DE4424761C1 - Expressionskassette für die Antisense- und die Ribozym-Expression - Google Patents
Expressionskassette für die Antisense- und die Ribozym-ExpressionInfo
- Publication number
- DE4424761C1 DE4424761C1 DE4424761A DE4424761A DE4424761C1 DE 4424761 C1 DE4424761 C1 DE 4424761C1 DE 4424761 A DE4424761 A DE 4424761A DE 4424761 A DE4424761 A DE 4424761A DE 4424761 C1 DE4424761 C1 DE 4424761C1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- ribozyme
- expression cassette
- loop region
- antisense
- rna
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 title claims abstract description 37
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 title claims abstract description 37
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 108091034131 VA RNA Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims abstract description 4
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 9
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 13
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 10
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 6
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 241000251131 Sphyrna Species 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 1
- 230000003760 hair shine Effects 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/61—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft einen Vektor für die Antisense- und für
die Ribozym-Expression. Anwendungsgebiete der Erfindung sind
die Molekularbiologie, die Gentechnik und die Medizin.
Die Inaktivierung von Genfunktionen durch reverses genetisches
Material ist die wichtigste Methode, um bestimmte Gene
abzuschalten. Das ist von großer Bedeutung zur Bekämpfung von
infektiösen und anderen, durch Störung der Genexpression
bedingten Krankheiten (einschließlich AIDS). Eine Genfunktion
kann in verschiedenen Ebenen außer Kraft gesetzt werden: durch
homologe Rekombination auf der DNA-Ebene, durch Antisense-
Nukleinsäuren oder Ribozyme auf der RNA-Ebene oder durch
Antikörper auf der Proteinebene. In der praktischen Umsetzung
haben alle 4 Möglichkeiten Vor- und Nachteile. Für eine
therapeutische Anwendung scheint nur die RNA-Inaktivierung durch
Antisense-Moleküle oder durch Ribozyme durchführbar zu sein.
Beide Verbindungsklassen können durch chemische Synthese oder in
Verbindung mit einem Promoter durch biologische Expression in
vitro oder sogar in vivo hergestellt werden. Das Prinzip der
katalytischen Selbstspaltung von RNA-Molekülen und der Spaltung
in trans hat sich in den letzten 10 Jahren gut etabliert.
Innerhalb der RNA-Moleküle mit Ribozym-Aktivität sind die
Hammerhead-Ribozyme am besten charakterisiert. Nachdem gezeigt
worden ist, daß Hammerhead-Strukturen in heterologe RNA-
Sequenzen integriert werden und dadurch die Ribozym-Aktivität
auf dieses Molekül übertragen können, scheint es naheliegend,
daß katalytische Antisense-Sequenzen für fast jede Zielsequenz
mit einem übereinstimmenden Spaltort vorgesehen werden können.
Das Grundprinzip der Ribozym-Ausstattung ist sehr einfach: Man
wählt eine interessierende Region der RNA aus, die das Triplett
GUC (bzw. CUC) enthält, nimmt 2 Oligonukleotid-Stränge mit je 6 bis
8 Nukleotiden und fügt die katalytische Hammerhead-Sequenz
dazwischen ein.
Moleküle dieser Art wurden für zahlreiche Zielsequenzen
synthetisiert, sie zeigten katalytische Aktivität in vitro und
in manchen Fällen auch in vivo. Die besten Ergebnisse wurden mit
kurzen Ribozymen und Zielsequenzen erzielt. Eine aktuelle
Herausforderung für die in-vivo-Anwendung ist die Konstruktion
von Ribozymgenen, die eine kontinuierliche Expression des
Ribozyms in einer bestimmten Zelle erlauben (Bertrand, E. et al.
[1994] Nucleic Acids Res. 22, 293-300).
Es gibt 5 potentielle Gründe, die eine befriedigende Funktion
von exprimierten Ribozymen innerhalb des komplexen Zellmilieus
behindern.
- 1. Innerhalb der Zelle existiert das mRNA-Substrat vermutlich in einer stark gefalteten Struktur, die außerdem noch durch an Teile der Struktur gebundene Proteine geschützt sein kann. Das Treffen von zugänglichen Orten innerhalb des Substrates zur Hybridisierung mit den komplementären flankierenden Regionen des Ribozyms ist eine Frage der aktuellen Wahrscheinlichkeit. Computergestützte Vorhersagen von möglichen thermodynamisch stabilen Sekundärstrukturen können für die Suche nach Loop- Regionen ohne Basenpaarung nützlich sein, aber die physiologische Relevanz dieser Konformationsmodelle ist noch unsicher.
- 2. Da die Ziel-mRNA sofort aus dem Zellkern heraustransportiert wird, muß das Ribozym auch in das Zytoplasma übergehen, bevorzugt auf demselben Wege. Es ist jedoch schwierig, eine Kolokalisation von Ribozymen und ihrem Substrat zu erreichen.
- 3. Der Einsatz von Ribozymen in vivo erfordert die Einfügung von Ribozymgenen in geeignete Expressionskassetten. Die Transkription dieser Konstrukte kann mRNAs produzieren, in denen die zentrale katalytische Sekundärstruktur der Ribozyme durch andere, stabilere Basenpaarungen innerhalb der nichtkomple mentären flankierenden Sequenzen verdrängt wird.
- 4. Ein Überschuß (100-1000fach) an Ribozym-Molekülen gegenüber der Zielsequenz ist notwendig, um ein registrierbares Ansteigen des RNA-Niveaus zu erreichen. Die Produktion von 10⁵-10⁶ Ribozym- Molekülen pro Zelle über eine lange Periode hinweg kann jedoch zytotoxische Wirkung haben. Im allgemeinen sind solche hohen Expressionsniveaus nicht stabil. Die Notwendigkeit des Überschusses an Ribozymen wird durch die ungenügende Stabilität der Ribozyme gegenüber Nukleasen, durch den uneffektiven Transport zum Zytoplasma und durch den nicht optimalen Umsatz- Faktor der Spaltungsreaktion hervorgerufen.
- 5. Die Kinetik der Spaltungsreaktion und die Fähigkeit der Ribozyme, Multi-Umsatz-Reaktionen durchzuführen, hängt von den Bindungsparametern und der Struktur der komplementären flankierenden Regionen der Ribozyme ab. Zelluläre Proteine können die Katalyse der Spaltungsreaktion beeinflussen, wahrscheinlich mit Hilfe der Dissoziation des Ribozyms vom Substrat der Spaltung, das die Vorstufe zur nächsten Spaltung darstellt. Bis heute ist es nicht möglich, die optimale Struktur der flankierenden Regionen für ein Ribozym vorherzusagen, um hohe Spezifität und einen hohen Umsatz zu garantieren.
Insgesamt kann man feststellen, daß trotz vieler Bemühungen zur
Konstruktion spezifischer Ribozym-Gene nur Teilerfolge erzielt
wurden, meist auf der Basis von "trial and error"-Experimenten.
Die Erfindung hat das Ziel, einen Vektor für die Antisense- und
die Ribozymexpression zu konstruieren. Er soll in der Lage sein,
eine kontinuierliche und stabile Expression eines bestimmten
gewünschten Ribozyms bzw. einer Antisensesequenz in einer Zelle
zu bewirken.
Diese Zielstellung wird mit dem Aufbau der erfindungsgemäßen
Expressionskassette gemäß Anspruch 1 realisiert. Sie hat
folgende Bestandteile:
- - einen starken Promotor
- - ein adenovirales va-RNA-Gen
- - eine stabile Schleifen(loop)-Region und
- - einen Insertionsort für die Antisense-/Ribozymsequenz in der Schleifenregion.
Die Unteransprüche 2-6 enthalten die Vorzugsvarianten der
Expressionskassette.
Der T7-Promoter wird bevorzugt in Kombination mit T7-Polymerase
verwendet. Die Loop-Region befindet sich in einem
Restriktionsort im zentralen Teil des adenoviralen va-RNA-Gens,
ihre Größe beträgt mindestens 2×21 Basen gleicher Sequenz. Eine
bevorzugte Basensequenz der Loop-Region ist
5′- AACCCAGGTGTGCGACGTCAG-3′.
5′- AACCCAGGTGTGCGACGTCAG-3′.
Ein Beispiel für die erfindungsgemäße Expressionskassette ist in
Abb. 1 gegeben.
Abb. 2 zeigt das Ergebnis der Spaltung von hGH RNA durch
ein spezifisches Ribozym in vitro.
A: Struktur des spezifischen Ribozyms für eine 27 n.t. Region um
das GUC auf Position 988 innerhalb des Exon IV von hGH RNA.
B: Karten von Plasmidmatrizen für die Ribozymsynthese durch in
vitro Transcription mit pol III (HeLa-extract) und T7-RNA
Polymerase.
C: Elektrophoretische Darstellung der Spaltprodukte.
Die Plasmide T7Rz und T7Rzneo wurden mit Hind III-Behandlung
linearisiert. GvaRz und GvaLRz wurden in Zirkularform
eingesetzt. hGH-RNA wurde aus einem linearen (SstI-Schnitt)
genomischen hGH-Gen (1663nt) durch in-vitro-Transkription mit
T7-RNA Polymerase (mit 0,2 µCi³²P CTP/µg RNA) synthetisiert. Eine
äquimolare Mixtur (100 nM) von Ribozym und Substrat wurde bei
37°C in 50 mM Tris-Cl pH 7,5 und 10 mM MgCl₂ für 30 min mit
vorheriger Hitzedenaturierung (90 sec 95°C) inkubiert. Nach der
Spaltung wurden die RNAs gereinigt und einzeln auf einem 6% PAA-
Gel getrennt. RNA- und Ribozym-Spaltungsprodukte mit voller Länge
(988nt und 675nt) wurden nachgewiesen. Das Ergebnis zeigt, daß
die Einbettung der katalytischen Hammerhead-Struktur in eine
stabilisierende RNA (va) erst nach zusätzlichem Einbau der loop-
Region zu einem funktionsfähigen und stabilen Ribozym führt.
Claims (6)
1. Expressionskassette für die Antisense- und die Ribozym
expression, gekennzeichnet durch
- - einen starken Promoter,
- - ein adenovirales va-RNA-Gen,
- - eine stabile Schleifen(loop)-Region und
- - einen Insertionsort für die Antisense- bzw. Ribozymsequenz in der Schleifenregion.
2. Expressionskassette nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß als starker Promotor der T7-Promotor verwendet wird.
3. Expressionskassette nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß der T7-Promoter in Kombination mit T7-Polymerase verwendet
wird.
4. Expressionskassette nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß sich die Loop-Region in einem Restriktionsort im zentralen
Teil des adenoviralen va-RNA-Gens befindet.
5. Expressionskassette nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß die Größe der Loop-Region mindestens 2×21 Basen gleicher
Sequenz beträgt.
6. Expressionskassette nach Anspruch 1 und 5, dadurch gekenn
zeichnet, daß die Loop-Region zweimal folgende Basensequenz
enthält: 5 ′-AACCCAGGTGTGCGACGTCAG-3′.
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4424761A DE4424761C1 (de) | 1994-07-04 | 1994-07-04 | Expressionskassette für die Antisense- und die Ribozym-Expression |
US08/314,588 US5695992A (en) | 1994-07-04 | 1994-09-28 | Expression cassette for antisense expression of ribozyme |
PCT/DE1995/000663 WO1996001315A1 (de) | 1994-07-04 | 1995-05-19 | Expressionskassette für die antisense- und die ribozym-expression |
EP95919314A EP0767834A1 (de) | 1994-07-04 | 1995-05-19 | Expressionskassette für die antisense- und die ribozym-expression |
US08/887,674 US6130092A (en) | 1994-07-04 | 1997-07-03 | Ribozyme gene library and method for making |
US09/089,594 USRE37411E1 (en) | 1994-07-04 | 1998-06-02 | Expression cassette for antisense expression of ribozyme |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4424761A DE4424761C1 (de) | 1994-07-04 | 1994-07-04 | Expressionskassette für die Antisense- und die Ribozym-Expression |
US08/314,588 US5695992A (en) | 1994-07-04 | 1994-09-28 | Expression cassette for antisense expression of ribozyme |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE4424761C1 true DE4424761C1 (de) | 1995-06-08 |
Family
ID=25938313
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE4424761A Expired - Fee Related DE4424761C1 (de) | 1994-07-04 | 1994-07-04 | Expressionskassette für die Antisense- und die Ribozym-Expression |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US5695992A (de) |
EP (1) | EP0767834A1 (de) |
DE (1) | DE4424761C1 (de) |
WO (1) | WO1996001315A1 (de) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6130092A (en) * | 1994-07-04 | 2000-10-10 | Max-Planck Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Ribozyme gene library and method for making |
US6107027A (en) * | 1994-12-14 | 2000-08-22 | University Of Washington | Ribozymes for treating hepatitis C |
FR2743818B1 (fr) * | 1996-01-23 | 1998-04-10 | Agronomique Inst Nat Rech | Constructions d'adn et vecteurs d'expression derives du gene de l'arn va i d'adenovirus |
GB9912965D0 (en) * | 1999-06-03 | 1999-08-04 | Oxford Biomedica Ltd | In vivo selection method |
DE10046913A1 (de) * | 2000-09-21 | 2002-04-18 | Nascacell Gmbh | Expressionssystem für funktionale Nukleinsäuren |
US8252527B2 (en) * | 2007-02-16 | 2012-08-28 | The Research Foundation Of State University Of New York | Method for identification of polynucleotides capable of cleaving target mRNA sequences |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0387775B1 (de) * | 1989-03-16 | 1996-07-31 | BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GmbH | Genetische Einheiten zur Inhibierung der Funktion von RNA |
FR2687411A1 (fr) * | 1992-02-13 | 1993-08-20 | Nice Sophia Antipolis Universi | Vecteur comportant un gene viral transcrit par l'arn polymerase iii, et procede de production intracellulaire d'arn. |
-
1994
- 1994-07-04 DE DE4424761A patent/DE4424761C1/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-28 US US08/314,588 patent/US5695992A/en not_active Ceased
-
1995
- 1995-05-19 EP EP95919314A patent/EP0767834A1/de not_active Ceased
- 1995-05-19 WO PCT/DE1995/000663 patent/WO1996001315A1/de not_active Application Discontinuation
-
1998
- 1998-06-02 US US09/089,594 patent/USRE37411E1/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Nucleic Acids Research, Vol. 22, No. 3, S. 293 - 300, 1994 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0767834A1 (de) | 1997-04-16 |
USRE37411E1 (en) | 2001-10-16 |
WO1996001315A1 (de) | 1996-01-18 |
US5695992A (en) | 1997-12-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE4424762C1 (de) | Ribozym-Bibliothek, ihre Herstellung und ihre Verwendung | |
EP1798285B1 (de) | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens | |
EP0845476B1 (de) | Synthetische katalytische Oligonukleotide | |
DE69435005T2 (de) | Antisense Oligonukleotide die anomales Splicing verhindern und deren Verwendung | |
DE69636937T2 (de) | Durch trans-spaltung erhaltene therapeutische molekule | |
EP0387775B1 (de) | Genetische Einheiten zur Inhibierung der Funktion von RNA | |
EP2121922B1 (de) | Biologisch wirksame moleküle, insbesondere auf grundlage von pna und sirna, verfahren zu deren zellspezifischen aktivierung sowie applikationskit zur verabreichung | |
EP1951870B1 (de) | Dna-konstrukte zur spezifischen hemmung der genexpression durch rna-interferenz | |
WO2003035876A1 (de) | Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur behandlung einer infektion mit einem (+)-strang-rna-virus | |
EP1276889A2 (de) | Sleeping beauty, ein transposonvektor mit breitem wirtsbereich für die genetische transformation bei wirbeltieren | |
WO2003062423A2 (de) | Verfahren zur hemmung der expression eines durch eine chromosomen-aberration entstandenen zielgens | |
DE4424761C1 (de) | Expressionskassette für die Antisense- und die Ribozym-Expression | |
DE19520815C2 (de) | Replikatives und transkriptionsaktives Peptid-Nukleinsäureplasmid, sowie seine Verwendung zur Einbringung in Zellen und Zellorganellen | |
DE60202196T2 (de) | Orientationsgerichtete konstruktion von plasmiden | |
EP0299303B1 (de) | Eukaryotische Expressionsvektoren mit multimeren Enhancer-Subelementen, Verfahren zu ihrer Herstellung und Verwendung | |
EP1259263B1 (de) | Komplexierung von rns, insbesondere von ribozymen, mit polyethyleniminen zu deren stabilisierung und zellulären einschleusung | |
WO1997004087A1 (de) | Ribozyme zur selektiven hemmung der expression von genen von mhc-allelen und diese enthaltende arzneimittel | |
DE102004038535B4 (de) | Zelluläre Einschleusung von Nukleinsäurewirkstoffen | |
DE19828624C1 (de) | Modular aufgebaute RNA-Moleküle mit zwei Sequenzbereichstypen | |
WO2003025169A2 (de) | Nukleinsäure für einen klonierungsvektor | |
DE69933382T2 (de) | Herstellung von ssdna innerhalb der zelle | |
EP1068237A1 (de) | T-zellrezeptor-expressionskassette | |
EP0877088A2 (de) | Regulation der Translationsinitiation in Eukaryotenzellen | |
WO2018149740A1 (de) | System und verfahren zur zelltyp-spezifischen translation von rna-molekülen in eukaryoten | |
DD247699A1 (de) | Verfahren zur selektiven hemmung der proteinbiosynthese |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8100 | Publication of the examined application without publication of unexamined application | ||
D1 | Grant (no unexamined application published) patent law 81 | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |