DE655506T1 - DNS Polymerase mit Veränderten Nukleotiden Bindungstelle. - Google Patents
DNS Polymerase mit Veränderten Nukleotiden Bindungstelle.Info
- Publication number
- DE655506T1 DE655506T1 DE0655506T DE94203433T DE655506T1 DE 655506 T1 DE655506 T1 DE 655506T1 DE 0655506 T DE0655506 T DE 0655506T DE 94203433 T DE94203433 T DE 94203433T DE 655506 T1 DE655506 T1 DE 655506T1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- dna
- polymerase
- dna polymerase
- modified
- ability
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 title claims abstract 69
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 title claims abstract 68
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title claims 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title claims 6
- 239000005546 dideoxynucleotide Substances 0.000 claims abstract 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract 17
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims 34
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 22
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims 13
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 11
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims 10
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 8
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 claims 4
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims 4
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims 3
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 claims 3
- 241000589500 Thermus aquaticus Species 0.000 claims 3
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 claims 3
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 claims 3
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 claims 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 claims 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 claims 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims 2
- 241000205160 Pyrococcus Species 0.000 claims 2
- 241000205180 Thermococcus litoralis Species 0.000 claims 2
- 241000589596 Thermus Species 0.000 claims 2
- 241000589499 Thermus thermophilus Species 0.000 claims 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims 2
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 claims 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 claims 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 claims 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- UFJPAQSLHAGEBL-RRKCRQDMSA-N dITP Chemical compound O1[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C[C@@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 UFJPAQSLHAGEBL-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 claims 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 241000894007 species Species 0.000 claims 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1241—Nucleotidyltransferases (2.7.7)
- C12N9/1252—DNA-directed DNA polymerase (2.7.7.7), i.e. DNA replicase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Claims (52)
1. Modifiziertes Gen, das für eine modifizierte DNA-Polymerase
codiert, wobei das modifizierte Gen dahingehend modifiziert ist, daß die Fähigkeit dieser Polymerase, ein
dem entsprechenden Desoxynukleotids verwandtes Didesoxynukleotid
einzubauen, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase, um
wenigstens das 20-fache gesteigert ist.
2. Modifiziertes Gen nach Anspruch 1, wobei die modifizierte DNA-Polymerase eine ausreichende DNA-Polymeraseaktivität
zur Verwendung bei der DNA-Sequenzierung
aufweist, wenn sie mit einem Faktor kombiniert wird, der für DNA-Polymeraseaktivität notwendig ist.
3. Modifiziertes Gen nach Anspruch 1 oder 2, wobei die modifizierte DNA-Polymerase eine ausreichend niedrige
Exonukleaseaktivitat aufweist, die es dieser Polymerase gestattet, bei der DNA-Sequenzierung verwendet zu werden.
4. Modifiziertes Gen nach einem der Ansprüche 1 bis
3, wobei die modifizierte DNA-Polymerase eine Didesoxynukleotidbindestelle
trägt, die einen Tyrosinmolekülres,t aufweist.
5. Modifiziertes Gen nach Anspruch 4, wobei die Polymerase eine T7-Typ-DNA-Polymerase ist, die aus einer
Gruppe ausgewählt ist, zu der T7, T3, Φ&Igr;, Φ&Igr;&Igr;, H, W31, gh-1,
Y, A1122 und SP6 gehören.
6. Modifiziertes DNA-Polymerase, die durch das modifizierte
Gen nach einem der Ansprüche 1 bis 5 codiert ist.
7. Modifizierte DNA-Polymerase nach Anspruch 6, wobei
_ 2 —
die Polymerase eine Pol-I-Typ-Polymerase ist, die an einer
Aminosäurestelle in einer Region modifiziert ist, die aus jenen ausgewählt ist, die bei der DNA-Polymerase I von E.
CoIi derjenigen in den Regionen 666-682, 710-755, 755-784, 798-867 und 914-928 entspricht.
8. Modifiziertes Gen nach einem der Ansprüche 1 bis
4, wobei die modifizierte DNA-Polymerase ein thermostabiles Enzym ist.
9. Modifiziertes Gen nach Anspruch 8, wobei das thermostabile Enzym aus einer Gruppe ausgewählt ist, zu
der die DNA-Polymerasen gehören, die durch Thermus aquaticus, Thermus thermophilis, Thermus flavus, Bacillus sterothermophilus,
Thermococcus litoralis and Pyrococcus furiosis codiert sind.
10. Modifiziertes Gen nach einem der Ansprüche 1 bis
5 oder 8 und 9, wobei die Fähigkeit dieser Polymerase, ein dem entsprechenden Desoxynukleotids verwandtes Didesoxynukleotid
einzubauen, um wenigstens das 25-fache gegenüber der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase
und verglichen mit dem entsprechenden Desoxynukleotid gesteigert ist.
11. Modifiziertes Gen nach Anspruch 10, wobei diese Fähigkeit um wenigstens das 50-fache gesteigert ist.
12. Modifiziertes Gen nach Anspruch 10, wobei diese Fähigkeit um wenigstens das 100-fache gesteigert ist.
13. Modifiziertes Gen nach Anspruch 10, wobei diese Fähigkeit um wenigstens das 500-fache gesteigert ist.
14. Verfahren zur Herstellung einer modifizierten
DNA-Polymerase, die verglichen mit der Fähigkeit der
entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase eine
gesteigerte Fähigkeit zum Inkorporieren eines mit dem
entsprechenden Desoxynukleotids verwandten Didesoxynukleotids
hat, mit den Schritten: gemäß denen ein Nukleinsäuremolekül, das für eine DNA-Polymerase codiert, bereitgestellt
und das Nukleinsäuremolekül mutagenisiert wird, um eine oder mehrere Basenänderungen in der Nukleotidbasensequenz
an einer oder mehreren Stellen einzubauen, die die Fähigkeit dieser durch die Nukleinsäure codierten Polymerase
ein Didesoxynukleotid einzubauen, um wenigstens den Faktor 20 ändert.
15. Verfahren zur Bestimmung der Nukleotidbasensequenz eines DNA-Moleküls mit den Schritten, gemäß denen:
ein DNA-Molekül, das mit einem Primermolekül, das mit dem DNA-Molekül hybridisieren kann, hybridisiert ist, in
einem Behälter inkubiert wird, der wenigstens ein Desoxynukleosidtriphosphat,
eine DNA-Polymerase, die gegenüber einer natürlich auftretenden DNA-Polymerase dahingehend
modifiziert ist, daß sie verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase eine
gesteigerte Fähigkeit aufweist, ein Didesoxynukleotid einzubauen aufweist, wobei die Polymerase zur Verwendung
bei der DNA-Sequenzierung eine ausreichende DNA-Polymeraseaktivität
und eine ausreichend niedrige Exonukleaseaktivität aufweist, und der wenigstens ein die DNA-Synthese
terminierendes Agens enthält, das die DNA-Synthese an einer speziellen Nukleotidbase beendet; und
die DNA-Produkte der Inkubationsreaktion nach der Größe getrennt werden, wodurch wenigstens ein Teil der
Nukleotidbasensequenz des DNA-Moleküls ermittelt werden kann.
16. Verfahren nach Anspruch 15, bei dem die DNA-Polymerase
eine thermostabile DNA-Polymerase ist und die Sequenzierung bei einer Temperatur von über 50° C durchgeführt
wird.
17. Verfahren nach Anspruch 16, bei dem die DNA-Polymerase eine thermostabile DNA-Polymerase ist und die
Sequenzierung bei einer Temperatur über 60° C durchgeführt wird.
18. Verfahren nach Anspruch 17, bei dem das thermostabile Enzym aus einer Gruppe ausgewählt ist, zu der die
DNA-Polymerasen gehören, die durch Thermus aquaticus,
Thermus thermophilis, Thermus flavus, Bacillus sterothermophilus, Thermococcus litoralis und Pyrococcus furiosis
codiert sind.
19. Verfahren nach einem der Ansprüche 15 bis 17, bei dem die DNA-Polymerase zwischen Desoxynukleotiden und
Didesoxynukleotiden um weniger als den Faktor 100 unterscheidet .
20. Verfahren nach einem der Ansprüche 15 bis 17, bei dem die DNA-Polymerase zwischen Desoxynukleotiden und
Didesoxynukleotiden um weniger als einen Faktor 5 0 unterscheidet .
21. Verfahren nach einem der Ansprüche 15 bis 20, bei dem die DNA-Polymerase eine Exonukleaseaktivität pro mg
Polymerase von weniger als 1000 Einheiten hat.
22. Zusammenstellung zur DNA-Sequenzierung, mit einer
modifizierten DNA-Polymerase, die dahingehend modifiziert
ist, daß, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase, die Fähigkeit
dieser Polymerase ein Didesoxynukleotid einzubauen, um wenigstens das 20-fache gesteigert ist; und mit einem
Agens, das zur Sequenzierung notwendig ist und aus einer Gruppe ausgewählt ist, zu der dITP gehört, ein kettenterminierendes
Agens, deaza-GTP und eine Mangan enthaltende Verbindung.
23. Verfahren zur Sequenzierung eines DNA-Strangs mit
- 5 den Schritten, gemäß denen:
ein Strang bereitgestellt wird, der mit einem Primer hybridisiert ist, der in der Lage ist, mit dem Strang zu
hybridisieren, um eine hybridisierte Mischung zu erhalten,
die hybridisierte Mischung mit einer oder mehreren Desoxyribonukleosidtriphosphaten, einer modifizierten DNA-Polymerase,
die dahingehend modifiziert ist, daß, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich
auftretenden DNA-Polymerase, die Fähigkeit dieser Polymerase, ein Didesoxynukleotid einzubauen, gesteigert ist,
und einem ersten kettenterminierenden Agens inkubiert wird, wobei die DNA-Polymerase bewirkt, daß der Primer
verlängert wird, um eine erste Serie von ersten DNA-Produkten zu erzeugen, die sich untereinander in der Länge
des verlängerten Primers unterscheiden, wobei jedes der ersten DNA-Produkte einen kettenterminierenden Wirkstoff
an seinem verlängerten Ende trägt und bei allen ersten DNA-Produkten die Anzahl von Molekülen für im wesentlichen
alle DNA-Produkte, die sich in der Länge um nicht mehr als 20 Basen unterscheidet, gleich ist; und ein zweites kettenterminierendes
Agens in der hybridisierten Mischung mit einer Konzentration bereitgestellt ist, die sich von der
des ersten kettenterminierenden Agens unterscheidet, wobei die DNA-Polymerase die Produktion einer zweiten Serie von
zweiten DNA-Produkten hervorruft, die sich untereinander in der Länge des verlängerten Primers unterscheiden, wobei
jedes der zweiten DNA-Produkte ein kettenterminierendes Agens an seinem verlängerten Ende trägt, bei allen zweiten
DNA-Produkten die Anzahl von Molekülen für im wesentlichen alle zweite DNA-Produkte, die sich hinsichtlich der Länge
um weniger als 1 bis 2 0 Basen voneinander unterscheiden, gleich ist und die klar von der Anzahl der Moleküle aller
ersten DNA-Produkte unterscheidbar ist, die sich hinsichtlich der Länge um nicht mehr als 20 Basen von der der
zweiten DNA-Produkte unterscheiden.
24. Verfahren zum Sequenzieren einer Nukleinsäure mit
den Schritten gemäß denen:
(a) ein Oligonukleotidprimer, eine zu sequenzierende
Nukleinsäure, zwischen einem und vier Desoxynukleosidtriphosphaten, eine modifizierte DNA-Polymerase, die dahingehend
modifiziert ist, daß, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase,
die Fähigkeit dieser Polymerase, ein Didesoxynukleotid einzubauen, gesteigert ist, und wenigstens zwei kettenabbrechende
Agenzien in unterschiedlicher Menge unter Bedingungen zusammengegeben werden, die die Verlängerung
des Oligonukleotidprimers begünstigen, um Nukleinsäurefragmente zu bilden, die zu der zu sequenzierenden Nukleinsäure
komplementär sind; die Desoxynukleinsäurefragmente nach der Größe unterschieden werden und die Nukleinsäuresequenz
bestimmt wird, wobei die Agenzien voneinander durch die Intensität einer Markierung in den Primerverlängerungsprodukten
unterscheidbar sind.
25. Automatisierte Einrichtung zum Sequenzieren von DNA,
mit einem Reaktor, der Reagenzien enthält, die wenigstens zwei Serien von DNA-Produkten liefern, die ausgehen
von einem einzigen Primer und eines einzigen DNA-Strangs gebildet sind, wobei die Reagenzien eine modifizierte DNA-Polymerase
umfassen, die dahingehend modifiziert ist, daß, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich
auftretenden DNA-Polymerase, die Fähigkeit dieser Polymerase, ein Didesoxynukleotid einzubauen, gesteigert ist,
wobei jedes DNA-Produkt der Serien sich hinsichtlich des Molekulargewichtes unterscheidet und ein kettenterminierendes
Agens an einem Ende aufweist, mit Trennmitteln zum Trennen der DNA-Produkte längs einer Achse des Separators,
um eine Serien von Banden zu bilden, wobei die Dichte von im wesentlichen allen benachbarten Banden einer Serie im
wesentlichen die gleiche ist und sich die Intensität im
wesentlichen aller benachbarter Banden aus jeder Serie von denen der anderen Serie unterscheidet, mit Bandenerkennungsmitteln,
um die Position und die Intensität jeder Bande nach der Trennung längs der Achse zu erkennen, und
mit Computereinrichtungen, die die DNA-Sequenz des DNA-Strangs ausschließlich aufgrund der Position und der
Intensität der Banden längs der Achse und nicht aufgrund der Wellenlänge der Lichtemission einer Markierung unterscheiden,
die in der Trenneinrichtung enthalten sein kann.
26. Verfahren zur in vitro Mutagenese eines geklonten DNA-Fragmentes, wobei gemäß dem Verfahren das zu klonende
Fragment und eine modifizierte DNA-Polymerase bereitgestellt werden, die dahingehend modifiziert ist, daß, verglichen
mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase, die Fähigkeit dieser Polymerase,
ein Didesoxynukleotid einzubauen, gesteigert ist, das geklonte Fragment mit der Polymerase unter Bedingungen
zum Synthethisieren eines DNA-Strangs aus dem Fragment zusammengebracht wird, wobei die Bedingungen, die Bildung
des DNA-Strangs durch Inkorporation einer Vielzahl individueller fortlaufender Basen, die mit dem Fragment Basenpaare
bilden, sowie die Inkorporation einer Nukleotidbase bewirken, die nicht in der Lage ist, mit dem Fragment
Basenpaare zu bilden.
27. Verfahren zur in vitro Mutagenese einer DNA-Fragmentmatrize, wobei gemäß dem Verfahren ein Primer und
die Matrize bereitgestellt werden, der Primer mit Ausnahme einer Base, die nicht in der Lage ist, zusammen mit der
Matrize Basenpaare zu bilden, fortlaufend Basen aufweist, die mit den fortlaufenden Basen der Matrize Basenpaare
bilden, und der Primer mit einer modifizierten DNA-Polymerase verlängert wird, die dahingehend modifiziert ist,
daß, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase, die Fähigkeit
dieser Polymerase, ein Didesoxynukleotid einzubauen, gesteigert ist.
28. Verfahren zum Erzeugen einer glatt endenden zweisträngigen DNA aus einem linearen DNA-Molekül mit
einer einsträngigen Region am 5'- Ende, wobei das 3'-Ende des Moleküls zweisträngig ist und keine vorstehenden 3'-Termini
trägt, wobei gemäß dem Verfahren das DNA-Molekül mit einer modifizierten DNA-Polymerase inkubiert wird, die
dahingehend modifiziert ist, daß, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase,
die Fähigkeit dieser Polymerase, ein Didesoxynukleotid einzubauen, gesteigert ist, und wobei die
Polymerase auf die einsträngige Region einwirkt, um ein glatt endendes zweisträngiges DNA-Molekül zu erzeugen.
29. Verfahren zum Markieren des 3'-Endes eines DNA-Fragments,
wobei gemäß dem Verfahren, ein DNA-Fragment mit einer modifizierten DNA-Polymerase, die dahingehend modifiziert
ist, daß, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase, die
Fähigkeit dieser Polymerase, ein Didesoxynukleotid einzubauen, gesteigert ist, und die aus einer rekombinanten
DNA hergestellt ist, sowie mit einer markierten Desoxynukleotid-Spezies unter Bedingungen inkubiert wird, unter
denen das 3'-Ende des DNA-Fragments durch die Polymerase verlängert und dadurch durch Anfügen des markierten Desoxynukleotids
an das DNA-Fragment markiert wird.
30. Verfahren zum Amplifizierung einer DNA-Sequenz, wobei gemäß dem Verfahren ein erster und ein zweiter
Primer an die gegenüberliegenden Stränge einer zweisträngigen DNA-Sequenz angelagert wird, die hybridisierte
Mischung mit einer modifizierten DNA-Polymerase inkubiert wird, die dahingehend modifiziert ist, daß, verglichen mit
der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase, die Fähigkeit dieser Polymerase, ein
Didesoxynukleotid einzubauen, gesteigert ist, wobei der erste und der zweite Primer mit den gegenüberliegenden
Strängen der DNA-Sequenz hybridisieren, derart, daß ihre 3'-Enden nach dem Hybridisieren einander entgegengerichtet
sind die DNA-Sequenz, die zu modifizieren ist, sich zwischen den beiden angelagerten Primern befindet.
31. DNA-Polymerase von Thermus aquaticus, die Tyrosin
beim Molekülbaustein 667 aufweist.
32. DNA-Polymerase I von E. CoIi, die Tyrosin beim Molekülbaustein 762 aufweist.
33. DNA-Polymerase vom Pol I-Typ mit einem Tyrosinmolekülbaustein
an einer Stelle, die bei der DNA-Polymerase von E.CoIi dem Molekülbaustein 762 analog ist.
34. DNA-Polymerase vom Typ Pol I nach Anspruch 33, wobei die Stelle die Aminosäuresequenz K N1 N2 N3 N4 N5 N6 N7
Y G/Q aufweist und jedes N unabhängig eine Aminosäure bedeutet.
35. Alpha-DNA-Polymerase mit der Sequenz K N1 N2 N3 N4
N5 N6 Y G, wobei jedes N unabhängig eine Aminosäure bedeutet
und eines der N mutiert ist, um eine Polymerase zu ergeben, die den Einbau von ddNMP verglichen mit dem
Einbau von dNMP um nicht mehr als den Faktor 50 benachteiligt .
36. Nukleinsäure, die für eine der DNA-Polymerase nach den Ansprüchen 31 bis 3 5 codiert.
37. DNA-Polymerase, die in Anwesenheit von Magnesium als einzigem zugegebenem divalentem Kation eine mittlere
Prozessivität von weniger als 100 hat und die Inkorporation ddNMP verglichen mit der Inkorporation von dNMP um
weniger als den Faktor 100 benachteiligt, wobei die Polymerase keine Reversetranscriptase ist.
38. DNA-Polymerase, die in Anwesenheit von Magnesium als dem einzigen divalenten Kation eine mittlere Prozessivität
von weniger als 50 hat und die Inkorporation von
ddNMP verglichen mit der Inkorporation von dNMP um weniger
als dem Faktor 50 benachteiligt.
39. DNA-Polymerase, die in Anwesenheit von Magnesium
als dem einzigen divalenten Kation eine mittlere Prozesivitat
von weniger als 50 hat und die Inkorporation von ddNMP verglichen mit der Inkorporation von dNMP um weniger
als dem Faktor 5 benachteiligt.
40. Thermophile DNA-Polymerase, die ddNMP verglichen mit dNMP um weniger als dem Faktor 100 benachteiligt.
41. Thermophile DNA-Polymerase, die in Anwesenheit von Magnesium als einzigem divalenten Kation ddNMP verglichen
mit dNMP um weniger als dem Faktor 100 benachteiligt.
42. DNA-Polymerase nach Anspruch 41, bei der die Polymerase eine durchschnittliche Prozessivität von weniger
als 100 hat.
43. Polymerase nach Anspruch 42, wobei die Polymerase
von einer Primermatrize zu der nächsten schneller als einmal pro fünf Sekunden wechselt.
44. Nukleinsäure, die für die Polymerase nach einem der Ansprüche 37 bis 43 codiert.
45. Verfahren zum zyklischen Sequenzieren unter Verwendung einer DNA-Polymerase nach einem der Ansprüche
31 bis 35 und 37 bis 43.
46. Zelluläre DNA-Polymerase mit Tyrosin anstelle der natürlich auftretenden Aminosäure an einer Stelle, die
bewirkt, daß die Polymerase ddNMP verglichen mit dNMP um mehr als den Faktor 50 benachteiligt.
47. Alpha-DNA-Polymerase nach Anspruch 35, die an
beliebiger Stelle zwischen N1 und N6 mutiert ist, um eine
Polymerase zu erzeugen, die ddNMPs wenigstens um den Faktor 20 effizienter inkorporiert als die nicht mutierte
Polymerase.
48. Verfahren zum zyklischen Sequenzieren, gemäß dem
alle vier dNTPs in der gleichen Menge wie die vier ddNTPs oder mit Überschuß in einer zyklischen Sequenzierungsreaktion
bereitgestellt werden und die zyklische Sequenzierungsreaktion durchgeführt wird.
49. Verfahren zum zyklischen Sequenzieren, gemäß dem mengenmäßig 10 mal weniger von allen vier fluoreszierend
markierten Didesoxynukleotide als den entsprechenden Desoxynukleotide in einer zyklischen Sequenzierungsreaktion
bereitgestellt werden und die zyklische Sequenzierungsreaktion durchgeführt wird.
50. Modifiziertes Gen, das für eine modifizierte DNA-Polymerase
codiert, wobei das modifizierte Gen dahingehend modifiziert ist, die Fähigkeit dieser Polymerase, ein dem
entsprechenden Desoxynukleotids verwandtes Didesoxynukleotid
oder ein anderes Desoxynukleotidanalogon einzubauen, zu erhöhen, verglichen mit der Fähigkeit der entsprechenden
natürlich auftretenden DNA-Polymerase.
51. Modifizierte DNA-Polymerase, die durch ein modifiziertes
Gen nach Anspruch 50 codiert ist.
52. Modifizierte DNA-Polymerase, wobei die modifizierte
DNA-Polymerase dahingehend modifiziert ist, die Fähigkeit dieser Polymerase, ein dem entsprechenden Desoxynukleotids
verwandtes Didesoxynukleotid oder ein anderes Desoxynukleotidanalogon einzubauen, zu erhöhen, verglichen
mit der Fähigkeit der entsprechenden natürlich auftretenden DNA-Polymerase.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US32443794A | 1994-10-17 | 1994-10-17 | |
US08/337,615 US5614365A (en) | 1994-10-17 | 1994-11-10 | DNA polymerase having modified nucleotide binding site for DNA sequencing |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE655506T1 true DE655506T1 (de) | 1995-09-28 |
Family
ID=26984456
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE0655506T Pending DE655506T1 (de) | 1994-10-17 | 1994-11-24 | DNS Polymerase mit Veränderten Nukleotiden Bindungstelle. |
DE69400567T Expired - Lifetime DE69400567T2 (de) | 1994-10-17 | 1994-11-24 | DNS Polymerase mit veränderter Nukleotid-Bindungstelle |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE69400567T Expired - Lifetime DE69400567T2 (de) | 1994-10-17 | 1994-11-24 | DNS Polymerase mit veränderter Nukleotid-Bindungstelle |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0655506B1 (de) |
CN (1) | CN100335621C (de) |
AT (1) | ATE143057T1 (de) |
AU (1) | AU4193396A (de) |
CA (1) | CA2201885C (de) |
DE (2) | DE655506T1 (de) |
DK (1) | DK0655506T3 (de) |
ES (1) | ES2072238T3 (de) |
FI (1) | FI120354B (de) |
GR (1) | GR950300040T1 (de) |
HU (1) | HU220839B1 (de) |
WO (1) | WO1996012042A2 (de) |
Families Citing this family (55)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5912155A (en) * | 1994-09-30 | 1999-06-15 | Life Technologies, Inc. | Cloned DNA polymerases from Thermotoga neapolitana |
US6015668A (en) * | 1994-09-30 | 2000-01-18 | Life Technologies, Inc. | Cloned DNA polymerases from thermotoga and mutants thereof |
US5885813A (en) * | 1995-05-31 | 1999-03-23 | Amersham Life Science, Inc. | Thermostable DNA polymerases |
US6077664A (en) * | 1995-06-07 | 2000-06-20 | Promega Corporation | Thermophilic DNA polymerases from Thermotoga neapolitana |
US6001645A (en) * | 1995-06-07 | 1999-12-14 | Promega Corporation | Thermophilic DNA polymerases from thermotoga neapolitana |
US5773258A (en) * | 1995-08-25 | 1998-06-30 | Roche Molecular Systems, Inc. | Nucleic acid amplification using a reversibly inactivated thermostable enzyme |
US5948614A (en) * | 1995-09-08 | 1999-09-07 | Life Technologies, Inc. | Cloned DNA polymerases from thermotoga maritima and mutants thereof |
GB9524974D0 (en) * | 1995-12-06 | 1996-02-07 | Amersham Int Plc | An improved method for dye-terminator (cycle) sequencing |
JP4073038B2 (ja) * | 1995-12-15 | 2008-04-09 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・コーポレイション | テルモアナエロバクター・テルモヒドロスルフリカスからの熱安定性dnaポリメラーゼおよびエキソヌクレアーゼ活性が除去されているその変異体酵素 |
US5888736A (en) * | 1995-12-22 | 1999-03-30 | Visible Genetics, Inc. | Method, compositions and kit for detection and identification of microorganisms |
US5789168A (en) * | 1996-05-01 | 1998-08-04 | Visible Genetics Inc. | Method for amplification and sequencing of nucleic acid polymers |
US5830657A (en) * | 1996-05-01 | 1998-11-03 | Visible Genetics Inc. | Method for single-tube sequencing of nucleic acid polymers |
DE19612684A1 (de) * | 1996-03-29 | 1997-10-02 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Neue Verwendung extrem thermophiler DNA-Polymerasen |
US6083699A (en) * | 1996-05-01 | 2000-07-04 | Visible Genetics Inc. | Method for bi-directional sequencing of nucleic acid polymers |
CA2252588A1 (en) * | 1996-05-01 | 1997-11-06 | Visible Genetics Inc. | Method for sequencing of nucleic acid polymers |
US6413718B1 (en) | 1996-05-01 | 2002-07-02 | Visible Genetics Inc. | Method for sequencing of nucleic acid polymers |
US6214555B1 (en) | 1996-05-01 | 2001-04-10 | Visible Genetics Inc. | Method compositions and kit for detection |
US5827716A (en) * | 1996-07-30 | 1998-10-27 | Amersham Life Science, Inc. | Modified Pol-II type DNA polymerases |
CZ293215B6 (cs) * | 1996-08-06 | 2004-03-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Rekombinantní tepelně stálá DNA polymeráza, způsob její přípravy a prostředek, který ji obsahuje |
WO1998023733A2 (en) | 1996-11-27 | 1998-06-04 | University Of Washington | Thermostable polymerases having altered fidelity |
US6306588B1 (en) | 1997-02-07 | 2001-10-23 | Invitrogen Corporation | Polymerases for analyzing or typing polymorphic nucleic acid fragments and uses thereof |
DE69806003T2 (de) | 1997-03-12 | 2003-01-30 | Pe Corp. (Ny), Foster City | Dna polymerasen, die verbesserte fähigkeiten zum einbau markierter nukleotide besitzen |
JP3172710B2 (ja) | 1997-07-07 | 2001-06-04 | 理化学研究所 | Rnaポリメラーゼ |
JP3318579B2 (ja) | 1997-07-07 | 2002-08-26 | 理化学研究所 | Dnaの塩基配列決定方法 |
US6228628B1 (en) * | 1997-07-09 | 2001-05-08 | Roche Molecular Systems | Mutant chimeric DNA polymerase |
US5882904A (en) * | 1997-08-04 | 1999-03-16 | Amersham Pharmacia Biotech Inc. | Thermococcus barossii DNA polymerase mutants |
CA2243985C (en) * | 1997-09-11 | 2004-08-10 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Thermostable dna polymerases incorporating nucleoside triphosphates labeled with fluorescein family dyes |
WO1999037810A1 (en) * | 1998-01-23 | 1999-07-29 | Amersham Pharmacia Biotech, Inc. | A method, reagent solution and kits for dna sequencing |
CA2266755A1 (en) * | 1998-04-24 | 1999-10-24 | James M. Dunn | Method for sequencing of nucleic acid polymers |
US6096875A (en) | 1998-05-29 | 2000-08-01 | The Perlein-Elmer Corporation | Nucleotide compounds including a rigid linker |
GB9907813D0 (en) * | 1999-04-06 | 1999-06-02 | Medical Biosystems Ltd | Synthesis |
CA2381206A1 (en) * | 1999-08-21 | 2001-03-01 | Amersham Pharmacia Biotech Inc. | Taq dna polymerases having an amino acid substitution at e681 and homologs thereof exhibiting improved salt tolerance |
US20040009486A1 (en) | 1999-10-29 | 2004-01-15 | Sorge Joseph A. | Compositions and methods utilizing DNA polymerases |
ATE321867T1 (de) | 1999-10-29 | 2006-04-15 | Stratagene California | Zusammensetzungen und methoden zur verwendung von dna polymerasen |
AU1491401A (en) | 1999-11-23 | 2001-06-04 | Amersham Pharmacia Biotech Inc. | Improving dideoxynucleotide-triphosphate utilization by the hyper-thermophilic dna polymerase from the archaeon pyrococcus furiosus |
US6329178B1 (en) * | 2000-01-14 | 2001-12-11 | University Of Washington | DNA polymerase mutant having one or more mutations in the active site |
US7179590B2 (en) | 2000-04-18 | 2007-02-20 | Roche Molecular Systems, Inc | High temperature reverse transcription using mutant DNA polymerases |
AU2007201277B2 (en) * | 2000-05-24 | 2011-10-13 | Third Wave Technologies, Inc. | Detection of RNA |
US7198924B2 (en) | 2000-12-11 | 2007-04-03 | Invitrogen Corporation | Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites |
US20050042629A1 (en) | 2002-09-13 | 2005-02-24 | Applera Corporation | Thermus scotoductus nucleic acid polymerases |
US7222059B2 (en) | 2001-11-15 | 2007-05-22 | Siemens Medical Solutions Diagnostics | Electrophoretic trace simulator |
US7148340B2 (en) | 2001-11-30 | 2006-12-12 | Applera Corporation | Thermus thermophilus nucleic acid polymerases |
AU2002346498A1 (en) | 2001-11-30 | 2003-06-17 | Applera Corporation | Thermus brockianus nucleic acid polymerases |
WO2003048310A2 (en) * | 2001-11-30 | 2003-06-12 | Applera Corporation | Thermus oshimai nucleic acid polymerases |
JP2005528114A (ja) * | 2002-05-31 | 2005-09-22 | ユニバーシティー・オブ・ワシントン | 変異性dnaポリメラーゼi突然変異体、および連続培養において変異性dnaポリメラーゼi突然変異体を用いた、標的とされたランダム突然変異誘発のための方法 |
US7309570B2 (en) | 2002-10-21 | 2007-12-18 | University Of Texas | Methods for using double-mutant RNA polymerases with reduced discrimination between non-canonical and canonical nucleoside triphosphates |
ATE469984T1 (de) | 2003-12-01 | 2010-06-15 | Life Technologies Corp | Rekombinationsstellen enthaltende nukleinsäuremoleküle und verfahren zur verwendung davon |
WO2007076493A2 (en) | 2005-12-23 | 2007-07-05 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Methods and reagents for genotyping hcv |
WO2007130967A2 (en) | 2006-05-01 | 2007-11-15 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Novel oligonucleotide primers and methods for dna replication |
WO2016014493A1 (en) * | 2014-07-22 | 2016-01-28 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Buffers for use with polymerases |
CN106318924B (zh) * | 2016-10-26 | 2018-10-16 | 江南大学 | 一种催化dna合成延伸能力提高的dna聚合酶 |
CN109652499B (zh) * | 2017-10-12 | 2022-06-03 | 深圳华大智造科技股份有限公司 | 快速检测dna聚合酶3′-5′外切活性或错配的方法和试剂盒 |
CN110093410A (zh) * | 2019-05-21 | 2019-08-06 | 通用生物***(安徽)有限公司 | 一种dna测序反应试剂及其制备方法 |
CN111534500A (zh) * | 2019-11-13 | 2020-08-14 | 深圳市真迈生物科技有限公司 | 改造的Klenow片段及应用 |
CN111826366B (zh) * | 2020-06-05 | 2022-08-02 | 广州英赞生物科技有限公司 | 一种直扩型热启动dna聚合酶及其制备方法与应用 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1338457C (en) * | 1986-08-22 | 1996-07-16 | Henry A. Erlich | Purified thermostable enzyme |
US4942130A (en) * | 1987-01-14 | 1990-07-17 | President & Fellows Of Harvard College | T7 DNA polymerase |
US4962020A (en) * | 1988-07-12 | 1990-10-09 | President And Fellows Of Harvard College | DNA sequencing |
EP0455744B1 (de) * | 1989-02-06 | 1993-08-18 | Eastman Kodak Company | Reaktionskonzentrat zur dna-sequenzierung mit thermostabiler dna-polymerase |
US5001050A (en) * | 1989-03-24 | 1991-03-19 | Consejo Superior Investigaciones Cientificas | PHφ29 DNA polymerase |
US5108892A (en) * | 1989-08-03 | 1992-04-28 | Promega Corporation | Method of using a taq dna polymerase without 5'-3'-exonuclease activity |
JPH07500004A (ja) * | 1991-07-24 | 1995-01-05 | ユニバーシティ パートナーシップス プロプライエタリー リミテッド | 核酸の一工程増幅及び配列決定 |
-
1994
- 1994-11-24 EP EP94203433A patent/EP0655506B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-24 AT AT94203433T patent/ATE143057T1/de active
- 1994-11-24 ES ES94203433T patent/ES2072238T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-24 DE DE0655506T patent/DE655506T1/de active Pending
- 1994-11-24 DK DK94203433.1T patent/DK0655506T3/da active
- 1994-11-24 DE DE69400567T patent/DE69400567T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-07-31 GR GR950300040T patent/GR950300040T1/el unknown
- 1995-10-16 CA CA002201885A patent/CA2201885C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-16 AU AU41933/96A patent/AU4193396A/en not_active Abandoned
- 1995-10-16 WO PCT/US1995/012928 patent/WO1996012042A2/en active IP Right Grant
- 1995-10-16 HU HU9702016A patent/HU220839B1/hu unknown
- 1995-10-16 CN CNB951968297A patent/CN100335621C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-04-16 FI FI971611A patent/FI120354B/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2201885C (en) | 2009-12-29 |
WO1996012042A3 (en) | 1996-08-01 |
FI971611A (fi) | 1997-06-13 |
ES2072238T1 (es) | 1995-07-16 |
HUT77037A (hu) | 1998-03-02 |
EP0655506A1 (de) | 1995-05-31 |
ATE143057T1 (de) | 1996-10-15 |
AU4193396A (en) | 1996-05-06 |
CN1170439A (zh) | 1998-01-14 |
HU220839B1 (en) | 2002-06-29 |
FI120354B (fi) | 2009-09-30 |
CN100335621C (zh) | 2007-09-05 |
ES2072238T3 (es) | 1997-01-16 |
CA2201885A1 (en) | 1996-04-25 |
FI971611A0 (fi) | 1997-04-16 |
GR950300040T1 (en) | 1995-07-31 |
DE69400567D1 (de) | 1996-10-24 |
EP0655506B1 (de) | 1996-09-18 |
WO1996012042A2 (en) | 1996-04-25 |
DK0655506T3 (da) | 1997-03-10 |
DE69400567T2 (de) | 1997-02-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE655506T1 (de) | DNS Polymerase mit Veränderten Nukleotiden Bindungstelle. | |
DE60114525T2 (de) | Array-basierende Methoden zur Synthese von Nukleinsäuregemischen | |
DE60034878T2 (de) | Verfahren zur Amplifizierung einer Nukleinsäuresequenz unter Verwendung eines chimären Primers | |
DE3687287T3 (de) | Verfahren zur Amplifikation von Nukleinsäuresequenzen. | |
DE69713599T2 (de) | Verfahren zur bestimmung von nukleinsäure-sequenzen und diagnostische anwendungen derselben | |
DE69524425T2 (de) | Nukleotid-sequenzierungsmethode | |
DE60131903T2 (de) | Direkte multiplex charakterisierung von genomischer dna | |
DE69531542T2 (de) | Ligase/polymerase-vermittelte analyse genetischer elemente von einzelnukleotid-polymorphismen und ihre verwendung in der genetischen analyse | |
US5432065A (en) | Cycle sequencing with non-thermostable DNA polymerases | |
Wu et al. | Allele-specific enzymatic amplification of beta-globin genomic DNA for diagnosis of sickle cell anemia. | |
DE69534728T2 (de) | Amplifizierung von langen Nukleinsäuresequenzen mit PCR | |
DE60212175T2 (de) | Verfahren zur reduzierung unspezifischer amplifikation bei pcr | |
DE265293T1 (de) | T7-dns-polymerase. | |
DE69804143T2 (de) | Verfahren zur charakterisierung von nukleinsäuremolekulen, das die erzeugung von verlängerbaren aufwärtsgelegenen dns-fragmenten, die durch spaltung der nukleinsäure an einer abasischen stelle entsteht, umfasst | |
DE60122962T2 (de) | Reverse Transkription bei hoher Temperatur durch die Verwendung von mutierten DNA Polymerasen | |
US5142033A (en) | Structure-independent DNA amplification by the polymerase chain reaction | |
DE60016947T2 (de) | Template Abhängige Ligierung mit PNA-DNA chimerischen Sonden | |
DE69133329T3 (de) | Markierte Oligonukleotide | |
EP0597006B1 (de) | Neues verfahren zur sequenzierung von nukleinsäuren | |
DE69720763T2 (de) | Sätze von, mit fluoreszierenden energieübertragungsverbindungen, markierten primern und deren verwendung in mehrkomponentenanalyse | |
DE60020124T2 (de) | Verlängerung einer pna-dna chimäre an ihrem 3' ende mittels einer polymerase | |
DE60219199T2 (de) | Analyse und detektion von mehreren zielsequenzen unter verwendung von zirkulären proben | |
DE69837255T2 (de) | Bestimmung der anzahl von nukleinsäurewiederholungsequenzeinheiten durch schrittweise primerverlängerung | |
Creighton et al. | Base mispair extension kinetics. Binding of avian myeloblastosis reverse transcriptase to matched and mismatched base pair termini. | |
US20090142764A1 (en) | Methods and Kits for Multiplex Amplification of Short Tandem Repeat Loci |