DE60130976T2

DE60130976T2 - Dosierschema enthaldend farnesyl protein transferase inhibitoren für die behandlung von krebs

Info

Publication number: DE60130976T2
Application number: DE60130976T
Authority: DE
Inventors: David William Ambler END
Original assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Current assignee: Janssen Pharmaceutica NV
Priority date: 2000-02-24
Filing date: 2001-02-20
Publication date: 2008-07-17
Anticipated expiration: 2021-02-21
Also published as: EP1267848A1; ATE375794T1; ES2293972T3; CA2397558A1; US6838467B2; JP2003523381A; WO2001062234A8; DE60130976D1; US20030060450A1; EP1267848B1; AU2001231763A1; WO2001062234A2

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Behandlung von SäugetierTumorenn durch die Verabreichung eines Farnesylproteintransferase-(FPT-)Inhibitors unter Anwendung eines stoßweisen Dosierungsschemas. Bei dem Protokoll verabreicht man einen FPT-Inhibitor über ein verkürztes Ein- bis Fünf-Tage-Dosierschema, wodurch Antikrebswirkungen erzielt werden, die über den Verabreichungszeitraum hinaus anhalten.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Im Verlauf des letzten Jahrzehnts sind in der Krebsforschung spezifische genetische Läsionen identifiziert worden, die maligne Transformationen induzieren und das Tumorwachstum fördern. Es ist mittlerweile akzeptiert, daß Mutationen, Deletionen oder Veränderungen bei der Expression von normalen, an der Steuerung des Wachstums beteiligten Säugetiergenen diese "Protoonkogene" in "Onkogene" umwandeln. Die ras-Familie von Onkogenen besteht aus H-ras-, K-ras- und N-ras-Onkogenen, die für ein hochkonserviertes GTP-bindendes Protein mit Mr = 21000 (p21) kodieren.
Onkogene kodieren häufig für Komponenten von Signalübertragungspfaden, die zu einer Stimulierung des Zellwachstums und der Mitogenese führen. Die Expression von Onkogenen in kultvierten Zellen resultiert in einer Transformation der Zellen, die dadurch gekennzeichnet ist, daß die Zellen dazu in der Lage sind, in weichem Agar zu wachsen, und daß die Zellen als dichte Foci heranwachsen, denen die von nicht-transformierten Zellen gezeigte Kontaktinhibierung fehlt. Die Mutation und/oder Überexpression bestimmter Onkogene ist beim Menschen häufig mit Krebs assoziiert. Zum Erwerb eines transformierenden Potentials muß der in einem carboxyl terminalen Tetrapeptid befindliche Cysteinrest eine Farnesylierung durchlaufen. Inhibitoren des Enzyms, das diese Modifikation katalysiert, der Farnesylproteintransferase, wurden daher als Antikrebsmittel gegen ras-transformierte Tumoren vorgeschlagen. Mutierte onkogene Formen von ras werden häufig bei vielen Krebsarten des Menschen angetroffen, ganz insbesondere bei mehr als 50% der Kolon- und Pankreaskarzinome (Kohl et al., Science, Band 260, 1384 bis 1837, 1993).
Die Proteinprodukte der ras-Onkogenen stehen aufgrund einiger einzigartiger Merkmale des zellulären Stoffwechsels dieser Proteine im Mittelpunkt der Anstrengungen zur Entdeckung von Arzneimitteln für die Onkologie. Um bei der Signalübertragung und der Zelltransformation zu wirken, muß sich ras an die Plasmamembran anheften, um Wechselwirkungen mit der Membranlokalisierung auch den Adaptorproteinen Grb2 und SOS der SH2/SH3-Domäne zu fördern. Die ras-Membranlokalisierung wirkt auch bei der Aktivierung von Downstream-Effektoren wie der Raf-Proteinkinase. Neu synthetisierte Ras-Proteine müssen in Säugetierzellen nach der Translation durch Farnesylierung und anschließende proteolytische Abspaltung der drei terminalen Aminosäuren und Carboxy-O-Methylierung unter Bildung der Hydrophobizitäts- oder Erkennungsstellen, die eine richtige Membranlokalisierung ermöglichen, modifiziert werden. Bei der zunächst erfolgenden und geschwindigkeitsbestimmenden posttranslationalen Modifikation von ras kommt es zur kovalenten Anbindung von Farnesol über eine Thioetherbindung an einen einzelnen Cysteinrest, der sich vier Aminosäuren vom Carboxylterminus des Proteins befindet. Diese Reaktion wird durch Farnesylproteintransferase (FPT) katalysiert. Das Enzym benötigt für die spezifische Bindung und die Katalyse von Proteinsubstraten lediglich die vier C-terminalen Aminosäuren bzw. das CAAX-Motiv.
Inhibitoren der Farnesylproteintransferase wurden als von Nutzen bei der Behandlung von Krebs beim Menschen und insbesondere bei der Behandlung von Kolon- und Bauchspeicheldrüsenkrebs beschrieben.
In der WO-97/21701 werden die Herstellung, die Formulierung und pharmazeutische Eigenschaften von farnesylproteintransferasehemmenden (Imidazol-5-yl)methyl-2-chinolinonderivaten der Formeln (I), (II) und (III) sowie von Zwischenprodukten der Formeln (II) und (III), die in vivo zu den Verbindungen der Formel (I) metabolisiert werden, beschrieben. Die Verbindungen der Formeln (I), (II) und (III) werden wiedergegeben durch
die pharmazeutisch unbedenklichen Säure- oder Basenadditionssalze davon und die stereochemisch isomeren Formen davon, wobei
die gestrichelte Linie für eine gegebenenfalls vorhandene Bindung steht;
X für Sauerstoff oder Schwefel steht;
R¹ für Wasserstoff, C_1-12-Alkyl, Ar¹, Ar²-C_1-6-Alkyl, Chinolinyl-C_1-6-alkyl, Pyridyl-C_1-6-alkyl, Hydroxy-C_1-6-alkyl , C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyl, Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino-C_1-6-alkyl, Amino-C_1-6-alkyl oder einen Rest der Formel -Alk¹-C(=O)-R⁹, -Alk¹-S(O)-R⁹ oder -Alk¹-S(O)₂-R⁹ steht, wobei Alk¹ für C_1-6-Alkandiyl steht,
R⁹ für Hydroxy, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxy, Amino, C_1-8-Alkylamino oder durch C_1-6-Alkyloxycarbonyl substituiertes C_1-8-Alkylamino steht;
R², R³ und R¹⁶ jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff, Hydroxy, Halogen, Cyano, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxy, Hydroxy-C_1-6-alkyloxy, C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyloxy, Amino-C_1-6-alkyloxy, Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino-C_1-6-alkyloxy, Ar¹, Ar²-C_1-6-Alkyl, Ar²-Oxy, Ar²-C_1-6-Alkyloxy, Hydroxycarbonyl, C_1-6-Alkyloxycarbonyl, Trihalogenmethyl, Trihalogenmethoxy, C_2-6-Alkenyl, 4,4-Dimethyloxazolyl stehen oder,
wenn R² und R³ in benachbarten Positionen stehen, sie zusammen einen zweiwertigen Rest der Formel -O-CH₂-O- (a-1), -O-CH₂-CH₂-O- (a-2), -O-CH=CH- (a-3), -O-CH₂-CH₂- (a-4), -O-CH₂-CH₂-CH₂- (a-5) oder -CH=CH-CH=CH- (a-6)bilden können;
R⁴ und R⁵ jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff, Halogen, Ar¹, C_1-6-Alkyl, Hydroxy-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkyloxy, C_1-6-Alkylthio, Amino, Hydroxycarbonyl, C_1-3-Alkyloxycarbonyl, C_1-6-Alkyl-S(O)-C_1-6-alkyl oder C_1-6-Alkyl-S(O)₂-C_1-6-alkyl stehen;
R⁶ und R⁷ jeweils unabhängig voneinander für Wasserstoff, Halogen, Cyano, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxy, Ar²-Oxy, Trihalogenmethyl, C_1-6-Alkylthio, Di(C_1-6-alkyl)amino stehen oder,
wenn R⁶ und R⁷ in benachbarten Positionen stehen, sie zusammen einen zweiwertigen Rest der Formel -O-CH₂-O- (c-1) oder -CH=CH-CH=CH- (c-2) bilden können;
R⁸ für Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, Cyano, Hydroxycarbonyl, C_1-6-Alkyloxycarbonyl, C_1-6-Alkylcarbonyl-C_1-6-alkyl, Cyano-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkyloxycarbonyl-C_1-6-alkyl, Carboxy-C_1-6-alkyl, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Amino-C_1-6-alkyl, Mono- oder Di(C_1-6-alkyl)amino-C_1-6-alkyl, Imidazolyl, Halogen-C_1-6-alkyl, C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkyl , Aminocarbonyl-C_1-6-alkyl oder einen Rest der Formel -O-R¹⁰ (b-1), -S-R¹⁰ (b-2), -N-R¹¹R¹² (b-3)steht, wobei R¹⁰ für Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkylcarbonyl, Ar¹, Ar²-C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxycarbonyl-C_1-6-alkyl, einen Rest der Formel -Alk²-OR¹³ oder -Alk²-NR¹⁴R¹⁵ steht;
R¹¹ für Wasserstoff, C_1-12-Alkyl, Ar¹ oder Ar-C_1-6-Alkyl steht;
R¹² für Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, C_1-16-Alkylcarbonyl, C_1-6-Alkyloxycarbonyl, C_1-6-Alkylaminocarbonyl, Ar¹, Ar²-C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkylcarbonyl-C_1-6-alkyl, eine natürliche Aminosäure, Ar¹-Carbonyl, Ar²-C_1-6-Alkylcarbonyl, Aminocarbonylcarbonyl, C_1-6-Alkyloxy-C_1-6-alkylcarbonyl, Hydroxy, C_1-6-Alkyloxy, Aminocarbonyl, Di(C_1-6-alkyl)-amino-C_1-6-alkylcarbonyl, Amino, C_1-6-Alkylamino, C_1-6-Alkylcarbonylamino, oder einen Rest der Formel -Alk²-OR¹³ oder -Alk²-NR¹⁴R¹⁵ steht;
wobei Alk² für C_1-6-Alkandiyl steht;
R¹³ für Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkylcarbonyl, Hydroxy-C_1-6-alkyl, Ar¹ oder Ar²-C_1-6-Alkyl steht;
R¹⁴ für Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, Ar¹ oder Ar²-C_1-6-Alkyl steht;
R¹⁵ für Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkylcarbonyl , Ar¹ oder Ar²-C_1-6-Alkyl steht;
R¹⁷ für Wasserstoff, Halogen, Cyano, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxycarbonyl, Ar¹ steht;
R¹⁸ für Wasserstoff, C_1-6-Alkyl, C_1-6-Alkyloxy oder Halogen steht;
R¹⁹ für Wasserstoff oder C_1-6-Alkyl steht;
Ar¹ für Phenyl oder durch C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amino, C_1-6-Alkyloxy oder Halogen substituiertes Phenyl steht; und
Ar² für Phenyl oder durch C_1-6-Alkyl, Hydroxy, Amino, C_1-6-Alkyloxy oder Halogen substituiertes Phenyl steht.
Die Verbindungen sind allgemein als Inhibitoren von Farnesylproteintransferase beschrieben, die sich für die Behandlung von Tumorenn bei Säugetieren eignen. Im allgemeinen verabreicht man bei der Behandlung von krebsartigen Tumorenn etwa 0,01 bis 100 mg/kg Köpergewicht eines Farnesylproteintransferaseinhibitors in Dosen von etwa zwei, drei, vier oder mehr Teildosen in angemessenen Abständen über den Tag. Das Dosierungsprotokoll basiert auf der Hypothese, daß für die Aufrechterhaltung der Antitumorwirkungen eine kontinuierliche Vorhandensein an Wirkstoff und eine daraus folgende Hemmung von FPT erforderlich sind.
Unerwarteterweise wurde gefunden, daß ein stoßweises Dosierungsprotokoll von etwa fünf Tagen mit einem bestimmten Farnesylproteintransferasehemmer als Wirkstoff, gefolgt von etwa zwei Wochen ohne Behandlung, zu einer Unterdrückung des Wachstums von Tumorenn in Säugetieren führt.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Dosierungsprotokolls umfassend ein diskontinuierliches Dosierungsschema, bei dem man einen Farnesylproteintransferasehemmer zur Unterdrückung des Wachstums von Tumorenn in Säugetieren verabreicht. Bei dem Protokoll verabreicht man eine einzelne Dosis eines Farnesylproteintransferaseinhibitors über einen Zeitraum von einem bis fünf Tagen, gefolgt von wenigstens zwei Wochen ohne Behandlung.
KURZE DARSTELLUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Behandlung von SäugetierTumorenn, bei dem man eine einzelne Dosis eines Farnesylproteintransferaseinhibitors über einen Zeitraum von einem bis fünf Tagen verabreicht. Die vorliegende Erfindung betrifft außerdem ein Antitumordosierungsprotokoll, bei dem eine Unterdrückung des Tumorwachstums durch die Verabreichung eines Farnesylproteintransferaseinhibitors über einen Zeitraum von einem bis fünf Tagen, gefolgt von wenigstens zwei Wochen ohne Behandlung, erzielt wird. Die vorübergehende Behandlung von SäugetierTumorenn mit einem Farnesylproteintransferaseinhibitor über einen Zeitraum von einem bis fünf Tagen bewirkt anhaltende Antitumorwirkungen. Die Inhibierung von FPT mit einem FPT-Inhibitor nach dem Verfahren und dem Protokoll die vorliegenden Erfindung führt zu anhaltenden Veränderungen bei dem malignen Prozess, die sich nur sehr langsam wieder erholen.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Inhibitoren von Farnesyltransferase (FPT) sind als von Nutzen bei der Behandlung von SäugetierTumorenn und insbesondere Kolon- und BauchspeicheldrüsenTumorenn bekannt. In frühreren Untersuchungen wurde gezeigt, daß Farnesylproteintransferaseinhibitoren das Wachstum von Tumorenn in Säugetieren hemmen, wenn sie in einem Dosierungsprotokoll zweimal täglich verabreicht werden. Unerwarteterweise wurde gefunden, daß die Verabreichung eines bestimmten Farnesylproteintransferasehemmers, nämlich (+)-6-[Amino(4-chlorphenyl)(1-methyl-1H-imida zol-5-yl)methyl]-4-(3-chlorphenyl)-1-methyl-2(1H)-chinolinon (Verbindung 75 in Tabelle 1 des experimentellen Teils von WO 97/21701 ); oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Säureadditionssalzes davon als erfindungsgemäße Einzeldosis täglich über ein bis fünf Tage zu einer deutlichen Unterdrückung des Tumorwachstums führte, die mindestens 21 Tage lang anhielt. Insbesondere die Verabreichung des Farnesylproteintransferasehemmers als Einzeldosis von zwischen 50 und 200 mg/kg Körpergewicht einmal täglich über ein bis fünf aufeinanderfolgende Tage nach der Tumorbildung führte zu einer deutlichen Unterdrückung des Tumorwachstums, die 21 Tage oder länger anhielt. Die Wirkung entspricht der kontinuierlichen täglichen Verabreichung eines Farnesylproteintransferaseinhibitors in einer Dosis von 50–100 mg/kg in dem gleichen Tumormodell. Beim Auftreten von Wachstum in gemäß dem erfindungsgemäßen Verfahren und/oder Protokoll behandelten Tumorenn führte eine erneute Verabreichung von FTP-Inhibitor an Tag 21 zu einem Wachstumsstopp, was darauf hindeutet, daß das Tumorwachstum nicht auf resistente Tumorzellen zurückging. 200 mg/kg ist die am meisten bevorzugte Dosis. Bei Menschen kann man auf der Basis der Daten aus der frühen Phase 1 davon ausgehen, daß der bevrozugte Dosisbereich bei 200 bis 2400 mg liegt. Die Feststellung, daß sich eine anhaltende Unterdrückung von Tumorwachstum mit lediglich einem bis fünf Behandlungstagen mit einem Farnesylproteintransferaseinhibitor erzielen läßt, war unerwartet, da angenommen wurde, daß Farnesylproteintransferaseinhibitoren als Klasse chronisch kontinuierlich gegenwärtig sein müßten, um eine ununterbrochene Inhibierung der Proteinfarnesylierung aufrechtzuerhalten.
Zu den obenerwähnten pharmazeutisch unbedenklichen Säureadditionssalzen gehören die therapeutisch wirksamen, nicht toxischen Säureadditionssalzformen, die von der obigen Stammverbindung gebildet werden können. Die Stammverbindung kann durch Behandeln der Basenform mit einer entsprechenden Säure in ihre pharmazeutisch unbedenklichen Säureadditionssalze umgewandelt werden. Zu den geeigneten Säuren gehören beispielsweise anorganische Säuren wie Halogenwasserstoffsäuren, z. B. Chlorwasserstoff- oder Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure und ähnliche Säuren; oder organische Säuren wie beispielsweise Essigsäure, Propionsäure, Hydroxyessigsäure, Milchsäure, Brenztraubensäure, Oxalsäure, Malonsäure, Bernsteinsäure (d. h. Butandisäure), Maleinsäure, Fumarsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Citronensäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Cyclaminsäure, Salicylsäure, p-Aminosalicylsäure, Pamoasäure und ähnliche Säuren.
Der Ausdruck "Säureadditionssalz" soll auch die Hydrate und Solvate, die die Ausgangsverbindung bilden kann, umfassen. Beispiel für solche Formen sind zum Beispiel Hydrate, Alkoholate und dergleichen.
Die Erfindung ist anwendbar insbesondere auf die Behandlung von Tumorenn, die ein aktiviertes ras-Onkogen exprimieren. Zu Tumorenn, die gehemmt werden können, zählen Lungenkrebs (zum Beispiel Adenokarzinom einschließlich nicht-kleinzelligem Lungenkrebs), Bauchspeicheldrüsenkrebs (zum Beispiel Bauchspeicheldrüsenkarzinome wie zum Beispiel exokrines Bauchspeicheldrüsenkarzinom), Dickdarmkrebs (zum Beispiel Kolorektalkarzinome, wie beispielsweise Kolon-Adenokarzinom und Kolonadenom), hämatopoetische Tumoren der Lymphwege (zum Beispiel akute lymphatische Leukämie, B-Zellen-Lymphom, Burkitt-Lymphom), myeloische Leukämien (zum Beispiel akute myeloische Leukämie (AML)), Schilddrüsenfollikelkrebs, Myelodysplasie-Syndrom (MDS), Tumoren mesenchymalen Ursprungs (zum Beispiel Fibrosarkome sowie Rhabdomyosarkome), Melanome, Teratokarzinome, Neuroblastome, Gliome, gutartige HautTumoren (zum Beispiel Keratoakanthome), Brustkrebs (zum Beispiel fortgeschrittener Brustkrebs), Nierenkrebs, Ovarial karzinom, Blasenkrebs sowie Epidermiskrebs, was jedoch keine Einschränkung darstellen soll.
Der obige erfindungsgemäß verwendete Farnesylproteintransferaseinhibitor kann nach im Stand der Technik bekannten Verfahren und insbesondere nach den in WO-97/21701 beschriebenen Verfahren zu pharmazeutischen Zusammensetzungen formuliert werden. Zur Herstellung der obenerwähnten pharmazeutischen Zusammensetzungen vereinigt man eine therapeutisch wirksame Menge der jeweiligen Verbindung, gegebenenfalls in Additionssalzform, als Wirkstoff in Form einer innigen Mischung mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger, der je nach der zur Verabreichung gewünschten Darreichungsform verschiedenste Formen annehmen kann. Diese pharmazeutischen Zusammensetzungen liegen wünschenswerterweise in Einzeldosisform vor, vorzugsweise zur systemischen Verabreichung wie der oralen, perkutanen oder parenteralen Verabreichung oder zur topischen Verabreichung mittels Inhalation, als Nasenspray, Augentropfen oder als Creme, Gel, Shampoo oder dergleichen. Zur Herstellung der Zusammensetzungen in oraler Dosierungsform beispielsweise kann man alle üblichen pharmazeutischen Medien verwenden, wie beispielsweise Wasser, Glykole, Öle, Alkohole und dergleichen bei oralen flüssigen Zubereitungen, wie Suspensionen, Sirupen, Elixieren und Lösungen, oder feste Träger, wie Stärken, Zucker, Kaolin, Gleitmittel, Bindemittel, Sprengmittel und dergleichen bei Pulvern, Pillen, Kapseln und Tabletten. Aufgrund ihrer leichten Verabreichbarkeit stellen Tabletten und Kapseln die vorteilhafteste orale Einzeldosisform dar, wobei man natürlich feste pharmazeutische Träger verwendet. Bei parenteralen Zusammensetzungen besteht der Träger in der Regel zumindest größtenteils aus sterilem Wasser, wenngleich auch andere Bestandteile, beispielsweise zur Förderung der Löslichkeit, vorhanden sein können. Es lassen sich beispielsweise Injektionslösungen herstellen, bei denen es sich bei dem Träger um Kochsalzlösung, Glucoselösung oder eine Mischung aus Kochsalz- und Glucoselösung handelt. Verbindungen der Formel (I) enthaltende Injektionslösungen lassen sich auch für eine länger anhaltende Wirkung in einem Öl formulieren. Für diesen Zweck geeignete Öle sind beispielsweise Erdnußöl, Sesamöl, Baumwollsamenöl, Maisöl, Sojabohnenöl, synthetische Glycerinester langkettiger Fettsäuren und Mischungen von diesen und anderen Ölen. Weiterhin lassen sich Injektionssuspensionen herstellen, wobei in diesem Fall geeignete flüssige Träger, Suspendiermittel und dergleichen verwendet werden können. Bei den zur perkutanen Verabreichung geeigneten Zusammensetzungen enthält der Träger gegebenenfalls ein die Penetration förderndes mittel und/oder ein geeignetes Netzmittel, gegebenenfalls in Kombination mit kleineren Mengen geeigneter Zusatzstoffe jeglicher Art, wobei diese Zusatzstoffe keine wesentliche negative Wirkung auf die Haut ausüben. Derartige Zusatzstoffe können die Aufbringung auf die Haut erleichtern und/oder für die Herstellung der gewünschten Zusammensetzungen von Nutzen sein. Diese Zusammensetzungen können auf verschiedenen Wegen verabreicht werden, z. B. als Transdermalpflaster, als Direktauftrag oder als Salbe. Als für eine topische Verabreichung geeignete Zusammensetzungen können alle Zusammensetzungen erwähnt werden, die gewöhnlich für eine topische Verabreichung von Arzneimitteln verwendet werden, z. B. Cremes, Gele, Verbände, Shampoos, Tinkturen, Pasten, Salben, Unguenta, Pulver und dergleichen. Die Anwendung der Zusammensetzungen kann als Aerosol erfolgen, beispielsweise mit einem Treibmittel wie Stickstoff, Kohlendioxid oder einem Freon oder ohne Treibmittel, wie bei Pumpsprays, Tropfen, Lotionen, oder als Halbfeststoff, wie eine verdickte Zusammensetzung, die sich mit einem Tupfer auftragen läßt. Insbesondere halbfeste Zusammensetzungen wie Unguenta, Cremes, Gele, Salben und dergleichen lassen sich einfach anwenden.
Zwecks einfacher Verabreichung und einheitlicher Dosierung ist es besonders vorteilhaft, die obengenannten pharmazeutischen Zusammensetzungen in Einheitsform zu formulieren. Unter dem Begriff Einheitsform, wie er in der Beschreibung und in den Ansprüchen verwendet wird, sind physikalisch diskrete Einheiten zu verstehen, die sich als Einzeldosen eignen, wobei jede Einheit eine vorbestimmte Menge des Wirkstoffs enthält, die so berechnet ist, daß in Verbindung mit dem erforderlichen pharmazeutischen Träger die gewünschte therapeutische Wirkung erzielt wird. Beispiele für solche Einheitsformen sind Tabletten (darunter Tabletten mit Bruchrille oder Dragees), Kapseln, Pillen, Pulverbeutel, Oblaten, Injektionslösungen, Injektionssuspensionen, Teelöffelvoll, Eßlöffelvoll und dergleichen sowie deren getrennt vorliegende Vielfache.
Der obige Farnesyltransferasehemmer läßt sich in Kombination mit einem oder mehreren Antikrebsmitteln wie Platinkoordinationsverbindungen, zum Beispiel Cisplatin oder Carboplatin, Taxanverbindungen, zum Beispiel Paclitaxel oder Docetaxel, Camptothecinverbindungen, zum Beispiel Irinotecan oder Topotecan, Vincaalkaloiden mit Antitumorwirkung, zum Beispiel Vinblastin, Vincristin oder Vinorelbin, Nukleosidderivaten mit Antitumorwirkung, zum Beispiel 5-Fluoruracil, Gemcitabin oder Capecitabin, Stickstofflost oder Nitrosoharnstoff-Alkylierungsmitteln, zum Beispiel Cyclophosphamid, Chlorambucil, Carmustin oder Lomustin, Anthracyclinderivaten mit Antitumorwirkung, zum Beispiel Daunorubicin, Doxorubicin, Idarubicin oder Epirubicin, HER2-Antikörpern, zum Beispiel Trastzumab, und Podophyllotoxinderivaten mit Antitumorwirkung, zum Beispiel Etoposid oder Teniposid, und Antiöstrogenmitteln einschließlich östrogenrezeptorantagonisten oder selektiven östrogenrezeptormodulatoren, vorzugsweise Tamoxifen, oder alternativ dazu Toremifen, Droloxifen, Faslodex und Raloxifen, oder Aromatase inhibitoren wie Exemestan, Anastrozol, Letrazol und Vorozol, anwenden.
Der Farnesyltransferasehemmer und das weitere Antikrebsmittel können gleichzeitig (zum Beispiel in getrennten Zusammensetzungen oder Einheitszusammensetzungen) oder nacheinander in beliebiger Reihenfolge verabreicht werden. In letzterem Fall werden die beiden Verbindungen innerhalb eines Zeitraums und in einer Menge und Weise verabreicht, die ausreichend ist, um sicherzustellen, daß eine vorteilhafte oder synergistische Wirkung erzielt wird. Es versteht sich, daß das bevorzugte Verabreichungsverfahren und die bevorzugte Verabreichungsreihenfolge und die jeweiligen Dosierungsmengen und -protokolle für die einzelnen Komponenten der Kombination von dem jeweiligen Farnesyltransferaseinhibitor und den jeweiligen weiteren verabreichten Antikrebsmitteln, ihrer Verabreichungsroute, dem jeweils behandelten Tumor und dem jeweils behandelten Wirt abhängen. Das beste Verabreichungsverfahren und die beste Verabreichungsreihenfolge und die Dosierungsmengen und -protokolle lassen sich vom Fachmann leicht unter Anwendung herkömmlicher Methoden und angesichts der hier gegebenen Informationen bestimmen.
Der FPT-Inhibitor für die Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung läßt sich auf herkömmliche Weise herstellen, zum Beispiel nach den in den obigen Patentschriften beschriebenen Verfahren.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele ausführlicher beschrieben.
BEISPIEL 1
MATERIALIEN UND METHODEN

Zellkultur: Humane CAPAN-2-Bauchspeicheldrüsenkarzinomazellen wurden von der American Type Culture Collection (Rockville, MD) erworben. Die Zellen wurden in mit 10% fetalem Kälberserum und Penicillin-Streptomycin ergänztem McCoys-5A-Medium kultiviert. Mit dem aktivierten T24 H-ras-Onkogen transfizierte NIH 3T3-Zellen (T24-Zellen) wurden von der Janssen Research Foundation erhalten (zu den Methoden siehe Parada, L. F., Tabin, C. J., Shih, C., und Weinberg, R. Human EJ bladder carcinoma oncogene is homologue of Harvey sarcoma virus ras gene. Nature 297: 474–478, 1982; Santos, E., Tronick, S. R., Aaronson, S. A., Pulciani, S., und Barbacid, M. T24 human bladder carcinoma oncogene is an activated form of the normal human homologue of BALB-and Harvey-MSV transforming genes. Nature 298: 343–347, 1982.) Die T24-Zellen wurden als Einzelschichtkulturen in mit 10% Nu-Serum vom Typ IV (Collaborative Biomedical Products, Redford, MA, USA) und 40 μg/ml G418 (Geneticin^®, GIBCO-BRL, Gaithersburg, MD, USA) angereichertem Dulbeccos modifiziertem Eagles-Medium (DMEM) kultiviert.
Tiere: Weibliche nu/nu immundefiziente Nacktmäuse (42 Tage alt) wurden von Charles River Laboratories (Wilmington, MA, USA) bezogen. Die Mäuse wurden jeweils zu fünft in Mikroisolatorkäfigen in einem Regal mit laminarem Luftstrom zur Aufrechterhaltung der Sterilität untergebracht. Streu, Futter, Wasser und Käfige wurden alle jeweils autoklaviert. Die Tiere wurden in der sterilen Umfassung eines Kabinetts mit laminarem Luftstrom gehandhabt. Ansonsten wurden die Mäuse unter Standardvivariumbedingungen gehalten. Die Tumorstudien wurden nach einem vom Institutional Animal Care and Use Committee genehmigten Protokoll durchgeführt.
Tumorstudien in Nacktmäusen: In Einzelschichten in T150-Gewebekulturflaschen wachsende Zellen wurden durch Trypsinbehandlung mit 10 ml 0,05% Trypsin plus 0,53 mM EDTA pro Kolben abgelöst. Die Tumorzellensuspensionen wurden gepoolt, und das Trypsin wurde durch Zugabe von serumhaltigem Medium (10 ml pro 40 ml Trypsinzellsus- Pension) desaktiviert. Die Zellen wurden durch Zentrifugieren gesammelt und in auf 37°C erwärmter Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) resuspendiert. Eine 1,0-ml-Portion der Zellsuspension wurde zu 20 ml Verdünnungsmittel gegeben und in einem Coulter-Teilchenzähler ausgezählt. Die Zellsuspensionen wurden nochmals zentrifugiert und in einer Konzentration von 1 × 10⁶ Zellen pro 0,10 ml HBSS resuspendiert. Die Mäuse wurden mit einer einzelnen subkutanen Injektion von 0,10 ml Tumorzellensuspension in der Leistenregion inokuliert. Die Mäuse wurden jeweils zu fünft in einem Käfig untergebracht, wobei jeder Behandlunggruppe 15 Mäuse zugeteilt wurden. Wöchentlich wurden das Körpergewicht und die mit einer Schieblehre bestimmte Tumorgröße gemessen. Die mit der Schieblehre gemessenen Längen und Breiten wurden multipliziert, wodurch man die Tumorflächen erhielt. Am Ende der Studie wurden die Mäuse durch Ersticken mit CO₂ getötet. Drei Tage nach der Tumorinokulation wurde mit der fünftägigen Behandlung mit (R)-6-[Amino(4-chlorphenyl)-(1-methyl-1H-imidazol-5-yl)methyl]-4-(3-chlorphenyl)-1-methyl-2(1H)-chinolinon (Verbindung 1) begonnen. Die Verbindung 1 wurde einmal täglich mit einer Schlundsonde in einem Vehikel mit 20% beta-Cyclodextrin in einem Volumen von 0,10 ml Lösung pro 10 g Körpergewicht verabreicht. Die Kontrollgruppen erhielten das gleiche Dosierungsvolumen an Vehikel mit 20% beta-Cyclodextrin.
Verbindungen Verbindung 1 wurde für die orale Verabreichung zubereitet, indem man die Verbindung zunächst als eine 2 × konzentrierte Stammlösung in 40% Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (Chargennummer 051-071/1) in 0,1 N HCl löste. Verbindung 1 wurde durch ungefähr 30 Minuten kräftiges Rühren und eine anschließende 10minütige Ultraschallbehandlung gelöst. Die Lösungen der Verbindung 1 wurden durch 1:1-Verdünnen mit 0,1 N HCl auf eine Endkonzentration gebracht. Die letztendlich erhaltenen Arnzeimittellösungen wurden sofort steril filtriert und in sterile Röhrchen überführt. Die Lösungen wurden im Kühlschrank aufbewahrt und während der Durchführung der Untersuchung vor Licht geschützt, und die Sterilität wurde aufrechterhalten, indem die Lösungen unter den Bedingungen eines sterilen laminaren Luftstroms geöffnet wurden.

ERGEBNISSE UND DISKUSSION
In 1 sind die Ergebnisse der Untersuchung der stoßweisen Verabreichung der Verbindung 1 gezeigt. Die Verbindung 1 wurde alle drei Wochen fünf Tage lang einmal täglich an Nacktmäuse verabreicht, die die T24 H-ras-Tumoren trugen. Die mit Vehikel behandelten Tiere zeigten 14 Tage nach der Inokulation aggressiv wachsende Tumoren. Diese Gruppe wurde an Tag 17 getötet, da ihre Tumoren die ethischen Richtlinien einer Tumorlast von nicht mehr als 10% des Körpergewichts des Tieres überschritten. Die fünf Tage lang (Tage 3–8 nach der Tumorinokulation) mit 200 mg/kg der Verbindung 1 behandelten Mäuse wiesen an Tag 17 kleine Tumoren auf. Ohne eine Behandlung hatten die Tumoren die schnellen Wachstumsraten der Kontrolle an Tag 24 wieder aufgenommen. Die Tiere wurden an Tag 28 getötet, wiederum entsprechend den ethischen Richtlinien. Eine separate Gruppe von 15 Mäusen erhielt eine weitere 5tägige Behandlung mit 200 mg/kg an Verbindung 1. Das Tumorwachstum wurde abermals angehalten, jedoch nicht so dramatisch wie bei der ersten Behandlung.
Ein identisches Dosierungsprotokoll wurde in humanen CAPAN-2-BauchspeicheldrüsenTumorenn in Nacktmäusen untersucht. Durch die fünftägige Verabreichung der Verbindung 1 in einer Dosis von 200 mg/kg wurde das Wachstum der CAPAN-2-Tumoren bis Tag 24 signifikant reduziert (2). Anschließend nahmen die Tumoren, die nicht weiter behandelt wurden, die bei der mit dem Vehikel behandelten Kontrollen beobachtete Wachstums rate wieder auf. Wiederumg erhielt eine separate Gruppe von 15 Tieren eine zusätzliche fünftägige Behandlung mit Verbindung 1 an den Tagen 21 bis 25. Es wurde lediglich ein vorrübergehender Wachstumsstillstand, der an Tag 28 der Studie signifikant war, bewirkt. Wenngleich die Reaktion bei den CAPAN-2-Tumorenn nicht so dramatisch war wie bei den T24-Tumorenn, sind die vorliegenden Ergebnisse im Vergleich zu früheren Studien bemerkenswert. Bei unserer ursprünglichen Bewertung der CAPAN-2-Tumoren mit zweimal täglich verabreichter Verbindung 1 mit einem kontinuierlichen Protokoll über 18 Tage bewirkten Dosen von 50 mg/kg (100 mg/kg Gesamttagesdosis) und 100 mg/kg (200 mg/kg Tagesdosis) signifikante Reduktionen des Tumorwachstums. Das Fünf-Tage-Protokoll stellte eine deutliche Reduzierung der Arzneimittelexposition aus dieser früheren Studie dar. Trotzdem wurde eine Antitumorwirkung aufrechterhalten.
Die Dosisabhängigkeit des verkürzten Fünf-Tage-Dosierungsprotokolls wurde an T24-Tumorenn mit Verbindung-1-Dosen von 50, 100 und 200 mg/kg untersucht. Das Anhalten der Reaktion war dosisabhängig, wobei die 200-mg-Dosis wiederum anhaltende Wirkungen bis zum Tag 17 der Untersuchung hervorrief (3). Bei den niedrigeren Dosen nahm die tumorunterdrückende Wirkung ab Tag 14 ab. Bei allen Behandlungsgruppen mit Verbindung 1 wurden noch an Tag 17 der Studie signifikante, dosisabhängige Reduktionen des Tumorwachstums, gemessen als Endtumorfläche ( 4) und Endtumorgewicht (5) beobachtet. Die höchste getestete Dosis von 200 mg/kg, bei der eine 90%ige Reduktion der Endtumorgewichte beobachtet wurde, war wesentlich wirksamer als die niedrigeren Dosen.
Schließlich wurden zur Feststellung der zur Bewirkung einer Antitumorwirkung erforderlichen Mindestexposition an FPT-Inhibitor Tiere mit einer einmaligen Verabreichung von Verbindung 1 behandelt. Wie in 6 gezeigt bewirkte eine einzelne Verabreichung einer 200-mg/kg- oder 400-mg/kg-Dosis an Verbindung 1 drei Tage nach der Inokulation mit dem Tumor eine anhaltende Inhibierung des Tumorwachstums, die bis zu 15 Tage anhielt.
Die vorliegenden Untersuchungen zeigen, daß man durch die verkürzten fünftägigen Expositionen mit Verbindung 1 Antitumorwirkungen herbeiführen kann, die nach der Behandlung noch weitere zwei Wochen oder länger anhalten.
1. Inhibierung des Wachstums von T24 H-rastransformierten NIH3T3-ZellTumorenn durch Verbindung 1, verabreicht als 5-Tage-Stoßbehandlung. Nacktmäuse wurden an Tag 0 subkutan mit 1 × 10⁶ T24-Zellen inokuliert. Nach drei Tagen wurde mit der oralen Verabreichung von beta-Cyclodextrin-Vehikel (100 μl pro 10 g Körpergewicht) oder Verbindung 1 (200 mg/kg) begonnen. Eine Behandlungsgruppe wurde beginnend an Tag 21 weitere fünf Tage lang behandelt. Die Tumorgröße wird als Tumorfläche (Länge × Breite) ausgedrückt. Bei den Werten handelt es sich um Mittelwerte (± SEM) für N = 14–15 Tiere pro Behandlungsgruppe. Um die Abbildung deutlicher zu machen, sind nur für den Tag 21 die signifikant (p < 0,05 gemäß ANOVA) von der Vehikelbehandlungsgruppe abweichenden Werte gezeigt (*). Signifikante Wirkungen beim zweiten Behandlungszyklus mit Verbindung 1 sind für Tag 28 (**) angeführt.
2. Inhibierung des Tumorwachstums von humanen CAPAN-2-BauchspeicheldrüsenTumorenn durch fünftägige Stoßbehandlungen mit Verbindung 1 (200 mg/kg, p. o.). Nacktmäuse wurden subkutan mit 1 × 10⁶ CAPAN-2-Zellen inokuliert. Nach drei Tagen wurde mit der oralen Verabreichung von beta-Cyclodextrin-Vehikel (100 μl pro 10 g Körpergewicht) oder Verbindung 1 (200 mg/kg) begonnen. Eine Behandlungsgruppe wurde beginnend an Tag 21 weitere fünf Tage lang behandelt. Die Tumorgröße wird als Tumorfläche (Länge × Breite) ausgedrückt. Bei den Werten handelt es sich um Mittelwerte (± SEM) für N = 14–15 Tiere pro Behandlungsgruppe. Um die Abbildung deutlicher zu machen, sind für den Tag 24 die signifikant (p < 0,05 gemäß ANOVA) von der Vehikelbehandlungsgruppe abweichenden Werte gezeigt (*). Signifikante Wirkungen beim zweiten Behandlungszyklus mit Verbindung 1 sind für Tag 28 (**) angeführt.
3. Zeitlicher Verlauf der Inhibierung des Wachstums von T24 H-ras-transformierten NIH3T3-Zell-Tumorenn durch Verbindung 1, verabreicht als einzelne Fünf-Tages-Behandlung. Nacktmäuse wurden an Tag 0 subkutan mit 1 × 10⁶ T24-Zellen inokuliert. Nach drei Tagen wurde mit der oralen Verabreichung von beta-Cyclodextrin-Vehikel (100 μl pro 10 g Körpergewicht) oder den angegebenen Dosen an Verbindung 1 durch Schlundsonde begonnen. Die Tumorgröße wird als Tumorfläche (Länge × Breite) ausgedrückt. Bei den Werten handelt es sich um Mittelwerte (± SEM) für N = 14–15 Tiere pro Behandlungsgruppe. Die statistischen Analysen für die am Ende der Studie an Tag 17 vorgenommenen Tumormessungen sind in 4 und 5 wiedergegeben.
4. Inhibierung des Wachstums von T24 H-rastransformierten NIH3T3-ZellTumorenn durch Verbindung 1, verabreicht als einzelne Fünf-Tages-Behandlung. Nacktmäuse wurden an Tag 0 subkutan mit 1 × 10⁶ T24-Zellen inokuliert. Nach drei Tagen wurde mit der oralen Verabreichung von beta-Cyclodextrin-Vehikel (100 μl pro 10 g Körpergewicht) oder den angegebenen Dosen an Verbindung 1 durch Schlundsonde begonnen. Die Tumorgröße wird als Tumorfläche (Länge × Breite) ausgedrückt. Bei den Werten handelt es sich um Mittelwerte (± SEM) für N = 14–15 Tiere pro Behandlungsgruppe. Werte mit dem gleichen Buchstaben sind nicht signifikant verschieden (p < 0,05 gemäß ANOVA). Die prozen tuale Reduktion der Tumorgröße ist über den einzelnen Histogrammbalken angegeben.
5. Inhibierung des Wachstums von T24 H-rastransformierten NIH3T3-ZellTumorenn durch Verbindung 1, verabreicht als einzelne Fünf-Tages-Behandlung. Nacktmäuse wurden an Tag 0 subkutan mit 1 × 10⁶ T24-Zellen inokuliert. Nach drei Tagen wurde mit der oralen Verabreichung von beta-Cyclodextrin-Vehikel (100 μl pro 10 g Körpergewicht) oder den angegebenen Dosen an Verbindung 1 durch Schlundsonde begonnen. Die Tumorgröße wird als post-mortem-Tumorgewicht (g) ausgedrückt. Bei den Werten handelt es sich um Mittelwerte (± SEM) für N = 14–15 Tiere pro Behandlungsgruppe. Werte mit dem gleichen Buchstaben sind nicht signifikant verschieden (p < 0,05 gemäß ANOVA). Die prozentuale Reduktion der Tumorgröße ist über den einzelnen Histogrammbalken angegeben.
6. Zeitlicher Verlauf der Inhibierung des Wachstums von T24 H-ras-transformierten NIH3T3-Zell-Tumorenn durch Verbindung 1, verabreicht als einzelne Behandlung. Nacktmäuse wurden an Tag 0 subkutan mit 1 × 10⁶ T24-Zellen inokuliert. Nach drei Tagen wurde mit der oralen Verabreichung von beta-Cyclodextrin-Vehikel (100 μl pro 10 g Körpergewicht) oder den angegebenen Dosen an Verbindung 1 durch Schlundsonde begonnen. Die Tumorgröße wird als Tumorfläche (Länge × Breite) ausgedrückt. Bei den Werten handelt es sich um Mittelwerte (± SEM) für N = 14–15 Tiere pro Behandlungsgruppe.

Claims

Verwendung eines Farnesylproteintransferaseinhibitors bei der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krebs in Säugetieren, wobei es sich bei dem Farnesylproteintransferase-Inhibitor um (±)-6-[Amino(4-chlorphenyl)(1-methyl-1H-imidazol-5-yl)methyl]-4-(3-chlorphenyl)-1-methyl-2(1H)-chinolinon oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon handelt, das in einem Dosierungszyklus verabreicht wird, bei dem die Verabreichung des Farnesyltransferase-Inhibitors einmal täglich in einer Dosierung von 50–200 mg/kg Körpergewicht über einen Zeitraum von 1–5 Tagen, gefolgt von einer wenigstens 14tägigen Periode, während der kein solcher Farnesyltransferase-Inhibitor verabreicht wird, erfolgt, wobei der Zyklus wenigstens einmal wiederholt wird.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Farnesylproteintransferase-Inhibitor einen Tag lang verabreicht wird.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Farnesylproteintransferase-Inhibitor 5 Tage lang verabreicht wird.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Farnesylproteintransferase-Inhibitor in Einheitsdosisform verabreicht wird.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Farnesylproteintransferase-Inhibitor zusammen mit einem oder mehreren Antikrebsmitteln angewendet wird.