DE69432530T2 - Somatostatin derivate und deren radiomarkierte produkte - Google Patents

Somatostatin derivate und deren radiomarkierte produkte Download PDF

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Description

  • ALLGEMEINER STAND DER TECHNIK
  • 1. Gebiet der Erfindung
  • Diese Erfindung betrifft therapeutische Mittel und Peptide, radiotherapeutische Mittel und Peptide, radiodiagnostische Mittel und Peptide und Verfahren zum Herstellen solcher markierten radiodiagnostischen und radiotherapeutischen Mittel. Speziell betrifft die Erfindung lineare Peptidderivate und -analoge von Somatostatin und Ausführungsformen solcher Peptide, die mit gammastrahlenemittierenden Radioisotopen, wie z. B. Technetium-99m (Tc-99m) markiert sind, sowie Verfahren und Kits zum Herstellen, radioaktiven Markieren und Verwenden solcher Peptide, um Stellen in einem Säugetierkörper bilderzeugend darzustellen. Die Erfindung betrifft auch lineare Peptidderivate und -analoge von Somatostatin, die mit zytotoxischen Radioisotopen, wie z. B. Rhenium-186 (186Re) und Rhenium-188 (188Re) markiert sind und Verfahren und Kits zum Herstellen, radioaktiven Markieren und Verwenden solcher Peptide zu therapeutischen Zwecken in einem Säugetierkörper.
  • 2. Beschreibung des Standes der Technik
  • Somatostatin ist ein Tetradecapeptid, das im Körper von Menschen oder anderen Säugetieren von dem Hypothalamus und der Bauchspeicheldrüse erzeugt wird. Das Peptid besitzt die Formel:
  • Formel I
    Figure 00010001
  • (Einbuchstabige Abkürzungen für Aminosäuren können bei G. Zubay, Biochemistry (2. Aufl.), 1988, (MacMillan Publishing: New York), 5.33, gefunden werden. Dieses Peptid übt in vivo eine breite Vielfalt an biologischen Wirkungen aus. Es ist bekannt, dass es physiologisch auf das zentrale Nervensystem, den Hypothalamus, die Bauchspeicheldrüse und den Magen-Darm-Trakt wirkt.
  • Somatostatin hemmt die Freisetzung von Insulin und Glucagon durch die Bauchspeicheldrüse, hemmt die Wachstumshormonfreisetzung durch den Hypothalamus und verringert Magensekretionen. So findet Somatostatin klinische und therapeutische Anwendungen zur Linderung einer Anzahl von Leiden und Krankheiten, sowohl bei Menschen als auch bei anderen Tieren. Natives Somatostatin ist aufgrund seiner kurzen Halbwertszeit in vivo, wo es rasch von Peptidasen abgebaut wird, von begrenzter Nützlichkeit. Aus diesem Grund sind Somatostatinanaloge, die in vivo eine verbesserte Stabilität aufweisen, im Stand der Technik entwickelt worden.
  • Freidinger, US-Patentschrift Nr. 4,235,886, offenbart cyclische Hexapeptid-Somatostatinanaloge, die zur Behandlung einer Anzahl von Krankheiten beim Menschen nützlich sind.
  • Coy und Murphy, US-Patentschrift Nr. 4,485,101, offenbart synthetische Dodecapeptid-Somatostatinanaloge.
  • Freidinger, US-Patentschrift Nr. 4,611,054, offenbart cyclische Hexapeptid-Somatostatinanaloge, die bei der Behandlung einer Anzahl von Krankheiten beim Menschen nützlich sind.
  • Nutt, US-Patentschrift Nr. 4,612,366, offenbart cyclische Hexapeptid-Somatostatinanaloge, die bei der Behandlung einer Anzahl von Krankheiten beim Menschen nützlich sind.
  • Coy et al., US-Patentschrift Nr. 4,853,371, offenbaren synthetische Octapeptid-Somatostatinanaloge.
  • Coy und Murphy, US-Patentschrift Nr. 4,871,717, offenbaren synthetische Heptapeptid-Somatostatinanaloge.
  • Coy et al., US-Patentschrift Nr. 4,904,642, offenbaren synthetische Octapeptid-Somatostatinanaloge.
  • Taylor et al., US-Patentschrift Nr. 5,073,541, offenbaren ein Verfahren zum Behandeln von kleinzelligem Lungenkrebs.
  • Brady, EP-A-0 113 029, offenbart dicyclische Hexapeptid-Somatostatinanaloge, die bei der Behandlung einer Anzahl von Krankheiten des Menschen nützlich sind.
  • Bauer et al., EP-A-0 187 622, offenbaren Somatostatinderivate, die bei der Behandlung einer Anzahl von Krankheiten des Menschen nützlich sind.
  • Eck und Moreau, EP-A-0 389 180, offenbaren therapeutische Octapeptid-Somatostatinanaloge.
  • Coy und Murphy, EP-A-0 395 417, offenbaren lineare Somatostatinanaloge.
  • Coy und Murphy, WO-A-91/09056, offenbaren Somatostatinanaloge für therapeutische Zwecke.
  • Schally et al., EP-A-0 450 480, offenbaren cyclische Peptide zur therapeutischen Verwendung.
  • Bodgen und Moreau, WO-A-92/13554, offenbaren Zusammensetzungen und Verfahren zum Behandeln von Hautkrankheiten.
  • Somatostatin übt seine Wirkungen durch das Binden an spezifische Rezeptoren aus, die auf der Zelloberfläche von Zellen exprimiert werden, umfassend das zentrale Nervensystem, den Hypothalamus, die Bauchspeicheldrüse und den Magen-Darm-Trakt. Es ist festgestellt worden, dass diese Somatostatin-Bindungsstellen hoher Affinität zahlreich an der Zellenoberfläche der meisten im Körper aktiven Tumoren exprimiert werden, die aus diesen Geweben hervorgehen. Die Expression von Bindungsstellen hoher Affinität zu Somatostatin ist ein Marker für diese Tumorzellen, und das spezifische Binden von Somatostatin kann ausgenutzt werden, um Tumorzellen in vivo zu lokalisieren und zu identifizieren.
  • Verfahren zum radioaktiven Markieren von Somatostatinanalogen, die so modifiziert worden sind, dass sie eine Tyrosin-Aminosäure (Tyr oder Y) enthalten, sind in dem Fachgebiet bekannt.
  • Albert et al., GB-A-2 225 579, offenbaren die radioaktiv-bilderzeugende Darstellung unter Verwendung von Somatostatinderivaten, wie z. B. Octreotid, das mit 123I markiert ist.
  • Bakker et al., 1990, J. Nucl. Med. 31: 1501 bis 1509, beschreiben die radioaktive Iodierung eines Somatostatinanalogen und seine Nützlichkeit zum Erfassen von Tumoren in vivo.
  • Bakker et al., 1991, J. Nucl. Med. 32: 1184 bis 1189, lehren die Nützlichkeit von radioaktiv markiertem Somatostatin zur radioaktiv-bilderzeugenden Darstellung in vivo.
  • Bomanji et al., 1992, J. Nucl. Med. 33: 1121 bis 1124, beschreiben die Verwendung von iodiertem (Tyr-3)-Octreotid zur bilderzeugenden Darstellung von metastasischen, krebsartigen Tumoren.
  • Alternativ dazu sind Verfahren zum radioaktiven Markieren von Somatostatin durch kovalentes Modifizieren des Peptids, so dass es eine Radionuklidchelatierende Gruppe enthält, in dem Stand der Technik offenbart worden.
  • Albert et al., GB-A-2 225 579, offenbaren die radioaktiv-bilderzeugende Darstellung unter Verwendung von Somatostatinderivaten, wie z. B. Octreotid, die über eine chelatierende Gruppe, die an dem Amino-Terminus gebunden ist, mit 111In markiert sind.
  • Albert et al., WO 91/01144, offenbaren die radioaktiv-bilderzeugende Darstellung unter Verwendung von radioaktiv markierten Peptiden, die mit Wachstumsfaktoren, Hormonen, Interferonen und Zytokinen im Zusammenhang stehen und aus einem spezifischen Erkennungspeptid bestehen, das kovalent an eine Radionuklid-chelatierenden Gruppe gebunden ist.
  • Albert et al., EP-A-0 515 313, offenbaren Somatostatinpeptide, die über endständige Aminogruppen gebundene Chelatbildner aufweisen.
  • Faglia et al., 1991, J. Clin. Endocrinol. Metab. 73: 850 bis 856, beschreiben das Erfassen von Somatostatinrezeptoren in Patienten.
  • Kwekkeboom et al., 1991, J. Nucl. Med. 32: 981, Zusammenfassung Nr. 305, betrifft das radioaktive Markieren von Somatostatinanalogen mit 111In.
  • Albert et al., 1991, Zusammenfassung LM10, 12th American Peptide Symposium: 1991, beschreiben Verwendungszwecke für mit 111In markierte, mit Diethylentriaminopentaessigsäure derivatisierte Somatostatinanaloge.
  • Krenning et al., 1992, J. Nucl. Med. 33: 652 bis 658, beschreiben die klinische Szintigraphie unter Verwendung von (111In)(DTPA)-Octreotid.
  • Diese Verfahren können auf einfache Weise angepasst werden, um das Erfassen von Tumorzellen in vivo durch radioaktiv-bilderzeugende Darstellung, basierend auf der Expression von Bindungsstellen mit hoher Affinität zu Somatostatin an Tumorzellen, zu ermöglichen. Radionuklide, die Gammastrahlung aussenden, können nach der Injektion in einen Menschen oder ein Tier durch Szintigraphie leicht erfasst werden. Von einer Vielzahl an Radionukliden ist bekannt, dass sie für die radioaktiv-bilderzeugende Darstellung nützlich sind, einschließlich 67Ga, 68Ga, 99mTc (Tc-99m), 111In, 123I oder 125I. Die Empfindlichkeit von bilderzeugenden Verfahren, die radioaktiv markierte Peptide verwenden, ist viel höher als die anderer Verfahren, die in dem Fachgebiet bekannt sind, da das spezifische Binden des radioaktiven Peptids das radioaktive Signal auf die interessierenden Zellen, z. B. Tumorzellen, konzentriert. Dies ist besonders bei endokrin aktiven Magen-Darm-Tumoren wichtig, die gewöhnlich klein, langsam wachsend und mit herkömmlichen Verfahren schwierig nachzuweisen sind. Das Markieren mit Technetium-99m (Tc-99m) ist vorteilhaft, da seine nuklearen und radioaktiven Eigenschaften dieses Isotop zu einem idealen Mittel zur szintigraphischen bilderzeugenden Darstellung machen. Tc-99m besitzt eine Einzelphotonenenergie von 140 keV und eine radioaktive Halbwertszeit von etwa 6 Stunden und ist durch einen 99Mo-99mTc-Erzeuger leicht verfügbar. Andere Radionuklide besitzen effektive Halbwertszeiten, die viel länger sind (z. B. 111In, das eine Halbwertszeit von 60 bis 70 h besitzt) oder sind toxisch (z. B. 125I). Obwohl Tc-99m ein ideales Reagens für die radioaktive Markierung ist, ist es vor der vorliegenden Erfindung in dem Fachgebiet nicht weit verbreitet benutzt worden (siehe z. B. Lambers, J. Nucl. Med. 32: 1189 bis 1191 (1991)).
  • Somatostatin und radioaktiv markierte Somatostatinanaloge können auch therapeutisch verwendet werden. Für diese Anwendungen sind zytotoxische Radioisotope vorteilhaft, wie z. B. Scandium-47, Kupfer-67, Gallium-72, Yttrium-90, Iod-125, Iod-131, Samarium-153, Gadolinium-159, Dysprosium-165, Holmium-166, Ytterbium-175, Lutetium-177, Rhenium-186, Rhenium-188, Astat-211 und Bismut-212. Die Rheniumisotope 186Re und 188Re sind besonders vorteilhaft.
  • Die Verwendung von Chelatbildnern zum radioaktiven Markieren von Proteinen ist im Stand der Technik bekannt, und Verfahren zum Markieren von Peptiden mit Tc-99m sind in den US-Patentschriften Nr. 5,654,272, 5,225,180, 5,443,815, 6,017,510, 5,965,107, 5,849,260, 5,508,020, 5,979,064, 5,405,597, 5,552,525, 5,645,815, 5,561,220, 6,017.509, 5,620,675, 5,843,403, 6,248,304, 5,783,170, 5,866,097, 5,830,856 und 5,997,844 und in den internationalen PCT-Anmeldungen WO-A-92/13572, WO-A-93/10747, WO-A-93/17719, WO-A-93/21962, WO-A-93/23085, WO-A-94/00489, WO-A-94/07918, WO-A-94/19024, WO-A-94/28942 und WO-A-95/00553 offenbart.
  • Fritzberg, US-Patentschrift Nr. 4,444,690, beschreibt eine Reihe von Chelatbildnern für Technetium, die auf 2,3-Bis(mercaptoacetamido)propionat basieren.
  • Gansow et al., US-Patentschrift Nr. 4,472,509, lehrt Verfahren zum Herstellen und Reinigen von Tc-99m-Chelat-konjugierten monoklonalen Antikörpern.
  • Reno und Bottino, EP-A-0 237 150, offenbaren das radioaktive Markieren von Antikörpern mit Tc-99m.
  • Pak et al., WO 88/07382, offenbaren ein Verfahren zum Markieren von Antikörpern mit Tc-99m.
  • Cox, WO-A-92/21383, offenbart radioaktiv markierte Somatostatinderivate, die zwei Cysteinreste enthalten.
  • Rhodes, 1974, Sem. Nucl. Med. 4: 281 bis 293, lehrt das Markieren von menschlichem Serumalbumin mit Technetium-99m.
  • Khaw et al., 1982, J. Nucl. Med. 23: 1011 bis 1019, offenbaren Verfahren zum Markieren von biologisch aktiven Makromolekülen mit Tc-99m.
  • Byrne und Tolman, siehe oben, offenbaren ein bifunktionelles Thiolacton-Chelatierungsmittel zum Koppeln von Tc-99m an biologische Moleküle.
  • Cox et al., 1991, Zusammenfassung, 7th International Symposium on Radiopharmacology, S. 16, offenbaren die Verwendung von mit Tc-99m, 131I und 111In markierten Somatostatinanalogen bei der radioaktiven Lokalisierung von endokrinen Tumoren in vivo durch Szintigraphie.
  • Verfahren zum direkten Markieren von Somatostatin, Derivaten von Somatostatin, Analogen von Somatostatin oder Peptiden, die sich an den Somatostatinrezeptor binden und mindestens 2 Cysteinreste enthalten, die ein Disulfid bilden oder worin das Disulfid zu der Sulfhydrylform reduziert ist, sind in der ebenfalls abhängigen US-Patentanmeldung mit der Serien-Nr. 07/807,062, jetzt US-Patent Nr. 5,225,180, erteilt am 6. Juli 1993, offenbart.
  • Es besteht weiterhin ein Bedarf an synthetischen (um die routinemäßige Herstellung praktikabel zu gestalten und die behördliche Zulassung zu erleichtern) Somatostatinanalogen, die eine erhöhte In-Vivo-Stabilität aufweisen, um therapeutisch als Szintigraphiemittel, wenn sie zur Verwendung bei der bilderzeugenden Darstellung von Tumoren in vivo mit Tc-99m oder anderen erfassbaren Radioisotopen radioaktiv markiert sind, und als radiotherapeutische Mittel, wenn sie mit einem zytotoxischen Radioisotop wie Rhenium-188 radioaktiv markiert sind, verwendet zu werden. Von dieser Erfindung werden kleine synthetische Somatostatinanaloge bereitgestellt, die speziell diesen Bedarf stillen.
  • ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
  • Die vorliegende Erfindung stellt Somatostatinanaloge, die lineare Peptide sind, für therapeutische Anwendungen, einschließlich radiotherapeutischer Anwendungen und diagnostischer Anwendungen, einschließlich radiodiagnostischer Anwendungen, insbesondere szintigraphische bilderzeugende Anwendungen, bereit. Zum Unterschied von nativem Somatostatin und Somatostatinanalogen, die im Stand der Technik bekannt sind, sind die linearen Peptide der Erfindung nicht innerhalb einer zyklischen Struktur eingeschlossen. Die Erfindung stellt auch lineare Peptidreagenzien bereit, die aus den linearen Peptid-Somatostatinanalogen der Erfindung bestehen, wobei solche Peptide kovalent an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit gebunden sind. Die Erfindung stellt solche linearen Peptide, linearen Peptidreagenzien und radioaktiv markierten linearen Peptidreagenzien bereit, die szintigraphische bilderzeugende Mittel, radiodiagnostische Mittel und radiotherapeutische Mittel sind. Szintigraphische bilderzeugende Mittel der Erfindung umfassen lineare Peptidreagenzien, die mit einem Radioisotop, vorzugsweise Technetium-99m, radioaktiv markiert sind. Radiotherapeutische Mittel der Erfindung umfassen lineare Peptidreagenzien, die mit einem zytotoxischen Radioisotop, vorzugsweise Rhenium-186 oder Rhenium-188, radioaktiv markiert sind. Verfahren zum Herstellen und die Verwendung solcher linearen Peptide, linearen Peptidreagenzien und radioaktiv markierten Ausführungsformen davon sind ebenfalls bereitgestellt.
  • Die vorliegende Erfindung stellt auch szintigraphische bilderzeugende Mittel bereit, die aus einem linearen Peptid bestehen, das ein Somatostatinanaloges ist und das mit Iod-123, Iod-125 oder Iod-131 markiert ist. In ähnlicher Weise stellt die Erfindung alternative Ausführungsformen der linearen Somatostatinpeptidanalogen, die mit Iod-125, Iod-131 oder Astat-211 radioaktiv markiert sind, zur Verwendung als therapeutische Mittel bereit.
  • Die Somatostatinanalogen, die von der Erfindung bereitgestellt sind, sind Somatostatinrezeptor-bindende Peptide, welche die folgende Formel aufweisen:
  • Formel II
  • X1-A1A2-B1B2B3B4-C1C2-X2, wobei X1 und X2 jeweils unabhängig voneinander für hydrophile Einheiten stehen;
    A1, A2 und C1 jeweils unabhängig voneinander für eine lipophile D- oder L-Aminosäure, S-alkyliertes Cystein, Penicillamin, Homocystein oder Homohomocystein stehen;
    B1 für D- oder L-Phe oder D- oder L-Tyr oder D- oder L-Nal oder Ain steht;
    B2 für D- oder L-Trp steht;
    B3 für D- oder L-Lys oder Hly, Achxa, Amf, Aec, Apc, Aes oder Aps steht;
    B4 für D- oder L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal oder Aib steht;
    C2 für D- oder L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal oder Aib steht;
    mit der Maßgabe, dass es sich bei dem Somatostatinrezeptor-bindenden Peptidreagens nicht um GGGFD-Cpa.YWDKTFT-Amid handelt, das kovalent an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit gebunden ist, die dazu in der Lage ist, mit einem Radioisotop einen elektrisch neutralen Komplex zu bilden, oder dass es nicht eine der folgenden Strukturen ist:
    K[BAT]D.Nal.CMEYWDKVCMeT.-Amid; oder
    [DTPA]K[BAT]D-Nal.CMEYWDKVCMET.-Amid,
    die Teilgegenstand der Offenbarung von WO-A-9321962, veröffentlicht am 11-11-1993, sind.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform steht X1 für eine hydrophile Einheit, die eine Aminosäure oder ein Peptid mit einer Aminosäuresequenz von nicht mehr als 10 Resten oder ein Monosaccharid oder ein Oligosaccharid, das 10 oder weniger Saccharideinheiten umfasst, oder ein Poly(N-carboxyalkyl)amin oder ein Polyoxyanion umfasst. In einer anderen bevorzugten Ausführungsform steht X2 für eine hydrophile Einheit, die ein Poly(N-carboxyalkyl)amin oder ein Polyoxyanion oder eine Aminosäure oder ein Peptid mit einer Aminosäuresequenz von nicht mehr als 10 Resten (einschließlich Peptiden, in denen die Carboxylgruppe der Aminosäure mit Carboxyl-Terminus zu einem Alkohol reduziert ist) oder ein Monosaccharid oder ein Oligosaccharid umfasst, das 10 oder weniger Saccharideinheiten umfasst. In einer anderen bevorzugten Ausführungsform steht B1 für Phenylalanin oder Tyrosin, B2 für Tryptophan, am stärksten bevorzugt für D-Tryptophan, B3 steht für Lysin, und B4 steht für Threonin oder Valin.
  • Die Erfindung stellt auch lineare Peptidreagenzien bereit, die ein lineares Peptid der Formel II umfassen, das kovalent an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit gebunden ist, wobei X2 für -COOR9, CH2OH, CH2COOR9 oder CON(R9)2 steht, wobei R9 jeweils für H, niederes lineares oder cyclisches Alkyl steht oder mit einer hydrophilen Einheit substituiert ist und wobei die einen radioaktiven Marker bindende Einheit nicht kovalent an die Einheiten B1, B2, B3 oder B4 gebunden ist.
  • Die vorliegende Erfindung stellt Peptide bereit, die lineare Somatostatinpeptidanaloge, wie hierin beschrieben, sind, die verglichen mit nativem Somatostatin eine erhöhte In-Vivo-Stabilität aufweisen und die zur Linderung von Krankheiten oder anderen Leiden beim Menschen oder anderen Tieren therapeutisch nützlich sind.
  • Die Erfindung stellt auch szintigraphische bilderzeugende Mittel bereit, welche die linearen Peptidreagenzien der Erfindung umfassen, wobei die radioaktiv markierte Einheit mit einem Radioisotop stabil komplexiert ist. In einer solchen Ausführungsform ist ein szintigraphisches bilderzeugende Mittel bereitgestellt, wobei die linearen Somatostatinpeptidanalog-Reagenzien der Erfindung mit Technetium-99m radioaktiv markiert sind. In anderen Ausführungsformen der szintigraphischen bilderzeugenden Mittel der Erfindung ist das Radioisotop Indium-111 oder Gallium-68. In noch anderen Ausführungsformen sind die szintigraphischen bilderzeugenden Mittel der Erfindung lineare Peptide, die mit Iod-123 oder Iod-125 radioaktiv markiert sind.
  • Die Erfindung stellt auch radiotherapeutische Mittel bereit, welche die linearen Peptidreagenzien der Erfindung sind, die mit einem zytotoxischen Radioisotop radioaktiv markiert sind, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Scandium-47, Kupfer-67, Gallium-72, Yttrium-90, Iod-125, Iod-131, Samarium-153, Gado linium-159, Dysprosium-165, Holmium-166, Ytterbium-175, Lutetium-177, Rhenium-186, Rhenium-188, Astat-211 und Bismut-212 besteht. In bevorzugten Ausführungsformen ist das Radioisotop Rhenium-186 oder Rhenium-188. In zusätzlichen bevorzugten Ausführungsformen sind die cyclischen Peptide der Erfindung mit Iod-125, Iod-131 oder Astat-211 radioaktiv markiert.
  • In einer anderen Ausführungsform stellt die Erfindung therapeutische Mittel bereit, welche die linearen Somatostatinanalogpeptid-Reagenzien der Erfindung umfassen, die mit einem nichtradioaktiven Metall, wie z. B. Rhenium, komplexiert sind. Kombinationsausführungsformen, wobei ein derartiger Komplex ebenfalls radioaktiv markiert ist, entweder direkt oder über eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit, sind von der Erfindung ebenfalls bereitgestellt und sind innerhalb ihres Umfangs.
  • Die Erfindung stellt auch pharmazeutische Zusammensetzungen bereit, welche die Somatostatinrezeptor-bindenden Peptide der Erfindung in einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger umfassen.
  • Die Erfindung umfasst auch die Verwendung der vorliegenden Verbindungen/Reagenzien zum Herstellen eines Arzneimittels zum Lindern von mit Somatostatin in Zusammenhang stehenden Krankheiten bei Tieren, vorzugsweise Menschen, die das Verabreichen einer therapeutisch wirksamen Menge der Somatostatinanalogen der Erfindung an das Tier umfasst. In bevorzugten Ausführungsformen beträgt die Menge des verabreichten Somatostatinanalogen etwa 0,1 bis etwa 50 mg/kg Körpergewicht/Tag.
  • Es ist ein Vorteil der Somatostatinanalogen, die durch diese Erfindung bereitgestellt sind, dass die Peptide eine hohe Affinität zu Somatostatinrezeptoren bewahren, obwohl es lineare Peptide sind. Da den bevorzugten Ausführungsformen eine intramolekulare Disulfidbindung fehlt, ist das vorteilhafte Merkmal der linearen Somatostatinpeptidanalogen dieser Erfindung, dass ihre Stabilität nicht von der Bildung oder Fortdauer intramolekularer Disulfidbindungen abhängig ist. Dieses Merkmal ist wiederum vorteilhaft, da die hohe Affinität der Peptide dieser Erfindung zu Somatostatinrezeptoren somit keine Funktion der Integrität von labilen intramolekularen Vernetzungen, wie z. B. Disulfidbindungen, ist. Außerdem bewahren die Peptidreagenzien der Erfindung ihre hohe Affinität zu Somatostatinrezeptoren, nachdem sie dem radioaktiven Markieren durch eine kovalent gebundene, einen radioaktiven Marker bindende Einheit unterworfen worden sind. Im Gegensatz dazu kann z. B. die Tc-99m- Konjugation an eine Tc-99m-bindende Einheit, die kovalent an natives Somatostatin oder an ein Somatostatinanaloges gebunden ist, das eine Disulfidbindung aufweist, zu einer Reduzierung des Disulfids begleitet von einem Verlust biologischer Aktivität führen. Solch ein Verlust an biologischer Aktivität kann auch in vivo bei Verwendung von nativem Somatostatin oder einem beliebigen Somatostatinanalogen, das eine Disulfidbindung aufweist, auftreten. Die vorliegende Erfindung unterliegt keinen ähnlichen Verlusten der biologischen Aktivität in vivo, da die Somatostatinanalogen der Erfindung als lineare Peptide aktiv sind.
  • Ein erster Gesichtspunkt der Reagenzien, die von der Erfindung zum Herstellen von radioaktiv markierten Mitteln der Erfindung bereitgestellt sind, sind Reagenzien, die jeweils aus einem Peptid bestehen, das ein Somatostatinanaloges ist, das kovalent an eine einen radioaktiver Marker bindende Einheit gebunden ist, das die Formel aufweist: C(pgp)s-(aa)-C(pgp)s , wobei (pgp)s für H oder eine Thiolschutzgruppe und (aa) für eine beliebige α- oder β-Aminosäure steht. In einer bevorzugten Ausführungsform ist die Aminosäure Glycin. In einer anderen bevorzugten Ausführungsform ist das Mittel ein szintigraphisches bilderzeugendes Mittel. In einer noch anderen bevorzugten Ausführungsform ist das Mittel ein radiotherapeutisches Mittel.
  • In einer zweiten Ausführungsform stellt die Erfindung Peptidreagenzien, die in der Lage sind, radioaktiv markiert zu werden, zur Verwendung als szintigraphische bilderzeugende Mittel oder radiotherapeutische Mittel bereit, wobei jedes ein Somatostatinanaloges umfasst, das kovalent gebunden ist an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit der Formel: A-CZ(B)-(C(R'R''))n-X , wobei A für H, HOOC, H2NOC, (Aminosäure oder Peptid)-NHOC, (Aminosäure oder Peptid)-OOC oder R'''' steht; B für H, SH oder NHR''', -N(R''')(Aminosäure oder Peptid) oder R'''' steht; X für SH oder NHR"', -N(R''')(Aminosäure oder Peptid) oder R'''' steht; Z für H oder R'''' steht; R', R'', R''' und R'''' unabhängig voneinander für H oder gerad- oder verzweigtkettiges oder cyclisches niederes Alkyl stehen; n für 0, 1 oder 2 steht; und: (1) wenn B für -NHR''' oder -N(R''')-(Aminosäure oder Peptid) steht, X für SH und n für 1 oder 2 steht; (2) wenn X für NHR''' oder N(R''')-(Aminosäure oder Peptid) steht, B für SH und n für 1 oder 2 steht; (3) wenn B für H oder R"" steht, A für HOOC, H2NOC, (Aminosäure oder Peptid)-NHOC, (Aminosäure oder Peptid)-OOC steht, X für SH und n für 0 oder 1 steht; (4) wenn A für H oder R"" steht, dann wenn B für SH steht, X für -NHR"' oder N(R''')-(Aminosäure oder Peptid) steht, und wenn X für SH steht, B für NHR"' oder -N(R''')-(Aminosäure oder Peptid) steht; (5) wenn X für H oder R"" steht, A für HOOC, H2NOC, (Aminosäure oder Peptid)-NHOC, (Aminosäure oder Peptid)-OOC steht, und B für SH steht; (6) wenn Z für Methyl steht, X für Methyl steht, A für HOOC, H2NOC, (Aminosäure oder Peptid)-NHOC, (Aminosäure oder Peptid)-OOC steht und B für SH und n für 0 steht; und (7), wenn Z für SH steht und X für SH steht, n nicht für 0 steht; und wobei die Thioleinheit in der reduzierten Form vorliegt.
  • Bevorzugte Ausführungsformen dieser einen radioaktiven Marker bindende Einheit weisen die folgende chemische Formel auf: R1-CO-(Aminosäure)1-(Aminosäure)2-Z, wobei (Aminosäure) und (Aminosäure)2 jeweils unabhängig voneinander für eine beliebige primäre α- oder β-Aminosäure stehen, die keine Thiolgruppe umfasst, Z für eine thiolhaltige Einheit steht, die Cystein, Homocystein, Isocystein, Penicillamin, 2-Mercaptoethylamin oder 3-Mercaptopropylamin ist und R1 für niederes (C1-C4)-Alkyl, eine Aminosäure oder ein Peptid steht, das 2 bis 10 Aminosäuren umfasst. Wenn Z für Cystein, Homocystein, Isocystein oder Penicillamin steht, ist die Carbonylgruppe der Einheit kovalent an eine Hydroxylgruppe, eine NR3R4-Gruppe gebunden, wobei R3 und R4 jeweils unabhängig voneinander für H oder niederes (C1-C4)-Alkyl, eine Aminosäure oder ein Peptid, das 2 bis 10 Aminosäuren umfasst, stehen; oder Y-(Aminosäure)2-(Aminosäure)1-NHR2, wobei Y für eine thiolhaltige Einheit steht, die Cystein, Homocystein, Isocystein, Penicillamin, 2-Mercaptoacetat oder 3-Mercaptopropionat ist, (Aminosäure) und (Aminosäure)2 jeweils unabhängig voneinander für eine beliebige primäre α- oder β-Aminosäure, die keine Thiolgruppe umfasst, stehen, und R2 für H oder niederes (C1-C4)-Alkyl, eine Aminosäure oder ein Peptid steht, das 2 bis 10 Aminosäuren umfasst. Wenn Y für Cystein, Homocystein, Isocystein oder Penicillamin steht, ist die Aminogruppe der Einheit kovalent an -H, eine Aminosäure oder ein Peptid, das 2 bis 10 Aminosäuren umfasst, gebunden; oder
    Figure 00130001
    oder
    Figure 00130002
    wobei n, m und p jeweils ganze Zahlen sind, die unabhängig voneinander 0 oder 1 sind; R' jeweils unabhängig voneinander für H, niederes Alkyl, C2-C4-Hydroxyalkyl oder C2-C4-Alkoxyalkyl steht und R jeweils unabhängig voneinander für H oder R'' steht, wenn R'' für substituiertes oder unsubstituiertes niederes Alkyl oder Phenyl steht, das keine Thiolgruppe umfasst, und ein R oder R' für L steht, wenn L für eine Funktionalität steht, die kovalent an das Somatostatinrezeptor-bindende Peptid gebunden ist.
  • In besonderen Ausführungsformen dieses Gesichtspunktes der Erfindung weist die einen radioaktiven Marker bindende Einheit die folgende chemische Formel auf:
    • – (Aminosäure)1-(Aminosäure)2-{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X},
    • – {A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X}-(Aminosäure)-(Aminosäure)2,
    • – (eine primäre α,ω- oder β,ω-Diaminosäure)-(Aminosäure)1{A-CZ(B)-{C(R1R2)}n-X} oder
    • – {A-CZ(B)-{C(R1R2)}nX}-(Aminosäure)1-(eine primäre α,ω- oder β,ω-Diaminosäure), wobei (Aminosäure) und (Aminosäure)2 jeweils unabhängig voneinander für eine beliebige natürlich vorkommende, modifizierte, substituierte oder veränderte αoder β-Aminosäure, die keine Thiolgruppe enthält, stehen; A für H, HOOC, H2NOC, (Aminosäure oder Peptid)-NHOC, (Aminosäure oder Peptid)-OOC oder R4 steht; B für H, SH oder NHR3, -N(R3)-(Aminosäure oder Peptid) oder R4 steht; Z für H oder R4 steht; X für SH oder NHR3, -N(R3)-(Aminosäure oder Peptid) oder R4 steht; R1, R2, R3 und R4 unabhängig voneinander für H oder gerad- oder verzweigtkettiges oder cyclisches niederes Alkyl stehen; n für eine ganze Zahl steht, die entweder 0, 1 oder 2 ist; (Peptid) für ein Peptid von 2 bis etwa 10 Aminosäuren steht; und: (1) wenn B für -NHR3 oder -N(R3)-(Aminosäure oder Peptid) steht, X für SH und n für 1 oder 2 steht; (2) wenn X für NHR3 oder – N(R3)-(Aminosäure oder Peptid) steht, B für SH und n für 1 oder 2 steht; (3) wenn B für H oder R4 steht, A für HOOC, H2NOC, (Aminosäure oder Peptid)-NHOC, (Aminosäure oder Peptid)-OOC steht, X für SH und n für 0 oder 1 steht; (4) wenn A für H oder R4 steht, dann, wenn B für SH steht, X für -NHR3 oder -N(R3)-(Aminosäure oder Peptid) steht, und wenn X für SH steht, B für -NHR3 oder -N(R3)-(Aminosäure oder Peptid) steht; (5) wenn X für H oder R4 steht, A für HOOC, H2NOC, (Aminosäure oder Peptid)-NHOC, (Aminosäure oder Peptid)-OOC steht und B für SH steht; (6) wenn Z für Methyl steht, X für Methyl steht, A für HOOC, H2NOC, (Aminosäure oder Peptid)-NHOC, (Aminosäure oder Peptid)-OOC steht und B für SH steht und n für 0 steht; und (7), wenn Z für SH steht und X für SH steht, n nicht für 0 steht; und wobei die Thiolgruppe in der reduzierten Form vorliegt.
  • Zusätzlich bevorzugte Ausführungsformen schließen radioaktive Marker bindende Einheiten ein, welche die Formel aufweisen: -Gly-Gly-Cys-, -Cys-Gly-Gly-, -Gly-Gly-Cys-, -(ɛ-Lys)-Gly-Cys-, (δ-Orn)-Gly-Cys-, -(γ-Dab)-Gly-Cys- und -(β-Dap)-Gly-Cys-. (Es versteht sich, dass in diesen Formeln ?-Lys einen Lysinrest darstellt, in dem eher die ?-Aminogruppe als die typische α-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet; δ-Orn stellt einen Ornithinrest dar, in dem eher die δ-Aminogruppe als die typische α-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet; γ-Dab stellt einen 2,4-Diaminobuttersäurerest dar, in dem die γ-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet; und β-Dap stellt einen 1,3-Diaminoproprionsäurerest dar, in dem die β-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet.
  • In einer anderen Ausführungsform stellt die Erfindung Peptidreagenzien, die in der Lage sind, mit einem Radioisotop radioaktiv markiert zu werden, zur Radiotherapie oder zum bilderzeugenden Darstellen von Stellen innerhalb eines Säugetierkörpers bereit, wobei jedes ein Somatostatinanaloges umfasst, das kovalent gebunden ist an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit der Formel:
    Figure 00150001
    (Für die Zwecke dieser Erfindung werden einen radioaktiven Marker bindende Einheiten, die diese Struktur aufweisen, als auf Picolinsäure (Pic) basierende Einheiten bezeichnet)
    oder
    Figure 00150002
    wobei X für H oder eine Schutzgruppe steht; (Aminosäure) für eine beliebige Aminosäure steht, und die einen radioaktiven Marker bindende Einheit kovalent an das Peptid gebunden ist. Für die Zwecke dieser Erfindung werden einen radioaktiven Marker bindende Einheiten, die diese Struktur aufweisen, als auf Picolylamin (Pica) basierende Einheiten bezeichnet. In einer bevorzugten Ausführungsform ist die Aminosäure Glycin, und X steht für eine Acetamidomethyl-Schutzgruppe.
  • Eine noch andere Ausführungsform der Erfindung stellt Peptidreagenzien bereit, die in der Lage sind, mit einem Radioisotop radioaktiv markiert zu werden, um Stellen innerhalb eines Säugetierkörpers bilderzeugend darzustellen, oder zur Verwendung als ein radiotherapeutisches Mittel, wobei jedes ein Somatostatinanaloges umfasst, das kovalent an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit gebunden ist, die eine einen radioaktiven Marker bindende Bisaminobisthiol-Einheit ist. Die einen radioaktiven Marker bindende Bisaminobisthiol-Einheit in dieser Ausführungsform der Erfindung weist die Formel auf:
    Figure 00160001
    wobei R jeweils unabhängig voneinander für H, CH3 oder C2H5 stehen kann; (pgp)s jeweils unabhängig voneinander für eine Thiolschutzgruppe oder H stehen kann; m, n und p unabhängig voneinander für 2 oder 3 stehen; A für lineares oder cyclisches niederes Alkyl, Aryl, Heterocyclyl, Kombinationen oder substituierte Derivate davon steht; und X für Peptid steht; oder
    Figure 00160002
    wobei R jeweils unabhängig voneinander für H, CH3 oder C2H5 steht; m, n und p unabhängig voneinander für 2 oder 3 stehen; A für lineares oder cyclisches niederes Alkyl, Aryl, Heterocyclyl, Kombinationen oder substituierte Derivate davon steht; V für H oder CO-Peptid steht; R' für H oder Peptid steht; vorausgesetzt dass, wenn V für H steht, R' für Peptid steht und wenn R' für H steht, V für Peptid steht. Für die Zwecke dieser Erfindung werden einen radioaktiven Marker bindende Einheiten, welche diese Strukturen aufweisen, als „BAT"-Einheiten bezeichnet.
  • Diese Erfindung stellt Verfahren zum Herstellen von Peptidreagenzien der Erfindung durch chemische Synthese in vitro bereit. In einer bevorzugten Ausführungsform werden Peptide durch Festphasenpeptidsynthese synthetisiert.
  • Diese Erfindung stellt Reagenzien zum Herstellen eines mit einem radioaktiven Marker versehenen Somatostatinrezeptor-bindenden Mittels bereit, das die Somatostatinrezeptor-bindenden Peptide der Erfindung, die an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit gebunden sind, umfasst. In einer bevorzugten Ausführungsform ist das Reagens mit Tc-99m radioaktiv markiert. In einer anderen bevorzugten Ausführungsform ist das Reagens mit 186Re oder 188Re radioaktiv markiert.
  • Die Erfindung stellt auch Komplexe der linearen Peptidreagenzien der Erfindung mit einem Radioisotop sowie Verfahren zum radioaktiven Markieren der Peptidreagenzien der Erfindung bereit. Z. B. umfassen szintigraphische bilderzeugende Mittel, die von der Erfindung bereitgestellt sind, in einer Ausführungsform mit Tc-99m markierte Komplexe, die gebildet werden durch Umsetzen der Peptidreagenzien der Erfindung mit Tc-99m in Gegenwart eines Reduktionsmittels. Bevorzugte Reduktionsmittel schließen das Dithionit-Ion, Zinn(II)-Ion und das Eisen(II)-Ion ein, sind aber nicht auf diese beschränkt. Solche Tc-99m-Komplexe der Erfindung sind auch durch Markieren der Peptidreagenzien der Erfindung mit Tc-99m durch Ligandenaustausch eines vorreduzierten Tc-99m-Komplexes, wie hier bereitgestellt, gebildet.
  • Die Erfindung stellt auch Kits zum Herstellen von radioaktiv markierten linearen Somatostatinanalogpeptiden aus den Peptidreagenzien der Erfindung bereit. Kits zum radioaktiven Markieren der Peptidreagenzien der Erfindung bestehen aus einem versiegelten Vial, das eine vorbestimmte Menge eines Peptidreagenzes der Erfindung und eine ausreichende Menge Reduktionsmittel, um die Peptide radioaktiv zu markieren, enthält. In einer bevorzugten Ausführungsform ist das radioaktiv markierte Somatostatinanaloge ein szintigraphisches bilderzeugendes Mittel. Ebenfalls bevorzugt ist das radioaktive Markieren des Peptidreagenzes der Erfindung mit Tc-99m. Kits zum Herstellen radiotherapeutischer Mittel sind ebenfalls bereitgestellt, wobei die bevorzugten Radioisotope Rhenium-186 und Rhenium-188 sind.
  • Die radioaktiv markierten Peptidreagenzien der Erfindung können diagnostisch und therapeutisch verwendet werden, z. B. Verwenden von szintigraphischen bilderzeugenden Mitteln, die mit Tc-99m markierte Peptidreagenzien zum bilderzeugenden Darstellen von Stellen in einem Säugetierkörper, durch Erhalten von Gamma-Szintigraphien in vivo, sind. Diese Verfahren umfassen das Verabreichen einer wirksamen diagnostischen Menge von mit Tc-99m markierten Peptidreagenzien der Erfindung und das Erfassen der Gammastrahlung, die von dem Tc-99m-Marker, der sich an der Stelle innerhalb des Säugetierkörpers befindet, ausgesandt wird.
  • Die Verbindungen der Erfindung können auch bei Verfahren zum Lindern von mit Somatostatin in Zusammenhang stehenden Krankheiten von Tieren, vorzugsweise Menschen, verwendet werden, die das Verabreichen einer therapeutisch wirksamen Menge der radioaktiv markierten Somatostatin-bindenden Peptidreagenzien der Erfindung an das Tier umfasst. In bevorzugten Ausführungsformen ist das Reagens mit 186Re oder 188Re radioaktiv markiert.
  • Die Peptide und Peptidreagenzien der Erfindung können auch aus einer polyvalenten Verbindungseinheit bestehen. Polyvalente Verbindungseinheiten der Erfindung bestehen aus mindestens 2 identischen funktionellen Verbindungsgruppen, die in der Lage sind, sich kovalent an Somatostatinanalogpeptide- oder Tc-99m bindende Einheiten zu binden. Bevorzugte funktionelle Verbindungsgruppen sind primäre oder sekundäre Amine, Hydroexilgruppen, Karbonsäuregruppen oder thiol-reaktive Gruppen. In bevorzugten Ausführungsformen bestehen die polyvalenten Verbindungseinheiten aus Bis-succinimidylmethylether (BSME), 4-(2,2-dimethylacetyl)benzoesäure (DMBA), N-[2-(N',N'-Bis(2-succinimidoethyl)aminoethyl)]-N6,N9-bis(2-methyl-2-mercapto-propyl)-6,9-diazanonanamid (BAT-BS), Tris(succinimidylethyl)amin (TSEA), Bis-succinimidohexan (BSH), 4-(O-CH2CO-Gly-Gly-Cys.-amid)-2-methylpropiophenon (ETAC), Tris(acetamidoethyl)amin, Bis-acetamidomethylether, Bis-acetamidoethylether, α,?-Bis-acetyllysin, Lysin und 1,8-Bis-acetamido-3,6-dioxa-octan oder einem Derivat davon.
  • Spezielle bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung werden aus der folgenden ausführlicheren Beschreibung von bestimmten bevorzugten Ausführungsformen und den Ansprüchen offensichtlich.
  • AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
  • Die vorliegende Erfindung stellt lineare Peptidreagenzien zum Herstellen von radioaktiv markierten Mitteln zu radiodiagnostischen und radiotherapeutischen Verwendungszwecken bereit. Die vorliegende Erfindung stellt lineare Peptide bereit, die Somatostatinanaloge sind und nicht innerhalb einer cyclischen Struktur eingeschlossen sind. Solche Somatostatinanalogen besitzen dadurch im Vergleich zu nativem Somatostatin erhöhte In-Vivo-Stabilität. Diese linearen Peptide sind selbst therapeutische Mittel zum Lindern von Krankheiten und anderen Leiden bei Tieren, einschließlich Menschen.
  • Auch sind von der Erfindung lineare Peptide bereitgestellt, die radioiodiert oder radioastatiert werden können und dadurch in radiotherapeutischen und radiodiagnostischen Anwendungen nützlich sind.
  • Eine andere Ausführungsform dieser linearen Peptiden, die von dieser Erfindung bereitgestellt ist, sind lineare Peptidreagenzien, wobei die linearen Peptide der Erfindung kovalent an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit gebunden sind. Solche linearen Peptidreagenzien sind dazu in der Lage, radioaktiv markiert zu werden, um radiodiagnostische oder radiotherapeutische Mittel bereitzustellen. Ein Beispiel für eine radiodiagnostische Anwendung, bei der die radioaktiv markierten Mittel der Erfindung benutzt werden, ist die szintigraphische Bildgebung, wobei der Ort und das Ausmaß von Somatostatinrezeptor-tragenden Tumoren bestimmt werden können.
  • Die linearen Peptidreagenzien der Erfindung können auch vorteilhaft mit zytotoxischen Radioisotopen, wie z. B. Rhenium-186 oder Rhenium-188, für radiotherapeutische Verwendungszwecke radioaktiv markiert werden. Die linearen Peptidreagenzien der Erfindung sind auch zum Herstellen von Komplexen mit nichtradioaktiven Metallen nützlich, wobei die Komplexe therapeutisch nützlich sind.
  • Die Verbindungen der Erfindung können bei einem Verfahren verwendet werden, um Krankheiten oder andere Leiden bei Tieren, vorzugsweise beim Menschen, zu lindern. Diese Krankheiten und Leiden schließen Diabetes und diabetische Retinopathie, Zirrhose der Leber und Hepatitisinfektion, blutende Geschwüre und andere Magen-Darm-Blutungen, Bauchspeicheldrüsenentzündung, Störungen des zentralen Nervensystems, endokrine Störungen, Alzheimersche Krankheit, Akromegalie und andere Krankheiten und Störungen, die mit der Erzeugung von Wachstumshormon in unangemessenem Maße in vivo in Zusammenhang stehen, und Krebs, insbesondere jene Krebsarten, deren Wachstum von der Wachstumshormonproduktion abhängig ist oder beeinflusst wird, ein, sind aber nicht auf diese beschränkt. Die Dosierungen der Somatostatinanalogen, die von der Erfindung bereitgestellt sind, können dieselben sein wie jene Dosierungen von nativem Somatostatin, die routinemäßig zur Behandlung der obigen oder anderer Krankheiten benutzt werden, oder aufgrund ihrer längeren Halbwertszeit in vivo kann weniger von den Verbindungen der Erfindung verabreicht werden.
  • In Ausführungsformen der Erfindung, die als szintigraphische bilderzeugende Mittel nützlich sind, ist das Markieren mit Tc-99m ein Vorteil der vorliegenden Erfindung, da die nuklearen und radioaktiven Eigenschaften dieses Isotops es zu einem idealen szintigraphischen bilderzeugenden Mittel machen. Dieses Isotop besitzt eine Einzelphotonenenergie von 140 keV und eine radioaktive Halbwertszeit von etwa 6 Stunden und ist durch einen 99Mo-99m-Erzeuger leicht verfügbar. Andere Radionuklide können bei der praktischen Anwendung der Erfindung, wie hier offenbart, ebenfalls benutzt werden.
  • Radiotherapeutische Ausführungsformen der Erfindung sind andererseits vorteilhaft mit zytotoxischen Radioisotopen markiert, einschließlich, aber nicht beschränkt auf Scandium-47, Kupfer-67, Gallium-72, Yttrium-90, Iod-125, Iod-131, Samarium-153, Gadolinium-159, Dysprosium-165, Holmium-166, Ytterbium-175, Lutetium-177, Rhenium-186, Rhenium-188, Astat-211 und Bismut-212, wobei 186Re oder 188Re am stärksten bevorzugt sind. Solche Ausführungsformen sind nützlich bei der Behandlung von Krankheiten, die mit Somatostatin in Zusammenhang stehen, oder von anderen Leiden von Tieren, vorzugsweise Menschen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf Krebs und andere Krankheiten, die durch das Wachstum von bösartigen oder gutartigen Tumoren gekennzeichnet sind, die in der Lage sind Somatostatin oder Somatostatinanaloge über die Expression von Somatostatinrezeptoren an der Zelloberfläche von Zellen, die solche Tumore umfassen, zu binden.
  • In den einen radioaktiven Marker bindenden Einheiten und den linearen Peptiden, die kovalent an solche Einheiten gebunden sind, die ein Thiol kovalent an eine Thiolschutzgruppe ((pgp)S) gebunden enthalten, die von der Erfindung bereitgestellt sind, können die Thiolschutzgruppen dieselben oder verschiedene sein und können die folgenden sein, sind aber nicht beschränkt auf:
    • – CH2-Aryl (Aryl steht für Phenyl oder mit Alkyl oder Alkyloxy substituiertes Phenyl);
    • – CH-(Aryl)2, (Aryl steht für Phenyl oder mit Alkyl oder Alkyloxy substituiertes Phenyl);
    • – C-(Aryl)3, (Aryl steht für Phenyl oder mit Alkyl oder Alkyloxy substituiertes Phenyl);
    • – CH2-(4-methoxyphenyl);
    • – CH-(4-pyridyl)(phenyl)2;
    • – C(CH3)3;
    • – 9-phenylfluorenyl;
    • – CH2NHCOR (R steht für unsubstituiertes oder substituiertes Alkyl oder Aryl);
    • – CH2-NHCOOR (R steht für unsubstituiertes oder substituiertes Alkyl oder Aryl);
    • – CONHR (R steht für unsubstituiertes oder substituiertes Alkyl oder Aryl);
    • – CH2-S-CH2-phenyl.
  • Bevorzugte Schutzgruppen besitzen die Formel -CH2-NHCOR, wobei R für ein niederes Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, Phenyl oder mit niederem Alkyl, Hydroxyl, niederem Alkoxy, Carboxy oder niederem Alkoxycarbonyl substituiertes Phenol steht. Die am stärksten bevorzugte Schutzgruppe ist eine Acetamidomethylgruppe.
  • Jede Ausführungsform der Erfindung, die Somatostatinrezeptor-bindendes lineares Peptid enthält, besteht aus einer Sequenz von Aminosäuren. Der Ausdruck Aminosäure, wie in dieser Erfindung verwendet, soll alle L- und D-Aminosäuren, die natürlich und sonst noch vorkommen, einschließen. Reagenzien, die Somatostatinrezeptor-bindende Peptide umfassen, die von der Erfindung bereitgestellt sind, schließen die folgenden veranschaulichenden Beispiele für die Peptid-Ausführungsformen der Erfindung ein, sind aber nicht auf diese beschränkt:
    CAcmGCAcmGGGFD.Cpa.YWDKTFT.Amid
    (DTPA).Fn.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid
    maGGGFD.Cpa.YWDKTFT.Amid
    Ac.CAcmGCAcmFD.Cpa.YWDKTFT.Amid
    (DTPA).D-Nal.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    AKCGGGFD.Cpa.YWDKTFT.Amid
    (DTPA).D-Nal.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid;
    (DTPA).Aca.FD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid
    (DTPA).(ε-K)GCFDFYWDKTFT.Amid
    Ac.CGCFD.Cpa.YWDKTFT.Amid
    (DTPA).(D-Nal.CYWDKVCT)2
    Ac.FD.FYWDKTFT(ε-K)GC.Amid
    Ac.FD.FYWDKTFTGGG(ε-K)GC.Amid
    K(BAT).D-Nal.CMeYWDKVCMeT.Amid
    Ac.FD.FYWDKTFGGG(ε-K)KC.Amid
    Pic.GCAcmGGGFD.Cpa.YWDKTFT.Amid
    (DTPA).D-Nal.CYWDKVCT.Amid
    (2-Ketogulonyl)D-NalFYWDKVCT.Amid
    (DTPA).K(BAT).D-Nal.CMeYWDKVCMeT.Amid
    (DTPA).FDFYWDKTFT(ε-K)GC.Amid
    AFDCFWDKTCMeT(CH2OH)
    (DTPA).FDGYWDKTCT(CH2OH)
    (DTPA).Nal.SYWDKVT.K(BAT).Amid
    (DTPA).Nal.SYWDKVCT.Amid
    DDD.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    Ac.DDD.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    Hca.G.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    (Trc.imid)2K.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCRR.
    Trc(Trc.imid)K.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCRR.Amid(Trc.imid)NalD.Cpa.YWDKTFT(?-K)GCR.Am id
    KDKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKDKD.Amid
    KDKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCDD.Amid
    (Trc)2K.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    Hca.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    (2-Ketogulonyl)FD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    KKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCDDDD.Amid
    Ac.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    Ac.KKKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.-Amid
    (2-Ketogulonyl)Fp.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid
    DDDD.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKKKK.Amid
    (DTPA)NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid
    (DTPA)NalD.Cpa.YWDKTFTCAcm,GCAcm.Amid
    Ac.KKKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid
    KDKD.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKDKD.Amid
  • Wie hierin verwendet, sollen die folgenden Aminosäuren und Aminosäureanalogen durch die folgenden Abkürzungen dargestellt werden: Ac steht für eine Acetylgruppe; ma steht für die Mercaptoessigsäuregruppe; Aca steht für 6-Aminocapronsäure; Hcy steht für Homocystein; Hhc steht für Homohomocystein, das (3-Mercaptopropyl)glycin ist; Pen steht für Penicillamin; Mob steht für die Sulfhydrylschutzgruppe 4-Methoxybenzyl; Acm steht für die Sulfhydrylschutzgruppe Acetamidomethyl; Aib steht für Aminoisobuttersäure; Nal steht für 2-Naphthylalanin; Ain steht für 2-Amino-indan-2-carbonsäure; Hly steht für Homolysin; Achxa steht für 4-Amino-cyclohexylalanin; Amf steht für 4-Aminomethylphenylalanin; Aec steht für S-(2-Aminoethyl)cystein; Apc steht für S-(3-Aminopropyl)cystein; Aes steht für O-(2-Aminoethyl)serin; Aps steht für O-(3-Aminopropyl)serin; Abu steht für 2-Aminobuttersäure; Nva steht für Norvalin; Aca steht für 6-Aminocapronsäure; FD steht für D-Phenylalanin; WD steht für D-Tryptophan; YD steht für D-Tyrosin; Cpa steht für L-(4-Chlorphenyl)alanin; Thp steht für 4-Aminotetrahydrothiopyran-4-carbonsäure; D-Nal steht für D-2-Naphthylalanin; Dpg steht für Dipropylglycin, Abu steht für α-Aminobuttersäure; Trc steht für Tricarboalkylsäure; Hca steht für Hexacarboxy-cyclohexan; und Nle steht für Norleucin. Alle natürlich vorkommenden Aminosäuren sind unter Verwendung der Standardabkürzungen (die bei G. Zubay, Biochemistry (2. Aufl.), 1988 (MacMillen Publishing: New York), 5.33, gefunden werden können) abgekürzt.
  • Für die Zwecke dieser Erfindung sind die natürlich vorkommenden Aminosäuren als lipophil (Alanin, Isoleucin, Leucin, Methionin, Phenylalanin, Tyrosin, Prolin, Tryptophan und Valin, ebenso wie S-alkylierte Derivate von Cystein), hydrophil (Asparagin, Glutamin, Threonin, Serin), sauer (Glutaminsäure und Asparaginsäure), basisch (Arginin, Histidin und Lysin) gekennzeichnet. T(CH2OH) stellt einen Threoninolrest dar, wobei die Carboxylgruppe der Aminosäure zu einem primären Alkohol reduziert ist, der unter Verwendung des Verfahrens von Neugebauer et al. (1990, Peptides: Proceedings of the 11th American Peptide Symposium, S. 1020 bis 1021) in das Peptid eingebaut wird. ?-K soll eine kovalente Bindung über die ?-Aminogruppe an der Seitenkette eines Lysinrestes darstellen. δ-Om stellt einen Ornithinrest dar, in dem eher die δ-Aminogruppe als die typische α-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet. γ-Dab stellt einen 2,4-Diaminobuttersäurerest dar, in dem die γ-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet. β-Dap stellt einen 1,3-Diaminopropionsäurerest dar, in dem die β-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet. Pic steht für Picolinoyl (Pyridin-2-carbonyl); Pica steht für Picolylamin (2-(Aminomethyl)pyridin); (BAT) stellt N6,N9-Bis(2-mercapto-2-methyl-propyl)-6,9-diazanonansäure dar; K.(BAT) und Lys.(BAT) stellen die Aminosäure Lysin dar, die an der ?-Aminogruppe an der Aminosäure-Seitenkette zu (BAT) acyliert ist; (BAM) steht für (N1,N4-Bis(2-mercapto-2-methylpropyl)-1,4,10-triazadecan; E.(BAM) und Glu.(BAM) stellen die Aminosäure Glutaminsäure dar, die eine γ-Amidbindung zwischen der Seitenketten-Carbonsäuregruppe der Glutaminsäure und einer von (BAM) abgeleiteten primären Aminogruppe aufweist; (BAT-BM) steht für N-(2-(N,N'-Bis(2-maleimidoethyl)aminoethyl)-N9-(t-butoxycarbonyl)-N6,N9-bis(2-methyl-2-triphenylmethylthiopropyl)-6,9-diazanonanamid; (BAT-BS) steht für N-(2-(N',N'-Bis(2-succinimidoethyl)aminoethyl)-N6,N9-bis(2-mercapto-2-methylpropyl)-6,9-diazanonanamid; (BMME) steht für Bis-maleimidomethylether; (BSME) steht für Bis-succinimidomethylether; und (DTPA) steht für Diethylentriaminpentaessigsäure.
  • Für die Zwecke dieser Erfindung soll der Ausdruck „Poly(N-carboxyalkyl)amin" eine Reihe von Verbindungen bezeichnen, die von Nitrilotriessigsäure, Iminodiessigsäure, Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) und Diethylentriaminpentaessigsäure (DTPA) beispielhaft dargestellt werden.
  • Für die Zwecke dieser Erfindung soll der Ausdruck „Polyoxyanion" Sulfate, Phosphate, Sulfonate, Phosphonate und dergleichen Verbindungen umfassen.
  • Lineare Somatostatinanalogpeptide der vorliegenden Erfindung können in vitro chemisch synthetisiert werden. Peptide der vorliegenden Erfindung können allgemein vorteilhaft in einem Peptidsynthesizer hergestellt werden. Die Peptide dieser Erfindung können synthetisiert werden, wobei die einen radioaktiven Marker bindende Einheit während der chemischen Synthese in vitro unter Verwendung von Techniken, die Fachleuten gut bekannt ist, kovalent an das Peptid gebunden wird. Solche Peptide, die während der Synthese an die einen radioaktiven Marker bindende Einheit kovalent gebunden werden, sind vorteilhaft, da spezifische Stellen kovalenter Bindung bestimmt werden können.
  • Die einen radioaktiven Marker bindenden Einheiten der Erfindung können während der Peptidsynthese in die linearen Ziel-Somatostatinanalogpeptide eingeführt werden. Für Ausführungsformen, die Picolinsäure ((Pic-), z. B. Pic-Gly-Cys(Schutzgruppe)-) umfassen, kann die einen radioaktiven Marker bindende Einheit bei der Synthese als der letzte (d.h. amino-endständige) Rest synthetisiert werden. Außerdem kann die die Picolinsäure enthaltende, einen radioaktiven Marker bindende Einheit kovalent an die ?-Aminogruppe von Lysin gebunden werden, um z. B. αN(Fmoc)-Lys-?N(Pic-Gly-Cys(Schutzgruppe)) zu ergeben, das an jede geeignete Position in die Peptidkette eingebaut werden kann. Diese Sequenz ist besonders vorteilhaft, da sie einen einfachen Einbau-Modus in das Ziel-Somatostatinanalogpeptid erfordert.
  • In ähnlicher Weise kann die Picolylamin (Pica) enthaltende, einen radioaktiven Marker bindende Einheit (-Cys(Schutzgruppe)-Gly-Pica) während der Peptidsynthese durch Einschließen der Sequenz ((-Cys(Schutzgruppe)-Gly) am Carboxyl-Terminus der Peptidkette hergestellt werden. Im Anschluss an die Abspaltung des Peptids von dem Harz wird der Carboxyl-Terminus des Peptids aktiviert und an Picolylamin gekoppelt. Dieser Syntheseweg erfordert, dass reaktive Seitenkettenfunktionalitäten maskiert (geschützt) bleiben und während der Konjugation des Picolylamins nicht reagieren.
  • Diese Erfindung stellt auch kleine lineare synthetische Peptide bereit, die Somatostatinanaloge sind und Bisaminbisthiol-(BAT)-Chelatbildner einbauen, die mit Tc-99m markiert werden können.
  • Diese Erfindung sorgt für den Einbau dieser Chelatbildner über kovalente Bindung an eine beliebige geeignete funktionelle Gruppe des Peptids an praktische jede Position in dem Peptid, mit der Ausnahme, dass die chelatierenden Einheiten der Erfindung nicht kovalent an die funktionelle Gruppe gebunden sind, welche die Aminosäureseitenketten der Aminosäuren B1, B2, B3 oder B4 umfassen.
  • Beim Bilden eines Komplexes von radioaktivem Technetium mit den Reagenzien dieser Erfindung wird der Technetiumkomplex, vorzugsweise ein Salz von Tc-99m-pertechnetat mit dem Reagens in Gegenwart eines Reduktionsmittels umgesetzt. Bevorzugte Reduktionsmittel sind Dithionit-, Zinn(II)- und Eisen(II)-Ionen; das am stärksten bevorzugte Reduktionsmittel ist Zinn(II)-Chlorid. Mittel zum Herstellen solcher Komplexe sind in Form eines Kits, das ein versiegeltes Vial umfasst, das eine vorbestimmte Menge eines zu markierenden Reagenzes der Erfindung und eine ausreichende Menge an Reduktionsmittel enthält, um das Reagens mit Tc-99m zu markieren, zweckmäßig bereitgestellt. Alternativ kann der Komplex durch Umsetzen eines Reagenzes dieser Erfindung mit einem vorgebildeten labilen Komplex von Technetium und einer anderen Verbindung, die als ein Transferligand bekannt ist, gebildet werden. Dieser Prozess ist als Ligandenaustausch bekannt und Fachleuten gut bekannt. Der labile Komplex kann z. B. unter Verwendung solcher Transferliganden wie Tartrat, Citrat, Gluconat oder Mannit gebildet werden. Die Tc-99m-pertechnetat-Salze, die bei der vorliegenden Erfindung nützlich sind, schließen die Alkalimetallsalze, wie z. B. das Natriumsalz, oder Ammoniumsalze oder Niederalkyl-Ammoniumsalze ein.
  • In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist ein Kit zum Herstellen von mit Technetium markierten Peptiden bereitgestellt. Eine geeignete Menge des Peptidreagenzes wird in ein Vial eingegeben, das ein Reduktionsmittel, wie z. B. Zinn(II)-Chlorid, in einer Menge enthält, die ausreichend ist, um das Peptid mit Tc-99m zu markieren. Eine geeignete Menge eines Transferliganden, wie beschrieben (wie z. B. Tartrat, Citrat, Gluconat oder Mannit), kann ebenfalls eingeschlossen sein. Das Kit kann auch herkömmliche pharmazeutische Zusatzstoffe, wie z. B. pharmazeutisch unbedenkliche Salze, um den osmotischen Druck einzustellen, Puffer, Konservierungsstoffe und dergleichen, enthalten. Die Bestandteile des Kits können in flüssiger, gefrorener oder trockener Form vorliegen. In einer bevorzugten Ausführungsform sind die Kit-Bestandteile in lyophilisierter Form bereitgestellt.
  • Erfindungsgemäße, mit Technetium-99m markierte Reagenzien für die bilderzeugende Darstellung können durch die Zugabe einer geeigneten Menge an Tc-99m oder Tc-99m-Komplex in die Vials und Reaktion unter Bedingungen, die in dem Beispiel 2 weiter unten beschrieben sind, hergestellt werden.
  • Radioaktiv markierte szintigraphische bilderzeugende Mittel, die von der vorliegenden Erfindung bereitgestellt sind, weisen eine geeignete Menge an Radioaktivität auf. Beim Bilden der radioaktiven Tc-99m-Komplexe wird allgemein bevorzugt, die radioaktiven Komplexe in Lösungen zu bilden, die Radioaktivität in Konzentrationen von etwa 0,01 Millicurie (mCi) bis 100 mCi pro ml enthalten.
  • Die Reagenzien für die bilderzeugende Darstellung, die von der vorliegenden Erfindung bereitgestellt sind, können zum Sichtbarmachen von Organen, wie z. B. den Nieren, zum Diagnostizieren von Störungen in diesen Organen, und Tumoren, insbesondere Magen-Darm-Tumoren, Myelomen, kleinzelligem Lungenkarzinom und anderen APUDomen, endokrinen Tumoren, wie z. B. Schilddrüsenkarzinomen und Hypophysentumoren, Gehirntumoren, wie z. B. Meningiomen und Astrocytomen verwendet werden, und Tumoren der Prostata, der Brust, des Gebärmutterhalses und der Eierstöcke können ebenfalls bilderzeugend dargestellt werden. Erfindungsgemäß werden die mit Tc-99m markierten Peptidreagenzien in einer injizierbaren Einzeldosis verabreicht. Die mit Tc-99m markierten Peptidreagenzien, die von der Erfindung bereitgestellt sind, können in einem beliebigen herkömmlichen Medium zur intravenösen Injektion, wie z. B. einem wässrigen Salzmedium oder in Blutplasmamedium, intravenös verabreicht werden. Die zu verabreichende Einheitsdosis besitzt im allgemeinen eine Radioaktivität von etwa 0,01 mCi bis etwa 100 mCi, vorzugsweise 1 mCi bis 20 mCi. Die bei Einheitsdosierung zu injizierende Lösung beträgt etwa 0,01 ml bis etwa 10 ml. Nach intravenöser Verabreichung kann die bilderzeugende Darstellung in vivo nach wenigen Minuten erfolgen. Die bilderzeugende Darstellung kann jedoch gewünschtenfalls nach Stunden oder sogar noch später, nachdem das radioaktiv markierte Peptid einem Patienten injiziert wurde, erfolgen. In den meisten Fällen wird sich eine ausreichende Menge der verabreichten Dosis innerhalb von etwa 0,1 Stunde in dem bilderzeugend darzustellenden Gebiet ansammeln, um die Aufnahme von Szintigraphien zu erlauben. Erfindungsgemäß kann jedes beliebige herkömmliche Verfahren der szintigraphischen bilderzeugenden Darstellung für diagnostische Zwecke verwendet werden.
  • Die Somatostatinrezeptor-bindenden linearen Peptide und nichtradioaktiven Metallkomplexe der linearen Peptidreagenzien der Erfindung können klinisch verwendet werden, um die Rückentwicklung von bestimmten Tumortypen, insbesondere von jenen, die Somatostatinrezeptoren exprimieren, zu fördern. Die linearen Somatostatinanalogpeptide der vorliegenden Erfindung können auch verwendet werden, um die hormonale Hypersekretion, die oftmals bestimmte Krebsarten begleitet, wie z. B. die APUDomen, zu verringern. Die Peptide der Erfindung, die als therapeutische Mittel verwendet werden, können auf einem beliebigen zweckmäßigen Weg, einschließlich intravenös, intramuskulär oder oral, und in einem beliebigen unbedenklichen pharmazeutischen Träger in Dosen, die von etwa 0,1 bis etwa 49 mg/kg Körpergewicht/Tag reichen, verabreicht werden.
  • Diese Erfindung stellt auch Peptide bereit, die mit einem zytotoxischen Radioisotop, wie z. B. Rhenium-186 oder Rhenium-188, radioaktiv markiert sind, die zur Radiotherapie von bestimmten Tumoren, wie oben beschrieben, verwendet werden können. Zu diesem Zweck kann eine Menge an radioaktivem Isotop von etwa 10 mCi bis etwa 200 mCi auf einem beliebigen geeigneten klinischen Weg, vorzugsweise durch intravenöse Injektion, verabreicht werden.
  • Die Verfahren zum Herstellen und Markieren dieser Verbindungen werden in den folgenden Beispielen umfassender veranschaulicht. Diese Beispiele veranschaulichen bestimmte Gesichtspunkte des oben beschriebenen Verfahrens und vorteilhafter Ergebnisse und werden mittels Veranschaulichung und nicht Einschränkung dargestellt.
  • BEISPIEL 1
  • Festphasenpeptidsynthese
  • Die Festphasenpeptidsynthese (SPPS) wurde in einem Maßstab von 0,25 Millimol (mmol) unter Verwendung eines Peptidsynthesizers von Applied Biosystems, Model 431A, und unter Verwendung von 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc)amino-Terminusschutz, Koppeln mit Dicyclohexylcarbodiimid/Hydroxybenzotriazol oder 2-(1H-Benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniuinhexafluorphosphat/Hydroxybenzotriazol (HBTU/HOBT) und Verwendung von p-Hydroxymethylphenoxy methylpolystyrol-(HMP)-Harz für Säuren mit Carboxyl-Terminus oder Rink-Amidharz für Amide mit Carboxyl-Terminus durchgeführt.
  • Wo zweckmäßig, wurden die folgenden Aminosäurederivate synthetisiert. Homocystein wurde durch alkalische Hydrolyse von L-Homocysteinlacton hergestellt. Threoninolreste, in denen die Carboxylgruppe der Aminosäure zu einem primären Alkohol reduziert ist, können, wo zweckmäßig, unter Verwendung des Verfahrens von Neugebauer et al. (1990, Peptides: Proceedings of the 11th American Peptide Symposium, S. 1020 bis 1021) in die Peptide der Erfindung eingeführt werden. Fmoc.Hcy(Trt) und Fmoc.Pen(Trt) wurden aus den geeigneten Aminosäuren durch Tritylierung mit Triphenylmethanol in TFA, gefolgt von Fmoc-Derivatisierung, wie beschrieben von Atherton et al. (1989, Solid Phase Peptide Synthesis, IRL Press: Oxford) hergestellt. Fmoc.-Homohomocystein(Trt) wurde durch Reduzieren von N,N-Bis-Boc-glutaminsäure-α-methylester mit Boran-THF, gefolgt von Mesylierung und Reaktion mit Tritylmercaptid, gefolgt von dem Entfernen der Boc-Gruppen mit BF3OEt in Essigsäure und anschließender Fmoc-Derivatisierung, wie oben beschrieben, hergestellt. PhCH2CHBrCOOH wurde durch Behandeln von Phenylalanin (in einer Lösung aus Wasser und TFA/ gesättigt mit NaBr) mit Natriumnitrit, gefolgt von Destillation, um das Reinprodukt zu gewinnen, hergestellt.
  • Wo zweckmäßig, wurden 2-Chloracetyl, 2-Bromacetyl und 2-Brom-3-phenylpropionylgruppen entweder durch Verwenden der geeigneten 2-Halogensäure als dem letzten Rest, der während der SPPS angekoppelt wird, oder durch Behandeln des freien Aminosäurepeptids mit N-Terminus, das an dem Harz gebunden ist, entweder mit 2-Halogensäure/ Diisopropylcarbodiimid/N-Hydroxysuccinimid/NMP oder 2-Halogensäureanhydrid/Diisopropylethylamin/NMP hergestellt.
  • Wo zweckmäßig, wurden mittels HPLC gereinigte, 2-halogenacylierte Peptide durch Rühren einer Lösung von 0,1 bis 1,0 mg/ml in Phosphat- oder Bicarbonatpuffer oder verdünntem Ammoniumhydroxid (pH 8,0), das gegebenenfalls 0,5 bis 1,0 mM EDTA enthielt, oder Acetonitril oder THF für 1 bis 48 h, gegebenenfalls gefolgt von Ansäuern mit Essigsäure, Lyophilisierung und Reinigung mittels HPLC, cyclisiert.
  • Wo zweckmäßig, wurde (BAM)(N1,N4-Bis(2-mercapto-2-methylpropyl)-1,4,10-triazadecan) an das Peptid konjugiert, indem zuerst das Peptidcarboxylat mit einer Mischung aus Diisopropylcarbodiimid/N-Hydroxysuccinimid oder HBTU/HOBt in DMF, NMP oder Methylenchlorid aktiviert wurde, gefolgt von dem Ankoppeln in Gegenwart von Diisopropylethylamin. Nach dem Ankoppeln wurden die Schutzgruppen der Konjugate, wie oben beschrieben, abgespalten.
  • Wo zweckmäßig, wurde (BAT) (N6,N9-Bis(2-mercapto-2-methylpropyl)-6,9-diazanonansäure) als (Nα(Fmoc)-Nα(N-Boc)-S,S'-bistrityl-BAT)lysin (hergestellt aus Nα(Fmoc)-lysin und Nε(N-Boc)-S,S'-bistrityl-BAT) während der Peptidsynthese in das Peptid eingebaut, und anschließend wurde nach der Abspaltung des vervollständigten Peptids von dem synthetischen Harz die Schutzgruppe abgespalten.
  • Wo zweckmäßig, wurden BSME-Addukte durch Umsetzen von einzelnes Thiol enthaltenden Peptiden (5 bis 50 mg/ml in DMF, gepuffert auf pH 7 mit N-Methylmorpholin oder N-Ethylmorpholin oder 50 mM Natriumphosphatpuffer, pH 7 bis 8, gegebenenfalls 0,5 mM EDTA oder DMF oder THF oder Acetonitril enthaltend) mit 0,5 Moläquivalenten BMME(Bis-maleimidomethylether), vorgelöst in Acetonitril, bei Raumtemperatur während ungefähr 1 bis 18 Stunden, hergestellt. Die Lösung wurde aufkonzentriert, und das Produkt wurde mittels HPLC gereinigt.
  • Wo zweckmäßig, wurden TSEA-Addukte durch Umsetzen einzelnes Thiol enthaltender Peptide (in Konzentrationen von 10 bis 100 mg/ml Peptid in DMF, gepuffert auf pH 7 mit N-Methylmorpholin oder N-Ethylmorpholin, oder 5 bis 50 mg/mL Peptid in 50 mM Natriumphosphat, pH 7 bis 8, gegebenenfalls enthaltend 0,5 mM EDTA oder DMF oder THF oder Acetonitril) mit 0,33 Moläquivalenten von TMEA (Tris(2-maleimidoethyl)amin), vorgelöst in Acetonitril oder DMF, mit oder ohne 1 Moläquivalent Triethanolamin während ungefähr 1 bis 18 Stunden bei Raumtemperatur hergestellt. Solche Reaktionsmischungen, die Addukte enthielten, wurden aufkonzentriert, und die Addukte wurden anschließend mittels HPLC gereinigt.
  • Wo zweckmäßig, wurden BAT-BS(N-(2-(N',N'-Bis(2-succinimidoethyl)aminoethyl))-N6,N9-bis(2-methyl-2-mercaptopropyl)-6,9-diazananamid)-Addukte durch Umsetzen einzelnes Thiol enthaltendes Peptid (in Konzentrationen von 2 bis 50 mg/ml Peptid in DMF, gepuffert auf pH 7 mit N-Methylmorpholin oder N-Ethylmorpholin oder in 50 mM Natriumphosphat (pH 7 bis 8), gegebenenfalls enthaltend 0,5 mM EDTA oder DMF oder THF oder Acetonitril) mit 0,5 Moläquivalenten von BAT-BM(N-(2-(N',N'-Bis(2-maleimidoethyl)aminoethyl)-N9-(t-butoxycarbonyl)- N6,N9-bis(2-methyl-2-triphenylmethylthiopropyl)-6,9-diazanonanamid), vorgelöst in Acetonitril oder THF, bei Raumtemperatur während ungefähr 1 bis 18 Stunden umgesetzt wurde. Die Lösung wurde anschließend zur Trockne eingedampft, und die Schutzgruppe der (BAT-BS)-Peptidkonjugate wurde durch Behandlung mit 10 ml TFA und 0,2 ml Triethylsilan während 1 Stunde abgespalten. Die Lösung wurde aufkonzentriert und die Produkt-Addukte wurden mit Ether abgeschieden und anschließend mittels HPLC gereinigt.
  • Wo zweckmäßig, kann die (DTPA)-Einheit unter Verwendung des Verfahrens von Bakker et al. (1991, Life Sci. 49: 1583 bis 1591, hiermit durch Bezugnahme eingebunden) eingeführt werden.
  • An Harz gebundene Produkte wurden routinemäßig unter Verwendung einer Lösung aus Trifluoressigsäure oder Trifluoressigsäure und Methylenchlorid, die gegebenenfalls Wasser, Thioanisol, Ethandithiol und Triethylsilan enthielt, hergestellt in den Verhältnissen von 100 : 5 : 5 : 2,5 : 2, bei Raumtemperatur während 0,5 bis 3 h gespalten. Die Rohpeptide wurden mittels präparativer Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) unter Verwendung einer Delta-Pak-C18-Säule von Waters und einer Gradientenelution unter Verwendung von 0,1% Trifluoressigsäure (TFA) in Wasser, modifiziert mit Acetonitril, gereinigt. Das Acetonitril wurde aus den eluierten Fraktionen verdampft, die anschließend lyophilisiert wurden. Die Identität jedes Produktes wurde durch Massenspektrometrie mittels Beschuss schneller Atome (fast-atom bombardment mass spectroscopy, FABMS) oder durch Elektrospray-Massenspektrometrie (ESMS) bestätigt.
  • Somatostatinanaloge, die wie hier bereitgestellt synthetisiert wurden, ebenso wie die Produkte solcher Synthesen, die durch FABMS identifiziert wurden, sind in der Tabelle I unten dargestellt.
  • BEISPIEL 2
  • Ein allgemeines Verfahren zum radioaktiven Markieren
  • 0,1 mg eines Peptids, das gemäß dem Beispiel 2 hergestellt wurde, wurde in 0,1 ml Wasser oder 50/50 Ethanol/Wasser oder phosphatgepufferter Salzlösung oder 50 mM Kaliumphosphatpuffer (pH = 5, 6 oder 7,4) gelöst. Tc-99m-Glucoheptonat wurde durch Rekonstituieren eines Glucoscan-Vials (E. I. DuPont de Nemours, Inc.) mit 1,0 ml Tc-99m-Natriumpertechnetat, das bis zu 200 mCi enthielt, hergestellt und 15 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen lassen. Dann wurden 25 μl Tc-99m-Glucoheptonat zu dem Peptid gegeben und die Reaktion wurde bei Raumtemperatur oder bei 100°C 15 bis 30 min lang fortschreiten lassen, und anschließend wurde durch ein Filter von 0,2 μm filtriert.
  • Die Reinheit des mit Tc-99m markierten Peptids wurde mittels HPLC unter Verwendung der folgenden Bedingungen bestimmt: Eine analytische Säule von Waters, Delta Pak RP-18, 5 μm, 4,6 mm × 220 mm, wurde mit jedem radioaktiv markierten Peptid beladen und die Peptide bei einer Lösemitteldurchflussgeschwindigkeit von 1 ml/min eluiert. Gradientenelution wurde beginnend mit 100% Lösemittel A (0,1% CF3OOOH/H2O) und endend mit 100% Lösemittel B90(0,1% CF3OOOH/90% CH3CN/H2O) im Verlauf von 10 bis 20 Minuten durchgeführt.
  • Die radioaktiven Bestandteile wurden unter Verwendung eines eingebauten radiometrischen Detektors, der mit einem integrierenden Aufzeichnungsgerät verbunden war, erfasst. Unter diesen Bedingungen eluieren Tc-99m-Glucoheptonat und Tc-99m-Natriumpertechnetat nach 1 bis 4 Minuten, wohingegen die mit Tc-99m markierten Peptide nach einem viel größeren Zeitraum eluierten, wie in der Tabelle I unten dargestellt.
  • TABELLE I
    Figure 00310001
  • TABELLE I (Forts.)
    Figure 00320001
  • TABELLE I (Forts.)
    Figure 00330001
  • TABELLE I (Forts.)
    Figure 00340001
  • * Die folgenden Markierungsbedingungen wurden bei den geeigneten Peptiden verwendet:
    • 1. Das Peptid wird in 50 mM Kaliumphosphatpuffer (pH 7,4) gelöst und bei Raumtemperatur markiert.
    • 2. Das Peptid wird in Wasser gelöst und bei Raumtemperatur markiert.
    • 3. Das Peptid wird in Wasser gelöst und bei 100°C markiert.
    • 4. Das Peptid wird in 50% Ethanol/Wasser gelöst und bei 100°C markiert.
    • 5. Das Peptid wird in 10%igem Hydroxypropylcyclodextrin gelöst und bei Raumtemperatur markiert.
    • 6. Das Peptid wird in 50% Ethanol/Wasser gelöst und bei Raumtemperatur markiert.
    • 7. Das Peptid wird in Wasser gelöst, auf pH 9 eingestellt und bei 100°C markiert.
    • 8. Das Peptid wird in Wasser gelöst, auf pH 6,5 eingestellt und bei 100°C markiert.
  • ** HPLC-Verfahren:
    allgemein: Lösemittel A = 0,1% CF3OOOH/H2O
    Lösemittel B90 = 0,1% CF3OOOH/90% CH3CN/H2O
    Lösemitteldurchflussgeschwindigkeit = 1 ml/min
    Säulen: a. Vydak-Säule = analytische Säule Vydak 218TP54 RP-18, 5 μm × 220 mm × 4,6 mm, mit Schutzsäule
    b. Waters-Säule = Waters Delta-Pak C18, 5 μm, 39 × 150 mm
    Verfahren 1: Vydak-Säule 100% A bis 100% B90 in 10 min
    Verfahren 2: Waters-Säule 100% A bis 100% B90 in 20 min
    Verfahren 3: Waters-Säule 100% A bis 100% B90 in 10 min (Einbuchstabige Abkürzungen für Aminosäuren können bei G. Zubay, Biochemistry (2. Aufl.), 1988 (MacMillen Publishing: New York), 5.33, gefunden werden. Ac = Acetyl; Acm = Acetamidomethyl; ma = Mercaptoessigsäure; Aca = 6-Aminocapronsäure; Hly = Homolysin; Apc = L-(S-(3-Aminopropyl)cystein; FD = D-Phenylalanin; WD = D-Tryptophan; YD = D-Tyrosin; Cpa = L-(4-Chlorphenyl)alanin; D-Nal = D-2-Naphthylalanin; Nle = Norleucin; Hcy = Homocystein; Hhc = Homohomocystein; Pen = Penicillamin; Aib = Aminoisobuttersäure; Nal = 2-Naphthylalanin; D-Nal = D-2-Naphthylalanin; Ain = 2-Aminoindan-2-carbonsäure; Achxa = 4-Amino-cyclohexylalanin; Amf = 4-Aminomethyl-phenylalanin; Aec = S-(2-Aminoethyl)cystein; Apc = S-(3-Aminopropyl)cystein; Aes = O-(2-Aminoethyl)serin; Aps = O-(3-Aminopropyl)serin; Abu = 2-Aminobuttersäure; Trc = Tricarboalkylsäure; Hca = Hexacarboxycyclohexan; Nva = Norvalin; T(CH2OH) = Threoninol (an dem die Carbonsäuregruppe zu einem primären Alkohol reduziert worden ist); ε-K = ein Lysinrest in einem Peptid, in dem die Peptidbindung eher die ε-Aminogruppe an der Lysin-Seitenkette einbezieht als die α-Aminogruppe; δ-Orn = ein Ornithinrest, in dem eher die δ-Aminogruppe als die typische α-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet; γ-Dab = ein 2,4-Diaminobuttersäurerest, in dem die γ-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet; β-Dap = ein 1,3-Diaminopropionsäurerest, in dem dieβ ß-Aminogruppe kovalent an die Carboxylgruppe der benachbarten Aminosäure gebunden ist und eine Peptidbindung bildet; Pic = Picolinoyl (Pyridin-2-carbonyl); Pica = Picolylamin (2-(Aminomethyl)pyridin); (BAT) = N6,N9-Bis(2-mercapto-2-methylpropyl)-6,9-diazanonansäure; BAT-Säure (geschützt) = N9-(t-Butoxycarbonyl)-N6,N9-bis(2-methyl-2-triphenylmethylthiopropyl)-6,9-diazanonansäure; BAM = N1,N4-Bis(2-mercapto-2-methylpropyl)-1,4,10-triazadecan; BAM (geschützt) = N1-(t-Butoxycarbonyl)-N1, N4-bis(2-methyl-2-triphenylmethylthiopropyl)-1,4,10-triazadecan; (BAT-BM) = N-(2-(N',N'-Bis(2-maleimidoethyl)aminoethyl)-N9-(t-butoxycarbonyl)-N6,N9-bis(2-methyl-2-triphenylmethylthiopropyl)-6,9-diazanonanamid; (BAT-BS) = N-(2-(N',N'-Bis(2-succinimidoethyl)aminoethyl)-N6,N9-bis(2-mercapto-2-methylpropyl)-6,9-diazanonanamid; (BMME) = Bis-maleimidomethylether; (BSME) = Bis-succinimidomethylether; (DTPA) = Diethylentriaminpentaessigsäure. RCY(%) = radiochemische Ausbeute (bestimmt durch HPLC) Nichtradioaktive Rheniumkomplexe wurden durch Auflösen jedes der Peptidreagenzien der Erfindung zusammen mit etwa einem Moläquivalent Tetrabutylammonium-oxotetra-bromrhenat (+5), das wie von Cotton et al. (1966, Inorg. Chem. 5: 9 bis 16) beschrieben, hergestellt wurde, in Dimethylformamid oder Acetonitril/Wasser und Rühren während 0,5 bis 5 Tagen hergestellt. Die Rheniumkomplexe wurden durch Umkehrphasen-HPLC, wie oben für mit Tc-99m markierten Peptiden beschrieben, isoliert und mittels FABMS oder ESMS gekennzeichnet.
  • Radioaktive Rheniumkomplexe, unter Verwendung von z. B. Re-186 oder Re-188, werden aus den geeigneten Perrhenatsalzen unter Verwendung derselben Vorschrift wie für das Markieren mit Tc-99m oder durch Zugeben eines Reduktionsmittels zu einer Lösung aus dem Peptid und dem Perrhenat oder gegebenenfalls unter Verwendung eines Ligandentransfermittels, wie z. B. Citrat, und Inkubieren der Reaktion bei einer Temperatur zwischen Raumtemperatur und 100 °C während 5 bis 60 min, hergestellt.
  • BEISPIEL 3
  • Hemmung des Bindens von (125I-Tyr11)-Somatostatin-14 an AR42J-Rattenbauchspeicheldrüsen-Tumorzellmembranen
  • Die Fähigkeit verschiedener Somatostatinanalogen der Erfindung, Somatostatinrezeptoren in vitro zu binden, wurde durch Untersuchen der Fähigkeit solcher Analogen, das Binden eines radioaktiv markierten Somatostatinanalogen an Somatostatinrezeptor enthaltenden Zellmembranen zu hemmen, gezeigt. Die Rattenbauchspeicheldrüsen-Tumorzellinie AR42J, die den Somatostatinrezeptor exprimiert, wurde in Minimalmedium nach Dulbecco (DMEM), ergänzt mit 10% fötalem Rinderserum (FBS) und 8 mM Glutamin, in einer angefeuchteten 5%igen CO2-Atmosphäre bei 37°C in T-Flaschen kultiviert. Die geernteten Zellen wurden in kaltem 50 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7,4) homogenisiert und das Homogenisat anschließend bei 39.000 g bei 4°C 10 min lang zentrifugiert. Die Pellets wurden einmal mit Puffer gewaschen und anschließend in einer eiskalten Lösung von 10 mM Tris-HCl (pH 7,4) wieder suspendiert. Gleiche Aliquote dieser Zellmembranzubereitung wurden mit (125I-Tyr11Somatostatin-14 (bei einer Endkonzentration von 0,5 nM und 750.000 cpm/ml, bei einer spezifischen Aktivität von 2.000 Ci/mmol, Amersham, Arlington Heights, IL) und Peptid bei einer Endkonzentration von 10–11 M bis 10–6 M in einer Lösung von 50 mM HEPES (pH 7,4), die 1% Rinderserumalbumin (BSA), 5 mM MgCl2, Trasylol (200.000 Internationale Einheiten), Bacitracin (0,02 mg/ml) und Phenylmethylsulfonylfluorid (0,02 mg/ml) enthielt, bei 30°C 25 min lang inkubiert. Unter Verwendung eines Filtrations-Mehrfachsystems wurde diese Mischung durch ein mit Polyethylenimin gewaschenes GC/F-Filter (Whatman, Maidstone, England) filtriert und der Rückstand, der auf dem Filter zurückblieb, dreimal mit 5 ml kaltem HEPES-Puffer gewaschen. Das Filter und eine Probe der Filtrations-Waschflüssigkeiten wurden dann in einem Gammazähler ausgezählt. Um das nichtspezifische Binden zu untersuchen, wurde die Untersuchung in Gegenwart von nichtmarkiertem Somatostatin-14 bei 200 nM durchgeführt. Die Analyse der Daten, einschließlich der Hill-Darstellungen der Daten, lieferte die Hemmkonstanten (siehe Bylund & Yamamura, "Methods of receptor binding", in Methods in Neurotransmitter Receptor Analysis, Yamamura et al., Hrsg., Raven Press; New York, 1990).
  • Dies Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle dargestellt. Die Daten zeigen, dass die Peptide der vorliegenden Erfindung eine hohe Bindungsaffinität zu Somatostatinrezeptoren aufweisen.
  • TABELLE II
    Figure 00380001
  • TABELLE II (Forts.)
    Figure 00390001
  • TABELLE II (Forts.)
    Figure 00400001

Claims (21)

  1. Somatostatinrezeptor-bindendes Peptidreagens der Formel X1-A1A2-B1B2B3B4-C1C2-X2 , wobei X1 und X2 jeweils unabhängig voneinander für hydrophile Einheiten stehen; A1, A2 und C1 jeweils unabhängig voneinander für eine lipophile D- oder L-Aminosäure, S-alkyliertes Cystein, Penicillamin, Homocystein oder Homohomocystein stehen; B1 für D- oder L-Phe, D- oder L-Tyr, D- oder L-Nal oder Ain steht; B2 für D- oder L-Trp steht; B3 für D- oder L-Lys, Hly, Achxa, Amf, Aec, Apc, Aes oder Aps steht; B4 für D- oder L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal oder Aib steht; C2 für D- oder L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal oder Aib steht; mit der Maßgabe, daß es sich bei dem Somatostatinrezeptor-bindenden Peptidreagens nicht um GGGFD.Cpa.YWDKTFT.Amid handelt, das kovalent mit einer einen radioaktiven Marker bindenden Einheit verbunden ist, die dazu in der Lage ist, mit einem Radioisotop einen elektrisch neutralen Komplex zu bilden, und es sich nicht um eine der folgenden Strukturen handelt: K[BAT]D.Nal.CMEYWDKVCMeT.Amid; oder [DTPA]K[BAT]D-Nal.CMEYWDKVCMeT.Amid.
  2. Das Reagens nach Anspruch 1, wobei X' eine Aminosäure, ein Peptid mit einer Aminosäuresequenz von nicht mehr als 10 Resten, ein Monosaccharid, ein Oligosaccharid mit 10 oder weniger Saccharideinheiten, ein Poly(N-carboxylalkyl)amin oder ein Polyoxyanion umfaßt, und X2 ein Poly(N-carboxylalkyl)amin, ein Polyoxyanion, eine Aminosäure, ein Peptid mit einer Aminosäuresequenz von nicht mehr als 10 Resten (einschließlich Peptiden, in denen die Carboxylgruppe der Aminosäure am Carboxyl-Terminus zu einem Alkohol reduziert ist), ein Monosaccharid und ein Oligosaccharid mit 10 oder weniger Saccharideinheiten umfaßt.
  3. Das Reagens nach Anspruch 1 oder 2, weiterhin umfassend eine polyvalente Verbindungseinheit, die kovalent an eine Mehrzahl der Somatostatinrezeptorbindenden Peptide gebunden ist und so ein multimeres, polyvalentes Somatostatinrezeptor-bindendes Mittel bildet, wobei das Molekulargewicht des multimeren, polyvalenten Somatostatinrezeptor-bindenden Mittels weniger als etwa 20000 Dalton beträgt; wobei die polyvalente Verbindungseinheit gegebenenfalls Bissuccinimidylmethylether, 4-(2,2-Dimethylacetyl)benzoesäure, N-2-(N',N'-Bis(2-succinimidoethyl)aminoethyl)-N6,N9-bis(2-methyl-2-mercaptopropyl)-6,9-diazanonanamid, Tris-(succinimidylethyl)amin, Tris(2-chloracetamidoethyl)amin, 1,2-Bis(2-(chloracetamido)ethoxy)ethan, Tris(acetamidoethyl)amin, Bis-acetamidomethylether, Bis-acetamidoethylether, α,ɛ-Bis-acetyllysin, Lysin und 1,8-Bis-acetamido-3,6-dioxaoctan oder ein Derivat davon umfaßt.
  4. Somatostatinrezeptor-bindendes Peptidreagens der Formel: X1-A1A2-B1B2B3B4-C1C2-X2 , wobei X1 für eine hydrophile Einheit steht; A1, A2 und C1 jeweils unabhängig voneinander für eine lipophile D- oder L-Aminosäure, S-alkyliertes Cystein, Penicillamin, Homocystein oder Homohomocystein stehen; B für D- oder L-Phe, D- oder L-Tyr, D- oder L-Nal oder Ain steht; B2 für D- oder L-Trp steht; B3 für D- oder L-Lys, Hly, Achxa, Amf Aec, Apc, Aes oder Aps steht; B4 für D- oder L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal oder Aib steht; C2 für D- oder L-Thr, Ser, Val, Phe, Ile, Abu, Nle, Leu, Nva, Nal oder Aib steht; X2 für -COOR9, -CH2OH, CH2COOR9 oder -CON(R9)2 steht, wobei R9 jeweils für H, niederes geradkettiges oder cyclisches Alkyl steht oder durch eine hydrophile Einheit substituiert ist; und wobei das Somatostatinrezeptor-bindende Peptid kovalent an eine einen radioaktiven Marker bindende Einheit gebunden ist, wobei die einen radioaktiven Marker bindende Einheit nicht kovalent an die Einheiten B1, B2, B3 bzw. B4 des Peptids gebunden ist; mit der Maßgabe, daß es sich bei dem Somatostatinrezeptor-bindenden Peptidreagens nicht um GGGFD.Cpa.YWDKTFT.Amid handelt, das kovalent mit einer einen radioaktiven Marker bindenden Einheit verbunden ist, die dazu in der Lage ist, mit einem Radioisotop einen elektrisch neutralen Komplex zu bilden, und es sich nicht um eine der folgenden Strukturen handelt: K[BAT]D.NalCMEYWDKVCMeT.Amid; oder [DTPA]K[BAT]D-Nal.CMEYWDKVCMeT.Amid.
  5. Das Reagens nach Anspruch 4, wobei X1 eine Aminosäure, ein Peptid mit einer Aminosäuresequenz von nicht mehr als 10 Resten, ein Monosaccharid, ein Oligosaccharid mit 10 oder weniger Saccharideinheiten, ein Poly(N-carboxylalkyl)amin oder ein Polyoxyanion umfaßt, und X2 ein Poly(N-carboxylalkyl)amin, ein Polyoxyanion, eine Aminosäure, ein Peptid mit einer Aminosäuresequenz von nicht mehr als 10 Resten, ein Monosaccharid oder ein Oligosaccharid mit 10 oder weniger Saccharideinheiten umfaßt.
  6. Das Reagens nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei B' für Phenylalanin oder Tyrosin, B2 für D-Tryptophan, B3 für Lysin und B4 für Threonin oder Valin steht.
  7. Reagentien nach einem der Ansprüche 4 bis 6, wobei die einen radioaktiven Marker bindende Einheit eine Formel ausgewählt aus der aus: i) C(pgp)S–(aa)–C(pgp)S, wobei (pgp)S für H oder eine Thiolschutzgruppe und (aa) für eine beliebige αoder β-Aminosäure steht; ii) eine Technetium-99m-komplexierende Einheit, umfassend eine einzelne Thioleinheit der Formel: A-CZ(B)-[C(R'R'')] X , wobei A für H, HOOC, H2NOC, (Peptid)-NHOC, (Peptid)-OOC oder R"" steht; B für H, SH, -NHR'''', -N(R''')-(Peptid) oder R"" steht; X für H, SH, -NNR'''', -N(R''')-(Peptid) oder R"" steht; Z für H oder R'''' steht; R', R'', R''' und R'''' unabhängig voneinander für N oder niederes geradkettiges oder verzweigtes oder cyclisches Alkyl stehen; n für 0, 1 oder 2 steht; und, wenn B für NHR''' oder -N(R''')-(Peptid) steht, X für SH und n für 1 oder 2 steht; wenn X NHR''' oder -N(R''')-(Peptid) steht, B für SH und n für 1 oder 2 steht; wenn B für H oder R"" steht, A für HOOC, H2NOC, (Peptid)-NHOC, (Peptid)-OOC, X für SH und n für 0 oder 1 steht; wenn A für H oder R'''' steht und wenn B für SH steht, X für NHR''' oder – N(R''')-(Peptid) steht, und wenn X für SH steht, B für NHR"' oder -N(R''')-(Peptid) steht; wenn X für H oder R'''' steht, A für HOOC, H2NOC, (Peptid)-NHOC, (Peptid)-OOC und B für SH steht; wenn Z für Methyl steht, X für Methyl, A für HOOC, H2NOC, (Peptid)-NHOC oder (Peptid)-OOC, B für SH und n für 0 steht; und wobei sich die Thioleinheit in der reduzierten Form befindet; iii)
    Figure 00450001
    wobei X = H oder eine Schutzgruppe; (Aminosäure) = eine beliebige Aminosäure; iv)
    Figure 00450002
    wobei X = H oder eine Schutzgruppe; (Aminosäure) = eine beliebige Aminosäure; v)
    Figure 00460001
    wobei R5 jeweils unabhängig für H, CH3 oder C2H5 steht; (pgp)s jeweils unabhängig für eine Thiolschutzgruppe oder H steht; m, n und p unabhängig voneinander für 2 oder 3 stehen; A = geradkettiges Alkyl, cyclisches niederes Alkyl, Aryl, Heterocyclyl oder eine Kombination davon; und vi)
    Figure 00460002
    wobei R5 jeweils unabhängig für H, CH3 oder C2H5 steht; m, n und p unabhängig voneinander für 2 oder 3 stehen; A = geradkettiges Alkyl, cyclisches niederes Alkyl, Aryl, Heterocyclyl oder eine Kombination davon; V = H oder -CO-Peptid; R6 = H oder Peptid; und wobei, wenn V = H, R6 = Peptid, und, wenn R6 = H, V = -CO-Peptid, bestehenden Gruppe aufweist.
  8. Das Reagens nach einem der Ansprüche 4 bis 7, weiterhin umfassend eine polyvalente Verbindungseinheit, die kovalent mit einer Mehrzahl der Somatostatinrezeptor-bindenden Peptide verbunden ist und weiterhin kovalent mit einer Mehrzahl von radioaktive Marker bindenden Einheiten verbunden ist, so daß es ein Reagens zur Herstellung eines multimeren, polyvalenten Somatostatinrezeptor-bindenden Reagens umfasst, wobei das Molekulargewicht des multimeren, polyvalenten Somatostatinrezeptor-bindenden Reagens weniger als etwa 20000 Dalton beträgt; wobei die polyvalente Verbindungseinheit gegebenenfalls Bissuccinimidylmethylether, 4-(2,2-Dimethylacetyl)benzoesäure, N-2-(N',N'-Bis(2-succinimidoethyl)aminoethyl)-N6,N9-bis(2-methyl-2-mercaptopropyl)-6,9-diazanonanamid, Tris-(succinimidylethyl)amin, Tris(2-chloracetamidoethyl)amin, 1,2-Bis(2-(chloracetamido)ethoxy)ethan, Tris(acetamidoethyl)amin, Bis-acetamidomethylether, Bis-acetamidoethylether, α,ɛ-Bis-acetyllysin, Lysin und 1,8-Bis-acetamido-3,6-dioxaoctan oder ein Derivat davon umfaßt.
  9. Das Reagens nach einem der Ansprüche 4 bis 8, wobei das Cystein der einen radioaktiven Marken bindenden Einheit der Formel C(pgp)S-(aa)-C(pgp)S eine Schutzgruppe der Formel -CH2-NH-CO-R aufweist, wobei R für niederes Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, 2-, 3-, 4-Pyridyl, Phenyl oder durch niederes Alkyl, Hydroxy, niederes Alkoxy, Carboxy oder niederes Alkoxycarbonyl substituiertes Phenyl steht.
  10. Das Reagens nach einem der Ansprüche 4 bis 8, wobei die einen radioaktiven Marken bindende Einheit C(pgp)S-(aa)-C(pgp)S die Formel:
    Figure 00480001
    aufweist.
  11. Reagens mit einer Formel ausgewählt aus der folgenden Gruppe: CAcmGCAcmGGGFD.Cpa.YWDKTFT.Amid; (DTPA).FD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid; ma.GGGFD.Cpa.YWDKTFT.Amid; Ac.CAcmGCAcm.Cpa.YwDKTFT.Amid; (DTPA).D-Nal.Cpa.YWpKTFT(ε-K)GCKK.Amid; AKCGGGFD.Cpa.YwDKTFT.Amid; (DTPA).D-Nal.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid; (DTPA).Aca.FD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid; (DTPA).(ε-K)GCFD.FYWDKTFT.Amid; Ac.CGCFD.Cpa.YWDKTFT.Amid; (DTPA).(D-Nal.CYWDKVCT)2; Ac.FD.FYWDKTFT(ε-K)GC.Amid; Ac.FDFYWDKTFTGGG(ε-K)GC.Amid; Ac.FDFYWDKTFGGG(ε-K)KC.Amid; (DTPA).D-Nal.CYWDKVCT.Amid; (2-Ketogulonyl)-D-NalFYWDKVCT.Amid; (DTPA).FDFYWDKTFT(ε-K)GC.Amid; (DTPA).FDGYWDKTCT(CH2OH); (DTPA).Nal.SYWDKVTK.(BAT).Amid; (DTPA).Nal.SYWDKVCT.Amid; DDD.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; Ac.DDD.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; Hca.G.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; (Trc.-Imid)2K.Nalp.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCRR.Amid; Trc(Trc.-Imid)K.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCRR.Amid; (Trc.-Imid)NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCR.Amid; KDKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKDKD.Amid; KDKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCDD.Amid; (Trc)2K.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; Hca.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; (2-Ketogulonyl)Fp.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; KKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCDDDD.Amid; Ac.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; Ac.KKKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; (2-Ketogulonyl)FD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid; DDDD.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKKKK.Amid; (DTPA)NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKK.Amid; (DTPA)NalD.Cpa.YWDKTFTCAmGCAm.Amid; Ac.KKKKK.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GC.Amid und KDKD.NalD.Cpa.YWDKTFT(ε-K)GCKDKD.Amid.
  12. Das Reagens nach einem der Ansprüche 4 bis 11, radioaktiv markiert mit einem Radioisotop ausgewählt aus der aus Technetium-99m, Indium-111, Gallium-67, Gallium-68, Iod-123, Scandium-47, Kupfer-67, Gallium-72, Yttrium-90, Iod-125, Iod-131, Samarium-153, Gadolinium-159, Dysprosium-165, Holmium-166, Ytterbium-175, Lutetium-177, Rhenium-186, Rhenium-188, Bismut-212 und Astatin-211 bestehenden Gruppe.
  13. Das Somatostatinrezeptor-bindende Peptidreagens nach Anspruch 1, radioaktiv markiert mit Iod-123, Iod-125, Iod-131 oder Astatin-211.
  14. Zusammensetzung umfassend ein Reagens nach einem der Ansprüche 4 bis 11 und ein Zinn(II)-Ion.
  15. Verfahren zur Markierung eines Reagens nach einem der Ansprüche 4 bis 11, welches umfasst, dass das Reagens in Gegenwart eines Reduktionsmittels mit Technetium-99m umgesetzt wird, wobei das Reduktionsmittel gegebenenfalls aus der aus Dithionitionen, Zinn(II)-Ionen und Eisen(II)-Ionen bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
  16. Verfahren zur Herstellung eines Reagens nach einem der Ansprüche 1 bis 3 oder 4 bis 11, bei dem das Somatostatinrezeptor-bindende Peptid chemisch in vitro synthetisiert wird, wobei das Somatostatinrezeptor-bindende Peptid gegebenenfalls durch Festphasenpeptidsynthese synthetisiert wird.
  17. Das Verfahren nach Anspruch 16, bei dem die einen radioaktiven Marker bindende Einheit während der Festphasenpeptidsynthese kovalent an das Somatostatinrezeptor-bindende Peptid gebunden wird.
  18. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend ein Reagens nach einem der Ansprüche 1 bis 11 in einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
  19. Kit zur Herstellung einer radiopharmazeutischen Zubereitung, wobei das Kit aus einem verschlossenen Vial besteht, das eine vorbestimmte Menge eines Reagens nach einem der Ansprüche 4 bis 11 und ein Reduktionsmittel in einer Menge enthält, die ausreicht, um das Reagens mit Technetium-99m, Rhenium-186 oder Rhenium-188 zu markieren.
  20. Komplex eines Reagens nach einem der Ansprüche 4 bis 11 und eines nicht radioaktiven Metalls, wobei es sich bei dem Metall gegebenenfalls um Rhenium handelt.
  21. Verwendung eines Reagens nach Anspruch 1 oder 12 zur Herstellung eines Medikaments zur Linderung einer Somatostatin-bedingten Erkrankung in einem Tier, gegebenenfalls einem Menschen, oder zur Herstellung eines Medikaments zur Abbildung einer Stelle im Körper eines Säugetieres.
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