DE4414940A1 - Verfahren zur Lumineszenz-Rastermikroskopie und ein Lumineszenz-Rastermikroskop - Google Patents
Verfahren zur Lumineszenz-Rastermikroskopie und ein Lumineszenz-RastermikroskopInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Lumineszenz-Raster
mikroskopie gemäß dem Oberbegriff des Hauptanspruches und ein
Lumineszenz-Rastermikroskop zur Durchführung dieses
Verfahrens.
Ein derartiges Verfahren ist aus der US PS 5034613 bekannt.
Bei dem beschriebenen Verfahren handelt es sich um ein
Verfahren mit Zwei-Photonenanregung. Ein zu untersuchendes
Objekt, vorzugsweise ein biologisches Objekt wird mit einem
lumineszierenden, insbesondere fluoreszierenden Farbstoff
versehen. Der im Objekt befindliche Farbstoff wird durch die
gemeinsame Wirkung von zwei Photonen angeregt und das vom
Farbstoff emittierte Licht mittels eines Detektors registriert
und ausgewertet. Um die gesamte Probe zu erfassen, wird der
Laserstrahl über das Objekt gerastert. Die Werte von allen
Punkten des Objektes werden registriert, wodurch eine
dreidimensionale Darstellung der Auswerteergebnisse möglich
ist. Die Zwei-Photonenanregung in Verbindung mit dem Rastern
führt zu einer direkten dreidimensionalen Abbildung des
Objektes. Um die Wahrscheinlichkeit der Zwei-Photonenanregung
zu erhöhen, werden Laserimpulse verwendet, deren Dauer im Sub-
Piko Sekundenbereich liegt. Laser, die solche extrem kurzen
Impulse erzeugen, sind sehr teuer. Darüber hinaus werden bio
logische Objekte durch die Impulse hoher Leistung oft
zerstört. Eine Anregung des Objektes mit Laserimpulsen im Sub-
Pico-Sekundenbereich führt oft dazu, daß das Lumineszenzsignal
"zusammenbricht". Dieses "Zusammenbrechen" kann anschaulich
als eine "Mikro-Explosion" dargestellt werden, die das
Objektmaterial zerstört.
Aufgabe der Erfindung ist es, ein gattungsgemäßes Verfahren so
weiterzubilden, daß die oben genannten Nachteile nicht auftre
ten.
Diese Aufgabe wird durch die in den Ansprüchen 1-3 angegebe
nen Merkmale gelöst. Es wurde überraschend gefunden, daß eine
Messung von Zwei-Photonen Lumineszenz mit Laserimpulsen von
längerer Dauer oder sogar mit kontinuierlichem Licht möglich
ist und zu guten Meßergebnissen führt. Durch die Anregung mit
Laserimpulsen, deren Dauer größer ist als 10-12 Sekunden oder
durch die Anregung mit kontinuierlichem Licht sind die
Leistungsspitzen im Anregungslicht soweit reduziert, daß eine
Zerstörung des Objektes nicht auftritt. Ein sehr vorteilhafter
Bereich der Impulsdauer liegt im Picosekunden-Bereich. Da die
verwendeten Laserimpulse eine niedrigere Leistung aufweisen,
als die Leistung im Sub-Picosekundenbereich, sind längere
Meßzeiten in der Regel angebracht, wobei die Empfindlichkeit
des verwendeten Detektors den Meßbedingungen angepaßt wird. Es
hat sich herausgestellt, daß wenn als Auswertungsverfahren das
Verfahren des Photonenzählens (Photon Counting) eingesetzt
wird, dieses zu sehr guten Meßergebnissen führt. Besonders
vorteilhaft ist es, wenn als Detektor eine Avalanche-Photo
diode eingesetzt wird. Sogar mit kontinuierlichem Laserlicht
mittlerer Leistung ist die Aufnahme und Auswertung der
Meßergebnisse möglich. Bei einer entsprechend verlängerten
Zeitdauer der Messung und der Wahl eines Detektors mit einem
hohen Signal-Rausch-Verhältnis sind die Ergebnisse mit denen
des Verfahrens unter Verwendung von Laserimpulsen im Sub-Piko
sekundenbereich vergleichbar.
Von besonderem Vorteil ist es, daß zur Durchführung des
erfindungsgemäßen Meßverfahrens als Lichtquelle handelsübliche
Laser mit kontinuierlicher oder gepulster Strahlung eingesetzt
werden können. Diese sind nicht teuer. Es können übliche Halb
leiter- oder Gaslaser eingesetzt werden. Als Gaslaser eignen
sich insbesondere HeNe-Laser und Krypton-Ion Laser. Die
Laseranordnung kann auch arrayförmig ausgebildet sein. Die Be
nutzung von zwei oder drei Lasern zur Bestrahlung des gleichen
Objektpunktes hat sich als besonders vorteilhaft herausge
stellt.
Wie oben bereits ausgeführt, ist es wesentlich, daß zur
Aufnahme und Auswertung des lumineszierenden Lichtes ein
Detektor mit einem hohen Signal-Rausch-Verhältnis eingesetzt
wird. Von besonderer Bedeutung ist dabei, daß der eingesetzte
Detektor eine entsprechend hohe Empfindlichkeit und ein
kleines Eigenrauschen aufweist. Durch die arrayförmige Anord
nung der Laser und Detektoren und die dadurch gegebene Be
strahlung und Messung von mehreren Rasterpunkten, ist die
Möglichkeit gegeben, die Dauer des Verfahrens zu verkürzen.
Vorteilhaft ist, wenn dem Objekt eine Strahlrastereinrichtung
vorgeordnet ist, wobei der Strahl über das Objekt gerastert
wird.
Bei dem erfindungsgemäßen Luminesenz-Rastermikroskop sind
weiterhin Filter vorgesehen zum Separieren des von der Probe
emmitierten Lichtes von dem Laserlicht. Anstatt eines Filters
kann auch ein Detektor eingesetzt werden, der die
entsprechende Wellenlänge herausfiltert.
Eine schematische Darstellung eines Lumineszenz-Rastermikro
skopes zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens ist
in Fig. 1 wiedergegeben.
Das Lumineszenz-Rastermikroskop weist einen Laser 1 zur
Erzeugung des Laserlichtes, einen Fotodedektor 2 zur Auswertung
der Meßergebnisse und ein Objektiv 3 zur Fokussierung des von
der Laserlichtquelle 1 ausgesandten Laserstrahles 4 auf das zu
untersuchende Objekt 5 auf. Der Laserstrahl 4 wird mit einer
Strahlrastereinrichtung 6 zum Abrastern des Objektes 5
gesteuert. Ferner weist das Lumineszenz-Rastermikroskop Filter
7 und 8 zum Separieren des Laserlichtes 4 vom Lumineszenzlicht
auf. Gemäß der Erfindung ist die Laserlichtquelle 1 als ein
herkömmlicher Laser mit kontinuierlicher oder gepulster
Strahlung ausgebildet. Die Laserlichtquelle 1 kann auch durch
eine arrayförmige Anordnung von Lasern gebildet sein. Das
gleiche trifft für den Fotodedektor 2 zu. Dieser kann entweder
punkt- oder arrayförmig ausgebildet sein. Im Falle einer
arrayförmigen Anordnung der Laser 1 und Detektoren 2 sind
diese sowie der abzubildende Probenbereich in jeweils zueinan
der optisch konjugierten Ebenen zur gleichzeitigen Aufnahme
von mehreren Rasterpunkten angeordnet.
Claims (14)
1. Verfahren zur Lumineszenz-Rastermikroskopie mit Zwei-Pho
tonen Anregung, insbesondere zur Untersuchung von
biologischen Objekten, wobei ein Laserimpuls lumineszie
rende, insbesondere fluoreszierende Moleküle angeregt und
das vom Objekt ausgesandte Lumineszenzlicht gemessen und
ausgewertet wird, dadurch gekennzeichnet, daß die
Anregung der im Objekt (5) vorhandenen lumineszierenden
Moleküle durch Laserimpulse erfolgt, deren Dauer größer
ist als 10-12 Sekunden.
2. Verfahren zur Lumineszenz-Rastermikroskopie mit Zwei-Pho
tonen Anregung, insbesondere zur Untersuchung von
biologischen Objekten, wobei ein Laserimpuls lumineszie
rende, insbesondere fluoreszierende Moleküle anregt und
das vom Objekt ausgesandte Lumineszenzlicht gemessen und
ausgewertet wird, dadurch gekennzeichnet, daß die
Anregung der im Objekt (5) vorhandenen lumineszierenden
Moleküle durch Laserimpulse erfolgt, deren Dauer 10-12 Se
kunden ist.
3. Verfahren zur Lumineszenz-Rastermikroskopie mit Zwei-Pho
tonen Anregung, insbesondere zur Untersuchung von
biologischen Objekten, wobei Laserlicht lumineszierende,
insbesondere fluoreszierende Moleküle anregt und das vom
Objekt ausgesandte Lumineszenzlicht gemessen und ausge
wertet wird, dadurch gekennzeichnet, daß die Anregung der
im Objekt vorhandenen lumineszierenden Moleküle durch
kontinuierliches Laserlicht erfolgt.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3 dadurch ge
kennzeichnet, daß das Auswerten des vom Objekt (5)
ausgesandten Lumineszenzlichtes im Verfahren des
Photonenzählens erfolgt.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4 dadurch ge
kennzeichnet, daß mehrere Rasterpunkte des Objektes (5)
gleichzeitig angeregt werden und das von diesen Raster
punkten ausgesandte Lumineszenzlicht gleichzeitig gemes
sen wird.
6. Lumineszenz-Rastermikroskop zur Durchführung des Verfah
rens nach einem der Ansprüche 1, 2, 4 oder 5 mit minde
stens einer Laserlichtquelle, mindestens einem Detektor,
mindestens einem Filter zum Separieren des von der Probe
emittierten Lichts von dem Laserlicht, dadurch gekenn
zeichnet, daß als Laserlichtquelle ein Laser (1) mit ge
pulster Strahlung dient.
7. Lumineszenz-Rastermikroskop zur Durchführung des Verfah
rens nach einem der Ansprüche 3 bis 5 mit mindestens ei
ner Laserlichtquelle, mindestens einem Detektor,
mindestens einem Filter zum Separieren des von der Probe
emittierten Lichts von dem Laserlicht, dadurch gekenn
zeichnet, daß als Laserlichtquelle ein Laser (1) mit kon
tinuierlicher Strahlung dient.
8. Lumineszenz-Rastermikroskop nach Anspruch 6 oder 7 da
durch gekennzeichnet, daß der Laser ein Halbleiterlaser
ist.
9. Lumineszenz-Rastermikroskop nach Anspruch 6 oder 7 da
durch gekennzeichnet, daß der Laser ein Gas-Laser ist.
10. Lumineszenz-Rastermikroskop nach Anspruch 9 dadurch ge
kennzeichnet, daß der Laser ein HeNe-Laser oder ein Kryp
ton-Ion-Laser ist.
11. Lumineszenz-Rastermikroskop nach einem der Ansprüche 6
bis 10 dadurch gekennzeichnet daß ein Detektor (2) mit
einem hohen Signal-Rauschverhältnis eingesetzt wird.
12. Lumineszenz-Rastermikroskop nach einem der Ansprüche 6
bis 11 dadurch gekennzeichnet, daß eine
Strahlrastereinrichtung (6) zum gesteuerten Abrastern des
Objektes (5) vorgesehen ist.
13. Lumineszenz-Rastermikroskop nach einem der Ansprüche 6
bis 12 dadurch gekennzeichnet, daß ein Array aus Laser
(1) als Lichtquelle dient und ein Array aus Detektoren
(2), die in einer optisch konjugierten Ebene zur Fokal
ebene des Objektes (5) angeordnet sind, verwendet wird.
14. Lumineszenz-Rastermikroskop nach einem der Ansprüche 6
bis 13 dadurch gekennzeichnet, daß der Detektor (2) eine
Avalanche-Photodiode ist.
Priority Applications (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4414940A DE4414940C2 (de) | 1994-04-28 | 1994-04-28 | Lumineszenz-Rastermikroskop mit zwei Photonen Anregung |
EP95916571A EP0706671A1 (de) | 1994-04-28 | 1995-04-27 | Verfahren zur lumineszenz-rastermikroskopie und ein lumineszenzrastermikroskop |
PCT/DE1995/000566 WO1995030166A1 (de) | 1994-04-28 | 1995-04-27 | Verfahren zur lumineszenz-rastermikroskopie und ein lumineszenzrastermikroskop |
US08/571,839 US5777732A (en) | 1994-04-28 | 1995-04-27 | Luminescence-scanning microscopy process and a luminescence scanning microscope utilizing picosecond or greater pulse lasers |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE4414940A DE4414940C2 (de) | 1994-04-28 | 1994-04-28 | Lumineszenz-Rastermikroskop mit zwei Photonen Anregung |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE4414940A1 true DE4414940A1 (de) | 1995-11-02 |
DE4414940C2 DE4414940C2 (de) | 1998-07-02 |
Family
ID=6516737
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE4414940A Revoked DE4414940C2 (de) | 1994-04-28 | 1994-04-28 | Lumineszenz-Rastermikroskop mit zwei Photonen Anregung |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5777732A (de) |
EP (1) | EP0706671A1 (de) |
DE (1) | DE4414940C2 (de) |
WO (1) | WO1995030166A1 (de) |
Cited By (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE19629141A1 (de) * | 1996-07-19 | 1998-04-16 | Bayer Ag | Verfahren und Vorrichtung zum Screening von Molekülen bezüglich ihres individuellen Bindungsverhaltens zu mindestens einem vorgegebenen Ligand |
US6028306A (en) * | 1997-05-14 | 2000-02-22 | Olympus Optical Co., Ltd. | Scanning microscope |
DE19901381A1 (de) * | 1999-01-15 | 2000-07-20 | Joerg Enderlein | Verfahren und Vorrichtung zur optischen Detektion eines Partikels |
US6262423B1 (en) | 1996-12-22 | 2001-07-17 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E. V. | Scanning microscope in which a sample is simultaneously and optically excited at various points |
EP1186882A2 (de) * | 2000-09-07 | 2002-03-13 | Leica Microsystems Heidelberg GmbH | Verfahren und Vorrichtung zur Detektion von Fluoreszenzlicht bei der konfokalen Rastermikroskopie |
US6567164B2 (en) | 2000-06-17 | 2003-05-20 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Entangled-photon microscope and confocal microscope |
WO2003060610A1 (de) * | 2002-01-16 | 2003-07-24 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Verfahren und anordnungen zur mikroskopischen abbildung |
DE10120425C2 (de) * | 2001-04-26 | 2003-12-18 | Leica Microsystems | Scanmikroskop |
US6677566B2 (en) | 2000-08-08 | 2004-01-13 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Device and method for examining and manipulating microscopic objects |
US6898367B2 (en) | 2000-06-17 | 2005-05-24 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Method and instrument for microscopy |
DE19733194B4 (de) * | 1997-08-01 | 2005-06-16 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Laser-Scanning-Mikroskop |
DE19733193B4 (de) * | 1997-08-01 | 2005-09-08 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Mikroskop mit adaptiver Optik |
US6952006B2 (en) | 2002-02-20 | 2005-10-04 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Microscope, detector, and method for microscopy |
US7005654B2 (en) | 2002-06-25 | 2006-02-28 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Method for microscopy, and microscope |
DE19733195B4 (de) * | 1997-08-01 | 2006-04-06 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Hoch-Kompaktes Laser Scanning Mikroskop mit integriertem Kurzpuls Laser |
US7123408B2 (en) | 2000-06-17 | 2006-10-17 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Arrangement for examining microscopic preparations with a scanning microscope, and illumination device for a scanning microscope |
US7679822B2 (en) | 2000-06-17 | 2010-03-16 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Broadband laser illumination device for a scanning microscope with output stabilization |
US7888659B2 (en) | 2006-06-28 | 2011-02-15 | Ltb Lasertechnik Berlin Gmbh | Spatially-resolved measurement method for the detection of melanin in fluorophor mixtures in a solid sample |
Families Citing this family (41)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0852716B1 (de) * | 1995-09-19 | 2005-11-30 | Cornell Research Foundation, Inc. | Multiphoton lasermikroskopie |
JP4323571B2 (ja) | 1997-01-31 | 2009-09-02 | エックスワイ, インコーポレイテッド | 光学装置 |
US6020591A (en) * | 1997-07-11 | 2000-02-01 | Imra America, Inc. | Two-photon microscopy with plane wave illumination |
US6149867A (en) | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
GB2349033B (en) | 1998-01-27 | 2002-06-26 | Wisconsin Alumni Res Found | Signal enhancement for fluorescence microscopy |
US6342397B1 (en) * | 1998-06-04 | 2002-01-29 | Erkki Soini | Homogeneous biospecific assay using a solid phase, two-photon excitation and confocal fluorescence detection |
EP2283848A1 (de) | 1998-07-30 | 2011-02-16 | Xy, Llc | Pferdesystem für die künstliche Befruchtung ohne chirurgischen Eingriff |
DE19851240C1 (de) * | 1998-11-06 | 2000-03-02 | Europ Lab Molekularbiolog | Fluoreszenzmikroskop mit Mehrphotonenanregung |
DE19908883A1 (de) | 1999-03-02 | 2000-09-07 | Rainer Heintzmann | Verfahren zur Erhöhung der Auflösung optischer Abbildung |
US6403332B1 (en) * | 1999-07-30 | 2002-06-11 | California Institute Of Technology | System and method for monitoring cellular activity |
US7024316B1 (en) | 1999-10-21 | 2006-04-04 | Dakocytomation Colorado, Inc. | Transiently dynamic flow cytometer analysis system |
EP1102101A1 (de) * | 1999-11-22 | 2001-05-23 | Leica Microsystems Heidelberg GmbH | Laserscanmikroskop |
US7208265B1 (en) | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
HUP0302232A2 (hu) | 2000-05-09 | 2003-10-28 | Xy, Inc. | Berendezés és eljárás X-kromoszómát hordozó hímivarsejtek és Y-kromoszómát hordozó hímivarsejtek szétválogatására, eljárás részecskék megkülönböztetésére és részecskeosztályozó berendezés |
US6687000B1 (en) | 2000-06-26 | 2004-02-03 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Photon-sorting spectroscopic microscope system |
DE10045245A1 (de) * | 2000-09-13 | 2002-03-28 | Siemens Ag | Einrichtung für optische Inspektion einer auf Defekte hin zu prüfenden Oberfläche eines Objekts |
EP1207387A1 (de) * | 2000-11-20 | 2002-05-22 | Institut Curie | Multiphotonabbildungsvorrichtung |
US7713687B2 (en) | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
AU2002220018A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-06-11 | Colorado State University | System for in-vitro fertilization with spermatozoa separated into x-chromosome and y-chromosome bearing populations |
US6552794B2 (en) * | 2001-04-04 | 2003-04-22 | Applied Spectral Imaging Ltd. | Optical detection method for improved sensitivity |
US20030211009A1 (en) * | 2001-05-18 | 2003-11-13 | Buchanan Kris S. | Rapid multi-material sample input system |
US8486618B2 (en) | 2002-08-01 | 2013-07-16 | Xy, Llc | Heterogeneous inseminate system |
MX337304B (es) | 2002-08-01 | 2016-02-24 | Xy Llc | Sistema de separacion de baja presion para celulas de esperma. |
WO2004017041A2 (en) | 2002-08-15 | 2004-02-26 | Xy, Inc. | High resolution flow cytometer |
US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
EP2306174B1 (de) | 2003-03-28 | 2016-05-11 | Inguran, LLC | Durchflusszytometriedüse zur Orientierung von Partikeln und entsprechendes Verfahren |
DE10314750A1 (de) * | 2003-03-31 | 2004-11-04 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Rastermikroskop zur Detektion eines Objekts |
US7151270B2 (en) * | 2003-05-02 | 2006-12-19 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Method for classifying object image regions of an object to be detected using a scanning microscope |
NZ544103A (en) | 2003-05-15 | 2010-10-29 | Xy Llc | Efficient haploid cell sorting for flow cytometer systems |
US7706863B2 (en) | 2004-01-21 | 2010-04-27 | University Of Washington | Methods for assessing a physiological state of a mammalian retina |
CN104974983A (zh) | 2004-03-29 | 2015-10-14 | 英格朗公司 | 用于授精的***悬浮液 |
AU2005266930B2 (en) | 2004-07-22 | 2010-09-16 | Inguran, Llc | Process for enriching a population of sperm cells |
EP2884258B1 (de) | 2004-07-27 | 2016-10-12 | Beckman Coulter, Inc. | Verbesserung der Durchflusszytometriediskriminierung mit computerimplementierter geometrischer Umwandlung |
DE112006002099A5 (de) * | 2005-05-31 | 2008-05-21 | W.O.M. World Of Medicine Ag | Verfahren und Vorrichtung zur optischen Charakterisierung von Gewebe |
US8217992B2 (en) | 2007-01-11 | 2012-07-10 | The Jackson Laboratory | Microscopic imaging techniques |
US7772569B2 (en) | 2008-04-01 | 2010-08-10 | The Jackson Laboratory | 3D biplane microscopy |
DE102009029831A1 (de) | 2009-06-17 | 2011-01-13 | W.O.M. World Of Medicine Ag | Vorrichtung und Verfahren für die Mehr-Photonen-Fluoreszenzmikroskopie zur Gewinnung von Informationen aus biologischem Gewebe |
DE102011007751B4 (de) | 2011-04-20 | 2023-10-19 | Carl Zeiss Microscopy Gmbh | Weitfeldmikroskop und Verfahren zur Weitfeldmikroskopie |
EP3538941A4 (de) | 2016-11-10 | 2020-06-17 | The Trustees of Columbia University in the City of New York | Schnelles hochauflösendes bildgebungsverfahren für grosse proben |
CN109718476A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-05-07 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 三维扫描双光子刺激***及其刺激方法 |
CN110146473B (zh) * | 2019-04-16 | 2020-10-13 | 浙江大学 | 一种轴向超分辨的双光子荧光显微装置及方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3505728C2 (de) * | 1984-02-16 | 1989-01-19 | Molecular Biophysics Technology, Inc., Philadelphia, Pa., Us | |
US5034613A (en) * | 1989-11-14 | 1991-07-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Two-photon laser microscopy |
DE4035799A1 (de) * | 1990-11-10 | 1992-05-14 | Zeiss Carl Fa | Optische vorrichtung mit konfokalem strahlengang zur dreidimensionalen untersuchung eines objektes |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5022757A (en) * | 1989-01-23 | 1991-06-11 | Modell Mark D | Heterodyne system and method for sensing a target substance |
DE4113279C2 (de) * | 1991-04-24 | 1996-08-29 | Miodrag Dipl Phys Milicev | Konfokales optisches Rastermikroskop |
US5196709A (en) * | 1991-05-03 | 1993-03-23 | University Of Maryland Systems | Fluorometry method and apparatus using a semiconductor laser diode as a light source |
US5462879A (en) * | 1993-10-14 | 1995-10-31 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Method of sensing with emission quenching sensors |
-
1994
- 1994-04-28 DE DE4414940A patent/DE4414940C2/de not_active Revoked
-
1995
- 1995-04-27 US US08/571,839 patent/US5777732A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-27 EP EP95916571A patent/EP0706671A1/de not_active Ceased
- 1995-04-27 WO PCT/DE1995/000566 patent/WO1995030166A1/de not_active Application Discontinuation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3505728C2 (de) * | 1984-02-16 | 1989-01-19 | Molecular Biophysics Technology, Inc., Philadelphia, Pa., Us | |
US5034613A (en) * | 1989-11-14 | 1991-07-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Two-photon laser microscopy |
DE4035799A1 (de) * | 1990-11-10 | 1992-05-14 | Zeiss Carl Fa | Optische vorrichtung mit konfokalem strahlengang zur dreidimensionalen untersuchung eines objektes |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Proceedings SPIE: Three Dimensional Microscopy, Image Acquisition and Processing, Two Photon Excitation in Time-Resolved FluorescensMikroscopy/vol. 2184, 7. Feb. 1994, San Jose USA, pp 66-71/ Pekka Hänninen and Stefan Hell * |
Cited By (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6713264B2 (en) | 1996-07-19 | 2004-03-30 | Bayer Aktiengesellschaft | Process and device for the screening of molecules with regard to their individual binding behaviour towards at least one given ligand |
DE19629141A1 (de) * | 1996-07-19 | 1998-04-16 | Bayer Ag | Verfahren und Vorrichtung zum Screening von Molekülen bezüglich ihres individuellen Bindungsverhaltens zu mindestens einem vorgegebenen Ligand |
US6262423B1 (en) | 1996-12-22 | 2001-07-17 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E. V. | Scanning microscope in which a sample is simultaneously and optically excited at various points |
DE19653413C2 (de) * | 1996-12-22 | 2002-02-07 | Stefan Hell | Rastermikroskop, bei dem eine Probe in mehreren Probenpunkten gleichzeitig optisch angeregt wird |
US6028306A (en) * | 1997-05-14 | 2000-02-22 | Olympus Optical Co., Ltd. | Scanning microscope |
DE19733195B4 (de) * | 1997-08-01 | 2006-04-06 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Hoch-Kompaktes Laser Scanning Mikroskop mit integriertem Kurzpuls Laser |
DE19733193B4 (de) * | 1997-08-01 | 2005-09-08 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Mikroskop mit adaptiver Optik |
DE19733194B4 (de) * | 1997-08-01 | 2005-06-16 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Laser-Scanning-Mikroskop |
DE19901381A1 (de) * | 1999-01-15 | 2000-07-20 | Joerg Enderlein | Verfahren und Vorrichtung zur optischen Detektion eines Partikels |
US6567164B2 (en) | 2000-06-17 | 2003-05-20 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Entangled-photon microscope and confocal microscope |
US7679822B2 (en) | 2000-06-17 | 2010-03-16 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Broadband laser illumination device for a scanning microscope with output stabilization |
US7123408B2 (en) | 2000-06-17 | 2006-10-17 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Arrangement for examining microscopic preparations with a scanning microscope, and illumination device for a scanning microscope |
US6898367B2 (en) | 2000-06-17 | 2005-05-24 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Method and instrument for microscopy |
US7110645B2 (en) | 2000-06-17 | 2006-09-19 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Method and instrument for microscopy |
US6677566B2 (en) | 2000-08-08 | 2004-01-13 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Device and method for examining and manipulating microscopic objects |
EP1186882A2 (de) * | 2000-09-07 | 2002-03-13 | Leica Microsystems Heidelberg GmbH | Verfahren und Vorrichtung zur Detektion von Fluoreszenzlicht bei der konfokalen Rastermikroskopie |
EP1186882A3 (de) * | 2000-09-07 | 2004-01-02 | Leica Microsystems Heidelberg GmbH | Verfahren und Vorrichtung zur Detektion von Fluoreszenzlicht bei der konfokalen Rastermikroskopie |
US6677596B2 (en) | 2000-09-07 | 2004-01-13 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Method and apparatus for the detection of fluorescent light in confocal scanning microscopy |
US6961124B2 (en) | 2001-04-26 | 2005-11-01 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Method for examining a specimen, and scanning microscope system |
DE10120425C2 (de) * | 2001-04-26 | 2003-12-18 | Leica Microsystems | Scanmikroskop |
WO2003060610A1 (de) * | 2002-01-16 | 2003-07-24 | Carl Zeiss Jena Gmbh | Verfahren und anordnungen zur mikroskopischen abbildung |
US6952006B2 (en) | 2002-02-20 | 2005-10-04 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Microscope, detector, and method for microscopy |
US7005654B2 (en) | 2002-06-25 | 2006-02-28 | Leica Microsystems Heidelberg Gmbh | Method for microscopy, and microscope |
US7888659B2 (en) | 2006-06-28 | 2011-02-15 | Ltb Lasertechnik Berlin Gmbh | Spatially-resolved measurement method for the detection of melanin in fluorophor mixtures in a solid sample |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1995030166A1 (de) | 1995-11-09 |
EP0706671A1 (de) | 1996-04-17 |
DE4414940C2 (de) | 1998-07-02 |
US5777732A (en) | 1998-07-07 |
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