EA016083B1

EA016083B1 - СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ НЕХОДЖКИНСКОЙ ЛИМФОМЫ С ПОМОЩЬЮ СЛИТОЙ МОЛЕКУЛЫ TACI-Ig

Info

Publication number: EA016083B1
Application number: EA200800560A
Authority: EA
Inventors: Эрве Броли; Эрик Сиверс; Арно Итье; Шарон Дж. Басби; Стефен М. Анселл; Ян Эрстрем; Иван Нестеров
Original assignee: Займоджинетикс, Инк.; Арес Трейдинг С.А.; Мэйо Фаундейшн Фор Медикал Эдьюкейшн Энд Рисерч
Priority date: 2005-08-09
Filing date: 2006-08-09
Publication date: 2012-02-28
Also published as: WO2007019575A2; US20070071760A1; AU2006278229A1; NO20081149L; AU2006278229B2; IL188403A0; CA2618765A1; CN101262876A; EP1922080A2; ZA200801354B; KR20080056714A; WO2007019575A3; EA200800560A1; US7842292B2; IL188403A; UA93516C2; JP2009507777A; MX2008001661A; AR059945A1

Abstract

Настоящее изобретение предоставляет способ лечения B неходжкинской лимфомы, включающий введение пациенту, нуждающемуся в лечении, слитой молекулы TACI-Ig в количестве, достаточном для супрессии индуцирующих пролиферацию функций BlyS и APRIL.

Description

Заявка на данное изобретение претендует на приоритет по предварительной заявке США № 60/706912, поданной 9 августа 2005 г., содержание которой приведено в описании в качестве ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способам и композициям для лечения заболеваний и расстройств, включая гиперпролиферативные расстройства, рак, воспалительные заболевания или расстройства иммунной системы, включающим в себя введение слитого белка ТАС1-1д, который блокирует функции факторов роста семейства ФНО.

Уровень техники

Семейство лиганда/рецептора ВЬу8.

Установлено, что три рецептора, ТАС1 (трансмембранный активатор или кальциймодулирующий посредник лиганда циклофилина), ВСМА (антиген созревания В-клеток) и ВАТР-К (рецептор фактора активации В-клеток, относящийся к семейству ФНО), обладают уникальным сродством связывания двух факторов роста (ВЬу8 (стимулятор В-лимфоцитов) и АРШЬ (лиганд, индуцирующий пролиферацию) (Маг51ег5 е! а1. Сигг Вю1. 2000; 10(13): 785-788; Тйотркоп е! а1. 8с1епсе 2001; 293: 2108-2111). ТАС1 и ВСМА связывают как ВЬу8. так и АРШЬ, в то время как ВАРР-К, по-видимому, способен связывать с высоким сродством только ВЬу8 (Маг51ег5 е! а1. Сигг Вю1. 2000; 10(13): 785-788; Тйотркоп е! а1. 8с1епсе. 2001; 293: 2108-2111). Как результат, ВЬу8 способен передавать сигналы посредством всех трех рецепторов, тогда как АРШЬ, по-видимому, способен передавать сигналы только посредством ТАС1 и ВСМА. Кроме того, циркулирующие гетеротримерные комплексы ВЬу8 и АРШЬ (группировки трех белков, содержащие одну или две копии каждого из ВЬу8 и АРШЬ) были идентифицированы в образцах сыворотки, взятых от пациентов с системными иммунными ревматическими заболеваниями, и было показано, что они индуцируют пролиферацию В-клеток ш уйго (Коксйке е! а1. 1. 1ттипо1. 2002; 169: 4314-4321). Среди белков, слитых с 1д, для всех трех рецепторов только ТАС1-Рс5 был способен блокировать биологическую активность гетеротримерных комплексов (Коксйке е! а1. 1. 1ттипо1. 2002; 169: 4314-4321).

ВЬу8 и АРШЬ являются мощными стимуляторами созревания, пролиферации и выживания В-клеток (Сго§5 е! а1. Ыа!иге. 2000; 404: 995-999. Сго§5 е! а1. 1ттцпйу. 2001; 15(2): 289-302. Сгоот е! а1. 1. Сйп. 1пуе§!. 2002; 109(1): 59-68). ВЬу8 и АРШЬ могут быть необходимы для персистенции аутоиммунных заболеваний, особенно тех, в которых участвуют В-клетки. У трансгенных мышей, созданных для экспрессии высоких уровней ВЬу8, развиваются иммунные клеточные расстройства и появляются симптомы, подобные наблюдаемым у больных системной красной волчанкой (8ЬЕ) (Сйекоп е! а1. Кеу18ей дшйе1ше8 £ог Фадпобщ апй 1геа1теп!. В1оой. 1996; 87: 4990-4997. Сйеета е! а1. АгФгйй Кйеит. 2001; 44(6): 1313-1319). Подобным образом, повышенные уровни ВЬу8/АРШЬ находили в образцах сыворотки, взятых от пациентов с 8ЬЕ и других пациентов с различными аутоиммунными заболеваниями, такими как ревматоидный артрит (КА) (Козсйке е! а1. 1. 1ттипо1. 2002; 169:4314-4321; МапеИе X., Апп Кйеит Όίδ. 2003; 62(2): 168-171; Найле е! а1. 1. Ехр. Мей. 1998; 188(6): 1185-1190), расширяя связь ВЬу8 и/или АРШЬ и заболеваний, опосредованных В-клетками, от животных моделей до человека.

В-клеточные опухоли.

В-клеточные опухоли представляют собой гетерогенную группу лимфопролиферативных онкологических заболеваний с различной структурой клинических проявлений и реакций на терапию. Полный прогноз может быть рассчитан с допустимой точностью путем определения гистологического типа опухоли, стадии заболевания и ранее полученного лечения. Клинические результаты в основном ассоциируются с общей степенью злокачественности заболевания. В-клеточные опухоли включают в себя спектр заболеваний от неактивных хронических лимфоцитарных лейкозов, которые часто в течение нескольких лет развиваются до очень агрессивных лимфом с намного более короткой динамикой развития. Хотя в конечном счете и неизлечимые, неактивные В-клеточные опухоли обычно ассоциируются с относительно хорошим прогнозом, со средней выживаемостью в пределах 10 лет.

Лечение более агрессивных типов В-клеточных опухолей может осуществляться с помощью интенсивных режимов комбинированной химиотерапии, и приблизительно половина пациентов выживает в течение не менее 5 лет. Несмотря на то что добавление к терапевтическим режимам ритуксимаба™ в основном улучшало клинические результаты, В-клеточные опухоли часто рецидивируют в течение первых двух лет после начального лечения. Ремиссия часто достигается при повторном лечении, если гистологически сохраняется низкая степень злокачественности заболевания. К сожалению, пациенты, у которых имеется или развилась агрессивная форма В-клеточных опухолей, имеют худший прогноз и составляют нерешенную медицинскую проблему. Таким образом, существует давно ощущаемая потребность в разработке более эффективных способов лечения В-клеточных опухолей, включая ходжкинскую и неходжкинскую лимфомы.

- 1 016083

Сущность изобретения

Изобретение связано со способами лечения неходжскинской лимфомы. Способы согласно изобретению включают в себя введение пациенту композиции, содержащей константный домен человеческого иммуноглобулина и внеклеточный домен ТАС1 или его фрагмент, который связывает ВЬу8 и/или АРГОЕ.

В одном варианте осуществления изобретение связано со способами лечения неходжскинской лимфомы с помощью слитой молекулы ТАС1-1д, включающей в себя внеклеточный домен ТАС1 или любой его фрагмент, который сохраняет способность связывать ВЬу8 и/или АРГОЕ.

В другом варианте осуществления изобретение связано со способами лечения неходжкинской лимфомы, включающими в себя введение пациенту слитой молекулы, содержащей константную цепь человеческого иммуноглобулина и внеклеточный домен ТАС1 или фрагмент внеклеточного домена ТАС1, который связывает ВЬу8 и/или АРГОЕ. Один предпочтительный фрагмент внеклеточного домена ТАС1 содержит один или два мотива повторяющегося цистеина. Другим предпочтительным фрагментом является фрагмент, включающий в себя аминокислоты 30-110 внеклеточного домена ТАС1. Еще одним предпочтительным фрагментом является фрагмент, включающий в себя аминокислоты 1-154 внеклеточного домена ТАС1 (8ЕО ГО N0: 1).

В другом варианте осуществления изобретение связано со способами лечения неходжкинской лимфомы путем введения пациенту композиции, включающей в себя слитый полипептид, ТАС1-Ее5, содержащий константный домен человеческого иммуноглобулина Ее5, имеющий последовательность, представленную как 8Е0 ГО N0: 2, и внеклеточный домен ТАС1, имеющий последовательность, представленную как 8Е0 ГО N0: 1.

В еще одном варианте осуществления изобретение связано со способами лечения неходжкинской лимфомы путем введения пациенту композиции, включающей в себя слитый полипептид, содержащий константный домен человеческого иммуноглобулина с последовательностью, представленной как 8Е0 ГО N0: 2, и полипептид, который связывает ВЬу8 и/или АРИГО и который не менее чем на 50, предпочтительно на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или на 99% идентичен 8Е0 ГО N0: 1.

Другие В-клеточные злокачественные образования, которые поддаются лечению с помощью способов согласно изобретению путем введения пациенту слитого полипептида, включающего в себя константную цепь человеческого иммуноглобулина и внеклеточный домен ТАС1 или фрагмент внеклеточного домена ТАС1, который связывает ВЬу8 и/или АРИ1Б. К таким В-клеточным злокачественным образованиям относятся, не ограничиваясь ими, острый лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, миелобластный лейкоз, промиелоцитарный лейкоз, миеломоноцитарный лейкоз, моноцитарная эритролейкемия, хронический лейкоз, хронический миелоцитарный (гранулоцитарный) лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, истинная полицитемия, болезнь Ходжкина, множественная миелома и макроглобулинемия Вальденстрема.

В одном предпочтительном варианте осуществления способы согласно изобретению включают в себя введение пациенту с неходжкинской лимфомой слитой молекулы ТАС1-1д в количестве от 0,01 до 10 мг на 1 кг веса тела пациента. Слитую молекулу ТАС1-1д можно вводить неоднократно с заданными интервалами. Предпочтительно, чтобы молекулу вводили по меньшей мере 5 раз в течение 4-недельного интервала. За этим начальным лечением слитым полипептидом ТАС1-1д может следовать еженедельное введение полипептида по меньшей мере в течение еще 2 дополнительных недель, и более предпочтительно полипептид вводят еженедельно в течение дополнительных 2-30 недель.

В соответствии со способами согласно изобретению слитый полипептид ТАС1-1д можно вводить пациенту с неходжкинской лимфомой подкожно, перорально или внутривенно и, необязательно, в комбинации с другими лекарственными средствами. К таким лекарственным средствам относятся, не ограничиваясь ими, бифосфонат, эритропоэтин, факторы роста гранулоцитов, колониестимулирующий фактор гранулоцитов, лекарственные средства для устранения боли, мелфалан, винкристин, доксорубицин, талидомид и аналоги нуклеозидов.

В одном варианте осуществления изобретения ТАС1-1д вводят в комбинации с бортезомибом. ТАС1-1д можно дозировать, как описано выше, а бортезомиб вводят в дозе приблизительно 1,3 мг/м²дважды в неделю в течение 2 недель, с последующим свободным от приема 10-дневным периодом. Это представляет собой один цикл лечения. Необязательно, бортезомиб можно вводить внутривенно. Мониторинг реакции на лечение проводят, как описано выше для ТАС1-1д в отдельности, и могут назначаться дополнительные циклы лечения ТАС1-1д и/или бортезомибом. ТАС1-1д можно вводить в дозе, как описано выше, или в более низкой дозе в комбинации с бортезомибом в дозе, описанной здесь, или с бортезомибом в более низкой дозе. Дозы ТАС1-1д и бортезомиба можно вводить одновременно или чередуя с введением ТАС1-1д с последующим циклом бортезомиба или циклом бортезомиба с последущим циклом ТАС1-1д. Это введение можно повторить.

ТАС1-1д можно вводить пациентам, у которых развилась резистенция или которые не отвечают на другие способы лечения, включая, не ограничиваясь ими, лечение бортезомибом.

Эти и другие варианты осуществления настоящего изобретения описаны более подробно ниже в этом документе.

- 2 016083

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Алгоритм принятия решения о повышении дозы при лечении ТАС1-Рс5.

Фиг. 2. Диаграмма областей тела пациента, которые подходят для подкожных инъекций молекулы ТАС1-1д.

Фиг. 3. 8ЕО ГО N0: 1.

Фиг. 4 8ЕО ГО N0: 2.

Подробное описание изобретения

С учетом того что настоящее изобретение можно осуществить в различных формах, ниже приведено описание нескольких вариантов осуществления, при этом, однако, предполагается, что настоящее раскрытие необходимо рассматривать лишь как примеры осуществления изобретения, не предназначенные для ограничения изобретения специфичными иллюстрированными вариантами осуществления. Заголовки предоставлены только для удобства и не должны ни в коем случае рассматриваться как ограничение объема изобретения. Варианты осуществления, иллюстрированные под любым заголовком, можно комбинировать с вариантами осуществления, иллюстрированными под любым другим заголовком.

Используемые числовые значения в различных диапазонах, определяемых в данном изобретении, если не указано иначе, указаны как приближенные, как если бы и минимальным и максимальным значениям в пределах заявленных диапазонов предшествовало бы слово приблизительно. Таким образом, можно использовать небольшие вариации выше и ниже заявленных диапазонов для достижения в основном таких же результатов, как и значения в пределах указанных диапазонов. Используемые здесь термины около и приблизительно в отношении числовых значений соответствуют их обычным значениям для специалистов в области фармацевтических наук или в связанных с ней областях. Кроме того, под указанными диапазонами следует понимать непрерывные диапазоны, включающие каждое значение между указанными минимальным и максимальным значениями, а также любые диапазоны, которые могут быть заключены в пределах указанных диапазонов.

Настоящее изобретение относится к способам уменьшения патологической пролиферации гемопоэтических клеток у пациентов с помощью ингибирования взаимодействия ВЬу8 и/или АРИ1Б с их рецепторами. А именно, в указанных способах применяется ингибитор, включающий в себя:

1) полипептид, который содержит домен, по меньшей мере частично идентичный внеклеточному домену ТАС1 или его фрагменту, и связывает ВЬу8 и/или АРИ1Б и

2) константную цепь человеческого иммуноглобулина. В способах согласно изобретению применяется слитая молекула, содержащая константную цепь человеческого иммуноглобулина и любой полипептид с последовательностью, идентичной не менее чем на 50% внеклеточному домену ТАС1, который может связывать лиганды ВЬу8 и/или АРИ1Б и который предпочтительно на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99% идентичен внеклеточному домену ТАС1. В патентах США № 5969102, 6316222 и 6500428 и заявках на патент США № 09/569245 и 09/627206 (которые включены в настоящее описание в виде ссылки в полном объеме) раскрыты последовательности внеклеточного домена ТАС1, а также специфичных фрагментов внеклеточного домена ТАС1, которые взаимодействуют с лигандами ТАС1, включая ВЬу8 и АРИЕ. Один предпочтительный фрагмент внеклеточного домена ТАС1 включает в себя один или два мотива из повторяющегося цистеина. Другим предпочтительным фрагментом является фрагмент, включающий в себя аминокислоты 30-110 внеклеточного домена ТАС1. Еще одним предпочтительным фрагментом является фрагмент, включающий в себя аминокислоты 1-154 внеклеточного домена ТАС1 (8ЕО ГО N0: 1).

К другим слитым молекулам, используемым в способах согласно изобретению, относятся слитый полипептид из константной цепи человеческого иммуноглобулина и всего внеклеточного домена ТАС1 или его ортолога или слитый полипептид из константной цепи человеческого иммуноглобулина и любого фрагмента внеклеточного домена ТАС1, который способен связывать лиганды АРШЬ и ВЬу8. Любая из слитых молекул, применяемых в способах согласно изобретению, может называться слитой молекулой ТАС1-1д.

ТАС1-Рс5 является одной из слитых молекул ТАС1-1д, полезных для способов согласно изобретению. ТАС1-Рс5 является рекомбинантным слитым полипептидом, включающим в себя внеклеточную, связывающую лиганд часть рецептора ТАС1 приблизительно от аминокислоты 1 приблизительно до аминокислоты 154 (8Е0 ГО N0: 1) и модифицированную часть Рс человеческого 1дО, Рс5 (8Е0 ГО N0: 2). Другие молекулы ТАС1-1д, используемые в способах согласно изобретению, включают в себя слитую молекулу, содержащую полипептид с 8Е0 ГО N0: 2 и полипептид, который может связывать ВЬу8 и который по меньшей мере на 50, предпочтительно на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или на 99% идентичен 8Е0 ГО N0: 1.

Варианты осуществления согласно изобретению включают в себя способы применения слитой молекулы ТАС1-1д для лечения неходжкинской лимфомы. К другим гематологическим злокачественным образованиям, лечение которых может осуществляться с применением способов согласно изобретению, относятся лейкозы (острый лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, острый миелоцитарный лейкоз, миелобластный лейкоз, промиелоцитарный лейкоз, миеломоноцитарный лейкоз, моноцитарная эритролейкемия, хронический лейкоз, хроническая миелоцитарная (гранулоцитарная) лейкемия, хронический лим

- 3 016083 фоцитарный лейкоз, истинная полицитемия), лимфомы (болезнь Ходжкина, множественная миелома, макроглобулинемия Вальденстрема и болезнь тяжелых цепей), аутоиммунные заболевания, такие как ревматоидный артрит и системная красная волчанка, или для уменьшения числа циркулирующих зрелых В-клеток и клеток, секретирующих иммуноглобулины, и растворимых иммуноглобулинов, ассоциированы с такими заболеваниями.

Варианты осуществления также включают в себя способы лечения путем введения пациенту слитой молекулы, включающей в себя константный домен человеческого иммуноглобулина и полипептид, содержащий любой фрагмент внеклеточного домена ТАС1, который может связывать ВЬу8 и/или АРШЬ.

Слитую молекулу ТАС1-1д можно вводить пациенту перорально, внутривенно или подкожно.

Композиции ТАС1-1д, используемые в способах согласно изобретению, можно изготовить и хранить в виде замороженного, стерильного, изоосмотического раствора. Такие композиции могут содержать и другие активные компоненты и наполнители, такие, например, как хлорид натрия, фосфатный буфер и гидроокись натрия или о-фосфорную-кислоту (рН 6,0). Композиции ТАС1-1д можно вводить пациенту в комбинации с другими лекарственными средствами. К таким лекарственным средствам относятся, не ограничиваясь ими, бифосфонат, эритропоэтин, факторы роста гранулоцитов, колониестимулирующий фактор гранулоцитов и лекарственные средства для устранения боли. Способы согласно изобретению можно применять в комбинации с другими способами лечения В-клеточных опухолей. К таким другим способам лечения относятся, не ограничиваясь ими, химиотерапия, лучевая терапия и генная терапия. Композиции ТАС1-1д можно вводить до, одновременно или более предпочтительно после других способов лечения.

Показано, что ТАС1-Ре5 ингибирует ВЬу 8-опосредованную активацию пролиферации В-клеток ίη νίΐτο. Лечение мышей ТАС1-Ре5 приводит к частичному блокированию развития В-клеток, которое оказывает минимальный эффект на предшественники В-клеток в костном мозге и на другие линии клеток, включая Т-клетки, моноциты и нейтрофилы периферической крови. Трансгенные мыши, созданные для повышенной экспрессии растворимой формы рецептора ТАС1 в крови, продуцируют меньше зрелых Вклеток и имеют меньшие уровни циркулирующих антител. Трансгенные мыши тТАС1-Ре5 имеют нормальное количество клеток в тимусе, костном мозге и мезентериальных лимфатических узлах. Не наблюдалось никаких значимых различий в популяциях Т-клеток в тимусе, лимфатических узлах и селезенке (Сто88 е! а1. 1ттипйу. 2001; 15(2): 289-302).

Далее, ТАС1-1д может ингибировать антиген-специфическую продукцию антител при иммунном ответе у мышей при введении либо во время первичного ответа, либо во время вторичного ответа на антиген. В этих исследованиях не наблюдали никаких эффектов иммунизации антигеном ех νίνο на реакцию Т-клеток. В животной модели системной красной волчанки лечение слитыми белками ТАС1-1д было эффективным в ограничении начала и прогрессии заболевания (Сто88 е! а1. №11иге. 2000; 404: 995-999). Подобным образом, в мышиной модели коллаген-индуцированного артрита ТАС1-1д был способен ингибировать развитие коллаген-специфических антител и снижать как частоту развития воспаления, так и скорость развития заболевания (Сто88 е! а1. 1ттипйу. 2001; 15(2): 289-302).

Композицию, содержащую слитую молекулу ТАС1-1д, можно вводить пациенту неоднократно в течение 4-недельного периода. Например, пациент может получать пять подкожных инъекций молекулы ТАС1-1д в течение этого периода в режиме, раскрытом в табл. 1. После 4-недельного периода лечения следует 4-недельный период последующего врачебного наблюдения (табл. 1). В примере 3 предоставлены другие детали этого протокола.

- 4 016083

Таблица 1

Режим лечения слитой молекулой ТЛС'Т-Щ

	скрининг	Дни введения (+ 1 день)	Дни последующего наблюдения (+1 день)
Действие		День 1	День 7	День 14	День21	День 28	День 35	День 42	День 49	День 56
1СЕ/Оет/ история заболевания/ Ргец	X
Вес/рост		X								X
Промежуточная история/РЕ	X	X	X	X	X	X	X	X	X	X
Жизненно важные функции организма'	X	X	X	X	X	X	X	X	X	X
Гематология	X	X	X	X	X	X	X	X	X	X
Химический анализ сыворотки	X	X	X	X	X	X	X	X	X	X
Панель коагуляции		X		X			X			X
Поточная цитометрия	X	X	X	X	X	X	X	X	X	X
Иммуноглобулины	X	X		X		X		X		X
Исследование мочи	X									X
Восточная объединенная группа онкологов	X									X
Повторное определение стадии опухоли²	X									X
РК³		X	X	X		X		X
Биопсия опухоли⁴	X									X
Л1ГГИ-ТЛС1- антвтела⁷		X								X
Ρϋ⁵	X	X	X	X		X		X		X
Нежелательные явления и сопутствующие лекарственные средства и Ргосз⁶	X	X	X	X	X	X	X	X	X	X

показатели жизненно важных функций (У8) будут измеряться перед введением каждой дозы ТЛС1-Ес5. У8 после введения первой дозы ТЛС1-Ес5 будут измеряться через 1, 2, 4 и 8 ч. Все другие последующие дозы будут вводиться через 1 и 2 ч.

²Скрининг компьютерных томограмм и позитронно-эмиссионных томограмм выполняли не более чем за 21 день до лечения; повторные исследования в течение 5 дней после 56 дня. См. Руководство по проведению исследования для определения опухолеспецифических индикаторов тяжести заболевания и оценки костного мозга (если показано).

³День 1 - до введения, в 2, 4 и 8 ч, затем в 24 ч (день 2), 48 ч (день 3), 72 ч (день 4), 168 ч (день 7), 336 ч (день 14), 672 ч (день 28) и 1008 ч (день 42) ч. Значения перед вторым введением (168 ч, день 7), третьим введением (336 ч, день 14) и пятым введением (672 ч, день 28) преднамеренно соответствуют минимальным концентрациям.

⁴В случае возможности и необходимости получения с точки зрения исследователя. В Руководстве по проведению исследования изложен способ забора ткани и процедуры исследования.

⁵В Руководстве по проведению исследования изложена совокупность фармакодинамических маркеров дополнительного исследования: сывороточные уровни свободных АРКИ, и ВЬу8 и комплекса ВЬу8/ТЛС1-Ес5.

⁶У субъектов будут отслеживать восстановление обоих классов лимфоцитов и иммуноглобулинов либо до исходного уровня до лечения, либо до абсолютного количества лимфоцитов >800/мм³, 1«(.г>400 мг/дл, 1дЛ>65 мг/дл и 1дМ>40 мг/дл. Во время периодов пролонгированного отслеживания иммунологического восстановления будут регистрировать заболеваемость, тип и тяжесть инфекций.

⁷Анти-ТЛС1-антитела также будут накапливаться в день 85 у пациентов, не включенных в добавочное исследование.

- 5 016083

Пациентам, у которых обнаруживается улучшение или, по меньшей мере, стабилизация состояния, можно проводить лечение слитой молекулой ТАС1-1д в течение дополнительного периода. Например, таким пациентам можно вводить недельную дозу слитой молекулы ТАС1-1д в течение дополнительных 2-30 недель. В табл. 2 представлен примерный пролонгированный режим введения молекулы ТАС1-1д пациентам.

Таблица 2

Режим пролонгированного лечения молекулой ТАС1-1д

Часть 1

Действие

Неделя

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

Квалифицирован ое согласие/ тест на беременность

X

Введение ТАС1

X

Вес/рост

X

Промежуточная история¹

X

РЕ \ν/ν8

X

Гематология

X

Химический анализ сыворотки

X

Панель коагуляции

X

Поточная цитометрия

X

Иммуноглобулины

X

Исследование мочи

X

Восточная объединенная группа онкологов

X

Повторное определение стадии опухоли¹

X

РК

X

Анти-ТАС!- антитело

X

ΡΏ³

X

Нежелательные явления и сопутствующие лекарственные средства

X

проводится в настоящее время

Объем крови за визит

X

- 6 016083

Часть 2

Действие

Неделя

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

Неделя последиего визита 28

Введение ТАС1

X

Вес

X

Промежуточная история’

X

РЕлЯ'й

X

Гематология

X

Химический анализ сыворотки

X

Панель коагуляции

X

Поточная цитометрия

X

Иммуноглобулины

X

х⁴

Восточная объединенная группа онкологов

X

Исследование мочи

X

Повторное определение стадии опухоли²

X

РК

X

Антм-ТАС!антитело

X

ИГ

X

проводится в настоящее время

Объем крови за визит

X

'Все клинические осмотры можно проводить каждые ±3 дня.

²Повторные сканограммы выполняют на 12-й неделе и затем приблизительно на 24-й неделе или во время прекращения лечения, независимо от того, что является первым. См. Руководство по проведению исследования для определения опухолеспецифических индикаторов тяжести заболевания и оценки костного мозга (если показано).

³В Руководстве по проведению исследования изложена совокупность фармакодинамических маркеров дополнительного исследования: сывороточные уровни свободных АРКИ, и ВЬу8 и комплекса ВЬу8/ТАС1-Рс5.

⁴Субъекты, у которых наблюдалось восстановление обоих классов лимфоцитов и иммуноглобулинов либо до исходных уровней до лечения, либо до абсолютного количества лимфоцитов >800/мм³, 1§С>400 мг/дл, 1дА>65 мг/дл и 1дМ>40 мг/дл, формально исключали из исследования по завершении 28-дневного срока наблюдения безопасности после последней дозы ТАС1-Рс5. У субъектов, у которых не удалось достичь этих уровней, будут ежемесячно производить полные анализы крови и определять уровни 1д(.г. 1дА и 1дМ до тех пор, пока не будет зарегистрировано восстановление, как определено выше. Во время этого пролонгированного наблюдения будут также регистрировать заболеваемость, тип и тяжесть инфекций.

Слитую молекулу ТАС1-1д вводят пациенту в количестве, эффективном для лечения заболевания пациента. Количество может составлять от 0,01 до 10 мг на 1 кг веса тела пациента. Оптимальная доза для лечения слитой молекулой ТАС1-1д может быть установлена с помощью диаграммы на фиг. 1, описанной более подробно в примере 5.

Слитая молекула ТАС1-1д может быть доставлена посредством подкожных инъекций в переднюю брюшную стенку. Если для введения дозы необходима более чем одна инъекция, инъекции необходимо выполнять на расстоянии нескольких сантиметров и, насколько это возможно, ближе по времени. Для повторного введения лекарственного средства рекомендуется циклически сменять участок введения на

- 7 016083 передней брюшной стенке. Возможные зоны для подкожной инъекции в переднюю брюшную стенку изображены на фиг. 2 и включают правую верхнюю наружную область, левую нижнюю наружную область, правую нижнюю наружную область, левую верхнюю наружную область, срединную нижнюю область, а также правое и левое бедра и плечевые части рук (фиг. 2). В альтернативном варианте слитая молекула ТАС1-1д согласно изобретению может доставляться посредством внутривенных инъекций или перорально в форме таблеток, каплет, жидких композиций или гелей.

Способы согласно изобретению можно комбинировать с другими способами лечения рака, такими как химиотерапия, лучевая терапия или хирургическое лечение. Слитую молекулу ТАС1-1д согласно изобретению можно вводить после окончания химиотерапии, лучевой терапии и/или хирургического лечения онкологического больного. Слитую молекулу ТАС1-1д согласно изобретению можно вводить одновременно с другими медикаментами, полезными для пациента. Такие медикаменты могут включать в себя, не ограничиваясь ими, бифосфонаты, эритропоэтин, факторы роста гранулоцитов или колониестимулирующие факторы гранулоцитов, или лекарственные средства для устранения боли, мелфалан, винкристин, доксорубицин, талидомид и аналоги нуклеозидов.

В одном варианте осуществления изобретения ТАС1-1д вводят в комбинации с бортезомибом. ТАС1-1д можно дозировать, как описано выше, и бортезомиб назначают в дозе приблизительно 1,3 мг/м²дважды в неделю в течение 2 недель, с последующим периодом покоя в 10 дней. Это представляет собой один цикл лечения. Необязательно, бортезомиб можно вводить внутривенно. Реакцию на лечение проверяют, как описано выше для ТАС1-1д в отдельности, и можно назначать циклы дополнительного лечения ТАС1-1д и/или бортезомибом. ТАС1-1д можно вводить в дозе, как описано выше, или в более низкой дозе в комбинации с бортезомибом в дозе, описанной здесь, или с бортезомибом в более низкой дозе. Дозы ТАС1-1д и бортезомиба можно вводить одновременно или чередуя введение ТАС1-1д с последующим циклом бортезомиба, или цикл бортезомиба с последующим циклом ТАС1-1д. Это дозирование можно повторять.

ТАС1-1д можно назначать тем пациентам, у которых развилась устойчивость, или у которых не наблюдается ответ на другие способы лечения, включая лечение бортезомибом, но не ограничиваясь им.

Все перечисленные здесь Патенты США и опубликованные заявки на патент приведены здесь в качестве: ссылки в полном объеме.

Примеры

Следующие примеры, иллюстрирующие различные варианты осуществления настоящего изобретения, никаким образом не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения.

Пример 1. Тестирование фармакологии токсикологии и фармакокинетики.

ТАС1-Ре5 на экспериментальной животной модели.

ТАС1-Ре5 был оценен в модели резистентности хозяина, которая предоставила возможность непосредственно оценить функциональный резерв иммунной системы. Во время лечения под действием ТАС1-Ре5 мыши подвергались заражению вирусом гриппа. Дексаметазон, применяемый в качестве позитивного контроля, приводил к усилению и пролонгированию вирусной инфекции. ТАС1-Ре5 снижал уровни циркулирующих В-клеток, общий уровень 1дС и 1дМ, и гриппспецифичных 1дС и 1дМ, но не уменьшал способность животных освобождаться от вирусной инфекции.

Ведущие фармакологические исследования безопасности показали, что ТАС1-Ре5 не индуцирует никаких значительных изменений в нервной, дыхательной и сердечно-сосудистой системах у мышей или обезьян при подкожном (п/к) введении дозы до 80 мг/кг. У мышей наблюдалось только незначительное повышение настороженности и двигательной активности при введении дозы 80 мг/кг, что может свидетельствовать о незначительном и транзиторном возбуждающем эффекте, при этом уровень, не вызывающий указанного эффекта, составлял 20 мг/кг.

При введении мышам однократной дозы посредством внутривенного (в/в) или подкожного (п/к) введения ТАС1-Ре5 не вызывал летальности или значительных общих или местных абдоминальных эффектов у животных вплоть до наивысшей технически возможной дозы: 1200 мг/кг.

Введение обезьянам ТАС1-Ре5 в виде однократной дозы на уровне 240 мг/кг при п/к введении не приводило к летальности или к каким-либо значительным токсическим эффектам.

На основе результатов, полученных через 2 или 4 недели после введения ТАС1-Ре5 подкожным путем мышам в дозах 5, 20 и 80 мг/кг/через день, можно заключить, что соединение хорошо переносится этим биологическим видом в дозах до 80 мг/кг. Связанные с лечением модификации на уровне иммунной системы наблюдались при всех дозах. Эти изменения включали снижение количества всех и зрелых В-клеток и сывороточных уровней 1дС и 1дМ. Иммуногистохимические тесты, выполненные на селезенке и лимфатических узлах, подтвердили истощение популяции, ограниченное В-клетками, с неизменным количеством Т-клеток. Все эти изменения, в некоторых случаях время- и дозозависимые, рассматривались как преувеличенные фармакологические эффекты, которые ожидались у восприимчивых биологических видов после введения очень больших доз ТАС1-Ре5. В целом эти эффекты отмечались после 2 и 4 недель лечения, без значительных признаков прогрессии во времени. Они оказались почти полностью обратимыми через 4 недели после прекращения лечения, за исключением сниженного количества Вклеток.

- 8 016083

Чтобы удостовериться в обратимости модуляции В-клеток, провели дальнейшее исследование действия на мышей доз 5 и 20 мг/кг, вводимых в течение 4 недель каждый 2-й день, с более длительными периодами восстановления. Восстановление общего количества и зрелых циркулирующих В-клеток было достигнуто через 2 месяца после прекращения лечения в дозе 5 мг/кг и через 4 месяца - в дозе 20 мг/кг. Кроме того, инъекция при всех дозах индуцировала небольшое увеличение, по сравнению с контрольным введением носителя, воспалительных изменений в участках инъекции.

Подкожное введение ТАС1-Рс5 у обезьян не индуцировало значительных признаков токсичности ни при какой из тестируемых доз: 5, 20 или 80 мг/кг каждый 3-й день, при назначении в течение 4 недель подряд.

Местную толерантность считали удовлетворительной вплоть до самой высокой тестируемой дозы, включая и саму эту дозу. Были индуцированы дозозависимые и обратимые незначительные или умеренные изменения воспалительного происхождения (главным образом периваскулярные инфильтраты из мононуклеарных и эозинофильных клеток), но они рассматривались в основном как связанные с местным присутствием экзогенных белков. Только при введении большой дозы у нескольких животных проявилось незначительное или умеренное подострое воспаление, у одного из них это было связано с образованием кисты.

Наблюдалось снижение количества циркулирующих В-клеток при определении субпопуляций лимфоцитов, а также гистологическое истощение фолликулярной маргинальной зоны селезенки (известной как область, зависимая от В-клеток) и уменьшение общего уровня в сыворотке 1дС и 1дМ. Это рассматривалось как результат фармакодинамических свойств ТАС1-Рс5, как показано в фармакологических экспериментах ίη νίίτο и ίη νίνο. Степень этих изменений была специально гипертрофирована, как и предполагается в токсикологических исследованиях, в которых животным преднамеренно вводят большие дозы тестируемого соединения. В то время как низкие уровни в сыворотке 1дС и 1дМ и истощение лимфоцитов в селезенке демонстрируют явную тенденцию к восстановлению в течение предусмотренного месячного периода прекращения лечения, подобной закономерности в отношении общего количества и в отношении зрелых циркулирующих В-клеток не наблюдается, что указывает на то, что для восстановления необходимо более длительное время.

В конце периода лечения (4-я неделя) у самцов и самок в группе, получавшей большую дозу (80 мг/кг), наблюдалось небольшое, но статистически значимое уменьшение средних показателей общего содержания белка по сравнению с контролем. Небольшая тенденция к уменьшению также отмечалась при той же дозе на 2-й неделе и в конце периода восстановления.

Модификации белка сыворотки у самок, получавших большую дозу, в конце периода введения включали уменьшение процентного содержания глобулинов и увеличение альбуминов и фракции альфа1-глобулинов. Фракция альфа-1-глобулинов также оказалась более высокой, чем в контроле, у самок в группе 3 (20 мг/кг).

Иммуногенность ТАС1-Рс5 была низкой как у мышей (только у нескольких самок определялись низкие уровни циркулирующих связывающих антител во время и после периода лечения), так и у обезьян (низкие уровни определялись после периода восстановления у нескольких животных); не было получено никаких данных о нейтрализующих антителах в обоих биологических видах.

ТАС1-Рс5 тестировали, используя стандартный набор тестов ίη νίνο для выявления токсикологического влияния на репродукцию и фертильность (тест фертильности у самцов и самок мышей, получавших лечение путем подкожного введения в дозах 5, 20 и 80 мг/кг каждый 2-й день до и во время спаривания, и до периода имплантации) и внутриутробное развитие плода (исследование внутриутробного развития плода у самок мышей и кроликов, получавших лечение путем подкожного введения в дозах 5, 20 и 80 мг/кг каждый 2-й день в течение периода органогенеза).

Тест фертильности на мышах показал дозозависимое увеличение пред- и постимплантационных потерь после воздействия 20 и 80 мг/кг каждый 2-й день ТАС1-Рс5 по сравнению с контрольной группой.

Оценка данных, полученных на мышах в исследовании внутриутробного развития плода, показала, что ни при какой дозе не наблюдалось никаких эмбриотоксических эффектов и не было индуцировано никаких связанных с соединением эмбриональных пороков развития.

Исследование внутриутробного развития плода, проведенное на кроликах, показало, что лечение вызывает дозозависимый более низкий прирост массы и более низкое потребление пищи у беременных животных, получавших лечение в дозе 20 или 80 мг/кг каждый 2-й день. Вышеупомянутые изменения по материнской линии были связаны с увеличением скорости резорбции и снижением массы тела эмбриона при двух наивысших дозах. Эти результаты позволяют предположить возможное влияние ТАС1-Рс5 на имплантацию мышиной бластоцисты в матке. Наблюдаемое влияние ТАС1-Рс5 на привес массы тела матери и потребление пищи, вероятно, отвечает за наблюдаемые эффекты на жизнеспособность приплода у кроликов, получавших лечение в дозе 20 или 80 мг/кг каждый 2-й день во время органогенеза, и ТАС1-Рс5 не оказывает никакого прямого токсического эффекта на плод. Никаких пороков развития не было связано с лечением ТАС1-Рс5 у этих двух биологических видов животных.

- 9 016083

Кроме того, гистологическую экспертизу мужских и женских гонад и добавочных половых органов проводили при исследованиях токсичности на 2 неделе и на 1 месяце, выполненных путем п/к введения мышам и обезьянам, которым ТЛС1-Бс5 вводили каждый 2- или каждый 3-й день соответственно, без данных об эффектах, связанных с лечением.

Исследование местной толерантности у кроликов показало, что композиция ТЛС1-Бс5 хорошо переносилась локально при введении кроликам подкожно в дозе 70 мг/мл.

Исследование фармакокинетики однократной дозы у самцов мышей при в/в и п/к введениях проводили на мышах либо при внутривенном введении в дозе 1 мг/кг, либо при подкожном введении в дозах 1, 5 и 15 мг/кг.

Установленное время до максимальной абсорбции (1тах) составляло от 4 до 16 ч, с подсчитанным показателем 1_1/2, приблизительно составляющим 40-50 ч.

Профиль, подобный инфузии, наблюдался в течение первых 30 мин после в/в болюсного введения, после чего ТЛС1-Бс5 выводился из организма с периодом полувыведения 44 ч. После подкожного введения соотношение между площадью под кривой (ЛИС), полученной для 3 доз: 1, 5 и 15 мг/кг - составляло 1:5:8, вместо 1:5:15, что соответствует соотношению доз - это позволяет предположить нарушение пропорциональности доз при введении большой дозы.

Биодоступность ТЛС1-Бе5 у мышей при подкожном введении составляла 76 и 89% для доз 1 и 5 мг/кг, но была более низкой, чем ожидалось для дозы 15 мг/кг (0,42; вычислена как отношение к внутривенной дозе 1 мг/кг). Поскольку кажущийся период полувыведения не изменялся, более низкую биодоступность, наблюдаемую при введении большей дозы, можно объяснить увеличением как клиренса, так и объема распределения или, более вероятно, уменьшением абсорбции вследствие формирования преципитата в участке инъекции.

Исследование фармакокинетики однократной дозы у самцов обезьян при в/в и п/к введениях проводили на самцах обезьян супото1ди§ (самцах яванских макак), которым вводили препарат либо внутривенным путем в дозе 1 мг/кг, либо подкожным в дозах 1, 5 и 15 мг/кг.

Шесть самцов обезьян разделили на 2 группы по 3 животных в каждой и им производили по 2 введения, разделенных 2-недельным периодом выведения. В 1 периоде препарат вводили в дозе 1 мг/кг в/в (группа 1) и 1 мг/кг п/к (группа 2), а во 2 периоде препарат вводили в дозе 5 мг/кг п/к (группа 1) и 15 мг/кг п/к (группа 2).

Установленное время до максимальной абсорбции (1тах) составляло от 6 до 8 ч, с подсчитанным показателем 1_1/2, приблизительно составляющим 120-190 ч.

Профиль, подобный инфузии, наблюдался у 2 из 3 обезьян в течение первых 15 мин после в/в болюсного введения, после чего ТЛС1-Бс5 выводился из организма с периодом полувыведения 179±29 ч. Объем распределения при непрерывном введении составлял 382±82 мл/кг - объем, приблизительно равный объему внутриклеточной жидкости.

После подкожного введения величины ЛИС, в сравнении с пропорциональностью доз, составляли 216, 1182 и 2732 мкг/мл ч в случае п/к доз, составлявших 1, 5 и 15 мг/кг. Биодоступность ТЛС1-Бс5 при подкожном введении (вычисленная в сравнении с 1 мг/кг при в/в введении) составляла 0,92, 1,02 и 0,77 при низкой, средней и большой дозах. Таким образом, ТЛС1-Бс5 почти полностью абсорбировался при подкожном введении.

В образцах до введения препарата во 2 периоде (между дозами 1 мг/кг, вводимыми путем в/в или п/к введения, в 1 периоде и дозами 5 или 15 мг/кг соответственно во 2 периоде) у всех шести обезьян определялись низкие уровни ТЛС1-Бс5, тогда как за время 2-недельного периода выведения прошло только 2 периода полувыведения, чего было недостаточно для полного устранения введенного соединения (необходимо 5 периодов полувыведения). Однако установленный вклад предыдущей дозы в ЛИС мог составлять только приблизительно 2% от всей ЛИС во 2 периоде.

Установлено снижение уровней 1дО в сыворотке на 10,2% после в/в введения. П/к доза 15 мг/кг вызвала несколько больший эффект, в то время как между дозами в 1 и 5 мг/кг, введенными п/к, не наблюдалось никаких различий (снижение на 8,6, 8,4 и 12,3% после доз в 1, 5 и 15 мг/кг соответственно). Установлено снижение уровней 1дМ в сыворотке 18,0% после в/в введения. Между 3 дозами, введенными п/к, никаких различий не наблюдалось (снижение на 23,5, 23,0 и 24,2% после введения доз 1, 5 и 15 мг/кг соответственно).

Пример 2. Определение переносимой дозы ТЛС1-Бс5 на здоровых добровольцах.

В настоящее время заканчивается первая фаза I исследования ТЛС1-Бс5. Это двойное слепое плацебоконтролируемое последовательное исследование с повышением дозы, в котором изучают безопасность, фармакокинетику и фармакодинамику однократных доз ТЛС1-Бс5, вводимых подкожно здоровым добровольцам мужского пола. Схема структуры исследования представлена ниже, вместе с кратким изложением доступных данных.

- 10 016083

ТАС1-Рс5 вводили человеку впервые; это было двойное слепое плацебоконтролируемое последовательное исследование с повышением дозы, изучающее безопасность, фармакокинетику и фармакодинамику однократных доз ТАС1-Рс5, вводимых подкожно здоровым добровольцам мужского пола.

В исследование были включены четыре группы субъектов. В каждой группе, получавшей препарат, один выбранный наугад субъект получал инъекцию плацебо, а все другие получали ТАС1-Рс5. После того как субъекты покидали исследовательский центр через 24 ч после введения препарата, их наблюдали амбулаторно в течение 7 недель в виде плановых обследований. Мониторинг системной и местной толерантности к ТАС1-Рс5 проводили путем физических исследований, определяя боль в участке инъекции, местные реакции на переносимость в участке инъекции(й) (покраснение, отек, кровоподтек и зуд), определяя показатели жизненно важных функций, ЭКГ в 12 отведениях (электрокардиограммы), производя лабораторные исследования безопасности и записывая нежелательные явления.

Мониторинг фармакокинетических и фармакодинамических маркеров проводили в течение 7недельного периода после введения препарата. Мониторинг фармакодинамического эффекта ТАС1-Рс5 проводили, применяя различные маркеры, включая субпопуляции лимфоцитов посредством РАС8анализа (плазмоциты (СЭ1 38+), незрелые В-клетки (СЭ19+, 1дО-), зрелые В-клетки (СЭ19+, Ι§Ό+), клетки Т-хелперы (СЭ5+. СЭ4+). цитотоксические Т-клетки (СЭ5+. СЭ8+), общее количество Т-клеток (СЭ5+)), свободный ВЬу8, комплекс ВЬу8/ТАС1-Рс5, 1д6, 1дМ, анти-ТАС1-Рс5-антитела.

Увеличение дозы осуществляли с помощью алгоритма в рамках протокола исследования, основываясь на обзоре данных за 3 недели после введения препарата. В четырех группах препарат вводили в следующей дозировке: группа 1 получала 2,1 мг; группа 2 получала 70 мг; группа 3 получала 210 мг и группа 4 получала 630 мг.

Результаты: здоровым добровольцам мужского пола вводили однократные подкожные дозы ТАС1-Рс5 в дозах от 0,03 до 9 мг/кг. Для определения увеличения дозы в группах использовали данные о безопасности и толерантности, а также РАС8-анализ субпопуляций лимфоцитов на 3-й неделе. Исследовали четыре группы, как показано в табл. 3.

Таблица 3

Перераспределение добровольцев

Номер группы	Количество субъектов⁰
1	6
2	6
3	6
4	5^а

Уровень дозы	Введенная доза*
0,03 мг/кг°	2,1 мг
1 мг/кг	70 мг
3 мг/кг	210 мг
9 мг/мг	630 мг

^а При каждом уровне дозы предполагался номинальный вес 70 кг у субъектов, получавших стандартную дозу.

^ь Вследствие ошибки из-за разбавления доза, вводимая в одну из групп, была в 10 раз ниже, чем было запланировано (0,3 мг/кг). Эта ошибка была установлена при обзоре данных о фармакокинетике в 1 группе, но после ведения препарата во 2 группе.

^с Включая одного субъекта, получавшего плацебо.

^а Одного добровольца исключили из исследования до осуществления инъекции.

- 11 016083

Демографические характеристики

Таблица 4

	Статистические показатели	Группа 1	Группа 2	Группа 3	Группа 4	Общее количество
Возраст (годы)	η(8ϋ) Средний диапазон	6 30,2 (7,0) 23-43	6 33,0 (7,7) 23-43	6 25,3 (6,8) 19-34	5 35,0(5,4) 30-44	23 30,7 (7,4) 19-44
Индекс массы тела (кг/м²)	η Средний (50) диапазон	6 24,7(1,7) 22,2-26,6	6 26,0 (2,0) 23,1-28,9	6 24,0 (3,5) 18,7-28	5 25,3 (2,8) 22,3-27,5	23 24,8 (2,4) 18,7-28,9
Рост(м)	η Средний (8ϋ) диапазон	6 1,82(0,04) 1,77-1,88	6 1,80 (0,08) 1,71-1,91	6 1,77(0,07) 1,67-1,85	5 1,73 (0,06) 1,68-1,78	23 1,78 (0,07) 1,67-1,91
Вес (кг)	η Средний (80) диапазон	6 81,7(7,3) 71-91	6 84,2(12,1) 69-101	6 74,7 (7,6) 67-84	5 76,2 (9,2) 63-89	23 79,0 (9,4) 63-101
Пол η (%)	η Мужской диапазон	6 6(100%) 0 (0%)	6 6(100%) 0(0%)	6 6(100%) 0(0%)	5 5(100%) 0(0%)	23 23(100%) 0(0%)
Расовая принадлежность п (%)	η Белые Другие	6 6(100%) 0 (0%)	6 6(100%) 0 (0%)	6 6(100%) 0 (0%)	5 5(100%) 0 (0%)	23 23(100%) 0 (0%)

В целом среднее значение возраста +:8Ό составило 30,7+ 7,4 лет, а средний индекс массы тела составил 24,8 кг/м². Все добровольцы были белыми мужчинами. ТЛС1-Ре5 хорошо переносился во всех группах. Не наблюдалось никаких явных влияний на данные физических исследований, показатели жизненно важных функций или ЭКГ в 12 отведениях.

- 12 016083

Таблица 5 Список нежелательных явлений, появившихся за время лечения до настоящего времени

Система организма	Характерный признак	Лечение
		ТАС1- Рс5 2,1 мг	ТАС1- Рс5 70 мг	ТАС1- Рс5 210 мг	ТАС1- Рс5 630 мг	Плацебо	Общее
		N	N	N	N	N	N	%
Расстройства со стороны глаз	Отек века	1					1	2,1
Гастроинтестинальные расстройства	Боль в животе Диарея Изъязвление слизистой ротовой полости Тошнота Рвота		1 1	1 1	1 ' 1 I 1	1 1 1	1 4 2 3 2	2,1 8,5 4.3 6.4 4,3
Общие расстройства и состояние участка введения	гриппоподобное заболевание				1	2	3	6,4
Инфекции и инвазии	Назофарингит ПерианальныЙ абсцесс	1	4	I	1		6 1	10,6 2,1
Травма, отравление и осложнения процедур	ушиб Сочетанная травма			1		I	1 1	2,1 2,1
Расстройства скелетных мышц и соединительной ткани	Артралгия Боль в спине		1			1	1 1	2,1 2,1
Расстройства нервной системы	Головная боль	1	2	2	2	1	8	17,0
Респираторные, торакальные и медиастинальны е расстройства	Кашель Заложенность носа Фаринголар ингеальная боль	1	1 2	1 )	1 2	1 1 1	3 2 7	6,4 4,3 14,9
Расстройства кожи и подкожных тканей	Генерализованная сыпь					1	1	2,1

Преходящее покраснение и отек в участке введения наблюдались у некоторых субъектов, при этом покраснение развивалось у всех субъектов в группах 3 и 4. Несмотря на то что, как оказалось, частота развития реакций в участке инъекции повышается в группах, получающих более высокие дозы, полагают, что это связано с увеличением объема (и числа) инъекций.

На протяжении 7 недель дозированного введения препарата сообщалось о 48 нежелательных явлениях, произошедших за период лечения. Большинство из них (44 явления, 91,7%) были легкой степени выраженности, тогда как остальные были средней степени выраженности (4 явления, 8,3%). За этот период не было отмечено никаких тяжелых нежелательных явлений и никаких серьезных нежелательных явлений. Не наблюдалось никакой явной зависимости между вводимыми дозами ТЛС1-Ре5 и частотой развития, интенсивностью или установленным соотношением нежелательных явлений. Отмеченные до настоящего времени нежелательные явления резюмированы в табл. 5.

Выявлена значительная толерантность ТЛС1-Рс5 в дозах до 630 мг, при этом не было отмечено значительного превышения безопасности. Эти данные подтверждают пригодность предполагаемых доз для исследований по предложенному вопросу.

- 13 016083

Был выполнен анализ без компартментализации концентраций ТАС1 в сыворотке. Этот предварительный анализ выполняли с применением номинальных интервалов отбора проб. Субъекты 2, 6 и 13 имели измеримую концентрацию до введения препарата, таким образом, до проведения анализа исходные концентрации вычитали из всех результатов измерения после введения препарата. Фармакокинетические параметры после однократного подкожного введения доз в 2,1, 70, 210 и 630 мг суммированы в табл. 6. Концентрации лекарственного средства были близки к пределу количественного определения в анализе после введения дозы в 2,1 мг ТАС1-Бе5, ограничивая значение данных при этой величине дозы. При дозах 70 мг и выше Ттах (время до максимальной абсорбции) варьировало от 16 до 36 ч, и суммарное среднее 1т (вычисленное из конечной части кривой) составило 303 ч. Кроме того, АИС (экстраполируемая до бесконечности) и Стах увеличивались в непропорционально большем соотношении, чем доза.

Таблица 6

Параметры РК

Параметр	Лечение	η			Минимальное значение	Среднее значение	Максимальное значение	коэффициент вариации
Стах(мкг/мл)	2,1 мг	5	0,015	0,011	0,005	0,013	0,032	74
Ттах (ч)	2,1 мг	5	-	-	8	72	336	-
1й(ч)	2,1 мг	4	204	180	45	203	365	88
лис (чмкг/мл)	2,1 мг	4	8,55	9,65	0,524	6,62	20,4	113
%АГ1С ех(гар	2,1 мг	4	36	24	13	32	69	65
СЪТ (л/ч)	2,1 мг	4	1,70	1,90	0,10	1_?34	4,01	112
Стах(мкг/мл)	70 мг	5	0,617	0,236	0,426	0,496	0,985	38
Ттах (ч)	70 мг	5	-	-	16	16	36
ΙΆ(4)	70 мг	5	255	23	219	264	276	9
лис (чмкг/мл)	70 мг	5	79,7	15,7	65,4	72,5	101	20
% АиС ехсгар	70 мг	5	10	]	9	11	11	12
СЬ/Р (л/ч)	70	5	0,90	0,17	0,69	0,97	1,07	18
Стах(мкг/мл)	210 мг	5	3	0,902	1,84	2,90	4,16	30
Ттах(ч)	210 мг	5	-	-	12	16	36
ί й (ч)	210 мг	5	429	160	169	433	568	37
лис (чмкг/мл)	210 мг	5	260	72	167	267	344	28
% дисех(гар	210 мг	5	6	3	I	6	9	54
СЬ/Р (л/ч)	210 мг	5	0,86	0,26	0,61	0,79	1,25	31
Стах(мкг/мл)	630 мг	4	13,9	2,79	11,4	13,7	16,7	20
Ттах (ч)	630 мг	4		-	16	16	16	-
ί й (ч)	630 мг	4	313	16	291	316	329	5
лис (чмкг/мл)	630 мг	4	992	194	719	1040	1170	20
% А11С ех!гар	630 мг	4	2	0		2	2	18
СЬТ (л/ч)	630 мг	4	0,66	0,15	0,54	0,61	0,88	23

Фармакодинамические анализы выявили снижение исходных уровней !дМ за 7 недель после однократного введения доз в 70, 210 или 630 мг. Несмотря на то что не удалось установить никакой явной зависимости при малом объеме выборки, степень снижения 1дМ была наибольшей в группе, получавшей наивысшую дозу. Как оказалось, у субъектов в группе, получавшей дозу 70 мг, наблюдался возврат уровней 1дМ к исходным через 7 недель после введения препарата. На этот момент уровни в группах, получавших более высокие дозы, оставались пониженными. Не было отмечено никакого явного влияния на уровни 1дС или на субпопуляции лимфоцитов, которые определяли с помощью РАС8-анализа.

Отмечалось пропорциональное повышение уровней комплексов ВЬу8/ТАС1-Рс5 в течение периода выборки, которое достигало плато приблизительно через 600 ч после введения препарата.

Заключение: клинические данные, полученные на здоровых мужчинах-добровольцах, показали, что ТАС1-Рс5 является безопасным и хорошо переносится субъектами в дозах до 630 мг. Природа, частота развития и тяжесть нежелательных явлений были сопоставимы в группах лечения ТАС1-Рс5 и плацебо. Не было отмечено никаких клинически значимых изменений в результатах физического исследования, показателях жизненно важных функций, ЭКГ в 12 отведениях или в лабораторных параметрах безопасности. Местная толерантность в участке введения была хорошей. Эти данные подтверждают предложенные дозы у субъектов с ВСМ.

- 14 016083

После введения однократных доз у здоровых субъектов мужского пола ТАС1-Ес5 достиг Ттах между 16 и 20 ч, АИС увеличилась пропорционально дозе, несмотря на то что повышение Стах было больше, чем пропорциональное дозе. Средний период полувыведения ТАС1-Ес5 составил приблизительно 300 ч. Был отмечен фармакодинамический эффект на уровни 1дМ в дозах 70, 210 и 630 мг. Не было отмечено никакого явного влияния лечения на 1дО или субпопуляции лимфоцитов после введения однократной дозы ТАС1-Бс5. Не отмечено никаких известных или предполагаемых рисков особой тяжести или серьезности, которые не были ранее приняты во внимание в предложенных протоколах исследования.

Пример 3. Лечение пациента с неходжкинской лимфомой с применением композиций ТАС1-Бс5.

Пациентов клинически обследовали до еженедельного введения ТАС1-Бс5. Для состоятельности экспериментов запланировано введение ТАС1-Бс5 приблизительно в одинаковое время (±6 ч) для каждого пациента для каждой последующей дозы за период лечения в 5 недель. Базовые исследования определяются как исследования, проведенные непосредственно перед первым введением ТАС1-Бс5. Первый день введения ТАС1-Бс5 определяется как День 1. Перед введением первой дозы лекарственного препарата ТАС1-Бс5 пациенту выполняют следующие процедуры: промежуточная история, промежуточное физическое обследование, определение показателей жизненно важных функций организма, измерение роста и веса (только при введении первой дозы), лабораторные тесты на безопасность: гематология, коагуляция, иммуноглобулины и химия, исследование сопутствующих медикаментов/процедур, образцов крови (временной паттерн регистрируют на е-СВЕ) для фармакокинетического определения сывороточной концентрации ТАС1-Бс5, сывороточных уровней свободного АРВ1Б и ВЬу8, комплекса ВЬу8/ТАС1-Ес5, количества клеток с помощью поточной цитометрии и определения анти-ТАС1-антител (только при введении первой дозы).

Пациентам вводят подкожно от 2 до 10 мг/1 кг композиции ТАС1-Бс5 в 1-, 7-, 14-, 21- и 28-й дни.

После введения препарата выполняют следующие исследования: определение показателей жизненно важных функций (У8) (для субъектов, получивших первую дозу ТАС1-Бс5, У8 будут определять через 1, 2, 4 и 8 ч после введения). Показатели жизненно важных функций при введении последующих доз ТАС1-Бс5 определяют через 1 и 2 ч после введения; непрерывного исследования нежелательных явлений и непрерывного исследования сопутствующей лекарственной терапии/процедур.

На 2-, 3- и 4-й дни проводили специальные исследования фармакокинетики/фармакодинамики. Эти исследования включают забор крови, определение фармакокинетической концентрации в сыворотке ТАС1-Бс5, фармакодинамические измерения свободного АРЫЬ и ВЬу8, комплекса ВЬу8/ТАС1-Бс5, количества лимфоцитов и концентрации в сыворотке 1дО и 1дМ.

После доставки всех доз ТАС1-Бс5 состояние пациентов оценивали еженедельно в течение дополнительных 4 недель после введения последней дозы ТАС1-Бс5: непрерывное исследование нежелательных явлений; непрерывное исследование сопутствующей лекарственной терапии/процедур; промежуточная история; промежуточное физическое обследование, показатели жизненно важных функций, лабораторные тесты на безопасность: гематология, коагуляция, иммуноглобулины и химия, образцы крови (временной паттерн регистрируют на е-СВР) для фармакокинетического определения сывороточной концентрации ТАС1-Бс5, сывороточных уровней свободного АРШЬ и ВЬу8, комплекса ВЬу8/ТАС1-Ес5, количества клеток с помощью поточной цитометрии.

Во время последующего контрольного визита на 56-й день к вышеупомянутым исследованиям необходимо добавить следующие: оценочную шкалу ЕСОС (Восточная кооперированная группа по онкологии), рост и вес, анализ мочи, определение анти-ТАС1-антител. Анти-ТАС1-антитела собирают в день 85 у пациентов, не входящих в дополнительное исследование.

Повторное определение стадий, характерных для заболевания, выполняли совместно с последним визитом приблизительно через 28 дней после последнего этапа лечения ТАС1-Ес5. Пациенты без прогрессии заболевания во время повторного определения стадий могут входить в группу, получающую дополнительное лечение. Рекомендуется выполнять компьютерную томографию и позитронноэмиссионную томографию грудной, брюшной и тазовой полости, даже если эти области первоначально не были включены, вследствие непредсказуемого характера рецидивирования В-клеточных опухолей. Необходим забор аспирата костного мозга и биопсия, если заболевание затрагивает костный мозг при зачислении в исследование. Опухолеспецифичные индикаторы тяжести заболевания (например, частота ! (Мапейе X., Апп ВЬеит Όίδ. 2003; 62(2): 168-171. Ке11у е! а1. Сапсег Век. 2001; 60(4): 1021-1027) транслокации с помощью флуоресцентной ш δίΐιι гибридизации в лимфоме клеток мантийной ткани).

Пациентов, у которых наблюдается восстановление как лимфоцитов, так и классов иммуноглобулинов либо до исходных уровней до лечения, либо до абсолютного числа лимфоцитов 800/мм³, 1дС>400 мг/дл, 1дА>65 мг/дл и 1дМ>40 мг/дл, формально исключают из исследования, сразу после окончания последующего наблюдения безопасности в течение 28 дней после введения последней дозы ТАС1-Ес5. У пациентов, у которых эти уровни не были достигнуты, ежемесячно проверяли анализы крови и уровни 1дО, 1дА и 1дМ до тех пор, пока не было зарегистрировано восстановление, как определено выше.

- 15 016083

Пример 4. Процедура инъекционного введения ТАС1-Ес5.

Если для доставки ТАС1-Ес5 выбрано подкожное введение, то молекулу вводят подкожно в брюшную стенку и участки, чередующиеся в соответствии с нижеприведенной диаграммой (фиг. 2). Необходима осторожность во избежание инъекции в кровеносный сосуд. Чрезвычайно важно чередовать участки, чтобы сохранять кожу здоровой. Повторные инъекции в одно и то же место могут вызвать рубцевание и склерозирование жировой ткани. Инъекции необходимо выполнять в следующие области и чередовать их еженедельно (фиг. 2): инъекция в правую верхнюю наружную область в течение 1 недели; инъекция в левую нижнюю наружную область в течение второй недели; инъекция в правую нижнюю наружную область в течение третьей недели; инъекция в левую верхнюю наружную область в течение четвертой недели и инъекция в срединную нижнюю область в течение пятой недели.

Для пациентов, требующих более одной инъекции на дозу, инъекции начинают с положения в 12 ч для области введения, определенной для введения на этой неделе (согласно фиг. 2, с 1 по 5 неделю), и затем последовательно перемещают по кругу по часовой стрелке в положение 2, 4, 6, 8 и/или 10 ч, как необходимо для требуемого количества инъекций на дозу. Инъекции должны отстоять друг от друга по меньшей мере на 2,5 см (1 дюйм) и вводиться как можно ближе по времени. Не допускается вводить в один инъекционный участок более 1,5 мл. Если пациенту затруднительно вводить препарат в область живота, можно вводить препарат в дополнительные области: области 6 и 7 (передняя поверхность бедер, фиг. 2) и области 8 и 9 (плечевые части рук, фиг. 2).

К общим симптомам реакций в участках инъекции относятся зуд, болезненность, ощущение тепла и/или покраснение в участке инъекции.

Пример 5. Протокол повышения дозы для введения молекулы ТАС1-1д.

Этот протокол повышения дозы для оценки ТАС1 в В-клеточных злокачественных образованиях (ВСМ) учитывает введение препарата двум пациентам в группе, получающей определенную дозу (2, 4, 7, 10 мг/кг), еженедельно в течение 5 недель, с последующим введением в течение 8 дней. При условии, что не наблюдается дозолимитирующая токсичность (БЬТ), один дополнительный пациент может получать лечение в дозе, имеющей обычный уровень. После введения третьему пациенту указанной дозы в течение 5 последовательных недель и наблюдения в течение 2 недель и при условии, что не наблюдается БЬТ, может происходить повышение, и два пациента могут получать лечение в дозе, имеющей следующий уровень. Дополнительные два пациента могут одновременно получать лечение в дозе, имеющей предыдущий уровень, при которой не наблюдается БЬТ, может происходить повышение (фиг. 1). Эта консервативная схема повышения дозы была основана на ограниченном преклиническом и клиническом опыте исследования ТАС1-Ес5 до инициирования ВСМ.

Три пациента были включены в исследование и получали лечение в исследовании по повышению дозы в ВСМ до момента получения дозы 2 мг/кг и 2 пациента в настоящее время включены в исследование и получают лечение в группе, получающей дозу 4 мг/кг.

До настоящего времени в четырех продолжающихся исследованиях получали лечение в режиме либо однократного, либо повторного введения ТАС1-Ес5 или плацебо общим числом 118 пациентов (92 получали активное лекарственное средство, 26 плацебо). Каждое из исследований выполняли под эгидой Комиссии по контролю мер обеспечения безопасности или Комитета мониторинга безопасности.

8КВ/8МС для этих исследований выполнили в общей сложности девять обзоров, от контингентов пациентов, получающих однократные и повторные подкожные дозы ТАС1-Ес5 до кумулятивной дозы 60 мг/кг (три цикла лечения по 5 недель и 4-недельный период отсеивания). Вопросы относительно безопасности лечения ТАС1-Ес5 эти комитеты не поднимали. Кроме того, непрерывное наблюдение безопасности до настоящего времени не выявило никаких клинически значимых проблем, связанных с безопасностью.

В исследовании множественной миеломы ТАС1-Ес5 в общей сложности 6 пациентов в 1 и 2 группах закончили исследование повышения дозы, в котором они получали инъекции 2 мг/кг (3 пациента) или 4 мг/кг (3 пациента) еженедельно в течение 5 недель, с последующими 4 неделями наблюдения. Кроме того, три пациента в 3 группе получали 7 мг/кг еженедельно в течение 1 недели. Два пациента из 1 группы и один пациент из 2 группы достигли стабильности заболевания в исследовании повышения дозы и были включены в дополнительное исследование.

Каждый из этих пациентов получил до 10 дополнительных еженедельных инъекций 2 или 4 мг/кг. Дозы, выбранные для оценки ТАС1-Ес5 в ВСМ, соответствуют дозам в вышеописанном исследовании множественной миеломы: 2, 4, 7 и 10 мг/кг, вводимым в виде 5 еженедельных инъекций до суммарной кумулятивной дозы 10, 20, 35 и 50 мг/кг.

Пределы безопасности на основе воздействия были вычислены на основе наблюдаемых воздействий на здоровых добровольцах, получающих однократные дозы ТАС1-Ес5, предсказуемых воздействий на пациентах с ВСМ и в сравнении с наблюдаемыми воздействиями у обезьян суиото1ди8, получающих 80 мг/кг каждые три дня в течение 4 недель (доза ΝΘΆΕΕ). Рассчитанные пределы безопасности для исходной дозы 2 мг/кг и наивысшей предлагаемой дозы 10 мг/кг составили в 291 и в 46 раз соответственно.

- 16 016083

ТАС1-Ес5, вводимый обезьянам в дозах 0, 4, 2 и 10 мг/кг каждый третий день в течение 13 или 3 недель, не индуцировал симптомы токсичности. Полагают, что снижение количества зрелых и общего количества циркулирующих В-клеток и тенденция к снижению количества незрелых В-клеток, а также снижение 1дС и 1дМ в сыворотке, а также истощение В-клеточно-компетентных областей селезенки и лимфатических узлов происходит вследствие фармакодинамической активности ТАС1-Ес5 и показанной обратимости у животных, подвергнутых восстановлению после 13 недель лечения.

ТАС1-Ес5, вводимый в тех же дозах мышам через день в течение 13 или 26 недель, индуцировал главным образом время- и дозозависимые изменения, связанные с ожидаемым фармакологическим действием ТАС1-Ес5, включая снижение 1дС и 1дМ и общего количества и зрелых В-клеток в сыворотоке при всех дозах, сопровождающееся тенденцией к снижению уровня гамма-глобулинов в сыворотке при всех дозах. Г истологическое исследование не показало никаких токсикологически значимых изменений, за исключением ожидаемых результатов, основанных на предыдущих исследованиях, включая снижение количества В-клеток в корковом слое лимфатических узлов и маргинальной зоне селезенки, и усиление подострого воспаления в участке инъекции.

С учетом существующих в настоящие время данных о безопасности для человека и преклинические данные и в особенности с учетом того, что агент исследования хорошо переносился субъектами с множественной миеломой в дозах на уровне 2, 4 и 7 мг/кг, до 15 доз в течение 5 месяцев, одновременное включение трех субъектов в группу, получающую определенную дозу, планировалось для доз 7 и 10 мг/кг.

Пример 6. Дальнейшее лечение пациентов с начальной благоприятной реакцией на ТАС1-Ес5.

Пациенты с неходжкинской лимфомой, у которых наблюдался положительный ответ на начальное лечение ТАС1-Ес5 в течение 5 недель, далее получали лечение недельной дозой ТАС1-Ес5. Пациенты получали до 24 последовательных недельных доз ТАС1-Ес5, подкожно (п/к), вводимых в виде многократных инъекций, по мере необходимости, не более 1,5 мл каждая. Для каждой инъекции предоставляется жидкая композиция ТАС1-Ес5 в пробирках с концентрацией 70 мг/0,5 мл.

Эти дополнительные 24 последовательные инъекции вводят в том же уровне дозы, который пациенты предварительно переносили при начальном лечении в течение 5 недель. Однако пациенты, которые первоначально получали 10 мг/кг ТАС1-Ес5, могут получать уменьшенную дозу 7 мг/кг.

- 17 016083

Список последовательностей

110> Вго1у, Ηβτν©

ΥΐϊιΐθΓ, Агпаиб

ВизЬу, 31эагоп СА

АпзеН, 3£βνβη М. ’

ОНгзЪгога, σ&η

ΝβδίΟΓΟν, ΧνΗΠ $ίβνβΓ3, Ег1с <120> Способы лечения В-клеточных злокачественных образований с поьдошью слитой молекулы ТАС1-КЗ <130> 05558.0033.ООРС01

<150	из 60/706,912
<151>	2005-08-09
<160	2
<170	Ра^еггЫп уег$1оп 3.3
<210>	1
<211>	154
<212>	белок
<213>	Ното заргепз
<400>	1

Меб

Зег

С1у

Теи

61 у

Агд

Зег

Агд

61у

С1у

Агд

Зег

Агд

Уа1

Азр

1

5

10

15

С1п

С1и

61и

Агд

РЬе

Рго

С1п

С1у

Теи

Тгр

ТЪг

С1у

Уа1

А1а

МеТ

Агд

20

25

30

Зег

Суз

Рго

С1и

С1п

Туг

Тгр

Аар

Рго

Ьеи

61 у

ТЙг

Суз

Меб

35

40

45

Зег

Суз

Туз

ТЪг

Не

Суз

Азп

ΗΪ3

εΐη

Зег

С1п

Агд

ТАг

Суз

А1а

50

55

60

Рке

Суз

Агд

Зег

Теи

Зег

Суа

Агд

Ьуз

61и

С1п

С1у

Туз

РЬе

Туг

Азр

65

70

75

80

Н1з

Теи

Ъеи

Агд

Азр

Суз

11е

Зег

Суз

А1а

5ег

Не

Суз

С1у

61п

Н±з

85

90

95

Ргс

Ьуз

С1п

Суз

А1а

Туг

РЬе

Суз

С1и

Аз η

Ьу5

Ъеи

Агд

Зег

Рго

Уа1

100

105

110

- 18 016083

Азп

Ъеи

Рго 115

Рго С1и

Леи

Агд Агд С1п Агд Зег С1у С1и

Уа1

С1и

Азп

120

125

Азп

Зег

Азр

Αεη

Зег

С1у

Агд

Туг

С1п

С1у

Ъеи

С1у

Н1з

Агд

С1у

Зег

130

135

140

С1и

А1а

Зег

Рго

А1а

Ъеи

Рго

С1у

Ъеи

Ъуз

145
<210>	2
<211>	348
<212>	белок
<213>	Ното зарЪепз

<400> 2

Ме5

Азр

А1а

Ме5

Ъуз

Агд

С1у

Ъеи

Суз

Уа1

Ъеи

Суз

С1у

1

5

10

15

А1а

Уа1

РЬе

Уа1

Зег

Ъеи

Зег

С1п

С1и

Не

Н1з

А1а

С1и

Ъеи

Агд

20

25

30

РЬе

Агд

А1а

Ме5

Агд

Зег

Суз

Рго

С1и

С1п

Тух

Тгр

Азр

Рго

35

40

45

Ъеи

С1у

ТЬг

Суз

МеЪ

Зег

Суз

Ъуз

ТЫ

11е

Суз

Азп

Н±з

С1п

Зег

50

55

60

С1п

Агд

ТЪг

Суз

А1а

РЬе

Суз

Агд

Зег

Ъеи

5ег

Суз

Агд

Ъуз

С1и

65

70

75

80

С1п

С1у

Ъуз

РНе

Тгр

Азр

Н13

Ъеи

Агд

Азр

Суз

11е

Зег

Суз

А1а

85

90

95

5ег

Не

Суз

С1у

С1п

Ηςβ

Рго

Ъуз

С1п

Суз

А1а

Тух

РНе

Суз

С1и

Азп

100

105

110

Ъуз

Ъеи

Агд

Зег

С1и

Рго

Ъуз

Зег

Азр

Ъуз

ТЬг

Н1з

ТЫ

Суз

Рго

115

120

125

Рго

Суз

Рго

А1а

Рго

С1и

А1а

С1и

61у

А1а

Рго

Зег

Уа1

₽Ье

Ъеи

РЬе

130

135

140

Рго

Туз

Рго

Ъуз

Азр

ТЬг

Ъеи

МеЬ

11е

Зег

Агд

ТЬг

Рго

С1и

Уа1

145

150

155

160

ТЬг

Суз

Уа1

Авр

Уа1

Зег

ΗΪ3

С1и

Азр

Рго

С1и

ν=ιΐ

Ъуз

РЬе

165

170

175

Азп

Тгр

Туг

7а1

Азр

<31у

Уа1

С1и

Уа1

ΗΪ3

Азп

А1а

Ъуз

ТЫ

Ъуз

Рго

180

185

190

Агд

С1и

С1п

Туг

Азп

Зег

ТЬг

Туг

Агд

Уа1

Зег

Уа1

Ъеи

ТЫ

195

200

205

Уа1

Ъеи

Н1з

С1п

Азр

Тгр

Ъеи

Азп

С1у

Ъуз

С1и

Туг

Ъуз

Суз

Ъуз

Уа1

210

215

220

Зег

Азп

Ъуз

А1а

Ъеи

Рго

Зег

Не

С1и

Ъуз

ТЬг

Не

Зег

Ъуз

А1а

225

230

235

240

ΙψΞ

С1у

С1п

Рго

Агд

С1и

Рго

С1п

Уа1 'Туг

ТЬг

Ъеи

Рго

Зег

Агд

245

250

255

Азр

С1и

Ъеи

ТЬг

Ъуз

Азп

61п

Уа1

Зег

Ъеи

ТЬг

Суз

Ъеи

Уа1

Ъуе

51у

260

265

270

РЪе

Туг

Рго

Зег

Азр

11е

А1а

Уа1

С1и

Тгр

С1и

Зег

Азп

С1у

С1п

Рго

275

280

285

61и

Азп

Туг

Ъуз

ТЬг

Рго

Уа1

Ъеи

Азр

Зег

Азр

С1у

Зег

290

295

300

РЪе

РЬе

Ъеи

Туг

Зег

Ъуз

Ъеи

ТЬг

Уа1

Азр

Ъуз

Зег

Агд

Тгр

С1п

305

310

315

320

С1у

Азп

Уа1

РЬе

Зег

Суз

Зег

Уа1

Мее

Η1Ξ

С1и

А1а

Ъеи

ΗΪ3

Αεη

ΗΪ5

325

330

335

Туг

ТЫ

61п

Ьуа

Зег

Ъеи

Зег

Ъеи

Зег

Рго

61у

Ъу5

340

345

- 19 016083

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ лечения неходжкинской лимфомы у пациента, включающий в себя введение пациенту композиции, включающей в себя слитую молекулу, содержащую:

(ί) внеклеточный домен ТАС1 или его фрагмент, который связывает ВЬу8; и (ίί) константный домен человеческого иммуноглобулина, где указанную композицию вводят в количестве от 0,01 до 10 мг на 1 кг веса тела пациента с частотой, выбранной из:

(a) 5 раз в течение 4-недельного интервала;

(b) 5 раз в течение 4-недельного интервала с последующим дополнительным еженедельным введением и (c) 5 раз в течение 4-недельного интервала с последующим введением один раз в неделю в течение 2-30 недель.
2. Способ по п.1, в котором указанный внеклеточный домен ТАС1 включает аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 80% идентичную аминокислотным остаткам 30-110 8ЕО ГО N0: 1.
3. Способ по п.2, в котором указанный внеклеточный домен ТАС1 включает аминокислотные остатки 30-110 8ЕО ГО N0: 1.
4. Способ по п.1, в котором указанный константный домен человеческого иммуноглобулина включает модифицированную часть Ес человеческого 1дС и в котором предпочтительно указанной слитой молекулой является слитая молекула ТАС1-Ес5.
5. Способ по п.1, в котором указанная слитая молекула включает внеклеточный домен ТАС1 с аминокислотами 1-154 8Е0 ГО N0: 1.
6. Способ по п.1, в котором указанная слитая молекула включает 8Е0 ГО N0: 2.
7. Способ по п.1, дополнительно включающий в себя введение лекарственного средства, выбранного из группы, состоящей из бифосфоната, эритропоэтина, факторов роста гранулоцитов, колониестимулирующего фактора гранулоцитов, лекарственных средств для устранения боли, мелфалана, винкристина, доксорубицина, талидомида и аналогов нуклеозидов.
8. Способ по п.1, в котором указанную композицию вводят подкожно, орально или внутривенно.
9. Способ по п.1, где пациентом является человек.