4, А5, А6, А7, А8, А9, А10, А11 и А12, также известных как МАСЕ-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12; антигенов МАСЕ В: МАСЕ В1, В2, В3 и В4; антигенов МАСЕ С: МАСЕ-С1 и МАСЕ-С2; антиген ЬАСЕ 1; антиген ЬАСЕ 2 (также известный как ΝΥЕ8О-1) и антиген САСЕ.
Простатоспецифические антигены могут также быть использованы в настоящем изобретении. Примеры простатоспецифических антигенов, которые могут быть гибридными, включают шеститрансмембранный эпителиальный антиген простаты (8ТЕАР), простатоспецифический антиген (Р8А), простатическую кислую фосфатазу (РАР), простатический антиген стволовых клеток (Р8СА), простатоспецифический мембранный антиген (Р8МА) или антиген, известный как простаза (также известный как Р703Р).
В одном воплощении простатический антиген представляет собой Р5018 или его фрагмент. Р5018, также называемый простеин, представляет собой белок из 553 аминокислот. Иммуногенные фрагменты и участки Р5018, содержащие по меньшей мере 20, 50 или 100 непрерывных аминокислот, или фрагменты, содержащие между 20-50 или 50-100 непрерывных аминокислот, могут быть использованы в качестве опухолеассоциированного антигена или производного по настоящему изобретению. В одном воплощении опухолеассоциированный антиген или производное представляет собой антиген Р8108 (раскрытый в АО98/50567) или белок, ассоциированный с раком простаты (см. АО 99/67384). В некоторых воплощениях фрагменты представляют собой аминокислоты 51-553, 34-553 или 55-553 полноразмерного белка Р5018. Они могут экспрессироваться в дрожжевых системах, например, последовательности ДНК, кодирующие такие полипептиды, могут экспрессироваться в дрожжевых системах.
В одном воплощении антиген может включать АТ-1, экспрессируемый геном опухоли Вильмса, или его Ν-концевой фрагмент АТ-1Е, содержащий примерно или приблизительно аминокислоты 1-249, либо состоять из них. АТ1 представляет собой белок, сверхэкспрессия которого исходно обнаружена при раке почки у детей, опухоли Вильмса. Антиген, который может быть использован, включает почти полноразмерный белок в качестве антигена. В одном воплощении антиген может включать белок АТ1А10, который представляет собой рекомбинантный слитый белок из 292 аминокислот, состоящий из 12мерной укороченной последовательности 1а1 и аминокислот № 2-281 последовательности АТ1, или состоять из него.
В одном воплощении изобретения опухолеассоциированный антиген или производное представляет собой антиген рака молочной железы, например Нег-2/пеи, маммаглобин или антиген Β305Ό.
Антиген Нег-2/пеи для применения в настоящем изобретении может содержать полноразмерный внеклеточный домен (ЕСЭ; например, последовательность, содержащую приблизительно аминокислоты 1-645 аминокислотной последовательности Нег-2/пеи) или его фрагменты. Альтернативно или дополни
- 4 018201 тельно, конструкция может содержать по меньшей мере иммуногенный участок полноразмерного внутриклеточного домена: например, приблизительно 580 С-концевых аминокислот последовательности Нег2/пеи.
Одна из конструкций, которая может быть использована в качестве производного опухолеассоциированного антигена по настоящему изобретению, представляет собой слитый белок из ЕСЭ и домена фосфорилирования (ΡΌ) Нег-2/пеи (ЕСО-РЭ). Еще одна конструкция, которая может быть использована, представляет собой слитый белок из ЕСЭ и фрагмента домена фосфорилирования Нег-2/пеи (ЕСЭ-АРЭ). Слитые белки и конструкции Нег-2/пеи, которые описаны, могут иметь происхождение от Нег-2/пеи человека, крысы, мыши или обезьяны/мартышки. Примерные последовательности и конструкции Нег-2/пеи описаны в АО 00/44899.
РКАМЕ (также известный как ЭАСЕ) представляет собой другой антиген, который может быть использован в качестве опухолеассоциированного антигена по настоящему изобретению. Также могут быть использованы слитые белки, как описано здесь, которые содержат антиген РКАМЕ. В частности, слияния антигена РКАМЕ, как описано здесь, и белка Ό в качестве партнера слияния белка или производного, как описано здесь, рассмотрены для применения в настоящем изобретении.
Несколькими группами показано, что антиген РКАМЕ экспрессируется при меланоме и широком ряде опухолей, включая рак легкого, почки и головы и шеи. Интересно, что также оказалось, что он экспрессируется при 40-60% лейкозов, таких как острый лимфоидный лейкоз и острый миелоидный лейкоз, см., например, Ехр Нета!о1. 2000 Эес; 28 (12): 1413-22. У пациентов наблюдали, что сверхэкспрессия РКАМЕ, как оказалось, ассоциирована с более высокой выживаемостью и более низкими частотами рецидивов по сравнению с теми, у которых нет сверхэкспрессии этого белка.
Антиген и его препарат описаны в патенте США № 5830753. РКАМЕ находится в Аннотированной базе данных генов человека Н-1пу ΌΒ под номерами по каталогу: И65011.1, ВС022008.1, АК129783.1, ВС014974.2, СК608334.1, АЕ025440.1, СК591755.1, ВС039731.1, СК623010.1, СК611321.1, СК618501.1, СК604772.1, СК456549.1 и СК620272.1.
В одном аспекте антиген по настоящему изобретению может включать антиген РКАМЕ или его иммуногенный фрагмент, либо состоять из него. Как правило, белок РКАМЕ имеет 509 аминокислот, и в одном воплощении все 509 аминокислот РКАМЕ могут быть включены в антиген.
Колоректальные антигены могут также быть использованы в качестве опухолеассоциированных антигенов по настоящему изобретению. Примеры колоректальных антигенов, которые могут быть использованы, включают: С1585Р (ММР 11) и С1491 (белок, связывающий энхансер Е1А), СА8В618 (как описано в АО 00/53748); СА8В7439 (как описано в АО 01/62778) и С1584 (Сир1о).
Другие опухолеассоциированные антигены, полезные в контексте настоящего изобретения, включают: Р1и-1, 1. Вю1. Сйеш. 274 (22), 15633-15645, 1999, НА8Н-1, НА8Н-2, Спрю (8а1отоп е! а1. Вюе88ау8 199, 21 61-70, патент США 5654140), Спрйп. патент США 5981215. Кроме того, антигены, особенно релевантные для вакцин при терапии рака, также включают тирозиназу и сурвивин.
Пептиды, имеющие происхождение от муцина, такие как Мис1, см., например, ϋδ 5744144, И8 5827666, АО 8805054, ϋδ 4963484. Конкретно рассмотрены пептиды, имеющие происхождение от Мис1, которые содержат по меньшей мере одну повторяющуюся единицу пептида Мис1, предпочтительно по меньшей мере два таких повтора, и которые распознаются антителом 8М3 (ϋδ 6054438). Другие пептиды, имеющие происхождение от муцина, включают пептид из Мис5.
Другие опухолеспецифические антигены подходят для применения в лиофилизированной композиции по настоящему изобретению и включают, но не ограничены ими, опухолеспецифические ганглиозиды, такие как СМ2 и СМ3, или их конъюгаты с белками-носителями; либо указанный антиген может представлять собой аутологичный пептидный гормон, такой как полноразмерный рилизинг-фактор гормона гонадотропина (СпКН, АО 95/20600), короткий пептид длиной 10 аминокислот, полезный в лечении многих видов рака или при иммунокастрации.
Изобретение также распространяется на применение вышеописанных антигенов, иммуногенных производных и иммуногенных фрагментов, а также слитых белков, содержащих их, в аспектах настоящего изобретения.
Производные, фрагменты и слитые белки
Опухолеассоциированные антигены по настоящему изобретению могут быть использованы в форме их производных или фрагментов, а не встречающегося в природе антигена.
Термин производное, как он использован здесь, относится к антигену, который модифицирован относительно его встречающейся в природе формы. Производное может включать мутацию, например точечную мутацию. В одном примере производное может изменять свойства белка, например, благодаря улучшению экспрессии в прокариотических системах или благодаря удалению нежелательной активности, например ферментативной активности. Производные по настоящему изобретению в достаточной степени подобны нативным антигенам в сохранении антигенных свойств и сохранении способности обеспечивать иммунный ответ, который должен быть вызван против природного антигена. Вызывает ли данное производное такой иммунный ответ, можно измерить с помощью подходящего иммунологического анализа, такого как твердофазный иммуноферментный анализ (ЕЬКА) или проточная цитометрия.
- 5 018201
В одном воплощении настоящего изобретения производное опухолеассоциированного антигена по настоящему изобретению представляет собой слитый белок, содержащий опухолеассоциированный антиген, связанный с гетерологичным белком-партнером слияния. Под термином гетерологичный в отношении опухолеассоциированного антигена подразумевают белок или полипептидную последовательность, которые не будут связываться с опухолеассоциированным антигеном в природе, т.е. они связываются с опухолеассоциированным антигеном в результате намеренного вмешательства человека.
Антиген и гетерологичный белок-партнер слияния могут быть конъюгированы химическим путем либо могут экспрессироваться в виде рекомбинантных слитых белков. В одном воплощении слитый белок по настоящему изобретению может обеспечить получение повышенных уровней слитого белка, продуцируемого в экспрессионной системе, по сравнению с неслитым белком. Таким образом, белокпартнер слияния может способствовать обеспечению Т-хелперных эпитопов, например Т-хелперных эпитопов, распознаваемых человеком (т.е. белок-партнер слияния действует как иммунологический партнер слияния). Партнер слияния может способствовать экспрессии белка при более высоких выходах, чем нативного рекомбинантного белка (т.е. белок-партнер слияния действует как усилитель экспрессии). В одном воплощении белок-партнер слияния может действовать и как иммунологический партнер слияния, и как партнер, усиливающий экспрессию.
Белки-партнеры слияния могут иметь происхождение, например, от белка Ό. Белок Ό представляет собой липопротеин (белок 42 кДа, связывающий иммуноглобулин Ό, экспонированный на поверхности грамотрицательной бактерии НаешорШик тПиепхае). Этот белок синтезируется в виде предшественника с сигнальной последовательностью из 18 аминокислотных остатков, содержащей консенсуспоследовательность для бактериального липопротеина (см. АО 91/18926). Нативный белокпредшественник белка Ό подвергается процессингу во время секреции, и сигнальная последовательность отщепляется. Цистеин (Сук) процессированного белка Ό (в положении 19 в молекуле предшественника) становится Ν-концевым остатком процессированного белка и параллельно модифицируется путем ковалентного присоединения жирных кислот, как связанных сложноэфирной связью, так и связанных амидной связью. Жирные кислоты, связанные с амино-концевым остатком цистеина, затем функционируют в качестве мембранного якоря.
В одном воплощении производное опухолеассоциированного антигена для применения в настоящем изобретении может включать белок Ό или его производное в качестве белка-партнера слияния.
Белок Ό или его производное, как описано здесь, может содержать, например, первую или Νконцевую треть процессированного белка Ό или приблизительно или примерно первую или Ν-концевую треть процессированного белка Ό. В одном воплощении белок Ό или его производное может включать первые или Ν-концевые 100-115 аминокислот процессированного белка Ό; либо первые или Ν-концевые 109 аминокислот процессированного белка Ό. В одном воплощении аминокислоты 2-Ьук и 3-Ьеи нативного процессированного белка Ό могут быть заменены аминокислотами 2-Акр и 3-Рго.
В одном воплощении белок Ό или его производное может дополнительно включать 18- или 19аминокислотную сигнальную последовательность белка-предшественника Ό. В одном воплощении белок-партнер слияния, происходящий из белка Ό, содержит аминокислоты 20-127 белка-предшественника Ό или состоит из них. В одном воплощении настоящего изобретения две аминокислоты 21-Ьук и 22-Ьеи белка-предшественника Ό, который является белком-партнером слияния, могут быть заменены аминокислотами 21-Акр и 22-Рго.
Белок-партнер слияния, представляющий собой белок Ό, как описано здесь, может дополнительно или альтернативно содержать делеции, замены или вставки в пределах аминокислотной последовательности по сравнению с предшественником дикого типа или процессированной последовательностью белка Ό. В одном воплощении 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более аминокислот могут быть вставлены, заменены или делетированы. Аминокислоты могут быть заменены консервативными заменами, как определено здесь, либо могут быть использованы другие аминокислоты.
В одном воплощении белок-партнер слияния может содержать последовательность белка Ό, как показано в 8Εβ ΙΌ ΝΟ: 1, или состоять из нее. В одном воплощении белок-партнер слияния может содержать аминокислоты, подчеркнутые на фиг. 1, т.е. аминокислотные остатки 20-127 включительно из 8Εβ ΙΌ ΝΟ: 12, или состоять из них. В одном воплощении антиген для применения в настоящем изобретении может представлять собой белок-Э-МАСЕ-3, в котором антиген МАСЕ-3 состоит из аминокислот 3-314 МАСЕ-3, и в котором белок-партнер слияния, представляющий собой белок Ό, состоит из аминокислотной последовательности, показанной на фиг. 1.
В другом воплощении настоящего изобретения белки-партнеры слияния могут быть выбраны из Ν81 или Ьу1А, либо их производных, как описано ниже.
Ν81 представляет собой неструктурный белок из вируса гриппа. В одном воплощении производное опухолеассоциированного антигена по настоящему изобретению может включать Ν81 или его производное в качестве белка-партнера слияния. Ν81 или его производное может содержать его Ν-концевые аминокислоты 1-81.
Ьу1А выделен из 81гер1ососеик рпеишошае. С-концевой домен белка Ьу1А ответственен за сродство к холину или к некоторым аналогам холина, таким как ЭЕАЕ. В одном воплощении производное опухо
- 6 018201 леассоциированного антигена по настоящему изобретению может включать Ьу!А или его производное в качестве белка-партнера слияния. Ьу!А или его производное может включать повторяющийся участок молекулы Ьу1А, находящийся на С-конце, начиная с остатка 178. В одном воплощении Ьу1А или его производное содержит остатки 188-305 С-Ьу1А.
Иммуногенные полипептиды для применения в настоящем изобретении обычно представляют собой рекомбинантные белки, продуцируемые, например, путем экспрессии в гетерологичном хозяине, таком как бактериальный хозяин, в дрожжах или культивируемых клетках млекопитающих.
Термин производное опухолеассоциированного антигена означает полипептид, который частично или полностью содержит последовательности, которые встречаются в природе в опухолеассоциированном антигене или которые обладают высокой степенью идентичности последовательности с ними (например, более чем 95% идентичности последовательности на отрезке по меньшей мере из 10 аминокислот, например по меньшей мере 20 аминокислот). Производные также включают последовательности, имеющие консервативные замены. Консервативные замены хорошо известны и в общем представлены в виде матриц замен по умолчанию в компьютерных программах выравнивания последовательностей.
В общем смысле замены в пределах приведенных ниже групп представляют собой консервативные замены, а замены между приведенными ниже группами считают неконсервативными. Эти группы представляют собой:
1) аспартат/аспарагин/глутамат/глутамин;
2) серин/треонин;
3) лизин/аргинин;
4) фенилаланин/тирозин/триптофан;
5) лейцин/изолейцин/валин/метионин;
6) глицин/аланин.
Производные по настоящему изобретению могут также включать химически обработанные последовательности, такие как обработанные альдегидом (таким как формальдегид или глутаральдегид), карбоксиметилированием, карбоксиамидированием, ацилированием и другими рутинными химическими обработками. Конструкции по настоящему изобретению, имеющие дериватизированные остатки свободного тиола, могут быть также использованы в настоящем изобретении. В частности, могут быть использованы карбоксиамидированные или карбоксиметилированные тиоловые производные.
В одном воплощении настоящего изобретения производное опухолеассоциированного антигена может представлять собой антиген МАСЕ, как описано здесь, имеющий дериватизированные остатки свободного тиола. Эти дериватизированные остатки свободного тиола могут представлять собой карбоксамидные или карбоксиметилированные производные.
Производное опухолеассоциированного антигена по настоящему изобретению может альтернативно включать конструкцию, содержащую более чем один опухолеассоциированный антиген. В одном воплощении настоящего изобретения производное опухолеассоциированного антигена может включать два или более чем два опухолеассоциированных антигена.
Термин фрагмент, как он использован здесь, относится к фрагментам опухолеассоциированного антигена или производного этого антигена, которые содержат по меньшей мере один эпитоп, например СТЬ эпитоп, как правило, пептид по меньшей мере из 8 аминокислот. Фрагменты по меньшей мере из 8, например 8-10 аминокислот или вплоть до 20, 50, 60, 70, 100, 150 или 200 аминокислот в длину считают включенными в объем изобретения настолько, насколько этот фрагмент проявляет антигенность, т.е. основные эпитопы (например СТЬ эпитопы) сохранены этим фрагментом, и этот фрагмент способен к индукции иммунного ответа, который перекрестно реагирует с природным опухолеассоциированным антигеном. Примерные фрагменты могут составлять 8-10, 10-20, 20-50, 50-60, 60-70, 70-100, 100-150, 150-200 аминокислотных остатков в длину (включая любое значение в этих интервалах).
В одном воплощении изобретения лиофилизированную композицию, содержащую антиген Нег 2 пей и СрС-олигонуклеотид, разводят носителем, представляющим собой эмульсию липосом или масло-вводе, содержащую 3Ό-ΜΡΕ и 0821. Такие разведенные препараты продуцируют как гуморальный, так и клеточно-опосредованный иммунный ответ.
Лиофилизированные композиции по изобретению могут содержать антигены, ассоциированные с механизмами поддержания опухоли (например, ангиогенезом, опухолевой инвазией), например, Не 2, УЕСЕ (фактор роста эндотелия сосудов).
В другом аспекте изобретения антиген в лиофилизированной композиции по изобретению представляет собой антиген, выбранный из антигенов, происходящих из ВИЧ, в частности антигенов, происходящих из ВИЧ-1. В приведенных ниже абзацах описаны антигены, которые могут иметь происхождение из ВИЧ-1.
Белки Та! и №Г ВИЧ представляют собой ранние белки, т.е. они экспрессируются на ранней стадии инфекции и в отсутствие структурного белка.
Ген №Г кодирует ранний вспомогательный белок ВИЧ, который, как показано, обладает несколькими активностями. Например, известно, что белок №Г вызывает удаление СЭ4. рецептора ВИЧ, с клеточной поверхности, хотя биологическое значение этой функции является спорным. Кроме того, №Г
- 7 018201 взаимодействует с биохимическим путем передачи сигнала Т-клетками и индуцирует активное состояние, которое, в свою очередь, может стимулировать более эффективную экспрессию гена. Некоторые изоляты ВИЧ имеют мутации или делеции в этой области, в результате которых они не кодируют функциональный белок, и их репликация и патогенез ίη νίνο сильно нарушены.
Ген Сад транслируется с полноразмерной РНК с образованием полипротеина-предшественника, который впоследствии расщепляется на 3-5 капсидных белков; матриксный белок р17, капсидный белок р24 и белок, связывающий нуклеиновую кислоту (БипбатеШа1 Упо1оду, Р1е1б8 ΒΝ, Кшре ΌΜ апб НоМеу Μ, 1996, 2. Г1е1б8 У1го1оду, νοί. 2, 1996).
Ген Сад образует белок-предшественник Сад, 55 килодальтон (кД), также называемый р55, который экспрессируется с несплайсированной вирусной мРНК. В процессе трансляции Ν-конец р55 подвергается миристоилированию, запускающему его связывание с цитоплазматической стороной клеточных мембран. Связанный с мембраной полипротеин Сад рекрутирует две копии вирусной геномной РНК наряду с другими вирусными и клеточными белками, которые запускают активную репликацию вирусной частицы в результате проникновения в клетку с поверхности инфицированной клетки. После этой активной репликации р55 расщепляется протеазой, кодируемой вирусом (продуктом гена Ро1), в процессе созревания вируса в четыре белка меньшего размера, обозначенные МА (матриксный[р17]), СА (капсидный[р24]), NС (нуклеокапсидный [р9]) и р6.
В дополнение к 3 основным белкам Сад (р17, р24 и р9) все предшественники Сад содержат несколько других областей, которые отщепляются и остаются в вирионе в виде пептидов различных размеров. Эти белки играют различные роли, например белок р2 играет предполагаемую роль в регуляции активности протеазы и вносит вклад в правильный тайминг протеолитического процессинга.
Полипептид МА происходит из Ν-концевого миристоилированного конца р55. Большинство молекул МА остается присоединенным к внутренней поверхности липидного бислоя вириона, стабилизируя частицу. Подгруппа МА рекрутируется внутрь более глубоких слоев вириона, где она становится частью комплекса, который сопровождает вирусную ДНК в ядро. Эти молекулы МА способствуют ядерному транспорту вирусного генома, поскольку сигнал ядерной локализации на МА распознается клеточным механизмом ядерного транспорта. Этот феномен дает возможность ВИЧ инфицировать неделящиеся клетки, что является необычным свойством для ретровируса.
Белок р24 (СА) образует конический кор вирусной частицы. Продемонстрировано, что циклофиллин А взаимодействует с областью р24 р55, что приводит к его включению в частицы ВИЧ. Взаимодействие между Сад и циклофиллином А существенно, поскольку прерывание этого взаимодействия циклоспорином ингибирует вирусную репликацию.
Область NС Сад ответственна за специфичное распознавание так называемого сигнала упаковки ВИЧ. Сигнал упаковки состоит из четырех структур типа стебель-петля, локализованных вблизи 5'конца вирусной РНК, и достаточен для того, чтобы опосредовать включение гетерологичной РНК в вирионы ВИЧ-1. NС связывается с сигналом упаковки посредством взаимодействий, опосредованных двумя мотивами типа цинковые пальцы. NС также способствует обратной транскрипции.
Область полипептида р6 опосредует взаимодействия между р55 Сад и вспомогательным белком Ург, приводя к включению Ург в собирающиеся вирионы. Область р6 также содержит так называемый поздний домен, который требуется для эффективного высвобождения активно реплицирующихся вирионов из инфицированной клетки.
Ген Ро1 кодирует три белка, обладающих активностями, необходимыми вирусу на ранней стадии инфекции, обратную транскриптазу КТ, протеазу и белок интегразу, необходимый для интеграции вирусной ДНК в клеточную ДНК. Первичный продукт Ро1 расщепляется протеазой вириона с образованием амино-концевого пептида КТ, который содержит активности, необходимые для синтеза ДНК (РНК- и ДНК-направленную ДНК полимеразу, рибонуклеазу Н), и карбокси-концевого белка интегразы. КТ ВИЧ представляет собой гетеродимер полноразмерной КТ (р66) и продукта расщепления (р51), у которого отсутствует карбокси-концевой домен РНКазы Н.
КТ представляет собой один из наиболее высоко консервативных белков, кодируемых ретровирусным геномом. Двумя основными активностями КТ являются ДНК Ро1 и рибонуклеаза Н. ДНК Ро1 активность КТ использует ДНК и РНК в качестве матриц взаимозаменяемо и, подобно всем известным ДНКполимеразам, неспособна инициировать синтез ДНК бе ηονο, а требует уже существующей молекулы, которая служит в качестве праймера (РНК).
Активность РНКазы Н, присущая всем белкам КТ, при ранней репликации играет незаменимую роль по удалению РНК-генома в процессе синтеза ДНК. Она селективно разрушает РНК из всех гибридных молекул РНК-ДНК. Структурно полимераза и РНКаза Н занимают отдельные, неперекрывающиеся домены в пределах Ро1, охватывающие две трети с амино-конца Ро1.
Каталитическая субъединица р66 уложена в 5 отдельных субдоменов. Амино-концевые 23 аминокислоты из них имеют участок с активностью КТ. Карбокси-концевые аминокислоты от них представляют собой домен РНКазы Н.
После инфицирования клетки-хозяина ретровирусный РНК-геном копируется в линейную двунитевую ДНК обратной транскриптазой, которая присутствует в инфицирующей частице. Интеграза (обзор
- 8 018201 сделан 8ка1ка АМ '99 Αάν ίη У1ги§ Век 52, 271-273) распознает концы вирусной ДНК, обрезает их и сопровождает вирусную ДНК к сайту хромосомы хозяина для катализа интеграции. Многие сайты в ДНК хозяина могут быть мишенями интеграции. Хотя интеграза достаточна для катализа интеграции ίη νίΐτο, она является не единственным белком, связанным с ДНК ίη νίνο; большой комплекс белок-вирусная ДНК, выделенный из инфицированных клеток, обозначен как прединтеграционный комплекс. Это способствует приобретению генов клетки-хозяина потомством вирусных геномов.
Интеграза состоит из 3 отдельных доменов: Ν-концевого домена, каталитического кора и Сконцевого домена. Каталитический коровый домен содержит все необходимое для химии полинуклеотидильного переноса.
Антигены, происходящие из ВИЧ-1, для применения в изобретении могут быть, таким образом, выбраны, например, из Сад (например, полноразмерного Сад), р17 (участка Сад), р24 (другого участка Сад), р41, р40, Ро1 (например, полноразмерного Ρο1), ВТ (участка Ρο1), р51 (участка ВТ), интегразы (участка Ρο1), протеазы (участка Ρο1), Εην, др120, др140 или др160, др41, №£, У1Р, Ург, Ури, Βον, Та1, а также их иммуногенных производных и их иммуногенных фрагментов, в частности, Εην, Сад, ΝοΓ и Ρο1 и их иммуногенных производных и их иммуногенных фрагментов, включая р17, р24, ВТ и интегразу. ВИЧвакцины могут содержать полипептиды и/или полинуклеотиды, кодирующие полипептиды, соответствующие множественным различным антигенам ВИЧ, например, 2 или 3 либо 4 или более антигенов ВИЧ, которые могут быть выбраны из приведенного выше перечня. Несколько различных антигенов могут, например, быть включены в единый слитый белок. Более чем один первый иммуногенный полипептид и/или более чем один второй иммуногенный полипептид, каждый из которых представляет собой антиген ВИЧ, либо слияние более чем одного антигена могут быть использованы.
Например, антиген может включать Сад или его иммуногенное производное или иммуногенный фрагмент, слитый с ВТ или его иммуногенным производным или иммуногенным фрагментом, слитым с №£ или его иммуногенным производным или иммуногенным фрагментом, где участок Сад слитого белка присутствует на 5'-конце полипептида.
Последовательность Сад, применяемая в соответствии с изобретением, может исключать последовательность, кодирующую полипептид р6 Сад. Конкретный пример последовательности Сад для применения в изобретении включает кодирующие последовательности р17 и/или р24.
Последовательность ВТ может содержать мутацию, для того чтобы, по существу, инактивировать какую-либо активность обратной транскриптазы (см. \УО 03/025003).
Г ен ВТ представляет собой компонент гена ро1 большего размера в геноме ВИЧ. Следует понимать, что последовательность ВТ, применяемая в соответствии с изобретением, может присутствовать в контексте Ρο1 или фрагмента Ρο1, соответствующего по меньшей мере ВТ. Такие фрагменты Ρο1 сохраняют основные СТЬ эпитопы Ρο1. В одном конкретном примере ВТ включает по меньшей мере только фрагмент р51 или только фрагмент р66 ВТ.
Компонент ВТ слитого белка или композиции согласно изобретению возможно содержит мутацию для удаления сайта, который служит в качестве внутреннего сайта инициации в прокариотических экспрессионных системах.
Возможно последовательность ΝοΓ для применения в изобретении укорочена для удаления последовательности, кодирующей Ν-концевую область, т.е. удаления от 30 до 85 аминокислот, например от 60 до 85 аминокислот, в частности Ν-концевых 65 аминокислот (на последнее укорочение здесь ссылаются как на ΙγΝοΓ). Альтернативно или дополнительно, ΝοΓ может быть модифицирована для удаления сайта миристоилирования. Например, сайт миристоилирования С1у 2 может быть удален путем делеции или замены. Альтернативно или дополнительно, №£ может быть модифицирована для изменения дилейцинового мотива Ьеи 174 и Ьеи 175 путем делеции или замены одного или обоих лейцинов. Важность дилейцинового мотива в негативной регуляции ί.Ό4 описана, например, в ΒΐΌκηηΙιηη Ρ.Α. е1 а1. (1998), СиггеШ Вю1оду, 8 (22): 1235-8.
Антиген Εην может присутствовать в его полноразмерном виде как др160, либо в укороченном виде как др140 или короче (возможно с подходящей мутацией для разрушения мотива сайта расщепления между др120 и др41). Антиген Εην может также присутствовать в его встречающейся в природе процессированной форме в виде др120 и др41. Эти два производных др160 могут быть использованы индивидуально или вместе в виде комбинации. Вышеупомянутые антигены Εην могут дополнительно проявлять делеции (в частности, вариабельных петель) и укорочения. Фрагменты Εην также могут быть использованы.
Примерная последовательность др120 показана в 8ΕΟ ΙΌ ΝΟ: 6. Примерная последовательность др140 показана в 8ΕΟ ΙΌ ΝΟ: 7.
Иммуногенные полипептиды для применения в лиофилизированной композиции согласно изобретению могут включать Сад, Ρο1, Εην и ΝοΓ, где присутствует по меньшей мере 75%, либо по меньшей мере 90%, либо по меньшей мере 95%, например 96%, СТЬ эпитопов этих нативных антигенов.
В лиофилизированных композициях, содержащих иммуногенные полипептиды, которые включают р17/р24 Сад, р66 ВТ и укороченный ΝοΓ, как определено выше, подходящим образом присутствует 96% СТЬ эпитопов нативных антигенов Сад, Ρο1 и ΝοΓ.
- 9 018201
В одном воплощении изобретения предложена лиофилизированная композиция, содержащая лиганд ТЬВ9 и иммуногенный полипептид, содержащий р17, р24 Сад, р66 ВТ, укороченный ΝοΓ (без нуклеотидов, кодирующих концевые аминокислоты 1-85 - ϊγΝθΓ) в порядке Сад, ВТ, ΝθΓ.
Конкретные полинуклеотидные конструкции и соответствующие полипептидные антигены для применения в лиофилизированных композициях согласно изобретению включают:
1) р17, р24 (оптимизированный по кодонам)Сад - р66 ВТ (оптимизированный по кодонам) - укороченный ΝθΓ;
2) укороченный ΝθΓ - р66 ВТ (оптимизированный по кодонам) - р17, р24 (оптимизированный по кодонам) Сад;
3) укороченный ΝθΓ - р17, р24 (оптимизированный по кодонам) Сад - р66 ВТ (оптимизированный по кодонам);
4) р66 ВТ (оптимизированный по кодонам) - р17, р24 (оптимизированный по кодонам) Сад - укороченный ΝθΓ;
5) р66 ВТ (оптимизированный по кодонам) - укороченный ΝθΓ - р17, р24 (оптимизированный по кодонам) Сад;
6) р17, р24 (оптимизированный по кодонам) Сад - укороченный ΝθΓ - р66 ВТ (оптимизированный по кодонам).
Примерный слитый белок представляет собой слияние Сад, ВТ и ΝθΓ, в частности в порядке СадВТ-ΝθΓ (см., например, 8ЕЦ ΙΌ ΝΟ: 8 или 8ЕС ΙΌ ΝΟ: 9). Другой примерный слитый белок представляет собой слияние р17, р24, ВТ и ΝθΓ, в частности в порядке ρ24-ВТ-NеΓ-ρ17. Этот слитый белок назван Р4 и описан в \УО 2006/013106. Р4 является предпочтительным примером антигена ВИЧ, который может находиться в лиофилизированной композиции по изобретению. Нуклеотидная последовательность Р4 приведена в 8ЕС ΙΌ ΝΟ: 10, где последовательность р24 выделена жирным шрифтом, последовательность ΝθΓ подчеркнута, а прямоугольники представляют собой нуклеотиды, введенные генетическим конструированием. Аминокислотная последовательность Р4 приведена в 8ЕС ΙΌ ΝΟ: 11, где последовательность Р24: аминокислоты 1-232 (жирным шрифтом);
последовательность ВТ: аминокислоты 235-795;
последовательность ΝθΓ: аминокислоты 798-1002;
последовательность Р17: аминокислоты 1005-1136; прямоугольники: аминокислоты, введенные генетическим конструированием;
К (Лизин): вместо триптофана (V). Мутация введена для удаления активности фермента.
В другом воплощении лиофилизированная композиция содержит Сад, ВТ, интегразу и ΝθΓ, в частности в порядке Сад-ВТ-интергаза-ΝθΓ (см., например, ЗЕЦ ΙΌ ΝΟ: 11).
В других воплощениях антиген ВИЧ может представлять собой слитый полипептид, который содержит ΝθΓ, или его иммуногенное производное, или его иммуногенный фрагмент и р17 Сад и/или р24 Сад, или их иммуногенные производные, или их иммуногенные фрагменты, где, когда присутствуют оба р17 и р24 Сад, между ними находится по меньшей мере один ВИЧ или его иммуногенный фрагмент.
Например, ΝθΓ подходящим образом представляет собой полноразмерный ΝθΓ.
Например, р17 Сад и р24 Сад подходящим образом представляют собой полноразмерные р17 и р24, соответственно.
В одном воплощении лиофилизированная композиция содержит иммуногенный полипептид, включающий оба р17 и р24 Сад или их иммуногенные фрагменты. В такой конструкции компонент р24 Сад и компонент р17 Сад разделены по меньшей мере одним дополнительным антигеном ВИЧ или его иммуногенным фрагментом, таким как ΝθΓ и/или ВТ или их иммуногенные производные или их иммуногенные фрагменты. Дополнительные подробности см. в νΟ 2006/013106.
В слитых белках, которые содержат р24 и ВТ, может быть предпочтительным, чтобы р24 предшествовал ВТ в конструкции, поскольку, когда антигены экспрессируются отдельно в Е.со1г, наблюдают лучшую экспрессию р24, чем ВТ.
Некоторые конструкции для применения в лиофилизированных композициях согласно изобретению, включают приведенные ниже:
1. р24-ВТ-NеΓ-р17;
2. р24-ВТ*-NеΓ-р17;
3. р24-р51ВТ-№Р-р17;
4. р24-р51ВТ*-№Р-р17;
5. р17-р51ВТ-Ке£;
6. р17-р51ВТ*-NеΓ;
7. №Р-р17;
8. №Р-р17 с линкером;
9. р17-№Е
10. р17-NеΓ с линкером.
* представляет собой мутацию ВТ метионин592 на лизин.
В другом аспекте в настоящем изобретении предложена лиофилизированная композиция, содержа
- 10 018201 щая слитый белок антигенов ВИЧ, содержащий по меньшей мере четыре антигена ВИЧ или их иммуногенных фрагмента, где эти четыре антигена или фрагмента представляют собой №Г, Ро1 и Сад или их производные. Предпочтительно Сад присутствует в виде двух отдельных компонентов, которые разделены по меньшей мере одним другим антигеном в слитом белке. Предпочтительно №Г представляет собой полноразмерный №Г. Предпочтительно Ро1 представляет собой р66 или ρ51ΒΤ. Предпочтительно Сад представляет собой р17 и р24 Сад. Другие предпочтительные признаки и свойства антигенных компонентов слитого белка в данном аспекте изобретения являются такими, как описано ниже.
Предпочтительными воплощениями данного аспекта являются четырехкомпонентные слияния, как уже перечислено выше.
1. ρ24-ΚΤ-№Γ-ρ17;
2. ρ24-ΒΤ*-№Γ-ρ17;
3. ρ24-ρ51ΒΤ-Νβί-ρ17;
4. ρ24-ρ51ΒΤ*-№Γ-ρ17.
Иммуногенные полипептиды, применяемые в лиофилизированной композиции по настоящему изобретению, могут иметь линкерные последовательности, присутствующие между последовательностями, соответствующими конкретным антигенам, таким как Сад, ВТ и ΝοΓ. Такие линкерные последовательности могут составлять, например, вплоть до 20 аминокислот в длину. В конкретном примере они могут составлять от 1 до 10 аминокислот или от 1 до 6 аминокислот, например 4-6 аминокислот.
Дополнительное описание таких подходящих антигенов ВИЧ можно найти в νθ 03/025003.
Антигены ВИЧ для применения в настоящем изобретении могут иметь происхождение от любой филогенетической ветви ВИЧ, например филогенетической ветви А, филогенетической ветви В или филогенетической ветви С. Например, антигены ВИЧ могут иметь происхождение от филогенетической ветви А или В, в частности В.
В одном конкретном воплощении изобретения лиофилизированная композиция содержит более чем один иммуногенный полипептид. В одном аспекте данного воплощения первый иммуногенный полипептид представляет собой полипептид, включающий Сад и/или Ро1 и/или №Г или фрагмент или производное любого из них (например, ρ24-ΒΤ-№Γ-ρ17). В одном конкретном аспекте данного воплощения изобретения второй иммуногенный полипептид представляет собой полипептид, включающий Сад и/или Ро1 и/или ΝοΓ или фрагмент или производное любого из них (например, Сад-ΒΤ-ΝβΓ или Сад-ΒΤинтеграза-ЫеГ).
Таким образом, в одном конкретном воплощении полипептид, включающий Саρ и/или Ро1 и/или №Г или фрагмент или производное любого из них (например, ρ24-ΒΤ-№Γ-ρ17), представляет собой первый иммуногенный полипептид, а полипептид, включающий Сад и/или Ро1 и/или №Г или фрагмент или производное любого из них (например, Сад-КЛ-№Г или Сад-ВΤ-интеграза-NеΓ), представляет собой второй иммуногенный полипептид.
В другом конкретном воплощении изобретения первый иммуногенный полипептид представляет собой Εην или его фрагмент или производное, например, дρ120, дρ140 или дρ160 (в частности, дρ120). В одном конкретном воплощении изобретения второй иммуногенный полипептид представляет собой полипептид, включающий Сад и/или Ро1 и/или №Г или фрагмент или производное любого из них (например, ρ24-ΒΤ-№Γ-ρ17).
Таким образом, в одном конкретном воплощении Εην или его фрагмент или производное, например дρ120, дρ140 или дρ160 (в частности, дρ120) представляет собой первый иммуногенный полипептид, а полипептид, включающий Сад и/или Ро1 и/или №Г или фрагмент или производное любого из них (например, ρ24-ΒΤ-№Γ-ρ17), представляет собой второй иммуногенный полипептид.
В другом конкретном воплощении изобретения первый иммуногенный полипептид представляет собой полипептид, включающий Сад и/или Ро1 и/или №Г или фрагмент или производное любого из них (например, ρ24-ΒΤ-№Γ-ρ17). В одном конкретном воплощении изобретения второй иммуногенный полипептид представляет собой Εην или его фрагмент или производное, например дρ120, дρ140 или дρ160 (в частности, дρ120).
Таким образом, в одном конкретном воплощении полипептид, включающий Сад и/или Ро1 и/или №Г или фрагмент или производное любого из них (например, ρ24-ΒΤ-№Γ-ρ17), представляет собой первый иммуногенный полипептид, а Εην или его фрагмент или производное, например дρ120, дρ140 или дρ160 (в частности, дρ120), представляет собой второй иммуногенный полипептид.
Лиофилизированная композиция может содержать один антиген или может содержать более чем один антиген.
В одном аспекте изобретения лиганд ΤΕΒ9 используют для улучшения растворимости антигенов, которые не являются положительно заряженными. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что, в частности, с антигенами, которые заряжены отрицательно, совместная лиофилизация Сρд может улучшить их растворимость при разведении. Когда лиганд ΤΕΒ9 является иммуностимулирующим олигонуклеотидом, антиген представляет собой молекулу с суммарным отрицательным зарядом. Когда этот лиганд лиофилизируют совместно с антигеном с суммарным положительным зарядом, существует возможность, что лиганд ΤΕΒ9 будет взаимодействовать с антигеном при разведении лиофилизированной ком
- 11 018201 позиции, возможно, вызывая осаждение антигена. Это нежелательно, но специалист в данной области техники может избежать этого путем включения вместе с композицией для лиофилизации эксципиентов, которые известны как повышающие растворимость в таких ситуациях, такие как, например, Ь-аргинин.
Лиганд ТЬК9 и один или более чем один антиген объединяют с подходящими эксципиентами с образованием конечной массы препарата, который должен быть лиофилизирован. Оптимально эксципиенты будут содержать криозащитный агент для защиты белка от денатурации на ранних стадиях лиофилизации и защитный агент лиофилизации для предотвращения инактивации белка в процессе сушки. Могут быть использованы две различные молекулы, либо может быть использована одна молекула, которая обладает обоими свойствами, такая как дисахарид. Возможно, также можно добавлять кристаллический наполнитель, такой как маннит или глицин. Неионное поверхностно-активное вещество, такое как полисорбат или Тгееп®, может также быть добавлено, чтобы способствовать предотвращению агрегации белка. Эксципиенты могут также включать буферные соли для изменения рН конечной массы препарата.
Подходящие эксципиенты включают следующие: сахара, такие как сахароза, трегалоза, рафиноза, и мальтодекстрины, такие как мальтотриоза, мальтотетраоза, мальтопентаоза или мальтогексаоза; полиолы, такие как маннит или сорбит; полимеры, такие как декстран, полиэтиленгликоль (ПЭГ) или поливинилпирролидон (ПВП); аминокислоты, такие как глицин, аланин или аргинин.
Эксципиенты можно также объединять, так чтобы два или более чем два, например три или четыре эксципиента можно было использовать вместе. Возможные комбинации включают сахар и декстран, например сахарозу и декстран или трегалозу и декстран; сахар и ПЭГ, например ПЭГ 8000 и сахариды; сахар и ПВП, например сахарозу и ПВП; сахар и аминокислоты, например глицин и сахарозу; два сахара вместе, например сахарозу и глюкозу или сахарозу и рафинозу; сахарозу и полиолы, например сахарозу и сорбит или сахарозу и маннит; полиолы и аминокислоты, такие как маннит и глицин.
Поверхностно-активные вещества, такие как полисорбат или Т\\ееп®. могут быть добавлены к любой комбинации эксципиентов.
В целях образования иммуногенной композиции, которая может быть использована для вакцинации, лиофилизированную композицию, содержащую антиген и лиганд ТЬК9, разводят фармацевтически приемлемым разбавителем. Предпочтительный аспект изобретения состоит в том, что такой разбавитель должен представлять собой разбавитель в форме частиц, например раствор частиц соли металла или липосом, либо эмульсию масло-в-воде.
В одном воплощении разбавитель содержит дополнительные иммуностимуляторы. Это означает, что конечная разведенная иммуногенная композиция содержит другие иммуностимуляторы в дополнение к лиганду ТЬК9, находящемуся в лиофилизированной композиции.
Существует ряд известных иммуностимуляторов, которые известны как адъюванты либо отдельно, либо в комбинации. Врожденная или природная иммунная система распознает широкий спектр патогенов без необходимости в предварительном воздействии. Основные клетки, ответственные за врожденный иммунитет, моноциты/макрофаги и нейтрофилы, фагоцитируют патогены микроорганизмов и запускают врожденный, воспалительный и специфический иммунные ответы.
Липополисахариды (ЛПС) являются основной поверхностной молекулой внешней поверхности наружной мембраны грамотрицательных бактерий и встречаются исключительно в нем. Показано, что ЛПС являются лигандами ТЬК4. ЛПС затрудняют разрушение бактерий сывороточными комплементами и фагоцитарными клетками и вовлечены в адгезию для колонизации. ЛПС представляют собой группу структурно родственных комплексных молекул размером приблизительно 10000 Дальтон (Да) и состоят из трех ковалентно сшитых участков:
(1) О-специфичная олигосахаридная цепь (О-антиген) в наружном участке;
(2) коровый олигосахаридный центральный участок;
(3) липид А - самый дальний внутренний участок, который служит в качестве гидрофобного якоря, он содержит дисахаридные звенья глюкозамина, которые несут длинноцепочечные жирные кислоты.
Показано, что биологические активности ЛПС, такие как летальная токсичность, пирогенность и адъювантные свойства, связаны с группировкой липида А. Напротив, иммуногенность ассоциирована с О-специфичным полисахаридным компонентом (О-антигеном). Давно известно, что как ЛПС, так и липид А обладают сильными адъювантными эффектами, но высокая токсичность этих молекул исключила их применение в вакцинных препаратах. Следовательно, предприняты значительные усилия в направлении снижения токсичности ЛПС и липида А при сохранении их адъювантных свойств.
Мутант 8а1топе11а ш1пие8О1а К595 был выделен в 1966 году из культуры исходного (8шоо1й) штамма (Бибегб/ е! а1. 1966, Апп. N. Υ. Асаб. 8с1. 133: 349-374). Был проведен скрининг отобранных колоний на их чувствительность к лизису панелью фагов, и только те колонии, которые проявляли узкий диапазон чувствительности (чувствительные только к одному или двум фагам), были отобраны для дальнейшего исследования. Эти усилия привели к выделению мутантного штамма беер гоидй, который является дефектным по биосинтезу ЛПС, и он был назван 8. Ш1ипе8о1а К595.
По сравнению с другими ЛПС, продуцируемые мутантом 8. тшпеюШ К595, имеют относительно простую структуру.
- 12 018201 (1) они не содержат О-специфичный участок - характерный признак, ответственный за сдвиг от фенотипа дикого типа втоо111 к мутантному фенотипу гоидй, и приводит в результате к потере вирулентности;
(2) коровый участок очень короткий - этот характерный признак повышает чувствительность штамма к ряду химических веществ;
(3) группировка липида А в высокой степени ацилирована жирными кислотами в количестве вплоть до 7.
4'-Монофосфориллипид А (МРЬ), который может быть получен кислотным гидролизом ЛПС, экстрагированного из мутантного штамма беер гоидй грамотрицательных бактерий, сохраняет адъювантные свойства ЛПС, демонстрируя при этом токсичность, которая снижена более чем в 1000 раз (как измерено на основании летальной дозы на эмбрионах куриных яиц) (Лойпвоп с1 а1., 1987, Рсу. 1пГсс1. Όιβ. 9 8ирр1: 8512-8516). ЛПС обычно кипятят с обратным холодильником в растворах минеральных кислот средней силы (например, 0,1 М НС1) в течение периода приблизительно 30 мин. Этот процесс приводит в результате к дефосфорилированию в положении 1 и декарбогидрированию в положении 6' с получением МРЬ.
3-О-деацилированный монофосфориллипид А (3Э-МРЬ), который может быть получен путем мягкого щелочного гидролиза МРЬ, обладает еще более сниженной токсичностью, при этом, опять же, сохраняя адъювантные свойства, см. И8 4912094 (К1Ы 1ттипос11ет1са1в). Щелочной гидролиз обычно проводят в органическом растворителе, таком как смесь хлороформ/метанол, путем насыщения водным раствором слабого основания, таким как 0,5 М карбонат натрия, при рН 10,5.
Дополнительная информация по получению 3Э-МРЬ имеется, например, в И8 4912094 и \УО 02/078637 (Сойха Согрогайои).
Показано, что некоторые молекулы, которые не являются лигандами ТЬВ, обладают адъювантной активностью. Сапонины килайи (ОиП1а|а) представляют собой смесь тритерпеновых гликозидов, экстрагированных из коры дерева Ош11а)а вароиала. Неочищенные сапонины широко применяли в качестве ветеринарных адъювантов. Οιιίΐ-Λ представляет собой частично очищенный водный экстракт вещества сапонинов килайи. 0821 представляет собой очищенную высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) нетоксичную фракцию Οιιίΐ А, и этот способ ее получения (как ΟΛ21) раскрыт в патенте США № 5057540.
В одном аспекте изобретения разбавитель содержит один дополнительный иммуностимулятор. В другом аспекте изобретения разбавитель содержит более чем один дополнительный иммуностимулятор. Такие иммуностимуляторы могут представлять собой лиганды ТЬВ4, сапонины, лиганды ТЬК.7, лиганды ТЬК.8 или лиганды ТЬК.9. В одном воплощении изобретения дополнительный иммуностимулятор представляет собой лиганд ТЬВ4, такой как 3О-МРЬ, как описано здесь. В еще одном воплощении изобретения дополнительный иммуностимулятор представляет собой 0821. как описано здесь. В еще одном воплощении изобретения разбавитель содержит 0821 и 3О-МРЬ. В одном аспекте данного воплощения разбавитель представляет собой эмульсию масло-в-воде, содержащую 0821 и 3О-МРЬ. В другом аспекте данного воплощения разбавитель представляет собой раствор липосом, содержащий 0821 и 3О-МРЬ.
Далее изобретение будет описано дополнительно со ссылкой на приведенные ниже не ограничивающие примеры.
Примеры
Пример 1. Сублимационная сушка СрО-олигонуклеотида и СРС-Р5018 в качестве антигена
Используемый антиген представлял собой СРС-Р5018. Этот антиген показан на фиг. 1 в виде диаграммы, на которой часть, показывающая ТМ2-ТМ12, представляет собой антиген Р5018; овальные формы на левой стороне представляют собой партнеры слияния СРС, а гистидиновый (Н1в) хвост показан на правой стороне.
Антиген продуцировали, как показано, с Н1в-хвостом в 8. сегеу1В1ае, а затем доводили до концентрации 700 мкг/мл, используя буфер Трис (5 мМ, рН 7,5) и Твин 80 (0,3%).
Для получения конечной массы препарата сахарозу (35%) добавляли в воду для инъекций до достижения конечной концентрации 6,3%. Затем добавляли Трис (1 М, рН 8,8), а затем Твин 80 (25%) до достижения конечной концентрации 0,2%. Эту смесь перемешивали магнитной мешалкой в течение 5 минт при комнатной температуре. Добавляли СРС-Р5018 и смесь перемешивали магнитной мешалкой в течение 4 мин при комнатной температуре. Затем добавляли СрО-олигонуклеотид с 8ЕО ГО N0: 4 и полученную в результате смесь перемешивали магнитной мешалкой в течение 15 минут при комнатной температуре с получением конечной массы препарата. Композицию анализировали следующим образом:
- 13 018201
Конечная масса препарата (500 мкл) | Конечный контейнер (500 мкл) Доза для человека | |
Осадки | После разведения 625 мкл А301В | |
СРС-Р501 | 125 мкг | 100 мкг |
СрС | 625 мкг | 500 мкг |
Трис | 50 мМ | 40 мМ |
Твин 80 | 0,50 % | 0,40 % |
Сахароза | 6.3% | 5,0% |
рН | 9,1+/-0,1 | 7,4+/-0,1 |
Конечная масса препарата (500 мкл) | Конечный контейнер (500 мкл) Доза для человека | |
Осадки | После разведения 625 мкл А501Θ | |
СРС-Р501 | 25 мкг | 20 мкг |
СрС | 625 мкг | 500 мкг |
Трис | 50 мМ | 40 мМ |
Твин 80 | 0,20% | 0,16% |
Сахароза | 6,3% | 5,0% |
РН | 9,1+/-0,1 | 7,4+/-0,1 |
0,5 мл композиции заполняли в стеклянный флакон, который подвергали циклу лиофилизации, как показано на фиг. 2.
Характеристику осадка проводили путем визуального осмотра и измерения диаметра при Т0, через 1 неделю, 2 недели, 3 недели и 4 недели при 37°С на трех флаконах композиции (см. фиг. 3). Остаточное содержание влаги измеряли в те же моменты времени и при той же температуре, используя термогравиметрический анализ (ТГ) или анализ по Карлу Фишеру (КФ). Как видно ниже, осадки были стабильны в течение времени вплоть до 2 недель.
Лиофилизированный осадок.
Стабильность во времени | Визуальный аспект | Диаметр осадка (мм) | Содержание влаги (масс.% Н2О/масса осадка) | |
КФ | ТГ | |||
то | ок | 12,610,1 | 0,3% (1,5 месяца при 4°С) | 0,8% (5 месяцев при 4°С) |
1 неделя 37’С | ок | нд | 0,59% | нд |
2 неделя 37°С | Ретракция + | 9,810,8 | нд | 1,4% |
3 недели 37*С | Ретракция ++ | 7,711,0 | нд | 1,2% |
4 недели 37°С | Ретракция ++ | 8,711,5 | неизмеримо | 1,3% |
КФ: метод Карла Фишера.
ТГ: Термогравиметрический метод. нд: не делали.
ОК: нет ни агрегации, ни разрушения. Спецификация: 3% (термогравиметрический метод).
Влажность в конечном контейнере, который хранят при 37°С (для ускорения анализа на стабильность), возрастает со временем. Через 1 месяц при 37°С осадки содержат 1,3% Н2О и подвергаются ретракции. В данном эксперименте возрастание влажности является следствием того факта, что гигроскопичный порошок абсорбирует воду из пробок. Замена пробок новыми типами пробок может способствовать предотвращению такой ретракции.
Затем осадки разводили либо водой для инъекций, либо следующими жидкими носителями: адъювантная система А (липосомный адъювант, приготовленный, как описано в \УО 2005/112991), адъювантная система Е (адъювант в виде эмульсии масло-в-воде, приготовленный, как описано в \УО 2005/112991) или адъювантная система Е (адъювант в виде эмульсии масло-в-воде, приготовленный, как описано в \УО 2005/112991).
Никакой агрегации или разрушения белка не наблюдали с водой для инъекций, адъювантной системой Е или адъювантной системой Е. Некоторую агрегацию и разрушение наблюдали с адъювантной системой А. Был сделан вывод, что это является следствием снижения рН ниже изоэлектрической точки СРС-Р5018. Повышение концентрации эксципиента Трис до 50 мМ решало эту проблему, и затем никакой агрегации не наблюдали с адъювантной системой А. Было также обнаружено, что присутствие СрО в лиофилизированном осадке (т.е. совместная лиофилизация антигена и СрО-олигонуклеотида) способствовало предотвращению агрегации антигена при восстановлении адъювантной системой А. Сравнение разведения лиофилизированных осадков с СрО и без него с использованием адъювантной системы А показало сниженную агрегацию после совместной лиофилизации (данные не показаны).
Влияние эксципиентов на размер липосом в адъювантной системе А было также исследовано и было обнаружено отсутствие различия в размере между липосомами, находящимися во флаконе с адъювантной системой А отдельно, и липосомами, находящимися во флаконе с адъювантной системой А после восстановления лиофилизированного осадка, содержащего антиген, СрО, Трис и Твин. Следовательно, авторы изобретения смогли сделать вывод, что компоненты лиофилизированного осадка не влияют на адъювантную систему (фиг. 4).
Наконец, была исследована антигенность препарата, и было обнаружено, что в отношении лимфо
- 14 018201 пролиферации и продуцирования внутриклеточного цитокина (интерферона-λ, ИФНл) отсутствовало различие между жидким и лиофилизированным препаратом СРС-Р5018 (данные не показаны). Таким образом, авторы изобретения смогли сделать вывод, что на иммуногенность антигена не влияет совместная лиофилизация с СрС.
Пример 2. Сублимационная сушка СрС-олигонуклеотида и Маде-3 в качестве антигена.
Используемый антиген представлял собой часть белка Ό, связанного с МАСЕ-3, который, в свою очередь, был связан с Ηίδ-хвостом для облегчения очистки РЭ-Маде3-Н|5 (см. фиг. 5: 8Еф ΙΌ N0: 13).
Очищенную массу антигена продуцировали с Ηίδ-хвостом в Е.со11, а затем доводили до концентрации 750 мкг/мл, используя буфер NаН2Ρ04·2Н20/Κ2НΡ04·2Н20 (2 мМ) и Твин 80 приблизительно при 0,2% об./об. (теоретически), рН 7,5.
Для получения конечной массы препарата сахарозу (30%) добавляли в воду для инъекций до получения конечной концентрации 3,15%. Затем добавляли NаН2Ρ04·2Н20/Κ2НΡ04·2Н20 (100 мМ, рН 7,5) до получения конечной концентрации РО4 5 мМ, учитывая фосфат, находящийся в буфере для антигена. Также добавляли Твин 80 (3%) до получения конечной концентрации 0,15%, учитывая Твин, находящийся в буфере для антигена. Эту смесь перемешивали магнитной мешалкой в течение периода времени от 5 до 15 минут при комнатной температуре. Добавляли РО-Маде3-Н|5 (750 мкг/мл) и смесь перемешивали магнитной мешалкой в течение 5-15 мин при комнатной температуре. Затем добавляли СрСолигонуклеотид с 8Еф ΙΌ N0: 4 и полученную в результате смесь перемешивали магнитной мешалкой в течение 15 минут (±5 мин) при комнатной температуре с получением конечной массы препарата. Доводили рН до рН 7,5±0,1, используя №10Н 0,05 М или 0,5 М, либо НС1 0,03 М или 0,3 М.
Композицию анализировали следующим образом.
№ | Ингредиенты | Перед лиофилизацией | На Ηϋ (после разведения 0,625 мл разбавителя) | |||||
Название | Компонент | Згс | СС | Масса (на 0,5 мп) | Концентрация | Масса (на 0,5 мл) | ||
1 | РЦ-МадеЗН!з | Ν3Η2ΡΟ4.2Η2ΟК2НРО4.ЗН2О 2 мМ/Твин 80 -0,2% об./об. теорет., рН 7,5 | 750 мкг/мл | 375 мкг | 600 мкг/мл | 300 мкг | ||
2 | СрС | ίίδΰ мкг/мл | 625 мкг | 1000 мкг/мл | 500 мкг | |||
3 | Сахароза | 3,15% масс./об. | 15,75 мг | 2,52% масс./об. | 12,6 мг | |||
4 | Твин 80 | 1 | 0,15% масс/об. | 0,12% масс./об. | ||||
5 | Р04 | 1 | 5мМ | 4 мМ | ||||
6 | ννπ | до 0,5 мл | ||||||
7 | РН | 7,5±0,1 |
0,5 мл этой композиции заполняли в стеклянный флакон, который подвергали циклу лиофилизации, показанному на фиг. 6.
Влияние эксципиентов и цикла сублимационной сушки на состав осадка анализировали через 7-9 суток хранения осадка при 37°С.
Состояние осадка и остаточная влажность.
Состояние осадка | Нет спадения (ТО) | Нет ретракции (Т7 сут. 37'С) |
Остаточная влажность | 0,59% (Т8 сут. 37’С) |
Видно, что осадки не проявляют какого-либо спадения через 7 суток и не меняются на протяжении 8 суток по их стабильности в стрессовой среде.
Остаточная влажность осадков, которые хранят в течение 7-9 суток при 37°С, остается ниже спецификации 3%.
Никакого изменения в диаметре не наблюдали после хранения в течение 7-9 суток при 37°С.
Затем осадки разводили адъювантной системой А (липосомный адъювант, приготовленный как описано в ν0 2005/112991). Никакой агрегации или разрушения белка не наблюдали, подтвердив, таким образом, что антиген можно лиофилизировать совместно с СрС без влияния на его способность к разведению.
Была исследована антигенность препарата. Было обнаружено, что после разведения в адъювантной системе А имело место снижение антигенности со временем после 24 ч. Посчитали, что это являлось следствием кислого рН (6,2±0,1), обнаруженного после разведения. Это подтвердили, когда обнаружили, что падение антигенности было уменьшено при повышении рН. Однако все же имело место некоторое снижение антигенности со временем. Таким образом, эти препараты были протестированы для проверки того, влияет ли это снижение на испытание эффективности ίη νίνο. Разведения 3/10, 1/10 и 1/30 дозы для человека давали группам мышей, 10 мышей на группу, как показано на фиг. 7. У мышей брали кровь на 28 сутки.
- 15 018201
Т0, 4 ч и 24 ч представляют собой периоды времени после разведения осадка адъювантной системой А. Как видно из фиг. 7, никакого влияния на эффективность не было.
Пример 3. Влияние СрО на растворимость антигена после разведения.
1. ^Т1 представляет собой белок, сверхэкспрессия которого впервые обнаружена при раке почки у детей, опухоли Вильмса. В антигене-кандидате, применяемом в настоящем случае, используют почти полноразмерный белок в качестве антигена. Белок \УТ1-А10 представляет собой рекомбинантный слитый белок из 292 аминокислот, экспрессируемый в Е.сой, состоящий из 12-мерной укороченной последовательности 1а1 (лидерной последовательности) и аминокислот 2-281 последовательности \УТ1. После лиофилизации одного этого антигена он осаждается при разведении адъювантной системой А из-за его изоэлектрической точки (5,85-7,5), которая находится близко к рН адъювантной системы А (6,1), и присутствия хлорида натрия в адъювантной системе А.
Готовили два препарата \УТ1-А10. Доза разведенного препарата содержала 400 мкг/мл антигена \УТ1-А10, 10% сахарозу, 100 мМ Трис и 0,2% Твин 80 плюс или минус 840 мкг/мл СрО.
Оба препарата разводили 500 мкл адъювантной системы А. Полученную в результате жидкость центрифугировали и проводили Вестерн-блоттинг на нецентрифугированной жидкости (ИС), супернатанте (8Ν) и осадке (Р). Результаты показаны на фиг. 8.
Как видно из фиг. 8, в присутствии СрО растворимость антигена после разведения улучшается, о чем свидетельствует отсутствие антигена в осадке. Осажденный антиген можно обнаружить в осадке разведенной лиофилизированной композиции, когда лиофилизированный осадок не содержал СрО. Это свидетельствует о том, что в случае антигена, который не является положительно заряженным, совместная лиофилизация с СрО улучшает растворимость антигена при разведении.
2. РЕАМЕ.
Готовили два препарата РЕАМЕ. Доза разведенного препарата содержала 1000 мкг/мл антигена РЕАМЕ, 3,15% сахарозу, 5 мМ борат, 150 нМ хлорид натрия плюс или минус 840 мкг/мл СрО. Оба препарата разводили 500 мкл адъювантной системы А. Полученную в результате жидкость центрифугировали и проводили Вестерн-блоттинг на не центрифугированной жидкости (ИС), супернатанте (8Ν) и осадке (Р). Результаты показаны на фиг. 9, где ИС означает нецентрифугированную жидкость, 8Ν означает супернатант и Р означает осадок.
Как видно из фиг. 9, в присутствии СрО растворимость антигена после разведения улучшается, о чем свидетельствует отсутствие антигена в осадке. Осажденный антиген можно обнаружить в осадке разведенной лиофилизированной композиции, когда лиофилизированный осадок не содержал СрО. Это дополнительно свидетельствует о том, что в случае антигена, который не является положительно заряженным, совместная лиофилизация с СрО улучшает растворимость антигена при разведении.
- 16 018201
ЗЕО Ю N0:1
ТСС АТС АСС ТТС СТС АСС ТТ
ЗЕО Ю N0:2
ТСТ ССС АСС СТС ССС САТ
ЗЕО 10 N0:3
АСС САТ САС СТС ССС ССТ САС ССС АСС АСС
ЗЕО Ю N0:4
ТСС ТСС ТТТ ТСТ ССТ ТТТ СТС СТТ
ЗЕО Ю N0:5
ТСС АТС АСС ТТС СТС АТС СТ
ЗЕО 10 N0:6
ΜΚνΚΕΤΡ.ΚΜΥ ОНЬККИСТИЬ ЬСМЕМЮЗАА ЕОЬНУТУУУС УРУИКЕАТТТ50
ЬГСАЗОАКАУ ОТЕУНМУНАТ НАСУРТОРЫР ОЕУУЪСИУТЕ ΥΓΝΜΝΚΝΝΜν100
ООМНЕОИЗЬ ИООЗЬКРСУК ЪТРЪСУТЮС ЗВУНТТМЗТТ ТТЗЫСНТСЕ!150
ККСЕ1КЫС5Г ΝΙΤΤΒΙΚϋΚν 0ΚΕΥΑ1ΡΎΝ1 ОУУРЮООЫА ΤΤΚΝΚΤΤΚΝΕ200
КЫНСЫЗЗУМ ТОАСРКУЗГЕ Р1Р1НУСАРА ΟΓΑΙΙ,ΚΟΝΝΚ ТЕОСКСЕСТИ250
У5ТУ0СТНС1 КРУУЗТОЬЬЬ ЫСЗЬАЕЕЕУУ ΙΕ30ΝΕΜ0ΝΤ КТИУОЪИЕЗ300 νΑΤΝΟΤΗΡΝΝ ΝΤΡΚΟΙΗΐσΡ СКАГУААКК! ТСОТВОАНСИ Ι.3ΚΆ0ΗΝΝΤΕ350
К01У1К1КЕН ΕΟΝΚΤΙΚΓΝΟ ЗЗСС0РЕ1УК НЗГИСССЕГГ УСОТТОЪЕЫЗ400
ΤΗΝΟΤΕΟΝΝΤ ЕСИЗТ1ТЬРС ΒΙΚϋΙΙΝΜΗΟ ЕУЗКАМУАРР 1СС01ВСЗЗЫ450
1ТСЫЬТКОС СТЕСЫСТЕЫЕ ТЕ1ГВРССС0 ΜΚϋΝΗΚ3ΕΕΥ КУКУУКУЕРЬ500
СУАРТКАККК ννοκ514
ЗЕО 10 N0:7
МКУМЕЮКЫС 0НЫКИС1М1 1СМ111СЗТА ОЫЬИУТУУУС УРУИНИАЕТТ
ЕГСАЗОАКАУ ЗТЕКННУИАТ ΗΑΟνΡΤΟΡΝΡ ΟΕΙΡΙΌΝνΤΕ ЕГММИКМИМУ
101 ООМНЕЭИЗЬ ИООЗЬКРСУО ЬТРЪСУТЬНС ЗИАЯУНАТЕН ЗТЕОНЕСМКЫ
151 СЗГЫМТТЕЬК ОККООУУЗЬГ ΥΗΙιϋΙΕΚΙΝΒ 3ΝΝΝ3ΕΥΚ1>ν ИСЫТЗАГТОА
201 СРКУТЕЕР1Р 1НУСАРАСГА ΙΕΚΟΝΟΤΕΓΝ СТСРСКЫУЗТ У0СТНС1КРУ
251 УЗТОЬЬЬЫСЗ ЕАЕАЕУК1НЗ ΕΝΙΑΝΝΑΚΝΙ 1У0ГАЗРУК1 ΝΟΙΚΡΝΝΝΤΚ
301 КЗУНЮРСОТ ΓΥΑΤΟίνΟϋΙ РОАНСНУЗКТ ОИИЫТЬКЬУА Ν01.ΚΚΥΕ3ΝΚ
351 ТИЕТЫЗЗСС ΟβΕΙΤΤΗ3ΕΝ СССЕЕЕУСНТ 3ΟΕΕΝ3ΤΝΤΤ ΝΝΜ0Ε3ΝΟΤ3
401 ЫСТ1ТЬРСН1 К0ИНМИ0КУ ΕΟΑΜΥΑΡΡΙΕ СУ1НСЕЗЫ1Т СЬТЬТКОССИ
451 ΝΝ3ΑΝΕΤΓΒΡ СССМКОИИК ЗЕЕУКУКУУК 1ЕРЪСУАРТН АКНВУУЕВЕК
501 РАУС1САУРЬ 6ЕЕСААСЗТМ САА31ТЕТУ0 АКООЬЗС1УО ООЗЫЬЬКАГЕ
551 АОООЫКЬТУ НС1КОЬОАРУ ЬАУЕКУЕКРО 0ЫС1ИССЗС ΚΙΙΟΤΤΝνΡΝ
601 Ν33Ν3ΝΚ3Υϋ ОхИОНМТИЕО ΝϋΚΕΙΒΝΥΤϋ 11УЗЫЕЕЗО Ν00ΕΚΝΕ001
651 ЬЛЮКНАНЕИ ΝΗΓ0Ι3ΚΝΙ,Η ΥΪΚδ
ЗЕО Ю N0:8
МСАКАЗУЬЗС СЕЮКИЕК1К ЬКРССКККУК ЬКШУИАЗКЕ ЬЕКЕАУИРСЬ 51 1ЕТЗЕССК01 ЬСОЬОРЗЮТ СЗЕЕЬВЗЪУМ ТУАТЬУСУНО ΗΙΕΙΚϋΤΚΕΑ 101 ЬОКТЕЕЕОИК 3ΚΚΚΑ00ΑΑΑ ОТСНЗЫОУЗО ΝΥΡίνβΝΙΟΟ ОМУНОА13РН 151 ТЕЫАИУКУУЕ ЕКАГЗРЕУ1Р МЕЗАЬЗЕСАТ РС'ОЬМТМЬИТ УССНОААМОМ 201 ΕΚΕΤΙΝΕΕΑΑ, ЕИОНУНРУНА СР1АРС0МНЕ ΡΡ.650Ι Α6ΊΤ ЗТЬОЕОЮИМ 251 ΤΝΝΡΡГРУЗЕ ТУКВИНЬСО ΝΚΐνΒΜΥ3ΡΤ 3Ι1ΌΙΗ0αΡΚ ΕΡΓΚΟΥνϋΚΡ 301 ΪΚΤ1ΚΑΕ0Α3 ОЕУКЫИМТЕТ ΙΙΛ'ΟΝΑΝΡϋΟ КТ11ЖАЕСРА АТЕЕЕММТАС 351 ОЗУССРОНКА НУЫ4СР13Р1 ЕТУРУКЪКРС МОСРКУКОИР ЬТЕЕК1КАЕУ 401 Е1СТЕМЕКЕС ΚΙ5ΚΙ0ΡΕΝΡ ΥΝΤΡνΓΑΙΚΚ КОЗТКНККЬУ ОГКЕЬЫККТО
- 17 018201
51
501
551
601
651
701
751
801
851
901
951
1001
1051
ОЕИЕУОЬ61Р ΝΝΕΤΡΟΙΗΥζ) ОЬТУСЗОЬЕ1 ΡϋΚΗΤνΟΡίν ТКАЬТЕУХРЬ ΟΜΤΥΟΙΥΰΕΡ ГРКЕКЬРГОК бАЕТГУУЕКА ЬаОЗСЬЕУЫ! УРАНКСЮСЫ ЕЬКЕКСбЬЕС; БИСУКЬУРУЕ АЕННУАКЕЬН
НРАСЪККККЗ ΥΝνίΡοοΗκα ΕβΗΕΤΚΙΕΕΙι ЬРЕКОЗИТУИ ТЕЕАЕЬЕЬАЕ ГКШКТСКУА ΕΤΜΕΤΗΗΤΕΥ АЫЕЕТКЬЙКА УТОЗОУАЬС1 ЕОУОКЬУЗАС ЫК30КН0О1 РОКУЕЕАВК& ΡΕΥΕΚΝ0
УТУЮУСОАУ 5ΡΑΙΕ0Ξ3ΜΤ ЕОНЫЕИСЬТ МОКБУОКЬН ΝΕΕϋΚΕΡνΗ ΚΜΗΟΑΗΤΝϋν КОАТИIРЕКЕ суутыеоеок ЮАОР&ЗЗЕЗ 1ЕКУ1МУСГР ьоьыг/нтос; ЕЫТЗЫНРУЗ
ЕЗУРЮЕОЕН КИЕРЕККОЫ ΤΡϋΚΚΗΟΚΕΡ ΗΑ30ΐγραικ 3νΥΥΟΡ5ΚΕ1 КОЬТЕАУОК! ГУКТРРЪУКЬ ννΤΙΤΟΤΤΝΟ ЕГЛПОИЕОЬ УТРОУРЬЕРМ ΥΕΡΟΗΟΝΥΤΡ ΙΗΟΜΒΟΡΕΚΞ
ΚΥΤΑΓΤΙΡ5Ι ΡΡίνΐΥΟΥΜϋ РЕЕКМСУЕЬН УЕОЬСКЬЬЕС ΐΑΕίοκοοοσ ТТЕ51У1НОК ΗΥΟΙ,ΕΚΕΡίν КТЕЫЭАТГЬА ΙΚΚΕΚνΥΙΛΗ ТУКААУВЬЗН ορανκγριτρ УЬЕИВЕОЗКЪ
ЗЕО Ю N0:9 аЕддЪЕаЕсдЪдсадаасаЕссаддддсаааЕддЬаеаЕсаддссаЕаЬсассЕадаасЕЫаааЬдсаЕддд ЕаааадбадЬадаададааддсЕЫеадсссадаадЕааЪасесаЬдВЕЕЕсадсаЕкаЬсадааддадссас сссасаадаЫЬаааеассаЬдсЪааасасадЕддддддасаЕааадсадссаЪдсааа^дСЬаааададасс аЬсааЪдаддаадсЕдсадааЪдддаЬададЕасаЬссадЪдса'ЬдсадддссЬаЬЪдсассаддссадаЬда дадаассааддддаад£даса£адсаддаасЕасЪад,ЬасссЁЬсаддаасаааЪаддаЪдда(дасаааЬаа ЕссассЕаЪсссадЪаддадаааНЕаЪаааадаЕддаЬаабссЪдддаЪЕаааЬааааеадЪаадааЬдЕаЕ адсссЪассадсаЬЬсЬддасаЪаадасааддассаааадаассЬиЬададасЪа'ЪдЬадассддЬЬсЬаЪа ааасЪаЪаададасдадсаадсЫсасаддаддЪааааааЪЬддаЬдасадааассЬ^дЬеддессааааедс даасссадаИдЪаадасЪаЪЫЛаааадсаЫдддасаадсддсЪасасЕадаадаааЪдаЪдасадсаЪдг садддадЬаддаддасссддссаЬааддсаададЫ;Ы:д|саЕаЕд|ддссссаЕЕадсссЕаЕЕдадасЕдЕдЕ садЕааааСЕааадссаддааЕддаЕддсссаааадЕЕааасааЬддссаЬЕдасадаадааааааЕаааадс аЕЕадЕадаааЕЕЕдЬасададаЕддааааддаадддааааЕ1ЕсаааааЕЕдддссЕ.дааааЕссаЕасаа(: асЕссадЕаЕСЕдссаЕааадаааааадасадЕасЕаааЬддадааааЕЕадЕадаЕЕЕсададаасЕЕааЬа ададаасЕсаадасЕ ЕсЕдддаадЕЕсааЕЕаддааЕассасаЕсссдсадддЬЕаааааадааааааЕсадЕ аасадЕасЕддаЕдЕдддЕдаЕдсаЕаЕЕеЕЕсадЕЕсссСЕадаЕдаадасПЕсаддаааСаЕасЕдсаЕЕ»: ассаЕассЕадЕаЕааасааЬдадасассадддаЕЕадаЕаЕсадЕасааЕдЕдеСЕссасадддаЕддааад даЕсассадсааЬаЕЕссааадЕадсаЕдасаааааЁс'ЕЪададссЪССЕадаааасааааЕссадасаЬадЬ ЕаЕсЕаЕсааЕасаЬддаЕдаЕСЕдЕаЕдГаддаЕсЕдасЕЕадаааЕадддсадсаЬадаасаааааЕадад дадсЕдадасаасаСсСдСЕдаддСддддасЕЕассасассадасаааааасаСсадааадаассЕссаГЕсс (ЛааааСддди1аедаасесса£сссда(:ааасддасадиасадссЬа1ад1.дс£дс:садааааадасадсСд дас! дЕсааЕдасаЕасадаадЬ ЕадЕддддаааЕЕдааЕЕдддсаадЬсадаЫЬасссадддаЕЬааадЕа аддсаа(ЕаЕдЕааасЕссЕ1:ададдаассааадсасСаасадаад1аа(:ассасЕаасадаадаадсададс ЕадаасЕддсадаааасадададаЕЕсЕаааадаассадЕасаЕддадЕдЕаЫаСдасссаЕсаааадасЕЕ ааЕадсадаааЕасадаадсаддддсааддссааЬддасаЕаЕсаааЕЕЕаЕсаададссаЕСЕаааааЕсЕд аааасаддааааЕаСдсаадааЕдаддддЬдсссасасЕааЕдаЬдЕаааасааЬЬаасададдсадЬдсааа аааЕаассасадааадсаЕадкааЕаЕддддааадасЕссЕаааЕЕЕааасЕдсссаЕасааааддааасаЕд ддааасаЕддЕддасададЕаЕЕддсаадссассЕддаЕЕссЕдадЕдддадЕЕЕдЫааЕассссессЕЕСа дЕдаааСЕаЕддЕассадЬЕададааадаасссаЬадЕаддадсадааассЬЬсЕаЕдЕадаЕддддсадсЕа асадддадасЕаааЕЕаддаааадсаддаЕаЕдЕЕасЕааЕададдаадасааааадСЕдЬсасссЕаасЕда сасаасаааЕсадаадасЕдадЕЕасаадсааЕЕЕаЕсЕадсЕЕЕдсаддаЕ1сдддаЕЕадаадЕааасаЕа дсаасадасЕсасааЕаЕдсаЕЕаддааЕсаЕЕсаадсасаассада^сааадЕдааЕсададгСадЬсааЬс аааЕааЕададсадЕЕааЕааааааддааааддЕсЕаЕсЕддсаЕдддьассадсасасаааддааЬЕддадд аааЕдаасаадЬадаЕаааЕЕадЕсадЬдсЕддааЕсаддааадЕдсЕа|дсЕаЕд|ддЕддсаадЕддЕсаааа адЕадЕдЕддСЕддаСддссЕасЕдЬаадддааадааЕдадасдадсЕдадссадсадсадаЕддддЕдддад садсаСсЕсдадассЕддааааасаЕддадсааЬсасаадЬадсааЕасадсадсЕассааЕдсЕдсЕЕдЕдс седдсЕадаадсасаададдаддаддаддЬдддЕЕЕЕссадЕсасассЕсаддЕассЫЬаадассааС дас! ЬасааддсадсЬдЕадаесЬЕадссасЕЬЬЕЕаааадааааддддддасЬддаадддсЕааЕЕсасЕсссаас даадасаадаЕаЕссЕЕдабсЕдЕддаЕсЕассасаеасааддсЕасЬЕсссЕдаЬЕддсадаасЕасасасс адддссаддддЕсадаЬаЕссасЕдассЕЕЕддаЕддЕдсЕасаадсСадЕассадЬЕдадссадаЕааддЕа даададдссааЕаааддададаасассадсеедеЕасасссСдЕдадссЕдсаеддааЬддаЬдасссЬдада дадаадЕдЕСададСддаддЕЕЕдасадссдссЬадсаЕЕЕсаЕсасдЕддсссдададсЕдсаессддадьа сЕЕсаадаасСдфддссдаЕдддЕдсдададсдЕеадеаСЕаадсдддддадааЕЬадаЕсдаЬдддааааа аЕЕсддЫааддссадддддааадааааааЕаЕаааЕЕаааасаЕаЕадЬаЬдддсаадсадддадсЕадаас даЕЕсдсадЬЕааЕссЕддссЕдЕЕадааасаЕсадааддсЕдЕадасаааЬасЬдддасадсЬасаассаЕс
- 18 018201 ссеьсадасаддабсадаадаасИ'ЬадаесаеьаЬаНаа'басад'ЬадсаасссИсбабьдСдУдсаСсааадд абададабаааадасассааддаадсСНЬадасаадагададдаададсаааасаааадСаадаааааадсас адсаадсадсадсбдасасаддасасадсааСсаддбсадссааааееасгаа
ЗЕО 10 N0:10
МУ1У0Н1СС0МУНСА13РНТ1ЛАНУКУУЕЁКАГЗРЕУ1РМЕЗА1.3ЕСЛТР ΟΟΕΝΙΗΕΜΤνββΗΟΜΜαΜΕΚΒΤΙΝΕΕΑΑΕΗΟΗνΗΡνΗΑβΡΙΑΡβΟΜΚΕΡ Κ63ΟΙΜΐΤΤ3ΤΙ>0Ε0ΙΟΗΜΤΗΝΡΡΙΡνεΕ1ΪΚΚ>ΠΙΙ>&1ΝΚΐνΒΜΥ8ΡΤ3 1Ш1НЗСИСЕРГЕЮХ7В11Е?К1ЫШ20АЗдаУКНЯМТЕ11ХУОН»1Р1ХЖ Т1ИСАЬСРАЛТ1Л:И®»ТАС0СУСе₽СШИЖИ@ЗР15₽1ЕТУЗУКЬКРа МОСРКУК0ИРЬТЕЕК1КАЬУЕ1€ТЕМЕКЕСК13К1СРЕ№УКТРУЕА1КК ΚΟεΤΚΗΗΚΙ,νΟΓΒΕΙ,ΝΚΒΤΟΟΓΗΕνΟΙ,ΟΙΡΗΡΑΟΙ,ΚΚΚΚΞντνΕΟνΟΟΑΥ ГЗУРЮЕ ΟΓΚΚΥΤΑΓΤI РЗ 1НМЕТРСI ΚΥΟΪΝνΕΡΟΟΗΚΟΞΡΑΙ РОЗ ЗИТ ΚΙΕΕΡ ΡΕΚΟΝΡΟIVIУОУМООЬУ753 О ЕЕ 1СОНЕТК1ЕЕЬРОНЪЬР.И5ЬТ ТР0ККН0КЕРРГЬ|МСУЕЪНР0КНТУ0Р1УЬРЕК05НТУМ010КЬУ5КЬК НА301УРС1КУК0ЬСКЬЬНСТКАЬТЕУ1РЬТЕЕАЕЬЕЬАЕННЕ1Ы<ЕРУН СУУУОР5КОЫАЕ10К06050ИТ¥01 ΥαΕΡΓΚΝΕΚΤεΚΥΑΒΜΕΟΑΗΤΝΟν К0ЫЕА70КIТТЕЗIVIН5КТ РКГК1ΡΙΟΚΕΤΗΕΤΗΜΤΕΥΗΟΑΓΜΙ РЕНЕ РУНТРРЬУКЬНУОЬЕКЕРХУСАЕТГУУОеААНКЕТКЬвКАСУУТМКСКОК ТУТЬТОТТЫОКТЕЬОА IУЬАЬООЗСЪЕ’Л!IУТОЗО ΥΑ15ΙПАЗ ΡΌ03Ε 3 ЕЬта<Э11ЕОШККЕКУУЬАНУРАНКО166ΝΕ0νϋΚΙ№ Α5Ι
ΗΞ КЗ 3775И РТ νΚΕΚΜΚΗΑΕ РААБС УСААЗ К Ш ЕКНС АIТ 3 5ΝΤ ΑΑΓΝ АА САНЬЕАОЕЕЕЕУСГРУТРОУРШРМТУКААУОЪЗНГЬКЕКССЬЕ(ЗЪ1НЗО ΕΕΏΟΙЬОЬНIΪΗΤΟΟΥΕΡΟΗΟΝΪΤ РСРСУВУ РЪТРСЯСУКЪУРУЕРОКУЕ ЕАЫКСЕНТЗЬЬНРУЗЕНСМООРЕКЕУЬЕНВЕОЗАЬАРННУАКЕЬНРЕУГК НС^МСАКАЗУЬ336ЕЬ0ЕИЕК1КЬКРС6КККУКЬКН1™аЗНЕЬЕКГАУ ΝΡ01ΕΕΊ ЗЕ6СВ01ЬЗСЦ10РЗ ЬОТСЗ ΕΕΕΚ3 Ь УЫТУАТ Ь‘ГС7Н0В.1 ΕΙΚΟ ΤΚΕ АЬЕКI ΕΕΞ0ΝΚ3ΚΚΚΑ00ΑΑΑϋΤ3Η3Ν0 7301«
100
150
200
250
300
350
400
450
500
550
600
650
700
750
800
850
900
950 1000 1050 1100 1136
5Е0 10
101
151
201
251
301
351 -О 01 451 501 551
601
651 ?01
751
801
851
901
951 1001 1051 1101 1151 1201 1251 1301 1351 1401
N0:11
МААКА31Ъ5а ЪЕТТЕЗСООГ 1ДЭКГЕЕ10ИК ΤΕ·ΝΑΗνκνΐΕ ΙιΚϋΤΙΗΕΕΑΑ ΤΟΝΡΡΙΡνΘΝ ЕКАЬНАЕОАТ оетебРснкА ΚΝΟΗΑΡΒΚΚΕ РЕРТАРРАЕЬ ΡΙΞΡΙΕΤνΡν ΕΡΕΝΡΥΝΤΡΙ ККККЗУТУЬО ОСИКСЗРА1Р К1ЕЕЬЕАНЬЬ знттаоюкь 1ЕЬАЕЖЕ1Ъ ΤΕΚΥΑΚΚΚδΑ ИЯМОУИОАТИ КЫЗКАСУУТО УАЬСИОАОР ЬУ5331РКУЬ ОКСОЬКСЕАМ ΑΕΤΕΟΕΤΑΥΓ ΙΡΪΝΡ0300ν Ι36Υ3Α0ΕΗΙ ЬЬНКСЕСАУУ МССКИЗКЕ31 Р5СУН0ЕА0Е
СКЬОАИЕК1К ΜΝΟΙ,βΡΆνΚΤ ЗКОКТаОААА ΕΚΑΓΒΡΕνίΡ ЕИОКЬНРУОА 1УканпьС1, ООУКСИМТЕТ ΚνΐΑΕΑΗ30Α снксекЕснц РСМСЕС1АЗЬ ТЬКРСМОСРК ΓΑΙΚΚΚΟ3ΤΚ усюаугзуре О35МТК1ЬЕР 5ИСРТТР0КК νσΚΕΝΗΑ30Ι ΚΟΡνΗΘνΥΪΟ ΗΤΝΟνΚΟΕΑΕ ΙΡΕΗΕΡνΝΤΡ ЕСЕОКУУЗЬТ □ВЗЕЗЕЬУИО ГЬОСГГЖАОЕ нсоуосзрс1 ЕЬКЬАСННРУ УАЗММКЕЪКК ιοιιατοιοτ Ι0ϋΝ30ΙΚνν УСНРЕ1КЕНМ ЕЕЕУСРРУКР
ЬВРССКККУК 6ТЕЕГК30ГЫ ПТСОЗЗКУЗО МЕЗАЪЗЕСАТ ΟΡΙΡΡΟΟΙΚΕ ΝΚΐνΚΜΥ3Ρν ΕΙ№ΝΑΝΡΟΟ ООТМ1ММОКС МКОСТЕКОАЫ ΡΚ0Ε0Κ0ΚΕ2 УКОИРЬТЁЕК НККЬУОРНЕЬ ОΕΝРЕКУТАГ ΓΚ3ΚΝΡΕΙΙΙ НОКЕРРГЬНМ ΥΑΟΙΚνΚΟΕΟ РЗКОЬУАЕН) ννΟΚνΑΜΕΒΙ РЬУКЬЫУОЬЕ ΕΤΤΝΟΚΤΕΕΗ ИЕкыокок ΟΗΕΗΥΗ5ΝΗΚ НОЬАСТНЬЕС ΚννΗΤΑΝΟ3Ν ΙΙΟΟνΚϋΟΑΕ ΚΕΕΟΚΟΙΤΚΙ ВКР.К АКИНО ΗΚΑΡΑΑΑΡΟν ΟνΡΙΗΡΜΤΪΚ
ЕКНЬУИАЗНЕ ТУАТЬУСУНО ΝΥΡΙΙΟΝΑΟσ ΡΟϋΙΝνΜΕΝΙ РЕС301АСТТ 3ΙΙΌΙΚ05ΡΚ КЗХЬКАЬСЗС ИЕКС<ЗКН1КС Ρ06ΚΙΗΡ53Κ УРРЬУЗЬКЗ! 1КАЕТЕ1СТЕ ΝΚΕΤΟϋΓΗΕν ΤΙΡ3ΤΝΝΕΤΡ ΪΟΪΜΑΑΕΥνα СУЕЬНРОКИТ ВЬЬКСАКАЬТ КОЗОООитУй νΐΗΟΚΤΡΚΕΚ КОР1БСАЕТР АГЬЬАИЮЗС 1УЬЗНУРАНК ΤΜΑΒϋΓΝΕΡΡ КУЮ7А7Н7А ГТЗААУКААС НЬКТАУОМАУ 0ΝΕΕνΥΥΗϋ3 УСВДМАСООС САУ30О1.ОКН САГОЬЗНРЬК
ЬОКРАЬНРЗЬ ΕΣβνΚΟΤΚΕΑ ΟΜΙΗΟΝΕ5ΡΚ νασΗΟΑΑΜΟΜ ЗТР0Е012ИМ ΕΡΓΡΟΥνΟΚΕ АТЬЕЕММТАС РЫССКЕОНЬА СВРСЫРРОЗК ГСИОРЪЗОСЗ МЕКЕСК13К1 0ЬС1РНРАСЬ σνΚΥΟΥΝνΕΡ 30ЬЕ1С0НКТ νΟΡΙΜΪ,ΡϋΚΕ О1УТЬТЕЕАЕ ΙΥΟΕΡΕΚΝΏΚ 1ΡΙΟΚΕΤΗΕΤ ΥνΟΟΑΑΝΒΕΤ ΞΕνΝΐνΤΟ3Ο ΕΙΟΟΝΕΟνϋΚ 1УАКЕ1УА5С εσγίΕΆΕνίρ ΗΜΑΝΙΟΟΕΓΟ ρΐΗΝΓκκκαο КОР1ИКСРАК УАСНСОЕОКЗ ΟΑΙΤ53ΝΙΝΝ ЕКСОЬООЫУ
1451
1501
1551
5ΗΚΗ0ΕΙьОЬ νΕΚΑΤΕβΕΝΝ УКОС
НУ'/НТОСУРР зглнргсднс
ΟΗΟΝΥΤΡΕΡΕ УРУРЬТЕСНС ЕКЬУРМЕРОЕ ΜΟϋΕΕΚΕνίΙ НКГОЗКЬАЬК ННАОЕЬНРЕГ
ЗЕО Ю
N0:12 (1) ΜΚίΚΤ1Α18ΕΙΛΑ0νΐΑ0Ο33Η85ΗΜΑΝΤ0ΜΚ3ΡΚΙΙΙΑΗΚΰΑ33ϊ1ΡΕΗ
Белок ΐη£1οβηζ£β
51) ГЬЕЗКАЬАЕ'АСОАРУЬЕОРЬАМТКРСВЬУУТНРШГЬРСЬТРУАККЕ'РНЙЯ (101) ВКРСВУУУ1РГТЬКЕ103ЬЕМТЕИГЕТ
Claims (15)
1. Лиофилизированная композиция для лечения рака, содержащая один или более чем один антиген, который не является положительно заряженным, и СрС-содержащий иммуностимулирующий олигонуклеотид, где указанный один или более чем один антиген представляет собой антиген ЭДТ-1 (белок опухоли Вильмса) или его производное или фрагмент, где указанное производное в достаточной степени подобно нативным антигенам в сохранении антигенных свойств и сохранении способности обеспечивать иммунный ответ, который должен быть вызван против ЭДТ-1, и где указанный фрагмент имеет по меньшей мере 8 аминокислот в длину и способен индуцировать иммунный ответ, который перекрестно реагирует с природным ЭДТ-1.
2. Композиция по п.1, где указанный иммуностимулирующий олигонуклеотид содержит последовательность: пурин, пурин, С, С, пиримидин, пиримидин.
3. Композиция по п.1 или 2, где указанный иммуностимулирующий олигонуклеотид выбран из группы, включающей
ТСС АТС АСС ТТС СТС АСС ТТ (8Ες ГО ΝΟ: 1);
ТСТ ССС АСС СТС ССС САТ (8Ες ГО ΝΟ: 2);
АСС САТ САС СТС ССС ССТ САС ССС АСС АСС (8Ες ГО ΝΟ: 3);
ТСС ТСС ТТТ ТСТ ССТ ТТТ СТС СТТ (8Ες ГО ΝΟ: 4);
ТСС АТС АСС ТТС СТС АТС СТ (8Ες ГО ΝΟ: 5).
4. Композиция по п.1 или 2, где иммуностимулирующий олигонуклеотид содержит по меньшей мере два неметилированных повтора СС, разделенных по меньшей мере 3 нуклеотидами.
5. Композиция по п.4, где иммуностимулирующий олигонуклеотид содержит по меньшей мере два неметилированных повтора СС, разделенных 6 нуклеотидами.
6. Способ изготовления лиофилизированной композиции по любому из пп.1-5, включающий стадии смешивания желаемого антигена и иммуностимулирующего олигонуклеотида с подходящими эксципиентами и осуществления цикла лиофилизации полученного препарата.
7. Способ изготовления иммуногенной композиции, включающий стадии разведения лиофилизированной композиции по любому из пп.1-5 подходящим носителем.
8. Способ по п.7, где указанный носитель представляет собой носитель в форме частиц, выбранный из группы, включающей минеральные соли, эмульсии, полимеры, липосомы, иммуностимулирующие комплексы (I8СΟΜ).
9. Способ по п.7, где указанный носитель представляет собой раствор липосом или эмульсию масло-в-воде.
10. Способ по любому из пп.7-9, где указанный носитель дополнительно содержит один или более чем один иммуностимулятор.
11. Способ по п.10, где указанный один или более чем один иммуностимулятор выбран из группы, состоящей из агонистов То11-подобного рецептора (ТЬК4), антагонистов ТЬК4, сапонинов, агонистов ΊΕΙ<7- агонистов ТРИ8_ агонистов ТРР9.
12. Способ по п.11, где указанный антагонист ТЬК4 представляет собой 3-деацилированный монофосфориллипид А (ΜΡΕ).
13. Способ по п.11, где указанный сапонин представляет собой р821.
14. Способ по п.10, где указанный носитель содержит два иммуностимулятора.
15. Способ по п.14, где указанные иммуностимуляторы представляют собой 3-деацилированный ΜΡΕ и ς821.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/EP2007/055037 WO2007137986A2 (en) | 2006-05-26 | 2007-05-24 | Vaccination against cancer |
GB0723044A GB0723044D0 (en) | 2007-11-23 | 2007-11-23 | Lyophillised antigen composition |
GB0723900A GB0723900D0 (en) | 2007-12-06 | 2007-12-06 | Lyophillised antigen composition |
PCT/EP2008/056305 WO2008142133A1 (en) | 2007-05-24 | 2008-05-22 | Lyophilised antigen composition |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200901434A1 EA200901434A1 (ru) | 2010-06-30 |
EA018201B1 true EA018201B1 (ru) | 2013-06-28 |
Family
ID=39714209
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201300101A EA201300101A1 (ru) | 2007-05-24 | 2008-05-22 | Лиофилизированная антигенная композиция |
EA201300102A EA201300102A1 (ru) | 2007-05-24 | 2008-05-22 | Лиофилизированная антигенная композиция |
EA200901434A EA018201B1 (ru) | 2007-05-24 | 2008-05-22 | Лиофилизированная антигенная композиция |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201300101A EA201300101A1 (ru) | 2007-05-24 | 2008-05-22 | Лиофилизированная антигенная композиция |
EA201300102A EA201300102A1 (ru) | 2007-05-24 | 2008-05-22 | Лиофилизированная антигенная композиция |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20090035360A1 (ru) |
EP (3) | EP2148697B1 (ru) |
JP (1) | JP5331105B2 (ru) |
KR (2) | KR101238795B1 (ru) |
CN (1) | CN101678091A (ru) |
AR (1) | AR066676A1 (ru) |
AU (1) | AU2008252911B2 (ru) |
BR (1) | BRPI0811228A2 (ru) |
CA (1) | CA2687632C (ru) |
CL (1) | CL2008001491A1 (ru) |
CY (1) | CY1113446T1 (ru) |
DK (1) | DK2148697T3 (ru) |
EA (3) | EA201300101A1 (ru) |
ES (1) | ES2395333T3 (ru) |
HR (1) | HRP20121019T1 (ru) |
MX (1) | MX2009012381A (ru) |
PE (1) | PE20090281A1 (ru) |
PL (1) | PL2148697T3 (ru) |
PT (1) | PT2148697E (ru) |
SI (1) | SI2148697T1 (ru) |
TW (1) | TW200911304A (ru) |
UY (1) | UY31101A1 (ru) |
WO (1) | WO2008142133A1 (ru) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TW200726479A (en) | 2005-04-12 | 2007-07-16 | Univ Duke | Method of inducing neutralizing antibodies to human immunodeficiency virus |
EP1951281B1 (en) | 2005-10-17 | 2015-04-15 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Wt1 hla class ii-binding peptides and compositions and methods comprising same |
US9265816B2 (en) | 2006-04-10 | 2016-02-23 | Sloan Kettering Institute For Cancer Research | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
EP2139516A4 (en) * | 2007-04-13 | 2011-06-29 | Univ Duke | METHOD FOR INDUCING NEUTRALIZING ANTIBODIES AGAINST THE HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS |
AU2010232915A1 (en) * | 2009-04-03 | 2011-10-20 | Duke University | Formulation for inducing broadly reactive neutralizing anti-HIV antibodies |
GB0910046D0 (en) * | 2009-06-10 | 2009-07-22 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel compositions |
GB0910045D0 (en) * | 2009-06-10 | 2009-07-22 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel compositions |
PT3023106T (pt) | 2010-12-14 | 2019-11-04 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composição antigénica de micobactéria |
MX2014000893A (es) * | 2011-07-22 | 2014-05-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Purificacion del antigeno expresado preferentemente en melanoma. |
US20150104413A1 (en) | 2012-01-13 | 2015-04-16 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof |
US10815273B2 (en) | 2013-01-15 | 2020-10-27 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof |
HUE052541T2 (hu) | 2013-01-15 | 2021-05-28 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Immunogén WT-1 peptidek és eljárások azok alkalmazására |
US10076567B2 (en) | 2013-09-27 | 2018-09-18 | Duke University | MPER-liposome conjugates and uses thereof |
PT3089754T (pt) * | 2013-12-31 | 2021-07-23 | Infectious Disease Res Inst | Formulações de vacina de dose única |
CA2943050A1 (en) * | 2014-03-25 | 2015-10-01 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Methods for enhancing the immunostimulation potency of aluminum salt-adsorbed vaccines |
SG10202012205XA (en) | 2015-11-06 | 2021-01-28 | Adjuvance Technologies Inc | Triterpene saponin analogues |
CN110035770B (zh) | 2016-12-07 | 2023-06-16 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 新方法 |
SG11202001826YA (en) * | 2017-10-16 | 2020-03-30 | Adjuvance Technologies Inc | Triterpene saponin analogues |
WO2020016322A1 (en) | 2018-07-19 | 2020-01-23 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Processes for preparing dried polysaccharides |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1547581A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-06-29 | Vectron Therapeutics AG | Liposomal vaccine for the treatment of human hematological malignancies |
US6949520B1 (en) * | 1999-09-27 | 2005-09-27 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon |
US7049302B1 (en) * | 1998-08-10 | 2006-05-23 | Antigenics Inc. | Compositions of CPG and saponin adjuvants and uses thereof |
Family Cites Families (43)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5827A (en) | 1848-10-03 | Improved table-cutlery | ||
US666A (en) | 1838-04-02 | Sfbing-bock for coagh and railroad-gab | ||
ATE160361T1 (de) | 1987-01-07 | 1997-12-15 | Imp Cancer Res Tech | Humane polymorphe epitheliale mucin polypeptide zur verwendung in therapie und diagnose |
US6054438A (en) | 1987-01-07 | 2000-04-25 | Imperial Cancer Research Technology Limited | Nucleic acid fragments encoding portions of the core protein of the human mammary epithelial mucin |
US5057540A (en) * | 1987-05-29 | 1991-10-15 | Cambridge Biotech Corporation | Saponin adjuvant |
US4963484A (en) * | 1988-01-29 | 1990-10-16 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Genetically engineered polypeptides with determinants of the human DF3 breast carcinoma-associated antigen |
US5278302A (en) * | 1988-05-26 | 1994-01-11 | University Patents, Inc. | Polynucleotide phosphorodithioates |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
US5256643A (en) * | 1990-05-29 | 1993-10-26 | The Government Of The United States | Human cripto protein |
SE466259B (sv) | 1990-05-31 | 1992-01-20 | Arne Forsgren | Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal |
EP0468520A3 (en) | 1990-07-27 | 1992-07-01 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences |
US5744144A (en) | 1993-07-30 | 1998-04-28 | University Of Pittsburgh University Patent Committee Policy And Procedures | Synthetic multiple tandem repeat mucin and mucin-like peptides, and uses thereof |
US5688506A (en) | 1994-01-27 | 1997-11-18 | Aphton Corp. | Immunogens against gonadotropin releasing hormone |
WO1995026204A1 (en) | 1994-03-25 | 1995-10-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs |
US6207646B1 (en) * | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
WO1996002555A1 (en) | 1994-07-15 | 1996-02-01 | The University Of Iowa Research Foundation | Immunomodulatory oligonucleotides |
US5830753A (en) * | 1994-09-30 | 1998-11-03 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursor dage and uses thereof. |
US5981215A (en) | 1995-06-06 | 1999-11-09 | Human Genome Sciences, Inc. | Human criptin growth factor |
US5666153A (en) * | 1995-10-03 | 1997-09-09 | Virtual Shopping, Inc. | Retractable teleconferencing apparatus |
US6130043A (en) | 1997-05-02 | 2000-10-10 | Abbott Laboratories | Reagents and methods useful for detecting diseases of the prostate |
JP2001517638A (ja) * | 1997-09-25 | 2001-10-09 | スローン − ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ | 小細胞肺癌に対するフコーシルgm−1−klh接合体ワクチン |
GB9727262D0 (en) | 1997-12-24 | 1998-02-25 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
AU4823599A (en) | 1998-06-22 | 2000-01-10 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Prostate cancer-associated genes |
US20030235557A1 (en) * | 1998-09-30 | 2003-12-25 | Corixa Corporation | Compositions and methods for WT1 specific immunotherapy |
WO2000044899A1 (en) | 1999-01-29 | 2000-08-03 | Corixa Corporation | Her-2/neu fusion proteins |
HUP0200366A2 (en) | 1999-03-11 | 2002-06-29 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
DK1265915T3 (da) | 2000-02-23 | 2011-02-14 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Nye forbindelser |
US20040022814A1 (en) * | 2000-06-15 | 2004-02-05 | O'hagan Derek | Microparticles with adsorbent surfaces, methods of making same, and uses thereof |
GB0022742D0 (en) * | 2000-09-15 | 2000-11-01 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
JP2004509970A (ja) | 2000-09-26 | 2004-04-02 | ハイブリドン・インコーポレイテッド | 位置的化学変化による免疫刺激オリゴヌクレオチドアナログの免疫刺激活性の調節 |
US20030031684A1 (en) | 2001-03-30 | 2003-02-13 | Corixa Corporation | Methods for the production of 3-O-deactivated-4'-monophosphoryl lipid a (3D-MLA) |
US7553494B2 (en) * | 2001-08-24 | 2009-06-30 | Corixa Corporation | WT1 fusion proteins |
EP1427826B1 (en) | 2001-09-20 | 2011-04-20 | Glaxo Group Limited | HIV- RT-nef-Gag codon optimised DNA vaccines |
WO2003035836A2 (en) | 2001-10-24 | 2003-05-01 | Hybridon Inc. | Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends |
GB0218821D0 (en) * | 2002-08-13 | 2002-09-18 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel compositions |
EP1575611A4 (en) * | 2002-12-23 | 2007-10-03 | Hope City | VACCINIA ANKARA MODIFIED EXPRESSING P53 IN IMMUNOTHERAPY OF CANCER |
GB0323968D0 (en) | 2003-10-13 | 2003-11-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic compositions |
GB0409940D0 (en) * | 2004-05-04 | 2004-06-09 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
GB0411411D0 (en) | 2004-05-21 | 2004-06-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccines |
JP2008502732A (ja) * | 2004-06-12 | 2008-01-31 | ファーマ パシフィック プロプリエタリイ リミテッド | ワクチンに対する免疫応答を増強する方法 |
GB0417494D0 (en) | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
WO2006092017A1 (en) | 2005-03-02 | 2006-09-08 | Solbec Pharmaceuticals Limited | Glycoalkaloid and tlr agonist combinations and various uses thereof |
EP2385060A3 (en) * | 2005-06-17 | 2012-02-15 | Mannkind Corporation | Methods and compositions to elicit multivalent immune responses against dominant and subdominant epitopes, expressed on cancer cells and tumor stroma |
-
2008
- 2008-05-22 US US12/125,182 patent/US20090035360A1/en not_active Abandoned
- 2008-05-22 EA EA201300101A patent/EA201300101A1/ru unknown
- 2008-05-22 AU AU2008252911A patent/AU2008252911B2/en not_active Ceased
- 2008-05-22 CA CA2687632A patent/CA2687632C/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-05-22 AR ARP080102167A patent/AR066676A1/es not_active Application Discontinuation
- 2008-05-22 EA EA201300102A patent/EA201300102A1/ru unknown
- 2008-05-22 KR KR1020097025005A patent/KR101238795B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2008-05-22 PL PL08759906T patent/PL2148697T3/pl unknown
- 2008-05-22 BR BRPI0811228-2A2A patent/BRPI0811228A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-05-22 TW TW097119008A patent/TW200911304A/zh unknown
- 2008-05-22 CN CN200880017245A patent/CN101678091A/zh active Pending
- 2008-05-22 DK DK08759906.4T patent/DK2148697T3/da active
- 2008-05-22 ES ES08759906T patent/ES2395333T3/es active Active
- 2008-05-22 MX MX2009012381A patent/MX2009012381A/es active IP Right Grant
- 2008-05-22 PE PE2008000879A patent/PE20090281A1/es not_active Application Discontinuation
- 2008-05-22 EP EP08759906A patent/EP2148697B1/en not_active Not-in-force
- 2008-05-22 EP EP12157796A patent/EP2476431A1/en not_active Withdrawn
- 2008-05-22 EA EA200901434A patent/EA018201B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-05-22 KR KR1020117016237A patent/KR20110091817A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-05-22 UY UY31101A patent/UY31101A1/es unknown
- 2008-05-22 CL CL2008001491A patent/CL2008001491A1/es unknown
- 2008-05-22 WO PCT/EP2008/056305 patent/WO2008142133A1/en active Application Filing
- 2008-05-22 PT PT87599064T patent/PT2148697E/pt unknown
- 2008-05-22 EP EP20120157797 patent/EP2489367A1/en not_active Withdrawn
- 2008-05-22 SI SI200830836T patent/SI2148697T1/sl unknown
- 2008-05-22 JP JP2010508850A patent/JP5331105B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-11-15 US US12/946,171 patent/US8557247B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-12-10 CY CY20121101196T patent/CY1113446T1/el unknown
- 2012-12-12 HR HRP20121019AT patent/HRP20121019T1/hr unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7049302B1 (en) * | 1998-08-10 | 2006-05-23 | Antigenics Inc. | Compositions of CPG and saponin adjuvants and uses thereof |
US6949520B1 (en) * | 1999-09-27 | 2005-09-27 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon |
EP1547581A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-06-29 | Vectron Therapeutics AG | Liposomal vaccine for the treatment of human hematological malignancies |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA018201B1 (ru) | Лиофилизированная антигенная композиция | |
KR20210135494A (ko) | 지질 나노입자의 제조 방법 | |
ES2407994T3 (es) | Utilización de ligando Flt3 para reforzar las respuestas inmunológicas en la inmunización con ARN | |
US6749856B1 (en) | Mucosal cytotoxic T lymphocyte responses | |
HU229642B1 (en) | Vaccines against cancers | |
US8383598B2 (en) | Immune regulatory oligonucleotide (IRO) compounds to modulate toll-like receptor based immune response | |
JP6786074B2 (ja) | エキソソーム標的dnaワクチン | |
US20240026317A1 (en) | PAN-RAS mRNA CANCER VACCINES | |
JP2017506232A (ja) | 腫瘍を治療するための阻害性オリゴヌクレオチド | |
Thalhamer et al. | Designing immune responses with genetic immunization and immunostimulatory DNA sequences | |
CN107207614B (zh) | 嵌合蛋白 | |
US20040191214A1 (en) | Nucleoside vaccine adjuvants | |
JP2005247861A (ja) | 免疫増強特性を有するムチンペプチド | |
AU2013213688A1 (en) | Lyophilised antigen composition | |
JP2021000093A (ja) | エキソソーム標的dnaワクチン | |
WO2024097894A1 (en) | Compositions and methods of ribonucleic acid vaccines encoding nye-so-1 | |
JP2024522215A (ja) | マルチプレックス化TP53および汎RAS mRNAがんワクチン | |
Andreasson | Vaccination against Her2/neu-expressing cancer using chimeric virus-like particles |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KG MD TJ TM |
|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): BY KZ RU |