DE4437163C1 - Verfahren und Vorrichtung zur Durchführung flüssigkeitschromatographischer Analysen und Stofftrennungen - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren und eine Vorrichtung zur Durchführung flüssigkeitschromatographischer Analysen und Stofftrennungen, die mit hoher Reproduzierbarkeit, Genauigkeit und Geschwindigkeit ausführbar sind. Die Erfindung ist anwendbar im Labor, im technischen und im Produktionsmaßstab für die Realisierung von Chromatographieaufgaben in den Bereichen der Biotechnologie, Medizin, Chemie und zur Wertstoffgewinnung.

Bekanntlich wird zur qualitativen und quantitativen Analyse und zur präparativen Stofftrennung mit Hilfe der Flüssigkeitschromatographie eine Probe eines Stoffgemisches auf einen chromatographischen Träger gegeben und mittels Elutionsflüssigkeiten (Eluenten), die unter Druck durch den Träger gepreßt werden, aufgetrennt. In Abhängigkeit vom Ausmaß der Wechselwirkung der Bestandteile der Probe mit dem Träger und den Elutionsflüssigkeiten werden die einzelne Bestandteile vom Träger unterschiedlich stark festgehalten und treten fraktioniert aus. Sie werden durch eine Detektionseinrichtung angezeigt und in einem Fraktionssammler gesammelt. Die an der Detektionseinrichtung angezeigten Extinktionen werden üblicherweise als Funktion der Zeit (Retentionszeit) aufgetragen. Anhand des Kurvenbildes können die aufgetrennten Stoffe qualitativ und quantitativ bestimmt werden.

Die Probe kann derart auf den Träger aufgegeben werden, daß sie entweder nur einen Teil oder seine gesamte Kapazität einnimmt. Im letzteren Fall, der sogenannten frontalen Chromatographie, wird der Träger mit dem zu trennenden Stoffgemisch in einem Umfang beaufschlagt, bis der gewünschte Stoff am Auslaß des Moduls, der den Träger beinhaltet, erscheint. Mit geeigneten Elutionsflüssigkeiten kann er eluiert und von den anderen am Träger festgehaltenen Stoffen abgetrennt werden.

Die frontale Chromatographie wird auch zur Ermittlung von Durchbruchskurven benutzt, deren Kenntnis für die Beschreibung der Wirksamkeit des Trägers und des gesamten Moduls für den gewünschten Stofftrennprozeß erforderlich ist. Hierbei wird der Träger vollständig mit dem zu trennenden Stoffgemisch beladen und der zeitliche Verlauf der Extinktion im Ablauf des Trägers gemessen. Aus dem Verlauf der Extinktionskurve für diesen Stoff können Rückschlüsse auf die Qualität und Brauchbarkeit des Trennsystems gezogen werden. Wünschenswert ist ein möglichst steiler Anstieg der Extinktion.

Unter Flüssigkeitschromatographie werden in der Erfindungsbeschreibung Chromatographieverfahren verstanden wie HPLC, Säulenchromatographie und Separationschromatographie. Als Module werden die Baueinheiten bezeichnet, die zwischen Flüssigkeitseinlaß und -auslaß den chromatographischen Träger enthalten. Die Module sind bei der HPLC als Kapillare, bei der Säulenchromatographie als Säule und bei der Separationschromatographie als Dead-End-Module, wie sie in der Separationstechnik (Filtrationstechnik) gebräuchlich sind, ausgestaltet.

Als chromatographische Träger kommen alle bekannten Medien in Betracht, insbesondere Harze, Gele, poröse partikuläre und poröse nichtpartikuläre Adsorber und Ionenaustauscher, für die Separationschromatographie vorzugsweise poröse nichtpartikuläre polymere Adsorber wie Vliese oder Membranen (Membranadsorber) in Form von Röhren, Hohlfasern und flächigen Materialien. Nach der WO-A1 92/00805 sind poröse Membranadsorber Membranen, die an ihrer Oberfläche funktionelle Gruppen, Liganden oder Reaktanden tragen, die zur Wechselwirkung mit mindestens einer Komponente einer mit ihr in Kontakt stehenden flüssigen Phase befähigt sind. Der Transport der flüssigen Phase durch die Membran hindurch erfolgt dabei konvektiv. Die Bezeichnung Membranadsorber ist Oberbegriff für verschiedene Membranadsorbertypen wie Membranionenaustauscher, Ligandenmembranen und aktivierte Membranen. Vliese und Membranen werden zur Erhöhung der Modulkapazität vorzugsweise als Stapel eingesetzt.

Im Routinebetrieb, insbesondere bei automatisch ablaufenden Chromatographiereihen (Chargen), müssen die durchzuführenden Analysen und Stofftrennungen mit dem gleichen Modul wiederholbar sein und ein hohes Maß an Reproduzierbarkeit der Ergebnisse aufweisen. In der Praxis wird eine Reproduzierbarkeit nur unzureichend erreicht. Mit zunehmender Chargenanzahl der zu analysierenden Reihe fallen die Extintionen, die die einzelnen Stoffe charakterisieren, zeitlich nicht mehr zusammen oder sie überlappen stark. Die Zeitverschiebung und Überlappung erschwert die Zuordnung der einzelnen Extinktionen zu den dazugehörigen Stoffen und behindert somit ihre qualitative und quantitative Auswertung. Die Überlappung führt zu einer deutlichen Verschlechterung in der Auftrennung des Stoffgemisches in die gewünschten Komponenten. Die Durchbruchskurven verlaufen in der frontalen Chromatographie stark abgeflacht, so daß die Module für die jeweilige Trennaufgabe ungeeignet zu sein scheinen. Die Flußrate an Elutionsflüssigkeit durch den Modul nimmt mit zunehmender Dauer der Chromatographie, das heißt mit zunehmender Elutionszeit und Chargenanzahl ab.

Die Zeitverschiebung der Extinktion und die damit verbundenen Nachteile sind in erster Linie zurückzuführen auf eine Abnahme der Flußrate an Elutionsflüssigkeit durch den Modul. Die Abnahme der Flußrate kann verursacht werden durch Leckagen auf der Druckseite der Vorrichtung, Qualitätsmängel in der Druckbeaufschlagung, z. B. durch mangelhafte Pumpen und durch Verringerung der Durchlaßfähigkeit des Moduls, z. B. wegen Verblockung der Poren des Trägers, wie Deckschichtbildung auf der Oberfläche (Membranfouling), unzulässiges Quellverhalten oder Verdichtungen des Trägers. Zur Beseitigung dieser Mängel wurden Maßnahmen vorgeschlagen wie, Verwendung von Hochleistungspräzisionspumpen, regelmäßige Überprüfung der Vorrichtung auf Undichtigkeiten und ihre Beseitigung, zusätzliche Regenerierungsschritte des Trägers, Eichungen mit internen Standardsubstanzen und Rekalkulation der Daten durch Computerprogramme.

So ist aus DE-A1 36 08 227 eine Anordnung zur Flüssigkeitschromatographie bekannt, die ein genaues Analysenergebnis liefern soll, indem ein Korrekturfaktor aus einem frei vorwählbaren Soll-Durchfluß an zu eluierender Flüssigkeit und einem gemessenen Ist-Durchfluß ermittelt und zur Rekalkulation an die Auswerteeinheit übermittelt wird. Mit dieser Korrektur wird dafür gesorgt, daß Abweichungen der Ist-Flußrate am Detektor nicht zu einer Verfälschung des Analysenergebnisses führen. Die Ermittlung des Korrekturfaktors erfolgt mit einem speziellen dem Detektor nachgeschalteten Durchflußmesser für Mikromengen, die bis zu 0,1 Mikroliter pro Sekunde herunter gehen können.

Alle diese Maßnahmen erhöhen den Aufwand zur Durchführung der Chromatographie oder sind im Routinebetrieb, insbesondere bei automatischen Chromatographiereihen nicht oder nur unzureichend realisierbar.

Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein verbessertes Verfahren zur Durchführung flüssigkeitschromatographischer Analysen und Stofftrennungen zu schaffen, das sich insbesondere durch eine hohe Reproduzierbarkeit der Ergebnisse, eine verbesserte Trennleistung und gegebenenfalls durch eine höhere Geschwindigkeit auszeichnet, sowie eine Vorrichtung zur Durchführung des Verfahrens bereitzustellen.

Die Aufgabe wird dadurch gelöst, daß die Extinktion der eluierten Stoffe als Funktion der Menge an eluierter Flüssigkeit bestimmt wird und/oder die Flußrate an eluierter Flüssigkeit konstant gehalten wird und daß eine Vorrichtung zur Durchführung flüssigkeitschromatographischer Analysen und Stofftrennungen mit einer Einrichtung zur Mengenbestimmung an eluierter Flüssigkeit und/oder mit einer Einrichtung zur Steuerung der Flußrate an eluierter Flüssigkeit kombiniert wird.

Es wurde überraschenderweise gefunden, daß die Extinktionen, die als Funktion der Menge an eluierter Flüssigkeit gemessen wurden, zwischen den Chargen in hohem Maße übereinstimmen, während sie, wenn sie wie nach dem Stand der Technik über die Zeit gemessen werden, deutlich voneinander abwichen und damit zu nicht reproduzierbaren Ergebnissen oder Fehlinterpretationen in der Verwendbarkeit des chromatographischen Systems führten.

Weiter wurde gefunden, daß Trennaufgaben mit gleichbleibender Trennschärfe zwischen den Stoffen und hoher Reproduzierbarkeit durchgeführt werden können, wenn man die Flußrate konstant hält. Dazu wird die Förderleistung von Dosierpumpen in Abhängigkeit von der im Fraktionssammler gemessenen eluierten Menge so geregelt, daß die Flußleistung nach Passage des Moduls konstant ist. Das hat den Vorteil, daß die Vorrichtung kostengünstig aufgebaut werden kann, indem man auf die Verwendung von Präzisionspumpen und einen hohen Aufwand bei der Abdichtung des Systems verzichtet. Die Trennaufgaben sind im Routinebetrieb mit dem gleichen Zeitaufwand für jede Charge durchführbar. Dadurch, daß bei erfindungsgemäßer Durchführung des Verfahrens mit konstanter Flußrate eine nach dem Stand der Technik auftretende dramatische Verschiebung der Elutionspeaks, die durch Verblocken der Adsorber-Einheit hervorgerufen würde, verhindert wird, wird eine sichere Identifikation der einzelnen Substanzen auch im Routinebetrieb gewährleistet.

Die Bestimmung der Menge an eluierter Flüssigkeit wird vorzugsweise gravimetrisch oder volumetrisch vorgenommen. Alternativ oder zusätzlich erfolgt ausgehend von der gemessenen Menge an eluierter Flüssigkeit eine Rückkopplung auf die Druckbeaufschlagung des Moduls mit Elutionsflüssigkeit in der Weise, daß eine konstante Flußrate innerhalb einer Chromatographiecharge und über alle Chargen hinweg gewährleistet wird.

In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung erfolgt die Bestimmung der Menge an eluierter Flüssigkeit gravimetrisch mittels einer Waage und die Konstanthaltung der Flußrate mittels einer Vorrichtung zum pulsationsfreien kontinuierlichen gravimetrischen Dosieren, wie sie beispielsweise aus der Deutschen Patentschrift 39 38 898 bekannt ist.

Die Erfindung wird anhand der beiliegenden Zeichnungen und Beispiele näher beschrieben. Dabei zeigt:

Fig. 1 die schematische Darstellung eines Ausführungsbeispiels einer erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einer Einrichtung zur gravimetrischen Bestimmung der eluierten Flüssigkeit,

Fig. 2 die schematische Darstellung eines Ausführungsbeispiels einer erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einer Einrichtung zur Konstanthaltung der Flußrate,

Fig. 3 Durchbruchskurven für ein Protein mit erfindungsgemäßer und ohne Regelung der Flußrate,

Fig. 4A ein Chromatogramm mit erfindungsgemäßer Regelung der Flußrate, in dem die Extinktionen als Funktion der Zeit dargestellt ist und

Fig. 4B ein Chromatogramm, bei dem die Extinktionen als Funktion der Zeit dargestellt sind, wobei aber keine Regelung der Flußrate erfolgte.

Das Ausführungsbeispiel gemäß Fig. 1 besteht aus einer Kombination einer HPLC-Vorrichtung, von der ein Eluentenreservoir 1, eine Dosierpumpe 2, eine Trennsäule 3, ein Detektor 4, ein Fraktionssammler 5 für eluierte Flüssigkeit und eine PC-gesteuerte Datenerfassungs-,-Steuer- und Auswerteeinheit 6 dargestellt ist, mit einer elektronischen Waage 7 zur Messung der Masse an eluierter Flüssigkeit. Der Detektor 4 und die elektronische Waage 7 sind mit der PC-gesteuerten Datenerfassungs-, Steuer- und Auswerteeinheit 6 datenverarbeitungstechnisch verbunden. Die PC-gesteuerte Datenerfassungs-, Steuer- und Auswerteeinheit 6 liefert Extinktionskurven als Funktion der Masse.

Beispiel 1

Mit einer HPLC-Vorrichtung (Millenium 2010 mit Refraktometer Detektor der Waters GmbH) wird ein Lösungsgemisch von Dextranen mit einer Molekularmasse zwischen 4000 und 550 000 chromatographiert.

In der Tabelle 1 sind die in einer ersten und einer 5. Charge gemessenen Extinktionswerte in bekannter Weise als Funktion der Zeit und erfindungsgemäß als Funktion der Masse an eluierter Flüssigkeit dargestellt. Es ist sichtbar, daß die Extinktionen, die als Funktion der Zeit gemessen wurden zwischen den Chargen deutlich voneinander abweichen, während sie nach dem erfindungsgemäßen Verfahren in einem hohen Maß übereinstimmen.

Tabelle 1

Wie das Ausführungsbeispiel gemäß Fig. 2 zeigt, besteht die Vorrichtung aus einer Kombination einer Vorrichtung zur Separationschromatographie mit einem Modul 8, Gefäßen zur Aufnahme der zu separierenden Probenlösung 9, 9′, Eluentenreservoirs 1, 1′, einem Fraktionssammler 5 für eluierte Flüssigkeit, einem Detektor 4 und aus einer Vorrichtung zur gravimetrischen Dosierung eines Flüssigkeits-Massenstromes in Form einer elektronischen Waage 7, einer Schnittstelle 10, einer PC gesteuerten Datenerfassungs-, Steuer- und Auswerteeinheit 6 und Dosierpumpen 2, 2′. Der Modul 8 enthält einen chromatographischen Träger 11 in Form eines Membranadsorbers, vorzugsweise eines Membranadsorberstapels aus mindestens zwei Membranlagen, der fluiddicht zwischen einem Flüssigkeitseinlaß 12 und einem Flüssigkeitsauslaß 13 für Permeat (eluierte Flüssigkeit) angeordnet ist. Am Flüssigkeitsauslaß 13 für Permeat (eluierte Flüssigkeit) ist der Detektor 4 zur Messung der Extinktion der durch den Träger 11 durchbrechenden Stoffe angeordnet bevor der Flüssigkeitsauslaß 13 in einem auf einer elektronischen Waage 7 befindlichen Fraktionssammler 5 mündet. Die Lösung des zu behandelnden Stoffgemisches befindet sich in den Probengefäßen 9 oder 9′. Sie wird aus 9′ beispielsweise per Hand mittels Kolbenspritze oder aus 9 automatisch über die Dosierpumpe 2 oder einer wahlweise vorhandenen (Hilfs-) Dosierpumpe 2′, die druckseitig mit dem Flüssigkeitseinlaß 12 des Moduls 8 verbunden sind, auf den Träger 11 aufgegeben. Die Dosierpumpe 2 und die wahlweise vorhandene (Hilfs-) Dosierpumpe 2′ sind ansaugseitig mit den Eluentenreservoirs 1, 1′ verbunden.

Die Vorrichtung zur gravimetrischen Dosierung des Flüssigkeits-Massenstromes fördert die Flüssigkeit mit einem voreinstellbaren Wert aus dem Probengefäß 9 und den Eluentenreservoirs 1, 1′ mit der Dosierpumpe 2 oder den Dosierpumpen 2, 2′ über den Flüssigkeitseinlaß 12, den Träger 11 und den Flüssigkeitsauslaß 13 des Moduls 8 in den Fraktionssammler 5, der sich auf der elektronischen Waage 7 befindet. Mit Hilfe eines Datenerfassungs-, Steuer- und Auswerteprogramms der PC-gesteuerte Datenerfassungs-, Steuer- und Auswerteeinheit 6 wird aufgrund der Ausgangssignale der Waage 7 die Förderleistung der Dosierpumpe 2 beziehungsweise der Dosierpumpen 2, 2′ so geregelt, daß der voreingestellte Wert des Massenstromes an Flüssigkeit, der den Träger 11 passiert, konstant gehalten wird. Über die Schnittstelle 10 ist die PC gesteuerte Datenerfassungs-, Steuer- und Auswerteeinheit 6 mit der Waage 7, den Dosierpumpen 2, 2′ und dem Detektor 4 datenverarbeitungstechnisch verbunden.

Beispiel 2

Mit einer erfindungsgemäßen Vorrichtung gemäß Fig. 2 wurde die Durchbruchskurve eines Testproteins bei konstanter Flußrate bestimmt und mit einer Durchbruchskurve, die in herkömmlicher Weise ohne Regelung der Flußrate erhalten wurde, verglichen. Dazu wurden in beiden Fällen die Extinktionen als Funktion der Zeit dargestellt.

Zur Durchführung des Verfahrens wird ein Modul mit einem stark basischen Membranionenaustauscher von 3,4 cm² Fläche mit Rinderserumalbumin (0,5 mg/ml 0,01 M Kalium-Phosphat-Puffer, pH 7) beaufschlagt und die Extinktion im Ablauf des Moduls aufgezeichnet. Das Ergebnis wird durch die in der Fig. 3 dargestellten Kurven widergegeben, wobei die Kurve 2 ohne Regelung der Flußrate und die Kurve 1 erfindungsgemäß mit Regelung der Flußrate erhalten wurde. Aus dem verzögerten Beginn des Durchbruchs an Rinderserumalbumin (Kurve 2) wird eine höhere Kapazität des Membranadsorbers vorgetäuscht, als tatsächlich vorhanden ist. Außerdem könnte der flache Anstieg der Kurve 2 zu dem Schluß führen, daß das System für bestimmte Trennaufgaben unter den gewählten Bedingungen ungeeignet ist.

Die Tabelle 2 gibt die gemessenen Flußraten gemäß Beispiel 2 am Beginn und Ende der Charge wider.

Tabelle 2

Beispiel 3

Zur Trennung eines Proteingemisches mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung gemäß Fig. 2 wird ein Gemisch der drei kommerziell erhältlichen Proteine Chymotrypsinogen, Cytochrom C und Lysozym (je 0,5 mg/ml; Gesamtproteingehalt 1,5 mg/ml) in 0,01 M Natrium-Acetat-Puffer pH 5,0 gelöst und von dieser Lösung 1 ml durch einen stark sauren Membran-Ionenaustauscher-Modul gepumpt. Dabei war die Adsorption der Proteine vollständig, wie das Fehlen von Proteinen im Ablauf der Einheit zeigte. Durch Anlegen eines linearen Gradienten von 0-1 M Kalium-Chlorid in 0,01 M Natrium-Acetat pH 5,0 werden die Proteine in der Reihenfolge Chymotrypsinogen, Cytochrom C und Lysozym eluiert.

Das mit der erfindungsgemäßen Regelung der Flußrate erhaltene Chromatogramm, in dem die Extinktionen als Funktion der Masse dargestellt ist, zeigt Fig. 4A. Ein Vergleich mit einem Chromatogramm, bei dem die Extinktionen als Funktion der Zeit dargestellt ist, und das unter den gleichen Bedingungen wie in Beispiel 3 beschrieben erhalten wurde, wobei aber keine Regelung der Flußrate erfolgte (Fig. 4 B) zeigt, daß durch Verblocken der Adsorber-Einheit die Elutionspeaks dramatisch verschoben werden, so daß eine sichere Identifikation der einzelnen Substanzen nicht mehr gewährleistet ist.

Claims (10)

1. Verfahren zur Durchführung flüssigkeitschromatographischer Analysen und Stofftrennungen durch Aufbringen eines Stoffgemisches auf einen in einem Modul befindlichen chromatographischen Träger, Hindurchpumpen von Elutionsflüssigkeiten durch den Modul, Detektieren der nach Passage des Moduls in der eluierten Flüssigkeit vorhandenen Stoffe und Sammeln der eluierten Flüssigkeit in einem Fraktionssammler, dadurch gekennzeichnet, daß die Masse an eluierter Flüssigkeit mit einer Waage gemessen wird und die detektierten Extinktionswerte der Stoffe als Funktion der Masse an eluierter Flüssigkeit zur Analyse und Stofftrennung ausgewertet werden.

2. Verfahren zur Durchführung flüssigkeitschromatographischer Analysen und Stofftrennungen durch Aufbringen eines Stoffgemisches auf einen in einem Modul befindlichen chromatographischen Träger, Hindurchpumpen von Elutionsflüssigkeiten durch den Modul mittels Dosierpumpen, Detektieren der nach Passage des Moduls in der eluierten Flüssigkeit vorhandenen Stoffe, Sammeln der eluierten Flüssigkeit in einem Fraktionssammler und Darstellen der detektierten Extinktionswerte als Funktion der Zeit, dadurch gekennzeichnet, daß die Flußrate an eluierter Flüssigkeit nach Passage des Moduls gemessen wird, die Meßwerte einer PC-gesteuerten Datenerfassungs-, Steuer- und Auswerteeinheit zugeführt und derart verarbeitet werden, daß durch Steuerung der Dosierpumpen die Flußrate an eluierter Flüssigkeit konstant auf einen voreinstellbaren Wert gehalten wird.

3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Flußrate an eluierter Flüssigkeit gravimetrisch oder volumetrisch gemessen wird.

4. Verfahren nach den Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß das Stoffgemisch auf Membranadsorber als in einem Modul befindlichen chromatographischen Träger aufgebracht wird.

5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Stoffgemisch auf einen aus mindestens zwei flächigen Zuschnitten bestehenden Membranadsorberstapel aufgebracht wird.

6. Vorrichtung zur Durchführung flüssigkeitschromatographischer Analysen und Stofftrennungen gemäß Anspruch 1 bestehend aus einem Modul mit einem Flüssigkeitsein- und auslaß, zwischen denen sich ein chromatographischer Träger befindet, Dosierpumpen, die druckseitig mit dem Flüssigkeitseinlaß des Moduls und ansaugseitig mit Probegefäßen und Eluentenreservoirs verbunden sind, einem Fraktionssammler, der nach dem Flüssigkeitsauslaß des Moduls angeordnet ist und einem Detektor am Flüssigkeitsauslaß, dadurch gekennzeichnet, daß der Fraktionssammler mit einer Waage zum Messen der Masse an eluierter Flüssigkeit verbunden ist und wahlweise eine PC-gesteuerte Datenerfassungs-, Steuer- und Auswerteeinheit an die Waage und den Detektor datenverarbeitungstechnisch angeschlossen ist, um die detektierten Extinktionen als Funktion der Masse an eluierter Flüssigkeit darzustellen.

7. Vorrichtung zur Durchführung flüssigkeitschromatographischer Analysen und Stofftrennungen gemäß der Ansprüche 2 bis 5 bestehend aus einem Modul mit einem Flüssigkeitsein- und auslaß, zwischen denen sich ein chromatographischer Träger befindet, Dosierpumpen, die druckseitig mit dem Flüssigkeitseinlaß des Moduls und ansaugseitig mit Probegefäßen und Eluentenreservoirs verbunden sind, einem Fraktionssammler, der nach dem Flüssigkeitsauslaß des Moduls angeordnet ist und einem Detektor am Flüssigkeitsauslaß, dadurch gekennzeichnet, daß über eine Schnittstelle eine PC-gesteuerte Datenerfassungs-, Steuerungs- und Auswerteeinheit mit einer Einrichtung zur Messung der Masse oder des Volumens an im Fraktionssammler vorhandener eluierter Flüssigkeit, den Dosierpumpen und dem Detektor datenverarbeitungstechnisch verbunden ist, derart, daß mit Hilfe der PC-gesteuerten Datenerfassungs-, Steuer-, und Auswerteeinheit die Förderleistung der Dosierpumpen so geregelt wird, daß ein voreingestellter Wert eines Massen- oder Volumenstroms an eluierter Flüssigkeit, der den Modul passiert hat, eingehalten wird.

8. Vorrichtung nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß die Einrichtung zur Messung der Masse eine Waage ist.

9. Vorrichtung nach den Ansprüchen 6 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß der chromatographische Träger aus Membranadsorbern besteht.

10. Vorrichtung nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß die Membranadsorber als Membranadsorberstapel vorliegen, die aus mindestens zwei flächigen Zuschnitten bestehenden.