DK173710B1 - Præparat og anordning til anvendelse til afsløring af dannet urease - Google Patents

Description

i DK 173710 B1

Den foreliggende opfindelse angår præparater til afsløring af dannet urease til diagnosticering af mavetarmsygdomme .

5 Faktorer, der har uheldig indvirkning på funktionen af mave tarmsys teinet hos mennesker, varierer i høj grad. Disse sygdomme kan forekomme i den øvre eller nedre mave-tarmkanal eller i begge områder. Der er en hel række forskellige grunde til mavetarmkanal-sygdomme, herunder ge-10 netisk-fysiologiske, miljømæssige og psykogene faktorer. Diagnose og behandling af disse sygdomme kan derfor være særdeles vanskelig. En detaljeret diskussion af mavetarm-kanal-funktionerne, af sygdomme, årsager og behandlinger kan findes hos Spiro, Clinical Gastroenterology (3. udga-15 ve 1983) .

Blandt de kroniske sygdomme i den øvre mavetarmkanal er de, der falder ind under den generelle betegnelse gastritis og peptisk mavesår. (Den øvre mavetarmkanal defineres 20 sædvanligvis som omfattende øsofagus, maven, duodenum, jejenum og ileum.) Peptisk mavesår er sårdannelser i ma-vetarrakanalens foring, der er karakteriseret ved tab af væv, der skyldes indvirkning af mavesyre og pepsin. Man har sædvanligvis antaget, at peptisk mavesår er forårsa-25 get enten af hypersekretion af mavesaft eller (oftere) ved nedsat modstandsdygtighed af mavens foring over for mavesafter og pepsin. Gastritis er pr. definition typisk ved en inflammation af mavemucosa. I praksis er imidlertid sygdommene manifesteret ved en hel række dårligt de-30 finerede og derfor ikke tilstrækkeligt behandlede sympto-ner som f.eks. fordøjelsesbesvær, '’halsbrand1', dyspepsi og kraftige opstød. En generel diskussion om gastritis kan ses hos B.J. Marshall og J.R. Warren, "Unidentified DK 175710 B1 2

Curved Bacilli in the Stomach of Patients with Gastritis and Peptic Ulceration", The Lancet, 1311-1315 (1984), og i R. Greenlaw, et al., "Gastroduodenitis, A Broader Concept of Peptic Ulcer Disease", 25 Digestive Diseases and 5 Sciences, 660-672 (1980). Som ved behandlingen af mange sygdomme er den hurtige, præcise og nøjagtige diagnose af mavetarm-sygdomme af stor betydning. Imidlertid er de diagnostiske metoder inden for fagområdet ofte langsomme, besværlige, kostbare og giver ikke-entydige eller unøjacf-10 tige resultater. Se f.eks. Sprio, ovenfor.

Det har nu vist sig, at mange sygelige tilstande i forbindelse med den øvre mavetarmkanal skyldes bakterier, som f.eks. Campylobacter, specielt Capylobacter pylori -15 dis.

De for øjeblikket anvendte metoder til at afsløre Campylobacter pylorides er tidskrævende og kostbare. Specielt er det ikke muligt at udføre en undersøgelse for at af-20 sløre infektionen inden for det tidsrum, som en patient har hos en læge.

Det er derfor et behov for yderligere konsultation. Campylobacter pyloridis er næsten enestående ved sin evne 25 til at frembringe store mængder ureaseenzym. Urease spalter urinstof under dannelse af ammoniak og carbondioxid.

Det har nu vist sig, at ureaseenzymet frembragt af Campylobacter pyloridis er så aktivt, at det ødelægger alt 30 tilstedeværende urinstof i mennesker mavesaft. Den foreliggende opfindelse tilvejebringer således en metode til at afsløre foruddannet urease til stedet i mavesaft inficeret med Campylobacter pyloridis. Tilstedeværelsen af DK 173710 B1 3 sådan foruddannet urease i mave slimhinden er et sygelighedstegn på infektionen og angiver, at der er gastritis. Yderligere har den omhandlede fremgangsmåde almindelig anvendelse til afsløring af foruddannet urease. For ek-5 sempel kan den anvendes til afsløring af foruddannet urease i opkast fra patienter med Campylobacter pyloridis gastritis. Tilstedeværelsen af urease kan være en indikation på tilstedeværelsen af toxiner i afgræsningsarealerne, der kan forårsage luftdannelse eller trommesyge hos 10 dyr.

Den omhandlede fremgangsmåde og anordning er således en hurtig, billig og nøjagtig diagnose for tilstedeværelsen af urease, der skyldes sådanne tilstande.

15 I én udførelsesform for opfindelsen tilvejebringes et præparat til afsløring foruddannet urease til diagnosticering af mavetarm-sygdomme hos mennesker eller mindre dyr, der er ejendommelig ved, at det omfatter 20 (a) urinstof, fortrinsvis i en koncentration på fra 10 til 40 gram pr. liter; (b) et baktericid, der i alt væsentligt hæmmer væksten af ureasedannende organismer, fortrinsvis i en koncentration på fra 1 til 5 gram pr. liter; 25 {c) en pH-indikator, der undergår farveforandring ved en stigning i pH i en effektiv koncentration; og (d) vand; idet præparatet har et surt pH på mindst 5,0, og at præparatets pH er mindst én pH-enhed lavere end indikatorens 30 pK,.

Det omhandlede præparat er fortrinsvis i gelform, indeholdende et gelerende middel i en koncentration på fra 5 DK 173710 B1 4 til 50 gram pr. liter. I en anden udførelsesform for opfindelsen tilvejebringes en anordning til afsløring at dannet urease. Alle koncentrationer er angivet i vægt af komponenten pr. rumfang af hele præparatet.

5

Medfølgende tegning viser en foretrukken anordning ti. 1 anvendelse ved den omhandlede fremgangsmåde. Fig. 1 er således en isometrisk afbildning af en forsøgsanordning med en afskåret del, der viser en beholder indeholdende 10 et omhandlet præparat; fig. 2 er et snit gennem anordningen fra fig. 1, og fig. 3 er en isometrisk afbildning af anordningen fra fig. 1, idet anordningen er i brug.

I den nærværende beskrivelse med krav angiver "en effek-15 tiv koncentration" af indikatoren en koncentration af indikatoren, der udviser en let skelnelig farve af det omhandlede præparat, når dette anvendes som angivet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Typisk findes indikatoren i en mængde på fra ca. 2 til ca. 150 mg pr. liter, 20 fortrinsvis på ca. 20 til ca. 150 mg pr. liter. Det har vist sig, at mængden af urinstof i området fra ca. 10 til 40 gram pr. liter af det omhandlede præparat er tilstrækkelig til reaktion med foruddannet urease, der typisk findes i prøver, for at frembringe en farveforandring.

25 Når ureasen kommer i kontakt med urinstoffet, sker der en reaktion, hvorved der frembringes ammoniak.

Tilstedeværelsen af ammoniak hæver pH i den tilstødende del af bærestofmediet, og dersom der er tilstrækkelig am- 30 moniak frembragt, forekommer der en farveforandring, på grund af pH-indikatorens tilstedeværelse. Foretrukkent forefindes urinstof i det omhandlede præparat i en koncentration på fra ca. 20 til ca. 40 g pr. liter.

DK 173710 B1 5 I den foreliggende beskrivelse med krav omfatter "mave-tarmsygdomme" en hvilken som helst sygdom eller sygelig tilstand i mavetarmkanalen hos mennesker eller mindre 5 dyr. Sådanne mavetarmsygdomme omfatter f.eks. sygelige tilstande, der ikke manifesterer sig ved tilstedeværelsen af mavesår i maveslimhinden (i det efterfølgende betegnet "ikke-ulcerativ mavetarmsygdom"), herunder kronisk eller atrofisk gastritis, gastroenteritis, ikke-mavesår dyspep-10 si, øsofogeal reflux sygdom og gastrisk motilitetssygdom-me; og "peptisk mavesår", d.v.s. mavesår eller duodenum-sår. Specielt omfatter "mavetarmsygdomme" sådanne sygdomme i den øvre mavetarmkanal, der er forårsaget eller fremkaldt af bakterier, herunder Capylobacter-lignende 15 organismer (i det efterfølgende betegnet "CLO") som f.eks. Campylobacter pyloridis. Sådanne CLO omfatter de, der er beskrevet af J.R. Warren og B.J. Marshall, "Unidentified Curved Bacilli on Gastric Epithelium in Active Chronic Gastritis", The Lancet 1273-1275 (1983), som der 20 herved henvises til.

Urinstof har formlen H^NCONHc og er et naturligt forekommende produkt i proteinstofskiftet. Urinstoffet, der anvendes i de omhandlede præparater, kan fås fra en hel , 25 række forskellige kommercielle kilder. Som basis for den omhandlede opfindelse har det vist sig, at mavemateriale fra mennesker eller dyr med mavetarmsygdomme indeholder I forholdsvis store mængder urease (urinstof amidohydrola- i se), der hydrolyserer urinstof til ammoniak og carbondio-30 xid (eller ammoniumcarbonat). De omhandlede præparater tjener således delvis til at afsløre tilstedeværelsen af urease gennem dettes hydrolyse af urinstof.

i DK 1717M0 B1 6 pH-indikatorerne, der kan anvendes ved den foreliggende opfindelse, er svage syrer med skarpt forskellige farvei inden for deres dissocierede (ioniserede) og ikke-dissocierede (neutrale) tilstande. De anvendelige indika-5 torer har fortrinsvis pKa-værdier på fra ca. 6,5 til ca.

8,5, fortrinsvis fra ca. 7,0 til ca. 8,0. Farven udvist af indikatoren i de omhandlede præparater afhænger af præparatets pH, af den specielt anvendte indikator og af dissociationskonstanten (Ka) for den pågældende indikator 10 (d.v.s. pKa = -logioKa) . Da farven udvist af indikatorer forandrer sig over en række pH-værdier (pH = -logic, [H+] ) , forandrer indikatorerne, der kan anvendes i det omhandlede præparat, sig over et pH-område fra ca. 5,5 til ca.

9,0, fortrinsvis fra ca. 6,5 til ca. 8,5. Det omhandlede 15 præparats pH er derfor indstillet til en pH-værdi på mindst ca. én pH-enhed under den anvendte indikators pK3 (d.v.s. har en hydrogenionkoncentration [H+], der er 10 gange mindre end (10% af) hydrogenionkoncentrationen i en opløsning, der har en pH-værdi, der er lig med indikato-20 rens pKJ .

Fortrinsvis indstilles pH til en pH-værdi ca. to pH-enheder under indikatorens pKa. Indstilling af de omhandlede præparaters pH kan udføres ved tilsætning af en 25 base, (f.eks. natriumhydroxid) eller en syre (f.eks. saltsyre eller citronsyre). Således indstilles det omhandlede præparats pH fortrinsvis til en pH-værdi fra ca.

5,0 til ca. 6,5, foretrukkent fra ca. 5,0 til ca. 6,0.

30 Indikatorer, der kan anvendes, omfatter p-nitrophenol, bromthymolblåt (dibromthymolsulfonphthalein), phenolrødt (phenolsulfonphthalein), neutralrødt (2-methyl-3-amino-6-dimethylaminophenazin), quinolinblåt (cyanin), cresolrødt DK 173710 B1 7 (o-cresolsulfonphthalein), metacresolpurpur (m-cresol-sulfonphthalein) og thymolblåt (thymolsulfon-phthalein). Bromthymthymolblåt, phenolrødt, neutralrødt og cresolrødt er de foretrukne indikatorer til de omhandlede præpara-5 ter.

Blandt anvendelige indikatorer er de, der er beskrevet i Merck Index (9. udgave 1976), som der herved henvises til.

10

Det i de omhandlede præparater indarbejdede baktericid er ét eller flere materialer, der i det væsentlige vil hæmme væksten af ureaseproducerende organismer i præparatet. Baktericidet forefindes fortrinsvis i en mængde på fra 2 15 til 4 gram pr. liter præparat.

Anvendelige baktericider omfatter natriumazid og methyl-hydroxybenzoat. Methylhydroxybenzoat er et særligt fore-trukkent baktericid. Den specielt anvendte mængde bakte-20 ricid i de omhandlede præparater afhænger af faktorer, der er velkendte inden for det mikrobiologiske område som f.eks. det pågældende anvendte baktericid og de bakteri-cide egenskaber (om de forefindes) af andre komponenter i de omhandlede præparater. Tilstedeværelsen af bakterici-25 det betyder, at uden overskud af alkali vil undersøgelsen kun give positivt resultat, dersom der findes foruddannet urease i den udtagne mavesaftprøve.

De omhandlede præparater kan eventuelt indeholde yderli-30 gere komponenter, der vil påvirke udseendet eller de særlige egenskaber ved præparaterne. Sådanne yderligere komponenter må imidlertid ikke gribe ind i indikatoren DK 1173710 B1 8 f.eks. ved at overskygge farveforandringen, der udvises af indikatoren.

De omhandlede præparater indeholder fortrinsvis et gele-5 rende middel, således at præparaterne er halvfaste vec stuetemperatur. Et særligt foretrukkent gelerende middel er agar, der fortrinsvis findes i en mængde på fra ca. i til ca. 50 g pr. liter, foretrukkent fra ca. 10 til ca.

20 g pr. liter. Den anvendte agar til de omhandlede præ-10 parater er lettilgængelige fra en hel række kommercielle kilder. Hyppigt ekstraheres agar (et polysaccharicl-kompleks) fra agarocyter i visse alger. Den foretrukne agar anvendt til de omhandlede præparater er fortrinsvis af ikke-spisekvalitet, d.v.s. udgør ikke en vækstkilde 15 for mikroorganismer. Da undersøgelsen kun skal afsløre tilstedeværelsen af foruddannet bakteriel urease, bør sædvanlige mikrobielle næringsstoffer helt udelades fra præparaterne.

20 En særlig foretrukken eventuel bestanddel i de omhandlede præparater er en puffer. Som angivet ovenfor indstilles de omhandlede præparater til en pH-værdi på mindst én pK-enhed under den anvendte indikators pK3. pH af det omhandlede præparat er således fortrinsvis fra ca. 5,0 til 25 ca. 6,5, foretrukkent fra ca. 5,0 til 6,0. Denne pH-værdi af slutpræparatet fås fortrinsvis ved tilsætning af en passende puffer. Sådanne puffere er velkendte inden for det kemiske fagområde og omfatter anvendelsen af svage sure salte som f.eks. natriumsulfat, natriumacetat og na-30 triumphosphat.

Den totale mængde anvendte puffer i det omhandlede præparat afhænger af den totale mængde urinstof indarbejdet i DK 173710 B1 9 præparatet, således at pufferen ikke forhindrer tilstrækkelig forandring i præparatets pH (der forekommer ved hydrolysen af det tilstedeværende urinstof), således at der forårsages en forandring i den anvendte indikators farve.

5 Hvis imidlertid pufferen forefindes i en koncentration, der er tilstrækkelig til at forhindre væsentlig forandring i præparatets pH og (derved) falske indikatorfarve-forandringer, der skyldes andre kemikalier end det foruddannede ureaseenzym i den maveprøve, der skal undersøges.

10 Hyppigst indarbejdes pufferen derfor i det omhandlede præparat i koncentrationer på fra ca. 50 til ca. 2000 mg pr. liter. (I den foreliggende beskrivelse med krav omfatter pufferkoncentrationen koncentrationen af puffersalt og syren, der anvendes for at udføre pH-15 indstillingen af præparatet).

I den foreliggende beskrivelse med krav betyder "maveprø-vemateriale" et hvilket som helst materiale, der direkte eller indirekte er opnået fra den øvre mavetarmkanal hos 20 et menneske eller et dyr. Sådant mavemateriale omfatter f.eks. maveepithel, maveslimhinde og mavesaft. Prøver af disse materialer, der skal undersøges ved den omhandlede fremgangsmåde, kan fås på en hel række måder, der er velkendte inden for almindelig medicinsk praksis. Sådanne 25 metoder omfatter f.eks. biopsiprøver af patienten, prøver af opkast fra patienten og opnåelse af en prøve fra næsemundhulen.

I efterfølgende beskrivelse med krav betyder "bringe i 30 kontakt”, at prøven bringes i kontakt med det omhandlede præparat ved en hvilken som helst metode, der giver væsentlig berøring mellem et omhandlet præparat og en prøve af mavematerialet i tilstrækkelig lang tid til at mulig- ίο DK17 J7- 0B1 gøre hydrolyse af urinstoffet af eventuelt tilstedeværende urease i prøven i tilstrækkelig grad til at frembringe en synlig farveforandring. Et sådant tidsrum er typisk længere end ca. 5 minutter og typisk 5 til 15 minutter.

5 Fortrinsvis neddykkes prøvematerialet imidlertid eller neddykkes i det væsentlige i det omhandlede præparat. Man sørger fortrinsvis også for at undgå forurening af mave-prøven med organismer fra andre kilder end den patients mave, der skal undersøges. Dersom det undersøgte mavema-10 teriale er mavesaft, er et eventuelt foretrukkent trin at undersøge mavematerialets pH. Prøven bringes fortrinsvis derfor i kontakt med et pH-undersøgt præparat, der er en vandig opløsning af den pågældende indikator, der anvendes i det omhandlede præparat (uden urinstof), indstillet 15 til samme pH som det urinstofholdige omhandlede præparat.

Dersom det udtagne mavemateriale ikke forandrer indikatorens farve i pH-undersøgelsesudstyret, er materialet af sur pH-værdi og kan anvendes direkte til at bringe i kontakt som beskrevet ovenfor med den omhandlede anordning, 20 Hvis derimod farven af pH-undersøgelsespræparatet forandrer sig, bør mavematerialets pH indstilles til sur reaktion ved tilsætning af en syre. i

Undersøgelsen omfatter afsløring af eventuel farveforan-25 dring i præparatets farve til den farve, der udvises af indikatoren i dens dissocierede tilstand. Dersom farven ikke forandres efter ca. 24 timer, er dette et negativt forsøgsresultat.

30 I de fleste tilfælde vil lægen have resultaterne, inden patienterne forlader hende, og hun kan derfor straks påbegynde behandlingen. Yderligere prøver er eventuelt ikke nødvendige. Dersom der findes et lille antal bakterier.

DK 173710 B1 11 kan en forsinket reaktion forekomme, der kan aflæses næste dag, men dette forekommer i mindre end 10% af de positive tilfælde. Da alle patienter inficeret med Campylobacter pyloridis har gastritis, vil et positivt resultat 5 også påvise tilstedeværelsen af denne tilstand. Den omhandlede fremgangsmåde udøves fortrinsvis under anvendelse af den anordnede, i det efterfølgende betegnet "diag-nostisk anordning”, der indeholder en mængde af det omhandlede præparat i en let håndterbar beholder. En sådan 10 anordning er ejendommelig ved, at den omfatter: (a) en beholder, der har et åbningsareal på fra 20 mm2 til 200 mm2 og som indeholder et rumfang på fra 40 mm3 til 1000 mm3; og (b) et låg for beholderen, der er fastgjort til behol- 15 deren med midler, der muliggør, at låget kan fjer nes, således at beholderåbningen åbnes og lukkes; idet beholderen indeholder fra 0,04 til 2,0 ml af det omhandlede præparat. Fortrinsvis indeholder beholderen fra 0,20 ml til 0,40 ml af det omhandlede præparat.

20 ______ ... .. .

En foretrukken diagnostisk anordning er afbildet i fig. 1 til 3, hvor fig. 1 og 2 viser en beholder 3, der er dannet som en konkav form eller brønd i en kontinuer flad holder 2, der er en plan flade af stift eller halvstift 25 vandgennemtrængeligt materiale. Beholderen indeholder det omhandlede materiale 4. Et låg 1 er fastgjort til beholderen og fremstillet af et fleksibelt, vandgennemtrængeligt materiale og er af samme dimensioner som det stive holder folie 2. Som angivet i fig. 1 er et mærke 5 for-30 trinsvis fastgjort eller trykt direkte på det fleksible låg 1. Fig. 3 viser den diagnostiske anordning med det fleksible låg delvis fjernet, åbningen af beholderen 3, hvorved en prøve af mavematerialet 6 kan anbringes i for- DK 173710 B1 12 søgspræparatet 4 under anvendelse af en passende anordning som f.eks. en pincet Ί.

Det fleksible låg 1 er fastgjort til den stive behol-5 der/holdermateriale 2 med midler, der muliggør dets fjernelse, og således, at beholderen kan åbnes og lukkes f.eks. ved hjælp af et klæbemiddel, der forbliver funktionsdygtigt (klæbrigt) undre gentagne åbninger og lukninger af beholderen.

10

Fortrinsvis er lukkematerialet tilstrækkeligt tyndt til., at man kan stikke en injektionssprøjte igennem og indsprøjte det flydende mavesaftmateriale direkte i præparatet uden at åbne låget. Den beskrevne diagnostiske anord-15 ning muliggør, at positive resultater let kan ses, og at anordningen er flad nok til, at den kan findes i lægens lomme eller være fastgjort til en patients endoskopirap-port, hvilket muliggør, at prøven kan undersøges for sene positive resultater.

20 Følgende ikke begrænsende eksempler illustrerer de omhandlede præparater, fremgangsmåden og den omhandlede anordning.

DK 173710 B1 13 EKSEMPEL 1

Et omhandlet præparat fremstilledes omfattende følgende 5 komponenter i vand:

Komponent Mængde (g) Slutkoncentration

Urinstof 3,000 30 g/1 10 Phenolrødt* 0,008 90 mg/1

Methylhydroxy- benzoat 0,200 2 g/1

Bakteriologisk agar 1,500 15 g/1 15 Citronsyre 0,040 400 mg/1

Natriumphosphat 0,080 800 mg/1

*: phenolsulfophthalein-indikator med pK3 =7,9 udviser en gul farve i dissocieret tilstand (under pH 20 6,4) og en rød farve i dissocieret tilstand (over pH

8,2} .

Bestanddelene, bortset fra urinstof, opløses i 100 ml vand, opvarmes til 100 °C og omrøres, indtil opløsningen 25 var klar. Opløsningen afkøledes herefter til under 45 °C, og urinstof tilsattes under omrøring, og opløsningens pH måltes til 6,0. Herefter hældtes præparatet i beholdere i en omhandlet anordning, idet hver beholder indeholdt ca.

0,3 ml af præparatet. Man lod præparatet afkøle til stue-30 temperatur, hvorved der dannedes en gel i beholderen, der havde en dyb gul farve.

DK 175710 B1 14

Et præparat fremstillet som oven for anvendtes til at undersøge en prøve maveslimhinde fra maven af et menneske, der havde symptomer på gastritis. Slimhindeprøven indførtes herefter i præparatet, og farven undersøgtes. Efter 5 omtrent 15 minutters forløb sås en rød farve, hvilket angav tilstedeværelsen af CLO-afhængig mavetarmsygdom.

EKSEMPEL 2 10 Et omhandlet præparat fremstilledes under anvendelse af følgende komponenter i vand:

Komponent Mængde (g) 5lutkoncentration 15 Urinstof 2, 000 20 g/1

Phenolrødt 0,006 60 mg/l

Natriumazid 0,100 1 g/1

Agar 2,000 20 g/1 20 Komponenterne opløses i 100 ml vand, opvarmes til 100 °C, og pH indstilledes til 5,50. Omtrent 0,3 ml af præparatet hældtes i beholdere i en omhandlet anordning og henstod for at afkøle, hvorved der dannedes en gel.

25 Præparatet og anordningen anvendtes til undersøgelse af en prøve opkast fra et barn, der var mistænkt for at have gastritis. En prøve af opkastet fjernedes med en kanyle, og en del indsprøjtedes i et pH-undersøgelsespræparat bestående af 0,6 mg phenolrødt i 10 ml vand, indstillet til 30 pH 5,5. Farven af pH-prøvepræparatet forandredes ikke. Herefter indførtes resten af opkastet i det omhandlede præparat ved at gennemstikke anordningens låg. Farven undersøgtes i omtrent 20 minutter, idet man så en foran- DK 173710 B1 15 dring i farven fra dyb gul til rød, hvilket indikerede tilstedeværelsen af en mavetarmsygdom.

Forandringer og variationer kan naturligvis foretages 5 uden at gå uden for den foreliggende opfindelses rammer.

10 15

Claims (13)

1. Præparat til afsløring af dannet urease til diagnostic 5 cering af mave tarmsygdomme, kendetegnet ved, at det omfatter (a) urinstof, (b) et baktericid, der i alt væsentligt hæmmer væksten af ureasedannende organismer 10 (c) en pH-indikator, der undergår en farveændring ved en stigning af pH i en effektiv koncen-i tration, og (d) vand, idet præparatet har et surt pH på mindst 5,0, og at præ-15 paratets pH er mindst én pH-enhed lavere end indikatorens pKa.

2. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indeholder urinstof i en koncentration på fra 10 20 til 40 gram pr. liter.

3. Præparat ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at baktericidet forefindes i en koncentration på fra 1 til. 5 gram pr. liter. 25

4. Præparat ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at pH-indikatoren har en pK3 på fra 6,5 til 8,5.

5. Præparat ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at pH-indikatoren findes i en koncentration på fra 2 til 150 mg pr. liter. DK 173710 B1

6. Præparat ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at pH-indikatoren er phe-nolrødt.

7. Præparat ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at det har en pH på fra 5,0 til 6,5.

8. Præparat ifølge et vilkårligt af de foregående krav, 10 kendetegnet ved, at det yderligere omfatter en pH-puffer.

9. Præparat ifølge et vilkårligt af de foregående krav, kendetegnet ved, at det yderligere omfatter 15 et geleringsmiddel.

10. Præparat ifølge krav 9, kendetegnet ved, at geleringsmidlet findes i en koncentration på fra 5 til 50 gram pr. liter. 20

11. Præparat ifølge krav 9 eller 10 kendetegne t ved, at geleringsmidlet er agar.

12. Præparat ifølge et vilkårligt af de foregående krav, 25 kendetegnet ved, at det ikke indeholder mikrobielle næringsstoffer.

13. Anordning til anvendelse til afsløring af dannet urease, kendetegnet ved, at den omfatter: 30 (a) en beholder med et åbningsareal på fra 20 mm2 til 200 mm2 og et totalrumfang på fra 40 mm3 til 1000 mm3, og (b) et låg for beholderen fastgjort til beholde- 35 ren med midler, der muliggør, at lukket kan DKm710B1 18 ! fjernes, således at beholderåbningen åbnes og lukkes, idet beholderen indeholder fra 0,04 til 2,0 ml af et præparat ifølge et vilkårligt af kravene 1 til 12. 5 10 15