DE69302938T2

DE69302938T2 - Erythromycinderivate, Herstellung und Verwendung davon

Info

Publication number: DE69302938T2
Application number: DE69302938T
Authority: DE
Inventors: Yasunori Funabashi; Setsuo Harada; Nobuhiro Inatomi; Shigeharu Tanayama; Seiichi Tanida
Original assignee: Kitasato Institute; Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: KITASATO KENKYUSHO TOKIO/TOKYO JP; Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1992-03-19
Filing date: 1993-03-19
Publication date: 1996-10-17
Anticipated expiration: 2013-03-20
Also published as: CA2092045A1; EP0561413B1; ATE138925T1; US5854407A; EP0561413A1; US5470961A; DE69302938D1; CA2092045C

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf neue Verbindungen, die sich als Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion eignen. Insbesondere bezieht sich die vorliegende Erfindung auf die Anwendung neuer Erythromycinderivate als Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion.
Das Antibiotikum Erythroniycin, das zur Klasse der basischen 14-Ring-Makrolide gehört, wird von Mikroorganismen erzeugt, wie den Stämmen, die in J.M. McGuire et al., Antibiotics & Chemotherapy, 2, 281-283 (1952), und D.P. Labeda et al., Int. J. Syst. Bacteriol., 37, 19-22 (1987), beschrieben sind, von denen Streptomyces erythreus (Saccharopolyspora erythrea) ein Vertreter ist, und setzt sich wie unten gezeigt aus den Erythromycinen A, B, C und D zusammen [P.F. Wiley et al., J. Amer. Chem. Soc., 79, 6062-6070, 6070-6073, 6074-6077 (1957); J. Mayer et al., J. Amer. Chem. Soc., 99, 1620-1622 (1977)].
Erythromycin (im folgenden zuweilen als ERM abgekürzt) A kann bei seiner Verwendung als antibakterielles Mittel Nebenwirkungen haben, wie Erbrechen. Z. Itoh et al. berichteten, daß ERM A eine motilinartige Wirkung hat und die peristaltische Magen-Darm- Bewegung fördert [gastromtestinale Motorik stimulierende (im folgenden zuweilen als GMS bezeichnet) Wirkung] [Am. J. Physiol., 247, G688-694 (1984)]. S. Omura et al. berichteten über die Herstellung von ERM-Derivaten mit starker GMS-Wirkung, bei denen nur wenig antibakterielle Wirkung beobachtet wurde, und reichten Patentanmeldungen ein (EP-A-213617 und EP-A-215355) . Herstellungsverfahren, Eigenschaften, Strukturen und biologische Wirkungen dieser Derivate sind in J. Med. Chem., 30, 1941-1943 (1987), und Chem. Pharm. Bull., 37, 2687-2700, 2701-2709 (1989), beschrieben.
Weiterhin offenbart EP-A-0 349 100 pharmazeutische Zusammensetzungen, die als Wirkstoff ein ringkontrahiertes Makrolid der Formel:
umfassen, wobei R&sub1; -N(CH&sub3;)&sub2; oder -[N(CH&sub3;)&sub2;R]&spplus;X&supmin; ist,
R C&sub1;- bis C&sub6;-Alkyl, C&sub2;- bis C&sub6;-Alkenyl, C&sub2;- bis C&sub6;-Alkinyl, Benzyl oder Benzyl, das mit 1 bis 3 Substituenten substituiert ist, die aus Fluor, Chlor, C&sub1;- bis C&sub4;-Alkyl, C&sub1;- bis C&sub4;-Alkoxy, Nitro, C&sub1; - bis C&sub4;-Alkoxycarbonyl, -N(C&sub1;-C&sub4;-Alkyl)&sub2; oder Cyan ausgewählt sind, ist,
R&sub2; und R&sub3; jeweils H sind oder zusammen eine Bindung bilden,
R&sub4; und R&sub5; unabhängig H oder C&sub1;- bis C&sub4;-Acyl sind oder zusammen mit einer Carbonylgruppe ein fünfgliedriges cyclisches Carbonat bilden,
R&sup6; H oder C&sub1;- bis C&sub4;-Acyl ist und
X&supmin; = Halogenid, Hydroxid, Carboxylat, Sulfat, Phosphat, Nitrat,
C&sub1;- bis C&sub3;-Alkylsulfonat oder Arylsulfonat (wie p-Toluolsulfonat oder Benzolsulfonat),
oder, wenn R&sub1; = -N(CH&sub3;)&sub2;, ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon zur Verwendung bei der Behandlung von Störungen der gastromtestinalen Motilität.
Der Mensch nimmt Nahrung zu sich, um am Leben zu bleiben und die physische Kraft zu erhalten oder wiederherzustellen. Ein Individuum, dessen Verdauungsfunktion oder dessen gastromtestinale Motorfunktion beeinträchtigt ist, wie ein Patient nach einer Operation, ein Patient mit einer schweren Infektionskrankheit oder Krebs, ein Patient mit Diabetes, bei dem man eine gastrointestinale Funktionsstörung beobachtet, ein Patient mit chronischer Gastritis oder ein Patient mit regurgitierender Ösophagitis, benötigt jedoch ein Medikament, um die gastrointestinale Motorfunktion zu aktivieren. Entsprechend ist die Entwicklung eines ausgezeichneten Mittels zur Förderung der gastrointestinalen Motorik erforderlich.

Kurzbeschreibung der Erfindung

Die Erfinder haben nun gefunden, daß ein Erythromycinderivat, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, die gastromtestinale Motorfunktion förderte (GMS- Wirkung hatte), wenn es Tieren verabreicht wurde.
Die Erfinder fanden nämlich in vivo einen aktiven Metaboliten, der die gastromtestinale Motorfunktion förderte (GMS-Wirkung hatte), wenn den Tieren Verbindung (1) oder (2) der 14-Ring- Makrolide mit der in Tabelle 1 unten gezeigten Strukturformel verabreicht wurde. Verbindung (1) wurde Hunden intravenös verabreicht, darauffolgte 30 Minuten nach der Verabreichung eine Lösungsmittelextraktion aus den Lebern, Chromatographie und präparative HPLC, wobei man zwei aktive Metabolite erhielt, die Verbindungen (3) und (4). Die Erfinder konnten bestimmen, daß die chemischen Strukturen dieser Verbindungen einem 15- bzw. einem 14-Hydroxyderivat von Verbindung (1) entsprachen. Verbindung (2) wurde ähnlich behandelt, wobei man die entsprechenden Verbindungen (7) und (8) erhielt. Alle diese Verbindungen sind neue Verbindungen, und wir konnten zeigen, daß sie bei einem in-vivo- Test bei Hunden eine starke Wirkung im Sinne einer Förderung der gastromtestinalen Motorik hatten.
Als Ergebnis weiterer Untersuchungen fanden die Erfinder, daß Erythromycinderivate, die wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufwiesen, die gastromtestinale Motorfunktion förderten und daß ihre Wirkung der von Derivaten ohne Hydroxygruppen an den Positionen 14 und 15 äquivalent oder größer als diese war.
Diese Verbindungen können durch eine Oxidationsreaktion gebildet werden.
Bei der oben erwähnten Oxidationsreaktion können von Tieren abgeleitete Oxidasen verwendet werden. Zur Herstellung der Proben in großen Mengen bestimmten die Erfinder Mikroorganismen, die Enzyme erzeugen, welche ermöglichen, daß eine solche Oxidationsreaktion abläuft. Als Ergebnis fanden die Erfinder, daß bestimmte Arten von Mikroorganismen diese Fähigkeit besitzen.
Auf der Grundlage dieser Befunde haben die Erfinder die vorliegende Erfindung fertiggestellt.
Die vorliegende Erfindung stellt bereit:
(1) ein strukturell neuartiges 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, oder ein Salz davon;
(2) ein Verfahren zur Herstellung eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, oder eines Salzes davon, umfassend das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats oder eines Salzes davon mit einer von einem Organismus abgeleiteten Oxidase; und
(3) ein Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion, das ein 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, oder ein Salz davon enthält.

Kurzbeschreibung der Zeichnungen

Fig. 1 zeigt ein IR-Spektrum von Verbindung (7);
Fig. 2 zeigt ein ¹H-NMR-Spektrum von Verbindung (7);
Fig. 3 zeigt ein IR-Spektrum von Verbindung (8);
Fig. 4 zeigt ein ¹³C-NMR-Spektrum von Verbindung (8);
Fig. 5 zeigt ein IR-Spektrum von Verbindung (3);
Fig. 6 zeigt ein ¹³C-NMR-Spektrum von Verbindung (3);
Fig. 7 zeigt ein IR-Spektrum von Verbindung (4);
Fig. 8 zeigt ein ¹³C-NMR-Spektrum von Verbindung (4);
Fig. 9 zeigt ein IR-Spektrum von Verbindung (5);
Fig. 10 zeigt ein ¹³C-NMR-Spektrum von Verbindung (5);
Fig. 11 zeigt ein IR-Spektrum von Verbindung (6);
Fig. 12 zeigt ein ¹³C-NMR-Spektrum von Verbindung (6);
Fig. 13 zeigt ein IR-Spektrum von Verbindung (9); und
Fig. 14 zeigt ein ¹³C-NMR-Spektrum von Verbindung (9).

Beschreibung der bevorzugten Ausführungsformen

Die 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate der vorliegenden Erfindung umfassen ein 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das durch die allgemeine Formel [1] dargestellt wird:
wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt und R&sub2; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt oder R&sub1; und R&sub2; zusammen mit dem benachbarten Stickstoffatom eine heterocyclische Gruppe bilden können, R&sub3; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe darstellt, R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist, R&sub6; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt, R&sub7; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, R&sub8; Wasserstoff, eine Hydroxygruppe, eine substituierte oder unsubstituierte Acyloxygruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkoxygruppe darstellt und
-A- die allgemeine Formel [2] darstellt:
wobei R&sub9; und R&sub1;&sub0; beide Wasserstoff darstellen oder beide eine chemische Bindung bilden
und Z die allgemeine Formel [3] darstellt:
wobei R&sub1;&sub1; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt und R&sub1;&sub2; Wasserstoff, eine Niedercarboxylacylgruppe oder eine Alkylgruppe, die gegebenenfalls Alkylthio als Substituenten trägt, darstellt,
oder Z die allgemeine Formel [4] darstellt:
wobei R&sub1;&sub3; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt,
oder Z die Formel [5] darstellt:
oder Z die Formel [6] darstellt:
oder Z die allgemeine Formel [7] darstellt:
wobei Y die Formel )B-R&sub1;&sub4;, wobei R&sub1;&sub4; eine Alkylgruppe oder eine Arylgruppe darstellt, )S=O, )C=O, )C=S oder die allgemeine Formel [8] darstellt:
wobei R&sub1;&sub5; und R&sub1;&sub6;, die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoff oder Alkylgruppen darstellen oder zusammen mit dem benachbarten Kohlenstoffatom eine cyclische Alkylgruppe bilden oder einer der Reste R&sub1;&sub5; und R&sub1;&sub6; Wasserstoff, eine Alkylgruppe oder eine Arylgruppe darstellt und der andere eine Dialkylaminogruppe darstellt,
oder -A- die allgemeine Pormel [9] darstellt:
wobei Z' die allgemeine Formel [10] darstellt:
wobei R&sub1;&sub7; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt.
Die oben erwähnten 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate umfassen ein 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das durch die allgemeine Formel [11] dargestellt wird:
wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub2;' eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist, R&sub7; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, R&sub8;' Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt und R&sub1;&sub8; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt.
Die oben erwähnten 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate umfassen ein 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das durch die allgemeine Formel [12] dargestellt wird:
wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub1;&sub8;' Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt, R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist, R&sub7; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, mit der Maßgabe, daß R&sub1;&sub8;' Wasserstoff darstellt, wenn R&sub7; Methyl ist.
Die oben erwähnten 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate umfassen ein 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das durch die allgemeine Formel [13] dargestellt wird:
wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist.
Zu den bevorzugten 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivaten, die durch die Formel [11] dargestellt werden, gehören solche, bei denen R&sub1; und R&sub2; gleich oder verschieden sein können und eine substituierte oder unsubstituierte Niederalkylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Cycloalkylgruppe darstellen.
Zu den noch mehr bevorzugten 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivaten, die durch die Formel [11] dargestellt werden, gehören solche, bei denen R&sub1; und R&sub2; gleich oder verschieden sein können und eine substituierte oder unsubstituierte C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppe darstellen.
Zu den bevorzugten 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivaten, die durch die Formel [12] oder [13] dargestellt werden, gehören solche, bei denen R&sub1; eine Isopropyl- oder Ethylgruppe ist.
Die 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate der vorliegenden Erfindung können durch eine Oxidationsreaktion unter Verwendung einer von einem Organismus abgeleiteten Oxidase hergestellt werden, wie es unten beschrieben ist.
Das Verfahren der vorliegenden Erfindung zur Herstellung des 6,9- Hemiacetal-Erythromycinderivats, das durch die Formel [1] dargestellt wird, oder eines Salzes davon umfaßt das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [14] dargestellt wird:
wobei R&sub7;' Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt und die anderen Symbole dasselbe wie oben bedeuten, oder eines Salzes davon mit einer von einem Organismus abgeleiteten Oxidase.
Das oben genannte Verfahren zur Herstellung des 6,9-Hemiacetal- Erythromycinderivats, das durch die Formel [11] dargestellt wird, oder eines Salzes davon umfaßt das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal- Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [15] dargestellt wird, oder eines Salzes davon mit einer von einem Organismus abgeleiteten Oxidase:
wobei R&sub1;, R&sub2;', R&sub7;', R&sub8;' und R&sub1;&sub8; dasselbe wie oben bedeuten.
Das oben genannte Verfahren zur Herstellung des 6,9-Hemiacetal- Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [16] dargestellt wird:
wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt und R&sub2; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt oder R&sub1; und R&sub2; zusammen mit dem benachbarten Stickstoffatom eine heterocyclische Gruppe bilden, R&sub3; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe darstellt, R&sub6; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt, R&sub8; Wasserstoff, eine Hydroxygruppe, eine substituierte oder unsubstituierte Acyloxygruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkoxygruppe darstellt und
-A- die allgemeine Formel [2] darstellt:
wobei R&sub9; und R&sub1;&sub0; beide Wasserstoff darstellen oder beide eine chemische Bindung bilden
und Z die allgemeine Formel [3] darstellt:
wobei R&sub1;&sub1; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt und R&sub1;&sub2; Wasserstoff, eine Niedercarboxylacylgruppe oder eine Alkylgruppe, die gegebenenfalls Alkylthio als Substituenten trägt, darstellt,
oder Z die allgemeine Formel [4] darstellt:
wobei R&sub1;&sub3; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt,
oder Z die Formel [5] darstellt:
oder Z die Formel [6] darstellt:
oder Z die allgemeine Formel [7] darstellt:
wobei Y die Formel > B-R&sub1;&sub4;, wobei R&sub1;&sub4; eine Alkylgruppe oder eine Arylgruppe darstellt, > S=O, > C=O, > C=S oder die allgemeine Formel [8] darstellt:
wobei R&sub1;&sub5; und R&sub1;&sub6;, die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoff oder Alkylgruppen darstellen oder zusammen mit dem benachbarten Kohlenstoffatom eine cyclische Alkylgruppe bilden oder eines davon Wasserstoff, eine Alkylgruppe oder eine Arylgruppe darstellt und das andere eine Dialkylaminogruppe darstellt,
oder -A- die allgemeine Formel [9] darstellt:
wobei Z' die allgemeine Formel [10] darstellt:
wobei R&sub1;&sub7; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt, oder eines Salzes davon,
umfaßt das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [17] dargestellt wird:
wobei R&sub1;, R&sub2;, R&sub3;, R&sub6;, R&sub8; und -A- dasselbe bedeuten wie oben, oder eines Salzes davon mit der von einem Organismus abgeleiteten Oxidase.
Das oben genannte Verfahren zur Herstellung des 6,9-Hemiacetal- Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [18] dargestellt wird:
wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub1;&sub8; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt, R&sub4;' und R&sub5;' Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, R&sub7; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, mit der Maßgabe, daß R&sub7; Wasserstoff darstellt, wenn sowohl R&sub4;' als auch R&sub5;' Wasserstoff sind, oder eines Salzes davon, in dem ein 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das durch die allgemeine Formel [19] dargestellt wird:
wobei R&sub1;, R&sub1;&sub8; und R&sub7;' dasselbe wie oben bedeuten, oder eines Salzes davon umfaßt das Umsetzen der durch die Formel [19] dargestellten Verbindung mit der von einem Organismus abgeleiteten Oxidase.
Die durch die Formel [14], [15] oder [19] dargestellte Verbindung, wobei R&sub7;' eine Methylgruppe ist, kann durch die Oxidationsreaktion in eine Verbindung umgewandelt werden, bei der R&sub7; ein Wasserstoffatom ist.
In den Formeln, die durch die obigen Formeln dargestellt werden, vorzugsweise [1] , [11] , [12] , [13], [14], [15] , [16] , [17], [18] und [19], die in den unten gezeigten Ansprüchen beschrieben sind und für die Beispiele für die gewünschten Derivate der vorliegenden Erfindung und für die Beispiele für die in der vorliegenden Erfindung verwendeten Ausgangsstoffe stehen, gehören zu den durch R&sub1; dargestellten aliphatischen Kohlenwasserstoffgruppen der substituierten oder unsubstituierten aliphatischen Kohlenwasserstoffgruppen zum Beispiel Niederalkyl, Cycloalkyl, Niederalkenyl und Niederalkinyl. Diese Gruppen sollten vorzugsweise nicht mehr als 12 Kohlenstoffatome und noch bevorzugter nicht mehr als etwa 6 Kohlenstoffatome enthalten. Niederalkyl und Cycloalkyl werden bevorzugt, und Niederalkyl wird noch mehr bevorzugt. Wenn diese Gruppen substituiert sind, können sie 1 bis 3 geeignete Substituenten tragen.
Von den Niederalkylgruppen werden Alkylgruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen mehr bevorzugt. Beispiele dafür sind Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, Pentyl und Hexyl. Bei den Niederalkylgruppen handelt es sich noch bevorzugter um Alkylgruppen mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen und noch bevorzugter um Methyl, Ethyl und Isopropyl.
Zu den Beispielen für die Cycloalkylgruppen gehören vorzugsweise Cycloalkylgruppen mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen, wie Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl. Bei den Cycloalkylgruppen handelt es sich bevorzugter um Cycloalkylgruppen mit 4 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.
Zu den bevorzugten Beispielen für die Niederalkenylgruppen gehören Alkenylgruppen mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Vinyl, Allyl, 2-Butenyl, Methylallyl, 3-Butenyl, 2-Pentenyl, 4-Pentenyl und 5-Hexenyl.
Zu den bevorzugten Beispielen für die Niederalkinylgruppen gehören Alkinylgruppen mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Ethinyl, Propargyl, 2-Butin-1-yl, 3-Butin-2-yl, 1-Pentin-3-yl, 3-Pentin-1-yl, 4-Pentin-2-yl und 3-Hexin-1-yl.
Zu den Substituenten an den substituierten oder unsubstituierten aliphatischen Kohlenwasserstoffgruppen gehören zum Beispiel Hydroxy, Azido, Nitro, Amino, Cyan, Guanidino, Amidino, Sulfo, Carboxy, Oxo, Epoxy, Thioxo, Sulfamino, Sulfamoyl, Sulfamoylamino, Ureido, Benzoyl, Halogen, C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy-C&sub2;&submin;&sub3;-alkyl, C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyloxy, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;- Aryloxy, C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkyloxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylthio, C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkylthio, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylthio, C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkylthio, Mono-C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylamino, Di-C&sub1;&submin;&sub4;- Alkylamino, C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkylamino, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylamino, C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkylamino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonyl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryloxycarbonyl, C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyloxycarbonyl, C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkyloxycarbonyl, C&sub1;&submin;&sub5;-Alkanoyl, C&sub1;&submin;&sub1;&sub5;- Alkanoyloxy, gegebenenfalls substituiertes Carbamoyl, gegebenenfalls substituiertes Carbamoyloxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonyloxy, C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;- Aralkyloxycarbonyloxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkanoylamino, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylcarbonylamino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonylamino, C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkyloxycarbonylamino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonylamino, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylsulfonylamino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfinyl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylsulfinyl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonyl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylsulfonyl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonyloxy, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylsulfonyloxy, heterocyclische Gruppen, Heterocyclusthio, Heterocycluscarbonylamino, Heterocyclusoxy und Heterocyclusamino.
Die Substituenten an den oben genannten aliphatischen Kohlenwasserstoffgruppen (1) C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkylgruppe, (2) C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylgruppe, (3) Alkylgruppen in C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylthio, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfinyl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonyl und C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonyloxy sowie (4) heterocyclische Gruppen in den heterocyclischen Gruppen, Heterocyclusthio, Heterocycluscarbonylamino, Heterocyclusoxy und Heterocyclusamino können weiterhin geeignete Substituenten tragen, wie Hydroxy, Azido, Nitro, Amino, Cyan, Sulfo, Carboxy, Oxo, Halogen, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylthio, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylamino, Di-C&sub1;&submin;&sub4;- Alkylamino, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylamino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonyl, C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryloxycarbonyl, C&sub1;&submin;&sub5;-Alkanoyl, C&sub1;&submin;&sub5;-Alkanoyloxy, Carbamoyl, Carbamoyloxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkanoylamino, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonylamino und C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonylamino.
Die Zahl der Substituenten an den oben genannten jeweiligen Gruppen beträgt vorzugsweise 1 bis 3.
Diese Substituenten werden unten im Einzelnen beschrieben.
Beispiele für die Halogenatome sind Fluor, Chlor, Brom und Iod.
Beispiele für die C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkylgruppen sind Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl und Cyclohexyl.
Beispiele für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylgruppen sind Phenyl und Naphthyl.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxygruppen sind Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy und tert-Butoxy.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy-C&sub2;&submin;&sub3;-alkylgruppen sind Ethoxyethyl, Methoxymethyl, Dimethoxyethyl und Diethoxyethyl.
Beispiele für die C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyloxygruppen sind Cyclopropyloxy, Cyclobutyloxy, Cyclopentyloxy und Cyclohexyloxy.
Beispiele für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryloxygruppen sind Phenoxy und Naphthyloxy.
Beispiele für die C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkyloxygruppen sind Benzyloxy, 2-Phenethyloxy und 1-Phenethyloxy.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylthiogruppen sind Methylthio, Ethylthio, Propylthio, Isopropylthio, Butylthio, Isobutylthio, sec- Butylthio und tert-Butylthio.
Beispiele für die C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkylthiogruppen sind Cyclopropylthio, Cyclopentylthio und Cyclohexylthio.
Beispiele für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylthiogruppen sind Phenylthio und Naphthylthio.
Beispiele für die C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkylthiogruppen sind Benzylthio, 2-Phenethylthio und 1-Phenethylthio.
Beispiele für die Mono-C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylaminogruppen sind Methylamino, Ethylamino, Propylamino, Isopropylamino, Butylamino, Isobutylamino und tert-Butylamino.
Beispiele für die Di-C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylaminogruppen sind Dimethylamino, Diethylamino, Dipropylamino, Dibutylamino, N-Methyl-N-ethylamino, N-Methyl-N-Propylamino und N-Methyl-N-butylamino.
Beispiele für die C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkylaminogruppen sind Cyclopropylamino, Cyclobutylamino, Cyclopentylamino und Cyclohexylamino.
Beispiele für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylaminogruppen sind Anilino und Naphthylamino.
Beispiele für die C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkylaminogruppen sind Benzylamino, Phenethylamino und Phenylpropylamino.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonylgruppen sind Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Propoxycarbonyl, Isopropoxycarbonyl, Butoxycarbonyl, tert-Butoxycarbonyl und Isobutoxycarbonyl.
Zu den Beispielen für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Aryloxycarbonylgruppen gehört Phenoxycarbonyl.
Beispiele für die C&sub3;&submin;&sub6;-Cycloalkyloxycarbonylgruppen sind Cyclopropyloxycarbonyl, Cyclobutyloxycarbonyl, Cyclopentyloxycarbonyl und Cyclohexyloxycarbonyl.
Beispiele für die C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkyloxycarbonylgruppen sind Benzyloxycarbonyl, 1-Phenethyloxycarbonyl und 2-Phenethyloxycarbonyl sowie Phenylpropyloxycarbonyl.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub5;-Alkanoylgruppen sind Formyl, Acetyl, Propionyl, Butyryl und Pivaloyl.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub1;&sub5;-Alkanoyloxygruppen sind Formyloxy, Acetoxy, Butyryloxy, Pivaloyloxy, Pentanoyloxy, Hexanoyloxy, Heptanoyloxy, Octanoyloxy, Nonanoyloxy, Decanoyloxy, Undecanoyloxy, Dodecanoyloxy, Tridecanoyloxy, Tetradecanoyloxy und Pentadecanoyloxy.
Beispiele für die substituierten Carbamoylgruppen sind N-Methylcarbamoyl, N,N-Dimethylcarbamoyl, N-Ethylcarbamoyl, N,N-Diethylcarbamoyl, N-Phenylcarbamoyl, Pyrrolidinocarbamoyl, Piperidinocarbamoyl, Piperazinocarbamoyl, Morpholinocarbamoyl und N-Benzylcarbamoyl.
Beispiele für die substituierten Carbamoyloxygruppen sind N-Methylcarbamoyloxy, N,N-Dimethylcarbamoyloxy, N-Ethylcarbamoyloxy, N-Benzylcarbamoyloxy, N,N-Dibenzylcarbamoyloxy und N-Phenylcarbamoyloxy.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonyloxygruppen sind Methoxycarbonyloxy, Ethoxycarbonyloxy und tert-Butoxycarbonyloxy.
Beispiele für die C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkyloxycarbonyloxygruppen sind Benzyloxycarbonyloxy und dergleichen.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkanoylaminogruppen sind Formylamino, Acetylamino, Propionylamino und Butyrylamino.
Zu den Beispielen für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylcarbonylaminogruppen gehört Benzamino.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonylaminogruppen sind Methoxycarbonylamino, Ethoxycarbonylamino, Butoxycarbonylamino und tert- Butoxycarbonylamino.
Beispiele für die C&sub7;&submin;&sub1;&sub2;-Aralkyloxycarbonylaminogruppen sind Benzyloxycarbonylamino, 2-Phenethyloxycarbonylamino und 1-Phenethyloxycarbonylamino.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonylaminogruppen sind Methansulfonylamino, Ethansulfonylamino und Butansulfonylamino.
Beispiele für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylsulfonylaminogruppen sind Benzolsulfonylamino und Naphthalinsulfonylamino.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfinylgruppen sind Methylsulfinyl, Ethylsulfinyl, Propylsulfinyl, Butylsulfinyl, Isobutylsulfinyl, sec-Butylsulfinyl und tert-Butylsulfinyl.
Beispiele für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylsulfinylgruppen sind Phenylsulfinyl und Naphthylsulfinyl.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonylgruppen sind Methansulfonyl, Ethansulfonyl und Butansulfonyl.
Beispiele für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylsulfonylgruppen sind Benzolsulfonyl, Toluolsulfonyl und Naphthalinsulfonyl.
Beispiele für die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylsulfonyloxygruppen sind Methansulfonyloxy, Ethansulfonyloxy und Butansulfonyloxy.
Beispiele für die C&sub6;&submin;&sub1;&sub0;-Arylsulfonyloxygruppen sind Benzolsulfonyloxy und Toluolsulfonyloxy.
Zu den heterocyclischen Gruppen gehören 5- oder 6-gliedrige cyclische Gruppen, die 1 bis 5 Heteroatome, wie Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel, enthalten. Beispiele dafür sind Pyrrolidinyl, Pyrrolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Furyl, Thienyl, Oxazolyl, Isoxazolyl, Isothiazolyl, Thiazolyl, Piperidinyl, Pyridyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Piperadinyl, Pyrimidinyl, Pyranyl, Tetrahydropyranyl, Tetrahydrofuryl, Indolyl, Chinolyl, 1,3,4-Oxadiazolyl, 1,2,3-Thiadiazolyl, 1,3,4-Thiadiazolyl, 1,2,3-Triazolyl, 1,2,4-Triazolyl, 1,3,4-Triazolyl, Tetrazolyl, 1,3-Dioxoranyl, Morpholino und Morpholinyl. Die heterocyclische Gruppe kann mit einem 5- oder 6-gliedrigen Ring kondensiert sein, der 1 bis 3 andere Heteroatome als Kohlenstoffatome, wie Stickstoff und Schwefel, enthalten kann, wobei eine kondensierte bicyclische Gruppe entsteht, wie 8-Chinolyl, 8-Purinyl, Thieno- [2,3-d]pyridyl, Tetrazolo[1,3-b]pyridazinyl, Benzothiazolyl, Benzooxazolyl, Benzoimidazolyl und Benzothienyl.
Zu den Heterocyclusthio-, Heterocyclusoxy-, Heterocyclusamino- und Heterocycluscarbonylaminogruppen gehören Gruppen, bei denen die oben genannten heterocyclischen Ringe jeweils an Schwefelatome, Sauerstoffatome, Stickstoffatome oder Carbonylaminogruppen gebunden sind.
Bevorzugte Beispiele für Substituenten in den substituierten Niederalkyl-, substituierten Cycloalkyl-, substituierten Niederalkenyl- und substituierten Niederalkinylgruppen, die durch R&sub1; dargestellt werden, sind Hydroxy, Amino, Sulfo, Carboxy, Halogen (wie Chlor, Brom, bd und Fluor), Aryl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen (wie Phenyl, Tolyl und Naphthyl), Niederalkoxy mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen (wie Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy und Butoxy), Niederalkylthio mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen (Methylthio, Ethylthio, Propylthio und Butylthio), Alkoxycarbonyloxy mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen (wie tert-Butoxycarbonyloxy), Aralkyloxycarbonyloxy (wie Benzyloxycarbonyloxy), substituiertes Amino (wie Dimethylamino und Diethylamino), heterocyclische (cyclische Amino-) Gruppen (wie Morpholino, Piperidino, Pyrrolidinyl und 2-Oxopyrrolidinyl), Alkanoyloxy mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen (wie Formyloxy, Acetoxy und Trifluoracetoxy), Alkanoylamino mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen (wie Acetamido (Acetylamino) und Trifluoracetamido), Niederalkoxy(mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen)carbonyl (wie Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl und Butoxycarbonyl) Carbamoyl und substituiertes Carbamoyl (wie Dimethylcarbamoyl und Diethylcarbamoyl). Von diesen werden Halogen (wie Chlor, Brom, bd und Fluor), Hydroxy und Amino bevorzugt.
Konkrete Beispiele für die durch R&sub1; dargestellten Gruppen sind Methyl, Ethyl, Isopropyl, Chlormethyl, Brommethyl, Iodmethyl, Trifluormethyl, Chlorethyl, Bromethyl, Iodethyl, Chlorpropyl, Hydroxymethyl, Hydroxyethyl, Hydroxypropyl, 2-Hydroxy-2-phenylethyl, Cyclopropylmethyl, Cyclobutylmethyl, Cyclopentylmethyl, Cyclohexylmethyl, 2-Cyclohexylethyl, 3-Chlorcyclobutylmethyl, Benzyl, 4-Chlorbenzyl, 4-Nitrobenzyl, 4-Methoxybenzyl, 2,4-Dimethoxybenzyl, 3,4-Dimethoxybenzyl, 4-Methylbenzyl, 2-Ethoxyethyl, 2-(2,2,2-Trifluorethoxy)ethyl, Methoxymethyl, 2,2-Dimethoxyethyl, 2, 2-Diethoxyethyl, Cyclopropylmethoxymethyl, Cyclobutylmethoxymethyl, 2-Cyclopropylmethoxyethyl, 2-Cyclobutylmethoxyethyl, 2-Benzyloxyethyl, 3-Benzyloxypropyl, 2-Phenoxyethyl, 3 -Phenylpropyl, Methylthiomethyl, 2 -Methylthioethyl, 2-Phenylthioethyl, 2-Benzylthioethyl, 2-Butylthioethyl, Cyclohexylthiomethyl, 2-(4-Pyridylthio)ethyl, Aminomethyl, Aminoethyl, 2-Methylaminoethyl, 2-tert-Butylaminoethyl, 2-Dimethylaminoethyl, 3-Dimethylaminopropyl, 2-Cyclohexylaminoethyl, 2-Benzylaminoethyl, 2-Azidoethyl, Nitromethyl, 2-Nitroethyl, Cyanmethyl, 2-Cyanethyl, 4-Cyanbutyl, Carboxymethyl, 2-Carboxyethyl, Ethoxycarbonylmethyl, Phenoxycarbonylmethyl, Cyclopentyloxycarbonylmethyl, Acetylmethyl, Benzoylmethyl, 4-Chlorbenzoylmethyl, 3 (4-Brombenzoyl)propyl, 3-Methoxybenzoylmethyl, 2-Formyloxyethyl, 2-Methylsulfinylethyl, 2-Phenylsulfinylethyl, 2-Methylsulfonylethyl, 3-Phenylsulfonylpropyl, 2-Acetoxyethyl, 4-Acetoxybutyl, Pivabyloxymethyl, 3-Sulfopropyl, Carbamoylmethyl, 3-Carbamoylpropyl, Pyrrolidinocarbonylmethyl, 2-(N-Ethylbenzylamino) ethyl, 2-(2-Oxopyrrolidino) ethyl, 2-Formylaminoethyl, 3-Formylaminopropyl, 3-Trifluoracetamidopropyl, 2-Benzaminoethyl, 3-tert-Butoxycarbonylaminopropyl, Benzyloxycarbonylaminopropyl, 2,3-Epoxypropyl, 2-Thioacetamidoethyl, 3-Sulfonaminopropyl, 2-(1,3-Dioxoran-2-yl)ethyl, 2-, 3-, 4-Pyridylmethyl, 2-(4-Pyridyl)ethyl, 3-(4-Pyridyl)propyl, Furfuryl, 3-(2-Furyl)allyl, 3-(2-Furyl)propyl, 2-(2-Pyranyloxy) ethyl, 2-(3-Indolyl)ethyl, 3-(1-Indolyl)propyl, 3-(2-Benzimidazolyl)propyl, 2-Morpholinoethyl, (3-Isoxazolyl)methyl, 2-(2-Pyridylthio)ethyl, 2-(2-Benzthiazolyl)ethyl, 2-(2-Pyrimidinylthio) ethyl, 2-(2-Aminoethylthio) ethyl, 2-Isonicotinoylaminoethyl, 2-Thenoylaminoethyl, 2-Furoylaminoethyl, 3-(tert-Butoxycarbonyloxy)propyl, 2-Methylsulfonyloxyethyl, 2-(p-Toluolsulfonyloxy)ethyl, 2-(tert-Butyldimethylsilyloxy)ethyl, Sulfoaminomethyl, 2-Sulfoaminoethyl, Ureidomethyl, 2-Ureidoethyl, Sulfamoylaminomethyl, 2-Sulfamoylaminoethyl, 4-Methoxybenzyloxycarbonylamino, 4-Nitrobenzyloxycarbonylamino, 4-Chlorbenzyloxycarbonylamino, Toluolsulfonylamino, Trifluormethansulfonylamino, 2-Chlorethanesulfonylamino und 2,2,2-Trifluormethansulfonylamino.
Zu den substituierten oder unsubstituierten aliphatischen Kohlenwasserstoffgruppen, die durch R&sub2; oder R&sub2;' dargestellt werden, gehoren dieselben Gruppen wie bei R&sub1;.
Wenn R&sub1; und R&sub2; zusammen mit einem Stickstoffatom eine heterocyclische Gruppe bilden, wird eine Kohlenstoffkette mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Trimethylen, Tetramethylen, Pentamethylen oder Hexamethylen zur Bildung der Gruppe verwendet. Beispiele für die Gruppen sind Azetidino(trimethylenimino), Pyridino(tetramethylenimino), Piperidino(pentamethylenimino), Hexamethylenimino.
Zu den Acylgruppen der durch R&sub3;, R&sub1;&sub1;, R&sub1;&sub3; oder R&sub1;&sub7; dargestellten substituierten oder unsubstituierten Acylgruppen oder zu den Acylgruppen in den durch R&sub8; dargestellten substituierten oder unsubstituierten Acyloxygruppen in den oben genannten Formeln gehören Carbonsäureacyl, Sulfonsäureacyl, Phosphonsäureacyl und Phosphorsäureacyl.
Die Carbonsäureacylgruppe bedeutet eine Acylgruppe, die von einer Carbonsäure abgeleitet ist, bei der es sich entweder um eine Monocarbonsäure oder eine Polycarbonsäure und entweder eine gesattigte Carbonsäure oder eine ungesättigte Carbonsäure handeln kann.
Bevorzugte Beispiele für die Monocarbonsäureacylgruppen sind gesättigte oder ungesättigte Acylgruppen mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen (wie Formyl, Acetyl, Propionyl, Butyryl, Isobutyryl, Valeryl, Isovaleryl, Hexanoyl, Pivabyl, Lauroyl, Myristoyl, Palmitoyl, Stearoyl, Acryloyl, Propiolyl und Methacryloyl) sowie Arylcarbonsäureacylgruppen. Zu den Arylcarbonsäureacylgruppen gehören Benzolcarbonsäure und Naphthalincarbonsäure.
Bevorzugte Beispiele für die Polycarbonsäureacylgruppen sind Dicarbonsäureacylgruppen. Zu den Dicarbonsäureacylgruppen gehören gesättigte oder ungesättigte Acylgruppen mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, die gegebenenfalls verestert sein können, wie Oxab, Carboxyacetyl, 3-Carboxypropionyl, cis-3-Carboxyacryloyl, trans- 3-Carboxyacryloyl sowie cis-3-Methylcarboxyacryloyl.
Die Sulfonsäureacylgruppe bedeutet eine Acylgruppe, die von einer Sulfonsäure abgeleitet ist. Beispiele dafür sind Alkyl-, Arylund Aralkylsulfonsäureacylgruppen. Die Alkylgruppe ist vorzugsweise zum Beispiel ein lineares oder verzweigtes Alkyl mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen. Konkrete Beispiele für die Alkylgruppen sind Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl, n-Pentyl und n-Hexyl. Beispiele für die Arylgruppen sind Phenyl und Naphthyl. Die Arylgruppen können Substituenten tragen, und Beispiele für die Substituenten sind Niederalkyl (zum Beispiel Methyl), Niederalkoxy (zum Beispiel Methoxy), Halogen (zum Beispiel Fluor, Chlor und Brom), Nitro und Carboxy. Zu den Beispielen für die Aralkylgruppen gehört 2-Phenethyl.
Die Phosphonsäureacylgruppe bedeutet eine Acylgruppe, die von Phosphonsäure abgeleitet ist. Beispiele dafür sind Phosphonsäureacylgruppen, die von Alkyl-, Aryl- und Aralkylderivaten von Phosphonsäure erhalten werden. Die Alkylgruppe enthält vorzugsweise zum Beispiel 1 bis 6 Kohlenstoffatome und kann linear oder verzweigt sein. Konkrete Beispiele für die Alkylgruppen sind Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl, n-Pentyl und n-Hexyl. Beispiele für die Arylgruppen sind Phenyl, Tolyl und Naphthyl. Beispiele für die Aralkylgruppen sind Arylalkyl, bei dem das Aryl vorzugsweise das oben genannte Aryl ist, während das Alkyl vorzugsweise 1 bis 3 Kohlenstoffatome enthält und zum Beispiel Methyl, Ethyl oder Propyl umfaßt.
Die Phosphorsäureacylgruppe bedeutet eine Acylgruppe, die von Phosphorsäure abgeleitet ist. Beispiele dafür sind Phosphorsäure acylgruppen, die von Alkyl-, Aryl- und Aralkylderivaten von Phosphorsäure erhalten werden. Das Alkyl, das Aryl und das Aralkyl bedeuten dasselbe wie bei der Phosphonsäure.
Beispiele für die Substituenten in den durch R&sub3;, R&sub1;&sub1;, R&sub1;&sub3; oder R&sub1;&sub7; dargestellten substituierten oder unsubstituierten Acylgruppen sind Halogen, Alkoxy und Alkylthio.
Beispiele für die Halogenatome sind Chlor, Brom, Fluor und Iod.
Zu den Alkoxygruppen gehören solche mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methoxy, Ethoxy, Propoxy und Butoxy.
Zu den Alkylthiogruppen gehören solche mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methylthio, Ethylthio, Propylthio, Isopropylthio, Butylthio, Isobutylthio, sec-Butylthio und tert-Butylthio.
Zu den Niedercarbonsäureacylgruppen, die in der oben genannten Formel durch R&sub1;&sub2; dargestellt werden, gehören Monocarbonsäureacylgruppen und Polycarbonsäureacylgruppen mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Formyl, Acetyl, Propionyl, Butyryl, Isobutyryl, Valeryl, Isovaleryl, Hexanoyl, Oxalo, Carboxyacetyl und 3-Carboxypropionyl.
Die Alkylgruppen in den durch R&sub8; dargestellten substituierten oder unsubstituierten Alkoxygruppen und die Alkylgruppen der durch R&sub1;&sub1;, R&sub1;&sub3; oder R&sub1;&sub7; dargestellten substituierten oder unsubstituierten Alkylgruppen in den oben genannten Formeln enthalten vorzugsweise 1 bis 3 Kohlenstoffatome und können linear oder verzweigt sein. Konkrete Beispiele für die Alkylgruppen sind Methyl, Ethyl, Propyl und Isopropyl. Als Substituenten werden Alkoxy mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder Alkoxyalkoxy mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen bevorzugt. Beispiele für die Alkoxygruppen sind Methoxy, Ethoxy und Propoxy, und Beispiele für die Alkoxyalkoxygruppen sind Methoxyethoxy, Methoxypropoxy, Methoxybutoxy, Methoxypentyloxy, Ethoxyethoxy, Ethoxypropoxy, Ethoxybutoxy und Propoxypropoxy.
Zu den Alkylgruppen der durch R&sub1;&sub2; dargestellten Alkylgruppen, die Alkylthiogruppen als Substituenten haben können, in der oben genannten Formel gehören die oben beschriebenen Alkylgruppen. Zu den Alkylthiogruppen als Substituenten gehört Niederalkylthio. Die Niederalkylgruppe enthält vorzugsweise 1 bis 3 Kohlenstoffatome, und Beispiele dafür sind Methyl, Ethyl und Propyl.
Zu den durch R&sub1;&sub4; dargestellten Alkylgruppen in der oben genannten Formel gehören solche mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen. Die Alkylgruppen mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen werden gegenüber den anderen bevorzugt, und konkrete Beispiele dafür sind Methyl, Ethyl und Propyl.
Zu den durch R&sub1;&sub4; dargestellten Arylgruppen in der oben genannten Formel gehören Phenyl, Tolyl und Naphthyl.
Die durch R&sub1;&sub5; oder R&sub1;&sub6; dargestellten Alkylgruppen in der oben genannten Formel können linear oder verzweigt sein und umfassen solche mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen&sub5; Konkrete Beispiele dafür sind Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec- Butyl, tert-Butyl, n-Pentyl und n-Hexyl. Die Alkylgruppen mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen werden gegenüber den anderen bevorzugt und können entweder linear oder verzweigt sein. Beispiele für die Alkylgruppen sind Methyl, Ethyl, Propyl und Isopropyl.
Zu den durch R&sub1;&sub5; und R&sub1;&sub6; dargestellten Kohlenstoffketten, die zusammen mit dem benachbarten Atom in den Acetalbindungen cyclische Alkylgruppen bilden, in der oben genannten Formel gehören solche mit 4 und 5 Kohlenstoffatomen, wie Tetramethylen und Pentamethylen.
Beispiele für die durch R&sub1;&sub5; oder R&sub1;&sub6; dargestellten Arylgruppen in der oben genannten Formel sind Phenyl, Tolyl und Naphthyl.
Zu den durch R&sub1;&sub5; oder R&sub1;&sub6; dargestellten Dialkylaminogruppen in der oben genannten Formel gehören Niederdialkylaminogruppen, und zu den Niederalkylgruppen davon gehören solche mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Ethyl und Propyl.
-A- wird vorzugsweise durch Formel [2] dargestellt.
Bevorzugte Beispiele für 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate der vorliegenden Erfindung, die wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweisen, werden durch die allgemeine Formel [20] dargestellt:
wobei R&sub3; aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus:
einem Wasserstoffatom,
einem Acylrest einer aliphatischen C&sub1;&submin;&sub5;-Carbonsäure,
einem C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Aroylrest,
einem C&sub2;&submin;&sub1;&sub2;-Dialkyloxyphosphorylrest und
einem C&sub1;&sub2;&submin;&sub2;&sub4;-Diaryloxyphosphorylrest
besteht,
R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist, R&sub1;&sub9; aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus:
einem Wasserstoffatom,
einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkanoylrest, der mit einem C&sub1;&submin;&sub3;-Alkoxycarbonylrest substituiert sein kann,
einem C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Aroylrest,
einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylsulfonylrest,
einem C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Arylsulfonylrest,
einem C&sub7;&submin;&sub2;&sub0;-Aralkylsulfonylrest und
einem C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylrest, der mit einem C&sub2;&submin;&sub6;-Alkoxyrest substituiert sein kann,
besteht,
wobei R&sub9; und R&sub1;&sub0; jeweils ein Wasserstoffatom darstellen oder beide zusammen genommen eine chemische Bindung bilden;
wobei Z" für die Formel:
steht, wobei R&sub1;&sub1; aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus:
einem Wasserstoffatom,
einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkanoylrest,
einem C&sub1;&submin;&sub1;&sub2;-Aroylrest,
einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylsulfonylrest,
einem C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;-Arylsulfonylrest,
einem C&sub7;&submin;&sub2;&sub0;-Aralkylsulfonylrest und
einem C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylrest, der mit einem C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylthiorest substituiert sein kann,
besteht, und R&sub1;&sub2; aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus:
einem Wasserstoffatom,
einem C&sub1;&submin;&sub6;&submin;Alkanoylrest und
einem C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylrest, der mit einem C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylthiorest sub-
stituiert sein kann,
besteht,
oder wobei Z" für die Formel:
steht oder Z" für die Formel:
steht, wobei Y für die Formel B-R&sub1;&sub4;' (wobei R&sub1;&sub4;' für einen C&sub6;&submin;&sub1;&sub2;- Arylrest steht), > C=O, > S=O, > C=S steht oder Y für die Formel [24] steht:
wobei R&sub1;&sub5;' und R&sub1;&sub6;', die gleich oder verschieden sein können, jeweils fur ein Wasserstoffatom oder einen C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylrest steht,
Ra für die Formel [25] steht:
wobei Rb aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus:
einem Wasserstoffatom und
einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylrest
besteht,
und wobei Rc aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus:
einem Wasserstoffatom,
einem C&sub2;&submin;&sub6;-Alkylrest, der mit einem oder mehreren Hydroxyresten substituiert sein kann,
einem C&sub2;&submin;&sub6;-Alkenylrest und
einem C&sub2;&submin;&sub6;-Alkinylrest besteht,
oder Rb und Rc zusammen und zusammen mit dem benachbarten Stickstoffatom einen cyclischen C&sub3;&submin;&sub6;-Alkylaminorest bilden oder Ra für die Formel [26] steht:
wobei Rd ein C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylrest ist und Re und Rf, die gleich oder verschieden sein können, aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus:
einem Wasserstoffatom,
einem C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylrest, der mit einem Hydroxyrest, Carboxyrest, Cyanrest oder Halogen, einem C&sub3;&submin;&sub5;-Cycloalkylrest oder
einem C&sub1;&submin;&sub3;-Alkoxycarbonylrest substituiert sein kann,
einem C&sub7;&submin;&sub2;&sub0;-Aralkylrest,
einem C&sub2;&submin;&sub6;-Alkenylrest und
einem C&sub2;&submin;&sub6;-Alkinylrest
besteht,
oder Re und Rf zusammen mit dem benachbarten Stickstoffatom einen cyclischen C&sub5;&submin;&sub7;-Alkylaminorest bilden und X&supmin; für ein Anion steht.
Die am meisten bevorzugten Beispiele für 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate der vorliegenden Erfindung, die wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweisen, werden durch die allgemeine Formel [27] dargestellt:
wobei R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist,
Ra' für die Formel:
steht, wobei Rc' Ethyl oder Isopropyl ist, oder Ra' für die Formel:
steht, wobei Re' und Rf', die gleich oder verschieden sein können, aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus Methyl-, Ethyl- und Isopropylresten besteht, und jeweils entweder unsubstituiert oder mit Resten substituiert sind, die aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus Hydroxy, Cyan, Halogen, Cyclopropyl und Propargyl besteht,
oder Re' und Rf' zusammen mit dem benachbarten Stickstoffatom einen Pyrrolidino- oder Piperidinoring bilden
und X- für ein Halogenanion steht.
Zu den bevorzugten Beispielen für die 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate, die wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweisen, oder die Salze davon gehören in der vorliegenden Erfindung Verbindungen, bei denen in der Formel [11] R&sub1; Methyl ist, R&sub2; Isopropyl oder Ethyl ist, R&sub1;&sub8; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe ist, R&sub7; Methyl ist und R&sub8;' Hydroxy ist.
Konkrete Beispiele für diese bevorzugten Verbindungen sind N-Demethyl-15-hydroxy-N-isopropyl-8,9-anhydroerythromycin-A-6,9- hemiacetal, N-Demethyl-14-hydroxy-N-isopropyl-8, 9-anhydroerythromycin-A-6, 9-hemiacetal, 3"-O-Demethyl-N-demethyl-14- hydroxy-N-isopropyl-8, 9-anhydroerythromycin-A-6, 9-hemiacetal, N-Demethyl-15-hydroxy-N-ethyl-8,9-anhydroerythromycin-A-6,9- hemiacetal, N-Demethyl-14-hydroxy-N-ethyl-8,9-anhydroerythromycin-A-6, 9-hemiacetal und 3 "-O-Demethyl-N-demethyl-14-hydroxy-N- ethyl-8,9-anhydroerythromycin-A-6,9-hemiacetal.
Die vorliegende Erfindung wird gemäß der folgenden Formel [12] und Tabelle 1 näher beschrieben. Tabelle 1 Verbindung Nr. Isopropyl Ethyl Methyl *(1), (2): Ausgangsverbindung
Zuerst untersuchten die Erfinder, ob in vivo Metabolite gebildet werden, die die gastromtestinale Motorik fördern (GMS-Wirkung haben), wenn einem Tier die Verbindung (1) oder (2), das in der Fachkunde bekannte 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, verabreicht wurde.
Das Lactobionat der Verbindung (1) (10 mg/kg, iv) wurde in die Vordergliedmaße eines Hundes injiziert, und das Blut, die Leber, die Galle und der Urin wurden einer HP-20-Chromatographie unterworfen. Nach der Extraktion mit Ethylacetat wurden aktive Metabolite bestimmt. Wenigstens zwei Metabolite zeigten GMS- Wirkung und waren in der Leber und außerdem in beträchtlichem Maße im Urin und der Galle vorhanden. Die ursprüngliche Verbindung war zum großen Teil im Blut vorhanden. Die Leber wurde 30 Minuten nach der Verabreichung entnommen, und eine extrahierte konzentrierte Lösung davon wurde einer HP-20-Chromatographie unterworfen. Die mit 80% (v/v) Methanol/0,005 N HCL eluierte Fraktion wurde mit Ethylacetat extrahiert, und dann wurde der Extrakt konzentriert, so daß man ein Pulver erhielt. Dieses Pulver wurde fraktionierender HPLC unterworfen, wobei man zwei aktive Fraktionen erhielt (Fraktionen, die jeweils die Verbindungen (3) und (4) enthielten). Diese zeigten bei der dreidimensionalen HPLC einen einzigen Peak und zeigten im FAB- Massenspektrum (FAB-MS) m/z von 760 (MH&spplus;), 602 (MH-Cladinose).
Das Lactobionat der Verbindung (2) wurde in ähnlicher Weise behandelt wie oben beschrieben, wobei man die Verbindungen (7) und (8) erhielt.
Die Verbindungen (3), (4), (7) und (8) liegen als weiße Pulver vor und haben basische und fettlösliche Eigenschaften. Die physicochemischen Eigenschaften dieser Verbindungen sind in den Beispielen gezeigt.
Die Strukturformeln dieser Verbindungen wurden durch Analysieren der Daten des zweidimensionalen Proton-Proton-Korrelationsspektrums (¹H-¹H-COSY), einer Art von NMR-Spektrum, im einzelnen untersucht. Es zeigte sich, daß die Verbindungen (3) und (4) das 15- bzw. das 14-Hydroxyderivat der Verbindung (1) sind und daß die Verbindungen (7) und (8) das 15- bzw. das 14-Hydroxyderivat der Verbindung (2) sind.
Zu den Verfahren zum Erhalten des 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats der vorliegenden Erfindung (siehe Formel [1], [11] und [16], im folgenden gelegentlich als gewünschte Verbindung der vorliegenden Erfindung bezeichnet) oder des Salzes davon der vorliegenden Erfindung gehört zum Beispiel das Verfahren des Durchführens einer Oxidationsreaktion mit dem 6,9-Hemiacetal- Erythromycinderivat (siehe Formel [14], [15] und [17], im folgenden gelegentlich als Ausgangsverbindung der vorliegenden Erfindung bezeichnet) oder dem Salz davon.
Die Oxidationsreaktion wird zum Beispiel unter Verwendung von Oxidasen durchgeführt, die von Organismen abgeleitet sind. Zu den verwendeten Oxidasen, die von Organismen abgeleitet sind, gehören Oxidasen, die von der Leber von Säugern (zum Beispiel Hunden, Rindern, Schweinen, Meerschweinchen und Ratten) abgeleitet sind.
Die Oxidasen werden in Form der Enzyme selbst oder von Enzymlösungen verwendet. Als Enzymlösungen werden zum Beispiel Homogenisate, die durch Zerkleinern der Lebern und Suspendieren der Gewebe in Puffern mit geeigneter Konzentration hergestellt werden, als solche verwendet, oder es werden rohe Enzyme verwendet, die durch Zentrifugieren der Homogenisate und anschließendes Hinzufügen von Aceton usw. zu den Überständen sowie anschließende Pulverisierung erhalten werden.
Wenn man die Oxidasen reagieren läßt, werden vorzugsweise Coenzyme, Dehydrogenasen und anorganische Salze in Kombination damit verwendet.
Beispiele für die Coenzyme sind Coenzyme, die gewöhnlich bei Oxidations-Reduktions-Reaktionen verwendet werden, wie Nicotinamid- Adenin-Dinucleotid (NAD&spplus;), dessen Phosphat (NADP&spplus;) und reduzierte Produkte davon (NADH und NADPH).
Beispiele für die Dehydrogenase sind D-Glucose-6-phosphat- Dehydrogenase und Glycerin-3-phosphat-Dehydrogenase.
Beispiele für die anorganischen Salze sind Erdalkalimetallhalogenide, wie Magnesiumchlorid.
Die Konzentration der Ausgangsverbindungen bei der Reaktion beträgt etwa 5 µg/ml bis etwa 5 mg/ml und vorzugsweise etwa 20 µg/ml bis etwa 2 mg/ml. Die Reaktionstemperatur beträgt etwa 30 bis 42ºC und vorzugsweise etwa 34 bis 40ºC. Die Reaktionszeit beträgt etwa 5 Minuten bis 24 Stunden und vorzugsweise etwa 10 Minuten bis 20 Stunden.
Die gewünschten Verbindungen der vorliegenden Erfindung oder die Salze davon werden erhalten, indem man die von einem Mikroorganismus abgeleiteten Oxidasen mit den Ausgangsverbindungen der vorliegenden Erfindung oder den Salzen davon reagieren läßt.
Die Mikroorganismen haben die Fähigkeit, die 6,9-Hemiacetal- Erythromycinderivate, die Ausgangsverbindungen der vorliegenden Erfindung, zu oxidieren. Beispiele für solche Mikroorganismen sind Stämme, die zu den Actinomyceten gehören. Von diesen werden zum Beispiel Stämme bevorzugt, die zu Aniycolatopsis (gemäß der IFO-Liste von 1992, Streptoinyces in der IFO-Liste von 1988), Saccharothrix (gemäß der IFO-Liste von 1992, Nocardia in der IFO- Liste von 1988) oder Dactylosporangium gehören. Typische Beispiele für die Stämme sind Amycolatopsis tolypophorus IFO 13151 (gemäß der IFO-Liste von 1992, Streptoznyces tolypophorus in der IFO-Liste von 1988), Saccharothrixmutabilis subsp. capreolus IFO 12847 (gemäß der IFO-Liste von 1992, Nocardia caprecla in der IFO-Liste von 1988) und Dactylosporangium variesporum IFO 14104. Die IFO-Nummern sind Hinterlegungsnummern beim Institute for Fermentation, Osaka, Japan (IFO).
Diese Actinomyceten können zum Beispiel durch Bestrahlung mit ultraviolettem Licht, Röntgenstrahlen, Strahlungen oder dergleichen, Einzelsporenisolierung, verschiedene Mutationsverfahren oder andere Vorgehensweisen in ähnlicher Weise wie andere Actinomyceten mutiert werden. Es ist unnotig, solche Mutanten und natürlich vorkommende Mutanten als wesentlich unterschiedliche Spezies voneinander zu unterscheiden, wenn man die taxonomischen Eigenschaften vergleicht, und alle Mikroorganismen, die die Ausgangsverbindungen der vorliegenden Erfindung oxidieren können, können in der vorliegenden Erfindung verwendet werden.
Für die Kultivierung dieser Mikroorganismen verwendete Medien können flüssig oder fest sein, so lange sie Nährstoffe enthalten, die von den Mikroorganismen verwertet werden können. Wenn die Mikroorganismen in großen Mengen kultiviert werden, werden vorzugsweise flussige Medien verwendet.
Zu den Medien gibt man geeignete Kohlenstoffquellen, Stickstoffquellen, anorganische Stoffe und Mikronährstoffe, die von den Mikroorganismen anabolisiert werden können. Beispiele für die Kohlenstoffquellen sind Glucose, Lactose, Saccharose, Maltose, Dextrin, Stärke, Glycerin, Mannit, Sorbit, Fette und Öle (zum Beispiel Sojabohnenöl, Specköl und Hühneröl) sowie n-Paraffin. Beispiele für die Stickstoffquellen sind Fleischextrakt, Hefeextrakt, Sojabohnenpulver, Maisquellwasser, Pepton, Baumwollsamenöl, Restmelasse, Harnstoff und Ammoniumsalze (zum Beispiel Ammoniumsulfat und Ammoniumchlorid). Weiterhin werden zweckmäßigerweise Salze, die Natrium, Kalium, Calcium, Magnesium und dergleichen enthalten, Metallsalze von Eisen, Mangan, Zink, Cobalt, Nickel und dergleichen, Salze von Phosphorsäure, Borsäure und dergleichen, Salze organischer Säuren, wie Essigsäure, Propionsäure und Oxalsäure, verwendet. Außerdem können Aminosäuren (zum Beispiel Glutaminsäure, Asparaginsäure, Alanin, Lysin, Methionin und Prolin), Peptide (zum Beispiel Dipeptide und Tripeptide), Vitamine (zum Beispiel Vitamin B&sub1;, Vitamin B&sub2;, Vitamin B&sub6;, Nicotinsäure, Vitamin B&sub1;&sub2; und Vitamin C) sowie Nudeinsäuren (zum Beispiel Purin, Pyrimidin und Derivate davon) hinzugefügt werden.
Um den pH-Wert des Mediums einzustellen, können anorganische Säuren (Salzsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure und Borsäure), organische Säuren (zum Beispiel Essigsäure, Oxalsäure, Zitronensäure und Weinsäure), Alkalien (zum Beispiel Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid und Natriumcarbonat) oder Puffer (zum Beispiel Natriumdihydrogenphosphat und Dinatriumhydrogenphosphat) hinzugefügt werden. Zur Vermeidung von Schaumbildung können auch Fette und Öle (zum Beispiel Sojabohnenöl, Specköl und Hühneröl) oder Tenside in geeigneten Mengen hinzugefügt werden.
Im Falle einer flüssigen Kultur haben die Medien zum Beispiel vorzugsweise einen ungefähr neutralen pH-Wert, insbesondere von etwa 5 bis 8. Die Kultivierungstemperatur beträgt vorzugsweise etwa 20 bis 37ºC. Die Kultivierungszeit beträgt vorzugsweise etwa 6 bis 72 Stunden und insbesondere etwa 12 bis 48 Stunden.
Durch die Verwendung der Oxidasen der vorliegenden Erfindung werden zum Beispiel eine oder mehrere der Positionen 14 und 15 sowie der 3"-O-Methylgruppe der Ausgangsverbindung (vgl. Formel [14]) in Hydroxygruppen umgewandelt.
Die Oxidasen werden als die Enzyme selbst oder als Enzymlösungen verwendet.
Als Enzymlösungen können die oben erwähnten Kulturlösungen als solche verwendet werden, oder es können Lösungen verwendet werden, die rohe Enzyme enthalten, die durch Zentrifugieren der Kulturlösungen und anschließendes Hinzufügen von Aceton zu den Überständen sowie anschließende Pulverisierung erhalten werden. In der vorliegenden Erfindung werden vorzugsweise die Kulturlösungen verwendet.
Weiterhin können die Enzymlösungen Coenzyme, wie Nicotinamid- Adenin-Dinucleotid (NAD&spplus;), dessen Phosphat (NADP&spplus;) und reduzierte Produkte davon (NADH und NADPH), Dehydrogenasen, wie D-Glucose-6- phosphat- und Glycerin-3-phosphat-Dehydrogenase, oder anorganische Salze, wie Erdalkalimetallhalogenide (zum Beispiel Magnesiumchlorid) enthalten.
Wenn die Ausgangsverbindungen für die Reaktion zu den Enzymlösungen gegeben werden, beträgt die Konzentration der Ausgangsverbindungen vorzugsweise etwa 1 µg/ml bis 20 mg/ml und noch bevorzugter etwa 2 µg/ml bis 10 mg/ml. Die Reaktionstemperatur beträgt vorzugsweise etwa 18 bis 42ºC und noch bevorzugter etwa 24 bis 37ºC. Die Reaktionszeit beträgt vorzugsweise etwa 1 Minute bis 50 Stunden und noch bevorzugter etwa 5 Minuten bis 30 Stunden.
Verfahren zur Gewinnung der gewünschten 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate oder der Salze davon aus den Reaktionslösungen werden unten beschrieben.
Diese Verbindungen sind basisch und fettlöslich, so daß allgemeine Verfahren der Naturstoffchemie verwendet werden können, die sich diese Eigenschaften zu Nutze machen.
Beispiele für solche Verfahren sind (1) ein Verfahren, bei dem eine Filterhilfe zu der Enzymreaktionslösung gegeben wird, das Gemisch filtriert oder zentrifugiert wird, um feste Stoffe zu entfernen, der pH-Wert der resultierenden Lösung auf etwa 5 bis 11, vorzugsweise etwa 6 bis 10, eingestellt wird, anschließend ein organisches Lösungsmittel hinzugefügt wird, das nicht mit Wasser mischbar ist (zum Beispiel Chloroform, Ethylacetat, Methylisobutylketon oder Isobutanol), um die gewünschte Verbindung zu extrahieren, der Extrakt mit Wasser, das einen anorganischen Stoff enthält (zum Beispiel wäßriges Natriumhydrogencarbonat oder wäßriges Natriumcarbonat), und Wasser gewaschen wird und die organische Lösungsmittelschicht konzentriert wird, wobei man ein Rohprodukt erhält, das die gewünschte Verbindung enthält, sowie (2) ein Verfahren zur Gewinnung eines Rohprodukts der gewünschten Verbindung aus der Enzymreaktionslösung oder dem Filtrat, das durch Filtration wie oben beschrieben erhalten wird, unter Verwendung eines Trägers. Um ein aktives Material von dem Träger zu eluieren, mit dem das aktive Material in der Enzymreaktionslösung absorbiert wurde, wird ein geeignetes Lösungsmittel verwendet, zum Beispiel ein gemischtes Lösungsmittel aus einem organischen Lösungsmittel, wie Aceton, Acetonitril oder Methanol, und Wasser oder Wasser, das eine geeignete Menge einer Säure (zum Beispiel Chlorwasserstoffsäure oder Schwefelsäure) enthält. Die eluierten Fraktionen werden nach der Entfernung des organischen Lösungsmittels dem oben beschriebenen Lösungsmittelextraktionsverfahren unterzogen, wobei man das gewünschte Produkt erhält. Konzentrieren des Extrakts ergibt das Rohmaterial. In der vorliegenden Erfindung wird das Verfahren der Gewinnung des Rohmaterials der gewünschten Verbindung aus der Enzymreaktionslösung unter Verwendung des Trägers bevorzugt.
Als Träger werden häufig verwendete anorganische oder organische Träger eingesetzt. Beispiele dafür sind Aktivkohle, Absorptionsharze, Ionenaustauscherharze, Aluminiumoxid, Cellulose, Ionenaustauschercellulose, Sephadex und Ionenaustauscher-Sephadex. Von diesen werden die Absorptionsharze bevorzugt. Insbesondere werden vorzugsweise Absorptionsharze wie Diaion HP-20 und SP-207 (Mitsubishi Kasei Corp.) und Amberlite XAD-I und II (Rohm & Haas Inc., USA) verwendet.
Eine weitere Reinigung dieses Rohmaterials kann das reine 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder das Salz davon liefern.
Zum Beispiel werden mit Vorteil verschiedene Arten von Chromatographie verwendet. Wenn zum Beispiel eine Säulenchromatographie durchgeführt wird, werden häufig verwendete anorganische oder organische Träger als Träger verwendet Beispiele für solche Träger sind Aktivkohle, Absorptionsharze, Aluminiumoxid, Cellulose, kristalline Cellulose, Ionenaustauschercellulose, Sephadex [Sephadex LH-20 (Pharmacia, Schweden)], Ionenaustauscher-Sephadex und Silicagel. Das Rohmaterial wird gewöhnlich durch Säulenchromatographie gereinigt. Um das aktive Material von einer Säule zu eluieren, wird ein geeignetes organisches Lösungsmittel, wie n-Hexan, Chloroform, Toluol, Ethylacetat, Dichlorethan, Aceton oder Methanol allein oder in Kombination als gemischtes Lösungsmittel verwendet.
Fraktionierende HPLC (high performance liquid chromatography) kann ebenfalls verwendet werden, um das Rohmaterial weiter zu reinigen und die reine gewünschte Verbindung zu erhalten. Als Träger werden mit Vorteil Octadecylsilan- (im folgenden als ODS bezeichnet) oder Silicagelträger verwendet. Im Falle von ODS wird zum Beispiel mit Vorteil ein gemischtes Lösungsmittel aus Methanol oder Acetonitril und einer salzhaltigen wäßrigen Lösung als mobile Phase verwendet. Das Eluat, das die gewünschte Verbindung enthält, wird mit einem geeigneten organischen Lösungsmittel extrahiert, das nicht mit Wasser mischbar ist, der Extrakt wird konzentriert, und der Rückstand wird aus dem oben genannten geeigneten organischen Lösungsmittel pulverisiert, wobei man die reine Verbindung erhält.
Das 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, der vorliegenden Erfindung weist eine Aminogruppe auf. Das Derivat kann daher nach an sich bekannten Verfahren unter Bildung eines physiologisch annehmbaren Salzes mit einer Säure umgesetzt werden. Beispiele für die Säuren sind organische Säuren (zum Beispiel Ethylbemsteinsäure, Lactobionsäure, Oxalsäure, Bernsteinsäure, Zitronensäure, Milchsäure, Essigsäure und Methansulfonsäure) und anorganische Säuren (zum Beispiel Schwefelsäure, Salzsäure und Phosphorsäure).
Das oben genannte 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, wird einer Alkylierungs-, Alkenylierungs- oder Alkinyherungsreaktion (Reaktion unter Bildung eines quartären Ammoniumsalzes) unterzogen, wodurch ein quartäres Salz hergestellt werden kann.
Beispiele für Reagenzien, die bei der Reaktion verwendet werden, sind Halogenide, Ester und Trioxoniumsalze entsprechender Alkyle, Alkenyle oder Alkinyle.
Beispiele für das Halogen in den Halogeniden sind Chlor, Brom und Iod. Iod wird gegenüber den anderen bevorzugt.
Beispiele für die Ester sind Sulfate.
Konkrete Beispiele für die Trioxoniumsalze sind Trimethyloxoniumfluoroborat und Triethyloxoniumfluoroborat.
Das Reagenz für die Reaktion wird in einer Menge von etwa 1 bis 100 Stoffmengenäquivalenten, vorzugsweise etwa 2 bis 25 Stoffmengenäquivalenten, pro Mol der Ausgangsverbindung verwendet.
Beispiele für die bei der Reaktion verwendeten Lösungsmittel sind halogenierte Kohlenwasserstoffe (wie Chloroform und Dichlormethan), Ether (wie Ethylether und Tetrahydrofuran), Ester (wie Ethylacetat) und Alkohole (wie Methanol und Ethanol).
Die Reaktion wird unter Eiskühlung (etwa 0ºC) oder bis zum Siedepunkt des Lösungsmittels (etwa 100ºC) , vorzugsweise bei Raumtemperatur (etwa 15 bis 25ºC) bis etwa 80ºC, durchgeführt.
Die Reaktionszeit beträgt etwa 2 Stunden bis 1 Woche.
Die Reaktion unter Bildung eines quartären Ammoniumsalzes kann vor oder nach der oben erwähnten Acylierung durchgeführt werden. Insbesondere wird die Reaktion unter Bildung eines quartären Ammoniumsalzes vorzugsweise nach der Acylierung durchgeführt.
Gegebenenfalls nach Waschen mit wäßrigem Natriumcarbonat oder wäßrigem Natriumchlorid, Trocknen oder Konzentrieren wird ein Ether zu der Reaktionslösung gegeben, so daß sich ein Niederschlag bildet, der durch Filtration abgetrennt wird, um ein Produkt zu isolieren, wobei man ein Salz eines Anions von dem bei der Reaktion zur Bildung eines quartären Ammoniumsalzes verwendeten Reagenz erhält.
Wenn die Reaktionslösung zum Beispiel einer Chromatographie auf Silicagel oder einem Ionenaustauscherharz unterworfen wird, wobei man ein System verwendet, bei dem konzentriertes wäßriges Ammoniak zu Chloroform/Methanol als Entwicklungslösungsmittel hinzugefügt wird, kann eine Verbindung mit Hydroxy (OH&supmin;) als Anion erhalten werden.
Das Anion der so erhaltenen Verbindung kann nach bekannten Verfahren gegen ein anderes Anion ausgetauscht werden.
Zu den Anionen in den quartären Ammoniumsalzen gehören Halogenidionen (wie ein Iodidion, ein Bromidion und ein Chloridion), ein Sulfation, ein Phosphation, ein Nitration, ein Methansulfation, ein p-Tolylsulfation, ein Benzolsulfation, ein Hydroxidion und organische Carboxylationen (wie ein Oxalation, ein Maleation, ein Fumaration, ein Succination, ein Citration, ein Lactation, ein Trifluoracetation, ein Lactobionation, ein Acetation, ein Propionation und ein Ethylsuccination).
Die 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate oder die Salze davon, die Ausgangsverbindungen der vorliegenden Erfindung, können nach bekannten Verfahren erhalten werden, zum Beispiel Verfahren, die in den oben genannten Literaturstellen beschrieben sind (EP-A- 213617, EP-A-215355 und J. Med. Chem., 30, 1941-1943 (1987)).
Die 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate, die wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweisen, oder die Salze davon, die gewünschten Verbindungen der vorliegenden Erfindung, zeigen eine starke Wirkung im Sinne einer Förderung der Magen-Darm-Funktion, wie es in den unten beschriebenen experimentellen Beispielen gezeigt ist.
In bezug auf das Lactobionat der Verbindung (8) der vorliegenden Erfindung wurde bei einem Test auf akute Toxizität mit Mäusen auch bei einer Dosis von 100 mg/kg (intravenöse Injektion) kein Todesfall beobachtet.
Wie oben beschrieben, haben die 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate, die wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweisen, oder die Salze davon, die gewünschten Verbindungen der vorliegenden Erfindung, eine ausgezeichnete Wirkung im Sinne einer Förderung der Magen-Darm-Funktion und besitzen eine geringe Toxizität. Sie eignen sich daher als Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion zum Zwecke der Behandlung von Unregelmäßigkeiten der Verdauungsfunktion (zum Beispiel Magenbeschwerden, Erbrechen und Anorexie) bei Säugern (zum Beispiel Mäusen, Ratten, Hunden, Rindern, Schweinen und Menschen).
Die Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion, die die 6,9- Hemiacetal-Erythromycinderivate, die wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweisen, oder die Salze davon, die gewünschten Verbindungen der vorliegenden Erfindung, als Wirkstoffe enthalten, erhält man durch Mischen der Verbindungen mit pharmazeutisch annehmbaren Trägern. Die Mittel können in einer Zubereitung bereitgestellt werden, die für pharmazeutische Medikamente geeignet ist, zum Beispiel in Form von Injektionen, Tropfen, Lösungen und Suspensionen als parenterale Mittel sowie in Form von Kapseln, Tabletten, Sirups, Pulvern und Granulaten als orale Mittel.
Wenn die parenteralen Mittel, wie Injektionen, hergestellt werden, können sie isotonische Mittel (zum Beispiel Glucose, Sorbit, Mannit und Natriumchlorid), Konservierungsstoffe (zum Beispiel Benzylalkohol, Chlorbutanol und Methyl-p-hydroxybenzoat), Antikoagulantien (zum Beispiel Dextransulfat und Heparin), Lösungsvermittler (zum Beispiel Lactobionsäureverbindungen, Cyclodextrine und Tween) sowie Stabilisatoren (zum Beispiel Polyethylenglycol und Polymilchsäure) enthalten. Zur Verabreichung der Mittel werden diese Antibiotika in häufig verwendeten wäßrigen Verdünnungsmitteln gelöst und als Lösungen verwendet. Zu den Verdünnungsmitteln gehören wäßrige Glucose, physiologische Kochsalzlösung, Ringer-Lösung und Lösungen zur künstlichen Ernährung. Weiterhin können die oralen Mittel Additive enthalten, wie Arzneimittelhilfsstoffe, Bindemittel, Desintegratoren, Gleitmittel, Farbstoffe, Aromen und Stabilisatoren.
Diese Präparate werden Säugern oral oder parenteral verabreicht. Wenn die Präparate zum Beispiel Menschen verabreicht werden, variiert die Dosis je nach der Art und dem Ausmaß der betreffenden Krankheit, dem Alter der Patienten und dergleichen. Gewöhnlich erhält ein erwachsener Patient parenteral etwa 0,1 bis 20 mg pro Tag, vorzugsweise etwa 0,2 bis 5 mg, und oral etwa 1 bis 100 mg pro Tag, vorzugsweise etwa 2 bis 50 mg.
Die Strukturformeln der in den folgenden Beispielen verwendeten Ausgangsverbindungen (der Verbindungen (1) und (2)) und der gewünschten Verbindungen (der Verbindungen (3) bis (9)) sind in der oben gezeigten Tabelle 1 zusammengefaßt.
Diese Verbindungen wurden einer HPLC unterworfen, wobei die in Tabelle 2 gezeigten Lösungsmittelsysteme als mobile Phasen verwendet wurden. Die jeweiligen Retentionszeiten sind in Tabelle 2 gezeigt. Tabelle 2 Retentionszeit (Minuten) Lösungsmittel system Verbindung Nr. gewünschte Verbindung Ausgangsverbindung Bedingungen: Säule; ODS (YMC-Pack A 312 S-5, Yamamura Kagaku Kenkyusho) mobile Phase; 28%, 32% bzw. 37% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4,0) Nachweis; UV 214 nm
Die vorliegende Erfindung wird anhand der folgenden Beispiele und experimentellen Beispiele näher beschrieben.
Prozentangaben bei Medien sind % (w/v), und Prozentangaben bei der Säulenchromatographie sind Vol.-%.
Die in den Beispielen zu findenden Abkürzungen in bezug auf das ¹H-NMR-Spektrum werden wie folgt erklärt:
s: Singulett, d: Dublett, t: Triplett, q: Quartett, dd: Doppeldublett, m: Multiplett, br: breit, J: Kopplungskonstante
Die in den Beispielen zu findenden Abkürzungen in bezug auf das ¹³C-NMR-Spektrum werden wie folgt erklärt:
s: quartäres Kohlenstoffatom, d: CH, t: CH&sub2;, q: CH&sub3;

Beispiel 1

Ein Hundeleberhomogenisat (10%, 0,01 M Natriumkaliumphosphatpuffer, pH 7,4) wurde bei 0ºC zentrifugiert (10 000 U/min, 10 Minuten), und der Überstand (400 ml) wurde in 200-ml-Portionen auf Erlenmeyer-Kolben (1,0 Liter) verteilt. Unter Eiskühlung wurden Nicotinamid (1 M wäßrige Lösung, 1,0 ml), Magnesiumchlorid (1 M wäßrige Lösung, 0,50 ml), Glucose-6-phosphat (170 mg), NADP&spplus; (23 mg) und Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase (100 Einheiten/ml, 100 µl) nacheinander zu jedem der Kolben gegeben und gemischt. Dann wurde eine wäßrige Lösung (20 mg/ml) des Lactobionats der Verbindung (2) (Stoffmengenverhältnis 1:1,1, 2,5 ml) zu jedem der Kolben gegeben, die mit Urethanstopfen verschlossen wurden; anschließend wurde 2,5 Stunden unter Schütteln bei 37ºC gemischt. Die Reaktionsgemische wurden kombiniert und auf pH 5,4 eingestellt; danach wurde mit einem Ethylacetat/Hexan-Gemisch (2:1, 400 ml) gemischt. Dann wurde eine wäßrige Schicht durch Zentrifugation (10 000 U/min, 10 Minuten) von einer organischen Schicht und einem Niederschlag getrennt. Die resultierende wäßrige Schicht (400 ml, pH 4,4) wurde auf pH 8,1 bis 8,6 eingestellt und dreimal mit Ethylacetat (200 ml) extrahiert. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit Wasser (100 ml) und gesättigter Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein öliges Produkt erhielt (83 mg). Die zurückgebliebene wäßrige Schicht (400 ml) und die Schicht der Waschlösung (100 ml) wurden kombiniert, und NaCl (50 g) wurde hinzugefügt, so daß der pH-Wert auf 8,1 bis 8,6 eingestellt wurde; anschließend wurde mit Ethylacetat (300 ml) extrahiert. Die resultierende Ethylacetatschicht wurde mit gesättigter Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen und anschließend mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein öliges Produkt erhielt (29 mg).
Die so erhaltenen rohen Extrakte wurden kombiniert und in Methanol (1,3 ml) gelöst. Die Lösung wurde einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile phase: 28 Vol.-% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer; pH 4; Fließgeschwindigkeit: 10 ml/Minute], und es wurden jeweils Fraktionen mit einer Elutionskapazität von 200 bis 240 ml (Fraktionen, die die Verbindung (7) enthielten) sowie Fraktionen mit einer Elutionskapazität von 365 bis 480 ml (Fraktionen, die die Verbindung (8) enthielten) aufgefangen. Jede der resultierenden Lösungen wurde auf einen pH von 7,4 eingestellt, danach wurde unter reduziertem Druck auf etwa 10 ml konzentriert.
Die konzentrierte Lösung der Fraktionen, die die Verbindung (7) enthielten, wurde dreimal mit Ethylacetat (8 ml) extrahiert, während sie in Gegenwart von NaCl (2,0 g) auf einen pH-Wert von 8,1 bis 8,6 eingestellt wurde. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit gesättigter Kochsalzlösung (6 ml) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein Pulver der Verbindung (7) erhielt (2,8 mg).
Nach dem Einstellen des pH-Werts auf 4,7 wurde die konzentrierte Lösung der Fraktionen, die die Verbindung (8) enthielten, mit einem Ethylacetat/Hexan-Gemisch (2:1, 8 ml) gewaschen und dann dreimal mit Ethylacetat (8 ml) extrahiert, während sie in Gegenwart von NaCl (2,0 g) auf einen pH-Wert von 8,1 bis 8,6 eingestellt wurde. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit halbgesättigter Kochsalzlösung (6 ml) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein Pulver der Verbindung (8) erhielt (4,7 mg).
Die physicochemischen Eigenschaften der Verbindungen (7) und (8) waren wie folgt:

Verbindung (7)

(1) Molekulargewicht: m/z 746 (MH&spplus;), 588 (MH-Cladinose) (anhand des FAB-Massenspektrums)
(2) Molekülformel: C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub7;NO&sub1;&sub3;
(3) UV-Spektrum: in Methanol
Maximum bei 208 nm
(4) Infrarot-Absorptionsspektrum (IR-Spektrum): in KBR [Fig. 1] Die Hauptabsorptionspeaks sind unten gezeigt (Wellenzahl, cm&supmin;¹) :
3430, 2970, 2930, 1725, 1630, 1455, 1375, 1200, 1170, 1055, 1010
(5) ¹H-NMR-Spectrum: 300 MHz, in CDCl&sub3;, δ ppm [Fig. 2]
1.06(3H,d,J=7.1Hz), 1.10(3H,d,J=7.3Hz),
1.11(3H,s), 1.14(3H,d,J=7.4Hz),
1.23(3H,d,J=6.1Hz), 1.26(3H,br), 1.27(3H,5),
1.33(3H,d,J=6.2Hz), 1.35(3H,s), 1.58(3H,s),
1.62(2H,m), 1.91(1H,dm,J=7.5Hz),
2.00(1H,d,J=15.6Hz), 2.11(1H,brd,J=9.9Hz),
2.16(1H,m), 2.25(3H,brs), 2.42(1H,d,J=15.3Hz),
2.60(1H,brt,J=9.0Hz), 2.65(1H,d,J=15.7Hz),
2.71(1H,dd,J=7.4, 2.5Hz), 2.83(1H,qunit,J=7.1Hz)
3.05(1H,t,J=9.6Hz), 3.22(1H,brt,J=8.3Hz),
3.36(3H,s), 3.52(1H,m), 3.53(1H,m)
3.55(1H,d,J=7.4Hz), 3.68(1H,dt,J=11.6, 4.5Hz),
3.91(1H,d,J=7.4Hz), 4.12(2H,m),
4.44(1H,d,J=7.3Hz), 5.01(1H,dd,J=9.9, 3.2Hz),
5.06(1H,d,J=4.7Hz)

Verbindung (8)

(1) Molekulargewicht: m/z 746 (MH&spplus;), 588 (MH-Cladinose) (anhand des FAB-Massenspektrums)
(2) Molekülformel: C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub7;NO&sub1;&sub3;
(3) UV-Spektrum: in MeOH
Maximum bei 208 nm
(4) IR-Spektrum: in KBr-Preßling [Fig. 3]
Die Hauptabsorptionspeaks sind unten gezeigt (Wellenzahl, cm&supmin;¹) :
3430, 2970, 2930, 1730, 1635, 1455, 1375, 1170, 1055, 1010
(5) ¹³C-NMR-Spektrum: 75 MHz, in CDCl&sub3;, δ ppm [Fig. 4] 177.5(s), 151.2(s), 103.1(d), 102.0(s), 94.6(d), 85.8(s), 80.1(d), 78.1(d), 77.2(d), 75.8(d), 73.0(s), 70.3(d), 69.9(d), 69.0(d), 66.4(d), 65.8(d), 65.2(d), 49.6(q), 47.7(t), 44.6(d), 43.5(d), 42.6(t), 36.3(q), 34.6(t), 30.4(d), 29.7(t), 26.2(q), 21.6(q), 21.3(q), 20.0(q), 18.2(q), 16.6(q), 15.2(q), 14.4(q), 13.3(q), 12.0(q), 8.6(q)
(6) ¹H-NMR-Spektrum: 300 MHz, in CDCl&sub3;, δ ppm
1.06(3H,d,J=7.0Hz), 1.09(3H,d,J=7.4Hz),
1.10(3H,d,J=6.1Hz), 1.14(3H,d,J=7.5Hz),
1.21(3H,s), 1.22(3H,d,J=7.0Hz),
1.26(3H,brt,J=7.5Hz), 1.27(3H,s),
1.33(3H,d,J=7.0Hz), 1.34(3H,s), 1.39(1H,m),
1.58(3H,s), 1.61(1H,dd,J=15.3, 4.9Hz),
1.65(1H,m), 1.86(1H,td,J=7.2, 2.2Hz),
1.96(1H,d,J=15.5Hz), 2.12(1H,d,J=9.6Hz),
2.26(3H,brs), 2.41(d,J=15.3Hz),
2.62(1H,m), 2.64(1H,d,J=15.7Hz),
2.69(1H,dd,J=7.5, 3.0Hz), 2.78(1H,qunit,J=7.3Hz),
3.06(1H,t,J=9.3Hz), 3.22(1H,brt,J=8.5Hz),
3.35(3H,s) ,3.42(1H,d,J=8.2Hz), 3.54(1H,m),
3.88(1H,d,J=7.7Hz), 4.10(3H,m),
4.43(1H,d,J=7.3Hz), 4.75(1H,d,J=9.1Hz),
5.09(1H,d,J=4.7Hz)

Beispiel 2

Ein Hundeleberhomogenisat (10%, 0,01 M Natriumkaliumphosphatpuffer, pH 7,4) wurde bei 0ºC zentrifugiert (10 000 U/min, 10 Minuten), und der Überstand (1000 ml) wurde in 333-ml-Portionen auf Erlenmeyer-Kolben (1,0 Liter) verteilt. Unter Eiskühlung wurden Nicotinamid (1 M wäßrige Lösung, 1,5 ml), Magnesiumchlorid (1 M wäßrige Lösung, 0,75 ml), Glucose-6-phosphat (255 mg), NADP&spplus; (34 mg) und Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase (100 Einheiten/ml, 150 µl) nacheinander zu jedem der Kolben gegeben und gemischt. Dann wurde eine wäßrige Lösung (10 mg/ml) des Lactobionats der Verbindung (1) (Stoffmengenverhältnis 1:1,1, 7,5 ml) zu jedem der Kolben gegeben, die mit Urethanstopfen verschlossen wurden; anschließend wurde 2,0 Stunden unter Schütteln bei 37ºC gemischt. Die Reaktionsgemische wurden kombiniert und auf pH 5,4 eingestellt; danach wurde mit einem Ethylacetat/Hexan-Gemisch (2:1, 900 ml) gemischt. Dann wurde eine wäßrige Schicht durch Zentrifugation (10 000 U/min, 10 Minuten) von einer organischen Schicht und einem Niederschlag getrennt. NaCl (100 g) wurde zu der resultierenden wäßrigen Schicht (1,0 Liter, pH 4,4) gegeben und aufgelöst. Die Lösung wurde auf pH 8,1 bis 8,6 eingestellt und dann dreimal mit Ethylacetat (500 ml) extrahiert. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit halbgesättigter Kochsalzlösung (500 ml) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein öliges Produkt erhielt (204 mg).
Die so erhaltenen rohen Extrakte wurden kombiniert und in Methanol (1,0 ml) gelöst. Die Lösung wurde einer präparativen HPLC ähnlich wie in Beispiel 1 unterzogen, und es wurden jeweils Fraktionen mit einer Elutionskapazität von 220 bis 280 ml (Fraktionen, die die Verbindung (3) enthielten) sowie Fraktionen mit einer Elutionskapazität von 430 bis 620 ml (Fraktionen, die die Verbindung (4) enthielten) aufgefangen. Jede der resultierenden Lösungen wurde auf einen pH von 7,4 eingestellt, danach wurde unter reduziertem Druck auf etwa 10 ml konzentriert. Jede dieser konzentrierten Lösungen wurde dreimal mit Ethylacetat (8 ml) extrahiert, während sie in Gegenwart von NaCl (2,0 g) auf einen pH-Wert von 8,1 bis 8,6 eingestellt wurde. Für jede der Lösungen wurden die resultierenden Ethylacetatschichten kombiniert und mit halbgesättigter Kochsalzlösung (6 ml) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurden die Lösungen konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man Pulver der Verbindung (3) und der Verbindung (4) erhielt (5,8 mg bzw. 6,2 mg).
Die physicochemischen Eigenschaften der Verbindungen (3) und (4) waren wie folgt:

Verbindung (3)

(1) Molekulargewicht: m/z 760 (MH&spplus;), 602 (MH-Cladinose) (anhand des FAB-Massenspektrums)
(2) Molekülformel: C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub9;NO&sub1;&sub3;
(3) UV-Spektrum: in Methanol
Maximum bei 210 nm (&epsi; 7600)
(4) IR-Spektrum: in KBR-Preßling [Fig. 5]
Die Hauptabsorptionspeaks sind unten gezeigt (Wellenzahl, cm&supmin;¹) :
3430, 2970, 2930, 1725, 1635, 1455, 1375, 1195, 1165, 1055, 1010
(5) ¹³C-NMR-Spectrum: 75 MHz, in CDCl&sub3;, δ ppm [Fig. 6]
178.7(s), 151.8(s), 103.0(d), 101.6(s), 94.5(d), 85.6(s), 79.8(d), 78.1(d), 75.9(d), 74.9(s), 74.6(d), 73.1(5), 70.3(d), 70.2(d), 68.9(d), 65.8(d), 63.1(d), 59.2(t), 52.8(d), 49.5(q), 44.3(d), 43.7(d), 42.6(t), 34.6(t), 33.1(t), 31.3(t), 30.9(q), 30.5(d), 26.5(q), 21.6(q), 21.4(q), 21.0(q), 20.5(q), 18.1(q), 16.4(q), 14.7(q), 12.6(q), 11.9(q), 8.8(q)

Verbindung (4)

(1) Molekulargewicht: m/z 760 (MH&spplus;), 602 (MH-Cladinose) (anhand des FAB-Massenspektrums)
(2) Molekülformel: C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub9;NO&sub1;&sub3;
(3) UV-Spektrum: in Methanol
Maximum bei 210 nm (&epsi; 8000)
(4) IR-Spektrum: in KBR-Preßling [Fig. 7]
Die Hauptabsorptionspeaks sind unten gezeigt (Wellenzahl, cm&supmin;¹) :
3435, 2970, 2935, 1730, 1635, 1460, 1375, 1170, 1055, 1010
(5) ¹³C-NMR-Spektrum: 75 MHz, in CDCL&sub3;, δ ppm (Fig. 8]
177.5(s), 151.2(s), 103.1(d), 101.9(s), 94.6(d), 85.8(s), 80.1(d), 78.1(d), 77.6(s), 76.2(d), 75.8(d), 73.1(s), 70.2(d), 69.8(d), 68.9(d), 66.4(d), 65.8(d), 63.1(d), 52.8(d), 49.5(q), 44.6(d), 43.5(d), 42.6(t), 34.6(t), 33.1(t), 30.9(q), 30.4(d), 26.2(q), 21.6(q), 21.4(q), 21.0(q), 20.5(q), 20.0(q), 18.2(q), 16.7(q), 15.3(q), 13.2(q), 12.0(q), 8.6(q)

Beispiel 3

Vierzig Milliliter eines Mediums, das 1% Glucose, 1% Trypton und 0,6% Hefeextrakt enthielt (pH 7,0), wurde in einen 200-ml-Erlenmeyer-Kolben gegeben und mit dem Stamm Saccharothrix mutabilis subsp. capreolus (Nocardia capreola) IFO 12847 beimpft, der in einem Hefeextrakt-Malzextrakt-Agar-Schrägmedium kultiviert worden war, und die Kultur wurde 24 Stunden bei 28ºC auf einer Umlaufschüttelmaschine durchgeführt. Dann wurden 5-ml-Portionen der resultierenden Kulturlösung jeweils in Reagenzgläser gegossen und zur Lagerung bei -80ºC eingefroren. Die Portionen der Kulturlösung wurden bei Raumtemperatur aufgetaut, und 1-ml-Portionen davon wurden jeweils in 40-ml-Portionen des oben genannten Mediums in 200-ml-Erlenmeyer-Kolben übergeführt; anschließend wurde 24 Stunden bei 28ºC auf einer Umlaufschüttelmaschine kultiviert, um Impfkulturlösungen zu erhalten. Dann wurden l-ml- Portionen der resultierenden Impfkulturlösungen jeweils in das oben genannte Medium in 200-ml-Erlenmeyer-Kolben übergeführt und 30 Stunden bei 28ºC auf einer Umlauf schüttelmaschine kultiviert. Nach 24 Stunden des Kultivierens wurde 1 ml einer wäßrigen Lösung des Lactobionats der Verbindung (1) (6 mg/ml) zu jedem der Kolben hinzugefügt.

Beispiel 4

Die in Beispiel 3 erhaltene Kulturlösung (3 Liter) wurde 10 Minuten bei 4ºC und 8000 U/min zentrifugiert, und der Überstand (2,8 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt. Dann wurde der Überstand einer Chromatographie auf einer Diaion-HP-20- Säule (300 ml) unterzogen und mit einer 50%igen wäßrigen Lösung von Methanol (1,5 Liter) gewaschen; anschließend wurde mit 80% Methanol/0,005 N Salzsäure (900 ml) eluiert. Das Eluat wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt, und Methanol wurde durch Destillation entfernt. Die resultierende wäßrige Schicht wurde auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und dreimal mit Ethylacetat (100 ml) extrahiert. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit Wasser (100 ml) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein rohes Pulver erhielt (203 mg). Das resultierende rohe Pulver (200 mg) wurde einer Chromatographie auf Silicagel (10 ml) unterzogen, und mit Chloroform/Methanol [98:2 bis 95:5 (70 ml)] eluierte Fraktionen wurden aufgefangen. Die resultierende Lösung wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man 111 mg eines Pulvers erhielt, das die Verbindung (4) enthielt. Weiterhin wurden mit Chloroform/Methanol [95:5 (50 ml)] eluierte Fraktionen aufgefangen. Die resultierende Lösung wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man 45 mg eines Pulvers erhielt, das die Verbindung (3) enthielt. Weiterhin wurden 110 mg des Pulvers, das die Verbindung (4) enthielt, einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile Phase: 55% Methanol/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit: 10 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindung (4) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend unter reduziertem Druck auf etwa 20 ml konzentriert. Die Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert, und die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (4) erhielt (43 mg).
Dann wurden 45 mg des Pulvers, das die Verbindung (3) enthielt, einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-PACK, D-ODS-5; mobile Phase: 28% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fleißgeschwindigkeit: 10 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindung (3) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend unter reduziertem Druck auf etwa 5 ml konzentriert. Die Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert, und die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (3) erhielt (413 mg).

Beispiel 5

Impfkulturlösungen des Stammes Amycolatopsis tolypophorus (Streptoinyces tolypophorus) IFO 13151 wurden nach dem Verfahren von Beispiel 3 hergestellt. Dann wurden 1-ml-Portionen davon in 40-ml-Portionen des in Beispiel 3 genannten Mediums in 200-ml- Erlenmeyer-Kolben übergeführt und 68 Stunden bei 28ºC auf einer Umlauf schüttelmaschine kultiviert. Nach 48 Stunden des Kultivierens wurde 1 ml einer wäßrigen Lösung des Lactobionats der Verbindung (1) (12 mg/ml) zu jedem der Kolben hinzugefügt.

Beispiel 6

Die in Beispiel 5 erhaltene Kulturlösung (3 Liter) wurde zentrifugiert, und der Überstand (2,9 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt. Dann wurde der Überstand einer Chromatographie auf einer Diaion-HP-20-Säule (300 ml) unterzogen und mit einer 50%igen wäßrigen Lösung von Methanol (1,5 Liter) gewaschen; anschließend wurde mit 80% Methanol/0,005 N Salzsäure (900 ml) eluiert. Das Eluat wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt, und Methanol wurde durch Destillation entfernt. Die resultierende wäßrige Schicht (100 ml) wurde auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und dreimal mit Ethylacetat (100 ml) extrahiert. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit Wasser (100 ml) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein rohes Pulver erhielt (415 mg). Das resultierende rohe Pulver (410 mg) wurde einer Chromatographie auf Silicagel (20 ml) unterzogen, und mit Chloroform/Methanol [98:2 (120 ml)] eluierte Fraktionen wurden aufgefangen. Die resultierende Lösung wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man 218 mg eines Pulvers erhielt, das die Verbindung (4) enthielt. Weiterhin wurde dieses Pulver (215 mg) einer praparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile Phase: 57% Methanol/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit 10 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindung (4) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend unter reduziertem Druck auf etwa 50 ml konzentriert. Die Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert, und die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (4) erhielt (102 mg).

Beispiel 7

Impfkulturlösungen des Stammes Dactylosporangiuzn variesporum (IFO 14104) wurden nach dem Verfahren von Beispiel 3 hergestellt. Dann wurden 1-ml-Portionen davon in 40-ml-Portionen des in Beispiel 3 genannten Mediums in 200-ml-Erlenmeyer-Kolben übergeführt und 24 Stunden bei 28ºC auf einer Umlaufschüttelmaschine kultiviert, um Impfkulturlösungen zu erhalten. Dann wurden 1-ml-Portionen der resultierenden Impfkulturlösungen jeweils in das oben genannte Medium in 200-ml-Erlenmeyer-Kolben übergeführt und 48 Stunden bei 28ºC auf einer Umlaufschüttelmaschine kultiviert. Nach 24 Stunden des Kultivierens wurde die Verbindung (1) (1 g/10 Liter der Kulturlösung) hinzugefügt.

Beispiel 8

Die in Beispiel 7 erhaltene Kulturlösung (3 Liter) wurde zentrifugiert, und der Überstand (9,0 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt. Dann wurde der Überstand einer Chromatographie auf einer Diaion-HP-20-Säule (900 ml) unterzogen und mit einer 50%igen wäßrigen Lösung von Methanol (4,5 Liter) gewaschen; anschließend wurde mit 80% Methanol/0,005 N Salzsäure (2,7 Liter) eluiert. Das Eluat wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt, und Methanol wurde durch Destillation entfernt. Die resultierende wäßrige Schicht (250 ml) wurde auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und dreimal mit Ethylacetat (250 ml) extrahiert. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit Wasser (250 ml) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein rohes Pulver erhielt (896 mg). Das resultierende rohe Pulver (895 mg) wurde einer Chromatographie auf Silicagel (40 ml) unterzogen, und mit Chloroform/Methanol [98:2 (240 ml)] eluierte Fraktionen wurden aufgefangen. Die resultierende Lösung wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man 468 mg eines Pulvers erhielt, das die Verbindungen (4), (5) und (6) enthielt. Weiterhin wurde dieses Pulver einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile Phase: 32% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit: 10 ml/Minute], und es wurden jeweils Fraktionen mit einer Elutionskapazität von 190 bis 240 ml (Fraktionen, die die Verbindung (5) enthielten), Fraktionen mit einer Elutionskapazität von 240 bis 285 ml (Fraktionen, die die Verbindung (4) enthielten) sowie Fraktionen mit einer Elutionskapazität von 300 bis 405 ml (Fraktionen, die die Verbindung (6) enthielten) aufgefangen. Jede der resultierenden Lösungen wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend unter reduziertem Druck auf etwa 10 ml konzentriert. Jede der Lösungen wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert, und die Ethylacetatschichten wurden konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (4) (42 mg) und ein gereinigtes Pulver der Verbindung (6) (49 mg) erhielt. Weiterhin wurden die Fraktionen mit Verbindung (5) erneut einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile Phase: 25% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit: 10 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindung (5) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend unter reduziertem Druck auf etwa 15 ml konzentriert. Die Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert, und die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (5) erhielt (46 mg).
Die physicochemischen Eigenschaften der Verbindungen (5) und (6) waren wie folgt:

Verbindung (5)

(1) Molekulargewicht: m/z 746 (MH&spplus;), 602 (MH-Cladinose) (anhand des FAB-Massenspektrums)
(2) Molekülformel: C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub7;NO&sub1;&sub3;
(3) UV-Spektrum: in MeOH
Maximum bei 207 nm (&epsi; 7500)
(4) IR-Spektrum: in KBR-Preßling [Fig. 9]
Die Hauptabsorptionspeaks sind unten gezeigt (Wellenzahl, cm&supmin;¹)
3460, 2970, 2940, 1730, 1640, 1460, 1380, 1330, 1270, 1170, 11101 1060, 1010, 940
(5) ¹³C-NMR-Spektrum: 75 MHz, in CDCl&sub3; [Fig. 10]
Die chemischen Verschiebungen sind unten gezeigt (δ ppm):
177.2(s), 15141(s)4 104.0(d), 102.3(5), 96.3(d), 86.1(s), 80.1(d), 77.2(d), 76.4(d), 75.9(d), 701(d), 69.8(d), 69.8(s), 69.4(d), 66.8(d), 66.3(d), 63.1(d), 53.0(d), 44.7(d), 43.5(d), 42.8(t), 40.2(t), 33.2(t), 30.6(q), 30.5(d), 25.9(q), 25.6(q), 21.4(q), 20.6(q), 20.4(q), 20.0(q), 18.1(q), 16.6(q), 15.5(q), 13.2(q), 12.0(q), 8.4(q)

Verbindung (6)

(1) Molekulargewicht: m/z 730 (MH&spplus;), 586 (MH-Cladinose) (anhand des FAB-Massenspektrums)
(2) Molekülformel: C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub7;NO&sub1;&sub2;
(3) UV-Spektrum: in MEOH
Maximum bei 206 nm (&epsi; 7400)
(4) IR-Spektrum: in KBR-Preßling [Fig. 11]
Die Hauptabsorptionspeaks sind unten gezeigt (Wellenzahl,
3490, 2970, 2940, 1730, 1640, 1460, 1380, 1330, 1270, 1200, 1160, 1110, 1060, 1020
(5) ¹³C-NMR-Spektrum: 75 MHz, in CDCl&sub3; [Fig. 12]
Die chemischen Verschiebungen sind unten gezeigt (δ ppm):
178.2(s), 151.5(s), 104.1(d), 101.9(5)1 96.6(d), 86.0(s), 80.4(d), 78.4(d), 77.2(d), 76.5(d), 75.4(s), 70.2(d), 70.2(d), 69.8(s), 69.4(d), 66.7(d), 63.1(d), 52.8(d), 45.0(d), 43.3(d), 42.8(t), 40.3(t), 33.2(t), 30.6(q), 30.5(d), 26.0(q), 25.6(q), 21.4(q), 21.0(t), 20.7(q), 20.5(q), 18.2(q), 16.1(q), 15.2(q), 13.6(q), 11.9(q), 10.9(q), 8.5(q)

Beispiel 9

Vierzig Milliliter eines Mediums, das 2% Glucose, 3% lösliche Stärke, 1% rohes Sojabohnenpulver, 0,3% Maisquellwasser, 0,5% Polypepton, 0,3% Natriumchlorid und 0,5% gefälltes Calciumcarbonat enthielt (pH 7,0), wurde in einen 200-ml-Erlenmeyer-Kolben gegeben und mit dem Stamm Dactylosporangium variesporum (IFO 14104) beimpft, der in einem Hefeextrakt-Malzextrakt-Agar- Schrägmedium kultiviert worden war, und die Kultur wurde 48 Stunden bei 28ºC auf einer Umlaufschüttelmaschine durchgeführt.
Dann wurden 5-ml-Portionen der resultierenden Kulturlösung jeweils in Reagenzgläser gegossen und zur Lagerung bei -80ºC eingefroren. Die Portionen der eingefrorenen Kulturlösung wurden bei Raumtemperatur aufgetaut, und 5 ml davon wurden in 506 ml eines Mediums übergeführt, das 1% Glucose, 1% Trypton und 0,6% Hefeextrakt enthielt (pH 7,0), in einen 3-Liter-Sakaguchi-Kolben gebracht und anschließend 24 Stunden bei 28ºC auf einem Schüttelapparat kultiviert, um eine Impfkulturlösung zu erhalten. In einem 200-Liter-Edelstahltank wurden 120 Liter eines Mediums hergestellt und sterilisiert, das 1% Glucose, 1% Trypton und 0,6% Hefeextrakt enthielt (pH 7,0). Das Medium wurde mit 1,5 Liter der oben genannten Impfkulturlösung beimpft und 24 Stunden bei 28ºC bei einer Luftzufuhr von 120 Liter/Minute und einer Rührdrehzahl von 120 U/min kultiviert, wobei man eine Tankkulturlösung erhielt. Nach 24 Stunden des Kultivierens wurde eine Lösung der Verbindung (1) in 80%igem Ethanol (12 mg/ml, 750 ml) hinzugefügt.

Beispiel 10

Eine Filterhilfe, Radiolite (3 kg, Showa Kagaku Kogyo), wurde zu der in Beispiel 9 erhaltenen Kulturlösung (112 Liter) gegeben, und es wurde filtriert. Das resultierende Filtrat (108 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt. Dann wurde das Filtrat einer Chromatographie auf einer Diaion-HP-20-Säule (10 Liter) unterzogen und mit einer 50%igen wäßrigen Lösung von Methanol (50 Liter) gewaschen; anschließend wurde mit 80% Methanol/0,005 N Salzsäure (30 Liter) eluiert. Das Eluat wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt, und Methanol wurde durch Destillation entfernt. Die resultierende wäßrige Schicht (7 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und zweimal mit Ethylacetat (5 Liter) extrahiert. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit Wasser (5 Liter) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein rohes Pulver erhielt (4,3 g). Das erhaltene rohe Pulver wurde einer Chromatographie auf Silicagel (200 ml) unterzogen, und mit Chloroform/Methanol [98:2 (400 ml)] eluierte Fraktionen sowie mit Chloroform/Methanol [98:2 (200 ml) und 95:5 (100 ml)] eluierte Fraktionen wurden jeweils aufgefangen. Die resultierenden Lösungen wurden konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man das Pulver I (972 mg) und das Pulver II (392 mg) erhielt, die die Verbindungen (4), (5) und (6) jeweils in unterschiedlichen Mengen enthielten. Das Pulver I wurde einer Chromatographie auf Sephadex LH-20 (500 ml, Pharmacia, Schweden) unterzogen, und mit Methanol eluierte Fraktionen wurden aufgefangen. Die resultierende Lösung wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein Pulver I-1 erhielt (506 mg), das die Verbindungen (4), (5) und (6) enthielt. Das Pulver I-1 (500 mg) und das Pulver II (392 mg) wurden jeweils einer präparativen HPLC unterzogen , und der Inhalt jeder eluierten Fraktion wurde durch analytische HPLC bestatigt. Fraktionen, die die Verbindung (4) enthielten, und Fraktionen, die die Verbindungen (5) und (6) enthielten, wurden jeweils aufgefangen und auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt; anschließend wurde konzentriert. Die konzentrierten Lösungen wurden bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschichten wurden konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (4) (104 mg) und ein Gemisch der Verbindungen (5) und (6) erhielt. Das Gemisch wurde erneut einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile Phase: 25% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit: 10 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindungen (5) und (6) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend konzentriert. Die konzentrierte Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man gereinigte Pulver der Verbindung (5) (129 mg) bzw. der Verbindung (6) (133 mg) erhielt.

Beispiel 11

Eine Tankkulturlösung des Stammes Saccharothrix mutabilis subsp. capreolus (Nocardia capreola) IFO 12847 wurde in ähnlicher Weise wie in Beispiel 9 hergestellt. Nach 24 Stunden des Kultivierens wurde eine Lösung der Verbindung (1) in 80%igem Ethanol (16 mg/ml, 750 ml) hinzugefügt, und die Kultur wurde 6 Stunden lang fortgesetzt. Eine Filterhilfe, Radiolite (4,0 kg, Showa Kagaku Kogyo), wurde zu der resultierenden Kulturlösung (120 Liter) gegeben, und es wurde filtriert. Das Filtrat (113 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt. Dann wurde das Filtrat einer Chromatographie auf einer Diaion-HP-20-Säule (10 Liter) unterzogen und mit einer 50%igen wäßrigen Lösung von Methanol (50 Liter) gewaschen; anschließend wurde mit 80% Methanol/0,005 N Salzsäure (30 Liter) eluiert. Das Eluat wurde auf einen pH-Wert von 7,5 eingestellt, und Methanol wurde durch Destillation entfernt. Die resultierende wäßrige Schicht (8 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und zweimal mit Ethylacetat (5 Liter) extrahiert. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit Wasser (5 Liter) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein rohes Pulver erhielt (6,1 g). Das erhaltene rohe Pulver wurde einer Chromatographie auf Silicagel (300 ml) unterzogenä und mit Chloroform/Methanol [98:2 (900 ml) und 95:5 (200 ml)] eluierte Fraktionen sowie mit Chloroform/Methanol [95:5 (600 ml)] eluierte Fraktionen wurden jeweils aufgefangen. Die resultierenden Lösungen wurden konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man das Pulver I (2,55 g) und das Pulver II (1,59 g) erhielt, die die Verbindungen (3), (4) und (5) jeweils in unterschiedlichen Mengen enthielten. Das Pulver I wurde einer Chromatographie auf Diaion HP-20 (100-200 mesh, 100 ml, Mitsubishi Kasei Corp.) unterzogen, und es wurde mit 80% Methanol/0,005 N Salzsäure eluiert. Das Eluat wurde auf einen pH-Wert von 7,5 eingestellt, und Methanol wurde durch Destillation entfernt. Die resultierende wäßrige Schicht wurde auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und mit Ethylacetat extrahiert. Die resultierende Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein Pulver I-1 erhielt (1,58 g), das die Verbindungen (3), (4) und (5) enthielt. Weiterhin wurde das Pulver II einer Chromatographie auf Diaion HP-20 (100-200 mesh, 50 ml) unterzogen und in ähnlicher Weise wie das Pulver I-1 behandelt, wobei man ein Pulver II-1 erhielt (722 mg), das die Verbindungen (3), (4) und (5) enthielt. Das Pulver I-1 (1,5 g) und das Pulver II-1 (720 mg) wurden jeweils einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pach, SH-363-15, S-15; mobile Phase: 30% und 26% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fleißgeschwindigkeit: 20 ml/Minute], und der Inhalt jeder eluierten Fraktion wurde durch analytische HPLC bestätigt. Fraktionen, die die Verbindungen (3), (4) und (5) enthielten, wurden jeweils aufgefangen und auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt; anschließend wurde konzentriert. Die konzentrierten Lösungen wurden bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschichten wurden konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein Pulver der Verbindung (3) (300 mg), ein Pulver der Verbindung (4) (534 mg) und ein Pulver der Verbindung (5) (323 mg) erhielt. Das Pulver der Verbindung (3) (300 mg) wurde erneut einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile Phase: 28% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit 10 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindung (3) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend konzentriert. Die konzentrierte Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (3) erhielt (105 mg). Weiterhin wurde das Pulver der Verbindung (4) (534 mg) erneut einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, SH-363-15, S-15; mobile Phase: 55% Methanol/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit 15 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindung (4) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend konzentriert. Die konzentrierte Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (4) erhielt (338 mg). Weiterhin wurde das Pulver der Verbindung (5) (323 mg) erneut einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, SH-363-15, S-15; mobile Phase: 54% Methanol/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit: 15 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindung (5) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend konzentriert. Die konzentrierte Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (5) erhielt (76 mg)

Beispiel 12

Eine Tankkulturlösung des Stammes Saccharothrixmutabilis subsp. capreolus (Nocardia capreola) IFO 12847 wurde in ähnlicher Weise wie in Beispiel 9 hergestellt. Nach 24 Stunden des Kultivierens wurde eine Lösung der Verbindung (2) in 80%igem Ethanol (16 mg/ml, 750 ml) hinzugefügt, und die Kultur wurde 6 Stunden lang fortgesetzt. Eine Filterhilfe, Radiolite (3,0 kg, Showa Kagaku Kogyo), wurde zu der resultierenden Kulturlösung (116 Liter) gegeben, und es wurde filtriert. Das Filtrat (110 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt. Dann wurde das Filtrat einer Chromatographie auf einer Diaion-HP-20-Säule (10 Liter) unterzogen und mit einer 50%igen wäßrigen Lösung von Methanol (50 Liter) gewaschen; anschließend wurde mit 80% Methanol/0,005 N Salzsäure (30 Liter) eluiert. Das Eluat wurde auf einen pH-Wert von 7,5 eingestellt, und Methanol wurde durch Destillation entfernt. Die resultierende wäßrige Schicht (10,5 Liter) wurde auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und zweimal mit Ethylacetat (5 Liter) extrahiert. Die resultierenden Ethylacetatschichten wurden kombiniert und mit Wasser (5 Liter) gewaschen; danach wurde mit Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein rohes Pulver erhielt (9,0 g) Das rohe Pulver wurde einer Chromatographie auf Silicagel (400 ml) unterzogen, und mit Chloroform/Methanol [98:2 (1,6 Liter)] eluierte Fraktionen sowie mit Chloroform/Methanol [95:5 (1,2 Liter)] eluierte Fraktionen wurden jeweils aufgefangen. Die resultierenden Lösungen wurden konzentriert und zur Trockne eingedampft, und man erhielt ein Pulver I (2,9 g), das die Verbindung (8) enthielt, und ein Pulver II (1,68 g), das die Verbindungen (7) und (9) enthielt. Das Pulver II wurde einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC- Pack, SH-363-15, S-15; mobile Phase: 26% Methanol/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit 20 ml/Minute], und der Inhalt jeder eluierten Fraktion wurde durch analytische HPLC bestätigt. Fraktionen, die die Verbindungen (7) und (9) enthielten, wurden jeweils aufgefangen, und die resultierenden Lösungen wurden auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend konzentriert. Die konzentrierten Lösungen wurden bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschichten wurden konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein Pulver der Verbindung (7) (80 mg) und ein Pulver der Verbindung (9) (783 mg) erhielt. Das Pulver der Verbindung (7) (80 mg) wurde erneut einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile Phase: 25% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit: 10 ml/Minute], und es wurden Fraktionen aufgefangen, die die Verbindung (7) enthielten. Die resultierende Lösung wurde auf einen pH-Wert von 7,4 eingestellt und anschließend konzentriert. Die konzentrierte Lösung wurde bei pH 8 mit Ethylacetat extrahiert. Die Ethylacetatschicht wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (7) erhielt (15 mg). Weiterhin wurde das Pulver der Verbindung (9) (783 mg) erneut einer präparativen HPLC unterzogen [Säule: ODS, YMC-Pack, SH-363-15, S-15; mobile Phase: 52% Methanol/0,02 M Phosphatpuffer (pH 4); Fließgeschwindigkeit: 15 ml/Minute] und in ähnlicher Weise mit dem obigen Verfahren behandelt, wobei man ein gereinigtes Pulver der Verbindung (9) erhielt (200 mg). Weiterhin wurde das Pulver (2,9 g), das die Verbindung (8) enthielt, in Methanol (10 ml) gelöst. Dann wurde Ether (10 ml) hinzugefügt, und die resultierende Lösung wurde konzentriert, wobei man Kristalle der Verbindung (8) erhielt (812 mg).
Die physicochemischen Eigenschaften der Verbindung (9) waren wie folgt:

Verbindung (9)

(1) Molekulargewicht: m/z 732 (MH&spplus;), 588 (MH-Cladinose) (anhand des FAB-Massenspektrums)
(2) Molekülformel: C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub5;NO&sub1;&sub3;
(3) UV-Spektrum: in MeOH
Maximum bei 208 nm (&epsi; 7100)
(4) IR-Spektrum: in KBr-Preßling [Fig. 13]
Die Hauptabsorptionspeaks sind unten gezeigt (Wellenzahl, cm&supmin;¹):
3455, 2975, 2935, 1735, 1635, 1455, 1375, 1330, 1275, 1170, 1115, 1055, 1020, 935
(5) ¹³C-NMR-Spektrum: 75 MHz, in CDCl&sub3; [Fig. 14]
Die chemischen Verschiebungen sind unten gezeigt (δ ppm):
177.2(s), 151.2(s), 104.0(d), 102.2(s), 96.2(d), 86.1(s), 79.9(d), 77.2(s), 76.8(d), 76.3(d), 76.0(d), 70.3(d), 69.8(s), 69.8(d), 69.6(d), 66.9(d), 66.4(d), 65.0(d), 47.5(t), 44.6(d), 43.6(d), 42.7(t), 40.2(t), 36.2(q), 30.6(d), 29.5(t), 25.9(q), 25.6(q), 21.4(q), 19.9(q), 18.1(q), 16.8(q), 15.6(q), 13.9(q), 13.0(q), 12.0(q), 8.4(q)

Experimentelles Beispiel 1

Die Wirkung (GMS-Wirkung) auf die Magenmotilität von Hunden wurde untersucht.

[Verfahren]

Beagles mit einem Körpergewicht von etwa 10 kg wurden unter Pentobarbital-Anästhesie einer Laparotomie unterzogen, und ein Dehnungsmeßstreifen-Kraftaufnehmer wurde am Magenantrum jedes Beagles befestigt. Mehr als 2 Wochen nach der Operation wurden die Beagles für das Experiment verwendet. Ein Anschlußdraht des Dehnungsmeßstreifen-Kraftaufnehmers wurde über einen Verstärker mit einem Aufzeichnungsgerät verbunden, und das Aufzeichnungsgerät zeichnete Magenkontraktionen auf. Signale aus dem Verstärker wurden einem Signalprozessor (NEC Sanei) zugeführt.
Jede der Testverbindungen wurde in Ethanol gelst, und Lactobionsäure (1 mg/mg der Testverbindung) wurde hinzugefügt; anschließend wurde mit physiologischer Kochsalzlösung verdünnt. Die resultierende Lösung wurde 15 Minuten nach dem Ende der natürlichen Kontraktionen zur interdigestiven Wanderung verabreicht.
Die Fläche der durch die Verabreichung der Testverbindungen induzierten Magenkontraktionen wurde unter Verwendung des Signalprozessors gemessen. Die Fläche zu der Zeit, als die maximale Kontraktion der Kontraktionen zur interdigestiven Wanderung 1 Minute lang beibehalten wurde, wurde als 100% angenommen, und die Dosis, die eine Kontraktionsfläche von 200% induzierte (ED&sub2;&sub0;&sub0;- Wert) wurde aus Dosis-Wirkungs-Kurven bestimmt.

[Ergebnisse]

Die ED&sub2;&sub0;&sub0;-Werte der jeweiligen Testverbindungen sind in Tabelle 3 gezeigt. Tabelle 3: Ergebnisse der Wirkung von Testverbindungen auf die Magenmotilität von Hunden Verbindung Nr.
Wie man aus Tabelle 3 erkennt, zeigen die nach dem Verfahren der vorliegenden Erfindung erhaltenen aktiven Verbindungen (3), (4) (7) und (8) eine stärkere GMS-Wirkung als die entsprechenden Ausgangsverbindungen (1) und (2).

Experimentelles Beispiel 2

Die Wirkung (GMS-Wirkung) der oben genannten Verbindungen auf die Magenmotilität der Hunde wurde gemessen.

[Verfahren]

Die Messung wurde in ähnlicher Weise durchgeführt wie im experimentellen Beispiel 1.

[Ergebnisse]

ED&sub2;&sub0;&sub0;-Werte der getesteten Verbindungen (1), (5) und (6) sind in Tabelle 4 gezeigt. Tabelle 4 Verbindung Nr.
Wie man aus Tabelle 4 erkennt, zeigen die nach dem Verfahren der vorliegenden Erfindung erhaltenen Verbindungen (5) und (6) eine stärkere GMS-Wirkung als die Ausgangsverbindung (1).

Bezugsbeispiel 1

Verfahren zur Herstellung von N-Demethyl-N-isopropyl-8,9-anhydroerythromycin-B-6,9-Hemiacetal

N-Demethyl-Erythromycin B als Ausgangsverbindung wurde nach einem Verfahren synthetisiert, das in der Japanischen Offenlegungsschrift Nr. 47-4232 (Abbott Laboratories, USA) beschrieben ist.
N-Demethyl-Erythromycin B (4,95 g, 7,03 mmol) wurde in Acetonitril (25 ml) gelöst, und Isopropyliodid (23,9 g, 140,6 mmol, 20 Äq.) sowie Triethylamin (35,6 g, 35,2 mmol, 5 Äq.) wurden hinzugefügt; danach wurde 17 Stunden bei 55ºC gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Destillation unter reduziertem Druck entfernt. Wasser (50 ml) und Ethylacetat (50 ml) wurden zu dem Rückstand gegeben, um ihn zu verteilen, und eine Ethylacetatschicht wurde abgetrennt. Die wäßrige Schicht wurde mit 30 ml Ethylacetat extrahiert. Die resultierenden organischen Schichten wurden kombiniert und zweimal mit gesättigter Kochsalzlösung (30 ml) gewaschen; danach wurde mit wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und zur Trockne eingedampft, wobei man rohes N-Demethyl-N-isopropylerythromycin B (6,3 g) als blaßgelben Feststoff erhielt. Dieses Produkt wurde in Essigsäure (10 ml) gelöst, und anschließend wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Eis (40 g) und 25%iges wäßriges Ammoniak (20 ml) wurden hinzugefügt, und anschließend wurde mit Ethylacetat (50 ml) extrahiert. Die Ethylacetatschicht wurde mit gesättigter Kochsalzlösung (20 ml) gewaschen und dann konzentriert und unter reduziertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei man einen Rückstand (4,86 g) erhielt. Dieser Rückstand wurde zur Reinigung einer Chromatographie auf Silicagel (400 g, Dichlormethan/Methanol = 10:1) unterzogen. Nach der Kristallisation aus Isopropylether/Hexan wurde N-Demethyl-N-isopropyl-8,9-anhydroerythromycin-B-6,9-Hemiacetal (3,20 g) in Form blaßgelber Kristalle erhalten. Die resultierende Verbindung kann als Ausgangsverbindung der vorliegenden Erfindung verwendet werden.
Die physicochemischen Eigenschaften der Verbindung waren wie folgt:
(1) Elementaranalyse C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub9;NO&sub1;&sub1; H&sub2;O (745,99)
ber. : C 62,79; H 9,59; N 1,88
gef. : C 62,54; H 9,48; N 1,89
(2) ¹³C-NMR-Spektrum: 75 MHz, in CDCl&sub3;, δ ppm
178.5(s), 151.5(s), 103.0(d), 101.6(s), 94.6(d), 85.8(s), 80.2(d), 78.2(d), 77.4(d), 76.9(d), 73.1(s), 71.2(d), 70.3(d), 68.9(s), 65.6(d), 63.1(d), 52.7(d), 49.5(q), 44.6(d), 43.7(d), 43.2(d), 42.5(t), 34.7(t), 33.7(d), 33.1(s), 30.9(q), 26.3(q), 25.0(t), 21.6(q), 21.4(q), 21.1(q), 20.6(q), 18.2(q), 14.9(q), 13.1(q), 12.1(q), 10.4(q), 8.7(q), 8.7(q)

Bezugsbeispiel 2

Verfahren zur Herstellung von 4"-Desoxy-N-demethyl-N-ethyl-8,9- anhydroerythromycin-A-6,9-Hemiacetal

2'-O-Acetyl-N-demethyl-N-ethylerythromycin A (1,31 g) wurde in Tetrahydrofuran (44 ml) gelöst, und Imidazol (113 mg) und 1,1'- Thiocarbonyldiimidazol (1,97 g) wurden hinzugefügt, und anschließend wurde 2 Stunden am Rückfluß gehalten. Die Reaktionslösung wurde mit Ether (100 ml) verdünnt und zweimal mit 5%igem wäßrigem Natriumhydrogencarbonat sowie mit Wasser (50 ml) und gesättigter Kochsalzlösung (50 ml) gewaschen; danach wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und unter reduziertem Druck zur Trockne eingedampft, wobei man einen rohen Extrakt erhielt (1,85 g). Dieser Extrakt wurde einer Chromatographie auf Silicagel (110 ml) unterzogen. Als die mit Aceton/Toluol (2:8) eluierten Fraktionen konzentriert wurden, erhielt man 2'-O-Acetyl-4"-O-imidazothiocarbonyl-N- demethyl-N-ethylerythromycin A (1,10 g, Ausbeute: 74%). Die physicochemischen Eigenschaften der Verbindung waren wie folgt:
(1) ¹H-NMR-Spektrum (300 MHz, in CDCl&sub3;), δ ppm
8,25, 7,56, 7,03 (Imidazol), 5,47 (4"-H)
(2) ¹³C-NMR-Spektrum: 75 MHz, in CDCl&sub3;, δ ppm
184.4(s), 175.3(s), 169.9(s), 136.7(d), 131.0(d), 117.8(d), 100.7(4), 95.9(d), 86.9(d), 83.7(d), 80.0(d), 76.8(d), 74.8(s), 74.5(s), 73.2(s), 71.4(d), 69.0(d), 68.1(d), 63.3(d), 62.6(d), 49.4(q), 47.8(t), 45.2(d), 44.6(d), 38.7(d), 37.9(t), 37.7(d), 36.7(q), 35.4(t), 31.0(t), 26.9(q), 21.3(q), 21.3(q), 21.1(q), 21.1(t), 18.1(q), 18.1(q), 16.3(q), 16.0(q), 14.0(q), 12.0(q), 10.6(q), 9.0(q)
Das so erhaltene 2'-O-Acetyl-4"-O-imidazothiocarbonyl-N-demethyl- N-ethylerythromycin A (380 mg) wurde in Toluol (30 ml) gelöst, und 2,2'-Azodiisobutyronitril (14 mg) sowie Tributylzinnhydrid (0,176 ml) wurden hinzugefügt, und anschließend wurde 3 Stunden am Rückfluß gehalten. Die Reaktionslösung wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, und der Rückstand wurde mit Hexan (50ml)/Acetonitril (50ml) verteilt. Nach dem Konzentrieren wurde die untere Schicht einer Chromatographie auf Silicagel (20 ml) unterzogen. Als die mit Aceton/Toluol (15:85) eluierten Fraktionen konzentriert wurden, erhielt man 2'-O-Acetyl-4"-desoxy-N- demethyl-N-ethylerythromycin A (185 mg, Ausbeute 56%).
Die gesamte Menge dieser Verbindung wurde in Methanol (6,0 ml) gelöst, und Kaliumcarbonat (16 mg) wurde hinzugefügt; anschliessend wurde 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde konzentriert und zur Trockne eingedampft, dann wurde mit Ethylacetat (15 ml) verdünnt. Dann wurde die resultierende Lösung mit gesättigtem wäßrigem Natriumhydrogencarbonat (10 ml) und mit gesättigter Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen; danach wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und unter reduziertem Druck zur Trockne eingedampft. Das resultierende Produkt wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur in Essigsäure/Dichlormethan (1:3, 4,0 ml) gerührt. Die Reaktionslösung wurde unter Eiskühlung auf gesättigtes wäßriges Natriumhydrogencarbonat (15 ml) gegossen, und die wäßrige Schicht wurde zweimal mit Chloroform (15 ml) extrahiert. Die organische Schicht wurde mit 5%igem wäßrigem Natriumhydrogencarbonat (15 ml) und 15%iger Kochsalzlösung (15 ml) gewaschen; danach wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und unter reduziertem Druck zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde in Methanol gelöst und einer präparativen Umkehrphasen-HPLC unterzogen (Säule: ODS, YMC-Pack, D-ODS-5; mobile Phase: 38% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer; pH 4). Fraktionen mit einer Elutionskapazität von 300 bis 470 ml wurden konzentriert. Ethylacetat (15 ml) und gesättigtes wäßriges Natriumhydrogencarbonat (15 ml) wurden zu dem Konzentrat gegeben, um es zu verteilen. Die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat (10 ml) extrahiert. Die resultierenden organischen Schichten wurden kombiniert und mit gesättigtem wäßrigem Natriumhydrogencarbonat (10 ml) und mit gesättigter Kochsalzlösung (10 ml) gewaschen; danach wurde mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Dann wurde die Lösung konzentriert und unter reduziertem Druck zur Trockne eingedampft. Als Ergebnis wurde 4"-Desoxy- N-demethyl-N-ethyl-8,9-anhydroerythromycin-A-6,9-Hemiacetal (12 mg) erhalten. Die resultierende Verbindung kann als Ausgangsverbindung der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Die physicochemischen Eigenschaften der Verbindung waren wie folgt:
(1) HPLC-Analyse: ODS, 37% Acetonitril/0,02 M Phosphatpuffer, Retentionszeit: 18,8 Minuten, Kontrollverbindung (2): 7,9 Minuten.
(2) ¹³C-NMR-Spektrum: 75 MHz, in CDCl&sub3;, δ ppm
178.6(s), 151.8(s), 102.6(d), 101.6(5), 95.3(d), 85.5(s), 79.8(d), 78.3(d), 76.1(d), 75.4(s), 70.5(s), 70.5(d), 69.6(d), 68.4(s), 64.8(d), 61.8(d), 49.4(q), 47.7(t), 46.0(t), 44.7(d), 43.4(d), 42.5(t), 36.2(q), 33.4(t), 30.5(d), 29.6(t), 26.4(q), 25.7(q), 21.5(q), 21.3(q), 21.1(t), 16.6(q), 15.1(q), 13.8(q), 13.3(q), 12.0(q), 11.0(q), 8.7(q)
(3) Molekulargewicht: 714 (M&spplus;H), 572 (M&spplus;H-Desoxycladinose) (anhand des FAB-Massenspektrums)
Die 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivate oder die Salze davon der vorliegenden Erfindung haben eine ausgezeichnete Wirkung im Sinne einer Förderung der Verdauungsfunktion und eine geringe Toxizität, so daß sie sich als Mittel zur Förderung der Magen-Darm- Funktion eignen.

Claims

1. 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, oder ein Salz davon.

2. 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz davon gemäß Anspruch 1, wobei das 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat durch die allgemeine Formel [1] dargestellt wird:

wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt und R&sub2; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt oder R&sub1; und R&sub2; zusammen mit dem benachbarten Stickstoffatom eine heterocyclische Gruppe bilden, R&sub3; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe darstellt, R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, wobei wenigstens, einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist, R&sub6; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt, R&sub7; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, R&sub8; Wasserstoff, eine Hydroxygruppe, eine substituierte oder unsubstituierte Acyloxygruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkoxygruppe darstellt und

-A- die allgemeine Formel [2] darstellt:

wobei R&sub9; und R&sub1;&sub0; beide Wasserstoff darstellen oder beide eine chemische Bindung bilden

und Z die allgemeine Formel [3] darstellt:

wobei R&sub1;&sub1; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt und R&sub1;&sub2; Wasserstoff, eine Niedercarboxylacylgruppe oder eine Alkylgruppe, die gegebenenfalls Alkylthio als Substituenten trägt, darstellt,

oder Z die allgemeine Formel [4] darstellt:

wobei R&sub1;&sub3; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt,

oder Z die Formel [5] darstellt:

oder Z die Formel [6] darstellt:

oder Z die allgemeine Formel [7] darstellt:

wobei Y die Formel > B-R&sub1;&sub4;, wobei R&sub1;&sub4; eine Alkylgruppe oder eine Arylgruppe darstellt, > S=O, > C=O, > C=S oder die allgemeine Formel [8] darstellt:

wobei R&sub1;&sub5; und R&sub1;&sub6;, die gleich oder verschieden sein können, Wasserstoff oder Alkylgruppen darstellen oder zusammen mit dem benachbarten Kohlenstoffatom eine cyclische Alkylgruppe bilden oder eines davon Wasserstoff, eine Alkylgruppe oder eine Arylgruppe darstellt und das andere eine Dialkylaminogruppe darstellt,

oder -A- die allgemeine Formel [9] darstellt:

wobei Z' die allgemeine Formel [10] darstellt:

wobei R&sub1;&sub7; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt.

3. 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz davon gemäß Anspruch 2, wobei das 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat durch die allgemeine Formel [11] dargestellt wird:

wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub2;' eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist, R&sub7; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, R&sub8;' Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt und R&sub1;&sub8; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt.

4. 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz davon gemäß Anspruch 3, wobei das 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat durch die allgemeine Formel [12] dargestellt wird:

wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub1;&sub8;' Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt, R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist, R&sub7; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, mit der Maßgabe, daß R&sub1;&sub8;' Wasserstoff darstellt, wenn R&sub7; Methyl ist.

5. 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz davon gemäß Anspruch 3, wobei das 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat durch die allgemeine Formel [13] dargestellt wird:

wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, wobei wenigstens einer der Reste R&sub4; und R&sub5; eine Hydroxygruppe ist.

6. 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz davon gemäß Anspruch 3, wobei R&sub1; und R&sub2; gleich oder verschieden sein können und eine substituierte oder unsubstituierte Niederalkylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Cycloalkylgruppe darstellen.

7. 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz davon gemäß Anspruch 3, wobei R&sub1; und R&sub2; gleich oder verschieden sein können und eine substituierte oder unsubstituierte C&sub1;&submin;&sub6;- Alkylgruppe darstellen.

8. 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz davon gemäß Anspruch 4 oder 5, wobei R&sub1; eine Isopropyl- oder Ethylgruppe ist.

9. Verfahren zur Herstellung eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, oder eines Salzes davon, umfassend das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats oder eines Salzes davon mit einer von einem Organismus abgeleiteten Oxidase.

10. Verfahren zur Herstellung eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats gemäß Anspruch 9, wobei das hergestellte Erythromycinderivat durch die allgemeine Formel [1] dargestellt wird:

wobei die Symbole dasselbe bedeuten wie in Anspruch 2, oder eines Salzes davon,

umfassend das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [14] dargestellt wird:

wobei R&sub7;' Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt und die anderen Symbole dasselbe bedeuten wie in Anspruch 2,

oder eines Salzes davon mit der von einem Organismus abgeleiteten Oxidase.

11. Verfahren zur Herstellung eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats gemäß Anspruch 9, wobei das hergestellte Erythromycinderivat durch die allgemeine Formel [11] dargestellt wird:

wobei die Symbole dasselbe bedeuten wie in Anspruch 3, oder eines Salzes davon,

umfassend das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [15] dargestellt wird:

wobei R&sub1;, R&sub2;', R&sub8;' und R&sub1;&sub8; dasselbe bedeuten wie oben und R&sub7;' Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, oder eines Salzes davon mit der von einem Organismus abgeleiteten Oxidase.

12. Verfahren zur Herstellung eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats gemäß Anspruch 9, wobei das hergestellte Erythromycinderivat durch die allgemeine Formel [16] dargestellt wird:

wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt und R&sub2; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt oder R&sub1; und R&sub2; zusammen mit dem benachbarten Stickstoffatom eine heterocyclische Gruppe bilden, R&sub3; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe darstellt, R&sub6; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt, R&sub8; Wasserstoff, eine Hydroxygruppe, eine substituierte oder unsubstituierte Acyloxygruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkoxygruppe darstellt und

-A- die allgemeine Formel [2] darstellt.

und Z die allgemeine Formel [3] darstellt:

oder Z die allgemeine Formel [4] darstellt:

oder Z die Formel [5] darstellt:

oder Z die Formel [6) darstellt:

oder Z die allgemeine Formel [7] darstellt:

wobei Y die Formel > B-R&sub1;&sub4;, wobei R&sub1;&sub4; eine Alkylgruppe oder eine Arylgruppe darstellt, > S=O, > CO, > C=S oder die allgemeine Formel [8] darstellt:

oder -A- die allgemeine Formel [9] darstellt:

wobei Z' die allgemeine Formel [10] darstellt:

wobei R&sub1;&sub7; Wasserstoff, eine substituierte oder unsubstituierte Acylgruppe oder eine substituierte oder unsubstituierte Alkylgruppe darstellt, oder eines Salzes davon,

umfassend das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [17] dargestellt wird:

wobei R&sub1;, R&sub2;, R&sub3;, R&sub6;, R&sub8; und -A- dasselbe bedeuten wie oben, oder eines Salzes davon mit der von einem Organismus abgeleiteten Oxidase.

13. Verfahren zur Herstellung eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats gemäß Anspruch 9, wobei das hergestellte Erythromycinderivat durch die allgemeine Formel [18] dargestellt wird:

wobei R&sub1; Wasserstoff oder eine substituierte oder unsubstituierte aliphatische Kohlenwasserstoffgruppe darstellt, R&sub1;&sub8; Wasserstoff oder eine Hydroxygruppe darstellt, R&sub4;' und R&sub5;' Wasserstoff oder Hydroxygruppen darstellen, R&sub7; Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, mit der Maßgabe, daß R&sub7; Wasserstoff darstellt, wenn sowohl R&sub4;' als auch R&sub5;' Wasserstoff sind, oder eines Salzes davon, umfassend das Umsetzen eines 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivats, das durch die allgemeine Formel [19] dargestellt wird:

wobei R&sub1; und R&sub1;&sub8; dasselbe bedeuten wie oben und R&sub7;' Wasserstoff oder eine Methylgruppe darstellt, oder eines Salzes davon mit der von einem Organismus abgeleiteten Oxidase.

14. Verfahren gemäß Anspruch 9, 10, 11, 12 oder 13, wobei die von einem Organismus abgeleitete Oxidase eine von einem Tier abgeleitete Oxidase ist.

15. Verfahren gemäß Anspruch 9, 10, 11, 12 oder 13, wobei die von einem Organismus abgeleitete Oxidase eine von einem Mikroorganismus abgeleitete Oxidase ist.

16. Verfahren gemäß Anspruch 15, wobei der Mikroorganismus ein Actinomycet ist, der zu Dactylosporangium, Saccharothrix oder Amicolatopsis gehört.

17. Verfahren zur Herstellung eines Salzes des 6,9-Hemiacetal- Erythromycinderivats, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, gemäß Anspruch 1, 2 oder 3, umfassend das Umsetzen des 6,9-Hemiacetal- Erythromycinderivats gemäß Anspruch 1, 2 oder 3 in einer Reaktion zur Bildung eines quartären Ammoniumsalzes.

18. Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion, das ein Erythromycinderivat, das wenigstens an einer der Positionen 14 und 15 eine Hydroxygruppe aufweist, oder ein Salz davon sowie pharmazeutisch annehmbare Träger umfaßt.

19. Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion gemäß Anspruch 18, wobei es sich bei dem Erythromycinderivat oder dem Salz davon um das 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz gemäß Anspruch 1 handelt.

20. Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion gemäß Anspruch 18, wobei es sich bei dem Erythromycinderivat oder dem Salz davon um das 6,9-Hemiacetal-Erythromycinderivat oder Salz gemäß Anspruch 2 handelt.

21. Mittel zur Förderung der Magen-Darm-Funktion gemäß Anspruch 18, wobei es sich bei dem Erythromycinderivat oder dem Salz davon um das Erythromycinderivat oder Salz gemäß Anspruch 3 handelt.