DE60132618T2 - 4,6-diphenylpyridinderivate als entzündungshemmende mittel - Google Patents

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Description

  • FACHGEBIET
  • Die vorliegende Erfindung betrifft neue 4-Arylpyridinderivate, Verfahren zu deren Herstellung und pharmazeutische Präparate, die diese enthalten. Die 4-Arylpyridinderivate der vorliegenden Erfindung hemmen IκB-Kinase-β-(IKK-β-)Aktivität und demnach die Kernfaktor-κB-(NF-κB-)Aktivität und können zur Prophylaxe und Behandlung von Krankheiten eingesetzt werden, die mit NF-κB-Aktivität in Zusammenhang stehen, insbesondere zur Behandlung von Entzündungserkrankungen.
  • STAND DER TECHNIK
  • Kernfaktor κB (NF-κB) gehört zu einer Familie von miteinander eng verwandten, homo- und heterodimeren Transkriptionsfaktorkomplexen, die aus verschiedenen Kombinationen der Rel/NF-κB-Polypeptidfamilie bestehen. NF-κB und verwandte Mitglieder der Familie sind an der Regulierung von mehr als 50 Genen beteiligt, die mit Immun- und Entzündungsreaktionen in Zusammenhang stehen (P.J. Barnes, M. Karin, N. Engl. J. Med. 336, 1066–1071 (1997), und P.A. Baeuerle, V.R. Baichwal, Adv. Immunol. 65, 111–137 (1997)). In den meisten Zelltypen ist NF-κB als Heterodimer vorhanden und umfasst eine 50-kDa- und eine 65-kDa-Untereinheit (p50/RelA). Das Heterodimer ist im Cytoplasma gemeinsam mit dem Inhibitor der NF-κB-(Iκ-B-)Proteinfamilie maskiert, um in einem inaktiven Zustand gehalten zu werden. Proteine der IκB-Familie maskieren das Kerntranslokationssignal von NF-κB. Bei Stimulierung von Zellen durch verschiedene Cytokine (z. B. TNF-α, IL-1), CD40-Ligand, Lipopolysaccarid (LPS), Oxidationsmittel, Mitogene (z. B. Phorbolester), Viren oder zahlreiche andere werden IκB-Proteine an bestimmten Serinresten phosphoryliert, polyubiquitiniert und dann über einen proteasomabhängigen Weg abgebaut. Von IκB befreit, ist das aktive NF-κB in der Lage, zum Kern zu translozieren, wo es selektiv an bevorzugte genspezifische Enhancer-Sequenzen bindet. Zu den Genen, die durch NF-κB reguliert werden, gehören viele, die für Pro-Entzündungsmediatoren, Cytokine, Zelladhä sionsmoleküle und Akutphasenproteine kodieren. Die Expression mehrerer dieser Cytokine und Mediatoren kann wiederum zu einer weiteren Aktivierung von NF-κB durch autokrine und parakrine Mechanismen führen.
  • Es existieren zahlreiche Hinweise darauf, dass NF-κB eine zentrale Rolle bei vielen Entzündungserkrankungen, wie z. B. Atemwegsentzündungen und Asthma, spielt (L. Yang et al., J. Exp. Med. 188, 1739–1750 (1998), L.A. Hart et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 158, 1585–1592 (1998), M.A. Stacey et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 236, 522-526 (1997), P. Barnes und I.M. Adcock, Trends Pharmacol. Sci. 18, 46–50 (1997)).
  • Außerdem wurde gezeigt, dass Glucocorticoide, die für die Behandlung von Asthma bei weitem am wirksamsten sind, Atemwegsentzündungen dadurch verhindern, dass sie direkt mit den Transkriptionsfaktoren NF-κB und dem aktivierenden Peptid-1 (AP-1) in Wechselwirkung treten und deren Aktivität hemmen (P. Barnes, Pulmon. Pharmacol. Therapeut. 10, 3–19 (1997), und A. Dumont et al., Trends Biochem. Sci. 23, 233–235 (1998)).
  • Allgemein ruft die Hemmung von NF-κB-Aktivierung starke Antientzündungswirkungen hervor, die den durch Steroide verursachten ähnlich oder sogar stärker als diese sind. In der Folge sollte NF-κB-Hemmung die Entzündungssymptome von Asthma; allergischer Rhinitis; atopischer Dermatitis; Urtikaria; Konjunktivitis; Frühjahrskatarrh; rheumatoider Arthritis; systemischem Lupus erythematodes; Psoriasis; diabrotischer Kolitis; systemischem inflammatorischem Reaktionssyndrom; Sepsis; Polymyositis; Dermatomyositis; Polyarteriitis nodosa; dem Sharp-Syndrom; dem Sjögren-Syndrom; und Gicht und dergleichen verbessern.
  • Außerdem implizieren verschiedene Studien, dass NF-κB eine grundlegende Rolle bei neoplastischer Transformation spielt. NF-κB steht beispielsweise mit der In-vitro- oder In-vivo-Zelltransformation als Folge von Gen-Überexpression, -Amplifikation, -Neuordnung oder -Translokation in Zusammenhang (F. Mercurio und A.M. Manning, Oncogene 18, 6163–6171 (1999)). Bei bestimmten menschlichen Lymphtumorzellen werden die Gene von Elementen der NF-κB-Familie neu angeordnet oder amplifiziert. Seine mögliche Rolle in der Krebspathologie wird von M.W. Mayo, A.S. Baldwin, Biochemica et Biophysica Acta 1470, M55–M62 (2000), offenbart. M.W. Mayo et al. offenbaren, dass die Hemmung von NF-κB zur Blockierung der Initiation und/oder des Fortschreitens von bestimmten Krebsarten, insbesondere von Kolorektalkrebs, führt.
  • NF-κB kann schließlich auch an der Steuerung des Nervenzelltodes beteiligt sein. Es wurde gezeigt, dass NF-κB bei fokaler Hirnischämie aktiviert wird und den Zelltod fördert (Nature Medicine, Band 5, Nr. 5 (Mai 1999)).
  • Umfassende Forschung in den letzten Jahren führte dazu, dass ein IκB-Kinase-(IKK-)Komplex als für die signalinduzierte IκB-Phosphorylierung verantwortlich identifiziert wurde (E.N. Hatada et al., Current Opinion in Immunology 12, 52–58 (2000)). Es ist sehr wahrscheinlich, dass dieser Komplex die Integrationsstelle für die verschiedenen Stimuli ist, die zu NF-κB-Aktivierung führen. Der IKK-Komplex (Molekulargewicht: 700–900 kDa) besteht aus verschiedenen Proteinen, umfassend zwei homologe IκB-Kinasen, als IKK-α und IKK-β bezeichnet, eine Stromauf-Kinase, NIK, die NF-κB induziert, ein als IKAP bezeichnetes Gerüstprotein, das die drei Kinasen verbindet, und eine Regulator-Untereinheit IKK-γ, die vorzugsweise mit IKK-β wechselwirkt.
  • IKK-β ist eine Serin-Threonin-Kinase mit 756 Aminosäuren, die zu 52% mit IKK-α ident ist und dieselbe Struktur wie diese aufweist (F. Mercurio et al., Science 278, 860–866 (1997), J.D. Woronicz et al., Science 278, 866–869 (1997), E. Zandi et al., Cell 91, 243–252 (1997)). IKK-β bildet mit IKK-α in vitro und in Zellen Homodimere bzw. Heterodimere. IKK-β wechselwirkt auch mit IKK-γ, IKAP, NIK und IκBα. Rekombinantes IKK-β phosphoryliert IκBα und IκBβ an bestimmten Serinresten mit gleicher Wirksamkeit (J. Li et al., J. Biol. Chem. 273, 30736–30741 (1998), E. Zandi, Y. Chen, M. Karin, Science 281, 1360–1363 (1998)). IKK-β weist im Vergleich zu IKK-α eine höhere konstitutive Kinase-Aktivität auf. Das stimmt mit Daten überein, die darauf hindeuten, dass eine Überexpression von IKK-β die Transkription von einem NF-κB-abhängigen Reportergen mit höherer Wirksamkeit als IKK-α aktiviert. Es wurde gezeigt, dass IKK-β in verschiedenen Zelllinien oder frischen menschlichen Zellen als Reaktion auf verschiedene Stimuli, wie z. B. TNF-α, IL-1β, LPS, Anti-CD3/Anti-CD28-Co-Stimulierung, Protein-Kinase C und Calcineurin, B-Zellen-Rezeptor/CD40-Ligandenstimulierung und Vanadat, aktiviert wird. IKK-β ist in den fibroblastenähnlichen Synoviozyten (FLS), die aus der Synovialis von Patienten, die an chronischer Polyarthritis oder Osteoarthritis leiden, isoliert wurden, aktiviert (S.J. Kempiak et al., J. Immunol. 162, 3176–3187 (1999)). Außerdem kann IKK-β durch die strukturell verwandten Stromauf-Kinasen MEKK-1 und NIK aktiviert werden, sehr wahrscheinlich durch Phosphorylierung von bestimmten Serinresten innerhalb der T-Schleife (Aktivierungsschleife) und durch bestimmte Protein-Kinase-C-Isoformen (M.J. Lallena et al., Mol. Cell. Biol. 19, 2180–2188)). Es wurde gezeigt, dass eine katalytisch inaktive Mutante von IKK-β die Aktivierung von NF-κB durch Stimulierung durch TNF-α, IL-1β, LPS, Anti-CD3/Anti-CD28 hemmt (J.D. Woronicz et al., Science 278, 866–869 (1997)). Dieselbe Wirkung wurde beobachtet, wenn MEKK1 oder NIK überexprimiert werden. Zusätzlich dazu hemmten IKK-β-Mutationen in der Aktivierungsschleife die IL-1- und TNF-α-Signalgebung (M. Deihase et al., Science 284, 309–313 (1999)). Basierend auf den oben beschriebenen Versuchsergebnissen gibt es deutliche Hinweise darauf, dass IKK-β auf verschiedenen Wegen, die zur Aktivierung von NF-κB führen, eine zentrale Rolle spielt.
  • Zusammenfassend sollte die spezifische Hemmung von IKK-β in vivo zu einer starken Anti-Entzündungswirkung und einer starken immunmodulierenden Wirkung führen, die das Potential besitzt, die Asthma und anderen Krankheiten zugrunde liegenden Ursachen zu verbessern. Zusätzlich dazu sind Anti-Tumor- und Anti-Ischämie-Wirkungen eines IKK-β-Hemmers zu erwarten.
  • Manna et al. offenbaren 4,6-disubstituierte 3-Cyano-2-aminopyridine der allgemeinen Formel:
    Figure 00050001
    worin (R', R'') (OCH3, OCH3), (Cl, Cl), (H, Cl), (H, Br), (H, CH3), (H, OCH3), (H, NO2) oder (H, N(CH3)2) ist,
    oder
    Figure 00050002
    als allgemeines antientzündliches, schmerzlinderndes und antipyretisches Mittel (Eur. J. Med. Chem. 34, 245–254 (1999)).
  • Die Entwicklung einer neuen Verbindung mit effektiver Anti-Entzündungswirkung, basierend auf der spezifischen und selektiven hemmenden Aktivität auf IKK-β-Kinase wird jedoch nach wie vor erwünscht.
  • ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
  • Nach umfassenden Studien in Bezug auf die chemische Modifizierung von Pyridinderivaten haben die Erfinder der vorliegenden Erfindung festgestellt, dass die Verbindungen mit neuer chemischer Struktur der vorliegenden Erfindung unerwarteterweise ausgezeichnete NF-κB-Hemmaktivität in Bezug auf IKK-β-Hemmung und Cytokinhemmung aufweisen. Die vorliegende Erfindung wurde auf Basis dieser Erkenntnisse entwickelt.
  • Die vorliegende Erfindung besteht in der Bereitstellung neuer 4-Arylpyridinderivate und von Salzen davon.
  • Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung weisen überraschenderweise ausgezeichnete IKK-β-Kinase hemmende Aktivität und Cytokin hemmende Aktivität auf. Deshalb sind sie speziell als NF-κB-Inhibitoren und insbesondere zur Herstellung von Medikamenten oder medizinischen Zusammensetzungen geeignet, die zur Behandlung von NF-κB-abhängigen Erkrankungen wirksam sein können.
  • Da die 4-Arylpyridinderivate der vorliegenden Erfindung IKK-β-Kinaseaktivität hemmen, eignen sie sich zur Behandlung und Prophylaxe von nachstehenden Erkrankungen, die NF-κB-Aktivität umfassen: Entzündungssymptome, einschließlich Asthma; allergischer Rhinitis; atopischer Dermatitis; Urtikaria; Konjunktivitis; Frühjahrskatarrh; rheumatoider Arthritis; systemischem Lupus erythematodes; Psoriasis; diabrotischer Kolitis; systemischem inflammatorischem Reaktionssyndrom (SIRS); Sepsis; Polymyositis; Dermatomyositis (DM); Polyarteriitis nodosa (PN); dem Sharp-Syndrom ("mixed connective tissue disease", MCTD); dem Sjögren-Syndrom; Gicht und dergleichen.
  • Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind auch für die Behandlung und die Prophylaxe von Erkrankungen wie Ischämie und Tumoren wirksam, da diese Erkrankungen ebenfalls mit IKK-β-Kinase- und NF-κB-Aktivität in Verbindung stehen.
  • Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind folgende:
    5-({3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat;
    N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-5-oxotetrahydro-2-furancarboxamid;
    N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}methansulfonamid;
    N4-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-L-asparagin;
    N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-L-asparagin;
    N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-(1-piperidinyl)-propanamid;
    5-({4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat;
    4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-N-[2-(1-piperidinyl)ethyl]benzamid;
    4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]benzoesäure;
    5-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat;
    N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl)-N2-cyclopentylglycinamid;
    N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid;
    N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hyd roxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-propylglycinamid;
    N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-(3-hydroxypropyl)glycinamid;
    N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N3-(cyclopropylmethyl)-β-alaninamid;
    N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2,N2-dimethylglycinamid;
    N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-2-(1-pyrrolidinyl)acetamid;
    N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-[2-(methyloxy)ethyl]glycinamid;
    N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(3-amino-1-pyrrolidinyl)phenyl]-β-alaninamid;
    N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(1-piperidinyl)phenyl]-β-alaninamid;
    N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(1-pyrrolidinyl)phenyl]-β-alaninamid;
    N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[ethyl-(2-hydroxyethyl)amino]phenyl}-β-alaninamid;
    N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(4-morpholinyl)phenyl]-β-alaninamid;
    N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(dimethylamino)phenyl]-β-alaninamid;
    N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-4-chlorphenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid;
    2-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]benzoesäure;
    2-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-N-[2-(1-piperidinyl)ethyl]benzamid;
    N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid;
    N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}-N2-(2-methoxyethyl)glycinamid;
    N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}-β-alaninamid;
    2-Amino-4-(4-amino-3-hydroxyphenyl)-6-(2-hydroxyphenyl)nicotinonitril;
    N-{4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid;
    N-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid;
    N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(dimethylamino)phenyl]-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid;
    N-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-inyl]-2-(dimethylamino)phenyl]-3-(1-piperidinyl)propanamid;
    N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[(2S)-2-(hydroxymethyl)-1-pyrrolidinyl]phenyl}-L-Ieucinamid;
    N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[(3S)-3-(dimethylamino)-1-pyrrolidinyl]phenyl}-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid;
    N1-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-L-leucinamid;
    N-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-3-(1-piperidinyl)propanamid;
    N1-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-N2-(2-methoxyethyl)glycinamid;
    N1-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid;
    2-Amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-hydroxyphenyl)nicotinonitril;
    N-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-3-(1-piperidinyl)propanamid;
    N1-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-N2-(2-methoxyethyl)glycinamid;
    N1-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid;
    2-Amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-hydroxyphenyl)nicotinonitril;
    N-{4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}acetamid;
    N-{4-[2-Amino-3-(hydroxymethyl)-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid;
    2-[6-Amino-4-[4-(ethylamino)-3-hydroxyphenyl]-5-(hydroxymethyl)-2-pyridinyl]-3-(cyclopropylmethoxy)phenol;
    N-{4-[2-Amino-6-[2-(cyclopropylmethoxy)-6-hydroxyphenyl]-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid;
    7-[2-(Cyclopropylmethoxy)-6-hydroxyphenyl]-5-(3-ethyl-2-oxo-2,3-dihydro-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,4-dihydro-2H-pyrido[2,3-d][1,3]oxazin-2-on;
    und pharmazeutisch annehmbare Salze davon.
  • Die Verbindung der vorliegenden Erfindung kann durch eine Kombination verschiedener bekannter Verfahren hergestellt werden, ist jedoch nicht darauf beschränkt. In manchen Ausführungsformen wird einer oder werden mehrere Substituenten, wie z. B. eine Aminogruppe, Carboxylgruppe und Hydroxylgruppe, der als Ausgangsmaterialien oder Zwischenprodukte eingesetzten Verbindungen vorteilhafterweise durch eine Schutzgruppe, die Fachleuten auf dem Gebiet der Erfindung bekannt ist, geschützt. Beispiele für die Schutzgruppen werden in Greene und Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2. Aufl., beschrieben.
  • Übliche Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden nachstehend erläutert.
    Figure 00100001
    worin
    X, R1, R2 und R3 wie oben definiert sind und R4a ein C1-6-Alkylsulfonyl oder -COR41 ist (R41 ist wie zuvor definiert),
    kann beispielsweise durch nachstehende Reaktion A hergestellt werden.
  • Figure 00110001
    Reaktion A
  • In Stufe 1 wird die Verbindung der Formel (II):
    Figure 00110002
    (worin R1, R2 und X wie oben definiert sind) mit einem Aldehyd der Formel (III):
    Figure 00110003
    (worin R3 wie oben definiert ist), Malononitril und Ammoniumacetat umgesetzt, um die Verbindung (IV) herzustellen.
  • In Stufe 2 wird die Nitrogruppe reduziert, um sie in die Aminogruppe überzuführen.
  • In Stufe 3 wird die Aminogruppe weiter modifiziert, um eine gewünschte Gruppe (NHR4a) zu erhalten.
  • Die Substituenten der Verbindung (II) oder (III) werden während der Reaktion bei Bedarf mit einer geeigneten Schutzgruppe (z. B. Benzyl, Silyl) geschützt und danach entschützt.
  • Stufe 1 wird ohne Lösungsmittel oder in einem Lösungsmittel durchgeführt, das beispielsweise Ether, wie z. B. Dioxan und Tetrahydrofuran; aromatische Kohlenwasserstoffe, wie z. B. Benzol, Toluol und Xylol; Nitrile, wie z. B. Acetonitril; Amide, wie z. B. Dimethylformamid (DMF) und Dimethylacetamid; Sulfoxide, wie z. B. Dimethylsulfoxid, und andere umfasst.
  • Die Reaktionstemperatur wird optional je nach den umzusetzenden Verbindungen eingestellt. Die Reaktionstemperatur beträgt üblicherweise etwa 50°C bis 200°C. Die Reaktion wird üblicherweise 30 min bis 48 h und vorzugsweise 1 bis 24 h lang durchgeführt.
  • Die Verbindungen (II) und (III) können im Handel erworben oder unter Einsatz bekannter Verfahren hergestellt werden.
  • Stufe 2 wird in Gegenwart eines Reduktionsmittels und eines Wasserstoffdonors bei etwa Raumtemperatur bis 120°C durchgeführt. Die Reaktionszeit und das Lösungsmittel in Stufe 2 sind ähnlich wie jene in Stufe 1.
  • Stufe 3 wird unter den üblicherweise von Fachleuten auf dem Gebiet der Erfindung angewandten Bedingungen durchgeführt, um Amide (NHR4a) zu synthetisieren.
    • (2) Alternativ dazu kann die Verbindung der Formel (I-b):
      Figure 00130001
      worin X, R1, R2, R3 und R41 wie oben definiert sind, beispielsweise durch nachstehende Reaktion B hergestellt werden.
  • Figure 00130002
    Reaktion B
  • Die Verbindung (II) wird mit einem Aldehyd der Formel (III'):
    Figure 00130003
    (worin R3 wie oben definiert ist und R4b Amino oder Alkoxy ist), Malononitril und Ammoniumacetat umgesetzt, um die Verbindung (IV') herzustellen. R4b wird weiter modifiziert, um eine gewünschte Gruppe (OH oder NHR41) zu erhalten.
  • Die Substituenten der Verbindung (II) oder (III) werden während der Reaktion bei Bedarf mit einer geeigneten Schutzgruppe (z. B. Benzyl, Silyl) geschützt und danach entschützt.
  • Stufe 1 der Reaktion B kann unter ähnlichen Bedingungen wie Reaktion A durchgeführt werden.
  • Stufe 2 der Reaktion B kann eine Hydrolyse sein und unter den gleichen Bedingungen durchgeführt werden, wie sie üblicherweise von Fachleuten auf dem Gebiet der Erfindung angewandt werden.
  • Stufe 3 der Reaktion B kann unter den von Fachleuten auf dem Gebiet der Erfindung angewandten Bedingungen zur Synthse von Amiden (CONHR41) durchgeführt werden.
    • (3) Alternativ dazu kann die Verbindung der Formel (I-c):
      Figure 00140001
      worin X, R1, R2, R3 und R4 wie oben definiert sind und R5a Carboxy, Carbamoyl, C1-6-Alkoxycarbonyl, Hydroxy, C1-6-Alkyl, C1-6-Alkylcarbamoyl oder C1-6-Alkyl ist, beispielsweise durch die nachstehende Reaktion C hergestellt werden.
  • Figure 00150001
    Reaktion C
  • Die Verbindung (II) wird mit einem Aldehyd der Formel (III'):
    Figure 00150002
    (worin R3 und R4 wie oben definiert sind), einem Nitril der Formel tBu-OCO-CH2CN und Ammoniumacetat umgesetzt, um die Verbindung (IV'') herzustellen. Anschließend kann COOtBu der resultierenden Verbindung (IV'') modifiziert werden, um eine gewünschte Verbindung (R5a) zu erhalten.
  • Die Substituenten der Verbindung (II) oder (III') werden während der Reaktion gegebenenfalls mit einer geeigneten Schutzgruppe (z. B. Benzyl, Silyl) geschützt und danach entschützt.
  • Stufe 1 der Reaktion C kann unter ähnlichen Bedingungen wie jene von Reaktion A durchgeführt werden.
  • Stufe 2 der Reaktion C kann beispielsweise eine Hydrolysereaktion, eine Decarboxylierungsreaktion, eine Reduktionsreaktion, eine Amidsynthese etc. ein. Die Bedingungen in Stufe 2 können gleich wie die von Fachleuten auf dem Gebiet der Erfindung üblicherweise angewandten Bedingungen sein.
  • Die Aminogruppe an Position 2 des Pyridinrings in den Verbindungen (I-a), (I-b) und (I-c) wird bei Bedarf gemäß herkömmlichen Verfahren modifiziert, um andere Gruppen, wie z. B. Alkylamino, Alcanoylamino und dergleichen herzustellen.
  • Als übliche Verfahren zur Herstellung von gesättigten oder ungesättigten Heteroringverbindungen, die von R5 und R6 in Formel I zusammen mit den Kohlenstoffatomen in dem Pyridinring gebildet werden, kommen folgende in Frage.
  • Die Ausgangsverbindung ist I-d: worin X, R1, R2, R3 und R4 wie oben definiert sind.
  • Figure 00170001
  • In Stufe 1 der Reaktion D kann die Ausgangsverbindung der Formel I-d in einem geeigneten Lösungsmittel mit einer geeigneten organischen Base durch ein bekanntes Verfahren mit Triphosgen versetzt werden, um eine gewünschte Verbindung, die durch Formel I-D dargestellt ist, zu erhalten.
  • In Stufe 1 der Reaktion E kann die Ausgangsverbindung der Formel I-d in einem geeigneten Lösungsmittel mit einem Oxidationsmittel, wie z. B. Mangandioxid, Salpetersäure und Pyridiniumchlorochromat (PCC) versetzt werden, um eine Verbindung, die durch Formel I-d'-1 dargestellt ist, herzustellen.
  • In Stufe 2 der Reaktion E kann die Formel I-d'-1 in einem geeigneten Lösungsmittel mit Diethylmalonat und einer geeigneten Base versetzt werden, um eine gewünschte Verbindung, die durch Formel I-E dargestellt ist, zu erhalten.
  • In Stufe 1 der Reaktion F kann die Ausgangsverbindung der Formel I-d in einem geeigneten Lösungsmittel mit einem Phosphonsäureester-Reagens, wie z. B. Diphenylphosphorylazid (DPPA) und einer geeigneten Base versetzt werden, um eine Verbindung, die durch Formel I-d'-2 dargestellt ist, herzustellen.
  • In Stufe 2 der Reaktion F kann die Verbindung I-d'-2 in Gegenwart eines Metallkatalysators, wie z. B. Palladium auf Kohlenstoff (Pd/C) in einem Lösungsmittel mit Wasserstoff versetzt werden, um eine Verbindung, die durch Formel I-d'-3 dargestellt ist, herzustellen.
  • In Stufe 3 der Reaktion F kann die Verbindung I-d'-3 in einem geeigneten Lösungsmittel mit 1,1'-Carbonyldiimidazol (CDI) versetzt werden, um eine gewünschte Verbindung der Formel I-F-1 zu erhalten.
  • In Stufe 4 der Reaktion F kann die Verbindung I-d'-3 mit Sulfamid und einer geeigneten Base versetzt werden, um eine gewünschte Verbindung, die durch Formel I-F-2 dargestellt ist, zu erhalten.
  • Die geeigneten Lösungsmittel für die einzelnen Stufen in den Reaktionen D bis F unterliegen keiner speziellen Einschränkung, wobei sie aus der aus Ethern, wie z. B. Dioxan, Diethylether, Tetrahydrofuran (THF), Glykoldimethylether, oder Alkoholen, wie z. B. Propanol, Butanol, Isopropanol, Ethanoldiisopropylether, oder Estern, wie z. B. Ethylacetat, Butylacetat 1, oder aromatischen Kohlenwasserstoffen, wie z. B. Benzol, Toluol, Xylol, Hexan, oder Nitrilen, wie z. B. Acetonitril, oder Amiden, wie z. B. Dimethylformamid (DMF), Dimethylacetamid, oder Sulfoxiden, wie z. B. Dimethylsulfoxid, oder halogenierten Kohlenwasserstoffen, wie z. B. Dichlormethan, Trichlormethan, und anderen bestehenden Gruppe ausgewählt sein können. Es wurden einige Beispiele für geeignete Lösungsmittel beschrieben, die jedoch nur zur Veranschaulichung und nicht als Einschränkung dienen. Die für die einzelnen Stufen geeigneten Lösungsmittel können vom Fachmann ausgewählt werden.
  • Die geeigneten anorganischen und organischen Basen für die einzelnen Stufen in den Reaktionen D bis F unterliegen keiner speziellen Einschränkung, sondern können aus der beispielsweise aus Erdalkalimetall- oder Alkalimetallhydroxiden, -alkoxiden, -acetaten, -carbonaten oder -bicarbonaten, wie z. B. Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid oder Ammoniumhydroxid, Natriummethoxid, Natriumethoxid oder Kaliumtert-butoxid, Natriumacetat, Kaliumacetat, Calciumacetat oder Ammoniumacetat, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat oder Ammoniumcarbonat, Natriumbicarbonat oder Kaliumbicarbonat und auch tertiären Aminen, wie z. B. Trimethylamin, Triethylamin, Tributylamin, Ethyldiisopropylamin, N,N-Dimethylanilin, N,N-Dimethylbenzylamin, Pyridin, Picolin, N-Methylpiperidin, N-Methylmorpholin, N,N-Dimethylaminopyridin, Diazabicyclooctan (DABCO), Diazabicyclononen (DBN) oder Diazabicycloundecen (DBU) bestehenden Gruppe ausgewählt werden. Es wurden einige Beispiele für geeignete anorganische und organische Basen beschrieben, die jedoch nur zur Veranschaulichung und nicht als Einschränkung dienen. Die für die einzelnen Stufen geeigneten Basen können vom Fachmann ausgewählt werden.
  • Die Reaktionstemperatur wird optional je nach den umzusetzenden Verbindungen eingestellt. Die Reaktionstemperatur beträgt üblicherweise etwa 0°C bis 150°C. Die Reaktion wird üblicherweise 30 min bis 48 h und vorzugsweise 1 bis 24 h lang durchgeführt.
  • Wenn die durch Formel (I) dargestellte Verbindung oder ein Salz davon geometrische Isomere und/oder Konformationsisomere aufweist, ist liegen ihre jeweiligen getrennten Isomere und Gemische davon ebenfalls im Schutzumfang der Erfindung.
  • Wenn die durch die Formel (I) dargestellte Verbindung oder ein Salz davon asymmetrische Kohlenstoffe in ihrer Struktur aufweisen, liegen deren optisch aktiven Verbindungen und racemische Gemische ebenfalls im Schutzumfang der Erfindung.
  • Typische Salze der durch Formel (I) dargestellten Verbindung umfassen Salze, die durch die Reaktion der erfindungsgemäßen Verbindung mit einer Mineral- oder organischen Säure oder einer organischen oder anorganischen Base hergestellt werden. Solche Salze sind jeweils als Säureadditions- bzw. Basenadditionssalze bekannt.
  • Säuren zur Bildung von Säureadditionssalzen umfassen anorganische Säuren, wie z. B., ohne Einschränkung, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Iodwasserstoffsäure und dergleichen, und organische Säuren, wie z. B., ohne Einschränkung, p-Toluolsulfonsäure, Methansulfonsäure, Oxalsäure, p-Bromphenylsulfonsäure, Kohlensäure, Bernsteinsäure, Zitronensäure, Benzoesäure, Essigsäure und dergleichen.
  • Basenadditionssalze umfassen die von anorganischen Basen abgeleiteten, wie z. B., ohne Einschränkung, von Ammoniumhydroxid, Alkalimetallhydroxiden, Erdalkalimetallhydroxiden, -carbonaten, -bicarbonaten und dergleichen, und von organischen Basen, wie z. B., ohne Einschränkung, von Ethanolamin, Triethylamin, Tris(hydroxymethyl)aminomethan und dergleichen. Beispiele für anorganische Basen umfassen Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Kaliumcarbonat, Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat, Kaliumbicarbonat, Calciumhydroxid, Calciumcarbonat und dergleichen.
  • Beispiele für solche Salze sind Sulfat, Pyrosulfat, Bisulfat, Sulfit, Bisulfit, Phosphat, Monohydrogenphosphat, Dihydrogenphosphat, Metaphosphat, Pyrophosphat, Chlorid, Bromid, Iodid, Acetat, Propionat, Decanoat, Caprylat, Acrylat, Formiat, Isobutyrat, Caproat, Heptanoat, Propiolat, Oxalat, Malonat, Succinat, Suberat, Secavat, Fumarat, Maleat, Butin-1,4-dioat, Hexin-1,6-dioat, Benzoat, Chlorbenzoat, Methoxybenzoat, Phthalat, Sulfonat, Xylolsulfonat, Phenylacetat, Phenylpropionat, Phenylbutyrat, Citrat, Lactat, γ-Hydroxybutyrat, Glycollat, Tartarat, Methansulfonat, Propansulfonat, Naphthalin-1-sulfonat, Naphthalin-2-sulfonat, Mandelat und ähnliche Salze der Verbindung der Formel (I).
  • Bevorzugte Säureadditionssalze sind solche, die mit Mineralsäuren, wie z. B., ohne Einschränkung, Salzsäure und Bromwasserstoffsäure, und solche, die mit organischen Säuren, wie z. B., ohne Einschränkung, Maleinsäure und Methansulfonsäure, gebildet werden. Kalium- und Natriumsalzformen stellen besonders bevorzugte Basenadditionssalze dar.
  • Die erfindungsgemäße Verbindung kann in oraler Form verabreicht werden, z. B., ohne Einschränkung, in Form von normal und enterisch beschichteten Tabletten, Kapseln, Pillen, Pulvern, Körnern, Elixieren, Tinkturen, Lösungen, Suspensionen, Sirupen, festen und flüssigen Aerosolen und Emulsionen. Sie können auch in parenteralen Formen verabreicht werden, wie z. B., ohne Einschränkung, intravenös, intraperitoneal, subkutan, intramuskulär und in ähnlichen Formen, die Fachleuten auf dem Gebiet der Pharmazeutik bekannt sind.
  • Die erfindungsgemäße Verbindung kann auch intranasal durch topische Anwendung von geeigneten intranasalen Trägern oder über transdermale Wege unter Einsatz von transdermalen Zufuhrsystemen, die Fachleuten auf dem Gebiet der Erfindung bekannt sind, verabreicht werden.
  • Die Dosierung bei Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen wird vom durchschnittlichen Fachmann in Anbetracht verschiedener Faktoren wie z. B., ohne Einschränkung, des Alters, Gewichts, Geschlechts und medizinischen Zustands des Empfängers, der Schwere der zu behandelnden Erkrankung, des Verabreichungsweges, des Ausmaßes der Stoffwechsel- und Ausscheidungsfunktionen des Empfängers, der verwendeten Dosierungsform, der jeweils verwendeten Verbindung und deren Salzes, bestimmt.
  • Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden vorzugsweise vor der Verabreichung gemeinsam mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Exzipienten formuliert. Exzipienten sind inerte Substanzen, wie z. B., ohne Einschränkung, Träger, Verdünnungsmittel, Geschmacksstoffe Süßstoffe, Gleitmittel, Lösungsvermittler, Suspensionsmittel, Bindemittel, tablettenzersetzende Stoffe und verkapselndes Material.
  • Eine weitere Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist eine pharmazeutische Formulierung, die die erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere pharmazeutisch annehmbare Exzipienten umfasst, die mit den anderen Inhaltsstoffen der Formulierung kompatibel und für den Empfänger der Formulierung nicht schädlich sind. Erfindungsgemäße pharmazeutische Formulierungen werden durch Kombination einer therapeutisch wirksamen Menge der erfindungsgemäßen Verbindung mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Exzipienten dafür hergestellt. Bei der Herstellung der Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung kann der Wirkbestandteil mit einem Verdünnungsmittel vermischt oder in einem Träger, der die Form einer Kapsel, eines Säckchens, eines Papiers oder eines anderen Behälters aufweist, eingeschlossen werden. Der Träger kann als Verdünnungsmittel dienen, das festes, halbfestes oder flüssiges Material sein kann, das als Träger dient, oder die Form von Tabletten, Pillen, Pulvern, Pastillen, Elixieren, Suspensionen, Emulsionen, Lösungen, Sirupen, Aerosolen, Salben, die beispielsweise bis zu 10 Gew.-% Wirkstoff enthalten, weichen und harten Gelatinekapseln, Suppositorien, sterilen injizierbaren Lösungen und sterilen verpackten Pulvern aufweisen.
  • Für die orale Verabreichung kann der Wirkbestandteil mit einem oralen, nichttoxischen, pharmazeutisch annehmbaren Träger kombiniert werden, wie z. B., ohne Einschränkung, Lactose, Stärke, Saccharose, Glucose, Natriumcarbonat, Mannit, Sorbit, Calciumcarbonat, Calciumphosphat, Calciumsulfat, Methylcellulose und dergleichen; optional gemeinsam mit Zersetzungsmitteln, wie z. B., ohne Einschränkung, Maisstärke, Methylcellulose, Agarbentonit, Xanthangummi, Alginsäure und dergleichen; und optional mit Bindemitteln, wie z. B., ohne Einschränkung, Gelatine, Akaziengummi, natürlichen Zuckern, β-Lactose, Maissüßstoffe, natürlichem und synthetischem Kautschuk, Akaziengummi, Tragant, Natriumalginat, Carboxymethylcellulose, Polyethylenglykol, Wachsen und dergleichen; und optional mit Gleitmitteln, wie z. B., ohne Einschränkung, Magnesiumstearat, Natriumstearat, Stearinsäure, Natriumoleat, Natriumbenzoat, Natriumacetat, Natriumchlorid, Talk und dergleichen.
  • In Pulverform kann der Träger ein fein verteilter Feststoff sein, dem der fein verteilte Wirkbestandteil beigemischt ist. Der Wirkbestandteil kann mit einem Träger mit Bindungseigenschaften in geeigneten Anteilen vermischt werden und zu gewünschter Form und Größe gepresst werden, um Tabletten herzustellen. Die Pulver und Tabletten umfassen vorzugsweise etwa 1 bis etwa 99 Gew.-% des Wirkbestandteils, der die neue Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung ist. Geeignete feste Träger sind Magnesiumcarboxymethylcellulose, niedrig schmelzende Wachse und Kakaobutter.
  • Sterile flüssige Formulierungen umfassen Suspensionen, Emulsionen, Sirupe und Elixiere. Der Wirkbestandteil kann in einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, wie z. B. sterilem Wasser, einem sterilen organischen Lösungsmittel oder einem Gemisch aus sterilem Wasser und sterilem organischem Lösungsmittel, gelöst oder suspendiert werden.
  • Der Wirkbestandteil kann auch in einem geeigneten organischen Lösungsmittel gelöst werden, z. B. in wässrigem Propylenglykol. Andere Zusammensetzungen können durch Dispersion des fein verteilten Wirkbestandteils in wässriger Stärke oder Natriumcarboxymethylcellulose-Lösung oder einem geeigneten Öl hergestellt werden.
  • Die Formulierung kann in Form einer Dosierungseinheit erfolgen, die eine physikalisch diskrete Einheit ist, die eine Dosierungseinheit enthält und für die Verabrei chung an Menschen oder andere Säugetiere geeignet ist. Eine Dosierungseinheit kann die Form einer Kapsel oder einer Tablette, von mehreren Kapseln oder Tabletten aufweisen. Eine "Dosierungseinheit" ist eine vorbestimmte Menge der aktiven Verbindung der vorliegenden Erfindung, die so berechnet ist, dass sie in Verbindung mit einem oder mehreren Exzipienten die gewünschte therapeutische Wirkung hervorruft. Die Menge des Wirkbestandteils in einer Dosierungseinheit kann in Abhängigkeit von der jeweils angewandten Behandlung von etwa 0,1 bis etwa 1000 mg oder mehr variieren oder angepasst werden.
  • Typische orale Dosierungen der vorliegenden Erfindung liegen, wenn sie für die angesprochenen Wirkungen eingesetzt wird, in einem Bereich von etwa 0,01 mg/kg/Tag bis etwa 100 mg/kg/Tag, vorzugsweise von 0,1 mg/kg/Tag bis 30 mg/kg/Tag und besonders bevorzugt von 0,5 mg/kg/Tag bis etwa 10 mg/kg/Tag. Bei parenteraler Verabreichung hat es sich im Allgemeinen als vorteilhaft erwiesen, Mengen von etwa 0,001 bis 100 mg/kg/Tag, vorzugsweise von 0,01 m/kg/Tag bis 1 mg/kg/Tag, zu verabreichen. Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können in einer einzigen Dosis/Tag verabreicht werden, oder die tägliche Gesamtdosis kann aufgeteilt zweimal, dreimal oder öfter pro Tag verabreicht werden. Wenn die Zufuhr transdermal erfolgt, erfolgt die Verabreichung selbstverständlich kontinuierlich.
  • Die Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindung wurde durch die folgenden Tests und pharmakologischen Tests untersucht.
  • [IKK-β-Kinase-Hemmungstest]
  • (1) Herstellung von IKK-β-Kinase-Protein
  • Ein cDNA-Fragment, das für einen menschlichen offenen IKK-β-Leseraster kodiert, wurde mittels PCR unter Einsatz eines Primerpaares hergestellt, das ausgehend von der veröffentlichten Sequenz erstellt wurde (D.J. Woronicz et al., Science 278, 866–869 (1997)). Eine Matrize wurde aus Quickclone-cDNA (Clontech) unter Einsatz eines ElongaseTM-Amplifikationssets (Life Technologies) erhalten. Die mittels PCR er zeugten DNA-Fragmente wurden gelgereinigt und in pBluescript subkloniert. Das in pBluescript klonierte cDNA-Fragment wurde in pcDNA3.1/His C KpnI/NotI insertiert und in pVL1393 SmaI/XbaI (Pharmingen) übertragen, um einen Baculovirus-Transfervektor zu erstellen. Dann wurde der Vektor gemeinsam mit dem linearisierten Baculovirus (BaculoGoldTM, Pharmingen) eingesetzt, um Sf21-Zellen (Invitrogen, San Diego, Kalif.) zu transfizieren. Das erzeugte rekombinante Baculovirus wurde in Sf21-Zellen kloniert und amplifiziert, die in mit 10% FCS, 50 g/ml Gentamycin, 0,1% Pluronic F-68 (Life Technologies, Inc.) ergänztem TNM-FH-Insektenzellmedium (Life Technologies, Inc.) als Suspensionskultur (200 ml in 1-l-Erlenmeyerkolben; 27°C, 130 U/min) gezüchtet wurden. Sf21-Zellen wurden mit diesem amplifizierten Virus mit einer Infektionsmultiplizität von 5 gemäß Standardvorschriften (R. Crossen, S. Gruenwald, Baculovirus Expression Vector System Instruction Manual, Pharmingen Corporation (1997)) infiziert und 48 h später geerntet. Die Zellen wurden lysiert, um das erzeugte chimäre, mit Histidin fusionierte Protein von IKK-β-Kinase (His-markierte IKK-β) zu erhalten.
  • (2) Herstellung von gereinigten GST-IκBα-Fusionsproteinen
  • Ein Expressionsvektor, der die Nucleotidsequenz enthielt, die für ein Fusionsprotein von GST mit den Aminosäureresten 1 bis 54 von IκBα kodierte, wurde unter der Kontrolle eines IPTG-induzierbaren Promotors hergestellt. Der Expressionsvektor wurde in E. coli eingeführt, und die Transformante wurde kultiviert und lysiert, um ein GST-IκBα-Fusionsprotein zu erhalten. Das resultierende GST-IκBα-Fusionsprotein wurde gereinigt und für den Kinase-Test biotinyliert.
  • (3) Messung der IKK-β-Kinase-Aktivität
  • Der Kinase-Test von IKK-β im 96-Well-Format wurde durchgeführt, um die hemmende Aktivität der Verbindungen der vorliegenden Erfindung zu testen. Zunächst wurden 5 μl einer Testverbindung in Gegenwart von 2,5%igem Dimethylsulfoxid (DMSO) in jeden Well einer 96-Well-Platte mit U-förmigem Boden (Falcon) gefüllt. In Kontroll-Wells für den Hintergrund (BG) und die Gesamtphosphorylierung (TP) wurden 5 μl 2,5%iges DMSO gefüllt. Rekombinante IKK-β (Endkonzentration 0,6 μg/ml) und Bio- GST-IκBα (1-54) (Endkonzentration 0,2 μM) wurden in 25 μl von 2 × Kinase-Puffer β (40 mM Tris-HCl, pH 7,6, 40 mM MgCl2, 40 mM β-Glycerophosphat, 40 mM p-Nitrophenylphosphat, 2 mM EDTA, 40 mM Creatinphosphat, 2 mM DTT, 2 mM Na3VO4, 0,2 mg/ml BSA und 0,8 mM Phenylmethylsulfonylfluorid) verdünnt und in die 96-Well-Platte übertragen. Bio-GST-IκBα (1-54) in 25 μl 2 × Kinase-Puffer β ohne IKK-β wurde in BG-Wells übertragen. Dann wurden 20 μl 12,5 μM ATP, 62,5 μCi/ml [γ-33P]-ATP (Amersham Pharmacia Biotech) zugesetzt und das resultierende Gemisch wurde 2 h lang bei Raumtemperatur inkubiert. Die Kinase-Reaktionen wurden durch Zugabe von 150 μl Terminationspuffer (100 mM EDTA, 1 mg/ml BSA, 0,2 mg NaN3) beendet. 150 μl der Probe wurden in Streptavidin-beschichtete, weiße MTP (Steffens Biotechnische Analysen GmbH Nr. 08114E14.FWD) übertragen, um die biotinylierten Substrate einzufangen. Nach einstündiger Inkubation wurde nichtgebundene Radioaktivität durch fünfmaliges Waschen der Wells mit 300 μl Waschpuffer, umfassend 0,9% NaCl und 0,1% (Gew./Vol.) Tween-20, unter Einsatz eines MW-96-Plattenwäschers (BioTec) eliminiert. Die gebundene Radioaktivität wurde nach der Zugabe von 170 μl MicroScint-PS-Szintillationscocktail (Packard) unter Einsatz eines TopCount-Szintillationszählers bestimmt.
  • [Syk-Tyrosin-Kinase-Hemmungstest auf Selektivität]
  • (1) Herstellung von Syk-Protein
  • Ein cDNA-Fragment, das für einen menschlichen offenen Syk-Leseraster kodiert, wurde aus der vollständigen RNA einer menschlichen Burkitt-Lymphom-B-Zelllinie, Raji (American Type Culture Collection) unter Einsatz des RT-PCR-Verfahrens kloniert. Das cDNA-Fragment wurde in pAcG2T (Pharmingen, San Diego, Kalif.) insertiert, um einen Baculovirus-Transfervektor zu erstellen. Dann wurde der Vektor gemeinsam mit dem linearisierten Baculovirus (BaculoGoldTM, Pharmingen) eingesetzt, um Sf21-Zellen (Invitrogen, San Diego, Kalif.) zu transfizieren.
  • Das erzeugte rekombinante Baculovirus wurde in Sf21-Zellen kloniert und amplifiziert. Sf21-Zellen wurden mit diesem amplifizierten Virus mit hohem Titer infiziert, um ein chimäres, mit Glutathion-S-transferase (GST) fusioniertes Protein von Syk-Kinase zu produzieren.
  • Das resultierende GST-Syk wurde unter Einsatz einer Glutathion-Säule (Amersham Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Schweden) gemäß den Herstellerhinweisen gereinigt. Mittels SDS-PAGE wurde bestätigt, dass die Reinheit des Proteins mehr als 90% betrug.
  • (2) Peptidsynthese
  • Als Nächstes wurde ein Peptidfragment mit 30 Resten, umfassend zwei Tyrosinreste, KISDFGLSKALRADENYYKAQTHGKWPVKW, mittels eines Peptidsynthesizers synthetisiert. Das N-Ende des Fragments wurde dann biotinyliert, um ein biotinyliertes Aktivierungsschleifenpeptid (AL) zu erhalten.
  • (3) Messung der Syk-Tyrosin-Kinase-Aktivität
  • Alle Reagenzien wurden mit dem Syk-Kinase-Testpuffer (50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 mM MgCl2, 0,1 mM Na3VO4, 0,1% BSA, 1 mM DTT) verdünnt. Zunächst wurde ein Gemisch (35 μl), umfassend 3,2 μg GST-Syk und 0,5 μg AL, in jeden Well von 96-Well-Platten gefüllt. Dann wurden 5 μl einer Testverbindung in Gegenwart von 2,5%igem Dimethylsulfoxid (DMSO) zu jedem Well zugesetzt. Zu diesem Gemisch wurden 300 μM ATP (10 μl) zur Initiation der Kinase-Reaktion zugesetzt. Das endgültige Reaktionsgemisch (50 μl) bestand aus 0,65 nM GST-Syk, 3 μM AL, 30 μM ATP, einer Testverbindung, 025% DMSO und einem Syk-Kinase-Testpuffer.
  • Das Gemisch wurde 1 h lang bei Raumtemperatur (RT) inkubiert, und die Reaktion wurde durch Zugabe von 120 μl Terminationspuffer (50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 10 mM EDTA, 500 mM NaCl, 0,1% BSA) beendet. Das Gemisch wurde in Streptavidinbeschichtete Platten übertragen und 30 min lang bei Raumtemperatur inkubiert, um Biotin-AL mit den Platten zu kombinieren. Nach dreimaligem Waschen der Platten mit Tris-gepufferter Kochsalzlösung (TBS) (50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 138 mM NaCl, 2,7 mM KCl), umfassend 0,05% Tween-20, wurden 100 μl Antikörper-Lösung zuge setzt, die aus 50 mM Tris-HCl (pH 8,0), 138 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1% BSA, 60 ng/ml monoklonalem Anti-Phosphotyrosin-Antikörper 4G10 (Upstate Biotechnology) bestand, der zuvor unter Einsatz des Sets von Amersham Pharmacia mit Europium markiert worden war, und bei Raumtemperatur 60 min lang inkubiert. Nach dem Waschen wurden 100 μl Enhancementlösung (Amersham Pharmacia Biotech) zugesetzt, und die zeitlich aufgelöste Fluoreszenz wurde mittels der Multi-Label-Zählvorrichtung ARVO (Wallac Oy, Finnland) bei 340 nm Anregung und 615 nm Emission mit einer Verzögerung von 400 ms und einem Fenster von 400 ms gemessen.
  • [Messung der RANTES-Produktion durch A549-Zellen als Reaktion auf TNF-α]
  • (1) Herstellung von A549-Zellen
  • Die menschliche A549-Lungenepithel-Zelllinie (ATCC Nr. CCL-885) wurde in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (D-MEM, Nikken Biomedical Institute), das mit 10% FCS (Gibco), 100 U/ml Penicillin, 100 μg/ml Streptomycin und 2 mM Glutamin ergänzt war (Nährmedium), aufbewahrt. 40.000 (4 × 104) Zellen (80 μl/Well) wurden in jeden Well einer 96-Well-Flachboden-Gewebekulturplatte (Falcon Nr. 3072) geimpft. Die Platte wurde 2 h lang stehen gelassen, wodurch die Zellen am Boden jedes Wells hafteten. Zu jedem Well wurden 10 μl Träger (1% DMSO), Verdünnungsreihen der Testverbindungen in 1% DMSO oder 5 nM Dexamethason in 1% DMSO als Referenz zugesetzt. Das Gemisch (90 μl/Well) wurde 1 h lang bei 37°C inkubiert. Nach 1 h wurde 1 μg/ml TNF-α (10 μl) in Nährmedium zum Gemisch zugesetzt, um 100 μl Reaktionsgemisch zu erhalten. Das Reaktionsgemisch wurde 24 h lang inkubiert, um die Zellen mit 100 ng/ml TNF-α zu stimulieren. Es wurden auch Zellen mit Träger ohne TNF-α-Stimulierung hergestellt.
  • (2) Enzym-Immuntest
  • Die Konzentration von durch die Zellen in den Überständen in jedem Well freigesetztem RANTES wurde unter Einsatz eines quantitativen Sandwich-Enzym-Immuntestverfahrens ermittelt. Zunächst wurden 2 μg/ml Maus-Anti-huRANTES-mAB (R&D Systems, Nr. mAb678) in PBS-Puffer (pH 7,4, 100 μl) in jeden Well einer 96-Well- NUNC-Fluor-Platte (Nalge Nunc, New York, USA) gefüllt (Endkonzentration 200 ng/Well), und die Platte wurde über Nacht bei 4°C stehen gelassen, um mit dem Antikörper beschichtet zu werden. Jeder Well der Platte wurde dann mit 350 μl Waschpuffer (0,05% Tween-20, 0,85% NaCl und 25 mM Tris/HCl, pH 7,4) 3-mal gewaschen. Blockierpuffer, der 1% BSA (Sigma, 99% rein, 100 g), 5% Saccharose (Nacalai tesque, 99% rein, 500 g) und 0,02% Azid (Nacalai tesque, 100%, 500 g) enthielt, wurde (200 μl) zu jedem Well zugesetzt, wonach die Platte 4 h lang stehen gelassen wurde, um die Antikörperbeschichtung zu stabilisieren.
  • Dann wurden 50 μl der oben in (1) hergestellten Zellkulturüberstände in jeden Well der mit Antikörper beschichteten 96-Well-NUNC-Fluor-Platte zugesetzt. Rekombinantes menschliches RANTES (Pepro Tech, Inc., Nr. 300-06) wurde als Standard für die Bestimmung der RANTES-Produktion (linearer Bereich zwischen 1 und 10 ng/ml) herangezogen. Eu-markierte Maus-Anti-huRANTES-mAb (60 ng/ml: R&D Systems Nr. mAb278) in mit 1% BSA und 0,05% Tween-20 ergänztem PBS wurden (50 μl) zu jedem Well zugesetzt. Die Reaktionsgemische wurden bei Raumtemperatur 4 h lang inkubiert. Nach fünfmaligem Waschen mit Waschpuffer (0,05% Tween-20, 0,85% NaCl und 25 mM Tris/HCl, pH 7,4, 350 μl/Well) unter Einsatz eines Sera-Wäschers (Bio-Tech, Nr. MW-96R) wurde die Enhancementlösung (DELFIA, Nr. 1244-405, 100 μl/Well) zu jedem Well zugesetzt. Die Platte wurde 10 min lang bei Raumtemperatur unter mäßigem Schütteln inkubiert. Die Fluoreszenzintensität wurde unter Einsatz eines DELFIA-Fluorimeters (Wallac) gemessen. Die Anregung erfolgte bei 340 nm, und die Emission wurde bei 615 nm gemessen.
  • [Messung der IL-2-Produktion in Jurkat-T-Zellen als Reaktion auf Antikörperstimulierung]
  • IL-2-Produktion wurde in Jurkat-T-Zellen (E6-1-Klon; ATCC Nr. TIB-152) als Reaktion auf die Stimulierung mit Anti-CD3/Anti-CD28-Antikörpern gemessen.
  • (1) Herstellung immobilisierter Antikörper
  • Zunächst wurden Anti-CD3-Antikörper (400 ng/Well, Nichirei, NU-T3 4 μg/ml in 100 μl Dulbeccos PBS) in jeden Well einer 96-Well-Platte (Falcon Nr. 3072) gefüllt, und die Platte wurde 2 h lang bei Raumtemperatur stehen gelassen, um mit dem Antikörper beschichtet zu werden. Jeder Well der Platte wurde dann 3-mal mit 250 μl PBS gewaschen.
  • (2) Herstellung einer Jurkat-Zellkultur
  • Jurkat-T-Zellen wurden in mit 10% hitzeinaktiviertem fötalem Kälberserum, 2 mM 1-Glutamin, 100 U/ml Penicillin G und 100 μg/ml Streptomycin ergänztem RPMI 1640 Medium (Nährmedium) kultiviert. 200.000 (2 × 105) Zellen (190 μl/Well) wurden in jeden Well von 96-Well-Gewebekulturplatten mit U-förmigem Boden (Falcon Nr. 3077) geimpft. Zu jedem Well wurden 10 μl Träger (0,2% DMSO), Verdünnungsreihen der Verbindungen der vorliegenden Erfindung in 0,2% DMSO oder 25 nM Cyclosporin A als Referenz in 0,2% DMSO zugesetzt. Das Gemisch (200 μl) wurde 1 h lang bei 37°C in einer befeuchteten Umgebung mit 5% CO2 inkubiert.
  • (3) Stimulierung der Zellen
  • Das in (2) erhalten Reaktionsgemisch (100 μl) wurde in jeden Well der unter (1) hergestellten Antikörper-immobilisierten Platte gefüllt. Zu diesem Well wurden Anti-CD28-Antikörper (Nichirei, KOLT-2, 6 μg/ml in Zellnährmedium, 50 μl/Well) und 2,5 μg/ml Ziegen-Anti-Maus-κ-Kette-Antikörper (Bethyl Laboratories, (Kat-Nr. A90–119A), 10 μg/ml in Nährmedium, 50 μl/Well) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch in jedem Well wurde 24 h lang bei 37°C inkubiert, um die Zellen mit den immobilisierten Anti-CD3-Antikörpern (400 ng/Well) und Anti-CD28-Antikörpern (1,5 μg/ml) zu stimulieren und dann Rezeptoren auf den Zellen mit den Anti-Maus-κ-Kette-Antikörpern (2,5 μg/ml) zu vernetzen.
  • (4) Messung der IL-2-Produktion
  • Die Überstände der Reaktionsgemische wurden dann gesammelt. Die IL-2-Konzentration in den Überständen wurde unter Einsatz eines DuoSetTM-ELISA-Develop ment-Sets (Genzyme Techne, Minneapolis, USA) gemäß den Empfehlungen des Herstellers bestimmt. Zunächst wurden 2 μg/ml Maus-Anti-hulL-2-Ab in PBS-Puffer (100 μl) in jeden Well einer 96-Well-Platte (NUNC, MaxisorpTM) gefüllt, und die Platte wurde über Nacht bei 4°C stehen gelassen, um mit dem Antikörper beschichtet zu werden. Jeder Well der Platte wurde dann 5-mal mit 350 μl Waschpuffer, der PBS, 0,05% Tween-20 (Nakalai tesque) enthielt, unter Einsatz eines Sera-Wäschers (Bio-Tech, Nr. MW-96R) gewaschen. Nach zweistündiger Inkubation bei Raumtemperatur wurde der Puffer verworfen, und 50 μl Nährmedium wurden zugesetzt. Als Nächstes wurden 50 μl des oben in (3) hergesellten Überstands der Kultur der stimulierten Zellen in jeden Well der mit Maus-Anti-hulL-2-Antikörper beschichteten 96-Well-Platte gefüllt. Rekombinantes menschliches IL-2 (Genzyme Techne) wurde als Standard für die Bestimmung der IL-2-Produktion (linearer Bereich zwischen 200 und 5.400 pg/ml) herangezogen. Die Reaktionsgemische wurden 1 h lang bei Raumtemperatur inkubiert. Nach fünfmaligem Waschen wurden 100 μl biotinylierter Kaninchen-Anti-hulL-2-Antikörper (Genzyme Techne, 1,25 μg/ml) in Verdünnungspuffer zu jedem Well zugesetzt und 1 h lang bei Raumtemperatur inkubiert. Nach fünfmaligem Waschen wurden 100 μl Streptavidin-konjugierte Meerrettichperoxidase (Genzyme Techne, 1/1000 in Verdünnungspuffer) zu jedem Well zugesetzt. Nach 20 min wurde jeder Well der Platte 5-mal mit Waschpuffer (350 μl/Well) gewaschen. Substrat und H2O2 (TMBZ-Peroxidasedetektionsset, SUMILON Nr. ML-1120T) wurden zu dem Gemisch zugesetzt, und das Gemisch wurde bei Raumtemperatur stehen gelassen. Die Reaktion wurde nach 20 min durch die Zugabe von 2 N H2SO4 beendet. Die optische Dichte bei 450 nm wurde unter Einsatz eines Mikroplatten-Lesers (Labosystems, Multiscan Multisoft) gemessen. Die Quantifizierung der IL-2-Produktion in jeder Probe erfolgte durch Vergleich der optischen Dichte jeder Probe mit der Standardkurve.
  • [Maus-LPS-induzierte TNF-α-Produktion]
  • Acht Wochen alte weibliche BALB/c-Mäuse wurden in zwei Gruppen unterteilt, eine Kontrollgruppe und eine behandelte Gruppe. Eine Lösung, umfassend 200 μg LPS pro Maus in 0,9% physiologischem Salz, wurde mittels intraperitonealer (ip-)Injek tion in die Kontrollmäuse injiziert. Den Mäusen in der behandelten Gruppe wurde zunächst 30 min vor der LPS-Injektion Verbindungen der vorliegenden Erfindung i.p. injiziert. Unter Anästhesie mit Pentobarbital (80 mg/kg, i.p.) wurde aus der hinteren Venenhöhle der behandelten Mäuse und der Kontrollmäuse 90 min nach der LPS-Injektion Blut abgenommen und in eine 96-Well-Platte gefüllt, die 2% EDTA-Lösung enthielt. Das Plasma wurde mittels zehnminütiger Zentrifugieren mit 1800 U/min bei 4°C abgetrennt und dann mit dem 4fachen Volumen Phosphatpuffersalzlösung (pH 7,4), umfassend 1% Rinderserumalbumin, verdünnt. Die TNF-α-Konzentration wurde unter Einsatz eines ELISA-Sets (Pharmingen, San Diego, Kalif.) bestimmt.
  • Der mittlere TNF-α-Spiegel in 5 Mäusen jeder Gruppe wurde bestimmt und der Reduktionsprozentsatz der TNF-α-Spiegel wurde berechnet. Die behandelten Mäuse wiesen im Vergleich mit den Kontrollmäusen einen deutlichen Rückgang des TNF-α-Spiegels auf. Das Ergebnis deutet an, dass die Verbindungen der vorliegenden Erfindung die LPS-induzierte Cytokin-Aktivität einschränken können.
  • In-vitro-Testergebnisse und Zelltestergebnisse (A549) sind in den Beispielen und den Tabellen zu den Beispielen nachstehend angeführt. Die Daten entsprechen den Verbindungen, die durch Festphasensynthese gewonnen wurden und dadurch eine Reinheit von etwa 40 bis 90% aufwiesen. Aus praktischen Gründen sind die Verbindungen wie folgt in vier Aktivitätsklassen eingeteilt:
    In-vitro-IC50 = A (= oder <) 0,5 μM < B (= oder <) 2 μM < C (= oder <) 10 μM < D
    Zellulärer IC50 = A (= oder <) 1 μM < B (= oder <) 10 μM < C
  • Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung weisen auch in anderen Zellaktivitäts- und In-vivo-Tests ausgezeichnete Selektivität und hohe Aktivität auf.
  • BEISPIELE
  • Die vorliegende Erfindung wird nachstehend anhand von Beispielen detailliert beschrieben, die in keiner Weise als Definition der Grenzen der vorliegenden Erfindung auszulegen sind.
  • In den nachstehenden Beispielen beziehen sich alle quantitativen Daten, sofern nicht anders angegeben, auf Gewichtsprozent. 1H-NMR-Spektren wurden mittels Bruker DRX-300 (300 MHz für 1H) in CDCl3 aufgezeichnet. Chemische Verschiebungen sind in Teilen pro Million Teile (ppm) in Bezug auf Tetramethylsilan (TMS) als innerer Standard bei 0 ppm angegeben. Kopplungskonstanten (J) sind in Hertz angegeben, und die Abkürzungen s, d, t, q, m und br stehen jeweils für Singulett, Dublett, Triplett, Quartett, Multiplett bzw. breit. Die Massenbestimmungen wurden mittels MAT95 (Finnigan MAT) durchgeführt.
  • Herstellungsverfahren der Ausgangsverbindungen:
  • Ausgangsverbindung 1A: 2-Benzyloxyacetophenon
    Figure 00330001
  • Ein Gemisch aus 2'-Hydroxyacetophenon (68,1 g, 0,500 mol), Benzylbromid (65,4 ml, 94,1 g, 0,550 mol) und K2CO3 (103 g, 0,750 mol) in Aceton (1,00 l) wurde über Nacht gerührt und rückflusserhitzt. Das resultierende Gemisch wurde unter reduziertem Druck eingeengt, um einen Rückstand zu erhalten. Der erhaltene Rückstand wurde in einem Gemisch aus AcOEt und Wasser gelöst und anschließend mit AcOEt extrahiert. Der Extrakt wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt, um ein Rohmaterial zu er geben. Das Rohmaterial wurde durch Destillation unter reduziertem Druck gereinigt, um die Ausgangsverbindung 1A als farbloses Öl (100 g, Ausbeute 80%) zu ergeben.
  • Ausgangsverbindung 1A': 1-{2-(Cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}ethanon
    Figure 00340001
  • Zu einer gerührten Lösung von 1-(2,6-Dihydroxyphenyl)ethanon (50,0 g, 328 mmol) in Aceton (1000 ml) wurden Kaliumcarbonat (227 g, 1643 mmol) und (Brommethyl)cyclopropan (35,1 ml, 361 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde bei 50°C 2 Tage lang gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde über Celite® filtriert, und dann wurde das Filtrat unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser verdünnt und mit Ethylacetat extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Hexan suspendiert. Dann wurde die Suspension 30 min lang bei 80°C gerührt. Die Lösung wurde filtriert, und das Filtrat wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen. Der resultierende weiße Feststoff wurde abfiltriert, mit Hexan gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um 1-{2-[(Cyclopropylmethyl)oxy]-6-hydroxyphenyl}ethanon als hellgelben Feststoff zu erhalten (56,3 g, Ausbeute: 83%).
  • Zu einer gerührten Lösung von 1-{2-[(Cyclopropylmethyl)oxy]-6-hydroxyphenyl}ethanon (56,3 g, 272 mmol) in Aceton (1000 ml) wurden Kaliumcarbonat (188 g, 1364 mmol), 4-Methoxybenzylchlorid (40,9 ml, 300 mmol) und Tetrabutylammoniumiodid (20,2 g, 54,6 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde unter Rückfluss über Nacht gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abkühlen gelassen, über Celite® filtriert, und dann wurde das Filtrat unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mit Wasser verdünnt und mit Ethylacetat extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der resultierende weiße Feststoff wurde aus Ethanol umkristallisiert, abfiltriert, mit Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um die Ausgangsverbindung 1A' als weißen Feststoff zu erhalten (79,2 g, Ausbeute: 89%).
  • Ausgangsverbindung 1B: 2'-[tert-Butyl(dimethyl)silyl]oxyacetophenon
    Figure 00350001
  • Zu einer gerührten Lösung von 2'-Hydroxyacetophenon (10,00 g, 73,45 mmol) in DMF (150 ml) wurden Imidazol (6,00 g, 88,14 mmol) und tert-Butyldimethylchlorsilan (12,18 g, 80,79 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde 60 h lang bei Raumtemperatur gerührt und anschließend mit Diethylether verdünnt. Die resultierende organische Phase wurde nacheinander mit Wasser, wässriger Kaliumhydrogensulfatlösung und Kochsalzlösung gewaschen. Dann wurde die gewaschene organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Hexan:Ethylacetat = 9:1 bis 4:1) gereinigt, um die Ausgangsverbindung 1B als farbloses Öl (19,83 g, Ausbeute 92%) zu ergeben.
  • Ausgangsverbindung 1C: 3-Benzyloxypicolinonitril
    Figure 00360001
  • Eine Suspension von 3-Hydroxypicolinonitril (3,00 g, 25,0 mmol), das gemäß Synthesis 316 (1983) und J. Organopolysiloxan. Chem. 48, 1375 (1983) hergestellt wurde, Kaliumcarbonat (5,40 g, 39,1 mmol) und Benzylbromid (5,10 g, 29,8 mmol) in Aceton (150 ml) wurde 20 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde filtriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Ethylacetat:n-Hexan = 1:3 bis 1:2) und Umkristallisation aus Ethylacetat:n-Hexan = 1:4 gereinigt, um die Ausgangsverbindung 1C als farbloses Pulver (4,354 g, Ausbeute 83%) zu ergeben.
  • Ausgangsverbindung 1D: 2-Acetyl-3-benzyloxypyridin
    Figure 00360002
  • Zu einer gekühlten Lösung (0°C) von 3-Benzyloxypicolinonitril (2,50 g, 11,9 mmol) in Tetrahydrofuran (100 ml) wurden 0,92 M Methylmagnesiumbromid in Tetrahydrofuran (150 ml, 138 mmol) zugesetzt und 30 min lang bei 0°C und anschließend bei Raumtemperatur 4 h lang gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser (2 l) gegossen und mit 10%iger Schwefelsäure (500 ml) angesäuert. Nach 30-minütigem Rühren wurde das Reaktionsgemisch zu Natriumbicarbonat (100 g) langsam zugesetzt und mit Ethylacetat extrahiert. Die resultierende organische Phase wurde mit gesättigten Natriumchlorid gewaschen, über wasserfreiem Na2SO4 getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Ethylacetat:n-Hexan = 1:3) gereinigt, um die Ausgangsverbindung 1D als farbloses Öl (2,49 g, Ausbeute 92%) zu ergeben.
  • Ausgangsverbindung 2: 2-Amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)nicotinonitril
    Figure 00370001
  • Ein Gemisch aus 2'-[tert-Butyl(dimethyl)silyl]oxyacetophenon (Ausgangsverbindung 1B, 20,0 g, 79,9 mmol), 3-Nitrobenzaldehyd (12,1 g, 79,9 mmol), Malononitril (5,3 g, 79,9 mmol), Ammoniumacetat (9,2 g, 119,8 mmol) und Toluol (25 ml) wurde 3 h lang unter Rückfluss gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ethylacetat und Wasser extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Hexan:Ethylacetat = 9:1 bis 4:1) gereinigt, um 2-Amino-6-(2-{[tert-Butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)-4-(3-nitrophenyl)nicotinonitril als weißen Feststoff (6,5 g, 18%) zu ergeben.
  • Ein Gemisch aus 2-Amino-6-(2-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)-4-(3-nitrophenyl)nicotinonitril (3,2 g, 7,2 mmol), 10% Pd-C (0,25 g) und Ethylacetat (1 l) wurde 12 h lang unter Wasserstoffatmosphäre (2,5 atm) bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde über ein Celite-Kissen filtriert, und das Filtrat wurde unter reduziertem Druck eingeengt, um Ausgangsverbindung 2 zu ergeben, die ohne weitere Reinigung in der nächsten Stufe eingesetzt wurde (2,6 g, Ausbeute 87%).
  • Ausgangsverbindung 3: 2-Amino-4-[3-amino-4-(1-pyrrolidinyl)phenyl]-6- (2-benzyloxyphenyl)nicotinonitril
    Figure 00380001
  • Ein Gemisch aus 2-Benzyloxyacetophenon (5,00 g, 22,10 mmol), 4'-Chlor-3'-nitrobenzaldehyd (8,20 g, 44,19 mmol), Malononitril (2,92 g, 44,19 mmol) und Ammoniumacetat (8,52 g, 110,48 mmol) in Toluol (15 ml) wurde 3 h lang bei 130°C gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das Gemisch mit Ethylacetat und THF verdünnt. Die organische Phase wurde zweimal mit Wasser gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Ethanol suspendiert. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Ethylacetat gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um 2-Amino-6-(2-benzyloxyphenyl)-4-(4-chlor-3-nitrophenyl)nicotinonitril als weißen Feststoff (6,40 g, Ausbeute 63%) zu ergeben.
  • Zu einer gekühlten (0°C) Lösung von 2-Amino-6-(2-benzyloxyphenyl)-4-(4-chlor-3-nitrophenyl)nicotinonitril (1,000 g, 2,189 mmol) in DMF (10 ml) wurde Pyrrolidin (0,778 g, 10,943 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde 2 h lang bei Raumtemperatur und anschließend 2 h lang bei 60°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Ethanol suspendiert, und der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Ethylacetat gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um 2-Amino-6-(2-benzyloxyphenyl)-4-[3-nitro-4-(1-pyrrolidinyl)phenyl]nicotinonitril als gelben Feststoff (0,990 g, Ausbeute 92%) zu ergeben.
  • Zu einer Suspension von 2-Amino-6-(2-(benzyloxy)phenyl)-4-[3-nitro-4-(1-pyrrolidinyl)phenyl]nicotinonitril (1,000 g, 2,043 mmol) und Fe-Pulver (3,000 g) in Ethanol (180 ml) wurde Wasser (10 ml) und dann Ammoniumchlorid (1,000 g) zugesetzt. Das Gemisch wurde 3 h lang unter Rückfluss gerührt. Das Gemisch wurde über ein Celite-Kissen filtriert und das Filtrat unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Ethanol suspendiert, und der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Ethylacetat gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um Ausgangsverbindung 3 als weißen Feststoff (0,700 g, Ausbeute 75%) zu ergeben.
  • Ausgangsverbindung 4: 2-Amino-4-[3-amino-4-(dimethylamino)phenyl]-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril
    Figure 00390001
  • Ein Gemisch aus 2-(4-Methoxybenzyloxy)acetophenon (5,663 g, 22,097 mmol), 4'-Chlor-3'-nitrobenzaldehyd (8,201 g, 44,193 mmol), Malononitril (2,920 g, 44,193 mmol) und Ammoniumacetat (8,516 g, 110,486 mmol) in Toluol (15 ml) wurde 4 h lang bei 130°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mit Ethanol suspendiert. Der resultierende Feststoff wurde abfiltriert, mit Ethanol, Ethylacetat und Diethylether gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um 2-Amino-4-(4-chlor-3-nitrophenyl)-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril als weißen Feststoff (5,560 g, Ausbeute 52%) zu ergeben.
  • Zu einer gerührten Lösung von 2-Amino-4-(4-chlor-3-nitrophenyl)-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril (0,850 g, 1,746 mmol) in DMF (5 ml) einschließlich Triethylamin (1,2 ml) wurde Dimethylamin-hydrochlorid (0,996 g, 12,220 mmol) zugesetzt und das Gemisch 3 h lang bei 70°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Wasser gequencht und mit Ethylacetat extrahiert. Die organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Ethanol suspendiert. Der resultierende Feststoff wurde abfiltriert, mit Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um 2-Amino-4-[4-dimethylamino)-3-nitrophenyl]-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril als orangefarbenes Öl (0,820 g, Ausbeute 95%) zu ergeben.
  • Zu einer gerührten Suspension von 2-Amino-4-[4-(dimethylamino)-3-nitrophenyl]-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril (0,815 g, 1,654 mmol) in Ethanol (150 ml) wurde Fe-Pulver (5,000 g), Wasser (20 ml) und Ammoniumchlorid (1,000 g) zugesetzt. Das Gemisch wurde 12 h lang unter Rückfluss gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und über ein Celite-Kissen filtriert. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Ethanol suspendiert. Der resultierende Feststoff wurde abfiltriert, mit Ethanol und Wasser gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um Ausgangsverbindung 4 als orangefarbenes Öl (0,500 g, Ausbeute 65%) zu ergeben.
  • Ausgangsverbindung 5: 3-(2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)benzoesäure
    Figure 00400001
  • Ein Gemisch aus 2-{(4-Methoxybenzyl)oxy}acetophenon (0,26 g, 1,00 mmol), Methyl-3-formbenzoat (0,16 g, 1,00 mmol), Malononitril (0,07 g, 1,00 mmol) und Ammoniumacetat (0,23 g, 3,00 mmol) in Xylol (10 ml) wurde über Nacht auf 120°C (Radtemperatur) erhitzt. Das resultierende Gemisch wurde unter reduziertem Druck eingeengt und der Rückstand mit Wasser verdünnt und mit Ethylacetat extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Das Rohmaterial wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Hexan:Ethylacetat = 70:30) gereinigt, um 2-Amino-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-(3-methoxycarbonylphenyl)nicotinonitril (0,200 g, Ausbeute 43%) zu ergeben.
  • Ein Gemisch aus 2-Amino-6-{2-[(methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-(3-methoxycarbonylphenyl)nicotinonitril (0,20 g, 0,43 mmol), 4 N NaOH-Lösung (1,0 ml) und THF (5,0 ml) wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser gegossen und mit Ethylether zweimal extrahiert. Zu dieser abgetrennten wässrigen Phase wurde 1 N KHSO4-Lösung zugesetzt, bis das Gemisch sauer reagierte. Der resultierende Niederschlag wurde abfiltriert und unter reduziertem Druck getrocknet, um Ausgangsverbindung 5 als graues Pulver (0,16 g, Ausbeute 81%) zu ergeben.
  • Ausgangsverbindung 6: tert-Butyl-2-amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-hydroxyphenyl)nicotinat
    Figure 00410001
  • Ein Gemisch aus 2'-Benzyloxyacetophenon (3,00 g, 13,25 mmol), 3'-Nitrobenzaldehyd (2,00 g, 13,25 mmol), tert-Butylcyanoacetat (1,87 g, 13,25 mmol), Ammoniumacetat (3,07 g, 39,77 mmol) in p-Xylol (10 ml) wurde 2 h bei 120°C gerührt.
  • Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Hexan:Ethylacetat = 5:1 bis 2:1) gereinigt, um tert-Butyl-2-amino-6-[2-(benzyloxy)phenyl]-4-(3-nitrophenyl)nicotinat als gelbes Öl (2,51 g, Ausbeute 38%) zu ergeben.
  • Ein Gemisch aus tert-Butyl-2-amino-6-[2-(benzyloxy)phenyl]-4-(3-nitrophenyl)nicotinat (2,50 g, 5,02 mmol) und 10% Pd-C (0,20 g) in Ethylacetat (20 ml) wurde unter Wasserstoffatmosphäre 5 h lang bei 2 atm gerührt. Das Gemisch wurde über ein Celite-Kissen filtriert, um Pd-C zu entfernen, und mit Ethylacetat gewaschen. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck eingeengt und der Rückstand mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Hexan:Ethylacetat = 4:1 bis 3:2) gereinigt, um Ausgangsverbindung 6 als blassgelbes Öl (1,05 g, Ausbeute 56%) zu ergeben.
  • Beispiel 1-1
  • N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-5-oxotetrahydro-2-furancarboxamid
    Figure 00420001
  • Zu einem gekühlten (0°C) Gemisch aus Pyridin (0,20 ml, 2,424 mmol), 2-Amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-{(tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)nicotinonitril (Ausgangsverbindung 2, 1,010 g, 2,424 mmol), Acetonitril (10 ml) und THF (2 ml) wurde eine Lösung von 5-Oxotetrahydro-2-furancarbonylchlorid (0,360 g, 2,424 mmol) in Acetonitril (4 ml) zugetropft. Das Gemisch wurde 2 h lang gerührt, auf Raumtemperatur erwärmen gelassen, 1 h lang gerührt und mit Ethylacetat und Wasser extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Hexan:Ethylacetat = 7:3 bis 5:5) gereinigt, um N-{3-[2-Amino-6-(2-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)-3-cyano-4-pyridinyl]phenyl}-5-oxotetrahydro-2-furancarboxamid als weißen Feststoff (0,982 g, Ausbeute 77%) zu ergeben.
  • Zu einer gekühlten (0°C) Lösung von N-{3-[2-Amino-6-(2-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)-3-cyano-4-pyridinyl]phenyl}-5-oxotetrahydro-2-furancarboxamid (0,400 g, 0,757 mmol) in THF (5 ml) wurde eine Lösung von n-Tetrabutylammoniumfluorid in THF (1 M, 2 ml) zugetropft. Nach 30-minütigen Rühren wurde das Gemisch mit Wasser (5 ml) gequencht. Der resultierende Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser und Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-5-oxotetrahydro-2-furancarboxamid als weißen Feststoff (0,293 g, Ausbeute 93%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 414,424
    Massenspektrometrie: 415
    Schmelzpunkt: 155°C (Zers.)
    In-vitro-Aktivitätsgrad: B
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-B
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 2,23-2,38 (2H, m), 2,55-2,59 (2H, m), 5,08-5,12 (1H, m), 6,87-6,93 (2H, m), 7,32-7,47 (4H, m), 7,50-7,56 (2H, m), 782 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,91 (1H, s), 8,02 (1H, d, J = 8,0 Hz), 10,47 (1H, s).
  • Beispiel 1-2
  • Natrium-5-({3-[2-amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat
    Figure 00440001
  • Zu einer Suspension von N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-5-oxotetrahydro-2-furancarboxamid (0,250 g, 0,603 mmol) in Methanol (10 ml) wurde 2 N NaOH-Lösung (0,3 ml) zugetropft. Nachdem das Gemisch 10 min lang gerührt wurde, war der nicht lösliche Feststoff abfiltriert. Das Filtrat wurde unter reduziertem Druck eingeengt und der Rückstand aus Methanol und Ethylether umkristallisiert. Der resultierende Feststoff wurde unter Argonatmosphäre abfiltriert, mit Ethylether gewaschen und unter reduziertem Druck gewaschen, um Natrium-5-({3-[2-amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat als blassgelben Feststoff (0,165 g, Ausbeute 60%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 454,421
    Massenspektrometrie: 433
    Schmelzpunkt: 199°C (Zers.)
    In-vitro-Aktivitätsgrad: B
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-C
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1,72-1,98 (2H, m), 2,18-2,25 (2H, m), 4,01 (1H, dd, J = 3,2, 7,5 Hz), 6,60-6,85 (2H, m), 7,09-7,30 (3H, m), 7,32 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,46 (1H, t, J = 7,9 Hz), 7,67 (1H, br), 7,93 (1H, d, J = 8,2 Hz), 8,01-8,05 (2H, m), 9,91 (1H, s), 10,38 (1H, br s).
  • Beispiele 1-03 bis 1-23
  • Die in Tabelle 1 angeführten Verbindungen in den Beispielen 1-03 bis 1-23 wurden auf ähnliche Weise wie in den obigen Beispielen 1-01 und 1-02 beschrieben synthetisiert.
  • Tabelle 1
    Figure 00450001
  • Figure 00460001
  • Figure 00470001
  • Figure 00480001
  • Beispiel 2-1
  • N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid-hydrochlorid
    Figure 00490001
  • Zu einer gekühlten (0°C) Lösung von 3-(1-Piperidinyl)propansäure (0,676 g, 3,601 mmol) in Dichlormethan wurde Oxalylchlorid (0,471 ml, 5,401 mmol) zugesetzt und 12 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde zu der Lösung von 2-Amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)nicotinonitril (Ausgangsverbindung 2, 1,500 g, 3,601 mmol) in Acetonitril (3 ml) zugesetzt und das resultierende Gemisch 1 h lang bei 0°C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ethylacetat und Wasser extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Die Reinigung wurde mittels Kieselgel-Säulenchromatographie (Chloroform:Methanol = 10:1) durchgeführt, um N-{3-[2-Amino-6-(2-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)-3-cyano-4-pyridinyl]phenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid als weißen Feststoff (0,860 g, Ausbeute 45%) zu ergeben.
  • Zu einer gerührten Lösung von N-{3-[2-Amino-6-(2-{[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy}phenyl)-3-cyano-4-pyridinyljphenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid (0,150 g, 0,270 mmol) in 1,4-Dioxan (5 ml) wurde 4 N HCl in Dioxan (2 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur 12 h lang gerührt. Der resultierende Niederschlag wurde abfiltriert, mit Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um N-{3[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid-hydrochlorid (0,011 g, Ausbeute 9%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 477,998
    Massenspektrometrie: 442
    In-vitro-Aktivitätsgrad: B
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-B
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1,38-1,50 (1H, m), 1,71-1,84 (5H, m), 2,76-3,04 (4H, m), 3,35-3,51 (4H, m), 6,90-6,98 (2H, m), 7,38-7,41 (3H, m), 7,54 (1H, t, J = 7,9 Hz), 7,83 (1H, d, J = 8,2 Hz), 7,95 (1H, s), 8,06 (1H, dd, J = 1,3, 8,2 Hz), 10,42 (1H, brs), 10,64 (1H, brs).
  • Beispiele 2-02 bis 2-19
  • Die in Tabelle 2 angeführten Verbindungen der Beispiele 2-02 bis 2-19 wurden auf ähnliche Weise wie im obigen Beispiel 2-01 beschrieben synthetisiert.
  • Tabelle 2
    Figure 00510001
  • Figure 00520001
  • Figure 00530001
  • Figure 00540001
  • Beispiel 3-1
  • N-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(1-pyrrolidinyl)phenyl]-3-(1-piperidinyl)propanamid-hydrochlorid
    Figure 00540002
  • Zu einer gerührten Lösung von 2-Amino[3-amino-4-(1-pyrrolidinyl)phenyl]-6-[2-(benzyloxyphenyl)nicotinonitril (Ausgangsverbindung 3, 0,166 g, 0,360 mmol) in Pyridin (3 ml) wurde 3-(1-Piperidinyl)propanoylchlorid-hydrochlorid (0,153 g, 0,719 mmol) bei Raumtemperatur zugesetzt und 3 h lang gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Ethylacetat und Wasser extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Ethylacetat und Ethanol suspendiert, und dann wurde der Niederschlag abfiltriert, mit Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um N-[5-[2-Amino-6-(2-benzyloxyphenyl)-3-cyano-4-pyridinyl]-2-(1-pyrrolidinyl)phenyl]-3-(1-piperidinyl)propanamid als weißen Feststoff (0,070 g, Ausbeute 32%) zu ergeben.
  • Ein Gemisch aus N-[5-[2-Amino-6-(2-benzyloxyphenyl)-3-cyano-4-pyridinyl]-2-(1-pyrrolidinyl)phenyl]-3-(1-piperidinyl)propanamid (0,140 g, 0,233 mmol), 10% Pd-C (0,150 g), Ethylacetat und Essigsäure (2,000 ml) wurde bei Raumtemperatur unter Wasserstoffatmosphäre 12 h lang gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde über ein Celite-Kissen filtriert und das Filtrat unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in THF (3 ml) gelöst, und 4 N HCl in 1,4-Dioxan (0,5 ml) wurde zur der Lösung zugesetzt. Der resultierende gelbe Feststoff wurde abfiltriert, mit THF gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um N-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(1-pyrrolidinyl)phenyl]-3-(1-piperidinyl)propanamidhydrochlorid (0,110 g, Ausbeute 86%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 547,105
    Massenspektrometrie: 511
    Schmelzpunkt: 152°C
    In-vitro-Aktivitätsgrad: B
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-B
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1,35-1,40 (1H, m), 1,67-1,80 (6H, m), 1,92 (4H, s), 2,89-2,98 (4H, m), 3,29-3,57 (8H, m), 3,58-3,60 (1H, m), 6,87-6,95 (2H, m), 7,02 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,30-7,37 (3H, m), 7,53-7,56 (2H, m), 7,98 (2H, d, J = 7,2 Hz), 9,85 (1H, s), 10,45 (1H, brs).
  • Beispiele 3-02 bis 3-17
  • Die in Tabelle 3 angeführten Verbindungen der Beispiele 3-02 bis 3-17 wurden auf ähnliche Weise wie in Beispiel 3-01 zuvor beschrieben synthetisiert.
  • Tabelle 3
    Figure 00560001
  • Figure 00570001
  • Figure 00580001
  • Figure 00590001
  • Beispiel 4-1
  • N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(dimethylamino)phenyl]-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid-hydrochlorid
    Figure 00590002
  • Zu einer gekühlten (0°C), gerührten Lösung von 2-Amino-4-[3-amino-4-(dimethylamino)phenyl]-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril (Ausgangsverbindung 4, 0,500 g, 1,724 mmol) in THF (7 ml) wurde unter Argonatmosphäre Chloracetylchlorid (0,121 g, 1,074 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde 15 min lang bei 0°C gerührt und dann zwischen Ethylacetat und gesättigtem wässrigem NaHCO3 verteilt. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Ethylacetat und Ethanol suspendiert. Der resultierende Feststoff wurde abfiltriert, mit Ethanol gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um N-[5-(2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)-2-(dimethylamino)phenyl]-2-chloracetamid als gelben Feststoff (0,410 g, Ausbeute 70%) zu ergeben.
  • Zu einer gerührten Lösung von N-[5-(2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)-2-(dimethylamino)phenyl]-2-chloracetamid (0,400 g, 0,738 mmol) in DMF (5 ml) wurde Aminomethylcyclopropan (0,192 ml, 2,214 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde 2 h lang bei 60°C gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das Gemisch mit Ethylacetat und Wasser extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Die Reinigung erfolgte mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Chloroform:Methanol = 100:2, Hexan:Ethylacetat = 1:2-1:3-1:5, 2 ×), um N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)-2-(dimethylamino)phenyl]-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid als gelbes Öl (0,130 g, Ausbeute 30%) zu ergeben.
  • Zu einer Suspension von N1-[5-(2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)-2-(dimethylamino)phenyl]-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid (0,130 g, 0,448 mmol) in Anisol (1 ml) und Wasser (1 ml) wurde Trifluoressigsäure (5 ml) zugesetzt. Das Gemisch wurde 20 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Toluol verdünnt und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in Hexan suspendiert und der Niederschlag abfiltriert. Der erhaltene Feststoff wurde in THF gelöst, und 4 N HCl in 1,4-Dioxan wurde zur Lösung zugesetzt. Der resultierende Feststoff wurde abfiltriert, mit THF und 1,4-Dioxan gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(dimethylamino)phenyl]-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid-hydrochlorid als gelben Feststoff (0,085 g, Ausbeute 77%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 493,013
    Massenspektrometrie: 457
    In-vitro-Aktivitätsgrad: B
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-B
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 0,35-0,40 (2H, m), 0,57-0,63 (2H, m), 1,05-1,08 (1H, m), 2,80 (6H, s), 2,87-2,91 (2H, m), 4,66-4,68 (2H, m), 6,87-6,94 (2H, m), 7,33-7,40 (4H, m), 7,52-7,55 (1H, m), 7,98 (1H, d, J = 7,2 Hz), 8,09 (1H, s), 9,12 (1H, brs), 10,07 (1H, brs).
  • Beispiele 4-02 bis 4-39
  • Die in Tabelle 4 angeführten Verbindungen der Beispiele 4-02 bis 4-39 wurden auf ähnliche Weise wie zuvor in Beispiel 4-01 beschrieben synthetisiert.
  • Tabelle 4
    Figure 00610001
  • Figure 00620001
  • Figure 00630001
  • Figure 00640001
  • Figure 00650001
  • Figure 00660001
  • Figure 00670001
  • Figure 00680001
  • Beispiel 5-1
  • Natrium-3-[2-amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]benzoat
    Figure 00680002
  • Ein Gemisch aus 3-(2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)benzoesäure (Ausgangsverbindung 5, 0,16 g, 0,36 mmol), Trifluoressigsäure (3,0 ml), Anisol (0,50 ml) und Wasser (0,50) wurde bei Raumtemperatur über Nacht ge rührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Toluol verdünnt und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde in THF gelöst und dann aus Hexan umkristallisiert. Der resultierende Niederschlag wurde abfiltriert und mit Hexan gewaschen und dann unter reduziertem Druck getrocknet, um 2-Amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-hydroxycarbonylphenyl)nicotinonitril (0,12 g, Ausbeute 74%) zu ergeben.
  • 2-Amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-hydroxycarbonylphenyl)nicotinonitril (0,02 g, 0,045 mmol) wurde in 4 N NaOH-Lösung (2 ml) gelöst und die resultierende Lösung mittels HPLC (ODS-Umkehrphasensäule, 10–90% CH3CN/H2O) gereinigt, um Natrium-3-[2-amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]benzoat als blassgelbes Puder (0,015 g, 95%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 353,316
    Massenspektrometrie: 332
    Schmelzpunkt: > 270°C
    In-vitro-Aktivitätsgrad: C
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-C
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 6,85-6,93 (2H, m), 7,31-7,56 (5H, m), 7,58 (1H, d, J = 3,0 Hz), 7,99-8,06 (2H, m), 8,10 (1H, s), 13,40 (1H, br s).
  • Beispiele 5-02 bis 5-05
  • Die in Tabelle 5 angeführten Verbindungen der Beispiele 5-02 bis 5-05 wurden auf ähnliche Weise wie zuvor in Beispiel 5-01 beschrieben synthetisiert.
  • Tabelle 5
    Figure 00700001
  • Beispiel 6-1
  • 3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-N-[2-(1-piperidinyl)ethyl]benzamid-trifluoracetat
    Figure 00710001
  • Zu einem gekühlten (0°C) Gemisch aus 3-(2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)benzoesäure (Ausgangsverbindung 5, 1,35 g, 3,00 mmol), N-(2-Aminoethyl)piperidin (0,420 g, 3,30 mmol) und 1-Hydroxybenzotriazol (0,490 g, 3,60 mmol) wurde 1-Ethyl-3-(3-Dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydrochlorid (0,69 g, 3,60 mmol) unter Rühren zugesetzt. Das Gemisch wurde auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und über Nacht gerührt. Der Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst und zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über MgSO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der erhaltene Feststoff wurde mit Ethylether trituriert und unter reduziertem Druck getrocknet, um 2-(1-Piperidinyl)ethyl-3-(2-amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)benzoat (0,98 g, Ausbeute 58%) zu ergeben.
  • Ein Gemisch aus 2-(1-Piperidinyl)ethyl-3-(2-amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)benzoat (0,14 g, 0,25 mmol), Trifluoressigsäure (3,00 ml), Anisol (0,50 ml) und Wasser (0,50 ml) wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Toluol verdünnt und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels HPLC (ODS-Umkehrphasensäule, 10–90% CH3CN/H2O) gereinigt, um 3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-N- [2-(1-piperidinyl)ethyl]benzamid-trifluoracetat als blassgelben Feststoff (0,061 g, Ausbeute 44%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 555,562
    Massenspektrometrie: 442
    Schmelzpunkt: 131°C (Zers.)
    In-vitro-Aktivitätsgrad: C
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-B
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1,36-1,86 (6H, m), 2,95 (2H, q, J = 10,5 Hz), 3,26-3,28 (2H, m), 3,56 (2H, d, J = 12,4 Hz), 3,66 (2H, 7 = 6,6 Hz), 6,88-6,95 (2H, m), 7,01 (1H, t, J = 7,91 Hz), 7,45 (1H, s), 7,53 (2H, s), 7,70 (1H, t, J = 7,9 Hz), 7,88 (1H, d, J = 7,54 Hz), 8,05 (2H, t, J = 7,0 Hz), 8,12 (1H, s), 8,84 (1H, t, J = 5,7 Hz), 9,02 (1H, br_s), 13,31 (1H, s).
  • Beispiele 6-02 bis 6-03
  • Die in Tabelle 6 angeführten Verbindungen der Beispiele 6-02 bis 6-03 wurden auf ähnliche Weise wie zuvor in Beispiel 6-01 beschrieben synthetisiert.
  • Tabelle 6
    Figure 00720001
  • Beispiel 7-1
  • Natrium-2-amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-hydroxyphenyl)nicotinat
    Figure 00730001
  • Ein Gemisch aus tert-Butyl-2-amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-hydroxyphenyl)nicotinat (Ausgangsverbindung 6, 0,025 g, 0,066 mmol) und Trifluoressigsäure (1 ml) wurde 2 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Nachdem das Gemisch unter reduziertem Druck eingeengt worden war, wurde der Rückstand in Acetonitril (0,5 ml) gelöst und anschließend mit gesättigter NaHCO3-Lösung (0,7 ml) versetzt. Das resultierende Gemisch wurde mittels HPLC (ODS-Umkehrphasensäule, 10–90% CH3CN/H2O) gereinigt, um Natrium-2-amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-hydroxyphenyl)nicotinat als blassgelben Feststoff (0,020 g, Ausbeute 88%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 343,320
    Massenspektrometrie: 322
    Schmelzpunkt: 140°C (Zers.)
    In-vitro-Aktivitätsgrad: C
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-D
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 4,94 (2H, s), 6,50 (1H, dd, J = 1,1, 7,9 Hz), 6,63 (1H, d, J = 7,5 Hz), 6,68 (1H, br), 6,73 (2H, s), 6,77-6,83 (2H, m), 6,95 (1H, d, J = 7,9 Hz), 6,98 (1H, s), 7,19 (1H, dt, J = 1,5, 8,3 Hz), 7,81 (1H, dd, J = 1,1, 7,9 Hz), 14,64 (1H, s).
  • Beispiel 7-2
  • Natrium-5-({3-[2-amino-3-(aminocarbonyl)-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat
    Figure 00740001
  • Zu einer gekühlten (0°C) Lösung von tert-Butyl-2-amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-hydroxyphenyl)nicotinat (Ausgangsverbindung 6, 0,626 g, 1,659 mmol) in THF (7 ml) einschließlich Pyridin (0,148 ml, 1,824 mmol) wurde eine Lösung von 5-Oxotetrahydro-2-furancarbonylchlorid (0,271 g, 1,824 mmol) in THF (3 ml) zugesetzt. Nach 1 h wurde das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und weitere 2 h lang gerührt. Das Gemisch wurde zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Hexan:Ethylacetat = 1:4-1:19) gereinigt, um tert-Butyl-2-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-{[(5-oxotetrahydro-2-furanyl)carbonyl]amino}phenyl)nicotinat als blassgelben Schaum (0,677 g, Ausbeute 83%) zu ergeben.
  • Ein Gemisch aus tert-Butyl-2-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-{[(5-oxotetrahydro-2-furanyl)carbonyl]amino}phenyl)nicotinat (0,025 g, 0,051 mmol) in Trifluoressigsäure (1 ml) wurde 2 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Nachdem das Gemisch unter reduziertem Druck eingeengt worden war, wurde der Rückstand in Acetonitril (0,6 ml) gelöst und anschließend mit gesättigter NaHCO3-Lösung (0,2 ml) versetzt. Das resultierende Gemisch wurde mittels HPLC (ODS-Umkehrphasensäule, 10–90% CH3CN/H2O) gereinigt, um Natrium-2-amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-{[(5-oxotetrahydro-2- furanyl)carbonyl]amino}phenyl)nicotinat als blassgelben Feststoff (0,009 g, Ausbeute 39%) zu ergeben.
  • Zu einem gekühlten (0°C) Gemisch aus 2-Amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-{[(5-oxotetrahydro-2-furanyl)carbonyl]amino}phenyl)nicotinsäure (0,070 g, 0,15 mmol), Ammoniumchlorid (0,016 g, 0,30 mmol), 1-Hydroxybenzotriazolhydrat (0,032 g, 0,24 mmol) in DMF (2 ml) wurde 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydrochlorid (0,034 g, 0,18 mmol) gefolgt von Triethylamin (0,042 ml, 0,30 mmol) zugesetzt. Nach 1 h wurde das Gemisch auf Raumtemperatur abkühlen gelassen und über Nacht weiter gerührt. Das resultierende Gemisch wurde mit Wasser verdünnt und mit Ethylacetat extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels HPLC (ODS-Umkehrphasensäule, 10–90% CH3CN/H2O) gereinigt, um ein Carboxamidanalog des Ausgangsmaterials zu ergeben. Das Produkt wurde in Acetonitril (0,7 ml) gelöst und anschließend mit 1 N NaOH-Lösung (0,6 ml) versetzt. Das resultierende Gemisch wurde mittels HPLC (ODS-Umkehrphasensäule, 10–90% CH3CN/H2O) gereinigt, um Natrium-5-({3-[2-Amino-3-(aminocarbonyl)-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat als gelben Feststoff (0,005 g, Ausbeute 7%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 472,437
    Massenspektrometrie: 451
    Schmelzpunkt: > 260°C
    In-vitro-Aktivitätsgrad: C
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-C
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1,72-1,96 (2H, m), 2,11-2,20 (2H, m), 3,99 (1H, d, J = 6,8 Hz), 6,46 (2H, br), 6,82 (2H, br), 7,17 (1H, d, J = 7,8 Hz), 7,18 (4H, br), 7,34 (1H, t, J = 7,8 Hz), 7,84 (1H, s), 7,87 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,95 (1H, dd, J = 1,3, 8,0 Hz), 9,75 (1H, s), 10,65 (1H, s), 13,91 (1H, s).
  • Beispiel 7-3
  • N-{3-[2-Amino-3-(hydroxymethyl)-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-(1-piperidinyl)propionat
    Figure 00760001
  • Zu einer gekühlten (0°C) Suspension von Lithiumaluminiumhydrid (0,077 g, 1,62 mmol) in THF (3 ml) wurde unter Argonatmosphäre eine Lösung von tert-Butyl-2-amino-4-(3-aminophenyl)-6-(2-hydroxyphenyl)nicotinat (0,353 g, 0,935 mmol) in THF (2 ml) unter Rühren zugetropft. Nach 30 min wurde das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und weitere 2 h lang bei Raumtemperatur und über Nacht bei 50°C gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch mit Wasser gequencht und mit Ethylacetat extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde durch Umkristallisation aus Methanol gereinigt, um 2-[6-Amino-4-(3-aminophenyl)-5-(hydroxymethyl)-2-pyridinyl]phenol als blassgelben Feststoff (0,133 g, Ausbeute 45%) zu ergeben.
  • Zu einer gekühlten (0°C) Lösung von 2-[6-Amino-4-(3-aminophenyl)-5-(hydroxymethyl)-2-pyridinyl]phenol (0,100 g, 0,325 mmol) in THF (3 ml), einschließlich Pyridin (0,028 ml, 0,34 mmol) wurde 3-Chlorpropionylchlorid (0,043 g, 0,34 mmol) zugesetzt. Nach 30-minütigem Rühren wurde das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und weitere 2 h lang gerührt. Das resultierende Gemisch wurde mit Wasser verdünnt und mit Ethylacetat extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mit Ethylether kristallisiert. Der resultierende Feststoff wurde abfiltriert, mit Ethylether gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um N-{3-[2-Amino-3-(hydroxymethyl)-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-chlorpropanamid als blassgelben Feststoff (0,072 g, Ausbeute 56%) zu ergeben.
  • Zu einer Lösung von N-{3-[2-Amino-3-(hydroxymethyl)-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-chlorpropanamid (0,065 g, 0,16 mmol) und Natriumiodid (0,007 g, 0,05 mmol) in Acetonitril (5 ml) wurde Piperidin (0,16 ml, 1,63 mmol) zugesetzt und das Gemisch über Nacht bei 75°C gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das resultierende Gemisch mit Wasser verdünnt und mit Ethylacetat extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Chloroform:Methanol = 85:15) gereinigt, um N-{3-[2-Amino-3-(hydroxymethyl)-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid als weißen Schaum (0,055 g, Ausbeute 75%) zu ergeben.
    Molekulargewicht: 446,554
    Massenspektrometrie: 447
    Schmelzpunkt: 133°C (Zers.)
    In-vitro-Aktivitätsgrad: B
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-B
    1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): 1,36-1,55 (6H, m), 2,39-2,65 (8H, m), 4,34 (2H, d, J = 4,9 Hz), 5,08 (1H, t, J = 4,9 Hz), 6,49 (2H, s), 6,78 (1H, dt, J = 1,1, 8,3 Hz), 6,85 (1H, dd, J = 1,5, 8,67 Hz), 7,10 (1H, s), 7,14 (1H, d, J = 7,9 Hz), 7,23 (1H, dt, J = 1,5, 8,7 Hz), 7,40 (1H, t, J = 7,9 Hz), 7,61 (1H, s), 7,66 (1H, d, J = 8,3 Hz), 7,86 (1H, dd, J = 1,5, 8,3 Hz), 10,28 (1H, s), 14,22 (1H, s).
  • Beispiel 8-1
  • 2-[6-Amino-4-[4-(ethylamino)-3-hydroxyphenyl]-5-(hydroxymethyl)-2-pyridinyl]-3-(cyclopropylmethoxy)phenol-hydrochlorid
    Figure 00780001
  • Ein Gemisch aus 1-{2-(Cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}ethanon (Ausgangsverbindung 1-A', 2,00 g, 6,13 mmol), 3-Hydroxy-4-nitrobenzaldehyd (2,05 g, 12,26 mmol), tert-Butylcyanoacetat (1,73 g, 12,26 mmol), Ammoniumacetat (1,42 g, 18,38 mmol) und 1,2-Dimethoxyethan (2,0 ml) wurde in ein verschlossenes Röhrchen gefüllt und 8 h lang bei 100°C gerührt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde das Gemisch unter reduziertem Druck eingeengt, und der Rückstand wurde zwischen Ethylacetat und Wasser verteilt. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Flashchromatographie auf Kieselgel (Hexan:Ethylacetat = 1:1) gereinigt, um tert-Butyl-2-amino-6-{2-cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-(3-hydroxy-4-nitrophenyl)nicotinat (2,32 g, 62%) zu ergeben; LC-MS (m/z = 614, M+1).
  • Eine Lösung von tert-Butyl-2-amino-6-{2-(cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-(3-hydroxy-4-nitrophenyl)nicotinat (2,32 g, 3,78 mmol) in Ethylacetat (15,0 ml) und THF (15,0 ml) wurde bei 1 atm in Gegenwart von Palladium auf Aktivkohle (10%ig, 0,10 g) über Nacht hydriert. Das resultierende Gemisch wurde über Celite filtriert und mit Ethylacetat und THF gewaschen. Das vereinigte Filtrat wurde unter reduziertem Druck eingeengt, um tert-Butyl-2-amino-4-(4-amino-3-hydroxyphenyl)-6-[2-[(4-methoxybenzyl)oxy]-6-(2-methylbutoxy)phenyl]nicotinat (2,21 g, 100%) zu ergeben; LC-MS (m/z = 584, M+1).
  • Zu einer Lösung von tert-Butyl-2-amino-4-(4-amino-3-hydroxyphenyl)6-[2-[(4-methoxybenzyl)oxy]-6-(2-methylbutoxy)phenyl]nicotinat (2,46 g, 4,21 mmol) wurde Essigsäureanhydrid (0,44 ml, 4,63 mmol) zugesetzt. Das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Gemisch wurde mit Ethylacetat verdünnt und mit gesättigtem wässrigem NaHCO3 und Kochsalzlösung gewaschen. Die organische Phase wurde über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt, um tert-Butyl-4-[4-(acetylamino)-3-hydroxyphenyl]-2-amino-6-{2-(cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinat (2,65 g, 100%) zu ergeben; LC-MS (m/z = 626, M+1).
  • Zu einer gekühlten (0°C) Lösung von tert-Butyl-4-[4-(acetylamino)-3-hydroxyphenyl]-2-amino-6-{2-(cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinat (1,00 g, 1,60 mmol) in THF (15,0 ml) wurde unter Argonatmosphäre eine Lösung von Natrium-bis(2-methoxyethoxy)aluminiumhydrid (3,7 N in Toluol, 1,25 ml, 6,39 mmol) in THF (2 ml) zugetropft. Nach 5-stündigem Rühren wurde zu dem Gemisch bei 0°C eine Lösung von Natrium-bis(2-methoxyethoxy)aluminiumhydrid (3,7 N in Toluol, 0,833 ml, 4,26 mmol) in THF (1 ml) zugesetzt, dann wurde das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und über Nacht weiter gerührt. Das Gemisch wurde mit Ethylacetat gequencht und in gesättigtes wässriges Natriumkaliumtartarat gegossen. Die extrahierte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt, um 5-[2-Amino-6-{2-cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-(ethylamino)phenol zu ergeben; LC-MS (m/z = 542, M+1).
  • Zu einer Lösung von 5-[2-Amino-6-{2-(cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-(ethylamino)phenol (0,013 g, 0,023 mmol) in 1,4-Dioxan (0,5 ml) wurde eine Lösung von HCl in 1,4-Dioxan (4 N, 1,0 ml) zugesetzt. Nach Rühren über Nacht wurde das Gemisch mit Diethylether verdünnt. Der resultierende Niederschlag wurde unter Argonatmosphäre abfiltriert, mit Et2O gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um 2-[6-Amino-4-[4-(ethylamino)-3-hydroxyphenyl]-5-(hydroxymethyl)-2-pyridinyl]-3-(cyclopropylmethoxy)phenol zu ergeben (0,008 g, 76%); LC-MS (m/z = 422 M+1).
    Molekulargewicht: 457,961
    Massenspektrometrie: 422
    Schmelzpunkt: 232°C (Zers.)
    In-vitro-Aktivitätsgrad: B
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-
    1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0,26 (2H, m), 0,47 (2H, m), 1,13 (1H, m), 1,20 (3H, t, J = 7,3 Hz), 3,19 (2H, m), 3,57 (1H, s), 3,86 (2H, m), 4,51 (2H, s), 6,64 (2H, m), 6,82 (1H, s), 6,94 (2H, m), 7,28 (2H, m), 10,3 (1H, br), 13,3 (1H, br).
  • Beispiel 8-2
  • 7-[2-(Cyclopropylmethoxy)-6-hydroxyphenyl-5-(3-ethyl-2-oxo-2,3-dihydro-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,4-dihydro-2H-pyrido[2,3-d][1,3]oxazin-2-on-hydrochlorid
    Figure 00800001
  • Zu einer gekühlten (0°C) Lösung von 5-[2-Amino-6-{2-(cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-(ethylamino)phenol (0,150 g, 0,28 mmol) in THF (5,0 ml) einschließlich Triethylamin (0,12 ml, 0,83 mmol) wurde Triphosgen (0,099 g, 0,33 mmol) zugesetzt. Nach 30-minütigem Rühren wurde das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und über Nacht weiter gerührt. Das resultierende Gemisch wurde mit Wasser gequencht und mit Ethylacetat extrahiert. Die abgetrennte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Dichlormethan:Methanol = 9:1) gereinigt, um 7-{2-(Cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-5- (3-ethyl-2-oxo-2,3-dihydro-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,4-dihydro-2H-pyrido[2,3-d][1,3]oxazin-2-on (0,049 g, 30%) zu ergeben; LC-MS (m/z = 594, M+1).
  • Zu einer Lösung von 7-{2-(Cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-5-(3-ethyl-2-oxo-2,3-dihydro-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,4-dihydro-2H-pyrido[2,3-d][1,3]oxazin-2-on (0,036 g, 0,065 mmol) in 1,4-Dioxan (1,0 ml) wurde eine Lösung von HCl in 1,4-Dioxan (4 N, 1,0 ml) zugesetzt. Nach Rühren über Nacht wurde das Gemisch mit Diethylether verdünnt. Der resultierende Niederschlag wurde unter Argonatmosphäre abfiltriert, mit Et2O gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um 7-[2-(Cyclopropylmethoxy)-6-(hydroxy)phenyl-5-(3-ethyl-2-oxo-2,3-dihydro-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,4-dihydro-2H-pyrido[2,3-d][1,3]oxazin-2-on (0,025 g, 80%) zu ergeben; LC-MS (m/z = 436, M+1).
    Molekulargewicht: 509,951
    Massenspektrometrie: 474
    Schmelzpunkt: 151°C
    In-vitro-Aktivitätsgrad: C
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-
    1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0,29 (2H, m), 0,49 (2H, m), 1,20 (1H, m), 1,30 (3H, t, J = 7,3 Hz), 3,87 (2H, d, J = 6,5 Hz), 3,92 (2H, m), 5,43 (2H, s), 6,55 (2H, d, J = 8,2 Hz), 6,92 (0,5 H, d, J = 8,5 Hz), 7,19 (1H, t, J = 8,2 Hz), 7,33 (2H, m), 7,49 (2H, m), 7,97 (1H, s).
  • Beispiel 8-3
  • N-{4-[2-Amino-6-[2-(cyclopropylmethoxy)-6-hydroxyphenyl]-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid-hydrochlorid
    Figure 00820001
  • Zu einer gekühlten (0°C) Lösung von tert-Butyl-4-[4-(acetylamino)-3-hydroxyphenyl]-2-amino-6-{2-(cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinat (1,65 g, 2,64 mmol) in THF (25,0 ml) wurde unter Argonatmosphäre eine Lösung von Natrium-bis(2-methoxyethoxy)aluminiumhydrid (3,7 N in Toluol, 4,12 ml, 21,1 mmol) in THF (3 ml) zugetropft. Nach 30-minütigem Rühren wurde das Gemisch mit Ethylacetat gequencht und in gesättigtes wässriges Natriumkaliumtartrat gegossen. Die extrahierte organische Phase wurde mit Kochsalzlösung gewaschen, über Na2SO4 getrocknet, filtriert und unter reduziertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde mittels Säulenchromatographie auf Kieselgel (Dichlormethan:Methanol = 19:1-9:1) gereinigt, um N-{4-[2-Amino-6-[2-(cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid zu ergeben (0,48 g, 33%); LC-MS (m/z = 556, M+1).
  • Zu einer Lösung von N-{4-[2-Amino-6-[2-(cyclopropylmethoxy)-6-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid (0,013 g, 0,023 mmol) in 1,4-Dioxan (0,5 ml) wurde eine Lösung von HCl in 1,4-Dioxan (4 N, 1,0 ml) zugesetzt. Nach Rühren über Nacht wurde das Gemisch mit Diethylether verdünnt. Der resultierende Niederschlag wurde unter Argonatmosphäre abfiltriert, mit Et2O gewaschen und unter reduziertem Druck getrocknet, um N-{4-[2-Amino-6-[2-(cyclo propylmethoxy)-6-hydroxyphenyl]-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid zu ergeben (0,025 g, 80%); LC-MS (m/z = 436, M+1).
    Molekulargewicht: 471,945
    Massenspektrometrie: 436
    Schmelzpunkt: 270°C (Zers.)
    In-vitro-Aktivitätsgrad: A
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-
    1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): 0,27 (2H, m), 0,47 (2H, m), 1,14 (1H, m), 2,14 (3H, s), 3,86 (2H, d, J = 7,0 Hz), 4,47 (2H, d, J = 11 Hz), 6,64 (2H, dd, J = 8,2, 25 Hz), 6,84 (1H, m), 6,94 (1H, m), 7,03 (1H, s), 7,28 (1H, m), 7,56 (1H, br), 7,94 (1H, br), 9,46 (1H, s), 10,2 (1H, br), 13,5 (1H, br).
  • Beispiele 8-04 bis 8-05
  • Die in Tabelle 8 angeführten Verbindungen der Beispiele 8-04 bis 8-05 wurden auf ähnliche Weise wie zuvor in den Beispielen 8-01 bis 8-03 beschrieben synthetisiert.
  • Tabelle 8
    Figure 00830001
  • Beispiel 9
  • N-{4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}acetamid-ditrifluoracetat
    Figure 00840001
  • Ein Gemisch aus 2-[(4-Methoxybenzyl)oxy]acetophenon, 3-Hydroxy-4-nitrobenzaldehyd, Malononitril, Ammoniumacetat und Toluol wurde 3 h lang unter Rückfluss gerührt. Die übliche Aufarbeitung und Säulenchromatographie ergaben 2-Amino-4-(3-hydroxy-4-nitrophenyl)-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril.
  • Ein Gemisch aus 2-Amino-4-(3-hydroxy-4-nitrophenyl)-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril, Cäsiumcarbonat, Kaliumiodid und DMF wurde über Nacht bei 80°C gerührt. Die übliche Aufarbeitung und Säulenchromatographie ergaben 2-Amino-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-{4-nitro-3-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}nicotinonitril.
  • Ein Gemisch aus 2-Amino-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-{4-nitro-3-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}nicotinonitril, SnCl2 und DMF wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die übliche Aufarbeitung und Säulenchromatographie ergaben 2-Amino-4-{4-amino-3-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril.
  • Ein Gemisch aus 2-Amino-4-{4-amino-3-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}nicotinonitril, Acetylchlorid, Pyridin und CH2Cl2 wurde 1 h lang bei 0°C und 2 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Die übliche Aufarbeitung und Säulenchromatographie ergaben N-{4-(2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)-2-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}acetamid.
  • Ein Gemisch aus N-{4-(2-Amino-3-cyano-6-{2-[(4-methoxybenzyl)oxy]phenyl}-4-pyridinyl)-2-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}acetamid und Trifluoressigsäure wurde 3 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Abdampfen der Trifluoressigsäure ergab N-{4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}acetamid-ditrifluoracetat.
    Molekulargewicht: 699,612
    Massenspektrometrie: 472
    In-vitro-Aktivitätsgrad: B
    Zellaktivitätsgrad: (A954)-B
  • Vergleichsbeispiele
  • Figure 00850001
  • 6-(2-Hydroxyphenyl)-4-(R''-phenyl)-3-cyano-2-aminopyridine (worin R'' Nitro oder Dimethylamin ist), wie von Mann et al., (Eur. J. Med. Chem. 34, 145–154 (1999)) offenbart, wurden gemäß den in diesem Dokument offenbarten Verfahren synthetisiert. Die Wirkungen der synthetisierten Verbindungen wurden mittels des hierin offenbarten In-vitro-Testverfahrens und Zelltestverfahrens untersucht. Diese Verbindungen zeigten keinerlei IKK-β hemmende Aktivität oder Cytokin hemmende Aktivität.

Claims (11)

  1. 4-Arylpyridin-Derivat, das aus der aus folgenden Verbindungen bestehenden Gruppe ausgewählt ist: 5-({3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat; N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-5-oxotetrahydro-2-furancarboxamid; N-{3-[2-Amino-3-cyano-6- (2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}methansulfonamid; N4-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-L-asparagin; N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-L-asparagin; N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid; 5-({4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat; 4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-N-[2-(1-piperidinyl)ethyl]benzamid; 4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]benzoesäure; 5-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}amino)-4-hydroxy-5-oxopentanoat; N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-2-[4-(2-furoyl)-1-piperazinyl]acetamid; N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-(4-ethyl-1-piperazinyl)propanamid; N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-3-octahydro-1(2H)-chinolinylpropanamid; N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-cyclopentylglycinamid; N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid; N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-propylglycinamid; N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-(3-hydroxypropyl)glycinamid; N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N3-(cyclopropylmethyl)-β-alaninamid; N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2,N2-dimethylglycinamid; N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-2-(1-pyrrolidinyl)acetamid; N1-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]phenyl}-N2-[2-(methyloxy)ethyl]glycinamid; N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(3-amino-1-pyrrolidinyl)phenyl]-β-alaninamid; N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(1-piperidinyl)phenyl]-β-alaninamid; N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(1-pyrrolidinyl)phenyl]-β-alaninamid; N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[ethyl-(2-hydroxyethyl)amino]phenyl}-β-alaninamid; N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(4-morpholinyl)phenyl]-β-alaninamid; N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(dimethylamino)phenyl]-β-alaninamid; N-{3-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-4-chlorphenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid; 2-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]benzoesäure; 2-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-N-[2-(1-piperidinyl)ethyl]benzamid; N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid; N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}-N2-(2-methoxyethyl)glycinamid; N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}-β-alaninamid; 2-Amino-4-(4-amino-3-hydroxyphenyl)-6-(2-hydroxyphenyl)nicotinonitril; N-{4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid; N-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-chlorphenyl}-3-(1-piperidinyl)propanamid; N1-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(dimethylamino)phenyl]-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid; N-[5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-(dimethylamino)phenyl]-3-(1-piperidinyl)propanamid; N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[(2S)-2-(hydroxymethyl)-1-pyrrolidinyl]phenyl}-L-leucinamid; N1-{5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[(3S)-3-(dimethylamino)-1-pyrrolidinyl]phenyl}-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid; N1-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-L-leucinamid; N-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-3-(1-piperidinyl)propanamid; N1-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-N2-(2-methoxyethyl)glycinamid; N1-(5-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-{3-[(trifluoracetyl)amino]-1-pyrrolidinyl}phenyl)-N2-(cyclopropylmethyl)glycinamid; 2-Amino-6-(2-hydroxyphenyl)-4-(3-hydroxyphenyl)nicotinonitril; N-{4-[2-Amino-3-cyano-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-[2-(1-piperidinyl)ethoxy]phenyl}acetamid; N-{4-[2-Amino-3-(hydroxymethyl)-6-(2-hydroxyphenyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid; 2-[6-Amino-4-[4-(ethylamino)-3-hydroxyphenyl]-5-(hydroxymethyl)-2-pyridinyl]-3-(cyclopropylmethoxy)phenol; N-{4-[2-Amino-6-[2-(cyclopropylmethoxy)-6-hydroxyphenyl]-3-(hydroxymethyl)-4-pyridinyl]-2-hydroxyphenyl}acetamid; 7-[2-(Cyclopropylmethoxy)-6-hydroxyphenyl]-5-(3-ethyl-2-oxo-2,3-dihydro-1,3-benzoxazol-6-yl)-1,4-dihydro-2H-pyrido[2,3-d][1,3]oxazin-2-on, oder ein Salz davon.
  2. Pharmazeutische Zusammensetzung, welche eine Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1 als Wirkbestandteil enthält.
  3. Pharmazeutische Zusammensetzung, welche eine Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1 zusammen mit einem oder mehreren pharmazeutisch annehmbaren Arzneimittelträger enthält.
  4. IκB-Kinase-β-Inhibitor, der eine Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1 als Wirkstoffbestandteil enthält.
  5. Entzündungshemmendes Mittel, das eine Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1 als Wirkbestandteil enthält.
  6. Entzündungshemmendes Mittel nach Anspruch 5, worin das Mittel zur Verwendung bei der Behandlung einer oder Vorbeugung gegen eine Krankheit dient, die aus der aus Asthma; allergischer Rhinitis; atopischer Dermatitis; Urtikaria; Konjunktivitis; Frühjahrskatarrh; chronischem Gelenksrheumatismus, systemischem Lupus erythematodes; Psoriasis; Colitis ulcerosa; Systemic Inflammatory Response Syndrom (SIRS); Sepsis; Polymyositis, Dermatomyositis (DM); Polyarthritis nodosa (PN); Sharp-Syndrom (MCTD); Sjögren-Syndrom; und Gicht bestehenden Gruppe ausgewählt ist.
  7. Immunsuppresivum, das eine Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1 als Wirkbestandteil umfasst.
  8. Mittel zur Behandlung von Ischämie, das eine Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1 als Wirkbestandteil umfasst.
  9. Antitumormittel, das eine Verbindung oder ein Salz davon nach Anspruch 1 als Wirkbestandteil umfasst.
  10. Verwendung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) nach Anspruch 1 zur Herstellung von Medikamenten.
  11. Verwendung nach Anspruch 10, worin die Medikamente zur Bekämpfung von Entzündungsleiden dienen.
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